JP6952736B2 - 抗cgrp組成物およびその使用 - Google Patents
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Description
本出願は、EFS‐WebによってASCII形式で提出され、その全体が参照により本明細書中に組み込まれる配列表を含む。2012年5月18日に作製されたそのASCIIコピーは67858o730301.txtという名称であり、サイズは203,815バイトである。
GRPの生物学的効果は、CGRP受容体(CGRP‐R)によって媒介され、これは受容体関連膜タンパク質(RAMP)とあわせて7の膜貫通成分から構成される。CGRP‐Rは、Gタンパク質によるアデニル酸シクラーゼに対する有効なカップリングおよびcAMPの産生に必須である、受容体成分タンパク質(RCP)の活性をさらに必要とする。Doods, H., Curr. Op. Invest. Drugs, 2(9):1261-68 (2001)。
度と偏頭痛との間の強力な相関関係、(2)CGRPの注入が引き起こす偏頭痛様頭痛、(3)ベースラインCGRPレベルの上昇、そして(4)頭痛強度と有意に相関する偏頭痛発作中の血漿CGRPレベルの変化。Arulmozhi, D.K., et al., Vas. Pharma., 43: 176-187 (2005)。
ンバーは、5‐HT1B、5‐HT1D、および5‐HT1Fをはじめとする複数のセロトニン受容体に対して親和性を有する。この薬物ファミリーのメンバーは、脳血管を選択的に収縮させるが、さらに冠状血管に対して血管収縮作用を引き起こす。Durham, P.L., New Eng. J. Med., 350 (11):1073-75 (2004)。すでに心臓疾患に罹っている患者では投
与後に冠動脈攣縮の理論上の危険性があり、トリプタン摂取後の心臓事象はめったに起こらない。冠血管疾患の患者について禁忌であることに注意。
を脊髄へと運ぶために重要であるという事実(Yoshida et al., 2011 J Pharmacol Sci (112):128)も含む。さらに、ボトックスの膀胱内投与はCGRPを抑制し、酢酸で誘発される膀胱痛モデルにおいて収縮間隔を有意に減少させることが報告されている(Chuang et al., 2004 J Urol (172):1529; Chuang et al., 2009 J Urol (182):786)。
管拡張を軽減する全長型抗体およびそのFab断片が企図される。
分子免疫薬)、キャメルボディ、ナノボディ、およびIgNARが含まれる。
酵母細胞(例えば二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株における抗CGRP抗体またはそれらの断片の産生に関する。
記載されている特定の方法、プロトコル、細胞系、動物種または属、および試薬は異なっていてもよいので、本発明はそれらに限定されないと理解されるべきである。本明細書中で用いられる専門用語は、特定の実施形態を記載するためだけであり、本発明の範囲を限定することを意図せず、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定される
ことも理解されるべきである。本明細書中で用いられる場合、単数形「a」、「and」、および「the」は、文脈上明確に別段の記載がない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「細胞 (a cell) 」への言及は複数のそのような細胞を含み、「タンパク質 (the protein) 」への言及は、1つ以上のタンパク質および当業者に公知のその
等価物などの言及を含む。本明細書中で用いられる全ての技術用語および科学用語は、明確に別段の指示がない限り、本発明が属する分野の通常の知識を有する者に通常理解されるのと同じ意味を有する。
RP‐ベータアミノ酸配列:
CGRP‐アルファ:ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGVVKNNFVPTNVGSKAF-NH2(配列番号281)
(N末端フェニルアラニンはアミド化されている);
CGRP‐ベータ:ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-NH2(配列番号282)(
N末端フェニルアラニンはアミド化されている);
だけではなく、これらのCGRPアミノ酸配列の任意の膜結合形態、ならびにこの配列の突然変異体(ムチエン(mutien))、スプライス変異、イソ型、オルトログ、ホモログおよび変異体も含む。
ができる任意の二倍体または四倍体酵母を広く含むことが意図される。そのような酵母種は、一倍体、二倍体、または他の倍数体形態で存在し得る。所定の倍数性の細胞は、適切な条件下で、その形態で無限の世代数増殖することができる。二倍体細胞はさらに胞子を形成して一倍体細胞を形成することもできる。連続接合の結果、二倍体株のさらなる接合または融合によって四倍体株を得ることができる。本発明は、一倍体酵母、ならびに例えば接合もしくはスフェロプラスト融合によって産生される二倍体または他の倍数体酵母細胞を企図する。
スコボトリオジマ属(Ascobotryozyma)、シテロミセス属(Citeromyces)、デバリオミ
セス属(Debaryomyces)、デッケラ属(Dekkera)、エレモテシウム属(Eremothecium)
、イサトチェンキア属(Issatchenkia)、カザクスタニア属(Kazachstania)、クロイベロミセス属(Kluyveromyces)、コダマエ属(Kodamaea)、ロデロミセス属(Lodderomyces)、パキソレン属(Pachysolen)、ピキア属、サッカロミセス属(Saccharomyces)、サツルニスポラ属(Saturnispora)、テトラピシスポラ属(Tetrapisispora)、トルラスポラ属(Torulaspora)、ウィリオプシス属(Williopsis)、およびジゴサッカロミセス属
(Zygosaccharomyces)を含む、サッカロミセス(Saccharomycetaceae)科のメンバーで
ある。本発明において有用である可能性のある他の種類の酵母としては、ヤロウィア属(Yarrowia)、ロドスポリジウム属(Rhodosporidium)、カンジダ属(Candida)、ハンセ
ヌラ属(Hansenula)、フィロバシウム属(Filobasium)、スポリジオボルス属(Sporidiobolus)、ブレラ属(Bullera)、ロイコスポリジウム属(Leucosporidium)およびフィ
ロバシデラ属(Filobasidella)が挙げられる。
)、およびハンセヌラ・ポリモルファ(Hansenula polymorpha)(ピキア・アングスタ(Pichia angusta))。本発明の特に好ましい実施形態では、ピキア属の接合可能酵母はピキア・パストリス種である。
体を得ることにより、そしてピキアでは一倍体の連続接合によって、栄養要求性二倍体を得ることによって、そのような4倍体を得ることができる。例えば、[met his]一倍体を[ade his]一倍体と接合して、二倍体[his]を得ることができる。そして[met arg]一倍体を[ade arg]一倍体と接合して、二倍体[arg]を得ることができる。次いで、二倍体[his]×二倍体[arg]で四倍体原栄養体を得る。二倍体細胞の利点および使用への言及は、四倍体細胞にも適用できることは当業者には理解されるであろう。
クターは細菌複製起源および適切な細菌選択マーカーを含む、そのような操作を促進する配列を含む。選択マーカーは、選択培養培地中で増殖させた、形質転換された宿主細胞の生存または増殖に必要なタンパク質をコード化する。選択遺伝子を含むベクターで形質転換されていない宿主細胞は、培養培地で生存しないであろう。典型的な選択遺伝子は、(a)抗生物質もしくは他の毒素に対する耐性を付与するタンパク質、(b)栄養要求不全を補完するタンパク質、または(c)複合培地から入手可能でない重要な栄養素を供給す
るタンパク質をコード化する。酵母の形質転換のための例示的ベクターおよび方法は、例えば、Burke, D., Dawson, D., & Stearns, T. (2000). Method]s in yeast genetics: a
Cold Spring Harbor Laboratory course manual. Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Pressに記載されている。
プロモーターは強力な構成的プロモーターであり、AOXおよびFLD1プロモーターは誘導性である。
証明されている。他の酵母シグナル配列としては、アルファ接合因子シグナル配列、インベルターゼシグナル配列、および他の分泌された酵母ポリペプチド由来のシグナル配列が挙げられるが、これらに限定されるものではない。さらに、これらのシグナルペプチド配列を操作して、二倍体酵母発現系で増強された分泌を提供することができる。対象となる他の分泌シグナルにはさらに、ほ乳動物シグナル配列も含まれ、これは分泌されるタンパク質に対して異種性であり得るか、または分泌されるタンパク質の天然の配列であり得る。シグナル配列はプレペプチド配列を含み得、場合によっては、プロペプチド配列も含み得る。免疫グロブリン鎖上で見いだされるシグナル配列、たとえばK28プレプロ毒素配列、PHA‐E、FACE、ヒトMCP‐1、ヒト血清アルブミンシグナル配列、ヒトIg重鎖、ヒトIg軽鎖などをはじめとする、多くのそのようなシグナル配列は当該技術分野で公知である。例えば、Hashimoto et. al.Protein Eng 11(2) 75 (1998);およびKobayashi et. al. Therapeutic Apheresis 2(4) 257 (1998)を参照のこと。
配列決定する。
後に、att部位が各親ベクターによって提供される配列から構成されるハイブリッド配列となるように、組換え部位に隣接するDNAセグメントが切り替えられる。組換えは、任意のトポロジーのDNA間で起こり得る。
は、エピトープとぴったり合い、エピトープを認識する特定の形状を有する任意のポリペプチド鎖含有分子構造を包含することが意図され、この場合、1つ以上の非共有的結合相互作用が分子構造とエピトープとの間の複合体を安定化させる。原型抗体分子はイムノグロブリンであり、あらゆる供給源、たとえばヒト、げっ歯類、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタ、イヌ、他の哺乳動物、ニワトリ、他の鳥類など由来の全種類のイムノグロブリン、IgG、IgM、IgA、IgE、IgDなどが「抗体」とみなされる。本発明による出発物質として有用な抗体を産生するための好ましいソースはウサギである。多くの抗体コード配列が記載されている。そして他のものは当該技術分野で周知の方法によって生じさせることができる。それらの例としては、キメラ抗体、ヒト抗体および他の非ヒトほ乳動物抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体(たとえばscFv)、キャメルボディ、ナノボディ、IgNAR(サメ由来の単鎖抗体)、小型モジュラー免疫薬剤(SMIP)、ならびに抗体断片、
たとえばFab、Fab’、F(ab’)2などが挙げられる。Streltsov VA, et al., Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an early-developmental isotype, Protein Sci. 2005 Nov;14(11):2901-9. Epub 2005 Sep 30、 Greenberg AS, et al., A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature. 1995 Mar 9;374(6518):168-73、 Nuttall SD, et al., Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display of protein loop libraries, Mol Immunol. 2001 Aug;38(4):313-26、 Hamers-Casterman C, et al., Naturally occurring antibodies devoid of light chains, Nature. 1993 Jun 3;363(6428):446-8、Gill DS, et al., Biopharmaceutical Drug discovery using novel protein scaffolds, Curr Opin Biotechnol. 2006 Dec; 17(6):653-8. Epub 2006 Oct 19を参照のこと。
の配列またはそれらの相補配列が同じアミノ酸配列をコード化する場合、互いに対応する。コード配列は適切な調節配列と関連して転写され、ポリペプチドに翻訳され得る。ポリアデニル化シグナルおよび転写停止配列は通常、コード配列に対して3’側に位置する。「プロモーター配列」は、細胞中のRNAポリメラーゼに結合することができ、下流(3’方向)コード配列の転写を開始することができるDNA調節領域である。プロモーター配列は、典型的にはコード配列の転写に影響を及ぼす調節分子(例えば、転写因子)の結合のためのさらなる部位を含む。RNAポリメラーゼが細胞中のプロモーター配列と結合し、コード配列をmRNAに転写し、これが次にコード配列によってコード化されるタンパク質に翻訳される場合、コード配列はプロモーター配列の「制御下」にあるか、またはプロモーターに「機能的に連結」される。
本の同一の軽いポリペプチド鎖(「軽鎖」)、および分子量53,000〜70,000の2本の同一の重い鎖(「重鎖」)からなる。4本の鎖は、ジスルフィド結合によって「Y」字型に結合し、ここで、軽鎖が「Y」字型の開口部分から始まる重鎖を囲む。「Y」字型の「枝」部分はFab領域と呼ばれている。「Y」字型の幹部分はFC領域と呼ばれている。アミノ酸配列の配向は、「Y」字型の頂点のN末端から各鎖の底部へと向かう。N末端は、それを惹起する抗原に対する特異性を有する可変領域を有し、約100アミノ酸の長さであり、軽鎖と重鎖との間で若干の変動があり、また抗体ごとに若干変動がある。
2nd Ed., p. 413-436, Holt, Rinehart, Winston (1976))、および他の細胞応答(Andrews, D. W., et al., Clinical Immunobiology, pp 1-18, W. B. Sanders (1980); Kohl,
S., et al., Immunology, 48: 187 (1983))を含む抗体のその後のエフェクター機能を
決定する;一方、可変領域はそれが反応する抗原を決定する。軽鎖は、κ(カッパ)またはλ(ラムダ)のいずれかとして分類される。各重鎖クラスは、カッパまたはラムダ軽鎖のいずれかを用いて調製することができる。軽鎖および重鎖は互いに共有結合し、2本の重鎖の「テール」部分は、ハイブリドーマによるかまたはB細胞によるかのいずれかでイムノグロブリンが産生される場合に、共有ジスルフィド結合によって互いに結合される。
持され、他の鎖からのCDRとともに、抗原結合部位の形成に寄与する。CDR内に、抗体−抗原相互作用でCDRによって使用される重要な接触残基である選択性決定領域(SDR)として記載されているえり抜きのアミノ酸がある(Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005))。
抗体Ab1
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVVVKR(配列番号1)。
TVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS(配列番号3)。
番号1の可変軽鎖領域の相補性決定領域(配列番号5、配列番号6、および配列番号7);および配列番号3の可変重鎖領域の相補性決定領域(配列番号8、配列番号9、および配列番号10)。
るが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するヒト化抗体を包含する:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(配列番号11)。
LGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号14)。
Fab断片は配列番号11の可変軽鎖配列および配列番号13の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、CGRPへの結合特異性を保持したままでの、前記Fab中の配列番号11および/または配列番号13への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
るが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するヒト化抗体を包含する:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR(配列番号21)。
領域(CDR、すなわち超可変領域)に対応する配列番号25、配列番号26、および配列番号27のポリペプチド配列のうちの1つ以上、ならびに/または配列番号23の可変重鎖配列もしくは配列番号24の重鎖配列の相補性決定領域(CDR、すなわち超可変領域)に対応する配列番号28、配列番号29、および配列番号30のポリペプチド配列のうちの1つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のCDR、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列のうちの(全てを含む)1つ以上の組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris)が含まれ
るが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVVVKR(配列番号31)。
るが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するヒト化抗体を包含する:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYD
CTNGDCFVFGGGTKVEIKR(配列番号41)。
リペプチド配列のうちの1つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの1つ以上からなる。
るが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するヒト化抗体を包含する:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR(配列番号51)。
)。
るが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する:QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKR(配列番号61)。
有するキメラ抗体も包含する:QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号64)。
列番号64を含み、あるいはそれらからなり、本明細書に記載される生物学的活性のうちの少なくとも1つを有するAb7である。
るが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するヒト化抗体を包含する:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKR(配列番号71)。
PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号74)。
るが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する:QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVVVKR(配列番号81)。
うちの1つ以上、またはこれらのポリペプチド配列の組合せを含む抗体をさらに企図する。本発明の別の実施形態では、本発明の抗体またはその断片は、上記のCDR、可変重鎖配列および可変軽鎖配列、ならびに重鎖配列および軽鎖配列のうちの(全てを含む)1つ以上の組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
るが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するヒト化抗体を包含する:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(配列番号91)。
のポリペプチド配列からなる。
まれるが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する:QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKR(配列番号101)。
SVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVVVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号102)。
配列番号103の可変重鎖配列または配列番号104の重鎖配列の相補性決定領域(CDR、すなわち超可変領域)に対応する配列番号108、配列番号109、および配列番号110のポリペプチド配列のうちの1つ以上を含む、あるいはそれらのポリペプチド配列のうちの1つ以上からなる。
まれるが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するヒト化抗体を包含する:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR(配列番号111)。
CAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS(配列番号113)。
域;配列番号111の可変軽鎖領域の相補性決定領域(配列番号115、配列番号116、および配列番号117);および配列番号113の可変重鎖領域の相補性決定領域(配列番号118、配列番号119、および配列番号120)。
まれるが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するキメラ抗体を包含する:AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVVVKR(配列番号121)。
PVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号124)。
全てを含む)1つ以上の組合せを含む、あるいはそれらの組合せからなる。
するFab断片(抗原結合断片)を含む、あるいはそれからなる。抗体Ab13に関して、Fab断片は配列番号121の可変軽鎖配列および配列番号123の可変重鎖配列を含む。本発明のこの実施形態は、CGRPへの結合特異性を保持したままでの、前記Fab中の配列番号121および/または配列番号123への付加、欠失およびそれらの変異体をさらに企図する。
まれるが、これに限定されない。
1つの実施形態では、本発明は、CGRPに対する結合特異性を有し、以下に示される配列を含む可変軽鎖配列を有するヒト化抗体を包含する:QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR(配列番号131)。
くはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株における発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris)が含
まれるが、これに限定されない。
つ以上の形態で存在し得る。好ましい実施形態では、本明細書に記載される抗CGRP抗体は、以下に示される配列を含むκ定常軽鎖配列をさらに含む:
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号283)。
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号284)。
細書に組み込まれる。
et al., Exp. Hematol. 20:1028-1035 (1992)も参照のこと。例えば、ポリエチレングリコールは、遊離アミノ基または遊離カルボキシル基などの反応性基によりアミノ酸残基を介して共有結合され得る。反応性基は、活性型ポリエチレングリコール分子が結合され得る基である。遊離アミノ基を有するアミノ酸残基にはリシン残基およびN末端アミノ酸残基が含まれ得る。遊離カルボキシル基を有するアミノ酸残基にはアスパラギン酸残基、グルタミン酸残基およびC末端アミノ酸残基が含まれ得る。スルフヒドリル基もポリエチレングリコール分子の結合のための反応性基として用いることができる。N末端またはリシン基での結合など、アミノ基での結合が治療目的にとって好ましい。
thracin dione)、1‐デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、コルチコステロイド、ミトタン(mytotane)(O,P’‐(DDD))、インターフェロン、およびこれらの細胞傷害剤の混合物が含まれる。
et al, J. Immunol. Meth. 40:219 (1981) 、および Nygren, J., Histochem. and Cytochem. 30:407 (1982) によって記載される方法などは当技術分野において公知である。
なくとも99%以上の配列相同性を企図する。核酸配列間およびアミノ酸配列間で相同性を決定するための方法は、当業者に良く知られている。
別の実施形態では、本発明は、完全ヒトCGRPポリペプチドもしくはその断片上にある、Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13もしくはAb14から選択される抗ヒトCGRP抗体のエピトープと同一の重複性の直鎖状エピトープもしくは立体構造エピトープに特異的に結合する、および/またはその同一の重複性の直鎖状エピトープもしくは立体構造エピトープへの結合について競合する1つ以上の抗ヒトCGRP抗体またはそれらの抗体断片を企図する。好ましい実施形態では、その抗ヒトCGRP抗体またはその断片は、完全ヒトCGRPポリペプチドもしくはその断片上にある、Ab3、Ab6、Ab13もしくはAb14のエピトープと同一の重複性の直鎖状エピトープもしくは立体構造エピトープに特異的に結合する、および/またはその同一の重複性の直鎖状エピトープもしくは立体構造エピトープへの結合について競合する。
て提供される。
、前記のヒトFRが、ヒト生殖系列抗体配列のライブラリーに含まれる他のヒト生殖系列抗体配列と比べて、対応するウサギ重鎖可変領域または軽鎖可変領域に対する高レベルの相同性に基づいてそのライブラリーから選択されたヒト可変重鎖抗体配列および可変軽鎖抗体配列より得られたものである、抗ヒトCGRP抗体をさらに企図する。
、酵母好適性コドンまたはヒト好適性コドンを含む、あるいはそれらからなるものを包含する1つ以上の核酸配列も企図する。本発明は、前記核酸配列を含むベクター(プラスミドベクターまたは組換えウイルスベクターを含む)も企図する。本発明は、上に示されている抗体のうちの少なくとも1つを発現する、哺乳類細胞、酵母細胞、細菌細胞および昆虫細胞を包含する宿主細胞または組換え宿主細胞も企図する。好ましい実施形態では、その宿主細胞は酵母細胞である。さらに好ましい実施形態では、その酵母細胞は二倍体酵母細胞である。より好ましい実施形態では、その酵母細胞はピキア酵母である。
抗体Ab1
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号1の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(配列番号141)。
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号142)。
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATG
ATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号143)。
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号144)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab1の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab1などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb1ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris
)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号11の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAG
CCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(配列番号151)。
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号152)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号153)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTC
CCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号154)。
配列番号13の重鎖可変配列または配列番号14の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド(配列番号158、配列番号159、および配列番号160)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab2の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab2などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb2ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris
)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号21の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(配列番号161)。
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTC
TTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号162)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号163)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCA
AAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号164)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab3の酵素(例
えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab3などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb3ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris
)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号31の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(配列番号171)。
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号172)。
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATG
GTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号173)。
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号174)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab4の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab4などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb4ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris
)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号41の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCA
CTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(配列番号181)。
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号182)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号183)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATT
TCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号184)。
列番号41の軽鎖可変配列または配列番号42の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド(配列番号185、配列番号186、および配列番号187);および配列番号43の重鎖可変配列または配列番号44の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド(配列番号188、配列番号189、および配列番号190)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab5の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab5などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb5ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris
)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号51の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(配列番号191)。
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATG
ATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号192)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号193)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTG
GCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号194)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab6の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab6などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb6ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris
)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号61の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(配列番号201)。
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号202)。
CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAAT
CGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC(配列番号203)。
CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号204)。
うちの1つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの1つ以上からなる。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab7の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab7などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb7ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris
)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号71の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAG
TGTTTACAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(配列番号211)。
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTACAATTACAACTACCTTGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号212)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCGTTGGTATCAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号213)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCGTTGGTATCAATGGTCGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATT
CACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号214)。
ポリヌクレオチド;配列番号73の重鎖可変配列をコードする配列番号213のポリヌクレオチド;配列番号74の重鎖配列をコードする配列番号214のポリヌクレオチド;配列番号71の軽鎖可変配列または配列番号72の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド(配列番号215、配列番号216、および配列番号217);および配列番号73の重鎖可変配列または配列番号74の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド(配列番号218、配列番号219、および配列番号220)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab8の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab8などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb8ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris
)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号81の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(配列番号221)。
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAGAGGCAGTGG
ATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号222)。
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号223)。
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCCGCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAG
ACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号224)。
における発現のために発現ベクターに組み込まれているこれらのポリヌクレオチドを企図する。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris)が含まれるが、
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab9の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab9などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb9ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris
)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号91の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(配列番号231)。
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号232)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号233)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号234)。
の相補性決定領域(CDR、すなわち超可変領域)をコードするポリヌクレオチドに対応する配列番号235、配列番号236、および配列番号237のポリヌクレオチド配列のうちの1つ以上を含む、あるいはそれらのポリヌクレオチド配列のうちの1つ以上からなる。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab10の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab10などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb10ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号101の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(配列番号241)。
CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号242)。
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号243)。
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCA
GGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号244)。
くを包含する、あるいはそれらからなる:配列番号101の軽鎖可変配列をコードする配列番号241のポリヌクレオチド;配列番号102の軽鎖配列をコードする配列番号242のポリヌクレオチド;配列番号103の重鎖可変配列をコードする配列番号243のポリヌクレオチド;配列番号104の重鎖配列をコードする配列番号244のポリヌクレオチド;配列番号101の軽鎖可変配列または配列番号102の軽鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド(配列番号245、配列番号246、および配列番号247);および配列番号103の重鎖可変配列または配列番号104の重鎖配列の相補性決定領域をコードするポリヌクレオチド(配列番号248、配列番号249、および配列番号250)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab11の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab11などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb11ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号111の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTACTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(配列番号251)。
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAG
TGTTTACTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号252)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号253)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAA
CCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号254)。
チドを含む、あるいはそれらのポリヌクレオチドからなる。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab12の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab12などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb12ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号121の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT(配列番号261)。
GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACTGGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCTCACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAGAAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号262)。
CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTACAATGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号263)。
CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGACACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTACAATGGTGATGGCAGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTATTGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGT
AAATGA(配列番号264)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab13の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab13などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb13ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris)が含まれるが、これに限定されない。
本発明は、CGRPに対する結合特異性を有する抗体ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドをさらに対象とする。本発明の1つの実施形態では、本発明のポリヌクレオチドは、配列番号131の可変軽鎖ポリペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGT(配列番号271)。
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG(配列番号272)。
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC(配列番号273)。
リペプチド配列をコードする次のポリヌクレオチド配列を含む、あるいはそのポリヌクレオチド配列からなる:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGTATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA(配列番号274)。
これに限定されない。本明細書において(下に)記載される本発明の1つの実施形態では、Fab断片は、適切な宿主での全長ポリヌクレオチドの発現の後に、Ab14の酵素(例えば、パパイン)消化により作製され得る。本発明の別の実施形態では、Ab14などの抗CGRP抗体またはそのFab断片は、CHO細胞、NSO細胞もしくはHEK293細胞などの哺乳類細胞、真菌系、昆虫系、または微生物系、例えば、酵母細胞(例えば、二倍体ピキア属などの二倍体酵母)および他の酵母株におけるAb14ポリヌクレオチドの発現により作製され得る。適切なピキア属の種にはピキア・パストリス(Pichia pastoris)が含まれるが、これに限定されない。
び配列番号13、配列番号21および配列番号23、配列番号31および配列番号33、配列番号41および配列番号43、配列番号51および配列番号53、配列番号61および配列番号63、配列番号71および配列番号73、配列番号81および配列番号83、配列番号91および配列番号93、配列番号101および配列番号103、配列番号111および配列番号113、配列番号121および配列番号123、または配列番号131および配列番号133に含まれるポリペプチドをコードする配列を含む1つ以上の異種性ポリヌクレオチドを対象とする。
1つの実施形態では、本発明は、少なくとも1つのCGRP抗原特異的細胞の単離に使用することができる抗原特異的B細胞のクローン集団の調製および単離を企図しており、そのCGRP抗原特異的細胞はCGRPに対するモノクローナル抗体またはそのような抗体に対応する核酸配列の作製に使用され得、そのモノクローナル抗体は所望のCGRP抗原に特異的である。抗原特異的B細胞の前記のクローン集団を調製および単離する方法は、例えば、Carvalho‐Jensenらの米国特許出願公開第2007/0269868号に教示されており、その開示は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。抗原特異的B細胞の前記のクローン集団を調製および単離する方法は本明細書中の実施例においても教示される。大きさまたは密度によって細胞集団を「濃縮する」方法は当技術分野において公知である。例えば、米国特許第5,627,052号を参照のこと。これらのステップは抗原特異性による細胞集団の濃縮に加えて使用され得る。
別の実施形態では、本発明は、抗体の重鎖および軽鎖をヒト化するための方法を企図する。抗CGRP抗体に適用することができる、抗体の重鎖および軽鎖をヒト化するための方法は、例えば、Olsonらの米国特許出願公開第2009/0022659号およびGarcia‐Martinezらの米国特許第7,935,340号に教示されており、それらのそれぞれの開示は、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
別の実施形態では、本発明は、抗CGRP抗体およびその断片を生産する方法を企図する。接合可能酵母の倍数体、好ましくは二倍体または四倍体から分泌される抗CGRP抗
体およびその断片の生産方法は、例えばOlsonらの米国特許出願公開第2009/002
2659号、Garcia-Martinezらの米国特許第7,935,340号で教示されている。
これらの各々の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
16,567号;Morrison et al., P.N.A.S. USA, 81:8651-55 (1984); Neuberger, M.S. et al., Nature, 314:268-270 (1985); Boulianne, G.L. et al., Nature, 312:643-46
(1984)を参照のこと。これらの各々の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組
み込まれる)。
762号、および第6,180,370;Winterらの米国特許第5,225,539号および第6,548,640号;Carterらの米国特許第6,054,297号、第6,407,213号、および第6,639,055号;Adairらの米国特許第6,632,92
7号;Jones, P.T. et al, Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann, L., et al, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen, M, et al, Science, 239:1534-36 (1988)を参照の
こと。これらの各々の開示内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる)。
、および前記の宿主細胞から抗体ポリペプチドを生産するための培養方法のいずれも、従来の手法を含む。抗体の生産に使用する細胞株は、好ましくは哺乳動物の細胞株であるが、他の適切な細胞株、例えば大腸菌由来菌株などの細菌細胞株や酵母細胞株も、代わりに使用してよい。
。参照によりこの文献の全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、CGRP関連の疾患または障害の症状を示す患者におけるCGRP関連の疾患または障害の特定を支援するように設計されたスクリーニングアッセイも含む。
る細胞の存在を検出するものであり、診断有効量の診断組成物を投与することを含む。上記のインビボの画像化は、例えば腫瘍や転移を発現するCGRPを検出または画像化する上で有用であり、効果的な癌治療プロトコルを設計するための計画レジメンの1つとして有用であり得る。この治療プロトコルには、抗CGRP抗体またはその断片に加えて、例えば放射線、化学療法、サイトカイン療法、遺伝子治療、抗体治療のうちの1つ以上が含まれ得る。
本発明の別の実施形態では、本明細書に記載の抗CGRP抗体またはその断片は、CGRP関連の疾患および障害の症状の改善もしくは軽減、またはCGRP関連の疾患および障害の治療もしくは予防に有用である。本明細書に記載の抗CGRP抗体またはその断片および組み合わせの治療有効量を、CGRP関連の疾患および障害の治療を必要とする患者に対して、以下でより詳しく述べる医薬組成物の形で投与することもできる。
、腸閉塞に関連する外科手術、憩室炎、腹膜炎、心膜炎、肝炎、虫垂炎、大腸炎、胆嚢炎、子宮内膜症、慢性膵炎や急性膵炎に関連する疼痛もしくは内臓痛、心筋梗塞、腎臓痛、胸膜痛、前立腺炎、骨盤痛、器官外傷、慢性侵害受容性疼痛、慢性神経因性疼痛、慢性炎症性疼痛、線維筋痛症、突出痛、および持続痛、ならびに、好ましくは腺組織における腺癌、器官の胚組織における芽細胞腫、上皮組織におけるカルシノーマ、血液細胞を形成する組織における白血病、リンパ組織におけるリンパ腫、骨髄における骨髄腫、結合組織もしくは支持組織における肉腫、副腎癌、エイズ関連リンパ腫、貧血、膀胱癌、骨癌、脳癌、乳癌、カルチノイド腫瘍、子宮頚部癌、化学療法、結腸癌、血球減少症、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、頭部癌、頸部癌、肝胆道癌、腎臓癌、白血病、肝臓癌、肺癌、リンパ腫、ホジキン病、リンパ腫、非ホジキン病、神経系腫瘍、口腔癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、直腸癌、皮膚癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、尿道癌、骨癌、結合組織の肉腫癌、骨組織の癌、造血細胞の癌、骨髄の癌、多発性骨髄腫、白血病、原発性もしくは続発性骨癌、骨に転移する腫瘍、神経および中空臓器に浸潤する腫瘍、神経構造近くの腫瘍のうちの1つ以上から選択される悪性腫瘍もしくは癌から生じる癌性疼痛。さらに好ましくは、癌性疼痛は内臓痛を含み、好ましくは、膵癌や腹部への転移から生じる内臓痛を含む。さらに好ましくは、癌性疼痛は体性痛を含み、好ましくは、骨癌、骨における転移、手術後の疼痛、結合組織の肉腫癌、骨組織の癌、骨髄の造血細胞の癌、多発性骨髄腫、白血病、原発性もしくは続発性骨癌の1つ以上に起因する体性痛を含む。
J Pharmacol (131):875; Menard et al., 1996 J Neurosci (16):2342; Wang et al., 2009 FASEB J (23):2576; Wang et al., 2010 Pain (151):194)。
‐メトキシ‐2ナフチル酢酸(6‐MNA)、ロフェコキシブ、MK‐966、ナブメトン(6‐MNAのプロドラッグ)、ニメスリド、NS‐398、SC‐5766、SC‐58215、T‐614、またはこれらの組み合わせが挙げられる。
特に骨癌性疼痛)、骨関節炎痛もしくはリウマチ性関節炎痛、腰痛、術後の切開疼痛、骨折疼痛、骨粗鬆症性骨折疼痛、骨粗鬆症、痛風性関節痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、鎌状赤血球発症に伴う疼痛、偏頭痛、ならびに他の神経因性疼痛および/または侵害受容性疼痛を治療する。したがって、本発明は、CGRP活性またはCGRPアップレギュレーションに関連する任意の疾患または障害(上記の代表的な疾患、障害、および状態を含む)を、本発明の抗体および抗体断片を用いて治療、予防、および/または改善する方法を含む。本発明の治療方法は、本明細書に開示する抗CGRP抗体を含む任意の製剤を、単独で、または別の活性薬剤と組み合わせて対象に投与することを含む。
本発明の1つの実施形態では、本明細書に記載の抗CGRP抗体またはそのCGRP結合断片、あるいはこれらの抗体または抗体断片の組み合わせを、対象レシピエントの体重1kgあたり約0.1〜100.0mgの濃度で対象に投与する。本発明の好適な1つの実施形態では、本明細書に記載の抗CGRP抗体またはそのCGRP結合断片、あるいはこれらの抗体または抗体断片の組み合わせを、対象レシピエントの体重1kgあたり約0.4mgの濃度で対象に投与する。本発明の好適な1つの実施形態では、本明細書に記載の抗CGRP抗体またはそのCGRP結合断片、あるいはこれらの抗体または抗体断片の組み合わせを、26週間に1回またはそれより低い頻度、例えば16週間に1回またはそれより低い頻度、8週間に1回またはそれより低い頻度、4週間に1回またはそれより低い頻度、2週間に1回またはそれより低い頻度、1週間に1回またはそれより低い頻度、または1日に1回またはそれより低い頻度で、対象レシピエントに投与する。
38]に記載の代表的な投与濃度より高いか低い場合があることを理解すべきである。
する。
ザプロパゾン、ベノリラート、ベノキサプロフェン、ブロムフェナク、カルプロフェン、セレコキシブ、サリチル酸コリンマグネシウム、クロフェゾン、COX‐2阻害剤、デクスイブプロフェン、デクスケトプロフェン、ジクロフェナク、ジフルニサル、ドロキシカム、エテンザミド、エトドラク、エトリコキシブ、ファイスルアミン(Faislamine)、フェナム酸類、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルフェナム酸、フルノキサプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、イブプロキサム、インドメタシン、インドプロフェン、ケブゾン、ケトプロフェン、ケトロラク、ロルノキシカム、ロキソプロフェン、ルミラコキシブ、サリチル酸マグネシウム、メクロフェナム酸、メフェナム酸、メロキシカム、メタミゾール、サリチル酸メチル、モフェブタゾン、ナブメトン、ナプロキセン、N‐アリールアントラニル酸類、神経成長因子(NGF)、オキサメタシン、オキサプロジン、オキシカム類、オキシフェンブタゾン、パレコキシブ、フェナゾン、フェニルブタゾン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、ピルプロフェン、プロフェン類、プログルメタシン、ピラゾリジン誘導体、ロフェコキシブ、サリチルサリチル酸、サリチルアミド、サリチル酸類、サブスタンスP、スルフィンピラゾン、スリンダク、スプロフェン、テノキシカム、チアプロフェン酸、トルフェナム酸、トルメチン、およびバルデコキシブが含まれるが、これらに限定されない。
ニラミン、クレマスチン、CS560、シプロヘプタジン、デスロラタジン、デクスクロルフェニラミン、エバスチン、エピナスチン、フェキソフェナジン、HSR609、ヒドロキシジン、レボカバスチン、ロラチジン、メトスコポラミン、ミゾラスチン、ノルアステミゾール、フェニンダミン、プロメタジン、ピリラミン、テルフェナジン、およびトラニラストが含まれるが、これらに限定されない。
、アンサマイシン類、アルスフェナミン、アジスロマイシン、アズロシリン、アズトレオナム、バシトラシン、カルバセフェム、カルバペネム類、カルベニシリン、セファクロール、セファドロキシル、セファレキシン、セファロチン(Cefalothi)、セファロチン(Cefalotin)、セファマンドール、セファゾリン、セフジニル、セフジトレン、セフェピム、セフィキシム、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフォキシチン、セフポドキシム、セフプロジル、セフタジジム、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトビプロール、セフトリアキソン、セフロキシム、セファロスポリン類、クロラムフェニコール、シラスタチン、シプロフロキサシン、クラリスロマイシン、クリンダマイシン、クロキサシリン、コリスチン、コトリモキサゾール、ダルホプリスチン、デメクロサイクリン、ジクロキサシリン、ジリスロマイシン、ドリペネム、ドキシサイクリン、エノキサシン、エルタペネム、エリスロマイシン、エタンブトール、フルクロキサシリン、ホスホマイシン、フラゾリドン、フシジン酸、ガチフロキサシン、ゲルダナマイシン、ゲンタマイシン、グリコペプチド類、ハービマイシン、イミペネム、イソニアジド、カナマイシン、レボフロキサシン、リンコマイシン、リネゾリド、ロメフロキサシン、ロラカルベフ、マクロライド類、マフェニド、メロペネム、メチシリン、メトロニダゾール、メズロシリン、ミノサイクリン、モノバクタム類、モキシフロキサシン、ムピロシン、ナフシリン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ニトロフラントイン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキサシリン、オキシテトラサイクリン、パロモマイシン、ペニシリン、ペニシリン類、ピペラシリン、プラテンシマイシン、ポリミキシンB、ポリペプチド類、プロントジル、ピラジナミド、キノロン類、キヌプリスチン、リファンピシン、リファンピン、ロキシスロマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、スルファセタミド、スルファメチゾール、スルファニルイミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、スルホンアミド類、テイコプラニン、テリスロマイシン、テトラサイクリン、テトラサイクリン類、チカルシリン、チニダゾール、トブラマイシン、トリメトプリム、トリメトプリムスルファメトキサゾール、トロレアンドマイシン、トロバフロキサシン、およびバンコマイシンが含まれるが、これらに限定されない。
Sciences, 第19版, Grennaro, A.編, 1995に記載されている(この文献は参照により
組み込まれる)。
Methods and Humanized Rabbit Antibodies」の国際公開第2008/144757号に対応)に開示されており、その開示内容の全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載の抗体選択プロトコルを使用することにより、広範な抗体パネルを作製することができる。
ウサギをヒトCGRPα(アメリカンペプタイド社、カリフォルニア州サニーベール、およびベイケム(Bachem)社、カリフォルニア州トランス)で免疫した。免疫化は初回の注射と後続の2回のブースト(追加免疫)からなり、初回の注射は、完全フロイントアジュバント(CFA)(シグマ社)中100μgのKLHと混合した100μgの抗原を皮下(sc)注射し、後続の2回のブーストは2週間の間隔を空け、それぞれ、不完全フロイントアジュバント(IFA)(シグマ社)中50μgと混合した50μgの抗原を含有していた。55日目に動物の血液を抜き取り、ELISA(抗原認識)、およびSK‐N‐MC中でCGRPに誘起されるcAMP増加の阻害により、血清力価を測定した。
ヒトCGRPαと結合する抗体を特定し特性評価するため、抗体を含有する溶液をELISAで試験した。手短に述べると、ニュートラアビジンがコーティングされたプレート(サーモサイエンティフィック社)に、室温で約1時間、または4℃で一晩かけて、ELISA緩衝液(PBS中0.5%の魚皮ゼラチン、pH7.3)中に希釈されたN末端ビオチン化ヒトCGRPα(1ウェルあたり50μL、1μg/mL)をコーティングした。次に、室温でプレートをELISA緩衝液でさらに1時間ブロッキングしてから、洗浄緩衝液(PBS、0.05%ツイーン20)で洗浄した。ELISA緩衝液を用いて、試験対象の血清試料を段階希釈した。希釈した血清試料50μLをウェルに移し、室温で1
時間インキュベートした。このインキュベートの後、プレートを洗浄緩衝液で洗浄した。現像のため、抗ウサギ特異的Fc‐HARP(ELISA緩衝液で1:5000に希釈)をウェルに添加し、室温で45分間インキュベートした。洗浄液を用いた洗浄ステップを3回行った後、TMB基質を使用して室温で2分間プレートを現像し、0.5MのHClを使用して反応物をクエンチした。ウェルの吸光度を450nmで読み取った。
機能活性を有する抗体を特定し特性評価するため、電気化学発光(メソスケールディスカバリー、MSD社)を使用してCGRP誘発性cAMPレベル上昇の阻害アッセイを実施した。手短に述べると、96ウェルの丸底ポリスチレンプレート(コースター)において、試験対象の抗体調製物をMSDアッセイ緩衝液(Hepes、MgCl2、pH7.3、1mg/mLブロッカーA、メソスケールディスカバリー)で段階希釈した。このプレートに、MSDアッセイ緩衝液で希釈したヒトCGRPαを添加し(最終濃度10ng/mL)、37℃で1時間インキュベートした。アッセイキット製造者の推奨に従って、適切な対照を使用した。EDTA溶液(PBS中5mM)を用いてヒト神経上皮腫細胞(SK‐N‐MC、ATCC)を剥離し、増殖培地(MEM、10%FBS、抗生剤)を用いて遠心分離により洗浄した。細胞数をアッセイ緩衝液1mLあたり200万に調整し、IBMX(3‐イソブチル‐1メチルキサンチン、シグマ)を添加して、細胞をcAMPアッセイプレートにセットする直前の最終濃度を0.2mMにした。抗体ヒトCGRPα溶液を1時間インキュベートした後、細胞を含有する溶液20μLをcAMPアッセイプレートに移した。すべての試験試料を、適切な対照を用いて2回繰り返し試験した。10μLの細胞をウェルに添加し、プレートを室温で30分間、振盪しながらインキュベートした。細胞をCGRP溶液と共にインキュベートする間に、溶解緩衝液(MSD)中1:200のTAG標識cAMP溶液を作製することにより停止液を調製した。細胞‐CGRPインキュベーションを停止するため、20μLの停止液を細胞に添加し、プレートを室温で1時間、振盪しながらインキュベートした。読み取り緩衝液(MSD)を水で4倍に希釈し、100μLをプレート上のすべてのウェルに添加した。次に、Sector Imager 2400(MSD)を用いてプレートを読み取り、Prismソフトウェアを用いてデータを当てはめ、IC50値を決定した。
許容できる力価が確立した後、ウサギを殺処分した。脾臓、リンパ節、および全血を回収し、以下の通りに処理した。
ーレーン)の上に35mlの全血混合物を注意深く層状に重ねて45mlの円錐管(コーニング)に入れ、室温で30分間、休止なしに2500rpmで遠心分離した。遠心分離の後、ガラス製パスツールピペット(VWR)を使ってPBMC層を慎重に取り除き、合わせて、清浄な50mlバイアルに注いだ。室温で10分間、1500rpmで遠心分離することにより、上記の改変培地と共に細胞を2回洗浄し、トリパンブルー染色により細胞密度を測定した。最後の洗浄の後、適量の10%DMSO/FBS培地中に細胞を再懸
濁させ、上記のように凍結させた。
B細胞培養を準備する日に、PBMC、脾細胞、またはリンパ節のバイアルを解凍して使用できるようにした。LN2タンクからバイアルを取り出し、37℃の水浴中に入れて解凍させた。バイアルの内容物を15mlの円錐遠心分離管(コーニング)に移し、10mlの上記改変RPMIをこの管に徐々に添加した。細胞を2K RPMで5分間遠心分
離して、上清を廃棄した。細胞を10mlの新しい培地中で再懸濁した。トリパンブルーにより細胞密度および生存率を測定した。
細胞を、次のようにビオチン化ヒトCGRPαと予め混合した。細胞を再度洗浄し、1E07細胞/80μL培養液で再懸濁した。ビオチン化ヒトCGRPαを、5μg/mLの最終濃度で細胞懸濁液に添加し、4℃で30分間インキュベートした。結合していないビオチン化ヒトCGRPαを、10mlのPBF[Ca/Mgを含まないPBS(ハイクロン)、2mMのエチレンジアミン四酢酸(EDTA)、0.5%ウシ血清アルブミン(BSA)(シグマ‐ビオチンフリー)]で2回洗浄して除去した。2回目の洗浄の後、細胞を1E07細胞/80μlのPBFで再懸濁し、20μlのMACS(登録商標)ストレプトアビジンビーズ(ミルテニーバイオテク、カリフォルニア州オーバーン)/10E7細胞を、細胞懸濁液に添加した。細胞およびビーズを4℃で15分間インキュベートし、10E7細胞あたり2mlのPBFで1回洗浄した。
ビオチン化ヒトCGRPαを、次のように予めストレプトアビジンビーズに添加した。75μlのストレプトアビジンビーズ(ミルテニーバイオテク、カリフォルニア州オーバーン)を、N末端をビオチン化したhuCGRPαと混合し(最終濃度10ug/ml)、300μlのPBFと混合した。この混合物を4℃で30分間インキュベートし、MACS(登録商標)分離カラム(ミルテニーバイオテク)を使用して未結合のビオチン化ヒトCGRPαを除去し、1mlのすすぎ液を用いて未結合物質を除去した。次に物質を押し出し、この物質を使用して、上記から得た細胞を1E7細胞あたり100μl中で再懸濁し、次いで混合物を4℃で30分間インキュベートし、10mlのPBFで1回洗浄した。
抗ヒトCGRPα抗体を生産しているウェルを特定するため、抗原認識(ELISA)による血清試料の力価測定で記述したプロトコルに下記の変更を加えたプロトコルを使用した。手短に述べると、ニュートラアビジンがコーティングされたプレートに、N末端、C末端がそれぞれビオチン化されたヒトCGRPαの混合物をコーティングした(1ウェルあたり50μL、各1μg/mL)。B細胞上清試料(50μL)を、事前に希釈せずに試験した。
B細胞上清に含まれる機能活性を測定するため、血清試料の機能的力価の測定で記述した類似の手順に下記の修正を加えた手順を使用した。手短に述べると、希釈したポリクローナル血清試料の代わりに、B細胞上清(20μL)を使用した。
対象のウェルの入ったプレートを−70℃から取り出し、1ウェルあたり200μlの培養液(10%完全RPMI、55μM BME)の5回の洗浄により各ウェルから細胞
を回収した。回収した細胞を遠心分離によりペレット状にして、上清を慎重に除去した。ペレット状にした細胞を、100μlの培養液中に再懸濁した。抗体を発現する細胞を特定するため、ストレプトアビジンがコーティングされた磁気ビーズ(M280ダイナビーズ、インビトロジェン)に、N末端とC末端がビオチン化されたヒトCGRPαの組み合わせをコーティングした。個々にビオチン化されたヒトCGRPαのロットを、段階希釈により最適化した。次に、約4×10E7のコーティング済みビーズの入った100μlと、再懸濁後の細胞とを混合した。この混合物に、培地中に1:100で希釈した15μlのヤギ抗ウサギH&L IgG‐FITC(ジャクソンイムノリサーチ)を添加した。
インキュベートした。
RT‐PCRをベースにした方法の組み合わせにより、単離した単一B細胞から抗体配列を復元した。制限酵素を含むプライマーを、ウサギ免疫グロブリン配列などの標的免疫グロブリン遺伝子の保存領域と定常領域(重鎖と軽鎖)においてアニールするように設計し、2段階のネステッドPCR復元を用いて抗体配列を増幅した。各ウェルから得た単位複製配列の復元とサイズ完全性を分析した。次に、得られた断片をAluIで消化して、配列クローン性の指紋(明確な特徴)を得る。複数の同一配列が、それぞれの電気泳動分析において共通の断片化パターンを示した。次に、PCRプライマー内に含まれる制限酵素部位を用いて、元の重鎖と軽鎖の単位複製配列断片を消化し、クローニングして発現ベクターにした。サブクローニングされたDNA断片を含むベクターを増幅し精製した。発現の前に、サブクローニングされた重鎖と軽鎖の配列を確認した。
特異的B細胞から回収した抗体の抗原特異性と機能特性を判定するため、所望される対の重鎖と軽鎖の配列の発現を誘発するベクターを、HEK‐293細胞に形質移入した。
組換え発現抗体のヒトCGRPαとの結合能力を特性評価するため、抗体を含有する溶液をELISAで試験した。どのインキュベーションも室温で行った。手短に述べると、Immulon IVプレート(サーモサイエンティフィック)に、CGRPαを含有す
る溶液(PBS中1ut/mL)を2時間かけてコーティングした。次に、CGRPαをコーティングしたプレートを洗浄緩衝液(PBS、0.05%ツイーン20)で3回洗浄した。次に、ブロッキング溶液(PBS、0.5%魚皮ゼラチン、0.05%ツイーン20)を用いてプレートを約1時間ブロッキングした。次に、ブロッキング溶液を除去してから、プレートを約1時間、希釈系列の抗体と共にインキュベートした。このインキュベーションの終わりにプレートを洗浄緩衝液で3回洗浄し、さらに、二次抗体(ペルオキシダーゼ結合Affinipure F(ab’)2断片ヤギ抗ヒトIgG、Fc断片特異
的(ジャクソンイムノリサーチ))を含有する溶液と共に約45分間インキュベートして、3回洗浄した。この時点で基質溶液(TMBペルオキシダーゼ基質、BioFx)を加え、暗所で3〜5分間インキュベートした。HCl含有溶液(0.5M)を加えて反応を停止させ、プレートリーダーにおいて450nmでプレートを読み取った。
CGRPα媒介性のcAMP細胞レベル上昇を阻害する組換え発現抗体の能力を特性評価するため、電気化学発光アッセイキット(メソスケールディスカバリー、MSD)を使用した。手短に述べると、96ウェルの丸底ポリスチレンプレート(コースター)において、試験対象の抗体調製物をMSDアッセイ緩衝液(Hepes、MgCl2、pH7.3、1mg/mLブロッカーA、メソスケールディスカバリー)で段階希釈した。このプレートに、MSDアッセイ緩衝液で希釈したヒトCGRPαを添加し(最終濃度25ng/mL)、37℃で1時間インキュベートした。アッセイキット製造者の推奨に従って、適切な対照を使用した。EDTA溶液(5mM)を用いてヒト神経上皮腫細胞(SK‐N‐MC、ATCC)を剥離し、増殖培地(MEM、10%FBS、抗生剤)を用いて遠心分離により洗浄した。細胞数をアッセイ緩衝液1mLあたり200万に調整し、IBMX(3‐イソブチル‐1メチルキサンチン、50mM シグマ)を添加して、細胞をcAM
Pアッセイプレートにセットする直前の最終濃度を0.2mMにした。抗体ヒトCGRPα溶液を1時間インキュベートした後、細胞を含有する溶液20μlをcAMPアッセイプレートに移した。すべての試験試料を、適切な対照を用いて2回繰り返し試験した。細胞10μlをウェルに添加し、プレートを30分間、振盪しながらインキュベートした。細胞をCGRP溶液と共にインキュベートする間に、溶解緩衝液(MSD)中1:200のTAG標識cAMP溶液を作製することにより停止液を調製した。細胞‐CGRPインキュベーションを停止するため、停止液20μlを細胞に添加し、プレートを1時間、振盪しながらインキュベートした。読み取り緩衝液(MSD)を水で4倍に希釈し、100μLをプレート上のすべてのウェルに添加した。次に、Sector Imager 2400(MSD)を用いてプレートを読み取り、Prismソフトウェアを用いてデータを当てはめ、IC50値を決定した。
RP(最終濃度5ng/mL)およびラットL6細胞株(ATCC)を使用して、ラットCGRP媒介性cAMP生成に対する組換え抗体の認識および阻害を評価した。
固定化パパイン(サーモ/ピアス)を使用して、製造者の指示に従ってパパイン分解を行った。手短に述べると、精製抗体をシステイン/HCl含有緩衝液に入れて、穏やかに揺らしながら、固定化パパインと共に37℃でインキュベートした。一定分量を採取しSDS‐PAGEで重鎖の切断を分析することにより、分解をモニタリングした。反応を停止させるため、固定化パパインを遠心分離で除去し、50mMトリス pH7.5で洗浄
し、濾過した。MabSelectSure(GE)カラムを用いて、未分解の全長抗体およびFc断片を除去した。
重鎖と軽鎖を発現するピキア・パストリス発現ベクターの構築
ヒト化軽鎖および重鎖の断片は、商業的に合成されpGAP発現ベクターにサブクローニングされている。pGAP発現ベクターでは、GAPプロモーターを用いて免疫グロブリン鎖の発現を誘発し、ヒト血清アルブミン(HSA)リーダー配列を用いて搬出する。加えて、このベクターは、細菌の複製起点や、P.パストリスにおいて抗生物質G418への耐性を与えるカナマイシン耐性遺伝子のコピーなどの一般の要素を含む。G418は、ゲノムに組み込まれた所望の発現ベクターを含む細胞株を選択する手段となる。
一倍体P.パストリス株の形質転換およびP.パストリス性周期の操作に使用したすべての方法は、Pichia Protocols (Methods in Molecular Biology Higgings, DR, and Cregg, JM, Eds. 1998. Humana Press, Totowa, NJ)に記載の通りである。形質転換の前に、各ベクターをGAPプロモーター配列内で直線化して、P.パストリスゲノムのGAPプロモーター座へのベクターの組み込みを導いた。エレクトロポレーションを用いて一倍体株を形質移入し、有効な形質転換体をYPDS(酵母エキス、ソルビトール含有ペプトンデキストロース)G418寒天プレート上で選択した。サザンブロット分析により、一倍体株の重鎖遺伝子と軽鎖遺伝子のコピー数を測定した。次に、一倍体株を接合させ、アミノ酸マーカー(すなわちLysとMet)の不存在下での増殖能力に関して選択した。次に、得られた二倍体クローンを最終サザンブロットに供し、重鎖遺伝子と軽鎖遺伝子のコピー数を確認した。関心の抗体を発現するクローンを、バイオレイヤー干渉法プロテインAバイオセンサーを使用して選択し、発現をモニタリングした(Octet、ForteBio)。
全長抗体を発現するための3つのピキア株を作製した。全長抗体を発現するすべての株について、一倍体株を作製してから接合した。ある1つの一倍体株が全長軽鎖配列を発現し、別の一倍体株が全長重鎖配列を発現した。各二倍体株を用いて研究細胞バンクを作製し、バイオリアクター内での発現に用いた。
リン酸カリウムで構成される培地を使用して、接種原を拡大させた。発酵槽用の接種原を作製するため、30℃で約24時間、300rpmの振盪インキュベーター内で細胞バン
クを拡大させた。次に、10%接種原を、1Lの無菌増殖培養液が入った作業体積2.5LのLabfors容器に加えた。増殖培養液は以下の栄養素で構成した:硫酸カリウム18.2g/L、第一リン酸アンモニウム36.4g/L、リン酸水素二カリウム12.8g/L、硫酸マグネシウム七水和物3.72g/L、クエン酸ナトリウム二水和物10g/L、グリセロール40g/L、酵母エキス30g/L、PTM1微量金属4.35mL/L、および消泡剤204 1.67mL/L。PTM1微量金属溶液は、以下の成分で構成した:硫酸銅五水和物6g/L、ヨウ化ナトリウム0.08g/L、硫酸マンガン水和物3g/L、モリブデン酸ナトリウム二水和物0.2g/L、ホウ酸0.02g/L、塩化コバルト0.5g/L、塩化亜鉛20g/L、硫酸第一鉄七水和物65g/L、ビオチン0.2g/L、および硫酸5mL/L。
抗体をヒト化する方法は、発行済み米国特許第7935340号で以前に説明されている(その開示内容の全体が、参照により本明細書に組み込まれる)。場合によっては、活性を維持するために追加のウサギフレームワーク残基が必要かどうかの決定が必要とされる。場合によっては、親和性または活性の損失を最小にするため、ヒト化抗体は依然として、いくつか重要なウサギフレームワーク残基を保持する必要がある。このような場合、所望の活性を得るには、単一または複数のフレームワークアミノ酸を、ヒト生殖系列配列から元のウサギアミノ酸に戻す必要がある。このような変更は実験により決定され、親和性または活性を維持するのに必要なウサギ残基が特定される。これが、可変の重鎖および軽鎖ヒト化アミノ酸配列の末端となる。
CGRPがその細胞受容体に結合するのを阻害する組換え発現抗体の能力を特性評価するため、以前に説明されている通りに放射性リガンド結合アッセイを実施した[Elshourbagy et al, Endocrinology 139:1678 (1998); Zimmerman et al, Peptides, 16:421 (1995)]。組換えヒトCGRP受容体、カルシトニン受容体様受容体、およびRAMP1の膜標本(Chemiscreen、ミリポア)を使用した。抗体希釈液を、125Iで放射標識されたヒトCGRPα(0.03nM)と共に室温で30分間プレインキュベートした。0.1μMのヒトCGRPαの存在下で、非特異的結合を見積もった。膜を濾過し、洗浄した。次に、フィルターをカウントすることにより、特異的に結合した125I放射標識ヒトCGRPαを特定した。
結合を阻害することを示す。
CGRPは強力な血管拡張物質である(Nature 313: 54-56 (1985) and Br J. Clin. Pharmacol. 26(6):691-5. (1988))。CGRP受容体アンタゴニスト活性を非侵襲的に測
定する薬力学アッセイを用いて、抗CGRP抗体の特性を評価した。このモデルでは、カプサイシン溶液を局所投与した後の真皮血流速の変化をレーザードプラー画像法で測定した。カプサイシンは一過性受容体電位バニロイド1型受容体(TRPV‐1)を活性化し、CGRPおよびサブスタンスPを含む血管作用物質の局所放出を介して神経原性炎症および血管拡張を発生させる(Br. J. Pharmacol. 110: 772-776 (1993))。
抗CGRP抗体投与が膀胱自制と過活動膀胱に及ぼす潜在的効力を評価する実験を行った。膀胱自制とは、尿道閉鎖と排尿筋活動の間のバランスのことであり、過活動膀胱とは、切迫、尿失禁、頻尿、および夜間頻尿を特徴とする状態である。文献で報告されたある事例証拠では、CGRPが膀胱自制に関与している可能性があり、またCGRPは過活動膀胱疾患症状と相関し、おそらく因果的役割を果たしている可能性があることを示唆している。こうしたことから、本発明の抗CGRP抗体は、特にCGRPとの親和性が高いことから判断して、この時として衰弱性の症状を予防または軽減し得ることが期待された。CGRPが過活動膀胱で何らかの役割を果たすと考えられる証拠の1つに、CGRPが尿路、DRG、および脊髄に存在するという事実が挙げられる(Wharton et al., 1986 Neurosci (3):727)。また、排尿に関与するインパルスを脊髄に運ぶにはC線維求心路が不
可欠である(Yoshida et al., 2011 J Pharmacol Sci (112):128)が、この線維はCGRPの影響を受ける。さらに、酢酸誘発性の膀胱痛モデルにおいて、ボトックスの膀胱内投与がCGRPを抑制し収縮間隔を有意に減少させることが、すでに報告されている(Chuang et al., 2004 J Urol (172):1529; Chuang et al., 2009 J Urol (182):786))。さらに最近では、テレビン油誘発性の過活動膀胱モデルにおいて、抗CGRP抗体を投与すると膀胱収縮数が減少するという主旨の報告がなされている(ファイザー社PCT特許出願
国際公開第2011/024113号)。
動物:
雌性Sprague‐Dawleyラット(247〜299g)(チャールズリバーラボラトリーズ、フランス、サンジェルマン・シュル・ラルブレル)を、実験室条件に順化させるため実験の5日前までに実験室に納入させた。各ケージ(ポリプロピレンE型ケージ、サイズ:1032cm2)に3匹ずつ収容し、食物(Teklad 2016 global rodents、ハーラン、フランス、ガナ03800)と水を自由に摂取させ
た。げっ歯類ケージ用のおがくず(Souralit 2912 plus、Souralit、スペイン、ジローナ17080)の床敷きを1週間に2回交換した。12/12時間の明暗サイクル(明期午前7時:午後7時)で動物の室温(20±2℃)を維持し、相対湿度を40〜70%に維持した。
膀胱カテーテルを、T字管を介してひずみゲージMX 860 Novatrans I
II Gold(Medex Medical社、フランス、ナントカルクフー)とシリンジポンプ(70‐2208 Model II plus、Harvard Apparatus社、フランス、レ・ジュリス、およびRazel R‐99E、Fisher Bioblock社、フランス、イルキルシュ)に接続した。PowerLabインタフェース(ADInstruments社、オーストラリア、キャッスルヒル)、およびPC上で動作するChart(登録商標)ソフトウェアを使用して、膀胱内圧を連続的に記録した。マイクロソフトのExcel(登録商標)ソフトウェアを用いてデータを分析した。
試験抗CGRP抗体(Ab3)
陰性対照抗体(抗ジギトキシン抗体)
生理食塩水(NaCl 0.9%)(バッチ番号11043411、CAS番号764
7‐14‐5)を、Centravet(フランス、ラパリス)を介してビー・ブラウンから購入した。
ウレタン(バッチ番号BCBC9294、CAS番号51‐79‐6)およびペントバルビタールナトリウム(バッチ番号150A1、CAS番号76‐74‐4)が、それぞれシグマアルドリッチ(フランス、サンカンタン・ファラヴィエ)とCentravet(フランス、ラパリス)から提供された。
各10匹のラットからなる2つの実験群を実験に使用した。各群に、10mg/kgの対照抗体または抗CGRP抗体を投与した。
実験手順
実験の18時間前に、尾静脈注射により、雌性ラットに試験抗体または陰性対照抗体を10mg/kgの用量で静脈内投与した。15時間後、ラットをウレタンで麻酔した(1.2g/kg、皮下(sc))。ウレタンの皮下投与から3時間後、ドームを介してポリエチレンカテーテル(内径0.58mm、外径0.96mm)を膀胱に挿入し、巾着縫合で固定した。実験全体を通じて、体温を37±2℃に維持した(TCAT‐2LVコント
ローラー、Physitemp、ADInstruments社、オーストラリア、キャッスルヒル)。
外科処置後に麻酔した雌性ラットにおいて、膀胱内圧調査を行った。室温の生理食塩水を少なくとも30分間、一定流量で(2mL/時間)連続的に膀胱に注入した。
測定した膀胱内圧パラメータは次の通りである:
排尿の振幅(AM)、すなわち排尿の限界圧力と最大圧力の間の圧力(mmHg)。
収縮間隔(ICI)、すなわち連続した2回の排尿間の時間(秒)。
排尿頻度(MF)、すなわち排尿収縮数/15分(ピーク数/15分)。
次の2匹のラットを実験から除外した。1匹は、生理食塩水の膀胱内注入中に膀胱過活動を示したため除外した。もう1匹は、実験中に麻酔深度が変化したために膀胱内圧測定プロファイルの修正が生じた。
生理食塩水注入中の最後の4回または5回の排尿の平均として、各ラットのAMおよびICIの値を計算した。生理食塩水注入中に15分間隔の2回の排尿で得られた平均として、MF値を計算した。
(登録商標)(バージョン4、グラフパッドソフトウェア社、米国カリフォルニア州ラホーヤ)を用いて作図と統計分析を行った。
図41に示すように、抗CGRP抗体処置群の方が、ICIが有意に高く、MFが有意に低かった(それぞれ図41A、図41B;p<0.05、対応のないスチューデントt検定)。AMに関しては、2群間に有意差は見られなかった(図41C、p>0.05、対応のないスチューデントt検定)。
末梢神経が損傷すると、神経因性の慢性関連痛が生じることが多い。この疼痛症候群は、通常は有害でない外部刺激(例えば機械刺激および/または熱刺激)に対する感受性からなる。結果として、神経因性疼痛は従来の鎮痛剤使用による方法に抵抗性があり、治療を困難にしている。実験的に、外科的に末梢神経に外傷を与えることで、神経因性疼痛を
動物でモデル化できる。このような系の一例であるChungモデルでは、脊髄神経のL5とL6を結紮することにより神経因性疼痛を誘発する。
った。13日目に痛覚感受性を検査し(アロディニアの確認)、その後、Ab2をそれぞれ投与した後、再び機械的アロディニアのvon Freyテストを用いて、抗アロディ
ニア活性の可能性を評価した。
到着時体重200〜225gの雄のSprague Dawleyラット(ハーランラ
ボラトリーズ)を開梱し、ケージに入れた。各動物を目視で健康チェックし、外被、四肢、開口部の評価を含めた。また、各動物の姿勢や動きに異常な徴候がないかどうかも調べた。すべての動物が良好な健康状態にあることを確認し、実験に使用した。
ースライン閾値を試験した。
)から左傍脊柱筋を分離した。L6‐S1椎間関節を挟み、横突起を穏やかに切り取って、L4およびL5脊髄神経にアクセスする空間を作った。左L5およびL6脊髄神経を分離し、6.0絹縫合糸で結紮した。次に、切開部を適切な縫合材および皮膚創傷クリップで閉じた。外科手技後、乳酸加リンガー液(3.0〜5.0mL)を皮下注射により動物に投与した。
ロディニアに関するvon Frey試験では、鎮痛化合物の抗侵害受容特性を評価する
。本試験では、最初に動物を試験チャンバーに慣れさせ、評価する痛覚閾値に対して十分に鎮静した状態にした。各処置群に対して盲検の技術者が、徐々に直径が増加する一連の段階的ナイロンフィラメント(von Freyフィラメント)を用いて、ラットの左後
足に軽く圧力をかけた。フィラメントを足の腹側表面に垂直に置き、足が曲がるまでフィラメントを押し当てた。痛みがあると判断すると、ラットは自身の足を引っ込めることで反応する。Chaplan up‐down法(Chaplan et al., J Neurosci Methods, 53:55-63, 1994)を使用してアロディニア閾値を測定した。Chaplan up‐down法により、心理物理的な試験目盛りを用いて、各ラットが足を引く際の正確な力を測定できる。
on Freyスコアが6gより高い動物は、実験から除外した。各群の平均von Freyスコアを調べ、平均値と標準偏差が均一性の仮定を満足していることを確認した。13日目(外科手技から13日後)に、群1(Ab2)と群2(陰性対照抗体)に腹腔内注
射により抗体を投与した(各群11匹;Ab2および陰性対照抗体を10mg/kg用量で投与)。群1には、行動試験前の17日目にAb2を静脈内ボーラス(無麻酔)注射により追加投与した。
0日目の外科手技より前にベースライン試験を受けたどの動物も、von Freyス
コアは15(表示せず)であり、正常な感受性を示した。13日目(抗体投与の前)は、実験から除外された2匹を除き、どの動物もvon Freyスコアは6g未満であり、
外部の機械刺激に対する感受性が発達したことを示した。13日目のvon Freyス
コアの平均は3g未満であった(図42、左の棒群)。13日目の試験の後、動物にAb2または陰性対照抗体(10mg/kg)を投与した。14日目と17日目にvon F
reyスコアを再テストしたところ、対照群よりAb2で処置された動物群の方がvon
Freyスコアが高かった(図42、それぞれ中央と右の棒群)。
3種類の実験(実施例10〜12)を実施して、抗CGRP抗体投与が痛覚消失または疼痛に与える潜在的効力を評価した。放射熱に対するげっ歯類のテールフリック(尻尾の引っ込みとも呼ばれる)応答は、潜在的に有用な鎮痛剤を検出するモデルとして一般に使われているため、本実験のすべてにおいて、げっ歯類のテールフリック応答モデルを使用した。本アッセイは、中枢に作用するモルヒネ様鎮痛薬(活性)と、非オピオイド性すなわち末梢に作用する抗炎症剤(非活性)とを区別するのに特に有用である。本動物モデルおよび本モデルで使用した方法と材料を以下に述べる。
動物:雄のSprague Dawley由来の体重150±20gの雄性ラット。
性ラット10匹からなる各群の痛覚閾値として、集束放射熱に誘起されるテールフリックの誘発に要する時間(秒数)を測定した。0日目にテールフリック応答のベースライン試験を行った。テールフリック応答が3〜5秒のラットを実験に含め、ベースラインテールフリック応答に基づきバランス処置群に割り当てた。組織損傷を避けるため、15秒切断を使用した。
各10匹の雄性Sprague Dawleyラットからなる3群のそれぞれに、午前
と午後の1日2回、生理食塩水ビヒクル(2ml/kg)を腹腔内に投与した。さらに、3群のうちの1群には、連続7日間、5mg/kg用量の鎮痛剤(モルヒネ)を1日2回腹腔内投与した。3群のラットのうちの第2群には、用量10mg/kgの本発明の抗CGRP抗体(Ab2)を、0日目に単回ボーラスとして腹腔内に投与した。午前の投与から30分後の1日1回、各群のラットのテールフリック応答を試験した。
2セット目のテールフリック実験では、本発明の抗CGRP抗体(Ab2)を用いて、様々な用量の抗CGRP抗体が痛覚消失に与える効果を評価した。この実験で使用したラットの種類は直前の実験と同じであり、テールフリックプロトコルは実質的に同一である。この実験では、複数の異なる動物群に様々な用量の抗CGRP抗体を投与し痛覚消失を群間で比較して、投与量が痛覚消失に影響するかどうかを評価した。この2セット目の実験では、5群の試験動物を次のように比較した。動物の第1群である対照群には、各動物にビヒクルを単独で投与した(15mMヒスチジン 250mMソルビトール、pH5.
5)。3つの動物群には、ビヒクルに含まれる同一の抗CGRP抗体の用量を変えて各群に投与した(0日目に、それぞれ1mg/kg、3mg/kg、10mg/kg用量のAb2を投与)。第5の動物群には、同じ0日目に陰性対照抗体(抗ジギトキシン抗体)10mg/kgを投与した。
第3のテールフリック実験も実施し、抗CGRP抗体/モルヒネ併用の鎮痛効果を評価した。この実験では、第1の動物群に同じ単独のビヒクルを5ml/kgの用量で投与した。第2の動物群には、1〜10日目に1日2回、用量5mg/kgのモルヒネを投与した。また、この動物群には、0日目に用量10mg/kgの抗CGRP抗体Ab2も投与した。第3の動物群には、1〜4日目のみ1日2回、用量濃度5mg/kgのモルヒネを投与し、さらに0日目に用量10mg/kgのAb2抗体を投与した。いずれも腹腔内に投与した。
このテールフリック実験の結果を、再び一元配置ANOVAの後にダネットのt検定を行って評価し、ビヒクル対照、陰性対照抗体、および試験抗CGRP抗体でそれぞれ処置した群間で比較した。P<0.05を有意とみなした。
過敏性腸症候群(IBS)を患う患者は、結腸バルーン拡張に対して低い内臓感覚閾値を示す(Ritchie, Gut, 1973, 14:125-32)。IBSにおいて、通常の活性化パターンで
脳‐腸管軸の痛覚感受性が増大することが示唆されている。以前に覚醒ラットで行われた測定では、近位結腸にトリニトロベンゼンスルホン酸(TNBS)を注射すると、慢性の結腸過敏症が誘発され、結腸拡張に対する痛覚閾値が低下することが示された(Diop et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2002, 302:1013-22)。この慢性過敏症は遠位の非炎症結腸に見られ、21日間持続した。この慢性過敏症はIBSのある特徴を模倣したものであるため、これをモデルとして使用して、この障害の病態生理側面を実験で調査することができる。このアッセイを用いて、TNBS誘発性の結腸過敏症に対する化合物の潜在的な抗過敏効果を測定する。
も豊富なペプチドであり、ペプチド免疫活性全体の最大80%を占める(Clague et al.,
Neurosci Lett 1985;56:63-8; Sternini et al., Gastroenterology 1987;93:852-62)
。加えて、TNBSモデルにおいてCGRPを注射すると結腸過敏症が誘発されるが(Delafoy et al., 2006, Gut 55:940-5)、CGRPアンタゴニストペプチド(CGRP8‐37)により、この結腸過敏性が逆行する。
外科手技日現在で体重390〜450gの雄のSprague‐Dawleyラットを本実験に含めた。温度(19.5℃〜24.5℃)と相対湿度(45%〜65%)が制御された12時間の明暗サイクルの部屋にラット群を収容した。2〜3匹ずつケージに収容し、試験前の順化期間(少なくとも5日)を遵守した。尾に印を付けて各ラットを識別した。この実験は、IASPの動物実験に関する倫理委員会のガイドライン(1983)および欧州ガイドライン2010/63/UEに従って行った。
に摂食させた。「無処置」の動物群(外科手技を受けていないラット)を同一の収容条件下に置いた。
ーカーとして使用される(Bourdu et al., Gastroenterology. 2005:128, 1996-2008)。絶食状態(24時間)の覚醒動物の肛門から10cm位置に、最も侵襲が少ない方法でバルーン(5cm)を直腸内に挿入し、尾の付け根にカテーテルをテープで留めた。次に、プレキシガラスの中央にラットを置き、カテーテルを電子圧力調節器に接続した。バルーンを挿入した状態で30分間順化させた後、疼痛行動が明確に確認されるまで、結腸圧力を5mmHgから75mmHg(カットオフ)まで30秒ごとに5mmHgずつ上昇させた。バルーン挿入から30分後、50分後、70分後、90分後の4回測定した。
TNBSの投与により慢性結腸過敏症を誘発させたラットモデルにおいて、抗CGRP抗体が内臓痛を軽減する能力を試験した。結腸拡張閾値(すなわち動物が行動反応(筋収縮)を示すまでに耐性を示した腹圧量)を測定することにより、内臓痛を定量化した。結腸拡張閾値が高いほど、感受性が低いことを表す。予想通り、無処置の動物と比べて、TNBS処置は結腸拡張閾値が大きく低下した(図46の中央の棒(TNBS処置)と左の棒(無処置)を比較)。対照動物群と比べて、Ab2投与は結腸拡張閾値が改善した(図46の右の棒(Ab2処置)と中央の棒(対照)を比較)。Ab2投与による改善は統計的に有意であった(p<0.05 スチューデントのt検定、TNBS+陰性対照群と比
較)。Ab2の抗過敏活性の計算値は27%となった(TNBS誘発性過敏症の軽減の度
合いを示す)。
ある態様において、本発明は以下であってもよい。
[態様1] Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13またはAb14から選択される抗ヒトCGRP抗体などの、同一もしくは重複直線状または立体構造エピトープ(複数可)と特異的に結合する、および/または完全CGRPポリペプチドもしくはその断片上の同一もしくは重複直線状もしくは立体構造エピトープ(複数可)との結合について競合する、抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様2] Ab3、Ab6、Ab13またはAb14などの、同一もしくは重複直線状または立体構造エピトープ(複数可)と特異的に結合する、および/または完全ヒトCGRPポリペプチドもしくはその断片上の同一もしくは重複直線状または立体構造エピトープ(複数可)への結合について競合する、態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または断片。
[態様3] 前記断片が、Fab断片、Fab’断片、F(ab’)2断片、または一価抗体、たとえば「metMab」から選択される、態様1記載の抗体断片。
[態様4] 前記断片がFab断片である、態様3記載の抗体断片。
[態様5] Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13またはAb14から選択される抗ヒトCGRP抗体と同じCDRを含む、態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様6] 配列番号25のCDR1配列、配列番号26のCDR2配列、および配列番号27のCDR3配列を含む可変軽鎖、ならびに/または配列番号28のCDR1配列、配列番号29のCDR2配列、および配列番号30のCDR3配列を含む可変重鎖を含む、態様4記載のFab断片。
[態様7] 配列番号55のCDR1配列、配列番号56のCDR2配列、および配列番号57のCDR3配列を含む可変軽鎖、ならびに/または配列番号58のCDR1配列、配列番号59のCDR2配列、および配列番号60のCDR3配列を含む可変重鎖を含む、態様4記載のFab断片。
[態様8] 可変軽および可変重領域のそれぞれにおいて、Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13またはAb14から選択される抗ヒトCGRP抗体中に含まれるものと同一である少なくとも2つの相補性決定領域(CDR)を含む、態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様9] 可変軽および可変重領域のそれぞれにおいて、Ab3、Ab6、Ab7、Ab8、Ab13またはAb14中に含まれるものと同一である少なくとも2つの相補性決定領域(CDR)を含む、態様8記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様10] アグリコシル化であるか、またはグリコシル化されている場合はマンノース残基だけを含むだけである、態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様11] N−グリコシル化されていない、態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様12] エフェクター機能、半減期、タンパク質分解、および/またはグリコシル化を改変するために修飾されたFc領域を含む、態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様13] ヒト化、単鎖またはキメラ抗体である、態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様14] ヒト細胞を発現するCGRPおよび/またはインビボの循環可溶性CGRP分子と特異的に結合する、態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様15] CGRPと結合する細胞と関連する疾患の患者においてヒト細胞上またはヒト細胞によって発現されるCGRPと特異的に結合する、態様14記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様16] 前記疾患が、偏頭痛(前兆を有する、または有しない)、CGRP関連疼痛をともなう状態、体重減少、癌または腫瘍、過活動膀胱、尿失禁、掻痒症、乾癬、潰瘍、心臓疾患、癌または腫瘍成長に伴う血管形成、癌または腫瘍生存に伴う血管形成、偏頭痛、慢性偏頭痛、反復発作性偏頭痛、月経性偏頭痛、片麻痺型偏頭痛、群発性頭痛、偏頭痛様神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般的頭痛、のぼせ、慢性発作性片側頭痛、頭頸部に内在する構造的問題による二次性頭痛、頭蓋神経痛、副鼻洞性頭痛(たとえば、副鼻腔炎を伴うものなど)、アレルギー誘発性の頭痛もしくは偏頭痛、疼痛、TMJ、顎関節症、炎症性痛覚、内臓痛、術後創疼痛、複合性局所疼痛症候群、癌性疼痛、原発性もしくは転移性骨癌性疼痛、骨折痛、骨粗鬆症性骨折痛、熱傷に起因する疼痛、骨粗鬆症、痛風性関節痛、鎌状赤血球発症に伴う疼痛、および他の侵害受容性疼痛、ならびに肝細胞癌、乳癌、肝硬変、神経性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、三叉神経痛、ヘルペス後神経痛、幻肢痛、線維筋痛、生理痛、卵巣痛、反射性交換神経性ジストロフィー、神経原性疼痛、骨関節炎痛もしくはリウマチ性関節炎痛、腰痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、または胃食道逆流と関連する内臓痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎疝痛、月経困難、膀胱炎、月経期、分娩、閉経、前立腺炎、または膵炎である、態様15記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様17] 前記疾患が、疼痛、内臓痛、TMJ、顎関節症、頭痛、過活動膀胱、尿失禁または偏頭痛から選択される、態様15記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
[態様18] 前記疾患が偏頭痛である、態様17記載の抗ヒトCGRP抗体または断片。
[態様19] 前記疾患が前兆の有無を問わない偏頭痛である、態様17記載の抗ヒトCGRP抗体または断片。
[態様20] 前記疾患が以下の種類の偏頭痛のうちの1つである、態様17記載の抗ヒトCGRP抗体または断片:慢性偏頭痛、反復発作性偏頭痛、または月経性偏頭痛。
[態様21] 前記疾患が群発性頭痛である、態様17記載の抗ヒトCGRP抗体または断片。
[態様22] 検出可能な標識または治療薬に直接または間接的に結合されている、態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または断片。
[態様23] 態様1または態様5記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片の発現をもたらす核酸配列(複数可)。
[態様24] 酵母またはヒトの好ましいコドンから構成される、態様23記載の核酸配列(複数可)。
[態様25] 態様24記載の核酸配列(複数可)を含むベクター。
[態様26] プラスミドまたは組み換えウイルスベクターである、態様25記載のベクター。
[態様27] 態様1〜22のいずれか1項に記載の抗体または抗体断片を発現する培養または組み換え細胞。
[態様28] 哺乳動物、酵母、細菌、真菌、または昆虫細胞から選択される、態様27記載の細胞。
[態様29] 酵母細胞である、態様28記載の方法。
[態様30] 二倍体酵母細胞である、態様29記載の細胞。
[態様31] ピキア酵母である、態様30記載の酵母細胞。
[態様32] CGRPアンタゴニストの投与によって治療可能な疾患または状態の患者に、治療有効量の態様1または5記載の少なくとも1つの抗ヒトCGRP抗体または断片を投与することを含む治療方法。
[態様33] 前記疾患または状態が、CGRP発現細胞と関連するものである、態様32記載の方法。治療有効量の態様1または5記載の少なくとも1つの抗ヒトCGRP抗体または断片の治療的有効量。
[態様34] 前記疾患が、偏頭痛(前兆を有する、または有しない)、体重減少、癌または腫瘍、癌または腫瘍成長に伴う血管形成、癌または腫瘍生存に伴う血管形成、偏頭痛、慢性偏頭痛、反復発作性偏頭痛、または月経性偏頭痛片麻痺型偏頭痛、群発性頭痛、偏頭痛様神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般的頭痛、のぼせ、慢性発作性片側頭痛、頭頸部に内在する構造的問題による二次性頭痛、頭蓋神経痛、副鼻洞性頭痛(たとえば副鼻腔炎に関連するものなど)、アレルギー誘発性の頭痛もしくは偏頭痛、疼痛、炎症性痛覚、術後創疼痛、複合性局所疼痛症候群、癌性疼痛、原発性もしくは転移性骨癌性疼痛、骨折痛、骨粗鬆症性骨折痛、熱傷に起因する疼痛、骨粗鬆症、痛風性関節痛、鎌状赤血球発症に伴う疼痛、および他の侵害受容性疼痛、ならびに肝細胞癌、乳癌、肝硬変、神経性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、三叉神経痛、ヘルペス後神経痛、幻肢痛、線維筋痛、生理痛、卵巣痛、反射性交換神経性ジストロフィー、神経原性疼痛、骨関節炎痛もしくはリウマチ性関節炎痛、腰痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、または胃食道逆流に関連する内臓痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎疝痛、月経困難、膀胱炎、月経期、分娩、閉経、前立腺炎、または膵炎から選択される、態様32または33記載の方法。
[態様35] 前記状態が、過活動膀胱;尿失禁;疼痛;慢性痛;神経原性炎症および炎症性痛覚;神経因性疼痛;眼痛;歯痛;手術後の痛み、外傷関連疼痛、糖尿病;非インシュリン依存型糖尿病および他の炎症性自己免疫障害、血管障害;炎症;関節炎;気管支過敏症、喘息;ショック;敗血症;アヘン製剤離脱症候群;モルヒネ耐性;男性および女性におけるのぼせ;アレルギー性皮膚炎;乾癬;脳炎;脳損傷;てんかん;神経変性疾患;掻痒症、神経性皮膚発赤、酒さおよび紅斑をはじめとする皮膚疾患;炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、膀胱炎;および月経困難を含む、態様32または33記載の方法。
[態様36] 前記疾患または状態が、疼痛、過活動膀胱、尿失禁、頭痛または偏頭痛である、態様32または33記載の方法。
[態様37] 前記治療が、抗ヒスタミン剤、抗炎症薬、鎮痛剤または抗生物質から選択される別の治療薬またはレジメンの投与をさらに含む、態様32または33記載の方法。
[態様38] 前記鎮痛剤が、NSAID、オピオイド鎮痛剤、抗体もしくは抗体断片または別の鎮痛生物製剤である、態様37記載の方法。
[態様39] 前記鎮痛剤がオピオイドであり、この方法を使用して、オピオイドに対する耐性を減少または防止する、態様38記載の方法。
[態様40] 前記オピオイドがモルヒネまたはモルヒネ誘導体である、態様38記載の方法。
[態様41] 前記他の鎮痛剤がNGF抗体または抗体断片である、態様37記載の方法。
[態様42] CGRPを発現する細胞の存在を検出するインビボ画像化法であって、診断上有効な量の少なくとも1つの態様1記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片を投与することを含む、方法。
[態様43] 前記投与が、CGRPを発現する疾患部位での抗体の検出を促進する放射性核種またはフルオロフォアの投与をさらに含む、態様42記載の方法。
[態様44] 結果を使用して、適切な治療レジメンの設計を容易にする、態様42記載の方法。
[態様45] 配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123、もしくは133から選択されるVHポリペプチド配列、またはそれらと少なくとも90%の配列同一性を示すその変異体;および/または:配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121もしくは131から選択されるVLポリペプチド配列、またはそれらと少なくとも90%の配列同一性を示すその変異体を含む単離された抗CGRP抗体または抗体断片であって、前記VHもしくはVLポリペプチド中の1つ以上のフレームワーク(FR)またはCDR残基が別のアミノ酸残基で置換され、その結果CGRPに特異的に結合する抗CGRP抗体が得られる、単離された抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様46] 配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123、もしくは133から選択されるVHポリペプチド配列、またはそれらと少なくとも95%の配列同一性を示すその変異体;および/または配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121もしくは131から選択されるVLポリペプチド配列、またはそれらと少なくとも90%の配列同一性を示すその変異体を含む単離された抗CGRP抗体または抗体断片であって、前記VHもしくはVLポリペプチド中の1つ以上のフレームワーク(FR)またはCDR残基が別のアミノ酸残基と置換され、その結果、CGRPに特異的に結合する抗CGRP抗体が得られる、単離された抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様47] 1つ以上の前記FR残基が、前記VHまたはVLポリペプチド中に含まれる相補性決定領域(CDR)が由来する親ウサギ抗CGRP抗体中の対応する部位で存在するアミノ酸で置換されているか、または保存的アミノ酸置換によって置換されている、態様45または46記載の単離された抗体または抗体断片。
[態様48] 前記VLポリペプチド配列のCDR中の最大で1または2個の残基が修飾されている、態様45または46記載の単離された抗体。
[態様49] 前記VHポリペプチド配列のCDR中の最大で1または2個の残基が修飾されている、態様45または46記載の単離された抗体。
[態様50] 前記抗体がヒト化である、態様45または46記載の抗体または抗体断片。
[態様51] 前記抗体がキメラである、態様45または46記載の抗体または抗体断片。
[態様52] 単鎖抗体を含む、態様45または46記載の抗体または抗体断片。
[態様53] 前記ヒト化またはキメラ抗体がヒトFcを含む、態様50または51記載の抗体。
[態様54] 前記ヒトFcがIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4由来である、態様53記載の抗体または抗体断片。
[態様55] 前記抗体が、CGRPとCGRP‐Rおよび/またはそのマルチマー、CGRP−CGRP‐R複合体中の1つ以上のさらなるタンパク質との会合を阻害する、および/またはその生物学的効果を拮抗する、態様45〜54のいずれか1項に記載の抗体または抗体断片。
[態様56] 態様45または46記載のポリペプチド配列のうちのいずれか1つと少なくとも90%またはそれ以上の相同性を有するポリペプチドを含む、単離された抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様57] 態様45または46記載のポリペプチド配列のいずれか1つに対して少なくとも95%またはそれ以上の相同性を有するポリペプチド配列を含む、単離された抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様58] 前記抗体がCGRPと10−4S−1、5×10−5S−1、10−5S−1、5×10−6S−1、10−6S−1、5×10−7S−1、または10−7S−1以下の解離速度(Koff)で結合する、態様56記載の抗体または抗体断片。
[態様59] 前記抗体が、CGRPとCGRP‐Rおよび/またはそのマルチマーとの複合体の産生、ならびにCGRPとCGRP‐Rおよび複合体中の1つ以上のさらなるタンパク質との産生を阻害する、態様45〜58のいずれか1項に記載の抗体または抗体断片。
[態様60] 前記断片が、Fab断片、Fab’断片、またはF(ab’)2断片から選択される、態様45〜59のいずれか1項に記載の抗体断片。
[態様61] 前記抗体または抗体断片がエフェクター部分をさらに含む、態様45〜60のいずれか1項に記載の抗体または抗体断片。
[態様62] 前記エフェクター部分が検出可能な部分または機能部分である、態様61記載の抗体または抗体断片。
[態様63] 前記検出可能な部分が、蛍光色素、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、または化学発光物質である、態様62記載の抗体。
[態様64] 前記機能部分が、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞毒性薬、または放射性物質である、態様62記載の抗体。
[態様65] CGRPアンタゴニストの投与によって治療可能な疾患または障害の症状を改善または軽減する方法であって、それを必要とする個体に治療有効量の、態様45〜64のいずれか1項に記載のCGRP抗体または抗体断片を投与することを含む、方法。
[態様66] 前記疾患がCGRPの増加と関連する、態様65記載の方法。
[態様67] 前記疾患または障害が、偏頭痛(前兆を有する、または有しない)、体重減少、癌または腫瘍、癌または腫瘍成長に伴う血管形成、癌または腫瘍生存に伴う血管形成、片麻痺型偏頭痛、群発性頭痛、偏頭痛様神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般的頭痛、のぼせ、慢性発作性片側頭痛、頭頸部に内在する構造的問題による二次性頭痛、頭蓋神経痛、副鼻洞性頭痛(たとえば副鼻腔炎を伴うものなど)、アレルギー誘発性頭痛または偏頭痛、疼痛、炎症性痛覚、術後創疼痛、複合性局所疼痛症候群、癌性疼痛、原発性もしくは転移性骨癌性疼痛、骨折痛、骨粗鬆症性骨折痛、熱傷に起因する疼痛、骨粗鬆症、痛風性関節痛、鎌状赤血球発症に伴う疼痛、および他の侵害受容性疼痛、ならびに肝細胞癌、乳癌、肝硬変、神経性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、三叉神経痛、ヘルペス後神経痛、幻肢痛、線維筋痛、生理痛、卵巣痛、反射性交換神経性ジストロフィー、神経原性疼痛、骨関節炎痛もしくはリウマチ性関節炎痛、腰痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、または胃食道逆流に関連する内臓痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎疝痛、月経困難、膀胱炎、月経期、分娩、閉経、前立腺炎、または膵炎から選択される、態様65または66記載の方法。
[態様68] 前記状態が、過活動膀胱、疼痛;TMJ、顎関節症、慢性痛;神経原性炎症および炎症性痛覚;神経因性疼痛;眼痛;歯痛;手術後の痛み、外傷関連疼痛、糖尿病;非インシュリン依存型糖尿病および他の炎症性自己免疫障害、血管障害;炎症;関節炎;サルコイドーシス、気管支過敏症、喘息;ショック;敗血症;アヘン製剤離脱症候群;モルヒネ耐性;男性および女性におけるのぼせ;アレルギー性皮膚炎;乾癬;脳炎;脳損傷;てんかん;神経変性疾患;掻痒症、神経性皮膚発赤、酒さおよび紅斑を含む皮膚疾患;炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、膀胱炎;ならびに月経困難を含む、態様65または66記載の方法。
[態様69] 前記疾患または状態が、疼痛、過活動膀胱、頭痛、または偏頭痛である、態様65または66記載の方法。
[態様70] CGRP抗体または抗体断片が、Ab3またはAb6と同じCDRを含む、態様65〜69のいずれかに記載の方法。
[態様71] 別の治療薬の投与を含む疼痛に関連する特定の疾患または状態の治療のための治療レジメンでCGRP抗体または抗体断片を投与する、態様65〜69のいずれかに記載の方法。
[態様72] 前記他の治療薬が、化学療法薬、鎮痛剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、サイトカイン、抗増殖剤、制吐剤および細胞毒素から選択される、態様71記載の方法。
[態様73] 前記他の治療薬が鎮痛剤である、態様71記載の方法。
[態様74] 前記他の鎮痛剤が、NSAID、オピオイド鎮痛剤、抗体または非抗体生物製剤である、態様73記載の方法。
[態様75] 前記抗体がNGF抗体または抗体断片である、態様74記載の方法。
[態様76] 前記他の鎮痛剤が、シクロオキシゲナーゼ1および/またはシクロオキシゲナーゼ2阻害剤であるNSAIDである、態様73記載の方法。
[態様77] NSAIDが、(1)イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナック、およびケトプロフェンをはじめとするプロピオン酸誘導体;(2)トルメチンおよびスリンダックをはじめとする酢酸誘導体;(3)メフェナム酸およびメクロフェナム酸をはじめとするフェナム酸誘導体;(4)ジフルニサルおよびフルフェニサルをはじめとするビフェニルカルボン酸誘導体;ならびに(5)ピロキシム(piroxim)、スドキシカム、およびイソキシカムをはじめとするオキシカムから選択される、態様76記載の方法。
[態様78] 前記他の鎮痛剤が、フェナントレン;フェニルヘプチルアミン;フェニルピペリジン;モルフィナン;またはベンゾモルファン化合物である、態様73記載の方法。
[態様79] 前記他の鎮痛剤が、コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、オキシモルフォン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニール、スフェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェンおよびペンタゾシンから選択されるオピオイド鎮痛剤またはその薬剤的に許容される塩である、態様73記載の方法。
[態様80] 前記オピオイド鎮痛剤およびCGRP抗体または抗体断片の併用投与が、それによって惹起される鎮痛効果を増大させる、および/または鎮痛剤に対する耐性を軽減する、請求項78または79記載の方法。
[態様81] 前記オピオイド鎮痛剤がモルヒネまたはモルヒネ誘導体もしくはその薬剤的に許容される塩である、態様79記載の方法。
[態様82] 培養培地中に少なくとも10〜25mg/リットルの前記抗体を安定して発現し、分泌する倍数体酵母培養物において態様45記載の抗体または抗体断片を作成する方法であって:
(i)プロモーターおよびシグナル配列に機能的に連結された前記抗体をコード化する1つ以上の異種性ポリヌクレオチドを含む少なくとも1つの発現ベクターを一倍体酵母細胞に導入し;
(ii)前記第1および/または第2一倍体酵母細胞から多倍数体性酵母を交配またはスフェロプラスト融合によって産生し;
(iii)前記抗体を安定して発現する多倍数体性酵母細胞を選択し;そして
(iv)前記抗体を培養培地中へ安定して発現する前記多倍数体性酵母細胞から安定な多倍数体性酵母培養物を産生する
ことを含む、方法。
[態様83] 前記酵母属がピキアである、態様82記載の方法。
[態様84] 前記ピキア種が、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)、ピキア・メタノリカ(Pichia methanolica)またはハンセヌラ・ポリモルファ(Hansenula polymorpha)(ピキア・アングスタ(Pichia angusta)から選択される、態様83記載の方法。
[態様85] 前記ピキア種がピキア・パストリスである、態様83記載の方法。
[態様86] 配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123もしくは133から選択される抗CGRP VH抗体アミノ酸配列をコード化するか、またはそれらと少なくとも90%の配列同一性を示すそれらの変異体をコード化するポリヌクレオチドを含む、単離されたポリヌクレオチド。
[態様87] ポリヌクレオチド配列が、少なくとも1つのフレームワーク残基(FR残基)がウサギ抗CGRP抗体VHポリペプチド中の対応する位置で存在するアミノ酸で、または保存的アミノ酸置換により置換された抗CGRP VH抗体アミノ酸配列をコード化する、請求項86記載の単離されたポリヌクレオチド。
[態様88] 態様86または87記載のポリヌクレオチド配列を含むベクターまたは宿主細胞。
[態様89] 前記宿主細胞がピキア属に属する酵母細胞である、態様88記載の宿主細胞。
[態様90] 前記異種性ポリヌクレオチドが、配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121もしくは131から選択される抗CGRP VLアミノ酸配列をコード化するポリヌクレオチド配列、またはそれらと少なくとも90%の配列同一性を示すその変異体をコード化するポリヌクレオチドをさらに含む、態様82記載の方法。
[態様91] 抗CGRP VL抗体アミノ酸配列をコード化するポリヌクレオチド配列が、ウサギ抗CGRP抗体VLポリペプチド中の対応する位置で存在するアミノ酸で、または保存的アミノ酸置換によって置換された少なくとも1つのフレームワーク残基(FR残基)を含む、態様90記載の方法。
[態様92] 配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121もしくは131から選択される抗CGRP VL抗体アミノ酸配列をコード化するか、またはそれらと少なくとも90%の配列同一性を示す変異体をコード化するポリヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
[態様93] 抗CGRP VL抗体アミノ酸配列をコード化するポリヌクレオチド配列が、ウサギ抗CGRP抗体VLポリペプチド中の対応する位置で存在するアミノ酸で、または保存的アミノ酸置換によって置換された少なくとも1つのフレームワーク残基(FR残基)を含む、態様92記載の単離されたポリヌクレオチド。
[態様94] 態様92または93記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。
[態様95] 態様94記載のベクターを含む宿主細胞。
[態様96] 前記宿主細胞がピキア属に属する酵母細胞である、態様95記載の宿主細胞。
[態様97] 前記異種性ポリヌクレオチドが、配列番号1および配列番号3;配列番号11および配列番号13;配列番号21および配列番号23;配列番号31および配列番号33;配列番号41および配列番号43;配列番号51および配列番号53、配列番号61および配列番号63;配列番号71および配列番号73;配列番号81および配列番号83;配列番号91および配列番号93;配列番号101および配列番号103;配列番号111および配列番号113;配列番号121および配列番号123;または配列番号131および配列番号133中に含まれるポリペプチドをコード化する配列を含む、態様90記載の方法。
[態様98] 態様92もしくは97記載のポリヌクレオチド配列のうちの1つによってコード化される配列を含む抗体または抗体断片と同一の、もしくは重複するCGRPエピトープと結合する、および/またはCGRPとの結合について抗CGRP抗体と競合する、抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様99] Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13またはAb14から選択される抗CGRP抗体と同一または重複するCGRPエピトープと結合する、態様98記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様100] 配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123、もしくは133から選択されるVHポリペプチド配列中に含まれる1つ以上のCDRおよび/または配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121もしくは131から選択されるVLポリペプチド配列中に含まれる1つ以上のCDRを含む、単離された抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様101] 配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123、もしくは133から選択されるVHポリペプチド配列中に含まれる少なくとも2つのCDRおよび/または配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121もしくは131から選択されるVLポリペプチド配列中に含まれる少なくとも2つのCDRを含む、態様100記載の単離された抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様102] 配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123、もしくは133から選択されるVHポリペプチド配列中に含まれる3つのCDRすべておよび/または配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121もしくは131から選択されるVLポリペプチド配列中に含まれる3つのCDRすべてを含む、態様101記載の単離された抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様103] 前記抗体または抗体断片がヒト化である、態様99、100、101または102記載の抗体または抗体断片。
[態様104] 前記抗体がキメラである、態様99、100、101または102記載の抗体。
[態様105] 前記キメラ抗体がヒトFcを含む、態様104記載の抗体。
[態様106] 単鎖抗体を含む、態様99、100、101、または102記載の抗体。
[態様107] 一価抗体分子を含む、態様99または100記載の抗体。
[態様108] 前記ヒトFcが、ヒトIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4から誘導される、態様105記載の抗体。
[態様109] 態様100または101記載のポリペプチド配列のいずれか1つと少なくとも90%またはそれ以上の相同性を有するVLまたはVHポリペプチド配列を含む、単離された抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様110] 前記抗体がCGRPと10−4S−1、5x10−5S−1、10−5S−1、5x10−6S−1、10−6S−1、5x10−7S−1、または10−7S−1以下の解離速度(koff)で結合する、態様109記載の抗体または抗体断片。
[態様111] 前記抗体が、CGRPとCGRP‐Rおよび/もしくはそのマルチマーとの会合、またはCGRPとその受容体(CGRP‐R)および複合体中の1つ以上のさらなるタンパク質との会合を阻害する、態様99〜110のいずれか1項に記載の抗体または抗体断片。
[態様112] 前記断片が、Fab断片、Fab’断片、またはF(ab’)2断片から選択される、態様99〜110のいずれか1項に記載の抗体断片。
[態様113] 前記抗体がエフェクター部分をさらに含む、態様99〜110のいずれか1項に記載の抗体または抗体断片。
[態様114] 前記エフェクター部分が検出可能な部分または機能部分である、態様113記載の抗体。
[態様115] 前記検出可能な部分が、蛍光色素、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、または化学発光物質である、態様114記載の抗体。
[態様116] 前記機能部分が、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞毒性薬、または放射性物質である、態様114記載の抗体。
[態様117] CGRPアンタゴニストの投与によって治療可能な疾患または障害の症状を改善または軽減する方法であって、それを必要とする患者に、有効量の態様99〜116のいずれか1項に記載の抗体または抗体断片を投与することを含む、方法。
[態様118] 前記疾患または障害が、増大したCGRPと関連する、態様117記載の方法。
[態様119] 前記疾患または障害が、偏頭痛(前兆を有する、または有しない)、体重減少、癌または腫瘍、癌または腫瘍成長に伴う血管形成、癌または腫瘍生存に伴う血管形成、片麻痺型偏頭痛、群発性頭痛、偏頭痛様神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般的頭痛、のぼせ、慢性発作性片側頭痛、頭頸部に内在する構造的問題による二次性頭痛、頭蓋神経痛、副鼻洞性頭痛(たとえば副鼻腔炎を伴うものなど)、アレルギー誘発性頭痛または偏頭痛、疼痛、炎症性痛覚、術後創疼痛、複合性局所疼痛症候群、癌性疼痛、原発性もしくは転移性骨癌性疼痛、骨折痛、骨粗鬆症性骨折痛、熱傷に起因する疼痛、骨粗鬆症、痛風性関節痛、鎌状赤血球発症に伴う疼痛、および他の侵害受容性疼痛、ならびに肝細胞癌、乳癌、肝硬変、神経性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、三叉神経痛、ヘルペス後神経痛、幻肢痛、線維筋痛、生理痛、卵巣痛、反射性交換神経性ジストロフィー、神経原性疼痛、骨関節炎痛もしくはリウマチ性関節炎痛、腰痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、または胃食道逆流に関連する内臓痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎疝痛、月経困難、膀胱炎、月経期、分娩、閉経、前立腺炎、または膵炎から選択される、態様118記載の方法。
[態様120] 前記状態が、過活動膀胱、疼痛;慢性痛;神経原性炎症および炎症性痛覚;神経因性疼痛;眼痛;歯痛;手術後の痛み、外傷関連疼痛、糖尿病;非インシュリン依存型糖尿病および他の炎症性自己免疫障害、血管障害;炎症;関節炎;気管支過敏症、喘息;ショック;敗血症;アヘン製剤離脱症候群;モルヒネ耐性;男性および女性におけるのぼせ;アレルギー性皮膚炎;乾癬;脳炎;脳損傷;てんかん;神経変性疾患;掻痒症、神経性皮膚発赤、酒さおよび紅斑をはじめとする皮膚疾患;炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、膀胱炎;ならびに月経困難を含む、態様118記載の方法。
[態様121] 前記状態または障害が、偏頭痛、過活動膀胱、疾患もしくは状態と関連する疼痛、またはオピオイド鎮痛剤耐性である、態様118記載の方法。
[態様122] 別の治療薬の投与を含む疼痛に関連する特定の疾患または状態の治療のための治療レジメンで、CGRP抗体または抗体断片が投与される、態様118記載の方法。
[態様123] 前記他の治療薬が、化学療法薬、鎮痛剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、サイトカイン、抗増殖剤、制吐剤および細胞毒素から選択される、態様122記載の方法。
[態様124] 前記他の治療薬が鎮痛剤である、態様122記載の方法。
[態様125] 前記他の鎮痛剤が、NSAID、オピオイド鎮痛剤、抗体または非抗体生物製剤である、態様122記載の方法。
[態様126] 前記抗体がNGF抗体または抗体断片である、態様125記載の方法。
[態様127] 前記他の鎮痛剤が、シクロオキシゲナーゼ1および/またはシクロオキシゲナーゼ2阻害剤を含むNSAIDである、態様125記載の方法。
[態様128] 前記NSAIDが、(1)イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナック、およびケトプロフェンをはじめとするプロピオン酸誘導体;(2)トルメチンおよびスリンダックをはじめとする酢酸誘導体;(3)メフェナム酸およびメクロフェナム酸をはじめとするフェナム酸誘導体;(4)ジフルニサルおよびフルフェニサルをはじめとするビフェニルカルボン酸誘導体;ならびに(5)ピロキシム、スドキシカム、およびイソキシカムをはじめとするオキシカムから選択される、態様127記載の方法。
[態様129] 前記他の鎮痛剤が、フェナントレン;フェニルヘプチルアミン;フェニルピペリジン;モルフィナン;またはベンゾモルファン化合物である、態様124記載の方法。
[態様130] 前記他の鎮痛剤が、コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、オキシモルフォン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニール、スフェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェンおよびペンタゾシンまたはそれらの薬剤的に許容される塩から選択されるオピオイド鎮痛剤である、態様124記載の方法。
[態様131] 前記鎮痛剤およびCGRP抗体または抗体断片の併用投与が、それによって惹起される鎮痛効果を増大させる、および/または鎮痛剤に対する耐性を軽減する、態様129または130記載の方法。
[態様132] 前記鎮痛剤がモルヒネまたはモルヒネ誘導体またはその薬剤的に許容される塩である、態様131記載の方法。
[態様133] 態様98〜116のいずれか1項に記載の抗体を、安定して発現し、培養培地中に少なくとも10〜25mg/リットルの前記抗体を分泌する倍数体酵母培養で作成する方法であって:
(i)プロモーターに機能的に連結された前記抗体をコード化する1つ以上の異種性ポリヌクレオチドおよびシグナル配列を含む少なくとも1つの発現ベクターを一倍体酵母細胞中に導入し;
(ii)多倍数体性酵母を前記第1および/または第2一倍体酵母細胞から交配またはスフェロプラスト融合によって産生し;
(iii)前記抗体を安定して発現する多倍数体性酵母細胞を選択し;そして
(iv)安定な多倍数体性酵母培養を、少なくとも10〜25mg/リットルの前記抗体を安定して発現する前記多倍数体性酵母細胞から培養培地へ産生する
ことを含む、方法。
[態様134] 前記酵母属がピキアである、態様133記載の方法。
[態様135] 前記ピキア種が、ピキア・パストリス、ピキア・メタノリカまたはハンセヌラ・ポリモルファ(ピキア・アングスタ)から選択される、態様134記載の方法。
[態様136] 前記ピキアの種がピキア・パストリスである、態様135記載の方法。
[態様137] 抗CGRP抗体由来の少なくとも1つのCDRポリペプチドを含むポリペプチドを発現する単離されたポリヌクレオチドであって、前記発現されたポリペプチドのみでCGRPと特異的に結合するか、または抗CGRP抗体由来の少なくとも1つのCDRポリペプチドを含むポリペプチドを発現する別のポリヌクレオチド配列と伴って発現される場合にCGRPと特異的に結合し、前記少なくとも1つのCDRが、配列番号1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、111、113、121、123、131または133のVLまたはVHポリペプチドに含まれるものから選択される、単離されたポリヌクレオチド。
[態様138] 抗CGRP抗体由来の2または3のCDRポリペプチドを含むポリペプチドを発現する態様137記載の単離されたポリヌクレオチドであって、前記発現されたポリペプチドのみでCGRPと特異的に結合するか、または抗CGRP抗体由来の2または3のCDRポリペプチドを含むポリペプチドを発現する別のポリヌクレオチド配列と伴って発現される場合にCGRPと特異的と特異的に結合し、前記CDRポリペプチドが、配列番号1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、111、113、121、123、131または133のVLもしくはVHポリペプチドに含まれるものから選択される、ポリヌクレオチド。
[態様139] 態様137または138記載の少なくとも1つのポリヌクレオチド配列を含むベクター。
[態様140] 態様139記載のベクターを含む宿主細胞。
[態様141] 前記宿主細胞がピキア属に属する酵母細胞である、態様140記載の宿主細胞。
[態様142] 前記異種性ポリヌクレオチドが、配列番号1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、111、113、121、123、131または133から選択されるVLもしくはVHポリペプチドに含まれる少なくとも1つのCDRをコード化するポリヌクレオチド配列を含む、態様133記載の方法。
[態様143] 態様1〜22または99〜116のいずれか1項に記載の少なくとも1つのCGRP抗体または断片および薬剤的に許容される担体を含む、医薬または診断組成物。
[態様144] 少なくとも1つの安定剤をさらに含む、態様143の医薬または診断組成物。
[態様145] 凍結乾燥される、態様143もしくは144記載の医薬または診断組成物。
[態様146] Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6、Ab7、Ab8、Ab9、Ab10、Ab11、Ab12、Ab13またはAb14から選択される1つ以上の抗CGRP抗体、あるいはキメラもしくはヒト化抗体、またはそれから誘導される断片を含む、請求項143もしくは144記載の医薬もしくは診断組成物。
[態様147] 抗CGRP抗体またはAb2から選択される断片またはキメラもしくはヒト化抗体、またはそれから誘導される断片を含む、態様143もしくは144記載の医薬または診断組成物。
[態様148] 抗CGRP抗体またはAb3から選択される断片あるいはキメラもしくはヒト化抗体、またはそれから誘導される断片を含む、態様143または144記載の医薬もしくは診断組成物。
[態様149] 抗CGRP抗体またはAb6から選択される断片またはキメラもしくはヒト化抗体、またはそれから誘導される断片を含む、態様143または144記載の医薬もしくは診断組成物。
[態様150] 治療有効量の態様143〜149のいずれか1項に記載の医薬組成物を投与することを含む、GRPアンタゴニストの投与によって治療可能または予防可能な疾患または状態を治療する方法。
[態様151] 前記疾患が、偏頭痛(前兆を有する、または有しない)、体重減少、癌または腫瘍、癌または腫瘍成長に伴う血管形成、癌または腫瘍生存に伴う血管形成、片麻痺型偏頭痛、群発性頭痛、偏頭痛様神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般的頭痛、のぼせ、慢性発作性片側頭痛、頭頸部に内在する構造的問題による二次性頭痛、頭蓋神経痛、副鼻洞性頭痛(たとえば副鼻腔炎を伴うものなど)、アレルギー誘発性の頭痛もしくは偏頭痛、疼痛、炎症性痛覚、術後創疼痛、複合性局所疼痛症候群、癌性疼痛、原発性もしくは転移性骨癌性疼痛、骨折疼痛、骨粗鬆症性骨折痛、熱傷に起因する疼痛、骨粗鬆症、痛風性関節痛、鎌状赤血球発症に伴う疼痛、および他の侵害受容性疼痛、ならびに肝細胞癌、乳癌、肝硬変、神経性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、三叉神経痛、ヘルペス後神経痛、幻肢痛、線維筋痛、生理痛、卵巣痛、反射性交換神経性ジストロフィー、神経原性疼痛、骨関節炎痛もしくはリウマチ性関節炎痛、腰痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、または胃食道逆流に関連する内臓痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎疝痛、月経困難、膀胱炎、月経期、分娩、閉経、前立腺炎、または膵炎から選択される、態様150記載の方法。
[態様152] 前記疾患が、疼痛、疼痛を伴う障害、過活動膀胱、頭痛、または偏頭痛である、態様150記載の方法。
[態様153] 前記状態が、過活動膀胱、疼痛;慢性痛;神経原性炎症および炎症性痛覚;神経因性疼痛;眼痛;歯痛;手術後の痛み、外傷関連疼痛、糖尿病;非インシュリン依存型糖尿病および他の炎症性自己免疫障害、血管障害;炎症;関節炎;気管支過敏症、喘息;ショック;敗血症;アヘン製剤離脱症候群;モルヒネ耐性;男性および女性におけるのぼせ;アレルギー性皮膚炎;乾癬;脳炎;脳損傷;てんかん;神経変性疾患;掻痒症、神経性皮膚発赤、酒さおよび紅斑をはじめとする皮膚疾患;炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、膀胱炎;ならびに月経困難を含む、態様150記載の方法。
[態様154] 前記状態または障害が、偏頭痛、過活動膀胱、疾患もしくは状態に関連する疼痛、またはオピオイド鎮痛剤耐性である、態様150記載の方法。
[態様155] CGRP抗体または抗体断片を、別の治療薬の投与を含む疼痛に関連する特定の疾患または状態の治療のための治療的レジメンで投与する、態様150記載の方法。
[態様156] 前記他の治療薬が、化学療法薬、鎮痛剤、抗炎症薬、免疫抑制剤、サイトカイン、抗増殖剤、制吐剤および細胞毒素から選択される、態様155記載の方法。
[態様157] 前記他の治療薬が鎮痛剤である、態様155記載の方法。
[態様158] 前記他の鎮痛剤がNSAID、オピオイド鎮痛剤、抗体または非抗体生物製剤である、態様157記載の方法。
[態様159] 前記抗体がNGF抗体または抗体断片である、態様158記載の方法。
[態様160] 前記他の鎮痛剤が、シクロオキシゲナーゼ1および/またはシクロオキシゲナーゼ2阻害剤を含むNSAIDである、態様157記載の方法。
[態様161] 前記NSAIDが、(1)イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナック、およびケトプロフェンを含むプロピオン酸誘導体;(2)トルメチンおよびスリンダックを含む酢酸誘導体;(3)メフェナム酸およびメクロフェナム酸を含むフェナム酸誘導体;(4)ジフルニサルおよびフルフェニサルを含むビフェニルカルボン酸誘導体;ならびに(5)ピロキシム、スドキシカム、およびイソキシカムを含むオキシカムから選択される、態様160記載の方法。
[態様162] 前記他の鎮痛剤が、フェナントレン;フェニルヘプチルアミン;フェニルピペリジン;モルフィナン;またはベンゾモルファン化合物である、態様157記載の方法。
[態様163] 前記他の鎮痛剤が、コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、オキシモルフォン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニール、スフェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェンおよびペンタゾシンまたはそれらの薬剤的に許容される塩から選択されるオピオイド鎮痛剤である、態様157記載の方法。
[態様164] 前記オピオイド鎮痛剤およびCGRP抗体または抗体断片の併用投与が、それによって惹起される鎮痛効果を増加する、および/またはオピオイド鎮痛剤に対する耐性を軽減する、態様162または163記載の方法。
[態様165] 前記オピオイド鎮痛剤がモルヒネまたはモルヒネ誘導体またはその薬剤的に許容される塩である、態様164記載の方法。
[態様166] 診断上有効な量の、態様143〜149のいずれか1項に記載の診断組成物を投与すること含む、CGRPを発現する細胞の存在を検出するインビボ画像化法。
[態様167] 偏頭痛(前兆を有する、または有しない)、体重減少、癌または腫瘍、癌または腫瘍成長に伴う血管形成、癌または腫瘍生存に伴う血管形成、片麻痺型偏頭痛、群発性頭痛、偏頭痛様神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般的頭痛、のぼせ、慢性発作性片側頭痛、頭頸部に内在する構造的問題による二次性頭痛、頭蓋神経痛、副鼻洞性頭痛(たとえば副鼻腔炎を伴うものなど)、アレルギー誘発性の頭痛もしくは偏頭痛、疼痛、炎症性痛覚、術後創疼痛、複合性局所疼痛症候群、癌性疼痛、原発性もしくは転移性骨癌性疼痛、骨折痛、骨粗鬆症性骨折痛、熱傷に起因する疼痛、骨粗鬆症、痛風性関節痛、鎌状赤血球発症に伴う疼痛、および他の侵害受容性疼痛、ならびに肝細胞癌、乳癌、肝硬変、神経性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、三叉神経痛、ヘルペス後神経痛、幻肢痛、線維筋痛、生理痛、卵巣痛、反射性交換神経性ジストロフィー、神経原性疼痛、骨関節炎痛もしくはリウマチ性関節炎痛、腰痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、または胃食道逆流に関連する内臓痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎疝痛、月経困難、膀胱炎、月経期、分娩、閉経、前立腺炎、または膵炎のための有効な治療プロトコルの設計のための計画レジメンの一部として使用される、態様166の方法。
[態様168] 前記治療プロトコルが、1つ以上の抗ヒスタミン剤、抗炎症薬、または抗生物質を含む、態様167記載の方法。
[態様169] 前記抗体が態様1〜22または98〜116のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または断片を含む、態様168記載の方法。
[態様170] 前記抗体断片が、scFv、キャメルボディ、ナノボディ、IgNAR、SMIP、またはそれらの組み合わせ、トランケーションもしくは修飾物から選択される単鎖抗体である、態様169記載の抗体。
[態様171] CGRPと結合し、CGRPとCGRP‐Rとの会合を阻害し、その生物学的効果を拮抗する、単離された抗CGRP抗体。
[態様172] 前記抗体が、Ab2、Ab3、Ab5、Ab6、Ab13、またはAb14から選択される、態様171記載の単離された抗CGRP抗体。
[態様173] CGRPとCGRP‐Rとの会合を阻害し、その生物学的効果を拮抗する、単離された抗CGRP抗体断片。
[態様174] 前記抗体断片がAb2、Ab3、Ab5、Ab6、Ab13もしくはAb14と同じエピトープと結合する、態様173記載の単離された抗CGRP断片。
[態様175] 前記抗体がAb3、Ab6、Ab13またはAb14またはその断片である、態様174記載の単離された抗CGRP抗体または断片。
[態様176] Ab3、Ab6、Ab13またはAb14と同じCDRを含む、態様174記載の単離された抗CGRP抗体または断片。
[態様177] CGRPとCGRP‐Rとの会合を阻害する、有効量の抗CGRP抗体またはその断片を投与することを含む、疼痛を治療する方法。
[態様178] 前記抗体がAb3、Ab6、Ab13またはAb14またはその断片である、態様177記載の方法。
[態様179] 前記抗体がAb3、Ab6、Ab13またはAb14と同じCDRを含む、態様177記載の方法。
[態様180] 前記疼痛が、筋骨格系への外傷、熱傷、または手術前または手術後に伴うか、あるいは胃食道逆流、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎疝痛、月経困難、膀胱炎、月経期、分娩、閉経、前立腺炎、乾癬、IBD、または膵炎に伴う内臓痛である、態様177記載の方法。
[態様181] 前記抗体がAb3、Ab6、Ab13もしくはAb14であるか、または抗体断片がAb3、Ab6、Ab13もしくはAb14から誘導される、態様180記載の方法。
[態様182] 前記抗体または抗体断片がAb3、Ab6、Ab13またはAb14と同じCDRを含む、態様180記載の方法。
[態様183] CGRPとCGRP‐Rとの会合を阻害する、有効量の抗CGRP抗体またはその断片を投与することを含む、偏頭痛を治療する方法。
[態様184] 前記抗体がAb2、Ab3、Ab5、Ab6、Ab13もしくはAb14であるか、または抗体断片がAb2、Ab3、Ab5、Ab6、Ab13もしくはAb14から誘導される、態様183記載の方法。
[態様185] CGRPとCGRP‐Rとの会合を阻害する、有効量の抗CGRP抗体またはその断片を投与することを含む、非偏頭痛性頭痛を治療する方法。
[態様186] 前記抗体がAb2、Ab3、Ab5、Ab6、Ab13もしくはAb14であるか、または抗体断片がAb2、Ab3、Ab5、Ab6、Ab13もしくはAb14から誘導される、態様185記載の方法。
[態様187] 前記抗体または抗体断片がAb2、Ab3、Ab5、Ab6、Ab13またはAb14と同じCDRを含む、態様185記載の方法。
[態様188] CGRPに対する結合特異性を有し、以下のものから選択される可変軽鎖CDR1、CDR2、およびCDR3ポリペプチド配列ならびに可変重鎖CDR1、CDR2、およびCDR3ポリペプチド配列を含む、抗CGRP抗体または抗体断片:
[態様189] 前記抗体断片が、scFv、キャメルボディ、ナノボディ、IgNAR(サメ由来の単鎖抗体)、Fab、Fab’、またはF(ab’)2断片である、態様188記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様190] 前記抗体断片がFab断片である、態様188記載の抗CGRP抗体断片。
[態様191] 以下から選択される、可変軽鎖ポリペプチド配列および可変重鎖ポリペプチド配列を含む態様188に記載の抗CGRP抗体または抗体断片:
[態様192] 以下から選択される軽鎖ポリペプチド配列および重鎖ポリペプチド配列を含む、態様188に記載の抗CGRP抗体または抗体断片:
[態様193] 可変軽鎖および可変重鎖ポリペプチド配列がそれぞれ、配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、または131の可変軽鎖ポリペプチド配列のうちの1つ、および配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123または133の可変重鎖ポリペプチド配列のうちの1つとそれぞれ少なくとも90%同一である、態様188〜192のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様194] キメラまたはヒト化である、態様188〜193のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様195] 非グリコシル化であるか、またはマンノース残基のみを含む、態様188〜194のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様196] ヒト定常ドメインを含む、態様188〜193のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様197] IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4抗体である、態様196記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様198] エフェクター機能、半減期、タンパク質分解、および/またはグリコシル化の少なくとも1つを変更するために修飾されたFc領域を含む、態様188〜196のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様199] 前記Fc領域がグリコシル化を変更または除去する突然変異を含む、態様198記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様200] 検出可能な標識または治療薬に直接的または間接的に結合されている、態様188〜199のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様201] エフェクター部分をさらに含む、態様188〜199のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様202] 前記エフェクター部分が検出可能な部分または機能部分である、態様201記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様203] 前記検出可能な部分が、蛍光色素、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、または化学発光物質である、態様202記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様204] 前記機能部分が、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞毒性薬、または放射性物質である、態様202記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様205] 可変軽鎖および可変重鎖ポリペプチド配列がそれぞれ、配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121または131の可変軽鎖ポリペプチド配列の可変軽鎖ポリペプチド配列の1つ、および配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123または133の可変重鎖ポリペプチド配列の1つとそれぞれ少なくとも95%同一である、態様188〜204のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様206] 可変軽鎖および可変重鎖ポリペプチド配列がそれぞれ、配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121または131の可変軽鎖ポリペプチド配列の可変軽鎖ポリペプチド配列の1つ、および配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123または133の可変重鎖ポリペプチド配列の1つとそれぞれ少なくとも98%同一である、態様188〜205のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様207] 可変軽鎖および可変重鎖ポリペプチド配列が、それぞれ、配列番号1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121または131の可変軽鎖ポリペプチド配列の1つ、および配列番号3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123または133の可変重鎖ポリペプチド配列の1つとそれぞれ少なくとも99%同一である、態様188〜206のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片。
[態様208] 態様1〜17または態様188〜207のいずれか1項に記載の抗CGRP抗体または抗体断片を含む組成物。
[態様209] 治療または診断用途に適している、態様208記載の組成物。
[態様210] 少なくとも1つの安定剤を更に含む、態様208記載の組成物。
[態様211] 凍結乾燥される態様208記載の組成物。
Claims (29)
- 単離された抗ヒトCGRP抗体または抗体断片であって、
配列番号25のVL 相補性決定領域CDR1、配列番号26のVL CDR2、および配列番号27のVL CDR3を含む可変軽鎖(VL)、ならびに配列番号28のVH CDR1、配列番号29のVH CDR2、および配列番号30のVH CDR3を含む可変重鎖(VH)を含む、
前記抗体または抗体断片。 - 前記抗ヒトCGRP抗体または抗体断片が:
(i)配列番号23に記載のアミノ酸配列を有する可変重鎖(VH)、またはそれらと少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、もしくは少なくとも99%の配列同一性を示すその変異体;および/または、
(ii)配列番号21に記載のアミノ酸配列を有する可変軽鎖(VL)、またはそれらと少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、もしくは少なくとも99%の配列同一性を示すその変異体;
を含む、請求項1記載の単離された抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。 - 前記抗ヒトCGRP抗体または抗体断片が:
配列番号21に記載のアミノ酸配列を有する可変軽鎖(VL)、および配列番号23に記載のアミノ酸配列を有する可変重鎖(VH)、
を含む、請求項1又は2に記載の単離された抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。 - 前記抗ヒトCGRP抗体または抗体断片が、さらに配列番号24に記載のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号22に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項3に記載の単離された抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
- 前記抗ヒトCGRP抗体または抗体断片が、場合により少なくとも一つのFc媒介エフェクター機能を障害するか又は増加するように修飾されたIgG1、IgG2、IgG3またはIgG4から選択されるヒト定常ドメインを含む、 請求項1〜4のいずれか1項記載の単離された抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
- 前記抗ヒトCGRP抗体または抗体断片が、場合により少なくとも一つのFc媒介エフェクター機能を障害するか又は増加するように修飾されたヒトIgG1定常ドメインを含む、 請求項5に記載の単離された抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
- 前記ヒトIgG1が障害されたエフェクター機能を有する、請求項6に記載の単離された抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。
- (i)アグリコシル化されている;
(ii)グリコシル化されているが、マンノース残基のみを含む;
(iii)N−グリコシル化されていない;
(iv)エフェクター機能、半減期、タンパク質分解、および/またはグリコシル化を改変するために修飾されたFc領域を含む;
(v)ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、または一価抗体である;
(vi)Fab断片、Fab’断片、またはF(ab’)2断片から選択される抗体断片である;
(vii)検出可能な標識または治療薬に直接または間接的に結合されている;
(viii)前記抗体がCGRPと10−4S−1、5×10−5S−1、10−5S−1、5×10−6S−1、10−6S−1、5×10−7S−1、または10−7S−1以下の解離速度(Koff)で結合する;
(ix)CGRPとCGRP−Rおよび/またはそのマルチマー、CGRP−CGRP−R複合体中の1つ以上のさらなるタンパク質との会合を阻害する、および/またはその生物学的効果を拮抗する;ならびに/または、
(x)検出可能な部分または機能部分であるエフェクター部分をさらに含み、ここで前記検出可能な部分が、場合により、蛍光色素、酵素、基質、生物発光物質、放射性物質、または化学発光物質であり、前記機能部分が、場合により、ストレプトアビジン、アビジン、ビオチン、細胞毒素、細胞毒性薬、または放射性物質である;
請求項1〜7のいずれか1項記載の単離された抗ヒトCGRP抗体または抗体断片。 - 請求項1〜8のいずれか一項記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片をコードする核酸(複数可)であって、前記核酸(複数可)が、場合により、酵母またはヒトの好ましいコドンから構成される、前記核酸(複数可)。
- 請求項9記載の核酸(複数可)を含むベクターであって、場合により、プラスミドまたは組み換えウイルスベクターである、前記ベクター。
- 請求項9記載の核酸(複数可)、および/または請求項10記載のベクターによってコードされる抗体または抗体断片を発現する培養細胞または組み換え細胞。
- 酵母、哺乳動物、細菌、真菌、または昆虫細胞から選択され、場合により前記細胞が二倍体ピキア酵母またはCHO細胞から選択される、請求項11記載の培養細胞または組み換え細胞。
- 予防的または治療有効量の請求項1〜8のいずれか1項記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片を含む医薬組成物。
- CGRPに関連する疾患または状態を治療、改善、軽減または予防するための医薬組成物であって、予防的または治療有効量の請求項1〜8のいずれか1項記載の抗ヒトCGRP抗体または抗体断片を含む、前記医薬組成物。
- 請求項14記載の医薬組成物であって、
CGRPに関連する疾患または状態が、前兆を有する偏頭痛、前兆を有しない偏頭痛、体重減少、癌もしくは腫瘍、癌もしくは腫瘍成長に伴う血管形成、癌もしくは腫瘍生存に伴う血管形成、慢性偏頭痛、反復発作性偏頭痛、月経性偏頭痛、片麻痺型偏頭痛、群発性頭痛、偏頭痛様神経痛、慢性頭痛、緊張性頭痛、一般的頭痛、のぼせ、慢性発作性片側頭痛、頭部に内在する構造的問題による二次性頭痛、頸部に内在する構造的問題による二次性頭痛、頭蓋神経痛、副鼻洞性頭痛、アレルギー誘発性の頭痛、アレルギー誘発性の偏頭痛、疼痛、炎症性痛覚、術後創疼痛、複合性局所疼痛症候群、癌性疼痛、原発性もしくは転移性骨癌性疼痛、骨折痛、骨粗鬆症性骨折痛、熱傷に起因する疼痛、骨粗鬆症、痛風性関節痛、鎌状赤血球発症に伴う疼痛、肝細胞癌、乳癌、肝硬変、神経性疼痛、神経因性疼痛、侵害受容性疼痛、三叉神経痛、ヘルペス後神経痛、幻肢痛、線維筋痛、卵巣痛、反射性交換神経性ジストロフィー、神経原性疼痛、骨関節炎痛、リウマチ性関節炎痛、腰痛、糖尿病性神経障害、坐骨神経痛、胃食道逆流と関連する内臓痛、消化不良、過敏性腸症候群、炎症性腸疾患、クローン病、回腸炎、潰瘍性大腸炎、腎疝痛、月経困難、膀胱炎、月経期、分娩、閉経、前立腺炎、または膵炎であり、
ここで、場合により、前記疾患が、過活動膀胱、尿失禁、疼痛、慢性痛、神経原性炎症、炎症性痛覚、神経因性疼痛、眼痛、歯痛、手術後の痛み、外傷関連疼痛、糖尿病、非インシュリン依存型糖尿病、炎症性自己免疫障害、血管障害、炎症、関節炎、気管支過敏症、喘息、ショック、敗血症、アヘン製剤離脱症候群、モルヒネ耐性、男性および女性におけるのぼせ、アレルギー性皮膚炎、乾癬、脳炎、脳損傷、てんかん、神経変性疾患、皮膚疾患、掻痒症、神経性皮膚発赤、酒さおよび紅斑をはじめとする皮膚疾患、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、膀胱炎、または月経困難であり、
ここで、場合により、前記疾患が、疼痛、過活動膀胱、尿失禁、頭痛または偏頭痛である、前記医薬組成物。 - 鎮痛剤、抗ヒスタミン剤、抗炎症薬、抗生物質、化学療法薬、免疫抑制剤、サイトカイン、抗増殖剤、制吐剤、または細胞毒素から選択される別の治療薬とともに用いるための、請求項14または15記載の医薬組成物。
- 請求項16記載の医薬組成物であって、
前記鎮痛剤がNSAID、オピオイド鎮痛剤、抗体もしくは抗体断片、または非抗体生物製剤から選択され、
(i)前記NSAIDが、シクロオキシゲナーゼ1および/もしくはシクロオキシゲナーゼ2阻害剤;イブプロフェン、ナプロキセン、ナプロシン、ジクロフェナック、およびケトプロフェンをはじめとするプロピオン酸誘導体;トルメチンおよびスリンダックをはじめとする酢酸誘導体;メフェナム酸およびメクロフェナム酸をはじめとするフェナム酸誘導体;ジフルニサルおよびフルフェニサルをはじめとするビフェニルカルボン酸誘導体;ならびにピロキシム(piroxim)、スドキシカム、およびイソキシカムをはじめとするオキシカムから選択され、
(ii)前記オピオイド鎮痛剤が、コデイン、ジヒドロコデイン、ジアセチルモルヒネ、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、レボルファノール、オキシモルフォン、アルフェンタニル、ブプレノルフィン、ブトルファノール、フェンタニール、スフェンタニル、メペリジン、メタドン、ナルブフィン、プロポキシフェン、ペンタゾシン、もしくはその薬剤的に許容される塩、またはモルヒネ、モルヒネ誘導体、もしくはその薬剤的に許容される塩から選択され、
(iii)前記抗体または抗体断片が、好ましくは、NGF抗体または抗体断片である、前記医薬組成物。 - 請求項13〜17のいずれか一項記載の医薬組成物であって、対象に投与された際に投与対象の体重1kgあたり0.1〜100.0mgの濃度を提供する抗CGRP抗体またはその断片を含む、前記医薬組成物。
- 請求項18に記載の医薬組成物であって、前記濃度が投与対象の体重1kgあたり0.4mgの濃度である、前記医薬組成物。
- 請求項13〜19のいずれか一項記載の医薬組成物であって、26週間に1回またはそれより低い頻度、16週間に1回またはそれより低い頻度、8週間に1回またはそれより低い頻度、4週間に1回またはそれより低い頻度、2週間に1回またはそれより低い頻度、1週間に1回またはそれより低い頻度、または1日に1回またはそれより低い頻度で、対象に投与される、前記医薬組成物。
- 請求項13〜20のいずれか一項記載の医薬組成物であって、前記抗CGRP抗体断片がFab断片である、前記医薬組成物。
- 請求項21に記載の医薬組成物であって、前記Fab断片を含む医薬組成物は、投与対象の体重1kgあたり0.1〜40mgの濃度を提供するFab断片を含む、前記医薬組成物。
- 請求項21又は22記載の医薬組成物であって、前記Fab断片を含む医薬組成物は2週間に1回またはそれより低い頻度、1週間に1回またはそれより低い頻度、または1日に1回またはそれより低い頻度で、1日に複数回、または数時間ごとに対象に投与するのに適している、前記医薬組成物。
- 請求項13〜23のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は筋肉内、皮下、静脈内、直腸内、注入、経口、経皮、腹腔内、または吸入投与に適している、前記医薬組成物。
- 請求項24記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は筋肉内、皮下、または静脈内投与に適している、前記医薬組成物。
- 請求項13〜25のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物はさらに薬剤的に許容可能な賦形剤または担体を含む、前記医薬組成物。
- 請求項26記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物はさらにリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を含む、前記医薬組成物。
- 請求項13〜27のいずれか一項記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は許容される安定剤をさらに含む、前記医薬組成物。
- 請求項13〜28のいずれか一項記載の医薬組成物であって、前記医薬組成物は凍結乾燥されたものである、前記医薬組成物。
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