TWI646111B - 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ）組成物及其用途 - Google Patents

抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ）組成物及其用途 Download PDF

Info

Publication number
TWI646111B
TWI646111B TW101118029A TW101118029A TWI646111B TW I646111 B TWI646111 B TW I646111B TW 101118029 A TW101118029 A TW 101118029A TW 101118029 A TW101118029 A TW 101118029A TW I646111 B TWI646111 B TW I646111B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
identification number
sequence identification
sequence
cgrp
antibody
Prior art date
Application number
TW101118029A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201300419A (zh
Inventor
布萊恩Ｒ 柯法席維屈
凱提 歐爾生
班傑明Ｈ 杜薩
珍斯Ｊ 比爾葛林
約翰Ａ 雷特漢
丹妮爾Ｍ 米歇爾
派翠西亞Ｄ 麥克尼爾
妮可Ｍ 詹生
馬帝茲 李奧Ｆ 賈西亞
瑪麗亞 克里斯蒂娜 盧米斯
Original Assignee
艾爾德生物控股有限責任公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47175055&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TWI646111(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 艾爾德生物控股有限責任公司 filed Critical 艾爾德生物控股有限責任公司
Publication of TW201300419A publication Critical patent/TW201300419A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI646111B publication Critical patent/TWI646111B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/485—Morphinan derivatives, e.g. morphine, codeine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Abstract

本發明係有關於具有CGRP結合特異性之抗體及其片段。本發明的另一實施例係有關於本文中所述之抗體及其結合片段，其包含本文中所述之VH、VL與CDR多肽之序列以及編碼其等的聚核苷酸。本發明亦設想抗CGRP抗體及其結合片段與一或多種功能性或可檢測性基團複合之複合物。本發明亦設想製造該抗CGRP抗體及其結合片段之方法。本發明的實施例亦有關抗CGRP抗體及其結合片段用於診斷、評估與治療與CGRP相關聯的疾病與功能失調之用途。

Description

抗降血鈣素基因相關胜肽(ANTI-CGRP)組成物及其用途
本申請案主張於2011年5月20日提出申請及標題為“抗降血鈣素基因相關胜肽(ANTI-CGRP)組成物及其用途”之第61/488,660號美國暫准申請案(代理人案號67858.730300)之利益，其在此完整地併入本案以為參考資料。
本申請案含有一序列表，其業已經由EFS-Web以ASCII格式提交及在此完整地併入本案以為參考資料。該ASCII副本係於2012年5月18日創建，檔案名稱為678580730301.txt及檔案大小為203,818位元。
發明領域
本發明係有關對於人類降血鈣素基因相關胜肽(以下簡稱“CGRP”)具有結合特異性之抗體及其片段(包括Fab片段)。本發明亦有關於篩檢與CGRP相關聯的疾病與功能失調之方法，及藉由投予該抗體或其片段而預防或治療與CGRP相關聯的疾病與功能失調之方法。
相關技術說明
降血鈣素基因相關胜肽(CGRP)係以長度為37個胺基酸的多功能性神經胜肽形式產生。在人類中存在二種CGRP形式，即CGRP-α與CGRP-β形式，而其等的活性相近。人類的CGRP-α與CGRP-β相差3個胺基酸，及衍生自不同的基因。CGRP胜肽家族包括澱粉素、腎上腺髓素及降血鈣素，雖然其等各具有獨特的受器與生物活性。Doods,H. 於期刊“Curr.Op.Invest.Drugs”第2(9)期第1261-68頁(2001年)乙文。
CGRP係從諸如三叉神經的多種組織釋出，當三叉神經被活化時，會在腦膜內釋出神經胜肽而媒介神經源性發炎，神經源性發炎的特徵在於血管舒張、血管滲漏及肥大細胞降解。Durham,P.L.於期刊“New Eng.J.Med.”第350(11)期第1073-75頁(2004年)乙文。CGRP的生物效應係經由CGRP受器(CGRP-R)媒介，CGRP受器係由七個跨膜組分聯同受器相關膜蛋白(RAMP)所組成。CGRP-R進一步需要受器組分蛋白(RCP)的活性，其係經由G蛋白與腺苷酸環化酶的高效偶合作用及cAMP生產作用所不可或缺者。Doods,H.於期刊“Curr.Op.Invest.Drugs”第2(9)期第1261-68頁(2001年)乙文。
偏頭痛是神經血管性功能失調，其影響美國約10%的成年人口，及典型伴隨著劇烈頭痛。約20至30%的偏頭痛患者感受到先兆，包含在偏頭痛事件之前及/或伴隨發生的局灶性神經系統現象。據信CGRP在偏頭痛的發生扮演一顯著角色。例如，在偏頭痛的頭痛期間發現頸靜脈血液中的CGRP血漿濃度升高，而其他神經胜肽並未升高。此外，根據Arulmozhi等人，在偏頭痛患者中發現下列各項：(1)在血漿CGRP濃度與偏頭痛之間存在很強的相關性；(2)輸注CGRP產生偏頭痛式的頭痛；(3)基線CGRP水平升高；及(4)偏頭痛發作期間之血漿CGRP水平係與頭痛劇烈程度顯著相關聯。Arulmozhi,D.K.等人於期刊“Vas.Pharma.”第 43期第176-187頁(2005年)乙文。
偏頭痛的一種有效治療方法係投予曲普坦(triptan)類，曲普坦是色胺式藥物家族，及包括舒馬普坦(sumatriptan)與利扎曲坦(rizatriptan)。該家族的成員對於包括5-HT1B、5-HT1D及5-HT1F在內的多種血清素受器具有親和性。該藥物家族的成員選擇性地造成腦部血管收縮，但亦在冠狀動脈血管上引發血管收縮效應。Durham,P.L.於期刊“New Eng.J.Med.”第350(11)期第1073-75頁(2004年)乙文。已患有心臟疾病的病患在投藥後有理論上的冠狀動脈痙攣風險，及在服用曲普坦(triptan)類之後，在罕見情況可能發生心臟事件。需注意其禁用於患有冠狀動脈血管疾病的病患。
同樣地，通常經由投予特定的麻醉藥品或非類固醇類消炎藥(NSAID)來處理疼痛。然而，施用該等治療方法可能要付上某些不良後果的代價。NSAID有可能導致腎臟衰竭、腸出血及肝功能異常。麻醉藥品有可能導致噁心、嘔吐、心智功能受損及成癮。因此，需要另覓疼痛的替代療法，以避免某些該等不良後果。
據信CGRP在多種疾病與功能失調中扮演一角色，包括但不限於偏頭痛、頭痛及疼痛。
例如，據報導CGRP可能與膀胱過動症相關聯或甚至扮演一肇因性角色。CGRP可能與膀胱過動病況相關聯之證據包括CGRP存在於泌尿道、DRG及脊髓之事實(Wharton等人於1986年期刊“Neurosci”第(3)期第727頁乙文) 以及傳入性C纖維係攸關將涉及排尿作用的脈衝傳送至脊髓之事實(Yoshida等人於2011年期刊“J Pharmacol Sci”第(112)期第128頁乙文)。此外，有報導指出，在乙酸引發型膀胱疼痛模式中，肉毒桿菌素的膀胱內投藥作用抑制CGRP及顯著縮短膀胱收縮間隔(Chuang等人於2004年期刊“J Urol”第(172)期第1529頁乙文；Chuang等人於2009年期刊“J Urol”第(182)期第786頁乙文)。
CGRP可能在該病況中扮演一肇因性角色之證據係發表在最近公開的一專利申請案，其中所包含的數據旨在表明該申請案中所揭露的一種抗CGRP Ab在松節油引發的膀胱過動症模式中減少膀胱收縮次數(輝瑞(Pfizer)公司之WO 2011/024113))。
由於察知CGRP涉及該等與其他功能失調，技藝中仍需要適用於預防或治療與CGRP相關聯的疾病與功能失調之組成物與方法，同時避免不良副作用。技藝中仍需要用於減少或抑制與CGRP相關聯的疾病或功能失調諸如偏頭痛、頭痛、膀胱過動症及疼痛之組成物或方法。
發明概要
本發明係有關於具有CGRP結合特異性之特異性抗體及其片段，特別是具有所欲的抗原決定位特異性、高親和性或結合性及/或功能性質之抗體。本發明的另一實施例係有關於本文中所述之抗體，其包含本文中所述之VH、VL及CDR多肽的序列及編碼其等的聚核苷酸。本發 明的一個較佳實施例係有關嵌合或人化抗體及其片段(包括Fab片段)，其可與CGRP結合及/或抑制藉由CGRP與CGRP受器(“CGRP-R”)的結合作用所媒介之生物活性。
在本發明的另一較佳實施例中，設想全長抗體及其Fab片段，其抑制由CGRP-α、CGRP-β及大鼠CGRP所驅動的cAMP生產作用。在本發明的又一較佳實施例中，設想全長及其Fab片段，其在投藥後減少領受者的血管舒張作用。
在本發明的另一實施例中，可與CGRP結合之嵌合或人化抗體及其片段(包括Fab片段)係適用於朝向減少、治療或預防下列各者之方法中：偏頭痛(不論有無前兆)、癌症或腫瘤、與癌症或腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與癌症或腫瘤存活相關聯之血管生成作用、體重減輕、疼痛、偏癱性偏頭痛、叢發性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、熱潮紅、慢性陣發性半邊頭痛、由於頭部或頸部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、顱部神經痛、鼻竇性頭痛(諸如例如與鼻竇炎相關者)及過敏引發型頭痛或偏頭痛。本發明的抗體與抗體片段在治療、預防、紓緩、控制下列病況或疾病中之一或多者或降低其風險方面特別具有效用：膀胱過動症與其他泌尿病況包括膀胱感染、疼痛；慢性疼痛；神經源性發炎與發炎疼痛；神經性病變疼痛；眼部疼痛；牙痛；手術後疼痛、創傷相關疼痛、曬傷相關疼痛、糖尿病；非胰島素依賴型糖尿病與其他炎性自體免疫功能失調、血管功能失調；發炎；關節 炎；支氣管過度敏感、氣喘；休克；敗血症；鴉片戒斷症候群；嗎啡耐藥性；男性與女性的潮熱；過敏性皮膚炎；牛皮癬；腦炎；腦部創傷；癲癇；神經退化性疾病；皮膚病包括搔癢症、神經源性皮膚發紅、薔薇色皮膚與紅斑；發炎性腸道疾病、激躁性腸症候群、膀胱炎；痛經及其他可能可以藉由CGRP受器的拮抗作用而治療或預防或紓緩症狀之病況。特別重要的是包括偏頭痛與叢發性頭痛在內的頭痛及其他疼痛相關病況，以及膀胱過動症之急性或預防性治療。
在本發明的另一實施例中，可與CGRP結合的嵌合或人化抗體及其片段(包括Fab片段)係較佳適用於朝向降低、治療或預防下列各者之方法中：胃食道逆流及與胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎或胰臟炎相關聯的內臟疼痛。
在本發明的另一實施例中，可自兔免疫細胞(B淋巴球)衍生該等抗體與人化抗體，及可基於其等與人類生殖細胞系序列的同源性(序列一致性)而加以選擇。該等抗體可能需要很少的序列改質作用或全無序列改質作用，以使得促進在人化作用後保有功能性質。本發明的又一實施例係有關包含VH、VL及CDR多肽之抗CGRP抗體的片段，如自兔免疫細胞及編碼其等之聚核苷酸所衍生者，以及該等抗體片段及編碼其等的聚核苷酸在創建可與CGRP及/或 CGRP/CGRP-R複合體結合的新穎抗體與多肽組成物之用途。
本發明亦設想抗CGRP抗體及其結合片段與一或多種功能性或可檢測性基團接合之接合物。本發明亦設想製造該嵌合或人化抗CGRP或抗CGRP/CGRP-R複合抗體及其結合片段之方法。在一實施例中，結合片段包括但不限於Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv片段、SMIP(小分子免疫藥劑)、駱駝抗體、奈米抗體及IgNAR。
本發明的實施例係有關於抗CGRP抗體及其結合片段用於診斷、評估與治療與CGRP或其異常表現相關聯的疾病與功能失調之用途。本發明亦設想抗CGRP抗體的片段用於診斷、評估與治療與CGRP或其異常表現相關聯的疾病與功能失調之用途。本發明的其他實施例係有關於在重組型宿主細胞中，例如在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO或HEK 293細胞中，或在酵母菌細胞(例如二倍體酵母菌諸如二倍體畢赤酵母菌屬(Pichia))與其他酵母菌株中，生產抗CGRP抗體或其片段。
圖式簡單說明
第1圖提供對應於全長抗體Ab1之聚核苷酸與多肽序列。
第2圖提供對應於全長抗體Ab2之聚核苷酸與多肽序列。
第3圖提供對應於全長抗體Ab3之聚核苷酸與多肽序列。
第4圖提供對應於全長抗體Ab4之聚核苷酸與多肽序列。
第5圖提供對應於全長抗體Ab5之聚核苷酸與多肽序列。
第6圖提供對應於全長抗體Ab6之聚核苷酸與多肽序列。
第7圖提供對應於全長抗體Ab7之聚核苷酸與多肽序列。
第8圖提供對應於全長抗體Ab8之聚核苷酸與多肽序列。
第9圖提供對應於全長抗體Ab9之聚核苷酸與多肽序列。
第10圖提供對應於全長抗體Ab10之聚核苷酸與多肽序列。
第11圖提供對應於全長抗體Ab11之聚核苷酸與多肽序列。
第12圖提供對應於全長抗體Ab12之聚核苷酸與多肽序列。
第13圖提供對應於全長抗體Ab13之聚核苷酸與多肽序列。
第14圖提供對應於全長抗體Ab14之聚核苷酸與多肽序列。
第15圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab1、Ab2、Ab3及Ab4的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數 據。
第16圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab5、Ab6、Ab7及Ab8的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第17圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab9、Ab10及Ab14的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第18圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab11、Ab12及Ab13的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第19圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2及Ab4對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第20圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab3對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第21圖遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab5與Ab6對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第22圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7、Ab8、Ab9及Ab10對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第23圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11、Ab12及Ab13對於CGRP-α驅動的cAMP生產 作用之抑制作用。
第24圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab14對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第25圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2及Ab3對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第26圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab4、Ab5及Ab6對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第27圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7與Ab8對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第28圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab9、Ab10及Ab14對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第29圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11、Ab12及Ab13對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第30圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2、Ab4及Ab5對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第31圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab3與Ab6對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用 之抑制作用。
第32圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7與Ab8對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第33圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab9對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第34圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab10對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第35圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11與Ab12對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第36圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab13對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第37圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab14對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第38圖顯示遵循下文第6例中的操作程序所獲得之抗體Ab1-Ab13對於經放射性標記的CGRP與CGRP-R的結合作用之抑制作用。
第39圖顯示相對於一對照組抗體，在大鼠模式中藉由投予抗體Ab3與Ab6接著投予辣椒素所獲得之血管 舒張作用之降低，其係遵循下文第7例中的操作程序而獲得。
第40圖顯示相對於一對照組抗體，在大鼠模式中藉由投予不同濃度的抗體Ab6接著投予辣椒素所獲得之血管舒張作用之降低，其係遵循下文第7例中的操作程序而獲得。
第41A至C圖顯示在輸注生理食鹽水期間之Ab3對於膀胱容量的有利效應。對於動物投予Ab3或一種負對照組抗體，然後在輸注期間監測進入膀胱的生理食鹽水。ICI(A圖)增加而MF(B圖)降低，顯示膀胱容量增加。AM之差異(C圖)係位於標準偏差之內及並非統計上顯著。星號係表示該改善具統計顯著性(相較於負對照組Ab之非成對學生t-檢定的p<0.05)。備註：實心柱狀：經Ab3治療(10毫克/公斤)；空心柱狀：負對照組抗體(10毫克/公斤)。誤差柱狀係表示標準偏差。縮寫：ICI：膀胱收縮間隔；MF：排尿頻率；AM：排尿收縮強度。
第42圖顯示Ab2在神經病變性疼痛模式中之效應。藉由鍾氏(Chung)手術引發機械性觸摸痛(L5/L6脊神經結紮)，及比較經Ab2治療動物(斜線柱狀)與對照組動物(實心柱狀)的敏感程度。數值越高表示敏感性越低。在第13天(在Ab2投藥作用之前)的平均敏感性相近，但在第14天與第17天獲得改善。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
第43圖顯示Ab2與嗎啡的止痛效應。藉由縮尾時間(y軸及以秒為單位)評估投予嗎啡(空心正方形)、Ab2(10 毫克/公斤及由實心三角形顯示)或載劑(負對照組及由空心圓形顯示)之動物的疼痛敏感性。動物產生嗎啡耐藥性，及所展現的縮尾時間在第4天即與對照組動物相近。相比之下，經Ab2治療的動物在實驗期間(至第7天)展現縮尾時間之持續改善。經Ab2治療動物之改善係統計上顯著(相較於載劑之依序所進行單因子變異數分析與唐奈特氏(Dunnett)檢定之p<0.05及由星號顯示)。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
第44圖顯示Ab2具劑量依賴性之止痛效應。在第0天(在第一次縮尾時間試驗之後)，對大鼠投予劑量為1毫克/公斤(實心正方形)、3毫克/公斤(朝下的實心三角形)或10毫克/公斤(朝上的實心三角形)的抗體Ab2，或投予載劑(空心圓形)或負對照組抗體(空心正方形)。每日評估大鼠回應致痛性熱刺激之縮尾時間(較長的時間表示對於疼痛相對不敏感)。藉由投予Ab2，使得縮尾時間以劑量依賴性方式增長。星號表示縮尾時間之增長係統計上顯著的(相較於載劑之依序所進行單因子變異數分析與唐奈特氏(Dunnett)檢定之p<0.05)。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
第45圖顯示Ab2組合嗎啡及當出現嗎啡耐藥性後撤除嗎啡時之止痛效應。在第0天(在第一次縮尾時間試驗之後)，對於大鼠投予劑量為10毫克/公斤的抗體Ab2(實心正方形與實心三角形)或載劑(空心圓形)。然後在第1至10天(實心正方形)或僅在第1至4天(實心三角形)對於大鼠每日投予嗎啡。經嗎啡治療的小鼠之縮尾時間最初大幅增 長，但在顯示嗎啡耐藥性的隨後幾天減少。然而，在第4天後即撤除嗎啡的小鼠之縮尾時間在第5天與第8天之間增長，及維持在增長的狀態。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
第46圖顯示Ab2在大鼠的內臟疼痛模式中之效應。藉由測量領受一種負對照組抗體(實心柱狀)或Ab2(斜線柱狀)之空白動物(空心柱狀)或經TNBS處理來引發慢性結腸過敏性之動物的結腸鼓脹閾值(數值越高表示敏感性越低)，而量化內臟疼痛。經Ab2治療的動物之過敏性減輕27%，及鼓脹閾值藉由Ab2投藥作用獲得顯著改善(相較於TNBS+負對照組之學生t-檢定的p<0.05)。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
較佳實施例之詳細說明 定義
需瞭解本發明不侷限於特定方法論、操作程序、細胞株、動物的物種或屬及所述試劑，因這些可能有所不同。亦需瞭解本文中所用的術語僅為了敘述具體實施例之目的，及並非意欲限制本發明的範圍，本發明的範圍僅受到所附申請專利範圍之限制。如本文中所用之單數形式的“一(a)”、“一(an)”及“該”係包括複數的所指對象，除非上下文顯然另有規定。因此，例如凡述及“一細胞”時，係包括該等細胞中之多者；而凡述及“該蛋白”時，係包括一或多種蛋白及嫻熟技藝者所熟知之等效物，依此類推。本 文中所用的所有技術與科學用語的含義，係與具有本發明所屬技術的一般技能者通常理解的含義相同，除非顯然另有規定。
降血鈣素基因相關胜肽(CGRP)：如本文中所用之CGRP不僅包含可從美國胜肽(American Peptides)公司(美國加州桑尼維爾(Sunnyvale))與巴亨(Bachem)公司(美國加州托倫斯(Torrance))取得之下列智人(Homo sapiens)CGRP-α與智人CGRP-β胺基酸序列：CGRP-α：ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-NH2(序列辨識編號：281)，其中胺基端苯丙胺酸係經醯胺化；CGRP-β：ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-NH2(序列辨識編號：282)，其中胺基端苯丙胺酸係經醯胺化；但亦包含該等CGRP胺基酸序列的任何膜結合形式，以及突變體(mutant)(突變體(mutien))、剪接變異體、異構體、直系同源物、同源物及該序列的變異體。
配對勝任型酵母菌物種：在本發明中係意欲廣泛包括可在培養中生長的任何二倍體或四倍體酵母菌。該酵母菌物種可能以單倍體、二倍體或其他多倍體形式存在。在適當的條件下，一特定倍體的細胞可能以該形式增殖無限世代。二倍體細胞亦可產孢而形成單倍體細胞。序列配對可經由進一步配對或融合二倍體菌株而產生四倍體菌株。本發明設想單倍體酵母菌以及例如藉由配對或球形質體融合產生的二倍體或其他多倍體酵母菌細胞之用途。
在本發明的一實施例中，配對勝任型酵母菌係釀母菌科(Saccharomycetaceae)之一成員，其包括下列各屬：Arxiozyma、Ascobotryozyma、固囊酵母屬(Citeromyces)、德巴利酵母屬(Debaryomyces)、德克酵母屬(Dekkera)、假囊酵母屬(Eremothecium)、伊薩酵母屬(Issatchenkia)、釀酒酵母屬(Kazachstania)、克魯維酵母屬(Kluyveromyces)、柯達菌屬(Kodamaea)、路德酵母屬(Lodderomyces)、管囊酵母屬(Pachysolen)、畢赤酵母屬(Pichia)、酵母菌屬(Saccharomyces)、子囊酵母菌屬(Saturnispora)、Tetrapisispora、有孢圓酵母屬(Torulaspora)、擬威爾酵母屬(Williopsis)及接合酵母菌屬(Zygosaccharomyces)。可能適用於本發明中之其他酵母菌類型包括耶鲁維亞酵母屬(Yarrowia)、紅冬孢酵母屬(Rhodosporidium)、假絲酵母菌屬(Candida)、漢遜氏酵母菌屬(Hansenula)、Filobasium、鎖擲酵母屬(Sporidiobolus)、布勒擲孢酵母屬(Bullera)、白冬孢酵母屬(Leucosporidium)及線黑粉菌屬(Filobasidella)。
在本發明的一個較佳實施例中，配對勝任型酵母菌係畢赤酵母屬(Pichia)之一成員。在本發明的又一較佳實施例中，屬於畢赤酵母屬(Pichia)的配對勝任型酵母菌係下列物種之一：巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)、甲醇畢赤酵母(Pichia methanolica)及多形漢遜氏酵母(Hansenula polymorpha)(安格斯畢赤酵母(Pichia angusta))。在本發明的一個特佳實施例中，屬於畢赤酵母屬(Pichia)的配對勝任型酵母菌係巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
單倍體酵母菌細胞：具有其正常基因體(染色體)補體的單套各基因之一細胞。
多倍體酵母菌細胞：具有其正常基因體(染色體)補體的多套各基因之一細胞。
二倍體酵母菌細胞：具有其正常基因體(染色體)補體之二套(對偶基因)的實質上每個基因之一細胞，其係典型藉由二個單倍體細胞的融合(配對)方法形成。
四倍體酵母菌細胞：具有其正常基因體(染色體)補體之四套(對偶基因)的實質上每個基因之一細胞，其係典型藉由二個單倍體細胞的融合(配對)方法形成。四倍體可帶有二個、三個、四個或更多個不同的表現組合體。該等四倍體可在釀酒酵母(S.cerevisiae)中藉由選擇性配對同型接合的異宗配合a/a與α/α二倍體而獲得，及在畢赤酵母屬(Pichia)中藉由單倍體的序列配對而獲得營養缺陷型二倍體。例如，一[甲硫胺酸 組胺酸]單倍體可與[腺嘌呤 組胺酸]單倍體配對而獲得二倍體[組胺酸]；及一[甲硫胺酸 精胺酸]單倍體可與[腺嘌呤 精胺酸]單倍體配對而獲得二倍體[精胺酸]；然後二倍體[組胺酸]x二倍體[精胺酸]而獲得四倍體原始營養型。嫻熟技藝者將瞭解所述之二倍體細胞的益處與用途，亦可適用於四倍體細胞。
酵母菌配對：二個單倍體酵母菌細胞自然融合而形成一個二倍體酵母菌細胞之過程。
減數分裂：二倍體酵母菌細胞進行減數分裂而形成四個單倍體孢子產物之過程。各孢子然後可萌發及形 成無性生長的單倍體細胞株。
篩選標記：篩選標記係一基因或基因片段，其在例如經由一轉形事件而領受該基因的一細胞上賦予生長表現型(物理生長特徵)。該篩選標記容許該細胞在未領受該篩選標記基因的細胞無法生長之條件下，在一篩選性生長培養基中存活與生長。篩選標記基因一般分為數種類型，包括：正篩選標記基因，諸如當二種溫度敏感性(“ts”)突變體交互雜交或將一種ts突變體轉形時，賦予一細胞對於抗生素或其他藥物、溫度的抗性之一基因；負篩選標記基因，諸如一生物合成基因，其賦予一細胞在缺乏一特定營養素的培養基中生長之能力及該營養素係不具有該生物合成基因的所有細胞所需者，或諸如使得不具有野生型基因的細胞無法生長之一種誘變型生物合成基因之類。適宜的標記包括但不限於：ZEO、G418、LYS3、MET1、MET3a、ADE1、ADE3、URA3之類。
表現載體：該等DNA載體含有促進操控外來蛋白在標的宿主細胞內的表現作用之元件。便利地，首先在一細菌宿主如大腸桿菌(E.coli)中進行序列操控作用及轉形用DNA的生產作用，及載體通常包括促進該等操控作用之序列，包括一個細菌性複製起點及適當的細菌性篩選標記。篩選標記係編碼轉形宿主細胞在一篩選性培養基中存活或生長所需的蛋白。宿主細胞若未經含有篩選基因的載體轉形，則無法在該培養基中存活。典型的篩選基因所編碼的蛋白係(a)賦予對於抗生素或其他毒素之抗性，(b)補充 營養缺陷型之不足，或(c)供應無法從複合培養基取得的關鍵性營養素。酵母菌之例示性載體及轉形方法係述於例如美國紐約州普萊恩維尤(Plainview)的冷泉港實驗室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)出版之Burke,D.、Dawson,D.及Stearns,T.(2000年)所著“酵母菌遺傳學方法：冷泉港實驗室課程手冊(Methods in yeast genetics：a Cold Spring Harbor Laboratory course manual)”。
本發明的方法所用之表現載體將進一步包括酵母菌特異性序列，包括用於辨識轉形酵母菌株之可篩選的營養缺陷型或藥物標記。藥物標記可進一步用於擴增一酵母菌宿主細胞中的載體套數。
所感興趣的多肽編碼序列係以可操作方式與轉錄及轉譯調節序列連接，該轉錄及轉譯調節序列在酵母菌細胞中提供多肽的表現作用。該等載體組分可包括但不限於下列一或多者：一增強子元件、一啟動子及一轉錄終止序列。用於分泌多肽之序列亦可包括如訊號序列之類。酵母菌複製起點係選擇性的，其通常以表現載體形式納入酵母菌基因體中。在本發明的一實施例中，所感興趣的多肽係以可操作方式與提供酵母菌二倍體細胞的最佳化多肽分泌作用之序列連接或融合。
當與另一核酸序列處於一功能性關係時，則該核酸係“以可操作方式連接”。例如，若訊號序列的DNA係以參與多肽分泌作用的蛋白前體形式表現，則訊號序列的DNA係以可操作方式與多肽的DNA連接；若一啟動子或增 強子影響該序列的轉錄作用，則該啟動子或增強子係以可操作方式與編碼序列連接。一般而言，“以可操作方式連接”係指連接的DNA序列係相鄰的，及在分泌前導的情況係相鄰及位於讀框中。然而，增強子不一定要相鄰。連接作用係藉由在合宜的限制酶酶切位點之接合作用而完成，或任擇地經由嫻熟技藝者所熟悉的PCR/重組方法完成(美國加州卡爾斯巴德(Carlsbad)的英杰(Invitrogen)公司之GatewayR技術)。若不存在該等位點，則依據習用作法使用合成的寡核苷酸轉接子或連接子。
啟動子係位於一結構基因(一般約100至1000鹼基對以內)的起始密碼子上游(5’)之未轉譯序列，其控制以可操作方式與其連接之特定核酸序列的轉錄作用與轉譯作用。啟動子分為數種類型：誘導性、持續性及可抑制性啟動子(回應缺乏抑制子之情況而增加轉錄作用水平)。誘導性啟動子可回應培養條件的一些變化，如一營養素之存在與否或溫度之變化，而起始在其等控制下的DNA轉錄水平之增加。
酵母菌啟動子片段亦可作為同源重組作用的位點，及將表現載體導入至酵母菌基因體中的相同位點；任擇地，使用一篩選標記作為同源重組作用的位點。畢赤酵母屬(Pichia)的轉形作用係述於Cregg等人(1985年)於期刊“Mol.Cell.Biol.”第5期第3376-3385頁乙文。
來自畢赤酵母屬(Pichia)的適宜啟動子之實例包括AOX1與啟動子(Cregg等人(1989年)於期刊“Mol.Cell. Biol.”第9期第1316-1323頁乙文)；ICL1啟動子(Menendez等人(2003年)於期刊“Yeast”第20(13)期第1097-108頁乙文)；甘油醛-3-磷酸去氫酶啟動子(GAP)(Waterham等人(1997年)於期刊“Gene”第186(1)期第37-44頁乙文)：及FLD1啟動子(Shen等人(1998年)於期刊“Gene”第216(1)期第93-102頁乙文)。GAP啟動子係一強力的持續性啟動子，而AOX與FLD1啟動子係誘導性啟動子。
其他的酵母菌啟動子包括ADH1、醇去氫酶II、GAL4、PHO3、PHO5、Pyk及自其等所衍生的嵌合啟動子。此外，可在本發明中使用非酵母菌啟動子，諸如哺乳類動物、昆蟲、植物、爬蟲類、兩棲動物、病毒及禽類啟動子。在最典型的情況，啟動子將包含一個哺乳類動物啟動子(對於所表現基因而言可能是內源性)，或將包含一個酵母菌或病毒啟動子，而在酵母菌系統中提供有效的轉錄作用。
可依重組方式產生所感興趣的多肽，不僅是直接重組，亦可與一異源多肽重組成為融合多肽，異源多肽如一訊號序列或在成熟蛋白或多肽胺基端具有特定酶切位點的其他多肽。一般而言，該訊號序列可為載體的一組分，或可為插入載體中之多肽編碼序列的一部分。所選擇的異源性訊號序列較佳係經由宿主細胞內可用的標準路徑辨識與處理者。已證實釀酒酵母(S.cerevisiae)α因子前原訊號有效分泌來自巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)的多種重組型蛋白。其他酵母菌訊號序列包括α配對因子訊號序列、轉化酶訊號序列及衍生自所分泌的其他酵母菌多肽之訊號序列。 此外，該等訊號胜肽序列可經工程設計而在二倍體酵母菌表現系統中提供增強的分泌作用。所感興趣的其他分泌訊號亦包括哺乳類動物訊號序列，其對於所分泌的蛋白而言可為異源性，或對於所分泌的蛋白而言可為一固有序列。訊號序列包括前胜肽序列，及在一些情況下可包括原胜肽序列。技藝中已知該等訊號序列中的多者，包括在免疫球蛋白鏈上所發現的訊號序列，如K28前原毒素序列、PHA-E、FACE、人類MCP-1、人類血清白蛋白訊號序列、人類Ig重鏈、人類Ig輕鏈之類。如參見Hashimoto等人於期刊“Protein Eng”第11(2)期第75頁(1998年)乙文；及Kobayashi等人於期刊“Therapeutic Apheresis”第2(4)期第257頁(1998年)乙文。
可藉由在載體中插入一轉錄活化子序列，而增加轉錄作用。該等活化子係DNA的順式作用元件，通常約10至300鹼基對，其作用在啟動子上而增加其轉錄作用。轉錄增強子係相對地不具有定向與位置依賴性，已發現轉錄增強子位於轉錄單元的5’與3’，位於一內含子之內，以及位於編碼序列本身之內。可將增強子剪接至表現載體中位於編碼序列的5’或3’之一位置，但較佳位於啟動子5’之一位點。
用於真核宿主細胞中的表現載體亦可含有用於終止轉錄作用及用於安定mRNA所需之序列。通常可在真核細胞或病毒DNA或cDNA的非轉譯區之轉譯終止密碼子的3’，取得該等序列。該等區所含有的核苷酸段係轉錄為 mRNA非轉譯部分中之聚腺苷酸化片段形式。
採用標準接合技術或PCR/重組方法，建構含有上文所列的一或多種組分之適宜載體。將所分離的質體或DNA片段按所欲形式酶切、量身訂做及再接合而產生所需的質體，或經由重組方法產生。為分析及確認所建構質體中的序列正確，使用接合混合物來進行宿主細胞之轉形作用，及酌情藉由抗生素抗性(如安比西林(ampicillin)或濟歐辛(Zeocin))篩選成功轉形體。製備來自該轉形體的質體，藉由限制內切酶酶切作用進行分析及/或定序。
可使用以att位點與重組酵素為基礎之重組方法，將DNA序列插入一載體中，而作為片段限制酶切作用與接合作用之替代方案。該等方法例如述於Landy(1989年)於期刊“Ann.Rev.Biochem.”第58期第913-949頁乙文；及為嫻熟技藝者所知。該等方法所採用的分子間DNA重組作用，係藉由λ與大腸桿菌(E.coli)編碼的重組蛋白之混合物所媒介。重組作用發生在交互作用的DNA分子上之特異性附著(att)位點之間。有關att之說明請參見由Weisberg編輯之“Lambda II”乙書(美國紐約冷泉港之冷泉港實驗室(Cold Spring Harbor Laboratory Press)出版公司)第211-250頁之Weisberg與Landy(1983年)所著“噬菌體λ中之位點特異性重組作用(Site-Specific Recombination in Phage Lambda)”乙文。將側臨重組位點的DNA段交換，以使得在重組作用後，att位點係由各親代載體捐出之序列所組成的雜交序列。重組作用可發生在具任何拓撲的DNA之間。
可藉由將所感興趣的序列接合至一適當的載體中；經由使用特異性引子而產生含有att B位點之一PCR產物；產生供選殖至含有att位點的適當載體中之cDNA庫之類，而在所感興趣的一序列中引入att位點。
如本文中所用之摺疊一詞係指多肽與蛋白之三維結構，其中胺基酸殘基之間的交互作用發揮功用而穩定該結構。雖然非共價交互作用攸關結構之確定，所感興趣的蛋白通常具有由二個半胱胺酸殘基所形成的分子內及/或分子間共價雙硫鍵。就天然存在的蛋白及多肽或其衍生物與變異體而言，正確的摺疊典型係產生最佳生物活性的配置方式，及可便利地藉由針對活性如配位體結合作用、酵素活性等之分析法來監測。
在一些情況下，例如當所欲的產物係出於合成時，以生物活性為基礎的分析法之意義不大。該等分子的正確摺疊則可能以物理性質、能量考量、模擬研究之類為基礎而測定。
可藉由引入編碼增進摺疊與雙硫鍵形成的一或多種酵素亦即摺疊酶、伴護蛋白(chaperonin)等之序列，而進一步將表現宿主改質。使用如技藝中所知的載體、標記等，該等序列可持續性或誘導性地在酵母菌宿主細胞中表現。包括足以促成所欲表現模式的轉錄調節元件之序列，較佳經由一種靶向方法而安定地導入酵母菌基因體中。
例如，真核細胞PDI不僅是蛋白半胱胺酸氧化作用與雙硫鍵異構化作用的有效催化劑，並且展現伴護活 性。PDI的共同表現作用可促進具有多個雙硫鍵的活性蛋白之生產作用。亦感興趣的是BIP(免疫球蛋白重鏈結合蛋白)、環親和素(cyclophilin)之類的表現作用。在本發明的一實施例中，單倍體親代菌株中之各者表現一獨特的摺疊酵素，如一菌株可能表現BIP，而另一菌株可能表現PDI或其組合。
“所欲蛋白”或“所欲抗體”係以可互換方式使用，及一般係指對於一標的具有特異性之一親代抗體，亦即如本文中所述之CGRP或一嵌合或人化抗體或自其所衍生的一結合部分。“抗體”一詞係意欲包括具有適合與辨識一抗原決定位的特定形狀之任何含有多肽鏈的分子結構，其中該分子結構與抗原決定位之間的一或多種非共價結合交互作用使該複合體安定。原型抗體分子係免疫球蛋白，及來自所有來源如人類、囓齒動物、兔、牛、羊、豬、狗、其他哺乳類動物、雞、其他禽類等之所有類型的免疫球蛋白、IgG、IgM、IgA、IgE、IgD等，皆被視為“抗體”。如本發明，適用作為生產抗體的起始原料之較佳來源是兔子。已有眾多抗體編碼序列被描述過；及其他可藉由技藝中所熟知的方法產生。實例包括嵌合抗體、人類抗體與其他非人類哺乳類動物抗體、人化抗體、單鏈抗體(諸如scFvs)、駱駝抗體、奈米抗體、IgNAR(從鯊魚衍生的單鏈抗體)、小模組免疫藥劑(SMIP)及抗體片段諸如Fabs、Fab’、F(ab’)2之類。參見Streltsov VA等人於2005年11月期刊“Protein Sci.”第14(11)期第2901-9頁及電子版為2005年9月30日之 “鯊魚IgNAR抗體可變域之結構及早期發育同型之模擬研究(Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype)”乙文：Greenberg AS等人於1995年3月9日期刊“Nature”第374(6518)期第168-73頁之“在鯊魚中進行重排作用及廣泛體細胞多樣化作用的一個新抗原受器基因家族(A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks)”乙文：Nuttall SD等人於2001年8月期刊“Mol Immunol.”第38(4)期第313-26頁之“從鬚鯊分離出新的抗原受器及作為用於展示蛋白環庫之一鷹架(Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks,and use as a scaffold for the display of protein loop libraries)”乙文；Hamers-Casterman C等人於1993年6月3日期刊“Nature”第363(6428)期第446-8頁之“全無輕鏈之天然存在的抗體(Naturally occurring antibodies devoid of light chains)”乙文；Gill DS等人於2006年12月期刊“Curr Opin Biotechnol.”第17(6)期第653-8頁及電子版為2006年10月19日之“使用新穎蛋白鷹架所發現之生物藥物(Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds)”乙文。
例如，可藉由基因工程產生抗體或抗原結合片段。在該技術中，如同其他方法，用所欲的抗原或免疫原將產生抗體的細胞致敏化。從產生抗體的細胞分離出之傳訊RNA，係作為使用PCR擴增反應生產cDNA之模板。藉由 在表現載體中插入擴增的免疫球蛋白cDNA之適當部分，而產生一個載體庫，其中載體各含有保留初始抗原特異性的一個重鏈基因與一個輕鏈基因。藉由將重鏈基因庫與輕鏈基因庫組合而建構一組合庫。這產生了共同表現重鏈與輕鏈(類似於一抗體分子的Fab片段或抗原結合片段)之一個殖株庫。將帶有該等基因的載體共轉染至一宿主細胞中。當在經轉染的宿主中誘發抗體基因合成作用時，重鏈與輕鏈蛋白自組裝而產生活性抗體，及可用抗原或免疫原篩檢而檢出該活性抗體。
所感興趣的抗體編碼序列包括該等藉由固有序列所編碼者，以及因著基因密碼簡併性而與所揭露的核酸在序列上不相同之核酸及其變異體。變異體多肽可包括胺基酸(aa)取代作用、添加作用或刪除作用。胺基酸取代作用可為保留性胺基酸取代作用，或為去除非必需胺基酸之取代作用，諸如改變一醣基化位點，或藉由取代或刪除非功能所必需的一或多個半胱胺酸殘基而盡量減少摺疊錯誤。 可設計變異體，而使得保留或增強該蛋白之一特定區的生物活性(如一功能域、催化性胺基酸殘基等)。變異體亦包括本文中所揭露之多肽的片段，特別是生物活性片段及/或對應於功能域的片段。已知在試管中用於誘發所選殖基因的突變作用之技術。在本發明中亦包括經一般分子生物技術改質之多肽，而使得增進其等對於蛋白分解性降解作用的抗性，或將溶解性質最佳化，或使其等更適合作為治療劑。
可藉由將來自一物種之產生抗體型細胞的輕鏈 與重鏈變異區(VL與VH)與來自另一物種的輕鏈與重鏈固定區組合之重組方式，產生嵌合抗體。嵌合抗體典型採用囓齒動物或兔的變異區及人類的固定區，而使得產生主要是人類域之一抗體。該等嵌合抗體的生產作用係技藝中所熟知，及可藉由標準方式達成(如述於第5,624,659號美國專利，其在此完整地併入本案以為參考資料)。進一步設想本發明之嵌合抗體的人類固定區可選自IgG1、IgG2、IgG3及IgG4固定區。
進行人化抗體的工程設計而含有甚至更多類似人類的免疫球蛋白域，及僅納入動物所衍生抗體的互補決定區。其可藉由仔細檢視單株抗體變異區之高度變異環的序列，及使其等與人類抗體鏈的結構擬合。這個方法雖然表面上看來複雜，但施行上是簡單的。如參見第6,187,287號美國專利，其在此完整地併入本案以為參考資料。
除了整體的免疫球蛋白(或其等的重組對應體)之外，可合成包含抗原決定位結合位點(如Fab’、F(ab’)2或其他片段)之免疫球蛋白片段。可採用重組型免疫球蛋白技術，設計“片段”或微小免疫球蛋白。例如，可藉由合成一個融合的可變輕鏈區與一個可變重鏈區，而產生用於本發明中的“Fv”免疫球蛋白。亦對於抗體組合物感興趣，如包含二種獨特的Fv特異性之雙鏈抗體。在本發明的另一實施例中，免疫球蛋白片段係涵蓋SMIP(小分子免疫藥劑)、駱駝抗體、奈米抗體及IgNAR。
免疫球蛋白及其片段可在轉譯後加以改質，如 添加作用性基團諸如化學連接子；可檢測性基團諸如螢光染料、酵素、毒素、受質、生物發光物質、放射性物質、化學發光基團之類；或特異性結合基團諸如鏈黴抗生物素蛋白、抗生物素蛋白或生物素之類，可用於本發明的方法與組成物中。附加的作用性分子之實例係提供於下文中。
若一聚核苷酸序列依據基因密碼的轉譯作用產生一多肽序列，則該聚核苷酸序列係“對應”於該多肽序列(亦即該聚核苷酸序列“編碼”該多肽序列)；若一聚核苷酸序列與另一聚核苷酸序列編碼相同的多肽序列，則該二序列係彼此“對應”。
一DNA建構體的“異源”區或“異源”域係一較大型DNA分子內之一段可識別的DNA，及未發現其與自然存在之該較大型分子有所關聯。因此，當該異源區編碼一哺乳類動物基因時，該基因兩側的DNA通常並非側臨來源生物體的基因體中之該哺乳類動物基因體DNA。異源區之另一實例係一建構體，其中編碼序列本身並非自然中所存在者(如cDNA，其中該基因體編碼序列含有內含子或為具有不同於天然基因的密碼子之合成序列)。對偶基因變異或自然發生的突變事件並不產生本文中所界定之DNA異源區。
一“編碼序列”係(鑑於基因密碼)對應於或編碼一蛋白或胜肽序列之密碼子的一讀框內序列。若二個序列或其等的互補序列編碼相同的胺基酸序列，則該等編碼序列係彼此對應。聯同適當的調節序列之一編碼序列可轉錄與轉譯成為多肽。聚腺苷酸化訊號與轉錄終止序列通常位 於該編碼序列的3’側。“啟動子序列”係一DNA調節區，其可與細胞中的RNA聚合酶結合及起始下游(3’方向)編碼序列的轉錄作用。啟動子序列典型含有用於與調節分子(如轉錄作用因子)結合的附加位點，該等調節分子會影響該編碼序列的轉錄作用。當RNA聚合酶與細胞中的啟動子序列結合及將編碼序列轉錄成為mRNA時，編碼序列係在啟動子序列的“控制下”或與啟動子“在操作上連接”，該mRNA然後進而轉譯成為該編碼序列所編碼之蛋白。
載體係用來將一外來物質諸如DNA、RNA或蛋白質引入一生物體或宿主細胞中。典型的載體包括重組型病毒(用於聚核苷酸)及脂質體(用於多肽)。“DNA載體”係諸如質體、噬菌體或黏接質體之一複製子，另一聚核苷酸段可連接其上，而導致所連接段之複製作用。“表現載體”係含有調節序列之一DNA載體，該調節序列引導一適當宿主細胞之多肽合成作用。這通常表示一啟動子與RNA聚合酶結合及起始mRNA的轉錄作用，以及核糖體結合位點與起始訊號引導mRNA轉譯成為多肽。將一聚核苷酸序列導入一表現載體之正確位點與正確讀框中，接著藉由該載體將一適當的宿主細胞轉形，使得能夠生產該聚核苷酸序列所編碼的多肽。
聚核苷酸序列的“擴增反應”係在試管中生產多套的特定核酸序列。經擴增的序列通常是DNA形式。Van Brunt的評論文章述及用於進行該擴增反應的多種技術(1990年期刊“Bio/Technol.”第8(4)期第291-294頁乙文)。聚 合酶鏈反應或PCR係核酸擴增反應之原型，及應將本文中所用之PCR視為其他適宜的擴增反應技術之例示。
現在已充分瞭解脊椎動物之抗體的一般結構(Edelman,G.M.於期刊“Ann.N.Y.Acad.Sci.”第190期第5頁(1971年)乙文)。抗體係由分子量約23,000道爾頓的二個相同輕質多肽鏈(“輕鏈”)與分子量53,000至70,000的二個相同重鏈(“重鏈”)所組成。四個鏈係在“Y”構型中由雙硫鍵連接，其中重鏈係從“Y”構型的口開始托架在輕鏈上。“Y”構型的“分支”係示為Fab區；“Y”構型的主幹部分係示為FC區。胺基酸序列的定向係自“Y”構型頂部的胺基端至各鏈底部的羧基端。胺基端所具備的變異區係對於引發它的抗原具有特異性，及其長度約為100個胺基酸，在輕鏈與重鏈之間及抗體與抗體之間略有不同。
各鏈中的變異區係與一固定區連接，該固定區延伸至鏈的剩餘長度及在一特定類型的抗體中不隨著抗體特異性(亦即誘發它的抗原)而異。有五種主要的固定區類型，其等決定免疫球蛋白分子之類型(IgG、IgM、IgA、IgD及IgE及其等對應於γ、μ、α、δ及ε(gamma、mu、alpha、delta或epsilon)重鏈固定區)。固定區或類型決定後續的抗體作用性功能，包括補體的活化作用(霍爾特、萊因哈特、溫斯頓(Holt,Rinehart,Winston)公司(1976年)出版之Kabat,E.A.所著“免疫學與免疫化學之結構概念(Structural Concepts in Immunology and lmmunochemistry)”乙書第二版第413-436頁)，及其他細胞反應(W.B.桑德斯(W.B.Sanders) 公司(1980年)出版之Andrews,D.W.等人所著“臨床免疫生物學(Clinical Immunobiology)”第1-18頁；Kohl,S.等人於期刊“Immunology”第48期第187頁(1983年)乙文)；而可變區決定其所反應的抗原。將輕鏈分類為(kappa)或λ(lambda)。可用或λ輕鏈製備各重鏈類型。輕鏈與重鏈係彼此共價鍵結，及當藉由融合瘤或藉由B細胞產生免疫球蛋白時，二重鏈的“尾部”部分係藉由雙硫鍵而彼此共價鍵結。
“變異區”或“VR”之用詞係指一抗體之各對輕鏈與重鏈內直接涉及抗體與抗原結合作用之域。各重鏈在一端有一個可變域(VH)及接著數個固定域。各輕鏈在一端有一個可變域(VL)及在另一端有一個固定域；輕鏈的固定域係與重鏈的第一個固定域對齊，而輕鏈的可變域係與重鏈的可變域對齊。
“互補決定區”、“高度變異區”或“CDR”等詞係指在一抗體的輕鏈或重鏈變異區中所發現之一或多個高度變異區或互補決定區(CDR)(參見美國馬里蘭州貝塞斯達(Bethesda)國家衛生研究院(1987年)出版之Kabat,E.A.等人之“具免疫益處之蛋白質序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)”)。該等用詞係包括如Kabat等人所界定之高度變異區(美國衛生與公眾服務部(Department of Health and Human Services)於1983年出版之Kabat,E.A.等人之“具免疫益處之蛋白質序列”)或抗體的三維結構中之高度變異環(Chothia與Lesk於期刊“J Mol.Biol.”第196期第901-917頁(1987年)乙文)。各鏈中的CDR係藉由架構區而維 持在鄰近處，及與其他鏈的CDR有助於形成抗原結合位點。在CDR內，有被述為選擇性決定區(SDR)之所選出的胺基酸，其等代表CDR在抗體-抗原交互作用中所用的關鍵接觸殘基(Kashmiri,S.於期刊“Methods”第36期第25-34頁(2005年)乙文)。
“架構區”或“FR”之用詞係指在一抗體的輕鏈與重鏈變異區內之一或多個架構區(參見美國馬里蘭州貝塞斯達(Bethesda)國家衛生研究院(1987年)出版之Kabat,E.A.等人之“具免疫益處之蛋白質序列”)。該等用詞包括在一抗體的輕鏈與重鏈變異區內之CDR之間所插入的該等胺基酸序列區。
具有CGRP結合活性之抗CGRP抗體及其結合片段 抗體Ab1
在一實施例中，本發明包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKR(序列辨識編號：1)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKRTVAA PSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：2)。
本發明進一步包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：3)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：4)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編 號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7係對應於序列辨識編號：1的可變輕鏈序列或序列辨識編號：2的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10係對應於序列辨識編號：3的可變重鏈序列或序列辨識編號：4的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：1或序列辨識編號：2的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：3或序列辨識編號：4的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7係對應於序列辨識編號：1的可變輕鏈序列或序 列辨識編號：2的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10係對應於序列辨識編號：3的可變重鏈序列或序列辨識編號：4的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：1的可變輕鏈區；序列辨識編號：3的可變重鏈區；序列辨識編號：1的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：5、序列辨識編號：6及序列辨識編號：7)；及序列辨識編號：3的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：8、序列辨識編號：9及序列辨識編號：10)。
在本發明的一個特佳實施例中，嵌合型抗CGRP抗體係Ab1，其包含序列辨識編號：2與序列辨識編號：4，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地 由其等所組成。就抗體Ab1而言，Fab片段包括序列辨識編號：1的可變輕鏈序列與序列辨識編號：3的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想在該Fab中的序列辨識編號：1及/或序列辨識編號：3之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab1的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab1或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab2
在一實施例中，本發明包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：11)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQ PEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：12)。
本發明進一步包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：13)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYA SWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：14)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及序列辨識編號：17的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及序列辨識編號：17係對應於序列辨識編號：11的可變輕鏈序列或序列辨識編號：12的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20係對應於序列辨識編號：13的可變重鏈序列或序列辨識編號：14的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：11或序列辨識編號：12的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：13或序列辨識編號：14的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及序列辨識編號：17的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及 序列辨識編號：17係對應於序列辨識編號：11的可變輕鏈序列或序列辨識編號：12的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20係對應於序列辨識編號：13的可變重鏈序列或序列辨識編號：14的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：11的可變輕鏈區；序列辨識編號：13的可變重鏈區；序列辨識編號：11的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：15、序列辨識編號：16及序列辨識編號：17)；及序列辨識編號：13的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：18、序列辨識編號：19及序列辨識編號：20)。
在本發明的一個特佳實施例中，人化抗CGRP抗體係Ab2，其包含序列辨識編號：12與序列辨識編號：14，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含 具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab2而言，Fab片段包括序列辨識編號：11的可變輕鏈序列與序列辨識編號：13的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：11及/或序列辨識編號：13之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab2的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab2或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab3
在一實施例中，本發明包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：21)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQ KPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：22)。
本發明進一步包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：23)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHY TQKSLSLSPGK(序列辨識編號：24)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27係對應於序列辨識編號：21的可變輕鏈序列或序列辨識編號：22的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30係對應於序列辨識編號：23的可變重鏈序列或序列辨識編號：24的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：21或序列辨識編號：22的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：23或序列辨識編號：24的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27的多肽序列中之一或多者，或任擇地 由其等所組成，序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27係對應於序列辨識編號：21的可變輕鏈序列或序列辨識編號：22的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30係對應於序列辨識編號：23的可變重鏈序列或序列辨識編號：24的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：21的可變輕鏈區；序列辨識編號：23的可變重鏈區；序列辨識編號：21的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：25、序列辨識編號：26及序列辨識編號：27)；及序列辨識編號：23的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：28、序列辨識編號：29及序列辨識編號：30)。
在本發明的一個特佳實施例中，嵌合型抗CGRP抗體係Ab3，其包含序列辨識編號：22與序列辨識編號：24，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab3而言，Fab片段包括序列辨識編號：21的可變輕鏈序列與序列辨識編號：23的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：21及/或序列辨識編號：23之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab3的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab3或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab4
在一實施例中，本發明包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR(序列辨識編號：31)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列： QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：32)。
本發明進一步包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：33)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSD GSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：34)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：35、序列辨識編號：36及序列辨識編號：37的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：35、序列辨識編號：36及序列辨識編號：37係對應於序列辨識編號：31的可變輕鏈序列或序列辨識編號：32的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40係對應於序列辨識編號：33的可變重鏈序列或序列辨識編號：34的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：31或序列辨識編號：32的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：33或序列辨識編號：34的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：35、序列辨識編號：36 及序列辨識編號：37的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：35、序列辨識編號：36及序列辨識編號：37係對應於序列辨識編號：31的可變輕鏈序列或序列辨識編號：32的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40係對應於序列辨識編號：33的可變重鏈序列或序列辨識編號：34的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：31的可變輕鏈區；序列辨識編號：33的可變重鏈區；序列辨識編號：31的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：35、序列辨識編號：36及序列辨識編號：37)；及序列辨識編號：33的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：38、序列辨識編號：39及序列辨識編號：40)。
在本發明的一個特佳實施例中，人化抗CGRP抗體係Ab4，其包含序列辨識編號：32與序列辨識編號：34，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之 至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab4而言，Fab片段包括序列辨識編號：31的可變輕鏈序列與序列辨識編號：33的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：31及/或序列辨識編號：33之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab4的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab4或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab5
在一實施例中，本發明包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：41)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異 性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：42)。
本發明進一步包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：43)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：44)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：45、序列辨識編號：46及序列辨識編號：47的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：45、序列辨識編號：46及序列辨識編號：47係對應於序列辨識編號：41的可變輕鏈序列或序列辨識編號：42的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50係對應於序列辨識編號：43的可變重鏈序列或序列辨識編號：44的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：41或序列辨識編號：42的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：43或序列辨識編號：44的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異 性的抗體片段包含序列辨識編號：45、序列辨識編號：46及序列辨識編號：47的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：45、序列辨識編號：46及序列辨識編號：47係對應於序列辨識編號：41的可變輕鏈序列或序列辨識編號：42的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50係對應於序列辨識編號：43的可變重鏈序列或序列辨識編號：44的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：41的可變輕鏈區；序列辨識編號：43的可變重鏈區；序列辨識編號：41的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：45、序列辨識編號：46及序列辨識編號：47)；及序列辨識編號：43的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：48、序列辨識編號：49及序列辨識編號：50)。
在本發明的一個特佳實施例中，嵌合型抗CGRP抗體係Ab5，其包含序列辨識編號：42與序列辨識編號：44， 或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab5而言，Fab片段包括序列辨識編號：41的可變輕鏈序列與序列辨識編號：43的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：41及/或序列辨識編號：43之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab5的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab5或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab6
在一實施例中，本發明包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：51)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：52)。
本發明進一步包括人化抗體，其具有CGRP結合特具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEY KCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：54)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57係對應於序列辨識編號：51的可變輕鏈序列或序列辨識編號：52的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60係對應於序列辨識編號：53的可變重鏈序列或序列辨識編號：54的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：51或序列辨識編號：52的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：53或序列辨識編號：54的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57係對應於序列辨識編號：51的可變輕鏈序列或序列辨識編號：52的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60係對應於序列辨識編號：53的可變重鏈序列或序列辨識編號：54的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：51的可變輕鏈區；序列辨識編號：53的可變重鏈區；序列辨識編號：51的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：55、序列辨識編號：56及序列辨識編號：57)；及序列辨識編號：53的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：58、序列辨識編號：59及序列辨識編號：60)。
在本發明的一個特佳實施例中，人化抗CGRP 抗體係Ab6，其包含序列辨識編號：52與序列辨識編號：54，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab6而言，Fab片段包括序列辨識編號：51的可變輕鏈序列與序列辨識編號：53的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：51及/或序列辨識編號：53之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab6的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab6或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab7
在一實施例中，本發明包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKR( 序列辨識編號：61)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：62)。
本發明進一步包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：63)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFT1SRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：64)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67係對應於序列辨識編號：61的可變輕鏈序列或序列辨識編號：62的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70係對應於序列辨識編號：63的可變重鏈序列或序列辨識編號：64的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：61或序列辨識編號：62的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：63或序列辨識編號：64的多肽序 列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67係對應於序列辨識編號：61的可變輕鏈序列或序列辨識編號：62的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70係對應於序列辨識編號：63的可變重鏈序列或序列辨識編號：64的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：61的可變輕鏈區；序列辨識編號：63的可變重鏈區；序列辨識編號：61的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：65、序列辨識編號：66及序列辨識編號：67)；及序列辨識編號：63的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：68、序列辨識編號：69及序列辨識編號：70)。
在本發明的一個特佳實施例中，嵌合型抗CGRP抗體係Ab7，其包含序列辨識編號：62與序列辨識編號：64，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab7而言，Fab片段包括序列辨識編號：61的可變輕鏈序列與序列辨識編號：63的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：61及/或序列辨識編號：63之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab7的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab7或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab8
在一實施例中，本發明包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLT ISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：71)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：72)。
本發明進一步包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：73)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：74)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77係對應於序列辨識編號：71的可變輕鏈序列或序列辨識編號：72的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80係對應於序列辨識編號：73的可變重鏈序列或序列辨識編號：74的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：71或序列辨識編號：77的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體 片段包含序列辨識編號：73或序列辨識編號：74的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77係對應於序列辨識編號：71的可變輕鏈序列或序列辨識編號：72的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80係對應於序列辨識編號：73的可變重鏈序列或序列辨識編號：74的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：71的可變輕鏈區；序列辨識編號：73的可變重鏈區；序列辨識編號：71的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：75、序列辨識編號：76及序列辨識編號：77)；及序列辨識編號：73的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號： 78、序列辨識編號：79及序列辨識編號：80)。
在本發明的一個特佳實施例中，人化抗CGRP抗體係Ab8，其包含序列辨識編號：72與序列辨識編號：74，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab8而言，Fab片段包括序列辨識編號：71的可變輕鏈序列與序列辨識編號：73的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：71及/或序列辨識編號：73之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab8的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab8或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab9
在一實施例中，本發明包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLA WYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR(序列辨識編號：81)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：82)。
本發明進一步包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：83)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKP SNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：84)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號：87的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號：87係對應於序列辨識編號：81的可變輕鏈序列或序列辨識編號：82的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90係對應於序列辨識編號：83的可變重鏈序列或序列辨識編號：84的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：81或序列辨識編號：82的多肽序列，或任擇地 由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：83或序列辨識編號：84的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號：87的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號：87係對應於序列辨識編號：81的可變輕鏈序列或序列辨識編號：82的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90係對應於序列辨識編號：83的可變重鏈序列或序列辨識編號：84的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：81的可變輕鏈區；序列辨識編號：83的可變重鏈區；序列辨識編號：81的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：85、序列辨識編號：86及序列辨識編號：87)；及序列 辨識編號：83的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：88、序列辨識編號：89及序列辨識編號：90)。
在本發明的一個特佳實施例中，嵌合型抗CGRP抗體係Ab9，其包含序列辨識編號：82與序列辨識編號：84，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab9而言，Fab片段包括序列辨識編號：81的可變輕鏈序列與序列辨識編號：83的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：81及/或序列辨識編號：83之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab9的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab9或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab10
在一實施例中，本發明包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈 序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：91)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：92)。
本發明進一步包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：93)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDVFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：94)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97係對應於序列辨識編號：91的可變輕鏈序列或序列辨識編號：92的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100係對應於序列辨識編號：93的可變重鏈序列或序列辨識編號：94的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列 辨識編號：91或序列辨識編號：92的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：93或序列辨識編號：94的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97係對應於序列辨識編號：91的可變輕鏈序列或序列辨識編號：92的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100係對應於序列辨識編號：93的可變重鏈序列或序列辨識編號：94的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：91的可變輕鏈區；序列辨識編號：93的可變重鏈區；序列辨識編號：91的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編 號：95、序列辨識編號：96及序列辨識編號：97)；及序列辨識編號：93的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：98、序列辨識編號：99及序列辨識編號：100)。
在本發明的一個特佳實施例中，人化抗CGRP抗體係Ab10，其包含序列辨識編號：92與序列辨識編號：94，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab10而言，Fab片段包括序列辨識編號：91的可變輕鏈序列與序列辨識編號：93的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：91及/或序列辨識編號：93之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab10的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab10或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab11
在一實施例中，本發明包括嵌合抗體，其具有 CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR(序列辨識編號：101)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：102)。
本發明進一步包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：103)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：104)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107係對應於序列辨識編號：101的可變輕鏈序列或序列辨識編號：102的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110係對應於序列辨識編號：103的可變重鏈序列或序列辨識編號：104的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：101或序列辨識編號：102的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：103或序列辨識編號：104的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107係對應於序列辨識編號：101的可變輕鏈序列或序列辨識編號：102的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110的多肽序係對應於序列辨識編號：103的可變重鏈序列或序列辨識編號：104的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編 號：101的可變輕鏈區；序列辨識編號：103的可變重鏈區；序列辨識編號：101的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：105、序列辨識編號：106及序列辨識編號：107)；及序列辨識編號：103的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：108、序列辨識編號：109及序列辨識編號：110)。
在本發明的一個特佳實施例中，嵌合型抗CGRP抗體係Ab11，其包含序列辨識編號：102與序列辨識編號：104，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab11而言，Fab片段包括序列辨識編號：101的可變輕鏈序列與序列辨識編號：103的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：101及/或序列辨識編號：103之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab11的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab11或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab12
在一實施例中，本發明包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：111)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：112)。
本發明進一步包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識編號：113)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVR QAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：114)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117係對應於序列辨識編號：111的可變輕鏈序列或序列辨識編號：112的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120係對應於序列辨識編號：113的可變重鏈序列或序列辨識編號：114的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈 與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：111或序列辨識編號：112的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：113或序列辨識編號：114的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117係對應於序列辨識編號：111的可變輕鏈序列或序列辨識編號：112的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120係對應於序列辨識編號：113的可變重鏈序列或序列辨識編號：114的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP 結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：111的可變輕鏈區；序列辨識編號：113的可變重鏈區；序列辨識編號：111的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：115、序列辨識編號：116及序列辨識編號：117)；及序列辨識編號：113的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：118、序列辨識編號：119及序列辨識編號：120)。
在本發明的一個特佳實施例中，人化抗CGRP抗體係Ab12，其包含序列辨識編號：112與序列辨識編號：114，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab12而言，Fab片段包括序列辨識編號：111的可變輕鏈序列與序列辨識編號：113的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：111及/或序列辨識編號：113之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab12的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如 Ab12或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab13
在一實施例中，本發明包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKR(序列辨識編號：121)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：122)。
本發明進一步包括嵌合抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGIIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSS(序列辨識編號：123)。
本發明亦包括嵌合抗體，其具有CGRP結 合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：124)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127係對應於序列辨識編號：121的可變輕鏈序列或序列辨識編號：122的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130係對應於序列辨識編號：123的可變重鏈序列或序列辨識編號：124的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發 明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：121或序列辨識編號：122的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：123或序列辨識編號：124的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127係對應於序列辨識編號：121的可變輕鏈序列或序列辨識編號：122的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130係對應於序列辨識編號：123的可變重鏈序列或序列辨識編號：124的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：121的可變輕鏈區；序列辨識編號：123的可變重鏈區；序列辨識編號：121的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：125、序列辨識編號：126及序列辨識編號：127)；及序列辨識編號：123的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：128、序列辨識編號：129及序列辨識編號：130)。
在本發明的一個特佳實施例中，嵌合型抗CGRP抗體係Ab13，其包含序列辨識編號：122與序列辨識編號：124，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab13而言，Fab片段包括序列辨識編號：121的可變輕鏈序列與序列辨識編號：123的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：121及/或序列辨識編號：123之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab13的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母 菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab13或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab14
在一實施例中，本發明包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(序列辨識編號：131)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一輕鏈序列：QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：132)。
本發明進一步包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一可變重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS(序列辨識 編號：133)。
本發明亦包括人化抗體，其具有CGRP結合特異性及具有包含如下所列序列之一重鏈序列：EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：134)。
本發明進一步設想抗體，其包含序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137係對應於序列辨識編號：131的可變輕鏈序列或序列辨識編號：132的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；及/或包含序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140的多肽序列中之一或多者，其中序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140係對應於序列辨識編號：133的可變 重鏈序列或序列辨識編號：134的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)；或包含該等多肽序列之組合。在本發明的另一實施例中，本發明的抗體或其片段包含CDR、可變重鏈與可變輕鏈序列及包括其中所有者之上文所列重鏈與輕鏈序列中之一或多者的組合物，或任擇地由其等所組成。
本發明亦設想具有CGRP結合特異性的抗體片段。在本發明的一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：131或序列辨識編號：132的多肽序列，或任擇地由其等所組成。在本發明的另一實施例中，本發明之抗體片段包含序列辨識編號：133或序列辨識編號：134的多肽序列，或任擇地由其等所組成。
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137係對應於序列辨識編號：131的可變輕鏈序列或序列辨識編號：132的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)
在本發明的又一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140的多肽序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140係對應於序列辨識編號：133的可變 重鏈序列或序列辨識編號：134的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)。
本發明亦設想抗體片段，其包括本文所述抗體片段中之一或多者。在本發明的一實施例中，具有CGRP結合特異性的抗體片段包含下列所有抗體片段中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：序列辨識編號：131的可變輕鏈區；序列辨識編號：133的可變重鏈區；序列辨識編號：131的可變輕鏈區之互補決定區(序列辨識編號：135、序列辨識編號：136及序列辨識編號：137)；及序列辨識編號：133的可變重鏈區之互補決定區(序列辨識編號：138、序列辨識編號：139及序列辨識編號：140)。
在本發明的一個特佳實施例中，人化抗CGRP抗體係Ab14，其包含序列辨識編號：132與序列辨識編號：134，或任擇地由其等所組成，及具有本文中所述生物活性中之至少一者。
在本發明之另一特佳實施例中，抗體片段包含具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab14而言，Fab片段包括序列辨識編號：131的可變輕鏈序列與序列辨識編號：133的可變重鏈序列。本發明的該實施例進一步設想該Fab中的序列辨識編號：131及/或序列辨識編號：133之添加作用、刪除作用及變異體，同時保留CGRP結合特異性。
在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab14的酵素酶切作用(如木瓜酶)，產生Fab片段。在本發明 的另一實施例中，可經由在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中的表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab14或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
在另一實施例中，抗體片段可能以下列非限制性形式中之一或多者呈現：Fab、Fab’、F(ab’)2，Fv及單鏈Fv抗體形式。在一個較佳實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體進一步包含固定輕鏈序列，其包含如下所列序列：VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(序列辨識編號：283)。
在另一較佳實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體進一步包含γ-1固定重鏈多肽序列，其包含如下所列序列：ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESN GQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(序列辨識編號：284)。
在另一實施例中，本發明設想一種分離的抗CGRP抗體，其包含選自下列之一VH多肽序列：序列辨識編號：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133或其變異體；及進一步包含選自下列之一VL多肽序列：序列辨識編號：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131或其變異體，其中該VH或VL多肽中的一或多個架構殘基(FR殘基)已被另一胺基酸殘基取代，而產生以特異性方式與CGRP結合之一抗CGRP抗體。本發明設想該等抗體的人化與嵌合形式。該嵌合抗體可包括衍生自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgG5、IgG6、IgG7、IgG8、IgG9、IgG10、IgG11、IgG12、IgG13、IgG14、IgG15、IgG16、IgG17、IgG18或IgG19固定區之一Fc。
在本發明的一實施例中，在起始本文中所提及的人化過程之前，抗體或VH或VL多肽係源自或選自一或多種兔子B細胞群。
在本發明的另一實施例中，抗CGRP抗體及其片段不具有CGRP-R結合特異性。在本發明的又一實施例中，抗CGRP抗體及其片段抑制CGRP與CGRP-R的結合作用。在本發明的另一實施例中，抗CGRP抗體及其片段抑制CGRP與CGRP-R及/或與附加的蛋白及/或與其多聚體之結合作用，及/或拮抗其生物效應。
如本文段落[0127]中所述，抗體及其片段可在轉 譯後加以改質，而添加作用性基團諸如化學連接子；可檢測性基團諸如螢光染料、酵素、毒素、受質、生物發光物質、放射性物質及化學發光基團；或功能性結合基團諸如例如鏈黴抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素、細胞毒素、細胞毒性藥物及放射性物質。
抗體或其片段亦可進行化學改質而提供附加的優點，諸如增加多肽的溶解性、安定性及循環時間(活體內半衰期)，或降低免疫生成性(參見第4,179,337號美國專利)。用於衍生化作用之化學基團可選自水溶性聚合物，諸如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、聚葡萄糖、聚乙烯醇之類。抗體及其片段可在分子內的隨機位置或在分子內的預定位置進行改質，及可包括一個、二個、三個或更多個連接的化學基團。
聚合物可具有任何分子量，及可為分支或未分支者。就聚乙二醇而言，為便於處理與製造，分子量較佳介於約1 kDa與約100 kDa之間(“約”一詞表明在製備聚乙二醇時，有些分子比所述分子量來得重，有些分子則較輕)。依所欲的治療廓型(如所欲的持續釋出期間、若有任何生物活性時之效應、處理之方便性、抗原性程度或缺乏抗原性及聚乙二醇對於一治療性蛋白或類似物的其他已知效應)而定，可採用其他分子量。例如，聚乙二醇的平均分子量可約為200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、 12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、50,000、55,000、60,000、65,000、70,000、75,000、80,000、85,000、90,000、95,000或100,000 kDa。分支型聚乙二醇係述於例如第5,643,575號美國專利；Morpurgo等人於期刊“Appl.Biochem.Biotechnol.”第56期第59-72頁(1996年)乙文；Vorobjev等人於期刊“Nucleosides Nucleotides”第18期第2745-2750頁(1999年)乙文；及Caliceti等人於期刊“Bioconjug.Chem.”第10期第638-646頁(1999年)乙文，各者的揭露內容在此併入本案以為參考資料。
有數種連接方法可供嫻熟技藝者使用，如參見EP 0 401 384，其在此併入本案以為參考資料(將PEG與G-CSF偶合)，亦參見Malik等人於期刊“Exp.Hematol.”第20期第1028-1035頁(1992年)乙文(報導使用三氟代乙烷磺醯氯之GM-CSF的聚乙二醇化作用)。例如，經由一反應基諸如游離胺基或羧基，聚乙二醇可經由胺基酸殘基而共價結合。反應基係可與一活化的聚乙二醇分子結合者。具有一游離胺基的胺基酸殘基可包括離胺酸殘基及胺基端胺基酸殘基；具有一游離羧基者可包括天冬胺酸殘基麩胺酸殘基及羧基端胺基酸殘基。巰基亦可作為用於連接聚乙二醇分子的反應基。就治療目的而言，較佳連接在一胺基上，諸如連接在胺基端或離胺酸基上。
如上文所述，聚乙二醇可經由與任何數目的胺 基酸殘基之鍵結而與蛋白連接。例如，聚乙二醇可經由與離胺酸、組胺酸、天冬胺酸、麩胺酸或半胱胺酸殘基的共價鍵而與多肽連接。可採用一或多種反應化學來連接聚乙二醇與特定的胺基酸殘基(如離胺酸、組胺酸、天冬胺酸、麩胺酸或半胱胺酸)或連接一種類型以上的胺基酸殘基(如離胺酸、組胺酸、天冬胺酸、麩胺酸或半胱胺酸及其組合物)。
任擇地，抗體或其片段可經由與白蛋白(包括但不限於重組型人類血清白蛋白或片段或其變異體(如參見於1999年3月2日頒證之第5,876,969號美國專利、EP專利0 413 622及於1998年6月16日頒證之第5,766,883號美國專利，其等在此完整地併入本案以為參考資料))或其他循環型血液蛋白諸如轉鐵蛋白或鐵蛋白融合，而增加活體內半衰期。在一個較佳實施例中，本發明的多肽及/或抗體(包括片段或其變異體)係與成熟形式的人類血清白蛋白融合(亦即如EP專利0 322 094第1與2圖中所示之人類血清白蛋白的第1至585個胺基酸)，該專利在此完整地併入本案以為參考資料。本發明亦涵蓋本發明之聚核苷酸所編碼的融合蛋白。
就可檢測性基團而言，進一步的例示性酵素包括但不限於山葵過氧化酶、乙醯膽鹼酯酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶及螢光素酶。進一步的例示性螢光物質包括但不限於玫瑰紅、螢光黃、螢光黃異硫氰酸鹽、繖形酮、二氯三胺、藻紅素及丹磺醯氯。進一步的例示性化學發光基團包括但不限於流明諾(luminol)。進一步的例示性生物 發光物質包括但不限於螢光素與水母發光蛋白。進一步的例示性放射性物質包括但不限於碘125(125I)、碳14(14C)、硫35(35S)、氚(3H)及磷32(32P)。
就功能性基團而言，例示性細胞毒性藥物包括但不限於甲氨蝶呤、胺喋呤、6-巰嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷(cytarabine)、5-氟尿嘧啶達卡巴仁(decarbazine)；烷化劑諸如氮芥(mechlorethamine)、沙奧特帕(thioepa)苯丁酸氮芥(chlorambucil)、黴法蘭(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)(BSNU)、絲裂黴素C、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)、1-甲基亞硝脲、塞克羅邁得(cyclophosphamide)、氮芥(mechlorethamine)、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、鏈佐黴素、絲裂黴素C、順二氯二胺鉑(II)(DDP)順鉑與卡鉑(carboplatin)(伯爾定(paraplatin))；蒽環素包括唐黴素(daunorubicin)(先前稱為道諾黴素(daunomycin))、多柔比星(doxorubicin)(阿德力黴素(adriamycin))、地托比星(detorubicin)、洋紅黴素(carminomycin)、伊達比星(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)與比生群(bisantrene)；抗生素包括更生黴素(dactinomycin)(放線菌素D)、博萊黴素(bleomycin)、卡奇黴素(calicheamicin)、光輝黴素(mithramycin)及安曲黴素(mithramycin)(AMC)；及抗有絲分裂劑諸如長春花生物鹼、長春新鹼及長春鹼。其他細胞毒性藥物包括太平洋紫杉醇(紫杉醇)、蓖麻毒蛋白、綠膿桿菌外毒素、吉西他濱(gemcitabine)、細胞遲緩素B、短桿菌肽(gramicidin)D、溴 化乙啶、吐根鹼、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(tenoposide)、秋水仙素、二羥基炭疽菌素二酮、1-去氫睪固酮、糖皮質素、普魯卡因(procaine)、四卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、嘌呤黴素、丙卡巴肼(procarbazine)、羥基脲、天冬醯胺酸酶、皮質類固醇、米托坦(mytotane)(O,P'-(DDD))、干擾素及該等細胞毒性藥物的混合物。
進一步的細胞毒性藥物包括但不限於化療藥物，諸如卡鉑(carboplatin)、順鉑、太平洋紫杉醇、吉西他濱(gemcitabine)、卡奇黴素(calicheamicin)、多柔比星(doxorubicin)、5-氟尿嘧啶、絲裂黴素C、放線菌素D、環磷醯胺、長春新鹼及萊黴素(bleomycin)。來自植物與細菌的毒性酵素諸如蓖麻毒蛋白、白喉毒素及假單胞菌毒素，可與人化或嵌合抗體或其結合片段接合而產生細胞類型特異性殺滅試劑(Youle等人於期刊“Proc.Nat’l Acad.Sci.USA”第77期第5483頁(1980年)乙文；Gilliland等人於期刊“Proc.Nat’l Acad.Sci.USA”第77期第4539頁(1980年)乙文；Krolick等人於期刊“Proc.Nat’l Acad.Sci.USA”第77期第5419頁(1980年)乙文。
其他細胞毒性藥物包括如Goldenberg於第6,653,104號美國專利中所述之細胞毒性核糖核酸酶。本發明的實施例亦有關於放射性免疫複合物，其中發射α或β粒子的一種放射性核種係在使用或不使用複合物形成劑之下，與抗體或其結合片段安定地偶合。該等放射性核種包 括β-發射體諸如磷-32(32P)、鈧-47(47Sc)、銅-67(67Cu)、鎵-67(67Ga)、釔-88(88Y)、釔-90(90Y)、碘-125(125I)、碘-131(131I)、釤-153(153Sm)、鎦-177(177Lu)、錸-186(186Re)或錸-188(188Re)，及α-發射體諸如砈-211(211At)、鉛-212(212Pb)、鉍-212(212Bi)或鉍-213(213Bi)或錒-225(225Ac)。
將一抗體或其結合片段與一可檢測性基團之類接合之方法係技藝中所知，諸如例如Hunter等人於期刊“Nature”第144期第945頁(1962年)乙文；David等人等人於期刊“Biochemistry”第13期第1014頁(1974年)乙文；Pain等人等人於期刊“J.Immunol.Meth.”第40期第219頁(1981年)乙文；及Nygren,J.於期刊“Histochem.and Cytochem.”第30期第407頁(1982年)乙文所述之該等方法。
本文中所述之實施例進一步包括與本文中所載列的抗體、抗體片段、雙鏈抗體、SMIP、駱駝抗體、奈米抗體、IgNAR、多肽、變異區及CDR實質上同源之變異體與等效物。其等可含有例如保留性取代突變作用(亦即藉由類似的胺基酸取代一或多個胺基酸)。例如，保留性取代作用係指用另一個同類胺基酸取代一胺基酸，如用另一個酸性胺基酸取代一個酸性胺基酸，用另一個鹼性胺基酸取代一個鹼性胺基酸，或用另一個中性胺基酸取代一個中性胺基酸。保留性胺基酸取代作用之目的係技藝中所熟知。
在另一實施例中，本發明設想多肽序列，其與本文中所載列之抗體片段、變異區及CDR的多肽序列中之任一或多者的序列同源性係至少90%或以上。本發明設想 多肽序列，其與本文中所載列之抗體片段、變異區及CDR的多肽序列中之任一或多者的序列同源性更佳至少95%或以上，序列同源性甚至更佳為至少98%或以上，及序列同源性又更佳為至少99%或以上。用於測定核酸與胺基酸序列之間的同源性之方法，係具一般技藝者所熟知。
在另一實施例中，本發明進一步設想本文中所載列的抗體片段、變異區及CDR之進一步具有抗CGRP活性的上述多肽同源物。本文中所載列之抗CGRP活性的非限制性實例，例如述於下文之段落[0329]至[0350]中。
在另一實施例中，本發明進一步設想與前述任何序列結合的抗遺傳型抗體之產生與用途。在一例示性實施例中，可對於領受一抗CGRP抗體之一個體投予該種抗遺傳型抗體，而調控、降低或中和抗CGRP抗體的效應。該抗遺傳型抗體亦可適用於治療自體免疫疾病，該自體免疫疾病的特徵在於存在抗CGRP抗體。該抗遺傳型抗體進一步的例示性用途，係用於檢測本發明的抗CGRP抗體，例如監測個體血液或其他體液中所存在的抗CGRP抗體水平。
本發明亦設想抗CGRP抗體，其包含用於取代本文所述之其他任一聚核苷酸序列之本文所述之任一多肽或聚核苷酸序列。例如但不侷限於此，本發明設想抗體，其包含本文中所述之任一可變輕鏈與可變重鏈序列的組合；及進一步設想抗體，其係用本文所述的任一CDR序列取代本文所述的其他任一CDR序列而產生。
本發明的附加例示性實施例
在另一實施例中，本發明設想一或多種抗人類CGRP抗體或其抗體片段，其係以選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一種抗人類CGRP抗體形式，以特異性方式與一完整的人類CGRP多肽或其片段中之相同的重疊線性或構型抗原決定位結合及/或競爭與相同的重疊線性或構型抗原決定位結合。在一個較佳實施例中，抗人類CGRP抗體或其片段係以Ab3、Ab6、Ab13或Ab14形式，以特異性方式與一完整的人類CGRP多肽或其一片段中之相同的重疊線性或構型抗原決定位結合及/或競爭與相同的重疊線性或構型抗原決定位結合。
本發明的一個較佳實施例係有關嵌合或人化抗體及其片段(包括Fab片段)，其具有CGRP結合特異性及抑制由CGRP與CGRP受器的結合作用所媒介之生物活性。在本發明的一個特佳實施例中，嵌合或人化抗CGRP抗體係選自Ab3、Ab6、Ab13或Ab14。
在本發明的又一實施例中設想減少、治療或預防與CGRP相關聯的疾病或功能失調之一方法，其係藉由影響經由CGRP所媒介的該等生物活性，使得以防止經由CGRP與CGRP-R的結合作用所媒介之生物活性。在一實施例中，與CGRP相關聯的疾病或功能失調係偏頭痛，或其中CGRP引發疼痛、頭痛、疼痛、癌症、膀胱過動症或體重減輕之另一功能失調。在本文中提供與CGRP相關聯的疾病與功能失調之又一非限制性清單
本發明的另一較佳實施例設想Fab多肽序列用於治療一病患的偏頭痛與頭痛之用途。本揭露內容的他處提供可使用Fab多肽序列治療之偏頭痛與頭痛的非限制性類型。
在本發明的另一實施例中，如藉由使用跨越人類天然的CGRP多肽全長之重疊線性胜肽片段之抗原決定位製圖所確定，抗人類CGRP抗體係在Ab3、Ab6、Ab13或Ab14所特異性結合之一完整的CGRP多肽或其片段，以特異性方式與相同的重疊線性或構型抗原決定位結合之一抗體。
本發明亦關於如本文中所揭露的一抗體或抗體片段形式之一種抗CGRP抗體，其係與相同的CGRP抗原決定位結合及/或與一種抗CGRP抗體競爭與CGRP結合，其包括但不限於選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一種抗CGRP抗體。
在另一實施例中，本發明亦關於所分離的一種抗CGRP抗體或抗體片段，其包含選自3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133或其變異體之VH多肽序列中所含有的一或多個CDR，及/或選自1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131或其變異體之VL多肽序列中所含有的一或多個CDR。
在本發明的一實施例中，前二段落所論及的抗人類CGRP抗體在各可變輕鏈與可變重鏈區包含至少二個 互補決定區(CDR)，其等係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之抗人類CGRP抗體中所含有者相同。
在一個較佳實施例中，上文所論及之抗人類CGRP抗體在各可變輕鏈與可變重鏈區包含至少二個互補決定區(CDR)，其等係與Ab3或Ab6中所含有者相同。在另一實施例中，上文所論及之抗人類CGRP抗體的所有CDR，係與選自Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13或Ab14之一抗人類CGRP抗體中所含有的CDR相同。在本發明的一個較佳實施例中，上文所論及之抗人類CGRP抗體的所有CDR係與選自Ab3或Ab6之一抗人類CGRP抗體中所含有的CDR相同。
本發明進一步設想上文所論及之一或多種抗人類CGRP抗體係脫醣基化；係含有一Fc區，其經改質而改變作用性功能、半衰期、蛋白溶解作用及/或醣基化作用；係人類、人化、單鏈或嵌合型；及係衍生自一種兔(親代)抗人類CGRP抗體之一種人化抗體。
本發明進一步設想一或多種抗人類CGRP抗體，其中該抗體之可變輕鏈區與可變重鏈區中的架構區(FR)分別為人類FR，其係未改質或已藉由用親代兔抗體的對應FR殘基取代可變輕鏈或重鏈區中的一或多個人類FR殘基而改質，及其中該人類FR係衍生自人類可變重鏈與輕鏈抗體序列，其係選自一個人類胚系抗體序列庫，及其選擇係基於其等對於對應的兔可變重鏈或輕鏈區之同源性水平係 高於該庫所含有的其他人類胚系抗體序列。
在本發明的一實施例中，抗人類CGRP抗體或片段係以特異性方式與活體內表現CGRP的人類細胞及/或與活體內循環型可溶性CGRP分子結合，包括表現在患有與CGRP表現型細胞相關聯的疾病之一病患的人類細胞上或藉由該等細胞所表現之CGRP。
在另一實施例中，該疾病係選自偏頭痛(不論有無前兆)、體重減輕、癌症或腫瘤、與癌症或腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與癌症或腫瘤存活相關聯之血管生成作用、偏癱性偏頭痛、叢發性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、熱潮紅、慢性陣發性半邊頭痛、由於頭部或頸部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、顱部神經痛、鼻竇性頭痛(諸如例如與鼻竇炎相關者)、過敏引發型頭痛或偏頭痛、疼痛、發炎疼痛、手術後傷口疼痛、複雜性局部疼痛症候群、癌症疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨質疏鬆性骨折疼痛、燒傷引起的疼痛、骨質疏鬆症、痛風關節疼痛、腹痛、與鐮狀細胞危象相關聯的疼痛及其他傷害性疼痛；以及肝細胞癌、乳癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性病變疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、痛經、卵巢痛、反射性交感神經失養症、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛；或與下列相關聯之疼痛或內臟疼痛：胃食道逆流、消化不良、激躁性 腸症候群、激躁性結腸、痙攣性結腸、黏膜性結腸炎、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎，胰臟炎，腎絞痛、痛經、包括間質性膀胱炎在內之(IC)膀胱炎、與腸塞絞痛相關聯之手術、憩室炎、腹膜炎、心包膜炎、肝炎、闌尾炎、結腸炎、膽囊炎、子宮內膜異位、慢性及/或急性胰臟炎、心肌梗塞、腎臟疼痛、胸膜疼痛、攝護腺炎、骨盆腔疼痛、器官創傷、慢性傷害性疼痛、慢性神經性病變疼痛、慢性發炎疼痛、纖維肌痛、突發性疼痛及持續性疼痛。
在本發明的另一實施例中，該疾病係源自惡性腫瘤或源自較佳地選自下列的一或多種癌症之癌症疼痛：腺體組織的腺癌、器官胚胎組織的胚細胞瘤、上皮組織的癌症、形成血球細胞的組織之白血病、淋巴組織的淋巴瘤、骨髓的骨髓瘤、結締或支持組織的肉瘤、腎上腺癌、愛滋病相關性淋巴瘤、貧血、膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、類癌瘤、子宮頸癌、化學療法、結腸癌、細胞減少症、子宮內膜癌、食道癌、胃癌(gastric cancer)、頭部癌症、頸癌、肝膽癌、腎臟癌、白血病(leukemia)、肝癌、肺癌、淋巴瘤、霍奇金氏(Hodgkin)病、淋巴瘤、非霍奇金氏病、神經系統腫瘤、口腔癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌(stomach cancer)、睾丸癌、甲狀腺癌、尿道癌、骨癌、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、造血細胞的癌症、骨髓癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原 發性或轉移性骨癌、轉移至骨的腫瘤、浸潤神經與中空型內臟之腫瘤、鄰近神經構造之腫瘤。癌症疼痛又較佳包括內臟疼痛，較佳為源自胰臟癌及/或至腹部的轉移作用之內臟疼痛。癌症疼痛又較佳包括軀體疼痛，較佳為由於一或多種骨癌、轉移至骨、手術後疼痛、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、骨髓造血細胞的癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原發性或轉移性骨癌之軀體疼痛。
本發明進一步設想直接或間接與一可檢測性標記或治療劑連接之抗人類CGRP抗體或片段。
本發明亦設想一或多種核酸序列，其導致如上文所列的一抗人類CGRP抗體或抗體片段之表現作用，其包括該等包含酵母菌或人類的較佳密碼子或任擇地由其等所組成者。本發明亦設想包含該核酸序列之載體(包括質體或重組型病毒載體)。本發明亦設想表現上文所列抗體中的至少一者之宿主細胞或重組型宿主細胞，其等包括一哺乳類動物、酵母菌、細菌及昆蟲細胞。在一個較佳實施例中，該宿主細胞係一酵母菌細胞。在又一較佳實施例中，該酵母菌細胞係二倍體酵母菌細胞。在一個更佳的實施例中，該酵母菌細胞係畢赤酵母屬(Pichia)酵母菌。
本發明亦設想一種治療方法，其包括對於患有與表現CGRP的細胞相關聯之一疾病或病況之一病患，投予一治療有效量之本文中所述的至少一種抗人類CGRP抗體或片段。本發明亦設想該治療方法可涉及投予本文中所揭露的二或多種抗CGRP抗體或其片段。若對於病患投予一種 以上的抗體，該多種抗體可同時或並行投藥，或可交錯投藥。可治療的疾病係示於上文所列的非限制性清單及本文他處。在一個較佳實施例中，該疾病係選自偏頭痛、頭痛、體重減輕、疼痛、癌症疼痛或神經性病變疼痛。在另一實施例中，該治療進一步包括投予另一治療劑或選自化學療法、放射線療法、細胞介素投藥作用或基因療法之療法。
在本發明的一個非限制性實施例中，另一治療劑或療法包括紫杉醇(太平洋紫杉醇)或其衍生物、鉑類化合物諸如卡鉑(carboplatin)或順鉑、蒽環素諸如多柔比星(doxorubicin)、烷化劑諸如環磷醯胺、抗代謝藥物諸如5-氟尿嘧啶或依托泊苷(etoposide)。
本發明進一步設想檢測是否存在表現CGRP的細胞之一種活體內成像方法，其包括投予一診斷有效量的至少一種抗人類CGRP抗體。在一實施例中，該投藥作用進一步包括投予一種放射性核種或螢光團，該放射性核種或螢光團係協助檢測位於表現CGRP的疾病位點之抗體。在又一實施例中，使用該活體內成像方法之結果來協助設計一適當的治療方案，包括涵蓋放射線療法、化學療法或其組合之治療方案。
本發明具有CGRP結合特異性的抗CGRP抗體及其片段之抗CGRP活性，亦可藉由其等對於CGRP的結合強度或親和性加以說明。在本發明的一實施例中，本發明之具有CGRP結合特異性的抗CGRP抗體及其片段係與CGRP結合，而其解離常數(KD)係小於或等於5x10-7 M、10-7 M、 5x10-8 M、10-8 M、5x10-9 M、10-9 M、5x10-10 M、10-10 M、5x10-11 M、10-11 M、5x10-12 M、10-12 M、5x10-13 M或10-13 M。較佳地，抗CGRP抗體及其片段係與CGRP結合，而其解離常數(KD)係小於或等於10-11 M、5x10-12 M或10-12 M。在本發明的另一實施例中，本發明之具有CGRP結合特異性的抗CGRP抗體及其片段係與一線性或構型CGRP抗原決定位結合。
在本發明的另一實施例中，本發明具有CGRP結合特異性的抗CGRP抗體及其片段之抗CGRP活性，係與CGRP結合，及其解離速率係小於或等於10-4S-1、5x10-5S-1、10-5S-1、5x10-6S-1、10-6S-1、5x10-7S-1或10-7S-1。
在本發明的又一實施例中，本發明具有CGRP結合特異性的抗CGRP抗體及其片段之抗CGRP活性，係藉由預防、紓緩或降低與CGRP相關聯的疾病與功能失調之症狀，或任擇地治療與CGRP相關聯的疾病與功能失調，而展現抗CGRP活性。與CGRP相關聯的疾病與功能失調之非限制性實例係載列於本文中。
編碼抗CGRP抗體多肽之聚核苷酸 抗體Ab1
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：1的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTG TCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：141)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：2的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAA AGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：142)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：3的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：143)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：4的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCA CGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAG TGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：144)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸係包含序列辨識編號：145、序列辨識編號：146及序列辨識編號：147的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：145、序列辨識編號：146及序列辨識編號：147係對應於編碼序列辨識編號：1的輕鏈可變序列或序列辨識編號：2的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：148、序列辨識編號：149及序列辨識編號：150的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：148、序列辨識編號：149及序列辨識編號：150係對應於編碼序列辨識編號：3的重鏈可變序列或序列辨識編號： 4的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：1的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：141；編碼序列辨識編號：2的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：142；編碼序列辨識編號：3的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：143；編碼序列辨識編號：4的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：144；編碼序列辨識編號：1的輕鏈可變序列或序列辨識編號：2的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：145、序列辨識編號：146及序列辨識編號：147)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：3的重鏈可變序列或序列辨識編號：4的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：148、序列辨識編號：149及序列辨識編號：150)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab1而言，編碼全長式Ab1抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：2的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：142及編碼序列辨識編號：4的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號： 144，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab1的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab1聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株中之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab1或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab2
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：11的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTG ATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(序列辨識編號：151)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：12的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCA AAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：152)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：13的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：153)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：14的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGA GTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGG AGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：154)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：155、序列辨識編號：156及序列辨識編號：157的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：155、序列辨識編號：156及序列辨識編號：157係對應於編碼序列辨識編號：11的輕鏈可變序列或序列辨識編號：12的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：158、序列辨識編號：159及序列辨識編號：160的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：158、序列辨識編號：159及序列辨識編號：160係對應於編碼序列辨識編號：13的重鏈可變序列或序列辨識編號：14的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：11的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：151；編碼序列辨識編號：12的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：152；編碼序列辨識編號：13的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：153；編碼序列辨識編號：14的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：154；編碼序列辨識編號：11的輕鏈可變序列或序列辨識編號：12的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：155、序列辨識編號：156及序列辨識編號：157)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：13的重鏈可變序列或序列辨識編號：14的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：158、序列辨識編號：159及序列辨識編號：160)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab2而言，編碼全長式Ab2抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：12的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：152與編碼序列辨識編號：14的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：154，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中 之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab2的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab2聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab2或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab3
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：21的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCT CACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(序列辨識編號：161)。
[0377]在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：22的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAG AGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：162)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：23的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：163)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：24的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAA GACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGT GGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：164)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：165、序列辨識編號：166及序列辨識編號：167的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：165、序列辨識編號：166及序列辨識編號：167係對應於編碼序列辨識編號：21的輕鏈可變序列或序列辨識編號：22的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：168、序列辨識編號：169及序列辨識編號：170的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：168、序列辨識編號：169及序列辨識編號：170係對應於編碼序列辨識編號：23的重鏈可變序列或序列辨識編號：24的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明 的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：21的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：161；編碼序列辨識編號：22的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：162；編碼序列辨識編號：23的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：163；編碼序列辨識編號：24的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：164；編碼序列辨識編號：21的輕鏈可變序列或序列辨識編號：22的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：165、序列辨識編號：166及序列辨識編號：167)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：23的重鏈可變序列或序列辨識編號：24的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：168、序列辨識編號：169及序列辨識編號：170)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab3而言，編碼全長式Ab3抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：22的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：162與編碼序列辨識編號：24的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：164，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母 菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab3的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab3聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab3或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab4
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：31的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGAT TGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：171)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：32的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：172)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：33的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：173)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：34的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGG CCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAG CAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：174)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：175、序列辨識編號：176及序列辨識編號：177的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：175、序列辨識編號：176及序列辨識編號：177係對應於編碼序列辨識編號：31的輕鏈可變序列或序列辨識編號：32的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：178、序列辨識編號：179及序列辨識編號：180的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：178、序列辨識編號：179及序列辨識編號：180係對應於編碼序列辨識編號：33的重鏈可變序列或序列辨識編號：34的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一 者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：31的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：171；編碼序列辨識編號：32的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：172；編碼序列辨識編號：33的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：173；編碼序列辨識編號：34的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：174；編碼序列辨識編號：31的輕鏈可變序列或序列辨識編號：32的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：175、序列辨識編號：176及序列辨識編號：177)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：33的重鏈可變序列或序列辨識編號：34的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：178、序列辨識編號：179及序列辨識編號：180)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab4而言，編碼全長式Ab4抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：32的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：172與編碼序列辨識編號：34的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：174，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母 (Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab4的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab4聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab4或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab5
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：41的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(序列辨識編號：181)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：42的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：182)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：43的可變重鏈多肽序列之下列 聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：183)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：44的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCC TCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGG CTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：184)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：185、序列辨識編號：186及序列辨識編號：187的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：185、序列辨識編號：186及序列辨識編號：187係對應於編碼序列辨識編號：41的輕鏈可變序列或序列辨識編號：42的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：188、序列辨識編號：189及序列辨識編號：190的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：188、序列辨識編號：189及序列辨識編號：190係對應於編碼序列辨識編號：43的重鏈可變序列或序列辨識編號：44的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：41的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編 號：181；編碼序列辨識編號：42的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：182；編碼序列辨識編號：43的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：183；編碼序列辨識編號：44的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：184；編碼序列辨識編號：41的輕鏈可變序列或序列辨識編號：42的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：185、序列辨識編號：186及序列辨識編號：187)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：43的重鏈可變序列或序列辨識編號：44的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：188、序列辨識編號：189及序列辨識編號：190)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab5而言，編碼全長式Ab5抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：42的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：182與編碼序列辨識編號：44的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：184，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab5的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著 在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab5聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab5或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab6
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：51的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(序列辨識編號：191)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：52的輕鏈多肽序列之下列聚核苷 酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：192)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：53的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGG CTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：193)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：54的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTG TCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：194)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：195、序列辨識編號：196及序列辨識編號：197的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：195、序列辨識編號：196及序列辨識編號：197係對應於編碼序列辨識編號：51的輕鏈可變序列或序列辨識編號：52的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：198、序列辨識編號：199及序列辨識編號：200的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：198、序列辨識編號：199及序列辨識編號：200係對應於編碼序列辨識編號：53的重鏈可變序列或序列辨識編號：54的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：51的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：191；編碼序列辨識編號：52的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：192；編碼序列辨識編號：53的重鏈可變序列 之聚核苷酸序列辨識編號：193；編碼序列辨識編號：54的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：194；編碼序列辨識編號：51的輕鏈可變序列或序列辨識編號：52的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：195、序列辨識編號：196及序列辨識編號：197)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：53的重鏈可變序列或序列辨識編號：54的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：198、序列辨識編號：199及序列辨識編號：200)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab6而言，編碼全長式Ab6抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：52的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：192與編碼序列辨識編號：54的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：194，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab6的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab6聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293 細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab6或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab7
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：61的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：201)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：62的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTG TCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：202)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：63的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAA TGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：203)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：64的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTC AGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：204)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號： 205、序列辨識編號：206及序列辨識編號：207的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：205、序列辨識編號：206及序列辨識編號：207係對應於編碼序列辨識編號：61的輕鏈可變序列或序列辨識編號：62的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：208、序列辨識編號：209及序列辨識編號：210的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：208、序列辨識編號：209及序列辨識編號：210係對應於編碼序列辨識編號：63的重鏈可變序列或序列辨識編號：64的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：61的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：201；編碼序列辨識編號：62的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：202；之聚核苷酸序列辨識編號：203編碼序列辨識編號：63的重鏈可變序列；編碼序列辨識編號：64的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：204；編碼序列辨識 編號：61的輕鏈可變序列或序列辨識編號：62的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：205、序列辨識編號：206及序列辨識編號：207)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：63的重鏈可變序列或序列辨識編號：64的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：208、序列辨識編號：209及序列辨識編號：210)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab7而言，編碼全長式Ab7抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：62的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：202與編碼序列辨識編號：64的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：204，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab7的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab7聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵 母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab7或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab8
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：71的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTACAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(序列辨識編號：211)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：72的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTACAATTACAACTACCCTTGCCTG GTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：212)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：73的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCGTTGGTATCAATGGTCGCACATACTACGCG AGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：213)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：74的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCGTTGGTATCAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCC AGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：214)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：215、序列辨識編號：216及序列辨識編號：217的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編 號：215、序列辨識編號：216及序列辨識編號：217係對應於編碼序列辨識編號：71的輕鏈可變序列或序列辨識編號：72的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：218、序列辨識編號：219及序列辨識編號：220的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：218、序列辨識編號：219及序列辨識編號：220係對應於編碼序列辨識編號：73的重鏈可變序列或序列辨識編號：74的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：71的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：211；編碼序列辨識編號：72的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：212；編碼序列辨識編號：73的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：213；編碼序列辨識編號：74的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：214；編碼序列辨識編號：71的輕鏈可變序列或序列辨識編號：72的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：215、序列辨識編號：216及序 列辨識編號：217)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：73的重鏈可變序列或序列辨識編號：74的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：218、序列辨識編號：219及序列辨識編號：220)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab8而言，編碼全長式Ab8抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：72的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：212與編碼序列辨識編號：74的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：214，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab8的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab8聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab8或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不 限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab9
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：81的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：221)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：82的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCG CGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：222)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：83的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCG AGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：223)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：84的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTG AACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：224)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：225、序列辨識編號：226及序列辨識編號：227的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：225、序列辨識編號：226及序列辨識編號：227係對應於編碼序列辨識編號：81的輕鏈可變序列或序列辨識編 號：82的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：228、序列辨識編號：229及序列辨識編號：230的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：228、序列辨識編號：229及序列辨識編號：230係對應於編碼序列辨識編號：83的重鏈可變序列或序列辨識編號：84的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：81的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：221；編碼序列辨識編號：82的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：222；編碼序列辨識編號：83的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：223；編碼序列辨識編號：84的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：224；編碼序列辨識編號：81的輕鏈可變序列或序列辨識編號：82的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：225、序列辨識編號：226及序列辨識編號：227)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：83的重鏈可變序列或序列辨識編號：84的重鏈序列之互補決 定區(序列辨識編號：228、序列辨識編號：229及序列辨識編號：230)之聚核苷酸
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab9而言，編碼全長式Ab9抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：82的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：222與編碼序列辨識編號：84的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：224，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab9的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab9聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab9或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab10
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：91的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(序列辨識編號：231)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：92的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTT ATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：232)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：93的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGA GC(序列辨識編號：233)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：94的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCC CTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：234)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：235、序列辨識編號：236及序列辨識編號：237的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：235、序列辨識編號：236及序列辨識編號：237係對應於編碼序列辨識編號：91的輕鏈可變序列或序列辨識編號：92的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：238、序列辨識編號：239及序列辨識編號：240的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：238、序列辨識編號：239及序列辨識編號：240係對應於編碼序列辨識編號：93的重鏈可變序列或序列辨識編號：94的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：91的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：231；編碼序列辨識編號：92的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：232；編碼序列辨識編號：93的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：233；編碼序列辨識編號：94的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：234；編碼序列辨識編號：91的輕鏈可變序列或序列辨識編號：92的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：235、序列辨識編號：236及序列辨識編號：237)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：93的重鏈可變序列或序列辨識編號：94的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：238、序列辨識編號：239及序列辨識編號：240)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab10而言，編碼全長式Ab10抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：92的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：232與編碼序列辨識編號：94的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：234，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab10的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab10聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab10或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab11
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發 明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：101的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：241)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：102的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAA ACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：242)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：103的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：243)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係 包含編碼序列辨識編號：104的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：244)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：245、序列辨識編號：246及序列辨識編號：247的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：245、序列辨識編號：246及序列辨識編號：247係對應於編碼序列辨識編號：101的輕鏈可變序列或序列辨識編號：102的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號： 248、序列辨識編號：249及序列辨識編號：250的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：248、序列辨識編號：249及序列辨識編號：250係對應於編碼序列辨識編號：103的重鏈可變序列或序列辨識編號：104的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：101的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：241；編碼序列辨識編號：102的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：242；編碼序列辨識編號：103的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：243；編碼序列辨識編號：104的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：244；編碼序列辨識編號：101的輕鏈可變序列或序列辨識編號：102的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：245、序列辨識編號：246及序列辨識編號：247)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：103的重鏈可變序列或序列辨識編號：104的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：248、序列辨識編號：249及序列辨識編號：250)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結 合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab11而言，編碼全長式Ab11抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：102的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：242與編碼序列辨識編號：104的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：244，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab11的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab11聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab11或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab12
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：111的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成： CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTACTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(序列辨識編號：251)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：112的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTACTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTG TGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：252)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：113的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：253)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：114的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成： GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTC ACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：254)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：255、序列辨識編號：256及序列辨識編號：257的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：255、序列辨識編號：256及序列辨識編號：257係對應於編碼序列辨識編號：111的輕鏈可變序列或序列辨識編號：112的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：258、序列辨識編號：259及序列辨識編號：260的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編 號：258、序列辨識編號：259及序列辨識編號：260係對應於編碼序列辨識編號：113的重鏈可變序列或序列辨識編號：114的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：111的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：251；編碼序列辨識編號：112的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：252；編碼序列辨識編號：113的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：253；編碼序列辨識編號：114的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：254；編碼序列辨識編號：111的輕鏈可變序列或序列辨識編號：112的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：255、序列辨識編號：256及序列辨識編號：257)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：113的重鏈可變序列或序列辨識編號：114的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：258、序列辨識編號：259及序列辨識編號：260)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab12而言，編碼全長式Ab12抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨 識編號：112的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：252與編碼序列辨識編號：114的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：254，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab12的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab12聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab12或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab13
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：121的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAATTGC CAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(序列辨識編號：261)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：122的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGG GTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：262)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：123的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTACAATGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：263)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：124的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCT GGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTACAATGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCC CATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：264)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：265、序列辨識編號：266及序列辨識編號：267的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：265、序列辨識編號：266及序列辨識編號：267係對應於編碼序列辨識編號：121的輕鏈可變序列或序列辨識編號：122的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：268、序列辨識編號：269及序列辨識編號：270的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：268、序列辨識編號：269及序列辨識編號：270係對應於編碼序列辨識編號：123的重鏈可變序列或序列辨識編 號：124的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：121的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：261；編碼序列辨識編號：122的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：262；編碼序列辨識編號：123的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：263；編碼序列辨識編號：124的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：264；編碼序列辨識編號：121的輕鏈可變序列或序列辨識編號：122的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：265、序列辨識編號：266及序列辨識編號：267)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：123的重鏈可變序列或序列辨識編號：124的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：268、序列辨識編號：269及序列辨識編號：270)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab13而言，編碼全長式Ab13抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：122的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：262與編碼序列辨識編號：124的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編 號：264，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab13的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab13聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab13或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
抗體Ab14
本發明係進一步關於編碼具有CGRP結合特異性的抗體多肽之聚核苷酸。在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：131的可變輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTG ATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(序列辨識編號：271)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：132的輕鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCA AAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(序列辨識編號：272)。
在本發明的另一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：133的可變重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(序列辨識編號：273)。
在本發明的一實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：134的重鏈多肽序列之下列聚核苷酸序列，或任擇地由其所組成：GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGA GTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGG AGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(序列辨識編號：274)。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：275、序列辨識編號：276及序列辨識編號：277的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：275、序列辨識編號：276及序列辨識編號：277係對應於編碼序列辨識編號：131的輕鏈可變序列或序列辨識編號：132的輕鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
在本發明的又一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含序列辨識編號：278、序列辨識編號：279及序列辨識編號：280的聚核苷酸序列中之一或多者，或任擇地由其等所組成，序列辨識編號：278、序列辨識編號：279及序列辨識編號：280係對應於編碼序列辨識編號：133的重鏈可變序列或序列辨識編號：134的重鏈序列之互補決定區(CDR或高度變異區)之聚核苷酸。
本發明亦設想聚核苷酸序列，其包括編碼本文中所述抗體片段的聚核苷酸序列中之一或多者。在本發明的一實施例中，編碼具有CGRP結合特異性的抗體片段之聚核苷酸，係包含編碼抗體片段的下列所有聚核苷酸中之一者、二者、三者或多者，或任擇地由其等所組成：編碼序列辨識編號：131的輕鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：271；編碼序列辨識編號：132的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：272；編碼序列辨識編號：133的重鏈可變序列之聚核苷酸序列辨識編號：273；編碼序列辨識編號：134的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：274；編碼序列辨識編號：131的輕鏈可變序列或序列辨識編號：132的輕鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：275、序列辨識編號：276及序列辨識編號：277)之聚核苷酸；及編碼序列辨識編號：133的重鏈可變序列或序列辨識編號：134的重鏈序列之互補決定區(序列辨識編號：278、序列辨識編號：279及序列辨識編號：280)之聚核苷酸。
在本發明的一個較佳實施例中，本發明的聚核苷酸係包含編碼具有CGRP結合特異性的Fab(片段抗原結合)片段之聚核苷酸，或任擇地由其等所組成。就抗體Ab14而言，編碼全長式Ab14抗體之聚核苷酸係包含編碼序列辨識編號：132的輕鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：272與編碼序列辨識編號：134的重鏈序列之聚核苷酸序列辨識編號：274，或任擇地由其等所組成。
本發明的另一實施例設想被導入一表現載體中 之該等聚核苷酸，以供在哺乳類動物細胞諸如CHO、NSO、HEK-293中表現，或在真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞及諸如畢赤酵母屬(Pichia)的酵母菌中表現。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。在此(下文)所述之本發明的一實施例中，可藉由Ab14的酵素酶切作用(如木瓜酶)產生Fab片段，接著在一適宜的宿主中表現全長聚核苷酸。在本發明的另一實施例中，可經由Ab14聚核苷酸在諸如CHO、NSO或HEK 293細胞的哺乳類動物細胞、真菌、昆蟲或微生物系統諸如酵母菌細胞(例如諸如二倍體畢赤酵母屬(Pichia)之二倍體酵母菌)與其他酵母菌株之表現作用，產生抗CGRP抗體諸如Ab14或其Fab片段。適宜的畢赤酵母屬(Pichia)物種包括但不限於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。
在一實施例中，本發明係有關一種分離的聚核苷酸，其包含編碼選自序列辨識編號：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123或133的抗CGRP VH抗體胺基酸序列或編碼其變異體之一聚核苷酸，其中至少一個架構殘基(FR殘基)已被存在於一種兔抗CGRP抗體VH多肽的對應位置之一胺基酸取代或經保留性胺基酸取代作用取代。
在另一實施例中，本發明係有關一種分離的聚核苷酸，其包含編碼1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121或131的抗CGRP VL抗體胺基酸序列或編碼其變異體之聚核苷酸序列，其中至少一個架構殘基(FR 殘基)已被存在於一種兔抗CGRP抗體VL多肽的對應位置之一胺基酸取代或經保留性胺基酸取代作用取代。
在又一實施例中，本發明係有關一或多種異源性聚核苷酸，其包含編碼下列所含多肽之一序列：序列辨識編號：1與序列辨識編號：3；序列辨識編號：11與序列辨識編號：13；序列辨識編號：21與序列辨識編號：23；序列辨識編號：31與序列辨識編號：33；序列辨識編號：41與序列辨識編號：43；序列辨識編號：51與序列辨識編號：53，序列辨識編號：61與序列辨識編號：63；序列辨識編號：71與序列辨識編號：73；序列辨識編號：81與序列辨識編號：83；序列辨識編號：91與序列辨識編號：93；序列辨識編號：101與序列辨識編號：103；序列辨識編號：111與序列辨識編號：113；序列辨識編號：121與序列辨識編號：123；或序列辨識編號：131與序列辨識編號：133。
在另一實施例中，本發明係有關一種分離的聚核苷酸，其所表現的多肽係含有從一種抗CGRP抗體衍生的至少一種CDR多肽，其中所表現的多肽本身係以特異性方式與CGRP結合，或當與另一聚核苷酸序列組合表現時係以特異性方式與CGRP結合，其所表現的多肽係含有從一種抗CGRP抗體衍生的至少一種CDR多肽，其中該至少一種CDR係選自序列辨識編號：1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、111、113、121、123、131或序列辨識編號：133的VL或VH多肽中所含者。
亦設想包含該聚核苷酸之宿主細胞與載體。
本發明進一步設想載體，其所包含之聚核苷酸序列係編碼如本文中所載列的可變重鏈與輕鏈多肽序列以及個別互補決定區(CDR或高度變異區)；以及設想包含該載體序列之宿主細胞。在本發明的一實施例中，該宿主細胞係一酵母菌細胞。在本發明的另一實施例中，該酵母菌宿主細胞係屬於畢赤酵母屬(Pichia)。
B細胞之篩檢與分離作用
在一實施例中，本發明設想可用於分離至少一種CGRP抗原特異性細胞之抗原特異性B細胞殖株種群之製備與分離作用，該CGRP抗原特異性細胞可用於生產對抗CGRP的單株抗體，其對於所欲的一CGRP抗原或對於對應於該一抗體的一核酸序列具特異性。例如在授予Carvalho-Jensen等人之第US 2007/0269868號美國專利公開案中，教導該抗原特異性B細胞殖株種群之製備與分離方法，該專利公開案的揭露內容在此完整地併入本案以為參考資料。在本文之實例中亦教導該抗原特異性B細胞殖株種群之製備與分離方法。技藝中已知按尺寸或密度“富集”一細胞種群之方法。如參見第5,627,052號美國專利。在藉由抗原特異性富集該細胞種群之外，可使用該等步驟。
人化抗體之方法
在另一實施例中，本發明設想用於人化抗體重鏈與輕鏈之方法。例如在Olson等人之第US2009/0022659號美國專利申請公開案與在授予Garcia-Martinez等人之第 7,935,340號美國專利中，教導可應用於抗CGRP抗體之用於人化抗體重鏈與輕鏈之方法，其中各者的揭露內容在此完整併入本案以為參考資料。
產生抗體及其片段之方法
在另一實施例中，本發明設想用於產生抗CGRP抗體及其片段之方法。例如在授予Olson等人之第US 2009/0022659號美國專利申請公開案與在授予Garcia-Martinez等人之第7,935,340號美國專利中，教導用於生產由配對勝任型酵母菌的多倍體及較佳二倍體或四倍體菌株所分泌之抗CGRP抗體及其片段之方法，其中各者的揭露內容在此完整併入本案以為參考資料。
產生抗體之其他方法係具一般技藝者所熟知。例如，產生嵌合抗體之方法係現在技藝中眾所周知者(例如參見授予Cabilly等人之第4,816,567號美國專利；Morrison等人於期刊“P.N.A.S.USA”第81期第8651-55頁(1984年)乙文；Neuberger,M.S.等人於期刊“Nature”第314第268-270頁(1985年)乙文；Boulianne,G.L.等人於期刊“Nature”第312第643-46頁(1984年)乙文，其中各者的揭露內容在此完整併入本案以為參考資料)。
同樣地，產生人化抗體之方法係現在技藝中眾所周知者(例如參見授予Queen等人之第5,530,101號、第5,585,089號、第5,693,762號及第6,180,370號美國專利；授予Winter之第5,225,539號與第6,548,640號美國專利；授予Carter等人之第6,054,297號、第6,407,213號及第6,639,055 號美國專利；授予Adair之第6,632,927號美國專利；Jones,P.T.等人於期刊“Nature”第321第522-525頁(1986年)乙文；Reichmann,L.等人於期刊“Nature”第332第323-327頁(1988年)乙文；Verhoeyen,M.等人於期刊“Science”第239第1534-36頁(1988年)乙文，其中各者的揭露內容在此完整併入本案以為參考資料)。
亦可使用具一般技藝者所熟知的習用技術，藉由建構含有一操縱組與編碼一抗體重鏈的一DNA序列之一表現載體，而產生本發明之具有CGRP結合特異性的抗體多肽，其中編碼抗體特異性所需的CDR之DNA序列係衍生自一非人類細胞來源，較佳為一種兔子B細胞來源，而編碼該抗體鏈的其餘部分之DNA序列係衍生自一人類細胞來源。
使用具一般技藝者所熟知的相同習用方式，產生第二表現載體，該表現載體含有一操縱組及編碼一抗體輕鏈之一DNA序列，其中編碼抗體特異性所需的CDR之DNA序列係衍生自一非人類細胞來源，較佳為一種兔子B細胞來源，而編碼該抗體鏈的其餘部分之DNA序列係衍生自一人類細胞來源。
藉由具一般技藝者所熟知的習用技術，將表現載體轉染至一宿主細胞中，而產生經轉染的宿主細胞，藉由具一般技藝者所熟知的習用技術培養該經轉染的宿主細胞，而產生該抗體多肽。
該宿主細胞可用上述的二個表現載體進行共轉染，第一表現載體含有編碼一操縱組與輕鏈所衍生的一種 多肽之DNA，而第二載體含有編碼一操縱組與重鏈所衍生的一種多肽之DNA。該二載體含有不同的篩選標記，但所達成之重鏈與輕鏈多肽的表現作用較佳係實質上相等的。任擇地，可使用單一載體，及該載體包括同時編碼重鏈與輕鏈多肽的DNA。重鏈與輕鏈的編碼序列可包含cDNA、基因體DNA或二者。
用於表現抗體多肽之宿主細胞可為一細菌細胞諸如大腸桿菌(E.coli)，或一真核細胞諸如巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)。在本發明的一實施例中，可使用針對此目的明確界定之哺乳類動物細胞類型，諸如骨髓瘤細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株、NSO細胞株或HEK293細胞株。
用於建構載體之通用方法、產生宿主細胞所需之轉染方法及從該宿主細胞產生抗體多肽所需之培養方法，皆涵蓋習用技術。雖然用於產生抗體之細胞株較佳為哺乳類動物細胞株，可任擇使用其他適宜的任一細胞株，諸如一細菌細胞株，諸如大腸桿菌(E.coli)所衍生的細菌菌株或一酵母菌細胞株。
同樣地，抗體多肽一旦產生後，可依據技藝中的標準程序進行純化，諸如例如掃流式過濾作用、硫酸銨沉澱作用、親和性管柱層析法之類。
本文中所述之抗體多肽亦可用於設計與合成胜肽或非胜肽模擬劑，其等將適用於與本發明的抗體多肽相同之治療應用。例如參見Saragobi等人於期刊“Science”第253期第792-795頁(1991年)乙文，其內容在此完整地併入本 案以為參考資料。
篩檢分析
本發明亦包括篩檢分析法，其設計係在顯現CGRP關聯性疾病或功能失調的症狀之病患中，用於協助辨識與CGRP相關聯的疾病與功能失調。
在本發明的一實施例中，本發明的抗CGRP抗體或其CGRP結合片段，係用於檢測從顯現一CGRP關聯性疾病或功能失調的症狀之一病患所獲得的一生物試樣是否存在CGRP。若存在CGRP，或若與可比較的一生物試樣中的疾病前CGRP水平比較時顯示其水平較高，則可能有利於診斷一CGRP關聯性疾病或功能失調。
本發明的另一實施例提供一診斷或篩檢分析法，以在顯現本文中所提及之CGRP關聯性疾病或功能失調的症狀之病患中協助診斷與CGRP相關聯的疾病或功能失調，其包括使用一種轉譯後改質的抗CGRP抗體或其結合片段，分析從該病患取得的一生物試樣中之CGRP表現水平。抗CGRP抗體或其結合片段可進行轉譯後改質，而包含諸如先前在揭露內容中所述之一可檢測性基團。
使用本文中所闡述之一種經改質的抗CGRP抗體或其結合片段，測定生物試樣中的CGRP水平，及將生物試樣中的CGRP水平與一標準CGRP水平(如正常生物試樣中的水平)比較。嫻熟的臨床醫師理解在正常生物試樣之間可能存在些許變異性，及當評估結果時會將其納入考量。在本發明的一實施例中，可使用本發明的抗CGRP抗體來取 得CGRP表現水平與癌症進程的一特定階段之關聯性。嫻熟技藝者能在眾多個體中測量CGRP，以建立對應癌症進程的臨床界定階段之CGRP表現作用範圍。該等範圍將容許嫻熟的執業醫師在經診斷罹患癌症的一個體中測量CGRP，及將各個體的水平與對應該癌症各階段的範圍互相關聯。嫻熟技藝者將瞭解藉由在不同的時間間隔測量病患的CGRP，可測定癌症進程。
上述分析法亦可適用於監測一疾病或功能失調，其中在據信患有一CGRP關聯性疾病或功能失調的一病患之生物試樣中所獲得的CGRP水平，係與來自相同病患的先前生物試樣中的CGRP水平比較，以確定該病患的CGRP水平是否因例如一治療方案而改變。
本發明亦關於檢測是否存在表現CGRP的細胞之一種活體內成像方法，其包括投予一診斷有效量之一診斷性組成物。例如，該活體內成像作用係適用於表現CGRP的腫瘤或轉移之檢測或成像，及可適用作為用於設計有效的癌症治療程序之規劃療法的一部分。該治療程序例如可包括一或多種輻射、化學療法、細胞介素療法、基因療法及抗體療法，以及一種抗CGRP抗體或其片段。
本發明進一步提供用於檢測本發明的抗CGRP抗體與CGRP的結合作用之一套組。尤其該套組可用於檢測是否存在與本發明的抗CGRP抗體或其免疫反應性片段進行特異性反應之CGRP。該套組亦可包括與一受質結合之一抗體、具有抗原反應性之一種二級抗體及用於檢測二級抗 體與抗原的反應之一試劑。該套組可為一種ELISA套組及可酌情包括受質、初級與二級抗體，及其他所需的任何試劑諸如可檢測性基團、酵素受質及呈色試劑，例如本文中所述者。該診斷套組亦可為免疫墨點套組之形式。該診斷套組亦可為化學發光套組之形式(美國馬里蘭州蓋瑟斯堡之Meso Scale Discovery公司)。該診斷套組亦可為一種鑭系元素式檢測套組(美國加州聖荷西之珀金埃爾默(PerkinElmer)公司)。
嫻熟的臨床醫師將瞭解生物試樣包括但不限於血清、血漿、尿液、唾液、黏液、胸腔積液、滑膜液及脊髓液。
紓緩或減少與CGRP相關聯的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防之方法
在本發明的另一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其片段，係適用於紓緩或減少與CGRP相關聯的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防。本文中所述之抗CGRP抗體或其片段以及組合物，亦能以如下文所詳述之一藥學組成物形式，對於需要治療與CGRP相關聯的疾病與功能失調之病患投予一治療有效量。
在本發明的另一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其片段係適用於紓緩或減少下列之症狀或進行治療或預防：偏頭痛(不論有無前兆)、體重減輕、癌症或腫瘤、與癌症或腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與癌症或腫瘤存活相關聯之血管生成作用、疼痛、偏癱性偏頭痛、 叢發性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、熱潮紅、慢性陣發性半邊頭痛、由於頭部或頸部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、顱部神經痛、鼻竇性頭痛(諸如例如與鼻竇炎相關者)及過敏引發型頭痛或偏頭痛。
在本發明的一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其片段及/或與第二劑，係適用於紓緩或減少下列非限制性清單中的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防：疼痛、發炎疼痛、手術後傷口疼痛、複雜性局部疼痛症候群、癌症疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、慢性疼痛、骨質疏鬆性骨折疼痛、燒傷引起的疼痛、骨質疏鬆症、痛風關節疼痛、腹痛、與鐮狀細胞危象相關聯的疼痛及其他傷害性疼痛；以及肝細胞癌、乳癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性病變疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、痛經、卵巢痛、反射性交感神經失養症、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛；或與下列相關聯之疼痛或內臟疼痛：胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、激躁性結腸、痙攣性結腸、黏膜性結腸炎、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎，胰臟炎，腎絞痛、痛經、包括間質性膀胱炎在內之(IC)膀胱炎、與腸塞絞痛相關聯之手術、憩室炎、腹膜炎、心包膜炎、肝炎、闌尾炎、結腸炎、膽囊炎、 子宮內膜異位、慢性及/或急性胰臟炎、心肌梗塞、腎臟疼痛、胸膜疼痛、攝護腺炎、骨盆腔疼痛、器官創傷、慢性傷害性疼痛、慢性神經性病變疼痛、慢性發炎疼痛、纖維肌痛、突發性疼痛與持續性疼痛；及源自惡性腫瘤或源自較佳地選自下列的一或多種癌症之癌症疼痛：腺體組織的腺癌、器官胚胎組織的胚細胞瘤、上皮組織的癌症、形成血球細胞的組織之白血病、淋巴組織的淋巴瘤、骨髓的骨髓瘤、結締或支持組織的肉瘤、腎上腺癌、愛滋病相關性淋巴瘤、貧血、膀胱癌、骨癌、腦癌、乳癌、類癌瘤、子宮頸癌、化學療法、結腸癌、細胞減少症、子宮內膜癌、食道癌、胃癌(gastric cancer)、頭部癌症、頸癌、肝膽癌、腎臟癌、白血病(leukemia)、肝癌、肺癌、淋巴瘤、霍奇金氏(Hodgkin)病、淋巴瘤、非霍奇金氏病、神經系統腫瘤、口腔癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌(stomach cancer)、睾丸癌、甲狀腺癌、尿道癌、骨癌、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、造血細胞的癌症、骨髓癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原發性或轉移性骨癌、轉移至骨的腫瘤、浸潤神經與中空型內臟之腫瘤、鄰近神經構造之腫瘤。癌症疼痛又較佳包括內臟疼痛，較佳為源自胰臟癌及/或至腹部的轉移作用之內臟疼痛。癌症疼痛又較佳包括軀體疼痛，較佳為由於一或多種骨癌、轉移至骨、手術後疼痛、結締組織的肉瘤癌症、骨組織的癌症、骨髓造血細胞的癌症、多發性骨髓瘤、白血病(leukaemia)、原發性或轉移性骨癌之軀體疼痛。
在本發明的另一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其片段及/或與第二劑，係適用於紓緩或減少下列非限制性清單中的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防：癌症或腫瘤、與癌症或腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與癌症或腫瘤存活相關聯之血管生成作用。
在本發明的另一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其片段及/或與第二劑，係適用於紓緩或減少下列非限制性清單中的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防：神經源性、神經性病變或傷害性疼痛。神經性病變疼痛可包括但不限於三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、痛經、卵巢痛、反射性交感神經失養症及神經源性疼痛。在其他的較佳實施例中，骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛及其他神經性病變疼痛。
在本發明的另一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其片段及/或與第二劑，係適用於紓緩或減少下列非限制性清單中的疾病與功能失調之症狀或進行治療或預防：膀胱過動症與其他泌尿病況、胃食道逆流及與胃食道逆流相關聯的內臟疼痛、消化不良、激躁性腸症候群、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎、搔癢症或胰臟炎。此外，主題CGRP抗體與抗體片段可單獨使用或聯同其他活性劑使用，如類鴉片與非類鴉片止痛劑諸如NSAID，而引發止痛作用，或賦予另一止痛劑之功效， 或預防或減緩對於一特定止痛劑諸如嗎啡或相關類鴉片止痛劑之耐藥性。在阻斷/逆轉嗎啡所誘發的止痛作用之生方面，有關CGRP所扮演角色之證據，係在於CGRP8-37與CGRP受器拮抗劑(BIBN4096BS)據報導預防/逆轉嗎啡耐藥性發生之事實(Powell等人於2000年期刊“J Brit J Pharmacol”第(131)期第875頁乙文；Menard等人於1996年期刊“J Neurosci”第(16)期第2342頁乙文；Wang等人於2009年期刊“FASEBJ”第(23)期第2576頁乙文；於2010年期刊“Pain”第(151)期第194頁乙文)。
主題抗體可能可與任一類鴉片止痛劑或NSAID或可為另一抗體的其他止痛劑組合，以提升或加強疼痛管理，或逆轉或抑制對於一止痛劑諸如一種類鴉片止痛化合物之耐藥性。這可容許該止痛化合物投予較長的期間，或以較低劑量投予而使得可能減輕與其相關的不良副作用。
本文中之“類鴉片止痛劑”一詞係指具有類似嗎啡的作用之所有天然或合成的藥物。合成與半合成的類鴉片止痛劑係五種化學類型的化合物之衍生物：菲類、苯基庚胺類、苯基哌啶類、嗎啡喃類及苯并嗎啡烷類，其中所有者皆位於該詞的範圍內。例示性類鴉片止痛劑包括可待因、二氫可待因、二乙醯嗎啡、氫可酮(hydrocodone)、氫嗎啡酮(hydromorphone)、左啡諾(levorphanol)、羥嗎啡酮(oxymorphone)、阿芬太尼(alfentanil)、丁丙諾啡(buprenorphine)、布托啡諾(butorphanol)、芬太尼(fentanyl)、舒芬太尼(sufentanyl)、哌替啶(meperidine)、美沙酮 (methadone)、納布啡(nalbuphine)、丙氧吩(propoxyphene)及潘他唑新(pentazocine)或其藥學上可接受的鹽類。
“NSAID”一詞係指非類固醇類消炎性化合物。NSAID按其等抑制環氧合酶的能力加以分類。環氧合酶1與環氧合酶2係二種主要的環氧合酶異構體，及大部分的標準NSAID係該二異構體的混合型抑制劑。大部分的NSAID係屬於下列五個結構類別之一：(1)丙酸衍生物，諸如伊布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、萘普生(naprosyn)、待可芬(diclofenac)及酮洛芬(ketoprofen)；(2)乙酸衍生物，諸如痛必定(tolmetin)與舒寧達克(slindac)；(3)芬那酸衍生物，諸如甲芬那酸與甲氯芬那酸；(4)聯苯羧酸衍生物，諸如二氟尼柳(diflunisal)與氟苯柳(flufenisal)；及(5)昔康(oxicam)類，諸如必樂信(piroxim)、舒多昔康(sudoxicam)與伊索昔康(isoxicam)。亦曾述及選擇性抑制環氧合酶2之另一NSAID類型。如在第5,616,601號、第5,604,260號、第5,593,994號、第5,550,142號、第5,536,752號、第5,521,213號、第5,475,995號、第5,639,780號、第5,604,253號、第5,552,422號、第5,510,368號、第5,436,265號、第5,409,944號及第5,130,311號美國專利中曾說明Cox-2抑制劑，其中所有專利在此併入本案以為參考資料。特定的例示性COX-2抑制劑包括塞來考昔(celecoxib)(SC-58635)、DUP-697、氟舒胺(flosulide)(CGP-28238)、美洛昔康(meloxicam)、6-甲氧基-2萘基乙酸(6-MNA)、羅非考昔(rofecoxib)、MK-966、萘丁美酮(nabumetone)(6-MNA的前驅藥)、尼美舒利 (nimesulide)、NS-398、SC-5766、SC-58215、T-614或其組合物。
在一些實施例中，阿斯匹靈及/或乙醯胺苯酚可聯同該主題CGRP抗體或片段服用。阿斯匹靈係另一類型的非類固醇類抗炎性化合物。
可藉由投予本發明的CGRP抗體而加以治療及/或預防之例示性、非限制性疾病與功能失調，係包括源自與神經源性、神經性病變、炎性、熱或傷害性疼痛相關聯的任何病況之疼痛。較佳地，該功能失調係與疼痛部位的CGRP增加相關聯。在神經性病變疼痛的特定實施例中，較佳治療所提及的三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、反射性交感神經失養症及神經源性疼痛病況。在其他實施例中，較佳治療尤其是骨癌疼痛之癌症疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、手術後傷口疼痛、骨折疼痛、骨質疏鬆性骨折疼痛、骨質疏鬆症、痛風關節疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛、與鐮狀細胞危象相關聯的疼痛、偏頭痛及其他神經性病變及/或傷害性疼痛。因此，本發明包括經由使用本發明的抗體與抗體片段而治療、預防及/或紓緩與CGRP活性或CGRP向上調控作用相關聯的任何疾病或功能失調(包括上述例示性疾病、功能失調及病況中之任一者)之方法。本發明的治療方法係包括對於一個體投予僅包含如本文中所揭露的一種抗CGRP抗體或連同另一活性劑之任一調配物。
投予該藥學調配物之個體可為例如需要該項治 療、預防及/或改善作用之任何人類或非人類動物，或在其他情況下將因CGRP媒介型活性的抑制或衰減作用而受益者。例如，該個體可為經診斷患有上述任一疾病或功能失調之個人，或被認為具有罹患風險者。本發明進一步包括本文所揭露的任一藥學調配物在製造用於治療、預防及/或改善與CGRP活性相關聯的任一疾病或功能失調(包括上述例示性疾病、功能失調及病況中之任一者)之一藥物之用途。
投藥作用
在本發明的一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，係以介於約0.1與100.0毫克/領受個體的體重公斤數之間之一濃度投藥至一個體。在本發明的一個較佳實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，係以約0.4毫克/領受個體的體重公斤數之濃度投藥至一個體。在本發明的一個較佳實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，係以每26個星期或以下一次之頻率投藥至一領受個體，諸如每16個星期或以下一次、每8個星期或以下一次、每4個星期或以下一次、每2個星期或以下一次、每個星期或以下一次或每日以下一次之頻率。
可每兩個星期或以下一次、每個星期或以下一次、每日以下一次、每日多次及/或每數小時投予Fab片段。在本發明的一實施例中，病患係每日領受有效獲得所欲結 果之0.1毫克/公斤至40毫克/公斤的Fab片段，其係以每日分成1至6次的分次劑量給藥，或以一持續釋出形式給藥。
需瞭解對於一特定病患所投予的抗體或Fab濃度，可能高於或低於在上文段落[0552]與[0553]中所列的例示性投藥濃度。
嫻熟技藝者將可經由實驗決定有效劑量及投藥頻率，例如遵循本文中的揭露內容及下列之教導：美國紐約之麥格羅-希爾‧古德曼(McGraw-Hill Goodman)公司出版之Goodman,L.S.,Gilman,A.,Brunton,L.L.,Lazo,J.S.及Parker,K.L.(2006年)所著“古德曼與吉爾曼之治療學藥理基礎(Goodman & Gilman's the pharmacological basis of therapeutics)”乙書；美國費城之利平科特‧威廉斯‧威爾金斯(Lippincott Williams & Wilkins)公司出版之Howland,R.D.,Mycek,M.J.,Harvey,R.A.,Champe,P.C.及Mycek,M.J.(2006年)所著“藥理學--利平科特之圖解總論(Pharmacology.Lippincott's illustrated reviews)”乙書；及美國賓州費城等之利平科特‧威廉斯‧威爾金斯(Lippincott Williams & Wilkins)公司出版之Golan,D.E.(2008年)所著“藥理學原理：藥物治療之病理生理學基礎(Principles of pharmacology：the pathophysiologic basis of drug therapy)”乙書。
在本發明的另一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，係以一藥學調配物形式投予至一個體。
一“藥學組成物”係指適合投藥至一哺乳類動物 之化學或生物組成物。可特別配製該等組成物供經由數種路徑中的一或多者投藥，該等路徑包括但不限於頰、表皮、硬脊膜外、吸入作用、動脈內、心臟內、側腦室內、真皮內、肌內、鼻內、眼內、腹膜內、椎管內、髓鞘內、靜脈內、口服、非經腸、經由一灌腸劑或栓劑之直腸方式、皮下、真皮下、舌下、經皮及經黏膜。此外，可藉由注射液劑、散劑、液劑、凝膠劑、滴劑之方式或其他投藥方式，進行投藥。
在本發明的一實施例中，本文中所述之抗CGRP抗體或其CGRP結合片段以及該抗體或抗體片段的組合物，可選擇性地與一或多種活性劑組合投藥。該等活性劑包括止痛劑、抗組織胺劑、退燒藥、消炎藥、抗生素、抗病毒劑及抗細胞介素劑。活性劑包括促效劑、拮抗劑及TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、IL-13、IL-18、IFN-α、IFN-γ、BAFF、CXCL13、IP-10、VEGF、EPO、EGF、HRG、肝細胞生長因子(HGF)、鐵調素之調節劑，包括對於前述任一者具有反應性之抗體，及對於其等任一受器具有反應性之抗體。活性劑亦包括但不限於2-芳基丙酸類、醋氯芬酸(Aceclofenac)、阿西美辛(Acemetacin)、乙醯水楊酸(阿斯匹靈)、阿氯芬酸(Alclofenac)、阿明洛芬(Alminoprofen)、阿莫西普(Amoxiprin)、4-胺安替比林(Ampyrone)、芳基鏈烷酸類、阿扎丙宗(Azapropazone)、貝諾酯(benorylate)/貝諾酯(Benorilate)、苯洛芬(Benoxaprofen)、溴芬酸(Bromfenac)、卡洛芬(Carprofen)、 塞來考昔(celecoxib)、三水楊酸膽鹼鎂、氯非宗(Clofezone)、COX-2抑制劑、右布洛芬(Dexibuprofen)、右酮洛芬(Dexketoprofen)、待可芬(diclofenac)、二氟尼柳(diflunisal)、屈昔康(Droxicam)、鄰乙氧苯甲酸胺(Ethenzamide)、依托度酸(Etodolac)、依托考昔(Etoricoxib)、非斯拉明(Faislamine)、芬那酸類、芬布芬(Fenbufen)、非諾洛芬(Fenoprofen)、氟芬那酸、氟諾洛芬(Flunoxaprofen)、氟比洛芬(Flurbiprofen)、伊布洛芬(ibuprofen)、異丁普生(Ibuproxam)、吲哚美辛(Indometacin)、吲哚洛芬(Indoprofen)、凱布宗(Kebuzone)、酮洛芬(Ketoprofen)、酮咯酸(Ketorolac)、氯諾昔康(Lornoxicam)、洛索洛芬(Loxoprofen)、蘆米考昔(Lumiracoxib)、水楊酸鎂、甲氯芬那(Meclofenamic)酸、甲芬那(Mefenamic)酸、美洛昔康(Meloxicam)、安乃近(Metamizole)、水楊酸甲酯、莫非布宗(Mofebutazone)、萘丁美酮(Nabumetone)、萘普生(Naproxen)、N-芳基鄰胺基苯甲酸類、神經生長因子(NGF)、奧沙美辛(Oxametacin)、4,5-二苯-2-唑丙酸(Oxaprozin)、昔康(Oxicam)類、羥布宗(Oxyphenbutazone)、帕瑞考昔(Parecoxib)、安替比林(Phenazone)、保泰松(Phenylbutazone)、保泰松(Phenylbutazone)、吡羅昔康(Piroxicam)、吡洛芬(Pirprofen)、洛芬(profen)類、丙谷美辛(Proglumetacin)、吡唑啶衍生物、羅非考昔(Rofecoxib)、雙水楊酸酯、水楊醯胺、水楊酸鹽類、物質P、磺吡酮(Sulfinpyrazone)、舒林酸(Sulindac)、舒洛芬(Suprofen)、替 諾昔康(Tenoxicam)、泰普菲(Tiaprofenic)酸、托芬那(Tolfenamic)酸、痛必定(Tolmetin)及伐地考昔(Valdecoxib)。
抗組織胺劑可為阻止組織胺的作用或阻止組織胺自細胞(如肥大細胞)釋出之任一化合物。抗組織胺劑包括但不限於阿伐斯汀(acrivastine)、阿司咪唑(astemizole)、阿扎他定(azatadine)、阿扎他定(azelastine)、betatastine、溴苯那敏(brompheniramine)、布克力嗪(buclizine)、西替利嗪(cetirizine)、西替利嗪類似物、氯苯那敏(chlorpheniramine)、氯馬斯汀(clemastine)、CS 560、賽庚啶(cyproheptadine)、地氯雷他定(desloratadine)、右旋氯苯那敏(dexchlorpheniramine)、依巴斯汀(ebastine)、依匹斯汀(epinastine)、非索非那定(fexofenadine)、HSR 609、羥、左卡巴斯汀(levocabastine)、樂雷塔定(loratidine)、甲基莨菪鹼、咪唑斯汀(mizolastine)、諾阿斯咪唑(norastemizole)、苯茚達明(phenindamine)、普洛敏太定(promethazine)、吡拉明(pyrilamine)、特非那定(terfenadine)及曲尼司特(tranilast)。
抗生素包括但不限於阿米卡星(Amikacin)、胺基苷類、阿莫西林(Amoxicillin)、安比西林(Ampicillin)、安沙黴素(Ansamycin)類、砷凡納明(Arsphenamine)、阿奇黴素(Azithromycin)、阿洛西林(Azlocillin)、氨曲南(Aztreonam)、枯草菌素、碳頭孢烯、碳青黴烯類、羧苄西林(Carbenicillin)、頭孢克洛(Cefaclor)、頭孢羥氨苄(Cefadroxil)、頭孢氨苄(Cefalexin)、頭孢噻吩(Cefalothin)、 頭孢噻吩(Cefalotin)、頭孢孟多(Cefamandole)、頭孢唑林(Cefazolin)、頭孢地尼(Cefdinir)、頭孢托侖(Cefditoren)、頭孢吡肟(Cefepime)、頭孢克肟(Cefixime)、頭孢哌酮(Cefoperazone)、頭孢噻肟(Cefotaxime)、頭孢西丁(Cefoxitin)、頭孢泊肟(Cefpodoxime)、頭孢丙烯(Cefprozil)、頭孢他啶(Ceftazidime)、頭孢布烯(Ceftibuten)、頭孢唑肟(Ceftizoxime)、頭孢吡普(Ceftobiprole)、頭孢曲松(Ceftriaxone)、頭孢呋辛(Cefuroxime)、頭孢菌素類、氯黴素、西司他丁(Cilastatin)、環丙沙星(Ciprofloxacin)、克拉黴素(Clarithromycin)、克林黴素(Clindamycin)、氯唑西林(Cloxacillin)、柯利黴素(Colistin)、複方磺胺甲基異唑(Co-trimoxazole)、達福普汀(Dalfopristin)、地美環素(Demeclocycline)、雙氯西林(Dicloxacillin)、地紅黴素(Dirithromycin)、多立培南(Doripenem)、多西環素(Doxycycline)、依諾沙星(Enoxacin)、厄他培南(Ertapenem)、紅黴素、孟表多(Ethambutol)、氟氯西林(Flucloxacillin)、磷黴素(Fosfomycin)、富來頓(Furazolidone)、梭鏈孢酸、加替沙星(Gatifloxacin)、格爾德黴素(Geldanamycin)、慶大黴素(Gentamicin)、醣肽類、除莠黴素(Herbimycin)、亞胺培南(Imipenem)、異菸酸肼(Isoniazid)、卡那黴素(Kanamycin)、左氧氟沙星(Levofloxacin)、林可黴素(Lincomycin)、利奈唑胺(Linezolid)、洛美沙星(Lomefloxacin)、氯碳頭孢(Loracarbef)、巨環內酯類、磺胺米隆(Mafenide)、美羅培南 (Meropenem)、甲氧西林(Meticillin)、甲硝唑(Metronidazole)、美洛西林(Mezlocillin)、米諾環素(Minocycline)、單內醯胺類、莫昔沙星(Moxifloxacin)、莫匹羅星(Mupirocin)、萘夫西林(Nafcillin)、新黴素、奈替米星(Netilmicin)、呋喃妥因(Nitrofurantoin)、諾氟沙星(Norfloxacin)、氧氟沙星(Ofloxacin)、苯唑西林(Oxacillin)、土黴素、巴龍黴素(Paromomycin)、盤尼西林、盤尼西林類、哌拉西林(Piperacillin)、平板黴素(Platensimycin)、多黏菌素B、多肽類、普隆托西(Prontosil)、吡甲醯胺、喹啉酮類、奎奴普丁(Quinupristin)、利福平(Rifampicin)、雷發平(Rifampin)、羅紅黴素(Roxithromycin)、大觀黴素(Spectinomycin)、鏈黴素、乙醯磺胺、磺胺甲二唑、對胺基苯磺醯胺、柳氮磺吡啶(Sulfasalazine)、磺胺異唑、磺醯胺類、替考拉寧(Teicoplanin)、替利黴素(Telithromycin)、四環黴素、四環黴素類、替卡西林(Ticarcillin)、替硝唑(Tinidazole)、泰百黴素(Tobramycin)、甲氧苄啶(Trimethoprim)、甲氧苄啶-磺胺甲異唑、醋竹桃黴素(Troleandomycin)、曲伐沙星(Trovafloxacin)及萬古黴素(Vancomycin)。
活性劑亦包括醛固酮、倍氯米松(Beclometasone)、倍他米松(Betamethasone)、皮質類固醇類、皮質醇、醋酸皮質酮、醋酸去氧皮質固酮、地塞米松(Dexamethasone)、氟氫可的松(Fludrocortisone)、糖皮質素類、氫化可的松(Hydrocortisone)、甲潑尼龍 (Methylprednisolone)、潑尼松龍(Prednisolone)、潑尼松(Prednisone)、類固醇類及去炎松(Triamcinolone)。亦設想該等活性劑之任一適宜組合物。
“藥學賦形劑”或“藥學上可接受的賦形劑”係在其中配製一活性治療劑之一載劑，及通常是一種液體。在本發明的一實施例中，該活性治療劑係本文中所述之一人化抗體，或其一或多種片段。賦形劑一般並未提供該調配物任何藥理活性，雖然其可能提供化學及/或生物安定性以及釋出特性。例示性調配物可參見例如由Grennaro,A.編輯之雷明頓製藥學(Remington’s Pharmaceutical Sciences)乙書第19版(1995年出版)，其在此併入本案以為參考資料。
如本文中所用之“藥學上可接受的載劑”或“賦形劑”包括生理上可相容的溶劑、分散介質、塗料、抗細菌與抗真菌劑、等張性與吸收延緩劑中之任一者及所有者。在一實施例中，該載劑係適用於非經腸投藥作用。任擇地，該載劑可適用於靜脈內、腹膜內、肌內或舌下投藥作用。藥學上可接受的載劑包括無菌水溶液或分散液，及包括供即席製備無菌可注射式溶液或分散液之無菌粉末。技藝中熟知該等介質與作用劑用於藥學活性物質之用途。除了與該活性化合物不相容的任一習用介質與作用劑之外，設想其等在本發明的藥學組成物中之用途。亦可在組成物中納入補充的活性化合物。
藥學組成物典型必須無菌及在製造與儲存條件下安定。本發明設想該藥學組成物係以冷凍乾燥型式存 在。可將該組成物配製成溶液、微乳液、脂質體或其他適於高藥物濃度的有序結構。載劑可為例如含有水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇與液態聚乙二醇)及其適宜混合物之一溶劑或分散介質。本發明進一步設想在藥學組成物中納入一安定劑。例如在分散液情況下，可藉由維持所需粒度及藉由使用表面活性劑，而維持適當的流動性。
在許多情況下，較佳在組成物中包括等張劑例如糖類、多元醇類諸如甘露糖醇、山梨糖醇或氯化鈉。可藉由在組成物中包括延遲吸收作用的作用劑例如單硬脂酸鹽類與明膠，而促成可注射式組成物的吸收作用之延遲。此外，可將鹼性多肽配製在一緩釋型調配物中，例如在包含一緩釋型聚合物之組成物中。可用保護活性化合物免於快速釋出之載劑，製備該化合物，諸如其中包括植入物與微膠囊化輸送系統之一控制釋出型調配物。可使用生物可降解性、生物可相容性聚合物，諸如醋酸乙烯酯、聚酸酐類、聚乙醇酸、膠原蛋白、聚原酸酯、聚乳酸及聚乳酸、聚乙醇酸共聚物(PLG)。用於製備該等調配物的眾多方法係嫻熟技藝者所知。
就所引述的各實施例而言，可藉由多種劑型投予該等化合物。設想具一般技藝者所知之任何生物上可接受的劑型及其組合物。該等劑型的實例包括但不限於可復水性散劑、酏劑、液體、液劑、懸液劑、乳劑、散劑、顆粒劑、顆粒劑、微米顆粒劑、可分散性顆粒劑、扁囊劑、吸入劑、氣霧吸入劑、貼劑、顆粒性吸入劑、植入物、儲 存型植入物、可注射式劑型(包括皮下、肌內、靜脈內及皮內)、輸注劑型及其組合物。
本發明所述各種實施例之上述說明並非意欲窮舉或將本發明侷限於所揭露的確切形式。在此係為了說明之目的而陳述本發明的特定實施例及用於本發明的實例，嫻熟相關技藝者所認出之各種等效改質作用，在本發明的範圍內皆屬可能。本文所提供關於本發明的教導可應用在上述實例以外的其他目的。
鑑於上述詳細說明，可在本發明進行該等與其他改變。一般而言，在下列申請專利範圍中，所用詞語不應被解釋將本發明侷限於說明書與申請專利範圍中所揭露的特定實施例。因此，本發明並非受限於揭露內容，本發明的範圍完全由下列申請專利範圍所決定。
可用特別述於前述說明與實例中的該等方式以外之其他方式，實施本發明。鑑於上述教導可能進行本發明的眾多改質作用與變化，及其等因此係位於所附申請專利範圍的範疇之內。
與用於獲得抗原特異性B細胞殖株種群之方法相關之特定教導，係揭露於2006年5月19日提出申請之第60/801,412號美國暫准專利申請案中，其揭露內容在此完整地併入本案以為參考資料。
與兔衍生型單株抗體的人化作用及用以維持抗原結合親和性之較佳的序列改質作用相關之特定教導，係揭露於第PCT/US2008/064421號國際申請案中，其係對應於 2008年5月21日提出申請及標題為“新穎兔抗體人化作用方法與人化兔抗體”之第WO/2008/144757號國際公開案，其揭露內容在此完整地併入本案以為參考資料。
與使用配對勝任型酵母菌及對應方法產生抗體或其片段相關之特定教導，係揭露於2006年5月8日提出申請之第11/429,053號美國專利申請案(美國專利申請公開案US 2006/0270045)中，其揭露內容在此完整地併入本案以為參考資料。
本專利申請案提出申請時所附序列表中所揭露的特定CGRP抗體聚核苷酸與多肽及該序列表的揭露內容，係在此完整地併入本案以為參考資料。
在本發明背景、詳細說明及實例中所引述各文獻的完整揭露內容(包括專利、專利申請案、期刊文章、摘要、手冊、書籍或其他揭露內容)，係在此完整地併入本案以為參考資料。
提出下列實例係為了提供該等具一般技藝者完整的揭露內容及說明如何製作與使用本發明，而並非意欲限制視為本發明之範圍。就所用數值(如量、溫度、濃度等)而言，已努力確保準確性，但應容許一些實驗誤差與偏差。除非另有說明，份係重量份，分子量係平均分子量，溫度係以攝氏度數為單位；及壓力係大氣壓力或接近大氣壓力。
實例 第1例：CGRP結合型抗體之製備作用
藉由使用本文中所述之抗體篩選程序，可產生 廣泛的抗體組。
免疫接種策略
用人類CGRPα(美國加州桑尼維爾(Sunnyvale)的美國胜肽(American Peptides)公司及美國加州托倫斯(Torrance)的巴亨(Bachem)公司)進行兔的免疫接種。免疫接種係首先皮下(sc)注射位於完全弗氏(Freund)佐劑(CFA)(西克瑪(Sigma)公司)中之100微克的抗原及混合100微克的KLH，接著注射分隔二個星期之二個補強劑，各補強劑含有50微克的抗原及與位於不完全弗氏(Freund)佐劑(IFA)(西克瑪(Sigma)公司)中的50微克混合。動物在第55天犧牲，及藉由ELISA(抗原辨識作用)與藉由抑制SK-N-MC中由CGRP所驅動的cAMP增加，而測定血清效價。
抗體篩選效價之評估
為了識別與人類CGRP結合的抗體及進行特性分析，藉由ELISA測試含有抗體的溶液。簡言之，經中性卵白素塗佈的平皿(賽默科技(Thermo Scientific)公司)，使用在ELISA緩衝液(位於pH7.4的PBS中之0.5%魚皮明膠)中稀釋之胺基端生物素化人類CGRPα(每孔50微升，1微克/毫升)進行塗佈，其係在室溫進行約1小時或任擇地在4℃過夜。然後在室溫進一步用ELISA緩衝液阻斷該等平皿1小時，及使用清洗緩衝液(PBS、0.05%妥文(Tween)20)清洗。所測試的血清試樣係使用ELISA緩衝液進行系列稀釋。將50微升的稀釋後血清試樣轉移至孔中，及在室溫培養1小時。在培養後，用清洗緩衝液清洗平皿。為進行顯影，在 孔中添加一種抗兔特異性Fc-HRP(在ELISA緩衝液中進行1：5000稀釋作用)，及在室溫培養45分鐘。使用清洗溶液進行3次清洗步驟之後，該平皿係使用TMB受質在室溫顯影2分鐘，及使用0.5M氯化鈉將該反應驟冷。在450奈米讀取各孔的吸光度。
藉由功能性活性(對於CGRP所驅動的cAMP水平之抑制作用)測定血清試樣之效價
為了識別具功能性活性的抗體及進行特性分析，使用電致化學發光(Meso Scale Discovery公司(MSD公司))，分析對於CGRP所驅動的cAMP水平增加之抑制作用。簡言之，在一個96孔圓底聚苯乙烯平皿(寇斯塔(Costar)公司)中，在MSD分析緩衝液(4-羥乙基哌乙磺酸(Hepes)、氯化鎂、pH值為7.3、1毫克/毫升的阻斷劑A，Meso Scale Discovery公司)中進行待測試的抗體製劑之系列稀釋作用。在該平皿中，添加在MSD分析緩衝液中稀釋的人類CGRPα(最終濃度為10奈克/毫升)，及在37℃培養1小時。如分析套組製造商所建議，使用適當的對照組。使用EDTA溶液(於PBS中的5 mM溶液)使人類神經上皮瘤細胞(SK-N-MC，ATCC)剝離，及使用生長培養基(MEM、10%的FBS、抗生素)而藉由離心作用清洗。將分析緩衝液中的細胞數目調整為每毫升2百萬個細胞，及在cAMP分析平皿中添加細胞之前，添加IBMX(3-異丁基-1-甲基黃嘌呤，西克瑪(Sigma)公司)至最終濃度為0.2 mM。當培養人類CGRPα抗體溶液1小時後，將20微升之含有細胞的溶液轉移 至cAMP分析平皿。所測試的所有試樣皆以二重複進行，及具有適當的對照組。在孔中添加10微升的細胞，及該平皿在室溫與振盪下培養30分鐘。當細胞與CGRP溶液一起培養時，藉由在溶解緩衝液(MSD公司)中製作經TAG標記的cAMP(MSD公司)之1：200溶液，而製備終止溶液。為終止細胞-CGRP培養作用，在細胞中添加20微升的終止溶液，及該平皿在室溫與振盪下培養1小時。用水將讀取緩衝液(MSD公司)稀釋四次，及在平皿的所有孔中添加100微升。然後使用Sector Imager 2400(MSD公司)讀取該平皿，及使用Prism軟體進行數據擬合與測定IC50。
採集組織
一旦建立可接受的效價後，即犧牲兔子。採集脾臟、淋巴結及全血，及如下進行處理：藉由將脾臟與淋巴結的組織解離，及用20毫升注射器的柱塞推壓通過一個70微米的無菌金屬絲網(飛世爾(Fisher)公司)，而將脾臟與淋巴結處理成為單細胞懸浮液。在PBS中收集細胞。藉由離心作用清洗細胞二次。在最後一次清洗之後，藉由錐蟲藍測定細胞密度。細胞係於1500 rpm離心10分鐘；將上清液棄置。將細胞再懸浮於適當體積之位於FBS(海克隆(Hyclone)公司)的10%二甲亞碸(DMSO，西克瑪(Sigma)公司)中，及按1毫升/小瓶分配。將小瓶置於慢速冷凍室中及於-70℃儲存24小時，及儲存於液態氮中。
藉由將全血與等份之上述不具有FBS的低葡萄 糖培養基混合，而分離末梢血液單核細胞(PBMC)。在45毫升的錐形管(康寧(Corning)公司)中，在8毫升的兔淋巴細胞分離液(西達蘭(Cedarlane)公司)上小心地將35毫升的全血混合物分層，及在無制動情況下在室溫及2500 rpm離心30分鐘。在離心後，使用一個玻璃製巴斯德吸量管(VWR公司)小心地將PBMC層移出，加以合併及置於一個乾淨的50毫升小瓶中。藉由在室溫與1500 rpm離心10分鐘，用上述改良型培養基清洗細胞，及藉由錐蟲藍染色作用測定細胞密度。在最後一次清洗之後，將細胞再懸浮於適當體積的10%DMSO/FBS培養基中，及如上述冷凍。
B細胞之篩選、富集及培養條件
在設置B細胞培養當天，將PBMC、脾細胞或淋巴結小瓶解凍待用。從液態氮槽中取出小瓶，及置於37℃水浴中直至解凍為止。將小瓶的內容物轉移至15毫升的錐形離心管(康寧(Corning)公司)中，及在管中緩慢添加10毫升的上述改良型RPMI。細胞係於2K RPM離心5分鐘，及將上清液棄置。將細胞再懸浮於10毫升的新鮮培養基中。藉由錐蟲藍測定細胞密度與存活性。
a)下列操作程序係用於Ab1與Ab13
如下將細胞與生物素化型人類CGRPα預混合。再度清洗細胞及依1E07個細胞/80微升培養基而再度懸浮。依5微克/毫升的最終濃度，在細胞懸浮液中添加生物素化型人類CGRPα，及於4℃培養30分鐘。使用10毫升PBF[無鈣/鎂型PBS(海克隆(Hyclone)公司)、2 mM乙烯二胺 四醋酸鹽(EDTA)、0.5%牛血清白蛋白(BSA)(西克瑪(Sigma)公司之無生物素型)]進行清洗二次，而除去未結合的生物素化型人類CGRPα。在第二次清洗之後，再度依1E07細胞/80微升PBF將細胞懸浮，及在細胞懸浮液中依每10E7細胞添加20微升的MACS®鏈黴抗生物素蛋白珠(美國加州奧本(Auburn)的美天旎生技(Miltenyi Biotech)公司)。細胞與珠係於4℃培養15分鐘，及每10E7細胞以2毫升的PBF清洗一次。
b)下列操作程序係用於Ab4、Ab7、Ab9及Ab11：
如下將生物素化型人類CGRPα預加載至鏈黴抗生物素蛋白珠上。將75微升的鏈黴抗生物素蛋白珠(美國加州奧本的美天旎生技公司)與胺基端經生物素化的huCGRPα(最終濃度為10微克/毫升)及300微升的PBF混合。在4℃培養該混合物30分鐘，及使用MACS®分離管柱(美天旎生技公司)將未結合的生物素化型人類CGRPα移除，及用1毫升的沖洗液除去未結合的物質。然後將物質取出，再將上述細胞依每1E7個細胞100微升之方式再度懸浮，然後在4℃培養該混合物30分鐘，及以10毫升的PBF清洗一次。
下列係適用於a)與b)二者的操作程序：在清洗後，將細胞再懸浮於500微升的PBF中及擱置待用。在一磁性架(美天旎公司)上，用500毫升的PBF預沖洗MACS®MS管柱(美國加州奧本的美天旎生技公司)。經由一預濾器將細胞懸浮液施用至管柱，及收集結合的部分。用2.5毫升的PBF緩衝液清洗該管柱。將管柱從磁性架移開，及置於一個乾 淨、無菌的1.5毫升微量試管上。在管柱頂部添加1毫升的PBF緩衝液，及收集陽性篩選細胞。藉由錐蟲藍染色作用測定陽性細胞部分的產率與存活性。陽性篩選作用所獲得者係平均為起始細胞濃度的1%。
建立先導性細胞篩選，以提供有關供培養用的接種水平之資訊。平皿係依10、25、50、100或200個富集性B細胞/孔接種。此外，各孔含有最終體積為250微升/孔之位於高葡萄糖改良型RPMI培養基中之50K個細胞/孔之經輻射的EL-4.B5細胞(5,000雷得(rad))及一適當水平的活化型兔T細胞上清液(參見美國專利申請公開案20070269868)(依製備作用而自1至5%)。培養物係在4%二氧化碳中及於37℃培養5至7天。
藉由抗原辨識作用(ELISA)之B細胞培養篩選
為識別產生抗人類CGRPα抗體之孔，使用所述藉由抗原辨識作用(ELISA)測定血清試樣效價的相同操作程序，及其變化如下。簡言之，用胺基端與羧基端生物素化的人類CGRPα之混合物(每孔50微升及各為1微克/毫升)進行塗佈經中性卵白素塗佈的平皿。B細胞上清液試樣(50微升)未經事先稀釋即進行試驗。
使用CGRP所驅動的cAMP生產作用來辨識B細胞上清液中的功能性活性
為測定B細胞上清液中所含有的功能性活性，使用所述用於測定血清試樣的功能性效價之一類似程序，及其修改如下。簡言之，使用B細胞上清液(20微升)來取代稀 釋後的多株血清試樣。
抗原特異性B細胞之分離作用
將含有所感興趣的孔之平皿從-70℃移出，及每孔使用200微升的培養基(10% RPMI完整型，55 μM BME)清洗五次，而從各孔回收細胞。藉由離心作用將所回收的細胞沉澱，及小心移除上清液。將沉澱後的細胞再懸浮於100微升的培養基中。為識別表現抗體的細胞，用胺基端與羧基端生物素化的人類CGRPα之組合物，塗佈經鏈黴抗生物素蛋白塗佈的磁珠(英杰(Invitrogen)公司之M280岱拿珠(dynabead))。藉由系列稀釋作用而最佳化個別的生物素化型人類CGRPα批量。然後將含有約4x10E7個經塗佈的珠之100微升與再懸浮的細胞混合。在該混合物中添加15微升之在培養基中進行1：100稀釋的山羊抗兔H&L IgG-FITC(傑克森免疫研究(Jackson Immunoresearch)公司)。
取出20微升的細胞/珠/抗兔H&L懸浮液，及以5微升的液滴分配至先前經西克瑪寇(Sigmacote)(西克瑪(Sigma)公司)處理的一個單孔式載玻片上，總計每個玻片35至40液滴。使用石蠟油的防滲障壁(貝克(JTBaker)公司)來浸沒該等液滴，及在37℃與4%二氧化碳的培養箱中，在黑暗中培養玻片90分鐘。
可藉由抗體分泌作用所產生的周圍螢光環、與珠相關聯的生物素化抗原之辨識作用及後續藉由螢光-IgG檢測試劑之檢測作用，辨識出產生抗體的特定B細胞。一旦辨識出所感興趣的一細胞後，則經由顯微操作器(艾本德 (Eppendorf)公司)回收。將合成與輸出抗體的細胞轉移至一微離心管中，使用乾冰冷凍及儲存於-70℃。
來自抗原特異性B細胞的抗體序列之擴增與定序
使用一種組合型RT-PCR式方法，從所分離的單個B細胞回收抗體序列。設計含有限制酵素的引子，而在標的免疫球蛋白基因(重鏈與輕鏈)諸如兔免疫球蛋白序列的保留與固定區中黏合，及使用一種二步驟套式PCR回收作用來擴增該抗體序列。分析來自各孔的擴增子之回收作用與尺寸完整性。所得的片段然後用AluI剪切而製作序列選殖性的酶解圖譜。相同序列在其等的電泳分析中展示一共同的分段模式。然後使用PCR引子內所含有的限制酵素位點剪切原始的重鏈與輕鏈擴增子片段，及選殖置入一表現載體中。擴增及純化含有次選殖DNA片段的載體。在表現作用之前，確認所次選殖的重鏈與輕鏈之序列。
具所欲抗原特異性及/或功能性質的單株抗體之重組生產作用
為測定從特定B細胞所回收的抗體之抗原特異性與功能性質，將驅動所欲的成對重鏈與輕鏈序列表現之載體轉染至HEK-293細胞中。
藉由ELISA之重組型抗體的抗原辨識作用
藉由ELISA測試含有抗體的溶液，而進行重組表現型抗體對於人類-CGRPα的結合能力之特性分析。所有培養作用皆在室溫進行。簡言之，用含有CGRPα的溶液(於PBS中為1微克/毫升)，塗佈Immulon IV平皿(賽默科技 (Thermo Scientific)公司)達2小時。經CGRPα塗佈的平皿然後在清洗緩衝液(PBS、0.05%妥文(Tween)-20)中清洗三次。然後使用一阻斷溶液(PBS、0.5%魚皮明膠、0.05%妥文(Tween)-20)阻斷該等平皿約1小時。然後將阻斷溶液移除，該等平皿然後與所試驗抗體的稀釋系列培養約1小時。在培養結束時，用清洗緩衝液清洗平皿三次，及進一步與含有二級抗體的一溶液(具Fc片段特異性之過氧化酶標記型亞芬普爾(affinipure)F(ab’)2片段山羊抗人IgG(傑克森免疫研究(Jackson Immunoresearch)公司)培養約45分鐘，及清洗三次。在該時點一受質溶液(BioFx公司的TMB過氧化酶受質)及在黑暗中培養3至5分鐘。藉由添加含有鹽酸的一溶液(0.5M)而終止反應，及在一平皿分析儀中，在450奈米讀取該平皿。
結果：第15至18圖顯示抗CGRP抗體Ab1至Ab14與CGRPα結合及辨識CGRPα。
藉由調控CGRP所驅動的細胞內cAMP水平及對於大鼠的交叉反應性而進行重組型抗體的功能性特徵分析
為分析重組表現型抗體對於CGRPα所媒介的cAMP細胞水平增加之抑制能力，使用一種電致化學發光分析套組(Meso Scale Discovery公司，MSD)。簡言之，在一個96孔圓底聚苯乙烯平皿(寇斯塔(Costar)公司)中，在MSD分析緩衝液(4-羥乙基哌乙磺酸(Hepes)、氯化鎂、pH值為7.3、1毫克/毫升的阻斷劑A，Meso Scale Discovery公司)中進行待測試的抗體製劑之系列稀釋作用。在該平皿中，添 加在MSD分析緩衝液中稀釋的人類CGRPα(最終濃度為25奈克/毫升)，及在37℃培養1小時。如分析套組製造商所建議，使用適當的對照組。使用EDTA溶液(5 mM)使人類神經上皮瘤細胞(SK-N-MC，ATCC)剝離，及使用生長培養基(MEM、10%的FBS、抗生素)而藉由離心作用清洗。將分析緩衝液中的細胞數目調整為每毫升2百萬個細胞，及在cAMP分析平皿中添加細胞之前，添加IBMX(西克瑪(Sigma)公司之50 mM的3-異丁基-1-甲基黃嘌呤)至最終濃度為0.2 mM。當培養人類CGRPα抗體溶液1小時後，將20微升之含有細胞的溶液轉移至cAMP分析平皿。所測試的所有試樣皆以二重複進行，及具有適當的對照組。在孔中添加10微升的細胞，及該平皿在室溫與振盪下培養30分鐘。當細胞與CGRP溶液一起培養時，藉由在溶解緩衝液(MSD公司)中製作經TAG標記的cAMP(MSD公司)之1：200溶液，而製備終止溶液。為終止細胞-CGRP培養作用，在細胞中添加20微升的終止溶液，及該平皿在振盪下培養1小時。用水將讀取緩衝液(MSD公司)稀釋四次，及在平皿的所有孔中添加100微升。然後使用Sector Imager 2400(MSD公司)讀取該平皿，及使用Prism軟體進行數據擬合與測定IC50。
為試驗重組型抗體對於人類CGRPβ之拮抗能力，用CGRP促效劑(CGRPβ的最終濃度為10奈克/毫升)取代而進行一類似分析。使用大鼠CGRP(最終濃度為5奈克/毫升)與大鼠L6細胞株(ATCC)，評估重組型抗體對於大鼠CGRP媒介型cAMP生成作用之辨識與抑制。
結果：第19至37圖表明抗CGRP抗體Ab1至Ab14抑制CGRPα、CGRPβ及大鼠CGRP媒介型細胞cAMP水平之增加。
第2例：Fab片段之酵素性生產作用
按照製造商的說明，使用固定化木瓜酶(賽默/皮爾斯(Thermo/Pierce)公司)進行木瓜酶酶切作用。簡言之，在含有半胱胺酸/鹽酸的緩衝液中，純化抗體在37℃與溫和搖動下與固定化木瓜酶一起培養。藉由取一等分試樣及使用SDS-PAGE分析重鏈之剪切，而監測酶切作用。為終止反應，將固定化木瓜酶離心除去，及使用pH 7.5的50 mM Tris清洗及加以過濾。藉由使用MabSelectSure(GE)管柱，將未剪切的全長抗體與Fc片段移除。
第3例：酵母菌細胞表現作用 用於重鏈與輕鏈的巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)表現載體之建構作用
將商業合成的人化輕鏈與重鏈片段次選殖至一個pGAP表現載體中。PGAP表現載體使用GAP啟動子來驅動供輸出用的免疫球蛋白鏈與人類血清白蛋白(HSA)引導序列之表現作用。此外，該載體含有共同元件，諸如一細菌複製起點及一套的卡那黴素(Kanamycin)抗性基因，該抗性基因賦予巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)對於抗生素G418之抗性。G418提供對於含有導入其等基因體中的所欲表現載體之菌株之一種篩選方式。
將表現載體轉形至巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)的單倍 體met1與lys3宿主菌株中之轉形作用
用於單倍體巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)菌株的轉形作用及巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)生殖週期的操控作用之所有方法，係如“畢赤酵母屬操作程序(Pichia Protocols)”(美國紐澤西州托托瓦(Totowa)的胡馬納出版社(Humana Press)於1998年出版及由Higgings,DR與Cregg,JM編輯之“分子生物學方法(Methods in Molecular Biology)”乙書)中所述進行。在轉形之前，在GAP啟動子序列內將各載體直線化，以引導載體嵌入巴斯德畢赤酵母(P.pastoris)基因體的GAP啟動子基因座。使用電穿孔進行單倍體菌株的轉染作用，及在YPDS(酵母菌萃取液、蛋白腖右旋葡萄糖及山梨糖醇)G418瓊脂平皿上篩選成功轉形體。藉由南方墨點分析法測定單倍體菌株的重鏈與輕鏈基因套數。然後進行單倍體菌株配對，及就其等在缺乏胺基酸標記(亦即離胺酸與甲硫胺酸)之情況下的生長能力進行篩選。所產生的二倍體植株然後進行最終的南方墨點分析，來確認重鏈與輕鏈基因的套數。使用生物薄膜干涉技術的蛋白A生物感測器來監測表現作用(弗泰生物(ForteBio)公司之八位組(Octet)系統)，而篩選表現所感興趣的抗體之一植株。
第4例：Ab3、Ab6與Ab14於巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)中之表現作用
製作用於表現全長抗體的三種畢赤酵母屬(Pichia)菌株。就所有表現全長抗體的菌株而言，創建單倍 體菌株及進行後續配對。一單倍體菌株表現全長輕鏈序列，而另一單倍體菌株表現全長重鏈序列。使用各個二倍體菌株來產生一研究細胞庫，及供用於一生物反應器中的表現作用。
首先使用包含下列營養素(重量/體積%)的培養基，使用該研究細胞庫擴增接種體：3%的酵母菌萃取液、4%的無水右旋葡萄糖、1.34%的YNB、0.004%的生物素及100 mM的磷酸鉀。為生產供發酵槽所用的接種體，在30℃與300 rpm的振盪式培養箱中擴增該細胞庫約24小時。然後將10%接種體添加至作業容積為2.5公升的拉弗斯(Labfors)容器中，該容器中含有1公升的無菌生長培養基。該生長培養基係由下列營養素所組成：18.2克/公升的硫酸鉀、36.4克/公升的磷酸二氫銨、12.8克/公升的磷酸氫二鉀、3.72克/公升的七水合硫酸鎂、10克/公升的二水合檸檬酸鈉、40克/公升的甘油、30克/公升的酵母菌萃取液、4.35毫升/公升的PTM1微量金屬及2041.67毫升/公升的消泡劑。PTM1微量金屬溶液係由下列組分所組成：6克/公升的五水合硫酸銅、0.08克/公升的碘化鈉、3克/公升的硫酸錳水合物、0.2克/公升的二水合鉬酸鈉、0.02克/公升的硼酸、0.5克/公升的氯化鈷、20克/公升的氯化鋅、65克/公升的七水合硫酸亞鐵、0.2克/公升的生物素及5毫升/公升的硫酸。
生物反應器的製程控制參數之設定如下：攪拌作用為1000 rpm，氣流為每分鐘1.35標準公升，溫度為28℃及使用氫氧化銨將pH值控制在6。並未提供氧氣之補充。
讓發酵培養物生長約12至16小時直至如溶氧激增所示之初始甘油耗盡為止。在溶氧激增後，讓培養物飢餓約3小時。在該飢餓期間之後，在反應器中添加大量乙醇，而使乙醇達到1%(重量/體積)。讓發酵培養物達到平衡達15至30分鐘。在添加大量乙醇之30分鐘後，開始添加進料及設定在1毫升/分鐘的恆定速率達40分鐘，然後使用乙醇感測探針(雷文生物科技(Raven Biotech)公司)，藉由乙醇感測器控制進料幫浦，而在剩餘的操作期間將乙醇濃度維持在1%。進料係由下列組分所組成：50克/公升的酵母菌萃取液、500克/公升的右旋葡萄糖、3克/公升的七水合硫酸鎂及12毫升/公升的PTM1微量金屬。就全長Ab6與Ab14的發酵作用而言，亦在進料中添加二水合檸檬酸鈉(0.5克/公升)。總發酵時間約為90小時。
第5例：人化抗體之方法
人化抗體之方法先前曾述於所頒證之第7935340號美國專利，其揭露內容在此完整地併入本案以為參考資料。在一些情況下，需判定活性之維持是否需要附加的兔架構殘基。在一些情況下，人化抗體仍需要保留一些關鍵性兔架構殘基，以將親和性或活性之損失降至最低。在該等情況下，需要將人類胚系序列的一或多個架構胺基酸改回原有的兔胺基酸，方能具有所欲活性。該等改變係由實驗方式測定，而識別哪些兔殘基係保留親和性與活性所需。如今這是可變重鏈與輕鏈人化胺基酸序列的終端。
第6例：抑制CGRP與其細胞受器的結合作用
為分析重組表現型抗體對於CGRP與其細胞受器結合作用之抑制能力，如先前所述[Elshourbagy等人於期刊“Endocrinology”第139期第1678頁(1998年)乙文；Zimmerman等人於期刊“Peptides”第16期第421頁(1995年)乙文]進行一種放射性配位體結合分析。使用重組型人類CGRP受器、降血鈣素受器類受器及RAMP1(密里博(Millipore)公司的化學篩(Chemiscreen))之膜製備作用。抗體稀釋液係與經125碘放射性標記的人類CGRPα(0.03nM)在室溫預培養30分鐘。估算在0.1 μM人類CGRPα存在下之非特異性結合。將膜過濾及清洗。然後進行過濾器之計數，以測定特異性結合之經125碘放射性標記的人類CGRPα。
結果：第38圖顯示抗CGRP抗體Ab1-Ab13抑制CGRP與其細胞受器的結合作用。
第7例：抗CGRP抗體在大鼠中對於神經源性血管舒張之抑制作用
CGRP係一強力的血管舒張劑(期刊“Nature”第313期第54-56頁(1985年)乙文與期刊“Br J.Clin.Pharmacol.”第26(6)期第691-5頁(1988年)乙文)。使用以非侵入性方式測量CGRP受器拮抗劑活性之一種藥力學分析法，來進行抗CGRP抗體的特性分析。該模式係仰賴在局部施用辣椒素溶液之後，使用雷射都卜勒(Doppler)成像技術所測量的皮膚血流量變化。辣椒素活化瞬時受器電位類香草素第一型受器(TRPV-1)，產生神經源性發炎及經由局部 釋出血管活性介質包括CGRP與物質P，而產生血管舒張作用(期刊“Br J.Pharmacol.”第110期第772-776頁(1993年)乙文)。
在進行血管舒張分析之前一天，經由IP(腹膜內)對動物投予試驗劑或對照組。在給藥之後，將動物的背側下背部區域剃光除毛，該區域約2x6公分。然後將動物各歸回籠中過夜。在試驗當天，即給藥後約24小時，用愛沙氟倫(isoflurane)氣體將動物麻醉及放置在一控溫式加熱墊上，及裝上鼻錐以持續輸送愛沙氟倫。雷射都卜勒(Doppler)成像器係用於觀察血管舒張作用。將藉由633奈米氦氖雷射所產生的一束同調紅光導向該剃毛區域，即一矩形區域(2x6公分)，及以中等分解析度模式掃描。首先獲得一基線都卜勒掃描，及藉由識別二個類似的低通量區域而預先決定O型環放置位置。將二個橡膠O型環(直徑約1公分)放置在所選定區域，及進行基線掃描。當掃描完成後，立即各在二個O型環內施用位於5微升的乙醇：丙酮溶液(1：1)中的1毫克辣椒素。在施用辣椒素之2.5、5、7.5、10、12.5、15、17.5、20、22.5、25、27.5及30分鐘後，重複進行都卜勒掃描。將二個O型環內各相較於基線平均通量的變化百分比，繪製作為由於辣椒素之血管舒張結果。
為試驗重組表現型抗體對於CGRP與其細胞受器的結合作用之抑制能力，如先前所述進行一種放射性配位體結合分析。
結果：第39與40圖表明在投予辣椒素之後，抗 CGRP抗體Ab3與Ab6在模式中減少血管舒張作用。
第8例：CGRP抗體投藥作用對於膀胱過動症之效應
進行實驗來評估一種抗CGRP抗體投藥作用對於膀胱性尿失禁與膀胱過動症的潛在功效。膀胱性尿失禁係尿道閉合與逼尿肌作用之間的平衡，及膀胱過動症係特徵在於急尿、尿失禁、頻尿及夜尿之一病況。文獻中所報導的一些軼事性證據表明CGRP可能涉及膀胱性尿失禁，及可能與膀胱過動症疾病病理相關聯及或許扮演一肇因性角色。因此，希望本發明的抗CGRP抗體可能有助於預防或減輕這有時拖累人的病況，尤其鑑於其等對於CGRP的高親和性。(CGRP可能在膀胱過動症扮演一角色之證據包括CGRP存在於泌尿道、DRG與脊髓中之事實(Wharton等人於1986年期刊“Neurosci”第(3)期第727頁乙文)。此外，傳入性C纖維係攸關將涉及排尿作用的脈衝傳至脊髓(Yoshida等人於2011年期刊“J Pharmacol Sci”第(112)期第128頁乙文)及該等纖維受到CGRP之影響。此外，有報導指出在乙酸誘發型膀胱疼痛模式中，肉毒桿菌素的膀胱內投藥作用抑制CGRP及顯著降低膀胱收縮間隔(Chuang等人於2004年期刊“J Urol”第(172)期第1529頁乙文；Chuang等人於2009年期刊“J Urol”第(182)期第786頁乙文))。此外，最近曾報導在松節油引發的膀胱過動症模式中，一種抗CGRP抗體的投藥作用據稱降低膀胱收縮數目(輝瑞公司(Pfizer)PCT專利申請案WO 2011/024113))。
材料與方法
動物：
雌性史普瑞格-道利(Sprague-Dawley)大鼠(247至299克)(法國聖日耳曼(Saint Germain sur l’Arbresle)的查爾斯河實驗室(Charles River Laboratories))在實驗前至少5天送達實驗室，以讓大鼠適應實驗室條件。每籠(尺寸為1032平方公分的聚丙烯E型籠)有3隻大鼠，及讓其等自由取用食物(法國伽納(Gannat)03800哈倫(Harlan)公司的泰克雷德(Teklad)2016全球囓齒動物飼料)與水。每星期更換囓齒動物籠中的鋸屑(西班牙赫羅納(Girona)17080梭拉黎特(Souralit)公司的梭拉黎特(Souralit)2912 plus)墊料二次。維持動物房的溫度(20±2℃)及具有12/12小時交替的光暗週期(光階段係自早上7點鐘至晚上7點鐘)，而相對濕度係維持在40至70%。
實驗室設備
膀胱導管係經由一個T型管而與一應變計MX 860 Novatrans III Gold(法國南特卡爾格弗(Nantes-Carquefou)的麥迪斯醫療器材(Medex Medical SARL)公司)及一注射式幫浦(法國萊於利(Les Ullis)哈佛儀器(Harvard Apparatus)公司70-2208型II plus及法國伊爾基希(Illkirch)飛世爾生物阻斷(Fisher Bioblock)公司的雷佐爾(Razel)R-99E)連接。使用在個人電腦上運作的一PowerLab界面(澳洲城堡山(Castle-Hill)的AD儀器(ADInstruments)私人有限公司)及Chart®軟體，持續記錄膀胱內壓力。使用微軟Excel ®軟體分析數據。
試驗物質
試驗用抗CGRP抗體(Ab3)
負對照組抗體(抗毛地黃苷抗體)。
化學試劑
生理食鹽水(氯化鈉0.9%)(批號11043411及CAS編號7647-14-5)係經由杉曲維(Centravet)公司(法國拉帕利斯(Lapalisse))自柏朗(B-Braun)公司購得。
麻醉藥物
脲烷(批號BCBC9294及CAS編號51-79-6)與戊巴比妥鈉(批號150A1及CAS編號76-74-4)係分別由西克瑪艾爾迪希(Sigma Aldrich)公司(法國聖昆廷法拉維耶(St Quentin Fallavier))與杉曲維(Centravet)公司(法國拉帕利斯(Lapalisse))供應。
實驗組
在實驗中使用各具有10隻大鼠的二個實驗組。對於各組投予10毫克/公斤的對照組或抗CGRP抗體：
研究之設計
實驗程序
在實驗前之18小時，使用尾靜脈注射作用，以靜脈內方式對於雌性大鼠投予劑量為10毫克/公斤的試驗抗體或負對照組抗體。15小時之後，用脲烷(1.2克/公斤及皮下(s.c.)方式)將大鼠麻醉。在皮下投予脲烷3小時之後，將一聚乙烯導管(內徑與外徑分別為0.58與0.96毫米)經由膀胱頂插入膀胱中及用荷包縫合法固定。在整個實驗期間，將體 溫維持在37±2℃(澳洲城堡山(Castle Hill)的AD儀器(ADInstruments)私人有限公司的Physitemp公司之TCAT-2LV控制器)。
膀胱測壓實驗
在手術後的麻醉雌性大鼠中進行膀胱測壓研究。在至少30分鐘之期間，以恆定流速(2毫升/小時)持續將室溫的生理食鹽水輸注至膀胱中。
在膀胱測壓實驗結束時，依序藉由注射致死(1毫升)的戊巴比妥鈉(54.7毫克/毫升)(CAS編號76-74-4)及頸椎脫臼而犧牲動物。
膀胱測壓參數
所測量的膀胱測壓參數為：排尿收縮強度(AM)，亦即介於排尿閾值壓力與最大壓力之間的壓力(毫米汞柱)，膀胱收縮間隔(ICI)，亦即前後二次排尿之間的時間(秒)，排尿頻率(MF)，亦即排尿收縮次數/15分鐘(尖峰/15分鐘)。
排除標準
二隻大鼠在實驗期間被排除：一隻大鼠因在膀胱內輸注生理食鹽水期間呈現膀胱機能亢進而被排除；而另一隻大鼠之排除係因為在實驗期間麻醉深度改變，而引發膀胱測壓廓型之變化。
結果之分析
就各隻大鼠而言，係依輸注生理食鹽水期間之最後四或五次排尿的平均值方式計算AM與ICI數值。依在輸注生理食鹽水期間的二個15分鐘區間所獲得的排尿平均值方式計算MF數值。
結果係以平均值±均值的標準誤差(±sem)之形式呈現。使用GraphPad Prism®(第四版；美國加州拉荷亞(La Jolla)的GraphPad軟體有限公司)繪製圖表及進行統計分析。
使用非成對的學生t-檢定，進行抗CGRP抗體組相對於對照抗體組的數值(生理食鹽水輸注作用)之統計比較。
採納p<0.05為統計顯著性。
結果：
如第41圖中所示，在抗CGRP Ab治療組中，ICI顯著較高及MF顯著較低(分別為第41A與B圖；非成對的學生t-檢定之p<0.05)。在各組之間未觀察到AM的顯著差異(第41C圖，非成對的學生t-檢定之p>0.05)。
該等結果表明抗CGRP抗體可適用於預防或減輕膀胱過動症，增進泌尿控制及治療相關泌尿病況。
第9例：紓解大鼠之神經性病變疼痛
周邊神經之損傷時常導致起源於神經性病變之慢性位移痛。該疼痛症候群包含對於通常不具傷害性的外界刺激(如機械性及/或熱刺激)之敏感性。因此，傳統止痛方法對神經性病變疼痛無效，使其難以治療。實驗上而言，可經由手術產生周邊神經創傷，而建立神經性病變疼痛的 動物模式。鍾氏(Chung)模式即是該種系統中之一者，其中藉由結紮L5與L6脊神經而誘發神經性病變疼痛。
在該實例中，在雄性史普瑞格道利大鼠進行脊神經結紮。使用馮佛雷氏(von Frey)機械性觸摸痛試驗，在第13天測試大鼠的疼痛敏感性(確認觸摸痛)，然後在Ab2的各次投藥作用後測試，以評估可能的抗觸摸痛活性。
方法
將送達時的重量為200至225克之雄性史普瑞格道利大鼠(哈倫實驗室(Harlan Laboratories)公司)的包裹打開，及置於籠中。對於每隻動物進行目測健康檢查，包括評估皮毛、四肢及孔口。亦檢視各動物是否具有任何姿勢或動作異常的跡象。發現所有動物的健康良好，及將其等納入研究中。
除了按抵達當天所量取的體重而進行隨機分派之外，在實驗程序開始之前，讓大鼠適應至少二天。動物係個別眷養在習用的透明聚碳酸酯籠或透明的聚碳酸酯微隔離籠，籠中有認證過之經輻射照射的接觸墊料。提供飼料與水供自由取食。設定環境控制而將溫度維持在攝氏18至26度(華氏64至79度)，相對濕度為30%至70%。維持12：12小時的光：暗週期。
在適應之第-4天或第-1天，使用馮佛雷氏(von Frey)細絲測試大鼠的基線閾值。
動物在第0天進行脊神經結紮程序。所有手術皆在無菌條件下進行。在手術之前，將大鼠麻醉。將背部區 域剃毛，及為無菌手術進行準備。將大鼠以腹臥位放置，及切口在L4至S2的中線左側區。將左脊側肌肉與棘突(L4至S2)分離。將L6至S1小面關節損壞及輕輕修整橫突，來提供接觸L4與L5脊神經之空間。將左側L5與L6脊神經分離及用絲質縫合線結紮。然後用適當的縫合物質及皮膚傷口縫合夾而將切口閉合。手術後，經由皮下注射方式對動物投予乳酸鹽林格氏(Ringer)液(3.0至5.0毫升)。
第1與2組中的所有動物在第-4或-1天、第13天、第14天及第17天接受馮佛雷氏(von Frey)試驗。第13天的測量係在給藥前進行。用於機械性觸摸痛之馮佛雷氏(von Frey)試驗係評估止痛化合物的抗痛覺性質。在該試驗中，首先讓動物習慣試驗室，使得其等充分平靜地進行疼痛閾值之評估。不知治療組別的技術員使用直徑遞增之一系列等級的尼龍細絲(馮佛雷氏(von Frey)細絲)，在大鼠左後爪施用輕微壓力。細絲係以垂直方式壓按爪的腹面直至細絲彎曲為止。當疼痛時，大鼠的反應是縮回其爪子。使用伽普蘭氏(Chaplan)上下法(Chaplan等人於期刊“J Neurosci Methods”第53期第55-63頁(1994年)乙文)，測定觸摸痛閾值，其提供使用試驗的心理物理學尺度所測得之使各大鼠縮回的精確力量。
在第13天，基於馮佛雷氏(von Frey)評分，將動物分派至二個治療組中。從研究中排除馮佛雷氏(von Frey)評分高於6克的所有動物。審查各組的馮佛雷氏(von Frey)評分，以確保平均值與標準偏差滿足同質性的假設。在第 13天(手術後13天)，藉由一次IP注射而對第1組(Ab2)與第2組(負對照組抗體)投予劑量(在各組中有11隻動物；投予10毫克/公斤的Ab2與負對照組抗體)。在第17天，第1組在行為測試之前領受靜脈(未麻醉)注射之附加的大量Ab2。
在第17天抽取第1組之血漿的血液試樣，及分析Ab2效價。
除了預期的手術部位之觀察及與鍾氏(Chung)手術相關聯的拖行爪子之外，並無異常的觀察記錄。治療處置對於動物整體健康狀況似乎並無不良效應，亦未擾亂在該齡段大鼠所預期的正常體重增加。
結果
在第0天手術之前進行基線試驗的所有動物所具有的馮佛雷氏(von Frey)評分為15(未顯示)，其表明正常的敏感性。在第13天(在抗體投藥作用之前)，除了從研究中排除的二隻動物之外，所有動物所具有的馮佛雷氏評分皆低於6克，顯示已產生對於機械性刺激之敏感性。在第13天的平均馮佛雷氏評分係低於3克(第42圖的左側柱狀圖組)。在第13天的試驗之後，對於動物投予Ab2或一種負對照組抗體(10毫克/公斤)。在第14天與第17天再度測試馮佛雷氏評分，而經Ab2治療隻動物的馮佛雷氏評分係高於對照組(分別為第42圖的中間柱狀圖組與右側柱狀圖組)。
該等結果顯示，一種抗CGRP抗體諸如Ab2之治療可能有助於預防或減輕神經性病變疼痛。
第10例：評估抗CGRP抗體投藥作用的止痛效應之第一個實 驗(閃尾模式)
進行三個不同實驗(第10至12例)，來評估一種抗CGRP抗體的投藥作用對於止痛作用或疼痛之潛在功效。在該等實驗中皆採用一種囓齒動物閃尾(亦稱作縮尾)反應模式，囓齒動物對於輻射熱的閃尾反應係用於檢測可能適用的止痛劑之一常用模式。該分析法特別適用於區別中樞作用型嗎啡類型止痛劑(活性)與非類鴉片或周邊作用型消炎劑(非活性)。如下說明本文中所用之該動物模式及方法與材料。
材料與方法
動物：重量為150±20克的雄性史普瑞格道利衍生型雄性大鼠。
試驗CGRP抗體：Ab2
載劑：15 mM組胺酸、250 mM山梨糖醇及pH值為5.5
止痛化合物：嗎啡
閃尾反應程序：測量引起集中輻射熱誘發型閃尾反應所需之時間(秒)，而作為重量為150±20克的10隻史普瑞格道利衍生型雄性大鼠組別之疼痛閾值。在第0天進行閃尾反應的基線試驗。在研究中納入閃尾反應為3至5秒的大鼠，及按基線閃尾反應分派至平衡的治療組別中。在15秒鐘即停止進行，以避免造成組織損傷。
嗎啡耐藥性之產生
對於各具有10隻雄性史普瑞格道利大鼠的三個 組，每日皆經由腹膜內投藥作用在早晨與傍晚投予生理食鹽水載劑(2毫升/公斤)二次。每日另外以腹膜內方式對於三個組中之一組投予劑量為5毫克/公斤的止痛劑(嗎啡)二次，及連續投予7天。在第0天以腹膜內方式對於三個大鼠組別中的第二組投予10毫克/公斤的單次大量劑之如本發明的一種抗CGRP抗體(Ab2)。每日在早晨劑量之後，不同組的大鼠各進行閃尾反應試驗30分鐘。
依續使用單因子變異數分析與唐奈特氏(Dunnett)t檢定，來進行載劑對照組與試驗化合物治療組之間之比較。P<0.05係視為顯著。
該等實驗的結果係示於第43圖中。其中的結果顯示當投予10毫克/公斤的試驗CGRP抗體時，引發對於熱疼痛刺激之顯著與持久的止痛效應。經由心臟採血方式，採集所有試驗大鼠的終端血液試樣，及稍後進行Ab2效價之分析。
第11例：評估抗CGRP抗體的止痛效應之第二個閃尾實驗(抗體劑量滴定)
使用如本發明的CGRP抗體(Ab2)進行第二個閃尾實驗，來評估不同的CGRP抗體劑量之止痛效應。該等實驗中所用的大鼠係與先前實驗中之類型相同，及閃尾操作程序係實質上相同。在該實驗中比較投予不同CGRP抗體劑量的不同動物組別之止痛作用，而評估在止痛作用上是否具有劑量效應。在第二個實驗中，如下進行五組試驗動物之比較。僅對於第一對照組的各隻動物投予載劑(15 mM組 胺酸、250 mM山梨糖醇及pH值為5.5)，對於三個組的各隻動物投予載劑中所含有之不同劑量的相同抗CGRP抗體(在第0天分別投予劑量為1毫克/公斤、3毫克/公斤或10毫克/公斤的Ab2)，及在第0天亦對於第五組的動物投予10毫克/公斤的一種負對照組抗體(抗毛地黃苷抗體)。
閃尾操作程序在其他情況下係實質上如上述進行。再度依續使用單因子變異數分析與唐奈特氏(Dunnett)t檢定來分析結果，而進行載劑對照組、負對照組抗體及試驗CGRP抗體治療組之間之比較。P<0.05係視為顯著。
該等實驗的結果係示於第44圖中。自其中可以看出，較高抗體劑量的試驗化合物(本發明的抗CGRP抗體Ab2)所引發之止痛效應係優於較低劑量。正如預期，相對於對照組，負對照組抗體並未引發可察知的止痛效應。
第12例：評估抗CGRP抗體/嗎啡共投藥作用的止痛效應之第三個閃尾實驗
亦進行第三個閃尾實驗，來評估抗CGRP抗體/嗎啡共投藥作用的止痛效應。在該等實驗中，僅對於第一組動物投予劑量為5毫升/公斤的相同載劑。在第1至10天，每天對於第二組動物投予劑量為5毫克/公斤的嗎啡二次，其中亦在第0天對於該等動物投予劑量為10毫克/公斤的抗CGRP抗體Ab2。第1至4天，每天僅對於第三組動物投予劑量為5毫克/公斤的嗎啡二次，及在第0天另投予劑量為10毫克/公斤的Ab2抗體。所有投藥作用係以腹膜內方式進行。
自第0天至第10天，每日對於該等組別的各隻動 物進行閃尾實驗。再度依續使用單因子變異數分析與唐奈特氏(Dunnett)t檢定來分析該等閃尾實驗的結果，而進行載劑對照組、負對照組抗體及試驗CGRP抗體治療組之間之比較。P<0.05係視為顯著。
該等比較之結果係概述於第45圖中。在整個實驗期間每日領受嗎啡劑量之經Ab2治療的動物表現出嗎啡耐藥性，及在第5天之後，閃尾時間幾乎降至經載劑治療的對照組動物之水平。相比之下，領受嗎啡只到第4天之經Ab2治療的動物，閃尾時間在第5天獲得改善，及持續改善直到第8天。該結果表明即使在產生嗎啡耐藥性之後，CGRP抗體的投藥作用仍可具有止痛效應，其在嗎啡戒斷時可能更為明顯。
第13例：紓解大鼠的內臟疼痛
罹患激躁性腸症候群(IBS)的病患顯示對於結直腸氣球鼓脹作用的內臟感覺閾值較低(Ritchie於期刊“Gut”第14期第125-32頁(1973年)乙文)。曾有人提出在IBS中，具有正常活化模式的腦腸軸之疼痛敏感性增高。先前已顯示在近端結腸中注射三硝基苯磺酸(TNBS)引發慢性結腸過敏性，其係由有意識大鼠回應結腸鼓脹的疼痛閾值降低所測得(Diop等人於期刊“J.Pharmacol.Exp.Ther.”第302期第1013-22頁(2002年)乙文)。在遠端非發炎性結腸發現該慢性過敏性，及持續達21天。其類似IBS的某些特徵，及因此可作為在實驗上探討該功能失調的病理生理學之一模式。該分析法可用於測定化合物對於TNBS誘發型結腸過敏 性之潛在抗過敏效應。
數項研究指出CGRP涉及內臟疼痛(Friese等人於期刊“Regul Pept”第70期第1-7頁(1997年)乙文；Gschossmann等人於期刊“Neurogastroenterol Motil”第13期第229-36頁(2001年)乙文；Julia與Bueno於期刊“Am J Physiol”第272期第G141-6頁(1997年)乙文；Plourde等人於期刊“Am J Physiol”第273期第G191-6頁(1997年)乙文)。在胃腸道起源的辣椒素敏感型傳入纖維中，含量最豐富的胜肽是CGRP，其佔整體胜肽免疫反應性之高達80%(Clague 等人於期刊“Neurosci Lett”第56期第63-8頁(1985年)乙文；Sternini等人於期刊“Gastroenterology”第93期第852-62頁(1987年)乙文)。此外，CGRP注射作用在TNBS模式中誘發結腸過敏性(Delafoy等人於期刊“Gut”第55期第940-5頁(2006年)乙文)，該結腸過敏性可藉由一種CGRP拮抗劑胜肽(CGRP8-37)逆轉。
該實例係說明在大鼠內臟疼痛模式(TNBS誘發型慢性結腸過敏性)中試驗一種抗CGRP抗體。
方法
在該研究中納入在手術當天重量為390至450克的雄性史普瑞格-道利大鼠。將其等眷養於控制溫度(19.5℃至24.5℃)與相對濕度(45%至65%)及具有12小時的光/暗週期之房中。每籠眷養2或3隻動物，及在試驗前有適應期間(至少5天)。藉由尾部標記來識別各隻大鼠。遵循I.A.S.P.研究與倫理議題委員會(Committee for Research and Ethical Issue of the I.A.S.P.)準則(1983年)及歐洲準則2010/63/UE，進行研究。
在行為試驗之七天前，藉由手術投予三硝基苯磺酸(TNBS及50毫克/公斤)而誘發結腸敏感性。對於禁食(24小時)動物進行手術。簡言之，在麻醉(5毫克/公斤的乙醯丙/30毫克/公斤的K他命)下，在結腸近端(距盲腸1公分)進行TNBS(50毫克/公斤、1毫升/公斤)注射作用。手術後，將動物置回位於調控環境的籠中，及自由取食直至試驗當天，即7天後。將“空白”動物(未進行手術的大鼠)置於相同的眷養條件下。
在測定結腸閾值之24小時前，以靜脈內方式對於動物投予抗CGRP抗體Ab2或一種負對照組抗體(均為10毫克/公斤)。在該研究中包括三個組別的大鼠：第1組：一“空白”組，其係由在第-7天未進行手術或TNBS治療的動物所組成，及在試驗(亦即在第0天測量結腸鼓脹閾值)之24小時前(亦即第-1天)用對照組抗體治療(n=7)。
第2組：一“TNBS”組，其係由在第-7天進行手術的動物所組成，及用對照組抗體治療(在試驗(亦即在第0天測量結腸鼓脹閾值)之24小時前(亦即第-1天))(n=8)。
第3組：一“治療”組，其係由在第-7天進行手術的動物所組成，及在試驗日(亦即在第0天測量結腸鼓脹閾值)之24小時前(亦即第-1天)用Ab2治療(n=8)。
在注射TNBS之七天(D7)後，在結腸因引入結腸 中的氣球充氣而鼓脹之期間，藉由測量誘發一行為反應所需的結腸內壓力，而評估結腸敏感性。該等試驗係由被蒙蔽的實驗者進行。該反應之特徵在於抬高動物身體的後肢部分及對應於嚴重收縮之明顯可見的腹肌收縮(Al Chaer等人於期刊“Gastroenterology”第119期第1276-1285頁(2000年)乙文)，及作為一疼痛標記(Bourdu等人於期刊“Gastroenterology”第128期第1996-2008頁(2005年)乙文)。以微創方式將氣球(5公分)插入禁食(24小時)過夜動物距肛門10公分的直腸內，及將導管貼在尾巴底部。將大鼠置於一樹脂玻璃盒的中央，及將導管與一電子恆壓裝置連接。在適應所插入的氣球之30分鐘適應期後，藉由每30秒遞增5毫米汞柱而逐步將結腸壓力自5增加至75毫米汞柱(截止)直至疼痛行為顯而易見為止。在氣球插入後之30分鐘、50分鐘、70分鐘及90分鐘進行四次測量。
使用來自各試驗的數據，計算對於結腸內投予TNBS所誘發的結腸過敏性之活性百分比如下：
鼓脹閾值治療組係“治療”組數值之算術平均；鼓脹閾值TNBS係“TNBS”組數值之算術平均；及鼓脹閾值空白係“空白”組數值之算術平均。
結果
在藉由投予TNB所誘發的慢性結腸過敏性之大 鼠模式中，試驗一種抗CGRP抗體減輕內臟疼痛之能力。藉由測量結腸鼓脹閾值，亦即在動物展現一行為反應(肌肉收縮)前之可忍受的腹部壓力量，而量化內臟疼痛。結腸鼓脹閾值之數值越高，則表示敏感性越低。正如所預期，相較於空白動物，TNBS之處置導致結腸鼓脹閾值大幅降低(比較第46圖之中間柱狀(經TNBS處置組)與左側柱狀(空白組))。相較於對照組動物，Ab2投藥作用改善結腸鼓脹閾值(比較第46圖之右側柱狀(經Ab2治療組)與中間柱狀(對照組))。自Ab2投藥作用而來的改善係統計上顯著(相較於TNBS+負對照組之學生t-檢定的p<0.05)。經計算Ab2的抗過敏活性為27%(表示對於TNBS所誘發的過敏性之紓解程度)。
該等結果表明抗CGRP抗體可能適用於預防或減輕內臟疼痛。
第1圖提供對應於全長抗體Ab1之聚核苷酸與多肽序列。
第2圖提供對應於全長抗體Ab2之聚核苷酸與多肽序列。
第3圖提供對應於全長抗體Ab3之聚核苷酸與多肽序列。
第4圖提供對應於全長抗體Ab4之聚核苷酸與多肽序列。
第5圖提供對應於全長抗體Ab5之聚核苷酸與多肽序 列。
第6圖提供對應於全長抗體Ab6之聚核苷酸與多肽序列。
第7圖提供對應於全長抗體Ab7之聚核苷酸與多肽序列。
第8圖提供對應於全長抗體Ab8之聚核苷酸與多肽序列。
第9圖提供對應於全長抗體Ab9之聚核苷酸與多肽序列。
第10圖提供對應於全長抗體Ab10之聚核苷酸與多肽序列。
第11圖提供對應於全長抗體Ab11之聚核苷酸與多肽序列。
第12圖提供對應於全長抗體Ab12之聚核苷酸與多肽序列。
第13圖提供對應於全長抗體Ab13之聚核苷酸與多肽序列。
第14圖提供對應於全長抗體Ab14之聚核苷酸與多肽序列。
第15圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab1、Ab2、Ab3及Ab4的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第16圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab5、Ab6、Ab7及Ab8的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第17圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab9、Ab10及 Ab14的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第18圖提供遵循下文第1例中用於抗體Ab11、Ab12及Ab13的操作程序所獲得之CGRP-α ELISA結合數據。
第19圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2及Ab4對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第20圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab3對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第21圖遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab5與Ab6對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第22圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7、Ab8、Ab9及Ab10對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第23圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11、Ab12及Ab13對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第24圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab14對於CGRP-α驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第25圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2及Ab3對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第26圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab4、Ab5及Ab6對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第27圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7與Ab8對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第28圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab9、Ab10及Ab14對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第29圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11、Ab12及Ab13對於CGRP-β驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第30圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab1、Ab2、Ab4及Ab5對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第31圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab3與Ab6對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第32圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab7與Ab8對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第33圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab9對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第34圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab10對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第35圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab11與Ab12對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑 制作用。
第36圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab13對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第37圖顯示遵循下文第1例中的操作程序所獲得之抗體Ab14對於大鼠CGRP驅動的cAMP生產作用之抑制作用。
第38圖顯示遵循下文第6例中的操作程序所獲得之抗體Ab1-Ab13對於經放射性標記的CGRP與CGRP-R的結合作用之抑制作用。
第39圖顯示相對於一對照組抗體，在大鼠模式中藉由投予抗體Ab3與Ab6接著投予辣椒素所獲得之血管舒張作用之降低，其係遵循下文第7例中的操作程序而獲得。
第40圖顯示相對於一對照組抗體，在大鼠模式中藉由投予不同濃度的抗體Ab6接著投予辣椒素所獲得之血管舒張作用之降低，其係遵循下文第7例中的操作程序而獲得。
第41A至C圖顯示在輸注生理食鹽水期間之Ab3對於膀胱容量的有利效應。對於動物投予Ab3或一種負對照組抗體，然後在輸注期間監測進入膀胱的生理食鹽水。ICI(A圖)增加而MF(B圖)降低，顯示膀胱容量增加。AM之差異(C圖)係位於標準偏差之內及並非統計上顯著。星號係表示該改善具統計顯著性(相較於負對照組Ab之非成對學生t-檢定的p<0.05)。備註：實心柱狀：經Ab3治療(10毫克/公斤)；空心柱狀：負對照組抗體(10毫克/公斤)。誤差柱狀係表示標準偏差。縮寫：ICI：膀胱收縮間隔；MF：排尿頻率；AM：排尿收縮強度。
第42圖顯示Ab2在神經病變性疼痛模式中之效應。藉由鍾氏(Chung)手術引發機械性觸摸痛(L5/L6脊神經結紮)，及比較經Ab2治療動物(斜線柱狀)與對照組動物(實心柱狀)的敏感程度。數值越高表示敏感性越低。在第13天(在Ab2投藥作用之前)的平均敏感性相近，但在第14天與第17天獲得改善。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
第43圖顯示Ab2與嗎啡的止痛效應。藉由縮尾時間(y軸及以秒為單位)評估投予嗎啡(空心正方形)、Ab2(10毫克/公斤及由實心三角形顯示)或載劑(負對照組及由空心圓形顯示)之動物的疼痛敏感性。動物產生嗎啡耐藥性，及所展現的縮尾時間在第4天即與對照組動物相近。相比之下，經Ab2治療的動物在實驗期間(至第7天)展現縮尾時間之持續改善。經Ab2治療動物之改善係統計上顯著(相較於載劑之依序所進行單因子變異數分析與唐奈特氏(Dunnett)檢定之p<0.05及由星號顯示)。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
第44圖顯示Ab2具劑量依賴性之止痛效應。在第0天(在第一次縮尾時間試驗之後)，對大鼠投予劑量為1毫克/公斤(實心正方形)、3毫克/公斤(朝下的實心三角形)或10毫克/公斤(朝上的實心三角形)的抗體Ab2，或投予載劑(空心圓形)或負對照組抗體(空心正方形)。每日評估大鼠回應致痛性熱刺激之縮尾時間(較長的時間表示對於疼痛相對不敏感)。藉由投予Ab2，使得縮尾時間以劑量依賴性方式增長。星號表示縮尾時間之增長係統計上顯著的(相較於載劑之依序所進行單因子變異數分析與唐奈特氏(Dunnett)檢定之 p<0.05)。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
第45圖顯示Ab2組合嗎啡及當出現嗎啡耐藥性後撤除嗎啡時之止痛效應。在第0天(在第一次縮尾時間試驗之後)，對於大鼠投予劑量為10毫克/公斤的抗體Ab2(實心正方形與實心三角形)或載劑(空心圓形)。然後在第1至10天(實心正方形)或僅在第1至4天(實心三角形)對於大鼠每日投予嗎啡。經嗎啡治療的小鼠之縮尾時間最初大幅增長，但在顯示嗎啡耐藥性的隨後幾天減少。然而，在第4天後即撤除嗎啡的小鼠之縮尾時間在第5天與第8天之間增長，及維持在增長的狀態。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
第46圖顯示Ab2在大鼠的內臟疼痛模式中之效應。藉由測量領受一種負對照組抗體(實心柱狀)或Ab2(斜線柱狀)之空白動物(空心柱狀)或經TNBS處理來引發慢性結腸過敏性之動物的結腸鼓脹閾值(數值越高表示敏感性越低)，而量化內臟疼痛。經Ab2治療的動物之過敏性減輕27%，及鼓脹閾值藉由Ab2投藥作用獲得顯著改善(相較於TNBS+負對照組之學生t-檢定的p<0.05)。誤差柱狀係表示均值的標準誤差。
<110> 艾爾德生物控股有限責任公司
<120> 抗降血鈣素基因相關胜肽(ANTI-CGRP)組成物及其用途
<130> 67858.730301
<150> 61/488,660
<151> 2011-05-20
<160> 284
<170> 專利申請軟體3.5版
<210> 1
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 1
<210> 2
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 2
<210> 3
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 3
<210> 4
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 4
<210> 5
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 5
<210> 6
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 6
<210> 7
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 7
<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 8
<210> 9
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 9
<210> 10
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 10
<210> 11
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 11
<210> 12
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 12
<210> 13
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 13
<210> 14
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 14
<210> 15
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 15
<210> 16
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 16
<210> 17
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 17
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 18
<210> 19
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 19
<210> 20
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 20
<210> 21
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 21
<210> 22
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 22
<210> 23
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 23
<210> 24
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 24
<210> 25
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 25
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 26
<210> 27
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 27
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 28
<210> 29
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 29
<210> 30
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 30
<210> 31
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 31
<210> 32
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 32
<210> 33
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 33
<210> 34
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 34
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 35
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 36
<210> 37
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 37
<210> 38
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 38
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 39
<210> 40
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 40
<210> 41
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 41
<210> 42
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 42
<210> 43
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 43
<210> 44
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 44
<210> 45
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 45
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 46
<210> 47
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 47
<210> 48
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 48
<210> 49
<211> 15
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 49
<210> 50
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 50
<210> 51
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 51
<210> 52
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 52
<210> 53
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 53
<210> 54
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 54
<210> 55
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 55
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 56
<210> 57
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 57
<210> 58
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 58
<210> 59
<211> 15
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 59
<210> 60
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 60
<210> 61
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 61
<210> 62
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 62
<210> 63
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 63
<210> 64
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 64
<210> 65
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 65
<210> 66
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 66
<210> 67
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 67
<210> 68
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 68
<210> 69
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 69
<210> 70
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 70
<210> 71
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 71
<210> 72
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 72
<210> 73
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 73
<210> 74
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 74
<210> 75
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 75
<210> 76
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 76
<210> 77
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 77
<210> 78
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 78
<210> 79
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 79
<210> 80
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 80
<210> 81
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 81
<210> 82
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 82
<210> 83
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 83
<210> 84
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 84
<210> 85
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 85
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 86
<210> 87
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 87
<210> 88
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 88
<210> 89
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 89
<210> 90
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 90
<210> 91
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 91
<210> 92
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 92
<210> 93
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 93
<210> 94
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 94
<210> 95
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 95
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 96
<210> 97
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 97
<210> 98
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 98
<210> 99
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 99
<210> 100
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 100
<210> 101
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 101
<210> 102
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 102
<210> 103
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 103
<210> 104
<211> 439
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 104
<210> 105
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 105
<210> 106
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 106
<210> 107
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 107
<210> 108
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 108
<210> 109
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 109
<210> 110
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 110
<210> 111
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 111
<210> 112
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 112
<210> 113
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 113
<210> 114
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 114
<210> 115
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 115
<210> 116
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 116
<210> 117
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 117
<210> 118
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 118
<210> 119
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 119
<210> 120
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 120
<210> 121
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 121
<210> 122
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 122
<210> 123
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 123
<210> 124
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 124
<210> 125
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 125
<210> 126
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 126
<210> 127
<211> 12
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 127
<210> 128
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 128
<210> 129
<211> 17
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 129
<210> 130
<211> 4
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 130
<210> 131
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 131
<210> 132
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 132
<210> 133
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 133
<210> 134
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成多肽
<400> 134
<210> 135
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 135
<210> 136
<211> 7
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 136
<210> 137
<211> 13
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 137
<210> 138
<211> 5
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 138
<210> 139
<211> 16
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 139
<210> 140
<211> 3
<212> PRT
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 140
<210> 141
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 141
<210> 142
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 142
<210> 143
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 143
<210> 144
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 144
<210> 145
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 145
<210> 146
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 146
<210> 147
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 147
<210> 148
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 148
<210> 149
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 149
<210> 150
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 150
<210> 151
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 151
<210> 152
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 152
<210> 153
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 153
<210> 154
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 154
<210> 155
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 155
<210> 156
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 156
<210> 157
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 157
<210> 158
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 158
<210> 159
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 159
<210> 160
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 160
<210> 161
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 161
<210> 162
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 162
<210> 163
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 163
<210> 164
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 164
<210> 165
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 165
<210> 166
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 166
<210> 167
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 167
<210> 168
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 168
<210> 169
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 169
<210> 170
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 170
<210> 171
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 171
<210> 172
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 172
<210> 173
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 173
<210> 174
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 174
<210> 175
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 175
<210> 176
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 176
<210> 177
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 177
<210> 178
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 178
<210> 179
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 179
<210> 180
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 180
<210> 181
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 181
<210> 182
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 182
<210> 183
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 183
<210> 184
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 184
<210> 185
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 185
<210> 186
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 186
<210> 187
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 187
<210> 188
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 188
<210> 189
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 189
<210> 190
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 190
<210> 191
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 191
<210> 192
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 192
<210> 193
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 193
<210> 194
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 194
<210> 195
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 195
<210> 196
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 196
<210> 197
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 197
<210> 198
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 198
<210> 199
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 199
<210> 200
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 200
<210> 201
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 201
<210> 202
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 202
<210> 203
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 203
<210> 204
<211> 1323
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 204
<210> 205
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 205
<210> 206
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 206
<210> 207
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 207
<210> 208
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 208
<210> 209
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 209
<210> 210
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 210
<210> 211
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 211
<210> 212
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 212
<210> 213
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 213
<210> 214
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 214
<210> 215
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 215
<210> 216
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 216
<210> 217
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 217
<210> 218
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 218
<210> 219
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 219
<210> 220
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 220
<210> 221
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 221
<210> 222
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 222
<210> 223
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 223
<210> 224
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 224
<210> 225
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 225
<210> 226
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 226
<210> 227
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 227
<210> 228
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 228
<210> 229
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 229
<210> 230
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 230
<210> 231
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 231
<210> 232
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 232
<210> 233
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 233
<210> 234
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 234
<210> 235
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 235
<210> 236
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 236
<210> 237
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 237
<210> 238
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 238
<210> 239
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 239
<210> 240
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 240
<210> 241
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 241
<210> 242
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 242
<210> 243
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 243
<210> 244
<211> 1320
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 244
<210> 245
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 245
<210> 246
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 246
<210> 247
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 247
<210> 248
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 248
<210> 249
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 249
<210> 250
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 250
<210> 251
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 251
<210> 252
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 252
<210> 253
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 253
<210> 254
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 254
<210> 255
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 255
<210> 256
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 256
<210> 257
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 257
<210> 258
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 258
<210> 259
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 259
<210> 260
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 260
<210> 261
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 261
<210> 262
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 262
<210> 263
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 263
<210> 264
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 264
<210> 265
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 265
<210> 266
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 266
<210> 267
<211> 36
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 267
<210> 268
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 268
<210> 269
<211> 51
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 269
<210> 270
<211> 12
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 270
<210> 271
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 271
<210> 272
<211> 660
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 272
<210> 273
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 273
<210> 274
<211> 1326
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列之說明：合成聚核苷酸
<400> 274
<210> 275
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 275
<210> 276
<211> 21
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 276
<210> 277
<211> 39
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 277
<210> 278
<211> 15
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 278
<210> 279
<211> 48
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 279
<210> 280
<211> 9
<212> DNA
<213> 穴兔(Oryctolagus cuniculus)
<400> 280
<210> 281
<211> 37
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> C端醯胺化
<400> 281
<210> 282
<211> 37
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> C端醯胺化
<400> 282
<210> 283
<211> 105
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 283
<210> 284
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 284

Claims (12)

  1. 一種分離的抗人類降血鈣素基因相關胜肽(CGRP)抗體或抗體片段，其中該抗人類CGRP抗體或抗體片段包含：一可變輕鏈(VL)多肽，其包含序列辨識編號：55之VL互補決定區1(CDR1)、序列辨識編號：56之VL互補決定區2(CDR2)、序列辨識編號：57之VL互補決定區3(CDR3)；以及一可變重鏈(VH)多肽，其包含序列辨識編號：58之VH CDR1、序列辨識編號：59之VH CDR2及序列辨識編號：60之VH CDR3。
  2. 如申請專利範圍第1項之抗體或抗體片段，其包含：(i)一可變重鏈(VH)多肽，其具有序列辨識編號：53所示之胺基酸序列或與其展現至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列一致性之一變異體；及(ii)一可變輕鏈(VL)多肽，其具有序列辨識編號：51所示之胺基酸序列或與其展現至少90%、至少95%、至少98%或至少99%的序列一致性之一變異體，其中於該VH或VL鏈多肽中的一或多個架構區(FR)殘基係任擇地被存在於一親代兔抗CGRP抗體中的對應位點之一胺基酸取代，其中該VH或VL多肽所含有的互補決定區(CDR)係衍生自該親代兔抗CGRP抗體，或藉由一保留性胺基酸取代作用取代，其中該抗體或抗體片段任擇地係一人化抗體、一嵌合型抗體或一單鏈抗體，其中該抗體或抗體片段任擇地抑制CGRP與CGRP受器(CGRP-R)及/或其多聚體、CGRP-CGRP-R複合體中一或多種另外的蛋白之結合作用(association)，及/或拮抗其生物效應，以及其中該抗體或抗體片段係以特異性方式結合至CGRP。
  3. 一種對降血鈣素基因相關胜肽(CGRP)具有結合特異性之抗CGRP抗體或抗體片段，其包含：(i)一具有序列辨識編號：51所示之胺基酸序列的可變輕鏈(VL)，以及一具有序列辨識編號：53所示之胺基酸序列的可變重鏈(VH)；或(ii)一具有序列辨識編號：52所示之胺基酸序列的輕鏈，以及一具有序列辨識編號：54所示之胺基酸序列的重鏈。
  4. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體或抗體片段，其：(i)係經脫醣基化；(ii)係經醣基化但僅含有甘露糖殘基；(iii)係非N-醣基化；(iv)所含有的一Fc區係業已改質而改變作用性功能、半衰期、蛋白溶解作用及/或醣基化作用；(v)係一人化抗體、一嵌合型抗體、一單鏈抗體或一單價抗體；(vi)係選自一Fab片段、一Fab’片段、一F(ab’)2片段之抗體片段或一單價抗體；(vii)係直接或間接與一可檢測性標記或治療劑連接；(viii)係以小於或等於10-4S-1、5x10-5S-1、10-5S-1、5x10-6S-1、10-6S-1、5x10-7S-1或10-7S-1之解離速率(Koff)結合至CGRP；(ix)抑制CGRP與CGRP-R之複合體及/或CGRP與CGRP-R之多聚體的產生，以及抑制CGRP與CGRP-R及一或多種另外的蛋白之複合體的產生；及/或(x)進一步包含一作用性基團，其係一可檢測性基團或一功能性基團，其中該可檢測性基團係一螢光染料、一酵素、一受質、一生物發光物質、一放射性物質或一化學發光物質，以及該功能性基團係鏈黴抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素、一細胞毒素、一細胞毒性劑或一放射性物質。
  5. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之抗體或抗體片段，其係以特異性方式活體內與表現CGRP的人類細胞及/或與循環型可溶性CGRP分子結合，及/或以特異性方式與表現在患有與CGRP結合型細胞相關聯的一疾病之一病患的人類細胞上或藉由該等細胞表現之CGRP結合，其中該疾病係選自於無前兆之偏頭痛、有前兆之偏頭痛、具有CGRP關聯性疼痛之一病況、體重減輕、癌症、腫瘤、膀胱過動症、尿失禁、搔癢症、牛皮癬、潰瘍、心臟病況、與癌症相關聯之血管生成作用、與腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與腫瘤存活相關聯之血管生成作用、偏頭痛、慢性偏頭痛、頻繁陣發性偏頭痛、經期偏頭痛、偏癱性偏頭痛、叢發性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、熱潮紅、慢性陣發性半邊頭痛、由於頭部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、由於頸部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、顱部神經痛、鼻竇性頭痛、過敏引發型頭痛、過敏引發型頭痛偏頭痛、疼痛、顳下頜關節(TMJ)病變(TMD)、發炎疼痛、內臟疼痛、手術後傷口疼痛、複雜性局部疼痛症候群、癌症疼痛、原發性或轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨質疏鬆性骨折疼痛、燒傷引起的疼痛、骨質疏鬆症、痛風關節疼痛、與鐮狀細胞危象相關聯的疼痛、肝細胞癌、乳癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性病變疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、痛經、卵巢痛、反射性交感神經失養症、骨關節炎疼痛、類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛；與胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群(IBS)、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎及胰臟炎相關聯之內臟疼痛。
  6. 一或多種核酸序列，其編碼如申請專利範圍第1至5項中任一項之抗人類CGRP抗體或抗體片段，其中該或該等核酸序列係任擇地由酵母菌或人類的較佳密碼子所組成。
  7. 一種載體，其包含如申請專利範圍第6項之一或多種核酸序列，其中該載體任擇地係一質體或一重組型病毒載體。
  8. 一種培養型或重組型細胞，其表現如申請專利範圍第6項之核酸序列及/或申請專利範圍第7項之載體所編碼之一抗體或抗體片段，其中該細胞任擇地係選自一哺乳類動物細胞、酵母菌細胞、細菌細胞、真菌細胞或昆蟲細胞。
  9. 一種使用如申請專利範圍第1至5項中任一項之抗人類CGPR抗體或抗體片段於製造一藥物之用途，該藥物係用於治療可藉由投與一治療有效量之CGRP結抗劑治療之疾病或病況，及/或該藥物係用於改善或減少可藉由投與一治療有效量之CGRP結抗劑治療之疾病或病況的症狀，其中該疾病或病況係與表現CGRP之細胞相關聯，其中該疾病或病況任擇地係選自有前兆之偏頭痛、無前兆之偏頭痛、體重減輕、癌症、腫瘤、與癌症相關聯之血管生成作用、與腫瘤生長相關聯之血管生成作用、與腫瘤存活相關聯之血管生成作用、偏頭痛、慢性偏頭痛、頻繁陣發性偏頭痛、經期偏頭痛、偏癱性偏頭痛、叢發性頭痛、偏頭痛性神經痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般性頭痛、熱潮紅、慢性陣發性半邊頭痛、由於頭部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、由於頸部的潛在構造問題所引起之次發性頭痛、顱部神經痛、鼻竇性頭痛、過敏引發型頭痛、過敏引發型偏頭痛、疼痛、發炎疼痛、手術後傷口疼痛、複雜性局部疼痛症候群、癌症疼痛、原發性骨癌疼痛、轉移性骨癌疼痛、骨折疼痛、骨質疏鬆性骨折疼痛、燒傷引起的疼痛、骨質疏鬆症、痛風關節疼痛、與鐮狀細胞危象相關聯的疼痛、肝細胞癌、乳癌、肝硬化、神經源性疼痛、神經性病變疼痛、傷害性疼痛、三叉神經痛、帶狀疱疹後之神經痛、幻肢疼痛、纖維肌痛、卵巢痛、反射性交感神經失養症、神經源性疼痛、骨關節炎或類風濕性關節炎疼痛、下背疼痛、糖尿病性神經病變、坐骨神經痛；與胃食道逆流、消化不良、激躁性腸症候群、發炎性腸道疾病、克隆氏症、迴腸炎、潰瘍性結腸炎、腎絞痛、痛經、膀胱炎、經期、分娩、停經、攝護腺炎或胰臟炎相關聯的內臟疼痛。
  10. 如申請專利範圍第9項之用途，其中該抗人類CGRP抗體或抗體片段係與選自下列之另一治療劑投予：抗組織胺劑、消炎劑、止痛劑、抗生素、化學治療劑、免疫抑制劑、細胞介素、抗增殖劑、止吐劑或細胞毒素，其中該止痛劑係一非類固醇抗發炎藥(NSAID)、一類鴉片止痛劑、一抗體或抗體片段或一非抗體生物製劑。
  11. 一種使用如申請專利範圍第1至5項中任一項之抗人類CGRP抗體或抗體片段於製造一組成物之用途，其中該組成物對於檢測表現CGRP的細胞是否存在之活體內成像係有用的，該檢測係藉由投予一診斷有效量之抗體或抗體片段，其中該投藥作用任擇地進一步包括投予一種放射性核種或螢光團，該放射性核種或螢光團係協助檢測位於表現CGRP的疾病位點之抗體，以及其中該等結果任擇地係用於協助設計一適當的治療方案。
  12. 一種藥學或診斷組成物，其含有至少一如申請專利範圍第1至5項中任一項之抗人類CGRP抗體或抗體片段以及一藥學上可接受之載劑，其中該組成物任擇地進一步包含至少一安定劑以及任擇地係經冷凍乾燥。
TW101118029A 2011-05-20 2012-05-21 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ）組成物及其用途 TWI646111B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161488660P 2011-05-20 2011-05-20
US61/488,660 2011-05-20

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201300419A TW201300419A (zh) 2013-01-01
TWI646111B true TWI646111B (zh) 2019-01-01

Family

ID=47175055

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW106121803A TWI685505B (zh) 2011-05-20 2012-05-21 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ-ｃｇｒｐ）組成物及其用途
TW101118029A TWI646111B (zh) 2011-05-20 2012-05-21 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ）組成物及其用途
TW107143050A TWI692485B (zh) 2011-05-20 2012-05-21 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ-ｃｇｒｐ）組成物及其用途
TW109110803A TWI719869B (zh) 2011-05-20 2012-05-21 抗降血鈣素基因相關胜肽(anti-cgrp)組成物及其用途

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW106121803A TWI685505B (zh) 2011-05-20 2012-05-21 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ-ｃｇｒｐ）組成物及其用途

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW107143050A TWI692485B (zh) 2011-05-20 2012-05-21 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ-ｃｇｒｐ）組成物及其用途
TW109110803A TWI719869B (zh) 2011-05-20 2012-05-21 抗降血鈣素基因相關胜肽(anti-cgrp)組成物及其用途

Country Status (35)

Country Link
US (9) US9745373B2 (zh)
EP (5) EP2710039B1 (zh)
JP (3) JP6282584B2 (zh)
KR (1) KR102128627B1 (zh)
CN (5) CN108424452B (zh)
AP (1) AP2013007259A0 (zh)
AR (3) AR086516A1 (zh)
AU (3) AU2012258966C1 (zh)
BR (2) BR112013029932A2 (zh)
CA (3) CA3079978A1 (zh)
CL (3) CL2013003336A1 (zh)
CO (1) CO6870005A2 (zh)
CY (2) CY1124209T1 (zh)
DK (3) DK3495392T3 (zh)
EA (3) EA031065B1 (zh)
ES (3) ES2893073T3 (zh)
FR (1) FR22C1032I2 (zh)
HR (3) HRP20190640T1 (zh)
HU (4) HUE055505T2 (zh)
IL (4) IL229431B (zh)
LT (4) LT2710039T (zh)
MX (3) MX370749B (zh)
NL (1) NL301181I2 (zh)
NZ (1) NZ733060A (zh)
PE (2) PE20141787A1 (zh)
PH (1) PH12018500521A1 (zh)
PL (3) PL3662932T3 (zh)
PT (3) PT2710039T (zh)
RS (3) RS61793B1 (zh)
SG (2) SG194938A1 (zh)
SI (3) SI2710039T1 (zh)
TR (1) TR201904088T4 (zh)
TW (4) TWI685505B (zh)
WO (1) WO2012162243A2 (zh)
ZA (1) ZA201308637B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI719869B (zh) * 2011-05-20 2021-02-21 美商艾爾德生物控股有限責任公司 抗降血鈣素基因相關胜肽(anti-cgrp)組成物及其用途

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT2380592T (pt) 2005-11-14 2018-06-06 Teva Pharmaceuticals Int Gmbh Anticorpos antagonistas dirigidos contra o péptido relacionado com o gene da calcitonina e métodos utilizando os mesmos
US8293239B2 (en) 2008-03-04 2012-10-23 Pfizer Limited Methods of treating chronic pain
KR101965461B1 (ko) 2011-05-20 2019-04-04 앨더바이오 홀딩스 엘엘씨 필요한 대상체, 특히 편두통 환자의 광선공포증 또는 광선 혐오증을 예방 또는 억제하기 위한 항-cgrp 항체 및 항체 단편의 용도
SG194974A1 (en) 2011-05-20 2013-12-30 Alderbio Holdings Llc Use of anti-cgrp or anti-cgrp-r antibodies or antibody fragments to treat or prevent chronic and acute forms of diarrhea
JP6472786B2 (ja) * 2013-03-15 2019-02-20 アルダー・バイオファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド 抗体の精製及び純度のモニタリング
SG10201906172XA (en) * 2013-07-03 2019-08-27 Alder Biopharmaceuticals Inc Regulation of glucose metabolism using anti-cgrp antibodies
US9896502B2 (en) 2014-03-21 2018-02-20 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
US10556945B2 (en) 2014-03-21 2020-02-11 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
EP3283169A4 (en) 2015-04-16 2019-03-20 Alder Biopharmaceuticals, Inc. USE OF ANTI-PACAP ANTIBODIES AND ANTIGEN-BINDING FRAGMENTS THEREOF FOR THE TREATMENT, PREVENTION OR INHIBITION OF PHOTOPHOBY
JOP20200116A1 (ar) 2015-04-24 2017-06-16 Amgen Inc طرق لعلاج أو الوقاية من الصداع النصفي
AR104847A1 (es) * 2015-06-17 2017-08-16 Lilly Co Eli Formulación de anticuerpo anti-cgrp
KR20200035163A (ko) * 2015-09-24 2020-04-01 테바 파마슈티컬스 인터내셔널 게엠베하 (지속성) 외상후 두통의 예방, 치료 및 감소
TW201725212A (zh) * 2015-12-10 2017-07-16 第一三共股份有限公司 特異性於降鈣素基因相關胜肽的新穎蛋白
CN108473567A (zh) * 2016-01-28 2018-08-31 伊莱利利公司 Cgrp抗体及其用途
US11492386B2 (en) 2016-02-01 2022-11-08 Eli Lilly And Company Parathyroid hormone-anti-RANKL antibody fusion compounds
CN109311977B (zh) 2016-04-15 2022-06-14 H.伦德贝克公司 人源化的抗pacap抗体及其用途
JP6937368B2 (ja) 2016-09-23 2021-09-22 テバ・ファーマシューティカルズ・インターナショナル・ゲー・エム・ベー・ハー 難治性片頭痛の治療方法
AU2017331592A1 (en) 2016-09-23 2019-04-11 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Treating cluster headache
MX2019010397A (es) 2017-03-02 2020-08-20 Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc Seleccion de pacientes de cefalea que responden a anticuerpos dirigidos contra el peptido relacionado con el gen de la calcitonina.
BR112020013621A2 (pt) 2018-01-12 2020-12-01 Amgen Inc. anticorpos contra pac1 e usos dos mesmos
US11274158B2 (en) * 2018-01-30 2022-03-15 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods and compositions for treating inflammatory or autoimmune diseases or conditions using calcitonin receptor activators
JP2021518748A (ja) * 2018-02-23 2021-08-05 アールイーエムディー バイオセラピューティクス，インコーポレイテッドＲＥＭＤ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ｃｇｒｐ）アンタゴニスト抗体
WO2019231800A1 (en) * 2018-05-31 2019-12-05 Eli Lilly And Company Anti-cgrp antibodies for treating menstrual-related migraines
US10899826B1 (en) * 2018-09-13 2021-01-26 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Pharmaceutical compositions for an anti-CGRP antagonist antibody
EP3674418A1 (en) * 2018-12-26 2020-07-01 Life Length S.L. Method for measuring telomere associated variables and uses thereof for the diagnosis and/or prognosis of telomeric-associated diseases
CN113272324A (zh) * 2019-01-08 2021-08-17 H.隆德贝克有限公司 使用抗cgrp或抗cgrp-r抗体治疗药物过度使用性头痛
KR20210113597A (ko) 2019-01-08 2021-09-16 하. 룬드벡 아크티에셀스카브 항-cgrp 항체를 사용한 두통의 급성 치료 및 신속 치료
CA3168643A1 (en) * 2019-02-28 2020-09-03 Dandi Bioscience Inc. Polypeptide having antibacterial activity, composition for preventing or treating sepsis comprising same, and antibacterial composition
CN113811326A (zh) * 2019-05-02 2021-12-17 H.隆德贝克有限公司 使用抗cgrp抗体治疗头痛
WO2020239014A1 (zh) * 2019-05-30 2020-12-03 山东博安生物技术有限公司 抗cgrp抗体及其应用
CA3077973A1 (en) 2020-04-06 2021-10-06 H. Lundbeck A/S Treatment of most bothersome symptom (mbs) associated with migraine using anti-cgrp antibodies
WO2022185224A1 (en) 2021-03-02 2022-09-09 Mark Hasleton Treatment and/or reduction of occurrence of migraine
WO2023026205A1 (en) 2021-08-24 2023-03-02 Cgrp Diagnostics Gmbh Preventative treatment of migraine
CN117813325A (zh) 2021-08-27 2024-04-02 H.隆德贝克有限公司 使用抗cgrp抗体治疗丛集性头痛
WO2023161526A1 (en) 2022-02-28 2023-08-31 Tridem Bioscience Gmbh & Co Kg A CONJUGATE CONSISTING OF OR COMPRISING AT LEAST A ß-GLUCAN OR A MANNAN
WO2024032750A1 (zh) * 2022-08-11 2024-02-15 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗cgrp抗体及用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007076336A1 (en) * 2005-12-22 2007-07-05 Eli Lilly And Company Treatment of migraine with anti-cgrp antibodies
CN101309704A (zh) * 2005-11-14 2008-11-19 礼纳特神经系统科学公司 针对降钙素基因相关肽的拮抗剂抗体及其使用方法

Family Cites Families (119)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3662333A (en) 1970-09-08 1972-05-09 Bendix Corp Hydraulic accumulator charge detector and indicating system
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS5123197A (ja) 1974-08-21 1976-02-24 Hitachi Ltd Purosesugasukuromatogurafuno ondoseigyohoshiki
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DE3484377D1 (de) * 1983-06-15 1991-05-08 Celltech Ltd Peptide, pharmazeutische zusammensetzungen, gene, vektoren, wirtorganismen, verfahren zu deren herstellung und diagnostische reagenzien.
JPS62129297A (ja) 1985-08-09 1987-06-11 Toyo Jozo Co Ltd カルシトニン遺伝子関連ペプチド誘導体
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
GB8725529D0 (en) 1987-10-30 1987-12-02 Delta Biotechnology Ltd Polypeptides
US5364841A (en) 1988-01-11 1994-11-15 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of obesity and essential hypertension and related disorders
US5266561A (en) 1988-01-11 1993-11-30 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of type 2 diabetes mellitus
JP2989002B2 (ja) 1988-12-22 1999-12-13 キリン―アムジエン・インコーポレーテツド 化学修飾顆粒球コロニー刺激因子
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
FR2650598B1 (fr) 1989-08-03 1994-06-03 Rhone Poulenc Sante Derives de l'albumine a fonction therapeutique
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
WO1992002551A1 (en) 1990-08-02 1992-02-20 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
FR2669336B1 (fr) 1990-11-20 1993-01-22 Adir Nouveaux derives d'oxazolo pyridines, leurs procedes de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
DE122004000008I1 (de) 1991-06-14 2005-06-09 Genentech Inc Humanisierter Heregulin Antikörper.
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
DE4227454C1 (de) * 1992-08-19 1994-02-03 Henning Berlin Gmbh Verfahren zur Früherkennung, zur Erkennung des Schweregrads sowie zur therapiebegleitenden Verlaufsbeurteilung einer Sepsis sowie Mittel zur Durchführung des Verfahrens
US5604260A (en) 1992-12-11 1997-02-18 Merck Frosst Canada Inc. 5-methanesulfonamido-1-indanones as an inhibitor of cyclooxygenase-2
US5409944A (en) 1993-03-12 1995-04-25 Merck Frosst Canada, Inc. Alkanesulfonamido-1-indanone derivatives as inhibitors of cyclooxygenase
WO1994021293A1 (en) 1993-03-19 1994-09-29 Duke University Method of treatment of tumors with an antibody binding to tenascin
US5436265A (en) 1993-11-12 1995-07-25 Merck Frosst Canada, Inc. 1-aroyl-3-indolyl alkanoic acids and derivatives thereof useful as anti-inflammatory agents
US5474995A (en) 1993-06-24 1995-12-12 Merck Frosst Canada, Inc. Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5475995A (en) 1994-05-16 1995-12-19 Livingston; George G. Truck spare tire locking rod
US5616601A (en) 1994-07-28 1997-04-01 Gd Searle & Co 1,2-aryl and heteroaryl substituted imidazolyl compounds for the treatment of inflammation
IL114909A (en) 1994-08-12 1999-10-28 Immunomedics Inc Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
DE69433747D1 (de) 1994-08-16 2004-06-03 Human Genome Sciences Inc Calcitoninrezeptor
US5521213A (en) 1994-08-29 1996-05-28 Merck Frosst Canada, Inc. Diaryl bicyclic heterocycles as inhibitors of cyclooxygenase-2
US5593994A (en) 1994-09-29 1997-01-14 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Prostaglandin synthase inhibitors
US5552422A (en) 1995-01-11 1996-09-03 Merck Frosst Canada, Inc. Aryl substituted 5,5 fused aromatic nitrogen compounds as anti-inflammatory agents
FR2732221B1 (fr) 1995-03-28 1997-04-25 Oreal Utilisation d'un antagoniste de cgrp pour traiter les rougeurs cutanees d'origine neurogene et composition obtenue
US5639780A (en) 1995-05-22 1997-06-17 Merck Frosst Canada, Inc. N-benzyl indol-3-yl butanoic acid derivatives as cyclooxygenase inhibitors
US5604253A (en) 1995-05-22 1997-02-18 Merck Frosst Canada, Inc. N-benzylindol-3-yl propanoic acid derivatives as cyclooxygenase inhibitors
US5510368A (en) 1995-05-22 1996-04-23 Merck Frosst Canada, Inc. N-benzyl-3-indoleacetic acids as antiinflammatory drugs
JPH11512396A (ja) 1995-09-05 1999-10-26 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 化合物および方法
US5710024A (en) * 1996-07-23 1998-01-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotides that encode the calcitonin gene-related peptide receptor coponent factor (HOUNDC44)
WO1998009630A1 (en) 1996-09-09 1998-03-12 Smithkline Beecham Corporation Compounds and methods
EP0927192B1 (de) 1996-09-10 2004-05-12 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co.KG Abgewandelte aminosäuren, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und verfahren zu ihrer herstellung
US6653104B2 (en) 1996-10-17 2003-11-25 Immunomedics, Inc. Immunotoxins, comprising an internalizing antibody, directed against malignant and normal cells
WO1998056779A1 (en) 1997-06-13 1998-12-17 Smithkline Beecham Corporation 4-sulfinyl benzamides as calcitonin gene-related peptide receptor antagonists
US6956107B2 (en) 1998-02-20 2005-10-18 Tanox, Inc. Inhibitors of complement activation
CA2345357A1 (en) 1998-09-30 2000-04-06 Merck Sharp & Dohme Limited Benzimidazolinyl piperidines as cgrp ligands
US20010036647A1 (en) 1998-10-22 2001-11-01 Prabhakara V. Choudary Functionally assembled antigen-specific intact recombinant antibody and a method for production thereof
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1031350A1 (en) 1999-02-23 2000-08-30 Warner-Lambert Company Use of a gabapentin-analog for the manufacture of a medicament for preventing and treating visceral pain
US6313097B1 (en) 1999-03-02 2001-11-06 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Antagonists of calcitonin gene-related peptide
US6521609B1 (en) 1999-08-10 2003-02-18 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Use of CGRP antagonists and CGRP release inhibitors for combating menopausal hot flushes
EP1700603A3 (en) 1999-09-25 2007-06-13 Coley Pharmaceutical GmbH Immunostimulatory nucleic acids
JP2003525061A (ja) 2000-03-01 2003-08-26 メディミューン，インコーポレイテッド 高効力組換え抗体およびその産生法
US6406863B1 (en) 2000-06-23 2002-06-18 Genetastix Corporation High throughput generation and screening of fully human antibody repertoire in yeast
US20020162125A1 (en) 2001-03-06 2002-10-31 Anne-Marie Salmon Methods and compositions for the modulation of neurogenic inflammatory pain and physical opiate withdrawal
US20030181462A1 (en) 2001-08-17 2003-09-25 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Use of BIBN4096 in combination with other antimigraine drugs for the treatment of migraine
CA2471833A1 (en) 2001-11-26 2003-06-05 Protemix Corporation Limited Methods of compositions for normalizing lipid levels in mammalian tissues
SI1527100T1 (sl) 2002-03-29 2009-12-31 Schering Corp Humana monoklonska protitelesa proti interlevkinu-5 in postopki in sestavki, ki jih obsegajo
US7879991B2 (en) 2002-05-06 2011-02-01 Noxxon Pharma Ag CGRP binding nucleic acids
US20040110170A1 (en) 2002-05-18 2004-06-10 The Regents Of The University Of California Cloning and characterization of calcitonin gene related peptide receptors
US7345065B2 (en) 2002-05-21 2008-03-18 Allergan, Inc. Methods and compositions for alleviating pain
NZ537315A (en) 2002-06-05 2006-04-28 Bristol Myers Squibb Co Calcitonin gene related peptide receptor antagonists
JP2006512895A (ja) 2002-06-28 2006-04-20 ドマンティス リミテッド リガンド
EA008744B1 (ru) 2002-08-12 2007-08-31 Актавис Груп Хф. Применение соединений антагонистов кальцитонин генсвязанного пептида (cgrp) для лечения псориаза
UA80447C2 (en) 2002-10-08 2007-09-25 Methods for treating pain by administering nerve growth factor antagonist and opioid analgesic
DE10250082A1 (de) 2002-10-25 2004-05-13 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Ausgewählte CGRP-Antagonisten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Arzneimittel
MXPA05005921A (es) 2002-12-02 2005-10-19 Abgenix Inc Anticuerpos dirigidos a factor de necrosis tumoral y sus usos.
CA2511598C (en) 2002-12-24 2016-09-13 Rinat Neuroscience Corp. Anti-ngf antibodies and methods using same
WO2004087649A2 (en) 2003-03-14 2004-10-14 Merck & Co., Inc. Benodiazepine spirohydantoin cgrp receptor antagonists
US7288559B2 (en) 2003-03-14 2007-10-30 Merck + Co, Inc. Carboxamide spirohydantoin CGRP receptor antagonists
ATE394400T1 (de) 2003-03-14 2008-05-15 Merck & Co Inc Bicyclische anilidspirohydantoine als cgrp- rezeptorantagonisten
JP4673296B2 (ja) 2003-03-14 2011-04-20 メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション アリールスピロヒダントインｃｇｒｐ受容体拮抗物質
AU2004221891B2 (en) 2003-03-14 2009-11-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Monocyclic anilide spirohydantoin CGRP receptor antagonists
JO2355B1 (en) 2003-04-15 2006-12-12 ميرك شارب اند دوم كوربوريشن Hereditary calcitonin polypeptide receptor antagonists
US7205292B2 (en) 2003-04-15 2007-04-17 Merck & Co., Inc. CGRP receptor antagonists
WO2004097421A2 (en) 2003-04-29 2004-11-11 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with calcitonin receptor-like receptor (calcrl)
US20060173046A1 (en) 2003-07-15 2006-08-03 Bell Ian M Hydroxypyridine cgrp receptor antagonists
ES2393555T3 (es) * 2003-10-22 2012-12-26 Keck Graduate Institute Métodos para la síntesis de polipéptidos hetero-multiméricos en levaduras usando una estrategia de apareamiento haploide.
WO2005041757A2 (en) 2003-10-29 2005-05-12 University Of Rochester Detection of neuropeptides associated with pelvic pain disorders and uses thereof
WO2005070444A2 (en) 2004-01-13 2005-08-04 Vasogenix Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating acute myocardial infarction by calcitonin gene related peptide and compositions containing the same
DE102004015723A1 (de) 2004-03-29 2005-10-20 Boehringer Ingelheim Pharma Ausgewählte CGRP-Antagonisten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Arzneimittel
DE102004018794A1 (de) 2004-04-15 2005-10-27 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Ausgewählte CGRP-Antagonisten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Arzneimittel
US7279471B2 (en) 2004-04-15 2007-10-09 Boehringer Ingelheim International Gmbh Selected CGRP-antagonists, process for preparing them and their use as pharmaceutical compositions
TWI432196B (zh) 2005-01-18 2014-04-01 Euro Celtique Sa 內臟痛的治療
EP1770091A1 (de) 2005-09-29 2007-04-04 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG CGRP-Antagonisten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Arzneimittel
ITRM20050290A1 (it) 2005-06-07 2006-12-08 Lay Line Genomics Spa Uso di molecole in grado di inibire il legame tra ngf e il suo recettore trka come analgesici ad effetto prolungato.
EP1928452A4 (en) 2005-08-25 2010-09-01 Wex Medical Ltd USE OF SODIUM CHANNEL BLOCKS FOR THE TREATMENT OF VISCERAL PAIN OR PAIN THROUGH CANCER TREATMENT
US8168592B2 (en) 2005-10-21 2012-05-01 Amgen Inc. CGRP peptide antagonists and conjugates
US20070108378A1 (en) 2005-11-14 2007-05-17 Toru Terabayashi High pressure optical cell for a downhole optical fluid analyzer
AU2006316626A1 (en) 2005-11-18 2007-05-31 Merck Sharp & Dohme Corp. Spirohydantoin aryl CGRP receptor antagonists
US9074352B2 (en) 2006-03-27 2015-07-07 John R. Ramun Universal control scheme for mobile hydraulic equipment and method for achieving the same
CA2652392C (en) 2006-05-19 2017-10-10 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Culture method for obtaining a clonal population of antigen-specific b cells
CA2654048A1 (en) 2006-06-08 2007-12-13 Boehringer Ingelheim International Gmbh Treatment of gastrointestinal disorders with cgrp antagonists
CA2658573A1 (en) 2006-07-21 2008-01-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Cgrp receptor antagonists
US8075902B2 (en) * 2007-01-03 2011-12-13 Michael Powell Diagnosis and treatment of cancer related to human dormancy
PT3187506T (pt) 2007-05-21 2019-04-24 Alderbio Holdings Llc Anticorpos contra il-6 e sua utilização
US9056905B2 (en) 2007-05-21 2015-06-16 Alderbio Holdings Llc Antibodies to TNF-α and use thereof
NZ601583A (en) 2007-05-21 2013-08-30 Bristol Myers Squibb Co Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
GB0725103D0 (en) * 2007-12-21 2008-01-30 Glaxo Group Ltd Novel compounds
US8293239B2 (en) 2008-03-04 2012-10-23 Pfizer Limited Methods of treating chronic pain
KR101304085B1 (ko) 2008-03-04 2013-09-05 라브리스 바이올로직스 인코포레이티드 염증성 통증의 치료 방법
JO3382B1 (ar) 2008-12-23 2019-03-13 Amgen Inc أجسام مضادة ترتبط مع مستقبل cgrp بشري
KR101519192B1 (ko) * 2009-08-28 2015-05-11 리나트 뉴로사이언스 코프. 칼시토닌 유전자-관련된 펩티드에 대해 지시된 길항제 항체의 투여에 의한 내장 통증의 치료 방법
JO3330B1 (ar) 2010-06-10 2019-03-13 Lilly Co Eli الأجسام المضادة cgrp
US11214610B2 (en) * 2010-12-01 2022-01-04 H. Lundbeck A/S High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris
SG194974A1 (en) 2011-05-20 2013-12-30 Alderbio Holdings Llc Use of anti-cgrp or anti-cgrp-r antibodies or antibody fragments to treat or prevent chronic and acute forms of diarrhea
EP2710039B1 (en) 2011-05-20 2019-01-09 AlderBio Holdings LLC Anti-cgrp compositions and use thereof
KR101965461B1 (ko) 2011-05-20 2019-04-04 앨더바이오 홀딩스 엘엘씨 필요한 대상체, 특히 편두통 환자의 광선공포증 또는 광선 혐오증을 예방 또는 억제하기 위한 항-cgrp 항체 및 항체 단편의 용도
US20170114122A1 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Alderbio Holdings Llc Regulation of glucose metabolism using anti-cgrp antibodies
KR20200035163A (ko) 2015-09-24 2020-04-01 테바 파마슈티컬스 인터내셔널 게엠베하 (지속성) 외상후 두통의 예방, 치료 및 감소
MX2019010397A (es) * 2017-03-02 2020-08-20 Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc Seleccion de pacientes de cefalea que responden a anticuerpos dirigidos contra el peptido relacionado con el gen de la calcitonina.
US11752099B2 (en) * 2017-03-27 2023-09-12 W. L. Gore & Associates, Inc. Injectable and biodegradable polymer formulations for controlled release of bioactive agents
WO2018236873A1 (en) * 2017-06-19 2018-12-27 President And Fellows Of Harvard College METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MICROBIAL INFECTION
TWI754772B (zh) * 2017-09-06 2022-02-11 美商美國禮來大藥廠 用於治療偏頭痛之拉米迪坦(lasmiditan)與cgrp拮抗劑之組合療法
KR20210113597A (ko) * 2019-01-08 2021-09-16 하. 룬드벡 아크티에셀스카브 항-cgrp 항체를 사용한 두통의 급성 치료 및 신속 치료
CN113272324A (zh) 2019-01-08 2021-08-17 H.隆德贝克有限公司 使用抗cgrp或抗cgrp-r抗体治疗药物过度使用性头痛

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101309704A (zh) * 2005-11-14 2008-11-19 礼纳特神经系统科学公司 针对降钙素基因相关肽的拮抗剂抗体及其使用方法
WO2007076336A1 (en) * 2005-12-22 2007-07-05 Eli Lilly And Company Treatment of migraine with anti-cgrp antibodies

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI719869B (zh) * 2011-05-20 2021-02-21 美商艾爾德生物控股有限責任公司 抗降血鈣素基因相關胜肽(anti-cgrp)組成物及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
PE20180502A1 (es) 2018-03-09
AU2017203890B2 (en) 2019-06-06
FR22C1032I1 (fr) 2022-09-09
NZ717570A (en) 2018-09-28
FR22C1032I2 (fr) 2023-06-02
MX370749B (es) 2019-12-20
EP3662932B1 (en) 2021-04-07
AR086516A1 (es) 2013-12-18
DK2710039T3 (en) 2019-04-01
TR201904088T4 (tr) 2019-05-21
HRP20190640T1 (hr) 2019-05-31
EP3495392A1 (en) 2019-06-12
CL2013003336A1 (es) 2014-06-06
EP3495392B1 (en) 2021-08-18
US20210047391A1 (en) 2021-02-18
CY1124515T1 (el) 2022-07-22
WO2012162243A3 (en) 2013-01-17
JP2019150044A (ja) 2019-09-12
NL301181I2 (nl) 2022-11-24
RS62306B1 (sr) 2021-09-30
US10214582B2 (en) 2019-02-26
US20180215813A1 (en) 2018-08-02
CN108373502B (zh) 2022-03-22
CO6870005A2 (es) 2014-02-20
CL2018001452A1 (es) 2018-08-10
TW201300419A (zh) 2013-01-01
NZ618637A (en) 2016-03-31
CA2836649C (en) 2020-06-23
AU2012258966B2 (en) 2017-03-09
US10189895B2 (en) 2019-01-29
ZA201308637B (en) 2022-11-30
JP2018038391A (ja) 2018-03-15
HUE054437T2 (hu) 2021-09-28
PT2710039T (pt) 2019-04-23
EP2710039A4 (en) 2014-11-19
ES2893073T3 (es) 2022-02-07
LT3662932T (lt) 2021-06-10
JP6952736B2 (ja) 2021-10-20
ES2715001T3 (es) 2019-05-31
US20180215816A1 (en) 2018-08-02
IL229431B (en) 2018-10-31
CA3080000A1 (en) 2012-11-29
EA031065B1 (ru) 2018-11-30
CN107602700A (zh) 2018-01-19
SG10201604040PA (en) 2016-07-28
CN107602700B (zh) 2021-12-17
KR102128627B1 (ko) 2020-06-30
US20190211085A1 (en) 2019-07-11
JP6282584B2 (ja) 2018-02-21
NL301181I1 (zh) 2022-06-15
CN108424452A (zh) 2018-08-21
EP4115905A1 (en) 2023-01-11
TWI719869B (zh) 2021-02-21
CN107586338A (zh) 2018-01-16
RS61793B1 (sr) 2021-06-30
US20180215814A1 (en) 2018-08-02
RS58621B1 (sr) 2019-05-31
BR122022012930B1 (pt) 2023-10-10
HUE044062T2 (hu) 2019-09-30
AU2017203890A1 (en) 2017-06-29
US20190092842A1 (en) 2019-03-28
HUE055505T2 (hu) 2021-11-29
TW202033559A (zh) 2020-09-16
SG194938A1 (en) 2013-12-30
EA201891284A1 (ru) 2018-11-30
EP2710039B1 (en) 2019-01-09
DK3662932T3 (da) 2021-05-17
DK3495392T3 (da) 2021-09-13
PE20141787A1 (es) 2014-12-07
US20180215815A1 (en) 2018-08-02
AU2012258966C1 (en) 2022-02-03
IL261927B (en) 2019-11-28
PT3495392T (pt) 2021-09-22
EA201592042A1 (ru) 2016-03-31
MX2019015745A (es) 2020-02-13
IL261927A (en) 2018-10-31
BR112013029932A2 (pt) 2017-01-31
PL2710039T3 (pl) 2019-07-31
IL229431A0 (en) 2014-01-30
NZ733060A (en) 2022-08-26
AR123876A2 (es) 2023-01-18
MX2013013535A (es) 2015-08-20
CN103748111B (zh) 2018-04-27
US10066009B2 (en) 2018-09-04
CN103748111A (zh) 2014-04-23
CY1124209T1 (el) 2022-05-27
KR20140042819A (ko) 2014-04-07
AR118605A2 (es) 2021-10-20
SI2710039T1 (sl) 2019-05-31
IL270382B (en) 2020-11-30
AP2013007259A0 (en) 2013-11-30
LTPA2022511I1 (zh) 2022-07-11
AU2019226231B2 (en) 2021-06-03
TW201936642A (zh) 2019-09-16
HRP20211395T1 (hr) 2021-12-10
US10533048B2 (en) 2020-01-14
US20170174754A1 (en) 2017-06-22
US20120294797A1 (en) 2012-11-22
ES2873837T3 (es) 2021-11-04
LT2710039T (lt) 2019-04-25
CL2017001379A1 (es) 2017-12-29
MX2019008185A (es) 2019-09-09
CA2836649A1 (en) 2012-11-29
LT3495392T (lt) 2021-09-27
CN108373502A (zh) 2018-08-07
JP2014517699A (ja) 2014-07-24
PL3662932T3 (pl) 2021-09-06
US10208112B2 (en) 2019-02-19
TWI692485B (zh) 2020-05-01
TWI685505B (zh) 2020-02-21
WO2012162243A2 (en) 2012-11-29
US10179809B2 (en) 2019-01-15
IL268464B (en) 2020-10-29
PH12018500521A1 (en) 2019-04-15
EA039905B1 (ru) 2022-03-25
AU2019226231A1 (en) 2019-09-26
CN107586338B (zh) 2021-09-17
US11111289B2 (en) 2021-09-07
EP3662932A1 (en) 2020-06-10
PT3662932T (pt) 2021-05-14
US9745373B2 (en) 2017-08-29
EP3875115A1 (en) 2021-09-08
PL3495392T3 (pl) 2021-12-13
IL268464A (en) 2019-09-26
SI3662932T1 (sl) 2021-08-31
TW201811835A (zh) 2018-04-01
HRP20210777T1 (hr) 2021-06-25
EA201301295A1 (ru) 2014-04-30
JP6527563B2 (ja) 2019-06-05
SI3495392T1 (sl) 2021-11-30
EP2710039A2 (en) 2014-03-26
CA3079978A1 (en) 2012-11-29
CN108424452B (zh) 2021-08-03
HUS2200031I1 (hu) 2022-07-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI646111B (zh) 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ）組成物及其用途
TWI609888B (zh) 抗降血鈣素基因相關胜肽（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ）或抗降血鈣素基因相關胜肽受器（ａｎｔｉ－ｃｇｒｐ－ｒ）抗體或抗體片段治療或預防慢性及急性型腹瀉之用途
AU2012258966A1 (en) Anti-CGRP compositions and use thereof
NZ717570B2 (en) Anti-cgrp compositions and use thereof