CN118271438B - 抗cgrp抗体或其抗原结合片段及其用途 - Google Patents

抗cgrp抗体或其抗原结合片段及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种抗CGRP抗体或其抗原结合片段及其用途。本发明提供的抗CGRP抗体或其抗原结合片段对CGRP具有高亲和力，能够阻断CGRP与其受体的结合并抑制下游信号转导。

Description

抗CGRP抗体或其抗原结合片段及其用途
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，涉及抗CGRP抗体或其抗原结合片段及其用途。本发明还涉及编码该抗CGRP抗体或其抗原结合片段的核酸分子、包含该核酸分子的载体、宿主细胞；包含该抗CGRP抗体或其抗原结合片段的偶联物。本发明进一步涉及抗CGRP抗体或其抗原结合片段及包含其的药物组合物和偶联物的用途。
背景技术
偏头痛是一种常见的慢性神经血管性疾病，其病情特征为反复发作、一侧或双侧搏动性的剧烈头痛且多发生于偏侧头部，可合并自主神经系统功能障碍如恶心、呕吐、畏光和畏声等症状，约1/3的偏头痛患者在发病前可出现神经系统先兆症状。
2018年Lancet发表的偏头痛综述（Lancet第17卷，第11期，第954-976页，2018年11月）建议偏头痛发作频率较高的患者（每月发病4次及以上或每月头疼天数大约等于8天）使用预防性药物。
偏头痛为第六位致残性疾病。偏头痛除疾病本身可造成损害外，还可以导致脑白质病变、认知功能下降、后循环无症状性脑梗死等。此外，偏头痛还可与多种诸如焦虑、抑郁的疾病共患。
随着对偏头痛病理机制研究的不断深入，人们发现降钙素基因相关肽（Calcitonin gene-related peptide, CGRP）及其受体广泛分布于在三叉神经血管系统和中枢，在偏头痛的发病机制中发挥着重要作用。CGRP是由降钙素基因表达的一种神经肽类物质，分为α和β两种亚型，也被称为CGRP I和CGRP II，其中α型主要表达在外周和中枢神经系统，β型则主要分布在肠神经系统。CGRP受体可分为3个亚型：CGRPR 1、CGRPR 2和CGRPR3。研究表明这些特异性受体包括以下3个部分：降钙素受体样受体（Calcitonin receptor-like receptor, CRLR）、受体结构蛋白（Receptor component protein, RCP）以及受体活性修饰蛋白（Receptor activity-modifying protein, RAMP）。CGRP与受体结合可上调细胞内cAMP水平，提高胞外信号调节蛋白激酶（Extracellular signal regulated proteinkinase, ERK）和cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）的磷酸化水平。
因此，迫切需要开发新一代抗CGRP抗体以优化对偏头痛患者的治疗、减轻其症状、提高偏头痛的临床疗效。
发明内容
本发明的目的是提供一种抗CGRP抗体或其抗原结合片段，并基于该抗体或其片段，提供其用途。本发明所述抗体分子的“片段”涵盖抗体的各种功能性片段，例如其抗原结合部分，如Fab、F(ab')2或scFV片段等。
本发明提供以下技术方案。
第一方面，本发明提供了抗CGRP抗体或其抗原结合片段，预期本发明的抗CGRP抗体对人类受试者具有小的免疫原性，人类受试者对该抗CGRP抗体将会具有良好的耐受性。
本发明提供了特异性结合CGRP的鼠源抗CGRP抗体、嵌合抗体以及人源化的抗CGRP抗体。本发明提供的结合CGRP的抗体或其抗原结合片段具有以下优点：
（1）高亲和力结合人αCGRP和βCGRP；
（2）高亲和力结合大鼠CGRP和兔CGRP；
（3）能够阻断CGRP与其受体的结合并抑制下游信号转导。
在一些实施方案中，本发明提供了抗CGRP抗体或其抗原结合片段，其包含：
如SEQ ID NO: 7所示的重链可变区所包含的3个重链CDR（HCDR1、HCDR2、HCDR3）/或如SEQ ID NO: 8所示的轻链可变区所包含的3个轻链CDR（LCDR1、LCDR2、LCDR3）。
基于本发明给定抗体或其片段包含的可变区氨基酸序列，本领域技术人员可以常规地确定其中包含的CDR。例如，根据本发明的具体实施方式，采用Kabat方案、AbM方案、Chothia方案或Contact方案限定可变区氨基酸序列中的CDR。
在一些实施方案中，本发明提供了抗CGRP抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区CDR（HCDR1、HCDR2、HCDR3）和/或轻链可变区CDR（LCDR1、LCDR2、LCDR3），其中：
HCDR1包含如SEQ ID NO: 1所示序列，或相对于SEQ ID NO: 1含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或由SEQ ID NO: 1组成；HCDR2包含如SEQ ID NO: 2所示序列，或相对于SEQ ID NO: 2含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或由SEQ ID NO: 2组成；HCDR3包含如SEQ ID NO: 3所示序列，或相对于SEQ ID NO: 3含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或由SEQ ID NO: 3组成；LCDR1包含如SEQID NO: 4所示序列，或相对于SEQ ID NO: 4含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或由SEQ ID NO: 4组成；LCDR2包含如SEQ ID NO: 5所示序列，或相对于SEQ ID NO: 5含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或由SEQ ID NO: 5组成；LCDR3包含如SEQ ID NO: 6所示序列，或相对于SEQ ID NO: 6含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或由SEQ ID NO: 6组成。
在一些实施方案中，本发明提供了抗CGRP抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区，其中：
1） 所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 7含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 7所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 7组成；
2）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 9所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 9含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 9组成；或
3）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 11所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:11含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 11所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 11组成。
在一个实施方案中，本发明提供了抗CGRP抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区，其中：
1）所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 8含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 8所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 8组成；
2）所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:10含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 10所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 10组成；或
3）所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 12所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:12含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 12所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 12组成。
在一些实施方案中，本发明提供了抗CGRP抗体或其抗原结合片段包含的重链可变区和/或轻链可变区选自以下的组合：
1）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 7含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 7所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 7组成；所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 8含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 8所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 8组成；
2）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 9所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 9含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 9组成；和/或所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:10所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 10含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 10所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 10组成；
3）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 9所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 9含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 9组成；和/或所述轻链可变区包含如SEQ ID NO:12所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 12含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 12所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 12组成；
4）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 11所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:11含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 11所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 11组成；和/或所述轻链可变区包含如SEQ IDNO: 10所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 10含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 10所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:10组成；或
5）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 11所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO:11含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 11所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 11组成；和/或所述轻链可变区包含如SEQ IDNO: 12所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 12含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 12所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO:12组成。
在一些实施方案中，本发明提供了抗CGRP抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，其中：
1）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 7所示氨基酸序列或由其组成，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 8所示氨基酸序列或由其组成；
2）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 9所示氨基酸序列或由其组成，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列或由其组成；
3）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 9所示氨基酸序列或由其组成，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 12所示氨基酸序列或由其组成；
4）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 11所示氨基酸序列或由其组成，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 10所示氨基酸序列或由其组成；或
5）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 11所示氨基酸序列或由其组成，所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 12所示氨基酸序列或由其组成。
特别地，本发明的抗体或其抗原结合片段至少包含重链可变区和/或轻链可变区，二者均包括上述CDR以及间隔的框架区（Framework，FR），各个结构域的排列方式为：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。进一步可选地，所述“至少90%同一性”导致的氨基酸序列上的至多10%差异可存在于重链可变区或轻链可变区中的任意框架区中，或者存在于本发明的抗体或其片段中重链可变区和轻链可变区以外的任意结构域或序列中。所述差异可以由任何位置的氨基酸取代、缺失或插入产生。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段还包含人或鼠源的恒定区，优选包含人或鼠源的重链恒定区和/或轻链恒定区；优选地，所述抗体或其抗原结合片段包含IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的重链恒定区和/或κ或λ型轻链恒定区。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段还包含来自人抗体胚系共有序列的重链和/或轻链恒定区序列。在一些实施方案中，所述的重链恒定区优选来自人源IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的恒定区序列。在一个具体实施方案中，所述重链恒定区包含或由SEQ IDNO: 13所示氨基酸序列，或由其组成。在一个具体实施方案中，所述轻链恒定区包含或由SEQ ID NO: 14所示氨基酸序列，或由其组成。
应当理解，也可以使用这些恒定区结构域的序列变体，例如包含一个或多个氨基酸修饰，其中氨基酸位点是Kabat等人的 (1991) EU索引系统标识。
在一个具体实施方案中，本发明提供了抗CGRP抗体或其抗原结合片段，其包含重链和/或轻链，其中：
1）所述重链包含如SEQ ID NO: 15所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 15含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQID NO: 15所示氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 15组成；所述轻链包含如SEQ ID NO: 16所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 16含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 16所示氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 16组成；
2）所述重链包含如SEQ ID NO: 17所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 17含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQID NO: 17所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 17组成，所述轻链包含如SEQ ID NO: 18所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 18含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 18所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 18组成；
3）所述重链包含如SEQ ID NO: 19所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 19含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQID NO: 19所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 19组成，所述轻链包含如SEQ ID NO: 20所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 20含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 20所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 20组成；
4）所述重链包含如SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 21含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQID NO: 21所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 21组成，所述轻链包含如SEQ ID NO: 22所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 22含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 22所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 22组成；或
5）所述重链包含如SEQ ID NO: 23所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 23含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQID NO: 23所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 23组成，所述轻链包含如SEQ ID NO: 24所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 24含有一个或多个氨基酸的取代（例如保守性取代）、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 24所示的氨基酸序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 24组成。
在前述任一项的抗体的某些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体、单链抗体、双功能抗体、单域抗体、纳米抗体、完全或部分人源化的抗体或者嵌合抗体等任意形式。在一个具体实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在一个优选实施方案中，所述抗体是嵌合抗体。在另一个更优选的实施方案中，所述抗体是人源化抗体。
在前述任一项的抗体的某些实施方案中，该抗体是全长抗体。
在一些实施方案中，本发明的抗CGRP抗体是完整抗体，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在另一个实施方案中，本发明的抗CGRP抗体仅涵盖其抗原结合部分，例如：Fab、Fab'、Fab'-SH、(Fab')2、Fv、scFv、BsFv、dsFv或(dsFv)2片段。
在一些实施方案中，所述抗原结合片段为抗体或半抗体的抗原结合片段，例如Fab、Fab'、Fab'-SH、(Fab')2、Fv、scFv、BsFv、dsFv或(dsFv)2片段；更优选地，所述抗体为IgG。
第二方面，本发明提供了一种生物材料，其包括：
（i）核酸分子，其编码本发明所述的抗体或其抗原结合片段；
（ii）载体，其包含（i）所述的核酸分子；和/或
（iii）宿主细胞，其包含（i）所述的核酸分子和/或（ii）所述的载体，或者所述宿主细胞被（i）所述的核酸分子和/或（ii）所述的载体转化或转染。
在一些实施方案中，所述核酸分子可以是分离的核酸分子。
本发明的核酸分子可以被克隆到载体中，进而转化或转染宿主细胞。因此本发明还提供了载体，其包含（i）所述的核酸分子。在一个实施方案中，所述载体是表达载体，例如真核表达载体、原核表达载体、人工染色体及噬菌体载体等。
本发明的载体或核酸分子可以用于转化或转染宿主细胞，用于保存或抗体表达等目的。因此，本发明还提供了宿主细胞，其包含（ii）所述的载体或（i）所述的核酸分子，或者所述宿主细胞被本发明的核酸分子和/或载体转化或转染。宿主细胞可以是任何原核或真核细胞，例如细菌或昆虫、真菌、植物或动物细胞。在一些实施方案中，该宿主细胞是原核的，例如大肠杆菌。在其它实施方案中，该宿主细胞是真核的，例如293细胞，CHO细胞，酵母细胞或植物细胞。在一些实施方案中，该宿主细胞是适用于制备抗体或其抗原结合片段的其它细胞。
本发明提供的抗体或其抗原结合片段可以利用本领域已知的任何方法获得。例如，可以先由本发明提供的核酸分子获得所述抗体的重链可变区和/或轻链可变区，或者获得所述抗体的重链和/或轻链，然后与所述抗体的任选其他结构域组装成抗体。或者，第三方面，本发明提供了制备本文所述的抗CGRP抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在适合于所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下在本文所述的宿主细胞中表达所述抗体或其抗原结合片段，并从所述宿主细胞回收所表达的抗体或其抗原结合片段。
第四方面，本发明提供一种偶联物，其包括本发明的抗体或其抗原结合片段和偶联部分，偶联部分为另一种分子；优选地，偶联部分为细胞毒素、放射性同位素、荧光物质、发光物质、有色物质或酶等。
本发明提供的抗体或其抗原结合片段、核酸分子、载体、宿主细胞和/或偶联物可以被包含在药物组合物中，更特别地被包含在药物制剂中，从而根据实际需要用于各种目的。因此，第五方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明第一方面的抗体或其抗原结合片段或本发明的生物材料（包括核酸分子、载体、宿主细胞）、偶联物以及可药用载体。在本发明的一些实施方案中，所述药物组合物还包含第二治疗剂和/或任选地药用辅料，第二治疗剂选自细胞因子、抗体、化学治疗剂和小分子药物。
第六方面，本发明提供了抗CGRP抗体或其抗原结合片段、或本发明的生物材料（包括核酸分子、载体、宿主细胞）、偶联物或药物组合物在制备如下任一所示的产品中的用途：
（a）检测CGRP的产品；
（b）刺激或提高免疫应答的产品；
（c）预防和/或治疗受试者所罹患疾病的产品。
在一个实施方案中，第一方面所述的任一抗体或其抗原结合片段或第四方面所述的偶联物用于治疗偏头痛。
第七方面，本发明提供了一种在有需要的受试者中预防和/或治疗疾病的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的本发明所述的抗体或其抗原结合片段或本发明的生物材料（包括核酸分子、载体、宿主细胞）、偶联物、药物组合物等。所述疾病包括偏头痛；优选地，所述受试者为哺乳动物；更优选地，所述受试者为人。
第八方面，本发明提供了用作药物的本发明公开的抗体或其抗原结合片段或本发明的生物材料（包括核酸分子、载体、宿主细胞）、偶联物或药物组合物。
第九方面，本发明提供了用于治疗的本发明公开的抗体或其抗原结合片段或本发明的生物材料（包括核酸分子、载体、宿主细胞）、偶联物或药物组合物。
第十方面，本发明提供了一种能够阻断CGRP与其受体的结合并抑制下游信号转导的方法，其包括向受试者施用有销量的本发明公开的抗体或其抗原结合片段或本发明的生物材料（包括核酸分子、载体、宿主细胞）、偶联物或药物组合物。
第十一方面，本发明提供一种试剂盒，其包括本发明的抗体或其抗原结合片段或偶联物。
第十二方面，本发明提供了检测CGRP在样品中的存在或其水平的方法，其包括使本发明的抗体或其抗原结合片段或偶联物与样品接触，并检测所述抗体或其抗原结合片段或偶联物是否与CGRP形成复合物的步骤。
在下面的附图和具体实施方案中进一步说明本发明。然而，这些附图和具体实施方案不应被认为限制本发明的范围，并且本领域技术人员容易想到的改变将包括在本发明的精神和所附权利要求的保护范围内。
附图说明
图1显示了纯化杂交瘤抗体对CGRP的结合活性。图1A显示杂交瘤抗体对人βCGRP的结合活性，图1B显示杂交瘤抗体对人αCGRP的结合活性，图1C显示杂交瘤抗体对大鼠生物素化CGRP的结合活性，图1D显示杂交瘤抗体对兔生物素化CGRP的结合活性。
图2显示了纯化杂交瘤抗体对CGRP在SK-N-MC细胞引起的下游信号传导的抑制作用。图2A显示了纯化杂交瘤抗体对αCGRP在SK-N-MC细胞引起的下游信号传导的抑制作用，图2B显示了纯化杂交瘤抗体对βCGRP在SK-N-MC细胞引起的下游信号传导的抑制作用。
图3显示了ch27C7D9和hz27C7D9（hz27C7D9-VH3+VL3、hz27C7D9-VH3+VL4、hz27C7D9-VH4+VL3、hz27C7D9-VH4+VL4）对CGRP的结合活性。图3A显示了ch27C7D9和hz27C7D9对人αCGRP的结合活性，图3B显示了ch27C7D9和hz27C7D9对人βCGRP的结合活性，图3C显示了ch27C7D9和hz27C7D9对大鼠生物素化CGRP的结合活性，图3D显示了ch27C7D9和hz27C7D9抗体对兔生物素化CGRP的结合活性。
图4显示了ch27C7D9和hz27C7D9(hz27C7D9-VH3+VL3、hz27C7D9-VH3+VL4、hz27C7D9-VH4+VL3、hz27C7D9-VH4+VL4)对CGRP在SK-N-MC细胞引起的下游信号传导的抑制作用。图4A显示了ch27C7D9和hz27C7D9对αCGRP在SK-N-MC细胞引起的下游信号传导的抑制作用。图4B显示了ch27C7D9和hz27C7D9对βCGRP在SK-N-MC细胞引起的下游信号传导的抑制作用。
图5显示了抗CGRP嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9-VH4+VL3对CGRP同家族类似物Adrenomedullin、Amylin、Calcitonin和Intermedin的交叉结合ELISA活性。图5A显示了抗CGRP嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9-VH4+VL3对Adrenomedullin的交叉结合ELISA活性，图5B显示了抗CGRP嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9-VH4+VL3对Amylin的交叉结合ELISA活性，图5C显示了抗CGRP嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9-VH4+VL3对Calcitonin的交叉结合ELISA活性，图5D显示了抗CGRP嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9-VH4+VL3对Intermedin的交叉结合ELISA活性。
具体实施方式
本文所提及的全部出版物、专利申请、专利和其他参考文献通过引用的方式完整地并入。此外，本文中所述的材料、方法和例子仅是说明性的并且不意在是限制性的。本发明的其他特征、目的和优点将从本说明书及附图并且从后附的权利要求书中显而易见。除非另有定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语均具有与本领域一般技术人员通常所理解的含义相同的含义。为了本发明的目的，下文定义了以下术语。
定义
除非另有说明，本发明的实施将采用分子生物学（包括重组技术）、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些都在本领域的技术范围内。
术语“约”在与数字数值联合使用时意为涵盖具有比指定数字数值小5%的下限和比指定数字数值大5%的上限的范围内的数字数值。
术语“和/或”应理解为意指可选项中的任一项或可选项中的任意两项或多项的组合。
如本文中所用，术语“包含”或“包括”意指包括所述的要素、整数或步骤，但是不排除任意其他要素、整数或步骤。在本文中，当使用术语“包含”或“包括”时，除非另有指明，否则也涵盖由所述及的要素、整数或步骤组成的情形。
术语“抗体”在本文中以最广意义使用，指包含抗原结合位点的蛋白质，其能够特异性识别和结合抗原。抗体可以是完整的抗体及其任何抗原结合片段或其单链，因此术语“抗体”包括分子中含有具有与抗原结合的生物学活性的免疫球蛋白分子的至少一部分的任何蛋白质或多肽。
术语“免疫球蛋白”指具有天然存在抗体的结构的蛋白质，在本申请中通常可以与术语“抗体”互换使用。IgG类免疫球蛋白是由二硫键键合的两条轻链和两条重链组成的异四聚体糖蛋白。从N端至C端，每条免疫球蛋白重链具有一个重链可变区（VH），也称作重链可变结构域，随后是三个重链恒定结构域（CH1、CH2和CH3）。类似地，从N端至C端，每条免疫球蛋白轻链具有一个轻链可变区（VL），也称作轻链可变结构域，随后是一个轻链恒定结构域（CL）。在IgG分子中，通常重链的VH-CH1与轻链的VL-CL配对形成特异性结合抗原的Fab片段。因此，一个IgG免疫球蛋白基本上由借助免疫球蛋白铰链区连接的两个Fab分子和两个二聚化的Fc区组成。免疫球蛋白的重链可以基于其恒定区的类型，归属5个类别之一，称作α(IgA)、δ (IgD)、ε (IgE)、γ (IgG)或μ (IgM)，其中某些类别可以进一步划分成亚类，例如γ1(IgG1)、γ2(IgG2)、γ3(IgG3)、γ4(IgG4)、α1(IgA1)和α2(IgA2)。免疫球蛋白的轻链也可以基于其恒定结构域的氨基酸序列而划分成两种类型之一，称作κ和λ。
“互补决定区”或“CDR区”或“CDR”或“高变区”，是抗体可变结构域中在序列上高度可变并且形成在结构上确定的环（“超变环”）和/或含有抗原接触残基（“抗原接触点”）的区域。CDR主要负责与抗原表位结合。
本领域公知多种用于在一个给定的VH或VL氨基酸序列中确定其CDR序列的方案：Kabat互补决定区（CDR）是基于序列变异性确定的并且是最常用的(Kabat等人, Sequencesof Proteins of Immunological Interest, 第5版, Public Health Service, NationalInstitutes of Health, Bethesda, Md. (1991)), 而Chothia指的是结构环的位置(Chothia等人, (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917；Chothia等人(1989) Nature 342:877-883), AbM CDR是Kabat CDR和Chothia结构环之间的折中，并且由Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用，“接触性”(Contact) CDR基于对可获得的复杂晶体结构的分析。根据不同的CDR确定方案，这些CDR中的每一个的残基如下所述。
在涉及用本发明定义的具体CDR序列限定抗体时，所述抗体的范围还涵盖了这样的抗体，其可变区序列包含所述的具体CDR序列，但是由于应用了不同的方案（例如不同的指派系统规则或组合）而导致其所声称的CDR边界与本发明所定义的具体CDR边界不同。
本发明抗体的CDR可以根据本领域的任何方案或其组合人工地评估确定边界。除非另有说明，否则在本发明中，术语“CDR”或“CDR序列”涵盖以上述任一种方式确定的CDR序列。
术语“抗原结合位点”与“抗原结合结构域”可以互换使用，表示抗体分子中与抗原实际结合的区域。抗原结合位点包括但不限于Fv、Fab片段、Fab'、Fab'-SH，F(ab')2、单链抗体分子（例如scFv）、VHH等形式。
术语抗体的“可变区”或“可变结构域”指参与抗体与抗原结合的抗体重链或轻链的结构域。抗体的可变区可以进一步再划分为超变区（即，互补决定区（CDR））和间插在超变区之间的较为保守的区域（即，框架区（FR））。在IgG类免疫球蛋白的情况下，重链可变区或轻链可变区从N端至C端依次分别包括FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。在重链抗体（在本文中也称作纳米抗体）的情况下，例如来自骆驼科重链抗体，抗原结合位点由单个VH结构域（即，“VHH”结构域）组成。天然重链抗体的VHH与天然的IgG抗体的重链可变区一样，具有相似的结构，即包含四个保守的框架区（FR）和三个互补决定区（CDR）。
“重链恒定区结构域”或“重链恒定区”指来自或获自或衍生自免疫球蛋白重链的恒定区结构域，包括从N端至C端顺序共价连接的重链恒定区CH1，CH2，CH3，和任选地重链恒定区CH4。在大多数情况下，重链恒定区CH1和CH2之间通过重链铰链区连接，但在适宜时，也可以通过柔性接头连接。
术语“EC50”，也被称为“半数有效浓度”，是指在特定的暴露时间后诱导在基线和最大值之间的50%的应答的药物、抗体或毒剂的浓度。
如本文所用，术语“结合”或“特异性结合”意指结合作用对抗原是选择性的并且可以与不想要的或非特异的相互作用区别。抗原结合位点与特定抗原结合的能力可以通过酶联免疫吸附测定法（ELISA）或本领域已知的常规结合测定法测定。
“亲和力”或“结合亲和力”指反映结合对子的成员之间相互作用的内在结合能力。分子X对其结合配偶体Y的亲和力可以由平衡解离常数（KD）表示，平衡解离常数是解离速率常数和结合速率常数（分别是kdis和kon）的比值。结合亲和力可以由本领域已知的常见方法测量。
氨基酸突变可以是氨基酸取代、缺失、插入和/或添加。在一些实施方案中，氨基酸突变是一个或者多个氨基酸的取代，例如单个氨基酸取代或多个氨基酸取代的组合。氨基酸缺失和插入包括在多肽序列的氨基和/或羧基末端的缺失和插入，也包括在多肽序列内部的缺失和插入。本发明的氨基酸取代任选地包括氨基酸的保守取代。
氨基酸序列的“同一性百分数（%）”是指将候选序列与本说明书中所示的具体氨基酸序列进行比对并且如有必要的话为达到最大序列同一性百分数而引入空位后，并且不考虑任何保守置换作为序列同一性的一部分时，候选序列中与本说明书中所示的具体氨基酸序列的氨基酸残基相同的氨基酸残基百分数。在一些实施方案中，本发明考虑本发明抗体分子的变体，所述变体相对于在本文中具体公开的抗体分子及其序列而言具有相当程度的同一性，例如同一性为至少80%、85%、90%、95%、97%、98%或99%或更高。所述变体可以包含保守性修饰。
对于多肽序列，“保守性修饰”包括对多肽序列的置换、缺失或添加，它们导致某个氨基酸置换为化学上相似的氨基酸。提供功能上相似氨基酸的保守性置换表是本领域熟知的。这类保守性修饰的变体相对于本发明的多态性变体、物种间同源物和等位基因而言是附加的并且不排斥它们。以下8组含有互为保守替换的氨基酸：1）丙氨酸（A）、甘氨酸（G）；2）天冬氨酸（D）、谷氨酸（E）；3）天冬酰胺（N）、谷氨酰胺（Q）；4）精氨酸（R）、赖氨酸（K）；5）异亮氨酸（I）、亮氨酸（L）、甲硫氨酸（M）、缬氨酸（V）；6）苯丙氨酸（F）、酪氨酸（Y）、色氨酸（W）；7）丝氨酸（S）、苏氨酸（T）；和8）半胱氨酸（C）、甲硫氨酸（M）（参阅例如，Creighton, Proteins(1984)）。在一些实施方案中，术语“保守序列修饰”用于指不显著影响或改变含有氨基酸序列的抗体的结合特征的氨基酸修饰。
术语“个体”或“受试者”可互换地使用，是指哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯化动物 （例如，奶牛、绵羊、猫、犬和马）、灵长类 （例如，人和非人灵长类如猴）、兔和啮齿类（例如，小鼠和大鼠）。特别地，个体是人。
术语“治疗”指意欲改变正在接受治疗的个体中疾病之天然过程的临床介入。想要的治疗效果包括但不限于防止疾病出现或复发、减轻症状、减小疾病的任何直接或间接病理学后果、防止转移、降低病情进展速率、改善或缓和疾病状态，以及缓解或改善预后。在一些实施方案中，本发明的抗体分子用来延缓疾病发展或用来减慢疾病的进展。
术语“预防”包括对疾病或病症或特定疾病或病症的症状的发生或发展的抑制。在一些实施方式中，具有偏头痛家族病史的受试者是预防性方案的候选。通常，在偏头痛的背景中，术语“预防”是指在偏头痛的病征或症状发生前，特别是在具有偏头痛风险的受试者中发生前的药物施用。
术语“有效量”指本发明的抗体或组合物的这样的量或剂量，其以单一或多次剂量施用患者后，在需要治疗或预防的患者中产生预期效果。有效量可以由作为本领域技术人员的主治医师通过考虑以下多种因素来容易地确定：诸如哺乳动物的物种；体重、年龄和一般健康状况；涉及的具体疾病；疾病的程度或严重性；个体患者的应答；施用的具体抗体；施用模式；施用制剂的生物利用率特征；选择的给药方案；和任何伴随疗法的使用。
术语“治疗有效量”指以需要的剂量并持续需要的时间段，有效实现所需治疗结果的量。抗体或抗体片段或组合物的治疗有效量可以根据多种因素如疾病状态、个体的年龄、性别和重量和抗体或抗体部分在个体中激发所需反应的能力而变动。治疗有效量也是这样的一个量，其中抗体或抗体片段或组合物的任何有毒或有害作用不及治疗有益作用。相对于未治疗的对象，“治疗有效量”优选地抑制可度量参数至少约20%、更优选地至少约40%、甚至更优选地至少约50%、60%或70%和仍更优选地至少约80%或90%。
术语“预防有效量”指以需要的剂量并持续需要的时间段，有效实现所需预防结果的量。通常，由于预防性剂量在对象中在疾病较早阶段之前或在疾病较早阶段使用，故预防有效量将小于治疗有效量。
术语“药物组合物”指这样的组合物，其以允许包含在其中的活性成分的生物学活性有效的形式存在，并且不包含对施用所述组合物的受试者具有不可接受的毒性的另外的成分。所述药物组合物，包括但不限于：载体、稀释剂、佐剂、赋形剂、防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、矫味剂、香味剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂、分散剂、温敏材料、温度调节剂、黏附剂、稳定剂、助悬剂等。
生物材料（核酸分子、载体和宿主细胞）
本发明提供编码以上任何抗体分子或其抗原结合片段的核酸分子。可以采用本领域熟知的方法，通过从头固相DNA合成或通过基因工程方法产生编码本发明抗体分子或其抗原结合片段的多核苷酸序列。此外，本发明的多核苷酸和核酸可以包含编码分泌信号肽的区段，并与编码本发明抗体分子或其抗原结合片段的区段可操作连接，从而可以指导本发明抗体分子或其抗原结合片段的分泌性表达。
本发明也提供包含本发明核酸分子的载体。在一个实施方案中，载体是表达载体，例如真核表达载体和原核表达载体。“表达载体”是指包含重组多核苷酸的载体，其包含有效连接要表达的核苷酸序列的表达控制序列。表达载体包含足够的用于表达的顺式作用元件；用于表达的其它元件可以由宿主细胞提供或在体外表达系统中。表达载体包括本领域已知的所有那些，包括被掺入重组多核苷酸的粘粒、质粒（例如，裸的或包含在脂质体中）和病毒（例如，慢病毒、逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒）。
本发明还提供包含所述核酸分子或所述载体的原核和真核宿主细胞。宿主细胞包括“转化体”和“转化的细胞”，这包括原代转化的细胞和从其衍生的子代。宿主细胞是可以用来产生本发明抗体分子的任何类型的细胞系统，包括真核细胞，例如，哺乳动物细胞、昆虫细胞、酵母细胞和原核细胞，例如，大肠杆菌细胞。宿主细胞包括培养的细胞，也包括转基因动物、转基因植物或培养的植物组织或动物组织内部的细胞。适用于复制并支持本发明抗体分子或其抗原结合片段表达的宿主细胞是本领域中公知的。可以用特定的表达载体转染或转导这类细胞，并且可以生长大量的含载体细胞以用于接种大规模发酵罐，从而获得充足量的抗体分子。
组合物和药物制剂
本发明提供了包含本发明抗体分子或其抗原结合片段的组合物。优选地，所述组合物为药物组合物。
本发明的组合物还包含药用辅料，如本领域中已知的药用载体、药用赋形剂。在一个实施方案中，组合物 (例如，药物组合物) 包含本发明的抗CGRP抗体或其ADC分子，以及一种或多种其它治疗剂的组合。
如本文所用，“药用载体”包括生理上相容的任何和全部溶剂、分散介质、等渗剂和吸收延迟剂等。
对于药用辅料的使用及其用途，亦参见“Handbook of PharmaceuticalExcipients”,第八版, R.C.Rowe, P.J.Seskey和S.C. Owen, Pharmaceutical Press,London, Chicago。
本发明的组合物可以处于多种形式。这些形式例如包括液体、半固体和固体剂型，如散剂或混悬剂、液态溶液剂 (例如，可注射用溶液剂和可输注溶液剂)、脂质体剂和栓剂。优选的形式取决于预期的施用模式和治疗用途。
本发明组合物的施用途径是根据已知方法，例如，经口、静脉内、腹膜内、脑内、肌内、眼内、动脉内或病灶内途径；通过持续释放系统或通过植入装置。在某些实施方案中，组合物可通过弹丸注射或通过连续输注或通过植入装置施用。
受试者可以是哺乳动物，例如，灵长类，例如，人类（例如，患有本文所述疾病或具有患有本文所述疾病的风险的个体）。在一个实施方案中，受试者患有本文所述疾病（例如，偏头痛）或具有患有本文所述疾病的风险。在某些实施方案中，受试者接受或已经接受过其它治疗。
可以通过将具有所需纯度的本发明的抗CGRP抗体或其ADC分子与一种或多种任选的药用辅料混合来制备包含本文所述的抗体的药物，优选地以冻干制剂或水溶液的形式。
本发明的药物组合物或制剂还可以包含超过一种活性成分，所述活性成分是被治疗的特定适应症所需的，优选具有不会不利地彼此影响的互补活性的那些活性成分。例如，理想的是还提供其它治疗剂。所述活性成分以对于目的用途有效的量合适地组合存在。
可制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括含有抗体的固体疏水聚合物的半渗透基质，所述基质呈成形物品，例如薄膜或微囊形式。
制备本发明的抗体
在一个实施方案中，本发明提供了制备抗CGRP抗体的方法，其中所述方法包括在适于表达编码所述抗CGRP抗体的核酸的条件下培养包含编码抗CGRP抗体的核酸或包含所述核酸的表达载体的宿主细胞，以及任选地分离所述抗CGRP抗体。在某个实施方案中，所述方法还包括从所述宿主细胞 (或宿主细胞培养基) 回收抗CGRP抗体。
为了重组产生本发明的抗CGRP抗体，首先分离编码本发明抗CGRP抗体的核酸，并将所述核酸插入载体，用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。此类核酸易于使用常规规程分离和测序，例如通过使用能够与编码本发明抗CGRP抗体的核酸特异性结合的寡核苷酸探针进行。
如本文所述制备的本发明的抗CGRP抗体可以通过已知的现有技术如高效液相色谱、离子交换层析、凝胶电泳、亲和层析、大小排阻层析等纯化。用来纯化特定蛋白质的实际条件还取决于净电荷、疏水性、亲水性等因素，并且这些对本领域技术人员是显而易见的。可以通过多种熟知分析方法中的任一种方法确定本发明的抗CGRP抗体的纯度，所述熟知分析方法包括大小排阻层析、凝胶电泳、高效液相色谱等。
治疗方法和用途
本发明提供了一种在有需要的受试者中预防和/或治疗疾病的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的本发明抗体或其抗原结合片段、或治疗有效量的本发明药物组合物。在一个实施方案中，所述疾病包括偏头痛。
在一个实施方案中，本发明提供了一种能够阻断CGRP与其受体的结合并抑制下游信号传导的方法，包括向所述受试者施用有效量的本发明抗体或其抗原结合片段、或有效量的本发明药物组合物。
本发明的抗体分子或其抗原结合片段（以及包含其的药物组合物）可以通过任何合适的方法给药，包括肠胃外给药，肺内给药和鼻内给药，并且，如果局部治疗需要，病灶内给药。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给药。在一定程度上根据用药是短期或长期性而定，可通过任何适合途径，例如通过注射，例如静脉内或皮下注射用药。本文中涵盖各种用药时程，包括，但不限于，单次给药或在多个时间点多次给药、推注给药及脉冲输注。
为了预防或治疗疾病，本发明抗体分子或其抗原结合片段的合适剂量（当单独或与一种或多种其他的治疗剂组合使用时）将取决于待治疗疾病的类型、疾病的严重性和进程、以预防目的施用还是以治疗目的施用、以前的治疗、患者的临床病史，和主治医师的判断力。
实施例
以下实施例进一步说明本发明，然而，应理解实施例以说明而非限定的方式来描述，并且本领域技术人员可以进行多种修改。
除非明确指明相反，否则本发明的实施将采用本领域内的常规化学、生物化学、有机化学、分子生物学、微生物学、重组DNA技术、遗传学、免疫学和细胞生物学的方法。所述及的实验方法，如无特殊说明，均为本领域采用默认参数、步骤等的常规方法；所用的实验材料，如无特殊说明，均为市售产品。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照相应产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
实施例1：产生抗人CGRP的小鼠杂交瘤
本实施例采用CGRP多肽方式对小鼠进行免疫，以获得抗人CGRP的抗体。即分别采用编码全长人αCGRP（UniProtKB: P06881）和人βCGRP（UniProtKB: P10092）多肽作为免疫原对小鼠进行免疫。具体方法如下：
1. 动物免疫
采用人αCGRP和人βCGRP作为免疫原（表1），与弗氏佐剂（SIGMA，货号F5506和F5881）1:1等体积混合，然后按照常规方法对6-8周龄C57BL/6雌性小鼠进行蛋白质免疫。初次免疫为50 μg/小鼠，间隔2周进行第二次免疫25 μg/小鼠，然后再间隔2周进行第三次免疫25 μg/小鼠，最后一次免疫10天后，再次采用该蛋白片段进行加强免疫，3天后取小鼠脾脏进行细胞融合。
表1
2. 细胞融合
将小鼠脾细胞与SP2/0细胞（ATCC No.CRL-1581）按2:1比例电融合（BTX电融合仪：ECM2001+），在96孔培养板中以HAT（Sigma，H0262）培养基培养，10天后进行杂交瘤细胞上清抗体筛选。
3. 阳性克隆筛选
ELISA筛选阳性克隆：将杂交瘤上清液按照每孔50 μL分别加入包被了人αCGRP多肽、人βCGRP多肽、大鼠CGRP多肽或兔CGRP的96孔平底检测板（Corning，9018）中。37℃孵育60分钟，PBST洗三遍，加入二抗（Anti-Mouse IgG，Sigma，A0168），37℃孵育30分钟。PBST洗三遍，每孔加入100 μL TMB（英创生物，EL0009），显色15分钟后每孔加入50 μL硫酸终止反应。酶标仪上读取OD值，表2中示出能与不同动物种属CGRP多肽结合的阳性相应克隆。基于与不同种属的CGRP结合活性（OD值），挑选可以结合不同种属CGRP的克隆进行活性测定。
表2 与不同种属的动物CGRP多肽结合的阳性杂交瘤克隆
<b>克隆号</b> <b>人</b><b>αCGRP</b><b>OD</b><b>值</b> <b>人</b><b>βCGRP</b><b>OD</b><b>值</b> <b>大鼠</b><b>CGRP</b><b>OD</b><b>值</b> <b>兔</b><b>CGRP</b><b>OD</b><b>值</b>
2-D6 1.984 1.856 1.658 2.04
6-F5 1.869 1.587 1.332 1.838
8-G3 2.095 1.929 1.746 2.116
8-G11 2.42 1.96 1.745 2.187
10-F2 1.936 1.744 1.417 1.711
10-G4 2.269 1.816 1.603 1.807
12-B7 1.998 1.622 1.303 1.647
15-A9 1.719 1.513 1.38 1.581
17-A8 1.299 0.47 0.399 0.736
18-E4 2.129 1.786 1.741 1.963
19-C5 1.896 1.349 1.208 1.404
21-A2 1.375 0.617 0.426 0.594
21-F7 1.84 1.665 1.455 1.851
22-C6 1.147 0.433 0.301 0.476
23-C2 1.804 1.57 1.502 1.745
25-B3 1.845 1.076 0.891 1.087
25-G8 0.4 0.15 0.594 0.072
25-H4 1.624 1.051 0.8 0.962
27-C7 2.145 1.939 1.816 1.997
31-C4 1.832 1.341 1.389 0.981
33-F9 1.754 1.286 1.228 0.938
34-F10 0.109 0.23 1.397 0.176
35-B1 1.627 1.436 1.826 1.151
36-H9 1.646 1.104 1.201 0.701
39-B1 2.149 1.747 2.038 1.616
39-B12 1.867 1.287 1.321 0.948
40-B12 0.868 0.603 0.513 0.518
40-D12 0.631 0.401 0.334 0.199
43-F8 1.165 0.764 0.629 0.548
43-G8 0.639 0.472 0.269 0.266
47-B1 0.28 0.59 0.05 0.05
47-H10 2.294 1.742 1.849 1.766
49-G11 0.311 0.593 0.053 0.052
30-E5 2.054 1.69 1.39 1.446
活性检测：G蛋白偶联受体（G Protein-Coupled Receptors，GPCR），是一类能与配体结合，能通过与G蛋白的相互作用激活胞内一系列信号通路的受体膜蛋白。研究表明，该类受体的共同点是其立体结构中都有七个跨膜α螺旋，且其肽链的C端和连接第5和第6个跨膜螺旋的胞内环上都有G蛋白（鸟苷酸结合蛋白）的结合位点。在某些生理过程中，G蛋白偶联受体能结合细胞周围环境中的化学物质并激活细胞内的一系列信号通路，最终引起细胞生理状态的改变。
本实验使用SK-N-MC细胞作为筛选模型，以人源αCGRP和βCGRP作为激动剂。通过检测激动剂与受体结合后胞内cAMP浓度的变化，运用HTRF检测技术检测胞内cAMP的浓度以评价杂交瘤克隆在CGRP受体上的中和功能活性。
SK-N-MC细胞培养于T25培养瓶中，在37°C/5% CO2培养箱中培养，当细胞汇合度达到80%-85%时，进行消化处理，将收集到的细胞悬液用Eagle's Minimum Essential Medium（EMEM）完全培养基调整SK-N-MC细胞密度；杂交瘤细胞上清和多肽混合，室温孵育30 min；在384孔板（Greiner，784075）中加入5 ml细胞/孔，再加入5 ml/孔上述αCGRP，37℃孵育30min；加入5 ml/孔1× cAMP D2 buffer（1倍体积20×cAMP D2 buffer和29倍体积Lysisbuffer），再加入5 ml/孔1× cAMP Eu-Cryptate antibody（1倍体积20×cAMP Eu-Cryptate antibody和29倍体积Lysis buffer），室温孵育1小时；多功能酶标仪（PHERAstar）在665 nm和620 nm波长读取数值；HTRF ratio=（Signal 665nm/Signal620nm）×104。表3中示出相应杂交瘤克隆27-C7上清中和活性检测数据。
表3 杂交瘤上清中和活性检测结果
根据与不同种属的动物CGRP多肽结合数据和中和活性结果，将阳性克隆培养孔中的细胞混匀后吸入离心管中，加入适量培养基，混匀后吸出少量细胞计数，根据计数结果将杂交瘤细胞稀释至每mL含5个细胞，96孔板每孔加入0.2 mL上述细胞悬液，培养一周后，挑选含有单个细胞集落的培养上清再次按上述方法进行检测。表4中示出阳性亚克隆27C7D9的检测结果。
表4 阳性亚克隆27C7D9的检测结果
实施例2：抗人CGRP的鼠源单克隆抗体的制备、纯化和功能鉴定
按照常规方法，将表4中具有结合活性的杂交瘤细胞用无血清培养基培养，10天后收集培养上清液，用Protein A柱（博格隆（上海）生物技术有限公司，货号：AA0272）纯化鼠源抗人CGRP单克隆抗体，获得纯化的单克隆抗体（按照杂交瘤的名称命名）。之后检测纯化的抗人CGRP抗体的活性和功能。
2.1 检测抗人CGRP的杂交瘤单克隆抗体的结合活性
CGRP ELISA结合活性（遵循实施例1中的方法）：将杂交瘤单克隆抗体每孔50 μL分别加入包被了人αCGRP多肽、人βCGRP多肽，大鼠CGRP多肽或兔CGRP多肽的96孔平底检测板（Corning，9018）中37℃孵育30分钟。PBST洗三遍，每孔加入100 μL TMB （英创生物，EL0009），显色15分钟后每孔加入50 μL硫酸终止反应。酶标仪上读取OD值。瑞玛奈珠单抗（Fremanezumab）、伽奈珠单抗（Galcanezumab）、艾普奈珠单抗（Eptinezumab）为阳性对照抗体。
结果如图1A、1B、1C、1D和表5所示，可以看出，27C7D9可与人αCGRP、人CGRP、大鼠CGRP和兔CGRP结合且亲和力与Fremanezumab、Glacanezumab和Eptinezumab相当或优于Fremanezumab、Glacanezumab和Eptinezumab。
表5 抗CGRP抗体与人CGRP的结合活性
2.2 抗人CGRP的杂交瘤单克隆抗体抑制cAMP信号转导
cAMP检测实验（遵循实施例1中的方法）：SK-N-MC细胞培养于T25培养瓶中，在37℃/5% CO2培养箱中培养，当细胞汇合度达到80%-85%时，进行消化处理，将收集到的细胞悬液用完全培养基调整SK-N-MC细胞密度；用1×stimulation buffer（1倍体积5×stimulation buffer和4倍体积双蒸水）稀释αCGRP多肽或者βCGRP多肽，配制4×溶液，浓度为600 nM，抗体也配制4×溶液，浓度从320 mg/ml开始，2倍稀释，抗体和多肽1:1混合，室温孵育30 min，得到抗体多肽混合物；在384孔板（Greiner，784075）中加入5 ml细胞/孔，再加入5 ml/孔上述抗体多肽混合物，37℃孵育30 min；加入5 ml/孔1× cAMP D2 buffer（1倍体积20×cAMP D2 buffer和29倍体积Lysis buffer），再加入5 ml/孔1× cAMP Eu-Cryptate antibody（1倍体积20×cAMP Eu-Cryptate antibody和29倍体积Lysisbuffer），室温孵育1小时；多功能酶标仪（BMG）在665nm和620nm波长读取数值；HTRF ration=（Signal 665nm/Signal 620nm）×104。结果如图2A，2B和表6所示。根据结合和功能结果，27C7D9具有与阳性对照同等或更好的活性。
表6 抗CGRP鼠源单克隆抗体功能活性结果
实施例3：构建、表达和纯化抗CGRP抗体的嵌合抗体
3.1抗CGRP抗体的测序、表达和纯化
嵌合抗体的制备:对杂交瘤克隆27C7D9产生的抗体27C7D9进行测序，获得相应抗体的可变区序列，序列见表7。采用常规方法将杂交瘤抗体27C7D9的轻、重链可变区（表7）分别构建到人源恒定区（IgG1/K，表8）上，获得嵌合抗体。嵌合抗体在相应杂交瘤克隆编号上加前缀ch对其进行命名。例如采用杂交瘤克隆27C7D9通过本实施例获得的嵌合抗体命名为ch27C7D9（抗CGRP抗体的嵌合抗体），用于体外功能鉴定或体内药效研究。
表7 抗CGRP杂交瘤抗体的CDR序列及其编号（根据Kabat方案确定）
表8 嵌合抗体及人源化抗体的恒定区序列
通过基因合成的方法将上述嵌合抗体构建到人源恒定区（IgG1/K，表8）上。采用Expi293细胞进行表达，并使用Protein A进行纯化，纯化后的抗体通过超滤换液将缓冲液置换成PBS。具体方法如下：
Expi293细胞表达抗体：在转染前一天，将Expi293细胞密度稀释到1.5×106个细胞/mL，放于37°C、8% CO2摇床中120 rpm进行培养。第二天，测定活细胞密度和存活率，细胞转染密度应在3×106个细胞/mL，细胞活率大于95%。制备PEI/质粒复合物：将PEI（1mg/mL，polysciences，货号：24765-1）颠倒混匀。用OPM-293 CD05 Medium（奥浦迈，货号：81075-001）稀释包含编码核酸的质粒，质粒总量为1 μg/mL，稀释质粒的培养基的体积为转染体积的1/20，轻轻混匀，轻重链比例为1:1.5。用OPM-293 CD05 Medium稀释PEI试剂，稀释PEI的培养基的体积为转染体积的1/20，轻轻颠倒混匀，在室温下孵育5分钟。将稀释的PEI试剂加入到稀释的质粒中，轻轻颠倒混匀。将PEI/质粒复合物在室温下孵育15分钟，然后将溶液缓慢滴加到转移摇瓶中，在加入过程中轻轻旋转摇瓶。转染完毕后将摇瓶放于37°C、8% CO2的摇床中120 rpm培养。在转染后第二天（转染后24小时），在摇瓶中加入10% OPM-293ProFeed（奥浦迈，货号：F081918），在加入过程中轻轻旋转烧瓶，之后将摇瓶放回摇床中继续培养5-7天，收获上清液。
Protein A柱纯化抗体：准备重力层析柱，打开重力层析柱上盖，将垫片置于重力柱底部，压紧。准备填料Protein A（Cytiva，货号：17549801），由目标填料体积和填料的悬浊比例精确计算出所需填料悬浊液体积，所需填料悬浊液体积=目标填料体积/填料的悬浊比例。将填料充分涡旋震荡，确保填料完全悬浮。填料悬浊液加入重力层析柱底部。添加至少10 CV的平衡缓冲液PBS到重力层析柱，平衡结束后，检测出口pH。如未至目标pH，继续加入平衡缓冲液直至平衡至目标pH。缓慢加入一定体积的样品至重力层析柱中。添加至少10CV的淋洗缓冲液到重力层析柱。缓慢加入5CV的洗脱缓冲液（10-50 mM NaAc，pH3.0-pH3.5）到重力层析柱，孵育3-5分钟对洗脱液进行收集。根据需要重复洗脱步骤。用中和缓冲液（1M Tris）调节洗脱液的pH至目标pH。用Nanodrop测定蛋白质浓度。通过超滤换液将保存抗体的缓冲液置换成PBS。
实施例4抗人CGRP抗体人源化及人源化抗体的表达纯化
抗体人源化:采用Kabat编号确定CDR，选择与鼠源序列同源性最高的人源种系基因作为受体框架，将鼠源序列的CDR移植至人源框架中。根据氨基酸重要性，进行回复突变，即将移植后框架区部分关键氨基酸回复突变成相对应的鼠源氨基酸，重、轻链分别设计数个变体。见表9和表10。
4.1抗CGRP抗体27C7D9人源化
分析鼠源抗体27C7D9序列，与IMGT的人胚系（germline）基因比对，确定IGKV1-33*01 的框架区序列为轻链的人源化构架序列，IGHV1-46*01的框架区序列为重链的人源化构架序列，IGKV1-33*01轻链可变区和IGHV1-46*01重链可变区序列如下文序列信息所示。通过CDR-grafting (CDR采用KABAT编码法确定)，将重链和轻链的CDR分别并置于选择的人源化构架序列，同时，对构架区上的关键位点进行回复突变设计，获得到若干人源化抗体可变区，示于表9。将重轻链可变区序列，分别与人IgG1恒定区 (IMGT, human IGHG1*01)和人kappa恒定区组合（表8所示的序列），得到人源化抗体。具体获得的27C7D9人源化抗体的重轻链可变区序列组合如表9所示。
表9设计的人源化重轻链可变区序列
4.2表达和纯化抗CGRP人源化抗体
通过基因合成的方法将上述人源化抗体的轻、重链可变区分别构建到人源恒定区（IgG1/K，表8）上。采用Expi293细胞进行表达，并使用Protein A进行纯化，纯化后的抗体通过超滤换液将缓冲液置换成PBS。具体方法如下：
Expi293细胞表达抗体：在转染前一天，将Expi293细胞密度稀释到1.5×106个细胞/mL，放于37°C、8% CO2摇床中120 rpm进行培养。第二天，测定活细胞密度和存活率，细胞转染密度应在3×106个细胞/mL，细胞活率大于95%。制备PEI/质粒复合物：将PEI（1mg/mL，polysciences，货号：24765-1）颠倒混匀。用OPM-293 CD05 Medium（奥浦迈，货号：81075-001）稀释包含编码核酸的质粒，质粒总量为1 μg/mL，稀释质粒的培养基的体积为转染体积的1/20，轻轻混匀，轻重链比例为1:1.5。用OPM-293 CD05 Medium稀释PEI试剂，稀释PEI的培养基的体积为转染体积的1/20，轻轻颠倒混匀，在室温下孵育5分钟。将稀释的PEI试剂加入到稀释的质粒中，轻轻颠倒混匀。将PEI/质粒复合物在室温下孵育15分钟，然后将溶液缓慢滴加到转移摇瓶中，在加入过程中轻轻旋转摇瓶。转染完毕后将摇瓶放于37°C、8% CO2的摇床中120 rpm培养。在转染后第二天（转染后24小时），在摇瓶中加入10% OPM-293ProFeed（奥浦迈，货号：F081918），在加入过程中轻轻旋转烧瓶，之后将摇瓶放回摇床中继续培养5-7天，收获上清液。
Protein A柱纯化抗体：准备重力层析柱，打开重力层析柱上盖，将垫片置于重力柱底部，压紧。准备填料Protein A（Cytiva，货号：17549801），由目标填料体积和填料的悬浊比例精确计算出所需填料悬浊液体积，所需填料悬浊液体积=目标填料体积/填料的悬浊比例。将填料充分涡旋震荡，确保填料完全悬浮。填料悬浊液加入重力层析柱底部。添加至少10 CV的平衡缓冲液PBS到重力层析柱，平衡结束后，检测出口pH。如未至目标pH，继续加入平衡缓冲液直至平衡至目标pH。缓慢加入一定体积的样品至重力层析柱中。添加至少10CV的淋洗缓冲液到重力层析柱。缓慢加入5CV的洗脱缓冲液（10-50 mM NaAc，pH3.0-pH3.5）到重力层析柱，孵育3-5分钟对洗脱液进行收集。根据需要重复洗脱步骤。用中和缓冲液（1M Tris）调节洗脱液的pH至目标pH。用Nanodrop测定蛋白质浓度。通过超滤换液将保存抗体的缓冲液置换成PBS。
实施例5抗CGRP抗体的嵌合抗体ch27C7D9和抗CGRP人源化抗体hz27C7D9功能鉴定
5.1抗CGRP抗体的嵌合抗体和抗CGRP人源化抗体的活性
（1）抗CGRP抗体的嵌合抗体和抗CGRP人源化抗体的结合活性
采用实施例1中公开的方法，检测实施例3获得嵌合抗体ch27C7D9和实施例4获得的人源化抗CGRP抗体hz27C7D9（hz27C7D9-VH3+VL3、hz27C7D9-VH3+VL4、hz27C7D9-VH4+VL3、hz27C7D9-VH4+VL4）与不同动物种属CGRP的结合活性，Fremanezumab、Glacanezumab和Eptinezumab作为阳性对照。
结果如图3A，3B，3C和3D和表10所示，所示人源化抗体均结合人CGRP，且结合活性与Fremanezumab、Glacanezumab和Eptinezumab相当。
表10 嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9ELISA检测结果体功能活性验证结果
NT：没有结合。
（2）嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9亲和力检测
将识别人IgG传感器探针置于Octet Red96e预湿板中。将抗体用0.02% PBST、0.1%BSA稀释至5000 ng/mL，每孔200 μL依次加入黑色不透明板中。将人CGRP用0.02% PBST、0.1%BSA稀释至400 nM（8800 ng/ml），再按2倍系列稀释得到梯度稀释的人CGRP蛋白，然后每孔200 μL依次加入黑色不透明板中。用Octet Red96e编辑实验方法进行运行，读取相结合信号数值。利用Octet分析软件Data Analysis分析试验数据，计算出动力学各种参数。Fremanezumab、Glacanezumab和Eptinezumab 作为阳性对照。
结果如表11所示，其中αCGRP和βCGRP均进行两组平行检测，嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9-VH3+VL3、hz27C7D9-VH3+VL4、hz27C7D9-VH4+VL3、hz27C7D9-VH4+VL4的KD值为~3E-13 M（αCGRP）和~1 E-11 M（βCGRP），且亲和力与Fremanezumab、Glacanezumab和Eptinezumab相当或优于Fremanezumab、Glacanezumab和Eptinezumab。
表11 嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9对人CGRP亲和力测定值
NT：没有结合。
（3）嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9抑制cAMP信号转导
采用实施例2.2的方法，检测抗CGRP嵌合抗体和人源化抗体抑制cAMP信号转导的活性，Fremanezumab、Glacanezumab和Eptinezumab作为阳性对照。
结果如图4A、图4B和表12所示，所示人源化抗体均能阻断CGRP受体cAMP下游信号，抑制活性和阳性对照可比。
表12 嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9对cAMP 信号传导抑制活性
（4）嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9-VH4+VL3对CGRP同家族类似物Adrenomedullin、Amylin、Calcitonin和Intermedin的交叉结合（ELISA）
采用实施例1的方法，检测抗CGRP嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9-VH4+VL3对CGRP同家族类似物Adrenomedullin、Amylin、Calcitonin和Intermedin的交叉结合ELISA活性：将抗体每孔50 μL分别加入包被了人Adrenomedullin（MCE产品，货号HY-P1770/CS-0095586）、Amylin（TOCRIS产品，货号3418）、Calcitonin（TOCRIS产品，货号6031）和Intermedin（固拓生物产品，货号GT-P1971）多肽的96孔平底检测板（Corning，9018）中，37℃孵育60分钟，PBST洗三遍，加入二抗（Anti-Human IgG HRP，Sigma，A8867），37℃孵育30分钟。PBST洗三遍，每孔加入100 μL TMB （英创生物，EL0009），显色15分钟后每孔加入50 μL硫酸终止反应。酶标仪上读取OD值。结果如图5A、5B、5C和5D所示。可以看出，与Fremanezumab、Glacanezumab和Eptinezumab相同，嵌合抗体ch27C7D9和人源化抗体hz27C7D9-VH4+VL3高度特异性结合CGRP，并且不结合同家族类似物Adrenomedullin（图5A）、Amylin（图5B）、Calcitonin（图5C）和Intermedin（图5D）。
序列信息：
IGKV1-33*01轻链可变区和IGHV1-46*01重链可变区序列
嵌合抗体ch27C7D9、人源化抗CGRP抗体、阳性对照抗体的重、轻链序列信息

Claims (12)

1.一种结合CGRP的抗体或其抗原结合片段，其包含重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，以及轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：
HCDR1由SEQ ID NO: 1组成；HCDR2由SEQ ID NO: 2组成；HCDR3由SEQ ID NO: 3组成；LCDR1由SEQ ID NO: 4组成；LCDR2由SEQ ID NO: 5组成；LCDR3由SEQ ID NO: 6组成。
2.根据权利要求1所述的结合CGRP的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中：
1）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 7所示的氨基酸序列或由其组成；所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 8所示的氨基酸序列或由其组成；
2）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列或由其组成；所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 10所示的氨基酸序列或由其组成；
3）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 9所示的氨基酸序列或由其组成；所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 12所示的氨基酸序列或由其组成；
4）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 11所示的氨基酸序列或由其组成；所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 10所示的氨基酸序列或由其组成；或
5）所述重链可变区包含如SEQ ID NO: 11所示的氨基酸序列或由其组成；所述轻链可变区包含如SEQ ID NO: 12所示的氨基酸序列或由其组成。
3.根据权利要求1或2所述的结合CGRP的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体为单克隆抗体、单链抗体、双功能抗体、完全或部分人源化的抗体或者嵌合抗体的任意形式；和/或
所述抗原结合片段为抗体的抗原结合片段。
4.根据权利要求3所述的结合CGRP的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段为Fab、Fab'、Fab'-SH、(Fab')2、Fv、scFv、BsFv、dsFv或(dsFv)2片段。
5.根据权利要求3所述的结合CGRP的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体或其抗原结合片段包含人或鼠源的重链恒定区和/或轻链恒定区；
所述抗体或其抗原结合片段包含IgG、IgA、IgM、IgD或IgE的重链恒定区和/或κ或λ型轻链恒定区。
6.根据权利要求5所述的结合CGRP的抗体或其抗原结合片段，其中，所述抗体为单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚型。
7. 根据权利要求6所述的结合CGRP的抗体或其抗原结合片段，其中，所述单克隆抗体的重链恒定区包含或由SEQ ID NO: 13所示的序列组成；和/或所述单克隆抗体的轻链恒定区包含或由SEQ ID NO: 14所示的序列组成。
8.根据权利要求1所述的结合CGRP的抗体或其抗原结合片段，其包含重链和/或轻链，其中：
1）所述重链包含如SEQ ID NO: 15所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 15含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 15所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 15组成，所述轻链包含如SEQ IDNO: 16所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 16含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 16所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 16组成；
2）所述重链包含如SEQ ID NO: 17所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 17含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 17所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 17组成，所述轻链包含如SEQ IDNO: 18所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 18含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 18所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 18组成；
3）所述重链包含如SEQ ID NO: 19所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 19含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 19所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 19组成，所述轻链包含如SEQ IDNO: 20所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 20含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 20所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 20组成；
4）所述重链包含如SEQ ID NO: 21所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 21含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 21所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 21组成，所述轻链包含如SEQ IDNO: 22所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 22含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 22所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 22组成；或
5）所述重链包含如SEQ ID NO: 23所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 23含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 23所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 23组成，所述轻链包含如SEQ IDNO: 24所示氨基酸序列或相对于SEQ ID NO: 24含有一个或多个氨基酸的取代、缺失或插入或其任意组合的序列，或与SEQ ID NO: 24所示的氨基酸序列具有至少90%同一性的氨基酸序列，或由SEQ ID NO: 24组成。
9.一种生物材料，其包括：
（i）核酸分子，其编码权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段；
（ii）载体，其包含（i）所述的核酸分子；和/或
（iii）宿主细胞，其包含（i）所述的核酸分子和/或（ii）所述的载体，或者所述宿主细胞被（i）所述的核酸分子和/或（ii）所述的载体转化或转染。
10.根据权利要求9所述的生物材料，其中，所述宿主细胞是原核的或真核的；所述宿主细胞选自酵母细胞、CHO细胞、293细胞、植物细胞。
11.一种偶联物，其包含权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段和偶联部分，其中，所述偶联部分为另一种分子；所述偶联部分为荧光物质、发光物质、有色物质或酶。
12.权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段、权利要求9或10所述的生物材料、权利要求11所述的偶联物在制备如下任一所示的产品中的用途：
（a）检测CGRP的产品；
（b）预防和/或治疗受试者所罹患疾病的产品；
所述疾病为偏头痛。
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