EA031065B1 - Композиции антител против cgrp и их применение - Google Patents

Композиции антител против cgrp и их применение Download PDF

Info

Publication number
EA031065B1
EA031065B1 EA201301295A EA201301295A EA031065B1 EA 031065 B1 EA031065 B1 EA 031065B1 EA 201301295 A EA201301295 A EA 201301295A EA 201301295 A EA201301295 A EA 201301295A EA 031065 B1 EA031065 B1 EA 031065B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
seq
antibody
variable region
cgrp
sequence
Prior art date
Application number
EA201301295A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201301295A1 (ru
Inventor
Браян Роберт Ковасевич
Леон Ф. Гарсия-Мартинес
Кейти Олсон
Бенджамин Х. Дуцар
Дженз Дж. Билгрен
Джон А. Лэтам
Даниэль М. Митчел
Патрисия Дайэн МакНейл
Николь М. Дженсон
Марайа-Кристина Лумис
Original Assignee
Олдербайо Холдингз Ллк
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47175055&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA031065(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Олдербайо Холдингз Ллк filed Critical Олдербайо Холдингз Ллк
Publication of EA201301295A1 publication Critical patent/EA201301295A1/ru
Publication of EA031065B1 publication Critical patent/EA031065B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/485—Morphinan derivatives, e.g. morphine, codeine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение направлено на антитела и их фрагменты, обладающие специфичностью связывания с CGRP. Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к антителам, описанным здесь, и их связывающим фрагментам, включая последовательности V, Vи CDR-полипептидов, описанные здесь, и полинуклеотиды, кодирующие их. Настоящее изобретение также рассматривает конъюгаты антител против CGRP и их связывающих фрагментов, конъюгированных с одной или более функциональных или обнаруживаемых молекул. Настоящее изобретение также рассматривает способы получения указанных антител против CGRP и их связывающих фрагментов. Варианты воплощения настоящего изобретения также относятся к применению антител против CGRP и их связывающих фрагментов для диагностики, оценки и лечения заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP.

Description

Настоящее изобретение направлено на антитела и их фрагменты, обладающие специфичностью связывания с CGRP. Еще один вариант воплощения настоящего изобретения относится к антителам, описанным здесь, и их связывающим фрагментам, включая последовательности Vh, VL и CDR-полипептидов, описанные здесь, и полинуклеотиды, кодирующие их. Настоящее изобретение также рассматривает конъюгаты антител против CGRP и их связывающих фрагментов, конъюгированных с одной или более функциональных или обнаруживаемых молекул. Настоящее изобретение также рассматривает способы получения указанных антител против CGRP и их связывающих фрагментов. Варианты воплощения настоящего изобретения также относятся к применению антител против CGRP и их связывающих фрагментов для диагностики, оценки и лечения заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP.
Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки США № 61/488660 (№ патентного реестра 67858.730300), поданной 20 мая 2011 года под названием КОМПОЗИЦИИ АНТИТЕЛ ПРОТИВ CGRP И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ, полностью включенной в настоящий документ посредством ссылки.
Настоящая заявка содержит Список последовательностей, представленный в формате ASCII через EFS-Web и полностью включенный в настоящий документ посредством ссылки. Название указанной ASCII-копии, созданной 18 мая 2012 г., - 67858o730301.txt, а ее размер составляет 203815 байт.
Уровень техники Область изобретения
Настоящее изобретение относится к антителам и их фрагментам (в том числе Fab-фрагментам), обладающим специфичностью связывания с пептидом, связанным с геном кальцитонина человека (Calcitonin Gene Related Peptide, в дальнейшем CGRP). Настоящее изобретение также относится к способам скрининга заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP, и способам профилактики или лечения заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP, путем введения указанных антител или их фрагментов.
Описание данной области техники
Пептид, связанный с геном кальцитонина (CGRP) продуцируется в виде многофункционального нейропептида длиной 37 аминокислот. В организме человека существуют две формы CGRP - CGRPальфа и CGRP-бета, обладающие аналогичной активностью. CGRP-альфа и CGRP-бета человека отличаются тремя аминокислотами и происходят из различных генов. Семейство пептидов CGRP включает амилин, адреномедуллин и кальцитонин, хотя рецепторы и биологическая активность каждого из них отличаются. Doods, H., Curr. Op. Invest. Drugs, 2(9): 1261-68 (2001).
CGRP высвобождается из многочисленных тканей, например, тройничных нервов, которые при активации высвобождают нейропептиды в мозговые оболочки, опосредуя нейрогенное воспаление, которое характеризуется расширением сосудов, выходом жидкости из сосудов и разрушением тучных клеток. Durham, P.L., New Eng. J. Med, 350 (11): 1073-75 (2004). Биологические эффекты CGRP опосредованы рецептором CGRP (CGRP-R), состоящим из компонента, семикратно проходящего через мембрану, в сочетании с рецептор-ассоциированным мембранным белком (RAMP). Для CGRP-R также требуется активность белка рецепторного компонента (RCP), необходимая для эффективного соединения с аденилатциклазой через G-белки и продукции цАМФ. Doods, Н., Curr. Op. Invest. Drugs, 2(9): 1261-68 (2001).
Мигрень является нейро-сосудистым расстройством, поражающим приблизительно 10% взрослого населения в США, и, как правило, сопровождающимся интенсивными головными болями. Примерно 2030% страдающих мигренью испытывают ауру, включающую очаговые неврологические явления, предшествующие и/или сопровождающие это событие. Считают, что CGRP играет заметную роль в развитии мигрени. Например, выявлено, что концентрации CGRP в плазме повышаются в крови яремной вены в течение фазы головной боли при мигрени, в отличие от других нейропептидов. Кроме того, согласно Arulmozhi et al., у лиц, страдающих мигренью, выявлены: (1) строгая корреляция между концентрацией CGRP в плазме и мигренью; (2) вливание CGRP приводит к мигренеподобной головной боли; (3) повышены исходные уровни CGRP; и (4) изменения уровней CGRP в плазме во время приступов мигрени значительно коррелируют с интенсивностью головной боли. Arulmozhi, D.K., et al., Vas. Pharma., 43: 176187 (2005).
Одним из эффективных средств для лечения мигрени является введение триптанов, являющихся семейством лекарственных средств на основе триптамина, включающим суматриптан и ризатриптан. Члены указанного семейства обладают сродством к различным рецепторам серотонина, включая 5-HTjB, 5-HT1D и 5-HTjF. Члены указанного семейства лекарственных средств селективно сужают сосуды головного мозга, а также оказывают сосудосуживающее действие на коронарные сосуды. Durham, P.L., New Eng. J. Med, 350 (11): 1073-75 (2004). Существует теоретический риск коронарного спазма у пациентов с установленным заболеванием сердца после введения, и после приема триптанов изредка могут возникать кардиологические события. Следует отметить, что они противопоказаны для больных коронарной недостаточностью.
Аналогичным образом, боль часто можно устранить путем введения некоторых наркотических средств или нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП). Тем не менее, введение указанных терапевтических средств может привести к определенным отрицательным последствиям. НПВП способны вызывать почечную недостаточность, желудочно-кишечное кровотечение и дисфункцию печени. Наркотики способны вызывать тошноту, рвоту, нарушения психики и привыкание. Таким образом, для избегания некоторых из этих отрицательных последствий желательно выявить альтернативные способы лечения боли.
Считается, что CGRP играет роль при многочисленных заболеваниях и нарушениях, включая, но не ограничиваясь мигренью, головными болями и болью.
Например, согласно сообщениям CGRP может коррелировать или даже являться причиной гиперактивности мочевого пузыря. Доказательства того, что CGRP может коррелировать с гиперактивностью мочевого пузыря, включают тот факт, что CGRP присутствует в мочевыводящих путях, DRG и спинном
- 1 031065 мозге - (Wharton et al., 1986 Neurosci (3):727). а также то, что афферентные С-волокна важны для проведения импульсов, участвующих в мочеиспускании, в спинной мозг (Yoshida et al., 2011 J Pharmacol Sci (112): 128). Кроме того, сообщалось, что внутрипузырное введение ботокса подавляет CGRP и значительно снижает интервал между сокращениями в модели боли в мочевом пузыре, вызванной уксусной кислотой (Chuang et al., 2004 J Urol (172): 1529; Chuang et al., 2009 J Urol (182):786).
Доказательством того, что CGRP может являться причиной указанного состояния, является недавно опубликованная патентная заявка. содержащая данные, предположительно указывающие на то, что раскрытое в ней антитело против CGRP снижало количество сокращений мочевого пузыря в модели гиперактивности мочевого пузыря, вызванной скипидаром - (Pfizer WO 2011/024113)).
В связи с предполагаемой вовлеченностью CGRP в указанные и другие расстройства, в данной области техники остается потребность в композициях и способах, используемых для профилактики или лечения заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP. при отсутствии побочных эффектов. В данной области техники остается потребность в композициях или способах, снижающих или подавляющих заболевания или расстройства, связанные с CGRP, например, мигрени, головные боли, гиперактивность мочевого пузыря и боль.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение направлено на специфические антитела и их фрагменты, обладающие специфичностью связывания с CGRP, которые содержат (i) полипептид вариабельной области легкой цепи (VL), содержащий VL CDR1 последовательности SEQ ID NO: 55. VL CDR2 последовательности SEQ ID NO: 56. VL CDR3 последовательности SEQ ID NO: 57 и полипептид вариабельной области тяжелой цепи (VH), содержащий VH CDR1 последовательности SEQ ID NO: 58. VH CDR2 последовательности SEQ ID NO: 59 и VH CDR3 последовательности SEQ ID NO: 60. В частности, данное антитело или фрагмент могут содержать полипептид вариабельной области легкой цепи последовательности SEQ ID NO: 51 и полипептид вариабельной области тяжелой цепи последовательности SEQ ID NO: 53. В еще более предпочтительном варианте воплощения антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по изобретению содержат полипептид легкой цепи последовательности SEQ ID NO: 52 и полипептид тяжелой цени последовательности SEQ ID NO: 54. Предпочтительный вариант воплощения настоящего изобретения направлен на химерные или гуманизированные антитела и их фрагменты (в том числе Fab-фрагменты). способные связываться с CGRP и/или ингибировать биологическую активность, опосредованную связыванием CGRP с рецептором CGRP (CGRP-R).
Данные антитела и их фрагменты могут быть использованы для лечения заболеваний, расстройств, состояний или симптомов, связанных с клетками, которые экспрессируют CGRP. В частности, химерные или гуманизированные антитела и их фрагменты (в том числе Fab-фрагменты), способные связываться с CGRP, по изобретению можно применять в рамках способов, направленных на снижение, лечение или профилактику мигреней (с аурой или без нее), рака или опухолей, ангиогенеза, связанного с раковым или опухолевым ростом, ангиогенеза, связанного с выживанием рака или опухоли, потери массы тела, боли, гемиплегических мигреней, кластерных головных болей, мигренозной невралгии, хронических головных болей, головных болей напряжения, общих головных болей, приливов, хронической пароксизмальной гемикрании, вторичных головных болей вследствие основной структурной проблемы в области головы или шеи, черепной невралгии, синусных головных болей (например, связанных с синуситом), и головных болей или мигреней, вызванных аллергией. Антитела и фрагменты антител по настоящему изобретению особенно полезны при лечении, профилактике, улучшении, контроле или снижении риска одного или более из следующих состояний или заболеваний: гиперактивности мочевого пузыря и других заболеваний мочевыделительной системы, включая инфекции, боли мочевого пузыря; хроническую боль; нейрогенное воспаление и боль при воспалении; невропатическую боль; боль в глазах; зубную боль; послеоперационную боль, боль, связанную с травмой, боль, связанную с ожогом, сахарный диабет: инсулиннезависимый сахарный диабет и другие воспалительные аутоиммунные заболевания, сосудистые расстройства; воспаление; артрит; гиперреактивность бронхов, астму; шок; сепсис; синдром отмены опиатов; устойчивость к морфину: приливы у мужчин и женщин; аллергический дерматит; псориаз; энцефалит; травму головного мозга; эпилепсию: нейродегенеративные заболевания; кожные заболевания, включая зуд, нейрогенное кожное покраснение, розовые угри и эритему; воспалительное заболевание кишечника, синдром раздраженного кишечника, цистит; дисменорею и другие состояния, которые потенциально можно лечить или предотвращать, или уменьшать их симптомы за счет антагонизма рецепторов CGRP. Особое значение имеет острое или профилактическое лечение головной боли, в том числе мигрени и кластерной головной боли, и других состояний, связанных с болью, а также гиперактивности мочевого пузыря.
В еще одном варианте воплощения антитела и их фрагменты по изобретению можно предпочтительно применять в рамках способов, направленных на уменьшение, лечение или профилактику желудочно-пищеводного рефлюкса и висцеральной боли, связанной с желудочно-пищеводным рефлюксом, диспепсией, синдромом раздраженного кишечника, воспалительным заболеванием кишечника, болезнью
Крона, илеитом, язвенным колитом, почечной коликой, дисменореей, циститом, менструальным периодом, родами, менопаузой, простатитом или панкреатитом. Настоящее изобретение также рассматривает
- 2 031065 конъюгаты антител прочив CGRP и их связывающих фрагментов, конъюгированных с одной или более функциональных или обнаруживаемых молекул. Настоящее изобретение также рассматривает способы получения указанных химерных или гуманизированных антител против CGRP или антител против комплексов CGRP/CGRP-R и их связывающих фрагментов. В одном варианте воплощения связывающие фрагменты включают, но не ограничиваются Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv-фрагментами. SMIP (иммунофармацевтическими средствами на основе низкомолекулярных соединений), камелизированными антителами, нанотелами и IgNAR.
Варианты воплощения настоящего изобретения относятся к применению антител против CGRP и их связывающих фрагментов для диагностики, оценки и лечения заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP или его аномальной экспрессией. Настоящее изобретение также относится к применению фрагментов антител против CGRP для диагностики, оценки и лечения заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP или его аномальной экспрессией. Другие варианты воплощения настоящего изобретения относятся к продукции антител против CGRP или их фрагментов в рекомбинантных клетках-хозяевах, например, таких клетках млекопитающих как клетки СНО, NSO или HEK 293, или клетках дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. В частности, данный способ может предусматривать:
(i) внедрение по меньшей мере одного экспрессирующего вектора, содержащего один или более гетерологичных полинуклеотидов, кодирующих указанное антитело, функционально связанных с промотором и сигнальной последовательностью в гаплоидной дрожжевой клетке;
(ii) получение полиплоидных дрожжей путем спаривания или слияния сферопластов указанной первой и/или второй гаплоидной дрожжевой клетки;
(iii) отбор полиплоидных дрожжевых клеток, стабильно экспрессирующих указанное антитело; и (iv) получение стабильных полиплоидных дрожжевых культур из указанных полиплоидных дрожжевых клеток, стабильно экспрессирующих указанное антитело в культуральную среду.
Краткое описание чертежей полипептидные
На фиг. 1 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab 1.
На фиг. 2 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab2.
На фиг. 3 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab3.
На фиг. 4 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab4.
На фиг. 5 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab5.
На фиг. 6 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab6.
На фиг. 7 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab7.
На фиг. 8 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab8.
На фиг. 9 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab9.
На фиг. 10 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab10.
На фиг. 11 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab11.
На фиг. 12 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab12.
На фиг. 13 представлены полинуклеотидные щие полноразмерному антителу Ab13.
На фиг. 14 представлены полипуклеотидпые щие полноразмерному антителу Ab14.
На фиг. 15 представлены данные твердофазного ИФА по связыванию CGRP-альфа. полученные гласно протоколу, описанному в примере 1 ниже, для антител Ab, Ab2, Ab3 и Ab4.
На фиг. 16 представлены данные твердофазного ИФА по связыванию CGRP-альфа, полученные гласно протоколу, описанному в примере 1 ниже для антител Ab5, Ab6, Ab7 и Ab8.
На фиг. 17 представлены данные твердофазного ИФА по связыванию CGRP-альфа, полученные гласно протоколу, описанному в примере 1 ниже для антител Ab9, Ab10 и Ab14.
На фиг. 18 представлены данные твердофазного ИФА по связыванию CGRP-альфа, полученные гласно протоколу, описанному в примере 1 ниже для антител Ab11, Ab12 и Ab13.
На фиг. 19 продемонстрировано ингибирование CGRP-альфа-зависимой продукции цАМФ антите полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные полипептидные последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, последовательности, соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую соответствую со со со со
- 3 031065 лами Ab1, Ab2 и Ab4, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 20 продемонстрировано ингибирование CGRP-альфа-зависимой продукции цАМФ антителом Ab3, полученным в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 21 продемонстрировано ингибирование CGRP-альфа-зависимой продукции цАМФ антителами Ab5 и Ab6, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 22 продемонстрировано ингибирование CGRP-альфа-зависимой продукции цАМФ антителами Ab7, Ab8, Ab9 и Ab10, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 23 продемонстрировано ингибирование CGRP-альфа-зависимой продукции цАМФ антителами Ab11, Ab12 и Ab13, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 24 продемонстрировано ингибирование CGRP-альфа-зависимой продукции цАМФ антителом Ab14, полученным в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 25 продемонстрировано ингибирование CGRP-бета-зависимой продукции цАМФ антителами Ab1, Ab2 и Ab3, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 26 продемонстрировано ингибирование CGRP-бета-зависимой продукции цАМФ антителами Ab4, Ab5 и Ab6, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 27 продемонстрировано ингибирование CGRP-бета-зависимой продукции цАМФ антителами Ab7 и Ab8, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 28 продемонстрировано ингибирование CGRP-бета-зависимой продукции цАМФ антителами Ab9, Ab10 и Ab14, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 29 продемонстрировано ингибирование CGRP-бета-зависимой продукции цАМФ антителами Ab11, Ab12 и Ab13, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 30 продемонстрировано ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRP крысы, антителами Ab1, Ab2, Ab4 и Ab5, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 31 продемонстрировано ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRP крысы, антителами Ab3 и Ab6, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 32 продемонстрировано ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRP крысы, антителами Ab7 и Ab8, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 33 продемонстрировано ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRP крысы, антителом Ab9, полученным в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 34 продемонстрировано ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRP крысы, антителом Ab10, полученным в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 35 продемонстрировано ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRP крысы, антителами Ab11 и Ab12, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 36 продемонстрировано ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRP крысы, антителом Ab13, полученным в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 37 продемонстрировано ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRP крысы, антителом Ab14, полученным в соответствии с протоколом, описанным в примере 1 ниже.
На фиг. 38 продемонстрировано ингибирование связывания CGRP, меченого радиоактивной меткой, с CGRP-R антителами Ab1-Ab13, полученными в соответствии с протоколом, описанным в примере 6 ниже.
На фиг. 39 продемонстрировано снижение расширения сосудов при введении антител Ab3 и Ab6, полученных в соответствии с протоколом, описанным в примере 7 ниже, после введения капсайцина в модели крысы по сравнению с контрольным антителом.
На фиг. 40 продемонстрировано снижение расширения сосудов при введении антитела Ab6, полученного в соответствии с протоколом, описанным в примере 7 ниже, в различных концентрациях после введения капсайцина в модели крысы по сравнению с контрольным антителом.
На фиг. 41А-С показано положительное действие Ab3 на емкость мочевого пузыря во время вливания физиологического раствора. Животным вводили Ab3 или антитело отрицательного контроля, затем выполняли мониторинг во время вливания физиологического раствора в мочевой пузырь. ICI (график А) увеличился, a MF (график В) снизилась, что указывало на увеличение емкости мочевого пузыря. Различия в AM (график С) были в пределах стандартного отклонения и не являлись статистически значимыми. Звездочки указывают на статистически значимое улучшение (р < 0,05 согласно t-критерию Стьюдента для независимых выборок, сравнение с антителом отрицательного контроля). Обозначения: закрашенные столбики: лечение Ab3 (10 мг/кг); светлые столбики: антитело отрицательного контроля (10 мг/кг). Показатели ошибки означают стандартное отклонение. Сокращения: ICI: интервал между сокращениями; MF: частота мочеиспускания; AM: амплитуда мочеиспускания.
На фиг. 42 показано действие Ab2 в модели невропатической боли. Механическую аллодинию индуцировали посредством операции Чанга (перевязка спинномозговых нервов L5/L6), и сравнивали степень чувствительности у животных, обработанных Ab2 (заштрихованные столбики), и контрольных животных (закрашенные столбики). Более высокие значения указывают на меньшую чувствительность.
Средняя чувствительность была аналогична в день 13 (до введения Ab2), но улучшилась в дни 14 и 17.
- 4 031065
Показатели ошибки означают стандартную ошибку среднего.
На фиг. 43 показано обезболивающее действие Ab2 и морфина. Болевую чувствительность оценивали по времени отдергивания хвоста (ось у, с) для животных, которым вводили морфин (светлые квадраты), Ab2 (10 мг/кг, закрашенные треугольники), или среду-носитель (отрицательный контроль, светлые круги). Животные вырабатывали устойчивость к морфину и демонстрировали время отдергивания хвоста, аналогичное времени у контрольных животных, к 4 дню. В противоположность этому, животные, получавшие Ab2, демонстрировали устойчивое улучшение времени отдергивания хвоста в течение всего эксперимента (до дня 7). Улучшение у животных, получавших Ab2, было статистически значимым (р < 0,05 согласно однофакторному дисперсионному анализу с последующим тестом Даннетта, сравнение со средой-носителем, помечено звездочками). Показатели ошибки означают стандартную ошибку среднего.
На фиг. 44 показано обезболивающее действие Ab2 в зависимости от дозировки. В день 0 (после первого анализа времени отдергивания хвоста), крысам вводили антитело Ab2 в дозировке 1 мг/кг (закрашенные квадраты), 3 мг/кг (закрашенные треугольники вершиной вниз), или 10 мг/кг (закрашенные треугольники вершиной вверх), или среду-носитель (светлые круги), или антитело отрицательного контроля (светлые квадраты). Время отдергивания хвоста крысами в ответ на болезненный тепловой раздражитель оценивали ежедневно (более продолжительное время указывает на относительную нечувствительность к боли). Время отдергивания хвоста повышалось за счет введения Ab2 в зависимости от дозы. Звездочки указывают на статистически значимое увеличение времени отдергивания хвоста (р < 0,05 согласно однофакторному дисперсионному анализу с последующим тестом Даннетта, сравнение со средойносителем). Показатели ошибки означают стандартную ошибку среднего.
На фиг. 45 показано обезболивающее действие Ab2 в комбинации с морфином, и при отмене морфина после развития устойчивости к морфину. В день 0 (после первого анализа времени отдергивания хвоста), крысам вводили антитело Ab2 в дозировке 10 мг/кг (закрашенные квадраты и закрашенные треугольники) или среду-носитель (светлые круги). Затем крысам ежедневно вводили морфин в дни 1-10 (закрашенные квадраты) или только в дни 1-4 (закрашенные треугольники). Время отдергивания хвоста вначале значительно увеличилось у мышей, получавших морфин, но снизилась в последующие дни, что указывало на устойчивость к морфину. Однако у мышей, для которых отменили морфин после дня 4, время отдергивания хвоста увеличилось и оставалось повышенным в дни 5-8. Показатели ошибки означают стандартную ошибку среднего.
На фиг. 46 показано действие Ab2 в модели висцеральной боли у крыс. Висцеральную боль количественно оценивали, измеряя порог растяжения толстой кишки (более высокие значения указывают на меньшую чувствительность) для животных, не получавших препаратов (светлый столбик) или животных, получавших TNBS для стимуляции хронической гиперчувствительности толстой кишки, которые получали антитело отрицательного контроля (закрашенные столбики) или Ab2 (заштрихованные столбики). Гиперчувствительность облегчалась на 27% у животных, получавших Ab2, и порог растяжения значительно улучшился за счет введения Ab2 (р < 0,05 согласно t-критерию Стьюдента по сравнению с группой, получавшей TNBS + отрицательный контроль). Показатели ошибки означают стандартную ошибку среднего.
Подробное описание предпочтительных вариантов воплощения
Определения
Следует понимать, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными способами, протоколами, линиями клеток, видами или родами животных и реагентами, описанными здесь, поскольку все это может изменяться. Кроме того, следует понимать, что терминология, которая используется здесь, служит лишь для целей описания конкретных вариантов воплощения и не должна рассматриваться в качестве ограничивающей объем настоящего изобретения, которые должны ограничиваться только прилагаемой формулой изобретения. Как используется здесь, формы единственного числа включают определяемые объекты во множественном числе, если контекст не диктует иное в явной форме. Так, например, ссылка на клетку включает множество таких клеток, а ссылка на указанный белок включает ссылку на один или более белков и их эквивалентов, известных специалистам в данной области техники, и так далее. Если иное не указано явным образом, все технические и научные термины, использованные в настоящем документе, имеют значения, совпадающие с общепринятыми среди специалистов в области, к которой относится настоящее изобретение.
Пептид, связанный с геном кальцитонина (CGRP): Как используется здесь, CGRP охватывает не только следующие аминокислотные последовательности CGRP-альфа и CGRP-бета Homo sapiens, доступные в American Peptides (Саннивейл, штат Калифорния, США) и Bachem (Торранс, штат Калифорния, США):
CGRP-альфа
ACDTATCVTHRLAGLLSRSGGWKNNFVPTNVGSKAF-NH2 (SEQ ID NO: 281) где N-концевой фенилаланин амидирован;
CGRP-бета
ACNTATCVTHRLAGLLSRSGGMVKSNFVPTNVGSKAF-NH2 (SEQ ID NO: 282) где N-концевой фенилаланин амидирован; но и любые мембрано-связанные формы этих аминокислот- 5 031065 ных последовательностей CGRP, а также мутантные формы (мутеины), сплайс-варианты, изоформы, ортологи, гомологи и варианты указанной последовательности.
Виды дрожжей, компетентные по спариванию. В настоящем изобретении предполагается широкий охват любых диплоидных или тетраплоидных дрожжей, которые можно вырастить в культуре. Такие виды дрожжей могут существовать в гаплоидной, диплоидной или другой полиплоидной форме. Клетки данной плоидности могут, при соответствующих условиях, размножаться в этой форме на протяжении неопределенного количества поколений. Диплоидные клетки могут также спорулировать, образуя гаплоидные клетки. Последовательное спаривание может привести к получению тетраплоидных штаммов за счет дальнейшего спаривания или слияния клеток диплоидных штаммов. Настоящее изобретение предусматривает использование гаплоидных дрожжей, а также диплоидных или других полиплоидных клеток дрожжей, полученных, например, путем спаривания или слияния сферопластов.
В одном варианте воплощения настоящего изобретения дрожжи, компетентные по спариванию, являются членом семейства Saccharomycetaceae, которое включает роды Arxiozyma; Ascobotryozyma; Citeromyces; Debaryomyces; Dekkera; Eremothecium; Issatchenkia; Kazachstania; Kluyveromyces; Kodamaea; Lodderomyces; Pachysolen; Pichia; Saccharomyces; Saturnispora; Tetrapisispora; Torulaspora; Williopsis и Zygosaccharomyces. Другие типы дрожжей, потенциально применимых в настоящем изобретении, включают Yarrowia; Rhodosporidium; Candida; Hansenula; Filobasium; Sporidiobolus; Bullera; Leucosporidium и Filobasidella.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения дрожжи, компетентные по спариванию, являются членом рода Pichia. В другом предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения дрожжи рода Pichia, компетентные по спариванию, принадлежат к одному из следующих видов: Pichia pastoris, Pichia methanolica и Hansenula polymorpha (Pichia angusta). В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения дрожжи рода Pichia, компетентные по спариванию, принадлежат к виду Pichia pastoris.
Гаплоидная дрожжевая клетка: Клетка, содержащая одну копию каждого гена с его нормальной геномной (хромосомной) комплементарной цепью.
Полиплоидная дрожжевая клетка: Клетка, содержащая более одной копии каждого гена с его нормальной геномной (хромосомной) комплементарной цепью.
Диплоидная дрожжевая клетка: Клетка, содержащая две копии (аллеля) практически каждого гена с его нормальной геномной комплементарной цепью, обычно получаемая путем слияния (спаривания) двух гаплоидных клеток.
Тетраплоидная дрожжевая клетка: Клетка, содержащая четыре копии (аллеля) практически каждого гена с его нормальной геномной комплементарной цепью, обычно получаемая путем слияния (спаривания) двух гаплоидных клеток. Тетраплоиды могут нести две, три, четыре или более различных экспрессионных кассеты. Такие тетраплоиды можно получить у S.cerevisiae путем селективного спаривания гомозиготных гетероталличных а/а и альфа/альфа-диплоидов, а у Pichia - путем последовательного спаривания гаплоидов с получением ауксотрофных диплоидов. Например, гаплоид [met his] можно спарить с гаплоидом [ade his], получая диплоид [his], а гаплоид [met arg] можно спарить с гаплоидом [ade arg], получая диплоид [arg]; затем скрещивание диплоид [his] х диплоид [arg] позволяет получить тетраплоидный прототроф. Специалист в данной области техники должен понимать, что сведения о преимуществах и применении диплоидных клеток также могут быть применимы к тетраплоидным клеткам.
Спаривание дрожжей: Процесс, при котором две гаплоидные дрожжевые клетки естественным образом сливаются, образуя одну диплоидную дрожжевую клетку.
Мейоз: Процесс, при котором диплоидная дрожжевая клетка подвергается редукционному делению, образуя четыре гаплоидных споры. Каждая спора затем может прорасти и образовать линию гаплоидных вегетативно растущих клеток.
Селектируемый маркер: Селектируемый маркер является геном или фрагментом гена, придающим клетке, принимающей указанный ген, например, за счет трансформации, фенотип роста (физическую характеристику роста). Селективный маркер позволяет указанной клетке выжить и развиваться в селективной ростовой среде в условиях, когда клетки, не получившие указанного селективного маркерного гена, не могут расти. Селективные маркерные гены в целом делятся на несколько типов, в том числе положительные селективные маркерные гены, например, ген, придающий клетке устойчивость к антибиотику или другому лекарственному средству, температуре при скрещивании двух мутантов, чувствительных к температуре (ts''-мутантов) или трансформации ts-мутанта; отрицательные селективные маркерные гены, например, ген биосинтеза, который придает клетке способность к росту в среде без определенного питательного вещества, необходимого для всех клеток, которые не содержат указанного гена биосинтеза, или мутантный ген биосинтеза, придающий клетке неспособность получать ростовое преимущество перед клетками, не имеющими гена дикого типа и т. п. Подходящие маркеры включают, но не ограничиваются ими: ZEO; G418; LYS3; МЕТ1; MET3a; ADE1; ADE3; URA3 и т.п.
Экспрессирующий вектор: Указанные ДНК-векторы содержат элементы, которые облегчают манипулирование экспрессией чужеродного белка в клетке-хозяине-мишени. В целях удобства манипулирование последовательностями и продукция ДНК для трансформации сначала выполняется в бактериаль- 6 031065 ном хозяине, например, Е. coli, и, как правило, векторы должны содержать последовательности для облегчения таких манипуляций, включая бактериальный сайт инициации репликации и соответствующий бактериальный селективный маркер. Селективные маркеры кодируют белки, необходимые для выживания или роста трансформированных клеток-хозяев, выращенных в селективной культуральной среде. Клетки-хозяева, не трансформированные вектором, содержащим селективный ген, не выживут в указанной культуральной среде. Типичные селективные гены кодируют белки, которые (а) придают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, (b) восполняют ауксотрофную недостаточность, или (с) поставляют критические питательные вещества, недоступные в сложных средах. Типичные векторы и способы трансформации дрожжей описаны, например, в Burke, D., Dawson, D., & Steams, T. (2000). Methods in yeast genetics: a Cold Spring Harbor Laboratory course manual. Plainview, N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Экспрессирующие векторы для использования в способах по изобретению также должны включать специфические последовательности дрожжей, в том числе селективный ауксотрофный или лекарственный маркер для идентификации трансформированных штаммов дрожжей. Лекарственный маркер препарат можно в дальнейшем использовать для амплификации количества копий вектора в дрожжевой клетке-хозяине.
Интересующая исследователя последовательность, кодирующая полипептид, функционально связана с регуляторными последовательностями транскрипции и трансляции, обеспечивающими экспрессию полипептида в дрожжевых клетках. Указанные компоненты вектора могут включать один или более из: энхансерного элемента, промотора и терминатора транскрипции, но не ограничиваются ими. Кроме того, можно включать последовательности для секреции полипептида, например, сигнальную последовательность и т.п. Дрожжевой сайт инициации репликации не обязателен, поскольку векторы экспрессии часто интегрируются в геном дрожжей. В одном варианте воплощения настоящего изобретения представляющий интерес полипептид функционально связан или объединен с последовательностями, обеспечивающими оптимизированную секрецию полипептида из диплоидных клеток дрожжей.
Нуклеиновые кислоты являются функционально связанными, если они вступают в функциональное взаимодействие с другой нуклеотидной последовательностью. Например, ДНК сигнальной последовательности функционально связана с ДНК полипептида, если она экспрессируется в виде белкапредшественника, участвующего в секреции полипептида; промотор или энхансер функционально связаны с кодирующей последовательностью, если они влияют на транскрипцию этой последовательности. В общем случае функционально связанные означает, что связанные последовательности ДНК непрерывны, а в случае секреторного лидера, непрерывны и в рамке считывания. Однако энхансеры не должны быть непрерывными. Связывание осуществляют лигированием в подходящих сайтах рестрикции или, в качестве альтернативы, с помощью способа ПЦР/рекомбинации, известного специалистам в данной области техники (GatewayR Technology; Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния, США). Если такие сайты отсутствуют, в соответствии с общепринятой практикой используют синтетические олигонуклеотидные адаптеры или линкеры.
Промоторы являются нетранслируемыми последовательностями, расположенными выше (5') стартового кодона структурного гена (обычно в пределах приблизительно от 100 до 1000 п.о.), которые контролируют транскрипцию и трансляцию определенных нуклеотидных последовательностей, с которыми они функционально связаны. Такие промоторы делятся на несколько классов: индуцибельные, конститутивные и репрессируемые промоторы (повышающие уровни транскрипции в ответ на отсутствие репрессора). Индуцибельные промоторы могут инициировать повышенные уровни транскрипции ДНК, находящейся под их контролем, в ответ на некоторые изменения условий культивирования, например, в присутствии или в отсутствие питательного вещества или при изменении температуры.
Фрагмент дрожжевого промотора может также служить в качестве сайта гомологичной рекомбинации и интеграции экспрессирующего вектора в указанный сайт генома дрожжей; в качестве альтернативы, в качестве сайта гомологичной рекомбинации используется селективный маркер. Трансформация Pichia описана в Cregg et al. (1985) Mol. Cell. Biol. 5:3376-3385.
Примеры подходящих промоторов Pichia включают промотор АОХ1 (Cregg et al. (1989) Mol. Cell. Biol. 9:1316-1323); промотор ICL1 (Menendez et al. (2003) Yeast 20(13): 1097-108); промотор глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAP) (Waterham et al. (1997) Gene 186(l):37-44); и промотор FLD1 (Shen et al. (1998) Gene 216(l):93-102). Промотор GAP является сильным конститутивным промотором, а промоторы АОХ и FLD1 являются индуцибельными.
Другие промоторы дрожжей включают ADH1, промотор алкогольдегидрогеназы II, GAL4, PHO3, PHO5, Pyk и химерные промоторы, полученные из них. Кроме того, в настоящем изобретении можно применять не-дрожжевые промоторы, например, промоторы млекопитающих, насекомых, растений, рептилий, амфибий, вирусов и птиц. В наиболее типичном случае промотор включает промотор млекопитающих (потенциально эндогенный для экспрессируемых генов) или включает дрожжевой или вирусный промотор, который обеспечивает эффективную транскрипцию в дрожжевых системах.
Интересующие исследователя полипептиды можно рекомбинантно получать не только напрямую, но и в качестве гибридного полипептида с гетерологичным полипептидом, например, сигнальной после- 7 031065 довательностью или другим полипептидом, содержащим специфический сайт расщепления на N-конце зрелого белка или полипептида. В общем случае сигнальная последовательность может являться компонентом вектора или частью кодирующей последовательности полипептида, вставленной в вектор. Предпочтительно выбираемой гетерологичной сигнальной последовательностью является последовательность, распознаваемая и подвергаемая процессингу посредством одного из стандартных путей, доступных в клетке-хозяине. Считается, что сигнальная последовательность пре-про-фактора альфа S. cerevisiae является эффективной при секреции различных рекомбинантных белков из P. pastoris. Другие дрожжевые сигнальные последовательности включают сигнальную последовательность альфа-фактора спаривания, сигнальную последовательность инвертазы и сигнальные последовательности, полученные из других секретируемых полипептидов дрожжей. Кроме того, указанные сигнальные пептидные последовательности можно модифицировать для обеспечения повышенной секреции в диплоидных дрожжевых экспрессионных системах. Другие представляющие интерес сигнальные последовательности для секреции также включают сигнальные последовательности млекопитающих, которые могут быть гетерологичными по отношению к секретируемому белку, или могут являться нативной последовательностью секретируемого белка. Сигнальные последовательности включают последовательности предшественников пептидов, а в некоторых случаях могут включать последовательности пропептидов. Многие такие сигнальные последовательности известны в данной области техники, включая сигнальные последовательности, обнаруженные в цепях иммуноглобулина, например, последовательность пре-про-токсина K28, РНА-Е, FACE, MCP-1 человека, сигнальные последовательности человеческого сывороточного альбумина, тяжелую цепь Ig человека, легкую цепь Ig человека и т.п. Например, см. Hashimoto et al. Protein Eng 11(2) 75 (1998); и Kobayashi et al. Therapeutic Apheresis 2(4) 257 (1998).
Транскрипцию можно увеличить путем инсерции последовательности активатора транскрипции в вектор. Указанные активаторы являются цис-действующими элементами ДНК, обычно длиной от приблизительно 10 до 300 п.о., которые действуют на промотор, усиливая транскрипцию с него. Энхансеры транскрипции являются сравнительно независимыми по отношению к ориентации и положению, обнаруживаясь 5'- и 3'- по отношению к единице транскрипции в пределах интрона, а также внутри самой кодирующей последовательности. Энхансер можно внедрить в экспрессирующий вектор в 5' или 3'направлении от кодирующей последовательности, однако предпочтительно в 5'-направлении от промотора.
Векторы для экспрессии, используемые в клетках-хозяевах эукариот, также могут содержать последовательности, необходимые для терминации транскрипции и стабилизации мРНК. Такие последовательности обычно доступны в 3'-направлении от кодона терминации транскрипции в нетранслируемых областях эукариотической или вирусной ДНК или кДНК. Указанные области содержат нуклеотидные сегменты, транскрибируемые в виде полиаденилированных фрагментов в нетранслируемой части мРНК.
Для конструирования подходящих векторов, содержащих один или более из вышеперечисленных компонентов, используют стандартные техники лигирования или способы ПЦР/рекомбинации. Выделенные плазмиды или фрагменты ДНК расщепляют, оптимизируют и повторно лигируют в форме, желательной для получения требуемых плазмид, или обрабатывают с помощью способов рекомбинации. Для анализа с целью подтверждения правильности последовательностей сконструированных плазмид смеси, полученные при лигировании, используют для трансформации клеток-хозяев, и в случае необходимости выполняют отбор успешных трансформантов по устойчивости к антибиотикам (например, ампициллину или зеоцину). Плазмиды из трансформантов выделяют, анализируют с помощью гидролиза эндонуклеазой рестрикции и/или секвенируют.
В качестве альтернативы рестрикции и лигированию фрагментов, для инсерции последовательностей ДНК в вектор можно использовать способы рекомбинации, основанные на att-сайтах и ферментах рекомбинации. Такие способы описаны, например, в статье Landy (1989) Ann.Rev.Biochem. 55:913-949; и известны специалистам в данной области техники. Такие способы используют межмолекулярную рекомбинацию ДНК, опосредуемую смесью рекомбинантных белков, кодируемых фагом лямбда и Е. coli. Рекомбинация происходит между специфическими сайтами присоединения (att) на взаимодействующих молекулах ДНК. Описание att-сайтов см. в Weisberg and Landy (1983) Site-Specific Recombination in Phage Lambda, in Lambda II, Weisberg, ed.(Cold Spring Harbor, NY:Cold Spring Harbor Press), pp. 211-250. Сегменты ДНК, фланкирующие сайты рекомбинации, меняются местами таким образом, что после рекомбинации указанные att-сайты являются гибридными последовательностями, состоящими из последовательностей, предоставленных каждым исходным вектором. Рекомбинация может происходить между ДНК любой топологии.
Att-сайты можно внедрить в интересующую исследователя последовательность путем лигирования интересующей последовательности с соответствующим вектором; получения ПНР-продукта, содержащего сайты att В, за счет использования специфических праймеров; получения библиотеки кДНК, клонированной в соответствующем векторе, содержащем att-сайты; и т.п.
Фолдинг, как используется здесь, относится к трехмерной структуре полипептидов и белков, где взаимодействия между аминокислотными остатками стабилизируют структуру. Хотя нековалентные взаимодействия играют важную роль в определении структуры, обычно исследуемые белки содержат
- 8 031065 внутри- и/или межмолекулярные ковалентные дисульфидные связи, образованные двумя остатками цистеина. Для естественных белков и полипептидов или их производных и вариантов правильный фолдинг обычно является механизмом, приводящим к оптимальной биологической активности; его можно контролировать с помощью анализов активности, например, связывания лигандов, ферментативной активности и т. д.
В некоторых случаях, например, если желательный продукт имеет синтетическое происхождение, анализы, основанные на биологической активности, имеют меньшее значение. Правильный фолдинг таких молекул можно определить на основе физических свойств, энергетических соображений, моделирования и т. п.
Хозяина для экспрессии можно дополнительно модифицировать путем внедрения последовательностей, кодирующих один или более ферментов, улучшающих фолдинг и образование дисульфидных связей, т.е. фолдаз, шаперонинов и т.д. Такие последовательности можно конститутивно или индуцибельно экспрессировать в дрожжевой клетке-хозяине с помощью векторов, маркеров и т.д., как известно в данной области техники. В предпочтительном случае последовательности, включая транскрипционные регуляторные элементы, достаточные для желательной картины экспрессии, стабильно интегрированы в геном дрожжей путем сайт-специфической методологии.
Например, PDI эукариот является не только эффективным катализатором окисления цистеина белка и изомеризации дисульфидных связей, но также проявляет шаперонную активность. Совместная экспрессия PDI может облегчить продукцию активных белков, содержащих множественные дисульфидные связи. Кроме того, представляет интерес экспрессия BIP (белок, связывающий тяжелые цепи иммуноглобулинов); циклофилина и т.п. В одном варианте воплощения настоящего изобретения каждый из гаплоидных родительских штаммов экспрессирует собственный фермент фолдинга, например, один штамм может экспрессировать BIP, а другой штамм может экспрессировать PDI или их комбинации.
Термины желательный белок или желательное антитело взаимозаменяемы и в целом относятся к исходному антителу, специфичному по отношению к мишени, т.е. CGRP, или химерному или гуманизированному антителу, или его связывающему фрагменту, получаемому из него, как описано здесь. Термин антитело предназначен для включения любой молекулярной структуры определенной формы, содержащей полипептидную цепь, которая соответствует эпитопу и распознает его, причем одно или более нековалентных связывающих взаимодействий стабилизируют комплекс между указанной молекулярной структурой и эпитопом. Молекула-прототип антитела является иммуноглобулином, и все типы иммуноглобулинов, IgG, IgM, IgA, IgE, IgD и т.д., из всех источников, например, человека, грызунов, кролика, коровы, овцы, свиньи, собаки, других млекопитающих, кур, других птиц и т.д., считаются антителами. Предпочтительным источником для продукции антител, пригодным в качестве исходного материала согласно изобретению, являются кролики. Описаны кодирующие последовательности различных антител; другие последовательности можно найти с помощью способов, известных в данной области техники. Их примеры включают химерные антитела, антитела человека и антитела других млекопитающих, гуманизированные антитела, одноцепочечные антитела (например, scFv), камелизированные антитела, нанотела, IgNAR (одноцепочечные антитела, полученные от акул), иммунофармацевтические средства на основе модульных белков малого размера (SMIP) и такие фрагменты антител как Fab, Fab', F(ab')2 и т.п. См. Streltsov V.A., et al., Structure of a shark IgNAR antibody variable domain and modeling of an earlydevelopmental isotype, Protein Sci. 2005 Nov;14(l l):2901-9. Epub 2005 Sep 30; Greenberg A.S., et al., A new antigen receptor gene family that undergoes rearrangement and extensive somatic diversification in sharks, Nature. 1995 Mar 9;374 (6518): 168-73; Nuttall SD, et al., Isolation of the new antigen receptor from wobbegong sharks, and use as a scaffold for the display of protein loop libraries, Mol Immunol. 2001 Aug; 38(4):313-26; Hamers-Casterman C., et al., Naturally occurring antibodies devoid of light chains, Nature. 1993 Jun 3;363(6428):446-8; Gill DS, et al., Biopharmaceutical drug discovery using novel protein scaffolds, Curr Opin Biotechnol. 2006 Dec; 17(6):653-8. Epub 2006 Oct 19.
Например, антитела или антигенсвязывающие фрагменты можно продуцировать с помощью генной инженерии. С помощью этой техники, как и при других способах, антитело-продуцирующие клетки сенсибилизируют желательным антигеном или иммуногеном. Матричную РНК, выделенную из антителопродуцирующих клеток, используют в качестве матрицы для получения кДНК с помощью ПЦРамплификации. Библиотеку векторов, каждый из которых содержит один ген тяжелой цепи и один ген лёгкой цепи, сохраняющие первоначальную антигенную специфичность, получают путем инсерции соответствующих участков амплифицированной кДНК иммуноглобулина в экспрессирующие векторы. Комбинаторную библиотеку конструируют путем объединения библиотеки генов тяжёлых цепей с библиотекой генов легких цепей. Это приводит к получению библиотеки клонов, которые совместно экспрессируют тяжелую и легкую цепи (аналогичные Fab-фрагменту или антигенсвязывающему фрагменту молекулы антитела). Векторы, которые несут эти гены, совместно переносят в клетку-хозяина путем трансфекции. При индукции синтеза генов антитела в трансфицированной клетке-хозяине белки тяжелых и легких цепей подвергаются самосборке, образуя активные антитела, которые можно обнаружить путем скрининга с антигеном или иммуногеном.
Последовательности, кодирующие интересующие исследователя антитела, включают нативные по
- 9 031065 следовательности, а также нуклеиновые кислоты, последовательность которых в силу вырожденности генетического кода не идентична последовательности раскрытых нуклеиновых кислот, и их варианты. Варианты полипептидов могут включать аминокислотные (АК) замены, добавления или делеции. Аминокислотные замены могут быть консервативными аминокислотными заменами или заменами для устранения несущественных аминокислот, например, для модификации сайта гликозилирования или минимизации неправильного фолдинга путем замены или делеции одного или более остатков цистеина, ненужных для функционирования. Можно сконструировать варианты, сохраняя или повышая биологическую активность определенной области белка (например, функционального домена, каталитических аминокислотных остатков и т.д.). Варианты также включают фрагменты полипептидов, раскрытые здесь, в частности, биологически активные фрагменты и/или фрагменты, соответствующие функциональным доменам. Известны техники мутагенеза клонированных генов in vitro. Настоящее изобретение также включает полипептиды, модифицированные с помощью обычных молекулярно-биологических техник с целью улучшения их устойчивости к протеолитической деградации или оптимизации свойств растворимости, или для их лучшего соответствия требованиям, предъявляемым к терапевтическим агентам.
Химерные антитела можно получить рекомбинантными способами путем объединения вариабельных областей легких и тяжелых цепей (VL и VH), полученных из антитело-продуцирующих клеток одного вида, с константными областями легких и тяжелых цепей из другого вида. Обычно в химерных антителах используют вариабельные области грызунов или кролика и константные области человека с целью получения антитела с доменами преимущественно человеческого происхождения. Продукция таких химерных антител хорошо известна в данной области техники, и ее можно осуществить с помощью стандартных средств (как описано, например, в патенте США № 5624659, полностью включенном в настоящий документ посредством ссылки). Кроме того, предполагается, что константные области человека в составе химерных антител по изобретению можно выбирать из константных областей IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4.
Гуманизированные антитела сконструированы таким образом, что их иммуноглобулиновые домены более подобны доменам человека, и включают только гипервариабельные области антитела животного происхождения. Это достигается путем тщательного изучения последовательности гипервариабельных петель вариабельных областей моноклонального антитела и их адаптации к структуре цепей антитела человека. Хотя указанный способ на первый взгляд сложен, его просто осуществить на практике. См., например, патент США № 6187287, полностью включенный в настоящий документ посредством ссылки.
В дополнение к целым иммуноглобулинам (или их рекомбинантным аналогам), можно синтезировать фрагменты иммуноглобулинов, включающие сайт связывания эпитопа (например, Fab', F(ab')2 или другие фрагменты). Фрагмент или минимальные иммуноглобулины можно сконструировать с использованием техник рекомбинантных иммуноглобулинов. Например, Fv''-иммуноглобулины для использования в настоящем изобретении можно получить путем синтеза гибридной вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи. Кроме того, представляют интерес комбинации антител, например, диатела, которые содержат два Fv с различной специфичностью. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты иммуноглобулинов включают SMIP (низкомолекулярные иммунофармацевтические средства), камелизированные антитела, нанотела и IgNAR.
Иммуноглобулины и их фрагменты можно модифицировать после трансляции, например, путем добавления эффекторных групп, например, химических линкеров, обнаруживаемых молекул, например, флуоресцентных красителей, ферментов, токсинов, субстратов, биолюминесцентных материалов, радиоактивных материалов, хемилюминесцентных групп и т.п., или фрагментов, обеспечивающих специфическое связывание, например, стрептавидина, авидина или биотина и т. п., которые можно применять в способах и композициях по настоящему изобретению. Примеры дополнительных эффекторных молекул приведены ниже.
Полинуклеотидная последовательность соответствует полипептидной последовательности, если трансляция полинуклеотидной последовательности в соответствии с генетическим кодом приводит к получению указанной полипептидной последовательности (т.е. полинуклеотидная последовательность кодирует полипептидную последовательность); одна полинуклеотидная последовательность соответствует другой полинуклеотидной последовательности, если указанные две последовательности кодируют одну и ту же полипептидную последовательность.
Гетерологичная область или домен ДНК-конструкта является идентифицируемым сегментом ДНК в более крупной молекуле ДНК, не присутствующим в связи с указанной более крупной молекулой в природе. Таким образом, если гетерологичная область кодирует ген млекопитающего, указанный ген обычно фланкирован ДНК, которая не фланкирует указанную геномную ДНК млекопитающего в геноме организма-источника.
Другим примером гетерологичной области является конструкт, где сама кодирующая последовательность не встречается в природе (например, кДНК, где геномная кодирующая последовательность содержит интроны или синтетические последовательности, содержащие кодоны, отличающиеся от нативного гена). Аллельные вариации или природные мутации не приводят к появлению гетерологичной области ДНК, как определено здесь.
- 10 031065
Кодирующая последовательность является последовательностью кодонов в рамке считывания, которые (с учетом генетического кода) соответствуют или кодируют последовательность белка или пептида. Две кодирующие последовательности соответствуют друг другу, если указанные последовательности или комплементарные им последовательности кодируют одни и те же аминокислотные последовательности. Кодирующую последовательность в сочетании с соответствующими регуляторными последовательностями можно транскрибировать и транслировать в полипептид. Сигнал полиаденилирования и последовательность терминации транскрипции обычно расположены в З'-направлении от кодирующей последовательности. Промоторная последовательность является регуляторной областью ДНК, способной связывать РНК-полимеразу в клетке и инициировать транскрипцию расположенной ниже (в 3'направлении) кодирующей последовательности. Промоторные последовательности, как правило, содержат дополнительные сайты связывания регуляторных молекул (например, факторов транскрипции), которые влияют на транскрипцию кодирующей последовательности. Кодирующая последовательность находится под контролем промоторной последовательности или функционально связана с промотором, если РНК-полимераза связывается с промоторной последовательностью в клетке и транскрибирует кодирующую последовательность в мРНК, которая затем, в свою очередь, транслируется в белок, кодируемый кодирующей последовательностью.
Векторы используются для введения чужеродного вещества, например, ДНК, РНК или белка, в организм или клетку-хозяина. Типичные векторы включают рекомбинантные вирусы (для полинуклеотидов) и липосомы (для полипептидов). ДНК-вектор является репликоном, например, плазмидой, фагом или космидой, к которому можно присоединить другой полинуклеотидный сегмент, вызывая репликацию присоединенного сегмента. Экспрессирующий вектор является ДНК-вектором, содержащим регуляторные последовательности, управляющие синтезом полипептида соответствующей клеткойхозяином. Это обычно подразумевает промотор, связывающий РНК-полимеразу и инициирующий транскрипцию мРНК, а также сайты связывания рибосом и сигналы инициации для управления трансляцией мРНК в полипептид(ы). Внедрение полинуклеотидной последовательности в экспрессирующий вектор в надлежащем сайте и в правильной рамке считывания с последующей трансформацией соответствующей клетки-хозяина с помощью указанного вектора дает возможность продукции полипептида, кодируемого указанной полинуклеотидной последовательностью.
Амплификация полинуклеотидных последовательностей является продукцией множественных копий определенной нуклеотидной последовательности in vitro. Амплифицированная последовательность обычно представлена в форме ДНК. Различные техники проведения такой амплификации описаны в обзорной статье Van Brunt (1990, Bio/Technol., 8(4):291-294). Полимеразная цепная реакция или ПЦР является прототипом амплификации нуклеиновых кислот, и использование ПЦР здесь следует рассматривать примером других подходящих техник амплификации.
Общая структура антител позвоночных хорошо изучена к настоящему времени (Edelman, G. M., Ann. N.Y. Acad. Sci., 190: 5 (1971)). Антитела состоят из двух одинаковых легких полипептидных цепей с молекулярной массой приблизительно 23000 дальтон (легкой цепи), и двух одинаковых тяжелых цепей с молекулярной массой 53000-70000 (тяжелой цепи). Указанные четыре цепи соединены дисульфидными связями в Y''-конфигурацию, где легкие цепи сгруппированы с тяжелыми цепями, начиная с горловины указанной Y''-конфигурации. Фрагменты-ветви Y-конфигурации обозначают как Fabобласть; стеблевой фрагмент Y''-конфигурации обозначают как Fc-область. Аминокислотная последовательность ориентирована от N-конца в верхней части Y''-конфигурации до С-конца в нижней части каждой цепи. N-конец содержит вариабельную область, обладающую специфичностью к антигену, вызвавшему синтез антитела, и составляющую приблизительно 100 аминокислот в длину; существуют небольшие различия между легкими и тяжелыми цепями и от антитела к антителу.
Вариабельная область каждой цепи связана с константной областью, которая распространяется на оставшуюся длину цепи и в рамках определенного класса антител не меняется в зависимости от специфичности антитела (т.е. от антигена, вызвавшего синтез антитела). Существует пять известных основных классов константных областей, определяющих класс молекулы иммуноглобулина (IgG, IgM, IgA, IgD, и IgE, соответствующие константным областям тяжелой цепи γ, μ, α, δ и ε (гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон). Константная область или класс определяет последующую эффекторную функцию антитела, в том числе активацию комплемента (Kabat, E. А., Structural Concepts in Immunology and Immunochemistry, 2nd Ed., p. 413-436, Holt, Rinehart, Winston (1976)) и другие типы клеточного ответа (Andrews, D. W., et al., Clinical Immunobiology, pp 1-18, W. B. Sanders (1980); Kohl, S., et al., Immunology, 48: 187 (1983)), в то время как вариабельная область определяет антиген, с которым взаимодействует антитело. Легкие цепи классифицируются или как к (каппа), или как λ (лямбда). Каждый класс тяжелой цепи можно получить с легкой цепью каппа или лямбда. Легкая и тяжелая цепи ковалентно связаны друг с другом, и хвостовые фрагменты двух тяжелых цепей соединены друг с другом посредством ковалентных дисульфидных связей, если иммуноглобулины получают с помощью или гибридом, или В-клеток.
Выражение вариабельная область или VR относится к доменам в пределах каждой пары легкой и тяжелой цепей антитела, которые вовлечены непосредственно в связывание антитела с антигеном. Ка
- 11 031065 ждая тяжелая цепь несет на одном конце вариабельный домен (VH), за которым следует ряд константных доменов. Каждая легкая цепь несет на одном конце вариабельный домен (VL), а на другом конце - константный домен; константный домен легкой цепи выровнен с первым константным доменом тяжелой цепи, а вариабельный домен легкой цепи выровнен с вариабельным доменом тяжелой цепи.
Выражения область, определяющая комплементарность, гипервариабельная область или CDR относятся к одной или более гипервариабельных или определяющих комплементарность областей (CDR), присутствующих в вариабельных областях легких или тяжелых цепей антитела (см. Kabat, E. A. et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)). Указанные выражения включают гипервариабельные области, соответствующие определению Kabat et al. (Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat E., et al., US Dept. of Health and Human Services, 1983) или гипервариабельные петли трехмерных структур антител (Chothia and Lesk, J Mol. Biol. 196 901917 (1987)). CDR каждой цепи удерживаются в непосредственной близости друг от друга посредством каркасных областей и вместе с CDR другой цепи вносят вклад в образование антигенсвязывающего сайта. В пределах CDR присутствуют избранные аминокислоты, описанные как области, определяющие селективность (SDR), которые представляют собой критические контактные остатки, используемые CDR при взаимодействии антитело-антиген (Kashmiri, S., Methods, 36:25-34 (2005)).
Выражения каркасная область или FR относятся к одной или более каркасных областей, присутствующих в вариабельных областях легких и тяжелых цепей антитела (см. Kabat, E. A. et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., (1987)). Указанные выражения относятся к областям аминокислотной последовательности, расположенным между CDR в пределах вариабельных областей легких и тяжелых цепей антитела.
Антитела против CGRP и их связывающие фрагменты, обладающие связывающей активностью по отношению к CGRP
Антитело Ab1
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGV SSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVWKR (SEQ ID NO: 1).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже:
QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGV SSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCFGSYDCSSGDCFVFGGGTEWVKRTVAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNAFQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 2).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QSLEESGGRFVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDN TYYASWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 3).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGINDNTYYA SWAKGRFTISRASSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRWS VLTVFHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 4).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, соответствующие областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 1 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 2, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 или последо
- 12 031065 вательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 4, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 3 или SEQ ID NO: 4.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 1 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 2.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 4.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 1; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 5; SEQ ID NO: 6 и SEQ ID NO: 7) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 1; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 8; SEQ ID NO: 9 и SEQ ID NO: 10) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения химерное антитело против CGRP является Ab1, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 4, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В другом особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab1, Fabфрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 1 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 3 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab1 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab1, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab2
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 11).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSV FIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 12).
- 13 031065
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже:
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGI NDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNT YYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVF LFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYAST YRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEM TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 14).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 12, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 13 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 14, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO: 12. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 13 или SEQ ID NO: 14.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 12.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 13 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 14.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 13; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 15; SEQ ID NO: 16 и SEQ ID NO: 17) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 18; SEQ ID NO: 19 и SEQ ID NO: 20) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 13.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения гуманизированное антитело против CGRP является Ab2, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 14, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В дополнительном, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения
- 14 031065 фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab2, Fab-фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 13. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 11 и/или SEQ ID NO: 13 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab2 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab2, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab3
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQ ID N0:21).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSV FIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYS LSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 22).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGI NDNTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 23).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGINDNT YYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 24).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, соответствующие областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 21 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 22, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29 и SEQ ID NO: 30, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 23 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 24, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 21 или SEQ ID NO: 22. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты
- 15 031065 антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 23 или SEQ ID NO: 24.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 21 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 22.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29 и SEQ ID NO: 30, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 23 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 24.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 21; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 23; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 25; SEQ ID NO: 26 и SEQ ID NO: 27) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 21; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 28; SEQ ID NO: 29 и SEQ ID NO: 30) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 23.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения химерное антитело против CGRP является Ab3, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 22 и SEQ ID NO: 24, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В другом, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab3, Fabфрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 21 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 23. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 21 и/или SEQ ID NO: 23 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab3 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab3, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab4
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGV PSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVWKR (SEQ ID NO: 31).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGQPPKQLIYDASTLASGV PSRFSGSGSGTQFTLTISGVQCNDAAAYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTEVWKRTVAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 32).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже:
QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGA TYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 33).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связы
- 16 031065 вания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGVIGINGATYYA SWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRWS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 34).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 37, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 31 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 32, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39 и SEQ ID NO: 40, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 33 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 34, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 31 или SEQ ID NO: 32. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 33 или SEQ ID NO: 34.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 37, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 31 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 32.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39 и SEQ ID NO: 40, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 33 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 34.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 31; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 33; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 35; SEQ ID NO: 36 и SEQ ID NO: 37) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 31; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 38; SEQ ID NO: 39 и SEQ ID NO: 40) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO:33.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения гуманизированное антитело против CGRP является Ab4, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 34, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В другом, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab4, Fabфрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 31 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 33. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 31 и/или SEQ ID NO: 33 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab4 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab4, или их Fab-фрагменты можно продуци
- 17 031065 ровать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab5
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 41).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPS VFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 42).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGI NGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 43).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATY YASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYR WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 44).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 41 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 42, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49 и SEQ ID NO: 50, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 43 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 44, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 41 или SEQ ID NO: 42. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 43 или SEQ ID NO: 44.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 41 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 42.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более
- 18 031065 полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49 и SEQ ID NO: 50, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 43 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 44.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 41; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 43; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 45; SEQ ID NO: 46 и SEQ ID NO: 47) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 41; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 48; SEQ ID NO: 49 и SEQ ID NO: 50) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 43.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения химерное антитело против CGRP является Ab5, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 42 и SEQ ID NO: 44, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В дополнительном, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab5, Fab-фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 41 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 43. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 41 и/или SEQ ID NO: 43 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab5 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab5, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab6
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQ ID N0:51).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLIYDASTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPS VFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 52).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGI NGATYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 53).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVIGINGATY YASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYR WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 54).
- 19 031065
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56 и SEQ ID NO: 57, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 51 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 52, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59 и SEQ ID NO: 60, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 53 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 54, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 51 или SEQ ID NO: 52. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 53 или SEQ ID NO: 54.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56 и SEQ ID NO: 57, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 51 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 52.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59 и SEQ ID NO: 60, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 53 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 54.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 51; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 53; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 55; SEQ ID NO: 56 и SEQ ID NO: 57) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 51; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 58; SEQ ID NO: 59 и SEQ ID NO: 60) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 53.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения гуманизированное антитело против CGRP является Ab6, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 52 и SEQ ID NO: 54, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В дополнительном, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab6, Fab-фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 51 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 53. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 51 и/или SEQ ID NO: 53 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab6 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab6, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей.
Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab7
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
- 20 031065
QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGV SSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEWVKR (SEQ ID NO: 61).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGV SSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVWKRTVAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 62).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGWGIN GRTYYASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 63).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGINGRTY YASWAKGRFTISRTSSTTVDLKMTRLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPS VFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS WTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFP PKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 64).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 66 и SEQ ID NO: 67, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 61 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 62, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 68; SEQ ID NO: 69 и SEQ ID NO: 70, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 64, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 61 или SEQ ID NO: 62. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 63 или SEQ ID NO: 64.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 66 и SEQ ID NO: 67, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 61 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 62.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 68; SEQ ID NO: 69 и SEQ ID NO: 70, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 64.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 61; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63; областей, оп
- 21 031065 ределяющих комплементарность (SEQ ID NO: 65; SEQ ID NO: 66 и SEQ ID NO: 67) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 61; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 68; SEQ ID NO: 69 и SEQ ID NO: 70) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения химерное антитело против CGRP является Ab7, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 62 и SEQ ID NO: 64 и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В дополнительном, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab7, Fab-фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 61 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 61 и/или SEQ ID NO: 63 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab7 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab7, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab8
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 71).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPS VFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 72).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGWGI
NGRTYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 73).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGWGINGRT YYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 74).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 77, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 71 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 72, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 78; SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 80, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 73 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 74, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или бо
- 22 031065 лее из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 71 или SEQ ID NO: 72. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 73 или SEQ ID NO: 74.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 77, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 71 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 72.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 78; SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 80, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 73 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 74.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 71; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 73; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 75; SEQ ID NO: 76 и SEQ ID NO: 77) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 71; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 78; SEQ ID NO: 79 и SEQ ID NO: 80) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 73.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения гуманизированное антитело против CGRP является Ab8, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 72 и SEQ ID NO: 74, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В другом, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab8, Fabфрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 71 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 73. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 71 и/или SEQ ID NO: 73 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab8 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab8, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab9
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGV SSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVWKR (SEQ ID NO: 81).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQTPSPVSAAVGSTVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGV SSRFRGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVWKRTVAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 82).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связы
- 23 031065 вания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGK TYYATWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 83).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGIGLSSYYMQWVRQSPGRGLEWIGVIGSDGKTYYA TWAKGRFTISKTSSTTVDLRMASLTTEDTATYFCTRGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWT VPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRWS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 84).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 86 и SEQ ID NO: 87, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 81 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 82, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 88; SEQ ID NO: 89 и SEQ ID NO: 90, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 83 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 84, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 81 или SEQ ID NO: 82. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 83 или SEQ ID NO: 84.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 86 и SEQ ID NO: 87, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 81 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 82.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 88; SEQ ID NO: 89 и SEQ ID NO: 90, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 83 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 84.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 81; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 83; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 85; SEQ ID NO: 86 и SEQ ID NO: 87) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 81; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 88; SEQ ID NO: 89 и SEQ ID NO: 90) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 83.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения химерное антитело против CGRP является Ab9, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 82 и SEQ ID NO: 84, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В другом, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab9, Fab
- 24 031065 фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 81 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 83. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 81 и/или SEQ ID NO: 83 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab9 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab9, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab10
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 91).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPS VFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 92).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGS DGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 93).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTY YATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYR WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 94).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 96 и SEQ ID NO: 97, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 91 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 92, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 98; SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 100, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 93 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 94, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 91 или SEQ ID NO: 92. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 93 или SEQ ID NO: 94.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладаю
- 25 031065 щие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 96 и SEQ ID NO: 97, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 91 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 92.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 98; SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 100, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 93 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 94.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 91; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 93; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 95; SEQ ID NO: 96 и SEQ ID NO: 97) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 91; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 98; SEQ ID NO: 99 и SEQ ID NO: 100) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 93.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения гуманизированное антитело против CGRP является Ab10, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 92 и SEQ ID NO: 94, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В дополнительном, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab10, Fab-фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 91 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 93. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 91 и/или SEQ ID NO: 93 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab10 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab10, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab11
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGV SSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVWKR (SEQ ID NO: 101).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQTASPVSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGV SSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVWKRTVAAP SVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDST YSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 102).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNG KRYYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 103).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
- 26 031065
QSLEESGGRLVTPGGSLTLTCTVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWIGVIGVNGKRYY
ASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSW TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRWS VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 104).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 107, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 101 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 102, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 108; SEQ ID NO: 109 и SEQ ID NO: 110, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 103 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 104, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 101 или SEQ ID NO: 102. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 103 или SEQ ID NO: 104.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 107, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 101 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 102.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 108; SEQ ID NO: 109 и SEQ ID NO: 110, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 103 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 104.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 101; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 103; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 105; SEQ ID NO: 106 и SEQ ID NO: 107) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 101; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 108; SEQ ID NO: 109 и SEQ ID NO: 110) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 103.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения химерное антитело против CGRP является Ab11, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 102 и SEQ ID NO: 104, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В дополнительном, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab11, Fab-фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 101 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 103. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 101 и/или SEQ ID NO: 103 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab11 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab11, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например,
- 27 031065 диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab12
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 111).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCRASQSVYYNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPS VFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 112).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGV NGKRYYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 113).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKR YYASWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTY RWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMT KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 114).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 116 и SEQ ID NO: 117, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 111 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 112, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 118; SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 120, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 113 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 114, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 111 или SEQ ID NO: 112. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 113 или SEQ ID NO: 114.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 116 и SEQ ID NO: 117, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 111 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 112.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 118; SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 120, которые соот
- 28 031065 ветствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 113 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 114.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 111; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 113; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 115; SEQ ID NO: 116 и SEQ ID NO: 117) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 111; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 118; SEQ ID NO: 119 и SEQ ID NO: 120) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 113.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения гуманизированное антитело против CGRP является Ab12, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 112 и SEQ ID NO: 114, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В дополнительном, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab12, Fab-фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 111 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 113. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 111 и/или SEQ ID NO: 113 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab12 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab12, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab13
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASG VPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVWKR (SEQ ID NO: 121).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
AIVMTQTPSSKSVPVGDTVTINCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASG VPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCDDAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVWKRTVAA PSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDS TYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 122).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGIIYNGD GSTYYASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSS (SEQIDNO: 123).
Настоящее изобретение также включает химерные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QSVEESGGGLVQPEGSLTLTCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLEWIGCIYNGDGSTY YASWVNGRFSISKTSSTTVTLQLNSLTVADTATYYCARDLDLWGPGTLVTVSSASTKGP SVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLS SWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYR WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 124).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из поли
- 29 031065 пептидных последовательностей SEQ ID NO: 125; SEQ ID NO: 126 и SEQ ID NO: 127, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 121 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 122, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 128; SEQ ID NO: 129 и SEQ ID NO: 130, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 123 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 124, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинации одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 121 или SEQ ID NO: 122. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 123 или SEQ ID NO: 124.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 125; SEQ ID NO: 126 и SEQ ID NO: 127, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 121 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 122.
В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 128; SEQ ID NO: 129 и SEQ ID NO: 130, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 123 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 124.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 121; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 123; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 125; SEQ ID NO: 126 и SEQ ID NO: 127) вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 121; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 128; SEQ ID NO: 129 и SEQ ID NO: 130) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 123.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения химерное антитело против CGRP является Ab13, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 122 и SEQ ID NO: 124, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В дополнительном, особенно предпочтительном, варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab13, Fab-фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 121 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 123. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 121 и/или SEQ ID NO: 123 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab13 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab13, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab14
В одном варианте воплощения настоящее изобретение включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
- 30 031065
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность легкой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPS VFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTY SLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 132).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность вариабельной области тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGS DGKTYYATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 133).
Настоящее изобретение также включает гуманизированные антитела, обладающие специфичностью связывания по отношению к CGRP, последовательность тяжелой цепи которых содержит последовательность, представленную ниже
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGSDGKTY YATWAKGRFTISRDNSKTTVYLQMNSLRAEDTAVYFCTRGDIWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSL SSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDARVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLF PPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYR WSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQ GNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 134).
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие одну или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 136 и SEQ ID NO: 137, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 131 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 132, и/или одной или более из полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 138; SEQ ID NO: 139 и SEQ ID NO: 140, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 133 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 134, или комбинации указанных полипептидных последовательностей. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела по изобретению или их фрагменты включают или, в качестве альтернативы, состоят из комбинаций одного или более из CDR, последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи и последовательностей тяжелой и легкой цепи, приведенных выше, включая все из них.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антитела, обладающего специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 131 или SEQ ID NO: 132. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полипептидной последовательности SEQ ID NO: 133 или SEQ ID NO: 134.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 136 и SEQ ID NO: 137, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 131 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 132.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полипептидных последовательностей SEQ ID NO: 138; SEQ ID NO: 139 и SEQ ID NO: 140, которые соответствуют областям, определяющим комплементарность (CDR, или гипервариабельным областям) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 133 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 134.
Настоящее изобретение также рассматривает фрагменты антител, включающие один или более из фрагментов антител, описанных здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих фрагментов антител: вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 131; вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 133; областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 135; SEQ ID NO: 136 и SEQ ID NO: 137) вариабельной
- 31 031065 области легкой цепи SEQ ID NO: 131; и областей, определяющих комплементарность (SEQ ID NO: 138; SEQ ID NO: 139 и SEQ ID NO: 140) вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 133.
В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения гуманизированное антитело против CGRP является Ab14, включающее или, в качестве альтернативы, состоящее из SEQ ID NO: 132 и SEQ ID NO: 134, и обладающее по меньшей мере одной из биологических активностей, изложенных здесь.
В дополнительном, особенно предпочтительном варианте, воплощения настоящего изобретения фрагменты антител включают или, в качестве альтернативы, состоят из Fab-фрагментов (антигенсвязывающих фрагментов), обладающих специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab14, Fab-фрагмент включает последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 131 и последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 133. Указанный вариант воплощения настоящего изобретения дополнительно рассматривает добавления, делеции и варианты SEQ ID NO: 131 и/или SEQ ID NO: 133 в указанном Fab, при условии сохранения специфичности связывания с CGRP.
В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fab-фрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab14 (например, папаином). В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab14, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
В еще одном варианте воплощения фрагменты антител могут находиться в одной или более из следующих неограничивающих форм: Fab, Fab', F(ab')2, Fv и формы одноцепочечных Fv-антител. В предпочтительном варианте воплощения антитела против CGRP, описанные здесь, дополнительно включают последовательность константной каппа-области легкой цепи, включающую последовательность, представленную ниже
VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESV TEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 283).
В еще одном предпочтительном варианте воплощения антитела против CGRP, описанные здесь, дополнительно включают полипептидную последовательность константной гамма-1-области тяжелой цепи, включающую последовательность, представленную ниже:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA
VLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAP
ELLGGPSVFLFPPKPKJDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKP REEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVY TLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 284).
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение рассматривает выделенное антитело против CGRP, включающее последовательность Vfj-полипептида, выбранную из: SEQ ID NO: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 или 133, или ее вариант, и дополнительно включающее последовательность VL-полипептида, выбранную из: SEQ ID NO: 1,11, 21,31, 41, 51, 61, 71,81, 91, 101, 111, 121 или 131, или ее вариант, где один или более из каркасных остатков (FR-остатков) в указанном VH- ИЛИ VLполипептиде замещен остатком другой аминокислоты, что приводит к получению антитела против CGRP, специфически связывающего CGRP. Настоящее изобретение рассматривает гуманизированные и химерные формы указанных антител. Химерные антитела могут включать Fc, полученный из константных областей IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6, IgG7, IgG8, IgG9, IgG10, IgG11, IgG12, IgG13, IgG14, IgG15, IgG16, IgG17, IgG18 или IgG19.
В одном варианте воплощения настоящего изобретения, антитела или VH- или VL-полипептиды происходят или выбраны из одной или более популяций В-клеток кролика до начала процесса гуманизации, упомянутого здесь.
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP и их фрагменты не обладают специфичностью связывания с CGRP-R. В дополнительном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP и их фрагменты ингибируют связывание CGRP с CGRP-R. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP и их фрагменты ингибируют связывание CGRP с CGRP-R и/или его дополнительными белками и/или мультимерами и/или оказывают антагонистическое действие на их биологические эффекты.
Как указано здесь, антитела и их фрагменты можно модифицировать после трансляции путем добавления эффекторных групп, например, химических линкеров, обнаруживаемых молекул, например, флуоресцентных красителей, ферментов, субстратов, биолюминесцентных материалов, радиоактивных материалов и хемилюминесцентных групп, или функциональных групп, например, стрептавидина, авидина, биотина, цитотоксина, цитотоксического агента и радиоактивных материалов.
- 32 031065
Антитела или их фрагменты также можно химически модифицировать с целью получения дополнительных преимуществ, например, повышенной растворимости, стабильности и времени циркуляции (период полужизни in vivo) полипептида, или пониженной иммуногенности (см. патент США № 4179337). Химические группы для модификации можно выбрать из водорастворимых полимеров, например, полиэтиленгликоля, сополимеров этиленгликоля/пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлозы, декстрана, поливинилового спирта и т.п. Антитела и их фрагменты можно модифицировать по случайным положениям в пределах молекулы или в заданных положениях в пределах молекулы; они могут включать одну, две, три или более присоединенных химических групп.
Указанный полимер может обладать любой молекулярной массой и быть разветвленным или неразветвленным. Для полиэтиленгликоля предпочтительная молекулярная масса составляет от приблизительно 1 кДа до приблизительно 100 кДа (термин приблизительно указывает, что в препаратах полиэтиленгликоля некоторые молекулы могут весить больше, некоторые - меньше установленной молекулярной массы) для простоты обращения и производства. Можно использовать другие размеры в зависимости от желательного терапевтического профиля (например, желательной продолжительности замедленного высвобождения, действия на биологическую активность, если таковое имеет место, простоты обращения, степени или отсутствия антигенности и других известных эффектов полиэтиленгликоля на терапевтический белок или его аналог). Например, полиэтиленгликоль может обладать средней молекулярной массой, приблизительно равной 200, 500, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 6000, 6500, 7000, 7500, 8000, 8500, 9000, 9500, 10000, 10500, 11000, 11500, 12000, 12500, 13000, 13500, 14000, 14500, 15000, 15500, 16000, 16500, 17000, 17500, 18000, 18500, 19000, 19500, 20000, 25000, 30000, 35000, 40000, 50000, 55000, 60000, 65000, 70000, 75000, 80000, 85000, 90000, 95000 или 100000 кДа. Разветвленные полиэтиленгликоли описаны, например, в патенте США № 5643575; Morpurgo et al., Appl. Biochem. Biotechnol. 56:59-72 (1996); Vorobjev et al., Nucleosides Nucleotides 18:2745-2750 (1999); и Caliceti et al., Bioconjug. Chem. 10:638-646 (1999), раскрытие каждого из которых включены в настоящий документ посредством ссылки.
Существует несколько способов присоединения, доступных для специалистов в данной области техники, см., например, ЕР 0401384, включенный в настоящий документ посредством ссылки (присоединение ПЭГ к Г-КСФ), см. также Malik et al., Exp. Hematol. 20:1028-1035 (1992) (сообщение о пегилировании ГМ-КСФ с помощью трезилхлорида). Например, полиэтиленгликоль можно ковалентно связать через аминокислотные остатки с помощью реакционноспособной группы, например, свободной аминогруппы или карбоксильной группы. Реакционноспособные группы являются группами, с которыми можно связать молекулу активированного полиэтиленгликоля. Аминокислотные остатки, содержащие свободную аминогруппу, могут включать остатки лизина и остатки N-концевой аминокислоты; остатки, содержащие свободную карбоксильную группу, могут включать остатки аспарагиновой кислоты, остатки глутаминовой кислоты и остаток С-концевой аминокислоты. Кроме того, в качестве реакционноспособной группы для присоединения молекул полиэтиленгликоля можно использовать сульфгидрильные группы. Для терапевтических целей является предпочтительным присоединение к аминогруппе, например, к группе N-концевой аминокислоты или лизина.
Как указано выше, полиэтиленгликоль можно присоединить к белкам посредством связи с любым из ряда аминокислотных остатков. Например, полиэтиленгликоль можно связать с полипептидами посредством ковалентных связей с остатками лизина, гистидина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты или цистеина. Одну или более реакционноспособных химических групп можно использовать для присоединения полиэтиленгликоля к специфическим аминокислотным остаткам (например, лизина, гистидина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты или цистеина) или к аминокислотному остатку более чем одного типа (например, лизина, гистидина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты, цистеина и их комбинациям).
В качестве альтернативы, антитела или их фрагменты могут обладать повышенным временем полужизни in vivo за счет объединения с альбумином (включая, но не ограничиваясь, рекомбинантным человеческим сывороточным альбумином или его фрагментами или вариантами (см., например, патент США № 5876969, выданный 2 марта 1999 г., патент ЕР 0413622 и патент США № 5766883, выданный 16 июня 1998 г., которые полностью включены в настоящий документ посредством ссылки)) или другими циркулирующими белками крови, например, трансферрином или ферритином. В предпочтительном варианте воплощения полипептиды и/или антитела по настоящему изобретению (включая их фрагменты или варианты) объединяют со зрелой формой человеческого сывороточного альбумина (т.е. аминокислотами 1-585 человеческого сывороточного альбумина, как показано на фиг. 1 и 2 патента ЕР 0 322 094), который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. Полинуклеотиды, кодирующие гибридные белки по изобретению, также входят в рамки изобретения.
Что касается обнаруживаемых групп, другие типичные ферменты включают пероксидазу хрена, ацетилхолинэстеразу, щелочную фосфатазу, бета-галактозидазу и люциферазу, но не ограничиваются ими. Дополнительные типичные флуоресцентные материалы включают родамин, флуоресцеин, флуоресцеинизотиоцианат, умбеллиферон, дихлортриазиниламин, фикоэритрин и дансилхлорид, но не ограничиваются ими.
- 33 031065
Дополнительные типичные хемилюминесцентные группы включают люминол, но не ограничиваются им. Дополнительные типичные биолюминесцентные материалы включают люциферин и экворин, но не ограничиваются ими. Дополнительные типичные радиоактивные материалы включают иод-125 (125I), углерод-14 (14С), серу-35 (35S), тритий (3Н) и фосфор-32 (32Р), но не ограничиваются ими.
Что касается функциональных групп, типичные цитотоксические агенты включают метотрексат, аминоптерин, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацил, декарбазин; алкилирующие агенты, например, мехлорэтамин, тиотепа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (BSNU), митомицин С, ломустин (CCNU), 1-метилнитрозомочевину, циклофосфамид, хлорметин, бусульфан, дибромманнит, стрептозотоцин, митомицин С, цис-дихлордиаминплатину (II) (DDP), цисплатин и карбоплатин (параплатин), антрациклины, включая даунорубицин (ранее дауномицин), доксорубицин (адриамицин), деторубицин, карминомицин, идарубицин, эпирубицин, митоксантрон и бисантрен; антибиотики, например, дактиномицин (ранее актиномицин D), блеомицин, калихемицин, митрамицин и антрамицин (АМС); и антимитотические агенты, например, алкалоиды барвинка, винкристин и винбластин, но не ограничиваются ими. Другие цитотоксические агенты включают паклитаксел (таксол), рицин, экзотоксин Pseudomonas, гемцитабин, цитохалазин В, грамицидин D, бромид этидия, эметин, этопозид, тенопозид, колхицин, дигидроксиантрациндион, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол, пуромицин, прокарбазин, гидроксимочевину, аспарагиназу, кортикостероиды, митотан (O,P'-(DDD)), интерфероны и смеси указанных цитотоксических агентов.
Дополнительные цитотоксические агенты включают такие химиотерапевтические агенты как карбоплатин, цисплатин, паклитаксел, гемцитабин, калихеамицин, доксорубицин, 5-фторурацил, митомицин С, актиномицин D, циклофосфамид, винкристин и блеомицин, но не ограничиваются ими. Токсичные ферменты растений и бактерий, например, рицин, дифтерийный токсин и токсин Pseudomonas, можно конъюгировать с гуманизированными или химерными антителами или их связывающими фрагментами с целью получения реагентов для уничтожения клеток определенного типа (Youle, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5483 (1980); Gilliland, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:4539 (1980); Krolick, et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 77:5419 (1980)).
Другие цитотоксические агенты включают цитотоксические рибонуклеазы, как описано Goldenberg в патенте США № 6653104. Варианты воплощения настоящего изобретения также относятся к радиоиммуноконъюгатам, где радионуклид, излучающий альфа- или бета-частицы, стабильно присоединен к антителу или его связывающим фрагментам с использованием или без использования комплексообразователя. Такие радионуклиды включают бета-излучающие агенты, например, фосфор-32 (32P), скандий-47 (47Sc), медь-67 (67Cu), галлий-67 (67Ga), иттрий-88 (88Y), иттрий-90 (90Y), иод-125 (125I), иод-131 (131I), самарий-153 ( Sm), лютеций-177 ( Lu), рений-186 ( Re) или рений-188 ( Re), и альфа-излучающие 711 717 717 713 агенты, например, астат-211 ( At), свинец-212 ( Pb), висмут-212 ( Bi) или -213 ( Bi) или актиний225 (225Ас).
В данной области техники известны способы конъюгирования антитела или его связывающего фрагмента с обнаруживаемой группой и т.п., например, способы, описанные в Hunter et al, Nature 144:945 (1962); David et al, Biochemistry 13:1014 (1974); Pain et al, J. Immunol. Meth. 40:219 (1981); и Nygren, J., Histochem. and Cytochem. 30:407 (1982).
Варианты воплощения, описанные здесь, дополнительно включают варианты и эквиваленты, практически гомологичные антителам, фрагментам антител, диателам, SMIP, камелизированным антителам, нанотелам, IgNAR, полипептидам, вариабельным областям и CDR, описанным здесь. Указанные варианты могут содержать, например, мутации консервативной замены (т. е. замены одной или более аминокислот на аналогичные аминокислоты). Например, консервативная замена относится к замене аминокислоты на другую аминокислоту, принадлежащую к тому же общему классу, например, одной кислой аминокислоты на другую кислую аминокислоту, одной основной аминокислоты на другую основную аминокислоту или одной нейтральной аминокислоты на другую нейтральную аминокислоту. Консервативные аминокислотные замены хорошо известны в данной области техники.
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение рассматривает полипептидные последовательности, обладающие по меньшей мере 90% или большей гомологией последовательности с любой одной или более из полипептидных последовательностей фрагментов антител, вариабельных областей и CDR, представленных здесь. Более предпочтительно настоящее изобретение рассматривает полипептидные последовательности, обладающие по меньшей мере 95% или большей гомологией последовательности, еще более предпочтительно по меньшей мере 98% или большей гомологией последовательности, а еще более предпочтительно по меньшей мере 99% или большей гомологией последовательности с любой одной или более из полипептидных последовательностей фрагментов антител, вариабельных областей и CDR, представленных здесь. Способы определения гомологии между нуклеотидными и аминокислотными последовательностями хорошо известны специалистам в данной области техники.
В другом варианте воплощения настоящее изобретение дополнительно рассматривает вышеописанные полипептидные гомологи фрагментов антител, вариабельных областей и CDR, представленные здесь и дополнительно обладающие активностью против CGRP. Неограничивающие примеры активности против CGRP приведены ниже.
- 34 031065
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение дополнительно рассматривает получение и применение антиидиотипических антител, связывающих любую из вышеуказанных последовательностей. В типичном варианте воплощения такое антиидиотипическое антитело можно ввести субъекту, получавшему антитело против CGRP, для регуляции, снижения или нейтрализации действия антитела против CGRP. Такие антиидиотипические антитела также можно применять для лечения аутоиммунного заболевания, характеризующегося наличием антител против CGRP. Другим примером применения таких антиидиотипических антител является обнаружение антител против CGRP по настоящему изобретению, например, для мониторинга уровней антител против CGRP, присутствующих в крови или других биологических жидкостях субъекта.
Настоящее изобретение также рассматривает антитела против CGRP, включающие любую из полипептидных или полинуклеотидных последовательностей, описанных здесь, замещенную на любую из других полинуклеотидных последовательностей, описанных здесь. Например, но не ограничиваясь этим, настоящее изобретение рассматривает антитела, включающие комбинацию любой из последовательностей вариабельной области легкой цепи и вариабельной области тяжелой цепи, описанных здесь, и дополнительно рассматривает антитела, полученные в результате замещения любой из последовательностей CDR, описанных здесь, любой другой из последовательностей CDR, описанных здесь.
Дополнительные типичные варианты воплощения настоящего изобретения
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение рассматривает одно или более антител против CGRP человека или фрагменты указанных антител, специфически связывающиеся с тем(и) же перекрывающимся(ися) линейным(и) или конформационным(и) эпитопом(ами) и/или конкурирующие за связывание с тем(и) же перекрывающимся(ися) линейным(и) или конформационным(и) эпитопом(ами) интактного полипептида CGRP человека или его фрагмента, что и антитело против CGRP человека, выбранное из Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13 или Ab14. В предпочтительном варианте воплощения антитело против CGRP человека или его фрагмент специфически связывается с тем(и) же перекрывающимся(ися) линейным(и) или конформационным(и) эпитопом(ами) и/или конкурирует за связывание с тем(и) же перекрывающимся(ися) линейным(и) или конформационным(и) эпитопом(ами) интактного полипептида CGRP человека или его фрагмента, что и Ab3, Ab6, Ab13 или Ab14.
Предпочтительный вариант воплощения настоящего изобретения направлен на химерные или гуманизированные антитела и их фрагменты (в том числе Fab-фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP и ингибирующие биологическую активность, опосредованную связыванием CGRP с рецептором CGRP. В особенно предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения химерные или гуманизированные антитела против CGRP выбраны из Ab3, Ab6, Ab13 или Ab14.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения рассматривается способ снижения, лечения или профилактики заболеваний или нарушений, ассоциированных с CGRP, путем воздействия на указанную биологическую активность, опосредованную CGRP, тем самым избегая биологической активности, опосредованной связыванием CGRP с CGRP-R. В одном варианте воплощения заболевание или расстройство, ассоциированное с CGRP, является мигренью или другим расстройством, при котором CGRP вызывает боль, головную боль, рак, гиперактивность мочевого пузыря или потерю массы тела. Здесь представлен дополнительный нелимитирующий список заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP.
Еще один предпочтительный вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает применение последовательностей Fab-полипептидов для лечения мигреней и головных болей у пациента. Неограничивающие типы мигреней и головных болей, которые можно лечить с помощью последовательностей Fab-полипептидов, приведены в настоящем раскрытии.
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитело против CGRP человека является антителом, специфически связывающимся с теми же перекрывающимися линейными или конформационными эпитопами интактного полипептида CGRP или его фрагмента, который(е) специфически связывается(ются) с Ab3, Ab6, Ab13 или Ab14, согласно картированию эпитопов с использованием перекрывающихся линейных пептидных фрагментов, охватывающих всю длину нативного полипептида CGRP человека.
Настоящее изобретение также направлено на антитело против CGRP, связывающееся с тем же эпитопом CGRP и/или конкурирующее за связывание с CGRP с антителом против CGRP, что и антитело или фрагмент антитела, раскрытые здесь, включая антитело против CGRP, выбранное из Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13 или Ab14, но не ограничиваясь им.
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение также направлено на выделенное антитело или фрагмент антитела против CGRP, включающее один или более из CDR, содержащихся в последовательностях ^-полипептида, выбранных из 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 или 133, или их варианта, и/или одного или более из CDR, содержащихся в последовательностях Vb-полипептида, выбранных из :1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121, или 131, или их варианта.
В одном варианте воплощения настоящего изобретения антитело против CGRP человека, обсуждаемое в двух предыдущих абзацах, включает по меньшей мере 2 области, определяющие комплемен
- 35 031065 тарность (CDR) в каждой вариабельной области легкой и тяжелой цепи, идентичные областям, содержащимся в антителе против CGRP человека, выбранном из Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13 или Ab14.
В предпочтительном варианте воплощения антитело против CGRP человека, обсуждаемое выше, включает по меньшей мере 2 области, определяющие комплементарность (CDR) в каждой вариабельной области легкой и тяжелой цепи, идентичные областям, содержащимся в Ab3 или Ab6. В еще одном варианте воплощения все CDR антитела против CGRP человека, обсуждаемого выше, идентичны CDR, содержащимся в антителе против CGRP человека, выбранном из Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab12, Ab13 или Ab14. В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения все CDR антитела против CGRP человека, обсуждаемого выше, идентичны CDR, содержащимся в антителе против CGRP человека, выбранном из Ab3 или Ab6.
Настоящее изобретение также предусматривает, что одно или более из антител против CGRP человека, обсуждаемых выше, агликозилированы; что антитела содержат Fc-область, модифицированную с целью изменения эффекторной функции, времени полужизни, протеолиза и/или гликозилирования; что антитела являются антителами человека, гуманизированными, одноцепочечными или химерными; и являются гуманизированным антителом, происходящим от антитела кролика (исходного антитела) против CGRP человека.
Кроме того, изобретение рассматривает одно или более антител против CGRP человека, где каркасные области (FR) в вариабельных областях легких и тяжелых цепей указанного антитела, соответственно, являются FR человека, немодифицированными или модифицированными путем замены одного или более остатков FR человека в вариабельных областях легких или тяжелых цепей соответствующими остатками FR исходного антитела кролика, и где указанные FR человека происходят от последовательностей вариабельных областей легких и тяжелых цепей антитела человека, выбранных из библиотеки последовательностей антител эмбрионального типа человека на основании высокого уровня их гомологии с соответствующими вариабельными областями легких или тяжелых цепей кролика по сравнению с другими последовательностями антител эмбрионального типа человека, содержащимися в библиотеке.
В одном варианте воплощения настоящего изобретения антитело или фрагмент против CGRP человека специфически связывается с CGRP-экспрессирующими клетками человека и/или циркулирующими растворимыми молекулами CGRP in vivo, включая CGRP, экспрессированный на клетках или клетками человека у пациента при заболевании, ассоциированном с клетками, экспрессирующими CGRP.
В еще одном варианте воплощения указанное заболевание выбрано из мигреней (с аурой или без нее), потери массы тела, рака или опухолей, ангиогенеза, связанного с раковым или опухолевым ростом, ангиогенеза, связанного с выживанием рака или опухоли, гемиплегических мигреней, кластерных головных болей, мигренозной невралгии, хронических головных болей, головных болей напряжения, общих головных болей, приливов, хронической пароксизмальной гемикрании, вторичных головных болей вследствие основной структурной проблемы в области головы или шеи, черепной невралгии, синусных головных болей (например, связанных с синуситом), головных болей или мигреней, вызванных аллергией, боли, воспалительной боли, боли в постоперационном разрезе, комплексного регионального болевого синдрома, раковой боли, боли при первичном или метастатическом раке костей, боли при переломе, хронической боли, боли при остеопорозном переломе, боли в результате ожога, остеопороза, подагрической боли в суставах, боли в животе, боли, связанной с кризисом серповидных клеток и другой ноцицептической боли, а также гепатоцеллюлярной карциномы, рака молочной железы, цирроза печени, нейрогенной боли, невропатической боли, ноцицептической боли, невралгии тройничного нерва, постгерпетической невралгии, фантомной боли конечностей, фибромиалгии, менструальной боли, овариалгии, рефлекторной симпатической дистрофии, нейрогенной боли, боли при остеоартрите или ревматоидном артрите, боли в пояснице, диабетической невропатии, пояснично-крестцовом радикулите, или боли или висцеральной боли, связанной с: желудочно-пищеводным рефлюксом, диспепсией, синдромом раздраженного кишечника, раздраженной толстой кишкой, спазмами толстой кишки, слизистым колитом, воспалительным заболеванием кишечника, болезнью Крона, илеитом, язвенным колитом, почечной коликой, дисменореей, циститом, менструальным периодом, родами, менопаузой, простатитом, панкреатитом, почечной коликой, дисменореей, циститом, в том числе интерстициальным циститом (IC), операцией, связанной с кишечной непроходимостью, дивертикулитом, перитонитом, перикардитом, гепатитом, аппендицитом, колитом, холециститом, эндометриозом, хроническим и/или острым панкреатитом, инфарктом миокарда, боли в почках, плевральной боли, простатите, боли в области таза, травмы органа, хронической ноцицептивной боли, хронической невропатической боли, хронической воспалительной боли, фибромиалгии, приступа неконтролируемой боли и постоянной боли.
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения указанное заболевание является раковой болью, возникающей в результате злокачественного новообразования или рака, предпочтительно выбранного из одного или более из: аденокарциномы железистой ткани, бластомы эмбриональной ткани органов, карциномы эпителиальной ткани, лейкоза в тканях, образующих клетки крови, лимфомы лимфатической ткани, миеломы костного мозга, саркомы в соединительной или опорной ткани, рака надпочечников, лимфомы, связанной со СПИДом, анемии, рака мочевого пузыря, рака костей, рака головного
- 36 031065 мозга, рака молочной железы, карциноидных опухолей, рака шейки матки, химиотерапии, рака толстой кишки, цитопении, рака эндометрия, рака пищевода, рака желудка, рака головы, рака шеи, гепатобилиарного рака, рака почки, лейкоза, рака печени, рака легких, лимфомы, болезни Ходжкина, неходжкинской лимфомы, опухолей нервной системы, рака ротовой полости, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака прямой кишки, рака кожи, рака желудка, рака яичка, рака щитовидной железы, рака уретры, рака костей, сарком соединительной ткани, рака костной ткани, рака кроветворных клеток, рака костного мозга, множественной миеломы, лейкоза, первичного или вторичного рака костей, опухолей, метастазирующих в кость, опухолей, прорастающих в нерв и полые органы, опухолей, расположенных возле нервных структур. Кроме того, в предпочтительном случае раковая боль включает висцеральную боль, предпочтительно висцеральную боль, возникающую в результате рака поджелудочной железы и/или метастазов в брюшную полость. Кроме того, в предпочтительном случае раковая боль включает соматическую боль, предпочтительно соматическую боль, вызванную одним или более из следующего: рака костей, метастазов в кости, послеоперационной раковой боли, сарком соединительной ткани, рака костной ткани, рака кроветворных клеток костного мозга, множественной миеломы, лейкоза, первичного или вторичного рака костей.
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает антитела или фрагменты против CGRP человека, непосредственно или косвенно присоединенные к обнаруживаемой метке или терапевтическому агенту.
Настоящее изобретение также рассматривает одну или более из нуклеотидных последовательностей, приводящих к экспрессии антитела или фрагмента антитела против CGRP человека, как представлено выше, в том числе последовательностей, содержащих или, в качестве альтернативы, состоящих из предпочтительных кодонов дрожжей или человека. Настоящее изобретение также рассматривает векторы (в том числе плазмидные или рекомбинантные вирусные векторы), включающие указанную(ые) нуклеотидную(ые) последовательность(и). Настоящее изобретение также рассматривает клетки-хозяева или рекомбинантные клетки-хозяева, экспрессирующие по меньшей мере одно из антител, представленных выше, в том числе клетки млекопитающих, дрожжей, бактерий и насекомых. В предпочтительном варианте воплощения клетка-хозяин является дрожжевой клеткой. В другом предпочтительном варианте воплощения указанная дрожжевая клетка является диплоидной дрожжевой клеткой. В более предпочтительном варианте воплощения указанная дрожжевая клетка является клеткой дрожжей Pichia.
Настоящее изобретение также рассматривает способ лечения, включающий введение пациенту с заболеванием или состоянием, связанным с клетками, экспрессирующими CGRP, терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного антитела или фрагмента против CGRP человека, описанного здесь. Настоящее изобретение также предусматривает, что указанный способ лечения может включать введение двух или более антител против CGRP или их фрагментов, раскрытых здесь. Если пациенту вводят более одного антитела, указанные множественные антитела можно вводить одновременно или согласованно, или со сдвигом по отношению друг к другу. Заболевания, которые можно лечить, представлены в неограничивающем списке, изложенном выше и в других разделах настоящего документа. В предпочтительном варианте воплощения указанное заболевание выбрано из мигрени, головной боли, потери массы тела, боли, раковой боли или невропатической боли. В еще одном варианте воплощения лечение дополнительно включает введение другого терапевтического агента или схемы лечения, выбранной из химиотерапии, лучевой терапии, введения цитокинов или генной терапии.
В неограничивающем варианте воплощения настоящего изобретения указанный другой терапевтический агент или схема лечения включает таксол (паклитаксел) или его производные, соединения платины, например, карбоплатин или цисплатин, антрациклины, например, доксорубицин, алкилирующие агенты, например, циклофосфамид, антиметаболиты, например, 5-фторурацил или этопозид.
Настоящее изобретение также рассматривает способ визуализации in vivo, обнаруживающий присутствие клеток, экспрессирующих CGRP, включающий введение диагностически эффективного количества по меньшей мере одного антитела против CGRP человека. В одном варианте воплощения указанное введение дополнительно включает введение радионуклида или флуорофора, что облегчает обнаружение антитела в очагах заболевания, экспрессирующих CGRP. В другом варианте воплощения результаты указанного способа визуализации in vivo используют для облегчения составления соответствующей схемы лечения, в том числе схем лечения, включающих лучевую терапию, химиотерапию или их комбинацию.
Антагонистическую по отношению к CGRP активность антител против CGRP по настоящему изобретению и их фрагментов, обладающих специфичностью связывания с CGRP, можно также описать по их силе связывания или их сродству к CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP по настоящему изобретению и их фрагменты, обладающие специфичностью связывания с CGRP, связываются с CGRP с константой диссоциации (KD), меньшей или равной 5х10-7 М, 107 М, 5х10-8 М, 10-8 М, 5х10-9 М, 10-9 М, 5х10-10 М, 10-10 М, 5х10-11 М, 10-11 М, 5х10-12 М, 10-12 М, 5х10-13 М или 10-13 М. Предпочтительно антитела против CGRP и их фрагменты связывают CGRP с константой диссоциации, меньшей или равной 10-11 М, 5х10-12 М или 10-12 М. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP по настоящему изобретению и их фрагменты, обладающие специфичностью связывания с CGRP, связываются с линейным или конформационным эпитопом
- 37 031065
CGRP.
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антагонистическая по отношению к CGRP активность антител против CGRP по настоящему изобретению и их фрагментов, обладающих специфичностью связывания с CGRP, характеризуется связыванием с CGRP со скоростью диссоциации, меньшей или равной 10-4 с-1, 5х10-5 с-1, 10-5 с-1, 5х10-6 с-1, 10-6 с-1, 5х10-7 с-1 или 10-7 с-1.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения антагонистическая по отношению к CGRP активность антител против CGRP по настоящему изобретению и их фрагментов, обладающих специфичностью связывания с CGRP, характеризуется проявлением активности против CGRP путем предотвращения, облегчения или снижения симптомов или, в качестве альтернативы, лечения заболеваний или расстройств, ассоциированных с CGRP. Здесь представлены неограничивающие примеры заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP.
Полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител против CGRP
Антитело Ab1
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 1
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGG CATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCA CCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATG ATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GT (SEQ ID NO: 141).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGG CATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCA CCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATG ATTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAAT CTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG TACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACA GAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAA AGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGA GCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 142).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по настоящему изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGA CACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCC GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAAC ACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGAC CACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCT GTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 143).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 4
- 38 031065
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGA
CACTCACCTGCACAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCC GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGATAAC ACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGAC CACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCT GTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCC ACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTC GTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTC CTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCAC CCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGA GAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTG AACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCA TGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGAC CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCG TCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAA GCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGA ACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCA GCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAG AGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGA CGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGG GGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGA AGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 144).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 145; SEQ ID NO: 146 и SEQ ID NO: 147, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 1 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 2.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 148; SEQ ID NO: 149 и SEQ ID NO: 150, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 4.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 141, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 1; полинуклеотида SEQ ID NO: 142, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2; полинуклеотида SEQ ID NO: 143, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3; полинуклеотида SEQ ID NO: 144, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 4; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 145; SEQ ID NO: 146 и SEQ ID NO: 147) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 1 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 2; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 148; SEQ ID NO: 149 и SEQ ID NO: 150) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 3 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 4.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab1, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab1, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 142, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 2, и полинуклеотида SEQ ID NO: 144, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 4.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab1 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте
- 39 031065 воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab1, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab1 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. Антитело Ab2
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGA TTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG T (SEQ ID NO: 151).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 12
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGA TTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG TACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT GGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTA CAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGA GCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGC TCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 152).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 13 GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC
TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGAT AACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 153).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 14
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGAT AACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCG CCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG GGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACG GTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTA CAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTG GGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGA CAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAG
- 40 031065
CACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACA CCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCT CACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCA GGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTG GGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACT CCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGC AGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 154).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 155; SEQ ID NO: 156 и SEQ ID NO: 157, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 12.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 158; SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 160, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 13 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 14.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 151, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11; полинуклеотида SEQ ID NO: 152, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 12; полинуклеотида SEQ ID NO: 153, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 13; полинуклеотида SEQ ID NO: 154, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 14; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 155; SEQ ID NO: 156 и SEQ ID NO: 157) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 11 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 12; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 158; SEQ ID NO: 159 и SEQ ID NO: 160) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 13 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 14.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab2, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab2, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 152, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 12, и полинуклеотида SEQ ID NO: 154, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 14.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab2 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab2, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab2 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab3
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной
- 41 031065 области легкой цепи SEQ ID NO: 21
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGA TTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG T(SEQ ID NO: 161).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTAGGCAGTTATGA TTGTAGTAGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG TACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT GGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTA CAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGA GCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGC TCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 162).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 23 GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC
TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGAT AACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 163).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 24:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGACTCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATCAATGAT AACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCG CCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG GGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACG GTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTA CAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTG GGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGA CGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAG CACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACA CCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCT CACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCA GGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTG GGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACT CCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGC AGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 164).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 165; SEQ ID NO: 166 и SEQ ID NO: 167, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи
- 42 031065
SEQ ID NO: 21 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 22.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 168; SEQ ID NO: 169 и SEQ ID NO: 170, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 23 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 24.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 161, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 21; полинуклеотида SEQ ID NO: 162, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22; полинуклеотида SEQ ID NO: 163, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 23; полинуклеотида SEQ ID NO: 164, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 24; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 165; SEQ ID NO: 166 и SEQ ID NO: 167) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 21 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 22; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 168; SEQ ID NO: 169 и SEQ ID NO: 170) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 23 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 24.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab3, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab3, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 162, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 22, и полинуклеотида SEQ ID NO: 164, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 24.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab3 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab3, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab3 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab4
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 31
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAG
TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGT
ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTG
GCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTC ACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTAT GATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAA CGT (SEQ ID NO: 171).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 32
- 43 031065
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAG
TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAACAACTGATCTATGATGCATCCACTCTG GCGTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTC ACCATCAGCGGCGTGCAGTGTAACGATGCTGCCGCTTACTACTGTCTGGGCAGTTAT GATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAA CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAA TCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAA GTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCAC AGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCA AAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTG AGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 172).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 33 CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGA
CACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCC GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCC ACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGAC CACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCT GTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 173).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 34
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGA CACTCACCTGTTCCGTCTCTGGCATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCC GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTATTAATGGTGCC ACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGAC CACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCT GTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCC ACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTC GTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTC CTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCAC CCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGA GAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTG AACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCA TGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGAC CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCG TCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAA GCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGA ACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCA GCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAG AGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGA CGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGG GGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGA AGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 174).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 176 и SEQ ID NO: 177, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 31 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 32.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 178; SEQ ID NO: 179 и SEQ ID NO: 180, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 33 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 34.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы,
- 44 031065 состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 171, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 31; полинуклеотида SEQ ID NO: 172, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 32; полинуклеотида SEQ ID NO: 173, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 33; полинуклеотида SEQ ID NO: 174, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 34; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 175; SEQ ID NO: 176 и SEQ ID NO: 177) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 31 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 32; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 178; SEQ ID NO: 179 и SEQ ID NO: 180) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 33 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 34.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab4, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab4, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 172, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 32 и полинуклеотида SEQ ID NO: 174, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 34.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab4 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab4, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab4 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab5
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 41
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT
CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTA
TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGG CATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCA CCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATG ATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAAC GT (SEQ ID NO: 181).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 42
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT
CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGG CATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCA CCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATG ATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAAC GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAAT CTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG TACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACA GAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAA AGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGA GCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 182).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 43:
- 45 031065
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC
TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGT GCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 183).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 44:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGT GCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCG CCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG GGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACG GTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTA CAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTG GGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGA CAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAG CACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACA CCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCT CACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCA GGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTG GGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACT CCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGC AGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 184).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 185; SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 187, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 41 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 42.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 188; SEQ ID NO: 189 и SEQ ID NO: 190, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 43 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 44.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 181, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 41; полинуклеотида SEQ ID NO: 182, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 42; полинуклеотида SEQ ID NO: 183, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 43; полинуклеотида SEQ ID NO: 184, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 44; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 185; SEQ ID NO: 186 и SEQ ID NO: 187) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 41 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 42; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 188; SEQ ID NO: 189 и SEQ ID NO: 190) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 43 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 44.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобрете
- 46 031065 нию включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab5, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab5, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 182, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 42, и полинуклеотида SEQ ID NO: 184, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 44.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab5 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab5, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab5 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab6
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 51:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT
CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTA
TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGG CATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCA CCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATG ATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAAC GT (SEQ ID NO: 191).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 52:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT
CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTA
TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATGATGCATCCACTCTGG CATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCA CCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATG ATTGTACTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAAC GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAAT CTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG TACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACA GAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAA AGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGA GCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 192).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 53: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC
TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGG
TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGT GCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 193).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 54:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC
TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGG
- 47 031065
TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTATTAATGGT GCCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCG CCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG GGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACG GTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTA CAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTG GGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGA CGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAG CACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACA CCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCT CACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCA GGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTG GGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACT CCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGC AGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 194).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 195; SEQ ID NO: 196 и SEQ ID NO: 197, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 51 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 52.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 198; SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 200, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 53 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 54.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 191, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 51; полинуклеотида SEQ ID NO: 192, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 52; полинуклеотида SEQ ID NO: 193, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 53; полинуклеотида SEQ ID NO: 194, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 54; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 195; SEQ ID NO: 196 и SEQ ID NO: 197) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 51 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 52; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 198; SEQ ID NO: 199 и SEQ ID NO: 200) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 53 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 54.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab6, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab6, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 192, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 52, и полинуклеотида SEQ ID NO: 194, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 54.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab6 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab6, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab6 в клетках млекопитающих, например,
- 48 031065 клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. Антитело Ab7
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 61:
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAG
TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGG CATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCA CCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATG ACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GT (SEQ ID NO: 201).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 62:
CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAG TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTATAATTACAACTACCTTGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGG CATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCA CCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATG ACTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAAT CTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG TACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACA
GAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAA AGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGA GCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 202).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63: CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCC
TGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGG TCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGT CGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTC GACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATT TCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 203).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 64:
CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCC TGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGG TCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGTATTAATGGT CGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAACCTCGTC GACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATT TCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGCGCCT CCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGG GCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTG TCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAG TCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGC ACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAA GAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCAC CTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCC TCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAA GACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAA GACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCA CCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAAC
- 49 031065
AAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCG
AGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGG TCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGG AGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCC GACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCA GGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCA GAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 204).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 205; SEQ ID NO: 206 и SEQ ID NO: 207, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 61 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 62.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 208; SEQ ID NO: 209 и SEQ ID NO: 210, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 64.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 201, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 61; полинуклеотида SEQ ID NO: 202, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 62; полинуклеотида SEQ ID NO: 203, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63; полинуклеотида SEQ ID NO: 204, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 64; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 205; SEQ ID NO: 206 и SEQ ID NO: 207) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 61 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 62; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 208; SEQ ID NO: 209 и SEQ ID NO: 210) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 63 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 64.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab7, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab7, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 202, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 62, и полинуклеотида SEQ ID NO: 204, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 64.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab7 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab7, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab7 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab8
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 71:
- 50 031065
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTACAATTACAACTACCTTGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGA TTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG T(SEQ ID N0:211).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 72:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAGTGTTTACAATTACAACTACCTTGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGA TTGTAGTACTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG TACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT GGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTA CAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGA GCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGC TCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 212).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 73:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCGTTGGTATCAATGGT CGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 213).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 74:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCGTTGGTATCAATGGT CGCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCTAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCG CCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTG GGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACG GTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTA CAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTG GGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGA CAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAG CACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACA CCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC AAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCT CACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCA GGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTG GGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACT CCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGC AGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 214).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 215; SEQ ID NO: 216 и SEQ ID NO: 217, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 71 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 72.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты
- 51 031065 антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 218; SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 220, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 73 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 74.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 211, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 71; полинуклеотида SEQ ID NO: 212, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 72; полинуклеотида SEQ ID NO: 213, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 73; полинуклеотида SEQ ID NO: 214, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 74; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 215; SEQ ID NO: 216 и SEQ ID NO: 217) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 71 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 72; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 218; SEQ ID NO: 219 и SEQ ID NO: 220) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 73 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 74.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab8, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab8, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 212, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 72, и полинуклеотида SEQ ID NO: 214, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 74.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab8 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab8, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab8 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab9
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 81:
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAG
TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGT
ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGG CATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCA CCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATG ATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GT (SEQ ID NO: 221).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 82:
CAAGTGCTGACCCAGACTCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAAGCACAG
TCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTATAATAACAACTACCTAGCCTGGT
ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACGTCCACTCTGG CATCTGGGGTCTCATCGCGATTCAGAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCA
- 52 031065
CCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATG ATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAAT CTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG TACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACA GAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAA AGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGA GCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 222).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 83: CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGA
CACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCC GCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAG ACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGAC CACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCT GTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 223).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 84:
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGA CACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAGTGGGTCC GCCAGTCTCCAGGGAGGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTAGTGATGGTAAG ACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAGACCTCGTCGAC CACGGTGGATCTGAGAATGGCCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCT GTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCC ACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTC GTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTC CTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCAC CCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGA GAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTG AACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCA TGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGAC CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCG TCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAA GCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGA ACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCA GCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAG AGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGA CGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGG GGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGA AGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 224).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 225; SEQ ID NO: 226 и SEQ ID NO: 227, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 81 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 82.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 228; SEQ ID NO: 229 и SEQ ID NO: 230, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 83 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 84.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 221, кодирующего последовательность вариабельной
- 53 031065 области легкой цепи SEQ ID NO: 81; полинуклеотида SEQ ID NO: 222, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 82; полинуклеотида SEQ ID NO: 223, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 83; полинуклеотида SEQ ID NO: 224, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 84; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 225; SEQ ID NO: 226 и SEQ ID NO: 227) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 81 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 82; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 228; SEQ ID NO: 229 и SEQ ID NO: 230) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 83 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 84.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab9, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab9, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 222, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 82, и полинуклеотида SEQ ID NO: 224, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 84.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab9 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab9, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab9 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab10
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 91:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT
CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGA TTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG T (SEQ ID NO: 231).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 92:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT
CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGA TTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG TACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT GGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTA CAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGA GCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGC TCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 232).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 93:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC
TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGG
TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGT
- 54 031065
AAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 233).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 94:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGT AAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGAC GGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCT ACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTT GGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGG ACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCA GCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGAC ACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAC GAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCC TCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCC AACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCC CCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACC AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGT GGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAG CAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACG CAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 234).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 235; SEQ ID NO: 236 и SEQ ID NO: 237, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 91 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 92.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 238; SEQ ID NO: 239 и SEQ ID NO:240, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 93 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO:94.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 231, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 91; полинуклеотида SEQ ID NO: 232, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 92; полинуклеотида SEQ ID NO: 233, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 93; полинуклеотида SEQ ID NO: 234, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 94; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 235; SEQ ID NO: 236 и SEQ ID NO: 237) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 91 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 92; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 238; SEQ ID NO: 239 и SEQ ID NO: 240) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 93 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 94.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab10, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab10, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 232, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 92, и полинуклеотида SEQ ID NO: 234, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 94.
- 55 031065
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab10 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab 10, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab 10 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab11
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 101:
CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAG TCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGG CATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCA CCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATG ATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GT (SEQ ID NO: 241).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 102:
CAGGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAG TCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTATTATAACAACTACCTAGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGG CATCTGGGGTCTCATCGCGGTTCAAAGGCAGTGGATCTGGGACACAGTTCACTCTCA CCATCAGCGACGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTCTAGGCAGTTATG ATTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAAT CTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG TACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACA GAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAA AGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGA GCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 242).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 103: CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGA
CACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCC GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAG AGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGAC CACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCT GTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 243).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 104:
CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGAGGATCCCTGA CACTCACCTGCACAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTATATGCAATGGGTCC GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGTGTGAATGGTAAG AGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGAC CACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCT GTGCCAGAGGCGACATCTGGGGCCCGGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCC ACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGC
- 56 031065
ACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTC
GTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTC CTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCAC CCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGA GAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTG AACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCA TGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGAC CCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGAC AAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCG TCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAA GCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGA ACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCA GCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAG AGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGA CGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGG GGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGA AGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 244).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 245; SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 247, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 101 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 102.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 248; SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 250, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 103 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 104.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 241, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 101; полинуклеотида SEQ ID NO: 242, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 102; полинуклеотида SEQ ID NO: 243, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 103; полинуклеотида SEQ ID NO: 244, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 104; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 245; SEQ ID NO: 246 и SEQ ID NO: 247) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 101 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 102; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 248; SEQ ID NO: 249 и SEQ ID NO: 250) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 103 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 104.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab11, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab11, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 242, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 102, и полинуклеотида SEQ ID NO: 244, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 104.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab11 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab11, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab11 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
- 57 031065
Антитело Ab12
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 111:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT CACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTACTATAACAACTACCTAGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGA TTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG T(SEQ ID NO; 251).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 112:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT CACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAGAGTGTTTACTATAACAACTACCTAGCCTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGA TTGTAGTAATGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG TACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT GGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTA CAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGA GCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGC TCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 252).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 113: GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC
TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTGTGAATGGT AAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 253).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 114:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGACGTCACTAACTACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTGTGAATGGT AAGAGATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGAC GGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCT ACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTT GGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGG ACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCA GCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGAC ACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAC GAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCC TCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCC AACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCC CCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACC AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGT GGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAG CAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACG CAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 254).
- 58 031065
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 255; SEQ ID NO: 256 и SEQ ID NO: 257, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 111 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 112.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 258; SEQ ID NO: 259 и SEQ ID NO: 260, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 113 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 114.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 251, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 111; полинуклеотида SEQ ID NO: 252, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 112; полинуклеотида SEQ ID NO: 253, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 113; полинуклеотида SEQ ID NO: 254, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 114; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 255; SEQ ID NO: 256 и SEQ ID NO: 257) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 111 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 112; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 258; SEQ ID NO: 259 и SEQ ID NO: 260) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 113 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 114.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab12, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab12, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 252, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 112, и полинуклеотида SEQ ID NO: 254, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 114.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab12 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab 12, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab12 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab13
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 121:
GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACAC
AGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTG
GTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACT GGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCT CACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAG AAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GT (SEQ ID NO: 261).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 122:
- 59 031065
GCCATCGTGATGACCCAGACTCCATCTTCCAAGTCTGTCCCTGTGGGAGACAC
AGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTGAGAGTCTTTATAATAACAACGCCTTGGCCTG GTTTCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCGCCTGATCTATGATGCATCCAAACT GGCATCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGTGGCGGTGGGTCTGGGACACAGTTCACTCT CACCATCAGTGGCGTGCAGTGTGACGATGCTGCCACTTACTACTGTGGAGGCTACAG AAGTGATAGTGTTGATGGTGTTGCTTTCGCCGGAGGGACCGAGGTGGTGGTCAAAC GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAAT CTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG TACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACA GAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAA AGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGA GCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 262).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 123: CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGA
CACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCC GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTACAATGGTGATGGC AGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCG ACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTAT TGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 263).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 124:
CAGTCGGTGGAGGAGTCCGGGGGAGGCCTGGTCCAGCCTGAGGGATCCCTGA CACTCACCTGCACAGCCTCTGGATTCGACTTCAGTAGCAATGCAATGTGGTGGGTCC GCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGATGCATTTACAATGGTGATGGC AGCACATACTACGCGAGCTGGGTGAATGGCCGATTCTCCATCTCCAAAACCTCGTCG ACCACGGTGACTCTGCAACTGAATAGTCTGACAGTCGCGGACACGGCCACGTATTAT TGTGCGAGAGATCTTGACTTGTGGGGCCCGGGCACCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCC TCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGG GGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGT GTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACA GTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGG CACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACA AGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCA CCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACC CTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGA AGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCA AGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTC ACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAA CAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCC GAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAG GTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGG GAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTC CGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGC AGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGC AGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 264).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 265; SEQ ID NO: 266 и SEQ ID NO: 267, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 121 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 122.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 268; SEQ ID NO: 269 и SEQ ID NO: 270, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 123 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 124.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих
- 60 031065 фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 261, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 121; полинуклеотида SEQ ID NO: 262, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 122; полинуклеотида SEQ ID NO: 263, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 123; полинуклеотида SEQ ID NO: 264, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 124; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 265; SEQ ID NO: 266 и SEQ ID NO: 267) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 121 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 122; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 268; SEQ ID NO: 269 и SEQ ID NO: 270) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 123 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 124.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к антителу Ab13, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab13, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 262, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 122, и полинуклеотида SEQ ID NO: 264, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 124.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab13 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab13, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab13 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
Антитело Ab14
Настоящее изобретение также направлено на полинуклеотиды, кодирующие полипептиды антител, обладающих специфичностью связывания с CGRP. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 131:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT
CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTA
TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGA TTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG T(SEQ ID NO: 271).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 132:
CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGT
CACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGAATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTA
TCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATCCACTCTGGC ATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCAC CATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGA TTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGGAACCAAGGTGGAAATCAAACG TACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT GGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTA CAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGA GCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAG CAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGC TCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 272).
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 133:
- 61 031065
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGT AAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 273).
В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из следующей полинуклеотидной последовательности, кодирующей полипептидную последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 134:
GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCC TGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTGGAATCGGCCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGG TCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGAGTCATTGGTAGTGATGGT AAGACATACTACGCGACCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTC CAAGACCACGGTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTGTGT ATTTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGACCCTCGTCACCGTCTCGAGC GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCT GGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGAC GGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCT ACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTT GGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGG ACGCGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCA GCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGAC ACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAC GAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCC TCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCC AACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCC CCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACC AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGT GGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAG CAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACG CAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 274).
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 275; SEQ ID NO: 276 и SEQ ID NO: 277, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 131 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 132.
В другом варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антитела, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одной или более полинуклеотидных последовательностей SEQ ID NO: 278; SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 280, соответствующих полинуклеотидам, кодирующим области, определяющие комплементарность (CDR, или гипервариабельные области) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 133 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 134.
Настоящее изобретение также рассматривает полинуклеотидные последовательности, включающие одну или более из полинуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты антител, описанные здесь. В одном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды, кодирующие фрагменты антител, обладающие специфичностью связывания с CGRP, включают или, в качестве альтернативы, состоят из одного, двух, трех или более, в том числе всех следующих полинуклеотидов, кодирующих фрагменты антител: полинуклеотида SEQ ID NO: 271, кодирующего последовательность вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 131; полинуклеотида SEQ ID NO: 272, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 132; полинуклеотида SEQ ID NO: 273, кодирующего последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 133; полинуклеотида SEQ ID NO: 274, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 134; полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 275; SEQ ID NO: 276 и SEQ ID NO: 277) последовательности вариабельной области легкой цепи SEQ ID NO: 131 или последовательности легкой цепи SEQ ID NO: 132; и полинуклеотидов, кодирующих области, определяющие комплементарность (SEQ ID NO: 278; SEQ ID NO: 279 и SEQ ID NO: 280) последовательности вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 133 или последовательности тяжелой цепи SEQ ID NO: 134.
В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения полинуклеотиды по изобретению включают или, в качестве альтернативы, состоят из полинуклеотидов, кодирующих Fab-фрагменты (антигенсвязывающие фрагменты), обладающие специфичностью связывания с CGRP. По отношению к
- 62 031065 антителу Ab14, полинуклеотиды, кодирующие полноразмерное антитело Ab14, включают или, в альтернативном случае, состоят из полинуклеотида SEQ ID NO: 272, кодирующего последовательность легкой цепи SEQ ID NO: 132, и полинуклеотида SEQ ID NO: 274, кодирующего последовательность тяжелой цепи SEQ ID NO: 134.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения рассматривает указанные полинуклеотиды, внедренные в экспрессирующий вектор для экспрессии в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO, HEK 293, или системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей, например, дрожжей Pichia. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им. В одном варианте воплощения изобретения, описанном здесь (ниже), Fabфрагменты можно получить путем ферментативного гидролиза Ab14 (например, папаином), после экспрессии указанных полноразмерных полинуклеотидов в подходящем хозяине. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, например, Ab 14, или их Fab-фрагменты можно продуцировать путем экспрессии полинуклеотидов Ab14 в клетках млекопитающих, например, клетках СНО, NSO или HEK 293, системах на основе клеток грибов, насекомых или микроорганизмов, например, клеток дрожжей (например, диплоидных дрожжей, например, диплоидных Pichia) и других штаммах дрожжей. Подходящие виды Pichia включают вид Pichia pastoris, но не ограничиваются им.
В одном варианте воплощения настоящее изобретение направлено на выделенный полинуклеотид, включающий полинуклеотид, кодирующий аминокислотную последовательность VH антитела против CGRP, выбранную из SEQ ID NO: 3, 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123 или 133, или кодирующий ее вариант, где по меньшей мере один каркасный остаток (FR-остаток) замещен аминокислотой, присутствующей в соответствующем положении Vn-полипептида антитела кролика против CGRP, или путем консервативной аминокислотной замены.
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение направлено на выделенный полинуклеотид, включающий полинуклеотидную последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность VL антитела против CGRP 1, 11, 21, 31, 41, 51, 61, 71, 81, 91, 101, 111, 121 или 131, или кодирующую ее вариант, где по меньшей мере один каркасный остаток (FR-остаток) замещен аминокислотой, присутствующей в соответствующем положении VL-полипептида антитела кролика против CGRP, или путем консервативной аминокислотной замены.
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение направлено на один или более гетерологичных полинуклеотидов, включающих последовательность, кодирующую полипептиды, содержащиеся в SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 3; SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 13; SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 23; SEQ ID NO: 31 и SEQ ID NO: 33; SEQ ID NO: 41 и SEQ ID NO: 43; SEQ ID NO: 51 и SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 61 и SEQ ID NO: 63; SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 73; SEQ ID NO: 81 и SEQ ID NO: 83; SEQ ID NO: 91 и SEQ ID NO: 93; SEQ ID NO: 101 и SEQ ID NO: 103; SEQ ID NO: 111 и SEQ ID NO: 113; SEQ ID NO: 121 и SEQ ID NO: 123; или SEQ ID NO: 131 и SEQ ID NO:133.
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение направлено на выделенный полинуклеотид, экспрессирующий полипептид, содержащий по меньшей мере один CDR-полипептид, происходящий от антитела против CGRP, причем указанный экспрессированный полипептид сам по себе специфически связывает CGRP или специфически связывает CGRP при экспрессии в сочетании с еще одной полинуклеотидной последовательностью, экспрессирующей полипептид, содержащий по меньшей мере один CDR-полипептид, происходящий от антитела против CGRP, причем указанный по меньшей мере один CDR выбран из CDR, содержащихся в VL- или ^-полипептидах SEQ ID NO: 1, 3, 11, 13, 21, 23, 31, 33, 41, 43, 51, 53, 61, 63, 71, 73, 81, 83, 91, 93, 101, 103, 111, 113, 121, 123, 131 или SEQ ID NO:133.
Кроме того, рассматриваются клетки-хозяева и векторы, включающие указанные полинуклеотиды.
Кроме того, настоящее изобретение рассматривает векторы, включающие полинуклеотидные последовательности, кодирующие полипептидные последовательности вариабельных областей тяжелых и легких цепей, а также отдельные области, определяющие комплементарность (CDR или гипервариабельные участки), как изложено здесь, а также клетки-хозяева, включающие последовательности указанных векторов. В одном варианте воплощения настоящего изобретения клетка-хозяин является дрожжевой клеткой. В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения указанная дрожжевая клеткахозяин принадлежит к роду Pichia.
Скрининг и выделение В-клеток
В одном варианте воплощения настоящее изобретение рассматривает получение и выделение клональной популяции антиген-специфических В-клеток, которые можно использовать для выделения по меньшей мере одной клетки, специфичной по отношению к антигену CGRP, которую можно использовать для продукции моноклонального антитела против CGRP, специфичного к желательному антигену CGRP, или нуклеотидной последовательности, соответствующей такому антителу. Способы получения и выделения указанной клональной популяции антиген-специфичных В-клеток изложены, например, в патентной публикации США № 2007/0269868 Carvalho-Jensen et al., раскрытие которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. Способы получения и выделения указанной клональной популяции антиген-специфических В-клеток также описаны здесь в примерах. В данной области техники известны способы обогащения клеточной популяции по размеру или плотности. См., например, патент
- 63 031065
США 5627052. Эти этапы можно использовать в дополнение к обогащению популяции клеток по антигенной специфичности.
Способы гуманизации антител
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение рассматривает способы гуманизации тяжелых и легких цепей антител. Способы гуманизации тяжелых и легких цепей антител, которые можно применять к антителам против CGRP, изложены, например, в публикации патентной заявки США № 2009/0022659 Olson et al. и в патенте США № 7935340 Garcia-Martinez et al., раскрытие каждого из которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.
Способы получения антител и их фрагментов
В еще одном варианте воплощения настоящее изобретение рассматривает способы получения антител против CGRP и их фрагментов. Способы получения антител против CGRP и их фрагментов, секретируемых из полиплоидных, предпочтительно диплоидных или тетраплоидных штаммов дрожжей, компетентных по спариванию, изложены, например, в публикации патентной заявки США № 2009/0022659 Olson et al. и в патенте США № 7935340 Garcia-Martinez et al., раскрытие каждого из которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.
Другие способы получения антител хорошо известны специалистам в данной области техники. Например, способы получения химерных антител в настоящее время хорошо известны в данной области техники (см., например, патент США № 4816567 Cabilly et al.; Morrison et al., P.N.A.S. USA, 81:8651-55 (1984); Neuberger, M.S. et al., Nature, 314:268-270 (1985); Boulianne, G.L. et al., Nature, 312:643-46 (1984), раскрытие каждого из которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки).
Аналогично, другие способы получения гуманизированных антител в настоящее время хорошо известны в данной области техники (см., например, патенты США № 5530101, 5585089, 5693762 и 6180370 Queen et al.; патенты США № 5225539 и 6548640 Winter; патенты США № 6054297, 6407213 и 6639055 Carter et al.; патент США № 6632927 Adair; Jones, P.T. et al, Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann, L., et al, Nature, 332:323-327 (1988); Verhoeyen, M, et al, Science, 239:1534-36 (1988), раскрытие каждого из которых полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки).
Полипептиды антител по настоящему изобретению, обладающие специфичностью связывания с CGRP, также можно получить путем конструирования с использованием стандартных техник, хорошо известных специалистам в данной области техники, экспрессирующего вектора, включающего оперон и последовательность ДНК, кодирующую тяжелую цепь антитела, причем последовательность ДНК, кодирующая CDR, необходимые для специфичности антитела, получена из источника клеток нечеловеческого происхождения, предпочтительно из В-клеток кролика, а последовательность ДНК, кодирующая оставшиеся фрагменты цепи антитела, получена из источника клеток человеческого происхождения.
Второй экспрессирующий вектор получают с использованием тех же стандартных средств, хорошо известных специалистам в данной области техники, причем указанный экспрессирующий вектор содержит оперон и последовательность ДНК, кодирующую легкую цепь антитела, причем последовательность ДНК, кодирующая CDR, необходимые для специфичности антитела, получена из источника клеток нечеловеческого происхождения, предпочтительно из В-клеток кролика, а последовательность ДНК, кодирующая оставшиеся фрагменты цепи антитела, получена из источника клеток человеческого происхождения.
Указанные векторы экспрессии трансфицируют в клетку-хозяина с помощью стандартных техник, хорошо известных специалистам в данной области техники, с целью получения трансфицированной клетки-хозяина, причем указанную трансфицированную клетку-хозяина культивируют с помощью стандартных техник, хорошо известных специалистам в данной области техники, с целью получения указанных полипептидов антител.
Клетку-хозяина можно совместно трансфицировать двумя экспрессирующими векторами, описанными выше, причем первый экспрессирующий вектор содержит ДНК, кодирующую оперон и полипептид, происходящий от легкой цепи, а второй вектор содержит ДНК, кодирующую оперон, и полипептид, происходящий от тяжелой цепи.
Указанные два вектора содержат различные селективные маркеры, но предпочтительно достигают практически равной экспрессии полипептидов тяжелой и легкой цепей. В качестве альтернативы можно использовать единственный вектор, включающий ДНК, кодирующую полипептиды как тяжелой, так и легкой цепей. Кодирующие последовательности тяжелой и легкой цепей могут содержать кДНК и/или геномную ДНК.
Клетки-хозяева, используемые для экспрессии полипептидов антител, могут являться бактериальной клеткой, например, Е. coli, или эукариотической клеткой, например, P. pastoris. В одном варианте воплощения настоящего изобретения для этой цели можно использовать клетку млекопитающего хорошо определенного типа, например, миеломную клетку, линию клеток яичника китайского хомячка (СНО), линию клеток NSO или линию клеток HEK293.
Общие способы конструирования векторов, способы трансфекции, необходимые для получения клетки-хозяина, и способы культивирования, необходимые для получения полипептидов антител из указанных клеток-хозяев, включают стандартные техники. Хотя в предпочтительном случае линия клеток,
- 64 031065 используемая для получения антитела, является линией клеток млекопитающего, в качестве альтернативы можно использовать любую другую подходящую линию клеток, например, бактериальную линию клеток, например, бактериальный штамм, происходящий от Е. coli, или дрожжевую клеточную линию.
Аналогично, после получения полипептиды антител можно очистить в соответствии со стандартными процедурами, известными в данной области техники, например, фильтрацией в тангенциальном потоке, осаждением сульфатом аммония, аффинной колоночной хроматографией и т.п.
Полипептиды антител, описанные здесь, также можно использовать для разработки и синтеза пептида или непептидных миметиков, потенциально пригодных для тех же терапевтических вариантов применения, что и полипептиды антител по изобретению. См., например, статью Saragobi et al, Science, 253:792-795 (1991), содержание которой полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.
Скрининговые анализы
Настоящее изобретение также включает скрининговые анализы, предназначенные для помощи при выявлении заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP, у пациентов, проявляющих симптомы заболевания или расстройства, ассоциированного с CGRP.
В одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP по настоящему изобретению или их CGRP-связывающие фрагменты применяют для обнаружения присутствия CGRP в биологическом образце, полученном от пациента, проявляющего симптомы заболевания или расстройства, ассоциированного с CGRP. Наличие CGRP или его повышенные уровни по сравнению с уровнями CGRP до заболевания в сопоставимом биологическом образце может быть благоприятным для диагностики заболевания или расстройства, ассоциированного с CGRP.
Еще один вариант воплощения настоящего изобретения обеспечивает диагностический или скрининговый анализ для помощи при диагностике заболеваний или расстройств, ассоциированных с CGRP у пациентов, проявляющих симптомы заболевания или расстройства, ассоциированного с CGRP, описанного в данном документе, включая анализ уровня экспрессии CGRP в биологическом образце от указанного пациента с использованием посттрансляционно модифицированного антитела против CGRP или его связывающего фрагмента. Антитело против CGRP или его связывающий фрагмент можно посттрансляционно модифицировать с целью внедрения обнаруживаемой группы, например, группы, представленной выше в настоящем раскрытии.
Уровень CGRP в биологическом образце определяют с использованием модифицированного антитела против CGRP или его связывающего фрагмента, как изложено здесь, и путем сравнения уровня CGRP в биологическом образце со стандартным уровнем CGRP (например, уровнем в нормальных биологических образцах). Опытный врач должен понимать, что среди нормальных биологических образцов может существовать некоторая изменчивость, и принимать это во внимание при оценке результатов. В одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP по настоящему изобретению можно применять для установления связи уровней экспрессии CGRP с определенной стадией развития рака. Специалист в данной области техники может измерить CGRP у многочисленных субъектов с целью установления диапазонов экспрессии CGRP, соответствующих клинически определенным стадиям развития рака. Эти диапазоны позволят специалисту в данной области техники измерить CGRP у субъекта с диагнозом рака и установить связь уровней у каждого субъекта с диапазоном, соответствующим стадии указанного рака. Специалист в данной области техники должен понимать, что путем измерения CGRP у пациента через различные промежутки времени можно определить прогрессирование рака.
Вышеописанный анализ можно также применять для мониторинга заболевания или расстройства, где уровень CGRP, полученный в биологическом образце от пациента, предположительно страдающего заболеванием или расстройством, ассоциированным с CGRP, сравнивают с уровнем CGRP в предшествующих биологических образцах от этого же пациента с целью выявления изменений уровня CGRP у указанного пациента, например, в связи со схемой лечения.
Настоящее изобретение также направлено на способ визуализации in vivo, обнаруживающий присутствие клеток, экспрессирующих CGRP, включающий введение диагностически эффективного количества диагностической композиции. Указанную визуализацию in vivo можно применять, например, для обнаружения или визуализации CGRP-экспрессирующих опухолей или метастазов, и в рамках планирования схемы для разработки эффективного протокола лечения рака. Протокол лечения может включать, например, одно или более из лучевой терапии, химиотерапии, цитокиновой терапии, генной терапии и терапии антителами, а также применения антитела против CGRP или его фрагмента.
Настоящее изобретение также обеспечивает набор для обнаружения связывания антитела против CGRP по изобретению с CGRP. В частности, указанный набор можно применять для обнаружения присутствия CGRP, специфически реагирующего с антителом против CGRP по изобретению или его иммунореактивным фрагментом. Указанный набор может также включать антитело, связанное с подложкой, вторичное антитело, реагирующее с антигеном, и реагент для обнаружения реакции вторичного антитела с антигеном. Такой набор может являться набором для твердофазного ИФА и при необходимости может содержать субстрат, первичные и вторичные антитела и любые другие необходимые реагенты, например,
- 65 031065 обнаруживаемые группы, субстраты ферментов и цветные реагенты, например, как описано здесь. Диагностический набор также может быть представлен в виде набора для иммуноблоттинга. Диагностический набор также может быть представлен в виде набора для хемилюминесцентного анализа (Meso Scale Discovery, Гейтерсберг, штат Мэриленд, США). Диагностический набор также может быть представлен в виде набора для лантаноидного обнаружения (PerkinElmer, Сан-Хосе, штат Калифорния, США).
Квалифицированный врач должен понимать, что биологический образец включает сыворотку, плазму, мочу, слюну, мазок со слизистых, плевральную жидкость, синовиальную жидкость и спинномозговую жидкость, но не ограничивается ими.
Способы облегчения или уменьшения симптомов, или лечения или предотвращения заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, описанные здесь, или их фрагменты можно применять для облегчения или снижения симптомов или лечения или предотвращения заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP. Антитела против CGRP, описанные здесь, или их фрагменты, а также комбинации также можно вводить в терапевтически эффективном количестве пациентам, нуждающимся в лечении заболеваний и расстройств, ассоциированных с CGRP, в виде фармацевтической композиции, как более подробно описано ниже.
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения описанные здесь антитела против CGRP или их фрагменты можно применять для облегчения или снижения симптомов или лечения или профилактики мигреней (с аурой или без нее), потери массы тела, рака или опухолей, ангиогенеза, связанного с раковым или опухолевым ростом, ангиогенеза, связанного с выживанием рака или опухоли, боли, гемиплегических мигреней, кластерных головных болей, мигренозной невралгии, хронических головных болей, головных болей напряжения, общих головных болей, приливов, хронической пароксизмальной гемикрании, вторичных головных болей вследствие основной структурной проблемы в области головы или шеи, черепной невралгии, синусных головных болей (например, связанных с синуситом), и головных болей или мигреней, вызванных аллергией.
В одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, описанные здесь, или их фрагменты в комбинации со вторым агентом или без него можно применять для облегчения или снижения симптомов, или лечения, или предотвращения следующего неограничивающего списка заболеваний и расстройств: боли, воспалительной боли, боли в постоперационном разрезе, комплексного регионального болевого синдрома, раковой боли, боли при первичном или метастатическом раке костей, боли при переломе, хронической боли, боли при остеопорозном переломе, боли в результате ожога, остеопорозе, подагрической боли в суставах, боли в животе, боли, связанной с кризисом серповидных клеток и другой ноцицептической боли, а также гепатоцеллюлярной карциномы, рака молочной железы, цирроза печени, нейрогенной боли, невропатической боли, ноцицептической боли, невралгии тройничного нерва, постгерпетической невралгии, фантомной боли конечностей, фибромиалгии, менструальной боли, овариалгии, рефлекторной симпатической дистрофии, нейрогенной боли, боли при остеоартрите или ревматоидном артрите, боли в пояснице, диабетической невропатии, пояснично-крестцовом радикулите, или боли или висцеральной боли, связанной с: желудочно-пищеводным рефлюксом, диспепсией, синдромом раздраженного кишечника, раздраженной толстой кишкой, спазмами толстой кишки, слизистым колитом, воспалительным заболеванием кишечника, болезнью Крона, илеитом, язвенным колитом, почечной коликой, дисменореей, циститом, менструальным периодом, родами, менопаузой, простатитом, панкреатитом, почечной коликой, дисменореей, циститом, в том числе интерстициальным циститом (IC), операцией, связанной с кишечной непроходимостью, дивертикулитом, перитонитом, перикардитом, гепатитом, аппендицитом, колитом, холециститом, эндометриозом, хроническим и/или острым панкреатитом, инфарктом миокарда, боли в почках, плевральной боли, простатите, боли в области таза, травмы органа, хронической ноцицептивной боли, хронической невропатической боли, хронической воспалительной боли, фибромиалгии, приступа неконтролируемой боли и постоянной боли, а также раковой боли, возникающей в результате злокачественного новообразования или рака, предпочтительно выбранного из одного или более из: аденокарциномы железистой ткани, бластомы эмбриональной ткани органов, карциномы эпителиальной ткани, лейкоза в тканях, образующих клетки крови, лимфомы лимфатической ткани, миеломы костного мозга, саркомы в соединительной или опорной ткани, рака надпочечников, лимфомы, связанной со СПИДом, анемии, рака мочевого пузыря, рака костей, рака головного мозга, рака молочной железы, карциноидных опухолей, рака шейки матки, химиотерапии, рака толстой кишки, цитопении, рака эндометрия, рака пищевода, рака желудка, рака головы, рака шеи, гепатобилиарного рака, рака почки, лейкоза, рака печени, рака легких, лимфомы, болезни Ходжкина, неходжкинской лимфомы, опухолей нервной системы, рака ротовой полости, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака предстательной железы, рака прямой кишки, рака кожи, рака желудка, рака яичка, рака щитовидной железы, рака уретры, рака костей, сарком соединительной ткани, рака костной ткани, рака кроветворных клеток, рака костного мозга, множественной миеломы, лейкоза, первичного или вторичного рака костей, опухолей, метастазирующих в кости, опухолей, прорастающих в нервы и полые органы, опухолей, расположенных вблизи нервных структур. Кроме того, в предпочтительном случае раковая боль включает висцеральную боль, предпочтительно висцеральную боль, возникающую в результате рака поджелудоч
- 66 031065 ной железы и/или метастазов в брюшную полость. Кроме того, в предпочтительном случае раковая боль включает соматическую боль, предпочтительно соматическую боль, вызванную одним или более заболеваний из рака костей, метастазов в кости, послеоперационной раковой боли, сарком соединительной ткани, рака костной ткани, рака кроветворных клеток костного мозга, множественной миеломы, лейкоза, первичного или вторичного рака костей.
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, описанные здесь, или их фрагменты в комбинации со вторым агентом или без него можно применять для облегчения или снижения симптомов, или лечения, или предотвращения следующего неограничивающего списка заболеваний и расстройств: рака или опухолей, ангиогенеза, ассоциированного с раковым или опухолевым ростом, ангиогенеза, ассоциированного с выживанием рака или опухоли.
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, описанные здесь, или их фрагменты в комбинации со вторым агентом или без него можно применять для облегчения или снижения симптомов, или лечения, или предотвращения следующего неограничивающего списка заболеваний и расстройств: нейрогенной, невропатической или ноцицептической боли. Невропатическая боль может включать невралгию тройничного нерва, постгерпетическую невралгию, фантомную боль конечностей, фибромиалгию, менструальную боль, овариалгию, рефлекторную симпатическую дистрофию и нейрогенную боль, но не ограничивается ими. В других предпочтительных вариантах воплощения - это боль при остеоартрите или ревматоидном артрите, боль в пояснице, диабетическая невропатия, пояснично-крестцовый радикулит и другая невропатическая боль.
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP и их фрагменты в комбинации со вторым агентом или без него можно применять для облегчения или снижения симптомов, или лечения, или предотвращения следующего неограничивающего списка заболеваний и расстройств: гиперактивности мочевого пузыря и других состояний мочевыделительной системы, желудочно-пищеводного рефлюкса и висцеральной боли, связанной с желудочно-пищеводным рефлюксом, диспепсией, синдромом раздраженного кишечника, воспалительным заболеванием кишечника, болезнью Крона, илеитом, язвенным колитом, почечной коликой, дисменореей, циститом, менструальным периодом, родами, менопаузой, простатитом, пруритом или панкреатитом. Кроме того, рассматриваемые антитела и фрагменты антител против CGRP можно применять отдельно или в сочетании с другими активными агентами, например, опиоидами и неопиоидными анальгетиками, например, НПВС, для обезболивания или усиления эффективности другого анальгетика или для предотвращения или облегчения устойчивости к специфическому анальгетику, например, морфину или родственным опиоидным анальгетикам. Доказательством роли CGRP в блокировании/обращении развития морфин-индуцированного обезболивания является тот факт, что CGRP8-37 и антагонист рецептора CGRP (BIBN4096BS), согласно сообщениям, предотвращает/обращает развитие устойчивости к морфину - (Powell et al., 2000 J Brit J Pharmacol (131):875; Menard et al., 1996 J Neurosci (16):2342; Wang et al., 2009 FASEB J (23):2576; Wang et al., 2010 Pain (151): 194).
Рассматриваемые антитела потенциально можно объединить с любым опиоидным анальгетиком или НПВС или другим анальгетиком, потенциально являющимся другим антителом, с целью повышения или усиления контроля над болью, или обращения или подавления устойчивости к анальгетику, например, опиоидному анальгетику. Это может дать возможность введения такого анальгетика на более длительный срок или в пониженных дозах, тем самым потенциально облегчая неблагоприятные побочные эффекты, связанные с ним.
Термин опиоидный анальгетик в данном описании относится ко всем лекарственным средствам, природным или синтетическим, обладающим морфиноподобным действием. Синтетические и полусинтетические опиоидные анальгетики являются производными пяти классов химических соединений: фенантренов; фенилгептиламинов; фенилпиперидинов; морфинанов; и бензоморфанов, все из которых находятся в рамках указанного термина. Примеры опиоидных анальгетиков включают кодеин, дигидрокодеин, диацетилморфин, гидрокодон, гидроморфон, оксиморфон, леворфанол, альфентанил, бупренорфин, буторфанол, фентанил, суфентанил, меперидин, метадон, налбуфин, пропоксифен и пентазоцин или их фармацевтически приемлемые соли.
Термин НПВС относится к нестероидному противовоспалительному соединению. НПВС классифицируются на основании их способности ингибировать циклооксигеназу. Циклооксигеназа 1 и циклооксигеназа 2 являются двумя основными изоформами циклооксигеназы, и большинство стандартных НПВС являются смешанными ингибиторами двух указанных изоформ. Большинство стандартных НПВС подпадают под одну из следующих пяти структурных категорий: (1) производные пропионовой кислоты, например, ибупрофен, напроксен, напросин, диклофенак и кетопрофен; (2) производные уксусной кислоты, например, толметин и сулиндак; (3) производные фенамовой кислоты, например, мефенамовая кислота и меклофенамовая кислота; (4) производные бифенилкарбоновой кислоты, например, дифлунизал и флуфенизал; и (5) оксикамы, например, пироксикам, судоксикам и изоксикам. Описан еще один класс НПВС, селективно ингибирующих циклооксигеназу 2. Ингибиторы Сох-2 описаны, например, в патентах США № 5616601; 5604260; 5593994; 5550142; 5536752; 5521213; 5475995; 5639780; 5604253; 5552422; 5510368; 5436265; 5409944 и 5130311, все из которых включены в настоящий документ посредством
- 67 031065 ссылки. Некоторые типичные ингибиторы СОХ-2 включают целекоксиб (SC-58635), DUP-697, флосулид (CGP-28238), мелоксикам, 6-метокси-2-нафтилуксусную кислоту (6-MNA), рофекоксиб, МК-966, набуметон (пролекарство 6-MNA), нимесулид, NS-398, SC-5766, SC-58215, Т-614, или их комбинации.
В некоторых вариантах воплощения можно принимать аспирин и/или ацетаминофен в сочетании с рассматриваемым антителом или фрагментом против CGRP. Аспирин является еще одним типом нестероидного противовоспалительного соединения.
В типичном случае неограничивающие заболевания и расстройства, которые можно лечить и/или предотвращать путем введения антител против CGRP по настоящему изобретению, включают боль, вызванную любым состоянием, связанным с нейрогенной, невропатической, воспалительной, термической или ноцицептической болью. В предпочтительном случае указанное расстройство ассоциировано с повышенным уровнем CGRP в области боли. В некоторых вариантах воплощения предпочтительному лечению подвергают невропатическую боль, рефлекторную невралгию тройничного нерва, постгерпетическую невралгию, фантомную боль конечностей, фибромиалгию, рефлекторную симпатическую дистрофию и состояния с нейрогенной болью. В других вариантах воплощения предпочтительному лечению подвергают раковую боль, в частности, боль при раке костей, боль при остеоартрите или ревматоидном артрите, боль в пояснице, боль в послеоперационном разрезе, боль при переломе, боль при остеопорозном переломе, остеопороз, подагрическую боль в суставах, диабетическую невропатию, поясничнокрестцовый радикулит, боли, связанные с кризисом серповидных клеток, мигрень и другую нейропатическую и/или ноцицептическую боль. Таким образом, настоящее изобретение включает способы лечения, предотвращения и/или облегчения любого заболевания или расстройства, ассоциированного с активностью CGRP или стимуляцией CGRP (включая любое из вышеупомянутых типичных заболеваний, расстройств и состояний) за счет применения антител и фрагментов антител по изобретению. Терапевтические способы по настоящему изобретению включают введение субъекту любого состава, содержащего антитело против CGRP, как раскрыто здесь, по отдельности или в сочетании с другим активным агентом.
Субъект, которому вводят фармацевтический состав, может являться, например, любым человеком или животным, не являющимся человеком, нуждающимся в таком лечении, профилактике и/или облегчении, или субъектом, который мог бы в другом случае получить благоприятный эффект от ингибирования или ослабления CGRP-опосредованной активности. Например, субъектом может быть человек, которому поставлен диагноз, или который предположительно подвергается риску любого из вышеуказанных заболеваний или расстройств. Настоящее изобретение также включает применение любого из фармацевтических составов, раскрытых здесь, при производстве лекарственного средства для лечения, предупреждения и/или облегчения любого заболевания или расстройства, ассоциированного с активностью CGRP (включая любые из вышеупомянутых типичных заболеваний, расстройств и состояний).
Введение
В одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, описанные здесь, или их CGRP-связывающие фрагменты, а также комбинации указанных антител или фрагментов антител вводят субъекту в концентрации между приблизительно 0,1 и 100,0 мг/кг массы тела субъектареципиента. В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, описанные здесь, или их CGRP-связывающие фрагменты, а также комбинации указанных антител или фрагментов антител вводят субъекту в концентрации приблизительно 0,4 мг/кг массы тела субъектареципиента. В предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, описанные здесь, или их CGRP-связывающие фрагменты, а также комбинации указанных антител или фрагментов антител вводят субъекту-реципиенту с частотой раз в двадцать шесть недель или менее, например, раз в шестнадцать недель или менее, раз в восемь недель или менее, раз в четыре недели или менее, раз в две недели или менее, раз в неделю или менее, или раз в день или менее.
Fab-фрагменты можно вводить раз в две недели или менее, раз в неделю или менее, раз в день или менее, несколько раз в день и/или раз в несколько часов. В одном варианте воплощения настоящего изобретения пациент получает Fab-фрагменты в количестве от 0,1 мг/кг до 40 мг/кг в день в разделенных дозах от 1 до 6 раз в день, или в форме с замедленным высвобождением, эффективной для получения желательных результатов.
Следует понимать, что концентрация антитела или Fab, вводимого данному пациенту, может быть больше или меньше, чем типичные вводимые концентрации, представленные выше.
Специалист в данной области техники может экспериментально определить эффективную дозировку и частоту приема в рабочем порядке, например, руководствуясь настоящим раскрытием и информацией в Goodman, L. S., Gilman, A., Brunton, L. L., Lazo, J. S., & Parker, K. L. (2006). Goodman & Gilman's the pharmacological basis of therapeutics. New York: McGraw-Hill; Howland, R. D., Mycek, M. J., Harvey, R. A., Champe, P. C, & Mycek, M. J. (2006). Pharmacology. Lippincott's illustrated reviews. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins; and Golan, D. E. (2008). Principles of pharmacology: the pathophysiologic basis of drug therapy. Philadelphia, Pa., [etc.]: Lippincott Williams & Wilkins.
В еще одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, описанные здесь, или их CGRP-связывающие фрагменты, а также комбинации указанных антител или фрагментов антител вводят субъекту в фармацевтическом составе.
- 68 031065
Фармацевтическая композиция относится к химической или биологической композиции, подходящей для введения млекопитающему. Такие композиции можно специально составить для введения посредством одного или более из ряда путей, включая буккальное, накожное, эпидуральное, ингаляционное, внутриартериальное, внутрисердечное, интрацеребровентрикулярное, внутрикожное, внутримышечное, интраназальное, внутриглазное, внутрибрюшинное, интраспинальное, интратекальное, внутривенное, пероральное, парентеральное, ректальное (путем клизмы или суппозитория), подкожное, субдермальное, сублингвальное, трансдермальное и трансмукозальное введение, но не ограничиваясь ими. Кроме того, введение можно осуществлять с помощью инъекции, порошка, жидкости, геля, капель или других средств для введения.
В одном варианте воплощения настоящего изобретения антитела против CGRP, описанные здесь, или их CGRP-связывающие фрагменты, а также комбинации указанных антител или фрагментов антител можно необязательно вводить субъекту в комбинации с одним или более активных агентов. Такие активные агенты включают анальгетики, антигистаминные, жаропонижающие, противовоспалительные агенты, антибиотики, противовирусные и антицитокиновые агенты. Активные агенты включают агонисты, антагонисты и модуляторы ФНО-a, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-13, IL-18, IFN-a, IFN-γ, BAFF, CXCL13, IP-10, ФРЭС, ЕРО, ЭФР, HRG, фактор роста гепатоцитов (ФРГ), гепцидин, в том числе антитела, активные против любого из вышеперечисленных агентов, а также антитела, активные против любого из их рецепторов. Активные агенты также включают 2-арилпропионовые кислоты, ацеклофенак, ацеметацин, ацетилсалициловую кислоту (аспирин), алклофенак, альминопрофен, эмоксипин, ампирон, арилалкановые кислоты, азапропазон, бенорилат, беноксапрофен, бромфенак, карпрофен, целекоксиб, холинсалицилат магния, клофезон, ингибиторы СОХ-2, дексибупрофен, декскетопрофен, диклофенак, дифлунизал, дроксикам, этензамид, этодолак, эторикоксиб, физаламин, фенамовые кислоты, фенбуфен, фенопрофен, флуфенамовую кислоту, флуноксапрофен, флурбипрофен, ибупрофен, ибупроксам, индометацин, индопрофен, кебузон, кетопрофен, кеторолак, лорноксикам, локсопрофен, люмиракоксиб, магния салицилат, меклофенамовую кислоту, мефенамовую кислоту, мелоксикам, метамизол, метилсалицилат, мофебутазон, набуметон, напроксен, N-арилантраниловые кислоты, фактор роста нервов (NGF), оксаметацин, оксапрозин, оксикамы, оксифенбутазон, парекоксиб, феназон, фенилбутазон, пироксикам, пирпрофен, профены, проглуметацин, производные пиразолидина, рофекоксиб, салицилсалицилат, салициламид, салицилаты, вещество Р, сульфинпиразон, сулиндак, супрофен, теноксикам, тиапрофеновую кислоту, толфенамовую кислоту, толметин и вальдекоксиб, но не ограничиваются ими.
Антигистаминный агент может быть любым соединением, противодействующим действию гистамина или его высвобождению из клеток (например, тучных клеток). Антигистаминные агенты включают акривастин, астемизол, азатадин, азеластин, бетатастин, бромфенирамин, буклизин, цетиризин, аналоги цетиризина, хлорфенирамин, клемастин, CS 560, ципрогептадин, дезлоратадин, дексхлорфенирамин, эбастин, эпинастин, фексофенадин, HSR 609, гидроксизин, левокабастин, лоратидин, метскополамин, мизоластин, норастемизол, фениндамин, прометазин, пириламин, терфенадин и траниласт, но не ограничиваются ими.
Антибиотики включают амикацин, аминогликозиды, амоксициллин, ампициллин, ансамицины, арсфенамин, азитромицин, азлоциллин, азтреонам, бацитрацин, карбацефем, карбапенемы, карбенициллин, цефаклор, цефадроксил, цефалексин, цефалотин, цефамандол, цефазолин, цефдинир, цефдиторен, цефепим, цефиксим, цефоперазон, цефотаксим, цефокситин, цефподоксим, цефпрозил, цефтазидим, цефтибутен, цефтизоксим, цефтобипрол, цефтриаксон, цефуроксим, цефалоспорины, хлорамфеникол, циластатин, ципрофлоксацин, кларитромицин, клиндамицин, клоксациллин, колистин, котримоксазол, далфопристин, демеклоциклин, диклоксациллин, диритромицин, дорипенем, доксициклин, эноксацин, эртапенем, эритромицин, этамбутол, флуклоксациллин, фосфомицин, фуразолидон, фузидиевую кислоту, гатифлоксацин, гелданамицин, гентамицин, гликопептиды, гербимицин, имипенем, изониазид, канамицин, левофлоксацин, линкомицин, линезолид, ломефлоксацин, лоракарбеф, макролиды, мафенид, меропенем, метициллин, метронидазол, мезлоциллин, миноциклин, монобактамы, моксифлоксацин, мупироцин, нафциллин, неомицин, нетилмицин, нитрофурантоин, норфлоксацин, офлоксацин, оксациллин, окситетрациклин, паромомицин, пенициллин, пенициллины, пиперациллин, платензимицин, полимиксин В, полипептиды, пронтозил, пиразинамид, хинолоны, хинупристин, рифампицин, рифампин, рокситромицин, спектиномицин, стрептомицин, сульфацетамид, сульфаметизол, сульфаниламид, сульфасалазин, сульфисоксазол, сульфонамиды, тейкопланин, телитромицин, тетрациклин, тетрациклины, тикарциллин, тинидазол, тобрамицин, триметоприм, триметоприм-сульфаметоксазол, тролеандомицин, тровафлоксацин и ванкомицин, но не ограничиваются ими.
Активные агенты также включают альдостерон, беклометазон, бетаметазон, кортикостероиды, кортизол, кортизона ацетат, дезоксикортикостерона ацетат, дексаметазон, флудрокортизона ацетат, глюкокортикоиды, гидрокортизон, метилпреднизолон, преднизолон, преднизон, стероиды и триамцинолон. Кроме того, рассматривается любая подходящая комбинация указанных активных агентов.
Фармацевтический наполнитель или фармацевтически приемлемый наполнитель является носителем, обычно жидким, используемым для получения состава активного терапевтического агента. В одном варианте воплощения настоящего изобретения активный терапевтический агент является гуманизи
- 69 031065 рованным антителом, описанным здесь, или одним или более из его фрагментов. Наполнитель обычно не обеспечивает фармакологическую активность состава, хотя может обеспечивать химическую и/или биологическую стабильность и характеристики высвобождения.
Типичные составы можно найти, например, в Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Ed., Grennaro, A., Ed., 1995, включенном в настоящий документ посредством ссылки.
Как используется здесь, термин фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель включает всевозможные растворители, дисперсионные среды, покрытия, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и задерживающие всасывание агенты, которые являются физиологически совместимыми. В одном варианте воплощения носитель подходит для парентерального введения. Предпочтительно носитель может быть пригоден для внутривенного, внутрибрюшинного, внутримышечного или сублингвального введения. Фармацевтически приемлемые носители включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций. Использование таких сред и агентов в комбинации с фармацевтически активными веществами хорошо известно в данной области техники. Кроме того, поскольку любая обычная среда или агент несовместима с активным соединением, рассматривается их использование в фармацевтических композициях по изобретению. В композиции можно также включать дополнительные активные соединения.
Фармацевтические композиции обычно должны быть стерильными и стабильными в условиях производства и хранения. Настоящее изобретение предусматривает, что фармацевтическая композиция присутствует в лиофилизированной форме. Композицию можно составить в виде раствора, микроэмульсии, липосомы или другой упорядоченной структуры, подходящей для высокой концентрации лекарственного агента. Носитель может быть растворителем или дисперсионной средой, содержащей, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль) и их подходящие смеси. Настоящее изобретение также рассматривает включение стабилизатора в состав фармацевтической композиции. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем использования ПАВ.
Во многих случаях предпочтительно включать в композицию изотонические агенты, например, сахара, многоатомные спирты, например, маннит, сорбит, или хлорид натрия. Длительное поглощение композиций, вводимых путем инъекции, можно осуществить путем включения в композицию агента, замедляющего поглощение, например, солей моностеарата и желатина. Кроме того, в состав с замедленным высвобождением, например, в композицию, включающую полимер для медленного высвобождения, можно включить щелочной полипептид. Активные соединения можно изготовить в комбинации с носителями, защищающими соединение от быстрого высвобождения, такими как препараты контролируемого высвобождения, включая импланты и микрокапсулированные системы доставки. Можно использовать биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, например, этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевую кислоту, коллаген, полиортоэфиры, полимолочную кислоту и сополимеры полимолочной и полигликолевой кислот (PLG). Многие способы изготовления таких составов известны специалистам в данной области техники.
В каждом из упомянутых вариантов воплощения соединения можно вводить в различных лекарственных формах. Рассматриваются любые биологически приемлемые лекарственные формы, известные специалистам в данной области техники, и их комбинации. Примеры таких лекарственных форм включают, без ограничения, восстанавливаемые порошки, эликсиры, жидкости, растворы, суспензии, эмульсии, порошки, гранулы, частицы, микрочастицы, диспергируемые гранулы, облатки, препараты для ингаляции, аэрозоль для ингаляции, пластыри, препараты частиц для ингаляции, импланты, депоимпланты, препараты для инъекций (в том числе подкожных, внутримышечных, внутривенных и внутрикожных), вливаний, и их комбинации.
Вышеуказанное описание различных иллюстрированных вариантов воплощения не следует считать исчерпывающим или жестко ограничивающим настоящее изобретение раскрытой формой. Несмотря на то, что здесь описаны конкретные варианты воплощения и примеры настоящего изобретения в целях иллюстрации, специалисты в данной области техники должны понимать, что возможны различные эквивалентные модификации, входящие в рамки изобретения. Информацию об изобретении, представленную здесь, можно применять для других целей, отличающихся от описанных выше примеров.
Указанные и другие изменения можно вносить в изобретение в свете вышеприведенного подробного описания. В общем случае, термины, использованные в следующей далее формуле изобретения, не следует интерпретировать как ограничения изобретения конкретными вариантами воплощения, раскрытыми в настоящем документе и пунктах формулы изобретения. Соответственно, настоящее изобретение не ограничивается указанным раскрытием, и рамки изобретения должны определяться исключительно прилагаемой формулой изобретения.
Настоящее изобретение можно реализовать способами, отличающимися от способов, явным образом описанных в вышеприведенном описании и примерах. В свете вышеприведенной информации возможны различные модификации и изменения настоящего изобретения, которые, таким образом, находятся в рамках прилагаемой формулы изобретения.
- 70 031065
Некоторые аспекты информации, относящейся к способам получения клональной популяции антиген-специфичных В-клеток, были раскрыты в предварительной патентной заявке США № 60/801412, поданной 19 мая 2006 года, раскрытие которой полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.
Некоторые аспекты информации, относящейся к гуманизации моноклональных антител кролика и предпочтительных модификаций последовательности для поддержания сродства связывания с антигеном, были раскрыты в международной заявке № PCT/US2008/064421, что соответствует международной публикации № WO/2008/144757 под названием Novel Rabbit Antibody Humanization Methods and Humanized Rabbit Antibodies, поданной 21 мая 2008 г., раскрытие которой полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.
Некоторые аспекты информации, относящейся к получению антител или их фрагментов с помощью дрожжей, компетентных по спариванию, и соответствующим способам, были раскрыты в патентной заявке США № 11/429053, поданной 8 мая 2006 г. (публикация патентной заявки США № US 2006/0270045), раскрытие которой полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.
Некоторые полинуклеотиды и полипептиды антител против CGRP раскрыты в списке последовательностей, прилагаемом к настоящей подаваемой патентной заявке, и раскрытие указанного списка последовательностей полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.
Полное раскрытие каждого документа (включая патенты, заявки на патенты, журнальные статьи, рефераты, учебные пособия, книги или другие источники), цитируемого в разделах Уровень техники, Подробное описание изобретения и примеры, полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.
Следующие примеры представлены с целью обеспечить специалистов в данной области техники полным раскрытием и описанием способов реализации и применения рассматриваемого изобретения и не предназначены для ограничения рамок и сущности изобретения. Были предприняты усилия для обеспечения точности используемых чисел (например, количеств, температуры, концентраций и т.д.), однако следует допускать возможность некоторых экспериментальных ошибок и отклонений. Если не указано иное, доли являются массовыми долями, молекулярная масса является средней молекулярной массой, температура приведена в градусах Цельсия, а давление равно или близко к атмосферному.
Примеры
Пример 1
Получение антител, связывающих CGRP
За счет применения протокола отбора антител, описанного здесь, можно получить расширенную панель антител.
Стратегия иммунизации
Кроликов иммунизировали CGRPa человека (American Peptides, Саннивейл, штат Калифорния, США и Bachem, Торранс, штат Калифорния, США). Иммунизация состояла из первой подкожной (п/к) инъекции 100 мкг антигена, смешанного с 100 мкг KLH в полном адъюванте Фрейнда (CFA) (Sigma) с последующими двумя стимуляциями, разнесенными во времени на две недели, каждая из которых содержала 50 мкг антигена, смешанного с 50 мкг в неполном адъюванте Фрейнда (IFA) (Sigma). У животных выполняли отбор крови в день 55, и определяли титры в сыворотке крови с помощью твердофазного ИФА (распознавание антигена) и путем ингибирования CGRP-зависимого повышения уровня цАМФ в SK-N-MC.
Оценка титра при отборе антитела
С целью выявления и описания характеристик антител, связывающихся с CGRPa человека, растворы антител тестировали с помощью твердофазного ИФА. Вкратце, планшеты, покрытые нейтравидином (Thermo Scientific), покрывали CGRPa человека, биотинилированным по N-концу (50 мкл на лунку, 1 мкг/мл), разбавленным буфером для твердофазного ИФА (0,5% желатина рыбьей кожи в PBS, рН 7,4) в течение приблизительно 1 ч при комнатной температуре или, в качестве альтернативы, в течение ночи при 4°С. Затем планшеты дополнительно блокировали буфером для твердофазного ИФА в течение 1 ч при комнатной температуре и промывали буфером для промывки (PBS, 0,05% твин-20). Протестированные образцы сыворотки последовательно разбавляли буфером для твердофазного ИФА. Пятьдесят микролитров разбавленных образцов сыворотки переносили в лунки и инкубировали при комнатной температуре в течение часа. После указанного инкубирования планшет промывали буфером для промывки. Для развития ответа в лунки добавляли специализированный Fc-HARP против антител кролика (разбавление 1:5000 в буфере для твердофазного ИФА) и инкубировали в течение 45 мин при комнатной температуре. После этапа 3-кратной промывки раствором для промывки планшет обрабатывали субстратом ТМВ в течение двух минут при комнатной температуре и останавливали реакцию с помощью 0,5 М HCl. Поглощение в лунках считывали при 450 нм.
Определение титра образцов сыворотки крови по функциональной активности (ингибирование CGRP-зависимых уровней цАМФ)
С целью выявления и описания характеристик антител с функциональной активностью выполняли
- 71 031065 анализ ингибирования CGRP-зависимого повышения уровней цАМФ с использованием электрохемилюминесценции (Meso Scale Discovery, MSD).
Вкратце, препараты антител, подлежащие тестированию, последовательно разбавляли в буфере для анализа MSD (Hepes, MgCl2, pH 7,3,1 мг/мл блокатора A, Meso Scale Discovery) в 96-луночном круглодонном полистирольном планшете (Costar). В указанный планшет добавляли CGRPa человека (конечная концентрация 10 нг/мл), разбавленный буфером для анализа MSD, и инкубировали в течение часа при 37°С. Согласно указаниям изготовителя аналитического набора использовали соответствующие контроля. Клетки нейроэпителиомы человека (SK-N-MC, АТСС) отделяли с помощью раствора ЭДТА (5 мМ в PBS) и промывали ростовой средой (MEM, 10% FBS, антибиотики) посредством центрифугирования. Количество клеток доводили до 2 миллионов клеток на мл в буфере для анализа и добавляли IBMX (3изобутил-1-метилксантин, Sigma) до конечной концентрации 0,2 мМ непосредственно перед загрузкой клеток в планшет для анализа цАМФ. После инкубирования раствора антитела против CGRPa человека в течение одного часа 20 мкл раствора, содержащего клетки, переносили в планшет для анализа цАМФ. Все образцы тестировали в двух повторностях с соответствующими контролями. Десять микролитров клеток добавляли в лунки и инкубировали планшет в течение 30 мин при встряхивании и комнатной температуре. Во время инкубирования клеток с раствором CGRP готовили стоп-раствор путем получения раствора TAG-меченого цАМФ (MSD) в лизирующем буфере (MSD) в разбавлении 1:200. Для остановки инкубирования клеток с CGRP к клеткам добавляли 20 микролитров стоп-раствора и инкубировали планшет в течение одного часа при встряхивании и комнатной температуре. Буфер для считывания (MSD) разбавляли в четыре раза водой и добавляли 100 мкл в каждую лунку планшета. Затем планшет считывали с помощью Sector Imager 2400 (MSD) и использовали программное обеспечение Prism для аппроксимации данных и определения IC50.
Сбор ткани
После установления приемлемых титров кролика(ов) умерщвляли. Селезенку, лимфатические узлы и цельную кровь собирали и обрабатывали следующим образом:
Селезенку и лимфатические узлы перерабатывали в суспензию отдельных клеток путем диссоциации ткани и продавливания через стерильную проволочную сетку с размером ячеек 70 мкм (Fisher) плунжером 20-мл шприца. Клетки собирали в PBS. Клетки дважды промывали центрифугированием. После последней промывки определяли плотность клеток с помощью трипанового синего. Клетки центрифугировали при 1500 об/мин в течение 10 мин, супернатант удаляли. Клетки ресуспендировали в соответствующем объеме 10% диметилсульфоксида (ДМСО, Sigma) в FBS (Hyclone) и разливали по 1 мл/флакон. Флаконы хранили при минус 70°С в камере медленной заморозки в течение 24 ч и хранили в жидком азоте.
Мононуклеарные клетки периферической крови (МПК) выделяли путем смешивания цельной крови с равными частями среды с низким содержанием глюкозы, описанной выше, не содержавшей FBS. 35 мл смеси цельной крови осторожно наслаивали на 8 мл Lympholyte Rabbit (Cedarlane) в 45-мл конической пробирке (Corning) и центрифугировали в течение 30 мин при 2500 об/мин при комнатной температуре без тормозной системы. После центрифугирования слои МПК тщательно удаляли с помощью стеклянной пипетки Пастера (VWR), объединяли и помещали в чистый 50-мл флакон. Клетки дважды промывали модифицированной средой, описанной выше, путем центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 мин при комнатной температуре, и определяли плотность клеток путем окрашивания трипановым синим. После последней промывки клетки ресуспендировали в соответствующем объеме 10% ДМСО/FBS-среды и замораживали, как описано выше.
Отбор, обогащение и условия культивирования В-клеток
В день создания культуры В-клеток МПК, спленоциты или флаконы с клетками лимфоузлов подвергали оттаиванию для использования. Флаконы извлекали из резервуара LN2 и помещали в водяную баню при 37°С до оттаивания. Содержание флаконов переносили в 15-мл коническую центрифужную пробирку (Corning) и медленно добавляли в пробирку 10 мл модифицированной среды RPMI, описанной выше. Клетки центрифугировали в течение 5 мин при 2000 об/мин, супернатант удаляли. Клетки ресуспендировали в 10 мл свежей среды. Плотность и жизнеспособность клеток определяли с помощью трипанового синего.
Следующий протокол использовали для Ab1 и Ab13
Клетки предварительно смешивали с биотинилированным CGRPa человека следующим образом. Клетки повторно промывали и ресуспендировали из расчета 1Е07 клеток/80 мкл среды. Биотинилированный CGRPa человека добавляли к суспензии клеток в конечной концентрации 5 мкг/мл и инкубировали в течение 30 мин при 4°С. Несвязанный биотинилированный CGRPa человека удаляли посредством двух 10-мл промывок с использованием PBF [PBS, не содержавший Са/Mg (Hyclone), 2 мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), 0,5% бычьего сывороточного альбумина (БСА) (Sigma - без биотина)]. После второй промывки клетки ресуспендировали из расчета 1Е07 клеток/80 мкл PBF и добавляли к суспензии клеток 20 мкл стрептавидиновых гранул MACS® (Miltenyi Biotech, Оберн, штат Калифорния, США) на 10Е7 клеток. Клетки и гранулы инкубировали при 4°С в течение 15 мин и однократно промы
- 72 031065 вали 2 мл PBF на 10Е7 клеток.
Следующий протокол использовали для Ab4, Ab7, Ab9 и Ab11: Биотинилированный CGRPa человека предварительно добавляли к стрептавидиновым гранулам следующим образом. Семьдесят пять микролитров стрептавидиновых гранул (Milteny Biotec, Оберн, штат Калифорния, США) смешивали с huCGRPa, биотинилированным по N-концу (конечная концентрация 10 мкг/мл) и 300 мкл PBF. Указанную смесь инкубировали при 4°С в течение 30 мин, несвязанный биотинилированный CGRPa человека удаляли с использованием разделительной колонки MACS® (Miltenyi Biotec) при промывке 1 мл с целью удаления несвязанного материала. Затем материал выгружали, затем использовали, чтобы ресуспендировать клетки из расчета 100 мкл на 1Е7 клеток, затем инкубировали смесь при 4°С в течение 30 мин и однократно промывали 10 мл PBF.
Как для протокола а), так и б) применимо следующее: После промывки клетки ресуспендировали в 500 мкл PBF и откладывали. Колонку MACS® MS (Miltenyi Biotec, Оберн, штат Калифорния, США) предварительно промывали 500 мл PBF на магнитной подставке (Milteni). Суспензию клеток наносили на колонку через предварительный фильтр и собирали несвязанную фракцию. Колонку промывали 2,5 мл буфера PBF. Колонку снимали с магнитной подставки и помещали на чистую, стерильную 1,5-мл пробирку Эппендорфа. Сверху на колонку добавляли 1 мл буфера PBF и собирали положительные отобранные клетки. Выход и жизнеспособность положительной фракции клеток определяли с помощью окрашивания трипанового синего. Выход положительного отбора составлял в среднем 1% от начальной концентрации клеток.
Для получения информации об уровнях диссеминирования культуры провели предварительный скрининг клеток. Планшеты засевали из расчета 10, 25, 50, 100 или 200 обогащенных В-клеток/лунку. Кроме того, каждая лунка содержала облученные клетки EL-4.B5 (5000 рад) из расчета 50000 клеток/лунку и соответствующий уровень супернатанта активированных Т-клеток кролика (см. публикацию патентной заявки США № 20070269868) (в диапазоне 1-5% в зависимости от препарата) в модифицированной среде RPMI с высоким уровнем глюкозы при конечном объеме 250 мкл/лунку. Культуры инкубировали в течение 5-7 дней при 37°С и 4% CO2.
Скрининг культуры В-клеток по распознаванию антигена (твердофазный ИФА) Для идентификации лунок, продуцирующих антитела против CGRPa человека использовали тот же протокол, что описан для определения титра образцов сыворотки по распознаванию антигена (твердофазный ИФА), со следующими изменениями. Вкратце, планшеты, покрытые нейтравидином, покрывали смесью CGRPa человека, биотинилированного по N- и С-концу (50 мкл на лунку, по 1 мкг/мл каждого из них).
Образцы супернатанта В-клеток (50 мкл) тестировали без предварительного разбавления.
Выявление функциональной активности в супернатантах В-клеток с использованием CGRPзависимой продукции цАМФ
Для выявления функциональной активности в супернатантах В-клеток использовали процедуру, аналогичную описанной для определения функционального титра образцов сыворотки, со следующими изменениями. Вкратце, вместо разбавленных образцов поликлональной сыворотки использовали супернатант В-клеток (20 мкл).
Выделение антиген-специфических В-клеток
Планшеты, содержавшие интересующие лунки, извлекали из холодильника при -70°С, клетки из каждой лунки восстанавливали путем пяти промывок 200 микролитрами среды (10% полная RPMI, 55 мкМ ВМЕ) на лунку. Восстановленные клетки осаждали центрифугированием, супернатант осторожно удаляли. Осажденные клетки ресуспендировали в 100 мкл среды. Для выявления клеток, экспрессирующих антитела, магнитные гранулы, покрытые стрептавидином (М280 Dynabeads, Invitrogen) покрывали комбинацией CGRPa человека, биотинилированного по N- и С-концу. Отдельные партии биотинилированного CGRPa человека оптимизировали путем последовательного разбавления. Затем сто микролитров, содержащие приблизительно 4х10Е7 покрытых гранул, смешивали с ресуспендированными клетками. К указанной смеси добавляли 15 микролитров H&L IgG-FITC козы против антител кролика (Jackson ImmunoResearch), разбавленных средой 1:100.
Двадцать микролитров клеток/гранул/суспензии H&L против антител кролика удаляли и распределяли в виде 5-мкл капель по однолуночным предметным стеклам, предварительно обработанным Sigmacote (Sigma) в общей сложности от 35 до 40 капель на стекло. Для погружения капель использовали непроницаемый барьер из парафинового масла (JT Baker); стекло инкубировали в течение 90 мин в инкубаторе при 37°С и 4% CO2 в темноте.
Специфические В-клетки, продуцирующие антитело, можно было идентифицировать по флуоресцентному кольцу вокруг них, получаемому за счет секреции антител, распознавания биотинилированного антигена, связанного с гранулами, и последующего обнаружения с помощью реагента для флуоресцентного обнаружения IgG. После выявления клетки, представляющей интерес, ее извлекали с помощью микроманипулятора (Eppendorf). Одиночную клетку, синтезирующую и экспортирующую антитело, переносили в микроцентрифужную пробирку, замораживали с помощью сухого льда и хранили при минус 70°С.
- 73 031065
Амплификация и секвенирование последовательностей антител из антигенспецифичных В-клеток
Последовательности антител восстанавливали с помощью комбинированного способа на основе ОТ-ПЦР из одиночной выделенной В-клетки. Для отжига консервативных и константных областей генов иммуноглобулина-мишени (тяжелых и легких цепей), например, последовательностей иммуноглобулинов кролика, разработали праймеры, содержащие сайты рестрикции; для амплификации последовательности антител использовали восстановление на основе двухэтапной вложенной ПЦР. Ампликоны из каждой лунки анализировали на восстановление и целостность по размеру. Затем полученные фрагменты расщепляли с помощью AluI для фингерпринта клональных свойств последовательности. Идентичные последовательности демонстрировали общую картину фрагментации при электрофоретическом анализе. Затем исходные фрагменты ампликона тяжелой и легкой цепей расщепляли по сайтам рестрикции, содержащимся в праймерах для ПЦР, и клонировали в экспрессирующий вектор. Вектор, содержащий субклонированные фрагменты ДНК, амплифицировали и очищали. Последовательность субклонированных тяжелых и легких цепей проверяли до экспрессии.
Рекомбинантная продукция моноклонального антитела с желательной антигенной специфичностью и/или функциональными свойствами
Для определения антигенной специфичности и функциональных свойств антител, восстановленных из специфических В-клеток, векторы, контролирующие экспрессию желательных последовательностей спаренных тяжелых и легких цепей, трансфицировали в клетки HEK-293.
Распознавание антигена рекомбинантными антителами согласно твердофазному ИФА
С целью оценки способности рекомбинантных экспрессируемых антител связываться с CGRPa человека растворы антител тестировали с помощью твердофазного ИФА. Все этапы инкубирования выполняли при комнатной температуре. Вкратце, планшеты Immulon IV (Thermo Scientific) покрывали раствором, содержащим CGRPa (1 мкг/мл в PBS) в течение 2 ч. Затем планшеты, покрытые CGRPa, трижды промывали буфером для промывки (PBS, 0,05% Твин-20). Затем планшеты блокировали с использованием блокирующего раствора (PBS, 0,5% желатина рыбьей кожи, 0,05% Твин-20) в течение приблизительно одного часа. Затем удаляли блокирующий раствор и инкубировали планшеты с последовательными разведениями тестируемого антитела в течение приблизительно одного часа. В конце указанного инкубирования планшет трижды промывали буфером для промывки и дополнительно инкубировали с раствором вторичного антитела (конъюгированный с пероксидазой и аффинно очищенный F(аb')2-фрагмент антитела козы против IgG человека, специфичный по отношению к Fc-фрагменту (Jackson Immunoresearch) в течение приблизительно 45 мин и трижды промывали. В этот момент добавляли раствор субстрата (ТМВ-субстрат пероксидазы, BioFX) и инкубировали в течение 3-5 мин в темноте. Реакцию останавливали добавлением раствора HCl (0,5 М) и считывали планшет при 450 нм с использованием планшет-ридера.
Результаты: фиг. 15-18 демонстрируют, что антитела Ab1-Ab14 против CGRP связывались с CGRPa и распознавали его.
Оценка функциональных характеристик рекомбинантных антител путем модуляции CGRPзависимых внутриклеточных уровней цАМФ и перекрестной реакционноспособности с CGRP крысы
Для оценки способности рекомбинантного экспрессируемого антитела ингибировать CGRPaопосредованные повышенные клеточные уровни анализа цАМФ использовали аналитический набор на основе электрохемилюминесценции (Meso Scale Discovery, MSD). Вкратце, препараты антител, подлежащие тестированию, последовательно разбавляли в буфере для анализа MSD (Hepes, MgC12, pH 7,3, 1 мг/мл блокатора A, Meso Scale Discovery) в 96-луночном круглодонном полистирольном планшете (Costar). В указанный планшет добавляли CGRPa человека (конечная концентрация 25 нг/мл), разбавленный буфером для анализа MSD, и инкубировали в течение одного часа при 37°С. Согласно указаниям изготовителя аналитического набора использовали соответствующие контроли. Клетки нейроэпителиомы человека (SK-N-MC, АТСС) отделяли с помощью раствора ЭДТА (5 мМ) и промывали ростовой средой (MEM, 10% FBS, антибиотики) посредством центрифугирования. Количество клеток доводили до 2 миллионов клеток на мл в буфере для анализа и добавляли IBMX (3-изобутил-1-метилксантин, 50 мМ, Sigma) до конечной концентрации 0,2 мМ непосредственно перед загрузкой клеток в планшет для анализа цАМФ. Раствор антитела против CGRPa человека инкубировали в течение одного часа, после чего 20 мкл раствора, содержащего клетки, переносили в планшет для анализа цАМФ. Все образцы тестировали в двух повторностях с соответствующими контролями. Десять микролитров клеток добавляли в лунки и инкубировали планшет в течение 30 мин при встряхивании. Во время инкубирования клеток с раствором CGRP готовили стоп-раствор путем получения раствора TAG-меченого цАМФ (MSD) в лизирующем буфере (MSD) в разбавлении 1:200. Для остановки инкубирования клеток с CGRP к клеткам добавляли 20 микролитров стоп-раствора и инкубировали планшет в течение одного часа при встряхивании. Буфер для считывания (MSD) разбавляли в четыре раза водой и добавляли 100 мкл в каждую лунку планшета. Затем планшет считывали с помощью Sector Imager 2400 (MSD) и использовали программное обеспечение Prism для аппроксимации данных и определения IC50.
Для проверки способности рекомбинантных антител противодействовать человеческому CGRP$
- 74 031065 выполнили аналогичный анализ с замещением агониста CGRP (конечная концентрация CGRP$ 10 нг/мл). Оценка рекомбинантных антител по отношению к распознаванию и ингибированию синтеза цАМФ, опосредованного CGRP крысы, проводили с использованием CGRP крысы (конечная концентрация 5 нг/мл) и линии клеток крысы L6 (АТСС).
Результаты: фиг. 19-37 демонстрируют, что антитела Ab1-Ab14 против CGRP ингибировали повышенные уровни цАМФ в клетке, опосредованные CGRPa, CGRP[J> и CGRP крысы.
Пример 2
Ферментативное получение Fab-фрагментов
Гидролиз папаином проводили с использованием иммобилизованного папаина (Thermo/Pierce) в соответствии с инструкциями изготовителя. Вкратце, очищенные антитела инкубировали в цистеин/HClбуфере с иммобилизованным папаином при 37°С и осторожном встряхивании. Гидролиз контролировали путем отбора аликвот и анализа отщепления тяжелой цепи с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ. Для остановки реакции удаляли иммобилизованный папаин, смесь промывали с помощью 50 мМ Трис, рН 7,5 и фильтровали. Негидролизованное полноразмерное антитело и Fc-фрагменты удаляли с помощью колонки MabSelectSure (GE).
Пример 3
Экспрессия в дрожжевых клетках
Конструирование экспрессирующих векторов Pichia pastoris для тяжелой и легкой цепи.
Фрагменты гуманизированной легкой и тяжелой цепи коммерчески синтезировали и субклонировали в экспрессирующем векторе pGAP. Экспрессирующий вектор pGAP использовал GAP-промотор для контроля экспрессии иммуноглобулиновой цепи и лидерную последовательность человеческого сывороточного альбумина (ЧСА) для экспорта. Кроме того, указанный вектор содержал обычные элементы, например, бактериальный сайт инициации репликации и копию гена устойчивости к канамицину, придававшего P. pastoris устойчивость к антибиотику G418. G418 обеспечивал средство отбора штаммов, содержавших желательный экспрессирующий вектор, интегрированный в их геном.
Трансформация экспрессирующих векторов в гаплоидные штаммы-хозяева met1 и lys3 Pichia pastoris
Все способы, используемые для трансформации гаплоидных штаммов P. pastoris и манипуляции половым циклом P. pastoris выполняли, как описано в Pichia Protocols (Methods in Molecular Biology Higgings, D.R. and Cregg, J.M., Eds. 1998. Humana Press, Totowa, NJ). Перед трансформацией каждый вектор переводили в линейную форму в пределах последовательностей GAP-промотора для стимуляции интеграции вектора в локус GAP-промотора генома P. pastoris. Гаплоидные штаммы трансфицировали с помощью электропорации и отбирали успешные трансформанты на чашках с YPDS (дрожжевой экстракт, пептон, декстроза с сорбитом) агаром с G418. Количество копий генов тяжелых и легких цепей определяли в гаплоидных штаммах с помощью саузерн-блоттинга. Затем скрещивали гаплоидные штаммы и осуществляли отбор по способности расти в отсутствие маркеров аминокислот (т.е. Lys и Met). Затем полученные диплоидные клоны подвергали окончательному саузерн-блоттингу для подтверждения количества копий генов тяжелых и легких цепей. Клон, экспрессировавший интересующее антитело, выбирали с помощью биосенсоров на основе белка А, использующих интерферометрию в биослое для контроля экспрессии (Octet, ForteBio).
Пример 4
Экспрессия Ab3, Ab6 и Ab14 в Pichia pastoris
Для экспрессии полноразмерного антитела сконструировали три штамма Pichia. Для всех штаммов, экспрессирующих полноразмерное антитело, создали гаплоидные штаммы, а затем выполнили их скрещивание. Один гаплоидный штамм экспрессировал полноразмерную последовательность легкой цепи, а другой гаплоидный штамм экспрессировал полноразмерную последовательность тяжелой цепи. Каждый диплоидный штамм использовали для получения исследовательского банка клеток и для экспрессии в биореакторе.
Вначале размножали инокулят с помощью исследовательского банка клеток в среде, состоящей из следующих питательных веществ (%, мас./об): дрожжевой экстракт 3%, безводная декстроза 4%, YNB 1,34%, биотин 0,004% и 100 мМ фосфат калия. Для получения инокулята для ферментеров банк клеток размножали приблизительно в течение 24 ч в инкубаторе с качалкой при 30°С и 300 об/мин. Затем 10% инокулят добавляли в резервуары Labfors с рабочим объемом 2,5 л, содержащие 1 л стерильной ростовой среды. Ростовая среда состояла из следующих питательных веществ: сульфат калия 18,2 г/л, одноосновный фосфат аммония 36,4 г/л, двухосновный фосфат калия 12,8 г/л, гептагидрат сульфата магния 3,72 г/л, дигидрат цитрата натрия 10 г/л, глицерин 40 г/л, дрожжевой экстракт 30 г/л, микроэлементы РТМ1 4,35 мл/л и пеногаситель 204 1,67 мл/л Раствор микроэлементов РТМ1 состоял из следующих компонентов: пентагидрат сульфата меди 6 г/л, иодид натрия 0,08 г/л, гидрат сульфата марганца 3 г/л, дигидрат молибдата натрия 0,2 г/л, борная кислота 0,02 г/л, хлорид кобальта 0,5 г/л, хлорид цинка 20 г/л, гептагидрат сульфата железа (II) 65 г/л, биотин 0,2 г/л и серная кислота 5 мл/л.
Параметры управления процессом в биореакторе устанавливали следующим образом: Перемешивание 1000 об/мин, воздушный поток 1,35 стандартных литров в минуту, температура 28°С, рН поддержи
- 75 031065 вали на уровне шести с помощью гидроксида аммония. Дополнительную подачу кислорода не осуществляли.
Культуры для ферментации выращивали в течение приблизительно 12-16 ч до израсходования исходного глицерина, на что указывал пик концентрации растворенного кислорода. Культуры поддерживали без источника углерода в течение приблизительно трех часов после пика растворенного кислорода. После указанного периода голодания в реактор добавляли болюс этанола из расчета конечной концентрации этанола 1% (мас./об). Культуры для ферментации оставляли уравновешиваться в течение 15-30 мин. Подачу питательной среды начинали через 30 мин после болюсного добавления этанола и устанавливали на постоянной скорости 1 мл/мин на 40 мин, затем насос среды контролировали с помощью датчика этанола, поддерживая концентрацию этанола 1% в течение оставшегося времени, с использованием датчика-зонда этанола (Raven Biotech). Питательная среда состояла из следующих компонентов: дрожжевой экстракт 50 г/л, глюкоза 500 г/л, гептагидрат сульфата магния 3 г/л, и микроэлементы РТМ1 12 мл/л. Для ферментации полноразмерных Ab6 и Ab14 в питательную среду также добавляли дигидрат цитрата натрия (0,5 г/л). Общее время ферментации составляло приблизительно 90 ч.
Пример 5
Способы гуманизации антител
Способы гуманизации антител были описаны ранее в опубликованном патенте США № 7935340, раскрытие которого полностью включено в настоящий документ посредством ссылки. В некоторых случаях требовалось определение необходимости дополнительных остатков каркасных областей кролика для поддержания активности. В некоторых случаях для минимизации потерь сродства или активности гуманизированных антител все еще требовались некоторые критические остатки каркасных областей кролика. В этих случаях для получения желательной активности было необходимо вновь заменить одну или несколько аминокислот каркасной области из последовательностей эмбрионального типа человека на исходные аминокислоты кролика. Указанные изменения определяли экспериментально с целью идентификации остатков последовательности кролика, необходимых для сохранения сродства и активности. Они располагались в конце гуманизированной аминокислотной последовательности вариабельной области тяжелой и легкой цепи.
Пример 6
Ингибирование связывания CGRP с его клеточным рецептором
Для оценки способности рекомбинантно экспрессируемых антител ингибировать связывание CGRP с его клеточным рецептором выполняли анализ связывания радиоактивного лиганда, как описано ранее [Elshourbagy et al, Endocrinology 139:1678 (1998); Zimmerman et al, Peptides, 16:421 (1995)]. Использовали мембранные препараты рекомбинантных рецепторов CGRP человека, рецептора, подобного рецептору кальцитонина, и RAMP1 (Chemiscreen, Millipore). Разбавления антител предварительно инкубировали с CGRPa человека, меченным 125I (0,03 нМ) в течение 30 мин при комнатной температуре. Неспецифическое связывание оценивали в присутствии 0,1 мкМ CGRPa человека. Мембраны фильтровали и промывали. Затем выполняли подсчет частиц на фильтрах для определения специфически связанного CGRPa человека, меченного I.
Результаты: фиг. 38 демонстрирует, что антитела Ab1-Ab13 против CGRP ингибировали связывание CGRP с его клеточным рецептором.
Пример 7
Ингибирование нейрогенного расширения сосудов антителами против CGRP у крыс
CGRP является мощным сосудорасширяющим фактором (Nature 313: 54-56 (1985) и Br J. Clin. Pharmacol. 26(6):691-5. (1988)). Для оценки антител против CGRP использовали фармакодинамический анализ для неинвазивного измерения активности, антагонистической рецептору CGRP. Данная модель основана на изменениях в кожном кровотоке, измеряемых с помощью лазерной допплеровской визуализации после наружного применения раствора капсаицина. Капсаицин активирует транзиторный рецепторный потенциал рецептора ваниллоидов 1 типа (TRPV-1), приводя к нейрогенному воспалению и расширению сосудов за счет локального высвобождения вазоактивных медиаторов, включая CGRP и вещество Р (Br. J. Pharmacol 110: 772-776 (1993)).
На день до анализа расширения сосудов животным в/б (внутрибрюшинно) вводили тестируемый агент или контроль. После введения дозы животных брили и депилировали в области поясницы со стороны спины на площади приблизительно 2x6 см. Затем животных возвращали в клетки на ночь. В день анализа, приблизительно через 24 ч после введения дозы, животных анестезировали газообразным изофлураном, помещали на термостатируемую грелку-матрац и оснащали носовым конусом для непрерывной доставки изофлурана. Для наблюдения за расширением сосудов использовали лазерный допплеровский тепловизор. Пучок когерентного красного света, генерируемого 633-нм гелий-неоновым лазером, направляли на выбритую прямоугольную область площадью 2x6 см и сканировали в режиме среднего разрешения. Вначале получали исходную доплеровскую сканограмму и заранее определяли расположение размещения О-кольца путем выявления двух областей с одинаково низким потоком. На выбранные области помещали два резиновых О-кольца (диаметром ~ 1 см) и выполняли исходное сканирование.
- 76 031065
Непосредственно после завершения сканирования в области каждого из двух О-колец наносили 1 мг капсаицина в 5 мкл раствора этанол: ацетон (1:1). Допплеровское сканирование повторяли через 2,5; 5; 7,5; 10; 12,5; 15; 17,5; 20; 22,5; 25; 27,5 и 30 мин после нанесения капсаицина. Процентное изменение по сравнению с исходным средним потоком в каждом из двух О- колец наносили на график результатов расширения сосудов, обусловленного капсаицином.
Для тестирования способности рекомбинантно экспрессируемых антител ингибировать связывание CGRP с его клеточным рецептором выполняли анализ связывания радиоактивного лиганда, как описано ранее.
Результаты: фиг. 39 и 40 демонстрируют, что антитела Ab3 и Ab6 против CGRP снижали расширение сосудов в указанной модели после введения капсаицина.
Пример 8
Действие введения антитела против CGRP на гиперактивность мочевого пузыря
Эксперименты проводили с целью оценки потенциальной эффективности введения антитела против CGRP на удержание мочи в мочевом пузыре и гиперактивность мочевого пузыря. Удержание мочи в мочевом пузыре является равновесием между закрытием уретры и активностью сжимающей мышцы, а гиперактивность мочевого пузыря является состоянием, характеризующимся неотложными позывами, недержанием мочи, частым мочеиспусканием и никтурией. Некоторые бессистемные данные, приведенные в литературе, указывают, что CGRP может быть вовлечен в удержание мочи и может коррелировать с и, возможно, являться причиной патологической гиперактивности мочевого пузыря. Соответственно, существовала надежда, что антитела против CGRP по изобретению, особенно учитывая их высокое сродство к CGRP, потенциально могли помочь предотвратить или смягчить это, иногда инвалидизирующее, состояние. (Доказательство того, что CGRP может участвовать в гиперактивности мочевого пузыря, включает тот факт, что CGRP присутствует в мочевыводящих путях, DRG и спинном мозге (Wharton et al., 1986 Neurosci (3):727). Кроме того, афферентные С-волокна важны для проведения импульсов, участвующих в мочеиспускании, в спинной мозг (Yoshida et al., 2011 J Pharmacol Sci (112): 128), a CGRP влияет на указанные волокна. Кроме того, сообщалось, что внутрипузырное введение ботокса подавляет CGRP и значительно снижает интервал между сокращениями в модели боли в мочевом пузыре, вызванной уксусной кислотой (Chuang et al., 2004 J Urol (172): 1529; Chuang et al., 2009 J Urol (182):786)). Кроме того, недавно сообщалось, что введение антитела против CGRP якобы снижало количество сокращений мочевого пузыря в модели гиперактивности мочевого пузыря, индуцированной скипидаром (Pfizer заявка на патент РСТ WO 2011/024113)).
Материалы и способы
Животные
Самок крыс Sprague-Dawley (247 - 299 г) (Charles River Faboratories, Сен-Жермен-сюр-л'Арбрель, Франция) доставили в лабораторию не позднее по меньшей мере за 5 дней до экспериментов с целью их акклиматизации в лабораторных условиях. Их разместили по 3 на клетку (полипропиленовые клетки типа Е размером 1032 см2) и содержали с неограниченным доступом к пище (корм для грызунов Teklad 2016 global rodents, Harlan 03800 Гана, Франция) и воде. Подстилку из опилок (Souralit 2912 плюс, Souralit, 17080 Жирона, Испания) для клеток грызунов меняли два раза в неделю. Животных содержали при комнатной температуре (20 ± 2°С) с циклом чередования свет-темнота 12/12 ч (светлая фаза с 7 до 19 ч) и относительной влажности 40-70%.
Лабораторное оборудование
Катетеры для мочевого пузыря присоединяли с помощью Т-трубки к тензодатчику MX 860 Novatrans III Gold (Medex Medical SARL, Нант-Каркефу, Франция) и шприцевому насосу (70-2208 Model II plus, Harvard Apparatus, Лез-Юлис, Франция и Razel R-99E, Fisher Bioblock, Илькирш, Франция). Внутрипузырное давление непрерывно регистрировали с использованием интерфейса PowerFab (ADInstruments Pty Ltd, Касл-Хилл, Австралия) и программного обеспечения Chart®, работающего на ПК. Данные анализировали с помощью программного обеспечения Microsoft Excel®.
Тестируемые соединения
Тестируемое антитело против CGRP (Ab3)
Антитело отрицательного контроля (антитело против дигитоксина).
Реактивы
Физиологический раствор (0,9% NaCl) (№ партии 11043411, № CAS 7647-14-5) приобрели в BBraun через Centravet (Лапалис, Франция).
Анестетик
Уретан (№ партии ВСВС9294, № CAS 51-79-6) и фенобарбитал натрия (№ партии 150А1, № CAS 76-74-4) были поставлены Sigma-Aldrich (Сен-Кантен-Фаллавье, Франция) и Centravet (Лапалис, Франция), соответственно.
Экспериментальные группы
В экспериментах использовали две экспериментальные группы по 10 крыс. Каждой группе вводили 10 мг/кг контроля или антитела против CGRP
- 77 031065
Схема исследования
Экспериментальная процедура
Самкам крыс вводили тестируемое антитело или антитело отрицательного контроля внутривенно в дозе 10 мг/кг за 18 ч до экспериментов с использованием инъекции в хвостовую вену. Пятнадцать (15) ч спустя крыс анестезировали уретаном (1,2 г/кг, подкожно (п/к). Через три (3) часа после п/к введения уретана в мочевой пузырь вводили полиэтиленовый катетер (с внутренним и наружным диаметром 0,58 и 0,96 мм, соответственно) через купол и закрепляли кисетным швом. Температуру тела поддерживали при 37 ± 2°С (контроллер TCAT-2LV, Physitemp, ADInstruments Pty Ltd., Касл-Хилл, Австралия) в течение всего эксперимента.
Цистометрический эксперимент
Цистометрические исследования проводили на наркотизированных самках крыс после операции. Физиологический раствор при комнатной температуре непрерывно вливали в мочевой пузырь при постоянной скорости потока (2 мл/ч) в течение по меньшей мере 30 мин.
В конце цистометрических экспериментов животных умерщвляли с помощью смертельной инъекции (1 мл) пентобарбитала натрия (54,7 мг/мл) (№ CAS 76-74-4) с последующим смещением шейных позвонков.
Цистометрические параметры
Измеряемыми цистометрическими параметрами являлись:
Амплитуда мочеиспускания (AM), т. е. давление между пороговым давлением и максимальным давлением мочеиспускания (мм рт.ст.),
Интервал между сокращениями (ICI), т. е. время между двумя последовательными мочеиспусканиями (с),
Частота мочеиспускания (MF), т. е. количество сокращений мочеиспускания/15 мин (пиков/15 мин).
Критерии исключения
Двух крыс исключили из экспериментов: Одну из них исключили ввиду гиперактивности мочевого пузыря во время внутрипузырного вливания физиологического раствора, а другую - потому, что глубина анестезии менялась в ходе эксперимента, что вызывало модификации цистометрического профиля.
Анализ результатов
Для каждой крысы рассчитывали значения AM и ICI как среднее за последние четыре-пять мочеиспусканий во время вливания физиологического раствора. Значения MF рассчитывали как среднее по количеству мочеиспусканий, полученных для двух 15-минутных интервалов во время вливания физиологического раствора.
Результаты представлены в виде средние значения ± стандартная ошибка среднего (± sem). Фигуры и статистические анализы выполняли с использованием GraphPad Prism® (версия 4; GraphPad Software Inc., Ла-Хойя, штат Калифорния, США).
Статистическое сравнение значений (вливание физиологического раствора) в группе антитела против CGRP по сравнению с контрольной группой антител проводили с использованием t-критерия Стьюдента для независимых выборок.
Р < 0,05 принимали за статистическую значимость.
Результаты
Как показано на фиг. 41, ICI был значительно выше, a MF - значительно ниже в группе, обработанной антителом против CGRP (фиг. 41А и В соответственно; р < 0,05, t-критерий Стьюдента для независимых выборок). Значимого различия для AM между группами не наблюдали (фиг. 41С, р > 0,05, tкритерий Стьюдента для независимых выборок).
Эти результаты показывают, что антитела против CGRP можно применять для предотвращения или облегчения гиперактивности мочевого пузыря, улучшения удержания мочи и лечения связанных с ними состояний мочевыделительной системы.
Пример 9
Облегчение невропатической боли у крыс
Повреждение периферических нервов часто приводит к хронической рефлекторной боли невропатического происхождения. Указанный болевой синдром состоит из чувствительности к внешним раздражителям (например, механическим и/или тепловым), которые обычно не вызывают боли. Как следствие, невропатическая боль не поддается традиционным подходам к обезболиванию, что затрудняет ее лечение. Невропатическую боль можно экспериментально смоделировать у животных с помощью хирургической травмы периферических нервов. Модель Чанга является одной из таких систем, где невропатическую боль индуцируют путем перевязки спинномозговых нервов L5 и L6.
В данном Примере перевязку спинномозгового нерва проводили на самцах крыс Sprague Dawley. У них тестировали болевую чувствительность на 13-й день (подтверждение аллодинии), а затем вновь после каждого введения Ab2 с помощью теста механической аллодинии фон Фрея для оценки возможной активности против аллодинии.
- 78 031065
Способы
Самцов крыс Sprague Dawley (Harlan baboratories) массой 200-225 г по прибытии вынимали из коробок и размещали в клетках. Каждое животное подвергали санитарному осмотру, включая оценку состояния шерсти, конечностей и отверстий. Каждое животное также проверяли на предмет любых аномальных признаков позы или при движении. Обнаружено, что все животные были здоровы, и их включили в исследование.
Крыс акклиматизировали в течение минимум двух дней до начала экспериментальных процедур, за исключением рандомизации массы тела, которую зарегистрировали на следующий день после прибытия. Животных содержали по отдельности в прозрачных поликарбонатных стандартных клетках или прозрачных поликарбонатных клетках-микроизоляторах с сертифицированной облученной контактной подстилкой. Доступ к пище и воде предоставили без ограничений. Климат-контроль установили на поддержание температуры 18-26°С (64-79°F) при относительной влажности от 30 до 70%. Поддерживали цикл свет:темнота 12:12 ч.
Исходный порог тестировали у крыс с помощью нитей фон Фрея в дни акклиматизации -4 или -1.
В день 0 животных подвергли процедуре перевязки спинномозгового нерва. Все операции выполняли асептически. Перед операцией крыс анестезировали. Область спины брили и подготавливали для асептической операции. Крыс помещали в положение лежа на брюхе и делали надрез чуть левее средней линии в области b4 - S2. Левые околопозвоночные мышцы отделяли от остистых отростков (b4 - S2). Перегибали дугоотростчатый сустав L6 - S1 и осторожно обрезали поперечный отросток, чтобы обеспечить пространство для доступа к спинномозговым нервам L4 и L5. Левые спинномозговые нервы L5 и L6 выделяли и перевязывали 6,0 шелковыми швами. Затем закрывали разрез соответствующим шовным материалом и зажимами для кожных ран. После операции животным вводили раствор Рингера с лактатом (3,0 - 5,0 мл) путем подкожной инъекции.
У всех животных из групп 1 и 2 проводили тест фон Фрея в дни -4 или -1, 13, 14 и 17. Измерение в день 13 выполняли перед введением дозы. Тест механической аллодинии фон Фрея оценивает антиноцицептивные свойства обезболивающих соединений. В данном тесте животных вначале приучают к испытательной камере, чтобы они были достаточно спокойны для оценки их болевого порога. Лаборант, не имеющий информации об экспериментальных группах, оказывает легкое давление на левую заднюю лапу крысы с использованием набора градуированных нейлоновых нитей (нитей фон Фрея) с увеличивающимся диаметром. Нитями перпендикулярно нажимают на брюшную поверхность лапы, пока они не согнутся. При ощущении боли крыса реагирует путем отдергивания лапы. Порог аллодинии определяли с помощью способа Chaplan вверх-вниз (Chaplan et al., J Neurosci Methods, 53:55-63, 1994), обеспечивающего точную силу для отдергивания для каждой крысы с помощью психофизической шкалы тестирования.
Животных распределяли на две экспериментальные группы на 13 день, основываясь на показателях фон Фрея. Животных, у которых показатель фон Фрея превышал 6 г, исключили из исследования. Средние показатели фон Фрея для каждой группы изучали для гарантии того, что средние значения и стандартное отклонение удовлетворяли предположению однородности. Дозы однократно вводили путем в/б инъекции в день 13 (через 13 дней после операции) для группы 1 (Ab2) и группы 2 (антитело отрицательного контроля) (11 животных в каждой группе; Ab2 и антитела отрицательного контроля вводили в дозе 10 мг/кг). Группа 1 получила дополнительную в/в болюсную (для вывода из наркоза) инъекцию Ab2 в день 17 до тестирования поведения.
Образцы крови группы 1 для получения плазмы собирали в день 17 и анализировали титр Ab2.
За исключением ожидаемых наблюдений в области операции и приволакивания лапы, связанных с операцией Чанга, аномальных наблюдений зафиксировано не было. Оказалось, что лечение не оказывало отрицательного влияния на общее состояние здоровья животного и не нарушало нормального увеличения массы тела, ожидаемого у крыс этого возраста.
Результаты
У всех животных, подвергавшихся исходному тестированию до операции в день 0, показатель фон Фрея составлял 15 (не приведено), что указывало на нормальную чувствительность. На 13-й день (перед введением антитела) показатели фон Фрея у всех животных были ниже 6 г, что указывало на развившуюся чувствительность к внешним механическим раздражителям, за исключением двух животных, исключенных из исследования. Средние показатели фон Фрея на 13 день составляли менее 3 г (фиг. 42, левая группа столбиков). После тестирования в день 13 животным вводили Ab2 или антитело отрицательного контроля (10 мг/кг). В дни 14 и 17 повторно тестировали показатели фон Фрея, и они были выше в Ab2обработанных животных, чем в контрольной группе (фиг. 42, средняя и правая группы столбиков, соответственно).
Эти результаты показывают, что лечение антителом против CGRP, например, Ab2, может помочь предотвратить или облегчить нейропатическую боль.
Пример 10
Первый эксперимент по оценке действия введения антитела против CGRP на анальгезию (модель подергивания хвоста)
- 79 031065
Три различных эксперимента (Примеры 10-12) проводили с целью оценки потенциальной эффективности введения антитела против CGRP на анальгезию или боль. Во всех указанных экспериментах использовали модель реакции подергивания хвоста грызунов (также называемую отдергиванием хвоста), поскольку реакция подергивания хвоста грызуна на тепловое излучение является широко используемой моделью для обнаружения потенциально полезных анальгетиков. Этот анализ особенно полезен для различения морфиноподобных анальгетиков центрального действия (активных) и неопиоидных противовоспалительных средств или противовоспалительных средств периферического действия (неактивных). Модель животного, а также способы и материалы, использованные здесь, описаны ниже.
Материалы и способы
Животные: Самцы крыс Sprague Dawley массой 150 ± 20 г.
Тестируемое антитело против CGRP: Ab2
Среда-носитель: 15 мМ гистидина, 250 мМ сорбита, рН 5,5
Анальгетик: Морфин
Процедуры реакции подергивания хвоста: Время (в секундах), необходимое для того, чтобы вызвать реакцию подергивания хвоста, вызванную сфокусированным тепловым излучением, измеряли как болевой порог в группах из 10 самцов крыс Sprague Dawley массой 150 ± 20 г. Исходное тестирование реакции подергивания хвоста выполнили в день 0. Крыс, характеризовавшихся реакцией подергивания хвоста 3-5 секунд, включили в исследование и распределили по сбалансированным экспериментальным группам на основании исходных реакций подергивания хвоста. Использовали 15-секундную отсечку во избежание повреждения тканей.
Развитие устойчивости к морфину
Каждая из 3 групп по 10 самцов крыс Sprague Dawley получала среду-носитель -физиологический раствор (2 мл/кг) 2 раза в день (утром и вечером) путем в/б введения. Кроме того, одной из 3 групп дополнительно в/б вводили анальгетик (морфин) в дозе 5 мг/кг 2 раза в день в течение 7 последовательных дней. Второй из 3 групп крыс в/б вводили антитело против CGRP по изобретению (Ab2) в дозе 10 мг/кг в виде однократного болюса в день 0. Затем каждую крысу в различных группах тестировали на реакцию подергивания хвоста раз в день через 30 мин после утренней дозы.
Для сравнения групп, получавших контрольную среду-носитель и тестируемое соединение, использовали однофакторный дисперсионный анализ с последующим t-критерием Даннетта. Р < 0,05 считали значимым.
Результаты указанных экспериментов показаны на фиг. 43. Результаты показывают, что тестируемое антитело против CGRP при введении в дозе 10 мг/кг вызывало значимый длительный обезболивающий эффект при термическом болевом раздражителе. Конечные образцы крови всех протестированных крыс собирали путем пункции сердца и впоследствии анализировали на титр Ab2.
Пример 11
Второй эксперимент по подергиванию хвоста для оценки действия антитела против CGRP на анальгезию (титрование дозы антитела)
Второй набор экспериментов по подергиванию хвоста проводили с целью оценки действия различных доз антитела против CGRP на анальгезию с помощью антитела против
CGRP по изобретению (Ab2). Крысы, используемые в указанных экспериментах, были аналогичны крысам, использованным в предыдущем эксперименте; протокол подергивания хвоста также был практически аналогичен. В указанном эксперименте сравнивали анальгезию в различных группах животных, получавших различные дозировки антитела против CGRP с целью оценки влияния дозировки на анальгезию. Во второй серии экспериментов сравнивали пять групп подопытных животных следующим образом. Первая контрольная группа животных получала только среду-носитель (15 мМ гистидина, 250 мМ сорбита, рН 5,5), 3 группы животных получали различные дозировки одного и того же антитела против CGRP, содержащегося в среде-носителе (Ab2, соответственно вводимое в дозировках 1 мг/кг, 3 мг/кг или 10 мг/кг в день 0), а пятая группа животных получала 10 мг/кг антитела отрицательного контроля (антитела против дигитоксина) также в день 0.
Протоколы подергивания хвоста в остальном выполнялись практически как описано выше. Для сравнения групп, получавших контрольную среду-носитель, антитело отрицательного контроля и тестируемое антитело против CGRP, оценку результатов вновь выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим t-критерием Даннетта. Р < 0,05 считали значимым.
Результаты указанных экспериментов показаны на фиг. 44. На ней видно, что более высокие дозировки тестируемого антитела (антитело Ab2 против CGRP по изобретению) оказывали обезболивающее действие лучше, чем более низкие дозировки. Как и ожидалось, антитело отрицательного контроля не оказывало заметного влияния на анальгезию по сравнению с контрольными группами.
Пример 12
Третий эксперимент по подергиванию хвоста для оценки действия совместного введения антитела против CGRP и морфина на анальгезию
Третий набор экспериментов по подергиванию хвоста также проводили с целью оценки действия
- 80 031065 совместного введения антитела против CGRP и морфина на анальгезию. В указанных экспериментах первой группе животных вводили только ту же среду-носитель в дозировке 5 мл/кг. Второй группе животных вводили морфин в дни 1-10 в дозировке 5 мг/кг два раза в день, причем таким животным в день 0 также вводили антитело Ab2 против CGRP в дозировке 10 мг/кг. Третьей группе животных вводили морфин только в дни 1-4 также в дозировке 5 мг/кг два раза в день, и дополнительно вводили антитело Ab2 в день 0 в дозировке 10 мг/кг. Все препараты вводили в/б.
Эксперименты по подергиванию хвоста выполняли в каждой из указанных групп животных ежедневно в дни 0-10. Для сравнения групп, получавших контрольную среду-носитель, антитело отрицательного контроля и тестируемое антитело против CGRP, оценку результатов указанных экспериментов по подергиванию хвоста вновь выполняли с использованием однофакторного дисперсионного анализа с последующим t-критерием Даннетта. Р < 0,05 считали значимым.
Сводные результаты указанного сравнения показаны на фиг. 45. Животные, обработанные Ab2, получавшие ежедневную дозу морфина в течение всего эксперимента, демонстрировали устойчивость к морфину, и после дня 5 время подергивания хвоста уменьшилось почти до уровня контрольных животных, получавших среду-носитель. В противоположность этому, у животных, обработанных Ab2, получавших морфин только до дня 4, время подергивания хвоста улучшилось на 5-й день и оставалось улучшенным до дня 8. Результаты показывают, что введение антитела против CGRP могло оказывать обезболивающее действие даже после начала устойчивости к морфину, которое могло быть более выраженным при отмене морфина.
Пример 13
Облегчение висцеральной боли у крыс
Пациенты, страдающие от синдрома раздраженного кишечника (СРК), демонстрируют более низкий висцеральный сенсорный порог при растяжении толстой кишки с помощью баллона (Ritchie, Gut, 1973, 14:125-32). Предполагают, что при СРК усиливается болевая чувствительность оси головной мозгкишечник при нормальной картине активации. Ранее было показано, что введение тринитробензолсульфоновой кислоты (TNBS) в проксимальный отдел толстой кишки вызвало хроническую гиперчувствительность толстой кишки, измеряемой у бодрствующих крыс по снижению порога болевой чувствительности в ответ на растяжение толстой кишки (Diop et al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 2002, 302:1013-22). Указанная хроническая гиперчувствительность обнаруживалась в дистальном невоспаленном отделе толстой кишки и сохранялась в течение 21 дня. Это имитировало некоторые характеристики СРК и поэтому может использоваться в качестве модели для экспериментального исследования патофизиологических аспектов этого расстройства. Указанный анализ используют для определения потенциального антигиперчувствительного действия соединений против TNBS-индуцированной гиперчувствительности толстой кишки.
Несколько исследований подразумевали участие CGRP в висцеральной боли (Friese et al., Regul Pept 1997;70:l-7; Gschossmann et al., Neurogastroenterol Motil 2001;13:229-36; Julia and Bueno, Am J Physiol 1997;272:G141-6; Plourde et al., Am J Physiol 1997; 273:G191-6). CGRP является наиболее распространенным пептидом капсаицин-чувствительных афферентных волокон желудочно-кишечного происхождения, что составляет до 80% от общей иммунореактивности пептида (Clague et al., Neurosci Lett 1985;56:63-8; Sternini et al., Gastroenterology 1987;93:852-62). Кроме того, инъекция CGRP вызывает гиперчувствительность толстой кишки в модели TNBS (Delafoy et al., 2006, Gut 55:940-5), которая устраняется за счет пептида-антагониста CGRP (CGRP 8-37).
В настоящем примере описано тестирование антитела против CGRP в модели висцеральной боли (TNBS-индуцированной хронической гиперчувствительности толстой кишки) у крыс.
Способы
В данное исследование включали самцов крыс Sprague-Dawley массой 390-450 г на дату операции. Их содержали в комнате с контролируемой температурой (19,5 - 24,5°С) и относительной влажностью (45% - 65%) при 12-ч цикле свет/темнота. Животных содержали по 2 или 3 на клетку и наблюдали во время периода акклиматизации (по меньшей мере 5 дней) перед испытанием. Каждую крысу идентифицировали по хвостовой метке. Исследование проводили в соответствии с рекомендациями Комитета по исследованиям и этическим проблемам I.A.S.P. (1983) и Европейскими методическими руководствами 2010/63/UE.
Чувствительность толстой кишки индуцировали путем хирургического введения тринитробензолсульфоновой кислоты (TNBS, 50 мг/кг) за 7 дней до тестирования поведения. Животных подвергали операции натощак (24 ч). Вкратце, под анестезией (ацепромазин 5 мг/кг/кетамин 30 мг/кг) выполняли инъекцию TNBS (50 мг/кг, 1 мл/кг) в проксимальную часть толстой кишки (в 1 см от слепой кишки). После операции животных возвращали в их клетки в регулируемой среде, и кормили без ограничения до даты тестирования через 7 дней. Наивных животных (крыс, не подвергавшихся операции) размещали в тех же условиях.
Животным внутривенно вводили антитело Ab2 против CGRP или антитело отрицательного контроля (и то, и другое в дозе 10 мг/кг) за 24 ч до определения порога толстой кишки. В данное исследование включили три группы крыс
- 81 031065
Группа 1: Наивная группа, состоявшая из животных, не подвергавшихся операции или обработке TNBS в день -7 и получавших контрольное антитело за 24 ч (т.е. в день -1) до тестирования (т.е. измерения порога растяжения толстой кишки в день 0) (п = 7).
Группа 2: Группа TNBS, состоявшая из животных, подвергавшихся операции в день -7 и получавших контрольное антитело за 24 ч (т.е. в день -1) до тестирования (т.е. измерения порога растяжения толстой кишки в день 0) (n = 8).
Группа 3: Обработанная группа, состоявшая из животных, подвергавшихся операции в день -7 и получавших Ab2 за 24 ч (т.е. в день -1) до дня тестирования (т.е. измерения порога растяжения толстой кишки в день 0) (n = 8).
Через семь дней (день 7) после инъекции TNBS чувствительность толстой кишки оценивали путем измерения давления внутри толстой кишки, необходимого для вызывания поведенческой реакции при растяжении толстой кишки вследствие раздувания баллона, введенного в толстую кишку. Тесты проводил экспериментатор, не имеющий информации о составе групп. Указанная реакция характеризуется подниманием задней части тела животных и четко видимым сжатием брюха, соответствующим сильным сокращениям (А1 Chaer et al., Gastroenterology 2000, 119:1276-1285) и использовалась в качестве маркера боли (Bourdu et al., Gastroenterology, 2005:128, 1996-2008). Баллон (5 см) вводили ректально минимально инвазивным образом на 10 см от ануса натощак (24 ч) бодрствующим животным, а катетер приклеивали к основанию хвоста. Затем крыс помещали в середину коробки из плексигласа и присоединяли катетер к электронному баростату. После 30-мин периода акклиматизации со вставленным баллоном давление в толстой кишке постепенно повышали от 5 до 75 мм ртутного столба (отсечка) на 5 мм рт.ст. каждые 30 с до проявления болевого поведения. Выполняли четыре определения, через 30 мин, 50 мин, 70 мин и 90 мин после введения баллона.
Используя данные по каждому тестированию, рассчитывали процентную активность по отношению к гиперчувствительности толстой кишки, индуцированной введением TNBS в толстую кишку, следующим образом:
Порог растяженияОб Порог растяжетв8ун8 (Процент активности) =----------------—----------------------хЮО обработка Порог растяженияНаид - Порог растяж<.-тв5ъ,нз
Порог растяженияобработка является среднеарифметическим значением для обработанной группы; Порог растяжения-ι-χι^ является среднеарифметическим значением для группы TNBS, а Порог растяженияНаив является среднеарифметическим значением для наивной группы.
Результаты
Способность антитела против CGRP облегчать висцеральную боль тестировали в модели крысы, у которой индуцировали хроническую гиперчувствительность толстой кишки введением TNBS. Висцеральную боль количественно оценивали, измеряя порог растяжения толстой кишки, т.е. внутрибрюшное давление, которое животные могли терпеть, не демонстрируя поведенческой реакции (сокращения мышц). Более высокие значения порога растяжения толстой кишки указывали на меньшую чувствительность. Как и ожидалось, обработка TNBS приводила к значительно сниженному порогу растяжения толстой кишки по сравнению с наивными животными (фиг. 46, сравнение среднего столбика (обработка TNBS) и левого столбика (наивные)). Введение Ab2 улучшало порог растяжения толстой кишки по сравнению с контрольными животными (фиг. 46, сравнение правого столбика (обработка Ab2) и среднего столбика (контроль)). Улучшение при введении Ab2 было статистически значимым (р < 0,05 согласно tкритерию Стьюдента по сравнению с TNBS + группой отрицательного контроля). Рассчитанная активность Ab2 против гиперчувствительности составила 27% (что указывает на степень облегчения TNBSиндуцированной гиперчувствительности).
Данные результаты показывают, что антитела против CGRP можно применять для предотвращения или облегчения висцеральной боли.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> KOVACEVICH, BRIAN ROBERT
GARCIA-MARTINEZ, LEON F.
OLSON, KATIE
DUTZAR, BENJAMIN H.
BILLGREN, JENS J.
LATHAM, JOHN A.
MITCHELL, DANIELLE M.
MCNEILL, PATRICIA DIANNE
JANSON, NICOLE M.
LOOMIS, MARIA-CRISTINA <120> КОМПОЗИЦИИ АНТИТЕЛ ПРОТИВ CGRP И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
- 82 031065 <130> 67858.730302 <150> 61/488,660 <151> 2011-05-20 <160> 284 <170> Патентная версия 3.5 <210> 1 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 1 Thr Gln 5 Thr Ala Ser Pro Val 10 Ser Ala Ala Val Gly 15 Ser
Gln 1 Val Leu
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg <210> 2 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 2
- 83 031065
Gln 1 Val Leu Thr Gln 5 Thr Ala Ser Pro Val 10 Ser Ala Ala Val Gly 15 Ser
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu
65 70 75 80
Cys Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 3 <211> 109 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический
- 84 031065 полипептид
<400> 3 Glu Glu 5 Ser Gly Gly Arg Leu 10 Val Thr Pro Gly Thr 15 Pro
Gln 1 Ser Leu
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105
<210> 4 <211> 439 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 4 Ser Gly Gly Arg Leu 10 Val Thr Pro Gly Thr 15 Pro
Gln 1 Ser Leu Glu Glu 5
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Ala Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
- 85 031065
Asp Ile Trp Gly 100 Pro Gly Thr Leu Val 105 Thr Val Ser Ser Ala 110 Ser Thr
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
210 215 220
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
275 280 285
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
325 330 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
- 86 031065
340 345 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435
<210> 5 <211> 13 <212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 5 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 6 7 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 6 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 7 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 7
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Ser Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 8 5 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 8
- 87 031065
Ser Tyr Tyr Met Gln
5 <210> 9 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 9
Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 10 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 10
Gly Asp Ile <210> 11 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 11 Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Gln 1 Val Leu Thr Gln 5 Ser
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
- 88 031065 <210> 12 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 12 Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Gln Val 1 Leu Thr Gln 5 Ser Pro
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
- 89 031065
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 13 <211> 111 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 13 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Gly
Glu Val 1 Gln Leu Val 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 14 <211> 441 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 14 Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Gly
Glu Val 1 Gln Leu Val 5 Glu
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
- 90 031065
Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp 55 Asn Thr Tyr Tyr Ala 60 Ser Trp Ala Lys
50
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
- 91 031065
Gln Tyr Ala 290 Ser Thr Tyr Arg 295 Val Val Ser Val Leu 300 Thr Val Leu His
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 15 <211> 13 <212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 15 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 16 <211> 7 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 16
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
5 <210> 17 <211> 13 <212> Белок
- 92 031065 <213> Oryctolagus cuniculus <400> 17
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Ser Gly Asp Cys Phe Val
5 10
<210> <211> <212> <213> 18 5 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 18
Ser Tyr Tyr Met Gln
5 <210> 19 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 19
Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
5 10 15 <210> 20 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 20
Gly Asp Ile <210> 21 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 21
Gln Val 1 Leu Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
- 93 031065
Gly 65 Ser Gly Ser Gly Thr 70 Asp Phe Thr Leu Thr 75 Ile Ser Ser Leu Gln 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg <210> 22 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 22 Ser Val Gly 15 Asp
Gln 1 Val Leu Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Ser Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
- 94 031065
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 23 <211> 111 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 23 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Gly
Glu Val 1 Gln Leu Val 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 24 <211> 441 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
- 95 031065 <223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 24
Glu Val 1 Gln Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Gly
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Leu Asp Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
- 96 031065
Pro Lys Asp Thr Leu 245 Met Ile Ser Arg Thr 250 Pro Glu Val Thr Cys 255 Val
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 25 <211> 13 <212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 25 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asp Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
- 97 031065 <210> 26 <211> 7 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 26
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
5 <210> 27 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 27
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Ser Gly Asp Cys Phe Val
5 10
<210> <211> <212> <213> 28 5 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 28
Ser Tyr Tyr Met Gln
5 <210> 29 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 29
Val Ile Gly Ile Asn Asp Asn Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
5 10 15 <210> 30 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 30
Gly Asp Ile <210> 31 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 31
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
5 10 15
- 98 031065
Thr Val Thr Ile 20 Asn Cys Gln Ala Ser Gln 25 Ser Val Tyr His 30 Asn Thr
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asn Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg <210> 32 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 32
Gln Val 1 Leu Thr Gln 5 Thr Pro Ser Pro Val 10 Ser Ala Ala Val Gly 15 Ser
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln
65 70 75 80
Cys Asn Asp Ala Ala Ala Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
- 99 031065
Asn Gly Asp Cys 100 Phe Val Phe Gly Gly 105 Gly Thr Glu Val Val 110 Val Lys
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 33 <211> 109 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 33
Gln 1 Ser Leu Glu Glu 5 Ser Gly Gly Arg Leu 10 Val Thr Pro Gly Thr 15 Pro
Leu Thr Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr Tyr
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
- 100 031065
Asp Ile Trp
Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 <210> 34 <211> 439 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 34 Gly Gly Arg Leu 10 Val Thr Pro Gly Thr 15 Pro
Gln 1 Ser Leu Glu Glu 5 Ser
Leu Thr Leu Thr Cys Ser Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr Tyr
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
- 101 031065
Asn Val Asn 195 His Lys Pro Ser Asn 200 Thr Lys Val Asp Lys 205 Arg Val Glu
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
210 215 220
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
275 280 285
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
325 330 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
340 345 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
- 102 031065
435 <210> 35 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 35
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 36 7 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 36 Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 37 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 37
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr Asn Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 38
<211> 5
<212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 38
Gly Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 39 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 39
Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 40 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 40
Gly Asp Ile
- 103 031065 <210> 41 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 41 Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Gln Val 1 Leu
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg <210> 42 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 42
Gln Val 1 Leu Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
- 104 031065
Ile Tyr 50 Asp Ala Ser Thr Leu 55 Ala Ser Gly Val Pro 60 Ser Arg Phe Ser
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 43 <211> 111 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu
Ser Cys Ala Val Ser
Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr 30
- 105 031065
Tyr Met Asn 35 Trp Val Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Val
Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 44 <211> 441 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 44 Gly Gly Gly Leu 10 Val Gln Pro Gly 15 Gly
Glu Val 1 Gln Leu Val 5 Glu Ser
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
- 106 031065
130
135
140
Pro 145 Glu Pro Val Thr Val 150 Ser Trp Asn Ser Gly 155 Ala Leu Thr Ser Gly 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
- 107 031065
Tyr 385 Lys Thr Thr Pro Pro 390 Val Leu Asp Ser Asp 395 Gly Ser Phe Phe Leu 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 45 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 45
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 46 <211> 7 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 46
Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser
5
<210> 47 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 47
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr Asn Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 48 5 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 48
Gly Tyr Tyr Met Asn
5 <210> 49 <211> 15 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 49
Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
- 108 031065 <210> 50 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 50
Gly Asp Ile <210> 51 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 51 Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Gln Val 1 Leu
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg <210> 52 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
- 109 031065
<400> 52 Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Gln Val 1 Leu Thr
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 53 <211> 111 <212> Белок <213>искусственная последовательность
- 110 031065 <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 53 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Gly
Glu Val 1 Gln Leu Val 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 54 <211> 441 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 54
Glu Val 1 Gln Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly Leu 10 Val Gln Pro Gly 15 Gly
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
- 111 031065
Gln Met Asn Ser Leu 85 Arg Ala Glu Asp Thr 90 Ala Val Tyr Phe Cys 95 Ala
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
- 112 031065
Pro Arg Glu Pro 340 Gln Val Tyr Thr Leu 345 Pro Pro Ser Arg Glu 350 Glu Met
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 55 <211> 13 <212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 55 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr His Asn Thr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 56 <211> 7 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 56
Asp Ala Ser Thr Leu Ala Ser
5
<210> 57 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 57
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Thr Asn Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 58 <211> 5 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
- 113 031065 <400> 58
Gly Tyr Tyr Met Asn
5 <210> 59 <211> 15 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 59
Ile Gly Ile Asn Gly Ala Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly 1 5 10 15 <210> 60 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 60
Gly Asp Ile <210> 61 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 61
Gln Val 1 Leu Thr Gln 5 Thr Ala Ser Pro Val 10 Ser Ala Ala Val Gly 15 Ser
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
- 114 031065
Arg <210> 62 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 62
Gln Val 1 Leu Thr Gln 5 Thr Ala Ser Pro Val 10 Ser Ala Ala Val Gly 15 Ser
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
- 115 031065
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 63 <211> 110 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 63 Glu Ser Gly Gly Arg 10 Leu Val Thr Pro Gly 15 Thr
Gln Glu 1 Gln Leu Lys 5
Ser Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Arg Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 64 <211> 440 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 64
Gln Glu Gln Leu Lys Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu
Thr Cys Thr Val Ser
Gly Ile Asp Leu Ser Asn His
- 116 031065
Tyr Met Gln 35 Trp Val Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Ile
Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Arg Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Gly Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
100 105 110
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
115 120 125
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
130 135 140
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
145 150 155 160
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
180 185 190
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
195 200 205
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
- 117 031065
Tyr Ala 290 Ser Thr Tyr Arg Val 295 Val Ser Val Leu Thr 300 Val Leu His Gln
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
305 310 315 320
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> <211> <212> <213> 65 13 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 65 Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 66 <211> 7 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 66
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
5 <210> 67
- 118 031065 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 67
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Thr Gly Asp Cys Phe Val
5 10 <210> 68 <211> 5 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 68
Asn His Tyr Met Gln
5 <210> 69 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 69
Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
5 10 15 <210> 70 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 70
Gly Asp Ile <210> 71 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 71
Gln 1 Val Leu Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
55 60
- 119 031065
Gly 65 Ser Gly Ser Gly Thr 70 Asp Phe Thr Leu Thr 75 Ile Ser Ser Leu Gln 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg <210> 72 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 72
Gln 1 Val Leu Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
- 120 031065
Tyr 145 Pro Arg Glu Ala Lys 150 Val Gln Trp Lys Val 155 Asp Asn Ala Leu Gln 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 73 <211> 111 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 73 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Gly
Glu Val 1 Gln Leu Val 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 74 <211> 441 <212> Белок <213>искусственная последовательность
- 121 031065 <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 74
Glu 1 Val Gln Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Gly
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Leu Ser Asn His
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
- 122 031065
225
230
235
240
Pro Lys Asp Thr Leu 245 Met Ile Ser Arg Thr 250 Pro Glu Val Thr Cys 255 Val
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 75 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 75
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Tyr Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
- 123 031065
<210> <211> <212> <213> 76 7 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 76
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> <211> <212> <213> 77 13 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 77
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Thr Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 78 5 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 78
Asn His Tyr Met Gln
1 5
<210> <211> <212> <213> 79 16 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 79
Val Val Gly Ile Asn Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> <211> <212> <213> 80 3 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 80
Gly Asp Ile <210> 81 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 81
Gln Val Leu Thr Gln Thr Pro Ser Pro Val Ser Ala Ala Val Gly Ser
- 124 031065
1 5 10 15
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg <210> 82 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 82
Gln 1 Val Leu Thr Gln Thr 5 Pro Ser Pro Val 10 Ser Ala Ala Val Gly 15 Ser
Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Arg
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
90 95
- 125 031065
Arg Gly Asp Cys 100 Phe Val Phe Gly Gly 105 Gly Thr Glu Val Val 110 Val Lys
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 83 <211> 109 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 83
Gln 1 Ser Leu Glu Glu 5 Ser Gly Gly Arg Leu 10 Val Thr Pro Gly Thr 15 Pro
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Met
65 70 75 80
- 126 031065
Ala Ser Leu Thr
Asp Ile Trp Gly
100
Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Thr Arg Gly
90 95
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 105 <210> 84 <211> 439 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 84
Gln 1 Ser Leu Glu Glu 5 Ser Gly Gly Arg Leu 10 Val Thr Pro Gly Thr 15 Pro
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Arg Met
65 70 75 80
Ala Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Thr Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
- 127 031065
Val Val Thr Val 180 Pro Ser Ser Ser Leu 185 Gly Thr Gln Thr Tyr 190 Ile Cys
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
210 215 220
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
275 280 285
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
325 330 335
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
340 345 350
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
- 128 031065
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 <210> 85 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 85
Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 86 7 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 86 Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 87 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 87
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Arg Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 88
<211> 5
<212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 88
Ser Tyr Tyr Met Gln
1 5
<210> 89 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 89
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 90
<211> 3
<212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 90
Gly Asp Ile
1
- 129 031065 <210> 91 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 91 Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Gln 1 Val Leu Thr Gln 5 Ser
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg <210> 92 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 92 Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Gln 1 Val Leu Thr Gln 5 Ser Pro Ser
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
- 130 031065
Ile Tyr 50 Ser Thr Ser Thr Leu 55 Ala Ser Gly Val Pro 60 Ser Arg Phe Ser
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 93 <211> 111 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 93
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu
Ser Cys Ala Val Ser
Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr 30
- 131 031065
Tyr Met Gln Trp Val 35 Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Val
Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 94 <211> 441 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 94
Glu Val 1 Gln Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly Leu 10 Val Gln Pro Gly 15 Gly
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
- 132 031065
Thr Ser 130 Gly Gly Thr Ala Ala 135 Leu Gly Cys Leu Val 140 Lys Asp Tyr Phe
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
- 133 031065
Tyr 385 Lys Thr Thr Pro Pro 390 Val Leu Asp Ser Asp 395 Gly Ser Phe Phe Leu 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210>
<211>
<212>
<213>
Белок
Oryctolagus cuniculus <400>
Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr
Asn
Asn
Asn
Tyr
Leu
Ala <210>
<211>
<212>
<213>
Белок
Oryctolagus cuniculus <400>
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser <210>
<211>
<212>
<213>
Белок
Oryctolagus cuniculus <400>
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
Arg
Gly
Asp
Cys
Phe
Val
<210> <211> <212> <213> 98 5 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 98
Ser Tyr Tyr Met Gln
5 <210> 99 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
- 134 031065 <400> 99
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
5 10 15 <210> 100 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 100
Gly Asp Ile <210> 101 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 101 Pro Val 10 Ser Pro Ala Val Gly 15 Ser
Gln Val 1 Leu Thr Gln Thr Ala 5 Ser
Thr Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg <210> 102 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
- 135 031065 <223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 102
Gln 1 Val Leu Thr Gln Thr 5 Ala Ser Pro Val 10 Ser Pro Ala Val Gly 15 Ser
Thr Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe Lys
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val Gln
65 70 75 80
Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 103 <211> 109 <212> Белок
- 136 031065 <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 103 Ser Gly Gly Arg Leu Val 10 Thr Pro Gly Gly 15 Ser
Gln Ser 1 Leu Glu Glu 5
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105
<210> 104 <211> 439 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 104
Gln 1 Ser Leu Glu Glu 5 Ser Gly Gly Arg Leu Val 10 Thr Pro Gly Gly 15 Ser
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr Tyr
20 25 30
Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
- 137 031065
Thr Ser Leu Thr Thr 85 Glu Asp Thr Ala Thr 90 Tyr Phe Cys Ala Arg 95 Gly
Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
100 105 110
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
115 120 125
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
130 135 140
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
145 150 155 160
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
180 185 190
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
195 200 205
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
210 215 220
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
225 230 235 240
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
245 250 255
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
260 265 270
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
275 280 285
Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
290 295 300
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
305 310 315 320
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
- 138 031065
325 330 335
Glu Pro Gln Val 340 Tyr Thr Leu Pro Pro 345 Ser Arg Glu Glu Met 350 Thr Lys
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
355 360 365
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
370 375 380
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
385 390 395 400
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
405 410 415
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
420 425 430
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435
<210> 105 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 105
Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 106 <211> 7 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 106
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
5
<210> 107 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 107
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Gly Asp Cys Phe Val
1 5 10
<210> 108 <211> 5
- 139 031065 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 108
Asn Tyr Tyr Met Gln
5 <210> 109 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 109
Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
5 10 15 <210> 110 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 110
Gly Asp Ile <210> 111 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 111
Gln Val 1 Leu Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Arg Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
- 140 031065
100
105
110
Arg <210> 112 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 112 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Gln 1 Val Leu Thr Gln 5
Arg Val Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Asn Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
- 141 031065
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 113 <211> 111 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 113 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly 15 Gly
Glu Val 1 Gln Leu Val 5
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 114 <211> 441 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Asp Val Thr Asn Tyr
- 142 031065
Tyr Met Gln Trp 35 Val Arg Gln Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp Val
Gly Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
- 143 031065
Val Asp Gly 275 Val Glu Val His Asn 280 Ala Lys Thr Lys Pro 285 Arg Glu Glu
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 115 <211> 13 <212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 115 Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Tyr Asn Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 116 <211> 7 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 116
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
5
- 144 031065 <210> 117 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 117
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Asn Gly Asp Cys Phe Val
5 10
<210> <211> <212> <213> 118 5 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 118
Asn Tyr Tyr Met Gln
5 <210> 119 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 119
Val Ile Gly Val Asn Gly Lys Arg Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
5 10 15 <210> 120 <211> 3 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 120
Gly Asp Ile <210> 121 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 121
Ala 1 Ile Val Met Thr Gln Thr 5 Pro Ser Ser 10 Lys Ser Val Pro Val 15 Gly
Asp Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Leu Tyr Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
- 145 031065
Leu Ile 50 Tyr Asp Ala Ser Lys 55 Leu Ala Ser Gly Val 60 Pro Ser Arg Phe
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Arg Ser Asp
85 90 95
Ser Val Asp Gly Val Ala Phe Ala Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg <210> 122 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 122 Thr Pro Ser Ser 10 Lys Ser Val Pro Val 15 Gly
Ala 1 Ile Val Met Thr 5 Gln
Asp Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Glu Ser Leu Tyr Asn Asn
20 25 30
Asn Ala Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val
65 70 75 80
Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Arg Ser Asp
85 90 95
Ser Val Asp Gly Val Ala Phe Ala Gly Gly Thr Glu Val Val Val Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
- 146 031065
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 123 <211> 111 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 123
Gln Ser 1 Val Glu Glu 5 Ser Gly Gly Gly Leu Val 10 Gln Pro Glu Gly 15 Ser
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Asn Ala
20 25 30
Met Trp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Cys Ile Tyr Asn Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn
50 55 60
Gly Arg Phe Ser Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln
65 70 75 80
Leu Asn Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Leu Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 124 <211> 441
- 147 031065 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 124
Gln 1 Ser Val Glu Glu 5 Ser Gly Gly Gly Leu 10 Val Gln Pro Glu Gly 15 Ser
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Ser Asn Ala
20 25 30
Met Trp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Cys Ile Tyr Asn Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn
50 55 60
Gly Arg Phe Ser Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Thr Leu Gln
65 70 75 80
Leu Asn Ser Leu Thr Val Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Leu Asp Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
- 148 031065
Ala 225 Pro Glu Leu Leu Gly 230 Gly Pro Ser Val Phe 235 Leu Phe Pro Pro Lys 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
420 425 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 125 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 125
- 149 031065
Gln Ala Ser Glu Ser Leu Tyr Asn Asn Asn Ala Leu Ala
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 126 7 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 126 Asp Ala Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 127 <211> 12 <212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 127 Gly Gly Tyr Arg Ser Asp Ser Val Asp Gly Val Ala
1 5 10
<210> 128
<211> 5
<212> Белок
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 128
Ser Asn Ala Met Trp
1 5
<210> 129 <211> 17 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 129
Cys Ile Tyr Asn Gly Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Val Asn
1 5 10 15
Gly <210> 130 <211> 4 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 130
Asp Leu Asp Leu <210> 131 <211> 113 <212> Белок <213>искусственная последовательность
- 150 031065 <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 131 Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Gln 1 Val Leu Thr Gln 5 Ser
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg <210> 132 <211> 219 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 132
Gln Val 1 Leu Thr Gln 5 Ser Pro Ser Ser Leu 10 Ser Ala Ser Val Gly 15 Asp
Arg Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Gln Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
- 151 031065
Gly 65 Ser Gly Ser Gly Thr 70 Asp Phe Thr Leu Thr 75 Ile Ser Ser Leu Gln 80
Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Asp Cys Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 <210> 133 <211> 111 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид
<400> 133 Ser Gly Gly Gly Leu 10 Val Gln Pro Gly 15 Gly
Glu 1 Val Gln Leu Val 5 Glu
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
- 152 031065
55 60
Gly 65 Arg Phe Thr Ile Ser 70 Arg Asp Asn Ser Lys 75 Thr Thr Val Tyr Leu 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 134 <211> 441 <212> Белок <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полипептид <400> 134
Glu 1 Val Gln Leu Val 5 Glu Ser Gly Gly Gly 10 Leu Val Gln Pro Gly Gly 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Ile Gly Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Thr Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys Thr
85 90 95
Arg Gly Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
100 105 110
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
115 120 125
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
130 135 140
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
145 150 155 160
- 153 031065
Val His Thr Phe Pro 165 Ala Val Leu Gln Ser 170 Ser Gly Leu Tyr Ser 175 Leu
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
180 185 190
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Ala Arg
195 200 205
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
210 215 220
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
225 230 235 240
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
245 250 255
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
260 265 270
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
275 280 285
Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
290 295 300
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
305 310 315 320
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
325 330 335
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
340 345 350
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
355 360 365
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
370 375 380
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
385 390 395 400
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
- 154 031065
405 410 415
Phe Ser Cys Ser Val 420 Met His Glu Ala Leu His 425 Asn His Tyr Thr Gln 430
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 135 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 135
Gln Ala Ser Gln Asn Val Tyr Asn Asn Asn Tyr Leu Ala
5 10 <210> 136 <211> 7 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 136
Ser Thr Ser Thr Leu Ala Ser
5 <210> 137 <211> 13 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 137
Leu Gly Ser Tyr Asp Cys Ser Arg Gly Asp Cys Phe Val
5 10
<210> <211> <212> <213> 138 5 Белок Oryctolagus cuniculus
<400> 138
Ser Tyr Tyr Met Gln
5
<210> 139 <211> 16 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus
<400> 139
Val Ile Gly Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 140 <211> 3
- 155 031065 <212> Белок <213> Oryctolagus cuniculus <400> 140
Gly Asp Ile <210> 141 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 141 caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240 tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 142 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 142
caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacctggag 240
tgtgccgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
- 156 031065 <210> 143 <211> 327 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 143 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggactcga cctcagtagc tactacatgc aatgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg ataacacata ctacgcgagc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaga gcctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300 ccaggcaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327 <210> 144 <211> 1320 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 144
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggactcga cctcagtagc tactacatgc aatgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg ataacacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaga gcctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300
ccaggcaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360
gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420
tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480
accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540
ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600
accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660
tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840
acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900
- 157 031065
ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320
<210> <211> <212> <213> 145 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 145 caggccagtc agagtgttta tgataacaac tacctagcc 39
<210> 146 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 146 tctacatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 147 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 147 ctaggcagtt atgattgtag tagtggtgat tgttttgtt 39
<210> 148 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 148 agctactaca tgcaa <210> 149 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 149 gtcattggta ttaatgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc <210> 150 <211> 9
- 158 031065 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 150 ggggacatc <210> 151 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 151 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 152 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 152
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
- 159 031065 <210> 153 <211> 333 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 153
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 154 <211> 1326 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 154
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
- 160 031065
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326 <210> 155 <211> 39 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 155 caggccagtc agagtgttta tgataacaac tacctagcc <210> 156 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 156 tctacatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 157 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 157 ctaggcagtt atgattgtag tagtggtgat tgttttgtt 39
<210> 158 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 158 agctactaca tgcaa <210> 159 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 159 gtcattggta tcaatgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc <210> 160
- 161 031065 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 160 ggggacatc <210> 161 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 161 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 162 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 162
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatgat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtcta ggcagttatg attgtagtag tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
- 162 031065 <210> 163 <211> 333 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 163
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 164 <211> 1326 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 164
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggact cgacctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatca atgataacac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacgc gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
- 163 031065
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326 <210> 165 <211> 39 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 165 caggccagtc agagtgttta tgataacaac tacctagcc <210> 166 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 166 tctacatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 167 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 167 ctaggcagtt atgattgtag tagtggtgat tgttttgtt 39
<210> 168 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 168 agctactaca tgcaa <210> 169 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 169 gtcattggta tcaatgataa cacatactac gcgagctggg cgaaaggc
- 164 031065 <210> 170 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 170 ggggacatc <210> 171 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 171 caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaaaca actgatctat gatgcatcca ctctggcgtc tggggtccca 180 tcgcggttca gcggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cggcgtgcag 240 tgtaacgatg ctgccgctta ctactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 172 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 172
caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaaaca actgatctat gatgcatcca ctctggcgtc tggggtccca 180
tcgcggttca gcggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cggcgtgcag 240
tgtaacgatg ctgccgctta ctactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
- 165 031065 <210> 173 <211> 327 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 173 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgttccgtct ctggcatcga cctcagtggc tactacatga actgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg gtgccacata ctacgcgagc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300 ccgggcaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327 <210> 174 <211> 1320 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 174
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgttccgtct ctggcatcga cctcagtggc tactacatga actgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtattaatg gtgccacata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagggga catctggggc 300
ccgggcaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360
gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420
tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480
accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540
ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600
accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660
tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840
- 166 031065
acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900
ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320
<210> <211> <212> <213> 175 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 175 caggccagtc agagtgttta tcataacacc tacctggcc 39
<210> 176 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 176 gatgcatcca ctctggcgtc t
<210> <211> <212> <213> 177 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 177 ctgggcagtt atgattgtac taatggtgat tgttttgtt 39
<210> 178 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 178 ggctactaca tgaac <210> 179 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 179 gtcattggta ttaatggtgc cacatactac gcgagctggg cgaaaggc <210> 180
- 167 031065 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 180 ggggacatc <210> 181 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 181 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 182 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 182
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
- 168 031065 <210> 183 <211> 333 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 183
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 184 <211> 1326 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 184
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
- 169 031065
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> <211> <212> <213> 185 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 185 caggccagtc agagtgttta tcataacacc tacctggcc 39
<210> 186 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 186 gatgcatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 187 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 187 ctgggcagtt atgattgtac taatggtgat tgttttgtt 39
<210> 188 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 188 ggctactaca tgaac <210> 189 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 189 gtcattggta ttaatggtgc cacatactac gcgagctggg cgaaaggc
- 170 031065 <210> 190 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 190 ggggacatc <210> 191 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 191 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 192 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 192
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttatcat aacacctacc tggcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat gatgcatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtactaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660
- 171 031065 <210> 193 <211> 333 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 193 gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 194 <211> 1326 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 194
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt ggctactaca tgaactgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtatta atggtgccac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacgc gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
- 172 031065
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> <211> <212> <213> 195 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 195 caggccagtc agagtgttta tcataacacc tacctggcc 39
<210> 196 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 196 gatgcatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 197 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 197 ctgggcagtt atgattgtac taatggtgat tgttttgtt 39
<210> 198 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 198 ggctactaca tgaac <210> 199 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 199 gtcattggta ttaatggtgc cacatactac gcgagctggg cgaaaggc
- 173 031065 <210> 200 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 200 ggggacatc <210> 201 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 201 caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttataat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcgattca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240 tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg actgtagtac tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 202 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 202
caagtgctga cccagactgc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttataat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcgattca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg actgtagtac tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
- 174 031065 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 <210> 203 <211> 330 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 203
caggagcagc tgaaggagtc cgggggtcgc ctggtcacgc ctgggacatc cctgacactc 60
acctgcaccg tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcggagtc gttggtatta atggtcgcac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agaacctcgt cgaccacggt ggatctgaaa 240
atgaccaggc tgacaaccga ggacacggcc acctatttct gtgccagagg ggacatctgg 300
ggcccaggca ccctggtcac cgtctcgagc 330
<210> 204 <211> 1323 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 204
caggagcagc tgaaggagtc cgggggtcgc ctggtcacgc ctgggacatc cctgacactc 60
acctgcaccg tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg gatcggagtc gttggtatta atggtcgcac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agaacctcgt cgaccacggt ggatctgaaa 240
atgaccaggc tgacaaccga ggacacggcc acctatttct gtgccagagg ggacatctgg 300
ggcccaggca ccctggtcac cgtctcgagc gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc 360
ctggcaccct cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag 420
gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg 480
cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc 540
gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc 600
aacaccaagg tggacaagag agttgagccc aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca 660
ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 720
aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc 780
cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc 840
- 175 031065
aagacaaagc cgcgggagga gcagtacgcc agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 900
gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc 960
ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag 1020
gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc 1080
ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg 1140
gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac 1200
agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg 1260
atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1320
tga 1323
<210> 205 <211> 39 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 205 caggccagtc agagtgttta taattacaac taccttgcc <210> 206 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 206 tctacatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 207 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 207 ctaggcagtt atgactgtag tactggtgat tgttttgtt 39
<210> 208 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 208 aaccactaca tgcaa <210> 209 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 209 gtcgttggta ttaatggtcg cacatactac gcgagctggg cgaaaggc
- 176 031065 <210> 210 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 210 ggggacatc <210> 211 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 211 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagag tgtttacaat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtac tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 212 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 212
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagag tgtttacaat tacaactacc ttgcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtac tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
- 177 031065 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 <210> 213 <211> 333 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 213
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc gttggtatca atggtcgcac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 214 <211> 1326 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 214
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacctcagt aaccactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc gttggtatca atggtcgcac atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgctag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
- 178 031065
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> <211> <212> <213> 215 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 215 caggccagtc agagtgttta caattacaac taccttgcc 39
<210> 216 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 216 tctacatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 217 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 217 ctgggcagtt atgattgtag tactggtgat tgttttgtt 39
<210> 218 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 218 aaccactaca tgcaa
<210> <211> <212> <213> 219 48 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 219
- 179 031065 gtcgttggta tcaatggtcg cacatactac gcgagctggg cgaaaggc <210> 220 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 220 ggggacatc <210> 221 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 221 caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagaa tgtttataat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacgtcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcgattca gaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240 tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 222 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 222
caagtgctga cccagactcc atcccccgtg tctgcagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagaa tgtttataat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacgtcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcgattca gaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
- 180 031065 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 <210> 223 <211> 327 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 223 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggaatcgg cctcagtagc tactacatgc agtgggtccg ccagtctcca 120 gggagggggc tggaatggat cggagtcatt ggtagtgatg gtaagacata ctacgcgacc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaag acctcgtcga ccacggtgga tctgagaatg 240 gccagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgta ccagagggga catctggggc 300 ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327 <210> 224 <211> 1320 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 224 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcgg cctcagtagc tactacatgc agtgggtccg ccagtctcca 120
gggagggggc tggaatggat cggagtcatt ggtagtgatg gtaagacata ctacgcgacc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaag acctcgtcga ccacggtgga tctgagaatg 240
gccagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgta ccagagggga catctggggc 300
ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360
gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420
tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480
accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540
ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600
accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660
tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780
- 181 031065
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840
acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900
ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320
<210> <211> <212> <213> 225 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 225 caggccagtc agaatgttta taataacaac tacctagcc 39
<210> 226 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 226 tctacgtcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 227 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 227 ctaggcagtt atgattgtag tcgtggtgat tgttttgtt 39
<210> 228 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 228 agctactaca tgcag <210> 229 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 229 gtcattggta gtgatggtaa gacatactac gcgacctggg cgaaaggc
- 182 031065 <210> 230 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 230 ggggacatc <210> 231 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 231 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 232 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 232
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
- 183 031065 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 <210> 233 <211> 333 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 233
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180
acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 234 <211> 1326 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 234
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180
acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
- 184 031065
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> <211> <212> <213> 235 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 235 caggccagtc agaatgttta caataacaac tacctagcc 39
<210> 236 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 236 tctacatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 237 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 237 ctgggcagtt atgattgtag tcgtggtgat tgttttgtt 39
<210> 238 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 238 agctactaca tgcaa
<210> <211> <212> <213> 239 48 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 239
- 185 031065 gtcattggta gtgatggtaa gacatactac gcgacctggg cgaaaggc <210> 240 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 240 ggggacatc <210> 241 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 241 caggtgctga cccagactgc atcccccgtg tctccagctg tgggaagcac agtcaccatc 60 aattgccggg ccagtcagag tgtttattat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180 tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240 tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 242 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 242
caggtgctga cccagactgc atcccccgtg tctccagctg tgggaagcac agtcaccatc 60
aattgccggg ccagtcagag tgtttattat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggcagc ctcccaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtctca 180
tcgcggttca aaggcagtgg atctgggaca cagttcactc tcaccatcag cgacgtgcag 240
tgtgacgatg ctgccactta ctactgtcta ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
- 186 031065 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 <210> 243 <211> 327 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 243 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gaggatccct gacactcacc 60 tgcacagtct ctggaatcga cgtcactaac tactatatgc aatgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtgtgaatg gtaagagata ctacgcgagc 180 tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240 accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagaggcga catctggggc 300 ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagc 327 <210> 244 <211> 1320 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 244 cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg gaggatccct gacactcacc 60
tgcacagtct ctggaatcga cgtcactaac tactatatgc aatgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggagtcatt ggtgtgaatg gtaagagata ctacgcgagc 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtctga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagaggcga catctggggc 300
ccggggaccc tcgtcaccgt ctcgagcgcc tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg 360
gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 420
tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 480
accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 540
ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 600
accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 660
tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 720
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 780
- 187 031065
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 840
acaaagccgc gggaggagca gtacgccagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 900
ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 960
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1020
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1080
gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1140
aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 1200
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1260
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 1320
<210> <211> <212> <213> 245 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 245 cgggccagtc agagtgttta ttataacaac tacctagcc 39
<210> 246 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 246 tctacatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 247 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 247 ctaggcagtt atgattgtag taatggtgat tgttttgtt 39
<210> 248 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 248 aactactata tgcaa <210> 249 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 249 gtcattggtg tgaatggtaa gagatactac gcgagctggg cgaaaggc
- 188 031065 <210> 250 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 250 ggcgacatc <210> 251 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 251 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccggg ccagtcagag tgtttactat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 252 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 252
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccggg ccagtcagag tgtttactat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtaa tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600
- 189 031065 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 <210> 253 <211> 333 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 253
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacgtcact aactactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtgtga atggtaagag atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgccag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 254 <211> 1326 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 254
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cgacgtcact aactactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtgtga atggtaagag atactacgcg 180
agctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtgccag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
- 190 031065
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> <211> <212> <213> 255 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 255 cgggccagtc agagtgttta ctataacaac tacctagcc 39
<210> 256 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 256 tctacatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 257 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 257 ctgggcagtt atgattgtag taatggtgat tgttttgtt 39
<210> 258 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 258 aactactaca tgcaa
<210> <211> <212> <213> 259 48 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 259
- 191 031065 gtcattggtg tgaatggtaa gagatactac gcgagctggg cgaaaggc <210> 260 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 260 ggggacatc <210> 261 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 261 gccatcgtga tgacccagac tccatcttcc aagtctgtcc ctgtgggaga cacagtcacc 60 atcaattgcc aggccagtga gagtctttat aataacaacg ccttggcctg gtttcagcag 120 aaaccagggc agcctcccaa gcgcctgatc tatgatgcat ccaaactggc atctggggtc 180 ccatcgcggt tcagtggcgg tgggtctggg acacagttca ctctcaccat cagtggcgtg 240 cagtgtgacg atgctgccac ttactactgt ggaggctaca gaagtgatag tgttgatggt 300 gttgctttcg ccggagggac cgaggtggtg gtcaaacgt 339 <210> 262 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 262
gccatcgtga tgacccagac tccatcttcc aagtctgtcc ctgtgggaga cacagtcacc 60
atcaattgcc aggccagtga gagtctttat aataacaacg ccttggcctg gtttcagcag 120
aaaccagggc agcctcccaa gcgcctgatc tatgatgcat ccaaactggc atctggggtc 180
ccatcgcggt tcagtggcgg tgggtctggg acacagttca ctctcaccat cagtggcgtg 240
cagtgtgacg atgctgccac ttactactgt ggaggctaca gaagtgatag tgttgatggt 300
gttgctttcg ccggagggac cgaggtggtg gtcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
- 192 031065 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 <210> 263 <211> 333 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 263 cagtcggtgg aggagtccgg gggaggcctg gtccagcctg agggatccct gacactcacc 60 tgcacagcct ctggattcga cttcagtagc aatgcaatgt ggtgggtccg ccaggctcca 120 gggaaggggc tggagtggat cggatgcatt tacaatggtg atggcagcac atactacgcg 180 agctgggtga atggccgatt ctccatctcc aaaacctcgt cgaccacggt gactctgcaa 240 ctgaatagtc tgacagtcgc ggacacggcc acgtattatt gtgcgagaga tcttgacttg 300 tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agc 333 <210> 264 <211> 1326 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 264 cagtcggtgg aggagtccgg gggaggcctg gtccagcctg agggatccct gacactcacc 60
tgcacagcct ctggattcga cttcagtagc aatgcaatgt ggtgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggagtggat cggatgcatt tacaatggtg atggcagcac atactacgcg 180
agctgggtga atggccgatt ctccatctcc aaaacctcgt cgaccacggt gactctgcaa 240
ctgaatagtc tgacagtcgc ggacacggcc acgtattatt gtgcgagaga tcttgacttg 300
tggggcccgg gcaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacaa gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
- 193 031065
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326
<210> <211> <212> <213> 265 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 265 caggccagtg agagtcttta taataacaac gccttggcc 39
<210> 266 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 266 gatgcatcca aactggcatc t
<210> <211> <212> <213> 267 36 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 267 ggaggctaca gaagtgatag tgttgatggt gttgct 36
<210> 268 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 268 agcaatgcaa tgtgg <210> 269 <211> 51 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus
- 194 031065 <400> 269 tgcatttaca atggtgatgg cagcacatac tacgcgagct gggtgaatgg c 51 <210> 270 <211> 12 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 270 gatcttgact tg <210> 271 <211> 339 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 271 caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60 aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120 ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180 tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240 cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300 tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgt 339 <210> 272 <211> 660 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 272
caagtgctga cccagtctcc atcctccctg tctgcatctg taggagacag agtcaccatc 60
aattgccagg ccagtcagaa tgtttacaat aacaactacc tagcctggta tcagcagaaa 120
ccagggaaag ttcctaagca actgatctat tctacatcca ctctggcatc tggggtccca 180
tctcgtttca gtggcagtgg atctgggaca gatttcactc tcaccatcag cagcctgcag 240
cctgaagatg ttgcaactta ttactgtctg ggcagttatg attgtagtcg tggtgattgt 300
tttgttttcg gcggaggaac caaggtggaa atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360
ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420
ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480
tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540
- 195 031065 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgttag 660 <210> 273 <211> 333 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид
<400> 273
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180
acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agc 333
<210> 274 <211> 1326 <212> ДНК <213>искусственная последовательность <220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический полинуклеотид <400> 274
gaggtgcagc ttgtggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag tctctggaat cggcctcagt agctactaca tgcaatgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcggagtc attggtagtg atggtaagac atactacgcg 180
acctgggcga aaggccgatt caccatctcc agagacaatt ccaagaccac ggtgtatctt 240
caaatgaaca gcctgagagc tgaggacact gctgtgtatt tctgtaccag aggggacatc 300
tggggccaag ggaccctcgt caccgtctcg agcgcctcca ccaagggccc atcggtcttc 360
cccctggcac cctcctccaa gagcacctct gggggcacag cggccctggg ctgcctggtc 420
aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg tcgtggaact caggcgccct gaccagcggc 480
gtgcacacct tcccggctgt cctacagtcc tcaggactct actccctcag cagcgtggtg 540
accgtgccct ccagcagctt gggcacccag acctacatct gcaacgtgaa tcacaagccc 600
agcaacacca aggtggacgc gagagttgag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc 660
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 720
- 196 031065
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 780
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 840
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac gccagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 900
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 960
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1020
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 1080
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 1140
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 1200
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 1260
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 1320
aaatga 1326 <210> 275 <211> 39 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 275 caggccagtc agaatgttta caataacaac tacctagcc <210> 276 <211> 21 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 276 tctacatcca ctctggcatc t
<210> <211> <212> <213> 277 39 ДНК Oryctolagus cuniculus
<400> 277 ctgggcagtt atgattgtag tcgtggtgat tgttttgtt 39
<210> 278 <211> 15 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 278 agctactaca tgcaa <210> 279 <211> 48 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus
- 197 031065 <400> 279 gtcattggta gtgatggtaa gacatactac gcgacctggg cgaaaggc <210> 280 <211> 9 <212> ДНК <213> Oryctolagus cuniculus <400> 280 ggggacatc <210> 281 <211> 37 <212> Белок <213> Homo sapiens <220>
<223> C-конец амидирован <400> 281
Ala Cys 1 Asp Thr Ala Thr 5 Cys Val Thr His 10 Arg Leu Ala Gly Leu Leu 15
Ser Arg Ser Gly Gly Val Val Lys Asn Asn Phe Val Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Lys Ala Phe
<210> 282 <211> 37 <212> Белок <213> Homo sapiens <220>
<223> C-конец амидирован <400> 282
Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Thr His Arg Leu Ala Gly Leu Leu
1 5 10 15
Ser Arg Ser Gly Gly Met Val Lys Ser Asn Phe Val Pro Thr Asn Val
20 25 30
Gly Ser Lys Ala Phe <210> 283 <211> 105 <212> Белок <213> Homo sapiens
- 198 031065
<400> 283 Ser Val 5 Phe Ile Phe Pro 10 Pro Ser Asp Glu Gln 15 Leu
Val 1 Ala Ala Pro
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
20 25 30
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
35 40 45
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
50 55 60
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
65 70 75 80
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
85 90 95
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 284 <211> 330 <212> Белок <213> Homo sapiens
<400> 284 Pro Ser Ser 15 Lys
Ala 1 Ser Thr Lys Gly 5 Pro Ser Val Phe Pro 10 Leu Ala
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
- 199 031065
Pro Ala Pro 115 Glu Leu Leu Gly Gly 120 Pro Ser Val Phe Leu 125 Phe Pro Pro
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330

Claims (1)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека, содержащие (i) полипептид вариабельной области легкой цепи (VL), содержащий VL CDR1 последовательности SEQ ID NO: 55, VL CDR2 последовательности SEQ ID NO: 56, VL CDR3 последовательности SEQ ID NO: 57 и полипептид вариабельной области тяжелой цепи (VH), содержащий VH CDR1 последовательности SEQ ID NO: 58, VH CDR2 последовательности SEQ ID NO: 59 и VH CDR3 последовательности SEQ ID NO: 60.
    - 200 031065
    2. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.1, содержащие полипептид вариабельной области легкой цепи последовательности SEQ ID NO: 51 и полипептид вариабельной области тяжелой цепи последовательности SEQ ID NO: 53.
    3. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.1, содержащие полипептид легкой цепи последовательности SEQ ID NO: 52 и полипептид тяжелой цепи последовательности SEQ ID NO: 54.
    4. Антитело или фрагмент антитела против CGRP по п.1 или 2, отличающиеся тем, что указанный фрагмент выбирают из Fab-фрагмента, Fab'-фрагмента и F(ab)'-фрагмента, а указанное антитело является одновалентным антителом.
    5. Фрагмент антитела по пп.1, 2 или 4, отличающийся тем, что указанный фрагмент является Fabфрагментом.
    6. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по пп.1, 2, 3, 4 или 5, которые являются (i) агликозилированными или (ii) гликозилированными, при условии, что, если указанные антитело или фрагмент являются гликозилированными, они содержат только остатки маннозы.
    7. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по пп.1, 2, 3, 4 или 5, отличающиеся тем, что не являются N-гликозилированными.
    8. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по пп.1, 2, 3, 4 или 5, которые содержат Fc-область, модифицированную для изменения эффекторной функции, периода полужизни, протеолиза и/или гликозилирования.
    9. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по пп.1, 2, 3, 4 или 5, отличающиеся тем, что являются гуманизированным, одноцепочечным или химерным антителом.
    10. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по пп.1, 2, 3, 4 или 5, отличающиеся тем, что специфически связываются с CGRP-экспрессирующими клетками человека и/или циркулирующими растворимыми молекулами CGRP in vivo.
    11. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.10, отличающиеся тем, что специфически связываются с CGRP, экспрессированным на клетках или клетками человека у пациента с заболеванием, расстройством, состоянием или симптомом, ассоциированным с клетками, связывающими CGRP.
    12. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.11, отличающиеся тем, что указанное заболевание, расстройство, состояние или симптом являются мигренью.
    13. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.11, отличающиеся тем, что указанное заболевание, расстройство, состояние или симптом являются мигренью с аурой или без нее.
    14. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.11, отличающиеся тем, что указанное заболевание, расстройство, состояние или симптом являются хронической мигренью, частой эпизодической мигренью или менструальной мигренью.
    15. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.11, отличающиеся тем, что указанное заболевание, расстройство, состояние или симптом являются кластерной головной болью.
    16. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.1, отличающиеся тем, что непосредственно или косвенно присоединены к обнаруживаемой метке или терапевтическому агенту.
    17. Нуклеотидная последовательность, которая кодирует антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по любому из пп.1-16.
    18. Нуклеотидная последовательность по п.17, отличающаяся тем, что состоит из кодонов, предпочтительных для дрожжей или человека.
    19. Вектор экспрессии, включающий нуклеотидную последовательность по п.18.
    20. Вектор экспрессии по п.19, отличающийся тем, что является плазмидой или рекомбинантным вирусным вектором.
    21. Рекомбинантная клетка, содержащая нуклеотидную последовательность или нуклеотидные последовательности, которые кодируют антитело против CGRP по любому из пп.1-16 или его фрагмент.
    22. Клетка по п.21, отличающаяся тем, что выбрана из клетки млекопитающего, дрожжевой, бактериальной, грибной клетки или клетки насекомого.
    23. Клетка по п.22, отличающаяся тем, что является дрожжевой клеткой.
    24. Клетка по п.23, отличающаяся тем, что является диплоидной дрожжевой клеткой.
    25. Клетка по п.24, отличающаяся тем, что является клеткой дрожжей Pichia.
    26. Способ лечения заболевания, расстройства, состояния или симптома, связанных с клетками, которые экспрессируют CGRP, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела или фрагмента антитела против CGRP человека по пп.1, 2, 3, 4 или 5.
    27. Способ по п.26, отличающийся тем, что указанное заболевание, расстройство, состояние или симптом, связанные с клетками, которые экспрессируют CGRP, характеризуются повышенным CGRP, связанным с расширением сосудов, и выбраны из мигрени (с аурой или без нее), состояния с CGRPассоциированной болью, потери массы тела, рака или опухоли, гиперактивности мочевого пузыря, недержания мочи, зуда, псориаза, язвы, заболевания сердца, ангиогенеза, связанного с раковым или опухолевым ростом, ангиогенеза, связанного с выживаемостью рака или опухоли, мигрени, хронической миг
    - 201 031065 рени, частых эпизодических мигреней, менструальных мигреней, гемиплегических мигреней, кластерных головных болей, мигренозной невралгии, хронических головных болей, головных болей напряжения, общих головных болей, приливов, хронической пароксизмальной гемикрании, вторичных головных болей вследствие основной структурной проблемы в области головы или шеи, черепной невралгии, синусных головных болей, включая связанные с синуситом головные боли, головных болей, вызванных аллергией, мигреней, вызванных аллергией, боли, дисфункции ВНЧС (височно-нижнечелюстного сустава), воспалительной боли, висцеральной боли, боли в постоперационном разрезе, комплексного регионального болевого синдрома, раковой боли, боли при первичном или метастатическом раке костей, боли при переломе, боли при остеопорозном переломе, боли в результате ожога, остеопороза, подагрической боли в суставах, боли, связанной с кризисом серповидных клеток, боли, ассоциированной с гепатоцеллюлярной карциномой, боли, ассоциированной с раком молочной железы, боли, ассоциированной с циррозом печени, нейрогенной боли, невропатической боли, ноцицептической боли, невралгии тройничного нерва, постгерпетической невралгии, фантомной боли конечностей, фибромиалгии, менструальной боли, овариалгии, рефлекторной симпатической дистрофии, нейрогенной боли, боли при остеоартрите или ревматоидном артрите, боли в пояснице, диабетической невропатии, пояснично-крестцового радикулита или висцеральной боли, связанной с желудочно-пищеводным рефлюксом, диспепсии, синдрома раздраженного кишечника, воспалительного заболевания кишечника, болезни Крона, илеита, язвенного колита, почечной колики, дисменореи, цистита, менструального периода, родов, менопаузы, простатита и панкреатита.
    28. Способ по п.26, отличающийся тем, что указанное заболевание, расстройство, состояние или симптом, связанные с клетками, которые экспрессируют CGRP, характеризуются повышенным CGRP, связанным с расширением сосудов, и выбраны из гиперактивного мочевого пузыря; недержания мочи; боли; хронической боли; нейрогенного воспаления и воспалительной боли; невропатической боли; боли в глазах; зубной боли; послеоперационной боли, боли, связанной с травмой; диабета; инсулиннезависимого сахарного диабета и других воспалительных аутоиммунных заболеваний, сосудистого расстройства; воспаления; артрита; гиперреактивности бронхов, астмы; шока; сепсиса, синдрома отмены опиатов; устойчивости к морфину; приливов у мужчин и женщин; аллергического дерматита; псориаза; энцефалита; травмы мозга; эпилепсии; нейродегенеративного заболевания; кожных заболеваний, включающих зуд, нейрогенное кожное покраснение, розовые угри и эритему; воспалительного заболевания кишечника, синдрома раздраженной кишки, цистита; и дисменореи.
    29. Способ по п.26, отличающийся тем, что указанное заболевание, расстройство, состояние или симптом, связанные с клетками, которые экспрессируют CGRP, характеризуются повышенным CGRP, связанным с расширением сосудов, и выбраны из боли, гиперактивности мочевого пузыря, недержания мочи, головной боли и мигрени.
    30. Способ по п.26, отличающийся тем, что лечение дополнительно включает введение другого терапевтического агента, выбранного из антигистаминов, противовоспалительных агентов, анальгетиков и антибиотиков.
    31. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанный анальгетик является НПВС, опиоидным анальгетиком, антителом или фрагментом антитела.
    32. Способ по п.31, отличающийся тем, что указанный анальгетик является опиоидом, а указанный способ применяют для снижения или предотвращения устойчивости к опиоиду.
    33. Способ по п.31, отличающийся тем, что указанный опиоид является морфином или производным морфина.
    34. Способ по п.30, отличающийся тем, что указанный другой анальгетик является антителом против фактора роста нервов (NGF) или фрагментом данного антитела.
    35. Способ визуализации in vivo, обнаруживающий присутствие клеток, экспрессирующих CGRP, включающий (i) введение диагностически эффективного количества по меньшей мере одного антитела или фрагмента антитела против CGRP человека по п.1, меченных детектируемым образом, и (ii) обнаружение антитела или фрагмента в очагах заболевания, экспрессирующих CGRP.
    36. Способ по п.35, отличающийся тем, что указанное введение дополнительно включает введение радионуклида или флуорофора, которые облегчают обнаружение антитела против CGRP человека или фрагмента антитела в очагах заболевания, экспрессирующих CGRP.
    37. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по пп.1, 2, 3, 4 или 5, отличающиеся тем, что указанное антитело ингибирует связывание CGRP с CGRP-R и/или его мультимерами и/или оказывает антагонистическое действие на биологические эффекты CGRP.
    38. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по пп.1, 2, 3, 4 или 5, отличающиеся тем, что указанное антитело связывается с CGRP со скоростью диссоциации (Koff), меньшей или равной 10-4, 5х10-5, 10-5, 5х10-6, 10-6, 5х10-7 или 10-7 с-1.
    39. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по пп.1, 2, 3, 4 или 5, отличающиеся тем, что указанное антитело ингибирует образование комплекса CGRP с CGRP-R и/или его мультимерами.
    40. Способ получения антитела против CGRP человека или фрагмента антитела по пп.1, 2, 3, 4 или
    - 202 031065 в культуре полиплоидных дрожжей, выделяющих в культуральную среду по меньшей мере 10-25 мг/л указанного антитела или фрагмента антитела, включающий:
    (i) введение по меньшей мере одного экспрессирующего вектора, содержащего один или более гетерологичных полинуклеотидов, кодирующих указанное антитело, функционально связанных с промотором и сигнальной последовательностью, в гаплоидную дрожжевую клетку;
    (ii) получение полиплоидных дрожжей из гаплоидной дрожжевой клетки путем спаривания или слияния сферопластов;
    (iii) отбор полиплоидных дрожжевых клеток, секретирующих указанное антитело или фрагмент антитела в культуральную среду;
    (iv) получение стабильных полиплоидных дрожжевых культур из указанных полиплоидных дрожжевых клеток со стадии (iii) и (v) получение указанного антитела или фрагмента антитела из стабильных полиплоидных дрожжевых культур со стадии (iv).
    41. Способ по п.40, отличающийся тем, что указанный род дрожжей представляет собой Pichia.
    42. Способ по п.41, отличающийся тем, что виды Pichia выбраны из Pichia pastoris, Pichia methanolica и Hansenula polymorpha (Pichia angusta).
    43. Способ по п.41, отличающийся тем, что вид Pichia является Pichia pastoris.
    44. Выделенный полинуклеотид, включающий последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность VH антитела по п.1 или 2, где аминокислотная последовательность VH представляет собой аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 53.
    45. Вектор, включающий и экспрессирующий полинуклеотид по п.44.
    46. Вектор по п.45, который дополнительно включает и экспрессирует полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность VL антитела, представленную SEQ ID NO: 51.
    47. Клетка-хозяин, включающая и экспрессирующая полинуклеотид по п.44.
    48. Клетка-хозяин по п.47, которая дополнительно включает и экспрессирует полинуклеотид, содержащий последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность VL антитела, представленную SEQ ID NO: 51.
    49. Выделенный полинуклеотид, включающий последовательность, кодирующую аминокислотную последовательность VL антитела, представленную SEQ ID NO: 51.
    50. Способ по пп.26, 28, 29 или 30, отличающийся тем, что указанное антитело или фрагмент антитела против CGRP человека вводят в рамках терапевтической схемы для лечения специфического заболевания или состояния, ассоциированного с болью, которая включает введение еще одного терапевтического агента.
    51. Способ по п.50, отличающийся тем, что указанный другой терапевтический агент выбран из химиотерапевтического агента, анальгетика, противовоспалительного агента, иммунодепрессанта, цитокина, антипролиферативного агента, противорвотного агента и цитотоксина.
    52. Способ по п.51, отличающийся тем, что указанный другой терапевтический агент является анальгетиком.
    53. Способ по п.52, отличающийся тем, что указанный другой анальгетик является НПВС, опиоидным анальгетиком, антителом или фрагментом антитела.
    54. Способ по п.53, отличающийся тем, что указанное антитело является антителом или фрагментом антитела против фактора роста нервов NGF.
    55. Способ по п.52, отличающийся тем, что указанный другой анальгетик является НПВС, включающим ингибитор циклооксигеназы 1 и/или циклооксигеназы 2.
    56. Способ по п.55, отличающийся тем, что указанное НПВС выбрано из (1) производных пропионовой кислоты, в том числе ибупрофена, напроксена, напросина, диклофенака и кетопрофена; (2) производных уксусной кислоты, в том числе толметина и сулиндака; (3) производных фенамовой кислоты, в том числе мефенамовой кислоты и меклофенамовой кислоты; (4) производных бифенилкарбоновой кислоты, в том числе дифлунизала и флуфенизала; и (5) оксикамов, в том числе пироксикама, судоксикама и изоксикама.
    57. Способ по п.52, отличающийся тем, что указанный другой анальгетик является фенантреном; фенилгептиламином; фенилпиперидином; морфинанами или бензоморфановым соединением.
    58. Способ по п.52, отличающийся тем, что указанный другой анальгетик является опиоидным анальгетиком, выбранным из кодеина, дигидрокодеина, диацетилморфина, гидрокодона, гидроморфона, леворфанола, оксиморфона, альфентанила, бупренорфина, буторфанола, фентанила, суфентанила, меперидина, метадона, налбуфина, пропоксифена и пентазоцина и их фармацевтически приемлемых солей.
    59. Способ по п.57 или 58, отличающийся тем, что комбинированное введение опиоидного анальгетика и антитела или фрагмента антитела против CGRP человека усиливает обезболивающий эффект, вызываемый ими, и/или облегчает устойчивость к опиоидному анальгетику.
    60. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.1, отличающиеся тем, что указанный фрагмент антитела является scFv, камелизированным антителом, нанотелом или IgNAR (одноцепо
    - 203 031065 чечным антителом, происходящим из организма акул).
    61. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.1 или 2, отличающиеся тем, что включают константный домен антитела человека.
    62. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.61, отличающиеся тем, что константный домен антитела человека является константным доменом антитела человека, принадлежащим IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4.
    63. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.61, отличающиеся тем, что указанная Fc-область содержит мутацию, изменяющую или устраняющую гликозилирование.
    64. Антитело или фрагмент антитела против CGRP по пп.1, 2, 3, 4 или 5, отличающиеся тем, что дополнительно включают обнаруживаемую группу или функциональную группу.
    65. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.64, отличающиеся тем, что указанная обнаруживаемая группа является флуоресцентным красителем, ферментом, субстратом, биолюминесцентным материалом, радиоактивным материалом или хемилюминесцентным материалом.
    66. Антитело или фрагмент антитела против CGRP человека по п.64, отличающиеся тем, что указанная функциональная группа является стрептавидином, авидином, биотином, цитотоксином, цитотоксическим агентом или радиоактивным материалом.
    67. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний, расстройств, состояний или симптомов, ассоциированных с CGRP, содержащая антитело или фрагмент антитела против CGRP по любому из пп.1-16, 38-40 и 61-66.
    68. Фармацевтическая композиция по п.67, которая пригодна для введения путем инъекции.
    69. Фармацевтическая композиция по п.67, отличающаяся тем, что дополнительно включает по меньшей мере один стабилизатор.
    70. Фармацевтическая композиция по п.67, отличающаяся тем, что является лиофилизированной.
    71. Фрагмент антитела по п.4, где указанное одновалентное антитело является metMab.
    АЫ
    Полноразмерная белковая последовательность тяжелой цепи АЬ1 (химера).
    QSLEESGGRLV'TPGTPim.TCTVSGLDLSSYT'MQWVRQAPGKGLEWIGVJGlNDNTYYASWAKGRFTlSRASSJTVDlKMTS LTTTDTATYFCARGDlWGPGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAAI.GCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVin'I’PAV EQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQ1YICNVNIIKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRWSVLTVT.HQDWENGKEYKCKVSNKaLPAP1EKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPV1.DSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHF.AIJIN11YTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 4)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЫ (химера,)·
    QSLEESGCrRI.VTPGTPLn.TCTVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGI.EWlGVIGlNDNrYYASWAKGRFTISRASSTTVDl.KMTS
    LTTEDTATYFCARGDIWGPGTL VTVSS (SEQ ID NO; 3)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ1 (химера)· CDR1: полужирный; СРВ2: подчеркнутый: CDR3: курсив.
    QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGLDLSSYYMOWVROAPGKGLEWlGVIGlNDKrYYASWAKGRFnSRASSTTVDLKMTS LTTEDTATYFCAR<7Z)/WGPGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 8, 9,10. соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЫ (химера). СРЫгпОЛУЖИРНЫЙ; СРВ2:
    MTO^GGAGGAGicCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCrCTGGACrCG ACCTCAGrAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTGA'rrGGTATrA
    AAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACAC<iGCCACCTA'rrTCTGTGCCAGACG'GG.4C(rCTGGGGCCCAGGCACCCTGGT CACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 143)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой цепи АЫ (химера).
    CAGTCGCTGGAGGAOTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACAGTCICTGGACTCG ACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATTGGrATTA ATGATAACACATACTACGCGAG€TGGGCG.AAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGCCTCGTCGAC€:ACGGTGGATCTGA AAATGACCAGTCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGI'GCCAGAGCtGGACATCTGGGGCCCAGGCACCCTCG TCACCGTCTCGAGCGCCrCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCOCCAAGAGCACCrCTGGGCjGCAC AGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAG CGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGFiiACCGlGCCCTCCAGC AGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCC AAATCTIGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCCtTCAGTCTTCCTCTTCC ccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgtgagccacgaag accctgaggtcaagitcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcag tacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctg.aatggcaaggagtacaagtgc aaggtctccaacaaagccctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaagcca.aagggcagccccgagaaccacag gtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctatc ccagcgacatcgccgtgg agtgggagagcaatgggcagccggag aacaactacaAG ACCACOCCTCCCGTGCTGG act ccg acggctccttcttcciotacagcaaoctcaccgtgg аса agagcaggtggcagcagggg aacgtcttc ГСА1GCTC CGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID NO: 144)
    Полноразмерная белковая последовательность легкой цепи АЬЦхимера).
    QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQUYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLT1SDLEC.AD aatyyclgsydcssgdcfvfgggtevvvkrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgns QESVTEQDSKDSIYSLSSTLTLSKADYEKIIKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO; 2)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЫ (химера).
    QVLTQTASPVSAAVGSTVTLNCQASQSVYDNN'YLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFK.GSGSGTQFTLT]SDLECAD
    AATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTEVWKR (SEQ ID NO: 1)
    - 204 031065
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ1 (химера). CDR1: полужирный; CDR2: подчеркнутый; CDR3: курсив......
    QVITQTASPVSAAVGSTVTiNCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGQPPKQUYSISIL^OVSSRFKCiSGSGTQi-TXTlSDLECA
    DAATYYC£GSHX’.SS6»CHTGGGTEVVVKR (SEQ ID NOS: 5,6. соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЬ1 (химера). CDR1: полужирный; CDR2:
    caagtoctgacccagactgcatcccccgtgtct^agctgtgggaagc^'actc^jcatcaattgccaggccagtca^
    AGTGTTTATGATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACXAGGGC,AGCCTC<.CAAGCAACTGAT€IATm.4.АТГГ АСТСТПГ.С АТГП IGf iGTCTOATCGCGGTrCAA AGGCAGTGG ATCT GCG AC ACAG Π C ACTCIC At C AT C AGCG AC. CTGGAGTGTCCCGATGCTGCCACTrACTACTOTCT4GGC:TGmTG.4 TTGTAGTAGTGGTGATrGTmGTT\ TCGGCGGAG GGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEQ ID NO: 141)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой цепи АЫ (химера).
    CAAGTGCTGACCCAGACTGCATCCCCCXnUrCTCCAGCTOrGGCAAGCACAGTCACCATCAATTGQ^AGJKXWyrCAG
    AGTGTTTATGATAACAACrACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCAACTGAlC ГАГТСГАСАТ CCACTCTGGCATCTGCWGTCTCATCGCGGTrCAAAGGCAGrGGATCTGGGACACAGITCACTLTCACCAlCAOCGACCT GGAGTGTGCCGATOCroCCACTTACTACTGTCTAGGCAGnATGATrGrAGTAGTGtnGATTGTnTGTTnCGGCGGAG ослсс^сюгсос1хюто(ла<хяассстсх!стссассатстотспсатст1ххссгсатстодтсйх1^<птолллт<TGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCC AAAGTACAGrGCAAGGTGGATAACGCC CTCCAATCaGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAaGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCrCAGCAGCACCCTG ACGCrGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGirrACGCCTGCGAAGICACCCATCAGGGCCTGAGCTCGacGTC ACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 142)
    Фиг. 1
    АЬ2
    Полноразмерная белковая последовательность тяжелой цепиАЬ2, ' '
    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGL.DLSSYY.MQWVRQAPGkiLEWYGVlGlNDNTYYASWAK.GRFTlSRDNSK.ITYrL OM^LR^DTAYYFCARGDlWGQGTLVTVSSAS'i^GPSVFPLAPSSKSTSGGrAALGCLVTCDYTPEPVTC'SWNSGALTSGV HTPTAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYlCNVNHKre4NTKVDiyiVEPKSCDKTIITCPPCPAPElXGG^yFLFPPKPKpn. MISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYYOGVEVilNAKTKPREEQYASTYRWSVLTVLHQDWLNGkE^KCRYSNK.AM’A PIEKTISKAKGQPREPQVYl-LPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENANYKTTPPVLDSDGSFFLYSkLTVD KSRWQQGNVFSCSVMllEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 14)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ2 (гуманизированная).
    EVQLVESGGGLVQPGGSLRI.SCAVSGI.DLSS YYMQW VRQAPGKGLEWVC.V1GINDNTY YASWAKGRFT1SRDNSKT TV Y L QMNSLRAEDTAVYFCARGD1WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 13)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ2 (гуманизированная). CPR1; ПОЛУЖИРНЫЙ; CDR2: подчеркнуть.!й; CDR3: курсив.
    EVQLVESGGGLVQPG<lSLRLSCAVSGWI.SSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVKHtlDNlYI>)SWAgGRFT is RON SKI I \ Ύ t. QMNSLRAEDTAVYFCARGDAVGQGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 18,19.20, соответственно)
    ПрследовательносшДНК вариабельной области тяжелой цепи АЬ2 (гуманизированная). СРКТ:~полуж'йрный;
    CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив. _ .
    GAGCiTGCAGCTTGTGGAGTCIXMGGGAGGCTFGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCIX'CTGTGCAGRTCIGGAC TCGACCTCAGTAG€TACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGC.GGCTGGAGTGGGTCGGAeiUIl£^ TCAATGATAACACATACTACGCGACiCTGQGQGAAAGjXCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGT ATC'rTCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTGCTG'rGTATTTCrGTGCTAGAGGGGJC.-ilC IGGGGC CAAGGGAC CCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 153)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой цепи АЬ2, продуцированная в клетке млекопитающего (гуманизированная). _________ _______.
    GAGGTGCAGCXrGTGGAGTCT<MGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGrCCXTCAGACr(-rcCTGTCR.AGTCTCTGGAC TCGACCTCM^^GCTACT'ACATCiCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGG(}AAGGGGCTGGAGTCGGTCGGAGTCATTGGTA TCAATGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAA-ntCAAt.ACCACGGTGT АТСП CAAATGAACAGCCTGAGAGCl GAGGACACTGCTCTGTATTrCTGTGCXAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGA CCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCnCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCIGG G<MCACAGCGGCCCTCGGCTG<XTGGTCAA(KiACl'ACTTCCCCGAACCGGTGACGGTOTCGTGGAACKAG^CGCCC GACCAGCGGCGTGCACACC TTCCCGGCIGTCCTACAGTCCTCAGGACICIACTCCC TCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCC TCCAGCAGCTTGGGCACCX’AGACCTAC^TCTGCAACGTGAATCACAAGCrcACK^
    GAGCCCAAATCTTGTGACAAAACrCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACICCTGGGGGGACCGTCAGFCrrCC TCTrCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGG ACCCCTGAGGTCACATGCG J GGTOGTGt/ACGTGAGC CA VGA AG ACCCTGAGGTCAA GTTCA ACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCC AAGACAA AGCCGCGGGAGG AGCAGTACGCCAa'ACGTACCGTCTGGTCAGCGTCCrCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCra^TGGKAAGGAGlM^ aGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCI'CCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATC! CCAA AGC CAAAGGGCAGCCCCGAGA AC CACAGGTGTACACCCTG^CCCATCCCGGGAGGAGATGACOAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTCXCTG^TCAAAG<3C1 TCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGA^ACGCCliXCGTOC tggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctc ATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACrACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA (SEQ ID
    NO: 154)
    Полноразмерная белковая последовательность легкой цепи АЬ2 ^VLE^^^LSASWDRVriNCQASQSVYDNNYLAWYQQKEGKYTKQUYSTSTCASGVKRFSGSGSGTDFlLTlSSLQPED
    VATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRIiAkVQWKVDNALQSGNbQ
    ESVTEQDSKDSTYSLSSTI.RSKADYEKHKVYACEVniQGUSPV'TKSFNRGEC (SEQ ID NO: 12)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ2 (гуманизированная). ...
    QVLTQSPSSI.SASVGDRVT)NCQASQSVYDNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDH LTISSLQI’ED VATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 11)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ2 (гуманизированная). CDR1: полужирный: CDR2: подчеркнутый; CDR3: курсив.
    QVITQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVrYDNNYLAWYQQKl>GKVPKQLlYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTlSSL.Ql'ED VATYYCiG'irDCSSGDCFITGGGTKVElKR (SEQ ID NOS: 15. 16, 17, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЬ2 (гуманизированная). CDR1: полужирный: CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив.
    лтсслсгста-^таосйтссглтстсйгггсАСтасслбтсолтст«ЮАСлилтсАСГстслс1:АТСлисА<к: СТОСЛОССТ13ЛЛСМЛГС!Ггс!сМСЯТАТ1ЧСТОТСЯИОСХ^<СП:<7Ш7ТОЛК?ТЛСТСС?ШПСП77СПТТСОСС<Х.ЛС GAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEQJDNO: 151)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой цепи АЬ2 (гуманизированная).
    CAAGTGCTGACCCAGTC'TCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCWTCAGA { tgtttatgataacaactacctagcctcgtatcagcagaaaccagggaaagttcctaagcaactgatct.aitctm.atc CACTCTG(iCATCTGGGGTCCCATCTCGrrTCAGTGC5CAGTGGATCTGGGACAGATTrCACTCTCACCATCAGCAGCCTG
    CAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 152)
    Фиг. 2
    - 205 031065
    АЬЗ
    Полноразмерная белковая последовательность тяжелой цепи АЬЗ, продуцированная в дрожжевой клетке (гуманизированная). ______„,™™.»·νττι·νι
    EVOLVFSGGGIVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGlN’DbllYYASWAKGRFllSRDNSKmAL oXl^otavy^
    MlSRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYKWSVLT\'LnQDWLNGKEY КС К\ SNKALPA PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSIXISFILYSKLIVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 24)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬЗДгуманизированнаяЦ
    BVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGLEWVGViGJNDNrYyASWAKGRFTISRDNSKnVYL
    QMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTI.VTVSS (SEQ ID NO: 23)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬЗ (гуманизированная). CDR1: nPAY2KMPHbUfc.CPR2; подчеркнутый; CDR3: курсив. ,г_г
    EVQLVESGGGLVQPGGSLRI.SCAVSGLDLSSYYMQWVRQAPGKGl.EWVGyKa^lJNTYYASWAKiiRFI ISRDNSKTTv λ L QMNSLRAEDTAVYFCARGD/WGQGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 2«, 29. 30,соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЬЗ (гуманизированная)· CDRl· полужирный;
    CDR2; подчеякнутый; СР R3; курсив, . ,а г·
    GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGOGGGAGGCnGGlXXAGCCTGGGGGOTCCCTGAOAClCTCCrGTGCAGTCTcTGiiAC TCGACCTCAGTAGCTACTACATGCAATGGOTC(»TCAGCO-<XAGGGAAGGGGCTGGAGT<^iajGAgiA^^A tcaatGATAACACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGACCACGGTGI mc^aatcaacagcctgaga^
    CCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 163)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой цепи АЬЗ, жж»
    GGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACrACTTCCCCOAACCG^^
    AGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATC1ССАА AGCCAAAGGGCAGC ССС GAGAAC cacaggtgtacaccctgcccccatcccgggackiagatgaccaagaaccaottcwgcctgacct^^^^
    TCTATCCCAGCGACATCCRrOTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACT/WAAGACCACGCCTCCCGTGC TGGACTCCGACGGCTCCrTCTrCrTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCtrCTC ATGCTCOTTGATCCATGAGGCrClGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCFCTCCCTGTCTCCGGGTAAArGA (SEQID
    NO: 164)
    Полноразмерная белковая последовательность легкой цепи АЬЗ (гуманизированная).
    ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVIKSFNRGEC (SEQ ID NO: 22)
    Белковая последовательность .вариабельной области легкой цепи АЬЗ (гуманизированная).
    QVLTQSPSSI-SASVGDRVTINCQASQSVYDNNYLAWYQQKPOKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTJSSLQPED VATYYCLGSYDCSSGDCFVFGGGTKVE1KR (SEQIDNO;21)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬЗ (гуманизированная). CDR1: полужирный;
    QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQ.SVYDNNYLAWYQCKPGKVPKQLlYSlSTLASGVPSRFSGSGSGTDfTLTlSSLQPF.D
    VAlYYCZGS'yDCSSGDCRITGGGTK.VEIKR (SEQ ID NOS; 25,26,27,соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЬЗ (гуманизированная). CDR1: полужирный: CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив.-r>AAr,TnrTnACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCA'irTOTAGGAGACAGAGTCACCATC.AATrGCCACGCCAGTGAG
    AGTGTTTATGATAACAACT^CClA^CCro<^ATCAGCA0AAACCAGW^^A^G7TCC^^G^^^CT(j^TC”l/vnXnAL CTGCAGOTT^^^^ITOCAACTTArrACTGTCl^GGCJGrWrGXTTGrjGTHGTGG/G.fTTGTTlTCTTnCGGCGC.AG GAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEQ ID NO; 161)
    CAAGTGCTGACCCAGTCTCXIATCCTCCCTGTCIGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGC'CVVGGCCAGTCAGA GTGTrDVrGAMACAACTACC'rAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTOCTAAGCAACTGATCTAnCTACATC rACTCrr>CiCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTT< АСТСТСАССАГСАОСАОС CTG СЛОССТ^ЛЛОЛТОТТССЛЛСПАТТАСТ^И^ТЛООСАСТТЛТСЛТТСТАСТАОТОС.ТйАТТОТТГГОТуГТСУОССОЛОС AACCAAGOTGGAAATCAAACGTACGGTGGCrGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT GGAACTGCCTCrGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCC ??ciScGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGAC/\GCAAGGACAGCACCTACAGCC.TCAGCAGCACCCTGA
    CAAAGAGCTTCAACAGCGGAGAGTGITAG (SEQID NO: 162)
    Фиг. 3
    Ab4
    Полноразмерная белковая последовательность тяжелой цепи АЬ4 (химера),
    KAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSI.TCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTIPPVLDSDGSFFL\ SKLTVDKSRWQ QGNVFSCSVMHEALirNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 34)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ4 (химера),
    QSLEESGGRLVTPGrPLTLTCSVSOIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWJGVIGINGATYYASWAKGRFTlSKTSSTTVDLKMTS
    L rrEDTAlYFCARGDIWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 33)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ4 (химера), CDR1: полужирный: CDR2: подчеркнутый: CPR3: курсив. .
    OSLEI-SGGRLVTPGTPLTLTCSVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWIGYigiNGAIYYASWAKGRFTlSKTSSTTVDLKMTS
    LTTEDTATYFCARGD/WGPGTL\fTVSS (SEQ ID NOS: 38,39,40. соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЬ4 (химера). CDR1: п~олужирныи:СРК2: слотссстосмюлотпссс1юоотгясст<кп<л<хюст<кк^лсхюсталсл<лслоскитссхл<лхл4*ллтсо
    ACf’TCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGAGTCATIfiGl^^
    AAT(^TGCCA^TACi^^3n3A^TGGGCGAAAGGCCGA4TCACCATCTCCAAAACCrCGTCGACCACGGTGGATCTG
    GTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 173)
    - 206 031065
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой цепи АЬ4 (химера).
    ATGGTCiCCACATACTACGCGAGCTGGGCG AAAGGCCGATTCACCATCTCCA а Алеете GTCGACCAC GGTGG АТСТОА
    AGCTTOOoCACCCAOMJCTACATCTGCAACxnOAATCACAACCccAOCAACACCMOCTcgACAAuACjMrtTOACccx
    TACGCCAGCACOTArcGTGTC^TCAGCGTCCTCAaOTCCTGi^CCAGGACTGGCrGAAT^LAAG^TACAAGTGC д и'гггтегл, acaaACK’CCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC AG сслосслслтс<кситасАс.тисллаАаслАТСС.остиссаслолдсллста:лАСлс(л<.«с1ссся\лтсмсл
    CCGAfOGCTCCTTCTrCCTCTrACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTCrGCAGCAGGGGAACGTCTTCrCAlGLlL c§tca?2Stcaggctctgc (SEQ 1D NO: ‘ '4>
    Полноразмерная белковая последовательность легкой цепи АЬ4 (химера).
    QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 32)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ4 (химера),
    QVLTQTPSmAAVGSTVTJNCQASQSVYHNnbAWYQQKPGQPPKQMYDASTI.ASGVPSRI-SGSGS(iTQFTLTlSGVQCND AAAYYCLGSYDCrNGDCFVFGGGrEVWKR (SEQ ID NO. 31)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ4 (химера), CDR1: полужирный: CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив.___________
    QVLTQTPSPVSAAVGSTVTlNCQASQSV3'HNTYLAWYQQKPGQPPKQLrrDA§TLASGVPSRfSGSGSGTQnLTlSGVQCN DAAAYYCIG'5yDdWGDCFPFGGGTEWVKB (SEQ ID NOS: 35, 36, 37, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЬ4 (химера). CDR1: полужирный: CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив. ,
    CAAGTGCTGAC^CAGACTCCATCCCCCGTGTCrGCAGCTGIGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAG ёгоС^ОТ^^АТССТСССССГГАСТАСТОТСТСССС.4С;тГСЯГтГЛСТЯЛТССтеЛП-С'77776ГГПтеССООАС GGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEQ ID NO: 171)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой цепи АЬ4 (химера).
    caagtgctgacccagactccatcccccgtgtctgcagctgtgggaagca(:agtcaccatcaattgccagg€cagtc nTfrrrrATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCC rCCCAAACAACTGArCTATGAlbCATC CACT^GGCGTCTGGGOT^CCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACACAG'n'CACrCICACCATCAGCGGCGTC CAGTGTAACGATGCTGCCOCTTACTACTGTClGGGCAGTTATGATTGTACrAArGGrGAfTGTTTTGl rTTCGGCGGAGG GACCGAGGTGOTGGTCAAAC.GTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTC^C^CCCGCCATCrGATGiM^^GITWi/^T^T GGAACTGCrTCTGnGTGTGCCTGCrGAATAACTTCrATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGrGGAAGGTGGArAACGCCC TCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA CGCTGAG^^.AAGCAGACDLCGAGAAACACAAAGTCTACGCCrGCGAAGTCACCCATCAGGGC,CTGAGCTCGCCCGTCA CAAAGAGCTrCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 172)
    Фиг. 4
    ЛЬ5
    Полноразмерная белковая последовательность тяжелой цепиАЬБ, продуцированная в клетке млекопитающего (гуманизированная). ..^,,κττνγ[
    SSivSVvSS
    KSRWQQGNVFSCSVMHEALHN1IYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 44)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ5 (гуманизированная). i^^^VQPGCSLRLSCAVSGTDLSGYYMNWV-RQAPGKGLEWGVlGlNGATYYASWAKGRFriSRDNSKTTVYL QMNSLRAEDTAVYFCARGD1WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO; 43)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ5 (гуманизированная).РРЯ1: ПОЛУЖИРНЫЙ; CDR2: подчеркнутый; CDR3: курсив, ™·*ιζρΒΓπ«ηχ·4ΓΓΤ\ΎΙ
    EVOLVESGGGLVQPGGSLRl.SCAVSGlDLSG't'YMNWVRQAPGKGLEWVGVTGIM'ATYlASWAKfiRETlSRDNSKTTS'YL QMNSLRAF.DTAVYFCARGDWGOG'rLVTVSS (SEQ ID NOS: 48,49, 50, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЬ5 (гуманизированная), CDR1: пол'ужйрный:
    TCGACCTCAGTGGCTACTACATGAACTGGGTCCGTCAGGCTC^GCRiAAGGGGCTGGAGTGGGTCGGA^^^ri^&CCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQIDNO: 183)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой цепиАЬб, продуцированная в клетке млекопитающего (гуманизированная).__г,.ГТГТгтпс,а.а sssssssss
    ATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCrGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTC. FCCGGGIAAA1GA (SEQ TD
    NO: 184)
    Полноразмерная белковая последовательность легкой цепи АЬ5 (гуманизированная).
    OVLTOSPSSlSASVGDRVTJNCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGK-VPKQLlYDASTLASGVPSIU'SGSGSGTDFrLySSLQPED <^VniQI»l«lSTYSLSSn.TLSKAl>YBKHKVYACEVTIiqOLSSrV7XSI-NKOrC (SEQ 1ΟΪ.0.4-)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ5..( гуманизированная).
    QVLTQSPSSlSASVGDRVTLNCQASQSVYlINTYLAWYQQKJ’GKVPKQLJYDASTLASGVPSRFSGSGSGTDnLTISSLQPED
    VATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGIXVEIKR (SEQ ID NO: 41)
    - 207 031065 ”Г“™М- ДЬ= 1г»»«ни.»роа,Ин=я).а>М; · QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYW>'TYLAWYWKPGKVPK.QLlYDASTLASGVPSRFSGSGSGiDni.llSSL.Qi’ED VATYYCIGSrDCnVGPCFPFGGGTKVEIKR (SEQ ID NOS: 45,46,17, соответственно)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой цепи АЬ5 (гуман1ляИрПЯЗЦЦоо) ----- CAAGTGCrGACCCAGTCTCCATCCFCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCrAGXtiCAGTCAG AGTGTrTATCATAACACCl'ACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATQATGC ATCC^ACTCTGGCATCTCGGGTCCCATCTCGTnCAGTGGC'AGTGCiATClGGGACAGATTTCACTCrCACCATCAGCAGC CTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACrTATTACTGTC7OGGCJGn-47G.47TGL4CT4.lTGGTG47TOm7GrrTTCGGCGGA<i GAACCAAGQTGGAAATCAAACGT (SEQ ID NO: 181)
    АЬб
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЬ5 (гуманизированная). CDR1: полужирный; CDR2: подчеркнутый; CDR3: курсив
    CAAGTGCTGACi:CAGTCTCCATCCTCCCTG'fCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAGA GTGTTTATCATAACACCTACCTGGCCTGGTATCAGCAGA.AACCAGGGAAAGTTCCTAAGC/VACTGATCTATGATGCATC CACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATrrCACTCTCACCATCAGCAGCCiG CAGCCTGAAGATGTrGCAACTTATTACTGTCIGGGCAGrrATGATTGTACTAATGGTGATTGTTnGTTnCGGCGGAGG AACCAAGGYGOAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT GGAACTGCCTCTGTTGrGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAG'IACAGTGGAAGGTGGATAACGCCC TCCAArCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGiCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCA CAAAGAGCTrCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: )82)
    Фиг. 5
    Полноразмерная белковая последовательность тяжел ой цепи АЬб, продуцированная в дрожжевой клетке (гуманизированная). . TVV.а ^ортт<гйПХЧКТТУУ1
    PIEICnSKAKGQPREPQVYTLPPSRISEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDlAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKI.T\rD KSRWQQGNVESCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 54)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬб ^TJ^^^PGGSLRLSCAVSGIDLSGYYMNWVRQAPGKGLEWVGVlGlNGAJYYAbwAKGRFnSRONSKn-VYL
    QMNSLRAEDTAVYFCARGD1WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO; 53)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬб (гуманизирова полужирный: CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив·
    BVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIDLSGY^ MNWVRQA?GKGLEWVG\ lGINfl&TY\
    QMNSLRAEDTAVYFCARGDWGQGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 58,59, 60, соответственно) rrVYl,
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЬб (гуманизированная), CDR1: полужирный: CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив.
    GAGGTGCAGCTlGTGGAGTCTGG<iGGAGGCTTGGTCCAGCClGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGTCTCTOGAA
    TATCTTCAAATGAACAGCCTCAGAGCTGAGGACACTGCTOTCiTATTTCTGTCiCTAOAOO'GGHCJ7tTOGG<KX:AAOCiGA CCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 193) Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой цепи АЬб, продуцированная в дрожжевой клетке (гуманизированная). * z- л гч-гг'тгг к тгтгчт и. а а
    CCCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCKDGU GGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGG IG rCGTGGAACTCAGGCGCCCΊ GACCAGCGGCGfGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACrCCCTCAGCAGCGTGGlGACCGrGCCC TCCAGCAGCrrGGGCACCCAGACCTACATCrGCAACGTGAATCACAAGt’CCAGCAACACCAAGGlC^ACGCGAGAGTT rArrrrAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTC l ГСС TCr^^^CAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACCiTGAGCCA C!GAAGACCCTGA(K3TCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAA.AGCCGCGGGAGG ACCAGT ycGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGAC rGGCTGAATGGCA AGGAG ГАС A AOTGCAAGokTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCrCCAAAGC^^G^^rCGAGAAC CACAGGTOTACACOTGCCCCCATCXXXKWAGGAGATGA<XAAGAACCAGGTCAG^GACCTGCCrGOT^^>GCT TCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGACmYACAACTACAAGACCACGCCTCCCGIGC TGGACT-CCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGG TGGCAGCAGGGGAACG атсстссотоатосатоасюсгстссасаассастасасосаоаасаосстстссстотстсссоотааатсл <seq,d
    NO: 194)
    Полноразмерная белковая последовательность легкой цепи АЬб
    S^SSwGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQLlYDAS'rLASGVPSRFSGSGSGTOFTLnSSLQPLD VATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFV'PREAKVQSVKVDNALQSGNS
    QBSVrEQDSKDSTYSLSSTLTtSKADYSKHKVYACEVniqCLSSrvrKSFNRGlX: СВД ID NO: >2)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬб (гуманизированная).
    QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAWYQQKPGKVPKQUYDASn.ASGVPSRFSGSGSGTDFrLTISSLQPED
    VATYYCLGSYDCTNGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQ ID NO: 51) дЬН-^ть^а^-идс^^ноуй р о6ласти легкой цепи АЬ6 (гуманизированная). CDR1:
    QVLTQSPSSLSASVGDRVTINCQASQSVYHNTYLAUYQQKPGKVPKQLIYDASILASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPED
    VATYYCLGSrDCTVGDCFJTGGGTKVEiKR (SEQ ID NOS: 55, 56, 57, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЬ6 (гуманизированная). CDR1: полужирный: СР^^подчеркнутый; CDR3: курсив. caagtgctgacccagtciccatcctccctgtctgcatctgtaggacacagagtc^^ ^7Д^^ст^^СЛ^ТПГЛ6Т«ЮЛОТСС,Л1СТК»лСЛСЛТГГСЛСТСТСЛ«:АТСЛОСАСС
    CTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGClGraro.-inGDlCT^/GG'fGATTGIlTTCTTTlCGGCGGAt, GAACCAAGQTGGAAATCAAACGT (SEQ ID NO: 191)
    Подноразмерная последовательность ДНК легкой цепи АЬб (гуманизированная),
    CACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTrrCAGTGGCAOTGGATCTGGCiACAGATTTCACTCICACCA rCAGCAGCCIG CAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTACTAATGGTGA'ITGTmCTTTTCGGCGGAGG $А^ХоСЛЛЛТСАЛАСОТЛСООТ«И.Т«^ССЛТСТСТСТГСЛТ<^^*Т^ТОЛ^^ЛЛА1С^ GQAACTGCCTCTGTrGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGIACAGTGGAAGGlGGAl AACGCCC tccaatc^ggSactcccaggagagtgtcacagagcaggacagc^^ggacagcacctacagcctcagcagcacctiga cgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgggaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtca CAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 192)
    Фиг. 6
    - 208 031065
    АЬ7
    Полноразмерная белковая последовательностьтяжелой цепиАЬ7 (химера).
    nmi kFSGGRLVTPGTSLTI TCTVSGJDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWIGVVGLNGRTYYASWAKGRf nSRTSSTTVDLKv 1 A¥lOSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYlCNVNHKPSKrK.VDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPkPKinLMISR
    TprwrvvvnvsHEDPFVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTYLHQDWLNGKEYKCkVSNlGXLPAPIEKT
    QQGNVFSCSVMIIEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO; 64)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой иепиАЬ7 i^^UCESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGlDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWlGWGlNGRTVyASWAKGRFTlSRTSSTTVDLKM
    TRLTFEDTATYFCARGDIWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO. 63)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ7 (химера). CDR1: полужирный; CDR2:
    QEQLKESGGRLVTPGTSLTLTCTVSGlDLSNIIYMQWVRQAPGKGUiWlOXvyihyiy
    TRLTTEDTATYFCARGD/WGPGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 68.69. 70,соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЬ7 (химера). CDR1: полужирный: CDR2: cacoagcagctgaa^agtccgggggtcgcctggtcacgcctgggacatccctgacactcacctgcagcgtctctgga •гдттд ATGGTCGCACATAr^rACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATrCACCATCTCCACiAACCTCGlCGACCACGGTGGAT ^^XTOACCAGGCrGACAi^AGGACACGGCCACCTATTrCTGTGCCAGAGGGGXairCTGGGGCCCAC^CACC (’1GGTCACCG CCTCGAGO (SEQ ID NO: 203)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой цепи др/ |химера|.
    CAGGAGCAGCTGAAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACATCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGA ATCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATCGGAGTCGTTGGT attaatggtcgcacatactacgcgagctggocgaaaggccgaitcaccatctccag/vxcctcgtcgaccacggtggat CTGAAAATGACCAGGCTGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTrCTGTGCCAGAGGGGACATCTGGGGCCCAGGCACC стостсАсссгстссАссб^х/тсслесААСсосссАтсбстстгссссстсссАСсстсстссААСАССАССЕстоссс; gcacagcggccctgggctgcciggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctga CCAGCGGCGTGCACACCITCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGIGCCCTC CAGCAGCTTGGGCACCC AGACCIACATCIOCAACGTGAATC АСА AGCCCAGCAAC ACCA AGGTGG АСА AGAGAGTIG A GCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAWACCTGAACTCCTGGCKIGGACCGTCAGTCrTCCTC TTCCCCCCAAAACCCA AGGACACCCTCATGATCTCCCGG ACCCCTGAGGTCAC ΑΊ GCGTGGTGGTGGACG PG AGCCACG AAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAG CAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAG TGCA AGGTCTCCAAC AA AGCCCTCCCAGCCCrCATCGAGAAAACCATCTC CAAAGCC'AAAGGGCAGCCCCG AGAACCA caggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttc tatcccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctg GACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGrGGCAGCAGGGGAACGTCrrCTCAT GCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATG A (SEQ ro NO: 204) цели АЬ7 (химера). --QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSXWNYNYLAWYQQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLnSDVQCD DAATYYCLGSYDCSTGDCFATGGGTEVWKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGN SQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGUSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 62) рдРиа6^нОй области легкой
    QVLTQTASPVSAAVGSTVTINCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQPPKQI.IYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCD DAATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTEVVVKR (SEQ ID NO: 61)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ7 (химера). CDR1: полужирный;
    QVLTQTASPVSAAVGSTVTlNCQASQSVYNYNYLAWYQQKPGQlTKQUYS^lLASGVSSRFKGSGSGTQFrLTISDX QCD
    DAATYYCiG^DCSTGDCFITGGG TEVWKR (SEQ ID NOS: 65. 66, 67. соответствен но)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЬ7 (химера). CDR1: полужирный; CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив.
    GACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEQ ID N0: 201)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой
    ACAAAGAGC rrCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 202)
    Фиг. 7
    Ab8
    Н^пи АЬ8 куманизировГЯ по ) следовательность тяжелой
    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGlDLSNHYMQWVRQAPGKGLEWVGVVGJNGRlVYASWAKGRFTISRDNSK.mYL QMNSLRAEDTAVYFCARGDJWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSG.ALTSGV HTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQ1TICNVNHKPSNTKVDK.RVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTL MISRTPEVTCVWDVSHEDPEVK1NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRWSVL1VLHQDWLNGKEYKCKVSNK.AM’A PlEKTISK.AKGQPREPQVyTLPPSREEMTKNQVSLTCEV'KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKi.TVD KSRWQQGNATSCSVMHEALILNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 74)
    Брдковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ8 (гуманизированная).
    EVQLXTSGGGLVQPGGSLRLSCAVSGlDLSNHYMQWVRQ.APGKGl.EWVGVVGINGRTYYASWAKCRIT’SRDNSKrTVA'L
    QMNSLRAED'fAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO; 73)
    Q.MNSLRAEDTAVYI-CARGD/WGQGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 78, 79,80. соответственно)
    FVYL ДЬ8 ^««ррш.ннтГ. nw- ·· gaggtgcagcttgtc^agtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagtctctggaa
    TCGACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGC1GGAGTGGGTCGGAGTCGITG<nA
    ATC'rrCAAATGAACAGCCTGAGAGCTGAGGACACTOCTGTGTATTTCTGTGCTAGAGGGGJiLfTCTGGGGCCAAGGGAC CCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO; 213)
    - 209 031065
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой
    T(’GACCTCAGTAACCACTACATGCAATGGGTCCGTtlAGGCTCCAGC»GAAG<>GGCTGGAGTGGGTU?»GAGTGGrTGG1A TC/UTGGTCOCACATACTACGCGAGCTGGGCGAAAGGCCGATTCACCAITTCCAC!AGACAA‘fjCCAA, JI . ’ ssss
    GCCKZACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG I’GACGGTG 1 CtjTGGAAClCAGGCGCCCr
    GAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACrCCIGGG<>GGACCGTCAGTCTlCC
    COAAG^CCTCAGOTCAAGTTCAACTCXiTACGTOGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGG ==™===Bss=
    NO: 214)
    Полноразмерная белковая последовательность легкой
    O^TOSPSSLSASWD^raNCQASQSVYNYNYLAV.DfQQKi’GKVPKQLIYSTSTEASGVPSRFSGSGSGTpFTUlSSLQPED VATYYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVEiKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWkVDN.ALQSGNS QESVrEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKiiKVYACEVTUQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 7.)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой
    OTuro^K^ffivi^QASQSVYNYNYLAWYQQICPGKVPKQUYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTT.TISSLQPED
    VA'iyYCLGSYDCSTGDCFVFGGGTKVElKR (SEQ ID N0:71)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ8 (гуманизированная). CDR1: полужирный: CDR2: подчеркнутый; CDR3: курсив.
    QVI TQSPSSLSASVGDRVT1NCQASQSVYNYNYLA^QQKPGKVPKQLPfSILSTIASGVPSRFSi»SGSGIDFTLriSSLQPED
    VAiyYCLGS7ZX37GDCFFFGGGTKVliIKR (SEQ ID NOS: 75, 76,77. соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЬ8 (гуманизированная). CDR1: полужирный; CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив.
    GAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEQ ID NO: 211)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой цепи
    САСКяполЛСЛТСТГ<КЛЛСТТАТТЛСГОТСТС<ЮС*СТТАТОЛТГСТЛ<Л'АСКЮТСЛТК>ГПТ<|ГПтаЮОТЬЛйО
    CAAAGAGCTrCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 212)
    Фиг. 8
    QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 84)
    Белковая последовательность вариабельной области
    LTTEDTATYFCTRGDWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 83)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ9 (химера). CDR1: полужирный;.
    LTTEDTATYFCTRGD/WGPGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 88,89. 90. соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЬ9 (химера!. CDR1: полужирный:
    DAATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTEVWKR (SEQIDNO: 81)
    Полноразмерная белковая последовательность Ижедой цепи АЬ9 (химера)
    Белковая последовательность вариабельной области
    GTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 223)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой цепиАЬЭ (химера) легкой цепи АЬ9 (химера).
    - 210 031065
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ9 (химера). CDR1: полужирный;
    DAATYYC£GS№CS«GDCFITGGGTEVWKR (SEQ ГО NOS: 85, 86, 87, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЬ9 (химера). CDR1: полужирный;
    CAAGTGCl'GACCCAGAt^TCCATCCCCCGTGTCTGCAGCTGTGCiGAAGCACAGTCACCA'rCAATT’GCCAGGCCAGTCAG ^TGTTTAT^TAACAACTACCTA^CCTOOT^rcAG^AGA^^CC^GGGCMjCCTCtXAAGCA^TbATCTATL^__^ §|S^^^^MiiCTGCCACrrACTACTGTCWGG’0Gmro4ZTGT.lG7-CG7-GGrc47TG7777G'7T(TCGGCGGAG GG ACCGAGGTGGTGGTC АА ACGT (SEQ ID NO: 22))
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой ^^^&eS®SS»SS8fflSSS8SSSSS
    CAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ TO NO: 222)
    Фиг. 9
    АЫО
    Полноразмерная белковая последовательность тяжелой цепи АЫО (гуманизированная). , т =Ξ=Ε=^=Ξ===
    EKTlSKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDtiSFF.
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой ‘igvq^vESGJx^vQWWSLBXscAVSGicLSSYYMOWvRQAKiKCtBWVGViGSDCKTVYATWAitoKFnsKDNSKTTVYL
    QMNSLRAEDTAVYFCTRGD1WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 93)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЫО (гуманизированная). CDR1:
    ОР^у/кимый; CPR2; пддчеркнутый; CDR3: курсив. , .
    EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAVSGIGLSSYYMQWVRQAPGKGLE^GVIGSEGKIYYAmAKGRFTISRDNSKTTVY
    QMNSI.RAEDTAVYFCTRGD/WGQGTLVTV'SS (SEQ ID NOS: 98,99,100, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЫО (гуманизированная). CDRI: ~ ' полужирный; CDR2; подчеркнутый: CPR3; курсив, *,, -стп-гтг л а а
    GAGGTGCAGCTTGTGGAGTCTGGGGGAGGCITGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACT< тгггггтс AGTAGi’TACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGbGGiTGGAGlGGGTCCiGAGl£^^MlA mnATm'^C^^J'ACTAraCGAOTGOGCGAAACCCCCATrCACCATCTCCAGAGACAATrCCAAGACCACGglOl ATCnCAAATCAACAGCCTGAGA«TGAGGACACTGCTGTCTATrTCTGTACCAOAOOGC,KJrCTGG№CCAA(,CGAC CCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 233)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой
    TCGGrf^CAGTAGCTACTACATGCAATGGGTCCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGlCGGAGiXATrGGTA GTGAHWTAAGACATACTACGCGACCTOG<^GAAAGGCCGATTCACCArcT^AG<^ACA^OTTCAAGACCA(^^GT ArCTTCAAATGAACAGCCiGAGAOCTGAGGACACTGClGTGTATrTCTGTACCAGAGGGGACATCTGGGGCCAAGGGA CCCTCGTCACCGTC^CGAGCGCCrCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCrCCTCCAAGAGCACCTCWb GGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTG ACGGTGTCG i GGAAC FCAGGCGCC nACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCrCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTOGTGACCGrGCCC тгг АЛГ trciTGOGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGOAC AAGAUAGTT
    TG<1 ACTCCGACGGCTCrTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGG7 GGCAGCAGGGGAACGTCI К. L ATGCTCCGTGATGCATGAGKiCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCrGTCTCCGGGTAAATGA (SEQID
    NO: 234)
    Полноразмерная белковая последовательность легкой цепи ^OVLrO^^S^VGD^TINCQASQNVYNNNYLA^QQKPGKVPKQIJYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTlSSLQPED VA’JYYCLGSYDCSRGDCnTGGGTKVElKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCl.LNNFYPRF-AKVQWKVDNALQbGNS QESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 92)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой ^^^LS^DromNCQASQNVYNNNYLAWYQQKPGKVPKQLIYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDHLnSSlQPED
    VATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVE1KR (SEQ ID NO: 91)
    OVLTOSPSSLSASVGDRVTINCOASONVYNNNYL.AWYOOKPGKVPKOLTYSTSTLASGVPSRFSGSGSGTDFTLT3SSLOPED
    VAn'YCZG5roCS^GDCnTGGGTKVElK.R. (SEQ ID NOS: 95.96,97, соответственно)
    ЩаХ*^^й^^^[5да^уц^(ей СОКЗ°к^сТ'вЛеГКОЙ Цепи АЬ1° (гУманизиРОванная). CDR1:
    CAAGTGCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGTCAG
    AATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATFCT^(2 ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCaCCaTCAGCAGC CTGCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTA'rTACTGTC.7-GGGC4G77J7G/1r/'6,7>iGTCG7GGrGJ7TG7777GnTrCGGCGGAG GAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEQ ID NO: 231)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой цепи
    АЫО (гуманизированная).
    CAAGI GCTGACCCAGTCrCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGG AGACAG AG ГСАССА TCAATTGCCAGGCC AGTCAGA ATGTTTACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTrCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATC CACTCTGGCATCrGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTG CAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACTGTCTGGGCAGTTATGATTGTAGTCGTGGTGATTGTTTrGTTTTCGGCGGAGG AACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTWCTTCATCTrCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCT GGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGCiCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCC TCCAATCGGGrAACTCCCAGGAGAGrGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCrGA CGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGC’GAAGTCACCCATCAGGGCCrGAGCTCGCCCG'ICA CA AAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO. 232)
    Фиг. 10
    - 211 031065
    АЬП ^Полноразмерная белковая последовательность ^LEFSGGRlAT’KK3SLTLTCTVSGIDVrNYYMQWVRQAPGK.GLEWIGVIGVNGKRYYASWAKGRlfTISKTSSlTyDLKMT SLTTED’rATYFCARGDnVGPGTLVTVSSASTICGl*S\TPLAPSSKSlSGGTAALGCLVKDYTPEPVTVSWNSGAUSGyHTH,A VLOSSGLYSLSSVVWPSSSLGTQTYlCNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDICrHTCPPCPAPEJ.LGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT _ 3pf.vv vnVSHEDl’F vkfnwyvtowvhnaktkpreeqyastyrvvsvltvlhqdwlngke ykcka SNK ALPAPIEK11
    QGNVFSCSVMDEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQIDNO: 104)
    Белковая последовательность вариабельной области ^^^^r^TO^nreTVSGlDVTNYYMQWVRQAPGKGLEWTGVlGVNGKR\rYASWAKCxRFTISKTSSTTVDLK.MT
    SLTTF-DTATYFCARGDIWGPGTL\rrVSS (SEQIDNO: 103)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЫ1 (химера). CDR1: полужирный: ^SL^GGRLWIXJGSLTLT^SGlDVINYYMQWVTtQAPGKGLEWiGyi^yMGKWLASWAKiiRFTISKI'SSTTVDLK^
    SLTTEDTATYFCARGD/WGPGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 108,109,110, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЫ1 (химера). CDR1: полужирный:
    CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив. _л „.rr^ri~.rrii-,. .ггг
    S^GACCAGTCTGACAACCGAGGACACGG^ACOTAnTCTGTGCCAGAGGCGTC^TriOGGGCCCGGGGACCC ГС G ι CACCGTCTCGAGC (SEQIDNO: 243)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой
    C^GTC^TCGM^ACilCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCYGGAGGATCCCTGACACrCACCTGCACAOTCrCTGGAATCG ACGlOACTAACTACTATATGCAATGGGTCCGCC^GGCTCCAGGGAAGGGGCrGGA^GGATCGGAGTCATTGinGTGA atggtaagagatactacgcgagctgggcgaaaggccgattcaccatctccaa^cctcg^ A.AATGACCAGTCTGACAACCGAGGAC?\CGGCCACCTAlTrCTGTGCCAG/\GGCGACATC IGGGGCCCGGGGACCCTcG TCACCGTCTCOAGCGCCTCCACCAAGGC^CCATCGGTOTCCCCCTGGCACCCTCCTiXAAGAGCACCTCTGGCiGGCAC AGCGGCCCTGGGC'rGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTCxGAAC IC AGGC GCCCTGACCAG CCWCGTGCACACCTTCCCCWCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGT^^CCGTOOTCCA^ AGCTrGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAACiGTOGACAAGAGAGITGAGCtC AAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCICTTCC CCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCrCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGG'rCiGTGGACGTGAGCC.ACGAAG ACCCTGAGGTC^^GT^Cj^CTrGGTACGTGGACGGCGTC^AGGTGCAlAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGA.GGAGCAG tacgccagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaatggcaaggagtacaagtgc AAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCC4GCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCC.AAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC.AG GTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGaGATGACCA/XGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTAIC CCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGa:GGAGAACAACTACAAGACCA<.GCCT<XYGTGCTGGACT CCGACGGCTCCTTCTTCCrCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGl GGCAGCAGGGGAACGTCTTC ^CATGC It CGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCC rCTCCCTGTCTCCGGGTA.AATCxA (SEQ ID NO. ^4-)
    Полноразмерная белковая последовательность легкой цепи ^W^bA^VSPAVGSTVTINCRASQSVYYNNYLAWY’QQKPGQPPKQLIYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTlSDyQCDD AATYYCTGSYDCSNGDCFVTGGGrEVWKRTVAAPSVFlFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQ^VDNALQSGNS QF.SVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKUKWACEVTHQGLSSPYTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 102)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи Abll (химера).-------QVL’IQTASPVSPAVGSTVTlNCRASQSVYYNNYlAWYQQKPGQPPKQLlYSTSTLASGVSSRFKGSGSGTQUL'nSDVQCDD
    AATYYCLGSYDCSNGDCFVFGGGTEVWKR (SEQIDNO: 101)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЫ1 (химера). CDR1: полужирный:
    СОД2: подчеркнутый: C0R3: курсив. _ -----QVlTQTASPVSPAVGSTVTWCRASQSVTYNNYLAWYOQKPGQPPKQUYSTSTU&OVSSRfKGSGSGTQFIL'HSDVQCD
    DAATYYCLGSlDCSAWCnTGGGTEWVKR (SEQ ID NOS: 105,106, 107, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЫ1 (химера), CDR1: полужирный:
    CDR2: подчеркнутый; CDR3: курсив.
    глггтггтг ArrrAr.ArTCiCATCCCCCGTGTCTCCAGCTGTGGGAAGCACAGTCACCATCAATTGCCGGGCCAGTCAG
    СТ^А^ТО^АТСКЯОССАСПАСТАСТСТСТЛС?ССЛбТ7ДГОлт7ГЛ^Г^7-ОСг7иЛГ/и77ТГ677ТГС06СйСАО
    GGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEQ ID NO: 241)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой цепи Abll (химера),
    SesBeassassse
    CAAAGAGCrrCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 242)
    Фиг. 11
    АЫ2
    Полноразмерная белковая последовательность тяжелой '^vnrv^CCffl^ORG^^wi^CAVSGIDVTNYYMQWVRQAI’GKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFnSKDNSKTrVYL
    KSRWQQGNVFSCSVMHEAI.HNHYTQKSLSLSPGK (SEQIDNO: 114)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой U^tvK^^vS^SLScAVSGIDVI-NYYMQWVRQAPGKGLEWVGVIGVNGKRYYASWAKGRFTISRDNSKrrVYL QMNSLRAEDTAVYFCARGDIWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 113)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепиАЫ2 (гуманизирОванная)ГСГПи: * “ ПРЛУЖИРНЫЙ;ДЗВ2; подчеркнутый; СРЕЗ: курсив, 4V„-A rrnmcunxiCR'TTW
    EVQLVESGGCaA^PGGSLRLSCAVSG^VTNYYNIQWVRQAPGKGLEWAOyiGyNGKimASWAKGRHlSKlJNSKri I QMNSLRAEDTAVYFCARGD/WGQGTLVrVSS (SEQ ID NOS: I IS, 119,120, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЬ12 {гуманизированная)· CDR1: полужирный;
    CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив. .„тгтгг л л тг а А тг г т А а г: a G А т а СТ ACGCG AGCTGGGQG АА AGGCCG АТТС ACCATCTCCAG AGACAATTCC AAG АССЛС GGTG Г ^^^VTGAACAGCCTCfeAGCTGAGGACACIOCTGTGTAlTrCTGTGCCAGA&GC?G,K'47rrGGGGCCAAGGGAC CCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 253)
    - 212 031065
    A'l
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой 1^==О1
    МО: 254)
    Полнрразмернад белковая последовательность легкой
    BSSssaxsaasss^
    ESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKUKVYACEVrHQGLSSPVIKSFNRGEC (SEQ ID NO. i i->
    Белковая последовательность вариабельной области легкой
    ATYYCLGSYDCSNGIX'FVFGGGTKVELKR (SEQ ID NO: ί 11)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепиАЬ12 (гуманизированная). CDR1: полужирный: CDR2: подчеркнутый; CDR3: курсив.
    0νηΠ5Γ5515ΛϊνΓ>Β^™εΚΛ845νγ™ΝνΓΛνΥΟ0ΚΡΟΚνΡΚρΐ1ΥΪΕ31Δ50νΡ5ΚΡ5Ο8ϋ5ΟΤ0ηΓη58ί0Ρω VATYYCIGSI'DCWGDCFITCGGIKVEIKR (SF.QIDNOS: 115, 1)6,117,соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЫ2 (гуманизированная). CDR1: полужирный; CDR2: подчеркнутый; CDR3: курсив.
    ATCCACTCTGGCATCTGGGGTCCCATC'fCGTTTCAGTCXjCAG'IOGATCTGGGACAGA't rrCACJCTCACCAlCAGCACi · ЬЙтЙгТСААСАК;ГГССААСТТА^АСТОТСТСОб’СЛСШТСЛТТЦГЛ СТА,·! ЮСТМПЬТТПЪТТП CGGCGGAG GAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEQ ID NG: 251)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой цепи А/^а ArTrr’-rrAiY'CAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAArrGCCGGGCCAGH. AGA GTGrrTACTATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACrGATCTATTCTACAiC CACrCTCKK7ATCTGGGGTCCCATCTCGlTrCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATrT<:ACT^ACCATCAGCAGCClG tggaatCGGCTAACTCCCAGGAGAGTG1'CACAGAGCAGGACAGCAAGGAC2\GCACCTACAGCCTCAGCA<jCAC CTG· OTCTGlG^GCAG^lcGAGAA^A(^AACTCTACGCCTOCGAAGTCACCCAT<?AGGGCCTGAGClCGCCCGrCA
    CAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 252)
    Фиг. 12
    АЫЗ
    Полноразмерная белковая последовательность
    KTlSKAKGQPREi^QVYTLPPSREENn KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNT KTTPPVTDSDGSFFIA SKLTVDKSR
    WQQGNVFSCSVMHEAL1INHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: )24)
    Белковая последовательность вариабельной области Tm^ES«lGLVQPEGSI/il'rCTASGFDFSSNAMWWVRQAPGKGLE^lGCIYNGDGSrYYASW\'NGRFSlSKiSSTn FLQL
    NSLTVADTATYYCARDLDLWGTGTLVTVSS (SEQ ID NO: 123)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЫЗ (химера). CDR1: полужирный:
    CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив. . t | Г|| о.
    NSLTVADTATYYCARDEDIWGPGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 128,129. 130, соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЫЗ (химера). CDR1: полужирный:
    CDR2: подчеркнутый: CDR3: курсив.
    ^^^^^TCra^^^G^^^^^WGT^GAGAG471CTTG.4aTOl-GGGGCCCGGGCA
    CCCTCGTCACCGTCTCGAGC (SEQ ID NO: 263)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой
    CCTCGTCACCGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCC.ATCGGTCTTCCCCC.TGGCACCCTCCTOCAAGAC.CACCTCTGGG
    GGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGrCAAGGACTACTTCCCCGAACCGG'iGACGGTGTCGTGGAACyCAGGCGCCCTG
    ArrAGCCiGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGLCCT
    CCAGCAGCTTGGOCACCCAGACC.TACATCrGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGOTGGACAAGAGAGTTG
    Arrri’AAATCTTGTGACAAAACrCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCl 1<-£T
    CTrcCG.^/AAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTG<>ACGTGAGCCAC,
    NO: 264)
    Полноразмерная белковая последовательность легкой
    DAy^CGCIYKSDSVDGVAFAGGTIWVVKRTVAAPSVFWPSDEQLKSGTA^CI^LNNFYPREAKVQWkVDNALQSGN
    SQESVTEQDSKDSTYSLSSTL'lESKADYEKllKVYACEVTHQGLSSPVrKSFNRGEC (SEQ ID NO: 12_)
    Белковая последовательность вариабельной области
    AIVMTQTPSSKSVPVGDTV-nNCQASESLYNNNALAWFQQKPGQPPKRLIYDASKLASGVPSRFSGGGSGTQFTLTISGVQCD
    DAATYYCGGYRSDSVDGVAFAGGTEVWKR (SEQ ID NO: 121)
    - 213 031065
    Белковая последовательность вариабельной области легкой цепи АЬ13 (химера). CDRlrngnWHpHbin:
    DAATVYCGCl’ItSUSI'OCKjrAOGTEVVVKK (SEQ ID NOS: 125,126, 122. еоотвегег.енио)
    Последовательность ДНК вариабельной области легкой цепи АЫЗ (химера). CDR1: полужирный;CDR2: ^^^^^лта^мсгглстАСТотешссстисус^сгаисгсттоигасготтссгггсоссжА GGGACCGAGGTGGTGGTCAAACGT (SEQIDNO: 261)
    Полноразмерная последовательность ДНК легкой цепи
    АЫЗ (химера).
    ACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 262)
    Фиг. 13
    АЫ4
    Полноразмерная белковая последовательность тяжелой eSkaKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDJAVEWESNGQPENNY’KTTPPX LDSDGSFH.YSKLTV D .
    _ _ __________tni Πίν-ΙΛ ret?n τη KW !
    RWQQGNVFSCSVMHEAI.HNHYTQKSLSLSPGK (SEQIDNO: 134)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой
    QMNSLRAEDTAVYFCTRGD1WGQGTLVTVSS (SEQIDNO: 133)
    Белковая последовательность вариабельной области тяжелой цепи АЬ14 (гуманизированная). CDR1; полужирный: СРR2: подчеркнутый: CDR3: курсив.
    EVQI VESGGGLVQPGGSUiLSCAVSGIGLSSYYMQ^'VRQAPGKGLEWVGVlG^OXXAlWAKfiRFnSRDNSKn V Y аQMNSLRAEDTAVYFCTRGD/WGQGTLVTVSS (SEQ ID NOS: 138. 13У,140. соответственно)
    Последовательность ДНК вариабельной области тяжелой цепи АЬ14 (гуманизированная). CDR1:
    AFCTrcS^^^TOAGAG^GGA^C^raTGTATl-TCTGTACCAGAGGGG.4Czi7-CTGGGGCCAAGGGAC
    CCTCGTCACCCiTCTCGAGC (SEQ ID NO: 273)
    Полноразмерная последовательность ДНК тяжелой saggaigesiO:
    ========
    NO: 274)
    Полноразмерная .белковая последовательность леткой
    Q^gSS^SoUJYMIKVVACEVTHQGLSSPVTKSFNROEC (SEQIDNO: 132)
    Белковая последовательность вариабельной области легкой “^y^fqgp^L^SVCT^VnNKXJASQNV'YNNNYLAWYQQKlNjKVl'KQLlYSTSTl.ASOVFSKFSGSGSGTDFTLTlSSLQrED VATYYCLGSYDCSRGDCFVFGGGTKVEIKR (SEQIDNO: 131)
    QVLTQSPSSLSASVGDRVTlNCQASQNVVNNNYLAWYQQKPGKVPK.QLD'SISTLASGVPSRFSGSGSGTDFrLTlSSLQI’ED
    VATYYCLG.VYDGSRGDOTTGGGIKWJKR (SEQ ID NOS: 135, 136, 137,соответственно) тьной о( i; CDR3:
    >R1:
    caagtgctgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcaattgccaggccagtcag AATGrn'ACAATAACAACTACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGnCCTAAGCAACTGATCTArTClAQ ATCCACrCTGGCATCTGGGGTCCCATCTCGTTTCAGTGiiCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCAICAGCAGC CTCjCAGCCTGAAGATGTTGCAACTTATTACrGTCrcGGC4GrWTGn77G7:4GrCG7UG7GU77G77TjnC77TrCGGCGGAG GAACCAAGGTGGAAATCAAACGT (SEQ ID NO: 271) ^14 (^манизиарованная)ВаТеЛЬНОСТЬ ДНК легкой цепи
    CAAGi'GCTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGlCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCAATTGCCAGGCCAGICAGA ATGTTTACAATAACAACrACCTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGTTCCTAAGCAACTGATCTATTCTACATC cactctggcatctggggtcccatctcgtttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctg CAGCCTOAAGATGTTGCAACTTATrACrGTCTGGGCAGTrATGA'rTGTAGTCGTGGTGATTGTTTTGTTTTCGGCGGAGG AACCAAGGTGGAAATC.AAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCITCATCTTCCCGCCATCTGATGAGC'AGTTGAAATCT GGAACTGCCYCTOTTGTGTGCCTGCTGAATAACTrCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCC TCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAiiCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGA CGCTGAGCAAAGCAGACIACGAGAAACACAAAGTCrACGCGTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCrGAGCTCGCCCGTCA CAAAGAGCTICAACAGGGGAGAGTGTTAG (SEQ ID NO: 272)
    Фиг. 14
    - 214 031065
    Твердофазный ИФА CGRPa человека
    Твердофазный ИФА связывания антигена
    10* КГ3 10·* 10’’ 10° 10’ 10*
    Конц, антитела (нМ)
    ЕС50(пМ) АЫ 103 АЬ2 S3 АЬЗ 154 АЬ4 88
    Фиг. 15
    Твердофазный ИФАCGRPa человека
    Твердофазный ИФАсвязывания антигена
    2.5·
    АЬ5
    АЬ6
    АЬ7 АЬд
    104 10·3 КГ* 10й 10° 101 10*
    Конц, антитела (нМ)
    ЕС50(пМ) АЬ5 103 АЬ6 95 АЬ7 70 АЬ8 74
    Фиг. 16
    Фиг. 17
    ЕС50 (пМ) АЪ9 79 АЬ10 92 Ab 14 89
    Фиг. 18
    ЕС50(пМ) АЫ1 184 АЫ2 171 АЫЗ 188
    - 215 031065 цАМФ CGRPa человека
    Фиг. 19
    Ингибирование CGRP-зависимой продукции цАМФ
    ЕС50(пМ) АЫ 531 АЬ2 452 АЬ4 429
    Фиг. 21 цАМФ CGRPa человека
    Ингибирование CGRP-зависимой продукции цАМФ
    20000ς 15000*
    I
    S u 10000*
    5000- * АЬ7 АЬ8 * АЬ9 * А10 у—'г *» и I........... I rrrrwi1...... .....ι πηη
    10‘2 10'1 10° 101
    Конц, антитела (нМ)
    ЕС50 (пМ) АЬ7 743 АЬ6 734 АЬ9 568 А10 542
    Фиг. 22
    - 216 031065 цАМФ CGRPa человека
    Фиг. 23
    ЕС50(пМ) Abll 698 АЬ12 511 АЫЗ 498
    АЫ1 АЬ12 Ab 13
    Фиг. 25 цАМФСбИРЗ человека
    Ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRP3 человека
    20000
    15000
    10000 о
    5000 • AM * АЬ5
    1СГ2 10·’ 10° 10’
    Конц, антитела (нМ)
    ЕС50 (пМ) Ab4 80S АЬ5 875 АЬ6 740
    Фиг. 26
    - 217 031065 цАМФСЦИРр человека
    Ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRPp человека
    Фиг. 27
    1 I ЕС50(пМ) 1 АЬ7 1 less 1 АЬ8 1 1981
    MAM<t>CGRPp человека
    Ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRPP человека
    20000л . дид
    10-2 10-| 10° 10’
    Конц, антитела (нМ)
    ЕС50(пМ) Ab9 716 АЫО 641 ЛЫ4 812
    Фиг. 28
    4AM<t>CGRP3 человека
    Ингибирование продукции цАМФ, зависимой от CGRPp человека
    Фиг. 29
    EC50(nMj ) АЫ1 1344 АЫ2 1181 АЫЗ 1276
    АЫ1 АЬ12 АЫЗ цАМФ CGRP крысы
    Ингибирование rtCGRP-зависимой продукции цАМФ 2000015000· =;
    I
    100005000-
    10-2 ......10·’ ' ' 10° W*
    Конц, антитела (нМ)
    ЕС50(пМ) АЫ 239 АЬ2 142 АЬ4 808 АЬ5 334
    Фиг. 30
    - 218 031065
    Фиг. 31
    Фиг. 32
    ЕС50 (пМ) АЬ7 297 АЬ8 243
    Фиг. 33
    - 219 031065
    Фиг. 35
    Ингибирование связывания радиолиганда
    ICS0 4hM)i Κι (нМ), АЫ 0.585 0.46 АЬ2 0.482 0.378 АЬЗ 2.49 10.96 АЬ4 0.579 0.455 АЬ5 0.586 0.461 АЫ» 2.46 1.94 АЬ7 4.53 3.56 АЬ8 0-936 0.736 АЬ9 2.03 1.6 АЫО 0.28 0.22 1 АЫ1 2.26 1.78 ί Ab 12 0.315 0.248 Ϊ АЫЗ 0.335 1 0.264
    Фиг. 38
    Снижение расширения сосудов после введения капсаицина
    Время, минут после введения капсаицина
    Фиг. 39
    - 220 031065
    Снижение расширения сосудов после введения капсаицина
    Фиг. 40
    в.
    с.
    *р < 0,05 согласно t-критерию Стьюдента для независимых выборок, сравнение с антителом отрицательного контроля
    Фиг. 41
    Фиг. 42
    Фиг. 43
    - 221 031065
    в.
    Сутки Сутки
    Фиг. 45
    В—I Наивные + антитело отрицательного контроля 10 мг/кг кр < 0,05 согласно t-критерию Стьюдента, сравнение с группой TNBS + контроль
    Фиг. 46
EA201301295A 2011-05-20 2012-05-21 Композиции антител против cgrp и их применение EA031065B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161488660P 2011-05-20 2011-05-20
PCT/US2012/038844 WO2012162243A2 (en) 2011-05-20 2012-05-21 Anti-cgrp compositions and use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201301295A1 EA201301295A1 (ru) 2014-04-30
EA031065B1 true EA031065B1 (ru) 2018-11-30

Family

ID=47175055

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201891284A EA201891284A1 (ru) 2011-05-20 2012-05-21 Композиции антител против cgrp и их применение
EA201592042A EA039905B1 (ru) 2011-05-20 2012-05-21 Анти-cgrp антитела и их применение
EA201301295A EA031065B1 (ru) 2011-05-20 2012-05-21 Композиции антител против cgrp и их применение

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201891284A EA201891284A1 (ru) 2011-05-20 2012-05-21 Композиции антител против cgrp и их применение
EA201592042A EA039905B1 (ru) 2011-05-20 2012-05-21 Анти-cgrp антитела и их применение

Country Status (35)

Country Link
US (10) US9745373B2 (ru)
EP (5) EP3662932B1 (ru)
JP (3) JP6282584B2 (ru)
KR (1) KR102128627B1 (ru)
CN (5) CN108424452B (ru)
AP (1) AP2013007259A0 (ru)
AR (3) AR086516A1 (ru)
AU (3) AU2012258966C1 (ru)
BR (2) BR122022012930B1 (ru)
CA (3) CA3080000A1 (ru)
CL (3) CL2013003336A1 (ru)
CO (1) CO6870005A2 (ru)
CY (2) CY1124209T1 (ru)
DK (3) DK2710039T3 (ru)
EA (3) EA201891284A1 (ru)
ES (3) ES2873837T3 (ru)
FR (1) FR22C1032I2 (ru)
HR (3) HRP20190640T1 (ru)
HU (4) HUE054437T2 (ru)
IL (4) IL229431B (ru)
LT (4) LT2710039T (ru)
MX (3) MX370749B (ru)
NL (1) NL301181I2 (ru)
NZ (1) NZ733060A (ru)
PE (2) PE20141787A1 (ru)
PH (1) PH12018500521A1 (ru)
PL (3) PL3662932T3 (ru)
PT (3) PT2710039T (ru)
RS (3) RS61793B1 (ru)
SG (2) SG10201604040PA (ru)
SI (3) SI3662932T1 (ru)
TR (1) TR201904088T4 (ru)
TW (4) TWI685505B (ru)
WO (1) WO2012162243A2 (ru)
ZA (1) ZA201308637B (ru)

Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3069731A1 (en) 2005-11-14 2016-09-21 Labrys Biologics Inc. Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
RU2522493C2 (ru) 2008-03-04 2014-07-20 Пфайзер Лимитед Способы лечения хронической боли
US9855332B2 (en) 2011-05-20 2018-01-02 Alderbio Holdings Llc Use of anti-CGRP antibodies and antibody fragments to treat diarrhea in subjects with diseases or treatments that result in elevated CGRP levels
SG194973A1 (en) * 2011-05-20 2013-12-30 Alderbio Holdings Llc Use of anti-cgrp antibodies and antibody fragments to prevent or inhibit photophobia or light aversion in subjects in need thereof, especially migraine sufferers
HUE054437T2 (hu) 2011-05-20 2021-09-28 H Lundbeck As Anti-CGRP készítmények és alkalmazásuk
TWI670279B (zh) 2013-03-15 2019-09-01 美商艾爾德生物製藥股份有限公司 抗體純化及純度監測
JP6502337B2 (ja) * 2013-07-03 2019-04-17 アルダー・バイオファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド 抗ｃｇｒｐ抗体を使用したグルコース代謝の調整
US10556945B2 (en) 2014-03-21 2020-02-11 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
CN106456759A (zh) 2014-03-21 2017-02-22 泰华制药国际有限公司 针对降钙素基因相关肽的拮抗剂抗体及其使用方法
WO2016168757A1 (en) 2015-04-16 2016-10-20 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Use of anti-pacap antibodies and antigen binding fragments thereof for treatment, prevention, or inhibition of photophobia
JOP20200116A1 (ar) 2015-04-24 2017-06-16 Amgen Inc طرق لعلاج أو الوقاية من الصداع النصفي
AR104847A1 (es) * 2015-06-17 2017-08-16 Lilly Co Eli Formulación de anticuerpo anti-cgrp
WO2017051385A1 (en) * 2015-09-24 2017-03-30 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Preventing, treating, and reducing (persistent) post-traumatic headache
TW201725212A (zh) * 2015-12-10 2017-07-16 第一三共股份有限公司 特異性於降鈣素基因相關胜肽的新穎蛋白
MX2018009218A (es) * 2016-01-28 2018-11-09 Lilly Co Eli Anticuerpos de cgrp y sus usos.
CA3013443C (en) 2016-02-01 2021-06-15 Eli Lilly And Company Parathyroid hormone - anti-rankl antibody fusion compounds
SG10202109691UA (en) 2016-04-15 2021-10-28 Alder Biopharmaceuticals Inc Anti-pacap antibodies and uses thereof
EP3515488A1 (en) 2016-09-23 2019-07-31 Teva Pharmaceuticals International GmbH Treating cluster headache
CN109952314A (zh) 2016-09-23 2019-06-28 泰瓦制药国际有限公司 治疗难治性偏头痛
AU2018226811A1 (en) 2017-03-02 2019-09-26 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Selecting headache patients responsive to antibodies directed against calcitonin gene related peptide
EP3610019A4 (en) * 2017-04-19 2021-05-12 John Mansell COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING PAINFUL DISORDERS
EP3737699A1 (en) 2018-01-12 2020-11-18 Amgen Inc. Pac1 antibodies and uses thereof
US11274158B2 (en) * 2018-01-30 2022-03-15 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods and compositions for treating inflammatory or autoimmune diseases or conditions using calcitonin receptor activators
JP2021518748A (ja) * 2018-02-23 2021-08-05 アールイーエムディー バイオセラピューティクス，インコーポレイテッドＲＥＭＤ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ｃｇｒｐ）アンタゴニスト抗体
WO2019231800A1 (en) * 2018-05-31 2019-12-05 Eli Lilly And Company Anti-cgrp antibodies for treating menstrual-related migraines
US10899826B1 (en) * 2018-09-13 2021-01-26 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Pharmaceutical compositions for an anti-CGRP antagonist antibody
EP3674418A1 (en) * 2018-12-26 2020-07-01 Life Length S.L. Method for measuring telomere associated variables and uses thereof for the diagnosis and/or prognosis of telomeric-associated diseases
BR112020018192A2 (pt) 2019-01-08 2021-08-24 H. Lundbeck A/S Tratamento agudo e tratamento rápido de dor de cabeça com o uso de anticorpos anti-cgrp
PE20211708A1 (es) * 2019-01-08 2021-09-01 H Lundbeck As Tratamiento de cefalea por uso excesivo de medicamentos usando anticuerpos anticgrp o anti-cgrp-r
WO2020175936A1 (ko) * 2019-02-28 2020-09-03 단디바이오사이언스 주식회사 항균활성을 갖는 폴리펩타이드, 이를 포함하는 패혈증 예방 또는 치료용 조성물, 및 항균용 조성물
AU2020267107A1 (en) * 2019-05-02 2021-10-07 H. Lundbeck A/S Treatment of headache using anti-CGRP antibodies
WO2020239014A1 (zh) * 2019-05-30 2020-12-03 山东博安生物技术有限公司 抗cgrp抗体及其应用
CA3077973A1 (en) 2020-04-06 2021-10-06 H. Lundbeck A/S Treatment of most bothersome symptom (mbs) associated with migraine using anti-cgrp antibodies
EP4301362A1 (en) 2021-03-02 2024-01-10 CGRP Diagnostics GmbH Treatment and/or reduction of occurrence of migraine
WO2023026205A1 (en) 2021-08-24 2023-03-02 Cgrp Diagnostics Gmbh Preventative treatment of migraine
AU2022333323A1 (en) 2021-08-27 2024-02-29 H. Lundbeck A/S Treatment of cluster headache using anti-cgrp antibodies
WO2023161526A1 (en) 2022-02-28 2023-08-31 Tridem Bioscience Gmbh & Co Kg A CONJUGATE CONSISTING OF OR COMPRISING AT LEAST A ß-GLUCAN OR A MANNAN
WO2024032750A1 (zh) * 2022-08-11 2024-02-15 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗cgrp抗体及用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007076336A1 (en) * 2005-12-22 2007-07-05 Eli Lilly And Company Treatment of migraine with anti-cgrp antibodies
US20090220489A1 (en) * 2005-11-14 2009-09-03 Joerg Zeller Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
WO2009109911A1 (en) * 2008-03-04 2009-09-11 Pfizer Limited Methods of treating chronic pain
WO2011024113A1 (en) * 2009-08-28 2011-03-03 Rinat Neuroscience Corporation Methods for treating visceral pain by administering antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide

Family Cites Families (117)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3662333A (en) 1970-09-08 1972-05-09 Bendix Corp Hydraulic accumulator charge detector and indicating system
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS5123197A (ja) 1974-08-21 1976-02-24 Hitachi Ltd Purosesugasukuromatogurafuno ondoseigyohoshiki
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DE3484377D1 (de) * 1983-06-15 1991-05-08 Celltech Ltd Peptide, pharmazeutische zusammensetzungen, gene, vektoren, wirtorganismen, verfahren zu deren herstellung und diagnostische reagenzien.
JPS62129297A (ja) 1985-08-09 1987-06-11 Toyo Jozo Co Ltd カルシトニン遺伝子関連ペプチド誘導体
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
GB8725529D0 (en) 1987-10-30 1987-12-02 Delta Biotechnology Ltd Polypeptides
US5364841A (en) 1988-01-11 1994-11-15 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of obesity and essential hypertension and related disorders
US5266561A (en) 1988-01-11 1993-11-30 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of type 2 diabetes mellitus
CA2006596C (en) 1988-12-22 2000-09-05 Rika Ishikawa Chemically-modified g-csf
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
FR2650598B1 (fr) 1989-08-03 1994-06-03 Rhone Poulenc Sante Derives de l'albumine a fonction therapeutique
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
CA2090126C (en) 1990-08-02 2002-10-22 John W. Schrader Methods for the production of proteins with a desired function
FR2669336B1 (fr) 1990-11-20 1993-01-22 Adir Nouveaux derives d'oxazolo pyridines, leurs procedes de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent.
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
DE4227454C1 (de) * 1992-08-19 1994-02-03 Henning Berlin Gmbh Verfahren zur Früherkennung, zur Erkennung des Schweregrads sowie zur therapiebegleitenden Verlaufsbeurteilung einer Sepsis sowie Mittel zur Durchführung des Verfahrens
US5604260A (en) 1992-12-11 1997-02-18 Merck Frosst Canada Inc. 5-methanesulfonamido-1-indanones as an inhibitor of cyclooxygenase-2
US5409944A (en) 1993-03-12 1995-04-25 Merck Frosst Canada, Inc. Alkanesulfonamido-1-indanone derivatives as inhibitors of cyclooxygenase
AU6445894A (en) 1993-03-19 1994-10-11 Duke University Method of treatment of tumors with an antibody binding to tenascin
US5436265A (en) 1993-11-12 1995-07-25 Merck Frosst Canada, Inc. 1-aroyl-3-indolyl alkanoic acids and derivatives thereof useful as anti-inflammatory agents
US5474995A (en) 1993-06-24 1995-12-12 Merck Frosst Canada, Inc. Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5475995A (en) 1994-05-16 1995-12-19 Livingston; George G. Truck spare tire locking rod
US5616601A (en) 1994-07-28 1997-04-01 Gd Searle & Co 1,2-aryl and heteroaryl substituted imidazolyl compounds for the treatment of inflammation
IL114909A (en) 1994-08-12 1999-10-28 Immunomedics Inc Immunoconjugates and humanized antibodies specific for b-cell lymphoma and leukemia cells
WO1996005221A1 (en) 1994-08-16 1996-02-22 Human Genome Sciences, Inc. Calcitonin receptor
US5521213A (en) 1994-08-29 1996-05-28 Merck Frosst Canada, Inc. Diaryl bicyclic heterocycles as inhibitors of cyclooxygenase-2
US5593994A (en) 1994-09-29 1997-01-14 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Prostaglandin synthase inhibitors
US5552422A (en) 1995-01-11 1996-09-03 Merck Frosst Canada, Inc. Aryl substituted 5,5 fused aromatic nitrogen compounds as anti-inflammatory agents
FR2732221B1 (fr) 1995-03-28 1997-04-25 Oreal Utilisation d'un antagoniste de cgrp pour traiter les rougeurs cutanees d'origine neurogene et composition obtenue
US5639780A (en) 1995-05-22 1997-06-17 Merck Frosst Canada, Inc. N-benzyl indol-3-yl butanoic acid derivatives as cyclooxygenase inhibitors
US5510368A (en) 1995-05-22 1996-04-23 Merck Frosst Canada, Inc. N-benzyl-3-indoleacetic acids as antiinflammatory drugs
US5604253A (en) 1995-05-22 1997-02-18 Merck Frosst Canada, Inc. N-benzylindol-3-yl propanoic acid derivatives as cyclooxygenase inhibitors
JPH11512396A (ja) 1995-09-05 1999-10-26 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション 化合物および方法
US5710024A (en) * 1996-07-23 1998-01-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotides that encode the calcitonin gene-related peptide receptor coponent factor (HOUNDC44)
AU4261697A (en) 1996-09-09 1998-03-26 Smithkline Beecham Corporation Compounds and methods
IL128118A0 (en) 1996-09-10 1999-11-30 Thomae Gmbh Dr K Modified amino acids medicaments containing these compounds and processes for their preparation
US6653104B2 (en) 1996-10-17 2003-11-25 Immunomedics, Inc. Immunotoxins, comprising an internalizing antibody, directed against malignant and normal cells
WO1998056779A1 (en) 1997-06-13 1998-12-17 Smithkline Beecham Corporation 4-sulfinyl benzamides as calcitonin gene-related peptide receptor antagonists
US6956107B2 (en) 1998-02-20 2005-10-18 Tanox, Inc. Inhibitors of complement activation
EP1117662A1 (en) 1998-09-30 2001-07-25 Merck Sharp &amp; Dohme Limited Benzimidazolinyl piperidines as cgrp ligands
AU1219000A (en) 1998-10-22 2000-05-08 Regents Of The University Of California, The Functionally assembled antigen-specific intact recombinant antibody and a methodfor production thereof
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1031350A1 (en) 1999-02-23 2000-08-30 Warner-Lambert Company Use of a gabapentin-analog for the manufacture of a medicament for preventing and treating visceral pain
US6313097B1 (en) 1999-03-02 2001-11-06 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Antagonists of calcitonin gene-related peptide
US6521609B1 (en) 1999-08-10 2003-02-18 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Use of CGRP antagonists and CGRP release inhibitors for combating menopausal hot flushes
DE60022665T2 (de) 1999-09-25 2006-06-22 Coley Pharmaceutical Gmbh Immunstimulierende nukeinsäuren
EP2341075A1 (en) 2000-03-01 2011-07-06 MedImmune, LLC Antibodies binding to the f protein of a respiratory syncytial virus (rsv)
US6406863B1 (en) 2000-06-23 2002-06-18 Genetastix Corporation High throughput generation and screening of fully human antibody repertoire in yeast
US20020162125A1 (en) 2001-03-06 2002-10-31 Anne-Marie Salmon Methods and compositions for the modulation of neurogenic inflammatory pain and physical opiate withdrawal
US20030181462A1 (en) 2001-08-17 2003-09-25 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Use of BIBN4096 in combination with other antimigraine drugs for the treatment of migraine
WO2003045424A1 (en) 2001-11-26 2003-06-05 Protemix Corporation Limited Methods of compositions for normalizing lipid levels in mammalian tissues
ATE435239T1 (de) 2002-03-29 2009-07-15 Schering Corp Menschliche monoklonale antikörper gegen interleukin-5 sowie diese umfassende verfahren und zusammensetzungen
EP1501929B1 (de) 2002-05-06 2013-03-27 Noxxon Pharma AG Cgrp bindende nukleinsäuren
US20040110170A1 (en) 2002-05-18 2004-06-10 The Regents Of The University Of California Cloning and characterization of calcitonin gene related peptide receptors
US7345065B2 (en) 2002-05-21 2008-03-18 Allergan, Inc. Methods and compositions for alleviating pain
LT1539766T (lt) 2002-06-05 2017-03-10 Bristol-Myers Squibb Company Su kalcitonino genu susijusio peptido receptoriaus antagonistai
EP2366718A3 (en) 2002-06-28 2012-05-02 Domantis Limited Ligand
ATE423553T1 (de) 2002-08-12 2009-03-15 Actavis Group Hf Verwendung von cgrp-antagonisten-verbindungen zur behandlung von psoriasis
UA80447C2 (en) 2002-10-08 2007-09-25 Methods for treating pain by administering nerve growth factor antagonist and opioid analgesic
DE10250082A1 (de) 2002-10-25 2004-05-13 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Ausgewählte CGRP-Antagonisten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Arzneimittel
RU2377253C2 (ru) 2002-12-02 2009-12-27 Амген Фремонт,Инк. Антитела, специфичные к фактору некроза опухолей, и их применение
SI2263692T1 (sl) 2002-12-24 2020-10-30 Rinat Neuroscience Corp. Anti-NGF protitelesa in postopki, v katerih se le-ta uporabljajo
US7192954B2 (en) 2003-03-14 2007-03-20 Merck & Co., Inc. Monocyclic anilide spirohydantoin CGRP receptor antagonists
CA2519475A1 (en) 2003-03-14 2004-09-30 Merck & Co., Inc. Bicyclic anilide spirohydantoin cgrp receptor antagonists
ATE516803T1 (de) 2003-03-14 2011-08-15 Merck Sharp & Dohme Aryl-spirohydantoin-cgrp-rezeptor-antagonisten
WO2004082602A2 (en) 2003-03-14 2004-09-30 Merck & Co. Inc. Carboxamide spirohydantoin cgrp receptor antagonists
CA2519515A1 (en) 2003-03-14 2004-10-14 Merck & Co., Inc. Benodiazepine spirohydantoin cgrp receptor antagonists
CA2522024A1 (en) 2003-04-15 2004-10-28 Merck & Co., Inc. Cgrp receptor antagonists
JO2355B1 (en) 2003-04-15 2006-12-12 ميرك شارب اند دوم كوربوريشن Hereditary calcitonin polypeptide receptor antagonists
WO2004097421A2 (en) 2003-04-29 2004-11-11 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with calcitonin receptor-like receptor (calcrl)
AU2004259675A1 (en) 2003-07-15 2005-02-03 Merck & Co., Inc. Hydroxypyridine CGRP receptor antagonists
DK1678314T3 (da) 2003-10-22 2012-12-03 Keck Graduate Inst Fremgangsmåde til syntetisering af heteromultimere polypeptider i gær ved anvendelse af en haploid parringsstrategi
US20080070239A1 (en) 2003-10-29 2008-03-20 University Of Rochester Detection of neureopeptides associated with pelvic pain disorders and uses thereof
EP1703915A2 (en) 2004-01-13 2006-09-27 Vasogenix Pharmaceuticals, Inc. Methods of using cgrp for cardiovascular and renal indications
DE102004015723A1 (de) 2004-03-29 2005-10-20 Boehringer Ingelheim Pharma Ausgewählte CGRP-Antagonisten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Arzneimittel
DE102004018794A1 (de) 2004-04-15 2005-10-27 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Ausgewählte CGRP-Antagonisten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Arzneimittel
US7279471B2 (en) 2004-04-15 2007-10-09 Boehringer Ingelheim International Gmbh Selected CGRP-antagonists, process for preparing them and their use as pharmaceutical compositions
TWI432196B (zh) 2005-01-18 2014-04-01 Euro Celtique Sa 內臟痛的治療
EP1770091A1 (de) 2005-09-29 2007-04-04 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG CGRP-Antagonisten, Verfahren zu deren Herstellung sowie deren Verwendung als Arzneimittel
ITRM20050290A1 (it) 2005-06-07 2006-12-08 Lay Line Genomics Spa Uso di molecole in grado di inibire il legame tra ngf e il suo recettore trka come analgesici ad effetto prolungato.
CA2619856A1 (en) 2005-08-25 2007-03-01 Wex Pharmaceuticals Inc. Use of sodium channel blockers for the treatment of visceral pain or pain caused by cancer treatment
US8168592B2 (en) 2005-10-21 2012-05-01 Amgen Inc. CGRP peptide antagonists and conjugates
US20070108378A1 (en) 2005-11-14 2007-05-17 Toru Terabayashi High pressure optical cell for a downhole optical fluid analyzer
CA2629406A1 (en) 2005-11-18 2007-05-31 Merck & Co., Inc. Spirohydantoin aryl cgrp receptor antagonists
US9074352B2 (en) 2006-03-27 2015-07-07 John R. Ramun Universal control scheme for mobile hydraulic equipment and method for achieving the same
WO2008045140A1 (en) 2006-05-19 2008-04-17 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Culture method for obtaining a clonal population of antigen-specific b cells
MX2008015562A (es) 2006-06-08 2008-12-17 Boehringer Ingelheim Int Tratamiento de trastornos gastrointestinales con antagonistas de cgrp.
AU2007275577A1 (en) 2006-07-21 2008-01-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated CGRP receptor antagonists
US8075902B2 (en) * 2007-01-03 2011-12-13 Michael Powell Diagnosis and treatment of cancer related to human dormancy
WO2008144763A2 (en) 2007-05-21 2008-11-27 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Antibodies to il-6 and use thereof
US9056905B2 (en) 2007-05-21 2015-06-16 Alderbio Holdings Llc Antibodies to TNF-α and use thereof
TWI609965B (zh) 2007-05-21 2018-01-01 艾爾德生物控股有限責任公司 新穎兔抗體人化方法以及經人化之兔抗體
GB0725103D0 (en) * 2007-12-21 2008-01-30 Glaxo Group Ltd Novel compounds
PL2265288T3 (pl) 2008-03-04 2017-01-31 Labrys Biologics Inc Sposoby leczenia bólu zapalnego
JO3382B1 (ar) 2008-12-23 2019-03-13 Amgen Inc أجسام مضادة ترتبط مع مستقبل cgrp بشري
JO3330B1 (ar) * 2010-06-10 2019-03-13 Lilly Co Eli الأجسام المضادة cgrp
US11214610B2 (en) * 2010-12-01 2022-01-04 H. Lundbeck A/S High-purity production of multi-subunit proteins such as antibodies in transformed microbes such as Pichia pastoris
HUE054437T2 (hu) * 2011-05-20 2021-09-28 H Lundbeck As Anti-CGRP készítmények és alkalmazásuk
US9855332B2 (en) 2011-05-20 2018-01-02 Alderbio Holdings Llc Use of anti-CGRP antibodies and antibody fragments to treat diarrhea in subjects with diseases or treatments that result in elevated CGRP levels
SG194973A1 (en) 2011-05-20 2013-12-30 Alderbio Holdings Llc Use of anti-cgrp antibodies and antibody fragments to prevent or inhibit photophobia or light aversion in subjects in need thereof, especially migraine sufferers
US20170114122A1 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Alderbio Holdings Llc Regulation of glucose metabolism using anti-cgrp antibodies
WO2017051385A1 (en) 2015-09-24 2017-03-30 Teva Pharmaceuticals International Gmbh Preventing, treating, and reducing (persistent) post-traumatic headache
AU2018226811A1 (en) * 2017-03-02 2019-09-26 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Selecting headache patients responsive to antibodies directed against calcitonin gene related peptide
US11752099B2 (en) * 2017-03-27 2023-09-12 W. L. Gore & Associates, Inc. Injectable and biodegradable polymer formulations for controlled release of bioactive agents
EP3641746A4 (en) * 2017-06-19 2021-03-17 President And Fellows Of Harvard College METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF MICROBIAL INFECTION
TWI754772B (zh) * 2017-09-06 2022-02-11 美商美國禮來大藥廠 用於治療偏頭痛之拉米迪坦(lasmiditan)與cgrp拮抗劑之組合療法
BR112020018192A2 (pt) 2019-01-08 2021-08-24 H. Lundbeck A/S Tratamento agudo e tratamento rápido de dor de cabeça com o uso de anticorpos anti-cgrp
PE20211708A1 (es) 2019-01-08 2021-09-01 H Lundbeck As Tratamiento de cefalea por uso excesivo de medicamentos usando anticuerpos anticgrp o anti-cgrp-r

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090220489A1 (en) * 2005-11-14 2009-09-03 Joerg Zeller Antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide and methods using same
WO2007076336A1 (en) * 2005-12-22 2007-07-05 Eli Lilly And Company Treatment of migraine with anti-cgrp antibodies
WO2009109911A1 (en) * 2008-03-04 2009-09-11 Pfizer Limited Methods of treating chronic pain
WO2011024113A1 (en) * 2009-08-28 2011-03-03 Rinat Neuroscience Corporation Methods for treating visceral pain by administering antagonist antibodies directed against calcitonin gene-related peptide

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ZELLER J. et al. "CGRP function-blocking antibodies inhibit neurogenic vasodilatation without affecting heart rate or arterial blood pressure in the rat". British Journal of Pharmacology, Vol. 155, pages 1093-1103, 08 September 2008. See the whole document *

Also Published As

Publication number Publication date
PE20180502A1 (es) 2018-03-09
SI3662932T1 (sl) 2021-08-31
TW201811835A (zh) 2018-04-01
US10066009B2 (en) 2018-09-04
TW202033559A (zh) 2020-09-16
HUE054437T2 (hu) 2021-09-28
US20180215815A1 (en) 2018-08-02
HRP20210777T1 (hr) 2021-06-25
US20240174738A1 (en) 2024-05-30
AU2017203890B2 (en) 2019-06-06
CN107602700A (zh) 2018-01-19
CA2836649C (en) 2020-06-23
DK2710039T3 (en) 2019-04-01
US10179809B2 (en) 2019-01-15
LT2710039T (lt) 2019-04-25
US20190092842A1 (en) 2019-03-28
RS62306B1 (sr) 2021-09-30
US10533048B2 (en) 2020-01-14
TWI646111B (zh) 2019-01-01
US20210047391A1 (en) 2021-02-18
IL268464A (en) 2019-09-26
ES2893073T3 (es) 2022-02-07
KR20140042819A (ko) 2014-04-07
EP4115905A1 (en) 2023-01-11
AR123876A2 (es) 2023-01-18
EP3662932A1 (en) 2020-06-10
IL261927B (en) 2019-11-28
EA201301295A1 (ru) 2014-04-30
CN108424452A (zh) 2018-08-21
BR122022012930B1 (pt) 2023-10-10
US20170174754A1 (en) 2017-06-22
AU2019226231B2 (en) 2021-06-03
US20190211085A1 (en) 2019-07-11
CN108373502B (zh) 2022-03-22
TW201936642A (zh) 2019-09-16
AU2012258966B2 (en) 2017-03-09
ZA201308637B (en) 2022-11-30
MX2019008185A (es) 2019-09-09
BR112013029932A2 (pt) 2017-01-31
CA3079978A1 (en) 2012-11-29
US9745373B2 (en) 2017-08-29
PT3495392T (pt) 2021-09-22
SG194938A1 (en) 2013-12-30
TW201300419A (zh) 2013-01-01
CL2013003336A1 (es) 2014-06-06
WO2012162243A2 (en) 2012-11-29
HRP20190640T1 (hr) 2019-05-31
CA3080000A1 (en) 2012-11-29
MX2019015745A (es) 2020-02-13
PE20141787A1 (es) 2014-12-07
PL2710039T3 (pl) 2019-07-31
US11111289B2 (en) 2021-09-07
CL2018001452A1 (es) 2018-08-10
CA2836649A1 (en) 2012-11-29
US10189895B2 (en) 2019-01-29
AR118605A2 (es) 2021-10-20
EP2710039A4 (en) 2014-11-19
PL3662932T3 (pl) 2021-09-06
TWI685505B (zh) 2020-02-21
HUE055505T2 (hu) 2021-11-29
EA201891284A1 (ru) 2018-11-30
EP2710039B1 (en) 2019-01-09
RS61793B1 (sr) 2021-06-30
RS58621B1 (sr) 2019-05-31
CN103748111A (zh) 2014-04-23
TR201904088T4 (tr) 2019-05-21
EA039905B1 (ru) 2022-03-25
SI3495392T1 (sl) 2021-11-30
JP6527563B2 (ja) 2019-06-05
CO6870005A2 (es) 2014-02-20
SI2710039T1 (sl) 2019-05-31
IL229431A0 (en) 2014-01-30
NZ618637A (en) 2016-03-31
EP2710039A2 (en) 2014-03-26
EA201592042A1 (ru) 2016-03-31
EP3495392A1 (en) 2019-06-12
FR22C1032I1 (fr) 2022-09-09
AU2017203890A1 (en) 2017-06-29
AR086516A1 (es) 2013-12-18
US20180215814A1 (en) 2018-08-02
IL268464B (en) 2020-10-29
MX370749B (es) 2019-12-20
US10214582B2 (en) 2019-02-26
US20180215813A1 (en) 2018-08-02
TWI719869B (zh) 2021-02-21
IL229431B (en) 2018-10-31
NL301181I2 (nl) 2022-11-24
CY1124209T1 (el) 2022-05-27
JP2014517699A (ja) 2014-07-24
CL2017001379A1 (es) 2017-12-29
LTPA2022511I1 (ru) 2022-07-11
JP6282584B2 (ja) 2018-02-21
IL261927A (en) 2018-10-31
HUE044062T2 (hu) 2019-09-30
TWI692485B (zh) 2020-05-01
EP3875115A1 (en) 2021-09-08
US20180215816A1 (en) 2018-08-02
MX2013013535A (es) 2015-08-20
AU2012258966C1 (en) 2022-02-03
CN108424452B (zh) 2021-08-03
HUS2200031I1 (hu) 2022-07-28
LT3495392T (lt) 2021-09-27
CN103748111B (zh) 2018-04-27
CN107586338B (zh) 2021-09-17
AU2019226231A1 (en) 2019-09-26
JP6952736B2 (ja) 2021-10-20
NZ717570A (en) 2018-09-28
JP2018038391A (ja) 2018-03-15
CN108373502A (zh) 2018-08-07
CN107602700B (zh) 2021-12-17
CN107586338A (zh) 2018-01-16
PL3495392T3 (pl) 2021-12-13
ES2873837T3 (es) 2021-11-04
PT3662932T (pt) 2021-05-14
LT3662932T (lt) 2021-06-10
FR22C1032I2 (fr) 2023-06-02
PT2710039T (pt) 2019-04-23
EP3495392B1 (en) 2021-08-18
ES2715001T3 (es) 2019-05-31
NZ733060A (en) 2022-08-26
CY1124515T1 (el) 2022-07-22
SG10201604040PA (en) 2016-07-28
EP3662932B1 (en) 2021-04-07
DK3495392T3 (da) 2021-09-13
JP2019150044A (ja) 2019-09-12
WO2012162243A3 (en) 2013-01-17
KR102128627B1 (ko) 2020-06-30
NL301181I1 (ru) 2022-06-15
AP2013007259A0 (en) 2013-11-30
DK3662932T3 (da) 2021-05-17
IL270382B (en) 2020-11-30
HRP20211395T1 (hr) 2021-12-10
US20120294797A1 (en) 2012-11-22
PH12018500521A1 (en) 2019-04-15
US10208112B2 (en) 2019-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2019226231B2 (en) Anti-CGRP compositions and use thereof
CN107827982B (zh) 抗cgrp抗体和抗体片段用于在有需要的受试者中预防或抑制畏光或厌光的用途
KR102128628B1 (ko) 설사의 만성 및 급성 형태를 치료 또는 예방하기 위한 항-cgrp 또는 항-cgrp-r 항체 또는 항체 단편의 용도
AU2012258966A1 (en) Anti-CGRP compositions and use thereof
KR20160029822A (ko) 항-ｃｇｒｐ 항체를 사용하는 글루코오스 대사의 조절
NZ618637B2 (en) Anti-cgrp compositions and use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment