TWI501957B - Ｃ型肝炎病毒抑制劑 - Google Patents

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Description

C型肝炎病毒抑制劑
本發明係關於製備適用於治療C型肝炎病毒(HCV)感染之化合物之方法。
本申請案主張2009年11月11日申請之美國臨時申請案第61/260,115號及2010年8月31日申請之美國臨時申請案第61/378,806號之權利，該等申請案以全文引用的方式併入本文中。
HCV為一種主要的人類病原體，全世界估計有1.7億人受感染，約為1型人類免疫缺陷病毒感染人數之五倍。此等感染HCV之個體中有相當一部分發展成嚴重進行性肝病，包括肝硬化及肝細胞癌。
當前對於HCV之標準護理為使用聚乙二醇化干擾素與病毒唑之組合，其在達成持續病毒反應方面的成功率並非最佳且引起許多副作用。因此，明顯且長期需要開發解決此未滿足之醫學需求的有效療法。
HCV為一種正股RNA病毒。基於推導之胺基酸序列的比較及5'未轉譯區之廣泛相似性，HCV已歸類為黃病毒科(Flaviviridae family)中之獨立屬。黃病毒科之所有成員均具有包膜病毒粒子，該等粒子含有經由轉譯單一不間斷之開放閱讀框架來編碼所有已知病毒特異性蛋白質之正股RNA基因組。
由於缺乏校對能力之所編碼之RNA依賴性RNA聚合酶的出錯率高，故在整個HCV基因組中，在核苷酸及所編碼之胺基酸序列中存在相當大的異質性。已表徵至少6種主要基因型，且已描述超過50種子型並遍佈全世界。HCV之基因異質性的臨床顯著性已顯現在單一療法治療期間出現突變之傾向，因此需要供使用之其他治療選擇。基因型對發病機制及療法之可能調節作用仍然難懂。
單股HCV RNA基因組之長度為約9500個核苷酸且具有編碼含約3000個胺基酸之單一大型聚合蛋白質的單一開放閱讀框架(ORF)。在受感染細胞中，此聚合蛋白質由細胞及病毒蛋白酶在多個位點裂解以產生結構及非結構(NS)蛋白質。在HCV之情況下，成熟非結構蛋白質(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B)之產生由兩種病毒蛋白酶實現。咸信第一種為金屬蛋白酶且在NS2-NS3接合處裂解；第二種為含於NS3之N端區域中的絲胺酸蛋白酶(本文中亦稱為NS3蛋白酶)且介導NS3下游之所有後續裂解，在NS3-NS4A裂解位點為順式，而在其餘NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位點為反式。NS4A蛋白似乎藉由充當NS3蛋白酶之輔因子及輔助NS3及其他病毒複製酶組分之膜定位來發揮多種功能。NS3-NS4A複合物之形成為適當蛋白酶活性所必需的，其使得裂解事件之蛋白水解效率增加。NS3蛋白亦展現核苷三磷酸酶及RNA解螺旋酶活性。NS5B(本文中亦稱為HCV聚合酶)為與複製酶複合物中HCV與其他HCV蛋白(包括NS5A)之複製有關之RNA依賴性RNA聚合酶。
需要適用於治療感染HCV之患者的化合物，其選擇性抑制HCV病毒複製。詳言之，需要有效抑制NS5A蛋白之功能的化合物。HCV NS5A蛋白例如描述於以下參考文獻中：Tan,S.L.等人，Virology, 284:1-12(2001)；Park,K.-J.等人，J .Biol .Chem ., 30711-30718(2003)；Tellinghuisen,T.L.等人，Nature, 435:374(2005)；Love,RA.等人，J .Virol ., 83:4395(2009)；Appel,N.等人，J .Biol .Chem ., 281:9833(2006)；Huang,L.,J .Biol .Chem ., 280:36417(2005)；Rice,C.等人，國際專利申請案WO 2006/093867。
在本發明之第一態樣中，本發明提供一種式(I)化合物
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：X及X'各獨立地選自CH、CR1 及N；Y及Y'各獨立地選自CH、CR2 及N；其限制條件為X、X'、Y及Y'中不超過兩者為N；R1 及R2 獨立地選自
各R3 獨立地選自氫、氰基及鹵基；各R4 獨立地選自氫及烷基，其中該烷基可視情況與相鄰碳原子一起形成3至5員稠合環，其中該環視情況經一或兩個甲基取代；或R4 與其所連接之碳形成伸乙基；各R5 獨立地選自氫及-C(O)R6 ；各R6 獨立地選自烷氧基、烷基、芳基烷氧基、芳基烷基、環烷基、雜環基、雜環基烷基、(NRc Rd )烯基及(NRc Rd )烷基；且各R7 及R8 獨立地選自氫及烷基。
在第一態樣之第一實施例中，本發明提供一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：X及X'獨立地選自CH及CR1 ；且Y及Y'獨立地選自CH及CR2 。
在第一態樣之第二實施例中，本發明提供一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：X及X'獨立地選自CH及CR1 ；且Y及Y'各為N。
在第一態樣之第三實施例中，本發明提供一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：Y及X'各為N；X係選自CH及CR1 ；且Y'係選自CH及CR2 。
在第一態樣之第四實施例中，本發明提供一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：X'為N；且X係選自CH及CR1 ；且Y及Y'獨立地選自CH及CR2 。
在第二態樣中，本發明提供一種包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及醫藥學上可接受之載劑的組合物。在第二態樣之第一實施例中，該組合物進一步包含至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。在第二態樣之第二實施例中，至少一種其他化合物為干擾素或病毒唑。在第二態樣之第三實施例中，該干擾素係選自干擾素α 2B、聚乙二醇化干擾素α、複合干擾素(consensus interferon)、干擾素α 2A及類淋巴母細胞干擾素τ。
在第二態樣之第四實施例中，本發明提供一種包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之載劑及至少一種具有抗HCV活性之其他化合物的組合物，其中至少一種其他化合物係選自介白素2、介白素6、介白素12、增強1型輔助T細胞反應發生之化合物、干擾RNA、反義RNA、咪奎莫特(Imiqimod)、病毒唑、肌苷5'-單磷酸去氫酶抑制劑、金剛胺(amantadine)及金剛乙胺(rimantadine)。
在第二態樣之第五實施例中，本發明提供一種包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽、醫藥學上可接受之載劑及至少一種具有抗HCV活性之其他化合物，其中至少一種其他化合物有效抑制選自HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出(egress)、HCV NS5A蛋白及IMPDH之標靶的功能以治療HCV感染。
在第三態樣中，本發明提供一種治療患者之HCV感染的方法，其包含向該患者投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。在第三態樣之第一實施例中，該方法進一步包含在該式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前、之後或同時投與至少一種具有抗HCV活性之其他化合物。在第三態樣之第二實施例中，至少一種其他化合物為干擾素或病毒唑。在第三態樣之第三實施例中，該干擾素係選自干擾素α 2B、聚乙二醇化干擾素α、複合干擾素、干擾素α 2A及類淋巴母細胞干擾素τ。
在第三態樣之第四實施例中，本發明提供一種治療患者之HCV感染的方法，其包含向該患者投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及在該式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前、之後或同時投與至少一種具有抗HCV活性之其他化合物，其中至少一種該等其他化合物係選自介白素2、介白素6、介白素12、增強1型輔助T細胞反應發展之化合物、干擾RNA、反義RNA、咪奎莫特、病毒唑、肌苷5'-單磷酸去氫酶抑制劑、金剛胺及金剛乙胺。
在第三態樣之第五實施例中，本發明提供一種治療患者之HCV感染的方法，其包含向該患者投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及在該式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之前、之後或同時投與至少一種具有抗HCV活性之其他化合物，其中至少一種該等其他化合物有效抑制選自HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白及IMPDH之標靶的功能以治療HCV感染。
在第四態樣中，本發明提供一種製備式(X)化合物之方法
其中R1 係選自氫及氮保護基；該方法包含：
(a)使式(Y)化合物
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R1 係選自氫及氮保護基；且R2 係選自胺基、烷氧基及芳基烷氧基；與鹼反應，及
(b)用水處理步驟(a)之產物。
在第四態樣之第一實施例中，R1 為氫。
在第四態樣之第二實施例中，R1 為氮保護基。在第四態樣之第三實施例中，該氮保護基為第三丁氧羰基。
在第四態樣之第五實施例中，該鹼係選自金屬烷醇鹽及金屬氫氧化物。在第四態樣之第六實施例中，鹼係選自乙醇鈉、異丙醇鈉、第三丁醇鈉、氫氧化鈉、氫氧化鋰、氫氧化鉀、異丙醇鉀、第三丁醇鉀、第三丁醇鋰及異丙醇鋰。
在第四態樣之第七實施例中，該方法進一步包含用氮保護試劑處理式(X)產物
其中R1 為氫；得到式(X)化合物
其中R1 為氮保護基。
在第四態樣之第八實施例中，該氮保護基為第三丁氧羰基。
在第五態樣中，本發明提供一種製備式(Z)化合物之方法
或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R4 及R5 獨立地選自氫、烷基、芳基、芳基烷基、雜環基及雜環基烷基；該方法包含：在乙酸銨存在下用鹼處理式(Q)化合物
在第五態樣之第一實施例中，該鹼係選自三級胺、芳族胺、苯胺及經取代之咪唑。在第五態樣之第二實施例中，鹼係選自1,4-二甲基哌嗪、3-喹寧醇、3-甲基吡啶、1-甲基咪唑、二甲基丁胺、N,N-二甲基苯胺、二甲胺丙醇(dimerpranol)、喹噁唑啉(quinoxazoline)、肌酐、2-甲基咪唑、4-甲基咪唑、咪唑、嗎啉、N-甲基嗎啉、1,8-二氮雜雙環十一碳-7-烯、1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷、三甲基吡啶、4-氯咪唑、2-氯咪唑、4-氰基咪唑、苯并咪唑、二異丙基乙胺及2,6-二甲基吡啶。在第三實施例中，鹼為咪唑。
在第六態樣中，本發明提供一種製備實例145之方法
該方法包含：
(a)在鹼存在下用實例143
處理實例144
得到式(V)化合物
(b)在鹼存在下用乙酸銨處理該式(V)化合物；及
(c)用甲醇處理步驟(b)之產物。
在第七態樣之第一實施例中，該方法為連續方法。
本發明之其他態樣可包括本文所揭示之實施例的適合組合。
其他態樣及實施例可見於本文所提供之描述中。
本文中對本發明之描述應解釋為符合化學鍵結之定律及原則。在一些情況下，可能必需在任何特定位置移除氫原子以接受取代基。
應瞭解本發明所涵蓋之化合物為適當穩定以用作藥劑之化合物。
預期任何取代基或變數在分子中之特定位置之定義獨立於其在該分子別處之定義。舉例而言，當R1 與R2 皆含有R4 基團時，兩個R4 基團可相同或不同。
說明書中所引用之所有專利、專利申請案及參考文獻均以全文引用的方式併入本文中。在出現矛盾之情況下，將以本發明(包括定義)為準。
如本說明書中所使用，以下術語具有所指示之含義：除非本文另外明確指示，否則如本文中所使用，單數形式「一」及「該」包括複數個指示物。
除非另有規定，否則本發明之所有芳基、環烷基及雜環基均可如其各別定義之每一者中所述經取代。舉例而言，芳基烷基之芳基部分可如術語「芳基」之定義中所述經取代。
如本文中所使用，術語「烯基」係指具有2至6個碳原子且含有至少一個碳-碳雙鍵之直鏈或分支鏈基團。
如本文中所使用，術語「烯氧基」係指烯基經由氧原子連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「烯氧羰基」係指烯氧基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「烷氧基」係指烷基經由氧原子連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「烷氧基烷基」係指烷基經一個、兩個或三個烷氧基取代。
如本文中所使用，術語「烷氧基烷基羰基」係指烷氧基烷基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「烷氧羰基」係指烷氧基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「烷基羰氧基」係指烷基羰基經由氧原子連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「烷基」係指得自含有1至6個碳原子之直鏈或分支鏈飽和烴的基團。在本發明之化合物中，當R4 為烷基時，該烷基可視情況與相鄰碳原子形成3員稠合環以提供以下所示之結構：
其中n係選自1及2。
如本文中所使用，術語「烷基羰基」係指烷基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「烷基硫基」係指烷基經由硫原子連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「烷基磺醯基」係指烷基經由磺醯基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「胺基」係指-NRq Rs ，其中Rq 及Rs 獨立地選自氫、烷基及芳基烷基。
如本文中所使用，術語「芳基」係指苯基或其中一個或兩個環為苯基之雙環稠合環系統。雙環稠合環系統由苯基與4至6員芳族或非芳族碳環稠合組成。本發明之芳基可經由基團中之任何可取代碳原子連接於母分子部分。芳基之代表性實例包括(但不限於)二氫茚基、茚基、萘基、苯基及四氫萘基。本發明之芳基視情況經一個、兩個、三個、四個或五個獨立地選自烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、第二芳基、芳基烷氧基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、雜環基、雜環基烷基、雜環基羰基、羥基、羥基烷基、硝基、-NRx Ry 、(NRx Ry )烷基、側氧基及-P(O)OR2 之取代基取代，其中各R獨立地選自氫及烷基；且其中該芳基烷基及該雜環基烷基之烷基部分未經取代且其中該第二芳基、該芳基烷基之芳基部分、該芳基羰基之芳基部分、該雜環基、及該雜環基烷基及該雜環基羰基之雜環基部分進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基及硝基之取代基取代。
如本文中所使用，術語「芳基烷氧基」係指芳基經由烷氧基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「芳基烷氧羰基」係指芳基烷氧基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「芳基烷基」係指烷基經一個、兩個或三個芳基取代。芳基烷基之烷基部分進一步視情況經一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基羰氧基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、雜環基、羥基及-NRc Rd 之其他基團取代，其中該雜環基進一步視情況經一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷氧基、未經取代之芳基烷氧羰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、羥基、-NRx Ry 及側氧基之取代基取代。
如本文中所使用，術語「芳基羰基」係指芳基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「鹼」係指接受質子之化合物。
如本文中所使用，術語「連續方法」係指不分離所形成之中間物的多步驟方法。
如本文中所使用，術語「氰基」係指-CN。
如本文中所使用，術語「環烷基」係指具有3至14個碳原子及零個雜原子之飽和單環或雙環烴環系統。環烷基之代表性實例包括(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環己基、雙環[3.1.1]庚基及金剛烷基。本發明之環烷基視情況經一個、兩個、三個、四個或五個獨立地選自烷氧基、烷基、芳基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、雜環基、羥基、羥基烷基、硝基及-NRx Ry 之取代基取代，其中該芳基及該雜環基進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、羥基、硝基及側氧基之取代基取代。
如本文中所使用，術語「環烷氧基」係指環烷基經由氧原子連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「環烷氧基羰基」係指環烷氧基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「環烷基磺醯基」係指環烷基經由磺醯基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「伸乙基」係指=CH2 。
如本文中所使用，術語「甲醯基」係指-CHO。
如本文中所使用，術語「鹵基」及「鹵素」係指Cl、Br、F或I。
如本文中所使用，術語「鹵烷氧基」係指鹵烷基經由氧原子連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「鹵烷氧羰基」係指鹵烷氧基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「鹵烷基」係指烷基經一個、兩個、三個或四個鹵素原子取代。
如本文中所使用，術語「雜環基」係指含有一個、兩個、三個或四個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的4、5、6或7員環。4員環具有零個雙鍵，5員環具有零至兩個雙鍵，且6及7員環具有零至三個雙鍵。術語「雜環基」亦包括雜環基環與另一單環雜環基或3至7員芳族或非芳族碳環稠合之雙環基；雜環基環經3至7員螺環取代之雙環基；以及橋式雙環基，諸如7-氮雜雙環[2.2.1]庚-7-基、2-氮雜雙環[2.2.2]辛-2-基及2-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基。本發明之雜環基可經由基團中之任何碳原子或氮原子連接於母分子部分。雜環基之實例包括(但不限於)苯并噻吩基、呋喃基、咪唑基、吲哚啉基、吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噁唑基、嗎啉基、噁唑基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、吡啶基、吡咯啶基、吡咯并吡啶基、吡咯基、喹啉基、四氫哌喃基、噻唑基、噻吩基及硫代嗎啉基。本發明之雜環基視情況經一個、兩個、三個、四個或五個獨立地選自烯基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、芳基、芳基烷氧羰基、芳基烷基、芳基羰基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、第二雜環基、雜環基烷基、雜環基羰基、羥基、羥基烷基、硝基、-NRx Ry 、(NRx Ry )烷基及側氧基之取代基取代，其中該芳基烷基及該雜環基烷基之烷基部分未經取代且其中該芳基、該芳基烷基之芳基部分、該芳基羰基之芳基部分、該第二雜環基、及該雜環基烷基及該雜環基羰基之雜環基部分進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基及硝基之取代基取代。
如本文中所使用，術語「雜環基烷氧基」係指雜環基經由烷氧基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「雜環基烷氧羰基」係指雜環基烷氧基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「雜環基烷基」係指烷基經一個、兩個或三個雜環基取代。雜環基烷基之烷基部分進一步視情況經一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基羰氧基、芳基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、羥基及-NRc Rd 之其他基團取代，其中該芳基進一步視情況經一或兩個獨立地選自烷氧基、烷基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷氧基、未經取代之芳基烷氧羰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基、羥基及-NRx Ry 之取代基取代。
如本文中所使用，術語「雜環基烷基羰基」係指雜環基烷基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「雜環基羰基」係指雜環基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「雜環基氧基」係指雜環基經由氧原子連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「雜環基氧基羰基」係指雜環基氧基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「羥基」係指-OH。
如本文中所使用，術語「羥基烷基」係指經一個、兩個或三個羥基取代之烷基。
如本文中所使用，術語「羥基烷基羰基」係指羥基烷基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「金屬烷醇鹽」係指M-OR，其中M為選自鈉、鋰及鉀之金屬且R為烷基。
如本文中所使用，術語「金屬氫氧化物」係指M-OH，其中M為選自鈉、鋰及鉀之金屬。
如本文中所使用，術語「硝基」係指-NO2 。
如本文中所使用，術語「氮保護基」係指意欲保護胺基以防合成程序期間之不當反應的基團。常見N-保護基包括(但不限於)醯基，諸如乙醯基、苯甲醯基、2-溴乙醯基、4-溴苯甲醯基、第三丁基乙醯基、羧醛、2-氯乙醯基、4-氯苯甲醯基、α-氯丁醯基、4-硝基苯甲醯基、鄰硝基苯氧基乙醯基、鄰苯二甲醯基、特戊醯基、丙醯基、三氯乙醯基及三氟乙醯基；磺醯基，諸如苯磺醯基及對甲苯磺醯基；胺基甲酸酯形成基團，諸如苯甲氧羰基、苯甲氧羰基(Cbz)、第三丁氧羰基(Boc)、對氯苯甲氧羰基及對甲氧基苯甲氧羰基。
如本文中所使用，術語「氮保護試劑」係指在反應條件下向可保護氮原子添加氮保護基之化合物。
如本文中所使用，術語「-NRc Rd 」係指兩個基團Rc 及Rd 經由氮原子連接於母分子部分。Rc 及Rd 獨立地選自氫、烯氧羰基、烷氧基烷基羰基、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、環烷氧基、烷基磺醯基、芳基、芳基烷氧羰基、芳基烷基、芳基烷基羰基、芳基羰基、芳氧羰基、芳基磺醯基、環烷基、環烷氧基羰基、環烷基磺醯基、甲醯基、鹵烷氧羰基、雜環基、雜環基烷氧羰基、雜環基烷基、雜環基烷基羰基、雜環基羰基、雜環基氧基羰基、羥基烷基羰基、(NRe Rf )烷基、(NRe Rf )烷基羰基、(NRe Rf )羰基、(NRe Rf )磺醯基、-C(NCN)OR'及-C(NCN)NRx Ry ，其中R'係選自烷基及未經取代之苯基，且其中該芳基烷基、該芳基烷基羰基、該雜環基烷基及該雜環基烷基羰基之烷基部分進一步視情況經一個-NRe Rf 基團取代；且其中該芳基，該芳基烷氧羰基、該芳基烷基、該芳基烷基羰基、該芳基羰基、該芳氧羰基及該芳基磺醯基之芳基部分，該雜環基，及該雜環基烷氧羰基、該雜環基烷基、該雜環基烷基羰基、該雜環基羰基及該雜環基氧基羰基之雜環基部分進一步視情況經一個、兩個或三個獨立地選自烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基及硝基之取代基取代。
如本文中所使用，術語「(NRc Rd )烯基」係指
其中Rc 及Rd 如本文所定義且各Rq 獨立地為氫或C1-3 烷基。
如本文中所使用，術語「(NRc Rd )烷基」係指烷基經一個、兩個或三個-NRc Rd 基團取代。(NRc Rd )烷基之烷基部分進一步視情況經一或兩個選自烷氧基、烷氧基烷基羰基、烷氧羰基、烷基硫基、C2 炔基、芳基烷氧羰基、羧基、氰基、環烷基、鹵基、雜環基、雜環基羰基、羥基及(NRe Rf )羰基之其他基團取代；其中該雜環基進一步視情況經一個、兩個、三個、四個或五個獨立地選自烷氧基、烷基、氰基、鹵基、鹵烷氧基、鹵烷基及硝基之取代基取代。
如本文中所使用，術語「-NRe Rf 」係指兩個基團Re 及Rf 經由氮原子連接於母分子部分。Re 及Rf 獨立地選自氫、烷基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷基、未經取代之環烷基、未經取代之(環烷基)烷基、未經取代之雜環基、未經取代之雜環基烷基、(NRx Ry )烷基及(NRx Ry )羰基。
如本文中所使用，術語「(NRe Rf )烷基」係指烷基經一個、兩個或三個-NRe Rf 基團取代。
如本文中所使用，術語「(NRe Rf )烷基羰基」係指(NRe Rf )烷基經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「(NRe Rf )羰基」係指-NRe Rf 基團經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「(NRe Rf )磺醯基」係指-NRe Rf 基團經由磺醯基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「-NRx Ry 」係指兩個基團Rx 及Ry 經由氮原子連接於母分子部分。Rx 及Ry 獨立地選自氫、烷氧羰基、烷基、烷基羰基、未經取代之芳基、未經取代之芳基烷氧羰基、未經取代之芳基烷基、未經取代之環烷基、未經取代之雜環基及(NRx' Ry' )羰基，其中Rx' 及Ry' 獨立地選自氫及烷基。
如本文中所使用，術語「(NRx Ry )烷基」係指烷基經一個、兩個或三個-NRx Ry 基團取代。
如本文中所使用，術語「(NRx Ry )羰基」係指-NRx Ry 基團經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「-NRx Ry 」係指兩個基團Rx 及Ry 經由氮原子連接於母分子部分。Rx 及Ry 獨立地選自氫及烷基。
如本文中所使用，術語「(NRx' Ry' )羰基」係指-NRx' Ry' 基團經由羰基連接於母分子部分。
如本文中所使用，術語「側氧基」係指=O。
如本文中所使用，術語「磺醯基」係指-SO2 -。
本發明之化合物中存在不對稱中心。此等中心視對掌性碳原子周圍之取代基之構型而定，由符號「R」或「S」表示。應瞭解本發明涵蓋所有具有抑制NS5A之能力的立體化學異構形式或其混合物。化合物之個別立體異構體可由含有對掌中心之市售起始物質以合成方式製備或藉由製備立體異構產物之混合物，隨後進行分離來製備，諸如轉化為非對映異構體混合物，隨後進行分離或再結晶、層析技術或在對掌性層析管柱上直接分離立體異構體。具有特定立體化學之起始化合物為市售的或可藉由此項技術中已知之技術製備及解析。
本發明之某些化合物亦可以可分離之不同穩定構形形式存在。由於圍繞不對稱單鍵之限制旋轉(例如由於位阻或環應力)所產生的扭轉不對稱性可允許分離不同構象異構體。本發明包括此等化合物之各構形異構體及其混合物。
本發明之化合物亦以互變異構體形式存在；因此，本發明亦涵蓋所有互變異構形式。
術語「本發明之化合物」及等效表述意欲涵蓋式(I)化合物及其醫藥學上可接受之立體異構體、非對映異構體及鹽。類似地，當情形允許時，提及中間物意欲涵蓋其鹽。
本發明意欲包括存在於本發明化合物中之原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序數但不同質量數之彼等原子。以一般實例說明，但不加以限制，氫之同位素包括氘及氚。碳之同位素包括13 C及14 C。本發明之同位素標記化合物一般可藉由熟習此項技術者已知之習知技術或藉由類似於本文所述的方法，使用適當同位素標記試劑替代以其他方式使用之未標記試劑來製備。該等化合物可具有各種潛在用途，例如作為測定生物活性之標準物及試劑。在穩定同位素之情況下，該等化合物可具有有利地改變生物學、藥理學或藥物動力學性質之潛能。
本發明之化合物可以醫藥學上可接受之鹽形式存在。如本文中所使用，術語「醫藥學上可接受之鹽」表示本發明之化合物的鹽或兩性離子形式，其具水溶性或油溶性或水分散性或油分散性，其在正確醫學判斷範疇內適於與患者組織接觸使用而無過量毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症且與合理的益處/風險比相稱，且有效達成其預期用途。該等鹽可在化合物之最後分離及純化期間製備或單獨藉由使適合之氮原子與適合之酸反應來製備。代表性酸加成鹽包括乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽；二葡糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、甲酸鹽、反丁烯二酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙烷磺酸鹽、乳酸鹽、順丁烯二酸鹽、均三甲苯磺酸鹽、甲烷磺酸鹽、伸萘基磺酸鹽、菸鹼酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、酒石酸鹽、三氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、磷酸鹽、麩胺酸鹽、碳酸氫鹽、對甲苯磺酸鹽及十一烷酸鹽。可用於形成醫藥學上可接受之加成鹽之酸的實例包括無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、硫酸及磷酸；及有機酸，諸如草酸、順丁烯二酸、丁二酸及檸檬酸。
鹼加成鹽可在化合物之最後分離及純化期間，藉由使羧基與適合之鹼(諸如金屬陽離子之氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽)或與氨或有機一級、二級或三級胺反應來製備。醫藥學上可接受之鹽的陽離子包括鋰、鈉、鉀、鈣、鎂及鋁，以及無毒性胺陽離子，諸如銨、四甲銨、四乙銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基嗎啉、二環己基胺、普魯卡因(procaine)、二苯甲基胺、N,N-二苯甲基苯乙基胺及N,N'-二苯甲基乙二胺。適用於形成鹼加成鹽之其他代表性有機胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶及哌嗪。
當對於在治療中使用而言可以原始化學物質形式投與治療有效量之式(I)化合物以及其醫藥學上可接受之鹽時，可以醫藥組合物形式提供活性成分。因此，本發明進一步提供醫藥組合物，其包括治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。如本文中所使用，術語「治療有效量」係指各活性組分足以顯示有意義的患者益處(例如病毒負荷持續降低)之總量。當應用於單獨投與之個別活性成分時，該術語係指單獨的該成分。當應用於組合時，該術語係指活性成分產生治療作用之組合量，無論以組合形式、連續或同時投與。式(I)化合物及其醫藥學上可接受之鹽如上文所述。載劑、稀釋劑或賦形劑在與調配物之其他成分相容的意義上必須為可接受的且對其接受者無害。根據本發明之另一態樣，亦提供一種製備醫藥調配物之方法，其包括將式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑混合。如本文中所使用，術語「醫藥學上可接受之」係指彼等化合物、物質、組合物及/或劑型在正確醫學判斷範疇內適於與患者組織接觸使用而無過量毒性、刺激、過敏反應或其他問題或併發症且與合理的益處/風險比相稱，且有效達成其預期用途。
醫藥調配物可以每單位劑量含有預定量之活性成分的單位劑型提供。每日每公斤體重約0.01毫克(「mg/kg」)至約250毫克、較佳每日每公斤體重約0.05 mg至約100 mg之本發明化合物的劑量為用於預防及治療HCV介導疾病之單一療法中的典型劑量。本發明之醫藥組合物通常將投與每日約1至約5次或者以連續輸注形式投與。該投藥可用作長期或短期療法。可與載劑物質組合產生單一劑型之活性成分的量將視所治療之病狀、病狀之嚴重程度、投藥時間、投藥途徑、所用化合物之排泄速率、治療持續時間及患者之年齡、性別、體重及狀況而變化。較佳單位劑量調配物為含有如上文所述之日劑量或子劑量或其適當部分之活性成分的彼等調配物。治療一般以實質上小於最佳劑量之小劑量的化合物開始。隨後，藉由小幅增量來增加劑量直至達到該等情形下之最佳作用。一般而言，化合物最理想地以一般將得到抗病毒有效結果而不引起任何不利或有害副作用之濃度水準投與。
當本發明之組合物包含本發明之化合物與一或多種其他治療劑或預防劑之組合時，該化合物與該其他藥劑通常皆以單一療法方案中通常所投與劑量的約10%至150%且更佳約10%至80%之劑量存在。
醫藥調配物可適用於藉由任何適當途徑來投與，例如藉由經口(包括頰內或舌下)、經直腸、經鼻、表面(包括頰內、舌下或經皮)、經陰道或非經腸(包括皮下、皮內、肌肉內、關節內、滑膜內、胸骨內、鞘內、病灶內、靜脈內或皮內注射或輸注)途徑。該等調配物可藉由藥劑學技術中已知之任何方法來製備，例如藉由使活性成分與載劑或賦形劑締合來製備。經口投藥或藉由注射投藥為較佳。
適用於經口投藥之醫藥調配物可以個別單位形式提供，諸如膠囊或錠劑；散劑或顆粒；於水性或非水性液體中之溶液或懸浮液；可食用泡沫或泡沫狀物；或水包油液體乳液或油包水乳液。
舉例而言，對於以錠劑或膠囊形式經口投藥而言，活性藥物組分可與口服、無毒性醫藥學上可接受之惰性載劑(諸如乙醇、甘油、水及其類似物)組合。散劑藉由將化合物碾碎至適合之精細尺寸且與同樣經碾碎之醫藥載劑(諸如可食用碳水化合物，例如澱粉或甘露糖醇)混合來製備。亦可存在調味劑、防腐劑、分散劑及著色劑。
膠囊藉由製備如上文所述之散劑混合物且填充已形成之明膠殼來製備。在填充操作之前，可將諸如膠狀二氧化矽、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇之助流劑及潤滑劑添加至散劑混合物中。亦可添加諸如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉之崩解劑或增溶劑以改良攝取膠囊時該藥劑之可用性。
此外，需要或必需時，亦可將適合之黏合劑、潤滑劑、崩解劑及著色劑併入混合物中。適合之黏合劑包括澱粉、明膠、天然糖(諸如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然及合成膠(諸如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇及其類似物。此等劑型中所用之潤滑劑包括油酸鈉、氯化鈉及其類似物。崩解劑包括(但不限於)澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、三仙膠及其類似物。錠劑係例如藉由製備散劑混合物，造粒或成塊(slugging)，添加潤滑劑及崩解劑，及壓成錠劑調配。散劑混合物係藉由適當碾碎之化合物與如上文所述之稀釋劑或基質且視情況與黏合劑(諸如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠或聚乙烯咯啶酮)、溶解延遲劑(諸如石蠟)、再吸收加速劑(諸如四級鹽)及/或吸收劑(諸如膨潤土、高嶺土或磷酸二鈣)混合製備。散劑混合物可用黏合劑(諸如糖漿、澱粉糊、阿卡迪亞黏漿(acadia mucilage)、或纖維素或聚合物質之溶液)潤濕及迫使通過篩網造粒。作為造粒之替代法，可使散劑混合物通過壓錠機，結果不完全成形的坯塊碎裂成顆粒。可藉由添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油潤滑顆粒以防止黏附於形成錠劑之模具上。接著將經潤滑之混合物壓成錠劑。本發明之化合物亦可與自由流動之惰性載體組合及直接壓成錠劑，不經造粒或成塊步驟。可提供由密封蟲膠塗層、糖或聚合物質塗層及拋光蠟塗層組成之透明或不透明保護塗層。可將染料添加至此等塗層中以區分不同單位劑量。
口服液體，諸如溶液、糖漿及酏劑，可製備呈單位劑型以使一給予量含有預定量之化合物。糖漿可由化合物溶於適當調味之水溶液中製備，而酏劑係經由使用無毒媒劑製備。亦可添加增溶劑及乳化劑(諸如乙氧化異十八醇及聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐劑、調味添加劑(諸如薄荷油或天然甜味劑、或糖精或其他人造甜味劑)及其類似物。
適當時，可將用於經口投藥之劑量單位調配物裝入微囊中。亦可例如藉由以聚合物、蠟或其類似物塗佈或包埋微粒物質來製備調配物以延長或持續釋放。
式(I)化合物及其醫藥學上可接受之鹽亦可以脂質體傳遞系統(諸如單層小微脂粒、單層大微脂粒及多層微脂粒)形式投與。脂質體可由各種磷脂(諸如膽固醇、十八烷胺或磷脂醯膽鹼)形成。
式(I)化合物及其醫藥學上可接受之鹽亦可藉由使用單株抗體作為化合物分子所偶合之個別載體來傳遞。該等化合物亦可與作為可靶向藥物載體之可溶性聚合物偶合。該等聚合物可包括聚乙烯吡咯啶酮、哌喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯醯胺苯酚、聚羥乙基天冬醯胺苯酚或經軟脂醯基殘基取代之聚氧化乙烯聚離胺酸。此外，化合物可偶合於適用於達成藥物控制釋放之一類生物可降解聚合物，例如聚乳酸、聚ε己內酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫哌喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝膠之交聯或兩性嵌段共聚物。
適用於經皮投藥之醫藥調配物可以個別貼片形式提供，其意欲與接受者之表皮保持長時間緊密接觸。舉例而言，活性成分可藉由如Pharmaceutical Research ,3(6):318(1986)中大致所述之離子導入療法自貼片傳遞。
適用於表面投藥之醫藥調配物可調配成軟膏、乳膏、懸浮液、洗劑、散劑、溶液、糊劑、凝膠、噴霧、氣溶膠或油劑。
對於治療眼部或其他外部組織(例如嘴及皮膚)，調配物較佳以表面軟膏或乳膏形式施用。當調配成軟膏形式時，活性成分可與石蠟或水混溶性軟膏基質一起使用。或者，活性成分可與水包油乳膏基質或油包水基質一起調配成乳膏形式。
適用於表面投與眼部之醫藥調配物包括滴眼劑，其中活性成分溶解或懸浮於適合之載劑(尤其水性溶劑)中。
適用於表面投與嘴中之醫藥調配物包括口含錠、片劑及漱口劑。
適用於經直腸投藥之醫藥調配物可以栓劑或灌腸劑形式提供。
適用於經鼻投藥之醫藥調配物(其中載劑為固體)包括粒徑例如在20微米至500微米範圍內之流動散劑，其以用鼻吸之方式投與，亦即藉由自保持貼近鼻子之散劑容器經由鼻腔快速吸入來進行。適於以鼻用噴霧或滴鼻劑形式投藥之調配物(其中載劑為液體)包括含活性成分之水性或油溶液。
適用於藉由吸入投藥之醫藥調配物包括細粒粉劑或細霧，其可藉助於各種類型之定劑量加壓噴霧器、霧化器或吹入器產生。
適用於經陰道投藥之醫藥調配物可以子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧調配物形式提供。
適用於非經腸投藥之醫藥調配物包括水性及非水性無菌注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝液、抑菌劑及使調配物與所欲接受者之血液等張的溶質；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。調配物可提供於單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)中，且可儲存於冷凍乾燥(凍乾)條件下，其僅需要在臨用前添加無菌液體載劑(例如注射用水)。即用型注射溶液及懸浮液可由無菌散劑、顆粒及錠劑製備。
應瞭解考慮到所述調配物之類型，除上文所特定提及之成分外，調配物可包括此項技術中習知之其他試劑，例如適於經口投藥之彼等調配物可包括調味劑。
術語「患者」包括人類與其他哺乳動物。
術語「治療」係指：(i)防止可能易患疾病、病症及/或病狀但尚未診斷出患病之患者出現該疾病、病症或病狀；(ii)抑制疾病、病症或病狀，亦即遏止其發展；及(iii)緩解疾病、病症或病狀，亦即使疾病、病症及/或病狀消退。
本發明之化合物亦可與環孢素(cyclosporin)(例如環孢素A)一起投與。臨床試驗中已顯示環孢素A具有針對HCV之活性(Hepatology ,38:1282(2003)；Biochem. Biophys. Res. Commun. ,313:42(2004)；J. Gastroenterol. ,38:567(2003))。
下表1列舉可與本發明之化合物一起投與的化合物之一些說明性實例。本發明之化合物可與其他抗HCV活性化合物在組合療法中聯合或分開投與，或藉由將化合物組合成組合物來投與。
本發明之化合物亦可用作實驗室試劑。化合物可有助於提供用於設計病毒複製檢定、驗證動物檢定系統及結構生物學研究之研究工具以進一步增強對HCV疾病機制之認知。此外，本發明之化合物適用於例如藉由競爭性抑制來建立或確定其他抗病毒化合物之結合位點。
本發明之化合物亦可用於治療或預防物質之病毒污染且因此降低與該等物質接觸之實驗室或醫務人員或患者之病毒感染風險，該等物質例如血液、組織、手術器械及衣服、實驗室器械及衣服、及血液採集或輸血設備及物質。
本發明意欲涵蓋藉由合成方法或藉由代謝過程(包括人體或動物體內(活體內)發生之彼等過程或活體外發生之過程)製備之式(I)化合物。
本發明中所用之縮寫(尤其包括隨後說明性實例中之縮寫)為熟習此項技術者所熟知。一些所用之縮寫如下：Ph為苯基；DME為1,2-二甲氧基乙烷；TFA為三氟乙酸；DCM為二氯甲烷；HATU為六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基；DMF為N,N-二甲基甲醯胺；iPr2 EtN、DIEA或DIPEA為二異丙基乙胺；h、hr或hrs為小時；MeOD為CD3 OD；MeOH為甲醇；min或mins為分鐘；EtOH為乙醇；Et為乙基；DMSO為二甲亞碸；rt或RT或Rt為室溫或滯留時間(將視上下文而定)；EDCI為1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽；Boc、boc或BOC為第三丁氧羰基；EtOAc或EtOAc為乙酸乙酯；THF為四氫呋喃；TBDPS為第三丁基二甲基矽烷基；DMAP為4-二甲基胺基吡啶；TBAF為氟化四丁基銨；OAc為乙酸酯；AcOH為乙酸；SEMC1為2-(三甲基矽烷基)乙氧基甲基氯；d為天數；TEA或Et3 N為三乙胺；ACN或MeCN為乙腈；NCS為N-氯丁二醯亞胺；NBS為N-溴丁二醯亞胺；Et2 O為乙醚；DCE為1,2-二氯乙烷；d為天數；及DEA為二乙胺。
本發明現將結合不欲限制本發明範疇之某些實施例來描述。相反，本發明涵蓋可包括在申請專利範圍之範疇內的所有替代物、修改及相等物。因此，以下實例(包括特定實施例)將說明本發明之一種實踐，應瞭解該等實例係出於說明某些實施例之目的且為了提供咸信為最適用且最容易理解的對於其程序及概念態樣之描述而提出。起始物質可由商業來源獲得或藉由一般技術者已知之公認文獻方法來製備。
常見CAP之合成化合物分析條件在Shimadzu LC系統耦合Waters MICROMASSZQ MS系統上進行純度評估及低解析率質量分析。應注意滯留時間在各機器之間可能稍有變化。除非另外註明，否則其他LC條件適用於當前章節。
條件-MS-W1
管柱=XTERRA3.0×50 mm S7
起始%B=0
最終%B=100
梯度時間=2分鐘
停止時間=3分鐘
流速=5 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90% H2 O
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10% H2 O
條件-MS-W2
管柱=XTERRA3.0×50 mm S7
起始%B=0
最終%B=100
梯度時間=3分鐘
停止時間=4分鐘
流速=4 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90% H2 O
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10% H2 O
條件-MS-W5
管柱=XTERRA3.0×50 mm S7
起始%B=0
最終%B=30
梯度時間=2分鐘
停止時間=3分鐘
流速=5 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90% H2 O
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10% H2 O
條件-D1
管柱=XTERRAC18 3.0×50 mm S7
起始%B=0
最終%B=100
梯度時間=3分鐘
停止時間=4分鐘
流速=4 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90% H2 O
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10% H2 O
條件-D2
管柱=PHENOMENEXLuna 4.6×50 mm S10
起始%B=0
最終%B=100
梯度時間=3分鐘
停止時間=4分鐘
流速=4 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90% H2 O
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10% H2 O
條件-M3
管柱=XTERRAC18 3.0×50 mm S7
起始% B=0
最終% B=40
梯度時間=2分鐘
停止時間=3分鐘
流速=5 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90% H2 O
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10% H2 O
條件I
管柱=PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10
起始% B=0
最終% B=100
梯度時間=2分鐘
停止時間=3分鐘
流速=4 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90% H2 O
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10% H2 O
條件II
管柱=PHENOMENEXLuna 4.6×50 mm S10
起始%B=0
最終%B=100
梯度時間=2分鐘
停止時間=3分鐘
流速=5 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90% H2 O
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10% H2 O
條件III
管柱=XTERRAC18 3.0×50 mm S7
起始%B=0
最終%B=100
梯度時間=3分鐘
停止時間=4分鐘
流速=4 mL/min
波長=220 nm
溶劑A=含0.1% TFA之10%甲醇/90% H2 O
溶劑B=含0.1% TFA之90%甲醇/10% H2 O
將10% Pd/C(2.0g)之甲醇(10 mL)懸浮液添加至(R)-2-苯基甘胺酸(10 g，66.2 mmol)、甲醛(33 mL 37重量%水溶液)、1 N HCl(30 mL)及甲醇(30 mL)之混合物中，且曝露於H2 (60 psi)中3小時。經由矽藻土(CELITE)過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液。使所得粗物質自異丙醇中再結晶，得到呈白色針狀之Cap-1的鹽酸鹽(4.0 g)。旋光性：-117.1°[c=9.95 mg/mL於H2 O中；λ=589 nm]。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz):δ7.43-7.34(m,5H),4.14(s,1H),2.43(s,6H)；LC(條件I)：RT=0.25；LC/MS:[M+H]+ C10 H14 NO2 之分析計算值：180.10；實驗值：180.17；HRMS:[M+H]+ C10 H14 NO2 之分析計算值：180.1025；實驗值：180.1017。
經數分鐘將NaBH3 CN(6.22 g，94 mmol)逐份添加至經冷卻(冰/水)之(R)-2-苯基甘胺酸(6.02 g，39.8 mmol)與甲醇(100 mL)的混合物中，且攪拌5分鐘。經10分鐘逐滴添加乙醛(10 mL)且在相同冷卻溫度下持續攪拌45分鐘並在周圍溫度下持續攪拌約6.5小時。用冰水浴反冷卻反應混合物，用水(3 mL)處理，接著經約45分鐘用逐滴添加濃HCl來淬滅直至混合物之pH值為約1.5-2.0。移除冷卻浴且持續攪拌，同時添加濃HCl以維持混合物之pH值為約1.5-2.0。攪拌反應混合物隔夜，過濾以移除白色懸浮液，且在真空中濃縮濾液。使粗物質自乙醇中再結晶，得到兩批呈亮白色固體狀之Cap-2的鹽酸鹽(第1批：4.16 g；第2批：2.19 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz): 10.44(1.00,br s,1H),7.66(m,2H),7.51(m,3H),5.30(s,1H),3.15(br m,2H),2.98(br m,2H),1.20(app br s,6H)。第1批：[α]25 -102.21°(c=0.357,H2 O)；第2批：[α]25 -99.7°(c=0.357,H2 O)。LC(條件I)：RT=0.43分鐘；LC/MS: [M+H]+ C12 H18 NO2 之分析計算值：208.13；實驗值：208.26。
將乙醛(5.0 mL，89.1 mmol)及10% Pd/C(720 mg)之甲醇/H2 O(4 mL/1 mL)懸浮液依序添加至經冷卻(約15℃)之(R)-2-苯基甘胺酸(3.096 g，20.48 mmol)、1 N HCl(30 mL)及甲醇(40 mL)的混合物中。移除冷卻浴且在H2 氣球下攪拌反應混合物17小時。再添加乙醛(10 mL，178.2 mmol)且在H2 氛圍下持續攪拌24小時[應注意：在整個反應過程中按需要補充H2 供給]。經由矽藻土(CELITE)過濾反應混合物，且在真空中濃縮濾液。使所得粗物質自異丙醇中再結晶，得到呈亮白色固體狀之(R)-2-(乙基胺基)-2-苯基乙酸的鹽酸鹽(2.846 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz):δ14.15(br s,1H),9.55(br s,2H),7.55-7.48(m,5H),2.88(br m,1H),2.73(br m,1H),1.20(app t,J =7.2,3H)。
LC(條件I)：RT=0.39分鐘；>95%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C10 H14 NO2 之分析計算值：180.10；實驗值：180.18。將10% Pd/C(536 mg)之甲醇/H2 O(3 mL/1 mL)懸浮液添加至(R)-2-(乙基胺基)-2-苯基乙酸/HCl(1.492 g，6.918 mmol)、甲醛(20 mL 37重量%水溶液)、1 N HCl(20 mL)及甲醇(23 mL)之混合物中。在H2 氣球下攪拌反應混合物約72小時，其中按需要補充H2 供給。經由矽藻土(CELITE)過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液。使所得粗物質自異丙醇(50 mL)中再結晶，得到呈白色固體狀之Cap-3的鹽酸鹽(985 mg)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz): δ10.48(br s,1H),7.59-7.51(m,5H),5.26(s,1H),3.08(app br s,2H),2.65(br s,3H),1.24(br m,3H)。LC(條件I)：RT=0.39分鐘；>95%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C11 H16 NO2 之分析計算值：194.12；實驗值：194.18；HRMS:[M+H]+ C11 H16 NO2 之分析計算值：194.1180；實驗值：194.1181。
經6分鐘將ClCO2 Me(3.2 mL，41.4 mmol)逐滴添加至經冷卻(冰/水)之(R)-2-胺基-2-苯基乙酸第三丁酯/HCl(9.877 g，40.52 mmol)及二異丙基乙胺(14.2 mL，81.52 mmol)的THF(410 mL)半溶液中，且在類似溫度下攪拌5.5小時。在真空中移除揮發性組分，且使殘餘物分配於水(100 mL)與乙酸乙酯(200 mL)之間。用1 N HCl(25 mL)及飽和NaHCO3 溶液(30 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並在真空中濃縮。用己烷濕磨所得無色油狀物，過濾並用己烷(100 mL)洗滌，得到呈白色固體狀之(R)-2-(甲氧羰基胺基)-2-苯基乙酸第三丁酯(7.7 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz): 7.98(d,J =8.0,1H),7.37-7.29(m,5H),5.09(d,J =8,1H),3.56(s,3H),1.33(s,9H)。LC(條件I)：RT=1.53分鐘；約90%均質性指數；LC/MS:[M+Na]+ C14 H19 NNaO4 之分析計算值：288.12；實驗值：288.15。經7分鐘將TFA(16 mL)逐滴添加至經冷卻(冰/水)之以上產物的CH2 Cl2 (160 mL)溶液中，移除冷卻浴且攪拌反應混合物20小時。因為脫除保護基仍未完成，所以再添加TFA(1.0 mL)且再持續攪拌2小時。在真空中移除揮發性組分，且用乙醚(15 mL)及己烷(12 mL)處理所得油狀殘餘物，得到沈澱物。過濾該沈澱物且用乙醚/己烷(約1:3比率；30 mL)洗滌並在真空中乾燥，得到呈白色絨毛狀固體之Cap-4(5.57 g)。旋光性：-176.9°[c=3.7 mg/mL於H2 O中；λ=589 nm]。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz):δ12.84(br s,1H),7.96(d,J =8.3,1H),7.41-7.29(m,5H),5.14(d,J =8.3,1H),3.55(s,3H)。LC(條件I)：RT=1.01分鐘；>95%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C10 H12 NO4 之分析計算值：210.08；實驗值：210.17；HRMS:[M+H]+ C10 H12 NO4 之分析計算值：210.0766；實驗值：210.0756。
在100℃下將(R)-2-苯基甘胺酸(1.0 g，6.62 mmol)、1,4-二溴丁烷(1.57 g，7.27 mmol)及Na2 CO3 (2.10 g，19.8 mmol)於乙醇(40 mL)中之混合物加熱21小時。使反應混合物冷卻至周圍溫度並過濾，且在真空中濃縮濾液。將殘餘物溶解於乙醇中且用1 N HCl酸化至pH 3-4，並在真空中移除揮發性組分。藉由逆相HPLC(水/甲醇/TFA)純化所得粗物質，得到呈半黏性白色泡沫狀之Cap-5的三氟乙酸鹽(1.0 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,500 MHz)δ10.68(br s,1H),7.51(m,5H),5.23(s,1H),3.34(app br s,2H),3.05(app br s,2H),1.95(app br s,4H)；RT=0.30分鐘(條件I)；>98%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C12 H16 NO2 之分析計算值：206.12；實驗值：206.25。
藉由使用Cap-5之製備方法，由(R)-2-苯基甘胺酸及1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷合成Cap-6之三氟乙酸鹽。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,500 MHz)δ12.20(br s,1H),7.50(m,5H),4.92(s,1H),3.78(app br s,4H),3.08(app br s,2H),2.81(app br s,2H)；RT=0.32分鐘(條件I)；>98%；LC/MS: [M+H]+ C12 H16 NO3 之分析計算值：222.11；實驗值：222.20；HRMS: [M+H]+ C12 H16 NO3 之分析計算值：222.1130；實驗值：222.1121。
將對甲苯磺醯氯(8.65 g，45.4 mmol)之CH2 Cl2 (200 mL)溶液逐滴添加至經冷卻(-5℃)之(S)-2-羥基-2-苯基乙酸苯甲酯(10.0 g，41.3 mmol)、三乙胺(5.75 mL，41.3 mmol)及4-二甲基胺基吡啶(0.504 g，4.13 mmol)的CH2 Cl2 (200 mL)溶液中，同時維持溫度介於-5℃與0℃之間。在0℃下攪拌反應物9小時，接著儲存於冷凍器(-25℃)中歷時14小時。使其解凍至周圍溫度且用水(200 mL)、1 N HCl(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，乾燥(MgSO4 )，過濾並在真空中濃縮，得到呈黏性油狀之2-苯基-2-(甲苯磺醯氧基)乙酸苯甲酯，其在靜置後凝固(16.5 g)。不檢查產物之對掌完整性且該產物不經進一步純化即用於下一步驟中。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,500 MHz)δ7.78(d,J =8.6,2H),7.43-7.29(m,10H),7.20(m,2H),6.12(s,1H),5.16(d,J =12.5,1H),5.10(d,J =12.5,1H),2.39(s,3H)。RT=3.00(條件III)；>90%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C22 H20 NaO5 S之分析計算值：419.09；實驗值：419.04。
在65℃下將2-苯基-2-(甲苯磺醯氧基)乙酸苯甲酯(6.0 g，15.1 mmol)、1-甲基哌嗪(3.36 mL，30.3 mmol)及N,N-二異丙基乙胺(13.2 mL，75.8 mmol)之THF(75 mL)溶液加熱7小時。使反應物冷卻至周圍溫度且在真空中移除揮發性組分。使殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間，且用水及鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並在真空中濃縮。藉由急驟層析(矽膠，乙酸乙酯)純化所得粗物質，得到呈橙棕色黏性油狀之2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯(4.56 g)。對掌性HPLC分析(CHIRALCELOD-H)指示樣‧品為38.2至58.7比率之立體異構體混合物。如下實現立體異構體之分離：將產物溶解於120 mL乙醇/庚烷(1:1)中且注射(每次注射5 mL)至對掌性HPLC管柱(Chiracel OJ，5 cmID×50 cm L，20 μm)上，用85:15庚烷/乙醇以75 mL/min溶離，且在220 nm下監測。得到呈黏性油狀之立體異構體-1(1.474 g)及立體異構體-2(2.2149 g)。1 H NMR(CDCl3 ,δ=7.26,500 MHz)7.44-7.40(m,2H),7.33-7.24(m,6H),7.21-7.16(m,2H),5.13(d,J =12.5,1H),5.08(d,J =12.5,1H),4.02(s,1H),2.65-2.38(app br s,8H),2.25(s,3H)。RT=2.10(條件III)；>98%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C20 H25 N2 O2 之分析計算值：325.19；實驗值：325.20。
將2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯(1.0 g，3.1mmol)之任一立體異構體的甲醇(10 mL)溶液添加至10%Pd/C(120 mg)之甲醇(5.0 mL)懸浮液中。在密切監測下，使反應混合物曝露於氫氣球不超過50分鐘。完成反應後，立即經由矽藻土(CELITE)過濾催化劑且在真空中濃縮濾液，得到呈棕褐色泡沫狀之受苯基乙酸污染的Cap-7(867.6 mg；質量超過理論產量)。產物不經進一步純化即用於下一步驟中。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,500 MHz)δ7.44-7.37(m,2H),7.37-7.24(m,3H),3.92(s,1H),2.63-2.48(app. br s,2H),2.48-2.32(m,6H),2.19(s,3H)；RT=0.31(條件II)；>90%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C13 H19 N2 O2 之分析計算值：235.14；實驗值：235.15；HRMS:[M+H]+ C13 H19 N2 O2 之分析計算值：235.1447；實驗值：235.1440。
根據Cap-7之合成，藉由SN2 置換步驟使用適當胺(亦即Cap-8使用4-羥基哌啶且Cap-9使用(S)-3-氟吡咯啶)且如下所述修改分離各別立體異構中間物的條件來進行Cap-8及Cap-9之合成。
藉由使用以下條件來實現中間物2-(4-羥基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯之立體異構分離：將化合物(500 mg)溶解於乙醇/庚烷(5 mL/45 mL)中。將所得溶液注射(每次注射5 mL)至對掌性HPLC管柱(Chiracel OJ，2 cm ID×25 cm L，10 μm)上，用80:20庚烷/乙醇以10 mL/min溶離，在220 nm下監測，得到呈淡黃色黏性油狀之186.3 mg立體異構體-1及209.1 mg立體異構體-2。根據Cap-7之製備，使此等苯甲酯氫解，得到Cap-8：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,500 MHz)7.40(d,J =7,2H),7.28-7.20(m,3H),3.78(s 1H),3.46(m,1H),2.93(m,1H),2.62(m,1H),2.20(m,2H),1.70(m,2H),1.42(m,2H)。RT=0.28(條件II)；>98%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C13 H18 NO3 之分析計算值：236.13；實驗值：236.07；HRMS:[M+H]+ C13 H18 NO3 之計算值：236.1287；實驗值：236.1283。
藉由使用以下條件來實現中間物2-((S)-3-氟吡咯啶-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯之非對映異構分離：在對掌性HPLC管柱(Chiracel OJ-H，0.46 cm ID×25 cm L，5 μm)上，在10巴壓力、70 mL/min流速及35℃之溫度下用95%CO2 /5%甲醇(含0.1% TFA)溶離來分離酯(220 mg)。濃縮各別立體異構體之HPLC溶離物，將殘餘物溶解於CH2 Cl2 (20 mL)中且用水性介質(10 mL水+1 mL飽和NaHCO3 溶液)洗滌。乾燥(MgSO4 )有機相，過濾並在真空中濃縮，得到92.5 mg溶離份-1及59.6 mg溶離份-2。根據Cap-7之製備使此等苯甲酯氫解，製得Cap-9a及Cap-9b。Cap-9a(非對映異構體-1；樣品為在逆相HPLC上使用H2 O/甲醇/TFA溶劑純化後所得之三氟乙酸鹽)：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,400 MHz) 7.55-7.48(m,5H),5.38(雙多重峰,J =53.7,1H),5.09(br s,1H),3.84-2.82(br m,4H),2.31-2.09(m,2H)。RT=0.42(條件I)；>95%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C12 H15 FNO2 之分析計算值：224.11；實驗值：224.14；Cap-9b(非對映異構體-2)：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,400 MHz) 7.43-7.21(m,5H),5.19(d of m,J =55.9,1H),3.97(s,1H),2.95-2.43(m,4H),2.19-1.78(m,2H)。RT=0.44(條件I)；LC/MS:[M+H]]+ C12 H15 FNO2 之分析計算值：224.11；實驗值：224.14。
向D-脯胺酸(2.0 g，17 mmol)及甲醛(2.0 mL 37重量%水溶液)之甲醇(15 mL)溶液中添加10% Pd/C(500 mg)之甲醇(5 mL)懸浮液。在氫氣球下攪拌混合物23小時。經由矽藻土(CELITE)過濾反應混合物且在真空中濃縮，得到呈灰白色固體狀之Cap-10(2.15 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,500 MHz) 3.42(m,1H),3.37(dd,J =9.4,6.1,1H),2.85-2.78(m,1H),2.66(s,3H),2.21-2.13(m,1H),1.93-1.84(m,2H),1.75-1.66(m,1H)。RT=0.28(條件II)；>98%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C6 H12 NO2 之分析計算值：130.09；實驗值：129.96。
在氫氣球下將(2S,4R)-4-氟吡咯啶-2-甲酸(0.50 g，3.8 mmol)、甲醛(0.5 mL 37重量%水溶液)、12 N HCl(0.25 mL)及10% Pd/C(50 mg)於甲醇(20 mL)中之混合物攪拌19小時。經由矽藻土(CELITE)過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液。使殘餘物自異丙醇中再結晶，得到呈白色固體狀之Cap-11的鹽酸鹽(337.7 mg)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,500 MHz) 5.39(d m,J =53.7,1H),4.30(m,1H),3.90(ddd,J =31.5,13.5,4.5,1H),3.33(dd,J =25.6,13.4,1H),2.85(s,3H),2.60-2.51(m,1H),2.39-2.26(m,1H)。RT=0.28(條件II)；>98%均質性指數；LC/MS: [M+H]+ C6 H11 FNO2 之分析計算值：148.08；實驗值：148.06。
將L-丙胺酸(2.0 g，22.5 mmol)溶解於10%碳酸鈉水溶液(50 mL)中，且向其中添加氯甲酸甲酯(4.0 mL)之THF(50 mL)溶液。在周圍條件下攪拌反應混合物4.5小時且在真空中濃縮。將所得白色固體溶解於水中且用1 N HCl酸化至pH~2-3。用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取所得溶液，乾燥(Na2 SO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮，得到無色油狀物(2.58 g)。藉由逆相HPLC(H2 O/甲醇/TFA)純化500 mg此物質，得到150 mg呈無色油狀之Cap-12。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,500 MHz) 7.44(d,J =7.3,0.8 H),7.10(br s,0.2H),3.97(m,1H),3.53(s,3H),1.25(d,J =7.3,3H)。
在氫氣氛圍(50 psi)下將L-丙胺酸(2.5 g，28 mmol)、甲醛(8.4 g，37重量%)、1 N HCl(30 mL)及10% Pd/C(500 mg)於甲醇(30 mL)中之混合物攪拌5小時。經由矽藻土(CELITE)過濾反應混合物且在真空中濃縮濾液，得到呈油狀之Cap-13的鹽酸鹽，其在真空下靜置後凝固(4.4 g；質量超過理論產量)。產物不經進一步純化即使用。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5,500 MHz)δ12.1(br s,1H),4.06(q,J =7.4,1H),2.76(s,6H),1.46(d,J =7.3,3H)。
步驟1：在0℃下在甲醇中攪拌(R)-(-)-D-苯基甘胺酸第三丁酯(3.00 g，12.3 mmol)、NaBH3 CN(0.773 g，12.3 mmol)、KOH(0.690 g，12.3 mmol)及乙酸(0.352 mL，6.15mmol)之混合物。經5分鐘向此混合物中逐滴添加戊二醛(2.23 mL，12.3 mmol)。攪拌反應混合物，同時使其升溫至周圍溫度且在相同溫度下持續攪拌16小時。隨後移除溶劑且用10% NaOH水溶液及乙酸乙酯分配殘餘物。分離有機相，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮至乾，得到透明油狀物。藉由逆相製備型HPLC(Primesphere C-18，30×100 mm；CH3 CN-H2 O-0.1% TFA)純化此物質，產生呈透明油狀之中間物酯(2.70 g，56%)。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δ7.53-7.44(m,3H),7.40-7,37(m,2H),3.87(d,J =10.9 Hz,1H),3.59(d,J =10.9 Hz,1H),2.99(t,J =11.2 Hz,1H),2.59(t,J =11.4 Hz,1H),2.07-2.02(m,2H),1.82(d,J =1.82 Hz,3H),1.40(s,9H)。LC/MS: C17 H25 NO2 之分析計算值：275；實驗值：276(M+H)+ 。
步驟2：向經攪拌之中間物酯(1.12 g，2.88 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中添加TFA(3 mL)。在周圍溫度下攪拌反應混合物4小時，接著將其濃縮至乾，產生淡黃色油狀物。使用逆相製備型HPLC(Primesphere C-18，30×100 mm；CH3 CN-H2 O-0.1% TFA)純化該油狀物。合併適當溶離份並在真空中濃縮至乾。接著將殘餘物溶解於最少量甲醇中且施加於MCX LP萃取濾筒(2×6 g)上。用甲醇(40 mL)沖洗該等濾筒，接著使用2 M氨之甲醇溶液(50 mL)溶離所需化合物。合併含有產物之溶離份並濃縮，將殘餘物溶解於水中。凍乾此溶液，得到呈淡黃色固體狀之標題化合物(0.492 g，78%)。1 H NMR(DMSO-d6 )δ7.50(s,5H),5.13(s,1H),3.09(br s,2H),2.92-2.89(m,2H),1.74(m,4H),1.48(br s,2H)。LC/MS: C13 H17 NO2 之分析計算值：219；實驗值：220(M+H)+ 。
步驟1：2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯：向α-溴苯基乙酸(10.75 g，0.050 mol)、(S)-(-)-1-苯基乙醇(7.94 g，0.065 mol)及DMAP(0.61 g，5.0 mmol)於無水二氯甲烷(100 mL)中之混合物中一次性添加固體EDCI(12.46 g，0.065 mol)。在室溫下在Ar下攪拌所得溶液18小時，接著用乙酸乙酯稀釋，洗滌(H2 O×2、鹽水)，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並濃縮，產生淺黃色油狀物。對此油狀物進行急驟層析(SiO2 /己烷-乙酸乙酯，4:1)，得到呈白色固體狀之標題化合物(11.64 g，73%)。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δ7.53-7.17(m,10H),5.95(q,J =6.6 Hz,0.5H),5.94(q,J =6.6 Hz,0.5H),5.41(s,0.5H),5.39(s,0.5H),1.58(d,J =6.6 Hz,1.5H),1.51(d,J =6.6 Hz,1.5H)。
步驟2：(R)-2-(4-羥基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯：向2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(0.464 g，1.45 mmol)之THF(8 mL)溶液中添加三乙胺(0.61 mL，4.35 mmol)，隨後添加碘化四丁基銨(0.215 g，0.58 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5分鐘，接著添加4-甲基-4-羥基哌啶(0.251 g，2.18 mmol)之THF(2 mL)溶液。在室溫下攪拌混合物1小時，接著在55-60℃(油浴溫度)下加熱4小時。接著用乙酸乙酯(30 mL)稀釋經冷卻之反應混合物，洗滌(H2 O×2、鹽水)，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。藉由矽膠層析(0-60%乙酸乙酯-己烷)純化殘餘物，首先得到呈白色固體狀之標題化合物的(S,R)-異構體(0.306 g，60%)，接著得到亦呈白色固體狀之相應(S,S)-異構體(0.120 g，23%)。(S,R)-異構體：1 H NMR(CD3 OD)δ7.51-7.45(m,2H),7.41-7.25(m,8H),5.85(q,J =6.6 Hz,1H),4.05(s,1H),2.56-2.45(m,2H),2.41-2.29(m,2H),1.71-1.49(m,4H),1.38(d,J=6.6 Hz,3H),1.18(s,3H)。LCMS: C22 H27 NO3 之分析計算值：353；實驗值：354(M+H)+ 。(S,S)-異構體：1 H NMR(CD3 OD)δ7.41-7.30(m,5H),7.20-7.14(m,3H),7.06-7.00(m,2H),5.85(q,J =6.6 Hz,1H),4.06(s,1H),2.70-2.60(m,1H),2.51(dt,J =6.6,3.3 Hz,1H),2.44-2.31(m,2H),1.75-1.65(m,1H),1.65-1.54(m,3H),1.50(d,J=6.8 Hz,3H),1.20(s,3H)。LCMS: C22 H27 NO3 之分析計算值：353：實驗值：354(M+H)+ 。
步驟3：(R)-2-(4-羥基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸：向(R)-2-(4-羥基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(0.185 g，0.52 mmol)之二氯甲烷(3 mL)溶液中添加三氟乙酸(1 mL)且在室溫下攪拌混合物2小時。隨後在真空中移除揮發性物質且藉由逆相製備型HPLC(Primesphere C-18，20×100 mm；CH3 CN-H2 O-0.1% TFA)純化殘餘物，產生呈淡藍色固體狀之標題化合物(呈三氟乙酸鹽形式)(0.128 g，98%)。LCMS: C14 H19 NO3 之分析計算值：249；實驗值：250(M+H)+ 。
步驟1：2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙酯：在室溫下將2-氟苯基乙酸(5.45 g，35.4 mmol)、(S)-1-苯基乙醇(5.62 g，46.0 mmol)、EDCI(8.82 g，46.0 mmol)及DMAP(0.561 g，4.60 mmol)於CH2 Cl2 (100 mL)中之混合物攪拌12小時。接著濃縮溶劑且用H2 O-乙酸乙酯分配殘餘物。分離各相且用乙酸乙酯(2次)反萃取水層。洗滌(H2 O、鹽水)合併之有機相，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮。藉由矽膠層析(BIOTAGE/0-20%乙酸乙酯-己烷)純化殘餘物，得到呈無色油狀之標題化合物(8.38 g，92%)。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.32-7.23(m,7H),7.10-7.04(m,2),5.85(q,J =6.5 Hz,1H),3.71(s,2H),1.48(d,J =6.5 Hz,3H)。
步驟2：(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯：在0℃下向2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙酯(5.00 g，19.4 mmol)之THF(1200 mL)溶液中添加DBU(6.19 g，40.7 mmol)且使溶液升溫至室溫同時攪拌30分鐘。接著使溶液冷卻至-78℃，添加CBr4 (13.5 g，40.7 mmol)之THF(100 mL)溶液，使混合物升溫至-10℃且在此溫度下攪拌2小時。用飽和NH4 Cl水溶液淬滅反應混合物且分離各層。用乙酸乙酯(2次)反萃取水層且洗滌(H2 O、鹽水)合併之有機相，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮。向殘餘物中添加哌啶(5.73 mL，58.1 mmol)且在室溫下攪拌溶液24小時。接著在真空中濃縮揮發性物質且藉由矽膠層析(BIOTAGE/0-30%乙醚-己烷)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之非對映異構體之純混合物(2:1比率，根據1 H NMR)(2.07 g，31%)，以及未反應之起始物質(2.53 g，51%)。對非對映異構混合物進行進一步層析(BIOTAGE/0-10%乙醚-甲苯)，得到呈無色油狀之標題化合物(0.737 g，11%)。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.52(ddd,J =9.4,7.6,1.8 Hz,1H),7.33-7.40(m,1),7.23-7.23(m,4H),7.02-7.23(m,4H),5.86(q,J =6.6 Hz,1H),4.45(s,1H),2.39-2.45(m,4H),1.52-1.58(m,4H),1.40-1.42(m,1H),1.38(d,J =6.6 Hz,3H)。LCMS: C21 H24 FNO2 之分析計算值：341；實驗值：342(M+H)+ 。
步驟3：(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸：在室溫及大氣壓(H2 氣球)下使(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯(0.737 g，2.16 mmol)與20% Pd(OH)2 /C(0.070 g)於乙醇(30 mL)中之混合物氫化2小時。接著用Ar淨化溶液，經由矽藻土(CELITE)過濾，且在真空中濃縮。此步驟得到呈無色固體狀之標題化合物(0.503 g，98%)。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.65(ddd,J =9.1,7.6,1.5 Hz,1H),7.47-7.53(m,1H),7.21-7.30(m,2H),3.07-3.13(m,4H),1.84(br s,4H),1.62(br s,2H)。LCMS: C13 H16 FNO2 之分析計算值：237；實驗值：238(M+H)+ 。
步驟1：(R)-2-(4-羥基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯：向2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(1.50 g，4.70 mmol)之THF(25 mL)溶液中添加三乙胺(1.31 mL，9.42 mmol)，隨後添加碘化四丁基銨(0.347 g，0.94 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物5分鐘，接著添加4-苯基-4-羥基哌啶(1.00 g，5.64 mmol)之THF(5 mL)溶液。攪拌混合物16小時，接著用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，洗滌(H2 O×2、鹽水)，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。在矽膠管柱上純化(0-60%乙酸乙酯-己烷)殘餘物，得到非對映異構體之約2:1混合物，如藉由1 H NMR判斷。使用超臨界流體層析法(CHIRALCELOJ-H，30×250 mm；20%乙醇，在CO2 中，在35℃下)進行此等異構體之分離，首先產生呈黃色油狀之標題化合物之(R)-異構體(0.534 g，27%)，接著為亦呈黃色油狀之相應(S)-異構體(0.271 g，14%)。(S,R)-異構體：1 H NMR(400 MHz，CD3 OD)δ7.55-7.47(m,4H),7.44-7.25(m,10H),7.25-7.17(m,1H),5.88(q,J =6.6 Hz,1H),4.12(s,1H),2.82-2.72(m,1H),2.64(dt,J =11.1,2.5 Hz,1H),2.58-2.52(m,1H),2.40(dt,J =11.1,2.5 Hz,1H),2.20(dt,J =12.1,4.6 Hz,1H),2.10(dt,J =12.1,4.6 Hz,1H),1.72-1.57(m,2H),1.53(d,J =6.5 Hz,3H)。LCMS: C27 H29 NO3 之分析計算值：415；實驗值：416(M+H)+ ；(S,S)-異構體：H1 NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.55-7.48(m,2H),7.45-7.39(m,2H),7.38-7.30(m,5H),7.25-7.13(m,4H),7.08-7.00(m,2H),5.88(q,J =6.6 Hz,1H),4.12(s,1H),2.95-2.85(m,1H),2.68(dt,J =11.1,2.5 Hz,1H),2.57-2.52(m,1H),2.42(dt,J =11.1,2.5 Hz,1H),2.25(dt,J =12.1,4.6 Hz,1H),2.12(dt,J =12.1,4.6 Hz,1H),1.73(dd,J =13.6,3.0 Hz,1H),1.64(dd,J =13.6,3.0 Hz,1H),1.40(d,J =6.6 Hz,3H)。LCMS: C27 H29 NO3 之分析計算值：415；實驗值：416(M+H)+ 。
以類似方式製備以下各酯：
用於測定滯留時間之對掌性SFC條件：
條件I
管柱：CHIRALPAKAD-H管柱，4.62×50 mm，5 μm
溶劑：含0.1% DEA之90% CO2 -10%甲醇
溫度：35℃
壓力：150巴
流速：2.0 mL/min
在220 nm下UV監測
注射：1.0 mg/3 mL甲醇
條件II
管柱：CHIRALCELOD-H管柱，4.62×50 mm，5 μm
溶劑：含0.1% DEA之90% CO2 -10%甲醇
溫度：35℃
壓力：150巴
流速：2.0 mL/min
在220 nm下UV監測
注射：1.0 mg/mL甲醇
Cap-17步驟2：(R)-2-(4-羥基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸：向(R)-2-(4-羥基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(0.350 g，0.84 mmol)之二氯甲烷(5 mL)溶液中添加三氟乙酸(1 mL)且在室溫下攪拌混合物2小時。隨後在真空中移除揮發性物質且藉由逆相製備型HPLC(Primesphere C-18，20×100 mm；CH3 CN-H2 O-0.1% TFA)純化殘餘物，產生呈白色固體狀之標題化合物(呈三氟乙酸鹽形式)(0.230 g，88%)。LCMS: C19 H21 NO3 之分析計算值：311.15；實驗值：312(M+H)+ 。以類似方式製備光學純形式之以下羧酸：
用於測定滯留時間之LCMS條件：
條件I
管柱：PHENOMENEXLuna 4.6×50 mm　S10
起始% B=0
最終% B=100
梯度時間=4分鐘
流速=4 mL/min
波長=220
溶劑A=10%甲醇-90% H2 O-0.1% TFA
溶劑B=90%甲醇-10% H2 O-0.1% TFA
條件II
管柱：Waters-Sunfire 4.6×50 mm　S5
起始% B=0
最終% B=100
梯度時間=2分鐘
流速=4 mL/min
波長=220
溶劑A=10%甲醇-90% H2 O-0.1% TFA
溶劑B=90%甲醇-10% H2 O-0.1% TFA
條件III
管柱：PHENOMENEX10 μ 3.0×50 mm
起始% B=0
最終% B=100
梯度時間=2分鐘
流速=4 mL/min
波長=220
溶劑A=10%甲醇-90% H2 O-0.1% TFA
溶劑B=90%甲醇-10% H2 O-0.1% TFA
步驟1：(R,S)-2-(4-吡啶基)-2-溴乙酸乙酯：在0℃下在氬氣下向4-吡啶基乙酸乙酯(1.00 g，6.05 mmol)之無水THF(150 mL)溶液中添加DBU(0.99 mL，6.66 mmol)。經30分鐘使反應混合物升溫至室溫，接著冷卻至-78℃。向此混合物中添加CBr4 (2.21 g，6.66 mmol)且在-78℃下持續攪拌2小時。接著用飽和NH4 Cl水溶液淬滅反應混合物且分離各相。洗滌(鹽水)有機相，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮。立即藉由急驟層析(SiO2 /己烷-乙酸乙酯，1:1)純化所得黃色油狀物，得到呈略微不穩定的黃色油狀之標題化合物(1.40 g，95%)。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δ8.62(dd,J =4.6,1.8 Hz,2H),7.45(dd,J =4.6,1.8 Hz,2H),5.24(s,1H),4.21-4.29(m,2H),1.28(t,J =7.1 Hz,3H)。LCMS: C9 H10 BrNO2 之分析計算值：242,244；實驗值：243,245(M+H)+ 。
步驟2：(R,S)-2-(4-吡啶基)-2-(N,N-二甲基胺基)乙酸乙酯：在室溫下向2-(4-吡啶基)-2-溴乙酸乙酯(1.40 g，8.48 mmol)之DMF(10 mL)溶液中添加二甲胺(2 M THF溶液，8.5 mL，17.0 mmol)。反應完成(如藉由薄層層析判斷)後，在真空中移除揮發性物質且藉由急驟層析(BIOTAGE，40+M SiO2 管柱；50%-100%乙酸乙酯-己烷)純化殘餘物，得到呈淡黃色油狀之標題化合物(0.539 g，31%)。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δ8.58(d,J =6.0 Hz,2H),7.36(d,J =6.0 Hz,2H),4.17(m,2H),3.92(s,1H),2.27(s,6H),1.22(t,J =7.0 Hz)。LCMS: C11 H16 N2 O2 之分析計算值：208；實驗值：209(M+H)+ 。
步驟3：(R,S)-2-(4-吡啶基)-2-(N,N-二甲基胺基)乙酸：在室溫下向(R,S)-2-(4-吡啶基)-2-(N,N-二甲基胺基)乙酸乙酯(0.200 g，0.960 mmol)於THF-甲醇-H2 O(1:1:1，6 mL)混合物中之溶液中添加粉末狀LiOH(0.120 g，4.99 mmol)。攪拌溶液3小時，接著使用1 N HCl酸化至pH 6。用乙酸乙酯洗滌水相，接著凍乾，產生呈黃色固體狀之標題化合物的二鹽酸鹽(含有LiCl)。產物按原樣用於後續步驟中。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δ8.49(d,J =5.7 Hz,2H),7.34(d,J =5.7 Hz,2H),3.56(s,1H),2.21(s,6H)。以類似方式使用上述方法製備以下實例：
步驟1：(R,S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N,N-二甲基胺基)-乙酸乙酯：用Ar氣泡流使N,N-二甲基胺基乙酸乙酯(0.462 g，3.54 mmol)、K3 PO4 (1.90 g，8.95 mmol)、Pd(t-Bu3 P)2 (0.090 g，0.176 mmol)及甲苯(10 mL)之混合物脫氣15分鐘。接著在100℃下加熱反應混合物12小時，隨後使其冷卻至室溫且傾倒於H2 O中。用乙酸乙酯(2次)萃取混合物且洗滌(H2 O、鹽水)合併之有機相，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮。首先藉由逆相製備型HPLC(Primesphere C-18，30×100 mm；CH3 CN-H2 O-5 mM NH4 OAc)，接著藉由急驟層析(SiO2 /己烷-乙酸乙酯，1:1)純化殘餘物，得到呈橙色油狀之標題化合物(0.128 g，17%)。1 H NMR(400 MHz，CDCl3 )δ8.90(d,J =2.0 Hz,1H),8.32(d,J =2.0 Hz,1H),8.03-8.01(m,2H),7.77(ddd,J =8.3,6.8,1.5 Hz,1H),7.62(ddd,J =8.3,6.8,1.5 Hz,1H),4.35(s,1H),4.13(m,2H),2.22(s,6H),1.15(t,J =7.0 Hz,3H)。LCMS: C15 H18 N2 O2 之分析計算值：258；實驗值：259(M+H)+ 。
步驟2：(R,S)2-(喹啉-3-基)-2-(N,N-二甲基胺基)乙酸：在100℃下加熱(R,S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N,N-二甲基胺基)乙酸乙酯(0.122 g，0.472 mmol)與6 M HCl(3 mL)之混合物12小時。在真空中移除溶劑，得到呈淡黃色泡沫狀之標題化合物的二鹽酸鹽(0.169 g，>100%)。未純化之物質不經進一步純化即用於後續步驟中。LCMS: C13 H14 N2 O2 之分析計算值：230；實驗值：231(M+H)+ 。
步驟1：(R)-2-(二甲基胺基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯及(S)-2-(二甲基胺基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯：向(RS)-2-(二甲基胺基)-2-(2-氟苯基)乙酸(2.60 g，13.19 mmol)、DMAP(0.209 g，1.71 mmol)及(S)-1-苯基乙醇(2.09 g，17.15 mmol)於CH2 Cl2 (40 mL)中之混合物中添加EDCI(3.29 g，17.15 mmol)且使混合物在室溫下攪拌12小時。接著在真空中移除溶劑且用乙酸乙酯-H2 O分配殘餘物。分離各層，用乙酸乙酯(2次)反萃取水層且洗滌(H2 O、鹽水)合併之有機相，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮。藉由矽膠層析(BIOTAGE/0-50%乙醚-己烷)純化殘餘物。接著藉由逆相製備型HPLC(Primesphere C-18，30×100 mm；CH3 CN-H2 O-0.1% TFA)分離所得純非對映異構混合物，首先產生(R)-2-(二甲基胺基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯乙酯(0.501 g，13%)，接著產生(S)-2-(二甲基胺基)-2-(2-氟苯基)-乙酸(S)-1-苯乙酯(0.727 g，18%)，兩者皆呈其三氟乙酸鹽形式。(S，R)-異構體：1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.65-7.70(m,1H),7.55-7.60(ddd,J =9.4,8.1,1.5 Hz,1H),7.36-7.41(m,2H),7.28-7.34(m,5H),6.04(q,J =6.5 Hz,1H),5.60(s,1H),2.84(s,6H),1.43(d,J =6.5 Hz,3H)。LCMS: C18 H20 FNO2 之分析計算值：301；實驗值：302(M+H)+ ；(S,S)-異構體：1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.58-7.63(m,1H),7.18-7.31(m,6H),7.00(dd,J =8.5,1.5 Hz,2H),6.02(q,J =6.5 Hz,1H),5.60(s,1H),2.88(s,6H),1.54(d,J =6.5 Hz,3H)。LCMS: C18 H20 FNO2 之分析計算值：301；實驗值：302(M+H)+ 。
步驟2：(R)-2-(二甲基胺基)-2-(2-氟苯基)乙酸：在室溫及大氣壓(H2 氣球)下使(R)-2-(二甲基胺基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯三氟乙酸鹽(1.25 g，3.01 mmol)與20% Pd(OH)2 /C(0.125 g)於乙醇(30 mL)中之混合物氫化4小時。接著用Ar淨化溶液，經由矽藻土(CELITE)過濾，且在真空中濃縮。此步驟產生呈無色固體狀之標題化合物(0.503 g，98%)。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.53-7.63(m,2H),7.33-7.38(m,2H),5.36(s,1H),2.86(s,6H)。LCMS: C10 H12 FNO2 之分析計算值：197；實驗值：198(M+H)+ 。
S-異構體可以類似方式由(S)-2-(二甲基胺基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯三氟乙酸鹽獲得。
在室溫及大氣壓(H2 氣球)下使(R)-(2-氯苯基)甘胺酸(0.300 g，1.62 mmol)、甲醛(35%水溶液，0.80 mL，3.23 mmol)及20% Pd(OH)2 /C(0.050 g)之混合物氫化4小時。接著用Ar淨化溶液，經由矽藻土(CELITE)過濾，且在真空中濃縮。藉由逆相製備型HPLC(Primesphere C-18，30×100 mm；CH3 CN-H2 O-0.1% TFA)純化殘餘物，產生呈無色油狀之標題化合物(R)-2-(二甲基胺基)-2-(2-氯苯基)乙酸的三氟乙酸鹽(0.290 g，55%)。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.59-7.65(m,2H),7.45-7.53(m,2H),5.40(s,1H),2.87(s,6H)。LCMS: C10 H12 ClNO2 之分析計算值：213；實驗值：214(M+H)+ 。
向冰冷的(R)-(2-氯苯基)甘胺酸(1.00 g，5.38 mmol)及NaOH(0.862 g，21.6 mmol)之H2 O(5.5 mL)溶液中逐滴添加氯甲酸甲酯(1.00 mL，13.5 mmol)。在0℃下使混合物攪拌1小時，接著藉由添加濃HCl(2.5 mL)酸化。用乙酸乙酯(2次)萃取混合物且洗滌(H2 O、鹽水)合併之有機相，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮，產生呈黃橙色泡沫狀之標題化合物(R)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(2-氯苯基)乙酸(1.31 g，96%)。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.39-7.43(m,2H),7.29-7.31(m,2H),5.69(s,1H),3.65(s,3H)。LCMS: C10 H10 ClNO4 之分析計算值：243；實驗值：244(M+H)+ 。
向2-(2-(氯甲基)苯基)乙酸(2.00 g，10.8 mmol)之THF(20 mL)懸浮液中添加嗎啉(1.89 g，21.7 mmol)且在室溫下攪拌溶液3小時。接著用乙酸乙酯稀釋反應混合物且用H2 O(2次)萃取。凍乾水相且藉由矽膠層析(BIOTAGE/0-10%甲醇-CH2 Cl2 )純化殘餘物，產生呈無色固體狀之標題化合物2-(2-((N-嗎啉基)甲基)苯基)乙酸(2.22 g，87%)。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.37-7.44(m,3H),7.29-7.33(m,1H),4.24(s,2H),3.83(br s,4H),3.68(s,2H),3.14(br s,4H)。LCMS: C13 H17 NO3 之分析計算值：235；實驗值：236(M+H)+ 。使用對於Cap-41所述之方法，類似地製備以下實例：
將HMDS(1.85 mL，8.77 mmol)添加至(R)-2-胺基-2-苯基乙酸對甲苯磺酸鹽(2.83 g，8.77 mmol)之CH2 Cl2 (10 mL)懸浮液中且在室溫下攪拌混合物30分鐘。整份添加異氰酸甲酯(0.5 g，8.77 mmol)，持續攪拌30分鐘。藉由添加H2 O(5 mL)淬滅反應物且過濾所得沈澱物，用H2 O及正己烷洗滌，並在真空下乾燥。回收呈白色固體狀之(R)-2-(3-甲基脲基)-2-苯基乙酸(1.5 g；82%)且其不經進一步純化即使用。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 2.54(d,J =4.88 Hz,3H)5.17(d,J =7.93 Hz,1H)5.95(q,J =4.48 Hz,1H)6.66(d,J =7.93 Hz,1H)7.26-7.38(m,5H)12.67(s,1H)。LCMS: C10 H12 N2 O3 之分析計算值：208.08，實驗值：209.121(M+H)+ ；HPLC PHENOMENEXC-18 3.0×46 mm，經2分鐘0至100% B，1分鐘保持時間，A=90%水、10%甲醇、0.1% TFA，B=10%水、90%甲醇、0.1% TFA，RT=1.38分鐘，90%均質性指數。
根據對於Cap-45a所述之方法製備所需產物。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 0.96(t,J =7.17 Hz,3H) 2.94-3.05(m,2H) 5.17(d,J =7.93 Hz,1H) 6.05(t,J =5.19 Hz,1H) 6.60(d,J =7.63 Hz,1H) 7.26-7.38(m,5H) 12.68(s,1H)。LCMS: C11 H14 N2 O3 之分析計算值：222.10，實驗值：223.15(M+H)+ 。HPLC XTERRAC-18 3.0×506 mm，經2分鐘0至100% B，1分鐘保持時間，A=90%水、10%甲醇、0.2% H3 PO4 ，B=10%水、90%甲醇、0.2% H3 PO4 ，RT=0.87分鐘，90%均質性指數。
步驟1：(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸第三丁酯：經10分鐘向經攪拌之(R)-2-胺基-2-苯基乙酸第三丁酯(1.0 g，4.10 mmol)及亨氏鹼(Hunig's base)(1.79 mL，10.25 mmol)於DMF(40 mL)中的溶液中逐滴添加二甲基胺基甲醯氯(0.38 mL，4.18 mmol)。在室溫下攪拌3小時後，在減壓下濃縮反應物且將所得殘餘物溶解於乙酸乙酯中。用H2 O、1 N HCl水溶液及鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾且於減壓下濃縮。獲得呈白色固體狀之(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸第三丁酯(0.86 g；75%)且不經進一步純化即使用。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.33(s,9H) 2.82(s,6H) 5.17(d,J =7.63 Hz,1H) 6.55(d,J =7.32 Hz,1H) 7.24-7.41(m,5H)。LCMS: C15 H22 N2 O3 之分析計算值：278.16，實驗值：279.23(M+H)+ ；HPLC PHENOMENEXLUNA C-18 4.6×50 mm，經4分鐘0至100% B，1分鐘保持時間，A=90%水、10%甲醇、0.1% TFA，B=10%水、90%甲醇、0.1% TFA，RT=2.26分鐘，97%均質性指數。
步驟2：(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸：向經攪拌之(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸第三丁酯(0.86 g，3.10 mmol)的CH2 Cl2 (250 mL)溶液中逐滴添加TFA(15 mL)且在室溫下攪拌所得溶液3小時。接著用EtOAC：己烷混合物(5:20)使所需化合物自溶液中沈澱出，濾出並在減壓下乾燥。分離出呈白色固體狀之(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸(0.59 g，86%)且不經進一步純化即使用。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 2.82(s,6H) 5.22(d,J =7.32 Hz,1H) 6.58(d,J =7.32 Hz,1H) 7.28(t,J =7.17 Hz,1H) 7.33(t,J =7.32 Hz,2H) 7.38-7.43(m,2H) 12.65(s,1H)。LCMS: C11 H14 N2 O3 之分析計算值：222.24；實驗值：223.21(M+H)+ 。HPLC XTERRAC-18 3.0×50 mm，經2分鐘0至100% B，1分鐘保持時間，A=90%水、10%甲醇、0.2% H3 PO4 ，B=10%水、90%甲醇、0.2% H3 PO4 ，RT=0.75分鐘，93%均質性指數。
步驟1：(R)-2-(3-環戊基脲基)-2-苯基乙酸第三丁酯：經10分鐘向經攪拌之(R)-2-胺基-2-苯基乙酸鹽酸鹽(1.0 g，4.10 mmol)及亨氏鹼(1.0 mL，6.15 mmol)於DMF(15 mL)中的溶液中逐滴添加異氰酸環戊酯(0.46 mL，4.10 mmol)。在室溫下攪拌3小時後，在減壓下濃縮反應物且將所得殘餘物溶解於乙酸乙酯中。用H2 O及鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並在減壓下濃縮。獲得呈不透明油狀之(R)-2-(3-環戊基脲基)-2-苯基乙酸第三丁酯(1.32 g；100%)且不經進一步純化即使用。1 H NMR(500 MHz,CD3 Cl-D)δppm 1.50-1.57(m,2H) 1.58-1.66(m,2H) 1.87-1.97(m,2H) 3.89-3.98(m,1H) 5.37(s,1H) 7.26-7.38(m,5H)。LCMS: C18 H26 N2 O3 之分析計算值：318.19，實驗值：319.21(M+H)+ ；HPLC XTERRAC-18 3.0×50 mm，經4分鐘0至100% B，1分鐘保持時間，A=90%水、10%甲醇、0.1% TFA，B=10%水、90%甲醇、0.1% TFA，RT=2.82分鐘，96%均質性指數。
步驟2：(R)-2-(3-環戊基脲基)-2-苯基乙酸：向經攪拌之(R)-2-(3-環戊基脲基)-2-苯基乙酸第三丁酯(1.31 g，4.10 mmol)的CH2 Cl2 (25 mL)溶液中逐滴添加TFA(4 mL)及三乙基矽烷(1.64 mL；10.3 mmol)，且在室溫下攪拌所得溶液6小時。在減壓下移除揮發性組分且使粗產物在乙酸乙酯/戊烷中再結晶，得到呈白色固體狀之(R)-2-(3-環戊基脲基)-2-苯基乙酸(0.69 g，64%)。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.17-1.35(m,2H) 1.42-1.52(m,2H) 1.53-1.64(m,2H) 1.67-1.80(m,2H) 3.75-3.89(m,1H) 5.17(d,J =7.93 Hz,1H) 6.12(d,J =7.32 Hz,1H) 6.48(d,J =7.93 Hz,1H) 7.24-7.40(m,5H) 12.73(s,1H)。LCMS: C14 H18 N2 O3 之分析計算值：262.31；實驗值：263.15(M+H)+ 。HPLC XTERRAC-18 3.0×50 mm，經2分鐘0至100% B，1分鐘保持時間，A=90%水、10%甲醇、0.2% H3 PO4 ，B=10%水、90%甲醇、0.2% H3 PO4 ，RT=1.24分鐘，100%均質性指數。
向經攪拌之2-(苯甲基胺基)乙酸(2.0 g，12.1 mmol)的甲酸(91 mL)溶液中添加甲醛(6.94 mL，93.2 mmol)。在70℃下5小時後，在減壓下濃縮反應混合物至20 mL且沈澱出白色固體。過濾後，收集母液且進一步在減壓下濃縮，得到粗產物。藉由逆相製備型HPLC(XTERRA30×100 mm，在220 nm下偵測，流速35 mL/min，經8分鐘0至35% B；A=90%水、10%甲醇、0.1% TFA，B=10%水、90%甲醇、0.1% TFA)純化，得到呈無色蠟狀之呈三氟乙酸鹽形式的標題化合物2-(苯甲基(甲基)-胺基)乙酸(723 mg，33%)。1 H NMR(300 MHz,DMSO-d6 )δppm 2.75(s,3H)4.04(s,2H)4.34(s,2H)7.29-7.68(m,5H)。LCMS: C10 H13 NO2 之分析計算值：179.09；實驗值：180.20(M+H)+ 。
向經攪拌之3-甲基-2-(甲基胺基)丁酸(0.50 g，3.81 mmol)的水(30 mL)溶液中添加K2 CO3 (2.63 g，19.1 mmol)及苯甲基氯(1.32 g，11.4 mmol)。在周圍溫度下攪拌反應混合物18小時。用乙酸乙酯(30 mL×2)萃取反應混合物且在減壓下濃縮水層，得到粗產物，藉由逆相製備型HPLC(XTERRA30×100 mm，在220 nm下偵測，流速40 mL/min，經6分鐘20至80% B；A=90%水、10%甲醇、0.1% TFA，B=10%水、90%甲醇、0.1% TFA)純化該粗產物得到呈無色蠟狀之2-(苯甲基(甲基)胺基)-3-甲基丁酸三氟乙酸鹽(126 mg，19%)。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 0.98(d,3H) 1.07(d,3H) 2.33-2.48(m,1H) 2.54-2.78(m,3H) 3.69(s,1H) 4.24(s,2H) 7.29-7.65(m,5H)。LCMS: C13 H19 NO2 之分析計算值：221.14；實驗值：222.28(M+H)+ 。
將Na2 CO3 (1.83 g，17.2 mmol)添加至L-纈胺酸(3.9 g，33.29 mmol)之NaOH(33 mL 1 M/H2 O，33 mmol)溶液中且用冰水浴冷卻所得溶液。經15分鐘逐滴添加氯甲酸甲酯(2.8 mL，36.1 mmol)，移除冷卻浴且在周圍溫度下攪拌反應混合物3.25小時。用乙醚(50 mL，3次)洗滌反應混合物，用冰水浴冷卻水相且用濃HCl酸化至1-2之pH值區，並用CH2 Cl2 (50 mL，3次)萃取。乾燥(MgSO4 )有機相且在真空中蒸發，得到呈白色固體狀之Cap-51(6 g)。對於主要旋轉異構體，1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz): 12.54(s,1H),7.33(d,J =8.6,1H),3.84(dd,J =8.4,6.0,1H),3.54(s,3H),2.03(m,1H),0.87(m,6H)。HRMS:[M+H]+ C7 H14 NO4 之分析計算值：176.0923；實驗值：176.0922。
將DIEA(137.5 mL，0.766 mol)添加至(S)-2-胺基-3-甲基丁酸第三丁酯鹽酸鹽(75.0 g，0.357 mol)之THF(900 mL)懸浮液中，且將混合物冷卻至0℃(冰/水浴)。經45分鐘逐滴添加氯甲酸甲酯(29.0 mL，0.375 mol)，移除冷卻浴且在周圍溫度下攪拌異質混合物3小時。在低壓下移除溶劑且使殘餘物分配於EtOAc與水(各1 L)之間。用H2 O(1 L)及鹽水(1 L)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並在低壓下濃縮。使粗物質通過矽膠塞(1 kg)，用己烷(4L)及15:85 EtOAc/己烷(4L)溶離，得到呈透明油狀之(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸第三丁酯(82.0 g，99%產率)。1 H-NMR(500 MHz,DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm) 7.34(d,J =8.6,1 H),3.77(dd,J =8.6,6.1,1 H),3.53(s,3 H),1.94-2.05(m,1 H),1.39(s,9 H),0.83-0.92(m,6 H)。13 C-NMR(126 MHz,DMSO-d6 ,δ=39.2 ppm) 170.92,156.84,80.38,60.00,51.34,29.76,27.62,18.92,17.95。LC/MS:[M+Na]+ 254.17。向(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸第三丁酯(82.0 g，0.355 mol)之CH2 Cl2 (675 mL)溶液中依序添加三氟乙酸(343 mL，4.62 mol)及Et3 SiH(142 mL，0.887 mol)，且在周圍溫度下攪拌混合物4小時。在低壓下移除揮發性組分且用石油醚(600 mL)濕磨所得油狀物，得到白色固體，過濾並用己烷(500 mL)及石油醚(500 mL)洗滌。自EtOAc/石油醚中再結晶，得到呈白色片晶狀之Cap-51(54.8 g，88%產率)。MP=108.5-109.5℃。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm) 12.52(s,1 H),7.31(d,J =8.6,1 H),3.83(dd,J =8.6,6.1,1 H),3.53(s,3 H),1.94-2.07(m,1 H),0.86(dd,J =8.9,7.0,6 H)。13 C NMR(126 MHz,DMSO-d6 ,δ=39.2 ppm) 173.30,156.94,59.48,51.37,29.52,19.15,17.98。LC/MS:[M+H]+ =176.11。C7 H13 NO4 之分析計算值：C,47.99；H,7.48；N,7.99。實驗值：C,48.17；H,7.55；N,7.99。旋光性：[α]D =-4.16(12.02 mg/mL；MeOH)。光學純度：>99.5% ee。應注意：光學純度評估係對Cap-51之甲酯衍生物進行，該衍生物係根據標準TMSCHN2 (苯/MeOH)酯化方案製備。HPLC分析條件：管柱，CHIRALPAKAD-H(4.6×250 mm，5 μm)；溶劑，95%庚烷/5% IPA(等強度)；流速，1 mL/min；溫度，35℃；在205 nm下UV監測。
[應注意：Cap-51亦可購自Flamm。]
根據對於合成Cap-51所述之程序，由L-丙胺酸合成Cap-52。出於表徵目的，藉由逆相HPLC(H2 O/甲醇/TFA)純化一部分粗物質，得到呈無色黏性油狀之Cap-52。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz): 12.49(br s,1H),7.43(d,J =7.3,0.88 H),7.09(app br s,0.12H),3.97(m,1H),3.53(s,3H),1.25(d,J =7.3,3H)。
Cap-53至Cap-64根據對於合成Cap-51所述之程序，由適當起始物質製備Cap-53至Cap-64，應注意可能進行修改。
經5分鐘將氯甲酸甲酯(0.65 mL，8.39 mmol)逐滴添加至經冷卻之(冰水)Na2 CO3 (0.449 g，4.23 mmol)、NaOH(8.2 mL 1 M/H2 O，8.2 mmol)及(S)-2-胺基-3-羥基-3-甲基丁酸(1.04 g，7.81 mmol)的混合物中。攪拌反應混合物45分鐘，接著移除冷卻浴且再持續攪拌3.75小時。用CH2 Cl2 洗滌反應混合物，用冰水浴冷卻水相且用濃HCl酸化至1-2之pH值區。在真空中移除揮發性組分，將殘餘物溶解於MeOH/CH2 Cl2 之2:1混合物(15 mL)中並過濾，旋轉蒸發濾液，得到呈白色半黏性泡沫狀之Cap-65(1.236 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz):δ6.94(d,J =8.5,0.9 H),6.53(br s,0.1H),3.89(d,J =8.8,1H),2.94(s,3H),1.15(s,3H),1.13(s,3H)。
藉由使用對於合成Cap-65所述之程序，由適當市售起始物質製備Cap-66及Cap-67。
1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz):δ12.58 (br s,1H),7.07(d,J =8.3,0.13H),6.81(d,J =8.8,0.67H),4.10-4.02(m,1.15H),3.91(dd,J =9.1,3.5,0.85H),3.56(s,3H),1.09(d,J =6.2,3H)。[應注意：僅記錄主要NH信號]。
1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz): 12.51(br s,1H),7.25(d,J =8.4,0.75H),7.12(br d,J =0.4,0.05H),6.86(br s,0.08H),3.95-3.85(m,2H),3.54(s,3H),1.08(d,J =6.3,3H)。[應注意：僅記錄主要NH信號]。
將氯甲酸甲酯(0.38 mL，4.9 mmol)逐滴添加至1 NNaOH(水溶液)(9.0 mL，9.0 mmol)、1 M NaHCO3 (水溶液)(9.0 mL，9.0 mol)、L-天冬胺酸β-苯甲酯(1.0 g，4.5 mmol)及二噁烷(9 mL)之混合物中。在周圍條件下攪拌反應混合物3小時，接著用乙酸乙酯(50 mL，3次)洗滌。用12 N HCl將水層酸化至pH~1-2，且用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。用鹽水洗滌合併之有機層，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮，得到呈淡黃色油狀之Cap-68(1.37 g；質量超過理論產量，且產物不經進一步純化即使用)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz):δ12.88(br s,1H),7.55(d,J =8.5,1H),7.40-7.32(m,5H),5.13(d,J =12.8,1H),5.10(d,J =12.9,1H),4.42-4.38(m,1H),3.55(s,3H),2.87(dd,J =16.2,5.5,1H),2.71(dd,J =16.2,8.3,1H)。LC(條件2)：RT=1.90分鐘；LC/MS:[M+H]+ C13 H16 NO6 之分析計算值：282.10；實驗值：282.12。
將NaCNBH3 (2.416 g，36.5 mmol)分批添加至經冷卻(約15℃)之丙胺酸(1.338 g，15.0 mmol)的水(17 mL)/MeOH(10 mL)溶液中。數分鐘後，經4分鐘逐滴添加乙醛(4.0 mL，71.3 mmol)，移除冷卻浴，且在周圍條件下攪拌反應混合物6小時。再添加乙醛(4.0 mL)且攪拌反應物2小時。將濃HCl緩慢添加至反應混合物中直至pH值達到約1.5，且在40℃下加熱所得混合物1小時。在真空中移除大部分揮發性組分且用DOWEX50WX8-100離子交換樹脂(用水洗滌管柱，且用藉由混合18 ml NH4 OH與282 ml水製備之稀NH4 OH溶離化合物)純化殘餘物，得到呈灰白色軟吸濕性固體狀之Cap-69(2.0 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz): δ3.44(q,J =7.1,1H),2.99-2.90(m,2H),2.89-2.80(m,2H),1.23(d,J =7.1,3H),1.13(t,J =7.3,6H)。
Cap-70至Cap-74x根據對於合成Cap-69所述之程序，藉由使用適當起始物質製備Cap-70至Cap-74x。
將NaBH3 CN(1.6 g，25.5 mmol)添加至經冷卻(冰/水浴)之H-D-Ser-OBzl HCl(2.0 g，8.6 mmol)的水(25 mL)/甲醇(15 mL)溶液中。經5分鐘逐滴添加乙醛(1.5 mL，12.5 mmol)，移除冷卻浴，且在周圍條件下攪拌反應混合物2小時。小心地用12 N HCl淬滅反應物且在真空中濃縮。將殘餘物溶解於水中且用逆相HPLC(MeOH/H2 O/TFA)純化，得到呈無色黏性油狀之(R)-2-(二乙基胺基)-3-羥基丙酸苯甲酯的三氟乙酸鹽(1.9 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz):δ9.73(br s,1H),7.52-7.36(m,5H),5.32(d,J =12.2,1H),5.27(d,J =12.5,1H),4.54-4.32(m,1H),4.05-3.97(m,2H),3.43-3.21(m,4H),1.23(t,J =7.2,6H)。LC/MS(條件2)：RT=1.38分鐘；LC/MS:[M+H]+ C14 H22 NO3 之分析計算值：252.16；實驗值：252.19。Cap-75將NaH(0.0727 g，1.82 mmol，60%)添加至經冷卻(冰水)之以上所製備之(R)-2-(二乙基胺基)-3-羥基丙酸苯甲酯三氟乙酸鹽(0.3019 g，0.8264 mmol)的THF(3.0 mL)溶液中且攪拌混合物15分鐘。添加碘代甲烷(56 μL，0.90 mmol)且持續攪拌18小時，同時使浴解凍至周圍條件。用水淬滅反應物且裝載於經MeOH預調節之MCX(6 g)濾筒上並用甲醇洗滌，隨後用2 N NH3 /甲醇溶離化合物。在真空中移除揮發性組分，得到呈黃色半固體狀之受(R)-2-(二乙基胺基)-3-羥基丙酸污染的Cap-75(100 mg)。產物不經進一步純化按原樣使用。
將NaCNBH3 (1.60 g，24.2 mmol)分批添加至經冷卻(約15℃)之(S )-4-胺基-2-(第三丁氧羰基胺基)丁酸(2.17 g，9.94 mmol)的水/MeOH(各12 mL)溶液中。數分鐘後，經2分鐘逐滴添加乙醛(2.7 mL，48.1 mmol)，移除冷卻浴，且在周圍條件下攪拌反應混合物3.5小時。再添加乙醛(2.7 mL，48.1 mmol)且攪拌反應物20.5小時。在真空中移除大部分MeOH組分，且用濃HCl處理剩餘混合物直至其pH值達到約1.0，接著在40℃下加熱2小時。在真空中移除揮發性組分，且用4 M HCl/二噁烷(20 mL)處理殘餘物並在周圍條件下攪拌7.5小時。在真空中移除揮發性組分且用DOWEX50WX8-100離子交換樹脂(用水洗滌管柱且用由18 ml NH4 OH及282 ml水製備之稀NH4 OH溶離化合物)，得到呈灰白色固體狀之中間物(S)-2-胺基-4-(二乙基胺基)丁酸(1.73 g)。經11分鐘將氯甲酸甲酯(0.36 mL，4.65 mmol)逐滴添加至經冷卻(冰水)之Na2 CO3 (0.243 g，2.29 mmol)、NaOH(4.6 mL 1 M/H2 O，4.6 mmol)及以上產物(802.4 mg)的混合物中。攪拌反應混合物55分鐘，接著移除冷卻浴且再持續攪拌5.25小時。用等體積水稀釋反應混合物且用CH2 Cl2 (30 mL，2次)洗滌，用冰水浴冷卻水相並用濃HCl酸化至2之pH值區。接著在真空中移除揮發性組分且用MCX樹脂(6.0 g；用水洗滌管柱，且用2.0 M NH3 /MeOH溶離樣品)來使粗物質形成自由鹼，得到呈灰白色固體狀之不純Cap-76(704 mg)。1 H NMR(MeOH-d4 ,δ=3.29 ppm,400 MHz):δ3.99(dd,J =7.5,4.7,1H),3.62(s,3H),3.25-3.06(m,6H),2.18-2.09(m,1H),2.04-1.96(m,1H),1.28(t,J =7.3,6H)。LC/MS:[M+H]+ C10 H21 N2 O4 之分析計算值：233.15；實驗值：233.24。
根據對於Cap-7所述之程序，藉由SN2 置換步驟使用7-氮雜雙環[2.2.1]庚烷，且藉由使用以下條件實現中間物2-(7-氮雜雙環[2.2.1]庚-7-基)-2-苯基乙酸苯甲酯之立體異構分離來進行Cap-77之合成：將中間物(303.7 mg)溶解於乙醇中，且將所得溶液注射於對掌性HPLC管柱(Chiracel AD-H管柱，30×250 mm，5 μm)上，在70 mL/min及35℃之溫度下用90% CO2 -10% EtOH溶離，得到124.5 mg立體異構體-1及133.8 mg立體異構體-2。根據Cap-7之製備，使此等苯甲酯氫解，得到Cap-77：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz):δ7.55(m,2H),7.38-7.30(m,3H),4.16(s,1H),3.54(app br s,2H),2.08-1.88(m,4H),1.57-1.46(m,4H)。LC(條件1)：RT=0.67分鐘；LC/MS:[M+H]+ C14 H18 NO2 之分析計算值：232.13；實驗值：232.18。HRMS:[M+H]+ C14 H18 NO2 之分析計算值：232.1338；實驗值：232.1340。
將NaCNBH3 (0.5828 g，9.27 mmol)添加至(R )-2-(乙基胺基)-2-苯基乙酸之鹽酸鹽(合成Cap-3之中間物；0.9923 mg，4.60 mmol)及(1-乙氧基環丙氧基)三甲基矽烷(1.640g，9.40 mmol)於MeOH(10 mL)中之混合物中，且用油浴在50℃下加熱半異質混合物20小時。再添加(1-乙氧基環丙氧基)三甲基矽烷(150 mg，0.86 mmol)及NaCNBH3 (52 mg，0.827 mmol)且再加熱反應混合物3.5小時。接著使其冷卻至周圍溫度且用濃HCl酸化至約2之pH值區，過濾混合物並旋轉蒸發濾液。將所得粗物質溶解於i -PrOH(6 mL)中且加熱以溶解，濾出未溶解部分並在真空中濃縮濾液。用逆相HPLC(H2 O/MeOH/TFA)純化約1/3所得粗物質，得到呈無色黏性油狀之Cap-78的三氟乙酸鹽(353 mg)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz；在D2 O交換後):δ7.56-7.49(m,5H),5.35(S,1H),3.35(m,1H),3.06(app br s,1H),2.66(m,1H),1.26(t,J =7.3,3H),0.92(m,1H),0.83-0.44(m,3H)。LC(條件1)：RT=0.64分鐘；LC/MS:[M+H]+ C/3 H18 NO2 之分析計算值：220.13；實驗值：220.21。HRMS:[M+H]+ C13 H18 NO2 之分析計算值：220.1338；實驗值：220.1343。
將臭氧鼓泡通過經冷卻(-78℃)之Cap-55(369 mg，2.13 mmol)的CH2 Cl2 (5.0 mL)溶液約50分鐘直至反應混合物呈現藍色色澤。添加Me2 S(移液管10滴)，且攪拌反應混合物35分鐘。用-10℃浴置換-78℃浴且再持續攪拌30分鐘，在真空中移除揮發性組分，得到無色黏性油狀物。將NaBH3 CN(149 mg，2.25 mmol)添加至以上粗物質及嗎啉(500 μL，5.72 mmol)之MeOH(5.0 mL)溶液中並在周圍條件下攪拌混合物4小時。冷卻至冰水溫度且用濃HCl處理，使其pH值達約2.0，接著攪拌2.5小時。在真空中移除揮發性組分，且用MCX樹脂(MeOH洗滌；2.0 N NH3 /MeOH溶離)及逆相HPLC(H2 O/MeOH/TFA)之組合純化殘餘物，得到含有未知量之嗎啉的Cap-79。
為了除去嗎啉污染物，將以上物質溶解於CH2 Cl2 (1.5 mL)中且依序用Et3 N(0.27 mL，1.94 mmol)、乙酸酐(0.10 mL，1.06 mmol)處理並在周圍條件下攪拌18小時。添加THF(1.0 mL)及H2 O(0.5 mL)並持續攪拌1.5小時。在真空中移除揮發性組分，且使所得殘餘物通過MCX樹脂(MeOH洗滌；2.0 N NH3 /MeOH溶離)，得到呈棕色黏性油狀之不純Cap-79，其不經進一步純化即用於下一步驟中。
經15分鐘將SOCl2 (6.60 mL，90.5 mmol)逐滴添加至經冷卻(冰水)之(S)-3-胺基-4-(苯甲基氧基)-4-側氧基丁酸(10.04 g，44.98 mmol)與MeOH(300 mL)的混合物中，移除冷卻浴且在周圍條件下攪拌反應混合物29小時。在真空中移除大部分揮發性組分且小心地使殘餘物分配於EtOAc(150 mL)與飽和NaHCO3 溶液之間。用EtOAc(150 mL，2次)萃取水相，且乾燥(MgSO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮，得到呈無色油狀之(S)-2-胺基丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(9.706 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz):δ7.40-7.32(m,5H),5.11(s,2H),3.72(app t,J =6.6,1H),3.55(s,3H),2.68(dd,J =15.9,6.3,1H),2.58(dd,J =15.9,6.8,1H),1.96(s,2H)。LC(條件1)：RT=0.90分鐘；LC/MS: [M+H]+ C12 H16 NO4 之分析計算值：238.11；實驗值：238.22。
經1分鐘將Pb(NO3 )2 (6.06 g，18.3 mmol)添加至(S)-2-胺基丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(4.50 g，19.0 mmol)、9-溴-9-苯基-9H -茀(6.44 g，20.0 mmol)及Et3 N(3.0 mL，21.5 mmol)之CH2 Cl2 (80 mL)溶液中，且在周圍條件下攪拌異質混合物48小時。過濾混合物且用MgSO4 處理濾液，再次過濾，並濃縮最終濾液。對所得粗物質進行BIOTAGE純化(350 g矽膠，CH2 Cl2 溶離)，得到呈高黏性無色油狀之(S)-2-(9-苯基-9H-茀-9-基胺基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(7.93 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz):δ7.82(m,2H),7.39-7.13(m,16H),4.71(d,J =12.4,1H),4.51(d,J =12.6,1H),3.78(d,J =9.1,NH),3.50(s,3H),2.99(m,1H),2.50-2.41(m,2H,部分與溶劑重疊)。LC(條件1)：RT=2.16分鐘；LC/MS: [M+H]+ C31 H28 NO4 之分析計算值：478.20；實驗值：478.19。
經10分鐘將LiHMDS(9.2 mL 1.0 M/THF，9.2 mmol)逐滴添加至經冷卻(-78℃)之(S)-2-(9-苯基-9H-茀-9-基胺基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(3.907 g，8.18 mmol)的THF(50 mL)溶液中且攪拌約1小時。經8分鐘將MeI(0.57 mL，9.2 mmol)逐滴添加至混合物中，且持續攪拌16.5小時，同時使冷卻浴解凍至室溫。用飽和NH4 Cl溶液(5 mL)淬滅後，在真空中移除大部分有機組分且使殘餘物分配於CH2 Cl2 (100 mL)與水(40 mL)之間。乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並在真空中濃縮，且用BIOTAGE(350 g矽膠；25% EtOAc/己烷)純化所得粗物質，得到3.65 g約1.0:0.65比率之3-甲基-2-(9-苯基-9H-茀-9-基胺基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯的2S/3S與2S/3R非對映異構混合物(1 H NMR)。此時不測定主要異構體之立體化學，且混合物不經分離即進行下一步驟。部分1 H NMR數據(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz)：主要非對映異構體,δ4.39(d,J =12.3,1H of CH2 ),3.33(s,3H,與H2 O信號重疊),3.50(d,J =10.9,NH),1.13(d,J =7.1,3H)；次要非對映異構體,δ4.27(d,J =12.3,1H of(CH2 )),3.76(d,J =10.9,NH),3.64(s,3H),0.77(d,J =7.0,3H)。LC(條件1)：RT=2.19分鐘；LC/MS:[M+H]+ C32 H30 NO4 之分析計算值：492.22；實驗值：492.15。
經10分鐘將氫化二異丁基鋁(20.57 ml 1.0 M己烷溶液，20.57 mmol)逐滴添加至經冷卻(-78℃)之以上所製備之(2S)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-茀-9-基胺基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(3.37g，6.86 mmol)的THF(120 mL)溶液，且在-78℃下攪拌20小時。自冷卻浴移出反應混合物且在攪拌下快速傾倒於約1 MH3 PO4 /H2 O(250 mL)中，且用乙醚(100 mL，2次)萃取混合物。用鹽水洗滌合併之有機相，乾燥(MgSO4 )，過濾並在真空中濃縮。製備粗物質之矽膠篩網且進行層析(25% EtOAc/己烷；重力溶離)，得到1.1 g呈無色黏性油狀之受苯甲醇污染的(2S,3S)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H -茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯及含有(2S,3R)立體異構體作為雜質之(2S,3R)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H -茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯。使後一樣品再經受相同管柱層析純化條件，得到750 mg呈白色泡沫狀之純化物質。[應注意：在以上條件下(2S,3S)異構體在(2S,3R)異構體之前溶離出]。(2S,3S)異構體：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz): 7.81(m,2H),7.39-7.08(m,16H),4.67(d,J =12.3,1H),4.43(d,J =12.4,1H),4.21(app t,J =5.2,OH),3.22(d,J =10.1,NH),3.17(m,1H),3.08(m,1H),~2.5(m,1H,與溶劑信號重疊),1.58(m,1H),0.88(d,J =6.8,3H)。
LC(條件1)：RT=2.00分鐘；LC/MS:[M+H]+ C31 H30 NO3 之分析計算值：464.45；實驗值：464.22。(2S,3R)異構體：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz): 7.81(d,J =7.5,2H),7.39-7.10(m,16H),4.63(d,J =12.1,1H),4.50(app t,J =4.9,1H),4.32(d,J =12.1,1H),3.59-3.53(m,2H),3.23(m,1H),2.44(dd,J =9.0,8.3,1H),1.70(m,1H),0.57(d,J =6.8,3H)。LC(條件1)：RT=1.92分鐘；LC/MS:[M+H]]+ C31 H30 NO3 之分析計算值：464.45；實驗值：464.52。
基於對由各異構體製備之內酯衍生物進行的NOE研究，藉由使用以下方案進行DIBAL還原產物之相對立體化學指定：將LiHMDS(50 μL 1.0 M/THF，0.05 mmol)添加至經冷卻(冰水)之(2S,3S)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H -茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯(62.7 mg，0.135 mmol)的THF(2.0 mL)溶液中，且在類似溫度下攪拌反應混合物約2小時。在真空中移除揮發性組分且使殘餘物分配於CH2 Cl2 (30 mL)、水(20 mL)與飽和NH4 Cl水溶液(1 mL)之間。乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並在真空中濃縮，且對所得粗物質進行BIOTAGE純化(40 g矽膠；10-15% EtOAc/己烷)，得到呈無色固體膜狀之(3S,4S)-4-甲基-3-(9-苯基-9H -茀-9-基胺基)二氫呋喃-2(3H )-酮(28.1 mg)。類似地將(2S,3R)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H -茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯精製成(3S,4R)-4-甲基-3-(9-苯基-9H -茀-9-基胺基)二氫呋喃-2(3H )-酮。(3S,4S)-內酯異構體：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz),7.83(d,J =7.5,2H),7.46-7.17(m,11H),4.14(app t,J =8.3,1H),3.60(d,J =5.8,NH),3.45(app t,J =9.2,1H),~2.47(m,1H,部分與溶劑信號重疊),2.16(m,1H),0.27(d,J =6.6,3H)。LC(條件1)：RT=1.98分鐘；LC/MS:[M+Na]+ C24 H21 NNaO2 之分析計算值：378.15；實驗值：378.42。(3S,4R)-內酯異構體：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz),7.89(d,J =7.6,1H),7.85(d,J =7.3,1H),7.46-7.20(m,11H),3.95(dd,J =9.1,4.8,1H),3.76(d,J =8.8,1H),2.96(d,J =3.0,NH),2.92(dd,J =6.8,3,NCH),1.55(m,1H),0.97(d,J =7.0,3H)。LC(條件1)：RT=2.03分鐘；LC/MS:[M+Na]+ C24 H21 NNaO2 之分析計算值：378.15；實驗值：378.49。
依序將TBDMS-Cl(48 mg，0.312 mmol)、咪唑(28.8 mg，0.423 mmol)添加至(2S,3S)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯(119.5 mg，0.258 mmol)之CH2 Cl2 (3 ml)溶液中，且在周圍條件下攪拌混合物14.25小時。接著用CH2 Cl2 (30 mL)稀釋反應混合物且用水(15 mL)洗滌，乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並在真空中濃縮。用BIOTAGE(40 g矽膠；5% EtOAc/己烷)純化所得粗物質，得到呈無色黏性油狀之受基於TBDMS之雜質污染的(2S,3S)-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯(124.4 mg)。類似地將(2S,3R)-4-羥基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯精製成(2S,3R)-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯。(2S,3S)-矽烷基醚異構體：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz),7.82(d,J =4.1,1H),7.80(d,J =4.0,1H),7.38-7.07(m,16H),4.70(d,J =12.4,1H),4.42(d,J =12.3,1H),3.28-3.19(m,3H),2.56(dd,J =10.1,5.5,1H),1.61(m,1H),0.90(d,J =6.8,3H),0.70(s,9H),-0.13(s,3H),-0.16(s,3H)。
LC(條件1，其中操作時間延長至4分鐘)：RT=3.26分鐘；LC/MS:[M+H]+ C37 H44 NO3 Si之分析計算值：578.31；實驗值：578.40。(2S,3R)-矽烷基醚異構體：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz),7.82(d,J =3.0,1H),7.80(d,J =3.1,1H),7.39-7.10(m,16H),4.66(d,J =12.4,1H),4.39(d,J =12.4,1H),3.61(dd,J =9.9,5.6,1H),3.45(d,J =9.5,1H),3.41(dd,J =10,6.2,1H),2.55(dd,J =9.5,7.3,1H),1.74(m,1H),0.77(s,9H),0.61(d,J =7.1,3H),-0.06(s,3H),-0.08(s,3H)。
將氫氣球連接於(2S,3S)-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H -茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯(836 mg，1.447 mmol)與10% Pd/C(213 mg)於EtOAc(16 mL)之混合物且在室溫下攪拌混合物約21小時，其中視需要向氣球再充填H2 。用CH2 Cl2 稀釋反應混合物且經由矽藻土墊(CELITE-545)過濾，且用EtOAc(200 mL)、EtOAc/MeOH(1:1混合物，200 mL)及MeOH(750 mL)洗滌該墊。濃縮合併之有機相，由所得粗物質製備矽膠篩網並進行急驟層析(EtOAc/i-PrOH/H2 O之8:2:1混合物)，得到呈白色絨毛狀固體之(2S,3S)-2-胺基-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-3-甲基丁酸(325 mg)。類似地將(2S,3R)-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-茀-9-基胺基)丁酸苯甲酯精製成(2S,3R)-2-胺基-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-3-甲基丁酸。(2S,3S)-胺基酸異構體：1 H NMR(甲醇-d4 ,δ=3.29 ppm,400 MHz),3.76(dd,J =10.5,5.2,1H),3.73(d,J =3.0,1H),3.67(dd,J =10.5,7.0,1H),2.37(m,1H),0.97(d,J =7.0,3H),0.92(s,9H),0.10(s,6H)。LC/MS:[M+H]+ C11 H26 NO3 Si之分析計算值：248.17；實驗值：248.44。(2S,3R)-胺基酸異構體：1 H NMR(甲醇-d4 ,δ=3.29 ppm,400 MHz),3.76-3.75(m,2H),3.60(d,J =4.1,1H),2.16(m,1H),1.06(d,J =7.3,3H),0.91(s,9H),0.09(s,6H)。[M+H]+ C11 H26 NO3 Si之分析計算值：248.17；實驗值：248.44。
將水(1 mL)及NaOH(0.18 mL 1.0 M/H2 O，0.18 mmol)添加至(2S,3S)-2-胺基-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-3-甲基丁酸(41.9 mg，0.169 mmol)與Na2 CO3 (11.9 mg，0.112 mmol)之混合物中，且音波處理約1分鐘以溶解反應物。接著用冰水浴冷卻混合物，經30秒添加氯甲酸甲酯(0.02 mL，0.259 mmol)，在類似溫度下持續有力攪拌40分鐘，接著在周圍溫度下有力攪拌2.7小時。用水(5 mL)稀釋反應混合物，用冰水浴冷卻且用1.0 N HCl水溶液(約0.23 mL)逐滴處理。進一步用水(10 mL)稀釋混合物且用CH2 Cl2 (15 mL，2次)萃取。乾燥(MgSO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮，得到呈灰白色固體狀之Cap-80a。類似地將(2S,3R)-2-胺基-4-(第三丁基二甲基矽烷基氧基)-3-甲基丁酸精製成Cap-80b。Cap-80a：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,400 MHz),12.57(br s,1H),7.64(d,J =8.3,0.3H),7.19(d,J =8.8,0.7H),4.44(dd,J =8.1,4.6,0.3H),4.23(dd,J =8.7,4.4,0.7H),3.56/3.53(兩個單峰,3H),3.48-3.40(m,2H),2.22-2.10(m,1H),0.85(s,9H),~0.84(d,0.9H,與t-Bu信號重疊),0.79(d,J =7,2.1H),0.02/0.01/0.00(三個重疊單峰,6H)。LC/MS:[M+Na]+ C13 H27 NNaO5 Si之分析計算值：328.16；實驗值：328.46。Cap-80b：1 H NMR(CDCl3 ,δ=7.24 ppm,400 MHz),6.00(brd,J =6.8,1H),4.36(dd,J =7.1,3.1,1H),3.87(dd,J =10.5,3.0,1H),3.67(s,3H),3.58(dd,J =10.6,4.8,1H),2.35(m,1H),1.03(d,J =7.1,3H),0.90(s,9H),0.08(s,6H)。LC/MS:[M+Na]+ C13 H27 NNaO5 Si之分析計算值：328.16；實驗值：328.53。粗產物不經進一步純化即使用。
根據Falb等人，Synthetic Communications ,23:2839(1993)所述之方案來製備。
Cap-82至Cap-85根據對於Cap-51或Cap-13所述之程序，由適當起始物質合成Cap-82至Cap-85。樣品展現類似於其立體異構體(亦即分別為Cap-4、Cap-13、Cap-51及Cap-52)之光譜概況。
在0℃下向O-甲基-L-蘇胺酸(3.0 g，22.55 mmol)、NaOH(0.902 g，22.55 mmol)於H2 O(15 mL)中之混合物中逐滴添加ClCO2 Me(1.74 mL，22.55 mmol)。使混合物攪拌12小時且使用1 N HCl酸化至pH 1。用EtOAc(2×250 mL)及10% MeOH之CH2 Cl2 溶液(250 mL)萃取水相且在真空下濃縮合併之有機相，得到無色油狀物(4.18 g，97%)，其具有足以用於後續步驟中之純度。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δ4.19(s,1H),3.92-3.97(m,1H),3.66(s,3H),1.17(d,J =7.7 Hz，3H)。LCMS: C7 H13 NO5 之分析計算值：191；實驗值：190(M-H)- 。
在0℃下向L-高絲胺酸(2.0 g，9.79 mmol)、Na2 CO3 (2.08 g，19.59 mmol)於H2 O(15 mL)中之混合物中逐滴添加ClCO2 Me(0.76 mL，9.79 mmol)。使混合物攪拌48小時且使用1 N HCl酸化至pH 1。用EtOAc(2×250 mL)萃取水相且在真空中濃縮合併之有機相，得到無色固體(0.719 g，28%)，其具有足以用於後續步驟中之純度。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δ4.23(dd,J =4.5,9.1 Hz,1H),3.66(s,3H),3.43-3.49(m,2H),2.08-2.14(m,1H),1.82-1.89(m,1H)。LCMS: C7 H13 NO5 之分析計算值：191；實驗值：192(M+H)+ 。
在100℃下將L-纈胺酸(1.0 g，8.54 mmol)、3-溴吡啶(1.8 mL，18.7 mmol)、K2 CO3 (2.45 g，17.7 mmol)及CuI(169 mg，0.887 mmol)於DMSO(10 mL)中之混合物加熱12小時。將反應混合物冷卻至室溫，傾倒於H2 O(約150 mL)中且用EtOAc(2次)洗滌。用少量H2 O萃取有機層且用6 N HCl將合併之水相酸化至約pH 2。將體積減少至約三分之一且添加20 g陽離子交換樹脂(Strata)。使漿料靜置20分鐘且裝載於陽離子交換樹脂(Strata)(約25 g)墊上。依序用H2 O(200 mL)、MeOH(200 mL)及NH3 (3 M MeOH溶液，2×200 mL)洗滌該墊。在真空中濃縮適當溶離份且將殘餘物(約1.1 g)溶解於H2 O中，冷凍並凍乾。獲得呈泡沫狀之標題化合物(1.02 g，62%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δ8.00(s,br,1H),7.68-7.71(m,1H),7.01(s,br,1H),6.88(d,J =7.5 Hz,1H),5.75(s,br,1H),3.54(s,1H),2.04-2.06(m,1H),0.95(d,J =6.0 Hz,3H),0.91(d,J =6.6 Hz,3H)。LCMS: C10 H14 N2 O2 之分析計算值：194；實驗值：195(M+H)+ 。
在100℃下將L-纈胺酸(1.0 g，8.54 mmol)、5-溴嘧啶(4.03 g，17.0 mmol)、K2 CO3 (2.40 g，17.4 mmol)及CuI(179 mg，0.94 mmol)於DMSO(10 mL)中之混合物加熱12小時。將反應混合物冷卻至室溫，傾倒於H2 O(約150 mL)中且用EtOAc(2次)洗滌。用少量H2 O萃取有機層且用6 N HCl將合併之水相酸化至約pH 2。將體積減少至約三分之一且添加20 g陽離子交換樹脂(Strata)。使漿料靜置20分鐘且裝載於陽離子交換樹脂(Strata)(約25 g)墊上。依序用H2 O(200 mL)、MeOH(200 mL)及NH3 (3 M MeOH溶液，2×200 mL)洗滌該墊。在真空中濃縮適當溶離份且將殘餘物(約1.1 g)溶解於H2 O中，冷凍並凍乾。獲得呈泡沫狀之標題化合物(1.02 g，62%)。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)顯示混合物含有纈胺酸且無法估算純度。將物質按原樣用於後續反應中。LCMS: C9 H13 N3 O2 之分析計算值：195；實驗值：196(M+H)+ 。
根據對於製備Cap-1所述之方法製備Cap-90。將粗物質按原樣用於後續步驟中。LCMS: C11 H15 NO2 之分析計算值：193；實驗值：192(M-H)- 。Cap-91至Cap-116除非另外註明，否則根據用於製備Cap-51之方法製備以下Cap：
Cap-117至Cap-123對於製備Cap-117至Cap-123，由商業來源獲得Boc胺基酸且藉由用25% TFA之CH2 Cl2 溶液處理來脫除保護基。如藉由LCMS判斷反應完成後，在真空中移除溶劑且根據對於Cap-51所述之程序，用氯甲酸甲酯使胺基酸之相應三氟乙酸鹽胺基甲醯化。
根據Cap-51之程序，使L-蘇胺酸第三丁酯之鹽酸鹽胺基甲醯化。用1 N HCl將粗反應混合物酸化至pH~1且用EtOAc(2×50 mL)萃取混合物。在真空中濃縮合併之有機相，產生無色油狀物，其在靜置後凝固。在真空中濃縮水層且用EtOAc-CH2 Cl2 -MeOH(1:1:0.1)濕磨所得產物與無機鹽之混合物，接著在真空中濃縮有機相，產生無色油狀物，LCMS顯示其為所需產物。合併兩批，得到0.52 g固體。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ4.60(m,1H),4.04(d,J =5.0 Hz,1H),1.49(d,J =6.3 Hz,3H)。LCMS: C5 H7 NO4 之分析計算值：145；實驗值：146(M+H)+ 。
向Pd(OH)2 (20%，100 mg)、甲醛水溶液(37重量%，4 mL)、乙酸(0.5 mL)於甲醇(15 mL)中之懸浮液中添加(S)-4-胺基-2-(第三丁氧羰基胺基)丁酸(1 g，4.48 mmol)。用氫氣淨化反應物數次且用室溫氫氣球攪拌隔夜。經由矽藻土(CELITE)墊過濾反應混合物，且在真空中移除揮發性組分。將所得粗物質按原樣用於下一步驟。LC/MS: C11 H22 N2 O4 之分析計算值：246；實驗值：247(M+H)+ 。
此程序為用於製備Cap-51之程序的修改。在0℃下向3-甲基-L-組胺酸(0.80 g，4.70 mmol)於THF(10 mL)及H2 O(10 mL)中之懸浮液中添加NaHCO3 (0.88 g，10.5 mmol)。用ClCO2 Me(0.40 mL，5.20 mmol)處理所得混合物且在0℃下使混合物攪拌。攪拌約2小時後，LCMS顯示無起始物質剩餘。用6 N HCl將反應物酸化至pH 2。在真空中移除溶劑且將殘餘物懸浮於20 mL 20% MeOH之CH2 Cl2 溶液中。過濾並濃縮混合物，產生淡黃色泡沫狀物(1.21 g)。LCMS及1 H NMR顯示物質為甲酯與所需產物之9:1混合物。將此物質溶解於THF(10 mL)及H2 O(10 mL)中，冷卻至0℃且添加LiOH(249.1 mg，10.4 mmol)。攪拌約1小時後，LCMS顯示無酯剩餘。因此，用6 N HCl酸化混合物且在真空中移除溶劑。LCMS及1 H NMR證實不存在酯。獲得受無機鹽污染之呈鹽酸鹽形式的標題化合物(1.91 g，>100%)。化合物不經進一步純化按原樣用於後續步驟中。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ8.84,(s,1H),7.35(s,1H),4.52(dd,J =5.0,9.1 Hz,1H),3.89(s,3H),3.62(s,3H),3.35(dd,J =4.5,15.6 Hz,1H,部分經溶劑遮蓋),3.12(dd,J =9.0,15.6 Hz,1H)。LCMS: C9 H13 N3 O4 之分析計算值：227.09；實驗值：228.09(M+H)+ 。
根據以上用於Cap-126之方法，以(S)-2-胺基-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙酸(1.11 g，6.56 mmol)、NaHCO3 (1.21 g，14.4 mmol)及ClCO2 Me(0.56 mL，7.28 mmol)作為起始物質來製備Cap-127。獲得受無機鹽污染之呈鹽酸鹽形式的標題化合物(1.79 g，>100%)。LCMS及1 H NMR顯示存在約5%甲酯。粗混合物不經進一步純化按原樣使用。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ8.90(s,1H),7.35(s,1H),4.48(dd,J =5.0,8.6 Hz,1H),3.89(s,3H),3.62(s,3H),3.35(m,1H),3.08(m,1H)；LCMS: C9 H13 N3 O4 之分析計算值：227.09；實驗值：228(M+H)+ 。
步驟1.製備(S)-2-(第三丁氧羰基胺基)戊-4-炔酸苯甲酯(cj-27b)。
在0℃下向cj-27a(1.01 g，4.74 mmol)、DMAP(58 mg，0.475 mmol)及iPr2 NEt(1.7 mL，9.8 mmol)於CH2 Cl2 (100 mL)中之溶液中添加Cbz-Cl(0.68 mL，4.83 mmol)。在0℃下使溶液攪拌4小時，洗滌(1 N KHSO4 、鹽水)，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮。藉由急驟管柱層析(TLC 6:1 hex:EtOAc)純化殘餘物，產生呈無色油狀之標題化合物(1.30 g，91%)。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δ7.35(s,5H),5.35(d,br,J =8.1 Hz,1H),5.23(d,J =12.2 Hz,1H),5.17(d,J =12.2 Hz,1H),4.48-4.53(m,1H),2.68-2.81(m,2H),2.00(t,J =2.5 Hz,1H),1.44(s,9H)。LCMS: C17 H21 NO4 之分析計算值：303；實驗值：304(M+H)+ 。步驟2.製備(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(第三丁氧羰基胺基)丙酸苯甲酯(cj-28)。
在室溫下向(S)-2-(第三丁氧羰基胺基)戊-4-炔酸苯甲酯(0.50 g，1.65 mmol)、抗壞血酸鈉(0.036 g，0.18 mmol)、CuSO4 -5H2 O(0.022 g，0.09 mmol)及NaN3 (0.13 g，2.1 mmol)於DMF-H2 O(5 mL，4:1)中之混合物中添加BnBr(0.24 mL，2.02 mmol)且使混合物升溫至65℃。5小時後，LCMS指示轉化率低。添加另一部分NaN3 (100 mg)且持續加熱12小時。將反應物傾倒於EtOAc及H2 O中並震盪。分離各層且用EtOAc萃取水層3次，洗滌(H2 O×3、鹽水)合併之有機相，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並濃縮。藉由急驟(BIOTAGE，40+M 0-5% MeOH之CH2 Cl2 溶液；TLC 3% MeOH之CH2 Cl2 溶液)純化殘餘物，得到淡黃色油狀物，其在靜置後凝固(748.3 mg，104%)。NMR與所需產物一致，但表明存在DMF。該物質不經進一步純化按原樣使用。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δ7.84(s,1H),7.27-7.32(m,10H),5.54(s,2H),5.07(s,2H),4.25(m,1H),3.16(dd,J =1.0,5.3 Hz,1H),3.06(dd,J =5.3,14.7 Hz),2.96(dd,J =9.1,14.7 Hz,1H),1.31(s,9H)。LCMS: C24 H28 N4 O4 之分析計算值：436；實驗值：437(M+H)+ 。步驟3.製備(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(甲氧羰基胺基)丙酸苯甲酯(cj-29)。
向(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(第三丁氧羰基胺基)丙酸苯甲酯(0.52 g，1.15 mmol)之CH2 Cl2 溶液中添加TFA(4 mL)。使混合物在室溫下攪拌2小時。在真空中濃縮混合物，產生無色油狀物，其在靜置後凝固。將此物質溶解於THF-H2 O中並冷卻至0℃。添加固體NaHCO3 (0.25 g，3.00 mmol)，隨後添加ClCO2 Me(0.25 mL，3.25 mmol)。攪拌1.5小時後，用6 N HCl將混合物酸化至pH~2，接著傾倒於H2 O-EtOAc中。分離各層且用EtOAc萃取水相2次。洗滌(H2 O、鹽水)合併之有機層，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮，產生無色油狀物(505.8 mg，111%，NMR表明存在未經鑑別之雜質)，其在泵上靜置後凝固。該物質不經進一步純化按原樣使用。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δ7.87(s,1H),7.70(d,J =8.1 Hz,1H),7.27-7.32(m,10H),5.54(s,2H),5.10(d,J =12.7 Hz,1H),5.06(d,J =12.7 Hz,1H),4.32-4.37(m,1H),3.49(s,3H),3.09(dd,J =5.6,14.7 Hz,1H),2.98(dd,J =9.6,14.7 Hz,1H)。LCMS: C21 H22 N4 O4 之分析計算值：394；實驗值：395(M+H)+ 。步驟4.製備(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙酸(Cap-128)。
在大氣壓下，在含Pd-C(82 mg)之MeOH(5 mL)存在下使(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(甲氧羰基胺基)丙酸苯甲酯氫化12小時。經由矽藻土(CELITE)過濾混合物且在真空中濃縮。獲得呈無色膠狀之(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙酸(266 mg，111%)，其受約10%甲酯污染。該物質不經進一步純化按原樣使用。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δ12.78(s,br,1H),7.59(s,1H),7.50(d,J =8.0 Hz,1H),4.19-4.24(m,1H),3.49(s,3H),3.12(dd,J =4.8 Hz,14.9Hz,1H),2.96(dd,J =9.9,15.0 Hz,1H)。LCMS: C7 H10 N4 O4 之分析計算值：214；實驗值：215(M+H)+ 。
步驟1.製備(S)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(cj-31)。
在50℃下將(S)-2-側氧基氧雜環丁烷-3-基胺基甲酸苯甲酯(0.67 g，3.03 mmol)及吡唑(0.22 g，3.29 mmol)於CH3 CN(12 mL)中之懸浮液加熱24小時。將混合物冷卻至室溫隔夜且過濾固體，得到(S)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(330.1 mg)。在真空中濃縮濾液，接著用少量CH3 CN(約4 mL)濕磨，得到第二批(43.5 mg)。總產量為370.4 mg(44%)。熔點165.5-168℃。文獻中之熔點168.5-169.5[Vederas等人，J. Am. Chem. Soc .,107:7105(1985)]。1 H NMR(400 MHz,CD3 OD)δ7.51(d,J =2.0,1H),7.48(s,J =1.5 Hz,1H),7.24-7.34(m,5H),6.23(m,1H),5.05(d,12.7 H,1H),5.03(d,J =12.7 Hz,1H),4.59-4.66(m,2H),4.42-4.49(m,1H)。LCMS: C14 H15 N3 O4 之分析計算值：289；實驗值：290(M+H)+ 。步驟2.製備(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(Cap-129)。
在大氣壓下，在含Pd-C(45 mg)之MeOH(5 mL)存在下使(S)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(0.20 g，0.70 mmol)氫化2小時。產物似乎不溶於MeOH中，因此，用5 mL H2 O及數滴6 N HCl稀釋反應混合物。經由矽藻土(CELITE)過濾均質溶液，且在真空中移除MeOH。冷凍及凍乾剩餘溶液，產生黃色泡沫(188.9 mg)。將此物質懸浮於THF-H2 O(1:1，10 mL)中，接著冷卻至0℃。小心地向冷混合物中添加NaHCO3 (146.0 mg，1.74 mmol)(析出CO2 )。氣體析出停止(約15分鐘)後，逐滴添加ClCO2 Me(0.06 mL，0.78 mmol)。使混合物攪拌2小時且用6 N HCl酸化至pH~2並傾倒於EtOAc中。分離各層且用EtOAc(5次)萃取水相。洗滌(鹽水)合併之有機層，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並濃縮，產生呈無色固體狀之標題化合物(117.8 mg，79%)。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δ13.04(s,1H),7.63(d,J =2.6 Hz,1H),7.48(d,J =8.1 Hz,1H),7.44(d,J =1.5 Hz,1H),6.19(app t,J =2.0 Hz,1H),4.47(dd,J =3.0,12.9 Hz,1H),4.29-4.41(m,2H),3.48(s,3H)。LCMS: C8 H11 N3 O4 之分析計算值：213；實驗值：214(M+H)+ 。
藉由類似於以下文獻中所給之程序使市售(R)-苯基甘胺酸醯化來製備Cap-130：Calmes,M.等人，Tetrahedron ,43(10):2285(1987)。
步驟a：將二甲基胺基甲醯氯(0.92 mL，10 mmol)緩慢添加至(S)-2-胺基-3-甲基丁酸苯甲酯鹽酸鹽(2.44 g；10 mmol)及亨氏鹼(3.67 mL，21 mmol)於THF(50 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌所得白色懸浮液(16小時)隔夜並在減壓下濃縮。使殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間。用鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並在減壓下濃縮。藉由急驟層析純化所得黃色油狀物，用乙酸乙酯：己烷(1:1)溶離。在真空下濃縮所收集之溶離份，得到2.35 g(85%)透明油狀物。1 H NMR(300 MHz,DMSO-d6 )δppm 0.84(d,J =6.95 Hz,3H),0.89(d,J =6.59 Hz,3H),1.98-2.15(m,1H),2.80(s,6H),5.01-5.09(m,J =12.44 Hz,1H),5.13(d,J =12.44 Hz,1H),6.22(d,J =8.05 Hz,1H),7.26-7.42(m,5H)。LC(條件1)：RT=1.76分鐘；MS:[M+H]+ C16 H22 N2 O3 之分析計算值：279.17；實驗值：279.03。步驟b:向以上製備之中間物(2.35 g；8.45 mmol)的MeOH(50 mL)溶液中添加Pd/C(10%；200 mg)且用N2 (3次)沖洗所得黑色懸浮液並置於1 atm H2 下。在室溫下攪拌混合物隔夜且經由微纖維濾紙過濾以移除催化劑。接著在減壓下濃縮所得透明溶液,獲得1.43 g(89%)呈白色泡沫狀之Cap-131，其不經進一步純化即使用。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 0.87(d,J =4.27 Hz,3H),0.88(d,J =3.97 Hz,3H),1.93-2.11(m,1H),2.80(s,6H),3.90(dd,J =8.39,6.87 Hz,1H),5.93(d,J =8.54 Hz,1H),12.36(s,1H)。LC(條件1)：RT=0.33分鐘；MS:[M+H]+ C8 H17 N2 O3 之分析計算值：189.12；實驗值：189.04。
根據對於Cap-131所述之方法，由(S)-2-胺基丙酸苯甲酯鹽酸鹽製備Cap-132。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 1.27(d,J =7.32 Hz,3H),2.80(s,6H),4.06(qt,1H),6.36(d,J =7.32 Hz,1H),12.27(s,1H)。LC(條件1)：RT=0.15分鐘；MS:[M+H]+ C6 H13 N2 O3 之分析計算值：161.09；實驗值：161.00。
根據對於Cap-47所述之方法，由(S)-2-胺基-3-甲基丁酸第三丁酯鹽酸鹽及氯甲酸2-氟乙酯製備Cap-133。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 0.87(t,J =6.71 Hz,6H),1.97-2.10(m,1H),3.83(dd,J =8.39,5.95 Hz,1H),4.14-4.18(m,1H),4.20-4.25(m,1H),4.50-4.54(m,1H),4.59-4.65(m,1H),7.51(d,J =8.54 Hz,1H),12.54(s,1H)。
根據對於Cap-51所述之方法，由(S)-二乙基丙胺酸及氯甲酸甲酯製備Cap-134。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 0.72-0.89(m,6H),1.15-1.38(m,4H),1.54-1.66(m,1H),3.46-3.63(m,3H),4.09(dd,J =8.85,5.19 Hz,1H),7.24(d,J =8.85 Hz,1H),12.55(s,1H)。LC(條件2)：RT=0.66分鐘；LC/MS:[M+H]+ C9 H18 NO4 之分析計算值：204.12；實驗值：204.02。
在25℃下使D-2-胺基-(4-氟苯基)乙酸(338 mg，2.00 mmol)、1N HCl之乙醚溶液(2.0 mL，2.0 mmol)及福馬林(37%，1 mL)於甲醇(5 mL)中之溶液在10%鈀/碳(60 mg)上進行氣球氫化16小時。接著經由CELITE過濾混合物，得到呈白色泡沫狀之Cap-135的鹽酸鹽(316 mg，80%)。1 H NMR(300 MHz,MeOH-d4 )δ7.59(dd,J =8.80,5.10 Hz,2H),7.29(t,J =8.6 Hz,2H),5.17(s,1H),3.05(v br s,3H),2.63(v br s,3H)；Rt =0.19分鐘(條件-MS-W5)；95%均質性指數；LRMS:[M+H]+ C10 H13 FNO2 之分析計算值：198.09；實驗值：198.10。
在氮氣下向經冷卻(-50℃)之1-苯甲基-1H -咪唑(1.58 g，10.0 mmol)的無水乙醚(50 mL)懸浮液中逐滴添加正丁基鋰(2.5 M己烷溶液，4.0 mL，10.0 mmol)。在-50℃下攪拌20分鐘後，將乾二氧化碳(通過燥石膏)鼓泡至反應混合物中歷時10分鐘，隨後使其升溫至25℃。將向反應混合物中添加二氧化碳後所形成之重沈澱物過濾，得到吸濕性白色固體，將其溶解於水(7 mL)中，酸化至pH=3，冷卻並用刮擦誘發結晶。過濾此沈澱物，產生白色固體，將其懸浮於甲醇中，用1N HCl/乙醚(4 mL)處理且在真空中濃縮。自水(5 mL)凍乾殘餘物，得到呈白色固體狀之Cap-136的鹽酸鹽(817 mg，40%)。1 H NMR(300 MHz,DMSO-d6 )δ7.94(d,J =1.5 Hz,1H),7.71(d,J =1.5 Hz,1H),7.50-7.31(m,5H),5.77(s,2H)；Rt =0.51分鐘(條件-MS-W5)；95%均質性指數；LRMS:[M+H]+ C11 H12 N2 O2 之分析計算值：203.08；實驗值：203.11。
在80℃下在氮氣下將1-氯-3-氰基異喹啉(188 mg，1.00 mmol；根據WO 2003/099274中之程序製備)(188 mg，1.00 mmol)、氟化銫(303.8 mg，2.00 mmol)、二氯化雙(三第三丁基膦)鈀(10 mg，0.02 mmol)及2-(三丁基錫烷基)呋喃(378 μL，1.20 mmol)於無水二噁烷(10 mL)中之懸浮液加熱16小時，隨後將其冷卻至25℃且在有力攪拌下用飽和氟化鉀水溶液處理1小時。使混合物分配於乙酸乙酯與水之間且分離有機相，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。對殘餘物進行矽膠純化(用0%至30%乙酸乙酯/己烷溶離)，得到呈白色固體狀之Cap-137步驟a(230 mg，105%)，其按原樣使用。Rt =1.95分鐘(條件-MS-W2)；90%均質性指數；LRMS:[M+H]+ C14 H8 N2 O之分析計算值：221.07；實驗值：221.12。
向Cap-137步驟a(110 mg，0.50 mmol)及過碘酸鈉(438 mg，2.05 mmol)於四氯化碳(1 mL)、乙腈(1 mL)及水(1.5 mL)中之懸浮液中添加水合三氯化釕(2 mg，0.011 mmol)。在25℃下攪拌混合物2小時，接著分配於二氯甲烷與水之間。分離水層，再用二氯甲烷萃取兩次且經Na2 SO4 乾燥合併之二氯甲烷萃取物，過濾並濃縮。用己烷濕磨殘餘物，得到呈淺灰色固體狀之Cap-137(55 mg，55%)。Rt =1.10分鐘(條件-MS-W2)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C11 H8 N2 O2 之分析計算值：200.08；實驗值：200.08。Cap-138至Cap-158合成策略。方法A。
向經攪拌之5-羥基異喹啉(根據WO 2003/099274中之程序製備)(2.0 g，13.8 mmol)及三苯基膦(4.3 g，16.5 mmol)於無水四氫呋喃(20 mL)中的懸浮液中逐份添加無水甲醇(0.8 mL)及偶氮二甲酸二乙酯(3.0 mL，16.5 mmol)。在室溫下攪拌混合物20小時，隨後用乙酸乙酯稀釋且用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。將殘餘物預吸附於矽膠上且純化(用40%乙酸乙酯/己烷溶離)，得到呈淡黃色固體狀之Cap-138步驟a(1.00 g，45%)。1 H NMR(CDCl3 ,500 MHz)δ9.19(s,1H),8.51(d,J =6.0 Hz,1H),7.99(d,J =6.0 Hz,1H),7.52-7.50(m,2H),7.00-6.99(m,1H),4.01(s,3H)；Rt =0.66分鐘(條件D2)；95%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C10 H10 NO之分析計算值：160.08；實驗值：160.10。
在室溫下向經攪拌之Cap-138步驟a(2.34 g，14.7 mmol)的無水二氯甲烷(50 mL)溶液中整份添加間氯過苯甲酸(77%，3.42 g，19.8 mmol)。攪拌20小時後，添加粉末狀碳酸鉀(2.0 g)且在室溫下攪拌混合物1小時，隨後過濾並濃縮，得到呈淡黃色固體狀之Cap-138步驟b，其純度足以用於後續步驟(2.15 g，83.3%)。1 H NMR(CDCl3 ,400MHz)δ8.73(d,J =1.5 Hz,1H),8.11(dd,J =7.3,1.7 Hz,1H),8.04(d,J =7.1 Hz,1H),7.52(t,J =8.1 Hz,1H),7.28(d,J =8.3 Hz,1H),6.91(d,J =7.8 Hz,1H),4.00(s,3H)；Rt =0.92分鐘(條件-D1)；90%均質性指數；LCMS: [M+H]+ C10 H10 NO2 之分析計算值：176.07；實驗值：176.0。
在室溫下在氮氣下向經攪拌之Cap-138步驟b(0.70 g，4.00 mmol)及三乙胺(1.1 mL，8.00 mmol)於無水乙腈(20 mL)中的溶液中添加三甲基矽烷基氰化物(1.60 mL，12.00 mmol)。在75℃下加熱混合物20小時，隨後冷卻至室溫，用乙酸乙酯稀釋且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌，隨後經Na2 SO4 乾燥並濃縮溶劑。對殘餘物進行矽膠急驟層析(用5%乙酸乙酯/己烷至25%乙酸乙酯/己烷溶離)，得到呈白色結晶固體狀之Cap-138步驟c(498.7 mg)以及另外223 mg自濾液回收之Cap-138步驟c。1 H NMR(CDCl3 ,500 MHz)δ8.63(d,J =5.5 Hz,1H),8.26(d,J =5.5 Hz,1H),7.88(d,J =8.5 Hz,1H),7.69(t,J =8.0 Hz,1H),7.08(d,J =7.5 Hz,1H),4.04(s,3H)；Rt =1.75分鐘(條件-D1)；90%均質性指數；LCMS: [M+H]+ C11 H9 N2 O之分析計算值：185.07；實驗值：185.10。
用5 N氫氧化鈉溶液(10 mL)處理Cap-138步驟c(0.45 g，2.44 mmol)且在85℃下加熱所得懸浮液4小時，冷卻至25℃，用二氯甲烷稀釋並用1 N鹽酸酸化。分離有機相，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，濃縮至體積且過濾，得到呈黃色固體狀之Cap-138(0.44 g，88.9%)。1 H NMR(DMSO-d6 ,400 MHz)δ13.6(br s,1H),8.56(d,J =6.0 Hz,1H),8.16(d,J =6.0 Hz,1H),8.06(d,J =8.8 Hz,1H),7.71-7.67(m,1H),7.30(d,J =8.0 Hz,1H),4.02(s,3H)；Rt =0.70分鐘(條件-D1)；95%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C11 H10 NO3 之分析計算值：204.07；實驗值：204.05。合成策略。方法B(來源於Tetrahedron Letters ,42:6707(2001))。
向含有經氬氣脫氣之1-氯-6-甲氧基異喹啉(1.2 g，6.2 mmol；根據WO 2003/099274中之程序製備)、氰化鉀(0.40 g，6.2 mmol)、1,5-雙(二苯基膦基)戊烷(0.27 g，0.62 mmol)及乙酸鈀(II)(70 mg，0.31 mmol)於無水甲苯(6 mL)中之懸浮液的厚壁螺旋蓋小瓶中添加N,N,N',N' -四甲基乙二胺(0.29 mL，2.48 mmol)。密封該小瓶，在150℃下加熱22小時，接著使其冷卻至25℃。用乙酸乙酯稀釋反應混合物，用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。用5%乙酸乙酯/己烷至25%乙酸乙酯/己烷溶離來對殘餘物進行矽膠純化，得到呈白色固體狀之Cap-139步驟a(669.7 mg)。1 H NMR(CDCl3 ,500 MHz)δ8.54(d,J =6.0 Hz,1H),8.22(d,J =9.0 Hz,1H),7.76(d,J =5.5 Hz,1H),7.41-7.39(m,1H),7.13(d,J =2.0 Hz,1H),3.98(s,3H)；Rt =1.66分鐘(條件-D1)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C11 H9 N2 O之分析計算值：185.07；實驗值：185.20。
根據對於Cap-138所述之程序,藉由用5 N NaOH使Cap-139步驟a鹼性水解來製備Cap-139。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δ13.63(v br s,1H),8.60(d,J =9.3 Hz,1H),8.45(d,J =5.6 Hz,1H),7.95(d,J =5.9 Hz,1H),7.49(d,J =2.2 Hz,1H),7.44(dd,J =9.3,2.5 Hz,1H),3.95(s,3H)；Rt =0.64分鐘(條件-D1)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C11 H10 NO3 之分析計算值：204.07；實驗值：204.05。
在25℃下在氮氣下向經有力攪拌之1,3-二氯-5-乙氧基異喹啉(482 mg，2.00 mmol；根據WO 2005/051410中之程序製備)、乙酸鈀(II)(9 mg，0.04 mmol)、碳酸鈉(223 mg，2.10 mmol)及1,5-雙(二苯基膦基)戊烷(35 mg，0.08 mmol)於無水二甲基乙醯胺(2 mL)中的混合物中添加N,N,N',N'-四甲基乙二胺(60 mL，0.40 mmol)。10分鐘後，將混合物加熱至150℃，接著經18小時使用注射泵以1 mL份添加丙酮氰醇之儲備溶液(由含457 μL丙酮氰醇之4.34 mL DMA製備)。接著使混合物分配於乙酸乙酯與水之間且分離有機層，用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。用10%乙酸乙酯/己烷至40%乙酸乙酯/己烷溶離來對殘餘物進行矽膠純化，得到呈黃色固體狀之Cap-140步驟a(160 mg，34%)。Rt =2.46分鐘(條件-MS-W2)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C12 H9 ClN2 O之分析計算值：233.05；實驗值：233.08。
藉由如下文所述之用於製備Cap-141之程序中所述，用12N HCl使Cap-140步驟a酸水解來製備Cap-140。Rt =2.24分鐘(條件-MS-W2)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]]+ C12 H11 ClNO3 之分析計算值：252.04；實驗值：252.02。
如用於製備Cap-140步驟a之程序(見上)中所述，由1-溴-3-氟異喹啉(使用J. Med. Chem .,13:613(1970)中所概述之程序，由3-胺基-1-溴異喹啉製備)製備Cap-141步驟a。1 H NMR(500 MHz,CDCl3 )δ8.35(d,J =8.5 Hz,1H),7.93(d,J =8.5 Hz,1H),7.83(t,J =7.63 Hz,1H),7.77-7.73(m,1H),7.55(s,1H)；Rt =1.60分鐘(條件-D1)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C10 H6 FN2 之分析計算值：173.05；實驗值：172.99。
用12N HCl(3 mL)處理Cap-141步驟a(83 mg，0.48 mmol)且在80℃下加熱所得漿料16小時，隨後冷卻至室溫並用水(3 mL)稀釋。攪拌混合物10分鐘，接著過濾，得到呈灰白色固體狀之Cap-141(44.1 mg，47.8%)。用二氯甲烷稀釋濾液且用鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥並濃縮，另外得到Cap-141，其純度足以直接用於後續步驟(29.30 mg，31.8%)。1 H NMR(DMSO-d6 ,500 MHz)δ14.0(br s,1H),8.59-8.57(m,1H),8.10(d,J =8.5 Hz,1H),7.88-7.85(m,2H),7.74-7.71(m,1H)；Rt =1.33分鐘(條件-D1)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C10 H7 FNO2 之分析計算值：192.05；實驗值：191.97。
如用於製備Cap-138步驟b及c之兩步程序中所述，由4-溴異喹啉N-氧化物製備Cap-142步驟a。Rt =1.45分鐘(條件-MS-W1)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C10 H6 BrN2 之分析計算值：232.97；實驗值：233.00。
向經氬氣脫氣之Cap-142步驟a(116 mg，0.50 mmol)、磷酸三鉀(170 mg，0.80 mmol)、乙酸鈀(II)(3.4 mg，0.015 mmol)及2-(二環己基膦基)聯苯(11 mg，0.03 mmol)於無水甲苯(1 mL)中的懸浮液中添加嗎啉(61 μL，0.70 mmol)。在100℃下加熱混合物16小時，冷卻至25℃且經由矽藻土(CELITE)過濾。用10%至70%乙酸乙酯/己烷溶離來對殘餘物進行矽膠純化，得到呈黃色固體狀之Cap-142步驟b(38 mg，32%)，其直接用於後續步驟。Rt =1.26分鐘(條件-MS-W1)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C14 H14 N3 O之分析計算值：240.11；實驗值：240.13。
如用於Cap-138之程序中所述，用5 N氫氧化鈉，由Cap-142步驟b製備Cap-142。Rt =0.72分鐘(條件-MS-W1)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C14 H15 N2 O3 之分析計算值：259.11；實驗值：259.08。
向經攪拌之3-胺基-1-溴異喹啉(444 mg，2.00 mmol)的無水二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中整份添加氫化鈉(60%，未洗滌，96 mg，2.4 mmol)。在25℃下攪拌混合物5分鐘，隨後添加2-溴乙醚(90%，250 μL，2.00 mmol)。進一步在25℃下攪拌混合物5小時且在75℃下攪拌72小時，隨後冷卻至25℃，用飽和氯化銨溶液淬滅並用乙酸乙酯稀釋。分離有機層，用水及鹽水洗滌，經Na2 SO4 乾燥，過濾並濃縮。用0%至70%乙酸乙酯/己烷來溶離對殘餘物進行矽膠純化，得到呈黃色固體狀之Cap-143步驟a(180 mg，31%)。Rt =1.75分鐘(條件-MS-W1)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C13 H14 BrN2 O之分析計算值：293.03；實驗值：293.04。
向冷(-60℃)的Cap-143步驟a(154 mg，0.527 mmol)之無水四氫呋喃(5 mL)溶液中添加正丁基鋰之己烷溶液(2.5 M，0.25 mL，0.633 mmol)。10分鐘後，將乾二氧化碳鼓泡至反應混合物中10分鐘，隨後用1N HCl淬滅且使其升溫至25℃。接著用二氯甲烷(3×30 mL)萃取混合物且在真空中濃縮合併之有機萃取物。藉由逆相HPLC(MeOH/水/TFA)純化殘餘物，得到Cap-143(16 mg，12%)。Rt =1.10分鐘(條件-MS-W1)；90%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C14 H15 N2 O3 之分析計算值：259.11；實驗值：259.08。
將1,3-二氯異喹啉(2.75 g，13.89 mmol)以小份添加至冷(0℃)的發菸硝酸(10 mL)及濃硫酸(10 mL)之溶液中。在0℃下攪拌混合物0.5小時，隨後逐漸升溫至25℃，其中攪拌16小時。接著將混合物傾倒於含有碎冰及水之燒杯中且在0℃下攪拌所得懸浮液1小時，隨後過濾，得到呈黃色固體狀之Cap-144步驟a(2.73 g，81%)，其直接使用。Rt =2.01分鐘(條件-D1)；95%均質性指數；LCMS:[M+H]+ C9 H5 Cl2 N2 O2 之分析計算值：242.97；實驗值：242.92。
將Cap-144步驟a(0.30 g，1.23 mmol)溶解於甲醇(60 mL)中且用氧化鉑(30 mg)處理，並使懸浮液在7 psi H2 下進行帕爾氫化(Parr hydrogenation)1.5小時。接著添加福馬林(5 mL)及另外氧化鉑(30 mg)，且使懸浮液在45 psi H2 下再進行帕爾氫化13小時。接著經由矽藻土(CELITE)抽濾並濃縮至體積。抽濾產生之沈澱物，得到呈黃色固體狀之標題化合物，用含5%乙酸乙酯之己烷至含25%乙酸乙酯之己烷溶離來進行矽膠急驟層析，得到呈淺黃色固體狀之Cap-144步驟b(231 mg，78%)。Rt =2.36分鐘(條件-D1)；95%均質性指數；1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δ8.02(s,1H),7.95(d,J =8.6 Hz,1H),7.57-7.53(m,1H),7.30(d,J =7.3 Hz,1H),2.88(s,6H)；LCMS:[M+H]+ C11 H11 Cl2 N2 之分析計算值：241.03；實驗值：241.02。HRMS:[M+H]+ C11 H11 Cl2 N2 之分析計算值：241.0299；實驗值：241.0296。
根據對於製備Cap-139步驟a所述之程序，由Cap-144步驟b製備Cap-144步驟c。Rt =2.19分鐘(條件-D1)；95%均質性指數；LC MS:[M+H]+ C12 H11 ClN3 之分析計算值：232.06；實驗值：232.03。HRMS:[M+H]+ C12 H11 ClN3 之分析計算值：232.0642；實驗值：232.0631。
根據對於Cap-141所述之程序，製備Cap-144。Rt =2.36分鐘(條件-D1)；90%；LCMS:[M+H]+ C12 H12 ClN2 O2 之分析計算值：238.01；實驗值：238.09。Cap-145至Cap-162除非如下文所概述另外註明，否則根據對於製備Cap-138(方法A)或Cap-139(方法B)所述之程序，由適當1-氯異喹啉製備Cap-145至Cap-162。
向2-丁酮酸(1.0 g，9.8 mmol)之乙醚(25 mL)溶液中逐滴添加溴化苯基鎂(22 mL，1 M THF溶液)。在約25℃下在氮氣下攪拌反應物17.5小時。用1 N HCl酸化反應物且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取產物。依序用水、鹽水洗滌合併之有機層並經MgSO4 乾燥。在真空中濃縮後，獲得白色固體。使固體自己烷/乙酸乙酯中再結晶，得到呈白色針狀之Cap-163(883.5 mg)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz): 12.71(br s,1H),7.54-7.52(m,2H),7.34-7.31(m,2H),7.26-7.23(m,1H),5.52-5.39(br s,1H),2.11(m,1H),1.88(m,1H),0.79(app t,J=7.4 Hz,3H)。
在帕爾瓶中，使2-胺基-2-苯基丁酸(1.5 g，8.4 mmol)、甲醛(14 mL，37%水溶液)、1 N HCl(10 mL)及10% Pd/C(0.5 mg)於MeOH(40 mL)中之混合物曝露於50 psi之H2 歷時42小時。經由CELITE過濾反應物且在真空中濃縮，將殘餘物溶解於MeOH(36 mL)中且用逆相HPLC(MeOH/H2 O/TFA)純化產物，得到呈白色固體狀之Cap-164的三氟乙酸鹽(1.7 g)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz) 7.54-7.47(m,5H),2.63(m,1H),2.55(s,6H),2.31(m,1H),0.95(app t,J=7.3 Hz,3H)。
向2-胺基-2-茚滿甲酸(258.6 mg，1.46 mmol)及甲酸(0.6 mL，15.9 mmol)於1,2-二氯乙烷(7 ml)中之混合物中添加甲醛(0.6 mL，37%水溶液)。在約25℃下攪拌混合物15分鐘，接著在70℃下加熱8小時。在真空中移除揮發性組分，且將殘餘物溶解於DMF(14 mL)中並藉由逆相HPLC(MeOH/H2 O/TFA)純化，得到呈黏性油狀之Cap-165的三氟乙酸鹽(120.2 mg)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz): 7.29-7.21(m,4H),3.61(d,J=17.4 Hz,2H),3.50(d,J=17.4 Hz,2H),2.75(s,6H)。LC/MS:[M+H]+ C12 H16 NO2 之分析計算值：206.12；實驗值：206.07。
根據對於合成Cap-7a及Cap-7b所述之方法，由(1S,4S)-(+)-2-甲基-2,5-二氮雜雙環[2.2.1]庚烷(2HBr)製備Cap-166a及Cap-166b，例外為使用半製備型Chrialcel OJ管柱，20×250 mm，10 μm，用85:15庚烷/乙醇混合物以10 mL/min溶離速率溶離來分離苯甲酯中間物歷時25分鐘。Cap-166b：1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz): 7.45(d,J=7.3 Hz,2H),7.27-7.19(m,3H),4.09(s,1H),3.34(app br s,1H),3.16(app br s,1H),2.83(d,J =10.1 Hz,1H),2.71(m,2H),2.46(m,1H),2.27(s,3H),1.77(d,J=9.8 Hz,1H),1.63(d,J=9.8 Hz,1H)。LC/MS:[M+H]+ C14 H19 N2 O2 之分析計算值：247.14；實驗值：247.11。
在約25℃下攪拌外消旋Boc-1,3-二氫-2H-異吲哚甲酸(1.0 g，3.8 mmol)之20% TFA/CH2 Cl2 溶液4小時。在真空中移除所有揮發性組分。在帕爾瓶中，將所得粗物質、甲醛(15 mL，37%水溶液)、1 N HCl(10 mL)及10% Pd/C(10 mg)於MeOH中之混合物曝露於H2 (40 PSI)歷時23小時。經由CELITE過濾反應混合物且在真空中濃縮，得到呈黃色泡沫狀之Cap-167(873.5 mg)。1 H NMR(DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm,500 MHz) 7.59-7.38(m,4H),5.59(s,1H),4.84(d,J=14 Hz,1H),4.50(d,J=14.1 Hz,1H),3.07(s,3H)。LC/MS:[M+H]+ C10 H12 NO2 之分析計算值：178.09；實驗值：178.65。
根據對於製備Cap-167所述之程序，由外消旋Boc-胺基茚滿-1-甲酸製備外消旋Cap-168。按原樣使用粗物質。
將2-胺基-2-苯基丙酸鹽酸鹽(5.0 g，2.5 mmol)、甲醛(15 mL，37%水溶液)、1 N HCl(15 mL)及10% Pd/C(1.32 g)於MeOH(60 mL)中之混合物置於帕爾瓶中且在氫氣(55 PSI)下震盪4天。經由CELITE過濾反應混合物且在真空中濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由逆相製備型-HPLC(MeOH/水/TFA)純化，得到呈黏性半固體狀之Cap-169的三氟乙酸鹽(2.1 g)。1 H NMR(CDCl3 ,δ=7.26 ppm,500 MHz):7.58-7.52(m,2H),7.39-7.33(m,3H),2.86(br s,3H),2.47(br s,3H),1.93(s,3H)。LC/MS:[M+H]+ C11 H16 NO2 之分析計算值：194.12；實驗值：194.12。
(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸向(S )-2-胺基-2-(四氫-2H -哌喃-4-基)乙酸(505 mg；3.18 mmol；自Astatech獲得)之水(15 ml)溶液中添加碳酸鈉(673 mg；6.35 mmol)，且將所得混合物冷卻至0℃，接著經5分鐘逐滴添加氯甲酸甲酯(0.26 ml；3.33 mmol)。使反應物攪拌18小時，同時使浴解凍至周圍溫度。接著使反應混合物分配於1 N HCl與乙酸乙酯之間。移除有機層且進一步再用2份乙酸乙酯萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機層，經由硫酸鎂乾燥，過濾並在真空中濃縮，得到無色殘餘物Cap-170。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 12.65(1 H,br s),7.44(1 H,d,J =8.24 Hz),3.77-3.95(3 H,m),3.54(3 H,s),3.11-3.26(2 H,m),1.82-1.95(1 H,m),1.41-1.55(2 H,m),1.21-1.39(2 H,m)；LC/MS:[M+H]+ C9 H16 NO5 之分析計算值：218.1；實驗值：218.1。
藉由鼓泡氮氣來使2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-(氧雜環丁烷-3-亞基)乙酸甲酯(200 mg，0.721 mmol；Il Farmaco(2001),56,609-613)於乙酸乙酯(7 ml)及CH2 Cl2 (4.00 ml)中之溶液脫氣10分鐘。接著添加二碳酸二甲酯(0.116 ml，1.082 mmol)及Pd/C(20 mg，0.019 mmol)，對反應混合物裝備氫氣球且使其在周圍溫度下攪拌隔夜，此時TLC(95:5 CH2 Cl2 /MeOH：用由1 g Ce(NH4 )2 SO4 、6 g鉬酸銨、6 ml硫酸及100 ml水製成之染色劑顯色)指示完全轉化。經由CELITE過濾反應物並濃縮。經由BIOTAGE(用二氯甲烷裝載於25 samplet上；在25S管柱上用3CV之二氯甲烷溶離，接著250 ml之0%至5% MeOH/二氯甲烷，接著保持250 ml之5% MeOH/二氯甲烷；9 mL溶離份)純化殘餘物。收集含有所需物質之溶離份並濃縮成120 mg(81%)呈無色油狀之2-(甲氧羰基胺基)-2-(氧雜環丁烷-3-基)乙酸甲酯。1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 3.29-3.40(m,J =6.71 Hz,1 H) 3.70(s,3 H) 3.74(s,3 H) 4.55(t,J =6.41 Hz,1 H) 4.58-4.68(m,2 H) 4.67-4.78(m,2 H) 5.31(br s,1 H)。LC/MS: [M+H]+ C8 H14 NO5 之分析計算值：204.2；實驗值：204.0。向含2-(甲氧羰基胺基)-2-(氧雜環丁烷-3-基)乙酸甲酯(50 mg，0.246 mmol)之THF(2 mL)及水(0.5 mL)中添加單水合氫氧化鋰(10.33 mg，0.246 mmol)。使所得溶液在周圍溫度下攪拌隔夜。TLC(1:1 EA/Hex；哈呢森染色劑(Hanessian stain)[1 g Ce(NH4 )2 SO4 、6 g鉬酸銨、6 ml硫酸及100 ml水]指示約10%起始物質剩餘。再添加3 mg LiOH且使其攪拌隔夜，此時TLC顯示無起始物質剩餘。在真空中濃縮且置於高真空隔夜，得到55 mg呈無色固體狀之2-(甲氧羰基胺基)-2-(氧雜環丁烷-3-基)乙酸鋰。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 3.39-3.47(m,1 H)3.67(s,3 H)4.28(d,J =7.93 Hz,1 H)4.64(t,J =6.26 Hz,1 H)4.68(t,J =7.02 Hz,1 H)4.73(d,J =7.63 Hz,2 H)。
以下重氮化步驟由Barton,A.等人，J. C. S. Perkin Trans I ,159-164(1982)改編而來：將NaNO2 (166 mg，2.4 mmol)之水(0.6 mL)溶液緩慢添加至經攪拌之冷(0℃)的2-胺基-5-乙基-1,3-噻唑-4-甲酸甲酯(186 mg，1.0 mmol)、CuSO4 ‧5H2 O(330 mg，1.32 mmol)、NaCl(260 mg，4.45 mmol)及H2 SO4 (5.5 mL)之水(7.5 mL)溶液中。在0℃下攪拌混合物45分鐘且使其升溫至室溫，其中再攪拌1小時，隨後添加CuCl(118 mg)。進一步在室溫下攪拌此混合物16小時，隨後用鹽水稀釋且用乙醚萃取兩次。合併有機層，經MgSO4 乾燥並濃縮，產生呈橙色油狀物(80%純度)之2-氯-5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(亦即Cap-172步驟a)(175 mg，85%)，其直接用於下一反應中。Rt =1.99分鐘(條件-MD1)；LC/MS: [M+H]+ C7 H9 ClNO2 S之分析計算值：206.01；實驗值：206.05。
Cap-172向2-氯-5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(175 mg)之THF/H2 O/MeOH(20 mL/3 mL/12 mL)溶液中添加LiOH(305 mg，12.76 mmol)。在室溫下攪拌混合物隔夜，隨後濃縮並用1N HCl之乙醚溶液(25 mL)中和。用乙酸乙酯萃取殘餘物兩次且合併有機層，經MgSO4 乾燥並蒸發，得到呈紅色固體狀之Cap-172(60 mg，74%)，其不經進一步純化即使用。1 H NMR(300 MHz,DMSO-d6 )δppm 13.03-13.42(1 H,m),3.16(2 H,q,J =7.4 Hz),1.23(3 H,t,J =7.5 Hz)。Rt =1.78分鐘(條件-MD1)；LC/MS:[M+H]+ C6 H7 ClNO2 S之分析計算值：191.99；實驗值：191.99。
以下重氮化步驟由Barton,A.等人，J.C.S. Perkin Trans I ,159-164(1982)改編而來：將NaNO2 (150 mg，2.17 mmol)之水(1.0 mL)溶液逐滴添加至經攪拌之冷(0℃)的2-胺基-5-乙基-1,3-噻唑-4-甲酸甲酯(186 mg，1.0 mmol)之50% H3 PO2 (3.2 mL)溶液中。在0℃下攪拌混合物1小時且使其升溫至室溫，其中再攪拌2小時。再冷卻至0℃後，用NaOH(85 mg)之水(10 mL)溶液緩慢處理混合物。接著用飽和NaHCO3 溶液稀釋混合物且用乙醚萃取兩次。合併有機層，經MgSO4 乾燥並濃縮，產生呈橙色油狀(85%純度)之5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(亦即Cap-173步驟a)(134 mg，78%)，其直接用於下一反應中。Rt =1.58分鐘(條件-MD1)；LC/MS:[M+H]+ C7 H10 NO2 S之分析計算值：172.05；實驗值：172.05。
Cap-173向5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(134 mg)之THF/H2 O/MeOH(18 mL/2.7 mL/11 mL)溶液中添加LiOH(281 mg，11.74 mmol)。在室溫下攪拌混合物隔夜，隨後濃縮並用1N HCl之乙醚溶液(25 mL)中和。用乙酸乙酯萃取殘餘物兩次且合併有機層，經MgSO4 乾燥並蒸發，得到呈橙色固體狀之Cap-173(90 mg，73%)，其不經進一步純化即使用。1 H NMR(300 MHz,DMSO-d6 )δppm 12.74-13.04(1 H,m),3.20(2 H,q,J =7.3 Hz),1.25(3H,t,J =7.5 Hz)。Rt =1.27分鐘(條件-MD1)；LC/MS:[M+H]+ C6 H8 NO2 S之分析計算值：158.03；實驗值：158.04。
將三氟甲磺酸酐(5.0 g，18.0 mmol)逐滴添加至冷(0℃)的3-羥基吡啶甲酸甲酯(2.5 g，16.3 mmol)及TEA(2.5 mL，18.0 mmol)於CH2 Cl2 (80 mL)中之溶液中。在0℃下攪拌混合物1小時，隨後使其升溫至室溫，其中再攪拌1小時。接著用飽和NaHCO3 溶液(40 mL)淬滅混合物且分離有機層，用鹽水洗滌，經MgSO4 乾燥並濃縮，產生呈深棕色油狀之3-(三氟甲基磺醯基氧基)吡啶甲酸甲酯(亦即Cap-174步驟a)(3.38 g，73%)(>95%純度)，其不經進一步純化即直接使用。1 H NMR(300 MHz,CDCl3 )δppm 8.72-8.79(1 H,m),7.71(1 H,d,J =1.5 Hz),7.58-7.65(1 H,m),4.04(3 H,s)。Rt =1.93分鐘(條件-MD1)；LC/MS:[M+H]+ C8 H7 F3 NO5 S之分析計算值：286.00；實驗值：286.08。
Cap-174向3-(三氟甲基磺醯基氧基)吡啶甲酸甲酯(570 mg，2.0 mmol)之DMF(20 mL)溶液中添加LiCl(254 mg，6.0 mmol)、三丁基(乙烯基)錫烷(761 mg，2.4 mmol)及二氯化雙(三苯基膦)鈀(42 mg，0.06 mmol)。在100℃下加熱混合物隔夜，隨後在室溫下將飽和KF溶液(20 mL)添加至反應混合物中。攪拌此混合物4小時，隨後經由CELITE過濾且用乙酸乙酯洗滌CELITE墊。接著分離濾液之水相並在真空中濃縮。用4N HCl之二噁烷溶液(5 mL)處理殘餘物且用甲醇萃取所得混合物，過濾並蒸發，得到呈綠色固體狀之Cap-174(260 mg)，其略受無機鹽污染，但不經進一步純化即使用。1 H NMR(300 MHz,DMSO-d6 )δppm 8.21(1 H,d,J =3.7 Hz),7.81-7.90(1 H,m),7.09(1 H,dd,J =7.7,4.8 Hz),6.98(1 H,dd,J =17.9,11.3 Hz),5.74(1 H,dd,J =17.9,1.5 Hz),5.20(1 H,d,J =11.0 Hz)。Rt =0.39分鐘(條件-MD1)；LC/MS:[M+H]+ C8 H8 NO2 之分析計算值：150.06；實驗值：150.07。
向3-(三氟甲基磺醯基氧基)吡啶甲酸甲酯(亦即Cap-174步驟a)(570 mg，2.0 mmol)(其為製備Cap-174之中間物)之DMF(20 mL)溶液中添加LiCl(254 mg，6.0 mmol)、三丁基(乙烯基)錫烷(761 mg，2.4 mmol)及二氯化雙(三苯基膦)鈀(42 mg，0.06 mmol)。在100℃下加熱混合物4小時，隨後在真空中移除溶劑。將殘餘物溶解於乙腈(50 mL)及己烷(50 mL)中且用己烷洗滌所得混合物兩次。接著分離乙腈層，經由CELITE過濾並蒸發。藉由在赫氏儀器(Horizon instrument)上急驟層析(用含25%乙酸乙酯之己烷至含65%乙酸乙酯之己烷梯度溶離)純化殘餘物，得到呈黃色油狀之3-乙烯基吡啶甲酸甲酯(亦即Cap-175步驟a)(130 mg，40%)。1 H NMR(300 MHz,CDCl3 )δppm 8.60(1 H,dd,J =4.6,1.7 Hz),7.94(1 H,d,J =7.7 Hz),7.33-7.51(2 H,m),5.72(1 H,d,J =17.2 Hz),5.47(1 H,d,J =11.0 Hz),3.99(3 H,s)。Rt =1.29分鐘(條件-MD1)；LC/MS:[M+H]+ C9 H10 NO2 之分析計算值：164.07；實驗值：164.06。
將鈀/碳(10%，25 mg)添加至3-乙烯基吡啶甲酸甲酯(120 mg，0.74 mmol)之乙醇(10 mL)溶液中。在室溫下在氫氣氛圍下攪拌懸浮液1小時，隨後經由CELITE過濾且用甲醇洗滌CELITE墊。將濾液濃縮至乾，得到3-乙基吡啶甲酸甲酯(亦即Cap-175步驟b)，其直接用於下一反應中。Rt =1.15分鐘(條件-MD1)；LC/MS：[M+H]+ C9 H12 NO2 之分析計算值：166.09；實驗值：166.09。Cap-175向3-乙基吡啶甲酸甲酯之THF/H2 O/MeOH(5 mL/0.75 mL/3 mL)溶液中添加LiOH(35 mg，1.47 mmol)。在室溫下攪拌混合物2天，隨後再添加LiOH(80 mg)。在室溫下再24小時，過濾混合物且在真空中移除溶劑。接著用4N HCl之二噁烷溶液(5 mL)處理殘餘物且將所得懸浮液濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之Cap-175，其不經進一步純化即使用。1 H NMR(300 MHz,DMSO-d6 )δppm 8.47(1 H,dd,J =4.8,1.5 Hz),7.82-7.89(1 H,m),7.53(1 H,dd,J =7.7,4.8 Hz),2.82(2 H,q,J =7.3 Hz),1.17(3 H,t,J =7.5 Hz)。Rt =0.36分鐘(條件-MD1)；LC/MS:[M+H]+ C8 H10 NO2 之分析計算值：152.07；實驗值：152.10。
將1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-酮(15 g，96 mmol)之EtOAc(150 mL)溶液添加至2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-(二甲氧基磷醯基)乙酸甲酯(21.21 g，64.0 mmol)於1,1,3,3-四甲基胍(10.45 mL，83 mmol)及EtOAc(150 mL)中之溶液中。在周圍溫度下攪拌所得溶液72小時，接著用EtOAc(25 mL)稀釋。用1 N HCl(75 mL)、H2 O(100 mL)及鹽水(100 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。經由BIOTAGE(5%至25% EtOAc/己烷；300 g管柱)純化殘餘物。接著在真空下濃縮合併之含有產物的溶離份且使殘餘物自己烷/EtOAc中再結晶，產生對應於2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-(1,4-二氧雜螺[4.5]癸-8-亞基)乙酸甲酯(6.2 g)之白色晶體。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 -d)δppm 7.30-7.44(5 H,m),6.02(1 H,br. s.),5.15(2 H,s),3.97(4 H,s),3.76(3 H,br.s.),2.84-2.92(2 H,m),2.47(2 H,t,J =6.40 Hz),1.74-1.83(4 H,m)。LC(條件OL1)：Rt =2.89分鐘。LC/MS:[M+Na]+ C19 H23 NNaO6 之分析計算值：745.21；實驗值：745.47。
根據Burk,M.J.等人(J. Am. Chem. Soc .,117:9375-9376(1995)及其中之參考文獻)之方法，由烯烴Cap-176步驟a製備酯Cap-176步驟b：在N2 層下將含烯烴Cap-176步驟a(3.5 g，9.68 mmol)之經脫氣MeOH(200 mL)裝入500 mL高壓瓶中。接著向溶液中裝入四氟硼酸(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷基)乙烷(環辛二烯)銠(I)(0.108 g，0.194 mmol)且用N2 (3次)沖洗所得混合物並裝入H2 (3次)。在周圍溫度下在70 psi H2 下有力地震盪溶液72小時。在減壓下移除溶劑且將剩餘殘餘物溶解於EtOAc中。接著經由矽膠塞過濾淡棕色溶液並用EtOAc溶離。在真空下濃縮溶劑，得到對應於酯Cap-176步驟b(3.4 g)之透明油狀物。1 H NMR(500 MHz,CDCl3 -d)δppm 7.28-7.43(5 H,m),5.32(1 H,d,J =9.16 Hz),5.06-5.16(2 H,m),4.37(1 H,dd,J =9.00,5.04 Hz),3.92(4 H,t,J =3.05 Hz),3.75(3 H,s),1.64-1.92(4 H,m),1.37-1.60(5 H,m)。LC(條件OL1)：Rt =1.95分鐘。LC/MS:[M+H]+ C19 H26 NO6 之分析計算值：364.18；實驗值：364.27。
將酯Cap-176步驟b(4.78 g，13.15 mmol)溶解於THF(15 mL)中，隨後依序添加水(10 mL)、冰乙酸(26.4 mL，460 mmol)及二氯乙酸(5.44 mL，65.8 mmol)。在周圍溫度下攪拌所得混合物72小時，且藉由在有力攪拌下減慢添加固體Na2 CO3 直至不再見到氣體釋放來淬滅反應物。用10%乙酸乙酯-二氯甲烷萃取粗產物且合併有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。經由BIOTAGE(0至30% EtOAc/Hex；25 g管柱)純化所得殘餘物，得到呈透明油狀之酮Cap-176步驟c(3.86 g)。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 -d)δppm 7.28-7.41(5 H,m),5.55(1 H,d,J =8.28 Hz),5.09(2 H,s),4.46(1 H,dd,J =8.16,5.14 Hz),3.74(3 H,s),2.18-2.46(5 H,m),1.96-2.06(1 H,m),1.90(1 H,ddd,J =12.99,5.96,2.89 Hz),1.44-1.68(2 H,m,J =12.36,12.36,12.36,12.36,4.77 Hz)。LC(條件OL1)：Rt =1.66分鐘。LC/MS:[M+Na]+ C17 H21 NNaO5 之分析計算值：342.13；實驗值：342.10。
將DEOXO-FLUOR(3.13 mL，16.97 mmol)添加至酮Cap-176步驟c(2.71 g，8.49 mmol)之CH2 Cl2 (50 mL)溶液中，隨後添加催化量之EtOH(0.149 mL，2.55 mmol)。在室溫下攪拌所得淺黃色溶液隔夜。藉由添加飽和NaHCO3 水溶液(25 mL)來淬滅反應物且用EtOAc(3×75 mL)萃取混合物。乾燥(MgSO4 )合併之有機層，過濾並乾燥，產生淺黃色油狀物。經由BIOTAGE層析(2%至15% EtOAc/Hex；90 g管柱)純化殘餘物且回收對應於二氟胺基酸二氟化物Cap-176步驟d(1.5 g)之白色固體。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 -d)δppm 7.29-7.46(5 H,m),5.34(1 H,d,J =8.28 Hz),5.12(2 H,s),4.41(1 H,dd,J =8.66,4.89 Hz),3.77(3 H,s),2.06-2.20(2 H,m),1.83-1.98(1 H,m),1.60-1.81(4 H,m),1.38-1.55(2 H,m)。19 F NMR(376 MHz,CDCl3 -d)δppm -92.15(1 F,d,J =237.55 Hz),-102.44(1 F,d,J =235.82 Hz)。LC(條件OL1)：Rt =1.66分鐘。LC/MS:[2M+Na]+ C34 H42 F4 N2 NaO8 之分析計算值：705.28；實驗值：705.18。
將二氟化物Cap-176步驟d(4 g，11.72 mmol)溶解於MeOH(120 mL)中且裝入Pd/C(1.247 g，1.172 mmol)。用N2 (3次)沖洗懸浮液且將反應混合物置於1 atm H2 (氣球)下。在周圍溫度下攪拌混合物48小時。接著經由CELITE塞過濾懸浮液且在真空下濃縮，產生對應於胺基酸Cap-176步驟e(2.04 g)且不經進一步純化即使用之油狀物。1 HNMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 3.62(3 H,s),3.20(1 H,d,J =5.77 Hz),1.91-2.09(2 H,m),1.50-1.88(7 H,m),1.20-1.45(2 H,m)。19 F NMR(376 MHz,DMSO-d6 )δppm-89.39(1 F,d,J =232.35 Hz),-100.07(1 F,d,J =232.35 Hz)。13 C NMR(101 MHz,DMSO-d6 )δppm 175.51(1 C,s),124.10(1 C,t,J =241.21,238.90 Hz),57.74(1 C,s),51.39(1 C,s),39.23(1 C,br. s.),32.02-33.83(2 C,m),25.36(1 C,d,J =10.02 Hz),23.74(1 C,d,J =9.25 Hz)。LC(條件OL2)：Rt =0.95分鐘。LC/MS:[2M+H]+ C18 H21 F4 N2 O2 之分析計算值：415.22；實驗值：415.40。
將氯甲酸甲酯(1.495 mL，19.30 mmol)添加至胺基酸Cap-176步驟e(2 g，9.65 mmol)及DIEA(6.74 mL，38.6 mmol)於CH2 Cl2 (100 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌所得溶液3小時且在減壓下移除揮發性物質。經由BIOTAGE(0%至20% EtOAc/Hex；90 g管柱)純化殘餘物。回收在真空下靜置後凝固且對應於胺基甲酸酯Cap-176步驟f(2.22 g)之透明油狀物。1 H NMR(500 MHz,CDCl3 -d)δppm 5.27(1 H,d,J =8.55 Hz),4.39(1 H,dd,J =8.85,4.88 Hz),3.77(3 H,s),3.70(3 H,s),2.07-2.20(2 H,m),1.84-1.96(1 H,m),1.64-1.82(4 H,m),1.39-1.51(2 H,m)。19 F NMR(471 MHz,CDCl3 -d)δppm-92.55(1 F,d,J =237.13 Hz),-102.93(1 F,d,J =237.12 Hz)。13 C NMR(126 MHz,CDCl3 -d)δppm 171.97(1 C,s),156.69(1 C,s),119.77-125.59(1 C,m),57.24(1 C,br. s.),52.48(1 C,br. s.),52.43(1 C,s),39.15(1 C,s),32.50-33.48(2 C,m),25.30(1 C,d,J =9.60 Hz),24.03(1 C,d,J =9.60 Hz)。LC(條件OL1)：Rt =1.49分鐘。LC/MS:[M+Na]+ C11 H17 F2 NNaO4 之分析計算值：288.10；實驗值：288.03。
將LiOH(0.379 g，15.83 mmol)之水(25 mL)溶液添加至胺基甲酸酯Cap-176步驟f(2.1 g，7.92 mmol)之THF(75 mL)溶液中且在周圍溫度下攪拌所得混合物4小時。在真空下移除THF且用1 N HCl溶液(2 mL)酸化剩餘水相，接著用EtOAc(2×50 mL)萃取。乾燥(MgSO4 )合併之有機層，過濾並濃縮，產生對應於Cap-176(1.92 g)之白色泡沫。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 12.73(1 H,s),7.50(1 H,d,J =8.78 Hz),3.97(1 H,dd,J =8.53,6.02 Hz),3.54(3 H,s),1.92-2.08(2 H,m),1.57-1.90(5 H,m),1.34-1.48(1 H,m),1.27(1 H,qd,J =12.72,3.26 Hz)。19 F NMR(376 MHz,DMSO-d6 )δppm-89.62(1 F,d,J =232.35 Hz),-99.93(1 F,d,J =232.35 Hz)。LC(條件OL2)：Rt =0.76分鐘。LC/MS:[M-H]+ C10 H14 F2 NO4 之分析計算值：250.09；實驗值：250.10。
將1,1,3,3-四甲基胍(0.985 mL，7.85 mmol)添加至經攪拌之2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-(二甲氧基磷醯基)乙酸甲酯(2.0 g，6.0 mmol)的EtOAc(40 mL)溶液中且在N2 下在室溫下攪拌混合物10分鐘。接著添加二氫-2H-哌喃-3(4H)-酮(0.604 g，6.04 mmol)且在室溫下攪拌混合物16小時。接著在冷凍器中冷卻反應混合物10分鐘且用檸檬酸水溶液(含1.5 g之20 mL水)中和。分配兩相且用0.25 N HCl水溶液及鹽水洗滌有機層，接著乾燥(MgSO4 )並濃縮成無色油狀物。藉由急驟二氧化矽層析(裝載溶劑：DCM，用EtOAc/己烷溶離，梯度為20%至30% EtOAc)純化粗物質，得到兩種異構產物：第一溶離產物為(Z)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-(2H-哌喃-3(4H,5H,6H)-亞基)乙酸甲酯(490 mg)(白色固體)，且第二溶離產物為(E)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-(2H-哌喃-3(4H,5H,6H)-亞基)乙酸甲酯(433 mg)(白色固體)。LC-MS滯留時間1.398分鐘(對於Z-異構體)及1.378分鐘(對於E-異構體)；m/z 304.08(對於Z-異構體)及304.16(對於E-異構體)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)(對於Z-異構體)δppm 7.30-7.44(m,5 H),6.18(br. s.,1 H),5.10-5.17(m,2 H),4.22(s,2 H),3.78(br. s.,3 H),2.93-3.02(m,2 H),1.80(dt,J =11.7,5.8 Hz,2 H),1.62(s,2 H)。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)(對於E-異構體)δppm 7.31-7.44(m,5 H),6.12(br. s.,1 H),5.13-5.17(m,2 H),4.64(br. s.,2 H),3.70-3.82(m,5 H),2.49(t,J =6.5 Hz,2 H),1.80(br. s.,2 H)。(應注意：由1 H NMR位移及偶合常數確定絕對區位化學)。
將四氟硼酸(-)-1,2-雙((2S,5S)-2,5-二甲基磷基)乙烷(環辛二烯)-銠(I)(28.2 mg，0.051 mmol)添加至經攪拌之(Z)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-(2H-哌喃-3(4H,5H,6H)-亞基)乙酸甲酯(310 mg，1.015 mmol)的MeOH(10 mL)溶液中且依序用N2 、H2 真空沖洗混合物，接著在室溫下在H2 (60 psi)下攪拌反應物2天。濃縮反應混合物且藉由急驟二氧化矽層析(裝載溶劑：DCM，用含20% EtOAc之己烷溶離)純化殘餘物，得到呈透明無色油狀之(S)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-((S)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸甲酯(204 mg)。LC-MS滯留時間1.437分鐘；m/z 307.89(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 7.30-7.46(m,5 H),5.32(d,J =8.8 Hz,1 H),5.12(s,2 H),4.36(dd,J =8.9,5.6 Hz,1 H),3.84-3.98(m,2 H),3.77(s,3 H),3.28-3.37(m,1 H),3.23(dd,J =11.3,10.5 Hz,1 H),2.04-2.16(m,1 H),1.61-1.75(m,3 H),1.31-1.43(m,1 H)。
以類似方式還原另一立體異構體((E)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-(2H-哌喃-3(4H,5H,6H)-亞基)乙酸甲酯)(360mg，1.18 mmol)，得到呈透明無色油狀之(S)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-((R)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸甲酯(214 mg)。LC-MS滯留時間1.437分鐘；m/z 308.03(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 7.30-7.44(m,5 H),5.31(d,J =9.0 Hz,1 H),5.12(s,2 H),4.31(dd,J =8.7,6.9 Hz,1 H),3.80-3.90(m,2 H),3.77(s,3 H),3.37(td,J =10.8,3.5 Hz,1 H),3.28(dd,J =11.3,9.8 Hz,1 H),1.97-2.10(m,1 H),1.81(d,J =11.5 Hz,1 H),1.61-1.72(m,2 H),1.33-1.46(m,1 H)。
將10% Pd/C(69.3 mg，0.065 mmol)添加至(S)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-((S)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸甲酯(200 mg，0.651 mmol)及二碳酸二甲酯[4525-33-1](0.104 mL，0.976 mmol)於MeOH(10 mL)中之溶液中。依序用N2 、H2 真空沖洗反應混合物，接著在室溫下在H2 (55 psi)下攪拌反應物5小時。經由CELITE/二氧化矽墊過濾反應混合物且將濾液濃縮成無色油狀物。藉由急驟二氧化矽層析(裝載溶劑：DCM，用含30% EtOAc之己烷溶離)純化粗油狀物，得到呈無色油狀之產物(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-((S)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸甲酯(132 mg)。LC-MS滯留時間0.92分鐘；m/z 231.97(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 5.24(d,J =8.5 Hz,1 H),4.34(dd,J =8.9,5.6 Hz,1 H),3.84-3.97(m,2 H),3.77(s,3 H),3.70(s,3 H),3.29-3.38(m,1 H),3.23(dd,J =11.2,10.4 Hz,1 H),2.03-2.14(m,1 H),1.56-1.75(m,3 H),1.32-1.43(m,1 H)。
以類似方式轉化另一非對映異構體((S)-2-(苯甲基氧基羰基胺基)-2-((R)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸甲酯)，得到呈透明無色油狀之(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-((R)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸甲酯。LC-MS滯留時間0.99分鐘；m/z 231.90(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 5.25(d,J =8.0 Hz,1 H),4.29(dd,J =8.4,7.2 Hz,1 H),3.82-3.90(m,2 H),3.77(s,3 H),3.70(s,3 H),3.37(td,J =10.8,3.3 Hz,1 H),3.28(t,J =10.5 Hz,1 H),1.96-2.08(m,1 H),1.81(dd,J =12.9,1.6 Hz,1 H),1.56-1.72(m,2 H),1.33-1.46(m,1 H)。
在室溫下向經攪拌之(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-((S)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸甲酯(126 mg，0.545 mmol)之THF(4 mL)溶液中添加1 M LiOH(1.090 mL，1.090 mmol)之水溶液。在室溫下攪拌反應物3小時，用1 M HCl(1.1 mL)中和且用EtOAc(3×10 mL)萃取。乾燥有機層，過濾並濃縮，得到呈透明無色油狀之(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-((S)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸(Cap-177a)(125 mg)。LC-MS滯留時間0.44分鐘；m/z 218.00(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 5.28(d,J =8.8 Hz,1 H),4.38(dd,J =8.7,5.6 Hz,1 H),3.96-4.04(m,1 H),3.91(d,J =11.0 Hz,1 H),3.71(s,3 H),3.33-3.41(m,1 H),3.24-3.32(m,1 H),2.10-2.24(m,1 H),1.74-1.83(m,1 H),1.63-1.71(m,2 H),1.35-1.49(m,1 H)。
以類似方式轉化另一非對映異構體((S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-((R)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸甲酯)，得到呈透明無色油狀之(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-((R)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸(Cap-177b)。LC-MS滯留時間0.41分鐘；m/z 217.93(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 6.18(br.s.,1 H),5.39(d,J =8.5 Hz,1 H),4.27-4.37(m,1 H),3.82-3.96(m,2H),3.72(s,3H),3.42(td,J =10.8,3.3 Hz,1 H),3.35(t,J =10.4 Hz,1 H),2.01-2.18(m,1 H),1.90(d,J =11.8 Hz,1 H),1.59-1.76(m,2 H),1.40-1.54(m,1 H)。
在氫化槽中向(2S,3S,4S)-二乙酸2-甲基-3,4-二氫-2H-哌喃-3,4-二基酯(5 g，23.34 mmol)之20 mL MeOH溶液中添加Pd/C(150 mg，0.141 mmol)。在40 psi下在帕爾震盪器上使所得混合物氫化1小時。接著過濾混合物且濃縮濾液，產生呈透明油狀之Cap-178步驟a(5.0 g)，其在靜置後凝固。1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 4.85-4.94(1 H,m),4.69(1H,t,J =9.46 Hz),3.88-3.94(1 H,m),3.44(1 H,td,J =12.21,1.83 Hz),3.36(1 H,dq,J =9.42,6.12 Hz),2.03-2.08(1 H,m),2.02(3 H,s),2.00(3 H,s),1.70-1.80(1 H,m),1.16(3 H,d,J =6.10 Hz)。
向Cap-178步驟a(5.0 g，23 mmol)之50 mL MeOH溶液中添加數滴甲醇鈉。在室溫下攪拌30分鐘後，添加甲醇鈉(0.1 mL，23.12 mmol)且在室溫下攪拌溶液隔夜。接著在真空下移除溶劑。用苯稀釋殘餘物並濃縮，產生呈黃色固體狀之相應二醇。將固體溶解於50 mL吡啶中且在-35℃下向此溶液中逐滴添加苯甲醯氯(2.95 mL，25.4 mmol)。在-35℃下攪拌所得混合物1小時，接著在室溫下攪拌隔夜。用Et2 O稀釋混合物且用水洗滌。用EtOAc(2次)萃取水層。用MgSO4 乾燥合併之有機層並濃縮。藉由急驟層析(矽膠，5%-15% EtOAc/Hex)純化粗產物，產生呈透明油狀之Cap-178步驟b(4.5 g)，其在長時間靜置後緩慢結晶。LC/MS:[M+Na]+ C13 H16 NaO4 之分析計算值：259.09；實驗值：259.0；1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 8.02-8.07(2 H,m),7.55-7.61(1 H,m),7.45(2 H,t,J =7.78 Hz),5.01(1 H,ddd,J =11.44,8.70,5.49 Hz),3.98(1 H,ddd,J =11.90,4.88,1.53 Hz),3.54(1H,td,J =12.36,2.14 Hz),3.41(1 H,t,J =9.00 Hz),3.31-3.38(1 H,m),2.13-2.19(1 H,m),1.83-1.94(1 H,m),1.36(3 H,d,J =5.80 Hz)。
經15分鐘向NaH(1.143 g，28.6 mmol)(60%礦物油溶液)於6 mL CS2 中之混合物中逐滴添加Cap-178步驟b(4.5 g，19 mmol)之40 mL CS2 溶液。在室溫下攪拌所得混合物30分鐘。混合物變成淺橙色且含有一些固體。接著經20分鐘逐滴添加MeI(14.29 mL，229 mmol)。接著在室溫下攪拌混合物隔夜。小心地用飽和NH4 Cl溶液淬滅反應物。用EtOAc(3次)萃取混合物。用MgSO4 乾燥合併之有機層並濃縮。藉由急驟層析(矽膠，6% EtOAc/Hex)純化粗產物，得到呈透明油狀之Cap-178步驟c(3.13 g)。LC/MS:[M+Na]+ C15 H18 NaO4 S2 之分析計算值：349.05；實驗值：349.11；1 H NMR(500 MHz,CDCl3 )δppm 7.94-8.00(2 H,m),7.50-7.58(1 H,m),7.41(2 H,t,J =7.78 Hz),5.96(1 H,t,J =9.46 Hz),5.28(1 H,ddd,J =11.37,9.38,5.49 Hz),4.02(1 H,ddd,J =11.98,4.96,1.68 Hz),3.54-3.68(2 H,m),2.48(3 H,s),2.31(1 H,dd),1.88-1.99(1 H,m),1.28(3 H,d)。
在80℃下向Cap-178步驟c(3.13 g，9.59 mmol)及AIBN(120 mg，0.731 mmol)於40 mL苯中之混合物中添加氫化三正丁基錫(10.24 mL，38.4 mmol)。在回流溫度下攪拌所得混合物20分鐘，接著冷卻至室溫。用乙醚稀釋混合物且添加100 mL KF(10 g)水溶液並用力攪拌混合物30分鐘。接著分離兩層且用EtOAc(2次)萃取水相。用MgSO4 乾燥有機層並濃縮。藉由急驟層析(矽膠，用含3% Et3 N之己烷去活且用含3% Et3 N之己烷沖洗以移除三丁基錫衍生物，接著用15% EtOAc/Hex溶離)純化粗產物，產生呈透明油狀之Cap-178步驟d(1.9 g)。1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 7.98-8.07(2 H,m),7.52-7.58(1 H,m),7.43(2 H,t,J =7.63 Hz),5.08-5.17(1 H,m),4.06(1 H,ddd,J =11.90,4.88,1.53 Hz),3.50-3.59(2 H,m),2.08-2.14(1 H,m),1.99-2.06(1 H,m),1.69-1.80(1 H,m),1.41-1.49(1 H,m),1.24(3 H,d,J =6.10 Hz)。
向Cap-178步驟d(1.9 g，8.63 mmol)於10 mL MeOH中之混合物中添加甲醇鈉(2 mL，4.00 mmol)(2 M甲醇溶液)。在室溫下攪拌所得混合物5小時。在真空下移除溶劑。用飽和NH4 Cl溶液中和混合物且用EtOAc(3次)萃取。用MgSO4 乾燥有機層並濃縮，產生呈透明油狀之Cap-178步驟e(0.8 g)。產物不經進一步純化即用於下一步驟中。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 4.01(1 H,ddd,J =11.80,5.02,1.76 Hz),3.73-3.83(1 H,m),3.36-3.46(2 H,m),1.92-2.00(1 H,m),1.88(1 H,m),1.43-1.56(1 H,m),1.23(3 H,d),1.15-1.29(1 H,m)。
將甲苯磺醯氯(2.63 g，13.77 mmol)添加至Cap-178步驟e(0.8 g，6.89 mmol)及吡啶(2.23 mL，27.5 mmol)於100 mL CH2 Cl2 中之溶液中。在室溫下攪拌所得混合物3天。接著將10 mL水添加至反應混合物中且在室溫下攪拌混合物1小時。分離兩層且用水及1 N HCl水溶液洗滌有機相。用MgSO4 乾燥有機相並濃縮，產生呈淡黃色固體狀之Cap-178步驟f(1.75 g)。產物不經進一步純化即用於下一步驟中。[M+H]+ C13 H19 O4 S之分析計算值：271.10；實驗值：270.90；1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 7.79(2 H,d,J =8.24 Hz),7.34(2 H,d,J =7.93 Hz),4.53-4.62(1 H,m),3.94(1 H,ddd,J =12.13,4.96,1.83 Hz),3.29-3.41(2 H,m),2.45(3 H,s),1.90-1.97(1 H,m),1.79-1.85(1 H,m),1.64-1.75(1 H,m),1.38-1.48(1 H,m),1.17(3 H,d,J =6.10 Hz)。
向微波管中置放2-(二苯基亞甲基胺基)乙酸乙酯(1.6 g，5.92 mmol)及Cap-178步驟f(1.6 g，5.92 mmol)。添加10mL甲苯。密封該管且在N2 下逐滴添加LiHMDS(7.1 mL，7.10 mmol)(1 N甲苯溶液)。在100℃下在微波輻射下加熱所得深棕色溶液6小時。接著向混合物中添加水且用EtOAc(3次)萃取混合物。用鹽水洗滌合併之有機層，用MgSO4 乾燥並濃縮，產生呈橙色油狀之Cap-3步驟g(3.1 g)之非對映異構混合物。粗混合物不經分離即進行下一步驟。LC/MS:[M+H]+ C23 H28 NO3 之分析計算值：366.21；實驗值：366.3。
向乙基Cap-178步驟g之非對映異構混合物的20 mL THF溶液中添加HCl(30 mL，60.0 mmol)(2 N水溶液)。在室溫下攪拌所得混合物1小時。用EtOAc萃取混合物且濃縮水層，產生呈橙色油狀之Cap-178步驟h的鹽酸鹽(1.9 g)。該鹽不經進一步純化即用於下一步驟中。LC/MS:[M+H]+ C10 H20 NO3 之分析計算值：202.14；實驗值：202.1。
在室溫下將1.9 g Cap-178步驟h(鹽酸鹽)、DiPEA(4.19 mL，24.0 mmol)及氯甲酸甲酯(1.24 mL，16.0 mmol)於20 mL CH2 Cl2 中之溶液攪拌1小時。用CH2 Cl2 稀釋混合物且用水洗滌。用Na2 SO4 乾燥有機層並濃縮。藉由急驟層析(矽膠，0-20% EtOAc/Hex)純化粗產物，產生呈黃色油狀之Cap-178步驟i(1.1 g)。[M+Na]+ C12 H21 NNaO5 之分析計算值：282.13；實驗值：282.14；1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 5.16(1 H,br. s.),4.43-4.58(1 H,m),4.17-4.28(2 H,m),3.89-4.03(1 H,m),3.72-3.78(2 H,m),3.67-3.72(3 H,m),2.07-2.19(1 H,m),1.35-1.77(4 H,m),1.30(3 H,td,J =7.09,2.89 Hz),1.19(3 H,d,J =6.53 Hz)。
向Cap-178步驟i(1.1 g，4.2 mmol)於5 mL THF及2 mL水中之混合物中添加LiOH(6.36 mL，12.7 mmol)(2 N水溶液)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。接著用1 N HCl水溶液中和混合物且用EtOAc(3次)萃取。用MgSO4 乾燥合併之有機層並濃縮，產生呈透明油狀之Cap-178步驟j(0.8 g)。LC/MS:[M+H]+ C10 H18 NO5 之分析計算值：232.12；實驗值：232.1；1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 5.20(1 H,d,J =8.28 Hz),4.54(1H,t,J =8.16 Hz),3.95-4.10(1 H,m),3.66-3.85(5 H,m),2.15-2.29(1 H,m),1.41-1.85(4 H,m),1.23(3 H,dd,J =6.53,1.76 Hz)。
向Cap-178步驟j(240 mg，1.04 mmol)、(S)-1-苯基乙醇(0.141 mL，1.142 mmol)及EDC(219 mg，1.14 mmol)於10 mL CH2 Cl2 中之溶液中添加DMAP(13.95 mg，0.114 mmol)。在室溫下攪拌所得溶液隔夜且在真空下移除溶劑。將殘餘物溶解於EtOAc中，用水洗滌，用MgSO4 乾燥並濃縮。藉由層析(矽膠，0-15% EtOAc/己烷)來純化粗產物，得到呈兩種非對映異構體之混合物形式之Cap-178步驟k。藉由對掌性HPLC(CHIRALPAKAS管柱，21×250 mm，10 μm)，用90% 0.1%二乙基胺/庚烷-10% EtOH以15 mL/min溶離來分離混合物，產生呈白色固體狀之Cap-178步驟k立體異構體1(第一個溶離出)及Cap-178步驟k立體異構體2(第二個溶離出)。不確定異構體之立體化學。Cap-178步驟k立體異構體1(130 mg)：LC/MS: [M+Na]+ C18 H25 NNaO5 之分析計算值：358.16；實驗值：358.16；1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 7.28-7.38(5 H,m),5.94(1 H,q,J =6.71 Hz),5.12(1 H,d,J =9.16 Hz),4.55(1 H,t,J =9.00 Hz),3.72-3.81(1 H,m),3.67(3 H,s),3.60-3.70(2 H,m),1.98-2.08(1 H,m),1.59(3 H,d,J =6.71 Hz),1.38-1.47(2 H,m),1.30(2 H,t,J =5.34 Hz),0.93(3 H,d,J =6.41 Hz)。
向Cap-178步驟k立體異構體1((S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-((2S,4R)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸)(150 mg，0.447 mmol)之10 mL EtOH溶液中添加Pd/C(20 mg，0.188 mmol)且在40 psi下在帕爾震盪器上使混合物氫化隔夜。接著過濾混合物且濃縮濾液，產生呈黏性白色固體狀之Cap-178立體異構體1(100 mg)。LC/MS:[M+H]+ C10 H18 NO5 之分析計算值：232.12；實驗值：232.1；1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 5.14-5.27(1 H,m),4.51(1 H,t,J =8.39 Hz),3.90-4.07(1 H,m),3.60-3.83(5 H,m),2.06-2.27(1 H,m),1.45-1.77(4 H,m),1.21(3 H,d,J =6.41 Hz)。
將2,6-二甲基-4H-哌喃-4-酮(10 g，81 mmol)溶解於乙醇(125 mL)中且添加Pd/C(1 g，0.94 mmol)。在室溫下在H2 (0.325 g，161 mmol)(70 psi)下在帕爾震盪器中使混合物氫化12小時。經由CELITE墊過濾催化劑且用乙醇洗滌。在真空中濃縮濾液且經由BIOTAGE(2%至25% EtOAc/Hex；160 g管柱)純化殘餘物。分離出兩份透明油狀物溶離份。第一個溶離之物質對應於(2R,6S)-2,6-二甲基二氫-2H-哌喃-4(3H)-酮(1.8 g，14.04 mmol，17.43%產率)，而第二個溶離之物質對應於Cap-179步驟a(1.8 g)。(2R,6S)-2,6-二甲基二氫-2H-哌喃-4(3H)-酮數據：1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 3.69(2 H,ddd,J =11.29,5.95,2.29 Hz),2.24-2.36(2 H,m),2.08-2.23(2 H,m),1.18-1.34(6 H,m)；13 C NMR(126 MHz,氯仿-d)δppm 206.96(1 C,br. s.),72.69(2 C,s),48.70(2 C,s),21.72(2 C,s)。Cap-179步驟a數據：1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 3.69-3.78(1 H,m),3.36-3.47(2 H,m),2.10(1 H,br. s.),1.88(2 H,dd,J =12.05,4.73 Hz),1.19(6 H,d,J =6.10 Hz),1.10(2 H,q,J =10.70 Hz)；13 C NMR(126 MHz,氯仿-d)δppm 71.44(2 C,s),67.92(1 C,s),42.59(2 C,s),21.71(2 C,s)。
將DEAD(2.311 mL，14.59 mmol)逐滴添加至Cap-179步驟a(0.38 g，2.92 mmol)、4-硝基苯甲酸(2.195 g，13.14 mmol)及Ph3 P(3.83 g，14.59 mmol)於苯(25 mL)中之溶液中。偵測到放熱且在周圍溫度下攪拌所得琥珀色溶液6小時。在減壓下移除溶劑且經由BIOTAGE(0至15% EtOAc/Hex；80 g管柱)純化殘餘物。分離出對應於Cap-179步驟b(0.77 g)之白色固體。LC/MS: [M]+ C14 H17 NO5 之分析計算值：279.11；實驗值：279.12。1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 8.27-8.32(2 H,m),8.20-8.24(2 H,m),5.45(1 H,五重峰,J =2.82 Hz),3.92(2 H,dqd,J =11.90,6.10,6.10,6.10,1.53 Hz),1.91(2 H,dd,J =14.80,2.29 Hz),1.57(3 H,dt,J =14.65,3.05 Hz),1.22(6 H,d,J =6.10 Hz)。
將LiOH(0.330 g，13.8 mmol)之水(8 mL)溶液添加至Cap-179步驟b(0.77 g，2.76 mmol)之THF(30 mL)溶液中且在周圍溫度下攪拌所得混合物16小時。在減壓下移除THF且再用水(20 mL)稀釋水層並用EtOAc(3×15 mL)萃取。乾燥(MgSO4 )合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。回收含白色固體之油狀殘餘物。用己烷濕磨混合物且濾出固體，得到對應於Cap-179步驟c(0.34 g，2.61 mmol，95%產率)之透明油狀物。1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 4.21(1 H,五重峰,J =2.82 Hz),3.87-3.95(2 H,m),1.72(1 H,br. s.),1.63(2 H,dd,J =14.34,2.14 Hz),1.39-1.47(2 H,m),1.17(6 H,d,J =6.41 Hz)。
在室溫下將對甲苯磺醯氯(3.98 g，20.89 mmol)添加至Cap-179步驟c(1.36 g，10.5 mmol)及吡啶(3.38 mL，41.8 mmol)於CH2 Cl2 (150 mL)中之溶液中且攪拌24小時，接著濃縮成黃色油狀物。將剩餘殘餘物添加至吡啶(20 mL)及水(30 mL)中且在周圍溫度下攪拌所得混合物1.5小時。用Et2 O(75 mL)萃取混合物且用1 N HCl水溶液(4×50 mL)充分洗滌分離之有機層。接著乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並濃縮。分離出對應於Cap-179步驟d(2.2 g)之白色固體。LC/MS:[2M+H]+ C28 H41 O8 S2 之分析計算值：569.22；實驗值：569.3。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 7.80(2 H,d,J =8.28 Hz),7.35(2 H,d,J =8.03 Hz),4.89(1 H,五重峰,J =2.82 Hz),3.77-3.88(2 H,m),2.46(3 H,s),1.77(2 H,dd,J =14.93,2.89 Hz),1.36(2 H,ddd,J =14.31,11.54,2.76 Hz),1.13(6 H,d,J =6.27 Hz)。
在室溫下在密封微波小瓶中將LiHMDS(4.30 mL，4.30 mmol)添加至Cap-179步驟d(1.02 g，3.59 mmol)及2-(二苯基亞甲基胺基)乙酸苯甲酯(1.181 g，3.59 mmol)於甲苯(25 mL)中之溶液中，接著在100℃下在微波輻射下攪拌所得混合物5小時。用水(10 mL)淬滅反應物，用EtOAc萃取，用水洗滌，經MgSO4 乾燥，濾液並在真空中濃縮。經由BIOTAGE(0%至6% EtOAc/Hex；80 g管柱)純化殘餘物且分離出對應於Cap-179步驟e(1.2 g)之黃色油狀物。[2M+Na]+ C58 H62 N2 NaO6 之分析計算值：905.45；實驗值：905.42。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 7.64-7.70(4 H,m),7.29-7.44(29 H,m),7.06(4 H,dd,J =7.65,1.63 Hz),5.18(2 H,d,J =2.01 Hz),3.89(2 H,d,J =6.53 Hz),3.79-3.87(1 H,m),3.46(5 H,dquind,J =11.26,5.87,5.87,5.87,5.87,1.88 Hz),2.47(2 H,s),2.35-2.46(2 H,m),1.78(1 H,dd,J =14.81,3.01 Hz),1.62-1.65(1 H,m),1.61(2 H,s),1.36-1.43(3 H,m),1.19(7 H,d,J =6.27 Hz),1.14(11 H,dd,J =6.15,2.89 Hz),0.86-0.96(3 H,m)。
將Cap-179步驟d(2.08 g，4.71 mmol)溶解於THF(100 mL)中且用2 N HCl(9.42 mL，18.84 mmol)處理。在周圍溫度下攪拌所得透明溶液4小時，接著在減壓下移除THF。用己烷(3×20 mL)萃取剩餘水層且在用H2 O(20 mL)稀釋後，用1 N NaOH將水相鹼化至pH=10並用EtOAc(3×10 mL)萃取。乾燥(MgSO4 )合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。將所得殘餘物溶解於CH2 Cl2 (100 mL)中且裝入DIEA(2.468 mL，14.13 mmol)及氯甲酸甲酯(0.401 mL，5.18 mmol)。在周圍溫度下攪拌所得溶液2小時。用水(10 mL)淬滅反應混合物且在減壓下移除有機層。接著用EtOAc(3×10 mL)萃取水層且乾燥(MgSO4 )合併之有機層，過濾並濃縮。經由BIOTAGE(10% EtOAc/Hex；25 g管柱)純化殘餘物。回收對應於Cap-179步驟f(1.05 g)之透明無色油狀物。LC/MS:[M+H]+ C18 H26 NO5 之分析計算值：336.18；實驗值：336.3。1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 7.32-7.40(5 H,m),5.26(1 H,d,J =8.24 Hz),5.13-5.24(2 H,m),4.36(1 H,dd,J =8.85,4.88 Hz),3.68(3 H,s),3.32-3.46(2 H,m),2.02-2.14(1 H,m),1.52(1 H,d,J =12.82 Hz),1.32(1 H,d,J =12.51 Hz),1.11-1.18(6 H,m),0.89-1.07(2 H,m)。
開發在CHIRALPAKAD-H管柱(30×250 mm，5 μm)(溫度=35℃，壓力=150巴，波長=210 nm，流速=70 mL/min，歷時8分鐘，溶劑A=CO2 ，溶劑B=MeOH)上藉由使用12%甲醇作為調節劑來分離立體異構體混合物之對掌性SFC方法。兩種經分離之異構體Cap-179步驟f(立體異構體1)(第一個溶離)及Cap-179步驟f(立體異構體2)(第二個溶離)顯示與相應混合物相同之分析數據(參見上文)。
在帕爾瓶中將Cap-179步驟f(立體異構體1)(0.35 g，1.044 mmol)溶解於MeOH(50 mL)中且裝入Pd/C(0.111 g，1.044 mmol)。接著將懸浮液置於帕爾震盪器中且用N2 (3次)沖洗混合物，置於40 psi H2 (2.104 mg，1.044 mmol)下並在室溫下震盪2小時。經由CELITE墊濾出催化劑且在減壓下移除溶劑，得到對應於Cap-179立體異構體1(0.25 g，1.019 mmol，98%產率)之琥珀色固體。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 12.74(4 H,br. s.),7.35(4 H,d,J =6.10 Hz),3.85(4 H,br. s.),3.53(3 H,s),3.35(2 H,ddd,J =15.95,9.99,6.10 Hz),1.97(1 H,br. s.),1.48(2 H,t,J =13.28 Hz),1.06(6 H,d,J =6.10 Hz),0.82-1.00(2 H,m)根據用於製備Cap-179立體異構體1之程序，使用Cap-179步驟f(立體異構體1)作為起始物質來獲得Cap-179立體異構體2。Cap-179立體異構體2：1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 12.50(1 H,br. s.),7.31(1H,br. s.),3.84(1 H,t,J =7.32 Hz),3.53(3 H,s),3.29-3.41(2 H,m),1.99(1 H,s),1.48(2 H,t,J =14.34 Hz),1.06(6 H,d,J =6.10 Hz),0.95(1 H,q,J =12.21 Hz),0.87(1 H,q,J =11.80 Hz)。
在室溫下將對甲苯磺醯氯(4.39 g，23.0 mmol)添加至Cap-179步驟a(1.50 g，11.5 mmol)及吡啶(3.73 mL，46.1 mmol)於CH2 Cl2 (50 mL)中之溶液中且攪拌2天。用CH2 Cl2 稀釋反應物，依序用水及1 N HCl洗滌。乾燥(MgSO4 )有機層並濃縮成黃色油狀物，其經由BIOTAGE(5%至20%EtOAc/Hex；40 g管柱)純化。分離出在真空下凝固且對應於Cap-180-2a(2.89 g)之透明油狀物。LC/MS:[2M+Na]+ C28 H40 NaO8 S2 之分析計算值：591.21；實驗值：591.3。1 H NMR(500 MHz,氯仿-d)δppm 7.80(2 H,d,J =8.24 Hz),7.35(2 H,d,J =7.93 Hz),4.59(1 H,tt,J =11.37,4.96 Hz),3.36-3.46(2 H,m),2.46(3 H,s),1.91(2 H,dd,J =12.05,5.04 Hz),1.37(2 H,dt,J =12.67,11.52 Hz),1.19(6 H,d,J =6.10 Hz)。
在室溫下將1 N LiHMDS(7.09 mL，7.09 mmol)添加至Cap-180步驟a(1.68 g，5.91 mmol)及2-(二苯基亞甲基胺基)乙酸乙酯(1.579 g，5.91 mmol)於甲苯(30 mL)中之溶液中，接著在85℃下攪拌所得混合物16小時。用水(50 mL)淬滅反應物，用EtOAc萃取，用水洗滌，經MgSO4 乾燥，過濾且在真空中濃縮。經由BIOTAGE(0%至15% EtOAc/Hex；40 g管柱)純化殘餘物。分離出對應於Cap-180步驟b(立體異構體混合物)(0.64 g)之透明淺黃色油狀物。LC/MS:[M+H]+ C24 H30 NO3 之分析計算值：380.22；實驗值：380.03。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 7.64-7.70(2 H,m),7.45-7.51(3 H,m),7.38-7.44(1 H,m),7.31-7.37(2 H,m),7.13-7.19(2 H,m),4.39(1 H,d,J =10.54 Hz),4.16-4.26(2 H,m),3.29-3.39(1 H,m),2.93-3.03(1 H,m),2.70(1 H,m,J =9.41,4.14 Hz),1.42-1.49(2 H,m),1.31-1.37(1 H,m),1.29(4 H,t,J =7.15 Hz),1.04(6 H,dd,J =7.78,6.27 Hz)。
將Cap-180步驟b(0.36 g，0.949 mmol)溶解於THF(10 mL)中且用2 N HCl(1.897 mL，3.79 mmol)處理。在周圍溫度下攪拌所得透明溶液20小時且在減壓下移除THF。用己烷(3×20 mL)萃取剩餘水層且在用H2 O(20 mL)稀釋後，用1 N NaOH將水相鹼化至pH=10並用EtOAc(3×10 mL)萃取。乾燥(MgSO4 )合併之有機層，過濾並在真空下濃縮。將所得殘餘物溶解於CH2 Cl2 (10.00 mL)中且裝入DIEA(0.497 mL，2.85 mmol)及氯甲酸甲酯(0.081 mL，1.044 mmol)。在周圍溫度下攪拌所得溶液2小時且用水(10 mL)淬滅反應混合物並在減壓下移除有機層。用EtOAc(3×10 mL)萃取水層且乾燥(MgSO4 )合併之有機層，過濾並濃縮。回收對應於Cap-180步驟c(0.21 g)之琥珀色油狀物且其不經進一步純化即使用。LC/MS:[M+H]+ C13 H24 NO5 之分析計算值：273.17；實驗值：274.06。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 5.20(1 H,d,J =8.03 Hz),4.59(1 H,t,J =10.16 Hz),4.11-4.27(3 H,m),3.69-3.82(2 H,m),3.64(3 H,s),1.95-2.07(1 H,m),1.63(1 H,d,J =13.80 Hz),1.41(2 H,dd,J =8.03,4.02 Hz),1.31-1.37(1 H,m),1.26(3 H,t,J =7.15 Hz),1.16(1 H,d,J =6.27 Hz),1.12(6 H,dd,J =6.15,3.89 Hz)。
在0℃下將Cap-180步驟c(0.32 g，1.2 mmol)溶解於THF(10 mL)中且裝入LiOH(0.056 g,2.342 mmol)之水(3.33 mL)溶液。在室溫下攪拌所得溶液2小時。在減壓下移除THF且用水(15 mL)稀釋剩餘殘餘物並用Et2 O(2×10mL)洗滌。接著用1 N HCl將水層酸化至pH~2且用EtOAc(3×15 mL)萃取。乾燥(MgSO4 )合併之有機層，過濾並在真空下濃縮，得到呈白色泡沫狀之Cap-180(立體異構體混合物)(0.2 g)。LC/MS:[M+H]+ C11 H20 NO5 之分析計算值：246.13；實驗值：246.00。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 5.14(1 H,d,J =9.03 Hz),4.65(1 H,t,J =9.91 Hz),3.63-3.89(5 H,m),1.99-2.13(1 H,m),1.56-1.73(2 H,m),1.48-1.55(1 H,m),1.35-1.48(1 H,m),1.27(1 H,br. s.),1.17(6 H,d,J =6.02 Hz)。
Literature Chem Comm ,2172-2174(2005)。
中間物12,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘與中間物22,7-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘之混合物向經脫氣之萘(19.34 g，151 mmol)及雙(頻哪醇根基)二硼(84 g，330 mmol)於環己烷(500 mL)中的溶液中添加4,4'-二第三丁基-2,2'-二吡啶基(4.05 g，15.1 mmol)及二-μ-甲氧基雙(1,5-環辛二烯)二銠(I)(5.0 g，7.5 mmol)。密封燒瓶且在80℃下加熱16小時，接著使其冷卻至室溫。在加熱後，反應物顏色變成深紅色。在真空中移除揮發性組分且用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用0-100%乙酸乙酯/甲苯溶離)，得到呈白色固體狀之2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘與2,7-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘的混合物(54.57 g，95%產率，1.5:1比率)。中間物1：1 H NMR(500 MHz,苯-d6 )δppm 8.70(s,2H),8.16(d,J =8.2 Hz,2H),7.75(d,J =8.2 Hz,2H),1.15(s,24H)。中間物2：1 H NMR(500 MHz,苯-d6 )δppm 8.77(s,2H),8.22(d,J =8.2 Hz,2H),7.66(d,J =8.2 Hz,2H). 1.15(s,24H)。
(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與中間物4(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,7-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之混合物向含2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘與2,7-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘之混合物(1.5:1)(1.25 g，3.29 mmol)及(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(3.01 g，8.22 mmol)之1,2-二甲氧基乙烷(50 mL)及水(12.5 mL)中添加NaHCO3 (1.38 g，16.4 mmol)。在真空中使反應混合物脫氣且用氮氣沖洗。添加Pd(Ph3 P)4 (190 mg，0.164 mmol)，將壓力燒瓶加蓋並用油浴在85℃下加熱16小時。在真空中移除揮發性組分。使殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間。分離各層且用乙酸乙酯萃取水相數次。經由矽藻土(CELITE)墊過濾合併之有機相且乾燥(Na2 SO4 )濾液，過濾並在真空中濃縮。用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用10-100%乙酸乙酯/CH2 Cl2 溶離)，接著用沖洗(10%甲醇/CH2 Cl2 )，得到呈橙色固體狀之(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪咪-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,7-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯的混合物(622 mg，27.1%產率)，其不經純化即使用。藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化等分試樣，得到呈三氟乙酸鹽形式之各中間物之分析樣品。
中間物3之分析數據：LC-MS滯留時間1.46分鐘；C42 H46 N6 O4 之計算值：698.36，m/z實驗值：699.26[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.28(br s,2H),8.13(t,J =8.7 Hz,4H),8.05(t,J =8.4 Hz,2H),7.92(dd,J =14.8,8.7 Hz,3H),5.20-5.36(m,2H),3.70-3.84(m,2H),3.57-3.70(m,2H),2.54-2.70(m,2H),2.18-2.28(m,2H),2.14(五重峰,J =6.9 Hz,4H),1.50(s,9H),1.23(s,9H)。中間物4之分析數據：LC-MS滯留時間1.52分鐘；C42 H46 N6 O4 之計算值：698.36，m/z實驗值：699.24[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.33(br s,2H),7.98-8.17(m,6H),7.83-7.98(m,4H),5.18-5.35(m,2H),3.71-3.83(m,2H),3.57-3.70(m,2H),2.63(br s,2H),2.19-2.28(m,2H),2.07-2.18(m,4H),1.50(s,9H),1.22(s,9H)。
(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯三氟乙酸鹽與中間物6(S)-2-(6-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯三氟乙酸鹽之混合物急驟層析純化後，以上反應亦得到(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯三氟乙酸鹽與(S)-2-(6-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之混合物(658 mg)。在HPLC分離(TFA緩衝液)期間，酸酯部分水解得到與酸中間物相同之混合物。LC-MS滯留時間1.34分鐘(酸)及2.05(酸酯)；(酸)C26 H28 BN3 O4 之計算值：457.22，m/z實驗值：458.14[M+H]+ 。(酸酯)[M+H]+ C32 H38 BN3 O4 之計算值：539.3，m/z實驗值：490.16[M]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中間物72,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘與中間物82,7-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘在周圍條件下將含(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,7-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之混合物(594 mg，0.162 mmol)及TFA(2 mL)之CH2 Cl2 (10 mL)攪拌3小時。在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化粗物質，得到呈黃色固體狀之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸鹽(434 mg)及呈黃色固體狀之2,7-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸鹽(204.8 mg)。
中間物7之分析數據：LC-MS滯留時間1.05分鐘；C32 H30 N6 之計算值：498.25，m/z實驗值：499.21[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.18(s,1H),8.06(d,J =8.6 Hz,1H),8.00(s,1H),7.84-7.92(m,1H),7.73-7.81(m,2H),5.08(t,J =7.6 Hz,1H),3.56-3.66(m,1H),3.48-3.56(m,1H),2.62-2.71(m,1H),2.36-2.47(m,1H),2.19-2.36(m,2H)。
中間物8之分析數據：LC-MS滯留時間1.11分鐘；C32 H30 N6 之計算值：498.25，m/z實驗值：499.20[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.23(s,2H),8.01(m,4H),7.82-7.89(m,2H),7.69-7.82(m,4H),5.08(t,J =7.6 Hz,2H),3.57-3.66(m,2H),3.48-3.57(m,2H),2.60-2.73(m,2H),2.37-2.48(m,2H),2.19-2.36(m,4H)。
(S)-2-(1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯經11分鐘將乙二醛(2.0 mL 40%水溶液)逐滴添加至NH4 OH(32 mL)及(S)-Boc-脯胺醛(8.56 g，43.0 mmol)之甲醇溶液中且在周圍溫度下攪拌反應物19小時。在真空中移除揮發性組分且藉由急驟層析(矽膠，乙酸乙酯)純化殘餘物，隨後再結晶(乙酸乙酯，室溫)，得到呈白色絨毛狀固體之(S)-2-(1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(4.43 g，18.6 mmol，43%產率)。1 H NMR(DMSO-d6 ,400 MHz)δppm 11.68/11.59(br s,1H),6.94(s,1H),6.76(s,1H),4.76(m,1H),3.48(m,1H),3.35-3.29(m,1H),2.23-1.73(m,4H),1.39/1.15(s,9H)。LCMS. RT=0.87分鐘；>95%均質性指數；LC/MS:[M+H]+ C12 H20 N3 O2 之分析計算值：238.16；實驗值：238.22。當在下文所註明之對掌性HPLC條件下分析時，化合物顯示具有98.9 ee%。
管柱：CHIRALPAKAD，10 um，4.6×50 mm溶劑：1.7%乙醇/庚烷(等度)流速：1 mL/min波長：220或256 nm相對滯留時間：3.25分鐘(R )，5.78分鐘(S )
(S)-2-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯在周圍溫度下將碘(16.17 g，63.7 mmol)添加至(S)-2-(1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(6.87 g，29.0 mmol)及碳酸鈉(9.21 g，87 mmol)於二噁烷(72 mL)及水(72 mL)中之溶液中。用鋁箔覆蓋燒瓶且攪拌16小時。用乙酸乙酯及飽和硫代硫酸鈉水溶液稀釋反應混合物。攪拌混合物15分鐘且分離各相。用乙酸乙酯萃取水相數次。乾燥(Na2 SO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮，得到呈棕褐色固體狀之(S)-2-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(12.5 g，88%)。LC-MS滯留時間1.40分鐘；C12 H17 I2 N3 O2 之計算值：488.94，m/z實驗值：489.96[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 4.72-4.84(m,1H),3.58-3.70(m,1H),3.43-3.54(m,1H),2.36(br s,1H),1.88-2.08(m,3H),1.47(br s,3H),1.27(br s,6H)。
(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將亞硫酸鈉(10.31 g，82 mmol)添加至(S)-2-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(4.0 g，8.2 mmol)於乙醇(75 mL)及水(75 mL)中之溶液中。用油浴在100℃下加熱懸浮液4小時且在90℃下加熱16小時。用乙酸乙酯及水稀釋反應物。分離各層且用乙酸乙酯萃取水層數次。乾燥(鹽水、Na2 SO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮。藉由急驟層析純化殘餘物(將樣品乾式裝載於矽膠上且用0至40%乙酸乙酯/CH2 Cl2 溶離)，得到呈白色固體狀之(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.17 g，73.1%)。LC-MS滯留時間0.930分鐘；C12 H18 IN3 O2 之計算值：363.04，m/z實驗值：364.06[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.52-7.64(m,1H),4.95-5.10(m,1H),3.57-3.70(m,1H),3.47-3.57(m,1H),2.37-2.55(m,1H),1.94-2.10(m,3H),1.46(s,4H),1.27(s,5H)。
中間物12(S)-2-(5-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與中間物13(S)-2-(5-(7-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之混合物向含(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯三氟乙酸鹽與(S)-2-(6-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯三氟乙酸鹽之混合物(560 mg，0.980 mmol)及(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(463 mg，1.27 mmol)之1,2-二甲氧基乙烷(11.2 mL)及水(2.8 mL)中添加NaHCO3 (412 mg，4.90 mmol)。在真空中使反應混合物脫氣5分鐘且用氮氣沖洗。添加Pd(Ph3 P)4 (57 mg，0.049 mmol)，將壓力燒瓶加蓋並用油浴在100℃下加熱16小時。在真空中移除揮發性組分。使殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間且用乙酸乙酯萃取水相數次。乾燥(Na2 SO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮。用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用50-100%乙酸乙酯/己烷溶離)，得到部分純化之產物混合物，其進一步藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化，得到(S)-2-(5-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽與(S)-2-(5-(7-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽的混合物(74 mg)。LC-MS滯留時間1.32分鐘；[M+H]+ C38 H44 N6 O4 之計算值：648.34，m/z實驗值：649.20[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。混合物不經進一步純化即使用。
中間物142-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑與中間物152-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑在周圍條件下將含呈三氟乙酸鹽形式之(S)-2-(5-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與(S)-2-(5-(7-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之混合物(74 mg)及TFA(2 mL)的CH2 Cl2 (10 mL)攪拌4小時。在真空中移除揮發性組分。藉由逆相HPLC(0至50%水/乙腈/TFA)純化粗物質，得到呈黃色油狀之2-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑之三氟乙酸鹽(32 mg，31%)及呈黃色油狀之2-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑之三氟乙酸鹽(16 mg)。中間物14之分析數據：LC-MS滯留時間0.081分鐘；C38 H28 N6 之計算值：448.24，m/z實驗值：449.20[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.33(s,1H),8.17(s,1H),8.03(d,J =3.7 Hz,1H),8.01(s,2H),7.92-7.97(m,1H),7.877.92(m,1H),7.75-7.80(m,3H),5.11(t,J =7.8 Hz,1H),4.99(t,J =7.9 Hz,1H),3.49-3.69(m,4H),2.56-2.76(m,2H),2.41-2.52(m,2H),2.21-2.41(m,4H)。中間物15之分析數據：LC-MS滯留時間0.87分鐘；C38 H28 N6 之計算值：448.24，m/z實驗值：449.21[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.39(s,1H),8.19(s,1H),7.97-8.04(m,3H),7.91(d,J =8.6 Hz,1H),7.87(d,J =8.6 Hz,1H),7.85(s,1H),7.78(s,2H),5.12(t,J =7.6 Hz,1H),5.04(t,J =8.1 Hz,1H),3.50-3.68(m,4H),2.60-2.74(m,2H),2.41-2.55(m,2H),2.21-2.41(m,4H)。
(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將EDCI‧HCl(16.9 g，88.0 mmol)添加至4-溴苯-1,2-二胺(15.0 g，80.0 mmol)、N-Boc-L-脯胺酸(18.13 g，84.0 mmol)及1-羥基苯并三唑(12.28 g，80.0 mmol)於CH2 Cl2 (500 mL)中之混合物中且在周圍條件下攪拌16小時。接著用水稀釋混合物。濾除所得白色沈澱物且分離各層。用水洗滌有機層，乾燥(鹽水；Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮，得到棕色泡沫。將乙酸(300 mL)添加至泡沫中且在85℃(浴溫度)下加熱混合物5小時。在真空中移除揮發性組分且將殘餘物溶解於EtOAc中，用水洗滌且乾燥(Na2 SO4 )有機相，過濾並在真空中濃縮。對所得粗物質進行急驟層析(矽膠；0-37% EtOAc/CH2 Cl2 )。對部分純物質再進行急驟層析(矽膠；20-35% EtOAc/CH2 Cl2 )，得到呈黃色泡沫狀之(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(17.98 g，61.2%產率)。LC-MS滯留時間1.23分鐘；C16 H20 BrN3 O2 之計算值：365.07，m/z實驗值：368.07[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.59-7.75(m.,1H),7.38-7.53(m,1H),7.31-7.38(m,1H),5.04-5.09(m,0.3H),4.94-5.00(m,0.7H),3.68-3.76(m,1H),3.50-3.59(m,1H),2.34-2.51(m.,1H),1.95-2.12(m.,3H),1.47(br s,3H),1.15(s,6H)。
(S)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯向含有(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(4.5 g，12 mmol)與雙(頻哪醇根基)二硼(6.55 g，25.8 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)中之混合物的燒瓶中添加乙酸鉀(3.01 g，30.7 mmol)。在真空中使反應燒瓶脫氣5分鐘，接著用氮氣淨化。添加催化劑Pd(Ph3 P)4 (710 mg，0.614 mmol)，將燒瓶加蓋且用油浴在85℃(浴溫度)下加熱16小時。於真空中濃縮反應混合物。使粗物質分配於CH2 Cl2 與飽和NaHCO3 溶液之間且用CH2 Cl2 萃取水層。乾燥(鹽水、Na2 SO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮。用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用10-50%乙酸乙酯/CH2 Cl2 溶離)，得到呈白色固體狀之(S)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.80 g，55%產率)。LC-MS滯留時間1.493分鐘；C22 H32 BN3 O4 之計算值：413.25，，/z實驗值：414.23[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 7.81-8.08(m,1H),7.40-7.68(m.,2H),4.95-5.13(m,1H),3.68-3.79(br s,1H),3.48-3.60(br s,1H),2.35-2.52(br s,1H),1.95-2.15(m,3H),1.46(s,3H),1.37(s,12H),1.13(s,6H)。
2-(5-(6-(2-(1-(第三丁氧羰基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯向(S)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.29 g，33.1 mmol)與2,6-二溴萘(446 mg，1.56 mmol)於1,2-二甲氧基乙烷(20 mL)及水(6 mL)中之混合物中添加NaHCO3 (787 mg，9.36 mmol)。在真空中使反應混合物脫氣10分鐘且用氮氣沖洗。添加催化劑Pd(Ph3 P)4 (90 mg，0.078 mmol)，將燒瓶加蓋且用油浴在100℃下加熱16小時。在真空中移除揮發性組分。使殘餘物分配於CH2 Cl2 與水之間且分離各層。用CH2 Cl2 萃取水相數次且乾燥(鹽水、Na2 SO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮。用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用0-70%乙酸乙酯/CH2 Cl2 溶離)，得到呈黃色固體狀之2-(5-(6-(2-(1-(第三丁氧羰基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(605 mg)。LC-MS滯留時間1.46分鐘；C42 H46 N6 O4 之計算值：698.36，m/z實驗值：699.26[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.28(br s,2H),8.13(t,J =8.7 Hz,4H),8.05(t,J =8.4 Hz,2H),7.92(dd,J =14.8,8.7 Hz,4H),5.20-5.36(m,2H),3.70-3.84(m,2H),3.57-3.70(m,2H),2.54-2.70(m,2H),2.18-2.28(m,2H),2.14(五重峰,J =6.9 Hz,4H),1.50(s,9H),1.23(s,9H)。
(2S)-2-(5-(6-溴-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯以上反應亦得到呈黃色固體狀之(2S)-2-(5-(6-溴-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(519 mg)。LC-MS滯留時間1.88分鐘；[M+H]+ C26 H26 BrN3 O2 之計算值：491.12，m/z實驗值：494.04[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.21(d,J =8.6 Hz,1H),8.05-8.14(m,2H),7.93-8.05(m,2H),7.82-7.93(m,3H),.7.57-7.67(m,1H),5.28(br s,1H),3.98(s,1H),3.70-3.80(m,1H),3.57-3.70(m,1H),2.54-2.71(m,1H),2.17-2.29(m,1H),2.09-2.17(m,2H),1.49(s,4H),1.22(s,5H)。
5,5'-(2,6-萘二基)雙(2-(2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑)在周圍條件下將2-(5-(6-(2-(1-(第三丁氧羰基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(591 mg，0.844 mmol)與TFA(2 mL)於CH2 Cl2 (10 mL)中之混合物攪拌2小時。在真空中移除揮發性組分且將所得物質裝載於MCX管柱上，用甲醇沖洗，用2.0 M NH3 /甲醇溶離釋放並濃縮，得到呈棕褐色固體狀之5,5'-(2,6-萘二基)雙(2-(2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑)(419 mg)。LC-MS滯留時間1.02分鐘；C33 H31 N5 之計算值：498.25，m/z實驗值：499.25[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.18(s,1H),8.06(d,J =8.6 Hz,1H),8.00(s,1H),7.84-7.92(m,1H),7.73-7.81(m,2H),5.08(t,J =7.6 Hz,1H),3.56-5.66(m,1H),3.48-3.56(m,1H),2.62-2.71(m,1H),2.36-2.47(m,1H),2.19-2.36(m,2H)。
2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘在真空中使含有2,6-二溴萘(8.0 g，28 mmol)、雙(頻哪醇根基)二硼(21.3 g，84.0 mmol)、乙酸鉀(3.01 g，30.7 mmol)及1,4-二噁烷(50 mL)之混合物的壓力燒瓶脫氣5分鐘且用氮氣淨化。添加催化劑Pd(Ph3 P)4 (710 mg，0.614 mmol)。將燒瓶加蓋且用油浴在85℃(浴溫度)下加熱16小時。在真空中濃縮反應混合物且使粗物質分配於CH2 Cl2 與飽和NaHCO3 溶液之間。用CH2 Cl2 萃取水層且乾燥(Na2 SO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮。用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用50-100% CH2 Cl2 /己烷溶離)，得到受雙(頻哪醇根基)二硼污染之2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘。將固體溶解於CH2 Cl2 中且添加甲醇直至觀察到沈澱。藉由過濾收集沈澱物，得到呈白色固體狀之2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘(5.1 g，48%產率)。1 H NMR(500 MHz,苯-d6 )δppm 8.70(s,2H),8.16(d,J =8.2 Hz,2H),7.75(d,J =8.2 Hz,2H),1.15(s,24H)。
(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯向2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘(2.0 g，5.3 mmol)與(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.89 g，7.89 mmol)於1,2-二甲氧基乙烷(42.1 mL)及水(10.5 mL)中之混合物中添加NaHCO3 (2.21 g，26.3 mmol)。在真空中使反應混合物脫氣且用氮氣沖洗。添加催化劑Pd(Ph3 P)4 (90 mg，0.078 mmol)。將燒瓶加蓋且用油浴在100℃下加熱16小時。在真空中移除揮發性組分且使殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間。分離各層且用乙酸乙酯萃取水相數次。經由矽藻土(CELITE)墊過濾合併之有機相且乾燥(Na2 SO4 )濾液，過濾並在真空中濃縮。用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用0-100%乙酸乙酯/己烷溶離)，得到呈橙色固體狀之(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(761 mg，21%產率)。LC-MS滯留時間1.46分鐘；C42 H46 N6 O4 之計算值：698.36，m/z實驗值：699.26[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.28(br s,2H),8.13(t,J =8.7 Hz,4H),8.05(t,J =8.4 Hz,2H),7.92(dd,J =14.8,8.7 Hz,4H),5.20-5.36(m,2H),3.70-3.84(m,2H),3.57-3.70(m,2H),2.54-2.70(m,2H),2.18-2.28(m,2H),2.09-2.19(m,4H),1.50(s,9H),1.23(s,9H)。
(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯以上反應亦得到呈棕褐色固體狀之(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.58 g，56%產率)。LC-MS滯留時間1.46分鐘；C32 H38 BN3 O4 之計算值：539.3，m/z實驗值：540.24[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1%TFA。
(S)-5-((第三丁基二苯基矽烷基氧基(甲基)吡咯-2-酮向(S )-5-(羥基甲基)吡咯啶-2-酮(10 g，mmol)之CH2 Cl2 (50 mL)溶液中添加第三丁基氯二苯基矽烷(25.6 g，93 mmol)、Et3 N(12.1 mL，87 mmol)及DMAP(1.06 g，8.7 mmol)。在室溫下攪拌混合物直至起始吡咯啶酮耗盡，接著用CH2 Cl2 (50 mL)稀釋且用水(50 mL)洗滌。乾燥(Na2 SO4 )有機層，過濾，在真空中蒸發且對粗物質進行急驟層析(矽膠；30至100% EtOAc/己烷)，得到呈無色油狀之(S)-5-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)吡咯啶-2-酮(22.7 g，74%產率)。LC/MS(M+H)+ =354.58。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 7.69(br s,1H),7.64-7.61(m,4H),7.50-7.42(m,6H),3.67-3.62(m,1H),3.58-3.51(m,2H),2.24-2.04(m,3H),1.87-1.81(m,1H),1.00(s,9H)。
(S)-2-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)-5-側氧基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯經10分鐘將二碳酸二第三丁酯(38.5 g，177 mmol)以固體形式逐份添加至(S)-5-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)吡咯啶-2-酮(31.2 g，88.3 mmol)、Et3 N(8.93 g，88 mmol)及DMAP(1.08 g，8.83 mmol)於CH2 Cl2 (200 mL)中之溶液中且在24℃下攪拌反應混合物18小時。在真空中移除大部分揮發性物質且藉由矽膠層析(20% EtOAc/己烷至50%EtOAc/己烷)純化粗物質，得到呈白色固體狀之(S)-2-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)-5-側氧基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(32.65 g，82%產率)。LC/MS(M-Boc+H)+ =354.58。1 HNMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 7.61-7.59(m,2H),7.56-7.54(m,2H),7.50-7.38(m,6H),4.18(m,1H),3.90(dd,J =10.4,3.6,1H),3.68(dd,J =10.4,2.1,1H),2.68-2.58(m,1H),2.40-2.33(m,1H),2.22-2.12(m,1H),2.01-1.96(m,1H),1.35(s,9H),0.97(s,9H)。
(S)-2-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)-2,3-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯將(S)-2-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)-5-側氧基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(10.05 g，22.16 mmol)及甲苯(36 mL)裝入配備有溫度計及氮氣入口之三頸燒瓶中且降至-55℃冷卻浴中。當混合物之內部溫度達到-50℃時，經30分鐘逐滴添加三乙基硼氫化鋰(23 mL 1.0 M/THF，23 mmol)且攪拌混合物35分鐘，同時維持內部溫度在-50℃與-45℃之間。經10分鐘逐滴添加亨氏鹼(16.5 mL，94 mmol)。接著整批添加DMAP(34 mg，0.278 mmol)，隨後經15分鐘添加三氟乙酸酐(3.6 mL，25.5 mmol)，同時維持內部溫度在-50℃與-45℃之間。10分鐘後移除浴且攪拌反應混合物14小時，同時使其升至周圍溫度。用甲苯(15 mL)稀釋反應混合物，用冰水浴冷卻且經5分鐘用水(55 mL)緩慢處理。分離各相，用水(50 mL，2次)洗滌有機層且在真空中濃縮。藉由急驟層析(矽膠；5% EtOAc/己烷)純化粗物質，得到呈無色黏性油狀之(S)-2-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)-2,3-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(7.947 g，82%產率)。LC/MS:[M+Na]+ =460.19。在以下HPLC條件下Rt=2.41分鐘：溶劑梯度為100% A:0% B至0%A:100% B(A=含0.1% TFA之1:9 MeOH/水；B=含0.1% TFA之9:1 MeOH/水))，經2分鐘且保持1分鐘；在220 nm下偵測；PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10管柱。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 7.62-7.58(m,4H),7.49-7.40(m,6H),6.47(br s,1H),5.07/5.01(重疊寬二重峰,1H),4.18(br s,1H),3.89(br s,0.5H),3.69(br s,1.5H),2.90-2.58(br m,2H),1.40/1.26(重疊寬單峰,9H),0.98(s,9H)。
(3S)-3-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯經15分鐘將二乙基鋅(19 mL約1.1 M甲苯溶液，21 mmol)逐滴添加至經冷卻(-30℃)之(S)-2-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)-2,3-二氫-1H-吡咯-1-甲酸第三丁酯(3.94 g，9.0 mmol)的甲苯(27 mL)溶液中。經10分鐘逐滴添加氯碘甲烷(經銅穩定；3.0 mL，41 mmol)並攪拌，同時維持浴溫度在-25℃下1小時且在-25℃與-21℃之間18.5小時。使反應混合物向空氣敞開且藉由減慢添加50%飽和NaHCO3 溶液(40 mL)淬滅，接著自冷卻浴移出並在周圍溫度下攪拌20分鐘。經由濾紙過濾反應混合物且用50 mL甲苯洗滌白色濾餅。分離濾液之有機相且用水(40 mL，2次)洗滌，乾燥(MgSO4 )且在真空中濃縮。藉由矽膠層析(350 g矽膠；用7% EtOAc/己烷裝載樣品；用7-20% EtOAc/己烷溶離)純化粗物質，得到呈順式/反式異構體混合物形式之(3S)-3-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(3.69 g，90.7%)。[應注意：在此階段不測定確切順式/反式異構體比率]。LC/MS: [M+Na]+ =474.14。在以下HPLC條件下Rt=2.39分鐘：溶劑梯度為100% A:0% B至0% A:100% B(A=含0.1% TFA 之1:9 MeOH/水；B=含0.1% TFA之9:1 MeOH/水))，經2分鐘且保持1分鐘；在220 nm下偵測；PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10管柱。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 7.62-7.60(m,4H),7.49-7.40(m,6H),3.77/3.67(重疊寬單峰,3H),3.11-3.07(m,1H),2.23(app br s,1H),2.05-2.00(m,1H),1.56-1.50(m,1H),1.33(極寬單峰,9H),1.00(s,9H),0.80(m,1H),0.30(m,1H)。
(3S)-3-(羥基甲基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯經5分鐘將TBAF(7.27 mL 1.0 M THF溶液，7.27 mmol)逐滴添加至(3S)-3-((第三丁基二苯基矽烷基氧基)甲基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(順式/反式異構體混合物)(3.13 g，6.93 mmol)之THF(30 mL)溶液中且在周圍溫度下攪拌混合物4.75小時。添加飽和NH4 Cl溶液(5 mL)後，在真空中移除大部分揮發性物質且使殘餘物分配於CH2 Cl2 (70 mL)與50%飽和NH4 Cl溶液(30 mL)之間。用CH2 Cl2 (30 mL)萃取水相且乾燥(MgSO4 )合併之有機相，過濾，在真空中濃縮，接著曝露於高真空隔夜。使用急驟層析(矽膠；40-50% EtOAc/己烷)純化粗物質，得到呈順式/反式異構體混合物形式且呈無色油狀之(3S)-3-(羥基甲基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(1.39 g，94%產率)。[應注意：在此階段不測定確切順式/反式異構體比率。]LC/MS(M+Na)+ =236.20。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 ,δ=2.5 ppm)δppm 4.70(t,J =5.7,1H),3.62-3.56(m,1H),3.49-3.44(m,1H),3.33-3.27(m,1H),3.08-3.04(m,1H),2.07(br m,1H),1.93-1.87(m,1H),1.51-1.44(m,1H),1.40(s,9H),0.76-0.71(m,1H),0.26(m,1H)。
(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸將NaIO4 (6.46 g，30.2 mmol)之水(31 mL)半溶液添加至(3S)-3-(羥基甲基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(順式/反式異構體混合物)(2.15 g，10.08 mmol)於CH3 CN(20 mL)及CCl4 (20 mL)中之溶液中。立即添加RuCl3 (0.044 g，0.212 mmol)且用力攪拌異質反應混合物75分鐘。用水(60 mL)稀釋反應混合物且用CH2 Cl2 (50 mL，3次)萃取。用1 mL MeOH處理合併之有機相，使其靜置約5分鐘，接著經由矽藻土(CELITE)墊過濾。用CH2 Cl2 (50 mL)洗滌該墊且在真空中濃縮濾液，得到淡木炭色固體。在加熱下將粗物質溶解於EtOAc(約10 mL)中且使其在周圍溫度下靜置，同時加晶種。約15分鐘到達冷卻階段，觀察到快速晶體形成。約1小時後，添加己烷(約6 mL)且冷凍混合物隔夜(似乎無其他物質沈澱出)。過濾混合物且用經冰/水冷卻之己烷/EtOAc(2:1比率；20 mL)洗滌並在高真空下乾燥，得到第一批(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(灰白色晶體，1.222 g)。在真空中濃縮母液且在加熱下將殘餘物溶解於約3 mL EtOAc中，使其在周圍溫度下靜置1小時，接著添加3 mL己烷並儲存於冷凍器中約15小時。類似地得到第二批(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(灰色晶體，0.133 g)，合併之產率為59%。LC/MS[M+Na]+ =250.22。在以下HPLC條件下Rt=1.48分鐘：溶劑梯度為100% A:0% B至0% A:100% B(A=含0.1% TFA之1:9甲醇/水；B=含0.1% TFA之9:1甲醇/水))，經3分鐘；在220 nm下偵測；PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10管柱。第一批之熔點(分解)=147.5-149.5℃。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 12.46(s,1H),3.88(app br s,1H),3.27(app br s,1H；與水信號重疊),2.28(br m,1H),2.07(app br s,1H),1.56(app s,1H),1.40/1.34(兩個重疊單峰,9H),0.71(m,1H),0.45(m,1H)。13 C-NMR(100.6 MHz,DMSO-d6 ) 172.96,172.60,154.45,153.68,78.74,59.88,59.58,36.91,31.97,31.17,27.77,27.52,14.86,14.53,13.69。C11 H17 NO4 之分析計算值：C,58.13；H,7.54；N,6.16。實驗值(第一批)：C,58.24；H,7.84；N,6.07。旋光性(10 mg/mL，於CHCl3 中)：第一批及第二批分別為[α]D=-216及-212。中間物24之替代合成：
(1R,3R,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲醯胺(CH3 SO3 H)根據專利WO 2004/052850中對於合成其立體異構體所述之程序製備。
(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸將50 g(225 mmol)(1R,3R,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲醯胺(.CH3 SO3 H)及250 mL異丙醇裝入配備有氮氣入口、頂置式攪拌器、熱電偶及加熱套之1 L圓底燒瓶中。接著將252 mL 23重量% NaOEt之EtOH溶液(2.68 M，675 mmol，3.0當量)裝入所得漿料中且在50℃下攪拌約1小時。將12.2 mL(675 mmol，3當量)水裝入混合物中且加熱至60℃。使所得漿料在60℃下攪拌約18小時。使漿料冷卻至室溫且裝入250 mL水及98.2 g(450 mmol，2.0當量)二碳酸二第三丁酯。經由真空蒸餾移除乙醇及異丙醇且使水性混合物冷卻至0℃。用76 mL(456 mmol)6 M HCl水溶液中和混合物，同時維持內部溫度低於5℃。用500 mL MTBE萃取產物且用100 mL水洗滌富有機層。經由真空蒸餾將透明溶液濃縮至150 mL且將600 mL庚烷裝入所得漿料中，同時維持內部溫度高於45℃。經約30分鐘使漿料冷卻至室溫且使其在室溫下攪拌約2小時。過濾產物，用250 mL 4:1庚烷：MTBE洗滌並在70℃下在真空下乾燥，產生40.5 g(178 mmol，79%產率，在205 nm下99.8 AP)(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸：1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δ12.48(s,1H),4.02-3.80(m,1H),3.45-3.15(m,1H),2.40-2.19(m,1H),2.19-2.0(m,1H),1.70-1.50(m,1H),1.50-1.20(m,9H),0.83-0.60(m,1H),0.33-0.55(m,1H)；13 C NMR(100 MHz,DMSO-d6 )δ173.7,173.2,155.0,154.3,79.4,60.5,60.2,37.6,32.6,31.8,28.4,28.2,15.6,15.2,14.4；C11 H18 NO4 (M+H；ESI+ ) HRMS之計算值：228.1236。實驗值：228.1234。
(1R,3S,5R)-3-(6-溴-1H-苯並[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將EDCI‧HCl(2.65 g，13.8 mmol)添加至4-溴苯-1,2-二胺(2.35 g，12.6 mmol)、(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(3.00 g，13.2 mmol)及1-羥基苯并三唑(1.93 g，12.6 mmol)於CH2 Cl2 (80 mL)中之混合物中且在周圍條件下攪拌16小時。接著用CH2 Cl2 稀釋混合物，用水洗滌，乾燥(鹽水；MgSO4 )，過濾並在真空中濃縮，得到棕色泡沫。將乙酸(80 mL)添加至該泡沫中且在75℃(浴溫度)下加熱混合物5小時。在真空中移除揮發性組分且將殘餘物溶解於EtOAc中，用飽和NaHCO3 溶液洗滌且乾燥(鹽水；MgSO4 )有機相，過濾並在真空中濃縮。對所得粗物質進行急驟層析(矽膠；50-100% EtOAc/己烷)，得到呈淡橙色泡沫狀之(1R,3S,5R)-3-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(3.01 g，7.96 mmol，63.3%產率)，其不經進一步純化即使用。反應亦得到847 mg較低純度之相同產物。進一步藉由製備型HPLC(C-18/30-100% CH3 CN-水+0.1% NH4 OAc)純化所收集物質之等分試樣，獲得分析樣品。LC-MS滯留時間1.248分鐘；C17 H21 BrN3 O2 之計算值：378.08，m/z實驗值：380.05[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.67(br s,1H),7.43(br s,1H),7.34(d,J =8.6 Hz,1H),4.75(br s,1H),3.62(br s,1H),2.50-2.57-2.31(m,1H),2.31(dt,J =13.2,6.7 Hz,1H),1.66-1.85(m,1H),1.45(br s,3H),1.11(br s,6H),0.87(dt,J =8.6,5.8 Hz,1H),0.66(br s,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯向含有(1R,3S,5R)-3-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(2.0 g，5.3 mmol)與雙(頻哪醇根基)二硼(2.69 g，10.6 mmol)於1,4-二噁烷(50 mL)中之混合物的壓力燒瓶中添加乙酸鉀(0.78 g，7.9 mmol)。在真空中使反應燒瓶脫氣10分鐘且用氮氣淨化。將Pd(Ph3 P)4 (305 mg，0.264 mmol)添加至反應混合物中，將燒瓶加蓋且用油浴在85℃(浴溫度)下加熱16小時。在真空中濃縮反應混合物且使粗物質分配於CH2 Cl2 (150 mL)與水性介質(50 mL水+10 mL飽和NaHCO3 溶液)之間。用CH2 Cl2 萃取水層且乾燥(Na2 SO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮。用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用20-100%乙酸乙酯/己烷溶離)，得到呈白色泡沫狀之(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(1.74 g，77%產率)。進一步藉由製備型HPLC(C-18/30-100% CH3 CN-水+0.1% NH4 OAc)純化所收集物質之等分試樣。LC-MS滯留時間1.78分鐘；C23 H32 BN32 之計算值：425.25，m/z實驗值：426.21[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mmol乙酸銨且溶劑B為95%乙腈/5%水/10 mmol乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.94(s,1H),7.61(d,J =7.9 Hz,1H),7.41-7.56(m,1H),4.83(br s,1H),3.64(d,J =1.2 Hz,1H),2.51-2.70(m,1H),2.33(dt,J =13.4,6.6 Hz,1H),1.67-1.84(m,J =8.5,6.10,5.8,5.8 Hz,1H),1.39-1.59(br s,3H),1.37(s,12H),1.10(br s,6H),0.88(dt,J =8.2,5.8 Hz,1H),0.66(br s,1H)。
(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯)向(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(1.50 g，3.53 mmol)及2,6-二溴萘(403 mg，1.41 mmol)於1,2-二甲氧基乙烷(21.7 mL)及水(6.50 mL)中之混合物中添加NaHCO3 (356 mg，4.23 mmol)。在真空中使反應混合物脫氣10分鐘且用氮氣沖洗。添加Pd(Ph3 P)4 (82 mg，0.071 mmol)且用油浴在100℃下加熱反應混合物16小時，接著在真空中移除揮發性組分。使殘餘物分配於CH2 Cl2 與水(30 mL)之間且用CH2 Cl2 萃取水相數次。用鹽水洗滌合併之有機相，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並在真空中濃縮。用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用0-70%乙酸乙酯/CH2 Cl2 溶離)，得到呈黃色固體狀之(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯)(377 mg)。LC-MS滯留時間1.49分鐘；C44 H46 N6 O4 之計算值：722.36，m/z實驗值：723.26[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.26(s,2H),8.12(d,J =8.5 Hz,2H),8.09(s,2H),8.00(m,J =8.6 Hz,2H),7.93(m,J =8.6 Hz,2H),7.86(d,J =8.6 Hz,2H),5.01(br s,2H),3.68(br s,2H),2.76(dd,J =13.3,9.3 Hz,2H),2.42-2.54(m,2H),1.87(br s,2H),1.49(br s,9H),1.19(br s,9H),0.94(dt,J =8.3,6.1Hz,2H),0.79(br s,2H)。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯以上反應亦得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(418 mg)。LC-MS滯留時間1.90分鐘；C27 H26 BrN3 O2 之計算值：503.12，m/z實驗值：506.05[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.20(s,1H),8.12(s,1H),8.05(s,1H),7.93-8.00(m,2H),7.86-7.93(m,2H),7.84(d,J =8.6 Hz,1H),7.63(dd,J =8.6,1.8 Hz,1H),5.00(br s,1H),3.68(br s,1H),2.75(dd,J =13.4,9.2 Hz,1H),2.41-2.54(m,1H),1.87(br s,1H),1.49(br s,5H),1.17(br s,4H),0.87-0.98(m,1H),0.79(br s,1H)。
2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘在周圍條件下將(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯)(360 mg，0.498 mmol)與TFA(2 mL)於CH2 Cl2 (10 mL)中之混合物攪拌3小時。在真空中移除揮發性組分且將所得物質裝載於MCX管柱上，用甲醇沖洗，用2.0 M NH3 /甲醇溶離並濃縮，得到呈黃色固體狀之2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(253 mg)。LC-MS滯留時間1.07分鐘；C34 H30 N6 之計算值：522.25，m/z實驗值：523.19[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 HNMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.17(s,2H),8.06(d,J =8.2 Hz,2H),8.00(s,2H),7.88(d,J =8.6 Hz,2H),7.71-7.81(m,4H),4.84(dd,J =10.8,7.5 Hz,2H),3.47-3.53(m,2H),2.80(dd,J =12.8,7.6 Hz,2H),2.54-2.63(m,2H),2.04-2.11(m,2H),1.20-1.27(m,2H),1.02(q,J =7.7 Hz,2H)。
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯雙-三氟乙酸鹽與中間物31(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯雙-三氟乙酸鹽之混合物向含(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽與(S)-2-(6-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽的混合物(190 mg)、(S)-2-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯(專利申請案：WO 2008/021928,WO 2008/021936及WO 2008/021927)(213 mg，0.499 mmol)之1,2-二甲氧基乙烷(10.0 mL)及水(2.0 mL)中添加NaHCO3 (140 mg，1.663 mmol)。在真空中使反應混合物脫氣5分鐘且用氮氣沖洗。添加Pd(Ph3 P)4 (19 mg，0.017 mmol)且將壓力燒瓶加蓋並用油浴在85℃下加熱16小時。在真空中移除揮發性組分且使殘餘物分配於乙酸乙酯與水之間。分離各層且用乙酸乙酯萃取水相數次。乾燥(Na2 SO4 )合併之有機相，過濾並在真空中濃縮。用急驟層析純化所得物質(將樣品乾式裝載於矽膠上且用0-5%甲醇/CH2 Cl2 溶離)，得到部分純化產物。進一步藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化殘餘物，得到(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯之三氟乙酸鹽與(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯之三氟乙酸鹽的混合物(381 mg)，其不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間1.54分鐘；C47 H46 N6 O4 之計算值：758.36，m/z實驗值：759.37[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中間物32(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯與中間物33(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯之混合物在周圍條件下將含(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯之三氟乙酸鹽與(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲苯甲酸酯之三氟乙酸鹽的混合物(381 mg)及TFA(2 mL)之CH2 Cl2 (10 mL)攪拌4小時。在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(0至50%水/乙腈/NH4 OAc)純化粗物質，得到呈黃色油狀之(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯與(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯的混合物(70 mg，21%產率)。LC-MS滯留時間2.87分鐘；C42 H38 N6 O2 之計算值：658.31，m/z實驗值：659.47[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、80%溶劑A/20%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mmol乙酸且溶劑B為95%乙腈/5%水/10 mmol NH4 OAc。1 H NMR(化合物之混合物,500 MHz,MeOD)δppm 8.07-8.24(m,4H),7.91-8.03(m,6H),7.73-7.89(m,12H),7.66-7.73(m,4H),7.27-7.46(m,6H),7.09-7.18(m,4H),6.97-7.04(m,2H),5.01-5.21(m,5H),4.83-5.01(m,2H),3.72-3.82(m,2H),3.53-3.65(m,2H),3.42-3.52(m,2H),3.35-3.42(m,4H),2.48-2.62(m,2H),2.28-2.47(m,4H),2.04-2.24(m,8H)。
2-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(6-(4-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑四-三氟乙酸鹽與中間物352-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(7-(4-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑四-三氟乙酸鹽在周圍溫度下向(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯與(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯之混合物(70 mg，0.057 mmol)及碳酸鉀(K2 CO3 )於甲醇(5 mL)中之溶液中添加鈀/碳(10%，11 mg)之甲醇(2 mL)漿料。真空淨化反應器且用氫氣回填。在氫氣球下攪拌反應物16小時。在真空下經由矽藻土(CELITE)墊過濾混合物且在真空中蒸發濾液。藉由逆相HPLC(0至50%水/乙腈/TFA)純化粗物質，得到呈白色固體狀之2-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(6-(4-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸鹽(50 mg)及呈白色固體狀之2-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(7-(4-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸鹽(24 mg)。中間物34之分析數據：LC-MS滯留時間1.06分鐘；C34 H32 N6 之計算值：524.27，m/z實驗值：525.26[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、80%溶劑A/20%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.19(d,J =10.4 Hz,2H),8.02-8.10(m,3H),7.84-7.96(m,7H),7.77-7.83(m,2H),5.14(t,J =7.8 Hz,1H),5.06-5.11(m,1H),3.52-3.67(m,4H),2.61-2.74(m,2H),2.43-2.56(m,2H),2.30-2.42(m,2H),2.18-2.30(m,2H)。中間物35之分析數據：LC-MS滯留時間1.13分鐘；C34 H32 N6 之計算值：524.27，m/z實驗值：525.24[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上,使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、80%溶劑A/20%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.27(d,J =7.0 Hz,2H),7.99-8.06(m,3H),7.90-7.96(m,4H),7.87(td,J =8.2,1.7 Hz,2H),7.76-7.85(m,3H),5.13(t,J =7.8 Hz,1H),5.03-5.08(m,1H),3.51-3.67(m,4H),2.61-2.74(m,2H),2.42-2.54(m,2H),2.20-2.40(m,4H)。
(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將HATU(3.64 g，9.57 mmol)添加至經攪拌之5-溴吡啶-2,3-二胺(1.64 g，8.70 mmol)及(S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-甲酸(1.87 g，8.70 mmol)於DMF(50 mL)及DIPEA(3.19 mL，18.3 mmol)中的溶液中。在室溫下攪拌反應混合物3天，用水(400 mL)稀釋且用EtOAc(150 mL)萃取。用鹽水(50 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。藉由急驟層析(110 g SiO2 ，1-4% MeOH/DCM)部分純化粗物質，得到3.36 g凝固泡沫。將物質溶解於AcOH(35.0 mL)中且在100℃下加熱8小時。使反應物冷卻至室溫，濃縮且藉由急驟層析(用DCM裝載，80 g SiO2 ，20-40% EtOAc/己烷)純化，得到呈黃色固體狀之(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.73 g)。LC-MS滯留時間1.33分鐘；m/z 365,367(1:1)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.40(br s,1H),8.09(br s,1H),5.12-4.96(m,1H),3.77-3.67(m,1H),3.62-3.51(m,1H),2.56-2.38(m,1H),2.15-1.90(m,3H),1.46(s,3.5H),1.16(s,5.5H)。
(S)-2-(6-溴-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與中間物38(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之混合物將60% NaH分散液(0.120 g，3.00 mmol)添加至經攪拌之(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.0 g，2.7 mmol)的DMF(25 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應物1.5小時。添加SEM-Cl(0.483 mL，2.72 mmol)且攪拌反應物16小時。用水(約30 mL)及EtOAc(約35 mL)稀釋反應物，分離各層且用鹽水(30 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。藉由急驟層析(80 g SiO2 ，20-30% EtOAc/己烷)純化殘餘粗黃色油狀物，得到呈黃色油狀之(S)-2-(6-溴-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之混合物(838 mg)。混合物不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間2.54分鐘；m/z497,499(1:1)(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與中間物40(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯在微波小瓶中，將2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘(57 mg，0.150 mmol)、(S)-2-(6-溴-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之混合物(112 mg)、碳酸銫(147 mg，0.450 mmol)及二環己基(2',6'-二甲氧基聯苯-2-基)膦(12.3 mg，0.030 mmol)溶解於THF(3 mL)及水(0.3 mL)中。再添加1.5 mL THF且用鼓泡氮氣向反應物充氣直至蒸發掉約2 mL。向透明溶液中添加乙酸鈀(II)(3.37 mg，0.015 mmol)。用氮氣沖洗該小瓶，密封，接著用微波輻射在120℃下加熱30分鐘。用EtOAc(約3 mL)稀釋反應物且用水(2 mL)及鹽水(2 mL)洗滌。乾燥(MgSO4 )反應物，過濾並濃縮成黃色油狀物，藉由急驟層析(12 g SiO2 ，25-75% EtOAc/己烷)純化，得到呈透明無色油狀之(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(74 mg)(SEM區域異構體之混合物)及呈無色油狀之(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(32 mg)(SEM區域異構體之混合物)。各者均不經進一步純化即使用。中間物39之分析數據：LC-MS滯留時間3.42分鐘；m/z 961.9(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)(SEM區域異構體之混合物)δppm 8.84-8.75(m,2H),8.39-8.31(m,2H),8.26-8.18(m,2H),8.11(br s,2H),7.92-7.84(m,2H),5.94-5.83(m,3H),5.79(d,J =11.0 Hz,1H),5.34-5.25(m,2H),3.86-3.57(m,8H),2.61-2.39(m,2H),2.34-1.99(m,6H),1.45(s,8H),1.17(s,10H),1.10-0.87(m,4H),-0.02(s,18H)。中間物40之分析數據：LC-MS滯留時間3.15分鐘；m/z 671.5(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。(SEM區域異構體之混合物)δppm 8.82-8.75(m,1H),8.39-8.29(m,2H),8.21-8.15(m,1H),8.07-8.01(m,1H),8.11(br s,2H),7.98-7.93(m,1H),7.89-7.80(m,2H),5.94-5.85(m,1.5H),5.79(d,J =11.3 Hz,0.5H),5.33-5.24(m,1H),3.85-3.56(m,4H),2.62-2.39(m,1H),2.33-1.99(m,1H),1.49-0.87(m,23H),-0.02(s,9H)。
2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)萘將4 M鹽酸(2.0 mL，8.0 mmol)之二噁烷溶液添加至經攪拌之(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)雙(3-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(74 mg，0.077 mmol)(SEM區域異構體之混合物)的甲醇(1 mL)溶液中。在室溫下攪拌反應物16小時，接著濃縮至乾，得到呈黃色固體狀之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)萘(51.1 mg)，其不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間0.83分鐘；m//z 501.13(MH+)。在配備有Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10%水/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。
使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,D2 O)δppm 8.76(s,2H),8.54(s,2H),8.07-7.97(m,4H),7.86-7.78(m,2H),5.26-5.16(m,2H),3.98-3.65(m,8H),2.79-2.63(m,2H),2.46-2.25(m,6H)。
(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將HATU(5.05 g，13.3 mmol)添加至經攪拌之5-溴哌嗪-2,3-二胺(2.28 g，12.1 mmol)及(S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-甲酸(2.60 g，12.0 mmol)於DMF(50 mL)及DIPEA(4.42 mL，25.3 mmol)中的溶液中。在室溫下攪拌反應混合物3天，接著在90℃下攪拌1天。用水(350 mL)稀釋反應混合物且用EtOAc(200 mL)萃取。用鹽水(100 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。藉由急驟層析(110 g SiO2 ，1-4% MeOH/DCM)部分純化粗物質，得到1.9 g凝固泡沫。將物質溶解於AcOH(35.0 mL)中且在95℃下加熱8小時。使反應物冷卻至室溫，濃縮並藉由急驟層析(用DCM裝載，80 g SiO2 ，20-30% EtOAc/己烷)純化，得到呈黃色凝固泡沫狀之(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(760 mg，2.06 mmol，17%產率)。LC-MS滯留時間1.28分鐘；m/z 366,368(1:1)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.50-8.43(m,1H),5.11-4.99(m,1H),3.77-3.68(m,1H),3.62-3.51(m,1H),2.57-2.40(m,1H),2.19-1.95(m,3H),1.46(s,3.5H),1.17(s,5.5H)。
(S)-2-(5-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與中間物44(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將60% NaH分散液(75 mg，1.9 mmol)添加至經攪拌之(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(627 mg，1.70 mmol)的DMF(15 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應物1.5小時。接著添加SEM-Cl(0.30 mL，1.7 mmol)且攪拌反應物隔夜。用水(約30 mL)及EtOAc(約35 mL)稀釋反應物，分離各層且用鹽水(30 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。藉由急驟層析(40 g SiO2 ，20-30% EtOAc/己烷)純化粗黃色油狀物，得到呈透明無色油狀之(S)-2-(5-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(421 mg)及呈透明無色油狀之(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(345 mg)。SEM組之絕對區域化學未明確地確定，名稱(及結構)在此等中間物中可交換。中間物43之分析數據：LC-MS滯留時間2.43分鐘；m/z496,498(1:1)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.52(s,0.5H),8.49(s,0.5H),5.90-5.72(m,2H),5.32-5.25(m,1H),3.82-3.54(m 4H),2.59-2.41(m,1H),2.32-1.98(m,3H),1.43(s,4.5H),1.15(s,4.5H),1.07-0.85(m,2H),-0.02(s,9H)。中間物44之分析數據：LC-MS滯留時間2.41分鐘；m/z 496,498(1:1)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.61(s,0.5H),8.58(s,0.5H),5.88-5.71(m,2H),5.28(dd,J =8.5,4.5 Hz,1H),3.82-3.54(m 4H),2.59-2.41(m,1H),2.32-1.98(m,3H),1.43(s,4.5H),1.15(s,4.5H),1.09-0.85(m,2H),-0.02(s,9H)。
(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基)雙(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]哌嗪-5,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與中間物46(S)-2-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯在微波小瓶中，將2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘(149 mg，0.393 mmol)、(S)-2-(5-溴-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(294 mg，0.590 mmol)(或SEM區域異構體)、碳酸銫(384 mg，1.18 mmol)及二環己基(2',6'-二甲氧基聯苯-2-基)膦(32.3 mg，0.079 mmol)溶解於THF(4 mL)及水(0.4 mL)中。再添加1.5 mL THF且用鼓泡氮氣向反應物充氣直至蒸發掉1.5 mL。向透明溶液中添加乙酸鈀(II)(8.83 mg，0.039 mmol)。用氮氣沖洗該小瓶，密封，接著用微波輻射在120℃下加熱30分鐘。用EtOAc(約3 mL)稀釋反應物且用水(2 mL)及鹽水(2 mL)洗滌。乾燥(MgSO4 )反應物，過濾並濃縮成黃色油狀物，藉由急驟層析(12 g SiO2 ，25-75% EtOAc/己烷)純化，得到呈黃色凝固泡沫狀之(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基)雙(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]哌嗪-5,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(或SEM區域異構體)(210 mg)及呈無色油狀之(S)-2-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(或SEM區域異構體)(53.5 mg)。中間物45之分析數據：LC-MS滯留時間3.27分鐘；m/z 963.89(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)(SEM區域異構體之混合物)δppm 9.29-9.15(m 2H),8.79-8.66(m,2H),8.43-8.29(m,2H),8.20-7.98(m,2H),6.03-5.84(m,4H),5.34(dd,J =8.3,4.3 Hz,2H),3.87-3.70(m,6H),3.68-3.58(m,2H),2.63-2.43(m,2H),2.36-1.14(m,4H),2.14-1.99(m,2H),1.46(s,8H),1.17(s,10H),1.35-0.85(m,4H),-0.02(s,18H)。
中間物45之分析數據：LC-MS滯留時間3.07分鐘；m/z 672.52(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)萘將4 M鹽酸(6.0 mL，24 mmol)之二噁烷溶液添加至經攪拌之(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基)雙(1-((2-(三甲基矽烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]哌嗪-5,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(210 mg，0.218 mmol)(SEM之絕對區域化學未確定)的甲醇(3 mL)溶液中。在室溫下攪拌反應物16小時並濃縮至乾，得到呈橙色固體狀之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)萘(143 mg)，其不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間0.90分鐘；m/z 503.21(M H+)。在配備有Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10%水/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,D2 O)δppm 8.59(s,2H),7.94(s,2H),7.85(d,J =8.5 Hz,2H),7.76(d,J =8.5 Hz,2H),5.23-5.16(m,2H),3.98-3.66(m,8H),2.78-2.64(m,2H),2.47-2.28(m,6H)。
(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯在室溫下向2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(885 mg，1.78 mmol)、DMAP(10.8 mg，0.089 mmol)及三乙胺(1.2 mL，8.9 mmol)於DMF(30 mL)中之溶液中整份添加二碳酸二第三丁酯(387 mg，1.78 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物隔夜且在BIOTAGE上純化(乾式裝載於80 g矽膠濾筒上且用含0至50% DCM之MeOH的梯度溶離)，得到呈橙色固體狀之(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(500 mg，0.835 mmol，47.1%產率)。LC-MS滯留時間1.207分鐘；m/z 599.25[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.27(d,J =3.1 Hz,1H),8.23(s,1H),8.04-8.17(m,4H),8.03(s,1H),7.88-7.97(m,3H),7.75-7.83(m,2H),5.28-5.35(m,1H),5.11(t,J =7.8 Hz,1H),3.75-3.83(m,1H),3.60-3.72(m,2H),3.51-3.59(m,1H),2.60-2.74(m,2H),2.40-2.50(m,1H),2.21-2.38(m,3H),2.10-2.20(m,2H),1.52(s,4H),1.25(s,4H)。
(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-纈胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯向(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(400 mg，0.668 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(176 mg，1.00 mmol)及DIEA(0.583 mL，3.34 mmol)於DMF(10 mL)中之溶液中添加HATU(381 mg，1.00 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2小時，接著藉由製備型HPLC純化(使用Waters Sunfire C18管柱30×150 mm 5u，用0至50%ACN-水+0.1% TFA之梯度溶離)，得到呈黃色固體狀之(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-纈胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(445 mg)。LC-MS滯留時間1.317分鐘；m/z 756.28[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A 為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-2-甲基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯在室溫下向(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-纈胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(445 mg)於DCM(10 mL)中的溶液中添加TFA(1 mL，13 mmol)。在室溫下攪拌混合物3小時，濃縮，且用MeOH稀釋殘餘物，裝載於Strata XC MCX濾筒上且用甲醇洗滌。藉由用2 M氨之甲醇溶液溶離，自該濾筒釋放化合物，接著在減壓下蒸發，產生呈橙色固體狀之((1S)-2-甲基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯(275 mg)。LC-MS滯留時間1.120分鐘；m/z 656.27[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.26(br s,1H),8.22(br s,1H),8.08-8.16(m,3H),8.04-8.08(m,1H),8.03(s,1H),7.86-7.96(m,3H),7.73-7.82(m,2H),5.88-5.93(m,0.1H),5.37-5.44(m,0.9H),5.07-5.15(m,1H),4.28-4.33(m,1H),4.12-4.19(m,0.8H),4.06-4.10(m,0.2H),3.94-4.02(m,1H),3.59-3.75(m,4H),3.50-3.59(m,1H),2.63-2.74(m,2H),2.41-2.47(m,1H),2.23-2.40(m,5H),2.06-2.16(m,1H),1.00-1.04(m,0.4H),0.94-1.00(m,3H),0.88-0.93(m,2.6H)。
(S)-2-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯與中間物52(2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(萘-2,6-二基)雙(1H-咪唑-4,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將含2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘(2.00 g，5.26 mmol)、(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(2.10 g，5.79 mmol)及Pd(Ph3 P)4 (0.058 g，0.05 mmol)之DME(47.8 mL)及水(4.8 mL)裝入配備有磁性攪拌棒之100 mL壓力容器中。在真空下使溶液脫氣5分鐘且用氮氣回填反應器。密封該容器且在120℃下加熱反應混合物隔夜。使反應物冷卻至室溫且移除揮發性物質。使殘餘物分配於水與EtOAc之間且再用EtOAc萃取水層。乾燥(Na2 SO4 )合併之有機層，過濾並濃縮。用BIOTAGE純化粗產物(乾式裝載於90 g矽膠濾筒上且用含0至30% EtOAc之DCM的梯度溶離)且再用BIOTAGE純化(乾式裝載於80 g矽膠濾筒上且用含0至50% EtOAc之DCM的梯度溶離)，得到呈黃色固體狀之(S)-2-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(949 mg)。該物質(受(2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(萘-2,6-二基)雙(1H-咪唑-4,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯污染)不經進一步純化即用於下一步驟中。LC-MS滯留時間1.760分鐘；m/z 490.21[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
來自下一反應之製備型HPLC得到呈黃色固體狀之(2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(萘-2,6-二基)雙(1H-咪唑-4,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(92 mg，0.111 mmol，11%產率)。LC-MS滯留時間1.113分鐘；m/z 599.24[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.35(br s,2H),8.13(br s,2H),8.08(br s,1H),8.00(br s,1H),7.95(m,2H),5.18(br s,2H),3.68-3.78(m,2H),3.62(br s,2H),2.51-2.68(m,2H),2.21(br s,2H),2.06-2.15(m,4H),1.50(br s,9H),1.31(br s,9H)。
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將含(S)-2-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(500 mg，1.02 mmol)、(S)-2-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(601 mg，1.53 mmol)及Pd(Ph3 P)4 (58 mg，0.05 mmol)之DME(10 mL)及水(1.0 mL)裝入配備有磁性攪拌棒之100 mL壓力容器中。在真空下使溶液脫氣5分鐘且用氮氣回填反應器。在120℃下加熱混合物8小時，再添加Pd(Ph3 P)4 (57.8 mg，0.05 mmol)，使混合物脫氣並在130℃下攪拌隔夜。使反應物冷卻至室溫且在真空下移除揮發性物質。使殘餘物分配於水與EtOAc之間且再用EtOAc萃取水層。乾燥(Na2 SO4 )合併之有機層，過濾並濃縮。在BIOTAGE上純化粗產物(乾式裝載於90 g矽膠濾筒上且用含5至100% EtOAc之DCM的梯度溶離)，接著再藉由製備型HPLC純化(使用Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用MeOH-水+0.1% TFA溶離)，得到(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(50 mg)。LC-MS滯留時間1.278分鐘；m/z 675.70[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.31(d,J =15.9 Hz,2H),8.14-8.18(m,1H),8.10(d,J =8.85 Hz,1H),8.05(s,0.6H),7.96-8.03(m,4H),7.85-7.94(m,3.4H),5.11-5.23(m,2H),3.69-3.77(m,2H),3.62(br s,2H),2.51-2.67(m,2H),2.16-2.26(m,2H),2.05-2.16(m,4H),1.51(s,9H),1.32(s,9H)。
2-((2S)-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑向(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(50 mg)於DCM(10 mL)中的溶液中整份添加TFA(2.0 mL，26mmol)。在室溫下攪拌混合物2小時。在真空下濃縮反應物，得到呈橙色固體狀之2-((S)-吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑之三氟乙酸鹽(51.5 mg)，其不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間0.978分鐘；m/z 475.19[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。使用Waters Sunfire C18管柱4.6×50 mm 5u之HPLC-MS(TFA)78457-087顯示反應完成，在RT=0.978分鐘處發現峰。MH+=475.19。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.34(s,1H),8.20(s,1H),8.03(dd,J =14.2,8.7 Hz,2H),7.84-7.96(m,7H),7.79-7.84(m,1H,)4.99-5.11(m,2H),3.48-3.63(m,4H),2.57-2.70(m,2H),2.41-2.55(m,2H),2.29-2.41(m,2H),2.15-2.29(m,2H)。
4,4'-(2,6-萘二基)雙(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑)在室溫下向(2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(萘-2,6-二基)雙(1H-咪唑-4,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(82 mg)於DCM(2 mL)中的溶液中整份添加TFA(2.0 mL，26 mmol)。在室溫下攪拌混合物3小時，藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用5至90% MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化且再藉由製備型HPLC(PHENOMENEXLuna C18管柱30×100 mm 10u，用10至90%甲醇-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化，得到呈棕褐色固體狀之4,4'-(2,6-萘二基)雙(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑)之三氟乙酸鹽(68 mg)。LC-MS滯留時間0.978分鐘；m/z399.18[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,2H),7.95-8.00(m,2H),7.91-7.95(m,2H),7.85(s,2H),5.03(t,J =8.2 Hz,2H),3.49-3.62(m,4H),2.59-2.67(m,2H),2.42-2.52(m,2H),2.31-2.40(m,2H),2.17-2.28(m,2H)。
中間物56(S)-2-(5-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(750 mg，2.07 mmol)及碘化銅(I)(79 mg，0.41 mmol)溶解於DMF(20 mL)及三乙胺(1.439 mL，10.33 mmol)中。真空沖洗反應溶液10分鐘(抽氣器真空，用氮氣沖洗)，接著添加乙炔基三甲基矽烷(1.2 mL，8.3 mmol)，最後添加Pd(PPh3 )4 (119 mg，0.103 mmol)。用氮氣沖洗燒瓶，密封且在50℃下加熱隔夜。濃縮反應物成粗黑色焦油狀物，溶解於DCM中且經由BIOTAGEHorizon(80 g SiO2 ，20-40% EtOAc/己烷)純化，得到呈黃色固體狀之(S)-2-(5-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(546 mg，1.64 mmol，79%產率)。此物質不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間1.393分鐘；m/z 332.33(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δppm 7.19-7.13(m,1H),4.92-4.85(m,1H),3.43-3.31(m,2H),3.04-2.83(m,1H),2.20-1.88(m,3H),1.51(s,3H),1.49(s,6H),0.25(s,3H),0.23(s,6H)。
(S)-2-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將(S)-2-(5-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(537 mg，1.61 mmol)溶解於MeOH(20 mL)中，接著添加碳酸鉀(22 mg，0.16 mmol)且在室溫下攪拌反應物3小時。濃縮反應物，溶解於二氯甲烷中，裝載於SiO2 管柱上且藉由BIOTAGEHorizon(30-50% EtOAc/己烷)純化，得到呈灰白色固體狀之(S)-2-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(346 mg，1.32 mmol，82%產率)。LC-MS滯留時間0.878分鐘；m/z 260.35(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δppm 7.21-7.17(m,1H),4.92-4.87(m,1H),3.43-3.30(m,2H),3.05(s,1H),3.03-2.85(m,1H),2.20-1.88(m,3H),1.60-1.45(m,9H)。
(2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-(第三丁氧羰基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯用DMF(10 mL)及三乙胺(0.54 mL，3.9 mmol)將(S)-2-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(340 mg，1.30 mmol)、2,6-二溴萘(744 mg，2.60 mmol)及碘化銅(I)(12.39 mg，0.065 mmol)製成漿料。用氮氣真空沖洗溶液(5次)，用Pd(PPh3 )4 (75 mg，0.065 mmol)處理，接著用氮氣真空沖洗(2次)。在室溫下在氮氣下攪拌混濁黃色溶液3小時。濃縮反應物成黃橙色半固體，用DMF/MeOH(約1:1)製成漿料，過濾且以5次注射藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水，15-100%)純化。合併含有所需產物之溶離份並濃縮，得到呈淡黃色固體狀之(2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-(第三丁氧羰基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪啶-2-基)-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(70 mg，0.11 mmol，18%產率)。LC-MS滯留時間1.448分鐘；m/z 647.45(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LCMICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δppm 10.70(br s,2H),7.98(s,2H),7.74(d,J =8.3 Hz,2H),7.57(d,J =8.3 Hz,2H),7.30-7.25(m,2H,在溶劑峰下),4.95(dd,J =7.3,3.3 Hz,2H),3.46-3.37(m,4H),3.08-2.91(m,2H),2.24-2.08(m,4H),2.03-1.92(m,2H),1.51(s,18H)。
4,4'-(2,6-萘二基二-2,1-乙炔二基)雙(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑)將(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基雙(乙炔-2,1-二基))雙(1H-咪唑-5,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(32 mg，0.049 mmol)溶解於二氯乙烷(2 mL)中，接著添加TFA(1 mL，13 mmol)。在室溫下攪拌溶液1小時。將反應物濃縮至乾，得到呈棕褐色固體狀之4,4'-(2,6-萘二基二-2,1-乙炔二基)雙(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑)(41.6 mg)。1 H NMR(500 MHz,CD3 OD)δppm 8.05(s,2H),7.89(d,J =8.3 Hz,2H),7.59(d,J =8.6 Hz,2H),7.52(s,2H),4.89-4.84(m,2H),3.56-3.44(m,4H),2.59-2.50(m,2H),2.42-2.24(m,4H),2.26-2.14(m,2H)。
(1R,5R)-3-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將亨氏鹼(7.69 mL，44.0 mmol)添加至經攪拌之2-溴-1-(4-溴苯基)乙酮(12.23 g，44.0 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(10 g，44 mmol)於無水MeCN(400 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌混合物16小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於乙酸乙酯中，用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌，乾燥(硫酸鈉)，過濾並濃縮。在壓力容器中，將殘餘物溶解於二甲苯(400 mL)中且添加乙酸銨(33.9 g，440 mmol)。密封容器並在140℃下加熱2小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於乙酸乙酯中，用飽和碳酸氫鈉溶液(pH=9)、鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥並濃縮。將呈紅橙色泡沫狀之粗產物溶解於二氯甲烷中且置於300 g湯普森矽膠濾筒(Thompson silica gel cartridge)上(用20% B至100% B溶離，經4000 mL，其中溶劑B=乙酸乙酯且溶劑A=己烷)，得到呈金棕色泡沫狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(16.67 g，39.1 mmol，88.8%產率)。LC-MS滯留時間1.762分鐘；m/z 403.94[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna S10 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.62(br d,J =8.6 Hz,2H),7.50(br d,J =8.6 Hz,2H),7.37(s,1H),4.66(br s,1H),3.58(br s,1H),2.56-2.47(m,1H),2.36-2.27(m,1H),1.75-1.67(m,1H),0.97(br s,9H),0.88-0.81(m,1H),0.64-0.57(m,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(羥基甲基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在0℃下經30分鐘向(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(9.85 g，43.3 mmol)於THF(200 mL)中之溶液中逐滴添加甲硼烷-甲基硫化物複合物(282 mL，563 mmol)。移除冰浴，攪拌混合物1小時，接著在回流下加熱2小時。使混合物冷卻至0℃，用甲醇(約200 mL)緩慢淬滅且在真空下濃縮。將殘餘物溶解於DCM中且用水(乳液)、1 N HCl、飽和NaHCO3 水溶液及鹽水洗滌。經Na2 SO4 乾燥有機層，過濾並濃縮，得到呈無色油狀之(1R,3S,5R)-3-(羥基甲基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(8.43 g，39.5 mmol，91%產率)。LC-MS滯留時間1.398分鐘；m/z 236.20[M+Na]+ 。在配備有Waters Sunfire5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%甲醇/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 3.72-3.79(m,1H),3.52-3.64(m,3H),3.15-3.24(m,1H),2.00-2.08(m,1H),1.62-1.72(m,1H),1.54-1.62(m,1H),1.45-1.51(m,9H),0.84(br s,1H),0.36(td,J =5.0,2.4 Hz,1H)。
(1R,3S,5R)-3-甲醯基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在0℃下向(1R,3S,5R)-3-(羥基甲基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(4.85 g，22.74 mmol)於DCM(125 mL)中之溶液中添加戴斯-馬丁高碘烷(Dess-Martin periodinane)(11.57 g，27.3 mmol)。使反應物升溫至室溫且攪拌3小時。將反應物傾倒於飽和NaHCO3 水溶液中，接著添加約20 g Na2 S2 O3 並攪拌1小時。分離各層且用DCM萃取水層數次。經Na2 SO4 乾燥合併之有機萃取物並在真空中蒸發。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，用0至40% EtOAc/己烷之梯度溶離來純化殘餘物，得到呈無色油狀之(1R,3S,5R)-3-甲醯基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(4.47 g，21.2 mmol，93%產率)。LC-MS滯留時間0.813分鐘；m/z未離子化(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90%H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 9.48(br s,1H),3.67-3.97(m,1H),3.33-3.59(m,1H),2.10-2.31(m,2H),1.56-1.67(m,1H),1.47(br s,9H),0.80(br s,1H),0.55(br s,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在0℃下將氫氧化銨(16.40 mL，421 mmol)逐滴添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-甲醯基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(4.4 g)的甲醇(15 mL)溶液中。使反應物升溫至室溫且攪拌45分鐘。接著逐滴添加40%乙二醛水溶液(5.32 mL，46.3 mmol)且攪拌反應混合物隔夜。反應物顏色隨時間變成棕色。用鹽水稀釋反應物並濃縮以移除揮發性溶劑。接著用乙酸乙酯萃取剩餘水層數次。經Na2 SO4 乾燥合併之有機層，在真空下蒸發。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，用0至70% EtOAc/己烷溶離來純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(3.71 g，14.9 mmol，71%產率)。LC-MS滯留時間0.772分鐘；m/z 250.20(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 10.43(br s,1H),6.99(s,2H),4.86(dd,J =9.0,5.0 Hz,1H),3.35(br s,1H),3.20(br s,1H),2.28-2.38(m,1H),1.71-1.80(m,1H),1.49(s,9H),0.83-0.90(m,1H),0.45(br s,1H)。
中間物64(1R,3S,5R)-3-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將碘(I2 ，12.43 g，49.0 mmol)添加至3-(1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸酯(5.55 g，22.3 mmol)及碳酸鈉(7.08 g，66.8 mmol)於二噁烷(56 mL)及水(56 mL)中之溶液中且在室溫下在黑暗中攪拌反應混合物16小時。用EtOAc稀釋反應混合物且用飽和硫代硫酸鈉水溶液洗滌。分離各層且用EtOAc萃取水層。經Na2 SO4 乾燥合併之有機層並在真空下蒸發。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，用0至100% EtOAc/己烷溶離來純化殘餘物，得到呈白色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(8.3 g，16 mmol，71%產率)。LC-MS滯留時間1.455分鐘；m/z 502.07(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 4.51(br s,1H),3.56(br s,1H),2.40-2.54(m,1H),2.18-2.27(m,1H),1.65-1.73(m,1H),1.20-1.40(br s,9H),0.82(dt,J =8.6,5.8 Hz,1H),0.58(br s,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將(1R,3S,5R)-3-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(8.3 g，17 mmol)於EtOH(83 mL)及水(83 mL)中之溶液裝入配備有攪拌棒之250 mL壓力燒瓶中。接著添加亞硫酸鈉(20.88 g，166 mmol)且在90℃下加熱混合物16小時。用EtOAc萃取反應混合物且經Na2 SO4 乾燥合併之有機層，並在真空下蒸發。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，用0至15% EtOAc/DCM之梯度溶離來純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(3.84 g，10.2 mmol，62%產率)以及完全還原產物(1R,3S,5R)-3-(1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(550 mg，2.21 mmol，13%產率)。LC-MS滯留時間0.932分鐘；m/z 376.22(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.12(br s,1H)，4.59(br s，1H),3.44-3.64(br s,1H),2.40-2.52(m,1H),2.17-2.30(m,1H),1.65-1.73(m,1H),1.27(br s,9H),0.84(dt,J =8.5,5.7 Hz,1H),0.58(br s,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯與中間物67(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(5,5'-(4,4'-(萘-2,6-二基)雙(4,1-伸苯基))雙(1H-咪唑-5,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯)在真空下使2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘(1.0 g，2.6 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(1.06 g，2.63 mmol)、Na2 CO3 (0.837 g，7.89 mmol)於DME(20 mL)及水(2 mL)中之溶液脫氣10分鐘。在80℃下加熱混合物，接著在氮氣流下添加Pd(Ph3 P)4 (0.152 g，0.132 mmol)。密封反應器且在120℃下進一步進行加熱16小時。在真空中移除DME且使粗物質分配於EtOAc/H2 O之間。分離各層且用EtOAc萃取水層數次。經Na2 SO4 乾燥合併之有機萃取物並在真空中蒸發。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，用0%至5% MeOH/DCM之梯度溶離來純化殘餘物，得到受反應副產物污染之部分純的標靶產物。再次藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，用50至100% EtOAc/己烷之梯度溶離來純化不純產物，接著用10% MeOH/DCM沖洗管柱，得到呈黃色泡沫狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(606 mg)。LC-MS滯留時間1.608分鐘；m/z 578.4(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,氯仿-d,部分NMR)δppm 4.89(br s,1H),3.20-3.66(m,1H),2.33-2.50(m,1H),1.76-1.86(m,1H),1.52(br s,9H),1.24-1.32(m,12H),0.87-0.93(m,1H),0.51(br s,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在真空下使(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(568 mg)、(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(369 mg，0.983 mmol)、Na2 CO3 (313 mg，2.95 mmol)於DME(10 mL)及水(2 mL)中之溶液脫氣10分鐘。在80℃下加熱混合物，接著在氮氣流下添加Pd(Ph3 P)4 (114 mg，0.098 mmol)。密封反應器且在130℃下進一步進行加熱隔夜。在真空中移除DME且使粗物質分配於EtOAc/H2 O之間。分離各層且用EtOAc萃取水層數次。經Na2 SO4 乾燥合併之有機萃取物並在真空中蒸發。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，依序用20至100% EtOAc/己烷之梯度、10% MeOH/DCM溶離來純化殘餘物，得到部分純的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(277 mg)。LC-MS滯留時間1.578分鐘；m/z 699.56(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.62-7.69(m,6H),7.53-7.59(m,4H),6.95(s,2H),4.67(br s,2H),3.46-3.56(m,2H),2.50-2.59(m,0.5H),2.32-2.49(m,2H),2.27(br s,1.5H),1.65-1.78(m,2H),1.28(br. s,18H),0.80-0.88(m,2H),0.53-0.66(m,2H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷向(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(275 mg)於DCM(10 mL)中之溶液中添加TFA(2 mL，26.0 mmol)。在室溫下攪拌混合物2小時。在真空下移除揮發性物質且藉由逆相HPLC(水/MeOH/TFA)，得到呈棕褐色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷的三氟乙酸鹽(106 mg)。LC-MS滯留時間1.153分鐘；m/z 499.36(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.33(s,1H),8.19(s,1H),7.99-8.05(m,2H),7.85-7.95(m,6H),7.83(s,1H),7.76(s,1H),4.78(q,J =9.4 Hz,2H),3.47-3.54(m,2H),2.65-2.74(m,4H),2.02-2.12(m,2H),1.18-1.25(m,2H),0.97-1.05(m,2H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯向經脫氣之6-溴-2-氯喹啉(30 mg，0.12 mmol)、Na2 CO3 (39.3 mg，0.371 mmol)及(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(116 mg，0.272 mmol)於二噁烷(1 mL)及H2 O(0.2 mL)中的溶液中添加Pd(Ph3 P)4 (14.3 mg，0.012 mmol)且在110℃下攪拌混合物2小時。用MeOH稀釋反應混合物，且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(60.6 mg，0.057 mmol，46.3%產率)。LC-MS滯留時間2.05分鐘；m/z 724[M+H]]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.68(1H,d,J =8.5 Hz),8.60(1H,s),8.44(1H,dd,J =8.5,1.5 Hz),8.39(1H,d,J =1.3 Hz),8.33(1H,d,J =8.8 Hz),8.23-8.29(1H,m),8.25(1H,d,J =8.5 Hz),8.19(1H,s),8.08(1H,d,J =9.0 Hz),7.96(1H,d,J =9.0 Hz),7.93(1H,d,J =9.5 Hz),5.02-5.12(2H,m),3.70(2H,br s),2.74-2.85(2H,m),2.45-2.57(2H,m),1.84-1.96(2H,m),1.05-1.68(18H,m),0.89-1.01(2H,m),0.77-0.86(2H,m)。
2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉將(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(51 mg，0.054 mmol)與HCl之二噁烷溶液(0.5 mL，2.00 mmol)混合且在室溫下攪拌2小時。移除揮發性物質，得到呈黃色固體狀之2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉的鹽酸鹽(53 mg)。LC-MS滯留時間1.20分鐘；m/z 524[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始%B=0。最終%B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹喏啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將Pd(Ph3 P)4 (14.24 mg，0.012 mmol)添加至經脫氣之6-溴-2-氯喹喏啉(30 mg，0.123 mmol)、NaHCO3 (31.1 mg，0.370 mmol)及(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(131 mg，0.308 mmol)於二噁烷(1.0 mL)及H2 O(0.2 mL)中的溶液中且在100℃下攪拌混合物2小時，接著在110℃下攪拌2小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化濾液，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹喏啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯的三氟乙酸鹽(67.6 mg)。LC-MS滯留時間2.13分鐘；m/z 725[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.60(1H,s),8.71(1H,s),8.56(1H,dd,J =8.8,1.5 Hz),8.45(1H,d,J =1.5 Hz),8.26-8.35(2H,m),8.21(1H,s),8.06-8.11(1H,m),7.91-7.99(2H,m),5.02-5.13(2H,m),3.70(2H,br s),2.79(2H,dd,J =13.4,9.2 Hz),2.43-2.57 (2H,m),1.83-1.96(2H,m),1.07-1.65(18H,m),0.95(2H,m),0.77-0.85(2H,m)。
2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉將TFA(0.25 mL，3.24 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹喏啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(65 mg)的DCM(0.5 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。移除揮發性物質且用Et2 O濕磨殘餘物。經由過濾漏斗收集所得固體且用Et2 O沖洗，得到呈黃色固體狀之2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉的三氟乙酸鹽(60 mg)。LC-MS滯留時間1.51分鐘；m/z 525[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始%B=0。最終%B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.52(1H,s),8.58(1H,s),8.36(1H,s),8.22-8.33(2H,m),8.30(1H,d,J =9.5 Hz),8.08(1H,s),7.76-7.94(2H,m),7.83(1H,d,J =9.5 Hz),4.80-5.05(2H,m),3.45-3.61(2H,m),2.70-2.92(2H,m),2.50-2.67(2H,m),2.00-2.18(2H,m),1.26(2H,br s),1.04(2H,br s)。
(S)-2-(5-(4-溴苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將NCS(0.51 g，3.82 mmol)添加至2-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.0 g，2.55 mmol)之DMF(25 mL)溶液中且在50℃下加熱混合物隔夜。在真空下移除揮發性物質。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，用0至10% EtOAc/DCM之梯度溶離來純化殘餘物，得到呈黃色泡沫狀之部分純的(S)-2-(5-(4-溴苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.04 g)。LC-MS滯留時間1.99分鐘；m/z 427.12(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C184.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.63(s,4H),4.74-4.81(m,1H),3.64-3.72(m,1H),3.45-3.55(m,1H),2.27-2.42(m,1H),2.00-2.15(m,2H),1.90-2.00(m,1H),1.48(m,3H),1.27(m,6H)。
(S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯在真空下使(S)-2-(5-(4-溴苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(1.04 g，2.44 mmol)及2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘(0.926 g，2.44 mmol)於DME(10 mL)及水(2 mL)中之溶液脫氣10分鐘。在約80℃下加熱混合物，在氮氣流下添加Pd(Ph3 P)4 (0.282 g，0.244 mmol)且密封反應器。進一步進行加熱至130℃後維持8小時。再添加Pd(PPh3 )4 (100 mg)且進行加熱隔夜。在真空中移除DME且使粗物質分配於EtOAc/H2 O之間。分離各層且用EtOAc萃取水層數次。經Na2 SO4 乾燥合併之有機萃取物並在真空中蒸發。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，用0至100% EtOAc/己烷之梯度溶離來純化殘餘物，得到受三苯基膦污染之部分純的(S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(292 mg)。進一步藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化少量等分試樣，得到純標題物質。殘餘物質不經進一步純化即用於後續步驟中。LC-MS滯留時間2.227分鐘；m/z 598.46(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為10%H2 O/90% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD,三氟乙酸鹽，部分NMR)δppm 3.71(br s,2H),3.55(br s,2H),2.45(br s,1H),2.07-2.17(m,2H),1.97-2.06(m,1H),1.50(s,3H),1.43(m,6H),1.31(br s,6H)。
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯在真空下使(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(163 mg，0.450 mmol)、(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(163 mg，0.450 mmol)、碳酸氫鈉(113 mg，1.350 mmol)於DME(10 mL)與水(2 mL)之溶劑混合物中之溶液脫氣10分鐘。在80℃下加熱混合物，接著添加Pd(Ph3 P)4 (52.0 mg，0.045 mmol)，用氮氣沖洗反應器並密封。進一步加熱至120℃後維持16小時。使燒瓶冷卻至室溫，在真空中移除DME且使粗物質分配於DCM/H2 O之間。分離各層且用DCM萃取水層數次。經Na2 SO4 乾燥合併之有機萃取物並在真空中蒸發。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，用0至100% EtOAc/己烷之梯度溶離來純化殘餘物，得到受三苯基膦污染之部分純的(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(77 mg)。LC-MS滯留時間1.830分鐘；m/z 709.43(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之ShimadzuLC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LCMICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d部分NMR)δppm 5.00(d,J =4.5 Hz,2H),3.38-3.52(m,4H),3.10(br. s,1H),2.91(br s,1H),2.09-2.33(m,4H),1.93-2.05(m,2H),1.54(s,18H)。
4-氯-2-((S)-吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑將TFA(2 mL)添加至(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(75 mg)之DCM(10 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物2小時。在真空中移除溶劑且將殘餘物溶解於1:1甲醇/CH2 Cl2 之溶劑混合物中並經由MCX濾筒(Strata XC)過濾。用甲醇洗滌該濾筒且用NH3 之甲醇溶液(2 M)溶離化合物。在真空中濃縮適當溶離份，得到呈黃色固體狀之4-氯-2-((S)-吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(40 mg，0.079 mmol)。LC-MS滯留時間1.353分鐘；m/z 509.32(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD,僅部分溶解)δppm 8.20(s,1H),8.09(s,1H),7.88-7.96(m,2H),7.76-7.88(m,6H),7.51(s,1H),4.50(t,J =7.28 Hz,1H),4.35(t,J =7.15 Hz,1H),3.03-3.31(部分經甲醇遮蓋,m,4H),2.24-2.42(m,2H),1.88-2.21(m,6H)。
(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-4,5-二氫-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯在真空下使(S)-2-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(402 mg，0.821 mmol)、(S)-2-(7-溴-4,5-二氫-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(344 mg，0.821 mmol)及碳酸氫鈉(207 mg，2.46 mmol)於DME(14 mL)及水(1.8 mL)中之溶液脫氣10分鐘。在80℃下加熱混合物，此時打開燒瓶且添加Pd(Ph3 P)4 (76 mg，0.066 mmol)。用氮氣沖洗燒瓶，密封並在120℃下加熱16小時。使燒瓶冷卻至室溫，在真空中移除DME且使粗物質分配於DCM與H2 O之間。分離各層且用DCM萃取水層數次。經Na2 SO4 乾燥合併之有機萃取物並在真空中蒸發。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，依序用20至100% EtOAc/己烷及0至10%甲醇/DCM之梯度溶離來純化殘餘物，得到(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-4,5-二氫-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(183 mg)。LC-MS滯留時間1.543分鐘；m/z 701.47(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將氧化錳(IV)(1.53 g，17.6 mmol)添加至(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-4,5-二氫-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(183 mg，0.196 mmol)之DCM(5 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物隔夜。經由矽藻土(CELITE)墊過濾反應混合物且用甲醇/DCM 1:1溶液洗滌。在真空下使用旋轉蒸發器移除揮發性物質，得到呈棕褐色固體狀之(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1，2-d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(163 mg)。LC-MS滯留時間1.523分鐘；m/z 699.53(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
2-((S)-吡咯啶-2-基)-7-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑在室溫下將TFA(2 mL，26.0 mmol)整份添加至經攪拌之(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(137 mg)的CH2 Cl2 (10 mL)溶液中。於室溫下攪拌混合物2小時，接著在真空中移除溶劑。將殘餘物溶解於50%甲醇/CH2 Cl2 中且經由MCX濾筒(Strata XC)過濾。用甲醇洗滌該濾筒且用NH3 之甲醇溶液(2 M)溶離化合物。在真空中濃縮適當溶離份，得到呈橙色固體狀之2-((S)-吡咯啶-2-基)-7-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑(98 mg，0.20 mmol)。LC-MS滯留時間1.245分鐘；m/z 499.30(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.59(d,J =8.5 Hz,1H),8.43(d,J =1.5 Hz,1H),8.36(s,1H),8.31(s,1H),8.13(dd,J =8.6,1.8 Hz,1H),8.01-8.10(m,3H),7.90-7.98(m,2H),7.87(s,1H),7.80(d,J =8.6 Hz,1H),5.18(t,J =7.9 Hz,1H),5.05(t,J =8.1 Hz,1H),3.63-3.72(m,1H),3.52-3.63(m,3H),2.61-2.77(m,2H),2.45-2.58(m,2H),2.33-2.43(m,2H),2.20-2.33(m,2H)。
(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將Pd(Ph3 P)4 (19.06 mg，0.016 mmol)添加至經脫氣之6-溴-2-氯喹啉(40 mg，0.165 mmol)、(S)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(150 mg，0.363 mmol)及NaHCO3 (41.6 mg，0.495 mmol)於二噁烷(1 mL)及H2 O(0.2 mL)中的溶液中。接著在110℃下加熱反應混合物2小時，冷卻至室溫，用MeOH稀釋且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(73 mg)。LC-MS滯留時間2.02分鐘；m/z 700[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始%B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.63-8.74(1H,m),8.60(1H,s),8.44(1H，dd，J =8.7,1.6 Hz),8.38(1H,br s),8.32(1H,d,J =8.8 Hz),8.25(2H,d,J =8.8 Hz),8.14-8.21(1H,m),8.04-8.12(1H,m),7.90-8.00(2H,m),5.24-5.36(2H,m),3.73-3.83(2H,m),3.59-3.72(2H,m),2.57-2.74(2H,m),2.20-2.33(2H,m),2.09-2.20(4H,m),1.50(9H,br s),1.23(9H,br s)。
2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉將TFA(0.25 mL，3.24 mmol)添加至(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯啶-1-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(65 mg)的DCM(0.5 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物2小時。在真空下移除揮發性物質且用Et2 O濕磨殘餘物。經由過濾收集所得固體且用Et2 O沖洗，得到呈黃色固體狀之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉的三氟乙酸鹽(61 mg)。LC-MS滯留時間1.12分鐘；m/z 500[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.89(1H,d,J =8.8 Hz),8.48(1H,d,J =1.3 Hz),8.45(1H,s),8.34-8.41(2H,m),8.31(1H,d,J =8.8 Hz),8.12(1H,dd,J =8.5,1.8 Hz),8.09(1H,s),7.89(1H,d,J =8.5 Hz),7.77-7.85(2H,m),5.05-5.19(2H,m),3.44-3.72(4H,m),2.61-2.75(2H,m),2.19-2.49(6H,m)。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在80℃下將Pd(Ph3 P)4 (0.382 g，0.330 mmol)添加至經脫氣之2,6-雙(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘(2.51 g，6.61 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(2.5 g，6.6mmol)及碳酸鈉(2.78 g，33.0 mmol)於DME(52.9 mL)及水(13.2 mL)中的溶液中。用氮氣回填反應物，密封且在100℃下加熱隔夜。在真空下移除揮發性物質且將殘餘物溶解於EtOAc中，用水洗滌，並用EtOAc萃取水層。經由矽藻土(CELITE)墊過濾合併之有機層並經Na2 SO4 乾燥，濃縮且在BIOTAGE上純化(乾式裝載於矽膠上，裝入90 g矽膠濾筒中且用含0至70%乙酸乙酯之己烷的梯度溶離，接著用10% MeOH/DCM沖洗)，得到呈淺黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(1.8 g，3.3 mmol，49%產率)。LC-MS滯留時間1.905分鐘；m/z 552.47(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上,使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將含(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(795 mg，1.44 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(538 mg，1.43 mmol)及碳酸氫鈉(502 mg，5.97 mmol)之DME(9.5 mL)及水(2.4 mL)裝入配備有磁性攪拌棒之200 mL壓力圓底燒瓶中。在真空下使溶液脫氣5分鐘且用N2 回填反應器。接著在N2 流下添加Pd(Ph3 P)4 (110 mg，0.096 mmol)，密封反應器並在120℃下加熱隔夜。使反應物冷卻至室溫且在真空下移除揮發性物質。使殘餘物分配於EtOAc與水之間且用EtOAc萃取水層。經由矽藻土(CELITE)墊過濾合併之有機層，經Na2 SO4 乾燥且在真空下移除揮發性物質。藉由急驟管柱層析(BIOTAGE)，依序用50至100% EtOAc/己烷之梯度及10%甲醇/DCM溶離來純化殘餘物，得到受起始物質、經還原之起始物質及其他反應副產物污染之部分純的標靶產物。進一步藉由製備型HPLC(ACN/水，0.1% TFA)純化殘餘物，得到(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(200.5 mg)。亦自同一反應混合物收集副產物，其經鑑別為(1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2,2'-聯萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸酯之三氟乙酸鹽(108 mg)。LC-MS滯留時間1.497分鐘；m/z 673.52(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.33(s,1H),8.31(s,1H),8.09-8.20(m,3H),7.96-8.08(m,2H),7.87-7.94(m,2H),5.07(t,J =8.2 Hz,1H),4.91(m,1H),3.69(br s,2H),2.70-2.84(m,2H),2.48(br s,2H),1.81-1.94(m,2H),1.51(br s,1H),1.51(br s,9H),1.31(br s,5H),1.21(br s,4H),0.89-0.99(m,2H),0.82(br s,1H),0.77(br s,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2,2'-聯萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸酯純化來自中間物85合成之反應混合物後，獲得呈三氟乙酸鹽形式之副產物(108 mg)。LC-MS滯留時間1.882分鐘；m/z 849.84(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.36(s,2H),8.28(s,2H),8.11-8.19(m,6H),8.03-8.09(m,4H),7.87-7.96(m,4H),5.07(t,J =8.2 Hz,2H),3.71(br s,2H),2.75-2.85(m,2H),2.51(br s,2H),1.86-1.94(m,2H),1.52(m,10H),1.22(br s,8H),0.97(ddd,J =8.4,6.0,5.8 Hz,2H),0.83(br s,2H)。
6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑將4 M HCl之二噁烷溶液(10 mL，40.0 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(151 mg)的DCM(3 mL)溶液中。立即形成沈澱物。攪拌懸浮液30分鐘。在真空下蒸發揮發性組分。將粗殘餘物溶解於DCM(3 mL)中且添加TFA(2 mL)。攪拌溶液1小時。在減壓下蒸發揮發性組分。將殘餘物溶解於MeOH中且經由Strata XC MCX濾筒過濾。用甲醇洗滌該濾筒且藉由用2 M氨/甲醇溶液溶離來自濾筒釋放化合物。在減壓下蒸發氨/甲醇濾液，得到呈黃色固體狀之6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑(79 mg，0.17 mmol)。LC-MS滯留時間1.130分鐘；m/z 473.35(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.19(s,1H),8.07(s,1H),7.92(dd,J =8.6,5.8 Hz,2H),7.88(s,1H),7.82(dd,J =5.8,1.5 Hz,2H),7.61-7.66(m,2H),7.51(s,1H),4.24-4.35(m,2H),3.11(td,J =6.1,2.4 Hz,1H),3.06(td,J =6.0,2.6 Hz,1H),2.40-2.53(m,2H),2.18-2.33(m,2H),1.69-1.76(m,1H),1.62-1.69(m,1H),0.88(ddd,J =6.6,4.3,2.6 Hz,1H),0.79-0.84(m,1H),0.61-0.68(m,1H),0.55-0.60(m,1H)。
6,6'-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2,2'-聯萘將TFA(2.0 mL，26 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2,2'-聯萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸酯之三氟乙酸鹽(108 mg)於DCM(5 mL)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。接著濃縮反應混合物，得到呈棕褐色固體狀之6,6'-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2,2'-聯萘的三氟乙酸鹽(22 mg)。LC-MS滯留時間1.722分鐘；m/z 649.54(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10%H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H-NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.33(br s,2H),8.22(br s,2H),8.09-8.15(m,4H),8.01-8.07(m,4H),7.89-7.95(m,2H),7.77-7.87(m,4H),4.85-4.98(m,2H),3.51-3.57(m,2H),2.79-2.87(m,2H),2.59-2.68(m,2H),2.07-2.14(m,2H),1.23-1.30(m,2H),1.01-1.09(m,2H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-1,5-啶-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將肆(三苯基膦)鈀(0)(17.4 mg，0.015 mmol)添加至2,6-二氯-1,5-啶(30 mg，0.151 mmol)、碳酸氫鈉(38.0 mg，0.452 mmol)及(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(141 mg，0.332 mmol)於二噁烷(1.0 mL)及H2 O(0.2 mL)中之溶液中且在110℃下加熱及攪拌混合物2小時。用MeOH稀釋反應物，過濾，濃縮且藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈白色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-1,5-啶-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(22.3 mg，0.030 mmol)。LC-MS滯留時間2.11分鐘；m/z 725[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。
2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1,5-啶將TFA(0.25 mL，3.2 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-1,5-啶-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(20 mg，0.028 mmol)之DCM(0.5 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。在真空下移除揮發性物質且用Et2 O濕磨殘餘物。經由過濾收集所得固體且用Et2 O沖洗，得到呈黃色固體狀之2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1,5-啶的三氟乙酸鹽(26 mg，0.022 mmol，78%產率)。LC-MS滯留時間1.41分鐘；m/z 525[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始%B=0。最終%B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.61(2H,d,J =8.8 Hz),8.51(2H,s),8.40(2H,d,J =9.0 Hz),8.23(2H,dd,J =8.5,1.5 Hz),7.81(2H,d,J =8.5 Hz),4.74-4.97(2H,m),3.47-3.57(2H,m),2.78-2.88(2H,m),2.52-2.65(2H,m),2.04-2.15(2H,m),1.22-1.33(2H,m),0.99-1.11(2H,m)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-5-氯-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在室溫下將NCS(20 mg，0.15 mmol)逐份添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(183 mg，0.272 mmol)的DMF(5 mL)溶液中。接著在50℃下加熱反應混合物3小時。使反應物冷卻至0℃，再添加NCS(15 mg，0.112 mmol)，且在50℃下攪拌混合物2小時。用水(2 mL)及甲醇(2 mL)稀釋反應物，移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(TFA)純化粗產物，得到呈橙色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-5-氯-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯的三氟乙酸鹽(140.4 mg)。LC-MS滯留時間1.822分鐘；m/z 707.54(1:1)(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 μm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.27(d,J =2.8 Hz,2H),8.03-8.18(m,4H),7.87-7.98(m,3H),5.04-5.10(m,1H),4.63(d,J =7.6 Hz,1H),3.71(br s,1H),3.63(br s,1H),2.74-2.87(m,1H),2.59(dd,J=13.3,8.7 Hz,1H),2.51(br s,1H),2.41(ddd,J =13.6,6.7,6.6 Hz,1H),1.86-1.95(m,1H),1.78(br s,1H),1.12-1.63(m,18H),0.97(ddd,J =8.7,6.0,5.8 Hz,1H),0.79-0.91(m,2H),0.66(br s,1H)。
2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-4-氯-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑將TFA(2 mL，26.0 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-5-氯-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(131 mg，0.140 mmol)的DCM(10 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物3小時。在真空下移除揮發性物質且將殘餘物溶解於MeOH中並經由Strata XC MCX濾筒過濾。用甲醇洗滌該濾筒且藉由用2 M氨/甲醇溶液溶離來自濾筒釋放化合物。在減壓下蒸發氨/甲醇濾液，得到呈棕褐色固體狀之2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-4-氯-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑(55 mg，0.11 mmol)。LC-MS滯留時間1.375分鐘；m/z 507.33(1:1)(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 μm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.26(s,1H),8.19(s,1H),8.00-8.09(m,3H),7.92(ddd,J =12.1,8.6,1.8 Hz,2H),7.85(dd,J =8.6,1.5 Hz,1H),7.81(d,J =8.6 Hz,1H),4.96(dd,J =11.0,7.6 Hz,1H),4.64(app t,J =9.3 Hz,1H),3.53-3.59(m,1H),3.44-3.50(m,1H),2.82(dd,J =13.0,7.5 Hz,1H),2.61-2.74(m,3H),2.03-2.15(m,2H),1.24-1.30(m,1H),1.18-1.24(m,1H),0.96-1.09(m,2H)。
(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(3-溴苯基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯將DIPEA(2.79 mL，16.0 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(2.00 g，8.80 mmol)及2-溴-1-(3-溴苯基)乙酮(2.22 g，8.00 mmol)於乙腈(25 mL)中之漿料中(溶液變成透明琥珀色)且攪拌反應混合物隔夜。濃縮反應物且經由BIOTAGE(80 g SiO2 ，10-25% EtOAc/己烷)純化，得到呈黏性淡黃色油狀之(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(3-溴苯基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(3.37 g，7.94 mmol)。LC-MS滯留時間1.853分鐘；m/z 423及425.98(1:1)(MH+)。在配備有waters XTERRAMS 7u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δppm 8.04(d,J =1.8 Hz,1H),7.83(d,J =7.8 Hz,1H),7.75(d,J =8.0 Hz,1H),7.38(dd,J =8.0,7.8 Hz,1H),5.58-5.10(m,2H),4.23(br s,1H),3.62-3.39(m,1H),2.58(dt,J =13.3,6.5 Hz,1H),2.46(dd,J =13.3,9.5 Hz,1H),1.73-1.51(m,1H),1.47(s,9H),0.85(br s,1H),0.51(s,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(3-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在350 mL高壓容器中，將乙酸銨(5.94 g，77 mmol)添加至(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(3-溴苯基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(3.33 g，7.85 mmol)之二甲苯(75 mL)溶液中且在氮氣下攪拌5分鐘。密封容器，接著置於已加熱至140℃之油浴中(反應物變成深棕色)且使反應物在140℃下保持11小時。再添加乙酸銨(3.0 g)且在145℃下攪拌反應物8小時，冷卻至室溫並攪拌(根據LCMS轉化率>90%)。在高真空下將反應物濃縮成棕色油狀物，使其分配於DCM(約200 mL)與半飽和碳酸氫鈉(約200 mL)之間。乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並濃縮。在BIOTAGEHorizon(20-50% EtOAc/己烷，160 g SiO2 )上純化粗橙色凝固泡沫，得到呈黃色凝固泡沫狀之(1R,3S,5R)-3-(4-(3-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(2.03 g，5.02 mmol)。LC-MS滯留時間2.450分鐘；m/z 404及406.06(1:1)(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,CDCl3 )δppm 7.89(s,1H),7.65(d,J =6.5 Hz,1H),7.42-7.32(m 2H),7.26(t,J =7.8 Hz,1H),4.72-4.61(m,1H),3.62-3.53(m,1H),2.51(dd,J =13.0,7.8 Hz,1H),2.36-2.26(m,1H),1.75-1.66(m,1H),1.29(br s,9H),0.84(dt,J =8.0,5.7 Hz,1H),0.63-0.57(m,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在100 mL壓力燒瓶中在真空下使(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(220 mg，0.395 mmol)(以與中間物51相同之方式由中間物55製備)、(1R,3S,5R)-3-(4-(3-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(192 mg，0.474 mmol)及碳酸銫(386 mg，1.185 mmol)於THF(4 mL)及水(4 mL)中之溶液脫氣5分鐘，接著用氮氣回填。添加乙酸鈀(II)(8.9 mg，0.039 mmol)且在120℃下加熱混合物4小時。將反應混合物冷卻至室溫，用水稀釋並用EtOAc及DCM萃取。用鹽水洗滌合併之有機層，乾燥(Na2 SO4 )，過濾並濃縮。在BIOTAGE系統上(90 g矽膠濾筒，用含0至100% EtOAc之己烷的梯度溶離)純化粗殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(142 mg，0.203 mmol)。LC-MS滯留時間1.585分鐘；m/z 699.57(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 um管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.33(d,J =1.2 Hz,1H),8.31(s,1H),8.20-8.24(m,1H),8.14-8.20(m,1H),8.10-8.14(m,1H),7.97-8.07(m,3H),7.94(d,J =7.9 Hz,1H),7.87-7.92(m,1H),7.77-7.82(m,1H),7.67-7.74(m,1H),4.84-4.96(m,2H),3.67(br s,2H),2.69-2.80(m,2H),2.47(br s,2H),1.82-1.91(m,2H),1.19-1.63(m,18H),0.89-0.97(m,2H),0.77(br s,2H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將TFA(2 mL，26.0 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(130 mg，0.20 mmol)之DCM(2 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物2小時。在真空下移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(甲醇/水，0.1%TFA)純化粗產物，得到呈棕褐色固體之(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷的三氟乙酸鹽(103 mg)。LC-MS滯留時間1.303分鐘；m/z 499.13(M H+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 μm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.33(s,1H),8.22(d,J =12.5 Hz,2H),8.02(dd,J =8.6,5.8 Hz,2H),7.90-7.97(m,2H),7.75-7.82(m,4H),7.58(t,J =7.8 Hz,1H),4.74-4.78(m,2H),3.46-3.53(m,2H),2.64-2.74(m,4H),2.04-2.12(m,2H),1.19-1.26(m,2H),1.02(ddd,J =14.2,7.3,7.2 Hz,2H)。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴喹喏啉-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將Pd(Ph3 P)4 (28.5 mg，0.025 mmol)添加至經脫氣之6-溴-2-氯喹喏啉(60 mg，0.246 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(115 mg，0.271 mmol)及碳酸氫鈉(62.1 mg，0.739 mmol)於二噁烷(1 mL)及H2 O(0.2 mL)中的溶液中且在110℃下攪拌混合物2小時，接著在120℃下攪拌2小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈亮黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴喹喏啉-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(102.2 mg，0.202 mmol，82%產率)。LC-MS滯留時間2.31分鐘；m/z 506[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。
2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉-6-基酸將Pd(Ph3 P)4 (23.28 mg，0.020 mmol)添加至經脫氣之(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴喹喏啉-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(102 mg，0.201 mmol)、KOAc(49.4 mg，0.504 mmol)及雙(頻哪醇根基)二硼(113 mg，0.443 mmol)於二噁烷(2 mL)中的溶液中且在83℃下攪拌反應物16小時。使反應混合物分配於EtOAc(20 mL)與飽和NH4 Cl(水溶液)(5 mL)之間。乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並濃縮成橙色油狀物，藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈橙色固體狀之2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉-6-基酸(57 mg，0.121 mmol，60.0%產率)。LC-MS滯留時間1.94分鐘；m/z 472[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將Pd(OAc)2 (2.67 mg，0.012 mmol)添加至經脫氣之2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉-6-基酸(56 mg，0.119 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(66.9 mg，0.178 mmol)、二環己基(2',6'-二甲氧基聯苯-2-基)膦(9.76 mg，0.024 mmol)及K2 CO3 (49.3 mg，0.356 mmol)於THF(1 mL)及水(0.25 mL)中的溶液中且在120℃下攪拌混合物2小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉-6-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(32 mg，0.047 mmol)。LC-MS滯留時間1.89分鐘；m/z 675[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=95%水/5%甲醇/10 mM乙酸銨。溶劑B=5%水/95%甲醇/10 mM乙酸銨。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=2分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.44(s,1H),8.45(br s,1H),8.39(s,1H),8.23(d,J =8.8 Hz,1H),8.18(d,J =8.5 Hz,1H),8.13(d,J =8.8 Hz,1H),7.69-7.76(m,1H),7.64(s,1H),4.69-4.78(m,1H),4.49-4.57(m,1H),3.56-3.70(m,2H),2.50-2.73(m,2H),2.31-2.47(m,2H),1.67-1.86(m,2H),1.31(br s,18H),0.82-0.95(m,2H),0.54-0.75(m,2H)。
2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)喹喏啉將TFA(0.25 mL，3.24 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉-6-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(30 mg，0.044 mmol)之DCM(0.5 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。在真空下移除揮發性物質且用Et2 O濕磨殘餘物，得到呈黃色固體狀之2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喏啉的三氟乙酸鹽(32.7 mg)。LC-MS滯留時間1.33分鐘；m/z 475[M+H]]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始%B=0。最終%B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.47(s,1H),8.54(s,1H),8.50(s,1H),8.31(dd,J =8.8,1.8 Hz,1H),8.26(dd,J =8.5,1.3 Hz,1H),8.15(d,J =8.8 Hz,1H),7.83(s,1H),7.82(d,J =8.8 Hz,1H),4.85-4.97(m,1H),4.67(dd,J =10.8,7.5 Hz,1H),3.45-3.57(m,2H),2.77-2.86(m,1H),2.65-2.74(m,1H),2.52-2.65(m,2H),2.02-2.15(m,2H),1.18-1.30(m,2H),0.95-1.09(m,2H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷在室溫下將TFA(1 mL，12.98 mmol)逐滴添加至(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(450 mg，1.20 mmol)之DCM(5 mL)溶液中。在室溫下攪拌混合物2小時，接著移除揮發性物質且將殘餘物溶解於MeOH(5 mL)中並經由Strata XC MCX濾筒過濾。用甲醇(30 mL)洗滌該濾筒且藉由用2 M氨/甲醇溶液(40 mL)溶離來自濾筒釋放化合物並濃縮，產生呈白色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(283 mg，1.03 mmol，86%產率)。LC-MS滯留時間0.448分鐘；m/z 275.94(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.17(s,1H),4.20(dd,J =10.4,7.3 Hz,1H),3.08(td,J =6.2,2.6 Hz,1H),2.38(dd,J =12.5,7.3 Hz,1H),2.19(ddd,J =12.7,10.5,4.9 Hz,1H),1.68-1.74(m,1H),0.85(ddd,J =6.6,4.4,2.8 Hz,1H),0.61-0.67(m,1H)。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯將HATU(464 mg，1.22 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(280 mg，1.02 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(214 mg，1.22 mmol)及DIEA(1.8 mL，10 mmol)於DMF(3 mL)中之溶液中。在室溫下攪拌反應混合物2小時，接著用MeOH(5 mL)及水(5 mL)稀釋。在真空下移除揮發性物質且用急驟層析純化殘餘物(將樣品乾式裝載於矽膠上且用0-100乙酸乙酯/己烷溶離)，得到呈淺黃色油狀之(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(500 mg，0.925 mmol，91%產率)。LC-MS滯留時間0.850分鐘；m/z 432.97(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 7.09(s,1H),5.09(dd,J =8.9,4.6 Hz,1H),4.47-4.60(m,1H),3.67(s,3H),3.59-3.62(m,1H),2.39-2.49(m,1H),2.29-2.39(m,1H),2.12(dq,J =13.6,6.8 Hz,1H),1.95-2.06(m,1H),1.11(dt,J =8.6,5.5 Hz,1H),0.94-1.02(m,3H),0.91(d,J =6.7 Hz,3H),0.76(br s,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在0℃下在真空下使(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(573 mg，1.04 mmol)、(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(374 mg，0.87 mmol)、二環己基(2',6'-二甲氧基聯苯-2-基)膦(SPHOS，71.0 mg，0.173 mmol)及碳酸銫(846 mg，2.60 mmol)於THF(7.9 mL)及水(0.8 mL)中之溶液脫氣5分鐘，接著用氮氣回填反應器。添加乙酸鈀(II)(19.4 mg，0.087 mmol)且在100℃下加熱反應混合物3小時。將水添加至經冷卻之溶液中且進一步用EtOAc(15 mL)稀釋反應物。分離各相且用EtOAc(15 mL)萃取水層。經Na2 SO4 乾燥合併之有機層，經由矽藻土(CELITE)墊過濾且在減壓下移除揮發性物質。用急驟層析純化殘餘物(將樣品乾式裝載於矽膠上且依序用20-100%乙酸乙酯/己烷、5% MeOH/DCM溶離)，得到(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(246 mg，0.337 mmol，39.0%產率)。LC-MS滯留時間1.448分鐘；m/z 730.21(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.32(br s,1H),8.30(s,1H),8.03-8.19(m,4H),7.96-8.03(m,1H),8.01(s,1H),7.85-7.96(m,2H),5.18(dd,J =9.0,7.0 Hz,1H),5.09(dd,J =8.9,7.6 Hz,1H),4.58(d,J =6.5 Hz,1H),3.81-3.89(m,1H),3.65-3.75(m,1H),3.69(s,3H),2.68-2.86(m,2H),2.52(dt,J =13.6,6.8 Hz,2H),2.15-2.29(m,1H),2.06-2.15(m,1H),1.85-1.95(m,1H),1.51(br s,4H),1.41(d,J =16.3 Hz,1H),1.27(s,1H),1.20(br s,3H),1.12(ddd,J =8.7,6.0,5.9 Hz,1H),1.04(d,J =6.8 Hz,3H),0.87-1.00(m,5H),0.83(br s,1H)。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯將TFA(2 mL)添加至(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(226 mg，0.310 mmol)之DCM(5 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。在真空下濃縮溶液，將殘餘物溶解於MeOH(10 mL)中，經由Strata XC MCX濾筒過濾且用甲醇(25 mL)洗滌。藉由用2 M氨/甲醇溶液(10 mL)洗滌管柱自濾筒釋放化合物並在減壓下濃縮，產生呈棕褐色固體狀之(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(131 mg，0.208 mmol)。LC-MS滯留時間1.235分鐘；m/z 630.17(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.16(s,1H),8.07(s,1H),7.92(dd,J =8.3,6.3 Hz,2H),7.87(s,1H),7.78-7.85(m,2H),7.60-7.69(m,2H),7.44(s,1H),5.20(dd,J =8.8,4.8 Hz,1H),4.62(d,J =6.8 Hz,1H),4.28(dd,J =9.8,7.8 Hz,1H),3.66-3.76(m,4H),3.35-3.41(m,2H),3.03(td,J =6.0,2.5 Hz,1H),2.40-2.59(m,3H),2.12-2.25(m,2H),1.99-2.09(m,1H),1.59-1.68(m,1H),1.10-1.18(m,1H),1.00-1.08(m,3H),1.04(d,J=6.8 Hz,3H),0.91-1.04(m,1H),0.95(d,J=6.8 Hz,3H),0.76-0.84(m,2H),0.50-0.59(m,1H)。
(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基胺基甲酸甲酯將HATU(846 mg，2.23 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(510 mg，1.85 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(483 mg，2.23 mmol)及DIEA(3.24 mL，18.5 mmol)於DMF(5 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用MeOH(5 mL)及水(5 mL)稀釋反應混合物。在真空下移除揮發性物質且用急驟層析純化殘餘物(將樣品乾式裝載於矽膠上且依序用0-100%乙酸乙酯/己烷、10% MeOH/DCM溶離)，得到呈白色泡沫狀之(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基胺基甲酸甲酯(370 mg，0.780 mmol，42.1%產率)。進一步在逆相HPLC(水/甲醇，0.1% TFA)上純化不純物質，得到呈無色油狀之(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(387 mg)。LC-MS滯留時間0.690分鐘；m/z 474.95(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 7.58(s,1H),5.04(dd,J =9.2,6.7 Hz,1H),4.56(d,J =7.8 Hz,1H),3.96(td,J =11.7,3.1 Hz,2H),3.74-3.81(m,1H),3.65-3.73(m,3H),3.35-3.44(m,2H),2.61(dd,J =13.6,9.3 Hz,1H),2.37(ddd,J =13.6,6.7,6.5 Hz,1H),1.96-2.09(m,2H),1.37-1.62(m,4H),1.06(dt,J =8.8,5.9 Hz,1H),0.84(td,J =5.6,2.4 Hz,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯在0℃下在真空下使(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(407 mg，0.738 mmol)、(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基胺基甲酸甲酯之三氟乙酸鹽(350 mg)、二環己基(2',6'-二甲氧基聯苯-2-基)膦(60.6 mg，0.148 mmol)及碳酸銫(721 mg，2.21 mmol)於THF(6.7 mL)及水(0.7 mL)中之漿料脫氣5分鐘，接著用氮氣回填反應器。添加乙酸酯鈀(II)(16.6 mg，0.074 mmol)且在100℃下加熱混合物3小時。在真空下移除揮發性物質且用水(20 mL)及EtOAc(20 mL)稀釋混合物。分離各相且用EtOAc(20 mL)萃取水層。經Na2 SO4 乾燥合併之有機層，過濾並在真空下蒸發。用急驟層析純化殘餘物(將樣品乾式裝載於矽膠上且依序用20-100%乙酸乙酯/己烷、10% MeOH/DCM溶離)。再次在逆相HPLC(水/甲醇，0.1% TFA)上純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯的三氟乙酸鹽(231 mg)。LC-MS滯留時間1.395分鐘；m/z 772.31(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,2H),8.09-8.18(m,3H),8.05(dd,J =8.7,1.7 Hz,1H),7.97-8.02(m,2H),7.91(d,J =8.6 Hz,1H),7.88(dd,J =8.7,1.7 Hz,1H),5.16(dd,J =9.2,7.0 Hz,1H),5.01-5.09(m,1H),4.62(d,J =7.6 Hz,1H),3.91-4.02(m,3H),3.83-3.89(m,1H),3.70(br s,4H),3.35-3.45(m,2H),2.68-2.83(m,2H),2.45-2.57(m,2H),2.04-2.16(m,2H),1.90(br s,1H),1.43-1.61(m,8H),1.14-1.31(m,4H),1.07-1.13(m,1H),0.97(dt,J =8.8,5.8 Hz,1H),0.91(br s,1H),0.82(br s,1H)。
(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基胺基甲酸甲酯將TFA(2 mL，26.0 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(150 mg)的DCM溶液中且在室溫下攪拌混合物2小時。在真空下移除揮發性物質且將殘餘物溶解於MeOH(15 mL)中，經由Strata XC MCX濾筒(1 g)過濾且用甲醇洗滌。藉由用2 M氨/甲醇溶液(20 mL)洗滌管柱來自濾筒釋放化合物並濃縮,產生呈白色固體狀之(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基胺基甲酸甲酯(100 mg，0.149 mmol)。LC-MS滯留時間1.772分鐘；m/z 670.36(M-H+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為10%水/90%甲醇/10 mM乙酸銨及溶劑。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.28(s,1H),8.24(s,1H),8.13(d,J =8.9 Hz,1H),8.05-8.10(m,1H),8.03(s,1H),7.96-8.00(m,2H),7.84(dd,J =8.7,1.7 Hz,1H),7.75-7.82(m,2H),5.16(dd,J =9.2,7.3 Hz,1H),4.84-4.88(部分經MeOD遮蓋,m,1H),4.62(d,J =7.6 Hz,1H),3.91-4.01(m,2H),3.84-3.89(m,1H),3.66-3.76(m,3H),3.51-3.56(m,1H),3.35-3.46(m,2H),2.82(dd,J =12.8,7.3 Hz,1H),2.73(dd,J =13.7,9.2 Hz,1H),2.61(td,J =12.0,4.7 Hz,1H),2.53(ddd,J =13.8,6.8,6.6 Hz,1H),2.06-2.16(m,3H),1.58-1.64(m,1H),1.44-1.57(m,3H),1.23-1.30(m,1H),1.08-1.16(m,1H),1.05(q,J =7.8 Hz,1H),0.88-0.93(m,1H)。
6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹喏啉將二氯雙(三苯基膦)-鈀(II)(17.30 mg，0.025 mmol)添加至6-溴-2-氯喹喏啉(60 mg，0.246 mmol)及三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(107 mg，0.296 mmol)於二噁烷(1.5 mL)中之溶液中且在110℃下攪拌混合物2小時。用MeOH稀釋反應物，且藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈白色固體狀之6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹喏啉(36 mg，0.129 mmol，52.3%產率)。LC-MS滯留時間2.76分鐘；m/z 279[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終%B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。
2-溴-1-(6-溴喹喏啉-2-基)乙酮將NBS(55.1 mg，0.310 mmol)添加至6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹喏啉(72 mg，0.26 mmol)於THF(2 mL)及水(0.500 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物2小時。用MeOH稀釋反應物且藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈白色固體狀之2-溴-1-(6-溴喹喏啉-2-基)乙酮(50 mg，0.15 mmol，59%產率)。LC-MS滯留時間2.40分鐘；m/z 329[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。
(1S,3S,5S)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹喏啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯將DIPEA(0.040 mL，0.227 mmol)添加至2-溴-1-(6-溴喹喏啉-2-基)乙酮(50 mg，0.152 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(37.9 mg，0.167mmol)於乙腈(1.5 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。蒸發溶劑且使殘餘物分配於EtOAc(20 mL)/飽和NaHCO3 水溶液(5 mL)之間。乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並濃縮，得到呈橙色固體狀之粗(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹喏啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(63 mg)。LC-MS滯留時間2.74分鐘；m/z 476[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴喹喏啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將NH4 OAc(102 mg，1.323 mmol)添加至(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹喏啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(63 mg，0.13 mmol)之甲苯(3 mL)溶液中且在120℃下攪拌混合物4小時。再添加NH4 OAc(102 mg，1.323 mmol)且進一步在120℃下加熱反應物4小時。用EtOAc(20 mL)及飽和NaHCO3 水溶液(5 mL)稀釋反應物。乾燥(MgSO4 )有機層，過濾，濃縮，接著藉由急驟二氧化矽層析(用1:2 EtOAc/己烷溶離)純化，得到呈紅橙色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴喹喏啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(25 mg，0.055 mmol)。LC-MS滯留時間2.07分鐘；m/z 456[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始%B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸酯將Pd(OAc)2 (1.230 mg，5.48 μmol)添加至經脫氣之(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴喹喏啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(25 mg，0.055 mmol)、K2 CO3 (22.71 mg，0.164 mmol)、二環己基(2',6'-二甲氧基聯苯-2-基)膦(4.50 mg，10.96 μmol)及(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(30.3 mg，0.071 mmol)於THF(1 mL)及水(0.250 mL)中的懸浮液中且在110℃下攪拌混合物2小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(12 mg，0.018 mmol，33%產率)。LC-MS滯留時間1.90分鐘；m/z 675[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=95%水/5%甲醇/10 mM乙酸銨。溶劑B=5%水/95%甲醇/10 mM乙酸銨。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=2分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.38(s,1H),8.28(d,J =2.0 Hz,1H),8.16-8.22(m,1H),8.10-8.15(m,1H),7.95(s,2H),7.66-7.76(m,2H),3.54-3.73(m,2H),2.52-2.69(m,2H),2.33-2.47(m,2H),1.71-1.84(m,2H),1.08-1.57(m,20H),0.83-0.95(m,2H),0.60-0.74(m,2H)。
6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)喹喏啉將TFA(0.25 mL，3.24 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(10 mg，0.015 mmol)之DCM(0.5 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。在真空下移除揮發性物質且用Et2 O濕磨殘餘物。用Et2 O沖洗所得固體，得到呈黃色固體狀之6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喏啉的三氟乙酸鹽(10.5 mg)。LC-MS滯留時間1.32分鐘；m/z 475[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。
(2S)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((苯甲基氧基)羰基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯啶甲酸苯甲酯以類似於中間物39之方式，使用(S)-1-(苯甲基氧基羰基)吡咯啶-2-甲酸作為起始物質而非(S)-1-(第三丁氧羰基)吡咯啶-2-甲酸來製備且不用SEM保護中間物。製備呈白色固體狀之(2S)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((苯甲基氧基)羰基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯啶甲酸苯甲酯(20.8 mg)。LC-MS滯留時間1.742分鐘；m/z 769.41(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。實例
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(59 mg，0.15 mmol)添加至2,7-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(37 mg)、二異丙基乙胺(68 μL，0.40 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(27 mg，0.15 mmol)於DMF(2 mL)中之混合物中且在周圍條件下攪拌所得混合物2.5小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且攪拌15分鐘。在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)及逆相HPLC(水/乙腈/NH4 OAc)純化殘餘物兩次，得到所需產物，將其懸浮於甲醇及TFA中。在真空中移除揮發性物質，得到呈棕褐色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(11.3 mg)。LC-MS滯留時間1.34分鐘；C46 H52 N8 O6 之計算值：812.4，m/z實驗值：813.42[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1%TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,2H),8.03-8.10(m,4H),7.96-8.02(m,Hz,2H),7.89(dd,J =8.6,1.5 Hz,2H),7.85(m,2H),5.36(t,J =7.0 Hz,2H),4.22-4.32(m,2H),4.09-4.19(m,2H),3.89-4.00(m,2H),3.63-3.74(m,6H),2.56-2.70(m,2H),2.31-2.40(m,2H),2.19-2.31(m,4H),2.08(dd,J =13.6,6.9 Hz,2H),0.95(d,J =7.0 Hz,6H),0.89(d,J =6.7 Hz,6H)。
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(82 mg，0.217 mmol)添加至含2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(69 mg)、二異丙基乙胺(126 μL，0.723 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(51 mg，0.29 mmol)的DMF(2 mL)中且在周圍條件下攪拌所得混合物2.5小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。接著在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化殘餘物，得到呈棕褐色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(47 mg)。LC-MS滯留時間1.30分鐘；C46 H52 N8 O6 之計算值：812.40，m/z實驗值：813.42[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.25(s,2H),8.07-8.16(m,4H),8.02(m,J =8.6 Hz,2H),7.91(m,J =8.6 Hz,2H),7.87(d,J =8.6 Hz,2H),5.37(t,J =7.2 Hz,2H),4.28(d,J =7.0 Hz,2H),4.09-4.18(m,2H),3.90-4.01(m,2H),3.63-3.73(m,6H),2.57-2.70(m,2H),2.32-2.45(m,2H),2.19-2.32(m,4H),2.09(dq,J =13.6,6.9 Hz,2H),0.95(d,J =6.7 Hz,6H),0.89(d,J =6.7 Hz,6H)。
(mg，0.15 mmol)於DMF(2 mL)中之混合物中且在周圍條件下攪拌所得混合物2.5小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。接著在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化殘餘物，得到呈棕褐色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-(1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(31.4 mg)。LC-MS滯留時間1.37分鐘；C48 H54 N8 O6 之計算值：838.42，m/z實驗值：839.36[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.23-8.28(m,2H),8.08-8.15(m,3H),8.02(d,J =8.6 Hz,1H),7.95-8.00(m,2H),7.85-7.95(m,6H),5.40(t,J =7.2 Hz,1H),5.29(t,J =7.5 Hz,1H),4.29(dd,J =19.4,7.2 Hz,2H),4.10-4.19(m,2H),3.96-4.03(m,1H),3.87-3.96(m,1H),3.69(m,6H),2.55-2.73(m,2H),2.04-2.42(m,8H),0.89-1.05(m,12H)。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(29 mg，0.076 mmol)添加至2-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(7-(4-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑之三氟乙酸鹽(25 mg)、二異丙基乙胺(45 μL，0.26 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(13 mg，0.76 mmol)於DMF(2 mL)中之混合物中且在周圍條件下攪拌所得混合物2.5小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。接著在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(14.2 mg)。LC-MS滯留時間1.40分鐘；C48 H54 N8 O6 之計算值：838.42，m/z實驗值：839.36[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.33(br s,2H),8.13(s,1H),8.03-8.10(m,3H),8.00(d,J =8.2 Hz,2H),7.86-7.94(m,6H),5.40(t,J =7.2 Hz,1H),5.29(t,J =7.6 Hz,1H),4.31(d,J =7.3 Hz,1H),4.27(d,J =7.3 Hz,1H),4.10-4.20(m,2H),3.85-4.10(m,2H),3.69(s,6H),2.55-2.74(m,2H),2.03-2.37(m,8H),0.85-1.05(m,12H)。
((1S)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-丙胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-1-甲基-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(74.5 mg，0.196 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(40 mg)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)丙酸(28.8 mg，0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL，0.653 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物9小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)純化，得到呈白色固體狀之((1S)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-丙胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-1-甲基-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(35.9 mg)。LC-MS滯留時間1.12分鐘；C42 H44 N8 O6 之計算值：756.34，m/z實驗值：757.20[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.22-8.30(m,2H),8.08-8.18(m,4H),7.99-8.07(m,2H),7.83-7.96(m,4H),5.44(dd,J =8.6,5.2 Hz,2H),4.56(q,J =6.9 Hz,2H),4.0-4.09(m,2H),3.94-4.02(m,2H),3.61-3.75(m,6H),2.58-2.72(m,2H),2.21-2.38(m,6H),1.32-1.45(m,6H)。
實例6(2,6-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯啶二基((1R)-2-側氧基-1-苯基-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯將HATU(74.5 mg，0.196 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(40 mg)、(R)-2-(甲氧羰基胺基)-2-苯基乙酸(41.0 mg，0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL，0.653 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物9小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)，接著藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水)純化，得到呈白色固體狀之(2,6-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯啶二基((1R)-2-側氧基-1-苯基-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯(32.3 mg)。LC-MS滯留時間1.43分鐘；C52 H48 N8 O6 之計算值：880.37，m/z實驗值：881.23[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.25-8.35(m,2H),8.12-8.21(m,4H),8.05-8.12(m,2H),7.90-8.00(m,4H),7.38-7.54(m,10H),5.62(s,2H),5.38-5.53(m,2H),4.04-4.18(m,2H),3.67(s,6H),2.34-2.41(m,2H),2.46-2.58(m,2H),2.15-2.35(m,4H),2.02-2.13(m,2H)。
5,5'-(2,6-萘二基)雙(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑)將HATU(74.5 mg，0.196 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(40 mg)、(R)-2-苯基-2-(哌啶-1-基)乙酸(43.0 mg，0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL，0.653 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物9小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)，接著藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水)純化，得到呈白色固體狀之5,5'-(2,6-萘二基)雙(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑)(44.3 mg)。LC-MS滯留時間1.18分鐘；[M+H]+ C58 H50 N8 O2 之計算值：900.48，m/z實驗值：451.33[1/2 M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1%TFA。
(1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基胺基)-2-苯基乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-N,N-二甲基-2-側氧基-1-苯基乙胺將HATU(74.5 mg，0.196 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(40 mg，0.065 mmol)、(R)-2-(二甲基胺基)-2-苯基乙酸(35.1 mg)及DIEA(0.114 mL，0.653 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物9小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)，接著藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水)純化，得到呈灰白色固體之(1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基胺基)-2-苯基乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-N,N-二甲基-2-側氧基-1-苯基乙胺(44.3 mg)。LC-MS滯留時間1.07分鐘；C52 H52 N8 O2 之計算值：820.42，m/z實驗值：821.29[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,2H),8.20-8.24(m,2H),8.13-8.20(m,2H),8.07-8.13(m,2H),7.89-8.05(m,4H),7.60-7.70(m,10H),5.55-5.59(m,2H),5.52(dd,J =8.7,3.8 Hz,2H),4.11-4.19(m,2H),2.42-3.18(m,13H),2.17-2.36(m,5H),1.98-2.08(m,4H)。
((1S,2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-蘇胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(74.5 mg，0.196 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(40 mg)、(2S,3R)-3-甲氧基-2-(甲氧羰基胺基)丁酸(37.4 mg，0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL，0.653 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物9小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)，接著藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水)純化，得到呈白色固體狀之((1S,2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-蘇胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯(9.3 mg)。LC-MS滯留時間1.22分鐘；[M+H]+ C46 H52 N8 O8 之計算值：844.39，m/z實驗值：845.25[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.10-8.21(m,2H),7.99-8.08(m,2H),7.83-7.96(m,4H),7.58-7.77(m,4H),5.70-5.75(m,0.4H),5.35(dd,J =7.9,4.9 Hz,1.6H),4.58-4.61(m,0.2H),4.51(d,J =4.9 Hz,1.5H),4.37-4.43(m,0.3H),3.89-4.08(m,3H),3.61-3.78(m,7H),3.38-3.45(m,2H),3.23-3.31(m,5H),1.93-2.57(m,9H),1.10-1.28(m,6H)。
((1S)-3-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-高絲胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(74.5 mg，0.196 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(40 mg)、(S)-4-甲氧基-2-(甲氧羰基胺基)丁酸(37.4 mg，0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL，0.653 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物9小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-3-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-高絲胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(28.6 mg)。LC-MS滯留時間1.18分鐘；[M+H]+ C46 H52 N8 O8 之計算值：844.39，m/z實驗值：845.22[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.23-8.30(m,2H),8.09-8.18(m,4H),8.00-8.09(m,2H),7.84-7.97(m,4H),5.84-5.90(m,0.2H),5.44(dd,J =8.2,4.9 Hz,1.8H),4.65(dd,J =9.2,4.0 Hz,1.8H),4.38-4.45(m,0.2H),3.91-4.11(m,4H),3.66-3.78(m,6H),3.39-3.55(m,4H),3.27-3.38(m,7H),2.59-2.75(m,2H),2.25-2.40(m,5H),2.16(dddd,J =14.3,7.0,6.8,4.3 Hz,2H),1.74-1.93(m,2H)。
(2,6-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯啶二基((1S)-1-環丙基-2-側氧基-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯將HATU(74.5 mg，0.196 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(40 mg，0.065 mmol)、(S)-2-環丙基-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(33.9 mg，0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL，0.653 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物9小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)純化，得到呈白色固體狀之(1S,1'S)-2,2'-((2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))雙(吡咯啶-2,1-二基))雙(1-環丙基-2-側氧基乙烷-2,1-二基)二胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(34.9 mg，0.038 mmol，58%產率)。LC-MS滯留時間1.23分鐘；C46 H48 N8 O6 之計算值：808.37，m/z實驗值：809.22[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.20-8.29(m,2H),8.07-8.16(m,4H),7.98-8.07(m,2H),7.84-7.95(m,4H),5.37-5.48(m,2H),4.03-4.13(m,2H),3.87-4.03(m,4H),3.64-3.74(m,6H),2.65-2.74(m,2H),2.20-2.40(m,6H),1.09-1.22(m,2H),0.47-0.67(m,6H),0.30-0.46(m,2H)。
(2,7-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯啶二基((1R)-2-側氧基-1-苯基-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯將HATU(56.2 mg，0.148 mmol)添加至經攪拌之2-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(47 mg)、(R)-2-(甲氧羰基胺基)-2-苯基乙酸(30.9 mg，0.148 mmol)及DIEA(0.086 mL，0.49 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物4小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1%TFA之乙腈/水)純化，得到呈淡黃色固體狀之(1R,1'R)-2,2'-((2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,7-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))雙(吡咯啶-2,1-二基))雙(2-側氧基-1-苯基乙烷-2,1-二基)二胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(38 mg)。LC-MS滯留時間1.45分鐘；C52 H48 N8 O6 之計算值：880.37，m/z實驗值：881.26[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.31-8.39(m,2H),8.03-8.17(m,6H),7.84-8.00(m,4H),7.33-7.53(m,10H),5.55-5.63(m,2H),5.40-5.54(m,2H),4.01-4.17(m,2H),3.67(s,6H),3.27-4.41(m,2H),2.44-2.75(m,2H),2.01-2.33(m,6H)。
((1S)-2-((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-丙胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-1-甲基-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(56.2 mg，0.148 mmol)添加至經攪拌之2-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(47 mg)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)丙酸(21.7 mg，0.148 mmol)及DIEA(0.086 mL，0.49 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物5小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)，接著藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水)純化，得到呈白色固體狀之((1S)-2-((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-丙胺醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-1-甲基-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯(20.9 mg)。LC-MS滯留時間1.16分鐘；C42 H44 N8 O6 之計算值：756.34，m/z實驗值：757.27[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.16-8.24(m,2H),7.87-8.02(m,4H),7.80-7.87(m,2H),7.60-7.75(m,4H),5.42-5.46(m,0.3H),5.34(dd,J =7.9,4.0 Hz,1.7H),4.55(q,J =7.0 Hz,1.7H),4.31-4.37(m,0.3H),3.80-3.98(m,4H),3.67(s,5H),3.47(s,1H),2.39-2.55(m,2H),2.04-2.36(m,4H),1.92-2.01(m,2H),1.31-1.42(m,6H)。
實例14((1R)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2R)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(56.2 mg，0.148 mmol)添加至經攪拌之2-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(47 mg)、(R)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(25.9 mg，0.148 mmol)及DIEA(0.086 mL，0.49 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物5小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)，接著藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水)純化，得到呈米色固體狀之((1R)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2R)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(25 mg)。LC-MS滯留時間1.36分鐘；C46 H52 N8 O6 之計算值：812.40，m/z實驗值：813.36[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C184.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.33(s,2H),8.07-8.13(m,4H),8.05(dd,J =8.5,1.2 Hz,2H),7.84-7.96(m,4H),5.49(dd,J =8.6,3.7 Hz,2H),4.36(d,J =7.3 Hz,2H),4.15-4.23(m,2H),3.83-3.97(m,2H),3.72(s,6H),2.58-2.71(m,2H),2.21-2.38(m,6H),2.05-2.18(m,2H),1.07(d,J =6.7 Hz,6H),1.04(d,J =6.7 Hz,6H)。
5,5'-(2,7-萘二基)雙(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑)將HATU(56.2 mg，0.148 mmol)添加至經攪拌之2-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘之三氟乙酸鹽(47 mg)、(R)-2-苯基-2-(哌啶-1-基)乙酸(32.4 mg，0.148 mmol)及DIEA(0.086 mL，0.49 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物5小時，用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋，濃縮以移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)，接著藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水)純化，得到呈白色固體狀之5,5'-(2,7-萘二基)雙(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑)(16.4 mg)。LC-MS滯留時間1.21分鐘；[M+H]+ C58 H60 N8 O6 之計算值：900.48，m/z實驗值：451.431/2[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.18-8.28(m,2H),7.96-8.05(m,2.2H),7.92(d,J =1.0 Hz,1.5H),7.80-7.90(m,2.2H),7.65-7.76(m,3.8H),7.55-7.64(m,3.2H),7.46-7.55(m,4.5H),6.85-6.97(m,1.6H),6.76-6.83(m,1H),5.65-5.70(m,0.5H),5.28(dd,J =7.5,3.3 Hz,1.5H),4.48(br s,0.5H),4.02-4.12(m,1.5H),3.90-3.98(m,0.5H),3.74-3.84(m,0.5H),3.25-3.40(m,3H),2.51-2.93(m,8H),1.89-2.33(m,8H),1.62-1.75(m,8H),1.47-1.59(m 4H)。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(40 mg，0.11 mmol)添加至2-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑之三氟乙酸鹽(32 mg)、二異丙基乙胺(62 μL，0.35 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(19 mg，0.106 mmol)於DMF(2 mL)中的混合物中且在周圍條件下攪拌所得混合物9小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(用含10 mM乙酸銨之水/乙腈一次及用含0.1% TFA之水/乙腈兩次)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(21 mg)。LC-MS滯留時間1.17分鐘；C42 H50 N8 O6 之計算值：762.39，m/z實驗值：763.34[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.30(s,1H),8.27(s,1H),8.15(d,J =8.9 Hz,1H),8.10(d,J =8.9 Hz,1H),8.07(s,1H),7.94-8.01(m,3H),7.82-7.89(m,2H),5.38(t,J =7.2 Hz,1H),5.31(t,J =7.6 Hz,1H),4.28(dd,J =14.5,7.2 Hz,2H),4.15(br s,2H),3.86-4.01(m,2H),3.69(s,6H),2.55-2.69(m,2H),2.19-2.39(m,6H),2.04-2.15(m,2H),0.86-1.05(m,12H)。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(20 mg，0.053 mmol)添加至2-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(7-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑之三氟乙酸鹽(16 mg)、二異丙基乙胺(31 μL，0.18 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(9.3 mg，0.053 mmol)於DMF(2 mL)中的混合物中且在周圍條件下攪拌所得混合物9小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(含0.1% TFA之水/乙腈)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(4-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(7.9 mg)。LC-MS滯留時間1.20分鐘；C42 H50 N8 O6 之計算值：762.39，m/z實驗值：763.35[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.35(s,1H),8.25(s,1H),8.09(dd,J =8.4,3.2 Hz,2H),8.04(s,1H),7.89-8.00(m,3H),7.77-7.87(m,2H),5.37(t,J =7.0 Hz,1H),5.30(t,J=7.3 Hz,1H),4.28(dd,J =15.4,7.2 Hz,2H),4.08-4.20(m,2H),3.86-4.01(m,2H),3.69(s,6H),2.56-2.68(m,3H),2.39-2.02(m,7H),0.87-1.04(m,12H)。
實例18((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(218 mg，0.574 mmol)添加至2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(100 mg)、二異丙基乙胺(334 μL，1.91 mmol)與(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(101 mg，0.574 mmol)於DMF(2 mL)中之混合物中且在環境下攪拌所得混合物4小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。接著在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(含0.1% TFA之水/乙腈)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(85 mg)。LC-MS滯留時間1.33分鐘；C48 H52 N8 O6 之計算值：836.4，m/z實驗值：837.32[M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.22(s,2H),8.05-8.13(m,4H),7.96-8.02(m,2H),7.82-7.92(m,4H),5.22-5.32(m,2H),4.59(d,J =6.4 Hz,2H),3.86(t,J =6.0 Hz,2H),3.60-3.75(m,6H),2.66-2.79(m,2H),2.54(m,2H),2.16-2.26(m,2H),2.02-2.16(m,2H),1.10-1.16(m,2H),0.98-1.05(m,6H),0.94-0.97(m,2H),0.91(d,J =6.7 Hz,6H)。
(1R)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2R)-2-(二乙基胺基)-2-苯基乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-N,N-二乙基-2-側氧基-1-苯基乙胺將HATU(109mg，0.287 mmol)添加至2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(50 mg)、二異丙基乙胺(0.167 mL，0.957 mmol)及(R)-2-(二乙基胺基)-2-苯基乙酸鹽酸鹽(70.0 mg，0.287 mmol)於DMF(2 mL)中之混合物中且在環境下攪拌所得混合物5小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。接著在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(含0.1% TFA之水/乙腈)，接著藉由逆相HPLC(含10 mM乙酸銨之水/乙腈)，最後藉由逆相HPLC(含0.1% TFA之水/乙腈)純化殘餘物，得到呈白色粉末狀之(1R)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2R)-2-(二乙基胺基)-2-苯基乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-N,N-二乙基-2-側氧基-1-苯基乙胺的三氟乙酸鹽(25.2 mg)。LC-MS滯留時間1.15分鐘；[M+H]+ C58 H60 N8 O2 之計算值：900.48，m/z實驗值：451.46[1/2 M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.27(s,2H),8.08-8.17(m,4H),7.96(td,J =8.7,1.5 Hz,4H),7.87(d,J =8.6 Hz,2H),7.68-7.72(m,4H),7.57-7.68(m,6H),5.79(s,2H),5.23(dd,J =9.0,6.3 Hz,2H),3.95-4.05(m,2H),3.25-3.48(m,4H),3.06(br s,4H),2.43-2.61(m,4H),2.01-2.11(m,2H),1.31(t,J =6.9 Hz,12H),0.62(ddd,J =8.7,6.0,5.8 Hz,2H),-0.21(td,J =5.7,2.4 Hz,2H)。
實例20((1R)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-苯基乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-苯基乙基)胺基甲酸甲酯及實例21(2,6-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基((1R)-2-側氧基-1-苯基-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯將HATU(109 mg，0.287 mmol)添加至2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(50 mg)、二異丙基乙胺(0.167 mL，0.957 mmol)及(R)-2-(甲氧羰基胺基)-2-苯基乙酸(60.0 mg，0.287 mmol)於DMF(2 mL)中之混合物中且在環境下攪拌所得混合物5小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。接著在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(含0.1% TFA之水/乙腈)，接著藉由逆相HPLC(含10 mM乙酸銨之水/乙腈)，最後藉由逆相HPLC(含0.1% TFA之水/乙腈)純化殘餘物，得到呈白色固體狀之((1R)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-苯基乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-苯基乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(6.9 mg)及呈白色固體狀之(2,6-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基((1R)-2-側氧基-1-苯基-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(12.5 mg)。實例20之分析數據：LC-MS滯留時間1.46分鐘；C54 H48 N8 O6 之計算值：904.37，m/z實驗值：453.35[1/2 M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.28(d,J =4.6 Hz,2H),8.15(d,J =8.6 Hz,2H),8.12(s,1H),8.07(s,1H),8.03(t,J =8.9 Hz,2H),7.92-7.98(m,2H),7.90(d,J =8.6 Hz,1H),7.85(d,J =8.6 Hz,1H),7.48-7.54(m,2H),7.37-7.48(m,8H),5.85(s,1H),5.78(s,1H),5.39(dd,J =9.0,6.3 Hz,1H),5.29(dd,J =9.2,5.8 Hz,1H),3.91-3.97(m,1H),3.68(s,3H),3.66(s,3H),3.52-3.61(m,1H),2.73(dd,J =13.7,9.2 Hz,1H),2.46-2.65(m,3H),2.06-2.14(m,1H),1.98-2.06(m,1H),1.23-1.30(m,1H),1.10(br s,1H),0.66-0.72(m,1H),0.01-0.10(m,1H)。實例21之分析數據：LC-MS滯留時間1.48分鐘；[M+H]+ C54 H48 N8 O6 之計算值：904.37，m/z實驗值：453.35[1/2 M+H]+ 。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(s,2H),8.16(d,J =8.6 Hz,2H),8.11(s,2H),8.01-8.06(m,2H),7.95(d,J =8.6 Hz,2H),7.90(m,J =8.6 Hz,2H),7.48-7.55(m,4H),7.36-7.48(m,6H),5.85(s,2H),5.29(dd,J =9.2,5.8 Hz,2H),3.92-3.97(m,2H),3.66(s,6H),2.55-2.66(m,2H),2.51(ddd,J =13.3,6.6,6.4 Hz,2H),1.97-2.07(m,2H),0.63-0.74(m,2H),-0.02-0.10(m,2H)。
實例22((1S)-1-(((2S)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯及實例23((1S)-1-(((2R)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(63.5 mg，0.167 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)萘之鹽酸鹽(45 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(29.3 mg，0.167 mmol)於DMF(1 mL)及DIPEA(0.122 mL，0.696 mmol)中的漿料中。在室溫下攪拌反應混合物16小時，用MeOH稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水)純化，得到呈白色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(19.2 mg)及呈白色固體狀之((1S)-1-(((2R)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(16.5 mg)(若在此步驟期間或在前一步驟中吡咯啶立體異構中心外消旋化，則不確定)。藉由對掌性HPLC解析2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)萘顯示寬峰，但個別非對映異構體在試驗條件下無法解析。實例22之分析數據：LC-MS滯留時間1.407分鐘；m/z 815.60(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.82-8.71(m,2H),8.32-8.18(m,4H),8.14-8.07(m,2H),7.92-7.84(m,2H),5.37-5.29(m,2H),4.30(d,J =7.3 Hz,2H),4.13-4.04(m,2H),4.02-3.92(m,2H),3.68(s,6H),2.54-1.98(m,10H),1.03-0.89(m,12H)。實例23之分析數據：LC-MS滯留時間1.442分鐘；m/z 815.59(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.89-8.66(m,2H),8.36-8.20(m,4H),8.15-8.10(m,2H),7.94-7.86(m,2H),5.44-5.29(m,2H),4.34(d,J =7.6 Hz,1H),4.30(d,J =7.6 Hz,1H),4.21-3.80(m,4H),3.74(s,3H),3.68(s,3H),2.69-1.95(m,10H),1.09-0.41(m,12H)。
實例24((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯及實例25A((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯及實例25B((1S)-1-(((2R)-2-(5-(6-(2-((2R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(63 mg，0.17 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)萘之鹽酸鹽(45 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(29 mg，0.17 mmol)於DMF(1 mL)及DIPEA(0.12 mL，0.69 mmol)中的漿料中。在室溫下攪拌反應混合物16小時，用MeOH稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之乙腈/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(11.2 mg)、呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(17.3 mg)及呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2R)-2-(5-(6-(2-((2R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(6.7 mg)(若在此步驟期間或在前一步驟中吡咯啶立體異構中心外消旋化，則未確定)。藉由對掌性HPLC解析2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)萘顯示寬峰，但個別非對映異構體在試驗條件下無法解析。實例24之分析數據：LC-MS滯留時間1.420分鐘；m/z 817.59(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 9.14-9.06(m,2H),8.71-8.64(m,2H),8.37-8.29(m,2H),8.18-8.11(m,2H),5.59-5.30(m,2H),4.30(d,J =7.3 Hz,2H),4.13-3.96(m,4H),3.78-3.64(m,6H),2.57-2.01(m,10H),1.07-0.92(m,12H)。
實例25A之分析數據：LC-MS滯留時間1.507分鐘；m/z 817.56(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上,使用SPD-10AV UV-Vis偵測器,在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 9.14-9.02(m,2H),8.69-8.60(m,2H),8.36-8.27(m,2H)28.15-8.08(m,2H),5.41-5.36(m,1H),5.34-5.29(m,1H),4.35(d,J =7.9 Hz,1H),4.31(d,J =7.3 Hz,1H),4.24-3.81(m,4H),3.78(s,3H),3.68(s,3H),2.62-1.97(m,10H),1.09-0.46(m,12H)。
實例25B之分析數據：LC-MS滯留時間1.562分鐘：m/z 817.58(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%水/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
實例26(2,6-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯啶二基((1S)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯將HATU(114 mg，0.301 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(50 mg)、二異丙基乙胺(175 μL，1.0 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(65 mg，0.30 mmol)於DMF(5 mL)中的溶液中且在周圍條件下攪拌所得混合物2小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。接著在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之(2,6-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯啶二基((1S)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(51.5 mg)。LC-MS滯留時間1.117分鐘；m/z 897.31(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽500 MHz,MeOD)δppm 8.27(br s,2H),8.10-8.18(m,4H),8.01-8.07(m,2H),7.86-7.96(m,4H),5.88-5.93(m,0.2H),5.39(t,J =7.0 Hz,1.8H),4.33-4.38(m,2H),4.12-4.22(m,2H),3.89-4.05(m,7H),3.70(s,6H),3.35-3.45(m,2H),2.60-2.75(m,2H),2.14-2.47(m,6.5H),1.94-2.12(m,2.5H),1.32-1.69(m,8H)。
((1S)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(87 mg，0.23 mmol)添加至經攪拌之((1S)-2-甲基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯(50 mg)、二異丙基乙胺(133 μL，0.76 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(50 mg，0.23 mmol)於DMF(3 mL)中的溶液中且在周圍條件下攪拌所得混合物2小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。接著在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(36 mg)。LC-MS滯留時間1.177分鐘；m/z 855.30(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.22-8.30(m,1.8H),8.20(br s,0.2H),8.07-8.17(m,4H),8.00-8.06(m,1.8H),7.98(br s,0.2H),7.85-7.95(m,4H),5.86(m,0.1H),5.35-5.44(m,1.8H),5.25-5.31(m,0.1H),4.36(d,J =7.6 Hz,0.5H),4.31(d,J =6.7 Hz,1H),4.15(br s,1.5H),3.87-4.05(m,4H),3.69(br s,6H),3.34-3.47(m,1H),2.96-3.23(m,2H),2.61-2.77(m,2.5H),2.21-2.47(m,6H),1.95-2.16(m,2H),1.33-1.69(m,3.5H),1.00-1.05(m,0.3H),0.94-0.99(m,3H),0.91(d,J =6.7 Hz,2.7H)。
((1S)-2-((2S)-2-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(36.6 mg，0.096 mmol)添加至經攪拌之2-((S)-吡咯啶-2-基)-6-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑之三氟乙酸鹽(29 mg)、二異丙基乙胺(56 μL，0.32 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(21 mg，0.10 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中且在周圍條件下攪拌所得混合物2小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。接著在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/乙腈/TFA)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((2S)-2-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(16.3 mg)。LC-MS滯留時間1.023分鐘；m/z 847.31(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AVUV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(d,J =12.5 Hz,2H),8.15(d,J =8.6 Hz,1H),8.10(d,J =8.5 Hz,1H),8.07(s,1H),7.92-8.01(m,3H),7.81-7.90(m,2H),5.37(dd,J =7.9,6.1 Hz,1H),5.30(t,J =7.5 Hz,1H),4.28-4.39(m,2H),4.12-4.22(m,2H),3.88-4.04(m,7H),3.65-3.77(m,6H),3.38-3.45(m,1H),2.56-2.69(m,2H),2.20-2.40(m,6.5H),2.01(br s,2.5H),1.57-1.69(m,2.5H),1.35-1.53(m,6.5H)。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(57.6 mg，0.152 mmol)添加至經攪拌之2-((S)-吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑之三氟乙酸鹽(47 mg)、二異丙基乙胺(88 μL，0.51 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(26.5 mg，0.152 mmol)於DMF(4 mL)中的溶液中且在周圍條件下攪拌所得混合物2小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/甲醇/TFA)純化殘餘物，藉由逆相HPLC(水/乙腈/乙酸銨)再純化，最後藉由逆相HPLC(水/甲醇/TFA)再純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(33.3 mg)。LC-MS滯留時間1.237分鐘；m/z 789.29(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(d,J =8.9 Hz,2H),8.15(d,J =8.5 Hz,1H),8.10(d,J =8.9 Hz,1H),7.95-8.03(m,4H),7.93(s,1H),7.84-7.91(m,3H),5.69-5.72(m,0.2H),5.24-5.35(m,1.8H),4.27(dd,J =7.2,2.6 Hz,2H),4.09-4.19(m,2H),3.85-3.97(m,2H),3.67-3.76(m,6H),2.55-2.68(m,2H),2.27-2.38(m,2H),2.14-2.27(m,4H),2.02-2.14(m,2H),0.86-1.06(m,12H)。
(2,6-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯將HATU(54.6 mg，0.144 mmol)添加至經攪拌之2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(25 mg)、二異丙基乙胺(84 μL，0.48 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(31.2 mg，0.144 mmol)於DMF(5 mL)中的溶液中且在周圍條件下攪拌所得混合物4小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。在真空中移除揮發性組分且藉由逆相HPLC(水/甲醇/TFA)純化殘餘物，藉由逆相HPLC(水/乙腈/乙酸銨)再純化，最後藉由逆相HPLC(水/甲醇/TFA)再純化，得到呈灰白色固體狀之(2,6-萘二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(8.2 mg)。LC-MS滯留時間1.220分鐘；m/z 461.3[1/2 M+H+ ]。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%乙腈/10%水/0.1%TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.28(br s,2H),8.07-8.18(m,4H),8.00-8.07(m,2H),7.84-7.96(m,4H),5.23-5.31(m,2H),4.59-4.67(m,2H),3.85-4.01(m,6H),3.70(s,6H),3.28-3.44(m,4H),2.71-2.80(m,2H),2.58(ddd,J =13.2,6.5,6.3 Hz,2H),2.03-2.20(m,4H),1.41-1.65(m,8H),1.13(br s,2H),0.97(br s,2H)。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(47.6 mg，0.125 mmol)添加至含2,6-雙((2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)萘之三氟乙酸鹽(38 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(22 mg，0.13 mmol)的DMF(0.7 mL)及TEA(0.047 mL，0.33 mmol)中且透明黃色溶液在室溫下隔夜。用MeOH(1 mL)稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(15-100% MeOH/水/TFA緩衝液)純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(37.1 mg)。LC-MS滯留時間2.530分鐘；m/z 759.61(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將4,4'-(2,6-萘二基)雙(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑)之三氟乙酸鹽(21 mg，0.025 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(12.9 mg)溶解於DMF(3 mL)及DIEA(0.043 mL，0.246 mmol)中。接著添加HATU(28.0 mg，0.074 mmol)且在室溫下攪拌反應混合物2小時。在真空下移除揮發性物質且藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用0至90% MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化粗產物，得到呈灰白色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(10.4 mg)。LC-MS滯留時間1.158分鐘；m/z 713.60(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,2H),8.11(d,J =8.6 Hz,2H),7.94-8.03(m,2H),7.84-7.94(m,2H),5.29(t,J =7.3 Hz,2H),4.26(d,J =7.02 Hz,2H),4.14(t,J =10.2 Hz,2H),3.85-3.96(m,2H),3.68(s,6H),2.53-2.67(m,2H),2.31(d,J =10.4 Hz,2H),2.16-2.28(m,4H),2.03-2.15(m,2H),0.88-1.08(m,12H)。
((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(120 mg，0.316 mmol)添加至經攪拌之2-((2S)-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑之三氟乙酸鹽(50 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(68.7 mg，0.316 mmol)於DMF(5 mL)及DIEA(0.18 mL，1.1 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空下移除揮發性物質。藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用10至90% MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化殘餘物，接著藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×150 mm 5u，用至% ACN-水+0.1% TFA之梯度溶離)再純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(96 mg)。LC-MS滯留時間1.207分鐘；m/z 873.63(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用5 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(d,J =7.9 Hz,2H),8.14(d,J =8.9 Hz,1H),8.06-8.11(m,1H),7.94-8.03(m,4H),7.90-7.94(m,1H),7.80-7.90(m,3H),5.74(br s,0.2H),5.23-5.35(m,1.8H),4.32(dd,J =8.1,4.7 Hz,2H),4.16(d,J =2.8 Hz,2H),3.94(dd,J =9.5,7.3 Hz,6H),3.69(s,6H),3.31-3.48(m,4H),2.55-2.68(m,2H),2.16-2.35(m,6H),1.92-2.10(m,2H),1.63(d,J =12.8 Hz,2H),1.34-1.54(m,6H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(57 mg，0.150 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(25 mg，0.050 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(33 mg)於DMF(3 mL)及DIEA(0.078 mL，0.50 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空下移除揮發性物質。藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用10至100%MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(27 mg)。LC-MS滯留時間1.280分鐘；m/z 897.65(MH+)。在配備有Waters Sunfire5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.28-8.32(m,2H),8.14(d,J =8.6 Hz,1H),8.07-8.11(m,1H),7.95-8.02(m,4H),7.84-7.93(m,4H),5.12-5.23(m,2H),4.62(dd,J =7.6,4.0 Hz,2H),3.92-4.00(m,4H),3.83-3.89(m,2H),3.72-3.78(m,2H),3.70(s,6H),3.35-3.46(經甲醇遮蓋,m,4H),2.68-2.77(m,2H),2.47-2.57(m,2H),2.00-2.15(m,4H),1.42-1.65(m,6H),1.06-1.17(m,2H),0.84-0.93(m,2H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(57 mg，0.150 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(25 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(26 mg，0.15 mmol)於DMF(3 mL)及DIEA(0.070 mL，0.40 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空下移除揮發性物質。藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用10至100% MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(34.8 mg)。LC-MS滯留時間1.402分鐘；m/z 813.69(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(d,J =7.9 Hz,2H),8.14(d,J =8.9 Hz,1H),8.09(d,J =8.9 Hz,1H),7.95-8.01(m,4H),7.92(s,1H),7.84-7.90(m,3H),5.16(ddd,J =11.6,9.2,7.0 Hz,2H),4.58(dd,J =6.4,2.1 Hz,2H),3.81-3.88(m,2H),3.66-3.75(m,6H),2.67-2.77(m,2H),2.46-2.57(m,2H),2.21(dq,J =12.9,6.5 Hz,2H),2.06-2.14(m,2H),1.08-1.18(m,2H),1.04(d,J =6.7 Hz,6H),0.95(d,J =6.7 Hz,6H),0.91(br s,2H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(32.7 mg，0.086 mmol)添加至2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉之鹽酸鹽(25 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(15 mg，0.086 mmol)於DMF(1 mL)及DIPEA(0.059 mL，0.34 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基))雙(3-甲基-1-側氧基丁烷-2,1-二基)二胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(8.3 mg)。LC-MS滯留時間1.88分鐘；m/z 838[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.64-8.80(1H,m),8.49-8.62(1H,m),7.45-8.48(9H,m),5.21-5.52(2H,m),4.50-4.68(2H,m),3.82-4.13(2H,m),3.70-3.79(2H,m),3,68,3.66(6H,s,s),2.48-2.83(3H,m),2.02-2.28(3H,m),1.09-1.30(2H,m),0.83-1.08(14H,m)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喏啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(25 mg，0.066 mmol)添加至2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉之三氟乙酸鹽(28 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(11.5 mg，0.066 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.045 mL，0.26 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌混合物2小時。用MeOH稀釋反應物，且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(喹喏啉-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基))雙(3-甲基-1-側氧基丁烷-2,1-二基)二胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(27 mg)。LC-MS滯留時間1.94分鐘；m/z 839[M+H]]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(三氟乙酸鹽，400 MHz,MeOD)δppm 9.56(s,1H),8.67(s,1H),8.52(d,J =8.8 Hz,1H),8.40(s,1H),8.26(d,J =8.8 Hz,1H),8.24(d,J =8.8 Hz,1H),8.17(s,1H),8.05(d,J =8.5 Hz,1H),7.93(d,J =8.5 Hz,1H),7.90(d,J =8.8 Hz,1H),5.30(app dd,J =9.0,6.8 Hz,2H),4.60(app d,J =6.0 Hz,2H),3.93-3.84(m,2H),3.68(s,6H),2.80-2.70(m,2H),2.63-2.51(m,2H),2.29-2.09(m,4H),1.21-1.11(m,2H),1.03(d,J =6.8 Hz,6H),1.00-0.90(m,2H),0.93(d,J =6.5 Hz,6H)。
(2,6-喹喏啉二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯將HATU(25.9 mg，0.068 mmol)添加至2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喏啉之三氟乙酸鹽(29 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(14.8 mg，0.068 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.046 mL，0.27 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(喹喏啉-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基))雙(2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙烷-2,1-二基)二胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(32.5 mg)。LC-MS滯留時間1.74分鐘；m/z 462[1/2 M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(三氟乙酸鹽，400 MHz,MeOD)δppm 9.53(s,1H),8.70(s,1H),8.55(dd,J =8.8,1.5 Hz,1H),8.44(d,J =1.8 Hz,1H),8.31(d,J =8.8 Hz,1H),8.27(dd,J =8.8,1.8 Hz,1H),8.19(br s,1H),8.08(dd,J =8.8,1.5 Hz,1H),7.96(d,J =8.8 Hz,1H),7.92(d,J =8.8 Hz,1H),5.28(app dd,J =8.8,6.8 Hz,2H),4.63(app d,J =7.3 Hz,2H),3.99-3.86(m,6H),3.69(s,6H),3.44-3.29(m,4H),2.81-2.71(m,2H),2.63-2.52(m,2H),2.20-2.03(m,4H),1.68-1.37(m,8H),1.17-1.08(m,2H),0.99-0.92(m,2H)。
實例39(2,6-喹啉二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯將HATU(34.0 mg，0.089 mmol)添加至2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉之鹽酸鹽(26 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(19.4 mg，0.089 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.061 mL，0.350 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。用MeOH稀釋反應物且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基))雙(2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙烷-2,1-二基)二胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(6.0 mg)。LC-MS滯留時間1.65分鐘；m/z 462[1/2 M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始%B=0。最終%B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.70(1H,d,J =8.5 Hz),8.57(1H,s),8.23-8.45(5H,m),8.17(1H,s),8.01-8.12(1H,m),7.88-7.97(2H,m),5.27(2H,t,J =7.8 Hz),4.33-4.68(2H,m),3.84-4.02(6H,m),3.69(6H,s),3.35-3.47(4H,m),2.67-2.81(2H,m),2.49-2.64(2H,m),1.91-2.21(4H,m),1.35-1.71(8H,m),1.07-1.17(2H,m),0.85-1.00(2H,m)。
((1S)-2-((2S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(45 mg，0.118 mmol)添加至4-氯-2-((S)-吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(20 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(25.6 mg，0.118 mmol)於DMF(3 mL)及DIEA(0.070 mL，0.40 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空下移除揮發性物質。藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用10至100%MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化殘餘物，接著藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×150 mm 5u，用10至100% ACN-水+0.1% TFA之梯度溶離)再純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((2S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(12.9 mg)。LC-MS滯留時間1.595分鐘；m/z 907.39(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.20-8.28(m,2H),8.09-8.12(m,1H),8.02-8.08(m,1H),7.91-8.00(m,3H),7.87-7.91(m,2H),7.80-7.87(m,2H),5.28(t,J =7.5 Hz,1H),5.06-5.14(m,1H),4.25-4.35(m,2H),4.11-4.19(m,1H),4.00-4.07(m,1H),3.85-4.00(m,6H),3.63-3.69(m,6H),3.32-3.43(m,4H),2.57-2.64(m,1H),2.34-2.40(m,1H),2.26-2.32(m,2H),2.12-2.25(m,4H),1.95-2.09(m,2H),1.34-1.64(m,8H)。
實例41((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(4-(4-氯-2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(45 mg，0.118 mmol)添加至4-氯-2-((S)-吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(20 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(20.7 mg，0.118 mmol)於DMF(3 mL)及DIEA(0.070 mL，0.40 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空下移除揮發性物質。藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用10至100% MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化殘餘物，接著藉由HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×150 mm 5u，用10至100% ACN-水+0.1% TFA之梯度溶離)再純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(4-(4-氯-2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(3.6 mg)。LC-MS滯留時間1.715分鐘；m/z 823.49(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.24-8.29(m,1H),8.22(s,1H),8.08-8.15(m,1H),8.03-8.08(m,1H),7.81-8.01(m,7H),5.31(t,J =7.5 Hz,1H),5.12(app t,J =7.5 Hz,1H),4.21-4.32(m,2H),4.08-4.19(m,1H),3.99-4.08(m,1H),3.85-3.96(m,2H),3.57-3.74(m,6H),2.56-2.67(m,1H),2.35-2.46(m,1H),2.28-2.35(m,2H),2.20-2.26(m,2H),2.05-2.19(m,4H),0.90-1.09(m,12H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(7-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(103 mg，0.271 mmol)添加至2-((S)-吡咯啶-2-基)-7-(6-(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑(45 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(58.8 mg，0.271 mmol)於DMF(3 mL)及DIEA(0.16 mL，0.90 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空下移除揮發性物質。藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用10至100% MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化殘餘物，接著藉由HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×150 mm 5u，用0至90% ACN-水+0.1% TFA之梯度溶離)再純化，得到呈白色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(7-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(8.7 mg)。LC-MS滯留時間1.307分鐘；m/z 897.67(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.51-8.57(m,2H),8.40(s,1H),8.30(s,1H),8.23(d,J =10.1 Hz,1H),8.18(d,J =8.6 Hz,1H),8.05-8.15(m,3H),8.00(s,1H),7.87(dd,J =8.6,1.8 Hz,1H),7.79-7.85(m,1H),5.43(t,J =7.3 Hz,1H),5.30(t,J =7.3 Hz,1H),4.28-4.40(m,2H),4.19(br s,2H),3.88-4.07(m,6H),3.70(d,J =1.5 Hz,6H),3.26-3.45(與甲醇重疊,m,4H),2.57-2.71(m,2H),2.30-2.42(m,3H),2.20-2.29(m,3H),1.93-2.10(m,2H),1.58-1.68(m.,2H),1.34-1.58(m,6H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(7-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(24.5 mg，0.065 mmol)添加至2，6-雙(2-((S)-吡咯啶-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉之三氟乙酸鹽(30 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(11.3 mg，0.065 mmol)於DMF(1 mL)及DIPEA(0.044 mL，0.252 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌混合物2小時。用MeOH稀釋反應物，且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(2S,2'S)-1,1'-((2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(吡咯啶-2,1-二基))雙(3-甲基-1-側氧基丁烷-2,1-二基)二胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(34 mg)。LC-MS滯留時間1.82分鐘；m/z 814[M+H]]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.71(1H,d,J =8.8 Hz),8.57(1H,s),8.21-8.43(5H,m),8.18(1H,s),8.04(1H,dd,J =8.5,1.5 Hz),7.88-7.96(2H,m),5.40(2H,t,J =7.03 Hz),4.31(2H,d,J =6.8 Hz),4.09-4.21(2H,m),3.91-4.06(2H,m),3.68(6H,s),2.58-2.73(2H,m),2.20-2.49(6H,m),2.02-2.19(2H,m),0.96(6H,dd,J =6.8,1.8 Hz),0.90(6H,dd,J =6.7,1.6 Hz)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(82 mg，0.22 mmol)添加至6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑(34 mg)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(37.8 mg，0.216 mmol)及DIEA(0.13 mL，0.72 mmol)於DMF(3 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。在真空下移除揮發性物質。藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×150 mm 5u，用10至80% ACN-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(49.8 mg)。LC-MS滯留時間1.357分鐘；m/z 787.65(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(d,J =10.7 Hz,2H),8.07-8.19(m,3H),7.94-8.05(m,3H),7.84-7.92(m,2H),5.29(dd,J =9.2,6.7 Hz,1H),5.18(dd,J =9.2,7.0 Hz,1H),4.59(dd,J =12.4,6.6 Hz,2H),3.81-3.91(m,2H),3.69(s,6H),2.67-2.80(m,2H),2.48-2.61(m,2H),2.07-2.27(m,4H),1.09-1.19(m,2H),0.99-1.06(m,6H),0.88-1.00(m,8H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(82 mg，0.216 mmol)添加至6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑(34 mg)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(46.9 mg，0.216 mmol)及DIEA(0.13 mL，0.72 mmol)於DMF(3 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。在真空下移除揮發性物質。藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×150 mm 5u，用10至80% ACN-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化殘餘物，得到呈淺黃色固體之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(38 mg)。LC-MS滯留時間1.240分鐘；m/z 871.66(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.30(d,J =6.1 Hz,2H),8.08-8.18(m,3H),8.04(dd,J =8.6,1.5 Hz,1H),7.95-8.01(m,2H),7.85-7.92(m,2H),5.27(dd,J =9.2,6.7 Hz,1H),5.16(dd,J =9.2,7.0 Hz,1H),4.59-4.66(m,2H),3.84-4.01(m,6H),3.70(s,6H),3.35-3.45(m,4H),2.69-2.80(m,2H),2.48-2.61(m,2H),2.03-2.20(m,4H),1.57-1.65(m,2H),1.40-1.56(m,6H),1.07-1.17(m,2H),0.97(br s,1H),0.91(br s,1H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2,2'-聯萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(22.7 mg，0.060 mmol)添加至6,6'-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2,2'-聯萘之三氟乙酸鹽(22 mg)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(10.5 mg，0.060 mmol)及DIEA(0.035 mL，0.20 mmol)於DMF(3 mL)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空下移除揮發性物質。藉由製備型HPLC(Waters Sunfire C18管柱30×100 mm 5u，用10至80% MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離)純化殘餘物，得到呈棕褐色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2,2'-聯萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(15.6 mg)。LC-MS滯留時間1.765分鐘；m/z 482.68(1/2 M+H+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.36(s,2H),8.27(s,2H),8.12-8.18(m,4H),8.11(s,2H),8.05(app t,J =8.6 Hz,4H),7.91-7.96(m,2H),7.86-7.91(m,2H),5.29(dd,J =9.2,6.7 Hz,2H),4.61(d,J =6.4 Hz,2H),3.85-3.91(m,2H),3.70(s,6H),2.72-2.80(m,2H),2.53-2.62(m,2H),2.12-2.26(m,4H),1.13-1.21(m,2H),1.04(d,J =6.7 Hz,6H),0.99(br s,2H),0.95(d,J =6.7 Hz,6H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-1,5-啶-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(8.7 mg，0.023 mmol)添加至2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1,5-啶之三氟乙酸鹽(12 mg，9.93 μmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(4.2 mg)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.017 mL，0.099 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(1,5-啶-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基))雙(3-甲基-1-側氧基丁烷-2,1-二基)二胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(5.6 mg)。LC-MS滯留時間1.91分鐘；m/z 420[1/2M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.59-8.67(4H,m),8.48(2H,dd,J =8.8,1.3 Hz),8.44(2H,d,J =8.8 Hz),7.92(2H,d,J =8.5 Hz),5.29(2H,dd,J =9.2,6.7 Hz),4.60(2H,d,J =6.5 Hz),3.84-3.92(2H,m),3.68(6H,s),2.69-2.80(2H,m),2.51-2.62(2H,m),2.07-2.27(4H,m),1.10-1.21(2H,m),1.02(6H,d,J =6.8 Hz),0.95-1.00(2H,m),0.93(6H,d,J =6.8 Hz)。
(1,5-啶-2,6-二基雙(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))雙胺基甲酸二甲酯將HATU(8.68 mg，0.023 mmol)添加至2,6-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1,5-啶之三氟乙酸鹽(12 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(5.0 mg，0.023 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.016 mL，0.089 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌混合物3小時。用MeOH稀釋反應物且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之(1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(1,5-啶-2,6-二基)雙(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3,2-二基))雙(2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙烷-2,1-二基)二胺基甲酸二甲酯的三氟乙酸鹽(11 mg)。LC-MS滯留時間1.73分鐘；m/z 462[1/2 M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.61-8.68(4H,m),8.50(2H,dd,J =8.8,1.51 Hz),8.45(2H,d,J =8.8 Hz),7.93(2H,d,J =8.8 Hz),5.28(2H,dd,J =9.3,6.8 Hz),4.64(2H,d,J =7.5 Hz),3.84-4.02(6H,m),3.69(6H,s),3.35-3.46(4H,m),2.75(2H,dd,J =13.7,9.2 Hz),2.58(2H,d,J =6.8 Hz),1.99-2.22(4H,m),1.36-1.69(8H,m),1.07-1.19(2H,m),0.96(2H,m)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(76 mg，0.20 mmol)添加至2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-4-氯-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑(34 mg)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(35.2 mg，0.201 mmol)及DIEA(0.12 mL，0.67 mmol)於DMF(3 mL)中之溶液中且在周圍溫度下攪拌所得混合物2小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空中移除揮發性組分。藉由逆相製備型HPLC(水/甲醇，0.1% TFA)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(41.3 mg)。LC-MS滯留時間1.717分鐘；m/z 821.58(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.24(d,J =1.8 Hz,2H),8.01-8.13(m,4H),7.84-7.98(m,3H),5.29(dd,J =9.2,6.7 Hz,1H),5.09(t,J =7.2 Hz,1H),4.60(t,J =7.2 Hz,2H),3.86-3.91(m,1H),3.71-3.76(m,1H),3.69(s,3H),3.68(m,3H),2.77(dd,J =13.6,9.3 Hz,1H),2.57(ddd,J =13.6,6.7,6.6 Hz,1H),2.44-2.53(m,2H),2.11-2.26(m,3H),1.99-2.10(m,1H),1.10-1.22(m,2H),0.89-1.09(m,13H),0.80-0.84(m,1H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(45.0 mg，0.118 mmol)添加至2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-4-氯-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑(20 mg，0.039 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(25.7 mg)及DIEA(0.069 mL，0.39 mmol)於DMF(3 mL)中之溶液中且在周圍溫度下攪拌所得混合物2小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空中移除揮發性組分。藉由逆相製備型HPLC(水/甲醇，0.1% TFA)純化殘餘物，得到呈淺黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(28.1 mg)。LC-MS滯留時間1.597分鐘；m/z 905.67(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δ. ppm 8.24(s,2H),8.02-8.13(m,4H),7.86-7.97(m,3H),5.27(dd,J =9.2,7.0 Hz,1H),5.08(t,J =7.2 Hz,1H),4.65(t,J =7.3 Hz,2H),3.88-4.02(m,5H),3.75-3.83(m,1H),3.70(s,3H),3.68(s,3H),3.36-3.49(m,4H),2.77(dd,J =13.7,9.5Hz,1H),2.57(ddd,J =13.7,6.7,6.4Hz,1H),2.46-2.53(m,2H),2.00-2.20(m,4H),1.55-1.69(m,4H),1.40-1.70(m,4H),1.08-1.20(m,2H),0.94-1.00(m,1H),0.80-0.84(m,1H)。
((1S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(4-(6-(3-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(47.8 mg，0.126 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷之三氟乙酸鹽(40 mg)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(22 mg，0.13 mmol)及DIEA(0.073 mL，0.42 mmol)於DMF(3 mL)中之混合物中且在周圍溫度下攪拌所得混合物2小時。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物且在真空中移除揮發性組分。藉由逆相HPLC(水/甲醇，0.1% TFA)部分純化殘餘物，接著藉由逆相HPLC(水/乙腈，0.1% TFA)再純化，得到呈白色固體狀之((1S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(4-(6-(3-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(45 mg)。LC-MS滯留時間1.458分鐘；m/z 813.30(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/10 mM乙酸銨且溶劑B為10%水/90%甲醇/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.30(d,J =4.6 Hz,2H),8.18(s,1H),8.14(d,J =8.9 Hz,1H),8.10(d,J =8.9 Hz,1H),7.98-8.02(m,2H),7.98(s,1H),7.93(d,J =8.2 Hz,1H),7.88(dd,J =8.7,1.7 Hz,1H),7.77(d,J =8.2 Hz,1H),7.69(t,J =7.8 Hz,1H),5.13-5.20(m,2H),4.57(t,J =6.1 Hz,2H),3.80-3.88(m,2H),3.69(d,J =6.1 Hz,6H),2.67-2.77(m,2H),2.51(dq,J =13.7,6.8 Hz,2H),2.15-2.25(m,2H),2.10(dq,J =13.8,6.8 Hz,2H),1.08-1.18(m,2H),1.03(dd,J =6.7,4.6 Hz,6H),0.95(dd,J =6.7,3.4 Hz,6H),0.92(dd,J =5.3,2.0 Hz,2H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(13.16 mg，0.035 mmol)添加至2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喏啉之三氟乙酸鹽(14 mg，0.015 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(6.1 mg)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.024 mL，0.135 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。用MeOH稀釋反應物且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(11.8 mg)。LC-MS滯留時間1.77分鐘；m/z 789[M+H]]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1%TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.59(s,1H),8.67(s,1H),8.51(d,J =8.8 Hz,1H),8.46(d,J =1.8 Hz,1H),8.27(d,J =8.8 Hz,1H),8.19(dd,J =8.8,2.0 Hz,1H),8.11(s,1H),7.92(d,J =8.5 Hz,1H),5.29(dd,J =9.2,6.7 Hz,1H),5.17(dd,J =9.2,7.2 Hz,1H),4.58(dd,J =13.2,6.7 Hz,2H),3.78-3.92(m,2H),3.68(s,6H),2.67-2.79(m,2H),2.45-2.62(m,2H),2.03-2.27(m,4H),1.07-1.21(m,2H),1.03(d,J =6.8 Hz,6H),0.93-1.00(m,2H),0.93(dd,J =6.3,5.8 Hz,6H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(15.0 mg，0.040 mmol)添加至2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喏啉之三氟乙酸鹽(16 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(8.6 mg，0.040 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.027 mL，0.16 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，且藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(14.5 mg)。LC-MS滯留時間1.58分鐘；m/z 873[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.34(s,1H),8.36(s,1H),8.28(d,J =1.0 Hz,1H),8.08-8.19(m,2H),8.03(d,J =8.8 Hz,1H),7.66(d,J =8.5 Hz,1H),7.54(s,1H),5.27(t,J =6.9 Hz,1H),5.18(dd,J =8.9,4.9 Hz,1H),4.69(d,J =5.5 Hz,2H),3.87-4.03(m,4H),3.73-3.85(m,2H),3.68(s,6H),3.32-3.47(m,4H),2.50-2.61(m,3H),2.40-2.49(m,1H),1.99-2.16(m,4H),1.51-1.72(m,6H),1.38-1.51(m,2H),1.09-1.22(m,2H),0.76-0.92(m,2H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(157 mg，0.413 mmol)添加至(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(130 mg)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(90 mg，0.41 mmol)及DIEA(0.36 mL，2.1 mmol)於DMF(4 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。在真空下移除揮發性物質。在逆相HPLC(水/甲醇，0.1% TFA)上純化物質，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(194 mg)。LC-MS滯留時間1.307分鐘；m/z 829.27(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,1H),8.29(s,1H),8.16(d,J =8.5 Hz,1H),8.11(d,J =0.9 Hz,1H),8.11(d,J =8.9 Hz,1H),8.02(dd,J =8.5,1.5 Hz,1H),8.00(s,1H),7.98(dd,J =8.5,1.5 Hz,1H),7.89(d,J =8.5 Hz,1H),7.88(dd,J =8.5,1.8 Hz,1H),5.27(dd,J =9.2,6.7 Hz,1H),5.18(dd,J =9.2,7.0 Hz,1H),4.62-4.67(m,1H),4.58(d,J =6.4 Hz,1H),3.87-4.01(m,3H),3.82-3.87(m,1H),3.70(m,6H),3.36-3.44(m,2H),2.74(td,J =13.3,9.5 Hz,2H),2.48-2.62(m,2H),2.04-2.24(m,4H),1.40-1.60(m,4H),1.09-1.19(m,2H),1.04(d,J =6.7 Hz,3H),0.89-0.99(m,5H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(100 mg，0.263 mmol)添加至(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基胺基甲酸甲酯(118 mg)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(46.2 mg，0.263 mmol)及DIEA(0.31 mL，1.8 mmol)於DMF(4 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀釋反應混合物。使用旋轉蒸發器在真空下移除揮發性物質且在逆相HPLC(水/甲醇，0.1% TFA)上純化殘餘物，得到((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之三氟乙酸鹽(55.3 mg)。LC-MS滯留時間1.320分鐘；m/z 829.42(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,1H) 8.29(s,1H),8.08-8.18(m,3H),8.04(dd,J =8.9,1.5 Hz,1H),7.95-8.00(m,2H),7.90(d,J =8.6 Hz,1H),7.87(dd,J =8.6,1.8 Hz,1H),5.29(dd,J =9.3,6.9 Hz,1H),5.17(dd,J =9.2,7.0 Hz,1H),4.62(dd,J =9.2,7.3 Hz,2H),3.96(td,J =10.8,2.9 Hz,2H),3.83-3.92(m,2H),3.64-3.77(m,6H),3.35-3.46(m,2H),2.74(ddd,J =19.3,13.5,9.3 Hz,2H),2.48-2.62(m,2H),2.06-2.26(m,4H),1.45-1.63(m,4H),1.06-1.22(m,2H),1.03(d,J =6.7 Hz,3H),0.96-1.01(m,1H),0.93(d,J =6.7 Hz,3H),0.88-091(m,1H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將NCS(14.98 mg，0.112 mmol)添加至((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(93 mg)之DMF溶液中且在50℃(油浴溫度)下加熱反應混合物2小時。在逆相HPLC(水/甲醇，0.1% TFA)上純化粗反應混合物，得到((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯之三氟乙酸鹽(102.8 mg)。LC-MS滯留時間1.648分鐘；m/z 863.32(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.22(br s,2H),8.10(s,1H),8.00-8.06(m,3H),7.85-7.94(m,3H),5.28(dd,J =9.2,7.0 Hz,1H),5.09(t,J =7.2 Hz,1H),4.65(d,J =7.3 Hz,1H),4.59(d,J =7.0 Hz,1H),3.89-3.99(m,3H),3.66-3.77(m,7H),3.35-3.44(m,2H),2.77(dd,J =13.6,9.3 Hz,1H),2.57(ddd,J =13.8,6.8,6.6 Hz,1H),2.47-2.52(m,2H),2.02-2.22(m,4H),1.44-1.63(m,4H),1.13(dt,J =8.6,5.8 Hz,2H),1.05(d,J =7.0 Hz,3H),0.92-1.02(m,4H),0.83(d,J =1.8 Hz,1H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將NCS(10.31 mg，0.077 mmol)添加至((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(64 mg)之DMF(2 mL)溶液中且在50℃下加熱反應混合物2小時。在逆相HPLC(水/甲醇，0.1% TFA)上部分純化粗反應混合物且在逆相HPLC(水/ACN，0.1% TFA)上再純化，得到呈棕褐色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(44.7 mg)。LC-MS滯留時間1.63分鐘；m/z 863.39(MH+)。在配備有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.24(br s,2H),8.02-8.12(m,4H),7.86-7.95(m,3H),5.28(dd,J =9.2,6.7 Hz,1H),5.08(明顯三重峰,J =7.0 Hz,1H),4.65(d,J =7.6 Hz,1H),4.60(d,J =6.7 Hz,1H),3.93-4.01(m,2H),3.86-3.91(m,1H),3.75-3.81(m,1H),3.65-3.74(m,6H),3.36-3.46(m,2H),2.77(dd,J =13.7,9.2 Hz,1H),2.57(ddd,J =13.7,6.7,6.4 Hz,1H),2.49(dd,J =7.8,3.2 Hz,2H),2.12-2.25(m,2H),2.00-2.12(m,2H),1.54-1.67(m,3H),1.41-1.51(m,1H),1.09-1.19(m,2H),0.97-1.06(m,4H),0.94(d,J =6.7 Hz,3H),0.82(br s,1H)。
實例58((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(5.64 mg，0.015 mmol)添加至6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喏啉之三氟乙酸鹽(6.0 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(3.2 mg)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(10.13 μL，0.058 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。移除溶劑且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(5.5 mg)。LC-MS滯留時間1.60分鐘；m/z 873[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=95%水/5%甲醇/10 mM乙酸銨。溶劑B=5%水/95%甲醇/10 mM乙酸銨。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=2分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.42(s,1H),8.41-8.50(m,2H),8.30(d,J =1.3 Hz,2H),8.19(d,J =1.0 Hz,1H),8.07(dd,J =8.5,1.5 Hz,1H),7.92(d,J =8.5 Hz,1H),5.13-5.33(m,3H),4.57-4.70(m,1H),3.81-4.04(m,6H),3.62-3.77(m,6H),3.34-3.46(m,4H),2.65-2.82(m,2H),2.45-2.61(m,2H),2.01-2.22(m,4H),1.40-1.65(m,8H),1.03-1.17(m,2H),0.83-0.98(m,2H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(5.64 mg，0.015 mmol)添加至6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喏啉之三氟乙酸鹽(6.0 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(2.60 mg，0.015 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(10.13 μL，0.058 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。移除溶劑且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(3.6 mg)。LC-MS滯留時間1.75分鐘；m/z 789[M+H]+ 。(管柱PHENOMENEXLuna 3.0×50 mm S10。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最終% B=100。梯度時間=3分鐘。波長=220)。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.42(s,1H),8.41-8.48(m,2H),8.30(d,J =1.3 Hz,2H),8.18(d,J =1.0 Hz,1H),8.06(dd,J =8.7,1.6 Hz,1H),7.92(d,J =8.5 Hz,1H),5.24-5.33(m,1H),5.16-5.24(m,1H),4.52-4.63(m,2H),3.78-3.91(m,2H),3.68(d,J =1.0 Hz,6H),2.65-2.79(m,2H),2.46-2.61(m,2H),2.05-2.26(m,4H),1.07-1.20(m,2H),0.99-1.06(m,6H),0.94-1.01(m,2H),0.92(dd,J =6.8,3.3 Hz,6H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯在室溫下將NCS(13.0 mg，0.097 mmol)添加至((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(79 mg)之DMF(2 mL)溶液中且在50℃下加熱混合物16小時。藉由製備型HPLC(TFA)，使用Waters Sunfire C18管柱30×150 mm 5u，用30至90% MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離來純化粗產物，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(20.2 mg)及兩種一氯化物產物之混合物，藉由SFC，在CHIRALPAKIB管柱上分離該混合物，接著個別地藉由製備型HPLC(TFA)，使用Waters Sunfire C18管柱30×150 mm 5u，用25至100% MeOH-水+0.1% TFA之梯度溶離來再純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(11.1 mg)及呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(11.4 mg)。對於實例60：LC-MS滯留時間2.133分鐘；m/z 883.35(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δ.ppm 8.22(s,2H),8.07(d,J =8.5 Hz,1H),8.03(d,J =8.9 Hz,1H),7.83-7.95(m,6H),5.08(td,J =9.1,6.0 Hz,2H),4.59(dd,J =6.7,1.8 Hz,2H),3.71-3.79(m,2H),3.68(s,6H),2.44-2.57(m,4H),2.13-2.25(m,2H),2.00-2.10(m,2H),1.09-1.16(m,2H),1.05(dd,J =6.7,1.5 Hz,6H),0.91-1.02(m,6H),0.79-0.87(m,2H)。
對於實例62：LC-MS滯留時間1.745分鐘；m/z 847.33(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δ.ppm8.23(s,2H),8.02-8.09(m,2H),7.98(d,J =8.2 Hz,2H),7.89-7.94(m,3H),7.86(d,J =8.6 Hz,2H),5.15(dd,J =9.2,7.0 Hz,1H),5.09(t,J =7.0 Hz,1H),4.58(t,J =6.7 Hz,2H),3.84(t,J =4.7 Hz,1H),3.71-3.77(m,1H),3.69(d,J =3.1 Hz,6H),2.72(dd,J =13.7,9.5 Hz,1H),2.45-2.54(m,3H),2.14-2.24(m,2H),2.00-2.14(m,2H),1.09-1.18(m,2H),1.00-1.08(m,6H),0.96(t,J =7.6 Hz,6H),0.92(br s,1H),0.83(br s,1H)。
對於實例63：LC-MS滯留時間1.753分鐘；m/z 847.32(M H+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δ.ppm 8.26(d,J =7.0 Hz,2H),8.13(d,J =8.9 Hz,1H),8.04-8.10(m,1H),7.95-8.01(m,2H),7.89-7.95(m,2H),7.82-7.89(m,3H),5.17(dd,J =9.2,7.0 Hz,1H),5.07(t,J =7.2 Hz,1H),4.58(d,J =6.4 Hz,2H),3.81-3.88(m,1H),3.71-3.76(m,1H),3.69(d,J =4.6 Hz,6H),2.73(dd,J =13.4,9.5 Hz,1H),2.44-2.56(m,3H),2.14-2.25(m,2H),2.08-2.14(m,1H),1.09-1.18(m,2H,)1.00-1.08(m,6H),0.96(t,J =6.4 Hz,6H),0.92(br s,1H) 0.78-0.85(m,1H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯中間物105與適當酸(以類似於中間物66之方式，使用適當起始物質製備)經由類似於製備中間物106之偶合反應的反應，得到呈淺黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(91mg)。LC-MS滯留時間1.362分鐘；m/z 855.31(MH+)。在配備有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1% TFA且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δ.ppm 8.29(s,1H),8.28(s,1H),8.14(d,J =8.9 Hz,1H),8.09(d,J =8.9 Hz,1H),8.01-7.94(m,4H),7.93-7.91(m,1H),7.90-7.83(m,3H),5.19-5.12(m,2H),4.62(d,J =7.6 Hz,1H),4.58(d,J =6.4 Hz,1H),3.99-3.91(m,2H),3.89-3.80(m,2H),3.70(s,3H),3.69(s,3H),3.46-3.35(m,2H),2.76-2.67(m,2H),2.57-2.46(m,2H),2.25-2.16(m,1H),2.15-2.05(m,3H),1.65-1.40(m,4H),1.16-1.07(m,2H),1.04(d,J =6.7 Hz,3H),0.95(d,J =6.7 Hz,3H),0.93-0.87(m,2H)。
1-(4-(6-乙醯基萘-2-基)苯基)乙酮將碳酸鈉(5.43 g，51.3 mmol)之水(35 mL)溶液添加至經攪拌之1-(6-溴萘-2-基)乙酮(2.554 g，10.25 mmol)及4-乙醯基苯基酸(2.017 g，12.30 mmol)於甲苯(35.0 mL)及乙醇(35.0 mL)中的溶液中且將氮氣鼓泡通過反應混合物15分鐘。接著添加Pd(PPh3 )4 (0.237 g，0.205 mmol)，用氮氣沖洗反應物且在95℃下在氮氣下加熱8小時，接著在室溫下攪拌隔夜。在高真空下將反應物濃縮至乾，接著分配於DCM(約200 mL)與水(約150 mL)之間。接著用鹽水(約100 mL)洗滌有機層，乾燥(MsSO4 )，過濾並濃縮。用MeOH(約120 mL)濕磨殘餘物且將剩餘固體再溶解於DCM中並濃縮至乾(約2.7 g橙色固體)。將此物質溶解於熱EtOAc(80 mL)中且使其冷卻。藉由過濾收集所得固體且用Et2 O沖洗，得到1-(4-(6-乙醯基萘-2-基)苯基)乙酮(1.84 g)。LC-MS滯留時間2.443分鐘；m/z 288.98(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.51(s,1 H),8.05-8.16(m,5 H),7.98(d,J =8.8 Hz,1 H),7.81-7.88(m,3 H),2.76(s,3 H),2.68(s,3 H)。
2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮將溴(0.669 mL，13.0 mmol)之DCM(10 mL)溶液添加至經攪拌之1-(4-(6-乙醯基萘-2-基)苯基)乙酮(1.827 g，6.34 mmol)的DCM(30 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應物1天。用DCM(約20 mL)稀釋反應混合物並濃縮至乾，得到2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(2.83 g)，其不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間2.708分鐘；m/z 446.71(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.57(s,1 H),8.07-8.17(m,5 H),8.02(d,J =8.8 Hz,1 H),7.88(d,J =8.8 Hz,3 H),4.60(s,2 H),4.51(s,2 H)。
(2S,5S)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)萘-2-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯將亨氏鹼(1.662 mL，9.52 mmol)添加至經攪拌之2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(1.42 g，3.17 mmol)及(2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸(1.45 g，6.34 mmol)於乙腈(60 mL)中的漿料中。在室溫下攪拌反應物1天(慢慢變透明)，濃縮透明橙色溶液且在BIOTAGEHorizon(160 g SiO2 ，30-40% EtOAc/己烷)上純化，得到呈灰白色凝固泡沫狀之(2S,5S)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)萘-2-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯(1.81 g)。LC-MS滯留時間3.126分鐘；m/z 765.87(M+Na)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.48(s,1 H),8.13(s,1 H),7.99-8.11(m,5 H),7.86(d,J =8.3 Hz,3 H),5.24-5.76(m,4 H),4.41-4.59(m,2 H),3.93-4.11(m,2 H),2.28-2.42(m,4 H),2.11(br. s.,2 H),1.77(br. s.,2 H),1.49(br. s.,9 H),1.48(br. s.,9 H),1.35(br. s.,6 H)。
(2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯將乙酸銨(3.76 g，48.7 mmol)添加至經攪拌之(2S,5S)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)萘-2-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯(1.81 g，2.437 mmol)的甲苯(40 mL)溶液中且在室溫下攪拌漿料10分鐘，隨後在100℃下加熱12小時。使反應物冷卻至室溫，濃縮至乾且使殘餘物分配於DCM(約150 mL)與半飽和NaHCO3 (水溶液)(約150 mL)之間。用鹽水(約100 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮成棕色凝固泡沫，藉由BIOTAGEHorizon(160 g SiO2 ，1.5-3% MeOH/DCM)純化，得到呈黃橙色凝固泡沫狀之(2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(1.46 g)。LC-MS滯留時間2.92分鐘；m/z 703.32(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑將TFA(0.500 mL，6.49 mmol)逐滴添加至經攪拌之(2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(228 mg，0.324 mmol)的DCE(6 mL)溶液中。在添加期間，形成沈澱物，其防礙攪拌。添加DCM(約10 mL)且攪拌漿料，同時添加剩餘TFA。在室溫下攪拌反應物30分鐘，再添加TFA(約0.5 mL)並攪拌反應物3小時。濃縮反應物，得到呈橙色固體狀之2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑的三氟乙酸鹽(102 mg，113 mg，114 mg)。LC-MS滯留時間2.756分鐘；m/z 503.14(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.32(s,1H),8.17(s,1H),8.01(app t,J =8.2 Hz,2H),7.85-7.95(m,6H),7.80(s,1H),7.73(s,1 H),5.02(app q,J =8.0 Hz,2H),3.92(dddd,J =8.7,7.0,6.9,4.8 Hz,2H),2.52-2.67(m,4H),2.38-2.49(m,2H),1.95-2.07(m,2H),1.55(app dd,J =6.7,4.4 Hz,6H)。
2-溴-1-(6-溴萘-2-基)乙酮將溴(0.682 mL，13.3 mmol)之DCM(20 mL)溶液添加至1-(6-溴萘-2-基)乙酮(3.30 g，13.3 mmol)(>90%純度)之DCM(60 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應物隔夜。濃縮反應混合物，得到呈灰白色固體狀之2-溴-1-(6-溴萘-2-基)乙酮(4.35 g)，其不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間2.177分鐘；m/z 342.92(MNa+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.49(s,1 H),8.03-8.10(m,2 H),7.86(d,J =8.5 Hz,1H),7.85(d,J =8.8 Hz,1 H),7.67(dd,J =8.8,2.0 Hz,1 H),4.56(s,2 H)。
(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴萘-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯將DIPEA(3.47 mL，19.88 mmol)添加至經攪拌之粗2-溴-1-(6-溴萘-2-基)乙酮(4.35 g，13.3 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(3.01 g，13.25 mmol)於乙腈(80 mL)中的漿料中且在室溫下攪拌反應物隔夜。將反應物濃縮至乾且藉由BIOTAGEHorizon(160 g SiO2 ，10-20% EtOAc/己烷)純化。使含有所需產物之溶離份靜置3天。一些溶離份具有已破碎之大晶體(收集240 mg，根據1 H NMR為純的所需產物)。收集含有所需產物之所有溶離份並濃縮成黃色凝固泡沫，用Et2 O(約40 mL)製成漿料。藉由過濾收集所形成之白色固體且用Et2 O沖洗，得到(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴萘-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(3.24 g)。LC-MS滯留時間2.760分鐘；m/z 472,474.02(1:1)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 mHz,MeOD) d ppm 8.61(br s,1H),8.17(s,1H),8.03(d,J=8.6 Hz,1H),8.00(d,J=8.9 Hz,1H),7.94(d,J=8.9 Hz,1H),7.71(dd,J=8.6,1.8 Hz,1H),5.75-5.66(m,1H),5.61-5.46(m,1H),4.34-4.26(m,1H),3.46(br s,1H),2.69-2.59(m,1H),2.55-2.44(m,1H),1.73(br s,1H),1.54-1.43(m,9H),0.88(br s,1H),0.59-0.53(m,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴萘-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(3.46 g，7.28 mmol)及乙酸銨(11.2 g，146 mmol)溶解於甲苯(100 mL)中並攪拌。接著將反應物置於已預加熱至100℃之油浴中且在該溫度下攪拌12小時。使反應物冷卻至室溫，濃縮並分配於DCM(約200 mL)與半飽和NaHCO3 水溶液(約150 mL)之間。用鹽水(約100 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮成棕褐色凝固泡沫。在BIOTAGEHorizon(160 g SiO2 ，用DCM裝載，30-50% EtOAc/己烷)上純化此物質，得到呈黃色凝固泡沫狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(3.05 g)。LC-MS滯留時間2.238分鐘；m/z 452.07、454.02(1:1)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.14(br. s.,1 H),7.96(d,J =1.8 Hz,1 H),7.79(d,J =9.0 Hz,1 H),7.72(d,J =9.8 Hz,2 H),7.53(dd,J =8.8,2.0 Hz,1 H),7.38(s,1 H),4.91(dd,J =9.0,5.3 Hz,1 H),3.25-3.56(m,2 H),2.40-2.51(m,1 H),1.75-1.85(m,1 H),1.38(br. s.,1 H),0.86-0.93(m,1 H),0.47-0.55(m,1 H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將氮氣鼓泡通過(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(1.65 g，4.40 mmol)及Cu(I)I(168 mg，0.880 mmol)於三乙胺(3.07 mL，22.0 mmol)及DMF(40 mL)中之溶液20分鐘。接著添加乙炔基三甲基矽烷(2.16 g，22.0 mmol)及Pd(PPh3 )4 (254 mg，0.220 mmol)，用氮氣沖洗反應物，密封且在室溫下攪拌24小時。將反應物濃縮成棕色油狀物，且藉由BIOTAGEHorizon(160 g SiO2 ，20-40% EtOAc/己烷)純化，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(980 mg)。LC-MS滯留時間3.230分鐘；m/z 346.17(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90%H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 7.18(s,1 H),4.77(dd,J =9.2,5.1 Hz,1 H),3.20(br. s.,1 H),3.14-3.39(m,1H),2.33(dd,J =13.2,9.4 Hz,1 H),1.69-1.78(m,1 H),1.34-1.56(m,1 H),1.49(s,9 H),0.85(dt,J =8.5,5.7 Hz,1 H),0.41-0.47(m,1 H),0.22-0.24(m,9 H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將碳酸鉀(194 mg，1.40 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(970 mg，2.81 mmol)之MeOH(30 mL)溶液中且在氮氣下攪拌反應物，接著在50℃(浴溫度)下加熱4小時。濃縮反應物至約5 mL體積，用DCM(約40mL)稀釋且用半飽和鹽水(約20 mL)洗滌。乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並濃縮成棕褐色固體。藉由BIOTAGEHorizon(40 g SiO2 ，用DCM裝載，35-45% EtOAc/己烷)純化此物質，得到呈淡黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(747 mg)。LC-MS滯留時間2.866分鐘；m/z 272.12(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 7.18(br. s.,1 H),4.59(br. s.,1 H),3.36-3.64(m,2 H),2.46(dd,J =13.2,8.9 Hz,1 H),2.18-2.31(m,1 H),1.64-1.74(m,1 H),1.18-1.45(m,9 H),0.83(dt,J =8.5,5.8 Hz,1 H),0.56(br. s.,1 H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將氮氣鼓泡通過(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(400 mg，0.880 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(313 mg，1.14 mmol)及Cu(I)I(8.4 mg，0.044 mmol)於三乙胺(0.37 mL，2.6 mmol)及DMF(8 mL)中之溶液歷時10分鐘。接著添加Pd(PPh3 )4 (50.9 mg，0.044 mmol)，將氮氣鼓泡通過反應混合物1分鐘，接著密封燒瓶並在50℃下加熱16小時。在高真空下濃縮反應物，用EtOAc(約5 mL)濕磨剩餘固體且藉由過濾收集(用EtOAc及己烷沖洗)，得到呈淡黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(595 mg)。該物質不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間3.140分鐘；m/z 647.35(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將4 M HCl(1.546 mL，6.18 mmol)之二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(200 mg，0.309 mmol)之二噁烷(3 mL)溶液中且用力攪拌反應物4小時。濃縮反應漿料，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷的鹽酸鹽(177 mg)。LC-MS滯留時間3.403分鐘；m/z 893.29(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD) d ppm 8.42(s,1 H),8.16(s,2 H),8.05(d,J=8.8 Hz,1 H),8.03(d,J =8.8 Hz,1 H),7.97(dd,J=8.8,1.8 Hz,1 H),7.74(s,1 H),7.66(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),5.01(dd,J =10.8,7.8 Hz,1 H),4.78(dd,J=10.8,8.3 Hz,1 H),3.57-3.77(m,2 H),3.50-3.56(m,1 H),2.61-2.92(m,4 H),2.13-2.21(m,1 H),2.06-2.13(m,1 H),1.25(ddd,J =7.8,5.0,2.5 Hz,1 H),0.99-1.14(m,2 H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯將氮氣鼓泡通過(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(以類似於中間物26之方式製備)(2.0 g，4.12 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(1.872 g，4.12 mmol)及Na2 CO3 (2.184 g，20.60 mmol)於EtOH(16.0 mL)、甲苯(16.0 mL)及水(16.0 mL)之混合物中的兩相溶液歷時15分鐘。接著添加Pd(PPh3 )4 (0.143 g，0.124 mmol)，用氮氣沖洗反應物，密封，接著在95℃下加熱10小時。用水(約20 mL)稀釋粗漿料且用EtOAc(約100 mL)萃取。用鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮成黃色泡沫。將此物質溶解於最少量之DCM中，且在BIOTAGEHorizon(110 g SiO2 ，70-85% EtOAc/己烷)上純化，得到呈淡黃色凝固泡沫狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(2.257 g)。LC-MS滯留時間4.158分鐘；m/z 733.17(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.17(br. s.,1 H),8.07(s,1 H),7.86-7.94(m,2 H),7.71-7.86(m,6 H),7.44(s,1 H),7.32(s,1 H),7.20(br. s.,5 H),5.14(d,J =12.3 Hz,1 H),4.91-5.05(m,1 H),4.63-4.77(m,1 H),3.55-3.69(m,2 H),3.29-3.34(m,1 H),2.46-2.59(m,2 H),2.29-2.44(m,2 H),1.66-1.80(m,2 H),1.30(br. s.,9 H),0.80-0.93(m,2 H),0.61(br. s.,2 H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將10% Pd/C(0.022 g，0.021 mmol)裝入(1R,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(0.305 g，0.416 mmol)及NaHCO2 (0.070 g，0.832 mmol)於MeOH(15 mL)中之溶液中。用N2 (3次)真空沖洗所得懸浮液且在室溫下置於1 atm H2 (氣球)下3小時。接著經由矽藻土(CELITE)墊過濾混合物且在真空下濃縮。回收對應於(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(0.235 g)之灰白色固體且其不經進一步純化即使用。LC/MS[M+H]+ =599；Rt=1.96分鐘為產物。管柱Luna 3u C18 2×50 mm；起始% B：0，最終%B：100，溶劑A：10%乙腈/90% H2 O+1% TFA；溶劑B：90%乙腈/10% H2 O+1% TFA；流速4 mL/min。操作時間：5分鐘。純度=94%。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 12.00(2 H,br. s.),8.11-8.32(3 H,m),7.88-8.02(5 H,m),7.72-7.88(9 H,m),7.63(4 H,br. s.),4.64(2H,br. s.),4.42(1 H,t,J =7.93 Hz),3.97-4.18(1 H,m),3.45(1 H,br. s.),3.17(3 H,s),2.96(1 H,dd,J =13.43,6.71 Hz),2.08-2.43(6 H,m),1.66(2 H,br. s.),1.07-1.50(20 H,m),0.81-0.89(3 H,m),0.77(1 H,br. s.),0.45-0.61(3 H,m),0.30(1 H,br. s.)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將HATU(0.164 g，0.432 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(0.235 g，0.392 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(0.069 g，0.39 mmol)及DIEA(0.137 mL，0.785 mmol)於DMF(10 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌所得黃色溶液隔夜。在減壓下移除溶劑且將殘餘物溶解於甲醇中，過濾且藉由製備型HPLC(溶劑A：10% MeOH/90%水/0.1% TFA；溶劑B：90% MeOH/10%水/0.1% TFA；管柱：Sunfire Prep MS C18 30×100 mm 5u；波長：220 nM；流速：30 ml/min；梯度：0% B至100% B，經30分鐘，保持時間2分鐘)純化，得到呈白色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯的三氟乙酸鹽(0.10 g)。LC/MS[M+H]+ =756；Rt=2.14分鐘為產物。管柱Luna 3u C18 2×50 mm；起始% B：0，最終% B：100，溶劑A：10%乙腈/90% H2 O+1% TFA；溶劑B：90%乙腈/10% H2 O+1% TFA；流速4 mL/min。操作時間：5分鐘。純度=96%。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 14.60(1 H,br. s.),8.39(3 H,d,J =4.88 Hz),8.09-8.24(4 H,m),7.99-8.08(6 H,m),7.89-7.98(5 H,m),7.27(1 H,d,J =8.55 Hz),4.98-5.07(1 H,m),4.84(1 H,br. s.),4.42(1 H,t,J =7.32 Hz),3.74(1 H,br. s.),3.55(4 H,s),2.55(2 H,d,J =9.77 Hz),2.32-2.44(3 H,m),2.13(1 H,dq,J =13.43,6.71 Hz),1.94(1 H,dt,J =13.28,6.79 Hz),1.75(1H,dt,J =12.89,6.22 Hz),1.40(4 H,d,J =10.07 Hz),1.11-1.30(10 H,m),0.90-1.00(5 H,m),0.73-0.88(10 H,m)。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯將4 N HCl之二噁烷溶液(2 mL,8.00 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(0.10 g，0.12 mmol)的CH2 Cl2 (20 mL)溶液中且在室溫下攪拌所得黃色懸浮液2小時。在真空下濃縮反應物且用Et2 O濕磨所得殘餘物，得到呈黃色固體狀之(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯HCl鹽(47 mg)。LC/MS[M+H]+ =656；Rt=1.73分鐘為產物。管柱Luna 3u C18 2×50 mm；起始%B：0，最終%B：100，溶劑A：10%乙腈/90% H2 O+1% TFA；溶劑B：90%乙腈/10% H2 O+1% TFA；流速4mL/min。操作時間：5分鐘。純度=95%。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 14.47-15.18(2 H,m),9.77-10.61(2 H,m),8.30-8.42(2 H,m),8.17(1 H,s),7.93-8.10(10 H,m),7.27(1 H,d,J =8.55 Hz),5.08(1 H,t,J =7.93 Hz),4.71(1 H,t,J =8.39 Hz),4.40-4.46(1 H,m),3.77(1 H,br. s.),3.52-3.58(3 H,m),3.38-3.44(1 H,m),2.52-2.61(3 H,m),2.39(1 H,dt,J =13.58,6.64 Hz),2.14-2.21(1 H,m),1.94(2 H,dd,J =8.24,4.88 Hz),1.15(1 H,d,J =5.80 Hz),0.93(4 H,d,J =6.71 Hz),0.75-0.89(6 H,m)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯將4.0 M HCl(1.167 mL，4.67 mmol)之二噁烷溶液添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(228 mg，0.311 mmol)的二噁烷(3 mL)溶液中且在室溫下用力攪拌反應物3小時。濃縮反應物，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯的鹽酸鹽(233 mg)。LC-MS滯留時間3.988分鐘；m/z 633.18(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.44(s,1 H),8.28(s,1 H),8.08-8.18(m,3 H),7.92-8.02(m,4 H),7.84(br. s.,3 H),7.31(br. s.,5 H),5.21(d,J =12.1,1 H),4.95-5.05(m,2 H),4.80-4.91(m,1 H),3.70-3.77(m,1 H),3.59-3.67(m,1 H),2.77-2.93(m,2 H),2.74(dd,J =13.4,9.2 Hz,1 H),2.46(dt,J =13.5,6.7 Hz,1 H),2.12-2.22(m,1 H),1.83-1.96(m,1 H),1.27-1.35(m,1 H),1.09(q,J =7.9 Hz,1 H),0.95(ddd,J =8.7,5.9,5.8 Hz,1 H),0.75-0.83(m,1 H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯將HATU(203 mg，0.533 mmol)添加至經攪拌之(1R,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(225 mg)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(93mg,0.53mmo1)於DMF(3mL)及DIPEA(0.37mL,2.1mmo1)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物3小時。在氮氣流下濃縮粗反應物,將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含乙酸銨緩衝液之MeOH/水)純化,得到呈黃色固體狀之(1R,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(200 mg)。LC-MS滯留時間4.053分鐘；m/z 790.25(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LCMICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.28(s,2 H),8.13(d,J =8.8 Hz,1 H),8.08(d,J =8.8 Hz,1 H),7.94-8.02(m,4 H),7.76-7.92(m,3 H),7.85(dd,J =8.7,1.6 Hz,1 H),7.29(br. s.,5 H),5.21(d,J =12.1 Hz1 H),5.16(dd,J =9.2,6.9 Hz,1 H),4.97(t,J =8.2 Hz,1 H),4.57(d,J =6.5 Hz,1 H),3.78-3.87(m,1 H),3.68(s,3 H),3.64-3.77(m,2 H),2.66-2.77(m,2 H),2.40-2.56(m,2 H),2.14-2.25(m,1 H),2.05-2.14(m,1 H),1.87(d,J =6.5 Hz,1 H),1.06-1.16(m,1 H),1.02(d,J =6.8 Hz,3 H),0.94(d,J =6.8 Hz,3 H),0.87-0.99(m,2 H),0.74-0.82(m,1 H)。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯將10%鈀/碳(100 mg，0.094 mmol)添加至(1R,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(190 mg，0.241 mmol)及Na2 CO3 (50 mg，0.472 mmol)於THF(10 mL)中之溶液中且依序用氮氣(3次)及用氫氣(5次)真空沖洗反應混合物。使反應混合物在氫氣球下攪拌2小時，經由矽藻土(CELITE)過濾並濃縮。再使殘餘物在室溫下經受反應條件(使用50 mg 10% Pd/C)隔夜，隨後經由矽藻土(CELITE)過濾並濃縮。將殘餘物溶解於DMSO/MeOH中，過濾並藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeOH/H2 O)純化，得到(2S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯之三氟乙酸鹽(55 mg)。LC-MS滯留時間2.147分鐘；m/z 656.21(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.28(s,1 H),8.24(s,1 H),8.12(d,J =8.9 Hz,1 H),8.07(d,J =8.9 Hz,1 H),7.91-8.01(m,4 H),7.83-7.90(m,3 H),7.66(s,1 H),5.17(dd,J =9.2,7.0 Hz,1 H),4.67(dd,J =10.7,7.6 Hz,1 H),4.58(d,J =6.7 Hz,1 H),3.82-3.87(m,1 H),3.69(s,3 H),3.44-3.49(m,1 H),2.59-2.77(m,3 H),2.48-2.56(m,1 H),2.16-2.25(m,1 H),2.03-2.15(m,2 H),1.21(ddd,J =7.5,4.9,2.6 Hz,1 H),1.09-1.15(m,1 H),1.04(d,J =6.7 Hz,3 H),0.98-1.03(m,1 H),0.95(d,J =6.7 Hz,3 H),0.89-0.95(m,1 H)。
(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(2,2'-聯萘-6,6'-二基)雙(1H-咪唑-4,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯)將氮氣鼓泡至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(250 mg，0.550 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-聯(1,3,2-二氧雜硼)(69.9 mg，0.275 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)-二茂鐵(15.42 mg，0.028 mmol)及K2 CO3 (228 mg，1.651 mmol)於DMSO(12 mL)中之溶液中歷時10分鐘。接著將二氯化1,1'-雙(二苯基膦基)-二茂鐵)鈀(22.63 mg，0.028 mmol)添加至反應混合物中且繼續氮氣鼓泡10分鐘，隨後密封反應物，接著在110℃下加熱20小時。使反應物分配於水(60 mL)與DCM(60 mL)之間且分離有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。藉由BIOTAGEHorizon(40 g SiO2 ，70-100% EtOAc/己烷)純化粗殘餘物，得到呈黃色固體狀之(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(2,2'-聯萘-6,6'-二基)雙(1H-咪唑-4,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯)(67 mg)。LC-MS滯留時間4.348分鐘；m/z 749.29(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.22(s,4 H),7.91-8.02(m,6 H),7.87(d,J =8.5 Hz,2 H),7.48(br. s.,2 H),4.68-4.77(m,2 H),3.61(br. s.,2 H),2.56(dd,J =13.1,8.8 Hz,2 H),2.33-2.43(m,2 H),1.70-1.79(m,2 H),1.31(br. s.,18 H),0.87(dt,J =8.5,5.8 Hz,2 H),0.63(br. s.,2 H)。
6,6'-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-聯萘將4.0 M HCl(1.0 mL，4.00 mmol)之二噁烷溶液添加至經攪拌之(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(2,2'-聯萘-6,6'-二基)雙(1H-咪唑-4,2-二基))雙(2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯)(62 mg，0.083 mmol)的二噁烷(2 mL)溶液中且用力攪拌反應漿料3小時。用MeOH稀釋漿料並濃縮至乾，得到呈淡黃色固體狀之6,6'-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-聯萘的鹽酸鹽(56 mg)。LC-MS滯留時間3.971分鐘；m/z 547.25(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上,使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.44(s,2 H),8.38(s,2 H),8.12-8.19(m,6 H),8.09(dd,2 H),7.97(dd,J =8.5,1.5 Hz,2 H),4.97(dd,J =10.5,8.1 Hz,2 H),3.62-3.66(m,2 H),2.79-2.89(m,4 H),2.15-2.22(m,2 H),1.29-1.34(m,2 H),1.11(q,J =7.9 Hz,2 H)。
6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹啉將二氯雙(三苯基膦)-鈀(II)(0.289 g，0.412 mmol)添加至6-溴-2-氯喹啉(1.0 g，4.1 mmol)及三丁基(1-乙氧基乙烯基)錫烷(1.79 g，4.95 mmol)於二噁烷(8 mL)中之溶液中且在100℃下攪拌混合物5小時，藉由LCMS鑑別所需產物。濃縮粗反應混合物且藉由急驟矽膠層析(用1:1己烷/DCM溶離)純化，得到呈白色固體狀之產物6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹啉(720 mg)。LC-MS滯留時間4.091分鐘；m/z 279.84(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
2-溴-1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮將NBS(407 mg，2.287 mmol)添加至6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹啉(530 mg，1.91 mmol)於THF(10 mL)及水(2.5 mL)之溶液中且在室溫下攪拌混合物2小時。使反應混合物分配於EtOAc與鹽水之間且濃縮有機層。藉由急驟矽膠層析(用Et2 O/己烷溶離，梯度為0%至5% Et2 O)純化粗物質，得到呈白色固體狀之2-溴-1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮(380 mg)。LC-MS滯留時間3.988分鐘；m/z 329.84(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯將DIPEA(0.21 mL，1.2 mmol)添加至2-溴-1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮(268 mg，0.815 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(204 mg，0.896 mmol)於乙腈(8 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物16小時。用飽和NaHCO3 水溶液(5 mL)稀釋反應混合物且用EtOAc(2×20 mL)萃取。用鹽水洗滌合併之有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。藉由急驟矽膠層析(使用DCM作為裝載溶劑，用Et2 O/己烷溶離，梯度為10%至30% Et2 O)純化粗產物，得到呈白色固體狀之(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(332 mg)。LC-MS滯留時間4.283分鐘；m/z 476.88(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將乙酸銨(990 mg，12.8 mmol)添加至(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(407 mg，0.856 mmol)於甲苯(10 mL)中之溶液中且在120℃下攪拌混合物3小時。用飽和NaHCO3 水溶液(10 mL)稀釋反應混合物且用EtOAc(50 mL)萃取。用鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮。藉由急驟矽膠層析(用1:1 EtOAc/己烷溶離)純化粗物質，得到呈淡黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(272 mg)。LC-MS滯留時間3.306分鐘；m/z 456.99(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.08(d,J =8.5 Hz,1H),7.95(d,J =2.2 Hz,1 H),7.78(dd,J =8.9,2.2 Hz,1 H),7.73-8.14(m,3 H),4.86-4.98(m,1 H),3.70-3.82(m,0.5 H),3.26-3.39(m,1 H),2.46(dd,J =13.3,9.3 Hz,1 H),1.84-1.91(m,0.5 H),1.74-1.84(m,1 H),1.52(s,9 H),0.87-0.97(m,1 H),0.48-0.61(m,1 H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將Pd(OAc)2 (7.40 mg，0.033 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(150 mg，0.329 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(149 mg，0.329 mmol)、二環己基(2',6'-二甲氧基聯苯-2-基)膦(27.0 mg，0.066 mmol)及K2 CO3 (137 mg，0.988 mmol)於THF(2 mL)及水(0.50 mL)中之溶液中且在110℃下攪拌反應混合物2小時。用MeOH稀釋反應混合物，過濾且藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈亮黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(140 mg)。LC-MS滯留時間3.150分鐘；m/z 700.36(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉將4 M HCl(1 mL，4.00 mmol)之二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(130 mg，0.186 mmol)於二噁烷(3 mL)、MeOH(0.5 mL)及DCM(3 mL)中之懸浮液中且在室溫下攪拌混合物2小時。濃縮反應物，得到呈黃色固體狀之2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉的鹽酸鹽(140 mg)。LC-MS滯留時間2.063分鐘；m/z 500.37(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上,使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.09(d,J =9.0 Hz,1 H),8.66(s,1 H),8.56-8.62(m,2 H),8.47-8.53(m,2 H),8.07(s,1 H),8.02-8.06(m,4 H),4.97(dd,J =10.8,8.0 Hz,1 H),3.65-3.71(m,1 H),3.55-3.65(m,2 H),2.73-2.86(m,3 H),2.61-2.72(m,1 H),2.07-2.20(m,2 H),1.25-1.35(m,2 H),1.07(t,2 H)。
1-(4-(5-乙醯基萘-1-基)苯基)乙酮將碳酸鈉(2.55 g，24.09 mmol)之水(20 mL)溶液添加至1-(5-溴萘-1-基)乙酮(1.2 g，4.8 mmol)及4-乙醯基苯基酸(1.03 g，6.26 mmol)於甲苯(20 mL)及乙醇(20 mL)中之溶液中，接著在氮氣鼓泡下用力攪拌異質溶液15分鐘。接著添加Pd(PPh3 )4 (0.111 g，0.096 mmol)，密封反應容器且在回流下加熱6小時。冷卻反應物並濃縮至乾。將粗殘餘物溶解於EtOAc(約150 mL)及水(約100 mL)中。分離各層且用鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮成橙色固體。在BIOTAGEHorizon(40 g SiO2 ，DCM)上純化橙色固體，得到呈灰白色固體狀之1-(4-(5-乙醯基萘-1-基)苯基)乙酮(1.31 g)。LC-MS滯留時間3.736分鐘；m/z 289.19(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90%MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.75(d,J =8.8 Hz,1 H),8.11(d,J =8.5 Hz,2 H),7.99(d,J =8.5 Hz,1 H),7.94(dd,J =7.2,1.1 Hz,1 H),7.67(dd,J =8.5,7.0 Hz,1 H),7.58(d,J =8.3 Hz,2 H),7.45-7.51(m,2 H),2.79(s,3 H),2.70(s,3 H)。
2-溴-1-(4-(5-(2-溴乙醯基)萘-1-基)苯基)乙酮將溴(0.47 mL，9.1 mmol)之DCM(10 mL)溶液添加至1-(4-(5-乙醯基萘-1-基)苯基)乙酮(1.285 g，4.46 mmol)之DCM(20 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應物1天。將反應物濃縮成黏性淡橙色油狀物(約1.92 g)。根據1 H NMR，主要產物似乎為所需產物，峰對應於兩個單溴化區域異構體(約10%)。粗物質不經純化即使用。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.64(d,J =8.5 Hz,1H),8.13-8.17(m,2 H),8.05(d,J =8.5 Hz,1 H),7.94(dd,J =7.2,1.1 Hz,1 H),7.71(dd,J =8.8,7.0 Hz,1 H),7.60-7.64(m,2 H),7.48-7.55(m,2 H),4.60(s,2 H),4.53(s,2 H)。
(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-羰基氧基)乙醯基)萘-1-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯將DIPEA(2.337 mL，13.38 mmol)添加至粗2-溴-1-(4-(5-(2-溴乙醯基)萘-1-基)苯基)乙酮(1.99 g，4.46 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(2.03 g，8.92 mmol)於乙腈(50 mL)之溶液中且在室溫下攪拌透明黃色溶液隔夜。將反應物濃縮成黃色凝固泡沫，在BIOTAGEHorizon(SiO2 ，EtOAc/己烷)上純化，得到呈白色絨毛狀固體之(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-羰基氧基)乙醯基)萘-1-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(2.95 g)。LC-MS滯留時間4.363分鐘；m/z 737.38(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.57(d,J =8.8 Hz,1 H),8.14(d,J =8.0 Hz,2 H),7.99-8.06(m,2 H),7.68(dd,J =8.8,7.0 Hz,1 H),7.64(d,J =8.3 Hz,2 H),7.52-7.60(m,2 H),5.60-5.70(m,1 H),5.32-5.56(m,3 H),4.24-4.34(m,2 H),3.38-3.49(m,2 H),2.59-2.69(m,1 H),2.38-2.55(m,3 H),1.61-1.77(m,2 H),1.47(br. s.,18 H),0.81-0.94(m,2 H),0.50-0.58(m,2 H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯攪拌(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-羰基氧基)乙醯基)萘-1-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯(2.01 g，2.72 mmol)及乙酸銨(4.19 g，54.4 mmol)於甲苯(40 mL)中之溶液且在100℃下加熱隔夜。將反應物濃縮至乾且使棕色固體分配於DCM(150 mL)與半飽和NaHCO3 水溶液(100 mL)之間。乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並濃縮。粗物質不易藉由急驟管柱層析純化，因此收集含有所需產物或起始物質之所有溶離份，濃縮並再經受反應條件(現為110℃隔夜)。濃縮反應物且使棕色固體分配於DCM(150 mL)與半飽和NaHCO3 (100 mL)之間。乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並濃縮。藉由製備型HPLC純化約30-35%物質(溶解於MeOH中，過濾，80-100% MeOH/水，乙酸銨緩衝液)，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(148 mg)。藉由製備型HPLC純化剩餘物質(溶解於MeOH中，過濾，60-100% MeOH/水，TFA緩衝液)，得到(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(299 mg)。LC-MS滯留時間3.100分鐘；m/z 699.56(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之ShimadzuLC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.29(d,J =8.5 Hz,1 H),7.90(d,J =8.5 Hz,1 H),7.83(d,J =8.3 Hz,2 H),7.59(dd,J =7.0,1.0 Hz,1 H),7.53(dd,J =8.5,7.0 Hz,1 H),7.43-7.50(m,4 H),7.42(s,1 H),7.23(s,1 H),4.66-4.80(m,2 H),3.60(br. s.,2 H),2.56(dt,J =13.1,8.9 Hz,2 H),2.32-2.46(m,2 H),1.70-1.78(m,2 H),1.38(br. s.,18 H),0.82-0.90(m,2 H),0.63(br. s.,2 H)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將4 M HCl(0.757 mL，3.03 mmol)之二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(141 mg，0.202 mmol)之二噁烷(3.0 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應物6小時。用MeOH沿小瓶側面向下洗滌固體且在氮氣流下濃縮反應物，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷的鹽酸鹽(119 mg)。LC-MS滯留時間2.333分鐘；m/z 499.57(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.15(d,J =8.3 Hz,1 H),8.03-8.08(m,2 H),8.01(d,J =8.0 Hz,2 H),7.95(s,1 H),7.77(d,J =6.5 Hz,1 H),7.68-7.74(m,1 H),7.65(d,J =8.0 Hz,2 H),7.57-7.64(m,2 H),5.03(t,J =9.4 Hz,1 H),4.97(dd,J =10.8,8.0 Hz,1 H),3.57-3.66(m,2 H),2.76-2.89(m,4 H),2.11-2.21(m,2 H),1.27-1.34(m,J =7.7,5.1,5.1,2.6 Hz,2 H),1.05-1.14(m,2 H)。
(2S,3aS,6aS)-六氫環戊并(cyclopenta)[b]吡咯-1,2(2H)-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-(第三丁氧羰基)-八氫環戊并[b]吡咯-2-羰基氧基)乙醯基)萘-2-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯將純DIPEA(0.068 mL，0.388 mmol)添加至經攪拌之2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(79 mg，0.176 mmol)及(2S,3aS,6aS)-1-(第三丁氧羰基)八氫環戊并[b]吡咯-2-甲酸(90 mg，0.353 mmol)於乙腈(1.5 mL)及氯仿(1.5 mL)中的懸浮液中且在室溫下攪拌混合物隔夜。將反應混合物蒸發至乾，接著藉由矽膠FCC(含3% MeOH之DCM)純化，得到呈棕褐色固體之中間物145。LC-MS滯留時間；2.480分鐘；m/z 793.7(M-H)- 。
中間物146(2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-(第三丁氧羰基)-八氫環戊并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)六氫環戊并[b]吡咯-1(2H)-甲酸第三丁酯在140℃下將經攪拌之(2S,3aS,6aS)-六氫環戊并[b]吡咯-1,2(2H)-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-(第三丁氧羰基)八氫環戊并[b]吡咯-2-羰基氧基)乙醯基)萘-2-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯(140 mg，0.176 mmol)及乙酸銨(272 mg，3.52 mmol)於二甲苯(4 mL)中的懸浮液加熱2小時。將反應混合物冷卻至室溫，用EtOAc(20 mL)稀釋，用飽和NaHCO3 、水、鹽水洗滌並乾燥(Na2 SO4 )，得到棕色固體，藉由矽膠FCC(含3-5% MeOH之DCM)純化，得到中間物146。LC-MS滯留時間：2.577分鐘；m/z 755.7(M+H)+ 。
(2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-八氫環戊并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)八氫環戊并[b]吡咯將4 N HCl之二噁烷溶液(20當量)添加至中間物146之DCM溶液中且在室溫下攪拌混合物2-3小時。將無水甲苯添加至所得黃色懸浮液中，接著蒸發至乾，得到呈米色固體狀之中間物147且以四鹽酸鹽形式分離：LC-MS滯留時間：2.343分鐘；m/z 555(M+H)+ 。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將TFA(1.028 mL,13.34 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(中間物120)(606 mg，1.334 mmol)之DCE(20 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。接著再添加TFA(1 mL)且在室溫下攪拌反應物4小時。將反應物濃縮至乾，將粗棕色油狀物溶解於乙醚中且在真空下濃縮(2次)，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷的三氟乙酸鹽(786 mg)。該物質不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間2.558分鐘；m/z 352.03、354.05(1:1)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 10.55(br. s.,1 H),8.02(s,1 H),7.93(d,J =1.5 Hz,1 H),7.72(d,J =8.5 Hz,1 H),7.65(d,J =8.8 Hz.1 H),7.59(dd,J =8.8,2.0 Hz,1 H),7.52(dd,J =8.7,1.6 Hz,1 H),7.44(s,1 H),5.10(dd,J =11.8,7.3 Hz,1 H),3.49-3.54(m,1 H),2.94(td,J =12.7,4.6 Hz,1 H),2.68(dd,J =13.2,7.2 Hz,1 H),2.06-2.14(m,1 H),1.20-1.26(m,1 H),1.00-1.09(m,1 H)。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯將HATU(411 mg，1.082 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷之三氟乙酸鹽(525 mg，0.902 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(190 mg，1.08 mmol)於DMF(10 mL)及DIPEA(0.79 mL，4.5 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物4小時。用EtOAc(約80 mL)稀釋反應物且用飽和NaHCO3 水溶液、水(30 mL)及鹽水(30 mL)洗滌。接著乾燥(MgSO4 )有機層，過濾並濃縮成棕色油狀物(625 mg)。在BIOTAGEHorizon(40 g SiO2 ，40-80% EtOAc/己烷)上純化此物質，得到呈黃色玻璃狀之(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(412 mg)。LC-MS滯留時間1.843分鐘；m/z 511.24、513.12(1:1)(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1.0 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將氮氣鼓泡通過(1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(中間物122)(118 mg，0.432 mmol)、(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(170 mg，0.332 mmol)及CuI(3.17 mg，0.017 mmol)於DMF(4 mL)及TEA(0.14 mL，0.10 mmol)中之混合物歷時15分鐘。接著添加Pd(PPh3 )4 (19.2 mg，0.017 mmol)，密封反應容器且在60℃下加熱隔夜。冷卻反應物，接著再將CuI(5 mg)及TEA(100 μL)添加至反應物中且將氮氣鼓泡通過反應物歷時15分鐘。接著再添加Pd(PPh3 )4 (12 mg)，密封反應物且在70℃下攪拌24小時。在高真空下濃縮反應物且使殘餘物分配於DCM(25 mL)與水(25 mL)之間。用DCM(2×10 mL)萃取水層且用鹽水(約20 mL)洗滌合併之有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮成黏性深色油狀物。將物質溶解於MeOH中，過濾且藉由製備型HPLC(MeOH/水，乙酸銨緩衝液)純化得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(187.4 mg)。該物質不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間1.720分鐘；m/z 704.59(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1.0 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(2S,5S)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(6-溴萘-2-基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯將DIPEA(0.823 mL，4.71 mmol)添加至經攪拌之2-溴-1-(6-溴萘-2-基)乙酮(中間物118)(1.03 g，3.14 mmol)及(2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸(0.720 g，3.14 mmol)於乙腈(50 mL)中的漿料中且在室溫下攪拌反應物隔夜。將反應物濃縮至乾且藉由BIOTAGEHorizon(40 g SiO2 ，10-20% EtOAc/己烷)純化，得到呈黃色凝固泡沫狀之(2S,5S)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(6-溴萘-2-基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯(1.09 g)。LC-MS滯留時間4.413分鐘；m/z 476,478.20(1:1)(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.57(br. s.,1H),8.14(d,J =1.5 Hz,1 H),8.01(d,J =8.5 Hz,1 H),7.96(d,J =8.8 Hz,1 H),7.91(d,J =8.8 Hz,1 H),7.68(dd,J =8.8,1.8 Hz,1 H),5.62-5.70(m,1 H),5.47-5.60(m,1 H),4.46(t,J =7.3 Hz,1 H),3.92-4.06(m,1 H),2.26-2.37(m,2 H),2.05-2.19(m,1 H),1.67-1.82(m,1 H),1.46(d,J =6.8 Hz,9 H),1.30(d,J =6.5 Hz,3 H)。
中間物152(2S,5S)-2-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將乙酸銨(3.79 g，49.1 mmol)添加至(2S,5S)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(6-溴萘-2-基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯(1.17 g，2.47 mmol)之甲苯(30 mL)溶液中，將反應物置於已預加熱至100℃之油浴中且在該溫度下攪拌隔夜。使反應物冷卻至室溫，濃縮且分配於DCM(100 mL)與半飽和NaHCO3 水溶液(75 mL)之間。用鹽水(約50 mL)洗滌有機層，乾燥(MgSO4 )，過濾並濃縮成棕褐色凝固泡沫。在BIOTAGEHorizon(160 g SiO2 ，用DCM裝載，20-35% EtOAc/己烷)上純化此物質，得到呈棕褐色凝固泡沫狀之(2S,5S)-2-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(893 mg)。LC-MS滯留時間3.410分鐘；m/z 456、458.22(1:1)(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δ.ppm 8.19(br. s.,1 H),8.01(s,1 H),7.83-7.93(m,1 H),7.76-7.83(m,2 H),7.55(dd,J =8.7,1.6 Hz,1 H),7.47(br. s.,1 H),4.94(br. s.,1 H),3.99-4.09(m,1 H),2.22-2.36(m,2 H),2.09-2.21(m,1 H),1.72(br. s.,1 H),1.42(d,J =6.0 Hz,3 H),1.34(br. s.,9 H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將氮氣鼓泡通過(2S,5S)-2-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(127 mg，0.277 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1,0]己烷-2-甲酸第三丁酯(91 mg，0.33 mmol)及CuI(2.6 mg，0.014 mmol)於DMF(3 mL)及TEA(0.12 mL，0.83 mmol)中之溶液歷時15分鐘。接著添加Pd(PPh3 )4 (16 mg，0.014 mmol)且用氮氣沖洗反應容器，密封並在50℃下加熱隔夜。使反應物冷卻至室溫，將氮氣鼓泡通過反應混合物歷時20分鐘，接著再添加CuI(約4 mg)及Pd(PPh3 )4 (15 mg)。用氮氣沖洗反應物5分鐘，密封並在60℃下加熱1天。將反應物冷卻至室溫，用甲醇稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯的三氟乙酸鹽(56.7 mg)。LC-MS滯留時間3.161分鐘；m/z 649.62(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δ. ppm 8.31(s,1 H),8.21(s,1 H),8.07(d,J =8.8 Hz,1 H),7.99-8.04(m,2 H),7.91(dd,J =8.8,1.8 Hz,1 H),7.77-7.87(m,1 H),7.69(dd,J =8.7,1.4 Hz,1 H),5.13(t,J =7.5 Hz,1 H),4.12(br. s.,1 H),3.61(br. s.,1 H),2.66(br. s.,1 H),2.45-2.54(m,1 H),2.33-2.42(m,1 H),2.22-2.32(m,2 H),1.75-1.86(m,2 H),1.25-1.59(m,21 H),1.06(無,1 H),0.90(dt,J =8.5,5.8 Hz,1 H),0.71(br. s.,1 H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將4 M HCl(0.611 mL，2.445 mmol)之二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(53.6 mg，0.061 mmol)於二噁烷(1.5 mL)中之混合物中且用力攪拌反應物2小時。在氮氣流下濃縮反應物隔夜，得到(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷之鹽酸鹽(37 mg)，其不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間2.302分鐘；m/z 449.40(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-3-(4-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將TFA(500 μl，6.49 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(299 mg，0.865 mmol)之DCE(5 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應物30分鐘。將反應物濃縮至乾，接著再經受反應條件5小時。濃縮反應物，得到呈黏性棕色油狀之(1R,3S,5R)-3-(4-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷的三氟乙酸鹽，其不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間2.755分鐘；m/z 246.25(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(S)-3-甲基-1-側氧基-1-((1R,3S,5R)-3-(4-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)丁-2-基胺基甲酸甲酯將HATU(428 mg，1.125 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(212 mg，0.865 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(197 mg，1.125 mmol)於DMF(3 mL)及DIPEA(1.2 mL，6.9 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物隔夜。將反應物濃縮至乾，接著用BIOTAGEHorizon(25 g SiO2 ，40-60% EtOAc/己烷)純化，得到呈黃色玻璃狀之(S)-3-甲基-1-側氧基-1-((1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)丁-2-基胺基甲酸甲酯(203 mg)。LC-MS滯留時間3.095分鐘；m/z 403.29(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 7.17(br.s .,1 H),5.04-5.11(m,1 H),4.54(d,J =6.8 Hz,1H),3.65(s,3 H),3.54-3.61(m,1 H),2.82(s,1 H),2.39-2.50(m,1 H),2.27-2.36(m,1 H),2.04-2.15(m,1 H),1.94-2.04(m,1 H),1.11(dt,J =8.7,5.6 Hz,1 H),0.95(d,J =6.8 Hz,3 H),0.90(d,J =6.8 Hz,3 H),0.73-0.79(m,1 H),0.21(s,9 H)。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯將碳酸鉀(34.3 mg，0.248 mmol)添加至(S)-3-甲基-1-側氧基-1-((1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基矽烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)丁-2-基胺基甲酸甲酯(200 mg，0.497 mmol)之甲醇(5 mL)溶液中且用氮氣沖洗反應物，密封，接著在50℃下加熱4小時，接著在室溫下攪拌隔夜。將反應物濃縮至乾，接著在BIOTAGEHorizon(12 g SiO2 ，70-90% EtOAc/己烷)上純化，得到呈黃色玻璃狀之(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(151 mg)。LC-MS滯留時間1.788分鐘；m/z 331.32(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯經10分鐘用氮氣(6次)真空沖洗(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(208 mg，0.457 mmol)、(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(151 mg，0.457 mmol)及CuI(8.70 mg，0.046 mmol)於DMF(4 mL)及TEA(0.19 mL，1.4 mmol)中之混合物。接著添加Pd(PPh3 )4 (53 mg，0.046 mmol)且用氮氣(3次)真空沖洗反應混合物，密封且在60℃下加熱20小時。在氮氣流下濃縮反應物隔夜，接著藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之40-80% MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯的三氟乙酸鹽(270 mg)。LC-MS滯留時間2.995分鐘；m/z 704.70(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δ.ppm 8.28(s,1 H),8.18(s,1 H),8.06(d,J =8.8 Hz,1 H),7.98-8.03(m,2 H),7.89(dd,J =8.5,1.8 Hz,1 H),7.69-7.85(m,1 H),7.67(dd,J =8.7,1.4 Hz,1 H),5.11(br. s.,1 H),4.84-4.91(m,2 H),4.55(d,J =5.8 Hz,1 H),3.70-3.77(m,1 H),3.67(s,3 H),2.72(dd,J =13.6,9.0 Hz,1 H),2.55-2.63(m,1 H),2.39-2.50(m,2 H),2.11-2.20(m,1 H),2.02-2.11(m,1 H),1.81-1.89(m,1 H),1.45(br. s.,9 H),1.07-1.14(m,1 H),1.00(d,J =6.8 Hz,3 H),0.93(d,J =6.8 Hz,3 H),0.84-0.93(m,2 H),0.74(br. s.,1 H)。
1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮將3 M HCl(水溶液)(10 mL，30.0 mmol)添加至6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹啉(780 mg，2.80 mmol)之丙酮(20 mL)懸浮液中且在室溫下攪拌反應混合物5小時。濃縮反應混合物，溶解於THF(20 mL)中且用3 N HCl(水溶液)(5 mL)處理，在60℃下攪拌透明反應溶液5小時。冷卻反應物，用NaOH水溶液及NaHCO3 中和且用EtOAc萃取。乾燥有機層並濃縮，得到呈白色固體狀之粗1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮(710 mg)。LC-MS滯留時間3.703分鐘；m/z 250、251.99(1:1)(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
1-(6-(4-乙醯基苯基)喹啉-2-基)乙酮將Pd(OAc)2 (62.9 mg，0.280 mmol)添加至4-乙醯基苯基酸(689 mg，4.20 mmol)、1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮(700 mg，2.8 mmol)、二環己基(2',6'-二甲氧基聯苯-2-基)膦(230 mg，0.560 mmol)及K2 CO3 (1.16 g，8.40 mmol)於二噁烷(10 mL)及水(2.500 mL)中之溶液中且在110℃下使反應混合物回流5小時。將反應混合物冷卻至室溫且分配於飽和NH4 Cl水溶液與EtOAc之間。用NaHCO3 及鹽水洗滌有機層，接著乾燥(MgSO4 )，過濾，濃縮且藉由急驟矽膠層析(裝載溶劑：DCM，用0~20% EtOAc/己烷溶離)純化，得到呈白色固體狀之1-(6-(4-乙醯基苯基)喹啉-2-基)乙酮(781 mg)。LC-MS滯留時間3.776分鐘；m/z 290.29(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.35(d,J =8.3 Hz,1 H),8.34(d,J =8.3 Hz,1 H),8.19(d,J =8.5 Hz,1 H),8.12(d,J =8.3 Hz,1 H),8.08-8.16(m,3 H),7.85(d,J =8.3 Hz,1 H),7.82-7.89(m,1 H),2.91(s,3 H),2.69(s,3 H)。
2-溴-1-(6-(4-(2-溴乙醯基)苯基)喹啉-2-基)乙酮將三溴化吡啶鎓(221 mg，0.691 mmol)添加至1-(6-(4-乙醯基苯基)喹啉-2-基)乙酮(100 mg，0.346 mmol)及HBr(0.061 mL，0.35 mmol)於乙酸(3 mL)中之懸浮液中，在70℃下攪拌反應混合物6小時。在真空下濃縮反應物且使殘餘物分配於NaHCO3 水溶液(15 mL)與EtOAc(30 mL+10 mL+10 mL)之間。合併有機層，用鹽水洗滌，乾燥，過濾並濃縮，得到呈白色固體狀之粗2-溴-1-(6-(4-(2-溴乙醯基)苯基)喹啉-2-基)乙酮(120 mg)。LC-MS滯留時間4.138分鐘；m/z 448.01(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(2S,4S)-4-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)苯基)喹啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯將DIPEA(0.094 mL，0.537 mmol)添加至2-溴-1-(6-(4-(2-溴乙醯基)苯基)喹啉-2-基)乙酮(60 mg，0.134 mmol)及(2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-甲酸(64.6 mg，0.282 mmol)於乙腈(2 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。使反應混合物分配於EtOAc(20 mL+20 mL)/NaHCO3 水溶液(5 mL)之間。用NaHCO3 水溶液、鹽水洗滌合併之有機層，乾燥，過濾並濃縮，得到呈橙色固體狀之粗(2S,4S)-4-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)苯基)喹啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯(100 mg)。此物質不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間4.558分鐘；m/z 742.36(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(2S,4S)-2-(5-(4-(2-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)喹啉-6-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將乙酸銨(207 mg，2.69 mmol)添加至(2S,4S)-4-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)苯基)喹啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯(100 mg，0.134 mmol)之甲苯(3 mL)溶液中且在120℃下(微波反應器)攪拌反應混合物3小時。使反應物分配於EtOAc(20 mL+10 mL+10 mL)與NaHCO3 水溶液(10 mL)之間且乾燥合併之有機層，過濾並濃縮。藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-CH3 CN)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之產物(2S,4S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(16.6 mg)。LC-MS滯留時間3.270分鐘；m/z 704.72(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
2-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉將4 M HCl(0.2 mL，0.800 mmol)之二噁烷溶液添加至(2S,4S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(16.6 mg，0.024 mmol)之二噁烷(1 mL)溶液中且在室溫下攪拌反應混合物3天。濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之粗2-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-6-(4-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉的鹽酸鹽(19.1 mg)。LC-MS滯留時間2.765分鐘；m/z 504.47(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(2S,5S)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)苯基)喹啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯將DIPEA(0.059 mL，0.335 mmol)添加至2-溴-1-(6-(4-(2-溴乙醯基)苯基)喹啉-2-基)乙酮(50 mg，0.11 mmol)及(2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸(54 mg，0.24 mmol)於乙腈(2 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物16小時。使反應物分配於EtOAc(20+20 mL)/NaHCO3 水溶液(5 mL)之間。用飽和NaHCO3 水溶液、鹽水洗滌合併之有機層，乾燥，過濾並濃縮，得到呈橙色固體狀之粗(2S,5S)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)苯基)喹啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯(69 mg)。此粗物質不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間4.483分鐘；m/z 744.61(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(2S,5S)-2-(5-(4-(2-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)喹啉-6-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯將乙酸銨(107 mg，1.39 mmol)添加至(2S,5S)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)苯基)喹啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯(69 mg，0.093 mmol)於甲苯(體積：2 mL)中之懸浮液中且在120℃下(微波反應器)攪拌反應混合物3小時。使反應物分配於EtOAc(10 mL+5 mL+5 mL)與NaHCO3 水溶液(5 mL)之間。乾燥合併之有機層，過濾並濃縮，藉由製備型HPLC(含10 mM NH4 OAc緩衝液之H2 O-CH3 CN)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之產物(2S,5S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(13.4 mg)。LC-MS滯留時間4.350 min；m/z 702.29(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.37(d,J =8.8 Hz,1 H),8.16(s,1 H),8.07-8.10(m,2 H),8.03(d,J =8.8 Hz,1 H),7.79-7.88(m,5 H),7.40(s,1 H),4.90-5.07(m,2 H),3.99-4.13(m,2 H),2.10-2.39(m,6 H),1.68-1.82(m,2 H),1.43(d,J =6.0 Hz,6 H),1.24-1.59(m,22 H)。
2-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉將4 M HCl(0.2 mL，0.8 mmol)之二噁烷溶液添加至(2S,5S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯(12.7 mg，0.018 mmol)之二噁烷(1 mL)溶液中且在室溫下攪拌混合物3天。濃縮反應混合物，得到呈黃色固體狀之粗2-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-6-(4-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉的鹽酸鹽(18.1 mg)。LC-MS滯留時間2.597分鐘；m/z 504.46(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.09(d,J =9.0 Hz,1 H),8.66(s,1 H),8.54-8.61(m,2 H),8.51(d,J =9.0 Hz,1 H),8.50(d,J =8.8 Hz,1 H),8.00-8.08(m,4 H),7.99(s,1 H),5.14(t,J =8.5 Hz,1 H),5.07(t,J =8.0 Hz,1 H),3.90-4.04(m,2 H),2.52-2.75(m,4 H),2.39-2.53(m,2 H),1.98-2.14(m,2 H),1.59(dd,J =9.7,6.7 Hz,6 H)。
以類似於中間物139的方式，在流程35中藉由使用6-溴-2-氯喹喏啉作為起始物質而非6-溴-2-氯喹啉來製備中間物173。下文顯示分析數據。
6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹喏啉反應得到呈白色固體狀之所需產物(380 mg)。LC-MS滯留時間4.178分鐘；m/z 278.9、280.98(1:1)(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
2-溴-1-(6-溴喹喏啉-2-基)乙酮反應得到呈白色固體狀之所需產物(390 mg)。LC-MS滯留時間3.743分鐘；m/z 331.12(1:2:1)(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹喏啉-2-基)-2-側氧基乙基)酯2-第三丁酯反應得到呈粉紅色/橙色固體狀之所需產物(270 mg)。LC-MS滯留時間4.115分鐘；m/z 473、475.81(1:1)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯反應得到呈紅色/橙色固體狀之所需產物(125 mg)。LC-MS滯留時間3.958分鐘；m/z 453.90、455.87(1;1)(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.40(br. s.,1 H),8.22(d,J =2.0 Hz,1 H),7.96(d,J =8.8 Hz,1 H),7.93-7.99(m,1 H),7.90(dd,J =8.8,2.0 Hz,1 H),4.71-4.81(m,1 H),3.59(br. s.,1 H),2.49-2.63(m,1 H),2.31-2.45(m,1 H),1.68-1.82(m,1 H),1.16-1.53(m,5 H),0.81-0.94(m,1 H),0.64(br. s.,1 H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯反應得到呈亮黃色固體狀之所需產物(64.4 mg)。LC-MS滯留時間3.696分鐘；m/z 699.3(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上,使用SPD-10AV UV-Vis偵測器,在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 9.45(s,1 H),8.31(s,1 H),8.19(d,J =8.3 Hz,1 H),8.07(d,J =8.8 Hz,1 H),7.97(s,1 H),7.81-7.95(m,4 H),7.60(s,1 H),4.57-4.80(m,2 H),3.23-3.60(m,2 H),2.23-2.48(m,4 H),1.61-1.75(m,2 H),1.28(br. s.,18 H),0.73-0.87(m,2 H),0.59(br. s.,2 H)。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯反應得到呈黃色固體狀之所需產物的鹽酸鹽(80 mg)。LC-MS滯留時間2.915分鐘；m/z 501.42(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.54(s,1 H),8.40-8.43(m,1 H),8.34(s,1 H),8.23-8.30(m,2 H),8.13(s,1 H),8.00-8.08(m,4 H),4.88-5.08(m,2 H),3.53-3.77(m,2 H),2.64-2.90(m,4 H),2.08-2.22(m,2 H),1.23-1.36(m,2 H),1.02-1.14(m,2 H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸-第三丁酯以類似於中間物153之方式，以適當起始物質製備化合物，得到呈黃色玻璃狀之標題化合物的三氟乙酸鹽(121 mg)。LC-MS滯留時間4.100分鐘；m/z 647.37(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis 偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將2 M HCl(0.33 mL，0.66 mmol)之二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯之三氟乙酸鹽(115 mg，0.131 mmol)的二噁烷(2 mL)溶液中且用力攪拌反應物隔夜。濃縮反應物，得到(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷之鹽酸鹽(87 mg)，其不經進一步純化即使用。LC-MS滯留時間2.793分鐘；m/z 449.41(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
以類似於製備中間物117之方式，在流程29中使用(S)-2-(第三丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸作為起始物質而非(2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸來製備中間物178。下文顯示中間物之分析數據。
(S)-2-(第三丁氧羰基胺基)-3-甲基丁酸2-(4-(6-(2-((S)-2-(第三丁氧羰基胺基)-3-甲基丁醯氧基)乙醯基)萘-2-基)苯基)-2-側氧基乙酯反應得到呈棕褐色固體之所需產物(700 mg)。LC-MS滯留時間2.243分鐘；m/z 717.5(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1.0 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((第三丁氧羰基)胺基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)胺基甲酸第三丁酯反應得到呈黃色固體狀之所需產物(453 mg)。LC-MS滯留時間2.407分鐘；m/z 677.6(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1.0 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(S)-1-(5-(4-(6-(2-((S)-1-胺基-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙-1-胺反應得到呈黃色固體狀之所需產物的鹽酸鹽(390 mg)。LC-MS滯留時間2.080分鐘；m/z 477.4(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1.0 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
以類似於製備中間物117之方式，在流程29中使用(S)-4-(第三丁氧羰基)嗎啉-3-甲酸作為起始物質而非(2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸來製備中間物181。下文顯示中間物之分析數據。
(S)-嗎啉-3,4-二甲酸3-(2-(4-(6-(2-((S)-4-(第三丁氧羰基)嗎啉-3-羰基氧基)乙醯基)萘-2-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯4-第三丁酯反應得到呈灰白色固體泡沫狀之所需產物的鹽酸鹽(1.60 g)。LC-MS滯留時間4.413分鐘；m/z 770.29(MNa+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.47(s,1 H),8.13(s,1 H),7.98-8.11(m,5 H),7.86(d,J =8.3 Hz,3 H),5.39-5.70(m,4 H),4.66-4.83(m,2 H),4.46-4.63(m,2 H),3.91-4.03(m,2 H),3.68-3.85(m,4 H),3.49-3.59(m,3 H),3.27-3.40(m,1 H),1.51(s,18 H)。
(R)-3-(5-(4-(6-(2-((R)-4-(第三丁氧羰基)嗎啉-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)嗎啉-4-甲酸第三丁酯反應得到呈橙色固體狀之所需產物(1.12 g)。LC-MS滯留時間3.608分鐘；m/z 707.94(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.22(br. s.,1 H),8.09(s,1 H),7.90-7.97(m,2 H),7.75-7.89(m,6 H),7.49(br. s.,1 H),7.41(br. s.,1 H),5.17-5.24(m,2 H),4.42(t,J =11.2 Hz,2 H),3.82-3.95(m,6 H),3.59(tt,J =11.6,3.0 Hz,2 H),3.39-3.51(m,2 H),1.50(d,J =2.8 Hz,18 H)。
(R)-3-(5-(4-(6-(2-((R)-嗎啉-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)嗎啉反應得到呈黃色固體狀之所需產物的鹽酸鹽(312 mg)。LC-MS滯留時間2.988分鐘；m/z 507.72(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(第三丁氧羰基)哌啶-2-甲酸作為起始物質而非(2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸來製備中間物184。下文顯示中間物之分析數據。
(S)-哌啶-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)哌啶-2-羰基氧基)乙醯基)萘-2-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯反應得到呈淡黃色凝固泡沫狀之所需產物(1.67 g)。LC-MS滯留時間4.850分鐘；m/z 766.37(MNa+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.47(s,1 H),8.13(s,1 H),7.99-8.10(m,5 H),7.83-7.89(m,3 H),5.32-5.67(m,4 H),4.92-5.13(m,2 H),3.93-4.11(m,2 H),3.00-3.28(m,2 H),2.40(br. s.,2 H),1.68-1.84(m,6 H),1.49(s,18 H),1.39-1.67(m,4 H)
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(第三丁氧羰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-甲酸第三丁酯反應得到呈亮黃色固體狀之所需產物(1.18 g)。LC-MS滯留時間3.778分鐘；m/z 703.97(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10%H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.22(br. s.,1 H),8.09(s,1 H),7.93(t,J =7.7 Hz,2 H),7.73-7.88(m,6 H),7.46(br. s.,1 H),7.38(br. s.,1 H),5.47(br. s.,2 H),4.03-4.15(m,2 H),2.99-3.12(m,2 H),2.46(br. s.,2 H),1.80-1.94(m,2 H),1.50(d,J =2.3 Hz,18 H),1.44-1.76(m,8 H)。
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-哌啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶反應得到呈黃色固體狀之所需產物的鹽酸鹽(280 mg)。LC-MS滯留時間3.015分鐘；m/z 503.69(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δ.ppm 10.06(br. s.,2 H),9.85(br. s.,2 H),8.48(s,1 H),8.36(s,1 H),8.09-8.19(m,3 H),7.96-8.09(m,7 H),4.70(br. s.,2 H),3.42-3.53(m,2 H),3.14(br. s.,2 H),2.10-2.37(m,4 H),1.60-2.00(m,8 H)。
以類似於製備中間物117之方式，在流程29中使用(2S,5R)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸(根據JOC 1995第5011頁製備)作為起始物質而非(2S,5S)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-甲酸來製備中間物187。下文顯示中間物之分析數據。
(2S,5R)-5-甲基吡咯啶-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-羰基氧基)乙醯基)萘-2-基)苯基)-2-側氧基乙基)酯1-第三丁酯反應得到所需產物(979 mg)。LC-MS滯留時間4.796分鐘；m/z 766.19(MNa+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,氯仿-d)δppm 8.47(br. s.,1 H),8.13(d,J =2.5 Hz,1 H),7.99-8.11(m,5 H),7.86(dd,J =7.8,2.3 Hz,3 H),5.21-5.77(m,4 H),4.51-4.58(m,1 H),4.47(dd,J =7.8,4.5 Hz,1 H),4.17-4.26(m,1 H),4.07-4.14(m,1 H),2.23-2.48(m,6 H),1.60-1.68(m,2 H),1.44-1.52(m,18 H),1.25(d,J =6.3 Hz,3H),1.21(d,J =6.3 Hz,3 H)。
(2S,5R)-2-(5-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-(第三丁氧羰基)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯反應得到呈橙色固體泡沫狀之所需產物(561 mg)。LC-MS滯留時間3.673分鐘；m/z 703.95(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LCMICROMASSPlatform測定MS數據。
2-((2S,5R)-5-甲基吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((2S,5R)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑反應得到呈淡橙色固體狀之所需產物的鹽酸鹽(157 mg)。LC-MS滯留時間2.975分鐘；m/z 503.71(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,DMSO-d6 )δppm 9.84-10.25(m,4 H),8.54(s,1 H),8.36(s,1 H),7.95-8.22(m,10 H),5.15(br. s.,2 H),4.00(br. s.,2 H),2.53-2.63(m,4 H),2.30-2.41(m,2 H),1.67-1.82(m,2 H),1.43(d,J =4.3 Hz,6 H)。
如流程49中所示，使用(S)-1-(第三丁氧羰基)-4-亞甲基吡咯啶-2-甲酸作為起始物質來製備中間物189。下文顯示中間物之分析數據。
(2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-(第三丁氧羰基)-4-亞甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-亞甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯將亨氏鹼(0.43 mL，2.47 mmol)添加至經攪拌之(S)-1-(第三丁氧羰基)-4-亞甲基吡咯啶-2-甲酸(509 mg，2.241 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(500 mg，1.121 mmol)於MeCN(25 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌混合物18小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用水、飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將殘餘物溶解於二甲苯(25 mL)中且添加乙酸銨(1.3 g，16.85 mmol)。密封壓力容器且在140℃下加熱2.5小時。將反應混合物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將粗產物裝入(二氯甲烷)80 g湯姆遜矽膠濾筒中(用15% B至100% B溶離，經1 L，其中溶劑B=乙酸乙酯且溶劑A=己烷)，得到(2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-(第三丁氧羰基)-4-亞甲基-2-吡咯啶基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)-4-亞甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(380 mg，45%產率)。LC-MS滯留時間3.32分鐘；C42 H47 N6 O4 之計算值：699.36，m/z實驗值：699.41[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1%TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.21(s,1H),8.14(s,1H),7.98(s,1H),7.97(s,1H),7.87-7.83(m,6H),7.54(s,1H),7.46(s,1H),5.14(s,2H),5.19(s,2H),4.30(br s,2H),4.15(br s,2H),3.22-3.16(m,2H),2.81-2.76(m,2H),1.51/1.31(s,18H)。
2-((S)-4-亞甲基吡咯啶-2-基)-4-(4-(6-(2-((S)-4-亞甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑將4 N HCl之二噁烷溶液(10 mL)添加至含(2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-(第三丁氧羰基)-4-亞甲基-2-吡咯啶基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)-4-亞甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(380 mg，0.544 mmol)之MeOH(10 mL)中且在周圍條件下攪拌4小時，濃縮並在真空下乾燥。四鹽酸鹽(假設理論值：350 mg)。LC-MS滯留時間2.68分鐘；C32 H31 N6 之計算值：499.26，m/z實驗值：499.21[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1%TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
如流程50中所示，使用(S)-2-(第三丁氧羰基胺基)丙酸作為起始物質來製備中間物191。下文顯示中間物之分析數據。
((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((第三丁氧羰基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)胺基甲酸第三丁酯將亨氏鹼(0.39 mL，2.24 mmol)添加至經攪拌之(S)-2-(第三丁氧羰基胺基)丙酸(424 mg，2.24 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(500 mg，1.121 mmol)於MeCN(50 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌混合物18小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用水、飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將殘餘物溶解於二甲苯(25 mL)中且添加乙酸銨(1.5 g，20.18 mmol)。密封壓力容器且在140℃下加熱3.5小時。將反應混合物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將粗產物裝入(二氯甲烷)90 g湯姆遜矽膠濾筒中(用15% B至100% B溶離，經1 L，其中溶劑B=乙酸乙酯且溶劑A=己烷)，得到((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((第三丁氧羰基)胺基)乙基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(368 mg，47%產率)。應注意，樣品僅部分溶解於二氯甲烷中。LC-MS滯留時間3.24分鐘；C36 H43 N6 O4 之計算值：623.33，m/z實驗值：623.37[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1%TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.20(s,1H),8.11(s,1H),7.95(t,J =8.24 Hz,2H),7.86-7.79(m,6H),7.46(s,1H),7.37(s,1H),4.93-4.89(m,2H),1.57-1.48(m,24H)。
(S)-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-胺基乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺將4 N HCl之二噁烷溶液(10 mL)添加至含((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((第三丁氧羰基)胺基)乙基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)乙基)胺基甲酸第三丁酯(368 mg，0.59 mmol)之MeOH(10 mL)中且在周圍條件下攪拌5小時，濃縮並在真空下乾燥。四鹽酸鹽(假設理論值：334 mg)。LC-MS滯留時間1.33分鐘；C26 H27 N6 之計算值：423.23，m/z實驗值：423.17[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
如流程51中所示，使用(S)-2-(第三丁氧羰基(甲基)胺基)丙酸作為起始物質來製備中間物193。下文顯示中間物之分析數據。
((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((第三丁氧羰基)(甲基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)甲基胺基甲酸第三丁酯將亨氏鹼(0.78 mL，4.48 mmol)添加至經攪拌之(S)-2-(第三丁氧羰基(甲基)胺基)丙酸(456 mg，2.241 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(500 mg，1.121mmol)於MeCN(50 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌混合物18小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用水、飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將殘餘物溶解於二甲苯(25 mL)中且添加乙酸銨(859 mg，11.15 mmol)。密封壓力容器且在140℃下加熱3小時。將反應混合物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將粗產物裝入(二氯甲烷)90g湯姆遜矽膠濾筒中(用15% B至100% B溶離，經1 L，其中溶劑B=乙酸乙酯且溶劑A=己烷)，得到((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((第三丁氧羰基)(甲基)胺基)乙基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)乙基)甲基胺基甲酸第三丁酯(460 mg，58%產率)。LC-MS滯留時間3.28分鐘；C38 H47 N6 O4 之計算值：651.37，m/z實驗值：651.34[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.24-8.12(m,2H),7.98-7.82(m,8H),7.52-7.42(m,2H),5.47(br s,2H),2.77(s,3H),2.76(s,3H),1.64(m,6H),1.52(s,18H)。
(S)-N-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-(甲基胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺將4 N HCl之二噁烷溶液(10 mL)添加至含((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((第三丁氧羰基)(甲基)胺基)乙基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)乙基)甲基胺基甲酸第三丁酯(434 mg，0.667 mmol)之MeOH(10 mL)中且在周圍條件下攪拌3小時，濃縮並在真空下乾燥。四鹽酸鹽(假設理論值：396 mg)。LC-MS滯留時間1.44分鐘；之計算值：C28 H31 N6 : 451.26，m/z實驗值：451.17[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
如流程52中所示，使用(2S，4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-甲酸作為起始物質來製備中間物196。下文顯示中間物之分析數據。
(2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-甲酸將(S)-1-(第三丁氧羰基)-4-亞甲基吡咯啶-2-甲酸(4 g，17.60 mmol)之2-丙醇(10 mL)溶液添加至經氮氣淨化之10%鈀/碳(936 mg)的2-丙醇(240 mL)懸浮液中且向燒瓶中裝入氫氣(1 atm)。攪拌18後，藉由經CELITE過濾來移除催化劑且濃縮濾液。LC分析顯示樣品含有約14%反式異構體，且自甲苯中再結晶使順式異構體富集至96%(16:1)。LC-MS滯留時間3.26分鐘；C11 H20 N6 O4 之計算值：230.14，m/z實驗值：252.14[M+Na]+ 。在配備有PHENOMENEX2×5 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶劑B為90%甲醇/10%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 4.21-4.17(m,1H),3.76-3.67(m,1H),2.96-2.92(m,1H),2.49-2.46(m,1H),2.30-2.29(m,1H),1.59-1.51(m,1H),1.47/1.43(m,9H),1.10-1.06(m,3H)。
(2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯將亨氏鹼(0.381 mL，2.181 mmol)添加至經攪拌之(2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-甲酸(500 mg，2.18 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(486 mg，1.09 mmol)於乙腈(11 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌異質混合物18小時且再添加亨氏鹼(1當量)並攪拌混合物24小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於二氯甲烷中且用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌，並經硫酸鈉乾燥。重複洗滌2次。將所分離之呈棕褐色泡沫狀之粗產物溶解於二甲苯(15 mL)中且添加乙酸銨(1.261 g，16.36 mmol)。密封壓力容器，置於預加熱油浴(140℃)中並攪拌2小時。將反應混合物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將粗產物裝入(二氯甲烷)80 g湯姆遜矽膠濾筒(用25% B至100% B溶離，經1.5 L且保持0.5 L B。溶劑B=乙酸乙酯且溶劑A=己烷)，得到呈黃色泡沫狀之(2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(214.2 mg，27.9%)。LC-MS滯留時間3.32分鐘；C42 H51 N6 O4 之計算值：703.40，m/z實驗值：703.28[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1%TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.20(s,1H),8.12(s,1H),7.96-7.94(m,2H),7.87-7.82(m,6H),7.50(s,1H),7.42(s,1H),4.87(br. s,2H),3.81(br. s,2H),3.24-3.18(m,2H),2.53-2.50(m,2H),2.36(br s,2H),1.82-1.74(m,2H),1.46/1.23(s,18H),1.17-1.16(m,6H)。
2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑將4 N HCl之二噁烷溶液(15 mL)添加至含(2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(200 mg，0.285 mmol)之MeOH(5 mL)中且在周圍條件下攪拌2小時，濃縮並在真空下乾燥。四鹽酸鹽(假設理論值：185 mg)。LC-MS滯留時間2.64分鐘；C32 H35 N6 之計算值：503.29，m/z實驗值：503.20[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
如流程53中所示，使用(2S,4R)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-甲酸作為起始物質來製備中間物201。下文顯示中間物之分析數據。
自可根據Tetrahedron Letters,2003,3203-3205中所述之程序由(S)-2-甲基-5-側氧基吡咯啶-1,2-二甲酸1-第三丁酯之碘代甲烷烷基化獲得的順式、反式及二甲基類似物之混合物分離反式異構體。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 4.66-4.64(m,1H),3.80(s,3H),2.34-2.29(m,1H),2.04-1.99(m,1H),1.49(s,9H),1.21-1.19(m,3H)。
將甲硼烷-甲基硫化物複合物(17.67 mL，35.3 mmol)添加至中間物197(6.06 g，23.55 mmol)之THF(180 mL)溶液中，且在40℃下加熱反應混合物16小時。在真空中移除溶劑且使殘餘物分配於EtOAc與水(各250 mL)之間。用EtOAc(2×60 mL)萃取水層，用Na2 SO4 乾燥合併之有機相，且在真空中濃縮。用急驟層析(10-65% EtOAc/己烷)純化所得無色油狀物，得到呈無色油狀之中間物198(3.65 g)。1 H NMR(CDCl3 ,δ=7.24 ppm,400 MHz): 4.36-4.33(dd,J=2.4,10,0.4H),4.26-4.23(dd,J=3,8.9,0.6 H),3.73-3.63(「s」與「m」重疊,4H),2.97-2.85(m,1H),2.37(m,1H),2.04(m,1H),1.81(m,1H),1.44-1.39(兩個「s」,9H),1.03-1.00(兩個「s」,3H)。
(2S,4R)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-甲酸向酯中間物198(3.63 g，14.92 mmol)之乙醇(36 mL)溶液中添加LiOH(0.393 g，10.42 mmol)之水(18.00 mL)溶液，且在室溫下攪拌反應混合物22小時。在真空中蒸發有機溶劑，用水(30 mL)稀釋殘餘物且用乙酸乙酯(50 mL)洗滌。在冰水浴中冷卻，且用1 N HCl酸化至約2之pH值範圍。接著用EtOAc(50 mL，2次)萃取。用Na2 SO4 乾燥有機層且在真空中濃縮，得到呈無色油狀之中間物199，其在長時間曝露於高真空後變成白色固體(3.3 g)。1 H NMR(CDCl3 ,δ=7.24 ppm,400 MHz): 4.37-4.27(重疊「m」1H),3.72-3.50(m,1H),3.01-2.83(重疊「m」,1H),2.50-2.11(m,2H),1.89-1.57(m,1H),1.47-1.39(兩個「s」,9H),1.04-1.03(兩個「s」,3H)。
(2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯將亨氏鹼(0.381 mL，2.181 mmol)添加至經攪拌之(2S,4R)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基吡咯啶-2-甲酸(500 mg，2.18 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(486 mg，1.09 mmol)於乙腈(11 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌異質混合物18小時且再添加亨氏鹼(1當量)並攪拌混合物24小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於二氯甲烷中且用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌，並經硫酸鈉乾燥。重複洗滌2次。將所分離之呈棕褐色泡沫狀之粗產物溶解於二甲苯(15 mL)中且添加乙酸銨(1.261 g，16.36 mmol)。密封壓力容器且置於預加熱油浴(140℃)中並攪拌2小時。將反應混合物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將粗產物裝入(二氯甲烷)80 g湯姆遜矽膠濾筒(用25% B至100% B溶離，經1.5 L且保持0.5 L B。溶劑B=乙酸乙酯且溶劑A=己烷)，得到呈黃色泡沫狀之(2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(214.2 mg，27.9%)。LC-MS滯留時間3.32分鐘；C42 H51 N6 O4 之計算值：703.40，m/z實驗值：703.28[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.20(s,1H),8.12(s,1H),7.96-7.94(m,2H),7.87-7.82(m,6H),7.50(s,1H),7.42(s,1H),4.87(br. s,2H),3.81(br. s,2H),3.24-3.18(m,2H),2.53-2.50(m,2H),2.36(br s,2H),1.82-1.74(m,2H),1.46/1.23(s,18H),1.17-1.16(m,6H)。
2-((2S,4R)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4R)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑將4 N HCl之二噁烷溶液(15 mL)添加至含(2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-(第三丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶甲酸第三丁酯(200 mg，0.285 mmol)之MeOH(5 mL)中且在周圍條件下攪拌2小時，濃縮並在真空下乾燥。四鹽酸鹽(假設理論值：185 mg)。LC-MS滯留時間2.64分鐘；C32 H35 N6 之計算值：503.29，m/z實驗值：503.20[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
如流程54中所示，使用(1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(其可根據WO 2004/052850製備)作為起始物質來製備中間物203。下文顯示中間物之分析數據。
(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將亨氏鹼(0.384 mL，2.2 mmol)添加至經攪拌之2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(0.491 g，1.100 mmol)及(1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(500 mg，1.1 mmol)於乙腈(11 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌異質混合物20小時，在真空中移除溶劑。將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌，並經硫酸鈉乾燥。重複洗滌2次。將粗產物溶解於二甲苯(11 mL)中且添加乙酸銨(1.27 g，16.5 mmol)。密封壓力容器且置於預加熱油浴(140℃)中並攪拌2小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將粗產物裝入(二氯甲烷)80 g湯姆遜矽膠濾筒(用25%B至100%B溶離，經1.5 L且保持0.5 L B。溶劑B=乙酸乙酯且溶劑A=己烷)，得到呈淡黃色固體狀之(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(418.9 mg，43%)。LC-MS滯留時間3.46分鐘；C42 H47 N6 O4 之計算值：699.37，m/z實驗值：699.33[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.18(s,1H),8.11(s,1H),7.96-7.93(m,2H),7.85-7.80(m,6H),7.45(br. s,1H),7.37(br. s,1H),5.36(br. s,2H),3.72(br. s,1H),3.64(br. s,1H),2.82(br. s,1H),2.72(br s,1H),2.43(br. s,1H),2.15(br. s,1H),1.70(br. s,2H),1.55/1.33(s,18H),1.10(br. s,1H),0.94(br. s,1H),0.88(br. s,1H),0.81(br. s,1H)。
(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將4 N HCl之二噁烷溶液(10 mL)添加至含(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H -咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H -咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(375 mg，0.537 mmol)之MeOH(3 mL)中且在周圍條件下攪拌2小時，濃縮並在真空下乾燥。四鹽酸鹽(假設理論值：346 mg)。LC-MS滯留時間2.75分鐘；C32 H31 N6 之計算值：499.26，m/z實驗值：499.22[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
如流程55中所示，使用(1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(其可根據WO 2004/052850製備)作為起始物質來製備中間物209。下文顯示中間物之分析數據。
在-50℃下在乾冰/丙酮浴中經10分鐘向中間物197之非對映異構混合物(在帶有甲基之碳處)(4.75 g，18.46 mmol)之溶液中逐滴添加超氫化物(19.20 mL，19.20 mmol)。添加亨氏鹼(13.58 mL，78 mmol)，攪拌10分鐘，添加呈固體狀之DMAP(0.122 g，0.997 mmol)，攪拌15分鐘，且經15分鐘逐滴添加三氟乙酸酐(2.98 mL，21.08 mmol)。移除乾冰/丙酮浴且攪拌反應混合物4小時，同時使其升溫至室溫。用水(50 mL)、飽和NaCl(30 mL)洗滌反應混合物且在真空中濃縮。藉由急驟層析(8-60% EtOAc/己烷)純化所得粗物質，得到呈黃色油狀之酯中間物204(2.85 g)。1 H NMR(CDCl3 ,400 MHz): 6.36(s,0.5H),6.25(s,0.5H),4.70-4.57(m,1H),3.78(s,3H),2.96(m,1H),2.54(m,1H),1.70(s,3H),1.50(s,4.5H),1.44(s,4.5H)。
經20分鐘將二乙基鋅(1.1 M甲苯溶液，59.1 mL，65.0 mmol)逐滴添加至經冷卻(-23℃)之中間物203(5.23 g，21.68 mmol)的甲苯(60 mL)溶液中且攪拌10分鐘。經10分鐘逐滴添加氯碘甲烷(9.44 mL，130 mmol)，且在-21℃下攪拌反應混合物16小時。將飽和NaHCO3 (60 mL)添加至反應混合物中，移除冷卻浴，且攪拌混合物10分鐘。接著過濾並用甲苯(50 mL)洗滌濾餅。分配濾液，用Na2 SO4 乾燥有機層，且在真空中濃縮。用急驟層析純化(2-10%EtOAc/己烷)所得粗物質，得到中間物205(第一溶離物；無色油狀物；2.88 g)及中間物206(第二溶離物；無色油狀物；1.01 g)。基於NOE研究進行相對立體化學指定。中間物205：1 H NMR(CDCl3 ,400 MHz): 4.65-4.52(m,1H),3.72(s,3H),3.28-3.17(m,1H),2.44-2.32(m,1H),2.16-2.10(m,1H),1.51-1.42(兩個單峰,9H),1.24(s,3H),1.07(m,1H),0.69-0.60(m,1H)。
(1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸向中間物205(2.88 g，11.28 mmol)之乙醇(20 mL)溶液中添加LiOH(0.324 g，13.54 mmol)之水(10.00 mL)溶液，且在室溫下攪拌混合物6小時。在真空中移除大部分揮發性組分，且使殘餘物分配於水(20 mL)與乙醚(20 mL)之間。在冰水浴中冷卻水層，用1 N HCl酸化至2之pH值區，且用EtOAc(30 mL，4次)萃取。用Na2 SO4 乾燥合併之有機相，在真空中蒸發，產生呈黏性固體狀之中間物207(2.55 g)。1 H NMR(CDCl3 ,400 MHz): 4.64(m,1H),3.25(appt s,1H),2.70-2.40(m,1H),2.14(m,1H),1.54-1.44(m,9H),1.27(s,3H),1.10-0.80(m,1H),0.67(m,1H)。
(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將亨氏鹼(0.475 mL，2.72 mmol)添加至經攪拌之2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(0.607 g，1.36 mmol)及(1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(729.0 mg，2.72 mmol)於無水乙腈(12 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌異質混合物20小時，在真空中移除溶劑。將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌，並經硫酸鈉乾燥。重複洗滌2次。將粗產物溶解於二甲苯(12 mL)中且添加乙酸銨(1.57 g，20.39 mmol)。密封壓力容器且置於預加熱油浴(140℃)中並攪拌2小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將粗產物裝入(二氯甲烷)80 g湯姆遜矽膠濾筒(用25% B至100% B溶離，經1.5 L且保持0.5 L B。溶劑B=乙酸乙酯且溶劑A=己烷)，得到呈淡黃色固體狀之(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(279 mg，27%)。LC-MS滯留時間3.56分鐘；C44 H51 N6 O4 之計算值：727.40，m/z實驗值：727.41[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEX2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.18(s,1H),8.11(s,1H),7.96-7.93(m,2H),7.83-7.80(m,6H),7.43(br. s,1H),7.35(br. s,1H),5.35(br. s,2H),3.42(br. s,1H),3.36(br. s,1H),2.61(br. s,1H),2.53(br.s,2H),2.72(brs,1H),1.55/1.33(s,25H),1.06(br. s,1H),0.85(br. s,1H),0.72(br. s,1H)。
(1S,3S,5S)-5-甲基-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將4 N HCl之二噁烷溶液(15 mL)添加至含(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(250 mg，0.344 mmol)之MeOH(5 mL)中且在周圍條件下攪拌2小時，濃縮並在真空下乾燥。四鹽酸鹽(假設理論值：231 mg)。LC-MS滯留時間3.09分鐘；C34 H35 N6 之計算值：527.29，m/z實驗值：527.35[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEX2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
如流程56中所示，使用(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(其可根據WO 2004/052850製備)作為起始物質來製備中間物212。下文顯示中間物之分析數據。
(1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸如上文對於中間物207所述，由中間物206製備中間物210。1 H NMR(CDCl3 ,400 MHz): 4.13(app br s,1H),3.06(app br s,1H),2.55/2.41(重疊app br s,2H),1.51(s,9H),1.27(s,3H),0.76(app t,J=5.6,1H),0.60(app br s,1H)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯將亨氏鹼(0.29 mL，1.66 mmol)添加至經攪拌之2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙醯基)萘-2-基)苯基)乙酮(0.37 g，0.83 mmol)及(1R,3R,5S)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-3-甲酸(0.40 g，1.66 mmol)於無水乙腈(9 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌異質混合物20小時，在真空中移除溶劑。將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌，並經硫酸鈉乾燥。重複洗滌2次。將粗產物溶解於二甲苯(9 mL)中且添加乙酸銨(1.3 g，16.6 mmol)。密封壓力容器且置於預加熱油浴(140℃)中並攪拌2小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於乙酸乙酯中且用飽和碳酸氫鈉溶液及鹽水洗滌。濃縮後，將粗產物裝入(二氯甲烷)90 g湯姆遜矽膠濾筒(用25% B至100% B溶離，經1.5 L且保持0.5 L B。溶劑B=乙酸乙酯且溶劑A=己烷)，得到(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(80 mg，10%)。LC-MS滯留時間3.37分鐘；C44 H51 N6 O4 之計算值：727.40，m/z實驗值：727.38[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEX2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LCMICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.19(s,1H),8.08(s,1H),7.92-7.91(m,2H),7.85-7.77(m,6H),7.47(s,1H),7.38(s,1H),4.67(br. s,2H),3.93-3.90(m,2H),2.63-2.57(m,2H),2.20-2.14(m,2H),1.31-1.23(m,24H),0.92(app. d,J=6.7 Hz,1H),0.82(br. s,1H),0.77-0.75(m,2H)。
(1R,3S,5R)-5-甲基-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將4 N HCl之二噁烷溶液(15 mL)添加至含(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(48 mg，0.066 mmol)之MeOH(1 mL)中且在周圍條件下攪拌2小時，濃縮並在真空下乾燥。四鹽酸鹽(假設理論值：44 mg)。LC-MS滯留時間2.82分鐘；C34 H35 N6 之計算值：527.29，m/z實驗值：527.26[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEX2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。實例
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將N-氯丁二醯亞胺(10.4 mg，0.078 mmol)添加至經攪拌之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(實例61)(60 mg，0.071 mmol)的DMF(1.5 mL)溶液中且密封反應容器並在50℃下加熱16小時。冷卻反應物，部分濃縮，接著用MeOH稀釋。過濾溶液且藉由製備型HPLC(MeOH/H2 O，含0.1% TFA)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(21.4 mg)。LC-MS滯留時間2.798分鐘；m/z 462.34(1/2 MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.18(s,2 H),8.03(d,J =8.8 Hz,1 H),7.99(d,J =8.8 Hz,1 H),7.80-7.92(m,6 H),5.06(ddd,J =9.0,5.8,3.5 Hz,2 H),4.63(d,J =7.5 Hz,1 H),4.57(d,J =6.5 Hz,1 H),3.92-3.98(m,2 H),3.71-3.81(m,2 H),3.67(s,6 H),3.35-3.44(m,2 H),2.42-2.57(m,4 H),1.99-2.24(m,4 H),1.40-1.66(m,4 H),1.06-1.14(m,2 H),1.03(d,J =6.8 Hz,3 H),0.95(d,J =6.8 Hz,3 H),0.82(d,J =2.8Hz,2H)。
((1S)-1-(4,4-二氟環己基)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-(4,4-二氟環己基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(67.3 mg，0.177 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物69)之鹽酸鹽(38.0 mg，0.059 mmol)及(S)-2-(4,4-二氟環己基)-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(44.5 mg，0.177 mmol)於DMF(0.7 mL)及DIPEA(0.103 mL，0.590 mmol)中的溶液中。用MeOH稀釋反應物，過濾，藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之水/MeOH)純化且藉由製備型HPLC(含10 mM乙酸銨之水/MeOH)再純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-1-(4,4-二氟環己基)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-(4,4-二氟環己基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯(22.1 mg)。LC-MS滯留時間2.713分鐘；m/z 483.13(1/2 MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.16(s,1 H),8.11(s,1 H),7.94(d,J =8.5 Hz,2 H),7.77-7.85(m,5 H),7.47(s,1 H),7.39(s,1 H),7.08(d,J =8.5 Hz,1 H),5.15(ddd,J =8.2,6.3,6.1 Hz,2 H),4.68(br. s.,2 H),3.69-3.76(m,2 H),3.68(s,6 H),2.41-2.57(m,4 H),1.65-2.12(m,16 H),1.33-1.59(m,4 H),1.06-1.17(m,2 H),0.78(br. s.,2 H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(89 mg，0.24 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物69)之三氟乙酸鹽(80 mg，0.084 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)丁酸(37.8 mg，0.235 mmol)於DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.15 mL，0.84 mmol)中的溶液中。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之水/MeOH)純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(70.1 mg)。LC-MS滯留時間1.688分鐘；m/z 785.55(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.28(s,1H),8.26(s,1 H),8.12(d,J =8.8 Hz,1 H),8.07(d,J =8.5 Hz,1 H),7.93-8.00(m,4 H),7.82-7.90(m,4 H),5.12-5.21(m,2 H),4.58-4.65(m,2 H),3.74-3.81(m,2 H),3.67(s,6 H),2.70(ddd,J =13.7,9.0,4.9 Hz,2 H),2.49(dq,J =14.2,7.1 Hz,2 H),2.09(br. s.,2 H),1.86-1.99(m,2 H),1.64-1.77(m,2 H),1.09-1.17(m,2 H),1.02(t,J =7.4 Hz,6 H),0.92(br. s.,2 H)。
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(101 mg，0.266 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物117)之三氟乙酸鹽(102 mg，0.106 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(46.6 mg，0.266 mmol)於DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.189 mL，1.1 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用MeOH稀釋反應混合物且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeOH/H2 O)純化，接著藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之乙腈/水)再純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(63.8 mg)。LC-MS滯留時間1.900分鐘；m/z 817.59(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR呈現為區域異構體之約4:1混合物。1 H NMR(對於主要區域異構體)(400 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,1 H),8.27(s,1 H),8.13(d,J =8.5 Hz,1 H),8.09(d,J =8.5 Hz,1 H),7.94-8.02(m,5 H),7.84-7.92(m,3 H),5.15-5.24(m,2 H),4.13(dd,J =8.7,1.4 Hz,2 H),3.74(d,J =2.8 Hz,2 H),3.67(s,6 H),2.50-2.60(m,2 H),2.26-2.45(m,4 H),1.95-2.10(m,4 H),1.57(dd,J =6.5,3.0 Hz,6 H),1.32(t,J =6.4 Hz,2 H),0.99(d,J =6.8 Hz,6 H),0.89(d,J =6.8 Hz,6 H)。
實例68((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯及
實例69((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯自製備((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(實例64)之三氟乙酸鹽的同一反應分離呈三氟乙酸鹽形式之兩種氯咪唑區域異構體(實例68及69)的混合物(21.4 mg)。使用SCF層析(2-乙基吡啶SCF管柱(4.6×250 mm，5 μm)及80% CO2 -20% EtOH/0.1% DEA)以多次注射分離該兩種區位異構化合物。藉由HMBC相關性測定所分離物質之絕對區域化學。反應得到((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(7.4 mg)及((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(4.5 mg)，各呈灰白色固體狀。對於實例68：LC-MS滯留時間2.683分鐘；m/z 889.17(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。對於實例69：LC-MS滯留時間2.695分鐘；m/z 889.22(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(73.3 mg，0.193 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物117)之三氟乙酸鹽(73.9 mg，0.077 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(41.9 mg，0.193 mmol)於DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.14 mL，0.77 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物30分鐘。用MeOH稀釋反應混合物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeOH/H2 O)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(51.2 mg)。LC-MS滯留時間1.897分鐘；m/z 901.39(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-1-(4,4-二氟環己基)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-(4,4-二氟環己基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(70.8 mg，0.186 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物117)之三氟乙酸鹽(71.4 mg，0.074 mmol)及(S)-2-(4,4-二氟環己基)-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(46.8 mg，0.186 mmol)於DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.13 mL，0.75 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物1.5小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeOH/H2 O)純化，得到呈淡黃色固體狀之所需產物((1S)-1-(4,4-二氟環己基)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-(4,4-二氟環己基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(43.3 mg)。LC-MS滯留時間2.828分鐘；m/z 485.22(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將N-氯丁二醯亞胺(7.1 mg，0.053 mmol)添加至經攪拌之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(實例34)(22.7 mg，0.025 mmol)的DMF(0.5 mL)溶液中且密封反應容器並在50℃下加熱反應物12小時。使反應物冷卻至室溫，再添加N-氯丁二醯亞胺(約3 mg)，密封反應容器並在50℃下攪拌2小時。使反應物冷卻至室溫，用MeOH稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之甲醇/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(12 mg)。LC-MS滯留時間2.708分鐘；m/z 483.25(1/2 MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.18(s,2H),8.04(d,J =8.8 Hz,1H),7.99(d,J =8.8 Hz,1H),7.80-7.92(m,6H),5.02-5.09(m,2H),4.63(d,J =6.0 Hz,2 H),3.91-3.99(m,4 H),3.73-3.80(m,2 H),3.67(s,6 H),3.34-3.45(m,4 H),2.43-2.54(m,4 H),1.98-2.13(m,4 H),1.38-1.67(m,8 H),1.06-1.15(m,2 H),0.81(br. s.,2 H)。
((1S,2R)-2-甲氧基-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-蘇胺醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(65.7 mg，0.173 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物133)之三氟乙酸鹽(66 mg，0.069 mmol)及(2S,3R)-3-甲氧基-2-(甲氧羰基胺基)丁酸(33.0 mg，0.173 mmol)於DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.121 mL，0.691 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物隔夜。用MeOH稀釋反應物，過濾且製備型HPLC(含10 nM乙酸銨之甲醇/水)純化，得到呈灰白色固體狀之((1S,2R)-2-甲氧基-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-蘇胺醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯之三氟乙酸鹽(51.9 mg，0.048 mmol，98%產率)。LC-MS滯留時間2.383分鐘；m/z 845.42(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 10u C18 3.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用4 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、3分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及4分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 HNMR(MeOD,400 MHz)δ8.29(br s,1H),8.26(s,1H),8.12(d,J=8.8 Hz,1H),8.07(d,J=8.8 Hz,1H),8.00-7.93(m,4H),7.91-7.82(m,4H),5.18(td,J=9.0,7.0 Hz,2H),4.78(dd,J=3.9,1.7 Hz,2H),3.92-3.79(m,4H),3.68(s,6H),3.35(s,3H),3.35(m,3H),2.76-2.65(m,2H),2.59-2.47(m,2H),2.15-2.05(m,2H),1.19(d,J=6.3 Hz,6H),1.16-1.07(m,2H),0.94-0.84(m,2H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(193 mg，0.506 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物124)之鹽酸鹽(100 mg，0.169 mmol)及(R)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(89 mg，0.51 mmol)於DMF(1.5 mL)及DIPEA(0.24 mL，1.4 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌透明橙色溶液3小時。用甲醇稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含乙酸銨緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(71 mg)。LC-MS滯留時間3.706分鐘；m/z 761.22(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.15(s,1 H),7.96(s,1 H),7.80-7.88(m,3 H),7.51(dd,J=8.4,1.6 Hz,1 H),7.46(s,1 H),7.27(s,1 H),5.18(dd,J=9.0,4.8 Hz,1 H),5.13(dd,J=8.8,4.3 Hz,1 H),4.59(dd,J=11.8,6.8 Hz,2 H),3.68-3.72(m,1 H),3.67(s,3 H),3.67(s,3 H),3.59-3.64(m,1 H),2.31-2.60(m,4 H),2.08-2.22(m,2 H),1.99-2.08(m,2 H),1.13(ddd,J=8.6,5.8,5.5 Hz,2 H),1.00(dd,J=12.9,6.9 Hz,6 H),0.93(dd,J=6.7,2.9 Hz,6 H),0.79(br. s.,2 H)。
(非對映異構體混合物)(2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(((甲氧羰基)胺基)(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(110 mg，0.289 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物124)之鹽酸鹽(57 mg，0.096 mmol)及外消旋2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(62.7 mg，0.289 mmol)於DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.134 mL，0.770 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌透明橙色溶液3小時。用甲醇稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含乙酸銨緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀且呈非對映異構體混合物形式之(2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(((甲氧羰基)胺基)(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(37.3 mg)。LC-MS滯留時間1.522分鐘；m/z 845.36(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。非對映異構體混合物。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.15(d,J =12.8 Hz,1 H),7.96(s,1 H),7.80-7.90(m,3 H),7.51(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),7.46(d,J =5.5 Hz,1 H),7.27(d,J =5.3 Hz,1 H),5.08-5.24(m,2 H),4.61-4.69(m,1 H),4.57(dd,J =8.3,4.5 Hz,1 H),3.85-4.03(m,5 H),3.63-3.79(m,8 H),3.34-3.49(m,5 H),2.30-2.63(m,4 H),1.99-2.16(m,3 H),1.70-1.80(m,1 H),1.35-1.66(m,6 H),1.16-1.26(m,1 H),1.07-1.16(m,1 H),0.70-0.83(m,2 H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-((4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將N-氯丁二醯亞胺(13.3 mg，0.100 mmol)添加至經攪拌之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(38 mg，0.050 mmol)的DMF(1 mL)溶液中，接著用氮氣沖洗反應容器，密封並在50℃下加熱16小時。使反應物冷卻至室溫且再添加N-氯丁二醯亞胺(7.4 mg)。在50℃下再加熱反應物3小時，冷卻至室溫，用MeOH(約0.5 mL)稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(MeOH/水，TFA緩衝液)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-((4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(5.0 mg)。LC-MS滯留時間4.153分鐘；m/z 831.02(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.19(s,1 H),8.07(s,1 H),7.87-7.99(m,3 H),7.58(dd,J =8.5,1.3 Hz,1 H),5.07(t,J =7.2 Hz,1 H),4.98-5.03(m,1 H),4.54-4.59(m,2 H),3.67(s,6 H),3.62-3.75(m,2 H),2.45-2.50(m,2 H),2.41(dd,J =7.3,3.5 Hz,2 H),2.09-2.21(m,2 H),1.96-2.08(m,2 H),1.08-1.16(m,2 H),1.02(t,J =6.1 Hz,6 H),0.92-0.97(m,6 H),0.75-0.85(m,2 H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(25.4 mg，0.067 mmol)添加至經攪拌之(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(中間物128)之鹽酸鹽(42 mg，0.061 mmo1)、2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(Cap-179立體異構體2)(14.9 mg，0.061 mmol)及DIEA(0.053 mL，0.30 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中且在室溫下攪拌所得淺黃色溶液2小時。在減壓下濃縮反應物，將殘餘物再溶解於甲醇中且藉由製備型HPLC(溶劑A：05% MeCN/95%水/10 mM NH4 Ac；溶劑B：95% MeCN/5%水/10 mM NH4 Ac；管柱：Sunfire Prep MS C18 30×100 mm S10；波長：220 nM；流速：40 ml/min；梯度：0%B至80%B，經30分鐘，保持時間5分鐘)純化，得到呈白色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(26 mg)。LC/MS[M+H]+ =883；Rt=2.99分鐘為產物。管柱Luna 3u C18 2×50 mm；起始%B：0，最後%B：100，溶劑A：5% ACN/95% H2 O+10 mM乙酸銨；溶劑B：95% ACN/5% H2 O+10 mM乙酸銨；流速為4 ml/min。操作時間：5分鐘。純度=97%。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 11.85(1 H,br. s.),11.73(1 H,br. s.),8.14-8.27(2 H,m),7.90-7.98(3 H,m),7.82-7.89(3 H,m),7.79(2 H,d,J =8.24 Hz),7.64(1 H,s),7.57(1 H,s),7.19(2 H,t,J =9.31 Hz),5.03-5.13(2 H,m),4.51(1 H,t,J =7.93 Hz),4.44(1 H,t,J =7.78 Hz)，3.65(1 H,br. s.),3.51-3.60(7 H,m),3.29-3.42(7 H,m),2.35-2.47(2 H,m),2.20-2.33(2 H,m),2.01-2.11(2 H,m),1.83-1.92(3 H,m),1.63(1 H,d,J =12.21 Hz),1.57(1 H,d,J =11.60 Hz),0.96-1.09(12 H,m),0.89(4 H,d,J =6.71 Hz),0.72(2 H,br. s.)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-聯萘-6-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(91 mg，0.240 mmol)添加至經攪拌之6,6'-雙(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-聯萘(中間物133)(43.9 mg，0.080 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(42.0 mg，0.240 mmol)於DMF(1 mL)及DIPEA(0.14 mL，0.80 mmol)中的溶液中且攪拌透明棕色溶液2小時。用MeOH稀釋反應混合物且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-聯萘-6-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(28.9 mg)。LC-MS滯留時間1.788分鐘；m/z 863.46(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.37(s,2 H),8.29(d,J =1.0 Hz,2 H),8.15(d,J =8.8 Hz,2 H),8.06-8.13(m,4 H),7.97(s,2 H),7.86(dd,J =8.7,1.6 Hz,2 H),5.17(dd,J =9.3,7.0 Hz,2 H),4.57(d,J =6.8 Hz,2 H),3.80-3.86(m,2 H),3.68(s,6 H),2.71(dd,J =13.7,9.4 Hz,2 H),2.46-2.56(m,2 H),2.15-2.25(m,2 H),2.09(d,J =8.0 Hz,2 H),1.08-1.16(m,2 H),1.03(d,J =6.8 Hz,6 H),0.92-0.96(m,6 H),0.88-0.96(m,2 H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(35.4 mg，0.093 mmol)添加至經攪拌之(2S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯之三氟乙酸鹽(47 mg，0.072 mmol)及(S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(23 mg，0.093 mmol)於DMF(1 mL)及DIPEA(0.050 mL，0.29 mmol)中的溶液中且攪拌反應物3小時。用MeOH稀釋反應混合物且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeOH/水純化)，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(31.3 mg)。LC-MS滯留時間1.670分鐘；m/z 883.43(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.28(d,J =1.0 Hz,1H),8.26(s,1 H),8.12(d,J =8.8 Hz,1 H),8.07(d,J =8.5 Hz,1 H),7.93-7.99(m,4 H),7.82-7.92(m,4 H),5.15(td,J =9.6,6.9 Hz,2 H),4.58(t,J =7.4 Hz,2 H),3.79-3.86(m,2 H),3.68(s,6 H),3.43-3.53(m,2 H),2.65-2.75(m,2 H),2.50(ddd,J =13.6,6.7,6.5 Hz,2 H),2.04-2.24(m,4 H),1.54-1.62(m,1 H),1.45-1.53(m,1 H),0.84-1.21(m,18 H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(64.1 mg，0.169 mmol)添加至2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉(中間物139)之鹽酸鹽(50 mg，0.073 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(29.5 mg，0.169 mmol)於DMF(1 mL)及DIPEA(0.115 mL，0.660 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(55.3 mg)。LC-MS滯留時間2.883分鐘；m/z 814.65(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(64.1 mg，0.169 mmol)添加至2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉(中間物139)之鹽酸鹽(50 mg，0.073 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(36.6 mg，0.169 mmol)於DMF(1 mL)及DIPEA(0.12 mL，0.66 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(64.8 mg)。LC-MS滯留時間2.553分鐘；m/z 898.70(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(102 mg，0.269 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷之鹽酸鹽(60 mg，0.134 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(58.4 mg，0.269 mmol)於DMF(1.2 mL)及DIPEA(0.19 mL，1.1 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用甲醇稀釋反應物且藉由製備型HPLC(含乙酸銨緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(48.9 mg)。LC-MS滯留時間2.572分鐘；m/z 845.65(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.14(s,1 H),7.96(s,1 H),7.80-7.87(m,3 H),7.51(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),7.45(s,1 H),7.27(s,1 H),5.16(dd,J =8.8,5.0 Hz,1 H),5.11(dd,J =8.8,4.5 Hz,1 H),4.66(d,J =7.5 Hz,1 H),4.63(d,J =7.8 Hz,1 H),3.90-3.98(m,4 H),3.67(s,6 H),3.63-3.76(m,2 H),3.33-3.44(m,4 H),2.32-2.56(m,4 H),1.98-2.10(m,4 H),1.35-1.67(m,8 H),1.08-1.16(m,2 H),0.78(br. s.,2 H)。
((1S)-2-((1R,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(27.8 mg，0.073 mmol)添加至(2S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基胺基甲酸甲酯(中間物131)(40 mg，0.061 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(15.90 mg，0.073 mmol)溶解於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.053 mL，0.31 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用甲醇稀釋反應物且藉由製備型HPLC(含乙酸銨緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-2-((1R,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(3.5 mg)。LC-MS滯留時間2.785分鐘；m/z 855.74(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.17(s,1 H),8.10(s,1 H),7.93(dd,J =8.5,3.0 Hz,2 H),7.77-7.86(m,6 H),7.44(s,1 H),7.35(s,1 H),5.20(dd,J =8.9,4.6 Hz,1 H),5.15(dd,J =8.8,5.0 Hz,1 H),4.66(d,J =7.8 Hz,1 H),4.61(d,J =6.8 Hz,1 H),3.90-3.99(m,2 H),3.68(s,6 H),3.64-3.76(m,3 H),3.34-3.43(m,3 H),2.39-2.61(m,4 H),2.12-2.23(m,1 H),1.99-2.10(m,2 H),1.52-1.67(m,2 H),1.41-1.51(m,1 H),1.08-1.18(m,2 H),1.02(d,J =6.8 Hz,3 H),0.94(d,J =6.8 Hz,3 H),0.76-0.84(m,2 H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯及
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將N-氯丁二醯亞胺(6.01 mg，0.045 mmol)添加至經攪拌之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(實例80)之三氟乙酸鹽(26 mg，0.022 mmol)的DMF(0.5 mL)溶液中且在50℃下攪拌反應混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到兩種產物：1)呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(12.4 mg)。LC-MS滯留時間3.871分鐘；m/z882.55(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.53(d,J =8.8 Hz,1 H),8.26(d,J =8.8 Hz,1 H),8.23(s,1 H),8.17(s,2 H),7.82-7.93(m,4 H),5.16(dd,J =8.8,5.3 Hz,1 H),5.06(t,J =7.2 Hz,1 H),4.53-4.63(m,2 H),3.68-3.76(m,2 H),3.67(s,6 H),2.44-2.60(m,4 H),2.11-2.24(m,2 H),1.97-2.09(m,2 H),1.09-1.18(m,2 H),1.03(dd,J =6.8,3.3 Hz,6 H),0.95(dd,J =6.8,2.4 Hz,6 H),0.75-0.87(m,2 H)。2)呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(4.8 mg)。LC-MS滯留時間2.98分鐘；m/z 848.60(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.64(d,J =8.8 Hz,1 H),8.34(s,1 H),8.32(s,1 H),8.25-8.29(m,2 H),8.09(d,J =8.8 Hz,1 H),7.86-7.96(m,4 H),5.18-5.25(m,1 H),5.03-5.09(m,1 H),4.53-4.62(m,2 H),3.64-3.83(m,2 H),3.64-3.69(m,6 H),2.42-2.70(m,4 H),1.97-2.24(m,4 H),1.08-1.17(m,2 H),1.02(dd,J =6.8,2.4 Hz,6 H),0.94(t,J =6.8 Hz,6 H),0.76-0.91(m,2 H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將N-氯丁二醯亞胺(6.68 mg，0.050 mmol)添加至((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(實例81)之三氟乙酸鹽(31 mg，0.025 mmol)的DMF(0.5 mL)溶液中且在50℃下攪拌反應混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(12.1 mg)。LC-MS滯留時間3.511分鐘；m/z 484.17(1/2 MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.60(d,J =8.8 Hz,1H),8.27-8.33(m,2H),8.21(s,2H),7.89-7.95(m,2 H),7.83-7.88(m,2 H),5.15(dd,J =8.7,5.6 Hz,1 H),5.05(dd,J =8.3,6.3 Hz,1 H),4.64(dd,J =11.3,7.8 Hz,2 H),3.87-4.00(m,4 H),3.73-3.81(m,2 H),3.68(s,6 H),3.33-3.48(m,4 H),2.41-2.61(m,4 H),1.95-2.16(m,4 H),1.39-1.70(m,8 H),1.06-1.18(m,2 H),0.81(m,2 H)。
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將N-氯丁二醯亞胺(18.88 mg，0.141 mmol)添加至經攪拌之((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之三氟乙酸鹽(105 mg，0.129 mmol)的DMF(3.0 mL)溶液中，接著用氮氣沖洗反應物，密封並在50℃下加熱隔夜。根據LCMS為1.3:1.6:1之起始物質：單氯(可能兩種區域異構體：二氯)。濃縮反應物，溶解於MeOH中，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到回收之起始物質(36.2 mg)、兩種單氯咪唑區域異構體(56.6 mg)(實例94及實例95)之混合物，及呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之三氟乙酸鹽(20.4 mg)。LC-MS滯留時間2.482分鐘；m/z 885.84(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10%H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-1-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(62.8 mg，0.165 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物144)之鹽酸鹽(42.6 mg，0.066 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(28.9 mg，0.165 mmol)於DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.092 mL，0.53 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈灰白色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-1-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(53.7 mg)。LC-MS滯留時間2.821分鐘；m/z 813.88(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.06(d,J =8.5 Hz,1 H),7.98(d,J =8.5 Hz,1 H),7.95(s,1 H),7.91(d,J =8.5 Hz,2 H),7.78(s,1 H),7.65-7.73(m,4 H),7.59-7.64(m,2 H),5.18(ddd,J =12.5,9.2,7.0 Hz,2 H),4.59(dd,J =6.4,3.4 Hz,2 H),3.80-3.87(m,2 H),3.69(s,6 H),2.73(dt,J =13.4,9.2 Hz,2 H),2.48-2.59(m,2 H),2.18-2.28(m,2 H),2.10(br. s.,2 H),1.08-1.15(m,2 H),1.06(d,J =7.0 Hz,3 H),1.04(d,J =7.0 Hz,3 H),0.99(d,J =6.7 Hz,3 H),0.95(d,J =6.7 Hz,3 H),0.89-0.94(m,2 H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-1-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(62.8 mg，0.165 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物144)之鹽酸鹽(42.6 mg，0.066 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(35.9 mg，0.165 mmol)於DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.092 mL，0.53 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物4小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含乙酸銨緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈灰白色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-1-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(42.6 mg，0.066 mmol)。LC-MS滯留時間1.965分鐘；m/z 897.59(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95% MeOH/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(500 MHz,MeOD)δppm 8.23(d,J =8.2 Hz,1 H),7.91(d,J =8.5 Hz,1 H),7.82(d,J =8.2 Hz,2 H),7.52-7.59(m,2 H),7.44-7.51(m,4 H),7.41(s,1 H),7.21(s,1 H),5.23(dd,J =8.9,4.6 Hz,1 H),5.18(dd,J =8.9,4.9 Hz,1 H),4.68(dd,J =7.5,2.6 Hz,2 H),3.89-4.01(m,4 H),3.70-3.77(m,2 H),3.69(s,6 H),3.35-3.45(m,4 H),2.43-2.63(m,4 H),2.00-2.14(m,4 H),1.52-1.71(m,6 H),1.41-1.52(m,2 H),1.10-1.18(m,2 H),0.79-0.86(m,2 H)。
((1S)-1-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯將(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物124)之鹽酸鹽(50 mg，0.073 mmol)、2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(Cap-179立體異構體2)(36.9 mg，0.151 mmol)、HATU(58.6 mg，0.154 mmol)及DIEA(0.077 mL，0.441 mmol)於DMF(3 mL)中組合且在室溫下攪拌所得黃色溶液15小時。在減壓下移除揮發性物質，將殘餘物再溶解於甲醇中且藉由製備型HPLC(溶劑A：10% MeOH/90%水/0.1% TFA；溶劑B：90% MeOH/10%水/0.1% TFA；管柱：Sunfire Prep MS C18 30×100 mm 5u；波長：220 nM；流速：40 ml/min；梯度：10% B至80% B，經30分鐘，保持時間5分鐘)純化，得到呈白色固體狀之((1S)-1-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(43 mg)。LC/MS[M+H]+ =902；Rt=1.93分鐘為產物。管柱PHENOMENEX10u C18 3.0×50 mm；起始% B：0，最後% B：100，溶劑A：10% MeOH/90% H2 O+1% TFA；溶劑B：90% MeOH/10% H2 O+1% TFA；流速為4 mL/min。操作時間：5分鐘。純度=98%。1 H NMR(500 MHz,DMSO-d6 )δppm 8.38(1 H,br. s.),8.14-8.22(1 H,m),8.09(1 H,d,J =8.85 Hz),7.93-8.00(2 H,m),7.62(1 H,d,J =8.85 Hz),7.25(2 H,t,J =7.48 Hz),5.02(2 H,t,J =6.87 Hz),4.51(1H,dd,J =7.78,6.56 Hz),4.45(1 H,t,J =7.93 Hz),3.82(1 H,br. s.),3.67(1 H,d,J =13.73 Hz),3.54(6 H,s),3.31-3.42(3 H,m),2.33(2 H,br. s.),1.85-1.97(2 H,m),1.43-1.52(1 H,m),1.22-1.31(1 H,m),1.03-1.12(10 H,m),0.89-1.01(9 H,m),0.82(1 H,br. s.),0.75(1 H,br. s.)。
((1S)-1-(((2S,3aS,6aS)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,3aS,6aS)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)八氫環戊并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)六氫環戊并[b]吡咯-1(2H)-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(60.9 mg，0.160 mmol)添加至經攪拌之(2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-八氫環戊并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)八氫環戊并[b]吡咯之鹽酸鹽(51 mg，0.073 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(中間物147)(28.1 mg，0.160 mmol)及DIPEA(0.076 mL，0.44 mmol)於DCM(1.5 mL)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。將粗反應混合物濃縮至乾且藉由製備型HPLC(TFA緩衝液)純化，得到呈白色固體狀之((1S)-1-(((2S,3aS,6aS)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,3aS,6aS)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)八氫環戊并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)六氫環戊并[b]吡咯-1(2H)-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(23.7 mg)。LC-MS滯留時間2.462分鐘；m/z 867.8(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%乙腈/10mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-2-((2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)六氫環戊并[b]吡咯-2(2H)-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)六氫環戊并[b]吡咯-1(2H)-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(62.1 mg，0.163 mmol)添加至經攪拌之(2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-八氫環戊并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)八氫環戊并[b]吡咯之鹽酸鹽(51 mg，0.073 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(中間物147)(52 mg，0.074 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(35.5 mg，0.163 mmol)及DIPEA(0.078 mL，0.45 mmol)於DCM(1.5 mL)中的溶液中且在室溫下攪拌混合物2小時。將粗反應混合物濃縮至乾且藉由製備型HPLC(TFA緩衝液)純化，得到呈白色固體狀之((1S)-2-((2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)六氫環戊并[b]吡咯-2(2H)-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)六氫環戊并[b]吡咯-1(2H)-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(25.8 mg)。LC-MS滯留時間2.350分鐘；m/z 477.5(1/2 MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5%H2 O/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
3-氯-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((3-氯-5-甲氧基-1-異喹啉基)羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-5-甲氧基異喹啉將HATU(48.1 mg，0.127 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物124)之鹽酸鹽(30 mg，0.051 mmol)及3-氯-5-甲氧基異喹啉-1-甲酸(30.1 mg，0.127 mmol)於DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.071 mL，0.45 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌隔夜。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含NH4 OAc緩衝液之MeOH/水)純化並藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)再純化，得到呈黃色固體狀之3-氯-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((3-氯-5-甲氧基-1-異喹啉基)羰基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-5-甲氧基異喹啉的三氟乙酸鹽(40.9 mg)。LC-MS滯留時間3.621分鐘；m/z 887.34(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯及
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯在製備((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(實例87)之反應中製備此兩種化合物且其以單氯咪唑區域異構體之混合物形式分離。藉由SCFC，在CHIRALCELOJ-H管柱(30×250 mm，5 μm)上，使用溶劑：75% CO2 -25% EtOH/0.1% DEA分離兩種區域異構體。不確定兩種單氯咪唑區域異構體之絕對區域化學，因此各自隨意指定。實例94：分離出呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(18.6 mg)。LC-MS滯留時間3.756分鐘；m/z 851.62(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。實例95：分離出呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(24.1 mg)。LC-MS滯留時間3.770分鐘；m/z 851.64(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將4 M HCl(0.370 mL，1.48 mmol)之二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(中間物150)(69 mg，0.074 mmol)之二噁烷(2 mL)溶液中且攪拌漿料1.5小時。接著在氮氣流下濃縮反應混合物且用(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(20.9 mg，0.096 mmol)、DMF(1.5 mL)、DIPEA(0.078 mL，0.44 mmol)及最後HATU(36.6 mg，0.096 mmol)處理中間產物。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，用MeOH稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(35.3 mg)。LC-MS滯留時間2.726分鐘；m/z 803.74(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.27(s,1 H),8.18(s,1 H),8.06(d,J =8.8 Hz,1 H),7.98-8.02(m,2 H),7.88(dd,J =8.7,1.6 Hz,1 H),7.74(s,1 H),7.67(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),5.15(dd,J =9.3,7.0 Hz,1 H),5.09(dd,J =9.0,6.3 Hz,1 H),4.59(d,J =7.8 Hz,1 H),4.56(d,J =6.5 Hz,1 H),3.91-4.00(m,2 H),3.74-3.84(m,2 H),3.67(s,6 H),3.34-3.45(m,2 H),2.70(dd,J =13.6,9.5 Hz,1 H),2.61(dd,J =13.8,8.8 Hz,1 H),2.40-2.54(m,2 H),2.14-2.23(m,1 H),2.01-2.13(m,3 H),1.56-1.64(m,1 H),1.38-1.55(m,3 H),1.05-1.14(m,2 H),1.01(d,J =6.8 Hz,3 H),0.92(d,J =6.8 Hz,3 H),0.82-0.92(m,2 H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將4 M HCl(0.34 mL，1.3 mmol)之二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(中間物150)(62.7 mg，0.067 mmol)之二噁烷(2 mL)溶液中，攪拌漿料1.5小時。接著在氮氣流下將反應物濃縮至乾，接著用2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(Cap-179立體異構體2)(21.45 mg，0.087 mmol)、DMF(1.5 mL)、DIPEA(0.071 mL，0.40 mmol)及最後HATU(33.3 mg，0.087 mmol)處理。在室溫下攪拌反應混合物隔夜，用MeOH稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(28 mg)。LC-MS滯留時間2.898分鐘；m/z 831.80(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.27(s,1 H),8.17(s,1 H),8.05(d,J =8.8 Hz,1 H),7.98-8.02(m,2 H),7.88(dd,J =8.5,1.8 Hz,1 H),7.74(s,1 H),7.66(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),5.15(dd,J =9.2,6.9 Hz,1 H),5.10(dd,J =9.0,6.3 Hz,1 H),4.56(t,J =6.0 Hz,2 H),3.73-3.85(m,2 H),3.67(s,6 H),3.43-3.54(m,2 H),2.70(dd,J =13.7,9.4 Hz,1 H),2.61(dd,J =13.6,9.0 Hz,1 H),2.40-2.54(m,2 H),2.01-2.23(m,4 H),1.55-1.64(m,1 H),1.46(d,J =12.0 Hz,1 H),1.17(dd,J =6.0,4.3 Hz,6 H),1.04-1.13(m,3 H),1.01(d,J =6.g Hz,3 H),0.96-1.03(m,1 H),0.92(d,J =6.8 Hz,3 H),0.88-0.93(m,1 H),0.82-0.87(m,1 H)。
((1S)-2-((2S,5S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(43.2 mg，0.114 mmol)添加至含(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物154)之鹽酸鹽(27 mg，0.045 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(24.7 mg，0.114 mmol)之DMF(1 mL)及DIPEA(0.056 mL，0.32 mmol)中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。在氮氣流下濃縮反應物，溶解於MeOH中，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((2S,5S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(31.4 mg)。LC-MS滯留時間2.658分鐘；m/z847.80(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10%H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR呈現為旋轉異構體之約1:3.5混合物。主要旋轉異構體之1 H NMR為：1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.29(s,1 H),8.18(s,1 H),8.06(d,J =8.5 Hz,1 H),8.01(d,J =8.8 Hz,1 H),7.99(s,1 H),7.89(dd,J =8.7,1.6 Hz,1 H),7.74(s,1 H),7.67(dd,J =8.4,1.4 Hz,1 H),5.19(dd,J =10.5,7.0 Hz,1 H),5.09(dd,J =8.9,6.4 Hz,1 H),4.59(d,J =7.5 Hz,1H),4.22(d,J =9.3 Hz,1 H),3.86-4.00(m,4 H),3.72-3.82(m,2 H),3.67(s,6 H),3.23-3.45(m,4 H),2.50-2.70(m,2 H),2.24-2.50(m,3 H),1.90-2.13(m,4 H),1.70-1.85(m,1 H),1.57(d,J =6.5 Hz,3 H),1.30-1.64(m,6 H),1.23(d,J =11.5 Hz,1 H),1.04-1.12(m,1 H),0.85(br. s.,1 H)。
實例99((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(43.2 mg，0.114 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物154)之鹽酸鹽(10.1 mg，0.017 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(7.44 mg，0.042 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.021 mL，0.119 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。濃縮反應物，溶解於MeOH中，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(9.3 mg)。LC-MS滯留時間2.930分鐘；m/z 763.75(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR呈現為旋轉異構體之約1:3混合物，主要旋轉異構體之數據為：1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.30(s,1 H),8.19(s,1 H),8.07(d,J =8.8 Hz,1 H),7.99-8.03(m,2 H),7.90(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),7.77(s,1 H),7.65-7.71(m,1 H),5.19(dd,J =10.2,6.9 Hz,1 H),5.10(dd,J =9.2,6.4 Hz,1 H),4.55(d,J =6.5 Hz,1 H),4.13(d,J =8.8 Hz,1 H),3.67(s,6 H),3.65-3.79(m,2 H),1.95-2.68(m,8 H),1.57(d,J =6.5 Hz,3 H),1.31(d,J =6.3 Hz,1 H),1.01(d,J =7.0 Hz,3 H),0.98(d,J =7.0 Hz,3 H),0.93(d,J =6.8 Hz,3 H),0.88(d,J =6.8 Hz,3 H),0.84-1.14(m,2 H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將4 M HCl(0.32 mL，1.3 mmol)之二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(中間物158)之三氟乙酸鹽(60 mg，0.064 mmol)於二噁烷(0.5 mL)中之混合物中且用力攪拌反應物4小時。將反應物濃縮至乾。接著將(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(18.2 mg，0.084 mmol)、DMF(0.5 mL)、DIPEA(0.067 mL，0.39 mmol)及最後HATU(31.8 mg)添加至粗物質中且在室溫下攪拌反應物1小時。用氮氣流部分濃縮反應物，用MeOH稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，接著藉由製備型HPLC(含乙酸銨緩衝液之MeOH/水)再純化。第三次藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化物質，得到呈白色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(27.7 mg)。LC-MS滯留時間3.291分鐘；m/z 803.67(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.27(s,1 H),8.19(s,1 H),8.06(d,J =8.8 Hz,1 H),7.99-8.03(m,2 H),7.88(dd,J =8.5,1.8 Hz,1 H),7.78(s,1 H),7.68(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),5.15(dd,J =9.0,7.0 Hz,1 H),5.09(dd,J =9.3,6.5 Hz,1 H),4.80(d,2 H),4.54(d,J =6.5 Hz,1 H),3.87-3.93(m,1 H),3.70-3.79(m,3 H),3.68(s,3 H),3.67(s,3 H),3.54-3.63(m,1 H),3.34-3.40(m,1 H),2.59-2.74(m,2 H),2.40-2.55(m,2 H),2.00-2.22(m,4 H),1.71-1.81(m,2 H),1.51-1.63(m,2 H),1.05-1.14(m,2 H),1.01(d,J =6.8 Hz,3 H),0.93(d,J =6.8 Hz,3 H),0.88(br. s.,2 H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-((3S)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙基)胺基甲酸甲酯將4 M HCl(0.3 mL，1.3 mmol)之二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸第三丁酯(中間物158)之三氟乙酸鹽(60 mg，0.064 mmol)於二噁烷(0.5 mL)中之混合物中且用力攪拌反應物4小時。將反應物濃縮至乾。接著將(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-((S)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙酸(Cap-177a)(18.2 mg，0.084 mmol)、DMF(0.5 mL)、DIPEA(0.067 mL，0.39 mmol)及最後HATU(32 mg，0.084 mmol)添加至粗物質中且在室溫下攪拌反應物1小時。部分濃縮反應物，用MeOH稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化且以一次注射藉由製備型HPLC(含乙酸銨緩衝液之MeOH/水)再純化，得到呈白色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((29)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-((3S)-四氫-2H-哌喃-3-基)乙基)胺基甲酸甲酯(30.5 mg)。LC-MS滯留時間3.376分鐘；m/z 803.66(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.14(s,1 H),7.94(s,1 H),7.78-7.86(m,3 H),7.49(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),7.45(s,1 H),7.26(s,1 H),5.15(ddd,J =12.9,8.7,4.5 Hz,2 H),4.57(d,J =6.8 Hz,1 H),3.70-3.86(m,3 H),3.67(br. s.,3 H),3.66(br. s.,3 H),3.58-3.64(m,1 H),3.53(t,J =8.3 Hz,1 H),3.45(dd,J =11.4,8.2 Hz,1 H),2.31-2.57(m,4 H),1.93-2.17(m,5 H),1.67-1.84(m,2 H),1.50-1.63(m,2 H),1.08-1.17(m,2 H),0.98(d,J =6.8Hz,3 H),0.92(d,J =6.8 Hz,3 H),0.78(br. s.,2 H)。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(20.99 mg，0.055 mmol)添加至2-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-6-(4-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉(中間物164)之鹽酸鹽(16.5 mg，0.024 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(9.7 mg，0.055 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.038 mL，0.22 mmol)之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(8.3 mg，6.94 μmol，28.9%產率)。LC-MS滯留時間3.555分鐘；m/z 818.78(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10%H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.60(d,J =8.5 Hz,1 H),8.34(d,J =1.8 Hz,1 H),8.32(s,1 H),8.26-8.31(m,1 H),8.21-8.26(m,1 H),8.06(d,J =8.5 Hz,1 H),7.97-8.03(m,1 H),8.00(d,J =8.5 Hz,1 H),7.93(s,1 H),7.87-7.92(m,2 H),5.19-5.36(m,2 H),4.29-4.41(m,2 H),4.24(t,J =6.9 Hz,2 H),3.67(s,6H),3.44(q,J =11.0 Hz,2 H),2.62-2.74(m,2 H),2.46-2.61(m,2 H),1.97-2.12(m,2 H),1.82-1.97(m,2 H),1.26(dd,J =6.3,3.3 Hz,6 H),0.91-0.96(m,6 H),0.89(dd,J =6.7,5.1 Hz,6 H)。
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(15.74 mg，0.041 mmol)添加至粗2-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)-6-(4-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉(中間物167)之鹽酸鹽(12.35 mg，0.018 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(7.25 mg，0.041 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.028 mL，0.16 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(3.9 mg)。LC-MS滯留時間3.616分鐘；m/z 818.73(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.68(d,J =8.8 Hz,1 H),8.39(d,J =1.3 Hz,1 H),8.30-8.35(m,2 H),8.26-8.31(m,1 H),8.16(d,J =8.8 Hz,1 H),7.99-8.06(m,3 H),7.89-7.94(m,2 H),5.14-5.31(m,2 H),4.14(dd,J =8.8,5.0 Hz,2 H),3.68(s,6 H),2.47-2.59(m,2 H),2.23-2.43(m,4 H),1.95-2.10(m,4 H),1.56(dd,J =6.7,3.6 Hz,6 H),1.01-1.07(m,2 H),0.99(dd,J =6.7,3.4 Hz,6 H),0.89(dd,J =6.8,1.8 Hz,6 H)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(50.7 mg，0.133 mmol)添加至((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(中間物173)之鹽酸鹽(41.7 mg，0.058 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(23.4 mg，0.133 mmol)於DMF(1 mL)及DIPEA(0.09 mL，0.5 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物16小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(22.3 mg)。LC-MS滯留時間3.451分鐘；m/z 815.72(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.41(s,1 H),8.43(d,J =8.5 Hz,1 H),8.41-8.47(m,1 H),8.28(d,J =1.3 Hz,2 H),8.03(d,J =8.5 Hz,1 H),8.00-8.07(m,1 H),7.87-7.95(m,3 H),5.10-5.26(m,2 H),4.57(t,J =6.7 Hz,2 H),3.76-3.89(m,2 H),3.68(s,6 H),2.70(dd,J =13.7,9.2 Hz,2 H),2.44-2.56(m,2 H),2.14-2.26(m,2 H),2.04-2.14(m,2 H),1.07-1.16(m,2 H),1.02(dd,J =6.8,2.0 Hz,6 H),0.93(dd,J =6.8,2.0 Hz,6 H),0.83-0.99(m,2 H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(12.24 mg，0.032 mmol)添加至((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯(中間物173)之鹽酸鹽(10.1 mg，0.014 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(7.0 mg，0.032 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.022 mL，0.13 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喏啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(7.3 mg)。LC-MS滯留時間3.251分鐘；m/z 899.79(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 9.41(s,1 H),8.41-8.47(m,2 H),8.27-8.31(m,2 H),8.03(d,J =8.5 Hz,1 H),8.01-8.06(m,1 H),7.87-7.95(m,3 H),5.09-5.26(m,2 H),4.61(t,J =7.2 Hz,2 H),3.90-4.01(m,4 H),3.80-3.90(m,2 H),3.68(s,6 H),3.34-3.47(m,4 H),2.70(dd,J =13.6,9.3 Hz,2 H),2.45-2.57(m,2 H),1.99-2.19(m,4 H),1.36-1.68(m,8 H),1.02-1.16(m,2 H),0.79-0.96(m,2 H)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-((4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將N-氯丁二醯亞胺(6.97 mg，0.052 mmol)添加至經攪拌之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯(實例82)(21.0 mg，0.025 mmol)的DMF溶液中，接著用氮氣流沖洗反應容器，密封且在50℃下加熱3小時。再添加N-氯丁二醯亞胺(5.0 mg)且用氮氣沖洗反應容器，密封且在50℃下加熱3小時，接著冷卻反應物並在氮氣流下濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-((4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(8.1 mg)。LC-MS滯留時間4.276分鐘；m/z 457.47(1/2 MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.18(s,1 H),8.07(s,1 H),7.98(d,J =8.8 Hz,1 H),7.93(d,J =8.5 Hz,1 H),7.88(dd,J =8.8,1.8 Hz,1 H),7.59(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),5.05(dd,J =8.5,6.3 Hz,1 H),4.99(t,J =6.9 Hz,1 H),4.62(d,J =7.5 Hz,2 H),3.91-3.98(m,4 H),3.74-3.81(m,1 H),3.68-3.72(m,1 H),3.67(s,6 H),3.34-3.45(m,4 H),2.45-2.56(m,2 H),2.39-2.44(m,2H),1.96-2.11(m,4H),1.37-1.66(m,8H),1.05-1.14(m,2H),0.74-0.84(m,2H)。
((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)胺基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)胺甲醯基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(77 mg，0.20 mmol)添加至經攪拌之(S)-1-(5-(4-(6-(2-((S)-1-胺基-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙-1-胺(中間物178)之鹽酸鹽(57.4 mg，0.092 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(35.4 mg，0.202 mmol)及DIPEA(0.096 mL，0.55 mmol)於DCM(1.5 mL)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。將粗反應混合物濃縮至乾且藉由製備型HPLC(TFA緩衝液)純化，得到呈白色固體狀之((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)胺基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)胺甲醯基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(60.4 mg)。LC-MS滯留時間2.253分鐘；m/z 759.6(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
3-甲基-N-((1S)-2-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-2-甲基-1-((3-甲基丁醯基)胺基)丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)丙基)丁醯胺將HATU(119 mg，0.313 mmol)添加至經攪拌之(S)-1-(5-(4-(6-(2-((S)-1-胺基-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙-1-胺(中間物178)之鹽酸鹽(89 mg，0.142 mmol)、3-甲基丁酸(32 mg，0.31 mmol)及DIPEA(0.149 mL，0.855 mmol)於DCM(2 mL)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2小時。將粗反應混合物濃縮至乾且藉由製備型HPLC(TFA緩衝液)純化兩次，得到呈米色固體狀之3-甲基-N-((1S)-2-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-2-甲基-1-((3-甲基丁醯基)胺基)丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)丙基)丁醯胺的三氟乙酸鹽(54.6 mg)。LC-MS滯留時間2.375分鐘；m/z 645.6(MH-)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5%乙腈/95% H2 O/10 mM乙酸銨且溶劑B為5% H2 O/95%乙腈/10 mM乙酸銨。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
2-((2S,5S)-1-乙醯基-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-乙醯基-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑將HATU(63.2 mg，0.166 mmol)添加至2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物117)(受乙酸銨污染)(38 mg，0.076 mmol)及(S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(40.8 mg，0.166 mmol)於DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.053mL，0.30 mmol)中的溶液中且在室溫下攪拌反應物隔夜。用MeOH稀釋反應混合物，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之2-((2S,5S)-1-乙醯基-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-乙醯基-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑的三氟乙酸鹽(20 mg)。LC-MS滯留時間3.123分鐘；m/z 587.62(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.30(s,1H),8.27(s,1H),8.13(d,J =8.8 Hz,1 H),8.09(d,J =8.8 Hz,1 H),7.93-8.01(m,4 H),7.84-7.91(m,4 H),5.25(q,J =8.4 Hz,2 H),4.31-4.40(m,2 H),2.53-2.66(m,2 H),2.28-2.40(m,4 H),2.25(s,3 H),2.25(s,3 H),1.88-1.97(m,2 H),1.47(dd,J =6.5,3.5 Hz,6 H),1.14-1.19(m,1H)。
實例110(1-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(61.9 mg，0.163 mmol)添加至2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物117)之鹽酸鹽(48 mg，0.074 mmol)及2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(Cap-179立體異構體2)(39.9 mg，0.163 mmol)於DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.09 mL，0.52 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌反應物2小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且以兩次注射藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈淡黃色固體狀之(1-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氫-2H-哌喃-4-基)((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(55.5 mg)。LC-MS滯留時間3.506分鐘；m/z 479.54(1/2 MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR呈現為旋轉異構體之複雜混合物。
((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(23.99 mg，0.063 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物175)之鹽酸鹽(15 mg，0.025 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(13.70 mg，0.063 mmol)於DMF(0.4 mL)及DIPEA(0.03 mL，0.2 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌反應物1.5小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且以兩次注射藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(12.0 mg)。LC-MS滯留時間3.040分鐘；m/z 847.76(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.28(s,1 H),8.18(s,1 H),8.05(d,J =8.8 Hz,1 H),7.97-8.02(m,2 H),7.88(dd,J =8.8,1.8 Hz,1 H),7.76(s,1 H),7.67(dd,J =8.4,1.4 Hz,1 H),5.23(dd,J =10.9,6.9 Hz,1 H),5.09(dd,J =9.0,6.5 Hz,1 H),4.59(d,J =7.8 Hz,1 H),4.34-4.41(m,1 H),4.28(d,J =8.0 Hz,1 H),3.86-4.00(m,4 H),3.75-3.81(m,1 H),3.67(s,3 H),3.67(s,3 H),3.32-3.50(m,5 H),2.39-2.74(m,4 H),1.87-2.13(m,4 H),1.27-1.65(m,8 H),1.25(d,J =6.3 Hz,3 H),1.04-1.14(m,1 H),0.86(br. s., 1 H)。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(60.8 mg，0.160 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物175)之鹽酸鹽(38 mg，0.064 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(28.0 mg，0.160 mmol)於DMF(0.7 mL)及DIPEA(0.08 mL，0.4 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌1.5小時。用MeOH稀釋反應物，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化兩次，得到呈灰白色固體狀之((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(19.1 mg)。LC-MS滯留時間3.288分鐘；m/z 763.74(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.28(s,1 H),8.18(s,1 H),8.05(d,J =8.8 Hz,1 H),7.98-8.03(m,2 H),7.88(dd,J =8.7,1.6 Hz,1 H),7.76(s,1 H),7.67(dd,J =8.5,1.5 Hz,1 H),5.24(dd,J =10.9,7.2 Hz,1 H),5.10(dd,J =9.0,6.5 Hz,1 H),4.55(d,J =6.5 Hz,1 H),4.30-4.37(m,1 H),4.23(d,J =7.3 Hz,1 H),3.72-3.79(m,1 H),3.67(s,3 H),3.66(s,3 H),3.43(t,J =10.4 Hz,1 H),2.49-2.74(m,3 H),2.44(ddd,J =13.6,6.7,6.4 Hz,1 H),2.11-2.22(m,1 H),1.98-2.11(m,2 H),1.89(q,J =12.0 Hz,1 H),1.25(d,J =6.3 Hz,3 H),1.06-1.15(m,1 H),1.00(d,J =6.8 Hz,3 H),0.95-0.98(m,1 H),0.94(d,J =4.0 Hz,3 H),0.92(d,J =3.8 Hz,3 H),0.88(d,J =6.8 Hz,3 H)。
2-((2S,4S)-4-甲基-1-(3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-1-(3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑將HATU(76 mg，0.200 mmol)添加至2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中間物196)之鹽酸鹽(64.8 mg，0.1 mmol)、3-甲基丁酸(22.5 mg，0.220 mmol)及DIPEA(0.122 mL，0.700 mmol)於DCM(2 mL)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物隔夜。將反應混合物蒸發至乾，接著藉由製備型HPLC純化，得到呈灰白色固體狀之2-((2S,4S)-4-甲基-1-(3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-1-(3-甲基丁醯基)-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑的三氟乙酸鹽(61.7 mg)。LC-MS滯留時間1.853分鐘；m/z 671.64(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(12.75 mg，0.034 mmol)添加至2-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉(中間物164)(10 mg，0.015 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(7.28 mg，0.034 mmol)於DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.023 mL，0.13 mmol)中之溶液中且在室溫下攪拌混合物16小時。濃縮反應物且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA緩衝液之H2 O-MeOH)純化殘餘物，得到呈黃色固體狀之((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(8.6 mg)。LC-MS滯留時間3.243分鐘；m/z 902.90(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10%H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.61(d,J =8.8 Hz,1 H),8.35(d,J =1.8 Hz,1 H),8.22-8.33(m,3 H),8.07(d,J =8.8 Hz,1 H),8.00(d,J =8.5 Hz,1 H),7.97-8.04(m,1 H),7.89(d,J =8.5 Hz,1 H),7.85-7.95(m,2 H),5.17-5.33(m,2 H),4.32-4.45(m,2 H),4.28(dd,J =8.2,5.4 Hz,2 H),3.83-3.98(m,4 H),3.67(s,6 H),3.22-3.54(m,6 H),2.63-2.75(m,2 H),2.46-2.61(m,2 H),1.83-2.04(m,4 H),1.52-1.64(m,2 H),1.30-1.53(m,6 H),1.26(dd,J =6.3,4.0 Hz,6 H)。
((1S)-1-(((3R)-3-(4-(4-(6-(2-((3R)-4-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-3-嗎啉基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-嗎啉基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(96 mg，0.252 mmol)添加至(R)-3-(5-(4-(6-(2-((R)-嗎啉-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)嗎啉(中間物181)之鹽酸鹽(71.6 mg，0.110 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(44.2 mg，0.252 mmol)於DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.13 mL，0.77 mmol)中之溶液中且用氮氣沖洗反應混合物，密封並在室溫下攪拌3小時。在氮氣流下濃縮反應物隔夜，用MeOH(約5 mL)稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈灰白色固體狀之((1S)-1-(((3R)-3-(4-(4-(6-(2-((3R)-4-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-3-嗎啉基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-嗎啉基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(75.5 mg)。LC-MS滯留時間3.351分鐘；m/z 822.07(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR呈現為旋轉異構體混合物。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.47(s,0.5 H),8.33(s,0.5 H),8.27(s,1 H),7.85-8.17(m,10 H),5.95(d,J =4.5 Hz,2 H),4.71(dd,J =12.5,7.8 Hz,1 H),4.35-4.58(m,4 H),3.94-4.20(m,5 H),3.79(s,3 H),3.68(s,3 H),3.53-3.78(m,3 H),2.76-2.91(m,1 H),2.12(br. s.,2 H),1.05-1.19(m,6 H),0.81-1.00(m,6 H)。
((1S)-2-((3R)-3-(4-(4-(6-(2-((3R)-4-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-3-嗎啉基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-嗎啉基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(88 mg，0.231 mmol)添加至(R)-3-(5-(4-(6-(2-((R)-嗎啉-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)嗎啉(中間物181)之鹽酸鹽(65.5 mg，0.100 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(50.2 mg，0.231 mmol)於DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.12 mL，0.70 mmol)中之溶液中且用氮氣沖洗反應混合物，密封並在室溫下攪拌3小時。在氮氣流下濃縮反應物隔夜，用MeOH(約5 mL)稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈灰白色固體狀之((1S)-2-((3R)-3-(4-(4-(6-(2-((3R)-4-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-3-嗎啉基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-嗎啉基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(75 mg)。LC-MS滯留時間3.120分鐘；m/z 906.15(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
(1R,3S,5R)-2-(3-甲基丁醯基)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷將HATU(74.8 mg，0.197 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物124)之鹽酸鹽(64.7 mg，0.098 mmol)、3-甲基丁酸(22.09 mg，0.216 mmol)及DIPEA(0.103 mL，0.590 mmol)於DCM(1.5 mL)中的溶液中且在室溫下攪拌反應混合物2-3小時。將反應物濃縮至乾且藉由製備型HPLC(TFA緩衝液)純化，得到呈米色凝固泡沫狀之(1R,3S,5R)-2-(3-甲基丁醯基)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷的三氟乙酸鹽(51.5 mg)。LC-MS滯留時間1.775分鐘；m/z 615.41(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為10%MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-哌啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-哌啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(93 mg，0.245 mmol)添加至(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-哌啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶(中間物184)之鹽酸鹽(69.0 mg，0.106 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(42.9 mg，0.245 mmol)於DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.13 mL，0.75 mmol)中之溶液中且用氮氣沖洗反應物，密封並在室溫下攪拌1小時。在氮氣流下濃縮反應物隔夜，用MeOH(約5 mL)稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-哌啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-哌啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(88.9 mg)。LC-MS滯留時間3.530分鐘；m/z 818.08(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR呈現為旋轉異構體混合物。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.46(s,0.65 H),8.33(br. s.,0.35 H),8.27(s,1 H),7.84-8.15(m,10 H),6.05(br. s.,1.3 H),5.80-5.90(m,0.7 H),4.67-4.78(m,1.3 H),4.42-4.50(m,2 H),3.99-4.10(m,0.7 H),3.78(br. s.,3.5 H),3.69(br. s.,2.5 H),3.40-3.52(m,0.7 H),2.61-2.73(m,1.3 H),2.46-2.59(m,1.3 H),2.37(br. s.,0.7 H),2.03-2.24(m,4 H),1.91-2.02(m,1.3 H),1.63-1.88(m,5.4 H),1.45-1.62(m,1.4.H),1.11(t,J =6.8 Hz,7.3 H),0.93-1.03(m,4.7 H)。
((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-哌啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-哌啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(84 mg，0.222 mmol)添加至(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-哌啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶(中間物184)之鹽酸鹽(62.5 mg，0.096 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(48.2 mg，0.222 mmol)於DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.12 mL，0.68mmol)中之溶液中且用氮氣沖洗反應物，密封並在室溫下攪拌1小時。在氮氣流下濃縮反應物隔夜，用MeOH(約5 mL)稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-2-哌啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-哌啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(71.2 mg)。LC-MS滯留時間3.348分鐘；m/z 902.10(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR呈現為旋轉異構體混合物。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.45(s,0.6 H),8.32(br. s.,0.4 H),8.27(s,1 H),8.02-8.15(m,4.4 H),7.85-8.02(m,5.6 H),6.08(br. s.,1.2 H),5.90(br. s.,0.8 H),4.70(br. s.,1.2 H),4.45-4.59(m,2 H),3.90-4.10(m,4.8 H),3.77(s,3.6 H),3.69(br. s.,2.4 H),3.36-3.50(m,5 H),2.35-2.73(m,3 H),1.36-2.22(m,20 H)。
((1S)-1-(((2S,5R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(62.0 mg，0.163 mmol)添加至2-((2S,5R)-5-甲基吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((2S,5R)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中間物187)之鹽酸鹽(46 mg，0.071 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(28.6 mg，0.163 mmol)於DMF(0.7 mL)及DIPEA(0.09 mL，0.5 mmol)中之溶液中且用氮氣沖洗反應容器，密封並在室溫下攪拌1小時。在氮氣流下濃縮反應物隔夜，用MeOH(約3 mL)稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-1-(((2S,5R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(53.3 mg)。LC-MS滯留時間3.255分鐘；m/z 818.08(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR呈現為旋轉異構體之複雜混合物。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,0.5 H),8.26-8.30(m,1.5 H),8.13(d,J =8.8 Hz,1 H),8.08(d,J =8.5 Hz,1 H),7.93-8.00(m,4 H),7.83-7.93(m,4 H),5.67(t,J =7.8 Hz,0.7 H),5.38-5.45(m,1.3 H),4.44-4.68(m,3.3 H),3.92(dd,J =8.2,4.4 Hz,0.7 H),3.66(s,3.5 H),3.41(s,1 H),3.35(s,1.5 H),2.53-2.92(m,3.3 H),1.96-2.30(m,6 H),1.78-1.87(m,0.7 H),1.43-1.53(m,3.5 H),1.33(dd,J =6.3,2.5 Hz,2.5 H),0.98-1.06(m,6 H),0.96(d,J =6.8 Hz,2.4 H),0.84(d,J =6.8 Hz,3.6 H)。
((1S)-2-((2S,5R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(55.8 mg，0.147 mmol)添加至2-((2S,5R)-5-甲基吡咯啶-2-基)-5-(4-(6-(2-((2S,5R)-5-甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中間物187)之鹽酸鹽(41.4 mg，0.064 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(31.9 mg，0.147 mmol)於DMF(0.7 mL)及DIPEA(0.08 mL，0.4 mmol)中之溶液中且用氮氣沖洗反應容器，密封並在室溫下攪拌1小時。在氮氣流下濃縮反應物隔夜，用MeOH(約3 mL)稀釋，過濾且藉由製備型HPLC(含TFA緩衝液之MeOH/水)純化，得到呈淡黃色固體狀之((1S)-2-((2S,5R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-5-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯的三氟乙酸鹽(27.6 mg)。LC-MS滯留時間3.135分鐘；m/z 902.15(MH+)。在配備有PHENOMENEXLuna 3u C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2 O/0.1%三氟乙酸且溶劑B為10% H2 O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。根據1 H NMR為旋轉異構體混合物。1 H NMR(400 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,0.5 H),8.25-8.29(m,1.5 H),8.13(d,J =8.8 Hz,1 H),8.08(dd,J =8.8,2.5 Hz,1 H),7.93-8.00(m,4 H),7.82-7.92(m,4 H),5.71(t,J =7.9 Hz,0.8 H),5.37-5.45(m,1.2 H),4.47-4.69(m,3 H),3.89-4.07(m,5 H),3.67(s,3 H),3.24-3.43(m,7 H),2.57-2.92(m,3 H),1.96-2.29(m,6 H),1.79-1.87(m,1 H),1.35-1.67(m,1 1H),1.33(dd,J =6.5,2.5 Hz,3 H)。
實例122((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-亞甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-亞甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(102 mg，0.269 mmol)添加至經攪拌之2-((S)-4-亞甲基吡咯啶-2-基)-4-(4-(6-(2-((S)-4-亞甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中間物189)之四鹽酸鹽(86 mg，0.148 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(47.1 mg，0.269 mmol)及亨氏鹼(0.234 mL，1.34mmol)於DMF(6 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物4小時且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeOH/水)純化，得到((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-亞甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-亞甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(65 mg，46%)。LC-MS滯留時間3.22分鐘；C46 H53 N8 O6 之計算值：813.40，m/z實驗值：813.7[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeCN/95%水/10 mM NH4 OAc且溶劑B為95% MeCN/5%水/10 mM NH4 OAc。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(s,1H),8.28(s,1H),8.15(d,J =8.9 Hz,1H),8.09(d,J =8.9 Hz,1H),8.0-7.85(m,8H),5.50-5.45(m,2H),5.32(s,2H),5.28(s,2H),4.72(d,J =11.6 Hz,2H),4.60(dd,J =11.3,3.4 Hz,2H),4.21(dd,J =7.6,2.8 Hz,2H),3.68(s,6H),2.98-2.92(m,2H),2.10-2.06(m,2H),1.06-1.02(m,2H),0.97-0.94(m,12H)。
實例123((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-亞甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-亞甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(102 mg，0.269 mmol)添加至經攪拌之2-((S)-4-亞甲基吡咯啶-2-基)-4-(4-(6-(2-((S)-4-亞甲基吡咯啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中間物189)之四鹽酸鹽(86 mg，0.148 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(58.4 mg，0.269 mmol)及亨氏鹼(0.234 mL，1.34 mmol)於DMF(6 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物5小時且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-亞甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-亞甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽。LC-MS滯留時間2.81分鐘；C50 H57 N8 O8 之計算值：897.43，m/z實驗值：897.41[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(s,2H),8.4(d,J =8.8 Hz,1H),8.09(d,J =9.0 Hz,1H),8.01-7.85(m,8H),5.50-5.44(m,2H),5.32(s,2H),5.28(s,2H),4.75(d,J =14.6 Hz,2H),4.63(dd,J =13.3,4.5 Hz,2H),4.27(dd,J =8.3,3.5 Hz,2H),3.99-3.91(m,4H)3.69(s,6H),3.41-3.37(m 4H),3.0-2.94(m,2H),2.02-1.98(m,2H),1.68-1.65(m,2H),1.59-1.32(m,8H)。
實例124((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)胺甲醯基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(149 mg，0.393 mmol)添加至經攪拌之(S)-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-胺基乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺(中間物191)之四鹽酸鹽(111 mg，0.148 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(47.1 mg，0.196mmol)及亨氏鹼(0.343 mL，1.96 mmol)於DMF(8 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物4小時且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)胺甲醯基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(91 mg，47%)。LC-MS滯留時間2.96分鐘；C40 H49 N8 O6 之計算值：737.38，m/z實驗值：737.45[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.35(s,1H),8.27(s,1H),8.13(d,J =8.9 Hz,1H),8.09(d,J =8.9 Hz,1H),7.99-7.88(m,8H),5.30-5.27(m,2H),3.99-3.97(m,2H),3.70(s,6H),2.14(br. s,2H),1.78-1.75(m,6H),0.99-0.95(m,12H)。
實例125((1S)-2-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)胺基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(149 mg，0.393 mmol)添加至經攪拌之(S)-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-胺基乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺(中間物191)之四鹽酸鹽(83 mg，0.196 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(85 mg，0.393 mmol)及亨氏鹼(0.343 mL，1.96 mmol)於DMF(8 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物5小時且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-2-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)胺基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(89 mg，42%)。LC-MS滯留時間2.64分鐘；C44 H53 N8 O8 之計算值：821.40，m/z實驗值：821.80[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% AcCN/95%水/10 mMNH4 OAc且溶劑B為95% AcCN/5%水/10 mM NH4 OAc。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.34(s,1H),8.2(s,1H),8.13(d,J =8.6 Hz,1H),8.09(d,J =8.6 Hz,1H),7.99-7.87(m,8H),5.29-5.26(m,2H),4.02-4.00(m,2H),3.98-3.93(m,4H) 3.71(s,6H),3.41-3.37(m 4H),2.02(br. s,2H),1.79-1.76(m,6H),1.62(d,J =13.0 Hz,2H),1.49-1.39(m,6H)。
實例126((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)(甲基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)(甲基)胺甲醯基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(84 mg，0.222 mmol)添加至經攪拌之(S)-N-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-(甲基胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺(中間物193)之四鹽酸鹽(66 mg，0.111 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(38.9 mg，0.222 mmol)及亨氏鹼(0.194 mL，1.11 mmol)於DMF(5 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物5小時且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)(甲基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)(甲基)胺甲醯基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽。LC-MS滯留時間1.78分鐘；C42 H53 N8 O6 之計算值：765.41，m/z實驗值：765.41[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽；旋轉異構體,500 MHz,MeOD)δppm 8.44/8.34(s,1H),8.27(s,1H),8.13(d,J =8.6 Hz,1H),8.10-7.88(m,9H),6.17-6.14/5.33-5.30(m,2H),4.64-4.6/4.41-4.39(m,2H),3.84/3.66(s,3H),3.83/3.59(s,3H),3.37(s,6H),2.10-2.05(m,2H),1.90-1.87/1.85-1.82(m,6H),1.15-0.90(m,12H)。
實例127((1S)-2-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)(甲基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)(甲基)胺基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯將HATU(84 mg，0.222 mmol)添加至經攪拌之(S)-N-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-(甲基胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺(中間物193)之四鹽酸鹽(66 mg，0.111 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(48 mg，0.222 mmol)及亨氏鹼(0.194 mL，1.11 mmol)於DMF(5 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物5小時且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-2-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)(甲基)胺基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)(甲基)胺基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽。LC-MS滯留時間1.58分鐘；C46 H57 N8 O8 之計算值：849.43，m/z實驗值：849.46[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×30 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用1 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、2分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及3分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 HNMR(三氟乙酸鹽；旋轉異構體500 MHz,MeOD)δppm 8.45/8.34(s,1H),8.28(s,1H),8.14(d,J =8.6 Hz,1H),8.09(d,J =8.3 Hz,1H),8.06-7.88(m,8H),6.21-6.18/5.38-5.34(m,2H),4.73-4.70/4.47-4.45(m,2H),4.02-3.94(m,4H)3.84/3.63(s,3H),3.83/3.60(s,3H),3.46-3.38(m 4H),3.37/3.35(s,6H),2.02(br. s,2H),1.91-1.88/1.84-1.81(m,6H),1.68(d,J =13.0 Hz,2H),1.53-1.42(m,6H)。
實例128((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯將HATU(32 mg，0.085 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物196)之四鹽酸鹽(25 mg，0.039 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(14.9 mg，0.085 mmol)及亨氏鹼(0.054 mL，0.308 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(24.5 mg，57.8%)。LC-MS滯留時間3.05分鐘；C46 H57 N8 O6 之計算值：817.44，m/z實驗值：817.36[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(s,1H),8.27(s,1H),8.13(d,J =8.6 Hz,1H),8.08(d,J =8.6 Hz,1H),7.99-7.85(m,8H),5.27-5.22(m,2H),4.37-4.33(m,2H),4.25-4.23(m,2H),3.68(s,6H),3.47-3.41(m,2H),2.72-2.68(m 2H),2.55(br. s,2H),2.07-2.03(m,2H),1.92-1.87(m,2H),1.27-1.26(m,6H),0.95-0.9(m,12H)。
實例129(2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(((甲氧羰基)胺基)(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(64.5 mg，0.170 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物196)之四鹽酸鹽(50 mg，0.077 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(36.8 mg，0.170 mmol)及亨氏鹼(0.11 mL，0.617 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到(2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(((甲氧羰基)胺基)(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽。LC-MS滯留時間2.84分鐘；C50 H61 N8 O8 之計算值：901.46，m/z實驗值：901.42[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(s,1H),8.28(s,1H),8.14(d,J =8.6 Hz,1H),8.09(d,J =8.6 Hz,1H),8.00-7.85(m,8H),5.25-5.21(m,2H),4.42-4.39(m,2H),4.30-4.27(m,2H),3.96-3.92(m,4H),3.68(s,6H),3.49-3.35(m 6H),2.71-2.38(m,2H),2.58-2.54(m,2H),1.97-1.89(m,4H),1.60(d,J =13.0 Hz,2H),1.48-1.26(m,12H)。
實例130(1-環丙基-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(環丙基((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(39 mg，0.102 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物196)之四鹽酸鹽(30 mg，0.085 mmol)、(S)-2-環丙基-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(17.62 mg，0.102 mmol)及亨氏鹼(0.065 mL，0.37 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到(1-環丙基-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(環丙基((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(24.5 mg，57.8%)。LC-MS滯留時間3.08分鐘；C46 H53 N8 O6 之計算值：813.41，m/z實驗值：813.45[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.32(s,1H),8.27(s,1H),8.13(d,J =8.6 Hz,1H),8.08(d,J =8.6 Hz,1H),7.99-7.87(m,8H),5.29-5.24(m,2H),4.30(br. s,2H),3.82-3.80(m,2H),3.68(s,6H),3.43-3.37(m,2H),2.72-2.68(m 2H),2.55(br. s,2H),1.91-1.86(m,2H),1.25-1.24(m,6H),1.11(br. s,2H),0.60-0.58(m,4H),0.53-0.51(m,2H),0.04-0.38(m,2H)。
實例131((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(45 mg，0.119 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物196)之四鹽酸鹽(35 mg，0.054 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)丁酸(19.14 mg，0.119 mmol)及亨氏鹼(0.075 mL，0.432 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(36.4 mg，61.7%)。LC-MS滯留時間2.91分鐘；C44 H53 N8 O6 之計算值：789.41，m/z實驗值：789.41[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.30(s,1H),8.28(s,1H),8.14(d,J =8.6 Hz,1H),8.09(d,J =8.6 Hz,1H),8.00-7.86(m,8H),5.27-5.22(m,2H),4.37(br. s,2H),4.24-4.23(m,2H),3.67(s,6H),3.44-3.39(m,2H),2.72-2.68(m 2H),2.58(br. s,2H),1.88-1.84(m,2H),1.47-1.25(m,6H),0.98-0.92(m,10H)。
實例132((1S)-1-環丁基-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-環丁基-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(45 mg，0.119 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物196)之四鹽酸鹽(35 mg，0.054 mmol)、(S)-2-環丁基-2-(甲氧羰基胺基)乙酸(22.23 mg，0.119 mmol)(以類似於Cap-51方式，使用市售(S)-2-(第三丁氧羰基胺基)-2-環丁基乙酸作為起始物質來製備)及亨氏鹼(0.075 mL，0.432 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-環丁基-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-環丁基-2-((甲氧羰基)胺基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(25.6 mg，43.6%)。LC-MS滯留時間3.13分鐘；C48 H57 N8 O6 之計算值：841.44，m/z實驗值：841.48[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.30(s,1H),8.28(s,1H),8.14(d,J =8.9 Hz,1H),8.09(d,J =8.6 Hz,1H),8.00-7.86(m,8H),5.26-5.21(m,2H),4.41-4.37(m,4H),3.68(s,6H),3.48-3.43(m,2H),2.71-2.66(m 4H),2.56(br. s,2H),1.96-1.87(m,14H),1.27-1.26(m,6H)。
實例133((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-((2R,4S)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-1-((2S,4R)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(32 mg，0.085 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物196)之四鹽酸鹽(25 mg，0.039 mmol)、2-(甲氧羰基胺基)-2-((2R,4S)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(Cap-178立體異構體1)(19.61 mg，0.085 mmol)及亨氏鹼(0.054 mL，0.308 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-((2R,4S)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-1-((2S,4R)-2-甲基四氫-2H-哌喃-4-基)-2-側氧基乙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(21.3 mg，45.2%)。LC-MS滯留時間2.94分鐘；C52 H64 N8 O8 之計算值：929.49，m/z實驗值：929.64[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.32(s,1H),8.28(s,1H),8.15-8.12(m,1H),8.09-8.06(m,1H),8.02-7.94(m,5H),7.90-7.86(m,3H),5.28-5.23(m,2H),4.50-4.48(m,2H),4.44(br. s,2H),3.95-3.91(m,2H),3.71-3.68(s,10H),3.46-3.41(m,2H),2.72-2.67(m,2H),2.55-2.52(m,2H),2.19(br. s,2H),1.97-1.92(m,2H),1.60(br. s,2H),1.48-1.46(m,2H),1.39(br. s,2H),1.30-1.26(m,8H),1.14-1.10(m,6H)。
實例134((1S)-1-(((2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(65 mg，0.171 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,4R)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4R)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物201)之四鹽酸鹽(50 mg，0.077 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(30 mg，0.170 mmol)及亨氏鹼(0.108 mL，0.308 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-(((2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(60.7 mg，71%)。LC-MS滯留時間3.12分鐘；C46 H57 N8 O6 之計算值：817.44，m/z實驗值：817.46[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.30(s,1H),8.28(s,1H),8.14(d,J =8.6 Hz,1H),8.09(d,J =8.6 Hz,1H),8.00-7.86(m,8H),5.43-5.38(m,2H),4.26-4.24(m,2H),4.09-4.05(m,2H),3.69(s,6H),3.64(br. s,2H),2.76-2.73(m 2H),235-2.32(m,2H),2.25-2.22(m,2H),2.11-2.09(m,2H),1.22-1.20(m,6H),0.98-0.93(m,12H)。
實例135((1S)-1-(((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(65 mg，0.171 mmol)添加至經攪拌之(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物203)之四鹽酸鹽(50 mg，0.078 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(30 mg，0.111 mmol)及亨氏鹼(0.108 mL，0.621 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-(((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(54 mg，63%)。LC-MS滯留時間3.15分鐘；C46 H53 N8 O6 之計算值：813.41，m/z實驗值：813.45[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.33(s,1H),8.26(s,1H),8.12(d,J =8.6 Hz,1H),8.07(d,J =8.6 Hz,1H),7.98-7.86(m,8H),5.80-5.74(m,2H),4.36-4.34(m,2H),4.02-3.99(m,2H),3.73(s,6H),2.99-2.95(m,2H),2.28-2.25(m 2H),2.16(br. s,2H),2.04(br.s,2H),1.24-1.20(m,2H),1.08(br. s,2H),1.02-1.00(m,12H)。
實例136((1S)-1-(((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(62 mg，0.164 mmol)添加至經攪拌之(1S,3S,5S)-5-甲基-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物209)之四鹽酸鹽(50 mg，0.074 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(28.7 mg，0.164 mmol)及亨氏鹼(0.104 mL，0.595 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-(((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(45 mg，54%)。LC-MS滯留時間3.15分鐘；C48 H57 N8 O6 之計算值：841.44，m/z實驗值：841.50[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXC18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.33(s,1H),8.25(s,1H),8.11(d,J =8.5 Hz,1H),8.06(d,J =8.7 Hz,1H),7.97-7.85(m,8H),5.82-5.75(m,2H),4.31-4.28(m,2H),3.73-3.71(m,8H),2.75-2.69(m,2H),2.44-2.37(m 2H),2.17-2.12(m,2H),1.40(s,6H),1.1-1.11(m,4H),1.01-0.99(m,12H)。
實例137((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(62 mg，0.164 mmol)添加至經攪拌之(1S,3S,5S)-5-甲基-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷(中間物209)之四鹽酸鹽(50 mg，0.074 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(35.5 mg，0.164 mmol)及亨氏鹼(0.104 mL，0.595 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(46.3 mg，51%)。LC-MS滯留時間3.15分鐘；C52 H61 N8 O86 之計算值：925.46，m/z實驗值：463.36[M/2+H]+ 。在配備有PHENOMENEXC18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.31(s,1H),8.25(s,1H),8.10(d,J =8.8 Hz,1H),8.06(d,J =8.8 Hz,1H),7.97-7.85(m,8H),5.80-5.74(m,2H),4.36-4.35(m,2H),3.99-3.95(m,4H),3.76-3.74(m,8H),3.43-3.35(m,4H),2.75-2.68(m,2H),2.44-2.37(m 2H),2.06-2.04(m,2H),1.74(app. d,J =13 Hz,2H),1.52-1.35(m,12H),1.22-1.19(m,2H),1.14-1.12(m,2H)。
實例138((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(31 mg，0.082 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸酯(中間物211)之四鹽酸鹽(25 mg，0.037 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(14 mg，0.082 mmol)及亨氏鹼(0.052 mL，0.297 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(17 mg，41%)。LC-MS滯留時間3.10分鐘；C48 H57 N8 O6 之計算值：841.44，m/z實驗值：841.542[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXC18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.27(s,1H),8.26(s,1H),8.12(d,J =8.5 Hz,1H),8.07(d,J =8.7 Hz,1H),7.98-7.93(m,4H),7.88-7.85(m,4H),5.09-5.04(m,2H),4.55-4.53(m,2H),3.38(s,6H),3.57(br.s,2H),2.81-2.75(m,2H),2.33-2.27(m 2H),2.22-2.16(m,2H),1.44(s,3H),1.43(s,3H),1.05-0.93(m,16H)。
實例139((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(34.8 mg，0.092 mmol)添加至經攪拌之(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(第三丁氧羰基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己烷-2-甲酸酯(中間物211)之四鹽酸鹽(28 mg，0.042 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(20 mg，0.092 mmol)及亨氏鹼(0.085 mL，0.333 mmol)於DMF(2 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化，得到((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮雜雙環[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(13 mg，25%)。LC-MS滯留時間2.92分鐘；C52 H61 N8 O86 之計算值：925.46，m/z實驗值：92.53[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXC18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.28(s,2H),8.14(d,J =8.8 Hz,1H),8.07(d,J =8.6 Hz,1H),8.00-7.96(m,4H),7.91-7.84(m,4H),5.08-5.02(m,2H),4.59-4.56(m,2H),4.00-3.94(m,4H),3.69(s,6H),3.62(br. s,2H),3.44-3.38(m,4H),2.81-2.78(m,2H),2.31-2.29(m,2H),2.09(br. s,2H),1.60-1.47(m,8H),1.43(s,3H),1.44(s,3H),1.04(br. s,2H),0.98-0.97(m,2H)。
實例140((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯
將HATU(97 mg，0.254 mmol)添加至經攪拌之2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中間物196)之四鹽酸鹽(150 mg，0.231 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙酸(50 mg，0.231 mmol)及亨氏鹼(0.162 mL，0.925 mmol)於DMF(1 mL)中的溶液中。在室溫下攪拌反應物1小時，隨後添加(S)-2-(甲氧羰基胺基)-3-甲基丁酸(40.5 mg，0.231 mmol)並添加亨氏鹼(0.162 mL，0.925 mmol)及HATU(97 mg，0.254 mmol)。進一步在室溫下攪拌混合物1小時且藉由氮氣淨化而部分濃縮。將殘餘物溶解於MeOH中且藉由製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)純化。應用第二種層析方法以分離異構體：SFC Diol-HL管柱，含0.1% DEA之20%甲醇；4.6×250 mm，5 μm，移動相：含0.1% DEA之80% CO2 -20%甲醇；溫度：35℃；壓力：150巴；流速：2 ml/min；在328 nm下監測UV。將分離之樣品溶解於甲醇(3 mL)中且在室溫下添加純TFA(50 mL)。將混合物濃縮至乾且置於高真空下，得到((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-2-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽(78.2 mg，29.5%產率)。LC-MS滯留時間2.95分鐘；C48 H59 N8 O7 之計算值：859.45，m/z實驗值：859.50[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.30(s,1H),8.28(s,1H),8.15(d,J =8.6 Hz,1H),8.09(d,J =8.6 Hz,1H),8.01-7.85(m,8H),5.26-5.22(m,2H),4.42-4.36(m,2H),4.30-4.27(m,1H),4.24-4.23(m,1H),3.95-3.91(m,2H),3.68(s,6H),3.47-3.36(m 2H),3.08-3.04(m,1H),2.70(br. s,2H),2.55(br. s,2H),2.08-2.03(m,1H),1.97-1.87(m,3H),1.59(d,J =13.0 Hz,1H),1.48-1.26(m,10H) 0.95-0.90(m,6H)。
實例141((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)-2-側氧基-1-(四氫-2H-哌喃-4-基)乙基)胺基甲酸甲酯
如實例140中所報導之另一異構體。LC-MS滯留時間2.98分鐘；C48 H59 N8 O7 之計算值：859.45，m/z實驗值：859.58[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.29(s,1H),8.28(s,1H),8.13(d,J =8.6 Hz,1H),8.09(d,J =8.6 Hz,1H),7.99-7.86(m,4H),7.91-7.85(m,4H),5.26-5.21(m,2H),4.41-4.36(m,4H),4.28(d,J =8.24 Hz,1H),4.24(d,J =7.32 Hz,1H),3.95-3.91(m,2H),3.68(s,6H),3.47-3.36(m 2H),2.73-2.66(m,2H),2.59-2.53(m,2H),2.07-2.03(m,1H),1.97-1.87(m,3H),1.59(d,J =13.0 Hz,1H),1.51-1.25(m,11H) 0.95-0.90(m,6H)。
實例142((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯
將NCS(17.98 mg，0.135 mmol)添加至經氮氣淨化之實例128(55 mg，0.067 mmol)的DMF(1 mL)溶液中且在50℃下攪拌反應混合物18小時。藉由濃縮移除溶劑，將粗產物溶解於CH2 Cl2 中且裝入4 g湯姆遜矽膠濾筒中。由5-100% B進行梯度溶離，經1 L。A/B(A=CH2 Cl2 ；B=10% MeOH/EtOAc)。將純化產物之樣品溶解於MeOH中且進行製備型HPLC(含0.1% TFA之MeCN/水)，得到((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯基)-4-甲基-2-吡咯啶基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯啶基)羰基)-2-甲基丙基)胺基甲酸甲酯之雙-三氟乙酸鹽。LC-MS滯留時間4.48分鐘；C46 H55 Cl2 N8 O6 之計算值：885.36，m/z實驗值：885.34[M+H]+ 。在配備有PHENOMENEXLuna C18 2.0×50 mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上，使用SPD-10AV UV-Vis偵測器，在220 nM偵測器波長下記錄LC數據。溶離條件使用0.8 mL/min之流速、100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度、4分鐘之梯度時間、1分鐘之保持時間及5分鐘之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶劑B為95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用電噴霧模式之LC MICROMASSPlatform測定MS數據。1 H NMR(三氟乙酸鹽，500 MHz,MeOD)δppm 8.20(s,1H),8.18(s,1H),8.03(d,J =8.6 Hz,1H),8.00(d,J =8.6 Hz,1H),7.90-7.83(m,6H),5.09-5.04(m,2H),4.30-4.7(m,2H),4.24-4.23(m,2H),3.68(s,6H),3.43-3.99(m,2H),2.58-2.56(m 2H),2.43(br. s,2H),2.05-2.04(m,2H),1.93-1.87(m,2H),1.24-1.22(m,6H),0.97-0.91(m,12H)。
實例145
將二異丙基乙胺(6.75 g，52.3 mmol，2.07當量)裝入經攪拌之實例143(10.0 g，25.3 mmol)及Boc-L-脯胺酸(11.4 g，53.0 mmol，2.1當量)於100 mL乙腈中的懸浮液中。使所得混合物升溫至35℃且使其攪拌3小時。使混合物冷卻至20℃且用50 mL 13重量% NaCl水溶液洗滌有機相三次。經由真空蒸餾將富有機層流溶劑交換為純甲苯，得到呈於約60 mL甲苯中之溶液形式之實例144。將乙酸銨(38.9 g，504.9 mmol，20當量)、咪唑(6.9 g，101.0 mmol，4當量)及50 mL甲苯裝入另一500 mL夾套反應器中。使所得懸浮液升溫至92-95℃之內部溫度。添加實例144之甲苯溶液，同時維持92-95℃之溫度。使所得混合物在92-95℃下攪拌15小時。使所得漿料冷卻至55-60℃且添加甲醇(150 mL)，同時維持55-60℃之溫度。漿料在此溫度下保持3小時，經1小時冷卻至20℃且在20℃下再保持18小時。經由過濾收集晶體且用甲醇洗滌。使濾餅脫水2小時，接著在50-55℃下在真空下乾燥18小時，得到12.1 g呈淡黃色固體狀之實例145(76.1%產率，HPLC AP為97.8)。
實例149
在500 mL反應器中，將實例146(市售，17.5 g，1.00當量)溶解於THF(87.5 mL)中。使所得溶液冷卻至-75℃且裝入1.5 M DIBAL-H之甲苯溶液(61.3 mL，1.5當量)，同時維持溫度低於-70℃。在-70℃下攪拌所得溶液1小時。經10分鐘裝入三氟乙酸(2.3 mL，0.5當量)，維持內部溫度低於-70℃。接著經15分鐘裝入三乙胺(51.3 mL，6當量)，維持內部溫度低於-70℃。經10分鐘裝入三氟乙酸酐(11.2 mL，1.3當量)，維持內部溫度低於-70℃。接著經90分鐘使反應物升溫至室溫且經由反向添加至20重量%單水合檸檬酸水溶液(96.6 g，1.5當量)中來淬滅，同時維持溫度低於15℃。在室溫下攪拌所得混合物2小時，接著丟棄下部水層。用70 mL飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌富含產物之有機層兩次。裝入固體碳酸氫鈉(1.7 g，每公克實例146 0.1 g)且在真空下將溶液之溶劑更換為純甲苯，得到呈於2 L/kg甲苯中之溶液形式之實例147。
將實例147(16.5 g，來自實例146之理論值)之33 mL甲苯溶液精緻過濾至250 mL反應器中。接著裝入三氟甲苯(50 mL)及氯碘甲烷(43.2 g，4.0當量)且使所得溶液冷卻至-20℃。裝入1.1 M二乙基鋅之甲苯溶液(111 mL，2.0當量)，同時維持內部溫度低於-8℃。在-15至-20℃下攪拌所得溶液14小時。使反應混合物升溫至0℃，接著經由反向添加至20重量%檸檬酸水溶液(135.7 g，2.3當量)中來淬滅。用甲苯(82 mL)沖洗反應器且將沖洗液添加至淬滅溶液中。攪拌所得兩相混合物20分鐘，接著分離下部水層並丟棄。依序用60 mL 13重量% NaCl水溶液、60 mL飽和NaHCO3 洗滌富有機層兩次。在真空下將所得溶液之溶劑更換為純IPA，得到呈於10 L/kg IPA中之溶液形式之實例148。
將實例148(147 mL，14.7 g，來自實例146之理論值)之IPA溶液裝入250 mL反應器中。使溶液升溫至35℃且添加固體氫氧化鈉(6.2 g，3.0當量)。在35℃下攪拌所得混合物隔夜。添加水(44 mL)且在真空下移除有機溶劑。添加MTBE(145 mL)且用6 N HCl水溶液將pH值調整至3.0。分離水層並丟棄。用60 mL水洗滌富含產物之有機層，接著經由添加恆定體積之MTBE，在真空下共沸式乾燥。將溶液濃縮至55 mL且在50℃下攪拌30分鐘。經1小時使溶液冷卻至室溫，在此期間形成漿料。經90分鐘裝入庚烷(90 mL)且使所得漿料熟化1小時。將固體收集於介質玻璃粉上且依序用22.5 mL 3:1庚烷：MTBE、22.5 mL庚烷洗滌。在50℃真空烘箱中乾燥棕褐色固體，得到5.48 g(46%)實例149，其LCAP純度為94.9。
在50℃下將粗實例149溶解於55 mL MTBE中。濃縮所得溶液至20 mL且經1小時冷卻至室溫。接著經90分鐘添加庚烷(33 mL)。將所得固體收集於介質玻璃粉上，用庚烷(15 mL)洗滌，並在50℃真空烘箱中乾燥，得到4.45 g(98.8 AP，98.8%對掌性純度，37%來自實例146)呈棕褐色粉末狀之所需產物。
預期以上反應順序(對於形成實例149而言)將足夠通用以便亦容許其他官能基。舉例而言，實例147之C2碳上的第三丁氧羰基可能經醯胺或另一酯置換。同樣，氮上之第三丁氧羰基保護基可經其他保護基(諸如其他胺基甲酸酯、醯胺、烷基、芳基)置換或可能完全不存在(經氫置換)。
生物活性
在本發明中使用HCV複製子檢定，且如共同擁有之PCT/US2006/022197及O'Boyle等人，Antimicrob. Agents Chemother. ,49(4):1346-1353(2005年4月)中所述來製備、進行及驗證。亦如所述(Apath.com)使用併有螢光素酶報導基因之檢定方法。
使用HCV-neo複製子細胞及在NS5A區中含有抗性取代之複製子細胞測試當前所述族群之化合物。測出該等化合物對含有突變之細胞的抑制活性相對於針對野生型細胞之相應抑制效力具有不同程度的降低。因此，本發明之化合物可有效抑制HCV NS5A蛋白之功能且應理解為其組合形式如先前在申請案PCT/US2006/022197及共同擁有之WO 04/014852中所述有效。應瞭解本發明之化合物可抑制HCV之多種基因型。表2顯示本發明之代表性化合物針對HCV 1b基因型的EC50 (有效50%抑制濃度)值。在一實施例中，本發明之化合物對1a、1b、2a、2b、3a、4a及5a基因型具有抑制性。對HCV 1b之EC50 值如下：A=0.4 pM-10 pM；B=10.1 pM-1.00 nM；且C=1.01 nM-1 μM。
本發明之化合物可藉由除NS5A抑制外或不同於NS5A抑制之機制來抑制HCV。在一實施例中，本發明之化合物抑制HCV複製子且在另一實施例中，本發明之化合物抑制NS5A。
熟習此項技術者將顯而易見，本發明並不限於上述說明性實例，且其可在不脫離其基本屬性之情況下以其他特定形式實施。因此，需要該等實例在所有態樣中均視為說明性而非限制性的，參考隨附申請專利範圍，而非上述實例，且因此在申請專利範圍之相等物的含義及範圍內之所有變化均欲涵蓋在其中。

Claims (4)

  1. 一種製備式(Z)化合物之方法， 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R4 及R5 獨立地選自氫、烷基、芳基、芳基烷基、雜環基及雜環基烷基；該方法包含：式(Q)化合物 用鹼在乙酸銨存在下處理。
  2. 如請求項1之方法，其中該鹼係選自三級胺、芳族胺、苯胺及經取代之咪唑。
  3. 如請求項1之方法，其中該鹼係選自1,4-二甲基哌嗪、3-喹寧醇(quinuclidinol)、3-甲基吡啶、1-甲基咪唑、二甲基丁胺、N,N-二甲基苯胺、二甲胺丙醇(dimmerpranol)、喹噁唑啉(quinoxazoline)、肌酐、2-甲基咪唑、4-甲基咪唑、咪唑、嗎啉、N-甲基嗎啉、1,8-二氮雜雙環十一碳-7-烯、1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷、三甲基吡啶(collidine)、4-氯咪唑、2-氯咪唑、4-氰基咪唑、苯并咪 唑、二異丙基乙胺及2,6-二甲基吡啶。
  4. 如請求項1之方法，其中該鹼為咪唑。
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