CN109952314A - 治疗难治性偏头痛 - Google Patents

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Abstract

本文中公开了在患有难治性偏头痛的对象中治疗偏头痛和/或与难治性偏头痛相关的至少一种继发症状或降低其发病率的方法，其包括向所述对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体。还提供了用于所公开方法的组合物。还描述了针对CGRP的拮抗剂抗体G1以及来自于G1的抗体。

Description

治疗难治性偏头痛
相关申请的交叉引用
本申请要求于2016年9月23日提交的美国申请No.62/399,180和于2017年9月14日提交的美国申请No.62/558,557的优先权权益。这些在先申请的内容在此通过引用整体并入。
背景技术
偏头痛是以头痛和相关症状(例如恶心、呕吐、畏光和/或恐声)的发作为特征的普遍的神经病症。在美国和西欧，偏头痛患者的总体患病率为总人群的11％(6％男性；15％至18％女性)。两种最常见的偏头痛形式(无先兆型偏头痛和先兆型偏头痛)每月发生小于15天，并且被称为阵发性偏头痛形式(episodic form of migraine，EM)(Lipton et al，Neurology 68(5)：343-349，2007)。然而，在任何给定年份，3％至6％的患有EM的个体进展为显著更失能的病症，称为慢性偏头痛(chronic migraine，CM)(Scher et al，Pain 106(1-2)：81-89，2003)。患有CM的个体每月15天或更多天出现任何严重程度的头痛，并且每月至少8天具有全面偏头痛(full-blown migraine)。相当大的一部分患有CM的个体每天都经历头痛，并因此面临相当大的失能(Bigal和Lipton，Neurology 71(11)：848-855，2008)。
在许多情况下，包括在每月发作的频率为2次或更高时或在患者的生命质量严重受损时，偏头痛的预防性药物治疗可以是合适的(Evers et al.，Europ.J.Neurol.16：968-981，2009)。来自不同药理学类别的许多药物(例如β阻滞剂、抗惊厥剂)已被批准用于偏头痛预防或具有A类证据以支持其用途。然而，患者对这些药物中的一些的响应和耐受性不同，并且对这些药物的依从性和顺从性可较差(Puledda et al.，J.Neurol.Mar 20.doi：10.1007/s00415-017-8434，2017)。
降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide，CGRP)是已被发现参与中枢和外周两种情况之偏头痛过程的神经肽(Eftekhari和Edvinsson，Ther.Adv.Neurol.Disord.3(6)：369-378，2010，Olesen，Cephalagia 31(5)：638，2011)。在偏头痛发作期间，CGRP的颈静脉水平升高，并且静脉内(intravenous，iv)CGRP施用在大多数患有偏头痛的个体中诱导偏头痛样头痛(Ashina et al.，Neurology 55(9)：1335-1340,2000，Hansen et al.，Cephalagia 30(1)：1179-1186，2010)。CGRP参与外周(血管扩张、炎症和蛋白质外渗)、三叉神经节处和脑内部的所有水平的偏头痛病理生理学(Ho et al.，Nat.Rev.Neurol.6(10)：573-582，2010)。研究已表明，抑制CGRP或拮抗CGRP受体已示出在EM(Bigal et al.，Lancet Neurol.14：1081-1090，2015a，Hewitt et al.，Cephalagia 31(6)：712-722，2011，Ho et al.，Lancet 372(9656)：2115-2123，2008，Olesen et al.，N.Engl.J.Med.350(11)：1104-1110，2004)和CM(Bigal et al.，Lancet Neurol.14：1091-1100，2015b)治疗中的效力。
因此，调节CGRP途径的单克隆抗体代表了用于对CM和EM的先前预防性治疗失败的患者的一类有希望的治疗候选物。
发明概述
本文中公开了抗CGRP拮抗剂抗体以及使用所述抗CGRP拮抗剂抗体用于在患有难治性偏头痛(refractory migraine)的对象(即，对先前预防性偏头痛治疗没有良好响应的对象)中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法。本文中还公开了在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体。
还提供了在对象中预防、治疗与难治性偏头痛相关的至少一种继发症状或降低其发病率的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体。在一些实施方案中，施用于患者的单克隆抗体的量可以是约225mg至约1000mg，例如约675mg或约900mg。因此，在一些方面，在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法可包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体，其中施用于患者的单克隆抗体的量可以是约225mg至约1000mg，例如约675mg或约900mg。在另一些方面，还提供了在对象中预防、治疗与难治性偏头痛相关的至少一种继发症状或降低其发病率的方法，其可包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体，其中施用于患者的单克隆抗体的量可以是约225mg至约1000mg，例如约675mg或约900mg。在一个实施方案中，给药方案包括皮下施用约675mg的初始抗体剂量(或起始抗体剂量)，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。另一给药方案包括以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的初始或起始剂量，然后每季度以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的剂量持续例如约1年、2年、3年、4年或5年。另一给药方案包括施用皮下施用的约675mg的初始或起始剂量，然后施用每季度皮下施用的约675mg的剂量持续例如约1年、2年、3年、4年或5年。
合适的施用方案包括但不限于每月或每季度剂量或单次剂量。在一些实施方案中，单克隆抗体可每月施用。例如，单克隆抗体可每月施用，持续1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多个月。在一些方面，单克隆抗体可每月施用，持续3或更多个月。当每月施用时，施用于患者的单克隆抗体的剂量可以是约225mg至约900mg。
单克隆抗体可作为单次剂量施用。当作为单次剂量施用时，施用于患者的单克隆抗体的剂量可以是约675mg至约1000mg。
治疗或降低可包括降低任何严重程度的头痛小时数、降低任何严重程度的每月头痛日数、降低任何急性头痛药物(例如，偏头痛特异性急性头痛药物)的使用、降低6项头痛影响测试(6-item Headache Impact Test，HIT-6)失能评分、提高12项简式健康调查(12-Item Short Form Health Survey，SF-12)评分(Ware et al.，Med Care 4：220-233，1996)、降低患者总体变化印象(Patient Global Impression of Change，PGIC)评分(Hurst et al.，J Manipulative Physiol Ther 27：26-35，2004)、提高运动震荡评估工具3(Sport ConCuSSion ASSeSment tool 3，SCAT-3)评分(McCrory et al.British Journalof Sports Medicine 47：263-266，2013)、或其任意组合。在一些实施方案中，在单次施用之后，每月头痛日数可降低至少七天。
在一些实施方案中，相对于对象中的施用前水平，对象在所述施用之后经历的每月头痛小时数降低40或更多个小时(例如，45、50、55、60、65、70、75、80或更多)。每月头痛小时数可降低超过60个小时。在一些实施方案中，相对于对象中的施用前水平，对象在所述施用之后经历的每月头痛小时数降低25％或更多(例如，30％、35％、40％、45％、50％或更多)。每月头痛小时数可降低40％或更多。在一些实施方案中，相对于对象中的施用前水平，对象在所述施用之后经历的每月头痛日数降低3或更多天(例如，3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多天)。在一些实施方案中，相对于对象中的施用前水平，每月头痛日数可降低至少约50％。因此，在一些方面，每月头痛日数可降低至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％或至少约90％。
在一些实施方案中，施用可以是皮下施用。在一些实施方案中，施用可以是静脉内施用。在一些实施方案中，施用可包括利用包含单克隆抗体之剂量的预填充注射器、具有针安全装置之预填充注射器、注射笔(injection pen)或自动注射器(auto-injector)。在一些实施方案中，单克隆抗体可以以至少150mg/mL的浓度配制。在一些实施方案中，单克隆抗体可以以小于2mL(例如，约1.5mL)的体积施用。
在一些实施方案中，所述方法还包括与单克隆抗体同时或先后向所述对象施用第二药剂。在一个实施方案中，第二药剂是急性头痛治疗(例如，偏头痛特异性急性头痛治疗)。因此，第二药剂可以是任何镇痛剂(例如，乙酰水杨酸、布洛芬、萘普生、双氯芬酸、对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸加对乙酰氨基酚加咖啡因、安乃近(metamizol)、安替比林(phenazon)或托芬那酸(tolfenamic acid))；止吐剂(例如，甲氧氯普胺(metoclopramide)或多潘立酮(domperidon))；麦角生物碱类(例如，酒石酸麦角胺或二氢麦角胺)；以及曲坦类(triptans)，即5-HT1激动剂(例如，舒马曲坦、佐米曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、阿莫曲坦、依来曲坦或氟伐曲坦)。
在一些实施方案中，在施用单克隆抗体之后，对象对第二药剂的每月使用降低至少约15％，例如至少16％、17％、18％、20％、22％、25％、28％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或至少约95％。在一些实施方案中，第二药剂是曲坦类。
在一些实施方案中，对象是人。
单克隆抗体可以是抗CGRP拮抗剂抗体。在一些实施方案中，单克隆抗体是人单克隆抗体或人源化单克隆抗体。在一些实施方案中，单克隆抗体包括：(a)抗体，其具有SEQ IDNO：3所示CDR H1；SEQ ID NO：4所示CDR H2；SEQ ID NO：5所示CDR H3；SEQ ID NO：6所示CDRL1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQ ID NO：8所示CDR L3；或(b)如表6中所示的根据(a)的抗体的变体。
还公开了降低患有难治性偏头痛的对象经历的每月头痛小时数的方法。在一个实施方案中，所述方法包括向对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体，其中单克隆抗体的量为在单次剂量之后有效地使每月头痛小时数降低至少20(例如，25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或更多个头痛小时)。在一些实施方案中，每月头痛小时数降低至少约50个小时。在一个实施方案中，所述方法包括向对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体，其中单克隆抗体的量为在单次剂量之后有效地使每月头痛小时数降低至少15％(例如20％、25％、30％、35％、40％或更多)。在一些实施方案中，每月头痛小时数降低至少约30％。在一些实施方案中，单克隆抗体是抗CGRP拮抗剂抗体。在一些实施方案中，施用于患者的单克隆抗体的量为约225mg至约1000mg。在一些实施方案中，单克隆抗体每月施用。在一些实施方案中，单克隆抗体作为单次剂量施用。在一些实施方案中，所述施用是皮下或静脉内施用。在一些实施方案中，单克隆抗体以至少150mg/mL的浓度配制。在一些实施方案中，单克隆抗体以小于2mL(例如约1.5mL)的体积施用。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，单克隆抗体是人的或人源化的。在一些实施方案中，单克隆抗体包括：(a)抗体，其具有SEQ ID NO：3所示CDR H1；SEQ ID NO：4所示CDR H2；SEQ ID NO：5所示CDR H3；SEQ ID NO：6所示CDR L1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQ ID NO：8所示CDR L3；或(b)如表6中所示的根据(a)的抗体的变体。
还公开了降低患有难治性偏头痛的对象经历的每月头痛日数的方法。在一个实施方案中，所述方法包括向所述对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体，其中单克隆抗体的量为在单次剂量之后有效地使每月头痛日数降低至少3(例如，3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个头痛日)。在一些实施方案中，每月头痛日数降低至少约6个头痛日。在一些实施方案中，相对于对象中的施用前水平，每月头痛日数可降低至少约50％。因此，在一些方面，每月头痛日数可降低至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％或至少约90％。在一些实施方案中，单克隆抗体是抗CGRP拮抗剂抗体。在一些实施方案中，施用于患者的单克隆抗体的量为约225mg至约1000mg。在一些实施方案中，单克隆抗体每月施用。在一些实施方案中，单克隆抗体作为单次剂量施用。在一些实施方案中，所述施用是皮下或静脉内施用。在一些实施方案中，单克隆抗体以至少150mg/mL的浓度配制。在一些实施方案中，其中单克隆抗体以小于2mL(例如约1.5mL)的体积施用。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，单克隆抗体是人的或人源化的。在一些实施方案中，单克隆抗体包括：(a)抗体，其具有SEQ ID NO：3所示CDR H1；SEQ ID NO：4所示CDR H2；SEQ ID NO：5所示CDR H3；SEQ ID NO：6所示CDRL1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQ ID NO：8所示CDR L3；或(b)如表6中所示的根据(a)的抗体的变体。
还公开了在患有难治性偏头痛的对象中降低任何急性头痛药物之使用的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，抗CGRP拮抗剂抗体)，其中单克隆抗体的量为有效地使对象对头痛药物的每月使用降低至少15％(例如，20％、25％、30％、35％、40％或更多)。在一些实施方案中，急性头痛药物选自：5-HT1激动剂、曲坦类、阿片类、麦角生物碱类和非甾体抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drug，NSAID)。在一些实施方案中，急性头痛药物选自镇痛剂(例如，乙酰水杨酸、布洛芬、萘普生、双氯芬酸、对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸加对乙酰氨基酚加咖啡因、安乃近、安替比林或托芬那酸)；止吐剂(例如，甲氧氯普胺或多潘立酮)；麦角生物碱类(例如，酒石酸麦角胺或二氢麦角胺)；以及曲坦类，即5-HT1激动剂(例如，舒马曲坦、佐米曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、阿莫曲坦、依来曲坦或氟伐曲坦)。在一些实施方案中，急性头痛药物是曲坦类。在一些实施方案中，施用于患者的单克隆抗体的量为约225mg至约1000mg，例如约675mg或约900mg。在一些实施方案中，单克隆抗体每月施用。在一些实施方案中，单克隆抗体作为单次剂量施用。在一些实施方案中，所述施用是皮下或静脉内施用。在一些实施方案中，单克隆抗体以至少150mg/mL的浓度配制。在一些实施方案中，其中单克隆抗体以小于2mL(例如约1.5mL)的体积施用。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，单克隆抗体是人的或人源化的。在一些实施方案中，单克隆抗体包括：(a)抗体，其具有SEQ ID NO：3所示CDR H1；SEQ ID NO：4所示CDR H2；SEQ IDNO：5所示CDR H3；SEQ ID NO：6所示CDR L1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQ ID NO：8所示CDR L3；或(b)如表6中所示的根据(a)的抗体的变体。
在一个方面，本发明提供了在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法，其包括以调节CGRP途径的量向对象皮下施用负荷剂量的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)，其中单克隆抗体的量为约225mg至约1000mg，例如约675mg(例如，三次皮下注射，每次225mg)，然后每月皮下注射约100mg至约1000mg，例如约225mg，持续约1至12个连续月，例如5个连续月。
在一些实施方案中，所述方法包括选择对选自以下的偏头痛治疗没有良好响应的对象：托吡酯、卡马西平、双丙戊酸钠、丙戊酸钠、丙戊酸、氟桂利嗪、坎地沙坦、苯噻啶(pizotifen)、阿米替林、文拉法辛、去甲替林、度洛西汀、阿替洛尔、纳多洛尔、美托洛尔、普萘洛尔、比索洛尔(bisopropol)、噻吗洛尔和奥那肉毒毒素A(onabotulinumtoxinA)。在一些实施方案中，所述方法包括选择对选自以下的偏头痛治疗没有良好响应的对象：托吡酯、卡马西平、双丙戊酸钠、丙戊酸钠、氟桂利嗪、苯噻啶、阿米替林、文拉法辛、去甲替林、度洛西汀、阿替洛尔、纳多洛尔、美托洛尔、普萘洛尔、噻吗洛尔和奥那肉毒毒素A。在一些实施方案中，所述方法包括选择对选自以下的偏头痛治疗没有良好响应的对象：普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔、比索洛尔、托吡酯、阿米替林、氟桂利嗪、坎地沙坦、奥那肉毒毒素A和丙戊酸。在一些实施方案中，所述方法包括选择对选自以下的偏头痛治疗没有良好响应的对象：普萘洛尔/美托洛尔、托吡酯、氟桂利嗪、丙戊酸类/双丙戊酸类(valproate/divalproex)、阿米替林、文拉法辛、赖诺普利、坎地沙坦和局部批准的产品(例如奥昔托隆(oxeterone)或苯噻啶)。在另一些实施方案中，所述方法包括选择对以下类别的一种或更多种偏头痛治疗没有良好响应的对象：β-阻滞剂、抗惊厥剂、三环类、钙通道阻滞剂、血管紧张素II受体拮抗剂。例如，对象可具有对至少两种预防性药物(来自如下定义的不同群集(cluster))的有记录的不充分响应(在医学图表中或通过治疗医师的确认)。或者，对象可具有对二至四种类别的先前预防性药物(例如来自如下定义的不同群集)的有记录的不充分响应(在医学图表中或通过治疗医师的确认)。作为另一个实例，对象可具有对二至三种类别的先前预防性药物(来自如下定义的不同群集)和丙戊酸类(例如，双丙戊酸钠、丙戊酸钠或丙戊酸)的有记录的不充分响应(在医学图表中或通过治疗医师的确认)。
不充分响应定义为：在以根据公认的国家指南认为适合于偏头痛预防的稳定剂量治疗至少三个月之后，或者由于致使患者不耐受的不良事件或者药物对于患者是禁忌或不适合的而必须中断治疗时，根据治疗医师的判断没有临床意义上的改善。如果药物对于患者是不耐受的或者禁忌或不适合的，则三个月的时间可以不适用。对于奥那肉毒毒素A，不充分响应定义为：在以根据公认的国家指南认为适合于偏头痛预防的稳定剂量治疗至少六个月之后，或者由于致使患者不耐受的不良事件而必须中断治疗时，根据治疗医师的判断没有临床意义上的改善。或者，如果奥那肉毒毒素A是先前预防性药物，则自最后一组注射起应经过了至少两组注射和三个月。
在一些实施方案中，群集如下：
·群集A：托吡酯、卡马西平、双丙戊酸钠和丙戊酸钠
·群集B：氟桂利嗪和苯噻啶
·群集C：阿米替林、文拉法辛、去甲替林和度洛西汀
·群集D：阿替洛尔、纳多洛尔、美托洛尔、普萘洛尔和噻吗洛尔
·群集E：奥那肉毒毒素A
在一些实施方案中，群集如下：
·群集A：β-阻滞剂：普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔和比索洛尔
·群集B：抗惊厥剂：托吡酯
·群集C：三环类：阿米替林
·群集D：钙通道阻滞剂：氟桂利嗪
·群集E：血管紧张素II受体拮抗剂：坎地沙坦
·群集F：奥那肉毒毒素A
·群集G：丙戊酸
另外的群集(其可包含在上述群集的任何一个组中)包括：
·群集a：血管紧张素转换酶(angiotensin-converting enzyme，ACE)抑制剂，例如赖诺普利
·群集b：基于苯并环庚烯的药物，例如苯噻啶
·群集c：抗抑郁药，例如阿米替林(Elavil)、曲唑酮(Desyrel)、丙咪嗪(Tofranil)和文拉法辛
·群集d：抗惊厥剂，例如苯妥英(Dilantin)或卡马西平(Tegretol)
·群集e：奥昔托隆
在一个方面，本发明提供了在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法，其包括以调节CGRP途径的量向对象施用单次剂量的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)，其中单克隆抗体的量为约225mg至约1000mg，例如约675mg或约900mg。在一个实施方案中，对象对于选自托吡酯、奥那肉毒毒素A和丙戊酸的至少两种不同的预防性治疗是难治性的。在一个实施方案中，对象对于用托吡酯、奥那肉毒毒素A和丙戊酸的预防性治疗是难治性的。
在一个方面，本发明提供了在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法，其包括以调节CGRP途径的量向对象施用单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)，其中单克隆抗体的量为约225mg至约1000mg，例如约675mg或约900mg。在一个实施方案中，对象对于选自托吡酯、奥那肉毒毒素A和丙戊酸的至少两种不同的预防性治疗是难治性的。在一个实施方案中，对象对于用托吡酯、奥那肉毒毒素A和丙戊酸的预防性治疗是难治性的。在一些实施方案中，单克隆抗体作为单次剂量施用。
在另一个实施方案中，本发明提供了用于在诊断为难治性偏头痛(参见例如本文中所述的标准)的个体中预防、治疗、改善、控制偏头痛，降低其发病率、或延迟其发生或进展的方法，其包括向所述个体施用有效量的与至少一种另外的急性头痛药物或可用于治疗偏头痛的药剂组合的抗CGRP拮抗剂抗体。这样的另外的药剂包括例如5-HT1样激动剂(和作用于其他5-HT1位点的激动剂)、曲坦类、阿片类、麦角生物碱类和非甾体抗炎药(NSAID)。在一些实施方案中，急性头痛药物选自镇痛剂(例如，乙酰水杨酸、布洛芬、萘普生、双氯芬酸、对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸加对乙酰氨基酚加咖啡因、安乃近、安替比林或托芬那酸)；止吐剂(例如，甲氧氯普胺或多潘立酮)；麦角生物碱类(例如，酒石酸麦角胺或二氢麦角胺)；以及曲坦类，即5-HT1激动剂(例如，舒马曲坦、佐米曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、阿莫曲坦、依来曲坦或氟伐曲坦)。
可与抗CGRP抗体组合使用的5-HTl激动剂的一些非限制性实例包括称为曲坦类的一类化合物，例如舒马曲坦、佐米曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、依来曲坦、阿莫曲坦和氟伐曲坦。还已知麦角生物碱类及相关化合物具有5-HT激动剂活性并且已被用于治疗头痛。这些化合物包括酒石酸麦角胺、马来酸麦角新碱和甲磺酸二氢麦角碱(例如，二氢麦角考宁(dihydroergocornine)、二氢麦角汀(dihydroergocristine)、二氢麦角隐亭(dihydroergocryptine)和甲磺酸二氢麦角胺(DHE 45))。
可与抗CGRP抗体组合使用的NSAID(作为急性头痛药物)的一些非限制性实例包括阿司匹林、双氯芬酸、二氟尼柳(diflusinal)、依托度酸、芬布芬(fenbufen)、非诺洛芬、氟苯柳(flufenisal)、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、萘丁美酮、萘普生、奥沙普秦(oxaprozin)、保泰松、吡罗昔康、舒林酸、托美汀或佐美酸(zomepirac)、环氧合酶-2(COX-2)抑制剂(塞来昔布、罗非昔布、美洛昔康、JTE-522、L-745,337、NS398)、或其可药用盐。
在一个实施方案中，用于上述任何方法的抗CGRP拮抗剂抗体是本文中所述的任何抗体。
在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体识别人CGRP。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体与人α-CGRP和β-CGRP二者结合。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体结合人和大鼠CGRP。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体结合具有CGRP的第25至37位氨基酸的C端片段。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体结合在CGRP的第25至37位氨基酸内的C端表位。
在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体是人源化的。在一些实施方案中，抗体是人的。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体是抗体G1(如本文中所述)。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体包含表6中所示的抗体G1或G1变体的一个或更多个CDR(例如一个、两个、三个、四个、五个、或在一些实施方案中全部六个CDR)。在另一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体包含图5中所示的重链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)和图5中所示的轻链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)。
在一些实施方案中，抗体包含经修饰的恒定区，例如免疫惰性的(包括部分地免疫惰性的)恒定区，例如不触发补体介导的裂解、不刺激抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell mediated cytotoxicity，ADCC)、不活化小胶质细胞(microglia)、或具有降低的这些活性中的一种或更多种。在一些实施方案中，恒定区如Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624；PCT申请No.PCT/GB99/01441；和/或英国专利申请No.9809951.8中所述进行修饰。在另一些实施方案中，抗体包含含有以下突变的人重链IgG2恒定区：A330P331至S330S331(参考野生型IgG2序列的氨基酸编号)。Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624。在一些实施方案中，抗体的重链恒定区是具有任何以下突变的人重链IgG1：1)A327A330P331至G327S330S331；2)E233L234L235G236(SEQ ID NO：48)至缺失G236的P233V234A235；3)E233L234L235至P233V234A235；4)E233L234L235G236A327A330P331(SEQ ID NO：49)至缺失G236的P233V234A235G327S330S331(SEQ ID NO：50)；5)E233L234L235A327A330P331(SEQ ID NO：51)至P233V234A235G327S330S331(SEQ ID NO：50)；以及6)N297至A297或除N之外的任何其他氨基酸。在一些实施方案中，抗体的重链恒定区是具有任何以下突变的人重链IgG4：E233F234L235G236(SEQ ID NO：52)至缺失G236的P233V234A235；E233F234L235至P233V234A235；以及S228L235至P228E235。
在另一些实施方案中，将恒定区非糖基化(aglycosylated)以用于N-连接的糖基化。在一些实施方案中，通过使作为恒定区中N-糖基化识别序列的一部分的寡糖附接残基(例如Asn297)和/或侧翼残基突变来使恒定区非糖基化以用于N连接的糖基化。在一些实施方案中，将恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。可酶促地或通过在糖基化缺陷型宿主细胞中表达来使恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。
抗CGRP拮抗剂抗体与CGRP(例如人α-CGRP，如在合适温度(例如25℃或37℃)下通过表面等离子体共振(surface plasmon resonance)测量)的结合亲和力(KD)可以是约0.02至约200nM。在一些实施方案中，结合亲和力是以下中的任一个：约200nM、约100nM、约50nM、约10nM、约1nM、约500pM、约100pM、约60pM、约50pM、约20pM、约15pM、约10pM、约5pM或约2pM。在一些实施方案中，结合亲和力小于以下中的任一个：约250nM、约200nM、约100nM、约50nM、约10nM、约1nM、约500pM、约100pM或约50pM。在一些实施方案中，结合亲和力小于约50nM。
抗CGRP拮抗剂抗体可在患有难治性偏头痛的对象中在偏头痛之前、期间和/或之后施用。在一些实施方案中，在对象经历偏头痛的症状之前施用抗CGRP拮抗剂抗体。抗CGRP拮抗剂抗体的施用可通过本领域中已知的任何方式来进行，包括：经口、静脉内、皮下、动脉内、肌内、鼻内(例如，具有或不具有吸入)、心内、椎管内(intraspinal)、胸内、腹膜内、室内、舌下、经皮、和/或通过吸入。施用可以是全身性的(例如，静脉内)或局部的。在一些实施方案中，初始或起始剂量和一个或更多个另外的剂量以相同的方式(即皮下或静脉内)施用。在一些实施方案中，所述一个或更多个另外的剂量以与初始剂量不同的方式施用，即初始剂量可静脉内施用，而所述一个或更多个另外的剂量可皮下施用。
在另一方面，本发明提供了抗CGRP拮抗剂抗体用于制备用于本文中所述的任何方法的药物的用途。
在另一方面，本发明提供了用于在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗或减轻偏头痛的药物组合物，其包含与一种或更多种可药用赋形剂组合的有效量的抗CGRP拮抗剂抗体。
在另一方面，本发明提供了用于本文中所述的任何方法的药盒(kit)。在一些实施方案中，药盒包含：容器、包含与可药用载体组合的本文中所述抗CGRP拮抗剂抗体的组合物、以及将组合物用于本文中所述任何方法的说明书。
在一些实施方案中，本文中提供的方法利用来自表6中所示的抗体G1或其变体的抗CGRP拮抗剂抗体和多肽。因此，在一个方面，本发明提供了由具有ATCC登录号PTA-6866和PTA-6867的表达载体产生的抗体G1(可互换地称为“G1”和“TEV-48125”)。例如，在一个实施方案中，是包含由具有ATCC登录号PTA-6867的表达载体产生的重链的抗体。在另一个实施方案中，是包含由具有ATCC登录号PTA-6866的表达载体产生的轻链的抗体。G1的重链和轻链可变区的氨基酸序列在图5中示出。抗体G1的互补决定区(complementaritydetermining region，CDR)部分(包括Chothia和Kabat CDR)也在图5中示出。应理解，对G1的任何部分或整个区域的提及涵盖由具有ATCC登录号PTA-6866和PTA-6867的表达载体产生的序列和/或在图5中所描述的序列。在一些实施方案中，本发明还提供了具有表6中所描述的氨基酸序列的G1的抗体变体。
在一些实施方案中，抗体包含VH结构域，所述VH结构域与SEQ ID NO：1在氨基酸序列中具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
在一些实施方案中，抗体包含VL结构域，所述VL结构域与SEQ ID NO：2在氨基酸序列中具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
在一些实施方案中，抗体包含重链序列，所述重链序列与SEQ ID NO：11在氨基酸序列中具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
在一些实施方案中，抗体包含轻链序列，所述轻链序列与SEQ ID NO：12在氨基酸序列中具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％的同一性。
在一些实施方案中，抗体包含表6中所示的抗体G1或其变体的片段或区域。在一个实施方案中，所述片段是抗体G1的轻链。在另一个实施方案中，所述片段是抗体G1的重链。在另一个实施方案中，所述片段包含来自抗体G1的轻链和/或重链的一个或更多个可变区。在另一个实施方案中，所述片段包含来自图5中所示的轻链和/或重链的一个或更多个可变区。在另一个实施方案中，所述片段包含来自抗体G1的轻链和/或重链的一个或更多个CDR。
在一些实施方案中，多肽(例如抗体)包含KASKXaaVXaaTYVS(SEQ ID NO：53)的氨基酸序列，其中第5位的Xaa是R、W、G、L或N；并且其中第7位的Xaa是T、A、D、G、R、S、W或V。在一些实施方案中，KASKXaaVXaaTYVS(SEQ ID NO：53)的氨基酸序列是抗体轻链的CDR1。
在一些实施方案中，多肽(例如抗体)包含XaaXaaSNRYXaa(SEQ ID NO：54)的氨基酸序列，其中第1位的Xaa是G或A；其中第2位的Xaa是A或H；并且其中第7位的Xaa是L、T、I或S。在一些实施方案中，XaaXaaSNRYXaa(SEQ ID NO：54)的氨基酸序列是抗体轻链的CDR2。
在一些实施方案中，多肽(例如抗体)包含EIRSXaaSDXaaXaaATXaaYAXaaAVKG(SEQID NO：55)的氨基酸序列，其中第5位的Xaa是E、R、K、Q或N；其中第8位的Xaa是A、G、N、E、H、S、L、R、C、F、Y、V、D或P；其中第9位的Xaa是S、G、T、Y、C、E、L、A、P、I、N、R、V、D或M；其中第12位的Xaa是H或F；其中第15位的Xaa是E或D。在一些实施方案中，EIRSXaaSDXaaXaaATXaaYAXaaAVKG(SEQ ID NO：55)的氨基酸序列是抗体重链的CDR2。
在一些实施方案中，抗体是人抗体。在另一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗体是单克隆的。在一些实施方案中，抗体(或多肽)是分离的。在一些实施方案中，抗体(或多肽)是基本上纯的。
抗体的重链恒定区可来自任何类型的恒定区，例如IgG、IgM、IgD、IgA和IgE；以及任何同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
在一些实施方案中，抗体包含如本文中所述的经修饰恒定区。
在一个方面，本发明提供了用于降低具有难治性偏头痛的对象经历的每月头痛小时数的组合物。在一个实施方案中，使用包括向对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体，其中单克隆抗体的量为在单次剂量之后有效地使每月头痛小时数降低至少20(例如，25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或更多个头痛小时)。在一些实施方案中，每月头痛小时数降低至少约50个小时。在一个实施方案中，使用包括向对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体，其中单克隆抗体的量为在单次剂量之后有效地使每月头痛小时数降低至少15％(例如20％、25％、30％、35％、40％或更多)。在一些实施方案中，每月头痛小时数降低至少约30％。在一些实施方案中，单克隆抗体是抗CGRP拮抗剂抗体。在一些实施方案中，施用于患者的单克隆抗体的量为约675mg至约1000mg。在一些实施方案中，单克隆抗体每月施用。在一些实施方案中，单克隆抗体作为单次剂量施用。在一些实施方案中，所述施用是皮下或静脉内施用。在一些实施方案中，单克隆抗体以至少150mg/mL的浓度配制。在一些实施方案中，其中单克隆抗体以小于2mL的体积施用。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，单克隆抗体是人的或人源化的。在一些实施方案中，单克隆抗体包括：(a)抗体，其具有SEQ ID NO：3所示CDR H1；SEQ ID NO：4所示CDR H2；SEQ ID NO：5所示CDR H3；SEQ IDNO：6所示CDR L1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQ ID NO：8所示CDR L3；或(b)如表6中所示的根据(a)的抗体的变体。
在一个方面，本发明提供了用于降低具有难治性偏头痛的对象经历的每月头痛日数的组合物。在一个实施方案中，使用包括向对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体，其中单克隆抗体的量为在单次剂量之后有效地使每月头痛日数降低至少3(例如，3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个头痛日)。在一些实施方案中，每月头痛日数降低至少约6个头痛日。在一些实施方案中，单克隆抗体是抗CGRP拮抗剂抗体。在一些实施方案中，施用于患者的单克隆抗体的量为约675mg至约1000mg。在一些实施方案中，单克隆抗体每月施用。在一些实施方案中，单克隆抗体作为单次剂量施用。在一些实施方案中，所述施用是皮下或静脉内施用。在一些实施方案中，单克隆抗体以至少150mg/mL的浓度配制。在一些实施方案中，其中单克隆抗体以小于2mL(例如约1.5mL)的体积施用。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，单克隆抗体是人的或人源化的。在一些实施方案中，单克隆抗体包括：(a)抗体，其具有SEQ ID NO：3所示CDR H1；SEQ ID NO：4所示CDRH2；SEQ ID NO：5所示CDR H3；SEQ ID NO：6所示CDR L1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQID NO：8所示CDR L3；或(b)如表6中所示的根据(a)的抗体的变体。
在一个方面，本发明提供了用于在具有难治性偏头痛的对象中降低任何急性头痛药物之使用的组合物，包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，抗CGRP拮抗剂抗体)，其中单克隆抗体的量有效地使对象对急性头痛药物的每月使用降低至少15％(例如，20％、25％、30％、35％、40％或更多)。在一些实施方案中，头痛药物选自：5-HT1激动剂、曲坦类、阿片类、麦角生物碱类和非甾体抗炎药(NSAID)。在一些实施方案中，头痛药物是曲坦类或麦角化合物。在一些实施方案中，急性头痛药物选自镇痛剂(例如，乙酰水杨酸、布洛芬、萘普生、双氯芬酸、对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸加对乙酰氨基酚加咖啡因、安乃近、安替比林或托芬那酸)；止吐剂(例如，甲氧氯普胺或多潘立酮)；麦角生物碱类(例如，酒石酸麦角胺或二氢麦角胺)；以及曲坦类，即5-HT1激动剂(例如，舒马曲坦、佐米曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、阿莫曲坦、依来曲坦或氟伐曲坦)。在一些实施方案中，施用于患者的单克隆抗体的量为约675mg至约1000mg。在一些实施方案中，单克隆抗体每月施用。在一些实施方案中，单克隆抗体作为单次剂量施用。在一些实施方案中，所述施用是皮下或静脉内施用。在一些实施方案中，单克隆抗体以至少150mg/mL的浓度配制。在一些实施方案中，其中单克隆抗体以小于2mL(例如约1.5mL)的体积施用。在一些实施方案中，对象是人。在一些实施方案中，单克隆抗体是人的或人源化的。在一些实施方案中，单克隆抗体包括：(a)抗体，其具有SEQ IDNO：3所示CDR H1；SEQ ID NO：4所示CDR H2；SEQ ID NO：5所示CDR H3；SEQ ID NO：6所示CDRL1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQ ID NO：8所示CDR L3；或(b)如表6中所示的根据(a)的抗体的变体。
在一个方面，本发明提供了组合物，其用于在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率，包括以调节CGRP途径的量向对象施用单次剂量的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)，其中施用于患者的单克隆抗体的量为约675mg至约1000mg。
附图简述
图1是示出了12种鼠抗体对不同的经丙氨酸替换的人α-CGRP片段的结合亲和力的表格。结合亲和力通过使Fab流过芯片上的CGRP使用Biacore在25℃下测量。除来自于19-37亲本的K35A之外，加框的值表示丙氨酸突变体相对于亲本片段25-37(斜体)的亲和力损失。“a”表示对19-37和25-37片段的亲和力是在不同传感器芯片上的两次独立测量的平均值±标准差。“b”表示这些相互作用由于双相解离率(biphasic offrate)而偏离简单的双分子相互作用模型，因此其亲和力使用构象变化模型来确定。灰度色调：白色(1.0)表示亲本亲和力；浅灰(小于0.5)表示比亲本更高的亲和力；暗灰(大于2)表示比亲本更低的亲和力；并且黑色表示未检测到结合。
图2A和2B示出了施用CGRP 8-37(400nmol/kg)、抗体4901(25mg/kg)和抗体7D11(25mg/kg)对在电脉冲刺激30秒之后作为血细胞通量测量的皮肤血流的影响。CGRP 8-37在电脉冲刺激之前3至5分钟静脉内(iv)施用。抗体在电脉冲刺激之前72小时腹膜内(IP)施用。图中的每个点表示在所示条件下处理的一只大鼠的AUC。图中的每条线表示在所示条件下处理的大鼠的平均AUC。AUC(曲线下面积)等于Δ通量×Δ时间。“Δ通量”表示电脉冲刺激之后通量单位的变化；并且“Δ时间”表示血细胞通量水平恢复至电脉冲刺激之前水平所需的时间。
图3示出了施用不同剂量的抗体4901(25mg/kg、5mg/kg、2.5mg/kg或1mg/kg)对在电脉冲刺激30秒之后作为血细胞通量测量的皮肤血流的影响。抗体在电脉冲刺激之前24小时静脉内(IV)施用。图中的每个点表示在所示条件下处理的一只大鼠的AUC。图中的线表示在所示条件下处理的大鼠的平均AUC。
图4A和4B示出了施用抗体4901(1mg/kg或10mg/kg，i.v.)、抗体7E9(10mg/kg，i.v.)和抗体8B6(10mg/kg，i.v.)对在电脉冲刺激30秒之后作为血细胞通量测量的皮肤血流的作用。静脉内(i.v.)施用抗体，然后在抗体施用之后30分钟、60分钟、90分钟和120分钟进行电脉冲刺激。Y轴表示与未施用抗体时(时间0)的AUC水平相比的AUC百分比。X轴表示抗体施用与电脉冲刺激之间的时间(分钟)。“*”表示与时间0相比P＜0.05，并且“**”表示与时间0相比P＜0.01。数据使用具有Dunnett多重比较检验的单因素ANOVA进行分析。
图5示出了抗体G1的重链可变区(SEQ ID NO：1)和轻链可变区(SEQ ID NO：2)的氨基酸序列。Kabat CDR为粗体文本，并且Chothia CDR加有下划线。重链可变区和轻链可变区的氨基酸残基按顺序编号。
图6示出了通过肽竞争使用Biacore对抗体G1的表位作图(epitope mapping)。将N-生物素化的人α-CGRP捕获在SA传感器芯片上。使不存在竞争性肽或与10μM竞争性肽预孵育1小时的G1Fab(50nM)流动到芯片上。测量G1Fab与芯片上人α-CGRP的结合。Y轴表示与不存在竞争性肽时的结合相比被竞争性肽的存在阻断的结合的百分比。
发明详述
在一些方面，本文中公开的发明提供了通过向个体施用治疗有效量的抗CGRP拮抗剂抗体来在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛和/或降低其发病率的方法。
在一些方面，本文中公开的发明还提供了来自表6中所示的G1或其变体的抗CGRP拮抗剂抗体和多肽或其组合物，其用于在患有难治性偏头痛的对象中治疗偏头痛和/或降低其发病率。
一般性技术
除非另有指明，否则本发明的多个方面的实践将采用在本技术领域内的分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术。这样的技术在例如以下的文献中有充分说明：Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第二版(Sambrook et al.，1989)Cold Spring Harbor Press；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait，ed.，1984)；Methods in Molecular Biology，Humana Press；Cell Biology：ALaboratory Notebook(J.E.Cellis，ed.，1998)Academic Press；Animal Cell Culture(R.I.Freshney，ed.，1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Matherand P.E.Roberts，1998)Plenum Press；Cell and Tissue Culture：LaboratoryProcedures(A.Doyle，J.B.Griffiths，and D.G.Newell，ed.，1993-1998)J.Wiley andSons；Methods in Enzymology(Academic Press，Inc.)；Handbook of ExperimentalImmunology(D.M.Weir and C.C.Blackwell，ed.)；Gene Transfer Vectors forMammalian Cells(J.M.Miller and M.P.Calos，ed.，1987)；Current Protocols inMolecular Biology(F.M.Ausubel et al.，ed.，1987)；PCR：The Polymerase ChainReaction，(Mullis et al.，ed.，1994)；Current Protocols in Immunology(J.E.Coliganet al.，ed.，1991)；Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons，1999)；Immunobiology(C.A.Janeway andP.Travers，1997)；Antibodies(P.Finch，1997)；Antibodies：a practical approach(D.Catty.，ed.，IRL Press，1988-1989)；Monoclonalantibodies：a practical approach(P.Shepherd and C.Dean，ed.，Oxford UniversityPress，2000)；Using antibodies：a laboratory manual(E.Harlow and D.Lane(ColdSpring Harbor Laboratory Press，1999)；The Antibodies(M.Zanetti and J.D.Capra，ed.，Harwood Academic Publishers，1995)。
定义
本文中使用的“约”当用于提及数值范围、截止值或特定值时用于指示所记载的值可与所列出的值相差至多10％。因此，术语“约”用于涵盖与特定值的±10％或更小的变化、±5％或更小的变化、±1％或更小的变化、±0.5％或更小的变化、或±0.1％或更小的变化。
“抗体”是能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点与靶标(例如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)特异性结合的免疫球蛋白分子。本文中使用的该术语不仅涵盖完整的多克隆抗体或单克隆抗体，而且还涵盖其片段(例如Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv)、单链(ScFv)、其突变体、包含抗体部分(例如结构域抗体)的融合蛋白，以及包含抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他经修饰构型。抗体包括任何类别的抗体，例如IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不需要是任何特定的类别。取决于其重链的恒定结构域的抗体氨基酸序列，免疫球蛋白可分为不同的类别。有五种主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的数种可进一步分成亚类(同种型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是公知的。
本文中使用的“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体的群体获得的抗体，即除了可以以少量存在的可能的天然突变之外，构成该群体的个体抗体是相同的。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原位点。此外，与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相反，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。修饰语“单克隆的”表示如同从基本上同质的抗体群体获得的抗体特征，并且不被解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，根据本发明待使用的单克隆抗体可通过首先由Kohler and Milstein，1975，Nature，256：495描述的杂交瘤方法制备，或者可通过例如美国专利No.4,816,567中描述的重组DNA方法制备。单克隆抗体还可从使用例如McCafferty et al.，1990，Nature，348：552-554中描述的技术产生的噬菌体文库中分离。
本文中使用的“人源化”抗体是指为包含来自非人免疫球蛋白的最小序列的特异性嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如抗体的Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或其他抗原结合子序列)的非人(鼠)抗体的形式。在大多数情况下，人源化抗体是人免疫球蛋白(接受者抗体)：其中来自接受者之互补决定区(CDR)的残基被来自非人物种(例如小鼠、大鼠或兔)之CDR的具有期望的特异性、亲和力和生物活性的残基(供体抗体)替代。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv框架区(framework region，FR)残基被对应的非人残基替代。此外，人源化抗体可包含既不存在于接受者抗体中也不存在于导入的CDR或框架序列中，但被包含在内以进一步改进和优化抗体性能的残基。通常来说，人源化抗体将包含至少一个并且通常两个可变结构域的基本上所有，其中所有或基本上所有的CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有或基本上所有的FR区是人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体最佳地还将包含免疫球蛋白恒定区或结构域(Fc)(通常是人免疫球蛋白的恒定区或结构域)的至少一部分。抗体可具有如WO 99/58572中所述修饰的Fc区。人源化抗体的另一些形式具有相对于原始抗体改变的一个或更多个(1、2、3、4、5、6个)CDR，其也被称为“来自于”原始抗体的一个或更多个CDR的一个或更多个CDR。
本文中使用的“人抗体”意指具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列之氨基酸序列的抗体和/或已经使用本领域中已知或本文中公开的任何用于制备人抗体的技术制备。人抗体的该定义包括包含至少一个人重链多肽或至少一个人轻链多肽的抗体。一个这样的实例是包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。人抗体可使用本领域中已知的多种技术来产生。在一个实施方案中，人抗体选自噬菌体文库，其中该噬菌体文库表达人抗体(Vaughanet al.，1996，Nature Biotechnology，14：309-314；Sheets et al.，1998，PNAS，(USA)95：6157-6162；Hoogenboom and Winter，1991，J.Mol.Biol.，227：381；Marks et al.，1991，J.Mol.Biol.，222：581)。人抗体也可通过将人免疫球蛋白基因座引入到转基因动物(例如其中内源性免疫球蛋白基因已部分或完全失活的小鼠)中来制备。这种方法在美国专利No.5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425和5,661,016中描述。或者，人抗体可通过永生化产生针对靶抗原的抗体的人B淋巴细胞来制备(这样的B淋巴细胞可从个体中回收或者可在体外免疫接种)。参见例如Cole et al.，Monoclonal Antibodies andCancer Therapy，Alan R.Liss，第77页(1985)；Boerner et al.，1991，J.Immunol.，147(1)：86-95；以及美国专利No.5,750,373。
本文中使用的术语“降钙素基因相关肽”和“CGRP”是指保留CGRP活性的至少一部分的任何形式的降钙素基因相关肽及其变体。例如，CGRP可以是α-CGRP或β-CGRP。本文中使用的CGRP包括所有哺乳动物物种(例如，人、犬、猫、马和牛)的天然序列CGRP。
本文中使用的“抗CGRP拮抗剂抗体”(可互换地称为“抗CGRP抗体”)是指能够与CGRP结合并且抑制CGRP生物活性和/或由CGRP信号传导介导的下游途径的抗体。抗CGRP拮抗剂抗体涵盖这样的抗体，其调节、阻断、拮抗、抑制或降低(包括显著地)CGRP生物活性或以其他方式拮抗CGRP途径，包括由CGRP信号传导介导的下游途径，例如受体结合和/或针对CGRP的细胞响应的激发。出于本发明的目的，将明确理解，术语“抗CGRP拮抗剂抗体”涵盖使得CGRP本身、CGRP生物活性(包括但不限于其介导任何头痛方面的能力)或生物活性的结果在任何有意义的程度上基本上消除、降低或中和的所有先前确定的术语、标题以及功能状态和特征。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体结合CGRP并且阻止CGRP与CGRP受体结合。在另一些实施方案中，抗CGRP抗体结合CGRP并阻止CGRP受体的活化。本文中提供了抗CGRP拮抗剂抗体的一些实例。
本文中使用的术语“G1”、“抗体G1”、“TEV-48125”和弗赖曼妥珠单抗(fremanezumab)可互换使用，是指由具有保藏号ATCC PTA-6867和ATCC PTA 6866的表达载体产生的抗CGRP拮抗剂抗体。重链和轻链可变区的氨基酸序列在图5中示出。抗体G1的CDR部分(包括Chothia和Kabat CDR)在图5中图示。编码重链和轻链可变区的多核苷酸示于SEQID NO：9和SEQ ID NO：10。G1重链全抗体氨基酸序列示于SEQ ID NO：11。G1轻链全抗体氨基酸序列示于SEQ ID NO：12。制备抗体G1(及其变体)的表征和方法描述于下文实施例1至4以及PCT申请No.PCT/IB2006/003181(其在此通过引用整体并入)中。
术语“多肽”、“寡肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用以指任何长度的氨基酸聚合物。聚合物可以是直链的或支链的，其可包含经修饰的氨基酸，并且其可被非氨基酸中断。所述术语还涵盖已被天然或通过干预修饰(例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，例如与标记组分缀合)的氨基酸聚合物。该定义中还包括例如包含一个或更多个氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)以及本领域中已知的其他修饰的多肽。应理解，由于本发明的多肽基于抗体，因此多肽可作为单链或缔合链存在。
本文中可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、经修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物，或可通过DNA或RNA聚合酶并入聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含经修饰的核苷酸，例如甲基化核苷酸及其类似物。如果存在的话，可在组装聚合物之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸序列可被非核苷酸组分中断。多核苷酸可在聚合之后被进一步修饰，例如通过与标记组分缀合。另一些类型的修饰包括例如“帽”，用类似物替换一个或更多个天然存在的核苷酸，核苷酸间修饰，例如具有不带电荷的连接(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和具有带电荷的连接(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些、包含侧基部分(例如蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、ply-L-赖氨酸等))的那些、具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些、包含螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些、包含烷化剂的那些、具有经修饰的连接的那些(例如，α端基异构核酸等)，以及多核苷酸的未经修饰形式。此外，通常存在于糖中的任何羟基可被例如膦酸酯基团、磷酸酯基团替代，被标准保护基保护，或被活化以制备与另外的核苷酸的另外的连接，或可与固体支持物缀合。5’和3’端OH可被磷酸化或被1至20个碳原子的胺或有机封端基团部分(organic capping group moiety)取代。其他羟基也可被衍生化成标准保护基。多核苷酸还可包含本领域中通常已知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括例如2’-O-甲基-、2’-O-烯丙基、2’-氟-或2’-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-端基异构糖、差向异构糖(例如阿拉伯糖、木糖或来苏糖)、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、无环类似物和无碱基核苷类似物(例如甲基核苷)。一个或更多个磷酸二酯连接可被作为替代的连接基团替代。这些作为替代的连接基团包括但不限于其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯”)、P(S)S(“二硫代酸酯”)、(O)NR2(“酰胺化物”)、P(O)R、P(O)OR’、CO或CH2(“甲缩醛”)替换的一些实施方案，其中每个R或R’独立地是H或者经取代或未经取代的烷基(1至20C)(其任选地包含醚(-O-)连接)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。不需要多核苷酸中的所有连接都相同。前面的描述适用于本文中提及的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
如本文中所用，如果难治性偏头痛患者(或“患有难治性偏头痛的对象”)具有对至少两种预防性药物(来自如下定义的不同群集)的有记录的不充分响应(在医学图表中或通过治疗医师的确认)，则认为他们是难治性的。如果难治性偏头痛患者具有对2至4类先前预防性药物(来自如下定义的不同群集)的有记录的不充分响应(在医学图表中或通过治疗医生的确认)，例如对于2类先前预防性药物的不充分响应、对于3类先前预防性药物的不充分响应或对于4类先前预防性药物的不充分响应，则也可认为他们是难治性的。
不充分响应定义为：在以根据公认的国家指南认为适合于偏头痛预防的稳定剂量治疗至少三个月之后，或者由于致使患者不耐受的不良事件或者药物对于患者是禁忌或不适合的而必须中断治疗时，根据治疗医师的判断没有临床意义上的改善。如果药物对于患者是不耐受的或禁忌或不适合的，则三个月的时间可以不适用。对于奥那肉毒毒素A，不充分响应定义为：在以根据公认的国家指南认为适合于偏头痛预防的稳定剂量治疗至少六个月之后，或者由于致使患者不耐受的不良事件而必须中断治疗时，根据治疗医师的判断没有临床意义上的改善。或者，如果奥那肉毒毒素A是先前预防性药物，则自最后一组注射起应经过了至少两组注射和三个月。
在一些实施方案中，群集如下：
·群集A：托吡酯、卡马西平、双丙戊酸钠和丙戊酸钠
·群集B：氟桂利嗪和苯噻啶
·群集C：阿米替林、文拉法辛、去甲替林和度洛西汀
·群集D：阿替洛尔、纳多洛尔、美托洛尔、普萘洛尔和噻吗洛尔
·群集E：奥那肉毒毒素A
在一些实施方案中，群集如下：
·群集A：β-阻滞剂：普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔和比索洛尔
·群集B：抗惊厥剂：托吡酯
·群集C：三环类：阿米替林
·群集D：钙通道阻滞剂：氟桂利嗪
·群集E：血管紧张素II受体拮抗剂：坎地沙坦
·群集F：奥那肉毒毒素A
·群集G：丙戊酸
在该群集组中，如果患者对2至4类预防性头痛药物具有不充分响应，则对象患有难治性偏头痛。例如，如果患者对各自来自不同群集(A、B、C、D、E、F)的两种或三种药物和丙戊酸(组G)具有不充分响应，则对象患有难治性偏头痛。
另外的群集包括：
·群集a：血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂，例如赖诺普利
·群集b：基于苯并环庚烯的药物，例如苯噻啶
·群集c：抗抑郁药，例如阿米替林(Elavil)、曲唑酮(Desyrel)、以及丙咪嗪(Toffanil)、以及文拉法辛
·群集d：抗惊厥剂，例如苯妥英(Dilantin)或卡马西平(Tegretol)
·群集e：奥昔托隆
熟练的从业者将能够容易地识别和/或诊断患有难治性偏头痛的对象。
本文中使用的“预防”是在尚未经历偏头痛的对象中阻止偏头痛发生或存在的方法。本文中使用的“治疗”是用于获得有益或期望的临床结果的方法。出于本发明的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于以下的一项或更多项：改善难治性偏头痛的任何方面，包括减轻严重程度、缓解疼痛强度和其他相关症状、降低复发的频率、降低每月头痛日数或小时数、提高患有难治性偏头痛者的生命质量，以及降低治疗难治性偏头痛所需的其他药物(例如，急性头痛药物)的剂量。
“降低偏头痛的发病率”意指以下中的任一项：降低严重程度(其可包括降低通常用于这种病症的其他药物和/或治疗(包括例如麦角胺、二氢麦角胺或曲坦类)的需要和/或量(例如，暴露))、持续时间和/或频率(包括例如延迟或延长个体中到下次发作的时间)。如本领域技术人员所理解的，个体可在其对治疗的响应方面有所不同，并且因此例如“在个体中降低偏头痛发病率的方法”反映基于以下合理预期来施用抗CGRP拮抗剂抗体：这样的施用可能在该特定个体中引起这样的偏头痛发病率降低。
“改善”偏头痛或者难治性偏头痛的一种或更多种症状意指与未施用抗CGRP拮抗剂抗体相比在患有难治性偏头痛的对象中减轻或改善偏头痛的一种或更多种症状。“改善”还包括缩短或降低症状的持续时间。
本文中使用的“控制难治性偏头痛”是指在患有难治性偏头痛的个体中维持或降低偏头痛的一种或更多种症状的严重程度或持续时间，例如偏头痛发作的频率(与治疗前的水平相比)。例如，与治疗前的水平相比，在个体中头痛的持续时间或严重程度或者发作频率降低至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％中的任一种。
本文中使用的“头痛小时数”是指在其期间对象经历头痛的小时数。头痛小时数可表示为整小时(例如，1个头痛小时、2个头痛小时、3个头痛小时等)或表示为整小时和部分小时(例如0.5个头痛小时、1.2个头痛小时、2.67个头痛小时等)。一个或更多个头痛小时数可相对于特定的时间间隔进行描述。例如，“每日头痛小时数”可指对象在一天的间隔(例如，24小时的时间)内经历的头痛小时数。在另一个实例中，“每周头痛小时数”可指对象在一周的间隔(例如，7天的时间)内经历的头痛小时数。可理解的是，一周的间隔可对应于或不对应于日历周。在另一个实例中，“每月头痛小时数”可指对象在一个月的间隔内经历的头痛小时数。可理解的是，一个月的间隔(例如，28、29、30或31天的时间)可根据特定月份而在天数方面有所不同，并且可对应于或不对应于日历月。在另一个实例中，“每年头痛小时数”可指对象在一年的间隔内经历的头痛小时数。可理解的是，一年的间隔(例如，365或366天的时间)可根据特定年份而在天数方面有所不同，并且可对应于或不对应于日历年。
本文中使用的“头痛日数”是指在其期间对象经历头痛的天数。头痛日数可以表示为整日(例如，1个头痛日、2个头痛日、3个头痛日等)或表示为整日和部分日(例如，0.5个头痛日、1.2个头痛日、2.67个头痛日等)。一个或更多个头痛日可相对于特定的时间间隔进行描述。例如，“每周头痛日数”可指对象在一周的间隔(例如，7天的时间)内经历的头痛日数。可理解的是，一周的间隔可对应于或不对应于日历周。在另一个实例中，“每月头痛日数”可指对象在一个月的间隔内经历的头痛日数。可理解的是，一个月的间隔(例如，28、29、30或31天的时间)可根据特定月份而在天数方面有所不同，并且可对应于或不对应于日历月。在另一个实例中，“每年头痛日数”可指对象在一年的间隔内经历的头痛日数。可理解的是，一年的间隔(例如，365或366天的时间)可根据特定年份而在天数方面有所不同，并且可对应于或不对应于日历年。
本文中使用的“延迟”偏头痛的发生意指在患有难治性偏头痛的对象中拖延、阻碍、减慢、延缓、稳定和/或推迟疾病的进展。这种延迟的时间长度可有所不同，这取决于疾病史和/或正在接受治疗的个体。对于本领域技术人员显而易见的是，充分或显著的延迟实际上可涵盖预防，即个体不发生偏头痛，尤其是在由于对先前预防性治疗的不充分响应而被诊断为难治性偏头痛之后。“延迟”症状发生的方法是与未使用该方法相比，在给定时间框内降低发生症状的概率和/或在给定时间框内降低症状程度的方法。这样的比较通常基于使用统计学上显著数量对象的临床研究。
偏头痛的“发生”或“进展”意指在患有难治性偏头痛的对象中该病症的初始表现和/或随后的进展。偏头痛的发生可使用本领域中公知的标准临床技术来检测和评估。
本文中使用的药物、化合物或药物组合物的“有效剂量”或“有效量”是足以实现有益或期望结果的量。对于预防性使用，有益或期望的结果包括例如以下的结果：消除或降低风险、减轻严重程度或延迟疾病发作，包括疾病的生物化学、组织学和/或行为症状，在疾病的发生期间出现的其并发症和中间病理学表型。对于治疗性使用，有益或期望的结果包括例如以下的临床结果：降低疼痛强度、持续时间或难治性偏头痛发作的频率；以及减轻由难治性偏头痛引起的一种或更多种症状(生物化学、组织学和/或行为的)，包括在疾病发生期间出现的其并发症和中间病理学表型；提高患有疾病的人的生命质量；降低治疗疾病所需的其他药物的剂量；增强另一药物的作用；和/或延迟患者的疾病进展。有效剂量可在一次或更多次施用中施用。出于本公开内容的目的，药物、化合物或药物组合物的有效剂量是足以直接或间接地实现预防性或治疗性治疗的量。如在临床背景下所理解的，药物、化合物或药物组合物的有效剂量可以或可以不与其他药物、化合物或药物组合物联合实现。因此，“有效剂量”可在施用一种或更多种治疗剂的情况下考虑，并且如果与一种或更多种其他药剂联合可实现或实现期望的结果，则可认为单一药剂以有效量给予。
“个体”或“对象”是哺乳动物，更优选人。哺乳动物还包括但不限于：农场动物、运动动物、宠物、灵长类、马、狗、猫、小鼠和大鼠。
A.用于预防、治疗或减轻难治性偏头痛和/或与难治性偏头痛相关的至少一种继 发症状的方法
在一个方面，本发明提供了在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法。在另一方面，本发明提供了在对象中治疗与难治性偏头痛相关的至少一种继发症状或降低其发病率的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向个体施用有效量的调节CGRP途径的抗体或来自于抗体的多肽(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。
在另一方面，本发明提供了用于在患有难治性偏头痛或与难治性偏头痛的诊断相关的症状的个体中预防、改善、控制偏头痛、降低其发病率或延迟其进展的方法，其包括向个体施用有效量的与可用于治疗偏头痛的另外的药剂组合的调节CGRP途径的抗体或抗CGRP拮抗剂抗体，例如，另外的药剂可以是急性头痛药物。
这样的另外的药剂包括但不限于：5-HT激动剂、曲坦类、NSAID、镇痛剂、止吐剂、麦角生物碱。例如，抗体和至少一种另外的急性偏头痛药物可同时施用，即其可在足够接近的时间内给予以允许其各自的治疗效果重叠。
可与抗CGRP拮抗剂抗体组合施用的另外的急性偏头痛药剂的另一些非限制性实例包括以下一种或更多种：
(i)阿片样镇痛药，例如吗啡、海洛因、氢吗啡酮、羟吗啡酮、左啡诺、左洛啡烷、美沙酮、哌替啶、芬太尼、可卡因、可待因、二氢可待因、羟可酮、氢可酮、丙氧芬、纳美芬、烯丙吗啡(nalorphine)、纳洛酮、纳曲酮、丁丙诺啡、布托啡诺、纳布啡或喷他佐辛；
(ii)非甾体抗炎药(NSAID)，例如阿司匹林、双氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、芬布芬、非诺洛芬、氟苯柳、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、萘丁美酮、萘普生、奥沙普秦、保泰松、吡罗昔康、舒林酸、托美汀或佐美酸、环氧合酶-2(COX-2)抑制剂(塞来昔布、罗非昔布、美洛昔康、JTE-522、L-745,337、NS398)、或其可药用盐；
(iii)巴比妥类镇静剂，例如异戊巴比妥、阿普比妥、仲丁巴比妥(butabarbital)、布他比妥(butabital)(包括布他比妥组合，例如布他比妥/阿司匹林/咖啡因(Actavis)或布他比妥/对乙酰氨基酚/咖啡因(Cardinal Health))、甲苯比妥、美沙比妥、美索比妥、戊巴比妥、苯巴比妥(phenobartital)、司可巴比妥、他布比妥、硫戊巴比妥(theamylal)或硫喷妥，或其可药用盐；
(iv)巴比妥类镇痛剂，例如布他比妥或其可药用盐或者包含布他比妥的组合物。
(v)具有镇静作用的苯二氮革类，例如氯氮革(chlordiazepoxide)、甲氨二氮革(clorazepat)、地西泮、氟西泮、劳拉西泮、奥沙西泮、替马西泮或三唑仑，或其可药用盐；
(vi)具有镇静作用的H1拮抗剂，例如苯海拉明、吡拉明、异丙嗪、氯苯那敏或氯环嗪，或其可药用盐；
(vii)镇静剂，例如格鲁米特、甲丙氨酯、甲喹酮或氯醛比林(dichloralphenazone)，或其可药用盐；
(viii)骨骼肌松弛剂，例如巴氯芬、卡立普多、氯唑沙宗、环苯扎林、美索巴莫或欧弗瑞那定(orphrenadine)，或其可药用盐；
(ix)NMDA受体拮抗剂，例如右美沙芬((+)-3-羟基-N-甲基吗啡喃)或其代谢物右啡烷((+)-3-羟基-N-甲基吗啡喃)、氯胺酮、美金刚、吡咯并喹啉醌或顺式-4-(膦酰基甲基)-2-哌啶羧酸，或其可药用盐；
(x)α-肾上腺素能剂，例如多沙唑嗪、坦洛新、可乐定或4-氨基-6，7-二甲氧基-2-(5-甲磺酰氨基-1，2，3，4-四氢异喹啉-2-基)-5-(2-吡啶基)喹唑啉；
(xi)COX-2抑制剂，例如塞来昔布、罗非昔布或伐地昔布；
(xii)煤焦油镇痛剂(coal-tar analgesic)，特别是对乙酰氨基酚；
(xiii)精神安定剂(neuroleptic)，例如氟哌利多；
(xiv)香草素(vanilloid)受体激动剂(例如，树脂毒素(resinferatoxin))或拮抗剂(例如辣椒平(capsazepine))；
(xv)局部麻醉剂，例如美西律；
(xxii)皮质类固醇，例如地塞米松；
(xxiii)血清素受体激动剂或拮抗剂；
(xxiv)胆碱能(烟碱)镇痛剂；
(xxv)曲马朵；
(xxvi)PDEV抑制剂，例如西地那非、伐地那非或他达拉非；
(xxvii)α-2-δ配体，例如加巴喷丁或普瑞巴林；以及
(xxviii)大麻素类(cannabinoid)。
本领域技术人员将认识到施用用于偏头痛急性治疗和用于偏头痛预防(即，用于偏头痛的预防性治疗)的药物之间的差异。
本领域技术人员将能够确定待与抗CGRP抗体组合使用的特定药剂的合适剂量。例如，舒马曲坦可以以约0.01至约300mg的剂量施用。在一些情况下，舒马曲坦可以以下剂量施用：约2mg至约300mg，例如约5mg至约250mg、约5mg至约200mg、约5mg至约100mg、约5mg至约50mg、或约5mg至约25mg。当非肠胃外施用时，舒马曲坦的典型剂量为约25至约100mg，通常优选约50mg，例如约45mg、约55mg或约60mg。当舒马曲坦肠胃外施用时，优选的剂量为约6mg，例如约5mg、约7mg或约8mg。然而，这些剂量可根据本领域标准的方法而有所不同，使得其针对特定患者或针对特定组合治疗而被优化。此外，例如，塞来昔布可以以下量施用：50至500mg，例如约50mg至约400mg、约50mg至约300mg、约50mg至约200mg、约50mg至约100mg、约100mg至约400mg、或约200mg至约300mg。此外，任何批准的急性头痛药物的标签也可提供对于期望的结果合适的剂量。
在另一方面，本公开内容提供了在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，在多天中的每一天施用的单克隆抗体的量可以是0.1mg至5000mg、1mg至5000mg、10mg至5000mg、100mg至5000mg、1000mg至5000mg、0.1mg至4000mg、1mg至4000mg、10mg至4000mg、100mg至4000mg、1000mg至4000mg、0.1mg至3000mg、1mg至3000mg、10mg至3000mg、100mg至3000mg、1000mg至3000mg、0.1mg至2000mg、1mg至2000mg、10mg至2000mg、100mg至2000mg、1000mg至2000mg、0.1mg至1000mg、1mg至1000mg、10mg至1000mg或100mg至1000mg。在一些实施方案中，该量为约225mg至约1000mg，例如约675mg或约900mg。一个示例性给药方案包括皮下施用约675mg的初始抗体剂量，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。另一示例性给药方案包括皮下施用约225mg的初始抗体剂量，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。另一给药方案包括以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的初始抗体剂量，然后每季度以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的剂量持续例如1年、2年、3年、4年或5年。另一给药方案包括皮下施用约675mg的初始或起始剂量，然后每季度皮下施用约675mg的剂量持续例如约1年、2年、3年、4年或5年。然而，其他给药方案可以是可用的，这取决于从业者希望实现的药动学衰减的模式。在一些实施方案中，初始剂量(即起始剂量)和一个或更多个另外的剂量以相同的方式(例如，皮下或静脉内)施用。在一些实施方案中，所述一个或更多个另外的剂量以与初始或起始剂量不同的方式施用，例如初始剂量可静脉内施用，而所述一个或更多个另外的剂量可皮下施用。
在另一方面，本公开内容提供了在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法，其包括以调节CGRP途径的量向对象施用单次剂量的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，单次剂量可以是以下抗体量：0.1mg至5000mg、1mg至5000mg、10mg至5000mg、100mg至5000mg、1000mg至5000mg、0.1mg至4000mg、1mg至4000mg、10mg至4000mg、100mg至4000mg、1000mg至4000mg、0.1mg至3000mg、1mg至3000mg、10mg至3000mg、100mg至3000mg、1000mg至3000mg、0.1mg至2000mg、1mg至2000mg、10mg至2000mg、100mg至2000mg、1000mg至2000mg、0.1mg至1000mg、1mg至1000mg、10mg至1000mg或100mg至1000mg。在一些实施方案中，单次剂量可以是225mg至约1000mg、例如约225mg、约675mg或约900mg的抗体量。在另一个实施方案中，单次剂量可以是675mg至900mg的抗体量。
在另一方面，本公开内容提供了在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法，其包括以调节CGRP途径的量向对象施用每月剂量的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，单次剂量可以是以下抗体量：0.1mg至5000mg、1mg至5000mg、10mg至5000mg、100mg至5000mg、1000mg至5000mg、0.1mg至4000mg、1mg至4000mg、10mg至4000mg、100mg至4000mg、1000mg至4000mg、0.1mg至3000mg、1mg至3000mg、10mg至3000mg、100mg至3000mg、1000mg至3000mg、0.1mg至2000mg、1mg至2000mg、10mg至2000mg、100mg至2000mg、1000mg至2000mg、0.1mg至1000mg、1mg至1000mg、10mg至1000mg或100mg至1000mg。在一些实施方案中，每月剂量可以是约225mg至约1000mg、例如约225mg、约675mg或约900mg的抗体量。一个示例性给药方案包括皮下施用约675mg的初始抗体剂量，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。另一示例性给药方案包括皮下施用约225mg的初始抗体剂量，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。另一给药方案包括以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的初始抗体剂量，然后每季度以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的剂量持续例如1年、2年、3年、4年或5年。另一给药方案包括皮下施用约675mg的初始或起始剂量，然后每季度皮下施用约675mg的剂量持续例如约1年、2年、3年、4年或5年。然而，其他给药方案可以是可用的，这取决于从业者希望实现的药动学衰减的模式。在一些实施方案中，初始剂量(即起始剂量)和一个或更多个另外的剂量以相同的方式(例如，皮下或静脉内)施用。在一些实施方案中，所述一个或更多个另外的剂量以与初始或起始剂量不同的方式施用，例如初始剂量可静脉内施用，而所述一个或更多个另外的剂量可皮下施用。
在另一方面，本公开内容提供了降低患有难治性偏头痛的对象经历的每月头痛小时数的方法，其包括向对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量、每月剂量或每季度剂量之后有效地使每月头痛小时数降低至少0.1、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或更多个头痛小时。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量、每月剂量或每季度剂量之后有效地使每月头痛小时数降低至少20个头痛小时。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是有效地使每月头痛小时数降低至少40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125或更多个头痛小时。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量之后有效地使每月头痛小时数降低至少0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量、每月剂量或每季度剂量之后有效地使每月头痛小时数降低至少15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。
在另一方面，本公开内容提供了降低患有难治性偏头痛的对象经历的每月头痛日数的方法，其包括向所述对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量之后有效地使每月头痛日数降低至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个头痛日。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在每月剂量或每季度剂量之后有效地使每月头痛日数降低至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个头痛日。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量、每月剂量或每季度剂量之后有效地使每月头痛日数降低至少0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。
在另一方面，本公开内容提供了在患有难治性偏头痛的对象中降低急性头痛药物之使用的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是有效地使对象对抗头痛药物的每日、每月、每季度和/或每年使用降低至少0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是有效地使对象对抗头痛药物的每月使用降低至少15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。抗头痛药物可以是本文中所述的任何类型的急性头痛药物。急性头痛药物可以是偏头痛特异性头痛药物，其是本领域技术人员可识别的(例如，曲坦类和麦角化合物)。急性头痛药物的一些非限制性实例包括例如：5-HT1激动剂(和作用于其他5-HT1位点的激动剂)、曲坦类(例如，舒马曲坦、佐米曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、依来曲坦、阿莫曲坦、氟伐曲坦)、麦角生物碱类(例如，酒石酸麦角胺、马来酸麦角新碱和甲磺酸二氢麦角碱(例如，二氢麦角考宁、二氢麦角汀、二氢麦角隐亭和甲磺酸二氢麦角胺(DHE 45))和非甾体抗炎药(NSAID)(例如，阿司匹林、双氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、芬布芬、非诺洛芬、氟苯柳、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、萘丁美酮、萘普生、奥沙普秦、保泰松、吡罗昔康、舒林酸、托美汀或佐美酸、环氧合酶-2(COX-2)抑制剂(塞来昔布、罗非昔布、美洛昔康、JTE-522、L-745,337、NS398)、或其可药用盐)、阿片类/阿片样物质(例如，可待因、羟可酮)和巴比妥类。
在另一方面，本公开内容提供了在患有难治性偏头痛的对象中降低偏头痛特异性急性头痛药物的每月平均使用日数的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量之后有效地使急性头痛药物的每月平均使用日数降低至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多天。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在每月剂量或每季度剂量之后有效地使急性头痛药物的每月平均使用日数降低至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多天。在一些实施方案中，偏头痛特异性急性头痛药物是曲坦类或麦角化合物。
在另一方面，本公开内容提供了降低患有难治性偏头痛的对象经历的每月平均恶心和/或呕吐日数的方法，其包括向对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量之后有效地使每月恶心和/或呕吐日数降低至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个恶心和/或呕吐日。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在每月剂量或每季度剂量之后有效地使每月恶心和/或呕吐日数降低至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个恶心和/或呕吐日。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量、每月剂量或每季度剂量之后有效地使每月恶心和/或呕吐日数降低至少0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。
在另一方面，本公开内容提供了降低患有难治性偏头痛的对象经历的每月平均畏光和/或恐声日数的方法，其包括向对象施用一定量的调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量之后有效地使每月畏光和/或恐声日数降低至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个畏光和/或恐声日。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在每月剂量或每季度剂量之后有效地使每月畏光和/或恐声日数降低至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个畏光和/或恐声日。在一些实施方案中，单克隆抗体的量可以是在单次剂量、每月剂量或每季度剂量之后有效地使每月畏光和/或恐声日数降低至少0.1％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。
在另一方面，本公开内容提供了改善患有难治性偏头痛的对象生命质量的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，对象自我报告生命质量的变化。在一些实施方案中，使用偏头痛特异性生命质量(Migraine-Specific Quality of Life，MSQOL)调查表测量对象生命质量的变化。MSQOL调查表及其多种版本在本领域中是已知的。
在另一方面，本公开内容提供了改善对象的健康相关生命质量的方法，其包括向对象施用凋节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，对象自我报告健康相关生命质量的变化。在一些实施方案中，使用EuroQol-5维(EuroQol-5 Dimension，EQ 5D)调查表测量对象的健康相关生命质量的变化。EQ5D调查表及其多种版本在本领域中是已知的。
在另一方面，本公开内容提供了降低由患有难治性偏头痛的对象的偏头痛引起的失能的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，对象自我报告由偏头痛引起的失能的变化。在一些实施方案中，使用6项头痛影响测试(HIT-6)测量由对象的偏头痛引起的失能的变化。HIT-6及其多种版本在本领域中是已知的。
在另一方面，本公开内容提供了降低由患有难治性偏头痛的对象的偏头痛引起的失能的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，对象自我报告由偏头痛引起的失能的变化。在一些实施方案中，使用偏头痛失能评估(Migraine Disability Assessment，MIDAS)调查表测量由对象的偏头痛引起的失能的变化。MIDAS调查表及其多种版本在本领域中是已知的。
在另一方面，本公开内容提供了降低对象中抑郁的方法，其包括向患有难治性偏头痛的对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，对象自我报告抑郁状态的变化。在一些实施方案中，使用2项患者健康调查表(two-item patient health questionnaire，PHQ-2)或9项患者健康调查表(nine-itempatient health questionnaire，PHQ-9)测量对象的抑郁状态的变化。在一些实施方案中，使用2项患者健康调查表(PHQ-2)和9项患者健康调查表(PHQ-9)测量对象的抑郁状态的变化。
在另一方面，本公开内容提供了改善患有难治性偏头痛的对象的工作生产率(productivity)和活动的方法，其包括向对象施用调节CGRP途径的单克隆抗体(例如，单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。在一些实施方案中，对象自我报告工作生产率和活动的变化。在一些实施方案中，使用工作生产率和活动损伤(Work Productivity and ActivityImpairment，WPAI)调查表测量对象的工作生产率和活动的变化。WPAI调查表及其多种版本在本领域中是已知的。
对于本文中所述的所有方法，提及抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)还包括包含这些药剂的一种或更多种的组合物。因此，可根据涉及本文中所述的抗体的方法使用这样的组合物。这些组合物还可包含合适的赋形剂，例如本文中别处描述的可药用赋形剂。
本文中所述的抗体(例如，单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)可以以任何治疗剂量、通过任何合适的途径并以任何合适的制剂施用于个体或对象。对于本领域技术人员应明显的是，本文中所述的实例并非旨在进行限制，而是为了举例说明可用技术。因此，在一些实施方案中，可根据已知方法(例如静脉内施用，例如通过推注或通过在例如以下时间内的连续输注)来将本文中所述的抗体施用于对象：约10分钟、约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约90分钟、约120分钟、约180分钟或约240分钟。本文中所述的抗体还可通过以下施用于对象：皮下、肌内、腹膜内、脑脊髓内、关节内、舌下、动脉内、滑膜内、通过吹入(insufflation)、鞘内、经口、吸入、鼻内(例如，具有或不具有吸入)、口含、经直肠、经皮、心内、骨内、皮内、经黏膜、经阴道、玻璃体内、关节外周、局部、经表皮或表面途径。施用可以是全身性的(例如，静脉内施用)或局部的。用于液体制剂的可商购雾化器(包括喷射雾化器和超声雾化器)可用于施用。液体制剂可直接雾化，并且冻干粉末可在重构之后雾化。或者，可使用氟碳化合物(fluorocarbon)制剂和计量吸入器来将本文中所述的抗体气雾化，或者将其作为冻干和经研磨粉末吸入。
在一些实施方案中，可通过位点特异性或靶向局部递送技术来施用本文中所述的抗体。位点特异性或靶向局部递送技术的一些实例包括抗体的多种可植入贮库源或局部递送导管，例如输注导管、留置导管或针导管、合成移植物、外膜包裹物(adventitial wrap)、分流器(shunt)和支架或其他可植入装置、位点特异性载体、直接注射或直接施加。参见例如PCT公开No.WO 00/53211和美国专利No.5,981,568，其在此通过引用整体并入。
本文中所述的抗体的多种制剂可用于施用。在一些实施方案中，可施用纯抗体。在一些实施方案中，抗体和可药用赋形剂可在多种制剂中。可药用赋形剂是本领域中已知的，并且是促进施用药理学有效物质的相对惰性的物质。例如，赋形剂可赋予形式或稠度，或用作稀释剂。合适的赋形剂包括但不限于：稳定剂、润湿剂和乳化剂、用于改变渗量(osmolarity)的盐、包封剂、缓冲剂和皮肤渗透增强剂。赋形剂以及用于肠胃外和非肠胃外药物递送的制剂在Remington，The Science and Practice of Pharmacy第20版MackPublishing(2000)中阐述。
在一些实施方案中，可将这些药剂(包括本文中所述的抗体)配制成用于通过注射(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内等)施用。因此，这些药剂可与可药用载剂(例如盐水、林格液(Ringer’s solution)、右旋糖溶液等)组合。特定的剂量方案(即，剂量、时间和重复)将取决于特定个体和该个体的病史(medical history)。
在一些实施方案中，这些药剂(包括本文中所述的抗体)可配制成用于外周施用。这样的制剂可通过任何合适的外周途径(包括静脉内和皮下)外周施用。制备用于外周施用的药剂可包含不经中枢、脊髓、鞘内递送或直接递送到CNS中的物质、药物和/或抗体。外周施用途径的一些非限制性实例包括以下途径：经口、舌下、口含、表面、经直肠、通过吸入、经皮、皮下、静脉内、动脉内、肌内、心内、骨内、皮内、腹膜内、经黏膜、经阴道、玻璃体内、关节内、关节外周、局部或经表皮。
根据本公开内容使用的抗体的治疗性制剂可通过将具有期望纯度的抗体与任选的可药用载体、赋形剂或稳定剂(Remington，The Science and Practice of Pharmacy第20版Mack Publishing(2000))混合来制备以供储存和/或使用，并且其在一些情况下可以是冻干制剂或水溶液的形式。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所使用的剂量和浓度下对接受者无毒。抗体的治疗性制剂可包含一种或更多种可药用载体、赋形剂或稳定剂，这样的物质的一些非限制性实例包括：缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；盐，例如氯化钠；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如，十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵(hexamethonium chloride)；苯扎氯铵、苄索氯铵；酚、丁基或苄基醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸(例如，浓度为0.1mM至100mM、0.1mM至1mM、0.01mM至50mM、1mM至50mM、1mM至30mM、1mM至20mM、10mM至25mM)，例如甘氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂(例如，浓度为0.001mg/mL至1mg/mL、0.001mg/mL至1mg/mL、0.001mg/mL至0.1mg/mL、0.001mg/mL至0.01mg/mL、0.01mg/mL至0.1mg/mL)，例如EDTA(例如EDTA二钠二水合物)；糖(例如，浓度为1mg/mL至500mg/mL、10mg/mL至200mg/mL、10mg/mL至100mg/mL、50mg/mL至150mg/mL)，例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反荷离子，例如钠；金属配合物(例如Zn-蛋白质配合物)；和/或非离子表面活性剂(例如，浓度为0.01mg/mL至10mg/mL、0.01mg/mL至1mg/mL、0.1mg/mL至1mg/mL、0.01mg/mL至0.5mg/mL)，例如TWEENTM(例如，聚山梨酯(例如，聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80))、PLURONICSTM或聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)。
可在多种物理特性中任一种的方面来表征抗体制剂。例如，液体抗体制剂可具有对于治疗效力、安全性和储存的任何合适的pH。例如，液体抗体制剂的pH可以是pH 4至约pH9、约pH 5至约pH 8、约pH 5至约pH 7或约pH 6至约pH 8。在一些实施方案中，液体抗体制剂的pH可以是约3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5或约10或者更高或更低。
在另一个实例中，液体抗体制剂可具有对于治疗效力、安全性和储存的任何合适的黏度。例如，在25℃下，液体抗体制剂的黏度可以是约0.5厘泊(centipoise，cP)至约100cP、约1cP至约50cP、约1cP至约20cP、约1cP至约15cP、或约5cP至约15cP。在一些实施方案中，在25℃下，液体抗体制剂的黏度可以是约0.5cP、1cP、1.2cP、1.4cP、1.6cP、1.8cP、2.0cP、2.2cP、2.4cP、2.6cP、2.8cP、3.0cP、3.2cP、3.4cP、3.6cP、3.8cP、4.0cP、4.2cP、4.4cP、4.6cP、4.8cP、5.0cP、5.2cP、5.4cP、5.6cP、5.8cP、6.0cP、6.2cP、6.4cP、6.6cP、6.8cP、7.0cP、7.2cP、7.4cP、7.6cP、7.8cP、8.0cP、8.2cP、8.4cP、8.6cP、8.8cP、9.0cP、9.2cP、9.4cP、9.6cP、9.8cP、10.0cP、10.2cP、10.4cP、10.6cP、10.8cP、11.0cP、11.2cP、11.4cP、11.6cP、11.8cP、12.0cP、12.2cP、12.4cP、12.6cP、12.8cP、13.0cP、13.2cP、13.4cP、13.6cP、13.8cP、14.0cP、14.2cP、14.4cP、14.6cP、14.8cP或约15.0cP，或者黏度可更高或更低。
在另一个实例中，液体抗体制剂可具有对于治疗效力、安全性和储存的任何合适的电导率。例如，液体抗体制剂的电导率可以是约0.1毫西门子/厘米(mS/cm)至约15mS/cm、0.1mS/cm至10mS/cm、0.1mS/cm至5mS/cm、0.1mS/cm至2mS/cm或0.1mS/cm至1.5mS/cm。在一些实施方案中，液体抗体制剂的电导率可以是0.19mS/cm、0.59mS/cm、1.09mS/cm、1.19mS/cm、1.29mS/cm、1.39mS/cm、1.49mS/cm、1.59mS/cm、1.69mS/cm、1.79mS/cm、1.89mS/cm、1.99mS/cm、2.09mS/cm、2.19mS/cm、2.29mS/cm、2.39mS/cm、2.49mS/cm、2.59mS/cm、2.69mS/cm、2.79mS/cm、2.89mS/cm、2.99mS/cm、3.09mS/cm、3.19mS/cm、3.29mS/cm、3.39mS/cm、3.49mS/cm、3.59mS/cm、3.69mS/cm、3.79mS/cm、3.89mS/cm、3.99mS/cm、4.09mS/cm、4.19mS/cm、4.29mS/cm、4.39mS/cm、4.49mS/cm、4.59mS/cm、4.69mS/cm、4.79mS/cm、4.89mS/cm、4.99mS/cm、5.09mS/cm、6.09mS/cm、6.59mS/cm、7.09mS/cm、7.59mS/cm、8.09mS/cm、8.59mS/cm、9.09mS/cm、9.59mS/cm、10.09mS/cm、10.59mS/cm、11.09mS/cm、11.59mS/cm、12.09mS/cm、12.59mS/cm、13.09mS/cm、13.59mS/cm、14.09mS/cm、14.59mS/cm或约15.09mS/cm，或者电导率可更高或更低。
在另一个实例中，液体抗体制剂具有对于治疗效力、安全性和储存的任何合适的渗量浓度(osmolality)。例如，液体抗体制剂的渗量浓度可以是约50毫摩尔/千克(mOsm/kg)至约5000mOsm/kg、约50mOsm/kg至约2000mOsm/kg、约50mOsm/kg至约1000mOsm/kg、约50mOsm/kg至约750mOsm/kg、或约50mOsm/kg至约500mOsm/kg。在一些实施方案中，液体抗体制剂的渗量浓度可以是约50mOsm/kg、60mOsm/kg、70mOsm/kg、80mOsm/kg、90mOsm/kg、100mOsm/kg 120mOsm/kg、140mOsm/kg、160mOsm/kg、180mOsm/kg、200mOsm/kg、220mOsm/kg、240mOsm/kg、260mOsm/kg、280mOsm/kg、300mOsm/kg、320mOsm/kg、340mOsm/kg、360mOsm/kg、380mOsm/kg、400mOsm/kg、420mOsm/kg、440mOsm/kg、460mOsm/kg、480mOsm/kg、500mOsm/kg、520mOsm/kg、540mOsm/kg、560mOsm/kg、580mOsm/kg、600mOsm/kg、620mOsm/kg、640mOsm/kg、660mOsm/kg、680mOsm/kg、700mOsm/kg、720mOsm/kg、740mOsm/kg、760mOsm/kg、780mOsm/kg、800mOsm/kg、820mOsm/kg、840mOsm/kg、860mOsm/kg、880mOsm/kg、900mOsm/kg、920mOsm/kg、940mOsm/kg、960mOsm/kg、980mOsm/kg、1000mOsm/kg、1050mOsm/kg、1100mOsm/kg、1150mOsm/kg、1200mOsm/kg、1250mOsm/kg、1300mOsm/kg、1350mOsm/kg、1400mOsm/kg、1450mOsm/kg、约1500mOsm/kg，或者渗量浓度可更高或更低。
包含抗体的脂质体可通过本领域中已知的方法制备，例如Epstein，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：3688(1985)；Hwang，et al.，Proc.Natl Acad.Sci.USA 77：4030(1980)；以及美国专利No.4,485,045和4,544,545中描述的。美国专利No.5,013,556中公开了循环时间延长的脂质体。特别可用的脂质体可通过反相蒸发方法用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-derivatized phosphatidylethanolamine，PEG-PE)的脂质组合物产生。将脂质体通过限定孔尺寸的过滤器挤出以产生具有期望直径的脂质体。
还可将活性成分包封在例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微囊中，例如分别为羟甲基纤维素或明胶微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊；包封在胶体药物递送系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米粒和纳米胶囊)中；或包封在粗乳剂(macroemulsion)中。这样的技术在Remington，The Science and Practice of Pharmacy第20版MackPublishing(2000)中公开。
可制备缓释制剂。缓释制剂的一些合适实例包括包含抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，所述基质是成型制品(例如膜或微囊)的形式。缓释基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或’聚(乙烯醇))、聚丙交酯(美国专利No 3,773,919)、L-谷氨酸与7-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOTrM(由乳酸-乙醇酸共聚物和乙酸亮丙瑞林构成的可注射微球)、蔗糖乙酸异丁酸酯和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
待用于体内施用的制剂通常应是无菌的。这通过例如经由无菌滤膜过滤来容易地实现。通常将治疗性抗体组合物放置到具有无菌进入口的容器中，例如静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶。
根据本发明的组合物可以是用于经口、肠胃外或直肠施用、或通过吸入或吹入施用的单位剂量形式，例如片剂、丸剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、溶液剂或混悬剂或栓剂。在一些情况下，单位剂量形式可在可用于将单位剂量施用于对象的预填充容器(例如，预填充注射器)中供应。
在一些实施方案中，可制备用于任何合适的施用途径的包含本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的制剂，其中抗体量为约0.1mg至约3000mg、约1mg至约1000mg、约100mg至约1000mg、或约100mg至约500mg、约200mg至约800mg、约500mg至约1500mg、约1500mg至约2500mg、或约2000mg至约3000mg。在一些情况下，包含本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的制剂可包含以下抗体量：至多或至少约0.1mg、1mg、100mg、1mg、10mg、25mg、50mg、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550mg、575mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg、2000mg、或约3000mg。
在一些实施方案中，可制备用于任何合适的施用途径的包含本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的液体制剂，其中抗体浓度为约0.1mg/mL至约500mg/mL、约0.1mg/mL至约375mg/mL、约0.1mg/mL至约250mg/mL、约0.1至约175mg/mL、约0.1至100mg/mL、约1mg/mL至约500mg/mL、约1mg/mL至约375mg/mL、约1mg/mL至约300mg/mL、约1mg/mL至250mg/mL、约1mg/mL至200mg/mL、约1mg/mL至150mg/mL、约1mg/mL至约100mg/mL、约10mg/mL至500mg/mL、约10mg/mL至约375mg/mL、约10mg/mL至250mg/mL、约10mg/mL至约150mg/mL、约10mg/mL至100mg/mL、约100mg/mL至500mg/mL、约100mg/mL至450mg/mL、约100mg/mL至400mg/mL、约100mg/mL至约350mg/mL、约100mg/mL至约300mg/mL、约100mg/mL至约250mg/mL、100mg/mL至200mg/mL、或约100mg/mL至约150mg/mL。在一些实施方案中，液体制剂可包含以下浓度的本文中所述的抗体：至多、至少或小于约0.1、0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490、或约500mg/mL。
抗体制剂可包含一种或更多种组分，其包含抗体和本文中别处描述的其他物质。抗体和其他组分可以是对于抗体的治疗效力、安全性和储存的任何合适的量和/或任何合适的浓度。在一个实例中，抗体制剂可以是包含以下的溶液：约51.4mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、16至20mM组氨酸、0.1mg/mL甲硫氨酸、84mg/mL海藻糖二水合物、0.05mg/mL EDTA二钠二水合物和0.2mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约200mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、15mM精氨酸，78mg/mL蔗糖、0.3mg/mL EDTA和0.1mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约175mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、20mM甘氨酸、88mg/mL海藻糖二水合物、0.015mg/mL EDTA和0.25mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约225mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、23mM天冬酰胺、84mg/mL山梨糖醇、0.1mg/mLEDTA和0.15mg/mL聚山梨酯60。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约150mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、17mM天冬酰胺、74mg/mL甘露糖醇、0.025mg/mLEDTA和0.2mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约100mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、16mM精氨酸、87mg/mL甘露糖醇、0.025mg/mLEDTA和0.15mg/mL聚山梨酯20。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约250mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、25mM组氨酸、74mg/mL甘露糖醇、0.025mg/mLEDTA和0.25mg/mL聚山梨酯20。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约50mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、19mM精氨酸、84mg/mL蔗糖、0.05mg/mL EDTA和0.3mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约125mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、22mM甘氨酸、79mg/mL海藻糖二水合物、0.15mg/mL EDTA和0.15mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可以是包含以下的溶液：约175mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、20mM组氨酸、0.1mg/mL甲硫氨酸、84mg/mL海藻糖二水合物、0.05mg/mL EDTA二钠二水合物和0.2mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约200mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、30mM精氨酸、78mg/mL蔗糖、0.3mg/mL EDTA和0.1mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约175mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、20mM甘氨酸、88mg/mL海藻糖二水合物、0.015mg/mL EDTA和0.15mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约150mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、20mM组氨酸、84mg/mL蔗糖、0.05mg/mL EDTA和0.2mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约225mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、23mM组氨酸、84mg/mL山梨糖醇、0.1mg/mL EDTA和0.15mg/mL聚山梨酯60。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约150mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、17mM天冬酰胺、74mg/mL甘露糖醇、0.3mg/mLEDTA和0.2mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约100mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、16mM精氨酸、87mg/mL甘露糖醇、0.025mg/mLEDTA和0.25mg/mL聚山梨酯20。
在另一个实例中，抗体制剂可包含约250mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、25mM组氨酸、89mg/mL甘露糖醇、0.025mg/mLEDTA和0.25mg/mL聚山梨酯20。
在另一个实例中，抗体制剂可包含125mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、29mM精氨酸、84mg/mL蔗糖、0.05mg/mL EDTA和0.3mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含150mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、25mM天冬酰胺、84mg/mL甘露糖醇、0.05mg/mL EDTA和0.2mg/mL聚山梨酯80。
在另一个实例中，抗体制剂可包含145mg/mL抗体(例如，抗体G1、另一抗CGRP拮抗剂抗体或调节CGRP途径的单克隆抗体)、22mM组氨酸、72mg/mL海藻糖二水合物、0.05mg/mLEDTA和0.1mg/mL聚山梨酯80。
本文中所述的抗体可使用任何合适的方法，包括通过注射(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内等)施用。如本文中所述，抗体还可以通过吸入施用。在一些情况下，抗体可在具有或不具有吸入的情况下经鼻施用。通常来说，对于本文中所述的抗体施用，初始候选剂量可以是约2mg/kg。出于本发明的目的，典型的每日剂量可能是以下中的任一种：约3μg/kg至约30μg/kg至约300μg/kg至约3mg/kg至约30mg/kg至约100mg/kg或更多，这取决于上文提及的因素。例如，可使用以下剂量：约1mg/kg、约2.5mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约25mg/kg和约30mg/kg。对于在数天或更长时间内的重复施用，根据病症，持续治疗直至出现期望的症状抑制或直至达到足够的治疗水平，例如减轻疼痛。一个示例性的给药方案包括施用约8.5mg/kg或约10mg/kg的初始或起始剂量，然后是抗体的约2.8mg/kg的维持剂量，或者然后是每隔一周约2.8mg/kg的维持剂量。另一示例性给药方案包括以约1小时的输注静脉内或皮下向对象每月(例如，约每28天)一次地施用以下剂量：约100mg、125mg、150mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、约675mg或约900mg。例如，一个示例性给药方案可包括皮下施用约225mg的初始抗体剂量，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。另一示例性给药方案包括皮下施用约675mg的初始抗体剂量，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。另一给药方案包括以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的初始或起始剂量，然后每季度以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的剂量持续例如1年、2年、3年、4年或5年。另一给药方案包括皮下施用约675mg的初始或起始剂量，然后每季度皮下施用约675mg的剂量持续例如约1年、2年、3年、4年或5年。然而，其他给药方案可以是可用的，这取决于从业者希望实现的药动学衰减的模式。例如，在一些实施方案中，考虑每周给药约一次至约四次。这种治疗的过程容易通过常规技术和测定进行监测。给药方案(包括使用的CGRP拮抗剂)可随时间变化。
在一些实施方案中，本文中所述并且施用于对象的抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量可以是约0.1μg至约3000mg、1mg至1000mg、100mg至1000mg、100mg至500mg、0.1mg至5000mg、1mg至4000mg、250mg至1000mg、500mg至1000mg、100mg至900mg、400mg至900mg、10mg至3000mg、10mg至2000mg、100mg至2000mg、150mg至2000mg、200mg至2000mg、250mg至2000mg、300mg至2000mg、350mg至2000mg、400mg至2000mg、450mg至2000mg、500mg至2000mg、550mg至2000mg、600mg至2000mg、650mg至2000mg、700mg至2000mg、750mg至2000mg、800mg至2000mg、850mg至2000mg、900mg至2000mg、950mg至2000mg、或1000mg至2000mg。在一些实施方案中，本文中所述并且施用于对象的抗体的剂量或量可以是、可以是至多、可以是小于或可以是至少约0.1μg、1μg、100μg、1mg、10mg、25mg、50mg、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550mg、575mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1000mg、1100mg、1200mg、1300mg、1400mg、1500mg、1600mg、1700mg、1800mg、1900mg、2000mg、或约3000mg。在一些实施方案中，该量为约225mg至约1000mg，例如约225mg、约675mg或约900mg。一个示例性给药方案包括皮下施用约225mg的初始抗体剂量，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。一个示例性给药方案包括皮下施用约675mg的初始抗体剂量，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。另一给药方案包括以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的初始或起始剂量，然后每季度以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的剂量持续例如1年、2年、3年、4年或5年。另一给药方案包括皮下施用约675mg的初始或起始剂量，然后每季度皮下施用约675mg的剂量持续例如约1年、2年、3年、4年或5年。然而，其他给药方案可以是可用的，这取决于从业者希望实现的药动学衰减的模式。
在一些实施方案中，本文中所述并且施用于对象的抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量可以是约0.1至500、0.1至100、0.1至50、0.1至20、0.1至10、1至10、1至7、1至5、或0.1至3mg/kg体重。在一些实施方案中，本文中所述并且施用于对象的抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量可以是、可以是至多、可以是小于或可以是至少约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、15.5、16.0、16.5、17.0、17.5、18.0、18.5、19.0、19.5、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475或约500mg/kg体重。
在一些实施方案中，向对象施用本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量的频率可有所不同。在一些实施方案中，可在整个治疗过程中向对象给予单次剂量的抗体。在一些实施方案中，向对象施用抗体的剂量或量的频率是恒定的(例如，约每月一次或约每季度一次施用)。在一些实施方案中，向对象施用抗体的剂量或量的频率为约每季度，持续约1年、2年、3年、4年或5年。在一些实施方案中，向对象施用本文中所述抗体的剂量或量的频率是可变的(例如，初始或起始剂量，然后是每月一次的剂量，然后是在约3个月和约7个月时的另外的剂量)。在一些实施方案中，向对象施用抗体的频率为、为至少、为小于或为至多约每天1、2、3、4、5或6次。在一些实施方案中，向对象施用抗体(例如，调节CGRP途径的单克降抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的频率为、为至少、为小于或为至多约每天1、2、3、4、5或6个剂量。
在一些实施方案中，向对象施用本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量的频率为、为至少、为小于或为至多每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、180或200天1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次。
在一些实施方案中，向对象施用本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量的频率为、为至少、为小于或为至多每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100周1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次。在一些实施方案中，向对象施用本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的频率小于每周1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个剂量。
在一些实施方案中，向对象施用抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量的频率为、为至少、为小于或为至多每个月、每2个月、每3个月、每4个月、每5个月、每6个月、每7个月、每8个月、每9个月、每10个月、每11个月、每12个月、每13个月、每14个月、每15个月、每16个月、每17个月或每18个月约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次。在一些实施方案中，向对象施用抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量的频率为每一个月约一次。在一些实施方案中，向对象施用抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量的频率为每三个月约一次。在一些实施方案中，向对象施用本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克降抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的频率小于每个月约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个剂量。在一些实施方案中，抗体的剂量或量可每个月1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次或更多次向对象施用(例如，皮下或以输注静脉内)。
在一些实施方案中，可每月一次地向对象施用(例如，皮下或以输注静脉内)以下剂量或量的抗体：约50mg、100mg、150mg、200mg、225mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、675mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg、1250mg、1300mg、1350mg、1400mg、1450mg、1500mg、1550mg、1600mg、1650mg、1700mg、1750mg、1800mg、1850mg、1900mg、1950mg、2000mg、2050mg、2100mg、2150mg、2200mg、2250mg、2300mg、2350mg、2400mg、2450mg、2500mg、2550mg、2600mg、2650mg、2700mg、2750mg、2800mg、2850mg、2900mg、2950mg、3000mg或更多。在一些实施方案中，可每月一次地向对象施用(例如，皮下或以输注静脉内)以下剂量或量的抗体：约0.1mg至5000mg、1mg至4000mg、10mg至3000mg、10mg至2000mg、100mg至2000mg、150mg至2000mg、200mg至2000mg、250mg至2000mg、300mg至2000mg、350mg至2000mg、400mg至2000mg、450mg至2000mg、500mg至2000mg、550mg至2000mg、600mg至2000mg、650mg至2000mg、700mg至2000mg、750mg至2000mg、800mg至2000mg、850mg至2000mg、900mg至2000mg、950mg至2000mg、或约1000mg至2000mg。在一些实施方案中，每月一次地施用约225mg至约1000mg、例如约225mg的抗体。一个示例性给药方案包括皮下施用约675mg的初始抗体剂量，然后皮下施用约225mg的每月抗体剂量持续例如约2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月、或甚至多于一年(例如，18个月、两年或三年)的时间。然而，其他给药方案可以是可用的，这取决于从业者希望实现的药动学衰减的模式。
在一些实施方案中，可每三个月向对象施用(例如，皮下或以输注静脉内)以下剂量或量的抗体：约50mg、100mg、150mg、200mg、225mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、675mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg、1250mg、1300mg、1350mg、1400mg、1450mg、1500mg、1550mg、1600mg、1650mg、1700mg、1750mg、1800mg、1850mg、1900mg、1950mg、2000mg、2050mg、2100mg、2150mg、2200mg、2250mg、2300mg、2350mg、2400mg、2450mg、2500mg、2550mg、2600mg、2650mg、2700mg、2750mg、2800mg、2850mg、2900mg、2950mg、3000mg或更多。在一些实施方案中，可每三个月向对象施用(例如，皮下或以输注静脉内)以下剂量或量的抗体：约0.1mg至5000mg、1mg至4000mg、10mg至3000mg、10mg至2000mg、100mg至2000mg、150mg至2000mg、200mg至2000mg、250mg至2000mg、300mg至2000mg、350mg至2000mg、400mg至2000mg、450mg至2000mg、500mg至2000mg、550mg至2000mg、600mg至2000mg、650mg至2000mg、700mg至2000mg、750mg至2000mg、800mg至2000mg、850mg至2000mg、900mg至2000mg、950mg至2000mg、或1000mg至2000mg。在一些实施方案中，每三个月一次或更少地施用约225mg至约1000mg，例如约每三个月皮下施用约675mg或约每三个月以输注静脉内施用约900mg。一个示例性给药方案包括以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的初始或起始剂量，然后每三个月以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的剂量持续1年、2年、3年、4年或5年。另一示例性给药方案包括皮下施用约675mg的初始或起始剂量，然后每三个月皮下施用约675mg的剂量持续约1年、2年、3年、4年或5年。然而，其他给药方案可以是可用的，这取决于从业者希望实现的药动学衰减的模式。
在一些实施方案中，可每六个月向对象施用(例如，皮下或以输注静脉内)以下剂量或量的抗体：约50mg、100mg、150mg、200mg、225mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、675mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg、1250mg、1300mg、1350mg、1400mg、1450mg、1500mg、1550mg、1600mg、1650mg、1700mg、1750mg、1800mg、1850mg、1900mg、1950mg、2000mg、2050mg、2100mg、2150mg、2200mg、2250mg、2300mg、2350mg、2400mg、2450mg、2500mg、2550mg、2600mg、2650mg、2700mg、2750mg、2800mg、2850mg、2900mg、2950mg、3000mg或更多。在一些实施方案中，可每六个月向对象施用(例如，皮下或以输注静脉内)以下剂量或量的抗体：约0.1mg至5000mg、1mg至4000mg、10mg至3000mg、10mg至2000mg、100mg至2000mg、150mg至2000mg、200mg至2000mg、250mg至2000mg、300mg至2000mg、350mg至2000mg、400mg至2000mg、450mg至2000mg、500mg至2000mg、550mg至2000mg、600mg至2000mg、650mg至2000mg、700mg至2000mg、750mg至2000mg、800mg至2000mg、850mg至2000mg、900mg至2000mg、950mg至2000mg、或1000mg至2000mg。在一些实施方案中，每6个月一次或更少地施用225mg至1000mg。然而，其他给药方案可以是可用的，这取决于从业者希望实现的药动学衰减的模式。
在一些实施方案中，向对象施用(例如，皮下或静脉内)抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量的频率为、为至少、为小于或为至多每季度1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次。可理解，“季度”可指四分之一年的时间，或者也可指日历季度，例如以下时间：1月1日至3月31日、4月1日至6月30日、7月1日至9月30日、或10月1日至12月31日。在一些情况下，“季度”可指约三个月的时间。
在一些实施方案中，可每季度向对象施用(例如，皮下或以输注静脉内)以下剂量或量的抗体：约50mg、100mg、150mg、200mg、225mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、675mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg、1250mg、1300mg、1350mg、1400mg、1450mg、1500mg、1550mg、1600mg、1650mg、1700mg、1750mg、1800mg、1850mg、1900mg、1950mg、2000mg、2050mg、2100mg、2150mg、2200mg、2250mg、2300mg、2350mg、2400mg、2450mg、2500mg、2550mg、2600mg、2650mg、2700mg、2750mg、2800mg、2850mg、2900mg、2950mg、3000mg或更多。在一些实施方案中，可每季度向对象施用(例如，皮下或以输注静脉内)以下剂量或量的抗体：约0.1mg至5000mg、1mg至4000mg、10mg至3000mg、10mg至2000mg、100mg至2000mg、150mg至2000mg、200mg至2000mg、250mg至2000mg、300mg至2000mg、350mg至2000mg、400mg至2000mg、450mg至2000mg、500mg至2000mg、550mg至2000mg、600mg至2000mg、650mg至2000mg、700mg至2000mg、750mg至2000mg、800mg至2000mg、850mg至2000mg、900mg至2000mg、950mg至2000mg、或1000mg至2000mg。一个示例性给药方案包括以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的初始或起始剂量，然后每季度以约60分钟的输注静脉内施用约900mg的剂量持续1年、2年、3年、4年或5年。另一示例性给药方案包括皮下施用约675mg的初始或起始剂量，然后每季度皮下施用约675mg的剂量持续约1年、2年、3年、4年或5年。然而，其他给药方案可以是可用的，这取决于从业者希望实现的药动学衰减的模式。
在一些实施方案中，施用抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量的频率为、为至少、为小于或为至多每年、每两年、每三年、每四年或每五年约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次。在一些实施方案中，向对象施用抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的频率小于每年1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个剂量。
在一些实施方案中，可每年一次地向对象施用以下剂量或量的抗体：约50mg、100mg、150mg、200mg、225mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg、500mg、550mg、600mg、650mg、675mg、700mg、750mg、800mg、850mg、900mg、950mg、1000mg、1050mg、1100mg、1150mg、1200mg、1250mg、1300mg、1350mg、1400mg、1450mg、1500mg、1550mg、1600mg、1650mg、1700mg、1750mg、1800mg、1850mg、1900mg、1950mg、2000mg、2050mg、2100mg、2150mg、2200mg、2250mg、2300mg、2350mg、2400mg、2450mg、2500mg、2550mg、2600mg、2650mg、2700mg、2750mg、2800mg、2850mg、2900mg、2950mg、3000mg或更多。在一些实施方案中，可每年一次地向对象施用以下剂量或量的抗体：约0.1mg至5000mg、1mg至4000mg、10mg至3000mg、10mg至2000mg、100mg至2000mg、150mg至2000mg、200mg至2000mg、250mg至2000mg、300mg至2000mg、350mg至2000mg、400mg至2000mg、450mg至2000mg、500mg至2000mg、550mg至2000mg、600mg至2000mg、650mg至2000mg、700mg至2000mg、750mg至2000mg、800mg至2000mg、850mg至2000mg、900mg至2000mg、950mg至2000mg、或1000mg至2000mg。在一些实施方案中，每年一次或更少地施用约450mg至约2000mg。
在一些实施方案中，方法可包括在多天向对象施用本文中所述的抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)。多天中的2、3、4、5、6、7、8或更多天可相隔多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或更多天。在一些实施方案中，多天中的两天相隔多于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多天。此外，在一些实施方案中，在多天中的第一天施用的抗体量可与在第二天施用的抗体量不同(例如，更高或更低)。
在一些实施方案中，可向对象施用初始剂量(其也被称为负荷剂量或起始剂量)的本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)，然后以期望的间隔施用一个或更多个另外的剂量。在一些实施方案中，初始剂量(或起始剂量)和一个或更多个另外的剂量是相同的剂量。在一些实施方案中，一个或更多个另外的剂量是与初始或起始剂量不同的剂量。在一些实施方案中，初始剂量和一个或更多个另外的剂量以相同方式，即皮下或静脉内施用。在一些实施方案中，所述一个或更多个另外的剂量以与初始剂量不同的方式施用，例如初始剂量可静脉内施用，而所述一个或更多个另外的剂量可皮下施用。在一些实施方案中，施用一个或更多个另外的剂量的频率是恒定的(例如，每月或每三个月)。在一些实施方案中，施用一个或更多个另外的剂量的频率是可变的(例如，在初始剂量之后一个月施用一个另外的剂量，然后在初始剂量之后三个月施用另一另外的剂量)。可使用初始负荷剂量、另外的剂量和另外的剂量的频率(例如，包括本文中所述的那些)的任何期望和/或治疗方案。一个示例性方案包括皮下施用约225mg抗CGRP拮抗剂抗体的初始负荷剂量，然后以一个月的间隔皮下施用约225mg抗体的后续维持剂量。一个示例性方案包括皮下施用约675mg抗CGRP拮抗剂抗体的初始负荷剂量，然后以一个月的间隔皮下施用约225mg抗体的后续维持剂量。另一示例性方案包括以约60分钟的输注静脉内施用约900mg抗CGRP拮抗剂抗体的初始剂量，然后以三个月的间隔以约60分钟的输注静脉内施用约900mg抗CGRP拮抗剂抗体的后续维持剂量。另一示例性方案包括皮下施用约675mg抗CGRP拮抗剂抗体的初始或起始剂量，然后以三个月的间隔皮下施用约675mg抗CGRP拮抗剂抗体的后续维持剂量。
在一些实施方案中，可向对象施用以下初始剂量(或起始剂量)的抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)：约0.1μg、1μg、100μg、1mg、10mg、25mg、50mg、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550mg、575mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1000mg、1500mg、2000mg、或约3000mg；然后施用一个或更多个以下另外剂量的抗体：约0.1μg、1μg、100μg、1mg、10mg、25mg、50mg、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550mg、575mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、725mg、750mg、775mg、800mg、825mg、850mg、875mg、900mg、925mg、950mg、975mg、1000mg、1500mg、2000mg、或约3000mg。一个示例性方案包括皮下施用约225mg抗CGRP拮抗剂抗体的初始负荷剂量，然后以一个月的间隔皮下施用约225mg抗体的后续维持剂量。一个示例性方案包括皮下施用约675mg抗CGRP拮抗剂抗体的初始负荷剂量，然后以一个月的间隔皮下施用约225mg抗体的后续维持剂量。另一示例性方案包括以约60分钟的输注静脉内施用约900mg抗CGRP拮抗剂抗体的初始剂量，然后以三个月的间隔以约60分钟的输注静脉内施用约900mg抗CGRP拮抗剂抗体的后续维持剂量。另一示例性方案包括皮下施用约675mg抗CGRP拮抗剂抗体的初始或起始剂量，然后以三个月的间隔皮下施用约675mg抗CGRP拮抗剂抗体的后续维持剂量。
在一些实施方案中，可将本文中所述的抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量或量分成亚剂量并作为多个亚剂量施用，这取决于例如施用途径和/或施用的特定制剂。例如，在皮下施用剂量的情况下，可将皮下剂量分成多个亚剂量，并且将每个亚剂量施用在不同部位以避免例如在单个部位的较大单次皮下注射。例如，可将900mg的静脉内剂量分成四个各自为225mg的亚剂量。作为另一个实例，可将675mg的皮下剂量分成三个各自为225mg的亚剂量，并且可将每个225mg剂量施用在不同部位，这可有助于使在每个部位注射的体积最小化。亚剂量的分配可相等(例如，三个相等的亚剂量)或可以不相等(例如，三个亚剂量，其中两个亚剂量是另一个亚剂量的两倍大)。
在一些实施方案中，在治疗过程中向对象施用的抗体剂量的数目可根据例如在该对象中实现难治性偏头痛和/或与难治性偏头痛相关的继发症状的发病率降低而有所不同。例如，在治疗过程中施用的剂量的数目可以是、可以是至少或可以是至多1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、或者可无限期地给予治疗。在一些情况下，治疗可以是急性的，从而向对象施用至多1、2、3、4、5或6个剂量用于进行治疗。
在一些实施方案中，本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量(或亚剂量)或量可配制成液体制剂并且施用(例如，通过皮下注射、通过静脉内注射)于对象。在这样的一些情况下，包含抗体的液体制剂的体积可根据例如液体制剂中的抗体浓度、期望的抗体剂量和/或使用的施用途径而有所不同。例如，包含本文中所述抗体并且施用(例如，通过注射，例如皮下注射或静脉内输注)于对象的液体制剂的体积可以是约0.001mL至约10.0mL、约0.01mL至约5.0mL、约0.1mL至约5mL、约0.1mL至约3mL、约0.5mL至约2.5mL、或约1mL至约2.5mL。例如，包含本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)并且施用(例如，通过注射，例如如皮下注射或静脉内输注)于对象的液体制剂的体积可以是、可以是至少、可以是小于或可以是至多约0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、或约10.0mL。
在一些实施方案中，本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量(或亚剂量)或量可在可用于将抗体施用于对象的预填充容器中供应。这样的预填充容器可设计成用于自施用或用于由另一人施用。例如，本文中所述抗体的剂量(或亚剂量)或量可作为液体制剂在预填充注射器、具有针安全装置的预填充注射器、注射笔或自动注射器中提供。在这样的一些实例中，预填充注射器可设计成用于自施用或由另一人施用。在一些情况下，预填充注射器或自动注射器可设计成用于皮下施用和/或静脉内施用。
出于本发明的目的，抗体的合适剂量可取决于所使用的抗体(或其组合物)、继发症状的类型和严重程度、难治性偏头痛或其他待治疗病症的类型和严重程度、施用药剂是用于预防目的还是治疗目的、先前治疗、患者的临床病史和针对药剂的响应、以及主治医师的判断。通常来说，临床医师将施用抗体，直至达到实现期望结果的剂量。剂量和/或频率可在治疗过程中变化。
经验考虑(例如半衰期)通常将有助于剂量的确定。例如，可使用与人免疫系统相容的抗体(例如人源化抗体或完全人抗体)来延长抗体的半衰期并且防止抗体受到宿主免疫系统的攻击。施用频率可在治疗过程中确定和调整，并且通常但不一定基于难治性偏头痛或其他病症的治疗和/或抑制和/或改善和/或延迟。或者，抗体的持续连续释放制剂可以是合适的。用于实现持续释放的多种制剂和装置是本领域中已知的。
在一个实施方案中，本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的剂量可在已被给予该抗体的一次或更多次施用的个体中凭经验确定。向个体给予增量剂量的抗体。为了评估抗体的效力，可追踪该疾病的指标。
根据本发明方法的抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)的施用可以是连续的或间歇的，这取决于例如接受者的生理状况、施用目的是治疗性的还是预防性的、以及熟练从业者已知的其他因素。抗体的施用可在预先选定的时间内是基本上连续的，或者可以以一系列间隔的剂量进行，例如在发生难治性偏头痛之前、期间或之后；在发生难治性偏头痛之前；在发生难治性偏头痛期间；在发生难治性偏头痛之前和之后；在发生难治性偏头痛期间和之后；在发生难治性偏头痛之前和期间；或在发生难治性偏头痛之前、期间和之后。施用可在任何可能导致难治性偏头痛的事件之前、期间和/或之后。
在一些实施方案中，可存在多于一种抗体。可存在至少一种、至少两种、至少三种、至少四种、至少五种不同的或更多种抗体。通常来说，那些抗体可具有不彼此产生不利影响的互补活性。本文中所述的抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)还可与其他CGRP拮抗剂或CGRP受体拮抗剂联合使用。例如，可使用一种或更多种以下CGRP拮抗剂：针对CGRP的反义分子(包括针对编码CGRP之核酸的反义分子)、CGRP抑制性化合物、CGRP结构类似物、与CGRP结合的CGRP受体的显性负效突变和抗CGRP受体抗体。抗体还可与用于增强和/或补充药剂有效性的其他药剂联合使用。
对难治性偏头痛的诊断或评估在本领域中是充分确立的。评估可基于主观量度(例如对症状的患者表征和记录针对先前预防性治疗的不充分响应的病史)来进行。在一些实施方案中，如本文中别处所述，难治性偏头痛的评估可通过头痛小时数进行。例如，难治性偏头痛的评估可根据每日头痛小时数、每周头痛小时数、每月头痛小时数和/或每年头痛小时数。在一些情况下，头痛小时数可由对象报告。
治疗效力可通过本领域中公知的方法来评估。例如，可评估疼痛缓解。因此，在一些实施方案中，在施用抗CGRP抗体之后1、2小时或数小时后主观地观察疼痛缓解。在一些实施方案中，在施用抗CGRP抗体之后主观地观察难治性偏头痛发作的频率。
在一些实施方案中，如本文中所述用于在患有难治性偏头痛的对象中预防、治疗偏头痛或降低其发病率的方法可在单次施用本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)之后长时间降低偏头痛的发病率。例如，在单次施用之后可降低偏头痛的发病率至少0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、1/、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50或更多天。
在一些实施方案中，用于在如本文中所述的对象(即患有难治性偏头痛)中治疗偏头痛或降低其发病率的方法可在向所述对象施用一个或更多个剂量的本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)之后相对于施用前水平降低对象经历的头痛小时数。例如，相对于对象中的施用前水平，在向对象施用一个或更多个剂量的抗体之后对象经历的每日头痛小时数可降低0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个头痛小时。在一些情况下，相对于对象中的施用前水平，在向对象施用一个或更多个剂量的抗体之后对象经历的每日头痛小时数可降低0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。在另一个实例中，相对于对象中的施用前水平，在向对象施用一个或更多个剂量的抗体之后对象经历的每周头痛小时数可降低0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75或更多个头痛小时。在一些情况下，相对于对象中的施用前水平，在向对象施用一个或更多个剂量的抗体之后对象经历的每周头痛小时数可降低0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。在另一个实例中，相对于施用前水平，在向对象施用一个或更多个剂量的抗体之后对象经历的每月头痛小时数可降低0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125或更多个头痛小时。在一些情况下，相对于对象中的施用前水平，在向对象施用一个或更多个剂量的抗体之后对象经历的每月头痛小时数可降低0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。
在一些实施方案中，用于在如本文中所述的患有难治性偏头痛的对象中治疗偏头痛或降低其发病率的方法可在向所述对象施用一个或更多个剂量的本文中所述抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)之后相对于施用前水平降低对象经历的头痛日数。例如，相对于对象中的施用前水平，在向对象施用一个或更多个剂量的抗体之后对象经历的每周头痛日数可降低0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5或7个头痛日。在一些情况下，相对于对象中的施用前水平，在向对象施用一个或更多个剂量的抗体之后对象经历的每周头痛日数可降低0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％或更多。在另一个实例中，相对于施用前水平，在向对象施用一个或更多个剂量的抗体之后对象经历的每月头痛日数可降低0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或更多个头痛日。
在一些实施方案中，方法可包括将一种或更多种另外的药剂与抗体(例如，调节CGRP途径的单克隆抗体、抗CGRP拮抗剂抗体、单克隆抗CGRP拮抗剂抗体)同时或先后施用于对象。在一些实施方案中，另外的药剂可以是本文中别处所述的急性头痛药物，例如5-HT1激动剂、曲坦类、麦角生物碱类、阿片类和NSAID。在一些实施方案中，与单独使用抗体或一种或更多种另外的药剂相比，治疗效果可更大。因此，可实现抗体与一种或更多种另外的药剂之间的协同效应。
B.抗CGRP拮抗剂抗体
在一些实施方案中，本发明的方法使用抗体，其可以是抗CGRP拮抗剂抗体。抗CGRP拮抗剂抗体可指阻断、抑制或降低(包括显著地)CGRP生物活性的任何抗体分子，所述生物活性包括由CGRP信号传导介导的下游途径，例如受体结合和/或针对CGRP的细胞响应的激发。
抗CGRP拮抗剂抗体可表现出以下特征中的任意一种或更多种：(a)与CGRP结合；(b)阻断CGRP与其受体结合；(c)阻断或降低CGRP受体活化(包括但不限于cAMP活化)；(d)抑制CGRP生物活性或由CGRP信号传导功能介导的下游途径；(e)预防、改善或治疗难治性偏头痛的任何方面；(f)提高CGRP的清除；以及(g)抑制(降低)CGRP的合成、产生或释放。抗CGRP拮抗剂抗体在本领域中是已知的。参见例如Tan et al.，Clin.Sci.(Lond).89：565-73，1995；Sigma(Missouri，US)，产品编号C7113(克隆#4901)；Plourde et al.，Peptides 14：1225-1229，1993。
在一些实施方案中，抗体以抑制CGRP和/或CGRP途径(包括由CGRP信号传导功能介导的下游途径)的方式与CGRP反应。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体识别人CGRP。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体与人α-CGRP和β-CGRP二者结合。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体结合人和大鼠CGRP。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体结合具有CGRP的第25至37位氨基酸的C端片段。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体结合在CGRP的第25至37位氨基酸内的C端表位。
可用于本发明的抗体可涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(例如，Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、Fc等)、嵌合抗体、双特异性抗体、异缀合物抗体、单链(ScFv)、其突变体、包含抗体部分(例如，结构域抗体)的融合蛋白、人源化抗体，以及包含具有所需特异性的抗原识别位点之免疫球蛋白分子的任何其他经修饰构型，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体、以及共价修饰抗体。抗体可以是鼠、大鼠、人或任何其他来源的(包括嵌合抗体或人源化抗体)。
在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体是人源化的。在一些实施方案中，抗体是人的。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体是抗体G1(如本文中所述)。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体包含表6中所示抗体G1或G1变体的一个或更多个CDR(例如一个、两个、三个、四个、五个、或在一些实施方案中，全部六个CDR)。在另一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体包含图5中所示的重链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)和图5中所示的轻链可变区的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)。在另一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体包含SEQ ID NO：11中所示的重链全抗体氨基酸序列和SEQ ID NO：12中所示的轻链全抗体氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体包含选自以下的轻链可变区(light chain variableregion，LCVR)和重链可变区(heavy chain variable region，HCVR)：(a)LCVR17(SEQ IDNO：58)和HCVR22(SEQ ID NO：59)；(b)LCVR18(SEQ ID NO：60)和HCVR23(SEQ ID NO：61)；(c)LCVR19(SEQ ID NO：62)和HCVR24(SEQ ID NO：63)；(d)LCVR20(SEQ ID NO：64)和HCVR25(SEQ ID NO：65)；(e)LCVR21(SEQ ID NO：66)和HCVR26(SEQ ID NO：67)；(f)LCVR27(SEQ IDNO：68)和HCVR28(SEQ ID NO：69)；(g)LCVR29(SEQ ID NO：70)和HCVR30(SEQ ID NO：71)；(h)LCVR31(SEQ ID NO：72)和HCVR32(SEQ ID NO：73)；(i)LCVR33(SEQ ID NO：74)和HCVR34(SEQ ID NO：75)；(j)LCVR35(SEQ ID NO：76)和HCVR36(SEQ ID NO：77)；以及(k)LCVR37(SEQ ID NO：78)和HCVR38(SEQ ID NO：79)。本文中提供了这些区域的序列。抗CGRP抗体的另一些实例在US20110305711(SEQ ID NO：5、6、7、12、16、19、24、29、34和39)、US20120294802、US20120294797(SEQ ID NO：51至60)中描述，其在此通过引用整体并入。例如，可使用具有任何以下序列的抗体。
Ab6可变区轻链(人源化)蛋白质序列(US20120294797)
Ab6轻链(人源化)全长蛋白质序列(US20120294797)
Ab6可变区重链(人源化)蛋白质序列(US20120294797)
Ab6重链(人源化)全长蛋白质序列-酵母产生的(US20120294797)
Ab6可变区轻链(人源化)蛋白质序列CDR1(US20120294797)
Ab6可变区轻链(人源化)蛋白质序列CDR2(US20120294797)
Ab6可变区轻链(人源化)蛋白质序列CDR3(US20120294797)
Ab6可变区重链(人源化)蛋白质序列CDR1(US20120294797)
Ab6可变区重链(人源化)蛋白质序列CDR2(US20120294797)
Ab6可变区重链(人源化)蛋白质序列CDR3(US20120294797)
轻链可变区蛋白质序列CDR3(US20110305711)
轻链可变区蛋白质序列CDR1(US20110305711)
轻链可变区蛋白质序列CDR2(US20110305711)
重链可变区蛋白质序列CDR1(US20110305711)
重链可变区蛋白质序列CDR2(US20110305711)
重链可变区蛋白质序列CDR3(US20110305711)
轻链可变区蛋白质序列(US20110305711)
重链可变区蛋白质序列(US20110305711)
轻链蛋白质序列(US20110305711)
重链蛋白质序列(US20110305711)
在一些实施方案中，抗体包含经修饰的恒定区，例如本文中所述的免疫惰性恒定区。在一些实施方案中，恒定区如Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624；PCT申请No.PCT/GB99/01441；和/或英国专利申请No.9809951.8中所述进行修饰。在另一些实施方案中，抗体包含含有以下突变的人重链IgG2恒定区：A330P331至S330S331(参考野生型IgG2序列的氨基酸编号)。Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624。在一些实施方案中，抗体包含含有以下突变的IgG4恒定区：E233F234L235至P233V234A235。在另一些实施方案中，将恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。在一些实施方案中，通过使作为恒定区中N-糖基化识别序列的一部分的寡糖附接残基(例如Asn297)和/或侧翼残基突变来使恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。在一些实施方案中，将恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。可酶促地或通过在糖基化缺陷型宿主细胞中表达来将恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。
抗CGRP拮抗剂抗体与CGRP(例如人α-CGRP)的结合亲和力(KD)可以是约0.02至约200nM。在一些实施方案中，结合亲和力为以下中的任一个：约200nM、约100nM、约50nM、约10nM、约1nM、约500pM、约100pM、约60pM、约50pM、约20pM、约15pM、约10pM、约5pM、或约2pM。在一些实施方案中，结合亲和力小于以下中的任一个：约250nM、约200nM、约100nM、约50nM、约10nM、约1nM、约500pM、约100pM、或约50pM。
确定抗体与CGRP的结合亲和力的一种方式是通过测量抗体的单功能Fab片段的结合亲和力。为了获得单功能Fab片段，可用木瓜蛋白酶切割抗体(例如，IgG)或将其重组表达。抗体的抗CGRP Fab片段的亲和力可通过配备有预固定链霉亲和素传感器芯片(SA)的表面等离子体共振(Biacore3000TM表面等离子体共振(surface Plasmon resonance，SPR)系统，Biacore，INC，Piscataway NJ)使用HBS-EP运行缓冲液(0.01M HEPES，pH 7.4，0.15NaCl、3mM EDTA、0.005％v/v表面活性剂P20)来确定。可将生物素化人CGRP(或任何其他CGRP)稀释到HBS-EP缓冲液中至浓度低于0.5μg/mL，并使用可变的接触时间进样通过各个芯片通道，以实现两个抗原密度范围：用于详细动力学研究的50至200个响应单位(response unit，RU)；或用于筛选测定的800至1，000RU。再生研究已显示，25％v/v乙醇中的25mM NaOH有效地除去结合的Fab，同时使芯片上的CGRP的活性保持超过200次进样。通常来说，将经纯化Fab样品的系列稀释液(横跨0.1至10×估计KD的浓度)以100μL/分钟进样1分钟，并允许多至2小时的解离时间。使用已知浓度的Fab(如通过氨基酸分析确定的)作为标准，通过ELISA和/或SDS-PAGE电泳确定Fab蛋白的浓度。通过使用BIAevaluation程序将数据全局拟合至1∶1朗缪尔结合模型(Langmuir binding mode1)(Karlsson，R.Roos，H.Fagerstam，L.Petersson，B.(1994).Methods Enzymology 6.99-110)来同时获得动力学缔合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(KD)值作为koff/kon计算。该方案适用于确定抗体与任何CGRP(包括人CGRP、其他哺乳动物的CGRP(例如小鼠CGRP、大鼠CGRP、灵长类CGRP)、以及不同形式的CGRP(例如α和β形式))的结合亲和力。一般在25℃下测量抗体的结合亲和力，但也可在37℃下测量。
抗体(包括抗CGRP拮抗剂抗体)可通过本领域中已知的任何方法制备。如本文中进一步描述的，宿主动物的免疫接种途径和方案通常与用于抗体刺激和产生的已建立的和常规的技术保持一致。用于产生人和小鼠抗体的一般技术是本领域中已知的并且在本文中描述。
考虑了任何哺乳动物对象(包括人)或从其来源的抗体产生细胞可被操作以用作产生哺乳动物(包括人)杂交瘤细胞系的基础。通常来说，向宿主动物腹膜内、肌内、经口、皮下、足底内(intraplantar)和/或皮内接种一定量的免疫原(包括如本文中所述的)。
抗体(例如，抗CGRP拮抗剂抗体)和来自抗体的多肽可使用本领域中已知的方法鉴定或表征，从而检测和/或测量CGRP生物活性的降低、改善或中和。例如，抗CGRP拮抗剂抗体还可通过以下鉴定：将候选药剂与CGRP一起孵育并监测以下特征中的任意一种或更多种：(a)与CGRP结合；(b)阻断CGRP与其受体结合；(c)阻断或降低CGRP受体活化(包括cAMP活化)；(d)抑制CGRP生物活性或由CGRP信号传导功能介导的下游途径；(e)预防、改善或治疗难治性偏头痛的任何方面；(f)提高CGRP的清除；以及(g)抑制(降低)CGRP的合成、产生或释放。在一些实施方案中，通过以下鉴定抗CGRP拮抗剂抗体或多肽：将候选药剂与CGRP一起孵育并监测CGRP的结合和/或其生物活性的伴随降低或中和。结合测定可用经纯化的CGRP多肽进行，或用天然表达或转染以表达CGRP多肽的细胞进行。在一个实施方案中，结合测定是竞争性结合测定，其中评价候选抗体与已知抗CGRP拮抗剂竞争CGRP结合的能力。该测定可以以多种形式进行，包括ELISA形式。在另一些实施方案中，通过以下鉴定抗CGRP拮抗剂抗体：将候选药剂与CGRP一起孵育并监测在细胞表面上表达的CGRP受体的结合及其活化的伴随抑制。在一些实施方案中，抗CGRP受体抗体可用于本文中所述的任何方法。例如，可使用如US20100172895和美国专利No.9,102,731(其在此通过引用整体并入)中所述的抗CGRP受体抗体。因此，可使用具有任何以下序列的抗体。
轻链可变区蛋白质序列CDR1(美国专利No.9,102,731)
轻链可变区蛋白质序列CDR2(美国专利No.9,102,731)
轻链可变区蛋白质序列CDR3(美国专利No.9,102,731)
重链可变区蛋白质序列CDR1(美国专利No.9,102,731)
重链可变区蛋白质序列CDR2(美国专利No.9,102,731)
重链可变区蛋白质序列CDR3(美国专利No.9,102,731)
轻链可变区蛋白质序列(美国专利No.9,102,731)
重链可变区蛋白质序列(美国专利No.9,102,731)
轻链蛋白质序列(美国专利No.9,102,731)
重链蛋白质序列(美国专利No.9,102,731)
在初步鉴定后，候选抗体(例如，抗CGRP拮抗剂抗体)的活性可通过已知用于测试靶向生物活性的生物测定来进一步确定和细化。或者，生物测定可用于直接筛选候选物。在实施例中详细描述了用于鉴定和表征抗CGRP拮抗剂抗体或多肽的一些方法。
抗体(包括抗CGRP拮抗剂抗体)可使用本领域中公知的方法进行表征。例如，一种方法是鉴定与其结合的表位或“表位作图”。本领域中已知有许多方法用于对蛋白质上表位的位置进行作图和表征，包括解析抗体-抗原复合物的晶体结构、竞争测定、基因片段表达测定和基于合成肽的测定，如例如在Harlow和Lane，Using Antibodies，a LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，New York，1999的第11章中所述。
可用于表征抗体(包括抗CGRP拮抗剂抗体)的另一种方法是使用具有已知与相同抗原(即CGRP上的多种片段)结合的其他抗体的竞争测定来确定抗CGRP拮抗剂抗体是否结合与其他抗体相同的表位。竞争测定是本领域技术人员所公知的。
C.抗体G1以及相关抗体、多肽、多核苷酸、载体和宿主细胞
本发明涵盖组合物(包括药物组合物)，其包含表6中所示的抗体G1及其变体或者来源于表6中所示的抗体G1及其变体的多肽；以及包含编码G1及其变体或多肽的序列的多核苷酸。在一些实施方案中，组合物包含与CGRP结合的一种或更多种抗体或多肽(其可以是或可以不是抗体)，和/或包含编码与CGRP结合的一种或更多种抗体或多肽的序列的一种或更多种多核苷酸。这些组合物还可包含本领域中公知的合适的赋形剂，例如可药用赋形剂，包括缓冲剂。
在一些实施方案中，本发明的抗CGRP拮抗剂抗体和多肽的特征在于以下特征中的任何(一个或更多个)：(a)与CGRP结合；(b)阻断CGRP与其受体的结合；(c)阻断或降低CGRP受体活化(包括cAMP活化)；(d)抑制CGRP生物学活性或由CGRP信号传导功能介导的下游途径；(e)预防、改善或治疗难治性偏头痛的任何方面；(f)提高CGRP的清除；以及(g)抑制(降低)CGRP的合成、产生或释放。
在一些实施方案中，本发明提供了以下中的任何，或者包含以下任何的组合物(包括药物组合物)：(a)表6中所示的抗体G1或其变体；(b)表6中所示的抗体G1或其变体的片段或区域；(c)表6中所示的抗体G1或其变体的轻链；(d)表6中所示的抗体G1或其变体的重链；(e)来自表6中所示的抗体G1或其变体的轻链和/或重链的一个或更多个可变区；(f)表6中所示的抗体G1或其变体的一个或更多个CDR(一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR)；(g)来自抗体G1重链的CDR H3；(h)来自表6中所示的抗体G1或其变体的轻链的CDR L3；(i)来自表6中所示的抗体G1或其变体的轻链的三个CDR；(j)来自表6中所示的抗体G1或其变体的重链的三个CDR；(k)来自表6中所示的抗体G1或其变体的轻链的三个CDR和重链的三个CDR；以及(1)包含(b)至(k)中任一种的抗体。在一些实施方案中，本发明还提供包含上述任何一种或更多种的多肽。
图5中图示地描绘了抗体G1的CDR部分(包含Chothia和Kabat CDR)。CDR区的确定完全在本领域技术的范围内。应理解的是，在一些实施方案中，CDR可以是Kabat和ChothiaCDR的组合(也称为“组合的CDR”或“延伸的CDR”)。在一些实施方案中，CDR是Kabat CDR。在另一些实施方案中，CDR是Chothia CDR。换句话说，在具有多于一个CDR的一些实施方案中，CDR可以是以下中的任一种：Kabat CDR、Chothia CDR、组合的CDR，或其组合。
在一些实施方案中，本发明提供了多肽(其可以是或可以不是抗体)，其包含与表6中所示的G1或其变体的至少一个CDR，至少两个、至少三个、至少四个、至少五个或全部六个CDR基本相同的至少一个CDR，至少两个、至少三个、或至少四个、至少五个或全部六个CDR。另一些实施方案包括这样的抗体，其具有与G1的或来源于G1的至少两个、三个、四个、五个或六个CDR基本相同的至少两个、三个、四个、五个或六个CDR。在一些实施方案中，所述至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR与表6中所示的G1或其变体的至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR具有至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。应理解的是，出于本发明的目的，一般保留结合特异性和/或整体活性，尽管活性程度与表6中所示的G1或其变体相比可变化(可更大或更小)。
在一些实施方案中，本发明还提供了包含表6中所示的G1或其变体的氨基酸序列的多肽(其可以是或可以不是抗体)，其具有以下任一种：表6中所示的G1或其变体的序列的至少5个连续氨基酸、至少8个连续氨基酸、至少约10个连续氨基酸、至少约15个连续氨基酸、至少约20个连续氨基酸、至少约25个连续氨基酸、至少约30个连续氨基酸，其中至少3个氨基酸来自表6中所示的G1(图5)或其变体的可变区。在一个实施方案中，可变区来自G1的轻链。在另一个实施方案中，可变区来自G1的重链。一个示例性多肽具有来自G1的重链可变区和轻链可变区二者的连续氨基酸(上述长度)。在另一个实施方案中，5个(或更多个)连续氨基酸来自图5中所示G1的互补决定区(CDR)。在一些实施方案中，连续氨基酸来自G1的可变区。
抗CGRP拮抗剂抗体和多肽与CGRP(例如人α-CGRP)的结合亲和力(KD)可以是约0.06至约200nM。在一些实施方案中，结合亲和力是以下中的任一个：约200nM、100nM、约50nM、约10nM、约1nM、约500pM、约100pM、约60pM、约50pM、约20pM、约15pM、约10pM、约5pM或约2pM。在一些实施方案中，结合亲和力小于以下中的任一个：约250nM、约200nM、约100nM、约50nM、约10nM、约1nM、约500pM、约100pM或约50pM。
本文提供的抗体可通过本领域中已知的程序来制备。多肽可通过抗体的蛋白水解或其他降解，通过如上所述的重组方法(即，单一多肽或融合多肽)或者通过化学合成产生。抗体的多肽(尤其是至多约50个氨基酸的较短多肽)通过化学合成方便地制备。化学合成的方法在本领域中是已知的并且可商购。例如，抗体可使用固相方法通过自动化多肽合成仪产生。也参见美国专利No.5,807,715、4,816,567和6,331,415。
在另一个替代方案中，抗体可使用本领域中公知的程序重组制备。在一个实施方案中，多核苷酸包含编码SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10中所示抗体G1的重链和/或轻链可变区的序列。在另一个实施方案中，将包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10中所示核苷酸序列的多核苷酸克隆到一个或更多个载体中用于表达或扩增。编码目的抗体的序列可保持在宿主细胞中的载体中，并且宿主细胞可随后扩增以及冷冻以备将来使用。本文中进一步描述了载体(包括表达载体)和宿主细胞。
在一些实施方案中，本发明还涵盖本发明抗体(例如G1)的单链可变区片段(“scFv”)。单链可变区片段通过使用短连接肽连接轻链和/或重链可变区来制备。Bird etal.(1988)Science 242：423-426。连接肽的一个实例是(GGGGS)3(SEQ ID NO：57)，其在一个可变区的羧基端与另一个可变区的氨基端之间桥接约3.5nm。已设计和使用了其他序列的接头。Birdet al.(1988)。接头可继而进行修饰以实现另外的功能，例如附接药物或附接于固体支持物。单链变体可重组产生或合成产生。对于scFv的合成产生，可使用自动化合成仪。对于scFv的重组产生，可将含有编码scFv的多核苷酸的合适质粒导入合适的宿主细胞，所述宿主细胞为真核细胞(例如酵母、植物、昆虫或哺乳动物细胞)或原核细胞(例如大肠杆菌(E.coli))。编码目的scFv的多核苷酸可通过常规操作(例如多核苷酸的连接)来制备。所得scFv可使用本领域中已知的标准蛋白质纯化技术来分离。
还涵盖了单链抗体的其他形式，例如双抗体。双抗体是二价、双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单个多肽链上表达，但使用的接头太短而不允许同一链上的两个结构域之间配对，从而迫使结构域与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点(参见例如Holliger，P.，等(1993)Proc.Natl.Acad Sci.USA 90：6444-6448；Poljak，R.J.，et al.(1994)Structure 2：1121-1123)。
例如，可使用本文中公开的抗体制备对至少两种不同抗原具有结合特异性的双特异性抗体、单克隆抗体。制备双特异性抗体的方法是本领域中已知的(参见例如Suresh etal.，1986，Methods in Enzymology 121：210)。传统上，双特异性抗体的重组产生基于两个免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，其中两个重链具有不同的特异性(Millstein和Cuello，1983，Nature 305，537-539)。
根据制备双特异性抗体的一种方法，将具有期望结合特异性(抗体-抗原组合位点)的抗体可变结构域与免疫球蛋白恒定结构域序列融合。所述融合优选是与包含铰链区、CH2区和CH3区的至少一部分的免疫球蛋白重链恒定结构域。优选地，包含轻链结合所必需位点的第一重链恒定区(CH1)存在于至少一个融合物中。编码免疫球蛋白重链融合物和如果期望时的免疫球蛋白轻链的DNA插入到分开的表达载体中，并共转染到合适的宿主生物中。当在构建中使用不等比例的三种多肽链提供最佳产率时，在一些实施方案中这为调节三种多肽片段的相互比例提供了极大的灵活性。然而，当至少两个多肽链以相同比例表达时导致高产率或者当比例没有特别意义时，可将两个或全部三个多肽链的编码序列插入到一种表达载体中。
在一种方法中，双特异性抗体由一个臂中的具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和另一个臂中的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。这种仅在双特异性分子的一半中具有免疫球蛋白轻链的不对称结构有利于将期望的双特异性化合物与不期望的免疫球蛋白链组合分开。该方法在PCT公开No.WO 94/04690中描述。
包含两个共价连接的抗体的异缀合物抗体(Heteroconjugate antibody)也在本发明的范围内。这样的抗体已用于将免疫系统细胞靶向不需要的细胞(美国专利号4,676,980)，以及用于治疗HIV感染(PCT申请公开No.WO 91/00360和WO 92/200373；EP 03089)。可使用任何方便的交联方法制备异缀合物抗体。合适的交联剂和技术是本领域中公知的，并且在美国专利No.4,676,980中有所描述。
嵌合或杂合抗体也可使用已知的合成蛋白质化学方法(包括涉及交联剂的那些)在体外制备。例如，可使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。用于该目的的合适药剂的实例包括亚氨基硫醇盐(iminothiolate)和4-巯基丁酰亚胺酸甲酯(methyl-4-mercaptobutyrimidate)。
可使用本领域中已知的任何方法制备包含表6中所示的抗体G1或其变体的一个或更多个CDR或者来自于表6中所示的抗体G1或其变体的一个或更多个CDR的人源化抗体。例如，可使用四个一般步骤来使单克隆抗体人源化。
在一些实施方案中，本发明涵盖对表6中所示的抗体G1或其变体的修饰，包括不显著影响其性质的功能等同抗体和具有增强或降低的活性和/或亲和力的变体。例如，表6中所示的抗体G1或其变体的氨基酸序列可被突变以获得对CGRP具有期望结合亲和力的抗体。多肽的修饰是本领域中的常规实践，并且不需要在本文中详细描述。实施例中举例说明了多肽的修饰。经修饰多肽的实例包括具有氨基酸残基的保守替换、一个或更多个不显著有害地改变功能活性的氨基酸缺失或添加、或者使用化学类似物的多肽。
氨基酸序列插入包括长度为一个残基至含有数百个或更多个残基的多肽的氨基端和/或羧基端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N端甲硫氨酰残基的抗体或与表位标签融合的抗体。抗体分子的其他插入变体包括延长抗体的血清半衰期的酶或多肽与抗体的N端或C端的融合。
替换变体为抗体分子中移除至少有一个氨基酸残基，并在其位置插入不同的残基。替换诱变最感兴趣的位点包括高变区，但也考虑了FR改变。表1中在“保守替换”标题下示出了保守替换。如果这样的替换导致生物活性发生变化，则可引入表1中称为“示例性替换”或下文中关于氨基酸类别进一步描述的更实质性变化，并对产物进行筛选。
表1：氨基酸替换
通过选择在维持以下的作用中显著不同的替换来实现抗体的生物学性质的实质性改变：(a)替换区域中多肽骨架的结构，例如作为片层或螺旋构象，(b)分子在靶位点处的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积(bulk)。基于常见的侧链性质将天然存在的残基分成几组：
(1)非极性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)极性无电荷：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性(带负电荷)：Asp、Glu；
(4)碱性(带正电荷)：Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；以及
(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe、His。
通过将这些类别中一个类别的成员替换为另一个类别来进行非保守性替换。
任何不参与维持抗体的适当构象的半胱氨酸残基也可替换，通常用丝氨酸，以改善分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反，可将半胱氨酸键添加至抗体以改善其稳定性，特别是当抗体是抗体片段(例如Fv片段)时。
氨基酸修饰的范围可从改变或修饰一个或更多个氨基酸到区域(例如可变区)的完全重新设计。可变区的变化可改变结合亲和力和/或特异性。在一些实施方案中，在CDR结构域内进行不超过一个至五个保守氨基酸替换。在另一些实施方案中，在CDR结构域内进行不超过一个至三个保守氨基酸替换。在另一些实施方案中，CDR结构域是CDR H3和/或CDRL3。
修饰还包括糖基化和非糖基化多肽，以及具有其他翻译后修饰的多肽，例如用不同糖的糖基化、乙酰化和磷酸化。抗体在其恒定区的保守位置被糖基化(Jefferis和Lund，1997，Chem.Immunol.65：111-128；Wright和Morrison，1997，TibTECH 15：26-32)。免疫球蛋白的寡糖侧链影响蛋白质的功能(Boyd et al.，1996，Mol.Immunol.32：1311-1318；Wittwe和Howard，1990，Biochem.29：4175-4180)以及糖蛋白的部分之间的分子内相互作用，其可影响糖蛋白的构象和呈现的三维表面(Hefferis和Lund，supra；Wyss和Wagner，1996，Current Opin.Biotech.7：409-416)。基于特异性识别结构，寡糖也可用于将给定的糖蛋白靶向某些分子。据报道，抗体的糖基化影响抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。特别地，据报道具有四环素调节的β(1，4)-N-乙酰葡糖胺基转移酶III(GnTIII)(催化形成二等分(bisecting)GlcNAc的糖基转移酶)表达的CHO细胞具有改善的ADCC活性(Umana et al.，1999，Mature Biotech.17：176-180)。
抗体的糖基化通常是N-连接的或O-连接的。N-连接的是指碳水化合物部分与天冬酰胺残基的侧链的连接。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸、天冬酰胺-X-苏氨酸和天冬酰胺-X-半胱氨酸(其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸)是用于将碳水化合物部分酶促连接至天冬酰胺侧链的识别序列。因此，多肽中这些三肽序列中任一种的存在产生潜在的糖基化位点。O-连接的糖基化是指将糖N-乙酰半乳糖胺、半乳糖或木糖之一连接至羟基氨基酸，最常见的是丝氨酸或苏氨酸，尽管也可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。
通过改变氨基酸序列以使其含有一个或更多个上述三肽序列(用于N-连接的糖基化位点)而方便地实现向抗体添加糖基化位点。该改变也可通过向原始抗体的序列添加或替换一个或更多个丝氨酸或苏氨酸残基来进行(用于O-连接的糖基化位点)。
其他修饰方法包括使用本领域中已知的偶联技术，包括但不限于酶促手段、氧化取代和螯合。例如，修饰可用于附接用于免疫测定的标签。经修饰G1多肽可使用本领域已建立的程序来制备，并且可使用本领域中已知的标准测定进行筛选，其中的一些在下文和实施例中描述。
在本发明的一些实施方案中，抗体包含经修饰恒定区，例如免疫惰性或部分惰性的恒定区，例如其不触发补体介导的裂解，不刺激抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或不活化小胶质细胞；或者在下列任何一种或更多种中具有降低的活性(与未经修饰抗体相比)：触发补体介导的裂解，刺激抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或活化小胶质细胞。可使用恒定区的不同修饰来实现效应功能的最佳水平和/或组合。参见例如Morgan etal.，Immunology 86：319-324(1995)；Lund et al.，J.Immunology 157：4963-9157：4963-4969(1996)；Idusogie et al.，J.Immunology 164：4178-4184(2000)；Tao et al.，J.Immunology 143：2595-2601(1989)；以及Jefferis et al.，Immunological Reviews163：59-76(1998)。在一些实施方案中，恒定区如以下中所述进行修饰：Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624；PCT申请号PCT/GB99/01441；和/或英国专利申请NO.9809951.8。在另一些实施方案中，抗体包含含有以下突变的人重链IgG2恒定区：A330P331至S330S331(参考野生型IgG2序列的氨基酸编号)。Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624。在另一些实施方案中，将恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。在一些实施方案中，通过使作为恒定区中N-糖基化识别序列的一部分的糖基化氨基酸残基或侧翼残基突变来将恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。例如，可将N-糖基化位点N297突变为A、Q、K或H。参见Tao et al.，J.Immunology 143：2595-2601(1989)；以及Jefferis et al.，Immunological Reviews163：59-76(1998)。在一些实施方案中，将恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。可酶促(例如通过酶PNGase移除碳水化合物)或通过在糖基化缺陷型宿主细胞中表达来将恒定区非糖基化以用于N-连接的糖基化。
其他抗体修饰包括已经如1999年11月18日公开的PCT公开No.WO 99/58572中所述修饰的抗体。除了针对靶分子的结合结构域之外，这些抗体包含具有与人免疫球蛋白重链的恒定结构域的全部或一部分基本同源的氨基酸序列的效应结构域(effector domain)。这些抗体能够结合靶分子而不触发显著的补体依赖性裂解或细胞介导的靶标破坏。在一些实施方案中，效应结构域能够特异性结合FcRn和/或FcγRIIb。这些通常基于来自于两个或更多个人免疫球蛋白重链CH2结构域的嵌合结构域。以这种方式修饰的抗体特别适用于长期抗体治疗，以避免对常规抗体治疗的炎性和其他不良反应。
在一些实施方案中，本发明包括亲和力成熟的一些实施方案。例如，亲和力成熟的抗体可通过本领域中已知的方法产生(Marks et al.，1992，Bio/Technology，10：779-783；Barbas et al.，1994，Proc Nat.Acad.Sci，USA 91：3809-3813；Schier et al.，1995，Gene，169：147-155；Yelton et al.，1995，J.Immunol.，155：1994-2004；Jackson et al.，1995，J.Immunol.，154(7)：3310-9；Hawkins et al.，1992，J.Mol.Biol.，226：889-896；和WO2004/058184)。
在一些实施方案中，本发明还涵盖包含来自本发明的抗体(例如G1)或多肽的一个或更多个片段或区域的融合蛋白。在一个实施方案中，提供了融合多肽，其包含SEQ ID NO：2中所示可变轻链区(图5)的至少10个连续氨基酸和/或SEQ ID NO：1中所示可变重链区(图5)的至少10个氨基酸。在另一些实施方案中，提供了融合多肽，其包含SEQ ID NO：2中所示的可变轻链区(图5)的至少约10个、至少约15个、至少约20个、至少约25个、或至少约30个连续氨基酸，和/或SEQ ID NO：1中所示的可变重链区(图5)的至少约10个、至少约15个、至少约20个、至少约25个、或至少约30个连续氨基酸。在另一个实施方案中，融合多肽包含如图5的SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：1中所示G1的轻链可变区和/或重链可变区。在另一个实施方案中，融合多肽包含G1的一个或更多个CDR。在另一些实施方案中，融合多肽包含抗体G1的CDR H3和/或CDR L3。出于本发明的目的，G1融合蛋白包含一个或更多个G1抗体和在天然分子中其不连接的其他氨基酸序列，例如异源序列或来自其他区域的同源序列。示例性的异源序列包括但不限于“标签”，例如FLAG标签或6His标签(SEQ ID NO：56)。标签是本领域中公知的。
在一些实施方案中，本发明还提供了包含抗体G1和/或本文中所述的任何或全部抗体或多肽的组合物(包括药物组合物)和药盒。
优选地，通过比较至少20个位置的比较窗口上的两个最佳比对的序列来确定“序列同一性的百分比”，其中与参考序列(其不包含添加或缺失)相比，比较窗口中多核苷酸或多肽序列的一部分可包含20％或更少、通常5％至15％、或10％至12％的添加或缺失(即，空位)，以用于两个序列的最佳比对。如下计算百分比：确定这两个序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数来得到匹配位置的数目，用匹配位置的数目除以参考序列中位置的总数(即，窗口大小)并将结果乘以100，以得到序列同一性的百分比。
变体也可以或作为替选地与天然基因或其一部分或互补序列基本上同源。这样的多核苷酸变体能够在中等严格条件下与编码天然抗体的天然DNA序列(或互补序列)杂交。
D.组合物
在一些实施方案中，用于本发明方法的组合物包含有效量的本文中所述抗体(例如，抗CGRP拮抗剂抗体、调节CGRP途径的单克隆抗体)或来自于抗体的多肽。此类组合物的实例以及如何配制也在前面的部分和下文中进行描述。在一个实施方案中，组合物还包含CGRP拮抗剂。在一些实施方案中，组合物包含调节CGRP途径的一种或更多种单克隆抗体。在一些实施方案中，组合物包含一种或更多种抗CGRP拮抗剂抗体。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体识别人CGRP。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体是人源化的。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体包含不触发不想要的或不期望的免疫应答(例如抗体介导的裂解或ADCC)的恒定区。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体包含抗体G1的一个或更多个CDR(例如来自G1的一个、两个、三个、四个、五个、或在一些实施方案中全部六个CDR)。在一些实施方案中，抗CGRP拮抗剂抗体是人的。
应理解的是，组合物可包含多于一种抗体(例如，多于一种抗CGRP拮抗剂抗体——识别CGRP的不同表位的抗CGRP拮抗剂抗体的混合物)。另一些示例性组合物包含多于一种识别相同表位的抗CGRP拮抗剂抗体，或者与CGRP的不同表位结合的不同种类的抗CGRP拮抗剂抗体。
组合物还可包含可药用载体、赋形剂或稳定剂(Remington：The Science andpractice of Pharmacy第20版.(2000)Lippincott Williams和Wilkins，Ed.K.E.Hoover)。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所使用的剂量和浓度下对接受者无毒。抗体的治疗制剂可包含一种或更多种可药用载体、赋形剂或稳定剂，此类物质的非限制性实例包括缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；盐，例如氯化钠；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；酚、丁基醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；以及间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸(例如，浓度为0.1mM至100mM、0.1mM至1mM、0.01mM至50mM、1mM至50mM、1mM至30mM、1mM至20mM、10mM至25mM)，例如甘氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂(例如，浓度为0.001mg/mL至1mg/mL、0.001mg/mL至1mg/mL、0.001mg/mL至0.1rng/mL、0.001mg/mL至0.01mg/mL)，例如EDTA(例如，EDTA二钠二水合物)；糖(例如，浓度为1mg/mL至500mg/mL、10mg/mL至200mg/mL、10mg/mL至100mg/mL、50mg/mL至150mg/mL)，例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反荷离子，例如钠；金属配合物(例如，Zn-蛋白质配合物)；和/或非离子表面活性剂(例如，浓度为0.01mg/mL至10mg/mL、0.01mg/mL至1mg/mL、0.1mg/mL至1mg/mL、0.01mg/mL至0.5mg/mL)，例如TWEENTM(例如，聚山梨酯(例如，聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80))、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。本文中进一步描述了可药用赋形剂。
抗体(例如，抗CGRP拮抗剂抗体)及其组合物也可与用于增强和/或补充药剂效力的其他药剂联合使用。
E.药盒
在一个方面，本发明还提供了用于本发明方法的药盒。药盒可包含含有本文中所述抗体(例如，抗CGRP拮抗剂抗体(例如人源化抗体))或本文中所述多肽的一个或更多个容器，以及用于根据本文中所述任何方法的说明书。通常来说，这些说明书包含根据本文中所述的任何方法施用抗体以治疗、改善或预防难治性偏头痛的描述。药盒可还包含基于鉴别个体是否患有难治性偏头痛或者该个体是否处于患有难治性偏头痛的风险中来选择适合于治疗的个体的描述。在另一些实施方案中，说明书包含向处于患有难治性偏头痛的风险中的个体施用抗体(例如，抗CGRP拮抗剂抗体)的描述。
在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗体是人的。在另一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体包含抗体G1的一个或更多个CDR(例如来自G1的一个、两个、三个、四个、五个、或在一些实施方案中全部六个CDR)。
涉及使用抗体(例如，抗CGRP拮抗剂抗体)的说明书通常包含关于用于预期治疗的剂量、给药方案和施用途径的信息。容器可以是单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。药盒中提供的说明书通常是标签或包装插页(例如，包含在药盒中的纸页)上的书面说明书，但机器可读说明(例如，磁性或光学存储盘上携带的说明书)也是可接受的。
标签或包装插页表明组合物用于在患有难治性偏头痛的对象中治疗、改善和/或预防偏头痛。可提供说明书以实践本文中所述的任何方法。
本发明的药盒在合适的包装中。合适的包装包括但不限于小瓶、瓶、罐、软包装(flexible packaging)(例如，密封的Mylar或塑料袋)等。还考虑与特定装置(例如吸入器、鼻施用装置(例如，雾化器))或输注装置(例如微型泵)组合使用的包装。药盒可具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针头刺穿的塞子的小瓶)。容器还可具有无菌进入口(例如，容器可以是静脉内溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是抗CGRP拮抗剂抗体和/或调节CGRP途径的单克隆抗体。容器还可包含第二药物活性剂。
药盒可任选地提供另外的组件，例如缓冲剂和解释性信息。通常来说，药盒包含容器和在容器上或与容器缔合的标签或包装插页。
本发明的另一些方面和实施方案在以下编号的段落中列出：
1.在对象中治疗难治性偏头痛的方法，所述方法包括：
选择对选自以下的偏头痛治疗没有良好响应的对象：托吡酯、卡马西平、双丙戊酸钠、丙戊酸钠、氟桂利嗪、苯噻啶、阿米替林、文拉法辛、去甲替林、度洛西汀、阿替洛尔、纳多洛尔、美托洛尔、普萘洛尔、噻吗洛尔和奥那肉毒毒素A；以及
向所述对象施用治疗有效量的调节降钙素基因相关肽(CGRP)途径的单克隆抗体。
2.段落1所述的方法，其中所述对象发生不良副作用和/或在约三个月之后对所述偏头痛治疗没有良好反应。
3.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体静脉内或皮下施用于所述对象。
4.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体以约675mg的剂量施用。
5.段落4所述的方法，其中所述单克隆抗体以三次独立注射中的约225mg剂量施用。
6.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体以约675mg的剂量、然后以一个月间隔的约225mg的后续剂量施用。
7.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体以约675mg的剂量、然后以一个月间隔的约225mg的五次后续剂量施用。
8.段落1所述的方法，其中所述施用包括从包含所述单克隆抗体的剂量的预填充注射器、具有针安全装置的预填充注射器、注射笔或自动注射器向所述对象施用所述抗体。
9.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体作为包含浓度为至少约150mg/mL的所述抗体的制剂施用。
10.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体以小于2mL的体积施用。
11.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体是抗CGRP拮抗剂抗体。
12.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体是人的或人源化的。
13.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体是人源化抗CGRP拮抗剂抗体。
14.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体包含：SEQ ID NO：3所示CDR H1；SEQID NO：4所示CDR H2；SEQ ID NO：5所示CDR H3；SEQ ID NO：6所示CDR L1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQ ID NO：8所示CDR L3。
15.段落1所述的方法，其中所述单克隆抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
16.段落1所述的方法，其中所述对象是人。
17.段落1所述的方法，其包括与所述单克隆抗体同时或先后向所述对象施用第二药剂。
18.段落17所述的方法，其中在施用所述单克隆抗体之后，所述对象对所述第二药剂的每月使用降低至少15％。
19.用于根据前述段落中任一段落的组合物。
提供以下实施例来举例说明但不限制本发明。应理解，本文中描述的实施例和实施方案仅用于举例说明的目的，并且将向本领域技术人员表明对它们的多种修改和改变并且其包含在本申请的精神和范围内。本文中引用的所有出版物、专利和专利申请在此出于所有目的通过引用整体并入本文，其程度如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体且单独地被指示为如此通过引用并入。
实施例
实施例1：针对CGRP的单克隆抗体的产生和表征
抗CGRP抗体的产生。为了产生对大鼠和人CGRP具有跨物种反应性的抗CGRP抗体，用佐剂中的25至100μg与KLH缀合的人α-CGRP或β-CGRP以多种间隔对小鼠进行免疫接种(每个足垫50μl每只小鼠总共100μl)。通常按照以下中的描述进行免疫接种：Geerligs HJ etal.，1989，J.Immunol.Methods 124：95-102；Kenney JS et al.，1989，J.Immunol.Methods121：157-166；和Wicher K et al.，1989，Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.89：128-135。首先用CFA(完全弗氏佐剂)中的50μg与KLH缀合的人α-CGRP或β-CGRP对小鼠进行免疫接种。21天后，用IFA(不完全弗氏佐剂)中的25μg与KLH缀合的人β-CGRP(用于首次用人α-CGRP免疫接种的小鼠)或α-CGRP(用于首次用人β-CGRP免疫接种的小鼠)对小鼠进行第二次免疫接种。在第二次免疫接种之后23天后，用IFA中的25μg与KLH缀合的大鼠α-CGRP对小鼠进行第三次免疫接种。十天之后，使用ELISA测试抗体效价。在第三次免疫接种之后34天，用IFA中的25μg肽(大鼠α-CGRP-KLH)进行第四次免疫接种。在第四次免疫接种之后32天，用100μg可溶性肽(大鼠α-CGRP)进行最后的加强。
从经免疫接种小鼠获得脾细胞，并利用聚乙二醇1500与NSO骨髓瘤细胞以10∶1的比例融合。将杂交物在含有20％马血清和2-草酰乙酸/丙酮酸/胰岛素的DMEM(Sigma)中平板接种到96孔板中，并开始次黄嘌呤/氨基蝶呤/胸苷选择。在第8天，向所有孔中添加100μl含有20％马血清的DMEM。使用抗体捕获免疫测定来筛选杂交物的上清液。用类别特异性二抗进行抗体类别的确定。
基于其与人和大鼠CGRP的结合来选择一组产生单克隆抗体的细胞系用于进一步表征。这些抗体和特征在下表2和3中示出。
纯化和Fab片段制备。使用蛋白A亲和色谱从杂交瘤培养物的上清液纯化选择用于进一步表征的单克隆抗体。将上清液平衡至pH 8。然后将上清液加载至用PBS平衡至pH 8的蛋白A柱MabSelect(Amersham Biosciences#17-5199-02)。用5柱体积的pH 8的PBS洗涤柱。用50mM pH 3的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液洗脱抗体。洗脱的抗体用1M pH 8的磷酸盐缓冲液中和。纯化的抗体用pH 7.4的PBS透析。使用鼠单克隆抗体标准曲线通过SDS-PAGE确定抗体浓度。
使用Immunopure Fab试剂盒(Pierce#44885)通过全抗体的木瓜蛋白酶蛋白水解来制备Fab，并按照制造商的说明书通过流过蛋白A色谱来进行纯化。使用已知浓度的标准Fab(通过氨基酸分析确定)通过ELISA和/或SDS-PAGE电泳以及通过使用1OD＝0.6mg/ml(或基于氨基酸序列的理论等价物)的A280确定浓度。
Fab的亲和力确定。使用BIACORE3000TM表面等离子体共振(SPR)系统(Biacore，INC，Piscataway NJ)并利用制造商自己的运行缓冲液HBS-EP(10mM HEPES pH 7.4，150mMNaCl，3mM EDTA，0.005％v/v聚山梨酯P20)在25℃或37℃下确定抗CGRP单克隆抗体的亲和力。通过用SA芯片上预先固定的链霉亲和素捕获N端生物素化CGRP肽(定制自GenScriptCorporation，New Jersey或Global Peptide Services，Colorado)并测量滴定通过CGRP表面的抗体Fab的结合动力学来确定亲和力。将生物素化CGRP稀释到HBS-EP中并以小于0.001mg/ml的浓度进样到芯片上。使用通过各个芯片通道的可变流动时间，获得了两个抗原密度范围：用于详细的动力学研究的＜50个响应单位(RU)和用于浓度研究和筛选的约800RU。将纯化的Fab片段的通常跨1μM至0.1nM浓度(旨在为0.1至10×的估计KD)的二倍或三倍系列稀释液以100μL/min进样1分钟，并允许10分钟的解离时间。在每个结合循环后，用25％v/v乙醇中的25mM NaOH再生表面，其耐受超过数百次循环。通过使用BIAevaluation程序将数据拟合至1∶1朗缪尔结合模型(Karlsson，R.Roos，H.Fagerstam，L.Petersson，B.(1994).Methods Enzymology 6.99-110)来同时获得动力学缔合速率(kon)和解离速率(koff)。全局平衡解离常数(KD)或“亲和力”由比例KD＝koff/kon计算。鼠Fab片段的亲和力在表2和3中示出。
鼠抗CGRP抗体的表位作图。为了确定抗CGRP抗体在人α-CGRP上结合的表位，如上所述通过在SA传感器芯片上捕获N端生物素化CGRP片段第19-37位氨基酸和第25-37位氨基酸来测量Fab片段对多种CGRP片段的结合亲和力。图1示出了在25℃下测量的其结合亲和力。如图1中所示，除抗体4901之外，所有抗体以与它们对全长人α-CGRP(1-37)的结合亲和力相似的亲和力与人α-CGRP片段19-37和25-37结合。主要由于解离速率的损失，抗体4901以与全长人α-CGRP片段结合的亲和力相比六倍低的亲和力与人α-CGRP片段25-37结合。数据表明这些抗CGRP抗体通常与CGRP的C端结合。
进行丙氨酸扫描以进一步表征人α-CGRP中参与抗CGRP抗体结合的的氨基酸。通过肽合成产生具有单丙氨酸替换的人α-CGRP的不同变体。它们的氨基酸序列与Biacore分析中使用的所有其他肽一起在表4中示出。如上所述使用Biacore确定抗CGRP抗体的Fab片段与这些变体的亲和力。如图1中所示，所有12种抗体均靶向C端表位，其中氨基酸F37是最关键的残基。F37突变成丙氨酸显著降低了亲和力或者甚至完全敲除了抗CGRP抗体与肽的结合。接下来最重要的氨基酸残基是G33，然而，仅高亲和力抗体(7E9、8B6、10A8和7D11)受到该位置丙氨酸替代的影响。氨基酸残基S34在这四种高亲和力抗体的结合中也发挥显著但较小的作用。
表2.抗CGRP单克隆抗体与人α-CGRP结合的特征及其拮抗剂活性
注意：抗体4901是市售的(Sigma，产品编号C7113)。
n.d.＝未确定
表3.抗CGRP单克隆抗体与大鼠α-CGRP结合的特征及其拮抗剂活性
“n.d.”表示没有对抗体进行测试。
表4.人α-CGRP片段(SEQ ID NO：15-40)和相关肽(SEQ ID NO：41-47)的氨基酸序列。除SEQ ID NO：36-40之外，所有肽都在C端酰胺化。粗体残基表示点突变。
实施例2：使用体外测定筛选抗CGRP拮抗剂抗体。
使用基于细胞的cAMP活化测定和结合测定进一步筛选鼠抗CGRP抗体的体外拮抗剂活性。
通过cAMP测定测量拮抗剂活性。在存在或不存在抗CGRP抗体(终浓度为1至3000nM)或大鼠α-CGRP或人α-CGRP(终浓度为0.1nM至10μM；作为c-AMP活化的阳性对照)的情况下，将5微升人或大鼠α-CGRP(终浓度为50nM))分配到384孔板(Nunc，目录号264657)中。将刺激缓冲液(20mM HEPES，pH 7.4、146mM NaCl、5mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2和500μM 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX))中的10μl细胞(如果使用人α-CGRP则为人SK-N-MC；或者如果使用大鼠α-CGRP则为来自ATCC的大鼠L6)添加到板的孔中。将板在室温下孵育30分钟。
孵育后，使用HitHunterTM酶片段互补测定(Applied Biosystems)按照制造商的说明书进行cAMP活化。该测定基于遗传改造的β-半乳糖苷酶，其由被称为酶接纳体(EnzymeAcceptor，EA)和酶供体(Enzyme Donor，ED)的两个片段组成。当两个片段分开时，酶无活性。当片段在一起时，它们可通过被称为互补的过程自发地重组以形成活性酶。EFC测定平台使用ED-cAMP肽缀合物，其中cAMP被抗cAMP识别。该ED片段能够与EA重新缔合以形成活性酶。在该测定中，最佳地滴定抗cAMP抗体以结合ED-cAMP缀合物并抑制酶形成。细胞裂解物样品中的cAMP水平与ED-cAMP缀合物竞争与抗cAMP抗体的结合。测定中游离ED缀合物的量与cAMP的浓度成比例。因此，通过活性酶的形成测量cAMP，所述活性酶的形成通过β-半乳糖苷酶发光底物的周转进行量化。通过添加10μl裂解缓冲液和抗cAMP抗体(1∶1比例)，随后在室温下孵育60分钟来进行cAMP活化测定。然后将10μl的ED-cAMP试剂添加到每个孔中并在室温下孵育60分钟。孵育后，将20μl EA试剂和CL混合物(含有底物)(1∶1比例)添加到每个孔中并在室温下孵育1至3小时或过夜。用PMT仪器以1秒/孔读取板，或用成像仪以30秒/位置读取板。在上表2和表3中鉴定了抑制α-CGRP活化cAMP的抗体(称为“是”)。表2和3中的数据表明在测定中显示出拮抗剂活性的抗体通常具有高亲和力。例如，对于人α-CGRP具有约80nM或更低KD(在25℃下测定)或对大鼠α-CGRP具有约47nM或更低KD(在37℃下测定)的抗体在该测定中显示出拮抗剂活性。
放射性配体结合测定。如先前的描述进行结合测定以测量抗CGRP抗体阻断CGRP与受体结合的IC50。Zimmermann et al.，Peptides 16：421-4，1995；Mallee et al.，J.Biol.Chem.277：14294-8，2002。将来自SK-N-MC细胞的膜(25μg)在室温下在总体积为1mL的含有10pM125I-人α-CGRP的孵育缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 7.4，5mM MgCl2，0.1％BSA)中孵育90分钟。为了确定抑制浓度(IC50)，将来自100倍高储液的抗体或未标记的CGRP(作为对照)以不同的浓度溶解于孵育缓冲液中，并与膜和10pM125I-人α-CGRP同时孵育。通过已用0.5％聚乙烯亚胺封闭的玻璃微纤维过滤器(GF/B，1μm)过滤终止孵育。绘制剂量响应曲线并使用以下等式确定Ki值：Ki＝IC50/(1+([配体]/KD)；其中人α-CGRP与存在于SK-N-MC细胞中的CGRP1受体的平衡解离常数KD＝8pM，并且Bmax＝0.025pmol/mg蛋白质。将报道的IC50值(就IgG分子而言)转化为结合位点(通过将其乘以2)，以便可将其与通过Biacore确定的亲和力(KD)进行比较(见表2)。
表2示出了鼠抗体7E9、8B6、6H2和4901的IC50。数据表明抗体亲和力通常与IC50相关：具有较高亲和力(较低KD值)的抗体在放射性配体结合测定中具有较低IC50。
实施例3：抗CGRP拮抗剂抗体对通过刺激大鼠隐神经诱导的皮肤血管扩张的作用
为了测试抗CGRP抗体的拮抗活性，使用先前描述的大鼠模型测试抗体对通过刺激大鼠隐神经的皮肤血管扩张的作用。Escott et al.，Br.J.Pharmacol.110：772-776，1993。在该大鼠模型中，隐神经的电刺激诱导从神经末梢释放CGRP，导致皮肤血流提高。在隐神经刺激之后测量雄性Sprague Dawley大鼠(170至300g，来自Charles River Hollister)的足部皮肤中的血流。用2％异氟烷将大鼠维持在麻醉下。在实验开始时给予托西溴苄铵(bretylium tosylate)(30mg/kg，i.v.施用)，以使由于隐神经交感神经纤维的伴随刺激引起的血管收缩最小化。通过使用恒温连接至温控加热垫的直肠探针将体温保持在37℃。除了受试化合物和对照通过尾静脉注射的图3中所示的实验，以及抗体4901和7D11腹膜内(IP)注射的图2A和2B中所示的实验，通过右股静脉静脉内给予包括抗体、阳性对照(CGRP8-37)和载剂(PBS，0.01％Tween 20)的化合物。由于其半衰期短，阳性对照化合物CGRP 8-37(血管扩张拮抗剂)在神经刺激之前3至5分钟以400nmol/kg(200μl)给予。Tan et al.，Clin.Sci.89：656-73，1995。抗体以不同剂量(1mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg和25mg/kg)给予。
对于图2A和2B中所示的实验，在电脉冲刺激之前72小时腹膜内(IP)施用抗体4901(25mg/kg)、抗体7D11(25mg/kg)或载剂对照(具有0.01％Tween 20的PBS)。对于图3中所示的实验，在电脉冲刺激之前24小时静脉内施用抗体4901(1mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg或25mg/kg)或载剂对照(具有0.01％Tween 20的PBS)。在施用抗体或载剂对照之后，手术暴露右后肢的隐神经，近侧切开并用塑料包裹物覆盖以防止干燥。将激光多普勒探头置于后爪皮肤的背中部侧(medio-dorsal side)，这是由隐神经支配的区域。使用激光多普勒流量计监测作为血细胞通量测量的皮肤血流。当稳定的基线通量(小于5％变化)建立至少5分钟时，将神经放置在铂双极电极上并用60个脉冲(2Hz，10V，1ms，持续30秒)进行电刺激并随后在20分钟后再次进行。对于电脉冲刺激的每个通量响应，通过通量-时间曲线下面积(AUC，其等于通量变化乘以时间变化)评估皮肤血流的累积变化。取对两次刺激的血流响应的平均值。将动物保持在麻醉下1至3小时。
如图2A和图2B中所示，与对照相比，通过在隐神经上施加电脉冲刺激的血流提高被抗体CGRP 8-37(400nmol/kg，i.v.施用)、抗体4901(25mg/kg，ip施用)或抗体7D11(25mg/kg，ip施用)的存在所抑制。在隐神经刺激之前3至5分钟施用CGRP 8-37；并且在隐神经刺激之前72小时施用抗体。如图3中所示，通过在隐神经上施加电脉冲刺激的血流提高被在隐神经刺激之前24小时静脉内施用的不同剂量(1mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg和25mg/kg)抗体4901的存在所抑制。
对于图4A和4B中所示的实验，在抗体施用之前手术暴露隐神经。通过手术暴露右后肢的隐神经，近侧切开并用塑料包裹物覆盖以防止干燥。将激光多普勒探头置于后爪皮肤的背中部侧，这是由隐神经支配的区域。使用激光多普勒流量计监测作为血细胞通量测量的皮肤血流。托西溴苄铵注射之后30至45分钟，当稳定的基线通量(小于5％变化)建立至少5分钟时，将神经放置在铂双极电极上并进行电刺激(2Hz，10V，1ms，持续30秒)并在20分钟后再次进行。使用对这两次刺激的血流通量响应的平均值来建立对电刺激的基线响应(时间0)。随后静脉内(i.v.)施用抗体4901(1mg/kg或10mg/kg)、抗体7E9(10mg/kg)、抗体8B6(10mg/kg)或载剂(具有0.01％Tween 20的PBS)。随后在抗体或载剂施用之后30分钟、60分钟、90分钟和120分钟对神经进行刺激(2Hz，10V，1ms，持续30秒)。将动物保持在麻醉下约3小时的时间。对于电脉冲刺激的每个通量响应，通过通量-时间曲线下面积(AUC，其等于通量变化乘以时间变化)评估皮肤血流的累积变化。
如图4A中所示，当在抗体施用之后60分钟、90分钟和120分钟施加电脉冲刺激时，通过在隐神经上施加电脉冲刺激的血流提高被1mg/kg i.v.施用的抗体4901的存在显著抑制，并且当在抗体施用之后30分钟、60分钟、90分钟和120分钟施加电脉冲刺激时，通过在隐神经上施加电脉冲刺激的血流提高被10mg/kg i.v.施用的抗体4901的存在显著抑制。图4B表明当在抗体施用之后30分钟、60分钟、90分钟和120分钟施加电脉冲刺激时，通过在隐神经上施加电脉冲刺激的血流提高被抗体7E9(10mg/kg，i.v.施用)的存在显著抑制，并且当在抗体施用之后30分钟施加电脉冲刺激时，被抗体8B6(10mg/kg，i.v.施用)的存在显著抑制。
这些数据表明抗体4901、7E9、7D11和8B6在阻断CGRP活性中是有效的，如通过刺激大鼠隐神经诱导的皮肤血管扩张测量的。
实施例4.抗CGRP抗体G1及其变体的表征
抗CGRP抗体G1的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列示于图5中。以下方法用于抗体G1及其变体的表达和表征。
使用的表达载体。类似于Barbas(2001)Phage display：a laboratory manual，Cold Spring Harbor，NY，Cold Spring Harbor Laboratory Press pg.2.10.VectorpComb3X)中的描述，抗体的Fab片段的表达在IPTG诱导型lacZ启动子的控制下，然而，修改包括添加和表达以下额外结构域：人κ轻链恒定结构域和IgG2人免疫球蛋白的CH1恒定结构域，Igγ-2链C区，蛋白质登录号P01859；免疫球蛋白κ轻链(智人(Homo sapiens))，蛋白质登录号CAA09181。
小规模Fab制备。从用Fab文库转化的大肠杆菌(使用电穿孔感受态TG1细胞或化学感受态Top 10细胞)，将单菌落用于接种样板(master plate)(琼脂LB+羧苄青霉素(50μg/mL)+2％葡萄糖)和其中每个孔含有1.5mL LB+羧苄青霉素(50μg/mL)+2％葡萄糖的工作板(2mL/孔，96孔/板)。将透气黏合密封件(ABgene，Surrey，UK)施加至板。将两个板在30℃下孵育12至16小时；剧烈摇动工作板。将样板储存在4℃直至需要，而将来自工作板的细胞沉淀(4000rpm，4℃，20分钟)并重悬于1.0mL LB+羧苄青霉素(50μg/mL)+0.5mM IPTG中，以通过在30℃剧烈摇动5小时来诱导Fab的表达。将诱导的细胞在4000rpm、4℃下离心20分钟，并重悬于0.6mL Biacore HB-SEP缓冲液(10mM HEPES pH 7.4，150mM NaCl，3mM EDTA，0.005％v/v P20)中。通过冷冻(-80℃)并随后在37℃解冻完成HB-SEP重悬细胞的裂解。将细胞裂解物在4000rpm、4℃下离心1小时以将碎片从含有Fab的上清液中分离，所述上清液随后使用Millipore MultiScreen Assay System 96孔过滤板和真空分流管过滤(0.2μm)。使用Biacore通过将经过滤的上清液进样经过传感器芯片上的CGRP来分析所述经过滤的上清液。从样板中拯救表达Fab的经亲和力选择的克隆，其提供用于PCR、测序和质粒制备的模板DNA。
大规模Fab制备。为了获得动力学参数，如下以更大规模表达Fab。用来自亲和力选择的表达Fab的大肠杆菌克隆的1mL“起始”过夜培养物接种含有150mL LB+羧苄青霉素(50μg/mL)+2％葡萄糖的锥形瓶(Erlenmeyer flask)。剩余的起始培养物(～3mL)用于制备质粒DNA(QIAprep mini-prep，Qiagen试剂盒)，用于测序和进一步操作。将大培养物在30℃剧烈摇动下孵育直至OD600nm达到1.0(通常为12至16小时)。通过在4000rpm、4℃下离心20分钟使细胞沉淀，并重悬于150mL LB+羧苄青霉素(50μg/mL)+0.5mM IPTG中。在30℃下表达5小时之后，通过在4000rpm、4℃下离心20分钟使细胞沉淀，重悬于10mL Biacore HBS-EP缓冲液中，并使用单次冷冻(-80℃)/解冻(37℃)循环裂解。通过在4000rpm、4℃下离心1小时使细胞裂解物沉淀，并收集上清液并过滤(0.2μm)。将经过滤的上清液加载到用pH 8的PBS平衡的Ni-NTA超流琼脂糖凝胶(superflow sepharose)(Qiagen，Valencia，CA)柱上，然后用5个柱体积的pH 8的PBS洗涤。用PBS(pH 8)+300mM咪唑洗脱不同级分中的各Fab。合并含有Fab的级分并在PBS中透析，然后在亲和力表征之前通过ELISA进行定量。
全抗体制备。为了表达全抗体，将重和轻链可变区克隆到哺乳动物表达载体中，并使用lipofectamine转染到HEK293细胞中用于瞬时表达。使用标准方法使用蛋白A纯化抗体。
载体pDb.CGRP.hFcGI是包含G1抗体重链的表达载体，并且适用于重链的瞬时表达或稳定表达。载体pDb.CGRP.hFcGI具有对应于以下区域的核苷酸序列：鼠巨细胞病毒启动子区(第7-612位核苷酸)；合成内含子(第613-1679位核苷酸)；DHFR编码区(第688-1253位核苷酸)；人生长激素信号肽(第1899-1976位核苷酸)；G1的重链可变区(第1977-2621位核苷酸)；包含以下突变的人重链IgG2恒定区：A330P331至S330S331(参考野生型IgG2序列的氨基酸编号；参见Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624)。载体pDb.CGRP.hFcGI于2005年7月15日保藏于ATCC，并被分配ATCC登录号PTA-6867。
载体pEb.CGRP.hKGI是包含G1抗体轻链的表达载体，并且适合于轻链的瞬时表达。载体pEb.CGRP.hKGI具有对应于以下区域的核苷酸序列：鼠巨细胞病毒启动子区域(第2-613位核苷酸)；人EF-1内含子(第614-1149位核苷酸)；人生长激素信号肽(第1160-1237位核苷酸)；抗体G1轻链可变区(第1238-1558位核苷酸)；人κ链恒定区(第1559-1882位核苷酸)。载体pEb.CGRP.hKGI于2005年7月15日保藏于ATCC，并被分配ATCC登录号PTA-6866。
Biacore测定用于亲和力确定。使用BIACORE3000TM表面等离子体共振(SPR)系统(Biacore，INC，Piscataway NJ)在25℃或37℃下确定G1单克隆抗体及其变体的亲和力。通过用预先固定的链霉亲和素(SA传感器芯片)捕获N端生物素化CGRP或片段并测量滴定通过芯片上的CGRP或片段的抗体G1Fab片段或变体的结合动力学来确定亲和力。所有Biacore测定均在HBS-EP运行缓冲液(10mM HEPES pH 7.4，150mM NaCl，3mM EDTA，0.005％v/v聚山梨酯P20)中进行。通过将N-生物素化CGRP在HBS-EP缓冲液中稀释至浓度小于0.001mg/mL并使用可变的接触时间将其进样经过SA传感器芯片来制备CGRP表面。对应于捕获水平＜50个响应单位(RU)的低容量表面用于高分辨率动力学研究，而高容量表面(约800RU的捕获CGRP)用于浓度研究、筛选和溶液亲和力确定。通过将抗体G1Fab以二或三倍增量系列稀释至跨越1uM至0.1nM(旨在为0.1至10×的估计KD)的浓度来获得动力学数据。样品通常以100μL/min进样1分钟，并且允许至少10分钟的解离时间。在每个结合循环之后，用25％v/v乙醇中的25mM NaOH使表面再生，其耐受超过数百次循环。使用BIAevaluaion程序将整个滴定系列(通常一式两份地产生)拟合至1∶1朗缪尔结合模型。这为每种结合相互作用返回了独特的缔合和解离动力学速率常数(分别为kon和koff)，其比值给出了平衡解离常数(KD＝koff/kon)。以这种方式确定的亲和力(KD值)在表6和7中列出。
具有极慢解离速率的结合相互作用的高分辨率分析。对于具有极慢解离速率的相互作用(特别地，在25℃下抗体G1Fab与芯片上的人α-CGRP结合)，在两部分实验中获得亲和力。使用具有以下修改的上述方案。通过以100μL/分钟进样跨550nM至1nM的2倍滴定系列(一式两份)30秒并允许仅30秒解离阶段来确定缔合速率常数(kon)。通过一式两份进样三种浓度(高、中和低)的相同滴定系列30秒并允许2小时解离阶段来确定解离速率常数(koff)。如表5中所示，通过将在这两种类型的实验中获得的kon和koff值组合获得每种相互作用的亲和力(KD)。
通过Biacore确定溶液亲和力。通过Biacore在37℃测量抗体G1对大鼠α-CGRP和F37A(19-37)人α-CGRP的溶液亲和力。使用高容量CGRP芯片表面(选择高亲和力人α-CGRP用于检测目的)，并且以5μL/min流动HBS-EP运行缓冲液。用3倍系列稀释中跨越1nM至1μM的终浓度的竞争性肽(大鼠α-CGRP或F37A(19-37)人α-CGRP)预孵育5nM恒定浓度(旨在等于或低于基于溶液的相互作用的预期KD)的抗体G1Fab片段。在不存在或存在基于溶液的竞争性肽的情况下，将抗体G1Fab溶液进样经过芯片上的CGRP并监测由于溶液竞争而造成的在芯片表面检测到的结合响应的消耗。使用校准曲线将这些结合响应转化为“游离Fab浓度”，所述校准曲线通过滴定单独抗体G1Fab(5、2.5、1.25、0.625、0.325和0nM)经过在芯片上的CGRP来构建。将“游离Fab浓度”相对于用于产生每个数据点的竞争性基于溶液之肽的浓度进行作图，并使用BIAevaluation软件拟合至溶液亲和力模型。以这种方式(间接)确定的溶液亲和力在表5和7中示出，并且用于验证直接进样Fab经过SA芯片上的N-生物素化CGRP时获得的亲和力。由这两种方法确定的亲和力之间的密切相符证实，将N-生物素化形式的CGRP束缚(tether)至芯片不改变其天然溶液结合活性。
下表5示出了通过使Fab片段流经SA芯片上的N-生物素化CGRP，通过Biacore确定的抗体G1与人α-CGRP、人β-CGRP、大鼠α-CGRP和大鼠β-CGRP的结合亲和力。为了更好地解析具有极低解离速率的结合相互作用的亲和力，还在与该测定方向互补的两部分实验中确定了亲和力，还确定了大鼠α-CGRP相互作用的溶液亲和力(如上所述)。在这两种测定方向上测量的亲和力的密切相符证实，在N-生物素化并束缚于SA芯片时，溶液中天然大鼠α-CGRP的结合亲和力没有改变。
表5.滴定经过芯片上的CGRP的抗体G1 Fab的结合亲和力
*在高分辨率两部分实验中确定α-CGRP(大鼠和人)的亲和力，其中监测解离阶段2小时(kon、koff和KD的值表示n个重复实验的平均值，标准差表示为变异百分比)。β-CGRP(大鼠和人)的亲和力通过使用仅20分钟解离阶段的全局分析来确定，所述解离阶段的准确度不足以量化它们的极端解离速率(它们的解离速率可能比此处所述的更慢，并因此它们的亲和力可能甚至更高)。抗体G1Fab从所有CGRP(除了α-大鼠CGRP)解离得极其缓慢，解离速率接近Biacore测定的分辨极限(尤其是在25℃)。
**通过测量在用基于溶液的大鼠α-CGRP竞争剂预孵育的抗体G1Fab在芯片上的CGRP处检测到的结合响应的消耗确定溶液亲和力。
下表6示出了与抗体G1相比具有氨基酸序列变异的抗体及其对大鼠α-CGRP和人α-CGRP二者的亲和力。相对于G1的序列描述了表6中所示变体的所有氨基酸替换。Fab片段的结合亲和力通过Biacore通过使其流经SA芯片上的CGRP来确定。
表6.通过Biacore在37℃下确定的抗体G1变体的氨基酸序列和结合亲和力数据。
所有CDR包括Kabat CDR和Chothia CDR二者。氨基酸残基按顺序编号(见图5)。所有克隆都具有与G1相同的L3+H1+H3序列。
KD＝koff/kon。所有koff值均在筛选模式中确定，除了具有下划线的那些，其通过Fab浓度系列的全局分析(以高分辨率模式分析G1)获得。因此，具有下划线的KD值通过测量kon经实验确定。其他kon值估计与M25相同。
n.d.＝未确定
为了确定人α-CGRP上被抗体G1识别的表位，使用上述Biacore测定。人α-CGRP作为N-生物素化形式购买，以能够通过SA传感器芯片进行其高亲和力捕获。确定在不存在或存在CGRP肽的情况下G1 Fab片段与芯片上的人α-CGRP的结合。通常来说，进样2000∶1mol肽/Fab溶液(例如，50nM G1 Fab中的10μM肽)经过芯片上的人α-CGRP。图6示出了竞争性肽阻断的结合百分比。图6中示出的数据表明阻断G1 Fab与人α-CGRP的100％结合的肽是人α-CGRP的1-37(WT)、8-37、26-37、P29A(19-37)、K35A(19-37)、K35E(19-37)和K35M(19-37)；β-CGRP的1-37(WT)；大鼠α-CGRP的1-37(WT)；以及大鼠β-CGRP的1-37(WT)。所有这些肽都在C端酰胺化。人α-CGRP的肽F37A(19-37)和19-37(后者未在C端酰胺化)也阻断了G1Fab与人α-CGRP的约80％至90％的结合。人α-CGRP的肽1-36(未在C端酰胺化)阻断G1Fab与人α-CGRP的约40％的结合。人α-CGRP的肽片段19-36(在C端酰胺化)、人α-CGRP的肽片段1-13和1-19(均未在C端酰胺化)、以及人胰淀素、降钙素和肾上腺髓质素(全部在C端酰胺化)不竞争G1 Fab与人芯片上α-CGRP的结合。这些数据表明G1靶向CGRP的C端表位，并且最末端残基(F37)的身份及其酰胺化对于结合均是重要的。
还确定了G1 Fab与人α-CGRP变体的结合亲和力(在37℃)。下表7示出了通过滴定G1 Fab经过在芯片上的N-生物素化的人α-CGRP及变体直接测量的亲和力。表7中的数据表明抗体G1与C端表位结合，F37和G33是最重要的残基。当在C端(其被酰胺化)添加额外的氨基酸残基(丙氨酸)时，G1不与CGRP结合。
在37℃下测量的G1 Fab与人α-CGRP及变体的结合亲和力(它们的氨基酸序列见表4)
芯片上的CGRP k<sub>on</sub>(1/Ms) k<sub>off</sub>(1/s) K<sub>D</sub>(nM)
1-37(WT) 4.68×10<sup>5</sup> 7.63×10<sup>-5</sup> 0.16(高分辨率K<sub>D</sub>＝0.06)
19-37 4.60×10<sup>5</sup> 7.30×10<sup>-5</sup> 0.16
25-37 3.10×10<sup>5</sup> 8.80×10<sup>-5</sup> 0.28
F27A(25-37) 3.25×10<sup>5</sup> 1.24×10<sup>-4</sup> 0.38
V28A(25-37) 3.32×10<sup>5</sup> 9.38×10<sup>-5</sup> 0.28
P29A(25-37) 2.26×10<sup>5</sup> 1.78×10<sup>-4</sup> 0.79
T30A(25-37) 1.79×10<sup>5</sup> 8.41×10<sup>-5</sup> 0.47
N31A(25-37) 2.17×10<sup>5</sup> 1.14×10<sup>-4</sup> 0.53
V32A(25-37) 2.02×10<sup>5</sup> 3.46×10<sup>-4</sup> 1.71
G33A(25-37) 2.07×10<sup>5</sup> 0.0291 141
S34A(25-37) 2.51×10<sup>5</sup> 7.64×10<sup>-4</sup> 3.04
K35A(19-37)) 2.23×10<sup>5</sup> 2.97×10<sup>-4</sup> 1.33
K35E(19-37) 5.95×10<sup>4</sup> 5.79×10<sup>-4</sup> 9.73
K35M(19-37) 2.63×10<sup>5</sup> 1.34×10<sup>-4</sup> 0.51
K35Q(19-37) 1.95×10<sup>5</sup> 2.70×10<sup>-4</sup> 1.38
F37A(25-37) 8.90×10<sup>4</sup> 8.48×10<sup>-3</sup> 95(溶液K<sub>D</sub>＝172nM)
38A(25-38A) - - 未检测到结合
上述数据表明抗体G1结合的表位位于人α-CGRP的C端，且人α-CGRP上的第33和37位氨基酸对于抗体G1的结合是重要的。此外，残基F37的酰胺化对于结合是重要的。
实施例5.临床研究
进行临床研究以评价弗赖曼妥珠单抗在对先前预防性治疗不充分响应的患者中预防性治疗偏头痛的有效性和安全性。弗赖曼妥珠单抗(TEV-48125)是完全人源化的IgG2a/κ单克隆抗体，用于通过皮下途径施用以用于偏头痛的预防性治疗。弗赖曼妥珠单抗是强效的选择性降钙素基因相关肽(CGRP)结合剂，其阻断这两种CGRP同种型(α和βCGRP)与CGRP受体的结合。
目的
该研究的主要目的是示出与安慰剂相比，作为每月和每季度皮下(sc)注射施用于患有偏头痛的成人患者的弗赖曼妥珠单抗的效力，所述成人患者对2至4类先前预防性治疗不充分响应。
该研究的次要目的是进一步评价与安慰剂相比，作为每月和每季度sc注射施用于患有偏头痛的成人患者的弗赖曼妥珠单抗的效力，所述患有偏头痛的成人患者对2至4类先前预防性治疗不充分响应。
该研究的次要目的是评价与安慰剂相比，作为每月和每季度sc注射施用于患有偏头痛的成人患者的弗赖曼妥珠单抗的安全性和耐受性，所述成人患者对2至4类先前预防性治疗不充分响应。
探索性目的如下：
·进一步评价弗赖曼妥珠单抗在对2至4类先前预防性治疗不充分响应的成人偏头痛患者中的效力
·评价抗药性抗体(antidrug antibody，ADA)的免疫原性和对临床结局的影响
·探究弗赖曼妥珠单抗的药代动力学参数与效力之间的相关性
·探究遗传多态性偏头痛发作/严重程度与弗赖曼妥珠单抗的效力和安全性之间的关系
临床研究设计
进行了具有开放标签期的多中心、随机化、双盲、安慰剂对照、平行组研究，以评价与安慰剂相比，每月和每季度皮下(sc)弗赖曼妥珠单抗在患有慢性偏头痛(CM)和阵发式偏头痛(EM)的对先前预防性治疗不充分响应的患者中的效力、安全性和耐受性。该研究将由筛选访视、磨合期(run-in period)(28天)、12周双盲安慰剂对照治疗期、12周开放标签期和用于ADA血液样品收集的弗赖曼妥珠单抗的最后剂量之后的随访6.0月组成。在开放标签治疗期结束时(最后剂量之后4周)，将安排治疗研究访视(访视8)结束，并且患者应该返回至其治疗医生的护理。适当时，在退出或终止24周治疗期/研究后，患者应该用标准的护理进行治疗。
双盲期
在基线访视(访视2)时，患者被以1∶1∶1比例随机分配至弗赖曼妥珠单抗(2种不同剂量方案)或安慰剂的治疗组，如下所示：
·对于患有CM的患者：
ο在访视2时sc施用675mg弗赖曼妥珠单抗，随后每月sc施用225mg弗赖曼妥珠单抗，持续2个月，或者
ο在访视2时sc施用675mg弗赖曼妥珠单抗，随后每月sc施用匹配安慰剂，持续2个月，或者
ο3个每月剂量的匹配安慰剂
·对于患有EM的患者：
οsc施用225mg弗赖曼妥珠单抗加2次匹配安慰剂注射作为第一剂量，随后每月sc施用225mg弗赖曼妥珠单抗，持续2个月，或者
οsc施用675mg弗赖曼妥珠单抗作为第一剂量，随后每月sc施用匹配安慰剂，持续2个月，或者
ο3个每月剂量的匹配安慰剂
开放标签期
在访视4之后，所有完成双盲期的患者进入开放标签期。所有患者(CM和EM)将每月接受sc 225mg弗赖曼妥珠单抗治疗，持续3个月。(访视5、6和7)。
双盲期的随机化和治疗分配使用电子交互式响应技术(interactive responsetechnology，IRT)来进行。该研究根据CM或EM、性别、国家和特殊治疗失败组进行分层，该组定义为必须对丙戊酸不充分响应的患者。另外，特殊治疗失败组中的患者必须对本文中限定的2至3种其他类型的偏头痛预防性药物不充分响应。研究中CM和EM患者的比例在每个亚组中应约为50∶50。
开放标签期将不会进行随机化，因为所有患者将接受相同的月剂量(225mg弗赖曼妥珠单抗)。
CM定义为：
在28天的磨合期期间，患者在前瞻性地收集的基线信息中满足以下CM标准：
·头痛发生≥15天
·在≥8天中，满足以下中的任一项：
οICHD-3诊断标准C和D，1.1无先兆型偏头痛
οICHD-3标准B和C，1.2先兆型偏头痛
ο可能的偏头痛(仅缺少1种偏头痛标准的偏头痛亚型)
ο使用曲坦类或麦角衍生物治疗已确定的头痛的患者。
EM定义为：
在28天的磨合期期间，患者在前瞻性地收集的基线信息中满足以下EM标准：
·头痛发生≥6天但＜15天
·在≥4天中，满足以下中的任一项：
οICHD-3诊断标准C和D，1.1无先兆型偏头痛
οICHD-3标准B和C，1.2先兆型偏头痛
ο可能的偏头痛(仅缺少1种偏头痛标准的偏头痛亚型)
ο使用曲坦类或麦角衍生物治疗已确定的头痛的患者
盲法治疗每月(约每28天)一次sc施用总计3个剂量(访视2、3和4)，并且开放标签治疗施用总计3个剂量(访视5、6和7)。在访视8(治疗结束[EOT]访视)时进行最终研究评估，其在施用弗雷马单抗的最后剂量之后的约4周。在最后一次所研究药物施用之后，计划进行随访6.0月(＞5个半衰期)用于ADA血液采样。早期停药的患者将在最后剂量之后进行随访6.0月。患者参与研究的总持续时间计划为50周，包含持续28天的磨合期、持续12周的双盲治疗期、持续12周的开放标签期和在第46周的1次随访。预期患者完成研究的整个持续时间，包含开放标签期和随访。
研究结束定义为最后一位患者的最后一次访视(随访，访视9)。然而，在最后一位患者的双盲治疗期结束之后发生临时数据库锁定以分析该部分研究数据。在开放标签期结束后将发生第二次临时锁定。总研究持续时间(包含6.0月随访期)为约2年。
终点
主要效力终点是弗赖曼妥珠单抗的第1剂量之后的12周时期期间每月平均偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
进一步示出效力的次要终点包括：
·弗赖曼妥珠单抗的第1剂量之后12周的时期期间实现每月平均偏头痛日数至少50％降低的患者的比例。
·弗赖曼妥珠单抗的第1剂量之后12周的时期期间至少中等严重程度的每月平均头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·弗赖曼妥珠单抗的第1剂量之后4周的时期期间每月平均偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·弗赖曼妥珠单抗的第1剂量之后4周的时期期间实现每月平均偏头痛日数至少50％降低的患者的比例。
·弗赖曼妥珠单抗的第1剂量之后12周的时期期间任何急性头痛药物的每月平均使用日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·弗赖曼妥珠单抗的第1剂量之后4周的时期期间至少中等严重程度的头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
示出安全性和耐受性的次要终点包括：
·整个研究中不良事件的发生。
·在指定时间点的临床实验室(血清化学、血液学、凝血和尿分析)测试结果的分析。
·每次访视时的生命体征(收缩压和舒张压、口腔温度和脉搏率)测量的分析。注意：另外，在怀疑过敏和严重超敏反应的情况下将测量氧饱和度和呼吸频率。
·在指定时间点的12导联心电图(electrocardiogram，ECG)结果的分析。
·在研究期间用于不良事件的伴随药物的使用。
·因不良事件而未完成研究的患者的数量(％)。
·身体检查(包括体重)的临床显著变化的分析。
·严重超敏反应/过敏反应的发生。
·由eC-SSRS测量的自杀意念和行为。
示出效力的探索性目的
·评价弗赖曼妥珠单抗在对2至4类先前预防性治疗不充分响应的成人偏头痛患者中的效力
双盲期的探索性终点如下：
·所研究药物的第1剂量之后12周的时期期间实现每月平均偏头痛日数至少75％降低的患者的比例。
·所研究药物的第1剂量之后12周的时期期间实现完全(100％)响应(无头痛)的患者的比例。
·所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间实现完全(100％)响应(无头痛)持续至少一个月的患者的比例。
·所研究药物的(第1)剂量之后12周的时期期间至少中等严重程度的每月平均头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·所研究药物的第1剂量之后4周的时期期间实现偏头痛日数至少50％降低的患者的比例，对于所述患者，在所研究药物的第1剂量之后整个12周的时期内维持这种水平的作用。
·所研究药物的第1剂量之后4周的时期期间实现偏头痛日数至少75％降低的患者的比例，对于所述患者，在所研究药物的第1剂量之后整个12周的时期内维持这种水平的作用。
·所研究药物的第1剂量之后12周的时期期间的每月平均恶心或呕吐日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·所研究药物的第1剂量之后12周的时期期间的每月平均畏光和恐声日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·所研究药物的第1剂量之后12周的时期期间偏头痛特异性急性头痛药物(曲坦类类和麦角化合物)的每月平均使用日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将托吡酯用于偏头痛失败的患者，所研究药物的第1剂量之后12周的时期期间偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将奥那肉毒毒素A用于偏头痛失败的患者，所研究药物的第1剂量之后12周的时期期间偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将丙戊酸用于偏头痛失败的患者，所研究药物的第1剂量之后12周的时期期间偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将2至3类预防性药物和丙戊酸用于偏头痛失败的患者的亚群，所研究药物的第1剂量之后12周的时期期间偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将2至3类预防性药物和丙戊酸用于偏头痛失败的患者的亚群，弗赖曼妥珠单抗的第1剂量之后12周的时期期间实现每月平均偏头痛日数至少50％降低的患者的比例。
·施用所研究药物的第3剂量之后4周时，通过6项头痛影响测试(HIT-6)测量的失能评分相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第3剂量之后4周时，通过偏头痛失能评估(MIDAS)调查表测量的失能评分相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第3剂量之后4周时，通过偏头痛特异性生命质量(MSQOL)调查表测量的生命质量相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第3剂量之后4周时，通过EuroQol-5维(EQ-5D-5L)调查表测量的健康状况相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第3剂量之后4周时，通过2项患者健康调查表(PHQ-2)和9项患者健康调查表(PHQ-9)测量的患者抑郁状况相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第3剂量之后4周时，通过工作生产率和活动损伤(WPAI)调查表测量的患者工作生产率和活动损伤相对于基线(第0天)的平均变化。
·所研究药物的第3剂量之后4周时，通过患者总体变化印象(PGIC)量表测量的患者满意度相对于基线(第0天)的平均变化。
开放标签期的探索性终点是：
·弗赖曼妥珠单抗的第4剂量之后12周的时期期间每月平均偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·弗赖曼妥珠单抗的第4剂量之后12周的时期期间实现每月平均偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)至少50％降低的患者的比例。
·弗赖曼妥珠单抗的第4剂量之后12周的时期期间至少中等严重程度的每月平均头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·弗赖曼妥珠单抗的第4剂量之后12周的时期期间任何急性头痛药物的每月平均使用日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间实现每月平均偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)至少75％降低的患者的比例。
·所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间实现完全(100％)响应(无头痛)的患者的比例。
·所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间实现完全(100％)响应(无头痛)持续至少一个月的患者的比例。
·所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间至少中等严重程度的每月平均头痛小时数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·所研究药物的第4剂量之后4周的时期期间实现偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)至少50％降低的患者的比例，对于所述患者，在所研究药物的第4剂量之后整个12周的时期内维持这种水平的作用。
·所研究药物的第4剂量之后4周的时期期间实现偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)至少75％降低的患者的比例，对于所述患者，在所研究药物的第4剂量之后整个12周的时期内维持这种水平的作用。
·所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间的每月平均恶心或呕吐日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间的每月平均畏光和恐声日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间偏头痛特异性急性头痛药物(曲坦类类和麦角化合物)的每月平均使用日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将托吡酯用于偏头痛失败的患者，所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将奥那肉毒毒素A用于偏头痛失败的患者，所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将丙戊酸用于偏头痛失败的患者，所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将2至3类预防性药物以及丙戊酸用于偏头痛失败的患者，所研究药物的第4剂量之后12周的时期期间偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)的平均变化。
·对于过去将2至3类预防性药物以及丙戊酸用于偏头痛失败的患者，弗赖曼妥珠单抗的第4剂量之后12周的时期期间实现每月平均偏头痛日数相对于基线(28天磨合期)至少50％降低的患者的比例。
·施用所研究药物的第6剂量之后4周时，通过HIT-6测量的失能评分相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第6剂量之后4周时，通过MIDAS调查表测量的失能评分相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第6剂量之后4周时，通过MSQOL调查表测量的生命质量相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第6剂量之后4周时，通过EQ-5D-5L调查表测量的健康状况相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第6剂量之后4周时，通过PHQ-2和PHQ-9测量的患者抑郁状况相对于基线(第0天)的平均变化。
·施用所研究药物的第6剂量之后4周时，通过WPAI调查表测量的患者工作生产率和活动损伤相对于基线(第0天)的平均变化。
·所研究药物的第6剂量之后4周时，通过PGIC量表测量的患者满意度相对于基线(第0天)的平均变化。
双盲期和开放标签期二者的探索性终点：
·评价弗赖曼妥珠单抗的免疫原性响应和在暴露于sc弗赖曼妥珠单抗的患者中ADA对临床结局的影响。
·探究遗传多态性(包含降钙素基因相关肽(CGRP)受体-配体复合物内、偏头痛相关易感基因中和尚未发现的基因座中的那些)与偏头痛发作/严重程度、药物不良事件和弗赖曼妥珠单抗效力之间的关系。
所研究人群
所研究人群由年龄为18岁至70岁(包括端值)的男性和女性患者构成，所述患者在筛选和诊断通过对在28天的磨合期期间电子每日头痛日记装置中每日记录的头痛数据进行回顾的前瞻性记录的阵发式或慢性偏头痛之前，具有至少12个月的偏头痛病史(由International Classification of Headache Disorders，第三版[ICHD-3]标准[IHS2013]定义)。
在筛选时，患者必须具有在过去10年内对两至四类先前预防性偏头痛药物的有记录的不充分响应(在医学图表中或通过治疗医师的确认)。
这些患者中的亚群(至少120名患者)必须具有对2至3类先前预防性药物的有记录的不充分响应以及对丙戊酸的不充分响应。所有不充分响应必须在过去10年内(在医学图表中或通过治疗医师的确认))。
先前偏头痛预防性药物如下(参见Martelletti et al.，J.Headache Pain，15(1)：47，2014)：
·β-阻滞剂：普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔和比索洛尔
·抗惊厥剂：托吡酯
·三环类：阿米替林
·钙通道阻滞剂：氟桂利嗪
·血管紧张素II受体拮抗剂：坎地沙坦
·奥那肉毒毒素A
·丙戊酸
在研究期间，不允许每天使用上面列出的药物用于其他适应症。如果任何所列出的药物作为表面或眼部滴剂给予，则是允许的。相同类别但未包含在此列表中的其他药物是允许的。
将对先前预防性偏头痛药物(包括丙戊酸)的不充分响应定义为：
·患者必须具有对来自上述列表的二至四类先前预防性药物(无论该药物属于哪一类)的有记录的不充分响应(在医学图表中或通过治疗医师的确认)。
·不充分响应定义为：在以根据公认的国家指南认为适合于偏头痛预防的稳定剂量治疗至少三个月之后，或者由于致使患者不耐受的不良事件或者药物对于患者是禁忌或不适合的而必须中断治疗时，根据治疗医师的判断没有临床意义上的改善。如果药物对于患者是不耐受的或禁忌或不适合的，则3个月的时间不适用。
如果奥那肉毒毒素A是先前失败的预防性药物，则在筛选访视之前自最后一组注射之后必须经过至少2组注射和3个月。
患者纳入标准
只有符合以下所有标准的患者才被纳入研究：
a.患者能够给出已签字的知情同意书。
b.年龄为18至70岁(包括端值)的男性或女性患者。
c.患者已被诊断为偏头痛，在≤50岁时发作。
d.通过病史、体格检查、实验室测试和ECG确定，调查人员认为患者健康状况良好。
e.体重≥45kg，并且体重指数(body mass index，BMI)在17.5至34.9kg/m2(包括端值)范围内。
f.患者在筛选前具有偏头痛病史(根据ICHD-3标准[IHS 2013])或者临床判断表明偏头痛诊断(无法通过另一种ICHD-3诊断更好地解释)≥12个月。
g.在28天的磨合期期间，患者在前瞻性地收集的基线信息中满足以下偏头痛标准：
对于患有CM的患者：
·头痛发生≥15天
·在≥8天中，满足以下中的任一项：
i. ICHD-3诊断标准C和D，1.1无先兆型偏头痛
ii. ICHD-3标准B和C，1.2先兆型偏头痛
iii.可能的偏头痛(仅缺少1种偏头痛标准的偏头痛亚型)
iv.使用曲坦类或麦角衍生物治疗已确定的头痛的患者
对于患有EM的患者：
·头痛发生≥6天
·在≥4天中，满足以下中的任一项：
i. ICHD-3诊断标准C和D，1.1无先兆型偏头痛
ii. ICHD-3标准B和C，1.2先兆型偏头痛
iii.可能的偏头痛(仅缺少1种偏头痛标准的偏头痛亚型)
iv.使用曲坦类或麦角衍生物治疗已确定的头痛的患者
h.在筛选时，患者在过去10年内必须具有对如本文中限定的两至四类先前预防性偏头痛药物的有记录的不充分响应(在医学图表中或通过治疗医师的确认)。对先前预防性偏头痛药物(包括丙戊酸)不充分响应定义为：在以根据公认的国家指南认为适合于偏头痛预防的稳定剂量治疗至少三个月之后，或者由于致使患者不耐受的不良事件或者药物对于患者是禁忌或不适合的而必须中断治疗时，根据治疗医师的判断没有临床意义上的改善。如果药物对于患者是不耐受的或禁忌或不适合的，则3个月的时间不适用。如果奥那肉毒毒素A是先前预防性药物，则在筛选访视之前自最后一组注射之后必须经过至少2组注射和3个月。
i.患者同意在磨合期、双盲治疗期和开放标签期期间不开始如本文中限定的任何偏头痛药物。在筛选访视时，自患者已使用如本文中限定的任何偏头痛预防性药物治疗以来，必须已经经过这些药物的至少五个半衰期。
j.未限定为如本文中限定的先前偏头痛预防性药物的其他处方药物必须在筛选访视时已使用稳定剂量至少2个月，在研究的双盲治疗期期间没有预期改变。
k.通过输入在磨合期期间累积最少24天的头痛数据，患者表现出对磨合期期间的电子头痛日记的依从性(～85％日记依从性)。
l.只有在筛选时具有阴性血清β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)测试、不育或绝经后的女性才可包括在内。
m.男性伴侣具有潜在生育能力(例如，未经输精管切除术)的具有生育潜力的女性(women of childbearing potential，WOCBP)必须在研究期间和访视期间(即，从筛选时开始)以及停止IMP之后的6.0个月使用高度有效的生育控制方法。
n.男性必须是不育的，或者如果他们具有潜在的生育能力/生殖能力(非手术[例如，输精管切除术]或先天不育)且其女性伴侣具有生育潜力，必须在研究期间和停止IMP之后的6.0个月与其女性伴侣一起使用可接受的生育控制方法。
o.患者必须愿意且能够遵守研究限制，以在研究期间保持在诊所期望的持续时间并返回诊所进行访视评价。
患者排除标准
如果患者符合任何以下标准，则被排除参与本研究：
a.在筛选访视时，患者正在接受如本文中限定的任何预防性偏头痛药物(不论医学适应症)超过5天，并且预期继续使用这些药物。
b.患者在筛选访视之前的3个月期间已接受奥那肉毒毒素A用于偏头痛或出于需要在头部、面部或颈部中注射的任何医疗或美容原因。
c.患者在磨合期期间超过4天使用含有阿片类(包括可待因)的药物或巴比妥类(包括布他比妥/阿司匹林/咖啡因[Actavis plc]、布他比妥/扑热息痛/咖啡因[Cardinal Health]或含有布他比妥的任何其他组合)的药物用于治疗偏头痛或用于任何其他动机。
d.患者在筛选之前的2个月期间已使用干预/装置(例如，预定的神经阻滞和经颅磁刺激)用于治疗偏头痛。
e.患者使用曲坦类类/麦角作为偏头痛的预防性治疗。
f.患者几乎每天使用作为偏头痛的预防性治疗的非甾体抗炎药(NSAID)用于其他适应症。注意：用于心血管疾病预防的低剂量阿司匹林(例如，81mg)是允许的。
g.患者患有持续不断的头痛，其定义为头痛超过他/她醒着的80％时间，并且每月少于4天没有头痛。如果大多数日子患者在他/她醒着的80％或更少时间头痛，则每日头痛是可接受的。
h.患者患有调查人员认为可危害或会损害患者参与该研究之能力的临床上显著的血液学、心脏、肾、内分泌、肺部、胃肠、泌尿生殖、神经、肝或眼部疾病。
i.调查人员认为可危害或会损害患者参与该研究之能力的临床上显著的精神问题的证据或病史，所述临床上显著的精神问题包括重性抑郁、惊恐障碍、或者广泛性焦虑症、过去的任何自杀企图或筛选之前的过去两年有具体计划的自杀意念或如通过eC-SSRS测量的当前自杀意念。
j.临床上显著的心血管疾病或血管缺血(如心肌缺血、神经缺血[例如，脑缺血]、外周肢体缺血或其他缺血事件)或血栓栓塞事件(动脉或静脉血栓形成或者栓塞事件)例如脑血管意外(包括短暂性脑缺血发作)、深静脉血栓形成或肺栓塞的病史。
k.人类免疫缺陷病毒、结核病或者慢性乙型肝炎或丙型肝炎感染的病史。
l.除在过去5年中经适当治疗的非黑素瘤皮肤癌之外，过去或现在的的癌症病史。
m.妊娠或哺乳女性患者或计划在研究期间妊娠的女性患者。
n.在筛选之前2个月(或在生物制剂的情况下，如果生物制剂的半衰期未知，则为3个月)或在5个半衰期(以较长者为准)内参与新化学实体或处方药的临床研究，或者目前正在参与另一项IMP(或医疗设备)研究。
o.对靶向CGRP途径的单克隆抗体(例如AMG 334、ALD304、LY2951742或弗赖曼妥珠单抗)的任何先前暴露。
p.根据调查人员的判断认为具有临床意义的基线12导联ECG中的任何发现。
q.根据调查人员的判断为临床上显著异常的任何发现，包括血清化学、血液学、凝血和尿分析测试值(可重复进行异常测试以进行确定)。
r.在筛选时，在重复测试中确定后的肝酶(丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶和碱性磷酸酶)＞1.5×正常的上限(upper limit of the normal，ULN)范围，或满足Hy′s定律的标准的疑似肝细胞损伤。
s.在筛选时血清肌酐＞1.5×ULN，临床上显著蛋白尿或肾脏疾病证据。
t.患者在筛选之前的2年内有酒精滥用史。
u.患者在过去2年内有药物滥用史或在过去5年内有药物依赖。
v.根据患者的医疗保健提供者或调查人员的意见，患者由于以下任何原因而不能参与或成功完成研究：
·心智上或法律上无行为能力或因任何原因而不能给出同意
·由于行政或法律决定而受监禁、被监护或被收容至疗养院(sanitarium)或社会机构
·在紧急情况下不能联系到
·有任何其他情况，其根据调查人员的意见使得患者不适合纳入研究
w.患者是直接参与研究的研究中心或赞助者雇员或这样的雇员的亲属。
x.患者先前未通过该研究的筛选。
抗体序列
G1重链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO：1)
G1轻链可变区氨基酸序列(SEQ ID NO：2)
G1 CDR H1(延伸的CDR)(SEQ ID NO：3)
G1 CDR H2(延伸的CDR)(SEQ ID NO：4)
G1 CDR H3(SEQ ID NO：5)
G1 CDR L1(SEQ ID NO：6)
G1 CDR L2(SEQ ID NO：7)
G1 CDR L3(SEQ ID NO：8)
G1重链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO：9)
G1轻链可变区核苷酸序列(SEQ ID NO：10)
G1重链全抗体氨基酸序列(包括如本文中所述的经修饰IgG2)(SEQ ID NO：11)
G1轻链全抗体氨基酸序列(SEQ ID NO：12)
G1重链全抗体核苷酸序列(包括如本文中所述的经修饰IgG2)(SEQ ID NO：13)
G1轻链全抗体核苷酸序列(SEQ ID NO：14)
人和大鼠CGRP的氨基酸序列比较(人α-CGRP(SEQ ID NO：15)；人β-CGRP(SEQ ID NO：43)；大鼠α-CGRP(SEQ ID NO：41)：以及大鼠β-CGRP(SEQ ID NO：44))：
(人α-CGRP)
(人β-CGRP)
(大鼠α-CGRP)
(大鼠β-CGRP)
轻链可变区LCVR17氨基酸序列(SEQID NO：58)
重链可变区HCVR22氨基酸序列(SEQ ID NO：59)
轻链可变区LCVR18氨基酸序列(SEQ ID NO：60)
重链可变区HCVR23氨基酸序列(SEQ ID NO：61)
轻链可变区LCVR19氨基酸序列(SEQ ID NO：62)
重链可变区HCVR24氨基酸序列(SEQ ID NO：63)
轻链可变区LCVR20氨基酸序列(SEQ ID NO：64)
重链可变区HCVR25氨基酸序列(SEQ ID NO：65)
轻链可变区LCVR21氨基酸序列(SEQ ID NO：66)
重链可变区HCVR26氨基酸序列(SEQ ID NO：67)
轻链可变区LCVR27氨基酸序列(SEQ ID NO：68)
重链可变区HCVR28氨基酸序列(SEQ ID NO：69)
轻链可变区LCVR29氨基酸序列(SEQ ID NO：70)
重链可变区HCVR30氨基酸序列(SEQ ID NO：71)
轻链可变区LCVR31氨基酸序列(SEQ ID NO：72)
重链可变区HCVR32氨基酸序列(SEQ ID NO：73)
轻链可变区LCVR33氨基酸序列(SEQ ID NO：74)
重链可变区HCVR34氨基酸序列(SEQ ID NO：75)
轻链可变区LCVR35氨基酸序列(SEQ ID NO：76)
重链可变区HCVR36氨基酸序列(SEQ ID NO：77)
轻链可变区LCVR37氨基酸序列(SEQ ID NO：78)
重链可变区HCVR38氨基酸序列(SEQ ID NO：79)

Claims (36)

1.在对象中治疗偏头痛的方法，所述方法包括：
选择对选自以下的预防性偏头痛治疗没有良好响应的对象：托吡酯、卡马西平、双丙戊酸钠、丙戊酸钠、丙戊酸、氟桂利嗪、坎地沙坦、苯噻啶、阿米替林、文拉法辛、去甲替林、度洛西汀、阿替洛尔、纳多洛尔、美托洛尔、普萘洛尔、比索洛尔、噻吗洛尔和奥那肉毒毒素A；以及
向所述对象施用治疗有效量的调节降钙素基因相关肽(CGRP)途径的单克隆抗体。
2.权利要求1所述的方法，其中所述预防性偏头痛治疗选自托吡酯、卡马西平、双丙戊酸钠、丙戊酸钠、氟桂利嗪、苯噻啶、阿米替林、文拉法辛、去甲替林、度洛西汀、阿替洛尔、纳多洛尔、美托洛尔、普萘洛尔、噻吗洛尔和奥那肉毒毒素A。
3.权利要求1所述的方法，其中所述预防性偏头痛治疗选自普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔、比索洛尔、托吡酯、阿米替林、氟桂利嗪、坎地沙坦、奥那肉毒毒素A和丙戊酸。
4.权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述对象对两种或更多种预防性偏头痛治疗没有良好响应。
5.权利要求4所述的方法，其中每种预防性偏头痛治疗选自不同的群集，其中所述群集如下定义：
群集A：普萘洛尔、美托洛尔、阿替洛尔和比索洛尔
群集B：托吡酯
群集C：阿米替林
群集D：氟桂利嗪
群集E：坎地沙坦
群集F：奥那肉毒毒素A；以及
群集G：丙戊酸。
6.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述对象发生不良副作用和/或在约三个月之后对所述预防性偏头痛治疗没有良好响应。
7.权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述预防性偏头痛治疗之一是奥那肉毒毒素A，并且所述对象发生不良副作用和/或在约六个月之后对奥那肉毒毒素A治疗没有良好响应。
8.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体静脉内或皮下施用于所述对象。
9.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体以约675mg的剂量施用。
10.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体以三次独立注射中的约225mg的剂量施用。
11.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体以约675mg的剂量、然后以一个月间隔的约225mg的后续剂量施用。
12.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体以约675mg的剂量、然后以一个月间隔的约225mg的五次后续剂量施用。
13.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体以约225mg的剂量、然后以一个月间隔的约225mg的后续剂量施用。
14.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体以约675mg的剂量、然后以每季度施用的约675mg的后续剂量施用。
15.权利要求14所述的方法，其中所述单克隆抗体皮下施用。
16.权利要求1所述的方法，其中所述施用包括从包含所述单克隆抗体之剂量的预填充注射器、具有针安全装置之预填充注射器、注射笔或自动注射器向所述对象施用所述抗体。
17.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体作为包含浓度为至少约150mg/mL之所述抗体的制剂施用。
18.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体以小于2mL的体积施用。
19.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体是抗CGRP拮抗剂抗体。
20.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体是人的或人源化的。
21.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体是人源化抗CGRP拮抗剂抗体。
22.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体包含：SEQ ID NO：3所示CDR H1；SEQID NO：4所示CDR H2；SEQ ID NO：5所示CDR H3；SEQ ID NO：6所示CDR L1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQ ID NO：8所示CDR L3。
23.权利要求1所述的方法，其中所述单克隆抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
24.权利要求1所述的方法，其中所述对象是人。
25.权利要求1所述的方法，其包括与所述单克隆抗体同时或先后向所述对象施用第二药剂，其中所述第二药剂是急性头痛药物。
26.权利要求25所述的方法，其中在施用所述单克隆抗体之后，所述对象对所述第二药剂的每月使用降低至少15％。
27.在对象中治疗偏头痛的方法，所述方法包括：
选择对选自以下的2至4种不同类别的预防性偏头痛治疗没有良好响应的对象：β-阻滞剂、抗惊厥剂、三环类、钙通道阻滞剂、血管紧张素II受体拮抗剂、奥那肉毒毒素A和丙戊酸类；以及
向所述对象施用治疗有效量的调节降钙素基因相关肽(CGRP)途径的单克隆抗体。
28.权利要求27所述的方法，其中所述单克隆抗体是抗CGRP拮抗剂抗体。
29.权利要求27所述的方法，其中所述单克隆抗体是人的或人源化的。
30.权利要求27所述的方法，其中所述单克隆抗体是人源化抗CGRP拮抗剂抗体。
31.权利要求27所述的方法，其中所述单克隆抗体包含：SEQ ID NO：3所示CDR H1；SEQID NO：4所示CDR H2；SEQ ID NO：5所示CDR H3；SEQ ID NO：6所示CDR L1；SEQ ID NO：7所示CDR L2；以及SEQ ID NO：8所示CDR L3。
32.权利要求27所述的方法，其中所述单克隆抗体以约675mg的剂量、然后以每季度施用的约675mg的后续剂量施用。
33.权利要求32所述的方法，其中所述单克隆抗体皮下施用。
34.权利要求27所述的方法，其中所述单克隆抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。
35.权利要求27所述的方法，其中所述对象是人。
36.根据前述权利要求中任一项使用的组合物。
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