本申请案主张2009年11月11日申请的美国临时申请案第61/260,115号及2010年8月31日申请的美国临时申请案第61/378,806号的权利,这些申请案以全文引用的方式并入本文中。
具体实施方式
本发明现将结合不欲限制本发明范畴的某些实施方案来描述。相反,本发明涵盖可包括在申请专利范围的范畴内的所有替代方案、修改方案及等同方案。因此,以下实施例(包括特定实施方案)将说明本发明的一种实践,应了解这些实施例是出于说明某些实施方案的目的且为了提供据信为最适用且最容易理解的对于其程序及概念方面的描述而提出。
起始物质可由商业来源获得或通过本领域技术人员已知的公认文献方法来制备。
常见CAP的合成
化合物分析条件
在Shimadzu LC系统耦合Waters MICROMASS? ZQ MS系统上进行纯度评估及低拆分率质量分析。应注意停留时间在各机器之间可能稍有变化。除非另外注明,否则其它LC条件适用于当前章节。
条件-MS-W1
柱 =XTERRA? 3.0×50 mm S7
起始% B =0
最终% B =100
梯度时间 =2分钟
停止时间 =3分钟
流速 =5 mL/min
波长 =220 nm
溶剂A =含0.1% TFA的10%甲醇/90% H2O
溶剂B =含0.1% TFA的90%甲醇/10% H2O
条件-MS-W2
柱 =XTERRA? 3.0×50 mm S7
起始% B =0
最终% B =100
梯度时间 =3分钟
停止时间 =4分钟
流速 =4 mL/min
波长 =220 nm
溶剂A =含0.1% TFA的10%甲醇/90% H2O
溶剂B =含0.1% TFA的90%甲醇/10% H2O
条件-MS-W5
柱 =XTERRA? 3.0×50 mm S7
起始% B =0
最终% B =30
梯度时间 =2分钟
停止时间 =3分钟
流速 =5 mL/min
波长 =220 nm
溶剂A =含0.1% TFA的10%甲醇/90% H2O
溶剂B =含0.1% TFA的90%甲醇/10% H2O
条件-D1
柱 =XTERRA? C18 3.0×50 mm S7
起始% B =0
最终% B =100
梯度时间 =3分钟
停止时间 =4分钟
流速 =4 mL/min
波长 =220 nm
溶剂A =含0.1% TFA的10%甲醇/90% H2O
溶剂B =含0.1% TFA的90%甲醇/10% H2O
条件-D2
柱 =PHENOMENEX? Luna 4.6×50 mm S10
起始% B =0
最终% B =100
梯度时间 =3分钟
停止时间 =4分钟
流速 =4 mL/min
波长 =220 nm
溶剂A =含0.1% TFA的10%甲醇/90% H2O
溶剂B =含0.1% TFA的90%甲醇/10% H2O
条件-M3
柱 =XTERRA? C18 3.0×50 mm S7
起始% B =0
最终% B =40
梯度时间 =2分钟
停止时间 =3分钟
流速 =5 mL/min
波长 =220 nm
溶剂A =含0.1% TFA的10%甲醇/90% H2O
溶剂B =含0.1% TFA的90%甲醇/10% H2O
条件I
柱 =PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10
起始% B =0
最终% B =100
梯度时间 =2分钟
停止时间 =3分钟
流速 =4 mL/min
波长 =220 nm
溶剂A =含0.1% TFA的10%甲醇/90% H2O
溶剂B =含0.1% TFA的90%甲醇/10% H2O
条件II
柱 =PHENOMENEX? Luna 4.6×50 mm S10
起始% B =0
最终% B =100
梯度时间 =2分钟
停止时间 =3分钟
流速 =5 mL/min
波长 =220 nm
溶剂A =含0.1% TFA的10%甲醇/90% H2O
溶剂B =含0.1% TFA的90%甲醇/10% H2O
条件III
柱 =XTERRA? C18 3.0×50 mm S7
起始% B =0
最终% B =100
梯度时间 =3分钟
停止时间 =4分钟
流速 =4 mL/min
波长 =220 nm
溶剂A =含0.1% TFA的10%甲醇/90% H2O
溶剂B =含0.1% TFA的90%甲醇/10% H2O
将10% Pd/C(2.0 g)的甲醇(10 mL)悬浮液添加至(R)-2-苯基甘氨酸(10 g,66.2 mmol)、甲醛(33 mL 37重量%水溶液)、1 N HCl(30 mL)及甲醇(30 mL)的混合物中,且暴露于H2(60 psi)中3小时。经由硅藻土(CELITE?)过滤反应混合物,且在真空中浓缩滤液。使所得粗材料自异丙醇中再结晶,得到呈白色针状的Cap-1的盐酸盐(4.0 g)。
(R)-2-(二乙基氨基)-2-苯基乙酸
经数分钟将NaBH3CN(6.22 g,94 mmol)逐份添加至经冷却(冰/水)的(R)-2-苯基甘氨酸(6.02 g,39.8 mmol)与甲醇(100 mL)的混合物中,且搅拌5分钟。经10分钟逐滴添加乙醛(10 mL)且在相同冷却温度下持续搅拌45分钟并在环境温度下持续搅拌约6.5小时。用冰水浴反冷却反应混合物,用水(3 mL)处理,接着经约45分钟用逐滴添加浓HCl来淬灭直至混合物的pH值为约1.5-2.0。移除冷却浴且持续搅拌,同时添加浓HCl以维持混合物的pH值为约1.5-2.0。搅拌反应混合物过夜,过滤以移除白色悬浮液,且在真空中浓缩滤液。使粗材料自乙醇中再结晶,得到两批呈亮白色固体状的Cap-2的盐酸盐(第1批:4.16 g;第2批:2.19 g)。
将乙醛(5.0 mL,89.1 mmol)及10% Pd/C(720 mg)的甲醇/ H2O(4 mL/1 mL)悬浮液依序添加至经冷却(约15℃)的(R)-2-苯基甘氨酸(3.096 g,20.48 mmol)、1 N HCl(30 mL)及甲醇(40 mL)的混合物中。移除冷却浴且在H2气球下搅拌反应混合物17小时。再添加乙醛(10 mL,178.2 mmol)且在H2氛围下持续搅拌24小时[注:在整个反应过程中按需要补充H2供给]。经由硅藻土(CELITE?)过滤反应混合物,且在真空中浓缩滤液。使所得粗材料自异丙醇中再结晶,得到呈亮白色固体状的(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸的盐酸盐(2.846 g).
将10% Pd/C(536 mg)的甲醇/H2O(3 mL/1 mL)悬浮液添加至(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸/HCl(1.492 g,6.918 mmol)、甲醛(20 mL 37重量%水溶液)、1 N HCl(20 mL)及甲醇(23 mL)的混合物中。在H2气球下搅拌反应混合物约72小时,其中按需要补充H2供给。经由硅藻土(CELITE?)过滤反应混合物且在真空中浓缩滤液。使所得粗材料自异丙醇(50 mL)中再结晶,得到呈白色固体状的Cap-3的盐酸盐(985 mg).
。
经6分钟将ClCO2Me(3.2 mL,41.4 mmol)逐滴添加至经冷却(冰/水)的(R)-2-氨基-2-苯基乙酸叔丁酯/HCl(9.877 g,40.52 mmol)及二异丙基乙胺(14.2 mL,81.52 mmol)的THF(410 mL)半溶液中,且在类似温度下搅拌5.5小时。在真空中移除挥发性组分,且使残余物分配于水(100 mL)与乙酸乙酯(200 mL)之间。用1 N HCl(25 mL)及饱和NaHCO3溶液(30 mL)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并在真空中浓缩。用己烷研磨所得无色油状物,过滤并用己烷(100 mL)洗涤,得到呈白色固体状的(R)-2-(甲氧羰基氨基)-2-苯基乙酸叔丁酯(7.7 g).
经7分钟将TFA(16 mL)逐滴添加至经冷却(冰/水)的以上产物的CH2Cl2(160 mL)溶液中,移除冷却浴且搅拌反应混合物20小时。因为脱除保护基仍未完成,所以再添加TFA(1.0 mL)且再持续搅拌2小时。在真空中移除挥发性组分,且用乙醚(15 mL)及己烷(12 mL)处理所得油状残余物,得到沉淀物。过滤该沉淀物且用乙醚/己烷(约1:3比率;30 mL)洗涤并在真空中干燥,得到呈白色绒毛状固体的Cap-4(5.57 g).
。
在100℃下将(R)-2-苯基甘氨酸(1.0 g,6.62 mmol)、1,4-二溴丁烷(1.57 g,7.27 mmol)及Na2CO3(2.10 g,19.8 mmol)于乙醇(40 mL)中的混合物加热21小时。使反应混合物冷却至环境温度并过滤,且在真空中浓缩滤液。将残余物溶解于乙醇中且用1 N HCl酸化至pH 3-4,并在真空中移除挥发性组分。通过反相HPLC(水/甲醇/TFA)提纯所得粗材料,得到呈半粘性白色泡沫状的Cap-5的三氟乙酸盐(1.0 g).
通过使用Cap-5的制备方法,由(R)-2-苯基甘氨酸及1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷合成Cap-6的三氟乙酸盐.
。
将对甲苯磺酰氯(8.65 g,45.4 mmol)的CH2Cl2(200 mL)溶液逐滴添加至经冷却(-5℃)的(S)-2-羟基-2-苯基乙酸苯甲酯(10.0 g,41.3 mmol)、三乙胺(5.75 mL,41.3 mmol)及4-二甲基氨基吡啶(0.504 g,4.13 mmol)的CH2Cl2(200 mL)溶液中,同时维持温度介于-5℃与0℃之间。在0℃下搅拌反应物9小时,接着储存于冷冻器(-25℃)中历时14小时。使其解冻至环境温度且用水(200 mL)、1 N HCl(100 mL)及盐水(100 mL)洗涤,干燥(MgSO4),过滤并在真空中浓缩,得到呈粘性油状的2-苯基-2-(甲苯磺酰氧基)乙酸苯甲酯,其在静置后凝固(16.5 g)。不检查产物的手性完整性且该产物不经进一步提纯即用于下一步骤中.
在65℃下将2-苯基-2-(甲苯磺酰氧基)乙酸苯甲酯(6.0 g,15.1 mmol)、1-甲基哌嗪(3.36 mL,30.3 mmol)及N,N-二异丙基乙胺(13.2 mL,75.8 mmol)的THF(75 mL)溶液加热7小时。使反应物冷却至环境温度且在真空中移除挥发性组分。使残余物分配于乙酸乙酯与水之间,且用水及盐水洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱法(硅胶,乙酸乙酯)提纯所得粗材料,得到呈橙棕色粘性油状的2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯(4.56 g)。手性HPLC分析(CHIRALCEL? OD-H)指示样品为38.2至58.7比率的立体异构体混合物。如下实现立体异构体的分离:将产物溶解于120 mL乙醇/庚烷(1:1)中且注射(每次注射5 mL)至手性HPLC柱(Chiracel OJ,5 cm ID×50 cm L,20 μm)上,用85:15庚烷/乙醇以75 mL/min洗脱,且在220 nm下监测。得到呈粘性油状的立体异构体-1 (1.474 g)及立体异构体-2(2.2149 g).
将2-(4-甲基哌嗪-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯(1.0 g,3.1 mmol)的任一立体异构体的甲醇(10 mL)溶液添加至10% Pd/C(120 mg)的甲醇(5.0 mL)悬浮液中。在密切监测下,使反应混合物暴露于氢气球不超过50分钟。完成反应后,立即经由硅藻土(CELITE?)过滤催化剂且在真空中浓缩滤液,得到呈棕褐色泡沫状的受苯基乙酸污染的Cap-7(867.6 mg;质量超过理论产量)。产物不经进一步提纯即用于下一步骤中.
根据Cap-7的合成,通过SN2置换步骤使用适当胺(亦即Cap-8使用4-羟基哌啶且Cap-9使用(S)-3-氟吡咯烷)且如下所述的分离各自立体异构中间体的修改条件来进行Cap-8及Cap-9的合成。
通过使用以下条件来实现中间体2-(4-羟基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯的立体异构分离:将化合物(500 mg)溶解于乙醇/庚烷(5 mL/45 mL)中。将所得溶液注射(每次注射5 mL)至手性HPLC柱(Chiracel OJ,2 cm ID×25 cm L,10 μm)上,用80:20庚烷/乙醇以10 mL/min洗脱,在220 nm下监测,得到呈淡黄色粘性油状的186.3 mg立体异构体-1及209.1 mg立体异构体-2。根据Cap-7的制备,使这些苯甲酯氢解,得到Cap-8:
通过使用以下条件来实现中间体2-((S)-3-氟吡咯烷-1-基)-2-苯基乙酸苯甲酯的非对映异构分离:在手性HPLC柱(Chiracel OJ-H,0.46 cm ID×25 cm L,5 μm)上,在10巴压力、70 mL/min流速及35℃的温度下用95% CO2/5%甲醇(含0.1% TFA)洗脱来分离酯(220 mg)。浓缩各自立体异构体的HPLC洗脱物,将残余物溶解于CH2Cl2(20 mL)中且用水性介质(10 mL水+1 mL饱和NaHCO3溶液)洗涤。干燥(MgSO4)有机相,过滤并在真空中浓缩,得到92.5 mg级分-1及59.6 mg级分-2。根据Cap-7的制备使这些苯甲酯氢解,制得Cap-9a及Cap-9b。Cap-9a(非对映异构体-1;样品为在反相HPLC上使用H2O/甲醇/TFA溶剂提纯后所得的三氟乙酸盐):
向D-脯氨酸(2.0 g,17 mmol)及甲醛(2.0 mL 37重量%水溶液)的甲醇(15 mL)溶液中添加10% Pd/C(500 mg)的甲醇(5 mL)悬浮液。在氢气球下搅拌混合物23小时。经由硅藻土(CELITE?)过滤反应混合物且在真空中浓缩,得到呈灰白色固体状的Cap-10(2.15 g)。
在氢气球下将(2S,4R)-4-氟吡咯烷-2-甲酸(0.50 g,3.8 mmol)、甲醛(0.5 mL 37重量%水溶液)、12 N HCl(0.25 mL)及10% Pd/C(50 mg)于甲醇(20 mL)中的混合物搅拌19小时。经由硅藻土(CELITE?)过滤反应混合物且在真空中浓缩滤液。使残余物自异丙醇中再结晶,得到呈白色固体状的Cap-11的盐酸盐(337.7 mg)。
(S)-2-(甲氧基羰基氨基)丙酸
将L-丙氨酸(2.0 g,22.5 mmol)溶解于10%碳酸钠水溶液(50 mL)中,且向其中添加氯甲酸甲酯(4.0 mL)的THF(50 mL)溶液。在环境条件下搅拌反应混合物4.5小时且在真空中浓缩。将所得白色固体溶解于水中且用1 N HCl酸化至pH~2-3。用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取所得溶液,干燥(Na2SO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩,得到无色油状物(2.58 g)。通过反相HPLC(H2O/甲醇/TFA)提纯500 mg此物质,得到150 mg呈无色油状的Cap-12。
在氢气氛围(50 psi)下将L-丙氨酸(2.5 g,28 mmol)、甲醛(8.4 g,37重量%)、1 N HCl(30 mL)及10% Pd/C(500 mg)于甲醇(30 mL)中的混合物搅拌5小时。经由硅藻土(CELITE?)过滤反应混合物且在真空中浓缩滤液,得到呈油状的Cap-13的盐酸盐,其在真空下静置后凝固(4.4 g;质量超过理论产量)。产物不经进一步提纯即使用。
步骤1:在0℃下在甲醇中搅拌(R)-(-)-D-苯基甘氨酸叔丁酯(3.00 g,12.3 mmol)、NaBH3CN(0.773 g,12.3 mmol)、KOH(0.690 g,12.3 mmol)及乙酸(0.352 mL,6.15 mmol)的混合物。经5分钟向此混合物中逐滴添加戊二醛(2.23 mL,12.3 mmol)。搅拌反应混合物,同时使其升温至环境温度且在相同温度下持续搅拌16小时。随后移除溶剂且用10% NaOH水溶液及乙酸乙酯分配残余物。分离有机相,干燥(MgSO4),过滤并浓缩至干,得到透明油状物。通过反相制备型HPLC(Primesphere C-18,30×100 mm;CH3CN-H2O-0.1% TFA)提纯此物质,产生呈透明油状的中间体酯(2.70 g,56%)。
步骤2:向经搅拌的中间体酯(1.12 g,2.88 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中添加TFA(3 mL)。在环境温度下搅拌反应混合物4小时,接着将其浓缩至干,产生淡黄色油状物。使用反相制备型HPLC(Primesphere C-18,30×100 mm;CH3CN-H2O-0.1% TFA)提纯该油状物。合并适当级分并在真空中浓缩至干。接着将残余物溶解于最少量甲醇中且施加于MCX LP萃取滤筒(2×6 g)上。用甲醇(40 mL)冲洗这些滤筒,接着使用2 M氨的甲醇溶液(50 mL)洗脱所需化合物。合并含有产物的级分并浓缩,将残余物溶解于水中。冻干此溶液,得到呈淡黄色固体状的标题化合物(0.492 g,78%)。
步骤1:2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯:向α-溴苯基乙酸(10.75 g,0.050 mol)、(S)-(-)-1-苯基乙醇(7.94 g,0.065 mol)及DMAP(0.61 g,5.0 mmol)于无水二氯甲烷(100 mL)中的混合物中一次性添加固体EDCI(12.46 g,0.065 mol)。在室温下在Ar下搅拌所得溶液18小时,接着用乙酸乙酯稀释,洗涤(H2O×2、盐水),干燥(Na2SO4),过滤并浓缩,产生浅黄色油状物。对此油状物进行快速色谱法(SiO2/己烷-乙酸乙酯,4:1),得到呈白色固体状的标题化合物(11.64 g,73%)。
步骤2:(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯:向2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(0.464 g,1.45 mmol)的THF(8 mL)溶液中添加三乙胺(0.61 mL,4.35 mmol),随后添加碘化四丁基铵(0.215 g,0.58 mmol)。在室温下搅拌反应混合物5分钟,接着添加4-甲基-4-羟基哌啶(0.251 g,2.18 mmol)的THF(2 mL)溶液。在室温下搅拌混合物1小时,接着在55-60℃(油浴温度)下加热4小时。接着用乙酸乙酯(30 mL)稀释经冷却的反应混合物,洗涤(H2O×2、盐水),干燥(MgSO4),过滤并浓缩。通过硅胶色谱(0-60%乙酸乙酯-己烷)提纯残余物,首先得到呈白色固体状的标题化合物的(S,R)-异构体(0.306 g,60%),接着得到亦呈白色固体状的相应(S,S)-异构体(0.120 g,23%)。
步骤3:(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸:向(R)-2-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(0.185 g,0.52 mmol)的二氯甲烷(3 mL)溶液中添加三氟乙酸(1 mL)且在室温下搅拌混合物2小时。随后在真空中移除挥发性物质且通过反相制备型HPLC(Primesphere C-18,20×100 mm;CH3CN-H2O-0.1% TFA)提纯残余物,产生呈淡蓝色固体状的标题化合物(呈三氟乙酸盐形式)(0.128 g,98%)。
步骤1:2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙酯:在室温下将2-氟苯基乙酸(5.45 g,35.4 mmol)、(S)-1-苯基乙醇(5.62 g,46.0 mmol)、EDCI(8.82 g,46.0 mmol)及DMAP(0.561 g,4.60 mmol)于CH2Cl2(100 mL)中的混合物搅拌12小时。接着浓缩溶剂且用H2O-乙酸乙酯分配残余物。分离各相且用乙酸乙酯(2次)反萃取水层。洗涤(H2O、盐水)合并的有机相,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱(BIOTAGE?/0-20%乙酸乙酯-己烷)提纯残余物,得到呈无色油状的标题化合物(8.38 g,92%)。
步骤2:(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯:在0℃下向2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯基乙酯(5.00 g,19.4 mmol)的THF(1200 mL)溶液中添加DBU(6.19 g,40.7 mmol)且使溶液升温至室温同时搅拌30分钟。接着使溶液冷却至-78℃,添加CBr4(13.5 g,40.7 mmol)的THF(100 mL)溶液,使混合物升温至-10℃且在此温度下搅拌2小时。用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应混合物且分离各层。用乙酸乙酯(2次)反萃取水层且洗涤(H2O、盐水)合并的有机相,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩。向残余物中添加哌啶(5.73 mL,58.1 mmol)且在室温下搅拌溶液24小时。接着在真空中浓缩挥发性物质且通过硅胶色谱(BIOTAGE?/0-30%乙醚-己烷)提纯残余物,得到呈黄色油状的非对映异构体的纯混合物(2:1比率,根据1H NMR) (2.07 g,31%),以及未反应的起始物质(2.53 g,51%)。对非对映异构混合物进行进一步色谱分离(BIOTAGE?/0-10%乙醚-甲苯),得到呈无色油状的标题化合物(0.737 g,11%)。
步骤3:(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸:在室温及大气压(H2气球)下使(R)-2-(2-氟苯基)-2-(哌啶-1-基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯(0.737 g,2.16 mmol)与20% Pd(OH)2/ C(0.070 g)于乙醇(30 mL)中的混合物氢化2小时。接着用Ar吹扫溶液,经由硅藻土(CELITE?)过滤,且在真空中浓缩。此步骤得到呈无色固体状的标题化合物(0.503 g,98%)。
步骤1:(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯:向2-溴-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(1.50 g,4.70 mmol)的THF(25 mL)溶液中添加三乙胺(1.31 mL,9.42 mmol),随后添加碘化四丁基铵(0.347 g,0.94 mmol)。在室温下搅拌反应混合物5分钟,接着添加4-苯基-4-羟基哌啶(1.00 g,5.64 mmol)的THF(5 mL)溶液。搅拌混合物16小时,接着用乙酸乙酯(100 mL)稀释,洗涤(H2O×2、盐水),干燥(MgSO4),过滤并浓缩。在硅胶柱上提纯(0-60%乙酸乙酯-己烷)残余物,得到非对映异构体的约2:1混合物,如通过1H NMR判断。使用超临界流体色谱法(CHIRALCEL? OJ-H,30×250 mm;20%乙醇,在CO2中,在35℃下)进行这些异构体的分离,首先产生呈黄色油状的标题化合物的(R)-异构体(0.534 g,27%),接着为亦呈黄色油状的相应(S)-异构体(0.271 g,14%)。
用于测定停留时间的手性SFC条件:
条件I
柱:CHIRALPAK? AD-H柱,4.62×50 mm,5 μm
溶剂:含0.1% DEA的90% CO2-10%甲醇
温度:35℃
压力:150巴
流速:2.0 mL/min
在220 nm下UV监测
注射:1.0 mg/3 mL甲醇
条件II
柱:CHIRALCEL? OD-H柱,4.62×50 mm,5 μm
溶剂:含0.1% DEA的90% CO2-10%甲醇
温度:35℃
压力:150巴
流速:2.0 mL/min
在220 nm下UV监测
注射:1.0 mg/mL甲醇
Cap-17步骤2:(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸:向(R)-2-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-2-苯基乙酸(S)-1-苯基乙酯(0.350 g,0.84 mmol)的二氯甲烷(5 mL)溶液中添加三氟乙酸(1 mL)且在室温下搅拌混合物2小时。随后在真空中移除挥发性物质且通过反相制备型HPLC (Primesphere C-18,20×100 mm;CH3CN-H2O-0.1% TFA)提纯残余物,产生呈白色固体状的标题化合物(呈三氟乙酸盐形式)(0.230 g,88%)。
以类似方式制备光学纯形式的以下羧酸:
用于测定停留时间的LCMS条件:
条件I
柱:PHENOMENEX? Luna 4.6×50 mm S10
起始% B=0
最终% B=100
梯度时间=4分钟
流速=4 mL/min
波长=220
溶剂A=10%甲醇-90% H2O-0.1% TFA
溶剂B=90%甲醇-10% H2O-0.1% TFA
条件II
柱:Waters-Sunfire 4.6×50 mm S5
起始% B=0
最终% B=100
梯度时间=2分钟
流速=4 mL/min
波长=220
溶剂A=10%甲醇-90% H2O-0.1% TFA
溶剂B=90%甲醇-10% H2O-0.1% TFA
条件III
柱:PHENOMENEX? 10 μ 3.0×50 mm
起始% B=0
最终% B=100
梯度时间=2分钟
流速=4 mL/min
波长=220
溶剂A=10%甲醇-90% H2O-0.1% TFA
溶剂B=90%甲醇-10% H2O-0.1% TFA
步骤1:(R,S)-2-(4-吡啶基)-2-溴乙酸乙酯:在0℃下在氩气下向4-吡啶基乙酸乙酯(1.00 g,6.05 mmol)的无水THF(150 mL)溶液中添加DBU(0.99 mL,6.66 mmol)。经30分钟使反应混合物升温至室温,接着冷却至-78℃。向此混合物中添加CBr4(2.21 g,6.66 mmol)且在-78℃下持续搅拌2小时。接着用饱和NH4Cl水溶液淬灭反应混合物且分离各相。洗涤(盐水)有机相,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩。立即通过快速色谱法(SiO2/己烷-乙酸乙酯,1:1)提纯所得黄色油状物,得到呈略微不稳定的黄色油状的标题化合物(1.40 g,95%)。
步骤2:(R,S)-2-(4-吡啶基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸乙酯:在室温下向(R,S)-2-(4-吡啶基)-2-溴乙酸乙酯(1.40 g,8.48 mmol)的DMF(10 mL)溶液中添加二甲胺(2 M THF溶液,8.5 mL,17.0 mmol)。反应完成(如通过薄层色谱判断)后,在真空中移除挥发性物质且通过快速色谱法(BIOTAGE?,40+M SiO2柱;50%-100%乙酸乙酯-己烷)提纯残余物,得到呈淡黄色油状的标题化合物(0.539 g,31%)。
步骤3:(R,S)-2-(4-吡啶基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸:在室温下向(R,S)-2-(4-吡啶基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸乙酯(0.200 g,0.960 mmol)于THF-甲醇-H2O(1:1:1,6 mL)混合物中的溶液中添加粉末状LiOH(0.120 g,4.99 mmol)。搅拌溶液3小时,接着使用1 N HCl酸化至pH 6。用乙酸乙酯洗涤水相,接着冻干,产生呈黄色固体状的标题化合物的二盐酸盐(含有LiCl)。产物按原样用于后续步骤中。
以类似方式使用上述方法制备以下实施例:
步骤1:(R,S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N,N-二甲基氨基)-乙酸乙酯:用Ar气泡流使N,N-二甲基氨基乙酸乙酯(0.462 g,3.54 mmol)、K3PO4(1.90 g,8.95 mmol)、Pd(t-Bu3P)2 (0.090 g,0.176 mmol)及甲苯(10 mL)的混合物脱气15分钟。接着在100℃下加热反应混合物12小时,随后使其冷却至室温且倾倒于H2O中。用乙酸乙酯(2次)萃取混合物且洗涤(H2O、盐水)合并的有机相,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩。首先通过反相制备型HPLC(Primesphere C-18,30×100 mm;CH3CN-H2O-5 mM NH4OAc),接着通过快速色谱法(SiO2/己烷-乙酸乙酯,1:1)提纯残余物,得到呈橙色油状的标题化合物(0.128 g,17%)。
步骤2:(R,S) 2-(喹啉-3-基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸:在100℃下加热(R,S)-2-(喹啉-3-基)-2-(N,N-二甲基氨基)乙酸乙酯(0.122 g,0.472 mmol)与6 M HCl(3 mL)的混合物12小时。在真空中移除溶剂,得到呈淡黄色泡沫状的标题化合物的二盐酸盐(0.169 g,>100%)。未提纯的物质不经进一步提纯即用于后续步骤中。
步骤1:(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯及(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯:向(RS)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(2.60 g,13.19 mmol)、DMAP(0.209 g,1.71 mmol)及(S)-1-苯基乙醇(2.09 g,17.15 mmol)于CH2Cl2(40 mL)中的混合物中添加EDCI(3.29 g,17.15 mmol)且使混合物在室温下搅拌12小时。接着在真空中移除溶剂且用乙酸乙酯-H2O分配残余物。分离各层,用乙酸乙酯(2次)反萃取水层且洗涤(H2O、盐水)合并的有机相,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩。通过硅胶色谱(BIOTAGE?/0-50%乙醚-己烷)提纯残余物。接着通过反相制备型HPLC(Primesphere C-18,30×100 mm;CH3CN-H2O-0.1% TFA)分离所得纯非对映异构混合物,首先产生(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸(S)-1-苯乙酯(0.501 g,13%),接着产生(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)-乙酸(S)-1-苯乙酯(0.727g,18%),两者皆呈其三氟乙酸盐形式。
步骤2:(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸:在室温及大气压(H2气球)下使(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯三氟乙酸盐(1.25 g,3.01 mmol)与20% Pd(OH)2/C(0.125 g)于乙醇(30 mL)中的混合物氢化4小时。接着用Ar吹扫溶液,经由硅藻土(CELITE?)过滤,且在真空中浓缩。此步骤产生呈无色固体状的标题化合物(0.503 g,98%)。
S-异构体可以类似方式由(S)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氟苯基)乙酸((S)-1-苯基乙基)酯三氟乙酸盐获得。
在室温及大气压(H2气球)下使(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(0.300 g,1.62 mmol)、甲醛(35%水溶液,0.80 mL,3.23 mmol)及20% Pd(OH)2/C(0.050 g)的混合物氢化4小时。接着用Ar吹扫溶液,经由硅藻土(CELITE?)过滤,且在真空中浓缩。通过反相制备型HPLC(Primesphere C-18,30×100 mm;CH3CN-H2O-0.1% TFA)提纯残余物,产生呈无色油状的标题化合物(R)-2-(二甲基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸的三氟乙酸盐(0.290 g,55%)。
向冰冷的(R)-(2-氯苯基)甘氨酸(1.00 g,5.38 mmol)及NaOH(0.862 g,21.6 mmol)的H2O(5.5 mL)溶液中逐滴添加氯甲酸甲酯(1.00 mL,13.5 mmol)。在0℃下使混合物搅拌1小时,接着通过添加浓HCl(2.5 mL)酸化。用乙酸乙酯(2次)萃取混合物且洗涤(H2O、盐水)合并的有机相,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩,产生呈黄橙色泡沫状的标题化合物(R)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(2-氯苯基)乙酸(1.31 g,96%)。
向2-(2-(氯甲基)苯基)乙酸(2.00 g,10.8 mmol)的THF(20 mL)悬浮液中添加吗啉(1.89 g,21.7 mmol)且在室温下搅拌溶液3小时。接着用乙酸乙酯稀释反应混合物且用H2O(2次)萃取。冻干水相且通过硅胶色谱(BIOTAGE?/0-10%甲醇-CH2Cl2)提纯残余物,产生呈无色固体状的标题化合物2-(2-((N-吗啉基)甲基)苯基)乙酸(2.22 g,87%)。
使用对于Cap-41所述的方法,类似地制备以下实施例:
将HMDS(1.85 mL,8.77 mmol)添加至(R)-2-氨基-2-苯基乙酸对甲苯磺酸盐(2.83 g,8.77 mmol)的CH2Cl2(10 mL)悬浮液中且在室温下搅拌混合物30分钟。整份添加异氰酸甲酯(0.5 g,8.77 mmol),持续搅拌30分钟。通过添加H2O(5 mL)淬灭反应物且过滤所得沉淀物,用H2O及正己烷洗涤,并在真空下干燥。回收呈白色固体状的(R)-2-(3-甲基脲基)-2-苯基乙酸(1.5 g;82%)且其不经进一步提纯即使用。
根据对于Cap-45a所述的方法制备所需产物。
步骤1:(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯:经10分钟向经搅拌的(R)-2-氨基-2-苯基乙酸叔丁酯(1.0 g,4.10 mmol)及亨氏碱(Hunig's base)(1.79 mL,10.25 mmol)于DMF(40 mL)中的溶液中逐滴添加二甲基氨基甲酰氯(0.38 mL,4.18 mmol)。在室温下搅拌3小时后,在减压下浓缩反应物且将所得残余物溶解于乙酸乙酯中。用H2O、1 N HCl水溶液及盐水洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤且于减压下浓缩。获得呈白色固体状的(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(0.86 g;75%)且不经进一步提纯即使用。
步骤2:(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸:向经搅拌的(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(0.86 g,3.10 mmol)的CH2Cl2(250 mL)溶液中逐滴添加TFA(15 mL)且在室温下搅拌所得溶液3小时。接着用EtOAC:己烷混合物(5:20)使所需化合物自溶液中沉淀出,滤出并在减压下干燥。分离出呈白色固体状的(R)-2-(3,3-二甲基脲基)-2-苯基乙酸(0.59 g,86%)且不经进一步提纯即使用。
步骤1:(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯:经10分钟向经搅拌的(R)-2-氨基-2-苯基乙酸盐酸盐(1.0 g,4.10 mmol)及亨氏碱(1.0 mL,6.15 mmol)于DMF(15 mL)中的溶液中逐滴添加异氰酸环戊酯(0.46 mL,4.10 mmol)。在室温下搅拌3小时后,在减压下浓缩反应物且将所得残余物溶解于乙酸乙酯中。用H2O及盐水洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并在减压下浓缩。获得呈不透明油状的(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(1.32 g;100%)且不经进一步提纯即使用。
步骤2:(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸:向经搅拌的(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸叔丁酯(1.31 g,4.10 mmol)的CH2Cl2(25 mL)溶液中逐滴添加TFA(4 mL)及三乙基硅烷(1.64 mL;10.3 mmol),且在室温下搅拌所得溶液6小时。在减压下移除挥发性组分且使粗产物在乙酸乙酯/戊烷中再结晶,得到呈白色固体状的(R)-2-(3-环戊基脲基)-2-苯基乙酸(0.69 g,64%)。
向经搅拌的2-(苯甲基氨基)乙酸(2.0 g,12.1 mmol)的甲酸(91 mL)溶液中添加甲醛(6.94 mL,93.2 mmol)。在70℃下5小时后,在减压下浓缩反应混合物至20 mL且沉淀出白色固体。过滤后,收集母液且进一步在减压下浓缩,得到粗产物。通过反相制备型HPLC(XTERRA? 30×100 mm,在220 nm下监测,流速35 mL/min,经8分钟0至35% B;A=90%水、10%甲醇、0.1% TFA,B=10%水、90%甲醇、0.1% TFA)提纯,得到呈无色蜡状的呈三氟乙酸盐形式的标题化合物2-(苯甲基(甲基)-氨基)乙酸(723 mg,33%)。
向经搅拌的3-甲基-2-(甲基氨基)丁酸(0.50 g,3.81 mmol)的水(30 mL)溶液中添加K2CO3(2.63 g,19.1 mmol)及苯甲基氯(1.32 g,11.4 mmol)。在环境温度下搅拌反应混合物18小时。用乙酸乙酯(30 mL×2)萃取反应混合物且在减压下浓缩水层,得到粗产物,通过反相制备型HPLC(XTERRA? 30×100 mm,在220 nm下监测,流速40 mL/min,经6分钟20至80% B;A=90%水、10%甲醇、0.1% TFA,B=10%水、90%甲醇、0.1% TFA)提纯该粗产物得到呈无色蜡状的2-(苯甲基(甲基)氨基)-3-甲基丁酸三氟乙酸盐(126 mg,19%)。
将Na2CO3(1.83 g,17.2 mmol)添加至L-缬氨酸(3.9 g,33.29 mmol)的NaOH(33 mL 1 M/H2O,33 mmol)溶液中且用冰水浴冷却所得溶液。经15分钟逐滴添加氯甲酸甲酯(2.8 mL,36.1 mmol),移除冷却浴且在环境温度下搅拌反应混合物3.25小时。用乙醚(50 mL,3次)洗涤反应混合物,用冰水浴冷却水相且用浓HCl酸化至1-2的pH值区,并用CH2Cl2(50 mL,3次)萃取。干燥(MgSO4)有机相且在真空中蒸发,得到呈白色固体状的Cap-51(6 g)。对于主要旋转异构体,
将DIEA(137.5 mL,0.766 mol)添加至(S)-2-氨基-3-甲基丁酸叔丁酯盐酸盐(75.0 g,0.357 mol)的THF(900 mL)悬浮液中,且将混合物冷却至0℃(冰/水浴)。经45分钟逐滴添加氯甲酸甲酯(29.0 mL,0.375 mol),移除冷却浴且在环境温度下搅拌异质混合物3小时。在低压下移除溶剂且使残余物分配于EtOAc与水(各1 L)之间。用H2O(1 L)及盐水(1 L)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并在低压下浓缩。使粗材料通过硅胶塞(1 kg),用己烷(4 L)及15:85 EtOAc/己烷(4 L)洗脱,得到呈透明油状的(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸叔丁酯(82.0 g,99%产率)。
向(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸叔丁酯(82.0 g,0.355 mol)的CH2Cl2(675 mL)溶液中依序添加三氟乙酸(343 mL,4.62 mol)及Et3SiH(142 mL,0.887 mol),且在环境温度下搅拌混合物4小时。在低压下移除挥发性组分且用石油醚(600 mL)研磨所得油状物,得到白色固体,过滤并用己烷(500 mL)及石油醚(500 mL)洗涤。自EtOAc/石油醚中再结晶,得到呈白色片晶状的Cap-51(54.8 g,88%产率)。
注:光学纯度评估是对Cap-51的甲酯衍生物进行,该衍生物是根据标准TMSCHN2(苯/ MeOH)酯化方案制备。HPLC分析条件:柱,CHIRALPAK? AD-H(4.6×250 mm,5 μm);溶剂,95%庚烷/5% IPA(等强度);流速,1 mL/min;温度,35℃;在205 nm下UV监测。
(S)-2-(甲氧羰基氨基)丙酸
根据对于合成Cap-51所述的程序,由L-丙氨酸合成Cap-52。出于表征目的,通过反相HPLC(H2O/甲醇/TFA)提纯一部分粗材料,得到呈无色粘性油状的Cap-52。
Cap-53至Cap-64
根据对于合成Cap-51所述的程序,由适当起始物质制备Cap-53至Cap-64,应注意可能进行修改。
经5分钟将氯甲酸甲酯(0.65 mL,8.39 mmol)逐滴添加至经冷却的(冰水)Na2CO3(0.449 g,4.23 mmol)、NaOH(8.2 mL 1 M/H2O,8.2 mmol)及(S)-2-氨基-3-羟基-3-甲基丁酸(1.04 g,7.81 mmol)的混合物中。搅拌反应混合物45分钟,接着移除冷却浴且再持续搅拌3.75小时。用CH2Cl2洗涤反应混合物,用冰水浴冷却水相且用浓HCl酸化至1-2的pH值区。在真空中移除挥发性组分,将残余物溶解于MeOH/CH2Cl2的2:1混合物(15 mL)中并过滤,旋转蒸发滤液,得到呈白色半粘性泡沫状的Cap-65(1.236 g)。
通过使用对于合成Cap-65所述的程序,由适当市售起始物质制备Cap-66及Cap-67。
将氯甲酸甲酯(0.38 mL,4.9 mmol)逐滴添加至1 N NaOH(水溶液)(9.0 mL,9.0 mmol)、1 M NaHCO3(水溶液)(9.0 mL,9.0 mol)、L-天冬氨酸β-苯甲酯(1.0 g,4.5 mmol)及二噁烷(dioxane)(9 mL)的混合物中。在环境条件下搅拌反应混合物3小时,接着用乙酸乙酯(50 mL,3次)洗涤。用12 N HCl将水层酸化至pH~1-2,且用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩,得到呈淡黄色油状的Cap-68(1.37 g;质量超过理论产量,且产物不经进一步提纯即使用)。
将NaCNBH3(2.416 g,36.5 mmol)分批添加至经冷却(约15℃)的丙氨酸(1.338 g,15.0 mmol)的水(17 mL)/MeOH(10 mL)溶液中。数分钟后,经4分钟逐滴添加乙醛(4.0 mL,71.3 mmol),移除冷却浴,且在环境条件下搅拌反应混合物6小时。再添加乙醛(4.0 mL)且搅拌反应物2小时。将浓HCl缓慢添加至反应混合物中直至pH值达到约1.5,且在40℃下加热所得混合物1小时。在真空中移除大部分挥发性组分且用DOWEX? 50WX8-100离子交换树脂(用水洗涤柱,且用通过混合18 ml NH4OH与282 ml水制备的稀NH4OH洗脱化合物)提纯残余物,得到呈灰白色软吸湿性固体状的Cap-69(2.0 g)。
Cap-70至Cap-74x
根据对于合成Cap-69所述的程序,通过使用适当起始物质制备Cap-70至Cap-74x。
将NaBH3CN(1.6 g,25.5 mmol)添加至经冷却(冰/水浴)的H-D-Ser-OBzl HCl(2.0 g,8.6 mmol)的水(25 mL)/甲醇(15 mL)溶液中。经5分钟逐滴添加乙醛(1.5 mL,12.5 mmol),移除冷却浴,且在环境条件下搅拌反应混合物2小时。小心地用12 N HCl淬灭反应物且在真空中浓缩。将残余物溶解于水中且用反相HPLC(MeOH/H2O/TFA)提纯,得到呈无色粘性油状的(R)-2-(二乙基氨基)-3-羟基丙酸苯甲酯的三氟乙酸盐(1.9 g)。
将NaH(0.0727 g,1.82 mmol,60%)添加至经冷却(冰水)的以上所制备的(R)-2-(二乙基氨基)-3-羟基丙酸苯甲酯三氟乙酸盐(0.3019 g,0.8264 mmol)的THF(3.0 mL)溶液中且搅拌混合物15分钟。添加碘代甲烷(56 μL,0.90 mmol)且持续搅拌18小时,同时使浴解冻至环境条件。用水淬灭反应物且装载于经MeOH预调节的MCX(6 g)滤筒上并用甲醇洗涤,随后用2 N NH3/甲醇洗脱化合物。在真空中移除挥发性组分,得到呈黄色半固体状的受(R)-2-(二乙基氨基)-3-羟基丙酸污染的Cap-75(100 mg)。产物不经进一步提纯按原样使用。
将NaCNBH3(1.60 g,24.2 mmol)分批添加至经冷却(约15℃)的(S)-4-氨基-2-(叔丁氧羰基氨基)丁酸(2.17 g,9.94 mmol)的水/MeOH(各12 mL)溶液中。数分钟后,经2分钟逐滴添加乙醛(2.7 mL,48.1 mmol),移除冷却浴,且在环境条件下搅拌反应混合物3.5小时。再添加乙醛(2.7 mL,48.1 mmol)且搅拌反应物20.5小时。在真空中移除大部分MeOH组分,且用浓HCl处理剩余混合物直至其pH值达到约1.0,接着在40℃下加热2小时。在真空中移除挥发性组分,且用4 M HCl/二噁烷(20 mL)处理残余物并在环境条件下搅拌7.5小时。在真空中移除挥发性组分且用DOWEX? 50WX8-100离子交换树脂(用水洗涤柱且用由18 ml NH4OH及282 ml水制备的稀NH4OH洗脱化合物),得到呈灰白色固体状的中间体(S)-2-氨基-4-(二乙基氨基)丁酸(1.73 g)。
经11分钟将氯甲酸甲酯(0.36 mL,4.65 mmol)逐滴添加至经冷却(冰水)的Na2CO3(0.243 g,2.29 mmol)、NaOH(4.6 mL 1 M/H2O,4.6 mmol)及以上产物(802.4 mg)的混合物中。搅拌反应混合物55分钟,接着移除冷却浴且再持续搅拌5.25小时。用等体积水稀释反应混合物且用CH2Cl2(30 mL,2次)洗涤,用冰水浴冷却水相并用浓HCl酸化至2的pH值区。接着在真空中移除挥发性组分且用MCX树脂(6.0 g;用水洗涤柱,且用2.0 M NH3/MeOH洗脱样品)来使粗材料不含碱(free-based),得到呈灰白色固体状的不纯Cap-76(704 mg)。
根据对于Cap-7所述的程序,通过SN2置换步骤使用7-氮杂双环[2.2.1]庚烷,且通过使用以下条件实现中间体2-(7-氮杂双环[2.2.1]庚-7-基)-2-苯基乙酸苯甲酯的立体异构分离来进行Cap-77的合成:将中间体(303.7 mg)溶解于乙醇中,且将所得溶液注射于手性HPLC柱(Chiracel AD-H柱,30×250 mm,5 μm)上,在70 mL/min及35℃的温度下用90% CO2-10% EtOH洗脱,得到124.5 mg立体异构体-1及133.8 mg立体异构体-2。根据Cap-7的制备,使这些苯甲酯氢解,得到Cap-77:
将NaCNBH3(0.5828 g,9.27 mmol)添加至(R)-2-(乙基氨基)-2-苯基乙酸的盐酸盐(合成Cap-3的中间体;0.9923 mg,4.60 mmol)及(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(1.640 g,9.40 mmol)于MeOH(10 mL)中的混合物中,且用油浴在50℃下加热半异质混合物20小时。再添加(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷(150 mg,0.86 mmol)及NaCNBH3(52 mg,0.827 mmol)且再加热反应混合物3.5小时。接着使其冷却至环境温度且用浓HCl酸化至约2的pH值区,过滤混合物并旋转蒸发滤液。将所得粗材料溶解于i-PrOH(6 mL)中且加热以溶解,滤出未溶解部分并在真空中浓缩滤液。用反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)提纯约1/3所得粗材料,得到呈无色粘性油状的Cap-78的三氟乙酸盐(353 mg)。
将臭氧鼓泡通过经冷却(-78℃)的Cap-55(369 mg,2.13 mmol)的CH2Cl2(5.0 mL)溶液约50分钟直至反应混合物呈现蓝色色泽。添加Me2S(移液管10滴),且搅拌反应混合物35分钟。用-10℃浴置换-78℃浴且再持续搅拌30分钟,在真空中移除挥发性组分,得到无色粘性油状物。
将NaBH3CN(149 mg,2.25 mmol)添加至以上粗材料及吗啉(500 μL,5.72 mmol)的MeOH(5.0 mL)溶液中并在环境条件下搅拌混合物4小时。冷却至冰水温度且用浓HCl处理,使其pH值达约2.0,接着搅拌2.5小时。在真空中移除挥发性组分,且用MCX树脂(MeOH洗涤;2.0 N NH3/ MeOH洗脱)及反相HPLC(H2O/MeOH/TFA)的组合提纯残余物,得到含有未知量的吗啉的Cap-79。
为了除去吗啉污染物,将以上物质溶解于CH2Cl2(1.5 mL)中且依序用Et3N(0.27 mL,1.94 mmol)、乙酸酐(0.10 mL,1.06 mmol)处理并在环境条件下搅拌18小时。添加THF(1.0 mL)及H2O(0.5 mL)并持续搅拌1.5小时。在真空中移除挥发性组分,且使所得残余物通过MCX树脂(MeOH洗涤;2.0 N NH3/MeOH洗脱),得到呈棕色粘性油状的不纯Cap-79,其不经进一步提纯即用于下一步骤中。
经15分钟将SOCl2(6.60 mL,90.5 mmol)逐滴添加至经冷却(冰水)的(S)-3-氨基-4-(苯甲基氧基)-4-氧代丁酸(10.04 g,44.98 mmol)与MeOH(300 mL)的混合物中,移除冷却浴且在环境条件下搅拌反应混合物29小时。在真空中移除大部分挥发性组分且小心地使残余物分配于EtOAc(150 mL)与饱和NaHCO3溶液之间。用EtOAc(150 mL,2次)萃取水相,且干燥(MgSO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩,得到呈无色油状的(S)-2-氨基丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(9.706 g)。
经1分钟将Pb(NO3)2(6.06 g,18.3 mmol)添加至(S)-2-氨基丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(4.50 g,19.0 mmol)、9-溴-9-苯基-9H-芴(6.44 g,20.0 mmol)及Et3N(3.0 mL,21.5 mmol)的CH2Cl2(80 mL)溶液中,且在环境条件下搅拌异质混合物48小时。过滤混合物且用MgSO4处理滤液,再次过滤,并浓缩最终滤液。对所得粗材料进行BIOTAGE?提纯(350 g硅胶,CH2Cl2洗脱),得到呈高粘性无色油状的(S)-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(7.93 g)。
经10分钟将LiHMDS(9.2 mL 1.0 M/THF,9.2 mmol)逐滴添加至经冷却(-78℃)的(S)-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(3.907 g,8.18 mmol)的THF(50 mL)溶液中且搅拌约1小时。经8分钟将MeI(0.57 mL,9.2 mmol)逐滴添加至混合物中,且持续搅拌16.5小时,同时使冷却浴解冻至室温。用饱和NH4Cl溶液(5 mL)淬灭后,在真空中移除大部分有机组分且使残余物分配于CH2Cl2(100 mL)与水(40 mL)之间。干燥(MgSO4)有机层,过滤并在真空中浓缩,且用BIOTAGE?(350 g硅胶;25% EtOAc/己烷)提纯所得粗材料,得到3.65 g约1.0:0.65比率的3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯的2S/3S与2S/3R非对映异构混合物(1H NMR)。此时不测定主要异构体的立体化学,且混合物不经分离即进行下一步骤。
经10分钟将氢化二异丁基铝(20.57 ml 1.0 M己烷溶液,20.57 mmol)逐滴添加至经冷却(-78℃)的以上所制备的(2S)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁二酸1-苯甲酯4-甲酯(3.37 g,6.86 mmol)的THF(120 mL)溶液,且在-78℃下搅拌20小时。自冷却浴移出反应混合物且在搅拌下快速倾倒于约1 M H3PO4/H2O(250 mL)中,且用乙醚(100 mL,2次)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机相,干燥(MgSO4),过滤并在真空中浓缩。制备粗材料之硅胶筛网(silica gel mesh)且进行色谱分离(25% EtOAc/己烷;重力洗脱),得到1.1 g呈无色粘性油状的受苯甲醇污染的(2S,3S)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯及含有(2S,3R)立体异构体作为杂质的(2S,3R)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯。使后一样品再经受相同柱色谱提纯条件,得到750 mg呈白色泡沫状的提纯物质。[注:在以上条件下(2S,3S)异构体在(2S,3R)异构体之前洗脱出]。
基于对由各异构体制备的内酯衍生物进行的NOE研究,通过使用以下方案进行DIBAL还原产物的相对立体化学指定:将LiHMDS(50 μL 1.0 M/THF,0.05 mmol)添加至经冷却(冰水)的(2S,3S)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯(62.7 mg,0.135 mmol)的THF(2.0 mL)溶液中,且在类似温度下搅拌反应混合物约2小时。在真空中移除挥发性组分且使残余物分配于CH2Cl2(30 mL)、水(20 mL)与饱和NH4Cl水溶液(1 mL)之间。干燥(MgSO4)有机层,过滤并在真空中浓缩,且对所得粗材料进行BIOTAGE?提纯(40 g硅胶;10-15% EtOAc/己烷),得到呈无色固体膜状的(3S,4S)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氢呋喃-2(3H)-酮(28.1 mg)。类似地将(2S,3R)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯精制成(3S,4R)-4-甲基-3-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)二氢呋喃-2(3H)-酮。
依序将TBDMS-Cl(48 mg,0.312 mmol)、咪唑(28.8 mg,0.423 mmol)添加至(2S,3S)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯(119.5 mg,0.258 mmol)的CH2Cl2(3 ml)溶液中,且在环境条件下搅拌混合物14.25小时。接着用CH2Cl2(30 mL)稀释反应混合物且用水(15 mL)洗涤,干燥(MgSO4)有机层,过滤并在真空中浓缩。用BIOTAGE?(40 g硅胶;5% EtOAc/己烷)提纯所得粗材料,得到呈无色粘性油状的受基于TBDMS的杂质污染的(2S,3S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯(124.4 mg)。类似地将(2S,3R)-4-羟基-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯精制成(2S,3R)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯。
将氢气球连接于(2S,3S)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯(836 mg,1.447 mmol)与10% Pd/C(213 mg)于EtOAc(16 mL)的混合物且在室温下搅拌混合物约21小时,其中视需要向气球再充填H2。用CH2Cl2稀释反应混合物且经由硅藻土垫(CELITE?-545)过滤,且用EtOAc(200 mL)、EtOAc/MeOH (1:1混合物,200 mL)及MeOH(750 mL)洗涤该垫。浓缩合并的有机相,由所得粗材料制备硅胶筛网并进行快速色谱法(EtOAc/i-PrOH/H2O的8:2:1混合物),得到呈白色绒毛状固体的(2S,3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸(325 mg)。类似地将(2S,3R)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基-2-(9-苯基-9H-芴-9-基氨基)丁酸苯甲酯精制成(2S,3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸。
将水(1 mL)及NaOH(0.18 mL 1.0 M/H2O,0.18 mmol)添加至(2S,3S)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸(41.9 mg,0.169 mmol)与Na2CO3(11.9 mg,0.112 mmol)的混合物中,且声处理约1分钟以溶解反应物。接着用冰水浴冷却混合物,经30秒添加氯甲酸甲酯(0.02 mL,0.259 mmol),在类似温度下持续有力搅拌40分钟,接着在环境温度下有力搅拌2.7小时。用水(5 mL)稀释反应混合物,用冰水浴冷却且用1.0 N HCl水溶液(约0.23 mL)逐滴处理。进一步用水(10 mL)稀释混合物且用CH2Cl2(15 mL,2次)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩,得到呈灰白色固体状的Cap-80a。类似地将(2S,3R)-2-氨基-4-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)-3-甲基丁酸精制成Cap-80b。
根据对于Cap-51或Cap-13所述的程序,由适当起始物质合成Cap-82至Cap-85。样品展现类似于其立体异构体(亦即分别为Cap-4、Cap-13、Cap-51及Cap-52)的光谱概况。
(2S,3R)-3-甲氧基-2-(甲氧羰基氨基)丁酸
在0℃下向O-甲基-L-苏氨酸(3.0 g,22.55 mmol)、NaOH(0.902 g,22.55 mmol)于H2O(15 mL)中的混合物中逐滴添加ClCO2Me(1.74 mL,22.55 mmol)。使混合物搅拌12小时且使用1 N HCl酸化至pH 1。用EtOAc(2×250 mL)及10% MeOH的CH2Cl2溶液(250 mL)萃取水相且在真空下浓缩合并的有机相,得到无色油状物(4.18 g,97%),其具有足以用于后续步骤中的纯度。
在0℃下向L-高丝氨酸(2.0 g,9.79 mmol)、Na2CO3(2.08 g,19.59 mmol)于H2O(15 mL)中的混合物中逐滴添加ClCO2Me(0.76 mL,9.79 mmol)。使混合物搅拌48小时且使用1 N HCl酸化至pH 1。用EtOAc(2×250 mL)萃取水相且在真空中浓缩合并的有机相,得到无色固体(0.719 g,28%),其具有足以用于后续步骤中的纯度。
在100℃下将L-缬氨酸(1.0 g,8.54 mmol)、3-溴吡啶(1.8 mL,18.7 mmol)、K2CO3(2.45 g,17.7 mmol)及CuI(169 mg,0.887 mmol)于DMSO(10 mL)中的混合物加热12小时。将反应混合物冷却至室温,倾倒于H2O(约150 mL)中且用EtOAc(2次)洗涤。用少量H2O萃取有机层且用6 N HCl将合并的水相酸化至约pH 2。将体积减少至约三分之一且添加20 g阳离子交换树脂(Strata)。使浆料静置20分钟且装载于阳离子交换树脂(Strata)(约25 g)垫上。依序用H2O(200 mL)、MeOH(200 mL)及NH3(3 M MeOH溶液,2×200 mL)洗涤该垫。在真空中浓缩适当级分且将残余物(约1.1 g)溶解于H2O中,冷冻并冻干。获得呈泡沫状的标题化合物(1.02 g,62%)。
在100℃下将L-缬氨酸(1.0 g,8.54 mmol)、5-溴嘧啶(4.03 g,17.0 mmol)、K2CO3(2.40 g,17.4 mmol)及CuI(179 mg,0.94 mmol)于DMSO(10 mL)中的混合物加热12小时。将反应混合物冷却至室温,倾倒于H2O(约150 mL)中且用EtOAc(2次)洗涤。用少量H2O萃取有机层且用6 N HCl将合并的水相酸化至约pH 2。将体积减少至约三分之一且添加20 g阳离子交换树脂(Strata)。使浆料静置20分钟且装载于阳离子交换树脂(Strata)(约25 g)垫上。依序用H2O(200 mL)、MeOH(200 mL)及NH3(3 M MeOH溶液,2×200 mL)洗涤该垫。在真空中浓缩适当级分且将残余物(约1.1 g)溶解于H2O中,冷冻并冻干。获得呈泡沫状的标题化合物(1.02 g,62%)。1H NMR (400 MHz, CD3OD)显示混合物含有缬氨酸且无法估算纯度。将物质按原样用于后续反应中。
根据对于制备Cap-1所述的方法制备Cap-90。将粗材料按原样用于后续步骤中。
除非另外注明,否则根据用于制备Cap-51的方法制备以下Cap:
对于制备Cap-117至Cap-123,由商业来源获得Boc氨基酸且通过用25% TFA的CH2Cl2溶液处理来脱除保护基。如通过LCMS判断反应完成后,在真空中移除溶剂且根据对于Cap-51所述的程序,用氯甲酸甲酯使氨基酸的相应三氟乙酸盐氨基甲酰化(carbamoylated)。
根据Cap-51的程序,使L-苏氨酸叔丁酯的盐酸盐氨基甲酰化。用1 N HCl将粗反应混合物酸化至pH~1且用EtOAc(2×50 mL)萃取混合物。在真空中浓缩合并的有机相,产生无色油状物,其在静置后凝固。在真空中浓缩水层且用EtOAc-CH2Cl2-MeOH(1:1:0.1)研磨所得产物与无机盐的混合物,接着在真空中浓缩有机相,产生无色油状物,LCMS显示其为所需产物。合并两批,得到0.52 g固体。
向Pd(OH)2(20%,100 mg)、甲醛水溶液(37重量%,4 mL)、乙酸(0.5 mL)于甲醇(15 mL)中的悬浮液中添加(S)-4-氨基-2-(叔丁氧羰基氨基)丁酸(1 g,4.48 mmol)。用氢气吹扫反应物数次且用室温氢气球搅拌过夜。经由硅藻土(CELITE?)垫过滤反应混合物,且在真空中移除挥发性组分。将所得粗材料按原样用于下一步骤。
此程序为用于制备Cap-51的程序的修改。在0℃下向3-甲基-L-组氨酸(0.80 g,4.70 mmol)于THF(10 mL)及H2O(10 mL)中的悬浮液中添加NaHCO3(0.88 g,10.5 mmol)。用ClCO2Me(0.40 mL,5.20 mmol)处理所得混合物且在0℃下使混合物搅拌。搅拌约2小时后,LCMS显示无起始物质剩余。用6 N HCl将反应物酸化至pH 2。
在真空中移除溶剂且将残余物悬浮于20 mL 20% MeOH的CH2Cl2溶液中。过滤并浓缩混合物,产生淡黄色泡沫状物(1.21 g)。LCMS及1H NMR显示物质为甲酯与所需产物的9:1混合物。将此物质溶解于THF(10 mL)及H2O(10 mL)中,冷却至0℃且添加LiOH(249.1 mg,10.4 mmol)。搅拌约1小时后,LCMS显示无酯剩余。因此,用6 N HCl酸化混合物且在真空中移除溶剂。LCMS及1H NMR证实不存在酯。获得受无机盐污染的呈盐酸盐形式的标题化合物(1.91 g,>100%)。化合物不经进一步提纯按原样用于后续步骤中。
根据以上用于Cap-126的方法,以(S)-2-氨基-3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)丙酸(1.11 g,6.56 mmol)、NaHCO3(1.21 g,14.4 mmol)及ClCO2Me(0.56 mL,7.28 mmol)作为起始物质来制备Cap-127。获得受无机盐污染的呈盐酸盐形式的标题化合物(1.79 g,>100%)。LCMS及1H NMR显示存在约5%甲酯。粗混合物不经进一步提纯按原样使用。
在0℃下向cj-27a(1.01 g,4.74 mmol)、DMAP(58 mg,0.475 mmol)及iPr2NEt(1.7 mL,9.8 mmol)于CH2Cl2(100 mL)中的溶液中添加Cbz-Cl(0.68 mL,4.83 mmol)。在0℃下使溶液搅拌4小时,洗涤(1 N KHSO4、盐水),干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩。通过快速柱色谱(TLC 6:1 hex:EtOAc)提纯残余物,产生呈无色油状的标题化合物(1.30 g,91%)。
在室温下向(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)戊-4-炔酸苯甲酯(0.50 g,1.65 mmol)、抗坏血酸钠(0.036 g,0.18 mmol)、CuSO4-5H2O(0.022 g,0.09 mmol)及NaN3(0.13 g,2.1 mmol)于DMF-H2O(5 mL,4:1)中的混合物中添加BnBr(0.24 mL,2.02 mmol)且使混合物升温至65℃。5小时后,LCMS指示转化率低。添加另一部分NaN3(100 mg)且持续加热12小时。将反应物倾倒于EtOAc及H2O中并震荡。分离各层且用EtOAc萃取水层3次,洗涤(H2O×3、盐水)合并的有机相,干燥(Na2SO4),过滤并浓缩。通过快速(BIOTAGE?,40+M 0-5% MeOH的CH2Cl2溶液;TLC 3% MeOH的CH2Cl2溶液)提纯残余物,得到淡黄色油状物,其在静置后凝固(748.3 mg,104%)。NMR与所需产物一致,但表明存在DMF。该物质不经进一步提纯按原样使用。
向(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸苯甲酯(0.52 g,1.15 mmol)的CH2Cl2溶液中添加TFA(4 mL)。使混合物在室温下搅拌2小时。在真空中浓缩混合物,产生无色油状物,其在静置后凝固。将此物质溶解于THF-H2O中并冷却至0℃。添加固体NaHCO3(0.25 g,3.00 mmol),随后添加ClCO2Me(0.25 mL,3.25 mmol)。搅拌1.5小时后,用6 N HCl将混合物酸化至pH~2,接着倾倒于H2O-EtOAc中。分离各层且用EtOAc萃取水相2次。洗涤(H2O、盐水)合并的有机层,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩,产生无色油状物(505.8 mg,111%,NMR表明存在未经鉴别的杂质),其在泵上静置后凝固。该物质不经进一步提纯按原样使用。
在大气压下,在含Pd-C(82 mg)的MeOH(5 mL)存在下使(S)-3-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-(甲氧羰基氨基)丙酸苯甲酯氢化12小时。经由硅藻土(CELITE?)过滤混合物且在真空中浓缩。获得呈无色胶状的(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙酸(266 mg,111%),其受约10%甲酯污染。该物质不经进一步提纯按原样使用。
在50℃下将(S)-2-氧代氧杂环丁烷-3-基氨基甲酸苯甲酯(0.67 g,3.03 mmol)及吡唑(0.22 g,3.29 mmol)于CH3CN(12 mL)中的悬浮液加热24小时。将混合物冷却至室温过夜且过滤固体,得到(S)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(330.1 mg)。在真空中浓缩滤液,接着用少量CH3CN(约4 mL)研磨,得到第二批(43.5 mg)。总产量为370.4 mg(44%)。熔点165.5-168℃。文献中的熔点168.5-169.5
在大气压下,在含Pd-C(45 mg)的MeOH(5 mL)存在下使(S)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-3-(1H-吡唑-1-基)丙酸(0.20 g,0.70 mmol)氢化2小时。产物似乎不溶于MeOH中,因此,用5 mL H2O及数滴6 N HCl稀释反应混合物。经由硅藻土(CELITE?)过滤均质溶液,且在真空中移除MeOH。冷冻及冻干剩余溶液,产生黄色泡沫(188.9 mg)。将此物质悬浮于THF-H2O(1:1,10 mL)中,接着冷却至0℃。小心地向冷混合物中添加NaHCO3(146.0 mg,1.74 mmol)(析出CO2)。气体析出停止(约15分钟)后,逐滴添加ClCO2Me (0.06 mL,0.78 mmol)。使混合物搅拌2小时且用6 N HCl酸化至pH~2并倾倒于EtOAc中。分离各层且用EtOAc(5次)萃取水相。洗涤(盐水)合并的有机层,干燥(Na2SO4),过滤并浓缩,产生呈无色固体状的标题化合物(117.8 mg,79%)。
通过类似于以下文献中所给的程序使市售(R)-苯基甘氨酸酰化来制备Cap-130:Calmes, M.等人,Tetrahedron, 43(10):2285 (1987)。
步骤a:将二甲基氨基甲酰氯(0.92 mL,10 mmol)缓慢添加至(S)-2-氨基-3-甲基丁酸苯甲酯盐酸盐(2.44 g;10 mmol)及亨氏碱(3.67 mL,21 mmol)于THF(50 mL)中的溶液中。在室温下搅拌所得白色悬浮液(16小时)过夜并在减压下浓缩。使残余物分配于乙酸乙酯与水之间。用盐水洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并在减压下浓缩。通过快速色谱法提纯所得黄色油状物,用乙酸乙酯:己烷(1:1)洗脱。在真空下浓缩所收集的级分,得到2.35 g(85%)透明油状物。
步骤b:向以上制备的中间体(2.35 g;8.45 mmol)的MeOH(50 mL)溶液中添加Pd/C(10%;200 mg)且用N2(3次)冲洗所得黑色悬浮液并置于1 atm H2下。在室温下搅拌混合物过夜且经由微纤维滤纸过滤以移除催化剂。接着在减压下浓缩所得透明溶液,获得1.43 g(89%)呈白色泡沫状的Cap-131,其不经进一步提纯即使用。
根据对于Cap-131所述的方法,由(S)-2-氨基丙酸苯甲酯盐酸盐制备Cap-132。
根据对于Cap-47所述的方法,由(S)-2-氨基-3-甲基丁酸叔丁酯盐酸盐及氯甲酸2-氟乙酯制备Cap-133。
根据对于Cap-51所述的方法,由(S)-二乙基丙氨酸及氯甲酸甲酯制备Cap-134。
在25℃下使D-2-氨基-(4-氟苯基)乙酸(338 mg,2.00 mmol)、1 N HCl的乙醚溶液(2.0 mL,2.0 mmol)及福尔马林(37%,1 mL)于甲醇(5 mL)中的溶液在10%钯/碳(60 mg)上进行气球氢化16小时。接着经由CELITE?过滤混合物,得到呈白色泡沫状的Cap-135的盐酸盐(316 mg,80%)。
在氮气下向经冷却(-50℃)的1-苯甲基-1H-咪唑(1.58 g,10.0 mmol)的无水乙醚(50 mL)悬浮液中逐滴添加正丁基锂(2.5 M己烷溶液,4.0 mL,10.0 mmol)。在-50℃下搅拌20分钟后,将干二氧化碳(通过燥石膏)鼓泡至反应混合物中历时10分钟,随后使其升温至25℃。将向反应混合物中添加二氧化碳后所形成的重沉淀物过滤,得到吸湿性白色固体,将其溶解于水(7 mL)中,酸化至pH=3,冷却并用刮擦诱发结晶。过滤此沉淀物,产生白色固体,将其悬浮于甲醇中,用1 N HCl/乙醚(4 mL)处理且在真空中浓缩。自水(5 mL)冻干残余物,得到呈白色固体状的Cap-136的盐酸盐(817 mg,40%)。
在80℃下在氮气下将1-氯-3-氰基异喹啉(188 mg,1.00 mmol;根据WO 2003/099274中的程序制备)(188 mg,1.00 mmol)、氟化铯(303.8 mg,2.00 mmol)、二氯化双(三叔丁基膦)钯(10 mg,0.02 mmol)及2-(三丁基锡烷基)呋喃(378 μL,1.20 mmol)于无水二噁烷(10 mL)中的悬浮液加热16小时,随后将其冷却至25℃且在有力搅拌下用饱和氟化钾水溶液处理1小时。使混合物分配于乙酸乙酯与水之间且分离有机相,用盐水洗涤,经Na2SO4干燥,过滤并浓缩。对残余物进行硅胶提纯(用0%至30%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到呈白色固体状的Cap-137步骤a(230 mg,105%),其按原样使用。
向Cap-137步骤a(110 mg,0.50 mmol)及过碘酸钠(438 mg,2.05 mmol)于四氯化碳(1 mL)、乙腈(1 mL)及水(1.5 mL)中的悬浮液中添加水合三氯化钌(2 mg,0.011 mmol)。在25℃下搅拌混合物2小时,接着分配于二氯甲烷与水之间。分离水层,再用二氯甲烷萃取两次且经Na2SO4干燥合并的二氯甲烷萃取物,过滤并浓缩。用己烷研磨残余物,得到呈浅灰色固体状的Cap-137(55 mg,55%)。
向经搅拌的5-羟基异喹啉(根据WO 2003/099274中的程序制备)(2.0 g,13.8 mmol)及三苯基膦(4.3 g,16.5 mmol)于无水四氢呋喃(20 mL)中的悬浮液中逐份添加无水甲醇(0.8 mL)及偶氮二甲酸二乙酯(3.0 mL,16.5 mmol)。在室温下搅拌混合物20小时,随后用乙酸乙酯稀释且用盐水洗涤,经Na2SO4干燥,过滤并浓缩。将残余物预吸附于硅胶上且提纯(用40%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到呈淡黄色固体状的Cap-138步骤a(1.00 g,45%)。
在室温下向经搅拌的Cap-138步骤a(2.34 g,14.7 mmol)的无水二氯甲烷(50 mL)溶液中整份添加间氯过苯甲酸(77%,3.42 g,19.8 mmol)。搅拌20小时后,添加粉末状碳酸钾(2.0 g)且在室温下搅拌混合物1小时,随后过滤并浓缩,得到呈淡黄色固体状的Cap-138步骤b,其纯度足以用于后续步骤(2.15 g,83.3%)。
在室温下在氮气下向经搅拌的Cap-138步骤b(0.70 g,4.00 mmol)及三乙胺(1.1 mL,8.00 mmol)于无水乙腈(20 mL)中的溶液中添加三甲基甲硅烷基氰化物(1.60 mL,12.00 mmol)。在75℃下加热混合物20小时,随后冷却至室温,用乙酸乙酯稀释且用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤,随后经Na2SO4干燥并浓缩溶剂。对残余物进行硅胶快速色谱法(用5%乙酸乙酯/己烷至25%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到呈白色结晶固体状的Cap-138步骤c(498.7 mg)以及另外223 mg自滤液回收的Cap-138步骤c。
用5 N氢氧化钠溶液(10 mL)处理Cap-138步骤c(0.45 g,2.44 mmol)且在85℃下加热所得悬浮液4小时,冷却至25℃,用二氯甲烷稀释并用1 N盐酸酸化。分离有机相,用盐水洗涤,经Na2SO4干燥,浓缩至1/4体积且过滤,得到呈黄色固体状的Cap-138(0.44 g,88.9%)。
向含有经氩气脱气的1-氯-6-甲氧基异喹啉(1.2 g,6.2 mmol;根据WO 2003/099274中的程序制备)、氰化钾(0.40 g,6.2 mmol)、1,5-双(二苯基膦基)戊烷(0.27 g,0.62 mmol)及乙酸钯(II)(70 mg,0.31 mmol)于无水甲苯(6 mL)中的悬浮液的厚壁螺旋盖小瓶中添加N,N,N',N'-四甲基乙二胺(0.29 mL,2.48 mmol)。密封该小瓶,在150℃下加热22小时,接着使其冷却至25℃。用乙酸乙酯稀释反应混合物,用水及盐水洗涤,经Na2SO4干燥,过滤并浓缩。用5%乙酸乙酯/己烷至25%乙酸乙酯/己烷洗脱来对残余物进行硅胶提纯,得到呈白色固体状的Cap-139步骤a(669.7 mg)。
根据对于Cap-138所述的程序,通过用5 N NaOH使Cap-139步骤a碱性水解来制备Cap-139。
在25℃下在氮气下向经有力搅拌的1,3-二氯-5-乙氧基异喹啉(482 mg,2.00 mmol;根据WO 2005/051410中的程序制备)、乙酸钯(II)(9 mg,0.04 mmol)、碳酸钠(223 mg,2.10 mmol)及1,5-双(二苯基膦基)戊烷(35 mg,0.08 mmol)于无水二甲基乙酰胺(2 mL)中的混合物中添加N,N,N',N'-四甲基乙二胺(60 mL,0.40 mmol)。10分钟后,将混合物加热至150℃,接着经18小时使用注射泵以1 mL份添加丙酮氰醇的储备溶液(由含457 μL丙酮氰醇的4.34 mL DMA制备)。接着使混合物分配于乙酸乙酯与水之间且分离有机层,用盐水洗涤,经Na2SO4干燥,过滤并浓缩。用10%乙酸乙酯/己烷至40%乙酸乙酯/己烷洗脱来对残余物进行硅胶提纯,得到呈黄色固体状的Cap-140步骤a(160 mg,34%)。
通过如下文所述的用于制备Cap-141的程序中所述,用12 N HCl使Cap-140步骤a酸水解来制备Cap-140.
如用于制备Cap-140步骤a的程序(见上)中所述,由1-溴-3-氟异喹啉(使用J. Med. Chem., 13:613 (1970)中所概述的程序,由3-氨基-1-溴异喹啉制备)制备Cap-141步骤a。
用12 N HCl(3 mL)处理Cap-141步骤a(83 mg,0.48 mmol)且在80℃下加热所得浆料16小时,随后冷却至室温并用水(3 mL)稀释。搅拌混合物10分钟,接着过滤,得到呈灰白色固体状的Cap-141(44.1 mg,47.8%)。用二氯甲烷稀释滤液且用盐水洗涤,经Na2SO4干燥并浓缩,另外得到Cap-141,其纯度足以直接用于后续步骤(29.30 mg,31.8%)。
如用于制备Cap-138步骤b及c的两步程序中所述,由4-溴异喹啉N-氧化物制备Cap-142步骤a。
向经氩气脱气的Cap-142步骤a(116 mg,0.50 mmol)、磷酸三钾(170 mg,0.80 mmol)、乙酸钯(II)(3.4 mg,0.015 mmol)及2-(二环己基膦基)联苯(11 mg,0.03 mmol)于无水甲苯(1 mL)中的悬浮液中添加吗啉(61 μL,0.70 mmol)。在100℃下加热混合物16小时,冷却至25℃且经由硅藻土(CELITE?)过滤。用10%至70%乙酸乙酯/己烷洗脱来对残余物进行硅胶提纯,得到呈黄色固体状的Cap-142步骤b(38 mg,32%),其直接用于后续步骤。
如用于Cap-138的程序中所述,用5 N氢氧化钠,由Cap-142步骤b制备Cap-142。
向经搅拌的3-氨基-1-溴异喹啉(444 mg,2.00 mmol)的无水二甲基甲酰胺(10 mL)溶液中整份添加氢化钠(60%,未洗涤,96 mg,2.4 mmol)。在25℃下搅拌混合物5分钟,随后添加2-溴乙醚(90%,250 μL,2.00 mmol)。进一步在25℃下搅拌混合物5小时且在75℃下搅拌72小时,随后冷却至25℃,用饱和氯化铵溶液淬灭并用乙酸乙酯稀释。分离有机层,用水及盐水洗涤,经Na2SO4干燥,过滤并浓缩。用0%至70%乙酸乙酯/己烷来洗脱对残余物进行硅胶提纯,得到呈黄色固体状的Cap-143步骤a(180 mg,31%)。
向冷(-60℃)的Cap-143步骤a(154 mg,0.527 mmol)的无水四氢呋喃(5 mL)溶液中添加正丁基锂的己烷溶液(2.5 M,0.25 mL,0.633 mmol)。10分钟后,将干二氧化碳鼓泡至反应混合物中10分钟,随后用1 N HCl淬灭且使其升温至25℃。接着用二氯甲烷(3×30 mL)萃取混合物且在真空中浓缩合并的有机萃取物。通过反相HPLC(MeOH/水/TFA)提纯残余物,得到Cap-143(16 mg,12%)。
将1,3-二氯异喹啉(2.75 g,13.89 mmol)以小份添加至冷(0℃)的发烟硝酸(10 mL)及浓硫酸(10 mL)的溶液中。在0℃下搅拌混合物0.5小时,随后逐渐升温至25℃,其中搅拌16小时。接着将混合物倾倒于含有碎冰及水的烧杯中且在0℃下搅拌所得悬浮液1小时,随后过滤,得到呈黄色固体状的Cap-144步骤a(2.73 g,81%),其直接使用。
将Cap-144步骤a(0.30 g,1.23 mmol)溶解于甲醇(60 mL)中且用氧化铂(30 mg)处理,并使悬浮液在7 psi H2下进行帕尔氢化(Parr hydrogenation)1.5小时。接着添加福尔马林(5 mL)及另外氧化铂(30 mg),且使悬浮液在45 psi H2下再进行帕尔氢化13小时。接着经由硅藻土(CELITE?)抽滤并浓缩至1/4体积。抽滤产生的沉淀物,得到呈黄色固体状的标题化合物,用含5%乙酸乙酯的己烷至含25%乙酸乙酯的己烷洗脱来进行硅胶快速色谱法,得到呈浅黄色固体状的Cap-144步骤b(231 mg,78%)。
根据对于制备Cap-139步骤a所述的程序,由Cap-144步骤b制备Cap-144步骤c。
根据对于Cap-141所述的程序,制备Cap-144。
除非如下文所概述另外注明,否则根据对于制备Cap-138(方法A)或Cap-139(方法B)所述的程序,由适当1-氯异喹啉制备Cap-145至Cap-162。
向2-丁酮酸(2-ketobutyric acid)(1.0 g,9.8 mmol)的乙醚(25 mL)溶液中逐滴添加溴化苯基镁(22 mL,1 M THF溶液)。在约25℃下在氮气下搅拌反应物17.5小时。用1 N HCl酸化反应物且用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取产物。依序用水、盐水洗涤合并的有机层并经MgSO4干燥。在真空中浓缩后,获得白色固体。使固体自己烷/乙酸乙酯中再结晶,得到呈白色针状的Cap-163(883.5 mg)。
在帕尔(Parr)瓶中,使2-氨基-2-苯基丁酸(1.5 g,8.4 mmol)、甲醛(14 mL,37%水溶液)、1 N HCl(10 mL)及10% Pd/C(0.5 mg)于MeOH(40 mL)中的混合物暴露于50 psi的H2历时42小时。经由CELITE?过滤反应物且在真空中浓缩,将残余物溶解于MeOH(36 mL)中且用反相HPLC(MeOH/ H2O/TFA)提纯产物,得到呈白色固体状的Cap-164的三氟乙酸盐(1.7 g)。
向2-氨基-2-茚满甲酸(258.6 mg,1.46 mmol)及甲酸(0.6 mL,15.9 mmol)于1,2-二氯乙烷(7 ml)中的混合物中添加甲醛(0.6 mL,37%水溶液)。在约25℃下搅拌混合物15分钟,接着在70℃下加热8小时。在真空中移除挥发性组分,且将残余物溶解于DMF(14 mL)中并通过反相HPLC (MeOH/H2O/TFA)提纯,得到呈粘性油状的Cap-165的三氟乙酸盐(120.2 mg)。
根据对于合成Cap-7a及Cap-7b所述的方法,由(1S, 4S)-(+)-2-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷(2HBr)制备Cap-166a及Cap-166b,例外为使用半制备型Chrialcel OJ柱,20×250 mm,10 μm,用85:15庚烷/乙醇混合物以10 mL/ min洗脱速率洗脱来分离苯甲酯中间体历时25分钟。
在约25℃下搅拌外消旋Boc-1,3-二氢-2H-异吲哚甲酸(1.0 g,3.8 mmol)的20% TFA/CH2Cl2溶液4小时。在真空中移除所有挥发性组分。在帕尔瓶中,将所得粗材料、甲醛(15 mL,37%水溶液)、1 N HCl(10 mL)及10% Pd/C(10 mg)于MeOH中的混合物暴露于H2(40 PSI)历时23小时。经由CELITE?过滤反应混合物且在真空中浓缩,得到呈黄色泡沫状的Cap-167(873.5 mg)。
根据对于制备Cap-167所述的程序,由外消旋Boc-氨基茚满-1-甲酸制备外消旋Cap-168。按原样使用粗材料。
将2-氨基-2-苯基丙酸盐酸盐(5.0 g,2.5 mmol)、甲醛(15 mL,37%水溶液)、1 N HCl(15 mL)及10% Pd/C (1.32 g)于MeOH(60 mL)中的混合物置于帕尔瓶中且在氢气(55 PSI)下震荡4天。经由CELITE?过滤反应混合物且在真空中浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过反相制备型-HPLC(MeOH/水/TFA)提纯,得到呈粘性半固体状的Cap-169的三氟乙酸盐(2.1 g)。
(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸
向(S)-2-氨基-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(505 mg;3.18 mmol;自Astatech获得)的水(15 ml)溶液中添加碳酸钠(673 mg;6.35 mmol),且将所得混合物冷却至0℃,接着经5分钟逐滴添加氯甲酸甲酯(0.26 ml;3.33 mmol)。使反应物搅拌18小时,同时使浴解冻至环境温度。接着使反应混合物分配于1 N HCl与乙酸乙酯之间。移除有机层且进一步再用2份乙酸乙酯萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层,经由硫酸镁干燥,过滤并在真空中浓缩,得到无色残余物Cap-170。
通过鼓泡氮气来使2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-亚基)乙酸甲酯(200 mg,0.721 mmol;Il Farmaco (2001), 56, 609-613)于乙酸乙酯(7 ml)及CH2Cl2(4.00 ml)中的溶液脱气10分钟。接着添加二碳酸二甲酯(dimethyl dicarbonate)(0.116 ml,1.082 mmol)及Pd/C(20 mg,0.019 mmol),对反应混合物装备氢气球且使其在环境温度下搅拌过夜,此时TLC(95:5 CH2Cl2/MeOH:用由1 g Ce(NH4)2SO4、6 g钼酸铵、6 ml硫酸及100 ml水制成的染色剂显色)指示完全转化。经由CELITE?过滤反应物并浓缩。经由BIOTAGE?(用二氯甲烷装载于25 samplet上;在25S柱上用3CV的二氯甲烷洗脱,接着250 ml的0%至5% MeOH/二氯甲烷,接着保持250 ml的5% MeOH/二氯甲烷;9 mL级分)提纯残余物。收集含有所需物质的级分并浓缩成120 mg(81%)呈无色油状的2-(甲氧羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯。
向含2-(甲氧羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸甲酯(50 mg,0.246 mmol)的THF(2 mL)及水(0.5 mL)中添加单水合氢氧化锂(10.33 mg,0.246 mmol)。使所得溶液在环境温度下搅拌过夜。TLC(1:1 EA/Hex;哈呢森染色剂(Hanessian stain)[1 g Ce(NH4)2SO4、6 g钼酸铵、6 ml硫酸及100 ml水]指示约10%起始物质剩余。再添加3 mg LiOH且使其搅拌过夜,此时TLC显示无起始物质剩余。在真空中浓缩且置于高真空过夜,得到55 mg呈无色固体状的2-(甲氧羰基氨基)-2-(氧杂环丁烷-3-基)乙酸锂。
以下重氮化步骤由Barton, A.等人,J. C. S. Perkin Trans I, 159-164 (1982)改编而来:将NaNO2(166 mg,2.4 mmol)的水(0.6 mL)溶液缓慢添加至经搅拌的冷(0℃)的2-氨基-5-乙基-1,3-噻唑-4-甲酸甲酯(186 mg,1.0 mmol)、CuSO4·5H2O (330 mg,1.32 mmol)、NaCl(260 mg,4.45 mmol)及H2SO4 (5.5 mL)的水(7.5 mL)溶液中。在0℃下搅拌混合物45分钟且使其升温至室温,其中再搅拌1小时,随后添加CuCl(118 mg)。进一步在室温下搅拌此混合物16小时,随后用盐水稀释且用乙醚萃取两次。合并有机层,经MgSO4干燥并浓缩,产生呈橙色油状物(80%纯度)的2-氯-5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(亦即Cap-172步骤a)(175 mg,85%),其直接用于下一反应中。
向2-氯-5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(175 mg)的THF/H2O/ MeOH(20 mL/3 mL/12 mL)溶液中添加LiOH(305 mg,12.76 mmol)。在室温下搅拌混合物过夜,随后浓缩并用1 N HCl的乙醚溶液(25 mL)中和。用乙酸乙酯萃取残余物两次且合并有机层,经MgSO4干燥并蒸发,得到呈红色固体状的Cap-172(60 mg,74%),其不经进一步提纯即使用。
以下重氮化步骤由Barton, A.等人,J.C.S. Perkin Trans I, 159-164 (1982)改编而来:将NaNO2(150 mg,2.17 mmol)的水(1.0 mL)溶液逐滴添加至经搅拌的冷(0℃)的2-氨基-5-乙基-1,3-噻唑-4-甲酸甲酯(186 mg,1.0 mmol)的50% H3PO2(3.2 mL)溶液中。在0℃下搅拌混合物1小时且使其升温至室温,其中再搅拌2小时。再冷却至0℃后,用NaOH(85 mg)的水(10 mL)溶液缓慢处理混合物。接着用饱和NaHCO3溶液稀释混合物且用乙醚萃取两次。合并有机层,经MgSO4干燥并浓缩,产生呈橙色油状(85%纯度)的5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(亦即Cap-173步骤a)(134 mg,78%),其直接用于下一反应中。
向5-乙基噻唑-4-甲酸甲酯(134 mg)的THF/H2O/MeOH(18 mL/2.7 mL/11 mL)溶液中添加LiOH(281 mg,11.74 mmol)。在室温下搅拌混合物过夜,随后浓缩并用1 N HCl的乙醚溶液(25 mL)中和。用乙酸乙酯萃取残余物两次且合并有机层,经MgSO4干燥并蒸发,得到呈橙色固体状的Cap-173(90 mg,73%),其不经进一步提纯即使用。
将三氟甲磺酸酐(triflic anhydride)(5.0 g,18.0 mmol)逐滴添加至冷(0℃)的3-羟基吡啶甲酸甲酯(methyl 3-hydroxypicolinate)(2.5 g,16.3 mmol)及TEA(2.5 mL,18.0 mmol)于CH2Cl2(80 mL)中的溶液中。在0℃下搅拌混合物1小时,随后使其升温至室温,其中再搅拌1小时。接着用饱和NaHCO3溶液(40 mL)淬灭混合物且分离有机层,用盐水洗涤,经MgSO4干燥并浓缩,产生呈深棕色油状的3-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶甲酸甲酯(methyl 3-(trifluoromethylsulfonyloxy)picolinate)(亦即Cap-174步骤a)(3.38 g,73%)(>95%纯度),其不经进一步提纯即直接使用。
向3-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶甲酸甲酯(570 mg,2.0 mmol)的DMF(20 mL)溶液中添加LiCl(254 mg,6.0 mmol)、三丁基(乙烯基)锡烷(tributyl(vinyl)stannane)(761 mg,2.4 mmol)及二氯化双(三苯基膦)钯(42 mg,0.06 mmol)。在100℃下加热混合物过夜,随后在室温下将饱和KF溶液(20 mL)添加至反应混合物中。搅拌此混合物4小时,随后经由CELITE?过滤且用乙酸乙酯洗涤CELITE?垫。接着分离滤液的水相并在真空中浓缩。用4 N HCl的二噁烷溶液(5 mL)处理残余物且用甲醇萃取所得混合物,过滤并蒸发,得到呈绿色固体状的Cap-174(260 mg),其略受无机盐污染,但不经进一步提纯即使用。
向3-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶甲酸甲酯(亦即Cap-174步骤a)(570 mg,2.0 mmol)(其为制备Cap-174的中间体)的DMF(20 mL)溶液中添加LiCl(254 mg,6.0 mmol)、三丁基(乙烯基)锡烷(761 mg,2.4 mmol)及二氯化双(三苯基膦)钯(42 mg,0.06 mmol)。在100℃下加热混合物4小时,随后在真空中移除溶剂。将残余物溶解于乙腈(50 mL)及己烷(50 mL)中且用己烷洗涤所得混合物两次。接着分离乙腈层,经由CELITE?过滤并蒸发。通过在赫氏仪器(Horizon instrument)上快速色谱法(用含25%乙酸乙酯的己烷至含65%乙酸乙酯的己烷梯度洗脱)提纯残余物,得到呈黄色油状的3-乙烯基吡啶甲酸甲酯(methyl 3-vinylpicolinate)(亦即Cap-175步骤a)(130 mg,40%)。
将钯/碳(10%,25 mg)添加至3-乙烯基吡啶甲酸甲酯(120 mg,0.74 mmol)的乙醇(10 mL)溶液中。在室温下在氢气氛围下搅拌悬浮液1小时,随后经由CELITE?过滤且用甲醇洗涤CELITE?垫。将滤液浓缩至干,得到3-乙基吡啶甲酸甲酯(methyl 3-ethylpicolinate)(亦即Cap-175步骤b),其直接用于下一反应中。
向3-乙基吡啶甲酸甲酯的THF/H2O/MeOH(5 mL/0.75 mL/3 mL)溶液中添加LiOH(35 mg,1.47 mmol)。在室温下搅拌混合物2天,随后再添加LiOH(80 mg)。在室温下再24小时,过滤混合物且在真空中移除溶剂。接着用4 N HCl的二噁烷溶液(5 mL)处理残余物且将所得悬浮液浓缩至干,得到呈黄色固体状的Cap-175,其不经进一步提纯即使用。
将1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮(15 g,96 mmol)的EtOAc (150 mL)溶液添加至2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(21.21 g,64.0 mmol)于1,1,3,3-四甲基胍(10.45 mL,83 mmol)及EtOAc(150 mL)中的溶液中。在环境温度下搅拌所得溶液72小时,接着用EtOAc(25 mL)稀释。用1 N HCl(75 mL)、H2O(100 mL)及盐水(100 mL)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩。经由BIOTAGE?(5%至25% EtOAc/己烷;300 g柱)提纯残余物。接着在真空下浓缩合并的含有产物的级分且使残余物自己烷/EtOAc中再结晶,产生对应于2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-亚基)乙酸甲酯(6.2 g)的白色晶体。
根据Burk, M.J.等人(J. Am. Chem. Soc., 117:9375-9376 (1995)及其中的参考文献)的方法,由烯烃Cap-176步骤a制备酯Cap-176步骤b:在N2层下将含烯烃Cap-176步骤a(3.5 g,9.68 mmol)的经脱气MeOH(200 mL)装入500 mL高压瓶中。接着向溶液中装入四氟硼酸(-)-1,2-双((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊基)乙烷(环辛二烯)铑(I)((-)-1,2-Bis((2S,5S)-2,5-dimethylphospholano)ethane(cyclooctadiene) rhodium (I) tetrafluoroborate)(0.108 g,0.194 mmol)且用N2(3次)冲洗所得混合物并装入H2(3次)。在环境温度下在70 psi H2下有力地震荡溶液72小时。在减压下移除溶剂且将剩余残余物溶解于EtOAc中。接着经由硅胶塞过滤淡棕色溶液并用EtOAc洗脱。在真空下浓缩溶剂,得到对应于酯Cap-176步骤b(3.4 g)的透明油状物。
将酯Cap-176步骤b(4.78 g,13.15 mmol)溶解于THF(15 mL)中,随后依序添加水(10 mL)、冰乙酸(26.4 mL,460 mmol)及二氯乙酸(5.44 mL,65.8 mmol)。在环境温度下搅拌所得混合物72小时,且通过在有力搅拌下减慢添加固体Na2CO3直至不再见到气体释放来淬灭反应物。用10%乙酸乙酯-二氯甲烷萃取粗产物且合并有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩。经由BIOTAGE?(0至30% EtOAc/Hex;25 g柱)提纯所得残余物,得到呈透明油状的酮Cap-176步骤c(3.86 g)。
将DEOXO-FLUOR?(3.13 mL,16.97 mmol)添加至酮Cap-176步骤c(2.71 g,8.49 mmol)的CH2Cl2(50 mL)溶液中,随后添加催化量的EtOH(0.149 mL,2.55 mmol)。在室温下搅拌所得浅黄色溶液过夜。通过添加饱和NaHCO3水溶液(25 mL)来淬灭反应物且用EtOAc(3×75 mL)萃取混合物。干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并干燥,产生浅黄色油状物。经由BIOTAGE?色谱(2%至15% EtOAc/Hex;90 g柱)提纯残余物且回收对应于二氟氨基酸二氟化物Cap-176步骤d(1.5 g)的白色固体。
将二氟化物Cap-176步骤d(4 g,11.72 mmol)溶解于MeOH(120 mL)中且装入Pd/C(1.247 g,1.172 mmol)。用N2(3次)冲洗悬浮液且将反应混合物置于1 atm H2(气球)下。在环境温度下搅拌混合物48小时。接着经由CELITE?塞过滤悬浮液且在真空下浓缩,产生对应于氨基酸Cap-176步骤e(2.04 g)且不经进一步提纯即使用的油状物。
将氯甲酸甲酯(1.495 mL,19.30 mmol)添加至氨基酸Cap-176步骤e(2 g,9.65 mmol)及DIEA(6.74 mL,38.6 mmol)于CH2Cl2(100 mL)中的溶液中。在室温下搅拌所得溶液3小时且在减压下移除挥发性物质。经由BIOTAGE?(0%至20% EtOAc/Hex;90 g柱)提纯残余物。回收在真空下静置后凝固且对应于氨基甲酸酯Cap-176步骤f(2.22 g)的透明油状物。
将LiOH(0.379 g,15.83 mmol)的水(25 mL)溶液添加至氨基甲酸酯Cap-176步骤f(2.1 g,7.92 mmol)的THF(75 mL)溶液中且在环境温度下搅拌所得混合物4小时。在真空下移除THF且用1 N HCl溶液(2 mL)酸化剩余水相,接着用EtOAc(2×50 mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并浓缩,产生对应于Cap-176(1.92 g)的白色泡沫。
将1,1,3,3-四甲基胍(0.985 mL,7.85 mmol)添加至经搅拌的2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-(二甲氧基磷酰基)乙酸甲酯(2.0 g,6.0 mmol)的EtOAc(40 mL)溶液中且在N2下在室温下搅拌混合物10分钟。接着添加二氢-2H-吡喃-3(4H)-酮[23462-75-1](0.604 g,6.04 mmol)且在室温下搅拌混合物16小时。接着在冷冻器中冷却反应混合物10分钟且用柠檬酸水溶液(含1.5 g的20 mL水)中和。分配两相且用0.25 N HCl水溶液及盐水洗涤有机层,接着干燥(MgSO4)并浓缩成无色油状物。通过快速二氧化硅色谱(装载溶剂:DCM,用EtOAc/己烷洗脱,梯度为20%至30% EtOAc)提纯粗材料,得到两种异构产物:第一洗脱产物为(Z)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-(2H-吡喃-3(4H,5H,6H)-亚基)乙酸甲酯(490 mg)(白色固体),且第二洗脱产物为(E)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-(2H-吡喃-3(4H,5H,6H)-亚基)乙酸甲酯(433 mg)(白色固体)。LC-MS停留时间1.398分钟(对于Z-异构体)及1.378分钟(对于E-异构体);m/z 304.08(对于Z-异构体)及304.16(对于E-异构体)(MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
将四氟硼酸(-)-1,2-双((2S,5S)-2,5-二甲基磷杂环戊基)乙烷(环辛二烯)-铑(I)(28.2 mg,0.051 mmol)添加至经搅拌的(Z)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-(2H-吡喃-3(4H,5H,6H)-亚基)乙酸甲酯(310 mg,1.015 mmol)的MeOH(10 mL)溶液中且依序用N2、H2真空冲洗混合物,接着在室温下在H2(60 psi)下搅拌反应物2天。浓缩反应混合物且通过快速二氧化硅色谱(装载溶剂:DCM,用含20% EtOAc的己烷洗脱)提纯残余物,得到呈透明无色油状的(S)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(204 mg)。LC-MS停留时间1.437分钟;m/z 307.89 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
以类似方式还原另一立体异构体((E)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-(2H-吡喃-3(4H,5H,6H)-亚基)乙酸甲酯)(360 mg,1.18 mmol),得到呈透明无色油状的(S)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(214 mg)。LC-MS停留时间1.437分钟;m/z 308.03 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
将10% Pd/C(69.3 mg,0.065 mmol)添加至(S)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(200 mg,0.651 mmol)及二碳酸二甲酯[4525-33-1](0.104 mL,0.976 mmol)于MeOH(10 mL)中的溶液中。依序用N2、H2真空冲洗反应混合物,接着在室温下在H2(55 psi)下搅拌反应物5小时。经由CELITE?/二氧化硅垫过滤反应混合物且将滤液浓缩成无色油状物。通过快速二氧化硅色谱(装载溶剂:DCM,用含30% EtOAc的己烷洗脱)提纯粗油状物,得到呈无色油状的产物(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(132 mg)。LC-MS停留时间0.92分钟;m/z 231.97 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
以类似方式转化另一非对映异构体((S)-2-(苯甲基氧基羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯),得到呈透明无色油状的(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯。LC-MS停留时间0.99分钟;m/z 231.90 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
在室温下向经搅拌的(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯(126 mg,0.545 mmol)的THF(4 mL)溶液中添加1 M LiOH(1.090 mL,1.090 mmol)的水溶液。在室温下搅拌反应物3小时,用1 M HCl(1.1 mL)中和且用EtOAc(3×10 mL)萃取。干燥有机层,过滤并浓缩,得到呈透明无色油状的(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸(Cap-177a)(125 mg)。LC-MS停留时间0.44分钟;m/z 218.00 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
以类似方式转化另一非对映异构体((S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸甲酯),得到呈透明无色油状的(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-((R)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸(Cap-177b)。LC-MS停留时间0.41分钟;m/z 217.93 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
在氢化罐中向(2S,3S,4S)-二乙酸2-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃-3,4-二基酯(5 g,23.34 mmol)的20 mL MeOH溶液中添加Pd/C(150 mg,0.141 mmol)。在40 psi下在帕尔震荡器上使所得混合物氢化1小时。接着过滤混合物且浓缩滤液,产生呈透明油状的Cap-178步骤a(5.0 g),其在静置后凝固。
向Cap-178步骤a(5.0 g,23 mmol)的50 mL MeOH溶液中添加数滴甲醇钠。在室温下搅拌30分钟后,添加甲醇钠(0.1 mL,23.12 mmol)且在室温下搅拌溶液过夜。接着在真空下移除溶剂。用苯稀释残余物并浓缩,产生呈黄色固体状的相应二醇。将固体溶解于50 mL吡啶中且在-35℃下向此溶液中逐滴添加苯甲酰氯(2.95 mL,25.4 mmol)。在 -35℃下搅拌所得混合物1小时,接着在室温下搅拌过夜。用Et2O稀释混合物且用水洗涤。用EtOAc(2次)萃取水层。用MgSO4干燥合并的有机层并浓缩。通过快速色谱法(硅胶,5%-15% EtOAc/Hex)提纯粗产物,产生呈透明油状的Cap-178步骤b(4.5 g),其在长时间静置后缓慢结晶。
经15分钟向NaH(1.143 g,28.6 mmol)(60%矿物油溶液)于6 mL CS2中的混合物中逐滴添加Cap-178步骤b(4.5 g,19 mmol)的40 mL CS2溶液。在室温下搅拌所得混合物30分钟。混合物变成浅橙色且含有一些固体。接着经20分钟逐滴添加MeI(14.29 mL,229 mmol)。接着在室温下搅拌混合物过夜。小心地用饱和NH4Cl溶液淬灭反应物。用EtOAc(3次)萃取混合物。用MgSO4干燥合并的有机层并浓缩。通过快速色谱法(硅胶,6% EtOAc/Hex)提纯粗产物,得到呈透明油状的Cap-178步骤c(3.13 g)。
在80℃下向Cap-178步骤c(3.13 g,9.59 mmol)及AIBN(120 mg,0.731 mmol)于40 mL苯中的混合物中添加氢化三正丁基锡(10.24 mL,38.4 mmol)。在回流温度下搅拌所得混合物20分钟,接着冷却至室温。用乙醚稀释混合物且添加100 mL KF(10 g)水溶液并用力搅拌混合物30分钟。接着分离两层且用EtOAc(2次)萃取水相。用MgSO4干燥有机层并浓缩。通过快速色谱法(硅胶,用含3% Et3N的己烷去活且用含3% Et3N的己烷冲洗以移除三丁基锡衍生物,接着用15% EtOAc/Hex洗脱)提纯粗产物,产生呈透明油状的Cap-178步骤d(1.9 g)。
向Cap-178步骤d(1.9 g,8.63 mmol)于10 mL MeOH中的混合物中添加甲醇钠(2 mL,4.00 mmol)(2 M甲醇溶液)。在室温下搅拌所得混合物5小时。在真空下移除溶剂。用饱和NH4Cl溶液中和混合物且用EtOAc(3次)萃取。用MgSO4干燥有机层并浓缩,产生呈透明油状的Cap-178步骤e(0.8 g)。产物不经进一步提纯即用于下一步骤中。
将甲苯磺酰氯(2.63 g,13.77 mmol)添加至Cap-178步骤e(0.8 g,6.89 mmol)及吡啶(2.23 mL,27.5 mmol)于100 mL CH2Cl2中的溶液中。在室温下搅拌所得混合物3天。接着将10 mL水添加至反应混合物中且在室温下搅拌混合物1小时。分离两层且用水及1 N HCl水溶液洗涤有机相。用MgSO4干燥有机相并浓缩,产生呈淡黄色固体状的Cap-178步骤f(1.75 g)。产物不经进一步提纯即用于下一步骤中。
向微波管中置放2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸乙酯(1.6 g,5.92 mmol)及Cap-178步骤f(1.6 g,5.92 mmol)。添加10 mL甲苯。密封该管且在N2下逐滴添加LiHMDS(7.1 mL,7.10 mmol)(1 N甲苯溶液)。在100℃下在微波辐射下加热所得深棕色溶液6小时。接着向混合物中添加水且用EtOAc(3次)萃取混合物。用盐水洗涤合并的有机层,用MgSO4干燥并浓缩,产生呈橙色油状的Cap-3步骤g(3.1 g)的非对映异构混合物。粗混合物不经分离即进行下一步骤。
向乙基Cap-178步骤g的非对映异构混合物的20 mL THF溶液中添加HCl(30 mL,60.0 mmol)(2 N水溶液)。在室温下搅拌所得混合物1小时。用EtOAc萃取混合物且浓缩水层,产生呈橙色油状的Cap-178步骤h的盐酸盐(1.9 g)。该盐不经进一步提纯即用于下一步骤中。
在室温下将1.9 g Cap-178步骤h(盐酸盐)、DiPEA(4.19 mL,24.0 mmol)及氯甲酸甲酯(1.24 mL,16.0 mmol)于20 mL CH2Cl2中的溶液搅拌1小时。用CH2Cl2稀释混合物且用水洗涤。用Na2SO4干燥有机层并浓缩。通过快速色谱法(硅胶,0-20% EtOAc/Hex)提纯粗产物,产生呈黄色油状的Cap-178步骤i(1.1 g)。
向Cap-178步骤i(1.1 g,4.2 mmol)于5 mL THF及2 mL水中的混合物中添加LiOH(6.36 mL,12.7 mmol)(2 N水溶液)。在室温下搅拌所得混合物过夜。接着用1 N HCl水溶液中和混合物且用EtOAc(3次)萃取。用MgSO4干燥合并的有机层并浓缩,产生呈透明油状的Cap-178步骤j(0.8 g)。
向Cap-178步骤j(240 mg,1.04 mmol)、(S)-1-苯基乙醇(0.141 mL,1.142 mmol)及EDC(219 mg,1.14 mmol)于10 mL CH2Cl2中的溶液中添加DMAP(13.95 mg,0.114 mmol)。在室温下搅拌所得溶液过夜且在真空下移除溶剂。将残余物溶解于EtOAc中,用水洗涤,用MgSO4干燥并浓缩。通过色谱(硅胶,0-15% EtOAc/己烷)来提纯粗产物,得到呈两种非对映异构体的混合物形式的Cap-178步骤k。通过手性HPLC(CHIRALPAK? AS柱,21×250 mm,10 μm),用90% 0.1%二乙基胺/庚烷-10% EtOH以15 mL/min洗脱来分离混合物,产生呈白色固体状的Cap-178步骤k立体异构体1(第一个洗脱出)及Cap-178步骤k立体异构体2(第二个洗脱出)。不确定异构体的立体化学。
向Cap-178步骤k立体异构体1((S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-((2S,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸)(150 mg,0.447 mmol)的10 mL EtOH溶液中添加Pd/C(20 mg,0.188 mmol)且在40 psi下在帕尔震荡器上使混合物氢化过夜。接着过滤混合物且浓缩滤液,产生呈粘性白色固体状的Cap-178立体异构体1(100 mg)。
将2,6-二甲基-4H-吡喃-4-酮(10 g,81 mmol)溶解于乙醇(125 mL)中且添加Pd/C(1 g,0.94 mmol)。在室温下在H2(0.325 g,161 mmol)(70 psi)下在帕尔震荡器中使混合物氢化12小时。经由CELITE?垫过滤催化剂且用乙醇洗涤。在真空中浓缩滤液且经由BIOTAGE?(2%至25% EtOAc/ Hex;160 g柱)提纯残余物。分离出两份透明油状物级分。第一个洗脱的物质对应于(2R,6S)-2,6-二甲基二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮(1.8 g,14.04 mmol,17.43%产率),而第二个洗脱的物质对应于Cap-179步骤a(1.8 g)。
将DEAD(2.311 mL,14.59 mmol)逐滴添加至Cap-179步骤a(0.38 g,2.92 mmol)、4-硝基苯甲酸(2.195 g,13.14 mmol)及Ph3P(3.83 g,14.59 mmol)于苯(25 mL)中的溶液中。监测到放热且在环境温度下搅拌所得琥珀色溶液6小时。在减压下移除溶剂且经由BIOTAGE?(0至15% EtOAc/Hex;80 g柱)提纯残余物。分离出对应于Cap-179步骤b(0.77 g)的白色固体。
将LiOH(0.330 g,13.8 mmol)的水(8 mL)溶液添加至Cap-179步骤b(0.77 g,2.76 mmol)的THF(30 mL)溶液中且在环境温度下搅拌所得混合物16小时。在减压下移除THF且再用水(20 mL)稀释水层并用EtOAc(3×15 mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。回收含白色固体的油状残余物。用己烷研磨混合物且滤出固体,得到对应于Cap-179步骤c(0.34 g,2.61 mmol,95%产率)的透明油状物。
在室温下将对甲苯磺酰氯(3.98 g,20.89 mmol)添加至Cap-179步骤c(1.36 g,10.5 mmol)及吡啶(3.38 mL,41.8 mmol)于CH2Cl2(150 mL)中的溶液中且搅拌24小时,接着浓缩成黄色油状物。将剩余残余物添加至吡啶(20 mL)及水(30 mL)中且在环境温度下搅拌所得混合物1.5小时。用Et2O(75 mL)萃取混合物且用1 N HCl水溶液(4×50 mL)充分洗涤分离的有机层。接着干燥(MgSO4)有机层,过滤并浓缩。分离出对应于Cap-179步骤d(2.2 g)的白色固体。
在室温下在密封微波小瓶中将LiHMDS(4.30 mL,4.30 mmol)添加至Cap-179步骤d(1.02 g,3.59 mmol)及2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸苯甲酯(1.181 g,3.59 mmol)于甲苯(25 mL)中的溶液中,接着在100℃下在微波辐射下搅拌所得混合物5小时。用水(10 mL)淬灭反应物,用EtOAc萃取,用水洗涤,经MgSO4干燥,滤液并在真空中浓缩。经由BIOTAGE?(0%至6% EtOAc/Hex;80 g柱)提纯残余物且分离出对应于Cap-179步骤e(1.2 g)的黄色油状物。
将Cap-179步骤d(2.08 g,4.71 mmol)溶解于THF(100 mL)中且用2 N HCl(9.42 mL,18.84 mmol)处理。在环境温度下搅拌所得透明溶液4小时,接着在减压下移除THF。用己烷(3×20 mL)萃取剩余水层且在用H2O(20 mL)稀释后,用1 N NaOH将水相碱化至pH=10并用EtOAc(3×10 mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。将所得残余物溶解于CH2Cl2(100 mL)中且装入DIEA(2.468 mL,14.13 mmol)及氯甲酸甲酯(0.401 mL,5.18 mmol)。在环境温度下搅拌所得溶液2小时。用水(10 mL)淬灭反应混合物且在减压下移除有机层。接着用EtOAc(3×10 mL)萃取水层且干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并浓缩。经由BIOTAGE?(10% EtOAc/Hex;25 g柱)提纯残余物。回收对应于Cap-179步骤f(1.05 g)的透明无色油状物。
开发在CHIRALPAK? AD-H柱(30×250 mm,5 μm)(温度=35℃,压力=150巴,波长=210 nm,流速=70 mL/min,历时8分钟,溶剂A=CO2,溶剂B=MeOH)上通过使用12%甲醇作为调节剂来分离立体异构体混合物的手性SFC方法。两种经分离的异构体Cap-179步骤f(立体异构体1)(第一个洗脱)及Cap-179步骤f(立体异构体2)(第二个洗脱)显示与相应混合物相同的分析数据(参见上文)。
2-((2R,4R,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-(甲氧基羰基氨基)乙酸
在帕尔瓶中将Cap-179步骤f(立体异构体1)(0.35 g,1.044 mmol)溶解于MeOH(50 mL)中且装入Pd/C(0.111 g,1.044 mmol)。接着将悬浮液置于帕尔震荡器中且用N2(3次)冲洗混合物,置于40 psi H2(2.104 mg,1.044 mmol)下并在室温下震荡2小时。经由CELITE?垫滤出催化剂且在减压下移除溶剂,得到对应于Cap-179立体异构体1(0.25 g,1.019 mmol,98%产率)的琥珀色固体。
根据用于制备Cap-179立体异构体1的程序,使用Cap-179步骤f(立体异构体1)作为起始物质来获得Cap-179立体异构体2。
在室温下将对甲苯磺酰氯(4.39 g,23.0 mmol)添加至Cap-179步骤a(1.50 g,11.5 mmol)及吡啶(3.73 mL,46.1 mmol)于CH2Cl2(50 mL)中的溶液中且搅拌2天。用CH2Cl2稀释反应物,依序用水及1 N HCl洗涤。干燥(MgSO4)有机层并浓缩成黄色油状物,其经由BIOTAGE?(5%至20% EtOAc/Hex;40 g柱)提纯。分离出在真空下凝固且对应于Cap-180-2a(2.89 g)的透明油状物。
在室温下将1 N LiHMDS(7.09 mL,7.09 mmol)添加至Cap-180步骤a(1.68 g,5.91 mmol)及2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸乙酯(1.579 g,5.91 mmol)于甲苯(30 mL)中的溶液中,接着在85℃下搅拌所得混合物16小时。用水(50 mL)淬灭反应物,用EtOAc萃取,用水洗涤,经MgSO4干燥,过滤且在真空中浓缩。经由BIOTAGE?(0%至15% EtOAc/ Hex;40 g柱)提纯残余物。分离出对应于Cap-180步骤b(立体异构体混合物)(0.64 g)的透明浅黄色油状物。
将Cap-180步骤b(0.36 g,0.949 mmol)溶解于THF(10 mL)中且用2 N HCl(1.897 mL,3.79 mmol)处理。在环境温度下搅拌所得透明溶液20小时且在减压下移除THF。用己烷(3×20 mL)萃取剩余水层且在用H2O(20 mL)稀释后,用1 N NaOH将水相碱化至pH=10并用EtOAc(3×10 mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩。将所得残余物溶解于CH2Cl2(10.00 mL)中且装入DIEA(0.497 mL,2.85 mmol)及氯甲酸甲酯(0.081 mL,1.044 mmol)。在环境温度下搅拌所得溶液2小时且用水(10 mL)淬灭反应混合物并在减压下移除有机层。用EtOAc(3×10 mL)萃取水层且干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并浓缩。回收对应于Cap-180步骤c(0.21 g)的琥珀色油状物且其不经进一步提纯即使用。
在0℃下将Cap-180步骤c(0.32 g,1.2 mmol)溶解于THF(10 mL)中且装入LiOH(0.056 g,2.342 mmol)的水(3.33 mL)溶液。在室温下搅拌所得溶液2小时。在减压下移除THF且用水(15 mL)稀释剩余残余物并用Et2O(2×10 mL)洗涤。接着用1 N HCl将水层酸化至pH~2且用EtOAc(3×15 mL)萃取。干燥(MgSO4)合并的有机层,过滤并在真空下浓缩,得到呈白色泡沫状的Cap-180(立体异构体混合物)(0.2 g)。
中间体1
2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊(dioxaborolan)-2-基)萘
与中间体2
2,7-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘的混合物
向经脱气的萘(19.34 g,151 mmol)及双戊酰二硼(bis(pinacolato)diboron)(84 g,330 mmol)于环己烷(500 mL)中的溶液中添加4,4'-二叔丁基-2,2'-二吡啶基(4.05 g,15.1 mmol)及二-μ-甲氧基双(1,5-环辛二烯)二铱(diirridium)(I)(5.0 g,7.5 mmol)。密封烧瓶且在80℃下加热16小时,接着使其冷却至室温。在加热后,反应物颜色变成深红色。在真空中移除挥发性组分且用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用0-100%乙酸乙酯/甲苯洗脱),得到呈白色固体状的2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘与2,7-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘的混合物(54.57 g,95%产率,1.5:1比率)。
中间体3
(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
与中间体4
(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,7-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物
向含2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘与2,7-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘的混合物(1.5:1)(1.25 g,3.29 mmol)及(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(3.01 g,8.22 mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(50 mL)及水(12.5 mL)中添加NaHCO3(1.38 g,16.4 mmol)。在真空中使反应混合物脱气且用氮气冲洗。添加Pd(Ph3P)4(190 mg,0.164 mmol),将压力烧瓶加盖并用油浴在85℃下加热16小时。在真空中移除挥发性组分。使残余物分配于乙酸乙酯与水之间。分离各层且用乙酸乙酯萃取水相数次。经由硅藻土(CELITE?)垫过滤合并的有机相且干燥(Na2SO4)滤液,过滤并在真空中浓缩。用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用10-100%乙酸乙酯/CH2Cl2洗脱),接着用(10%甲醇/CH2Cl2)冲洗,得到呈橙色固体状的(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯与(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,7-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物(622 mg,27.1%产率),其不经提纯即使用。通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯等分试样,得到呈三氟乙酸盐形式的各中间体的分析样品。
中间体3的分析数据:LC-MS停留时间1.46分钟;C42H46N6O4的计算值:698.36,m/z实测值: 699.26 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中间体4的分析数据:LC-MS停留时间1.52分钟;C42H46N6O4的计算值:698.36,m/z实测值: 699.24 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中间体5
(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯三氟乙酸盐
与中间体6
(S)-2-(6-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯三氟乙酸盐的混合物
快速色谱法提纯后,以上反应亦得到(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯三氟乙酸盐与(S)-2-(6-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物(658 mg)。在HPLC分离(TFA缓冲液)期间,硼酸酯部分水解得到与硼酸中间体相同的混合物。LC-MS停留时间1.34分钟(硼酸)及2.05(硼酸酯);(硼酸)C26H28BN3O4的计算值:457.22,m/z实测值: 458.14 [M+H]+。(硼酸酯) [M+H]+C32H38BN3O4的计算值:539.3,m/z实测值: 490.16[M]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中间体7
2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘
与中间体8
2,7-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘
在环境条件下将含(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯与(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,7-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物(594 mg,0.162 mmol)及TFA(2 mL)的CH2Cl2(10 mL)搅拌3小时。在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯粗材料,得到呈黄色固体状的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(434 mg)及呈黄色固体状的2,7-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(204.8 mg)。
中间体7的分析数据:LC-MS停留时间1.05分钟;C32H30N6的计算值:498.25,m/z实测值: 499.21 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中间体8的分析数据:LC-MS停留时间1.11分钟;C32H30N6的计算值:498.25,m/z实测值: 499.20 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(S)-2-(1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
经11分钟将乙二醛(2.0 mL 40%水溶液)逐滴添加至NH4OH(32 mL)及(S)-Boc-脯氨醛(8.56 g,43.0 mmol)的甲醇溶液中且在环境温度下搅拌反应物19小时。在真空中移除挥发性组分且通过快速色谱法(硅胶,乙酸乙酯)提纯残余物,随后再结晶(乙酸乙酯,室温),得到呈白色绒毛状固体的(S)-2-(1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.43 g,18.6 mmol,43%产率)。
当在下文所注明的手性HPLC条件下分析时,化合物显示具有98.9 ee%.
柱:CHIRALPAK? AD,10 um,4.6×50 mm
溶剂:1.7%乙醇/庚烷(等度)
流速:1 mL/min
波长:220或256 nm
相对停留时间:3.25分钟(R),5.78分钟(S)
(S)-2-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在环境温度下将碘(16.17 g,63.7 mmol)添加至(S)-2-(1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(6.87 g,29.0 mmol)及碳酸钠(9.21 g,87 mmol)于二噁烷(72 mL)及水(72 mL)中的溶液中。用铝箔覆盖烧瓶且搅拌16小时。用乙酸乙酯及饱和硫代硫酸钠水溶液稀释反应混合物。搅拌混合物15分钟且分离各相。用乙酸乙酯萃取水相数次。干燥(Na2SO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩,得到呈棕褐色固体状的(S)-2-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(12.5 g,88%)。LC-MS停留时间1.40分钟;C12H17I2N3O2的计算值:488.94,m/z实测值: 489.96 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将亚硫酸钠(10.31 g,82 mmol)添加至(S)-2-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.0 g,8.2 mmol)于乙醇(75 mL)及水(75 mL)中的溶液中。用油浴在100℃下加热悬浮液4小时且在90℃下加热16小时。用乙酸乙酯及水稀释反应物。分离各层且用乙酸乙酯萃取水层数次。干燥(盐水、Na2SO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩。通过快速色谱法提纯残余物(将样品干式装载于硅胶上且用0至40%乙酸乙酯/CH2Cl2洗脱),得到呈白色固体状的(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.17 g,73.1%)。LC-MS停留时间0.930分钟;C12H18IN3O2的计算值:363.04,m/z实测值: 364.06 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中间体12
(S)-2-(5-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
与中间体13
(S)-2-(5-(7-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物
向含(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯三氟乙酸盐与(S)-2-(6-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯三氟乙酸盐的混合物(560 mg,0.980 mmol)及(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(463 mg,1.27 mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(11.2 mL)及水(2.8 mL)中添加NaHCO3(412 mg,4.90 mmol)。在真空中使反应混合物脱气5分钟且用氮气冲洗。添加Pd(Ph3P)4(57 mg,0.049 mmol),将压力烧瓶加盖并用油浴在100℃下加热16小时。在真空中移除挥发性组分。使残余物分配于乙酸乙酯与水之间且用乙酸乙酯萃取水相数次。干燥(Na2SO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩。用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用50-100%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到部分提纯的产物混合物,其进一步通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯,得到(S)-2-(5-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐与(S)-2-(5-(7-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐的混合物(74 mg)。LC-MS停留时间1.32分钟;[M+H]+C38H44N6O4的计算值:648.34,m/z实测值: 649.20 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。混合物不经进一步提纯即使用。
中间体14
2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑
与中间体15
2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑
在环境条件下将含呈三氟乙酸盐形式的(S)-2-(5-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯与(S)-2-(5-(7-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物(74 mg)及TFA(2 mL)的CH2Cl2(10 mL)搅拌4小时。在真空中移除挥发性组分。通过反相HPLC(0至50%水/乙腈/ TFA)提纯粗材料,得到呈黄色油状的2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸盐(32 mg,31%)及呈黄色油状的2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸盐(16 mg)。
中间体14的分析数据:LC-MS停留时间0.081分钟;C38H28N6的计算值:448.24,m/z实测值: 449.20 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中间体15的分析数据:LC-MS停留时间0.87分钟;C38H28N6的计算值:448.24,m/z实测值: 449.21 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将EDCI·HCl(16.9 g,88.0 mmol)添加至4-溴苯-1,2-二胺(15.0 g,80.0 mmol)、N-Boc-L-脯氨酸(18.13 g,84.0 mmol)及1-羟基苯并三唑(12.28 g,80.0 mmol)于CH2Cl2(500 mL)中的混合物中且在环境条件下搅拌16小时。接着用水稀释混合物。滤除所得白色沉淀物且分离各层。用水洗涤有机层,干燥(盐水;Na2SO4),过滤并在真空中浓缩,得到棕色泡沫。将乙酸(300 mL)添加至泡沫中且在85℃(浴温度)下加热混合物5小时。在真空中移除挥发性组分且将残余物溶解于EtOAc中,用水洗涤且干燥(Na2SO4)有机相,过滤并在真空中浓缩。对所得粗材料进行快速色谱法(硅胶;0-37% EtOAc/CH2Cl2)。对部分纯物质再进行快速色谱法(硅胶;20-35% EtOAc/CH2Cl2),得到呈黄色泡沫状的(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(17.98 g,61.2%产率)。LC-MS停留时间1.23分钟;C16H20BrN3O2的计算值:365.07,m/z实测值: 368.07 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向含有(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(4.5 g,12 mmol)与双戊酰二硼(bis(pinacolato)diboron)(6.55 g,25.8 mmol)于1,4-二噁烷(50 mL)中的混合物的烧瓶中添加乙酸钾(3.01 g,30.7 mmol)。在真空中使反应烧瓶脱气5分钟,接着用氮气吹扫。添加催化剂Pd(Ph3P)4(710 mg,0.614 mmol),将烧瓶加盖且用油浴在85℃(浴温度)下加热16小时。于真空中浓缩反应混合物。使粗材料分配于CH2Cl2与饱和NaHCO3溶液之间且用CH2Cl2萃取水层。干燥(盐水、Na2SO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩。用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用10-50%乙酸乙酯/CH2Cl2洗脱),得到呈白色固体状的(S)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.80 g,55%产率)。LC-MS停留时间1.493分钟;C22H32BN3O4的计算值:413.25,m/z实测值: 414.23 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/ 0.1% TFA。
2-(5-(6-(2-(1-(叔丁氧羰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
向(S)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.29 g,33.1 mmol)与2,6-二溴萘(446 mg,1.56 mmol)于1,2-二甲氧基乙烷(20 mL)及水(6 mL)中的混合物中添加NaHCO3(787 mg,9.36 mmol)。在真空中使反应混合物脱气10分钟且用氮气冲洗。添加催化剂Pd(Ph3P)4(90 mg,0.078 mmol),将烧瓶加盖且用油浴在100℃下加热16小时。在真空中移除挥发性组分。使残余物分配于CH2Cl2与水之间且分离各层。用CH2Cl2萃取水相数次且干燥(盐水、Na2SO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩。用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用0-70%乙酸乙酯/CH2Cl2洗脱),得到呈黄色固体状的2-(5-(6-(2-(1-(叔丁氧羰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(605 mg)。LC-MS停留时间1.46分钟;C42H46N6O4的计算值:698.36,m/z实测值: 699.26 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(2S)-2-(5-(6-溴-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
以上反应亦得到呈黄色固体状的(2S)-2-(5-(6-溴-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(519 mg)。LC-MS停留时间1.88分钟; [M+H]+C26H26BrN3O2的计算值:491.12,m/z实测值: 494.04 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
5,5'-(2,6-萘二基)双(2-(2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑)
在环境条件下将2-(5-(6-(2-(1-(叔丁氧羰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(591 mg,0.844 mmol)与TFA(2 mL)于CH2Cl2(10 mL)中的混合物搅拌2小时。在真空中移除挥发性组分且将所得物质装载于MCX柱上,用甲醇冲洗,用2.0 M NH3/甲醇洗脱释放并浓缩,得到呈棕褐色固体状的5,5'-(2,6-萘二基)双(2-(2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑)(419 mg)。LC-MS停留时间1.02分钟;C33H31N5的计算值:498.25,m/z实测值: 499.25 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/ 0.1% TFA。
2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘
在真空中使含有2,6-二溴萘(8.0 g,28 mmol)、双戊酰二硼(bis(pinacolato)diboron)(21.3 g,84.0 mmol)、乙酸钾(3.01 g,30.7 mmol)及1,4-二噁烷(50 mL)的混合物的压力烧瓶脱气5分钟且用氮气吹扫。添加催化剂Pd(Ph3P)4(710 mg,0.614 mmol)。将烧瓶加盖且用油浴在85℃(浴温度)下加热16小时。在真空中浓缩反应混合物且使粗材料分配于CH2Cl2与饱和NaHCO3溶液之间。用CH2Cl2萃取水层且干燥(Na2SO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩。用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用50-100% CH2Cl2/己烷洗脱),得到受双戊酰二硼(bis(pinacolato)diboron)污染的2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘。将固体溶解于CH2Cl2中且添加甲醇直至观察到沉淀。通过过滤收集沉淀物,得到呈白色固体状的2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘(5.1 g,48%产率)。
(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
向2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘(2.0 g,5.3 mmol)与(S)-2-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.89 g,7.89 mmol)于1,2-二甲氧基乙烷(42.1 mL)及水(10.5 mL)中的混合物中添加NaHCO3(2.21 g,26.3 mmol)。在真空中使反应混合物脱气且用氮气冲洗。添加催化剂Pd(Ph3P)4(90 mg,0.078 mmol)。将烧瓶加盖且用油浴在100℃下加热16小时。在真空中移除挥发性组分且使残余物分配于乙酸乙酯与水之间。分离各层且用乙酸乙酯萃取水相数次。经由硅藻土(CELITE?)垫过滤合并的有机相且干燥(Na2SO4)滤液,过滤并在真空中浓缩。用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用0-100%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到呈橙色固体状的(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(761 mg,21%产率)。LC-MS停留时间1.46分钟;C42H46N6O4的计算值:698.36,m/z实测值: 699.26 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
以上反应亦得到呈棕褐色固体状的(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.58 g,56%产率)。LC-MS停留时间1.46分钟;C32H38BN3O4的计算值:539.3,m/z实测值: 540.24 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)吡咯烷-2-酮
向(S)-5-(羟基甲基)吡咯烷-2-酮(10 g,mmol)的CH2Cl2 (50 mL)溶液中添加叔丁基氯二苯基硅烷(25.6 g,93 mmol)、Et3N(12.1 mL,87 mmol)及DMAP(1.06 g,8.7 mmol)。在室温下搅拌混合物直至起始吡咯烷酮耗尽,接着用CH2Cl2(50 mL)稀释且用水(50 mL)洗涤。干燥(Na2SO4)有机层,过滤,在真空中蒸发且对粗材料进行快速色谱法(硅胶;30至100% EtOAc/己烷),得到呈无色油状的(S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)吡咯烷-2-酮(22.7 g,74%产率)。
(S)-2-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
经10分钟将二碳酸二叔丁酯(di-tert-butyl dicarbonate)(38.5 g,177 mmol)以固体形式逐份添加至(S)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)吡咯烷-2-酮(31.2 g,88.3 mmol)、Et3N(8.93 g,88 mmol)及DMAP(1.08 g,8.83 mmol)于CH2Cl2(200 mL)中的溶液中且在24℃下搅拌反应混合物18小时。在真空中移除大部分挥发性物质且通过硅胶色谱(20% EtOAc/己烷至50% EtOAc/己烷)提纯粗材料,得到呈白色固体状的(S)-2-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(32.65 g,82%产率)。
(S)-2-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯
将(S)-2-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)-5-氧代吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(10.05 g,22.16 mmol)及甲苯(36 mL)装入配备有温度计及氮气入口的三颈烧瓶中且降至-55℃冷却浴中。当混合物的内部温度达到-50℃时,经30分钟逐滴添加三乙基硼氢化锂(23 mL 1.0 M/THF,23 mmol)且搅拌混合物35分钟,同时维持内部温度在-50℃与-45℃之间。经10分钟逐滴添加亨氏碱(16.5 mL,94 mmol)。接着整批添加DMAP(34 mg,0.278 mmol),随后经15分钟添加三氟乙酸酐(3.6 mL,25.5 mmol),同时维持内部温度在-50℃与-45℃之间。10分钟后移除浴且搅拌反应混合物14小时,同时使其升至环境温度。用甲苯(15 mL)稀释反应混合物,用冰水浴冷却且经5分钟用水(55 mL)缓慢处理。分离各相,用水(50 mL,2次)洗涤有机层且在真空中浓缩。通过快速色谱法(硅胶;5% EtOAc/己烷)提纯粗材料,得到呈无色粘性油状的(S)-2-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(7.947 g,82%产率)。LC/MS: [M+Na]+=460.19。在以下HPLC条件下Rt=2.41分钟:溶剂梯度为100% A:0% B至0% A:100% B(A=含0.1% TFA的1:9 MeOH/水;B=含0.1% TFA的9:1 MeOH/水)),经2分钟且保持1分钟;在220 nm下监测;PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10柱。
(3S)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
经15分钟将二乙基锌(19 mL约1.1 M甲苯溶液,21 mmol)逐滴添加至经冷却(-30℃)的(S)-2-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)-2,3-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯(3.94 g,9.0 mmol)的甲苯(27 mL)溶液中。经10分钟逐滴添加氯碘甲烷(经铜稳定;3.0 mL,41 mmol)并搅拌,同时维持浴温度在-25℃下1小时且在-25℃与-21℃之间18.5小时。使反应混合物向空气敞开且通过减慢添加50%饱和NaHCO3溶液(40 mL)淬灭,接着自冷却浴移出并在环境温度下搅拌20分钟。经由滤纸过滤反应混合物且用50 mL甲苯洗涤白色滤饼。分离滤液的有机相且用水(40 mL,2次)洗涤,干燥(MgSO4)且在真空中浓缩。通过硅胶色谱(350 g硅胶;用7% EtOAc/己烷装载样品;用7-20% EtOAc/己烷洗脱)提纯粗材料,得到呈顺式/反式异构体混合物形式的(3S)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(3.69 g,90.7%)。[注:在此阶段不测定确切顺式/反式异构体比率]。LC/MS: [M+Na]+=474.14。在以下HPLC条件下Rt=2.39分钟:溶剂梯度为100% A:0% B至0% A:100% B(A=含0.1% TFA的1:9 MeOH/水;B=含0.1% TFA的9:1 MeOH/水)),经2分钟且保持1分钟;在220 nm下监测;PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10柱。
(3S)-3-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
经5分钟将TBAF(7.27 mL 1.0 M THF溶液,7.27 mmol)逐滴添加至(3S)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基氧基)甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(顺式/反式异构体混合物)(3.13 g,6.93 mmol)的THF(30 mL)溶液中且在环境温度下搅拌混合物4.75小时。添加饱和NH4Cl溶液(5 mL)后,在真空中移除大部分挥发性物质且使残余物分配于CH2Cl2(70 mL)与50%饱和NH4Cl溶液(30 mL)之间。用CH2Cl2(30 mL)萃取水相且干燥(MgSO4)合并的有机相,过滤,在真空中浓缩,接着暴露于高真空过夜。使用快速色谱法(硅胶;40-50% EtOAc/己烷)提纯粗材料,得到呈顺式/反式异构体混合物形式且呈无色油状的(3S)-3-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(1.39 g,94%产率)。[注:在此阶段不测定确切顺式/反式异构体比率]。
(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸
将NaIO4(6.46 g,30.2 mmol)的水(31 mL)半溶液添加至(3S)-3-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(顺式/反式异构体混合物)(2.15 g,10.08 mmol)于CH3CN(20 mL)及CCl4(20 mL)中的溶液中。立即添加RuCl3(0.044 g,0.212 mmol)且用力搅拌异质反应混合物75分钟。用水(60 mL)稀释反应混合物且用CH2Cl2(50 mL,3次)萃取。用1 mL MeOH处理合并的有机相,使其静置约5分钟,接着经由硅藻土(CELITE?)垫过滤。用CH2Cl2(50 mL)洗涤该垫且在真空中浓缩滤液,得到淡木炭色固体。在加热下将粗材料溶解于EtOAc(约10 mL)中且使其在环境温度下静置,同时加晶种。约15分钟到达冷却阶段,观察到快速晶体形成。约1小时后,添加己烷(约6 mL)且冷冻混合物过夜(似乎无其它物质沉淀出)。过滤混合物且用经冰/水冷却的己烷/EtOAc(2:1比率;20 mL)洗涤并在高真空下干燥,得到第一批(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(灰白色晶体,1.222 g)。在真空中浓缩母液且在加热下将残余物溶解于约3 mL EtOAc中,使其在环境温度下静置1小时,接着添加3 mL己烷并储存于冷冻器中约15小时。类似地得到第二批(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(灰色晶体,0.133 g),合并之产率为59%。LC/MS[M+Na]+=250.22。在以下HPLC条件下Rt=1.48分钟:溶剂梯度为100% A:0% B至0% A:100% B(A=含0.1% TFA的1:9甲醇/水;B=含0.1% TFA的9:1甲醇/水)),经3分钟;在220 nm下监测;PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10柱。第一批的熔点(分解)=147.5-149.5℃。
(1R,3R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(.CH3SO3H)根据专利WO 2004/052850中对于合成其立体异构体所述的程序制备。
(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸
将50 g(225 mmol)(1R,3R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酰胺(.CH3SO3H)及250 mL异丙醇装入配备有氮气入口、顶置式搅拌器、热电偶及加热套的1 L圆底烧瓶中。接着将252 mL 23重量% NaOEt的EtOH溶液(2.68 M,675 mmol,3.0当量)装入所得浆料中且在50℃下搅拌约1小时。将12.2 mL(675 mmol,3当量)水装入混合物中且加热至60℃。使所得浆料在60℃下搅拌约18小时。使浆料冷却至室温且装入250 mL水及98.2 g(450 mmol,2.0当量)二碳酸二叔丁酯。经由真空蒸馏移除乙醇及异丙醇且使水性混合物冷却至0℃。用76 mL(456 mmol)6 M HCl水溶液中和混合物,同时维持内部温度低于5℃。用500 mL MTBE萃取产物且用100 mL水洗涤富有机层。经由真空蒸馏将透明溶液浓缩至150 mL且将600 mL庚烷装入所得浆料中,同时维持内部温度高于45℃。经约30分钟使浆料冷却至室温且使其在室温下搅拌约2小时。过滤产物,用250 mL 4:1庚烷:MTBE洗涤并在70℃下在真空下干燥,产生40.5 g(178 mmol,79%产率,在205 nm下99.8 AP)(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸:
(1R,3S,5R)-3-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将EDCI·HCl(2.65 g,13.8 mmol)添加至4-溴苯-1,2-二胺(2.35 g,12.6 mmol)、(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(3.00 g,13.2 mmol)及1-羟基苯并三唑(1.93 g,12.6 mmol)于CH2Cl2(80 mL)中的混合物中且在环境条件下搅拌16小时。接着用CH2Cl2稀释混合物,用水洗涤,干燥(盐水;MgSO4),过滤并在真空中浓缩,得到棕色泡沫。将乙酸(80 mL)添加至该泡沫中且在75℃(浴温度)下加热混合物5小时。在真空中移除挥发性组分且将残余物溶解于EtOAc中,用饱和NaHCO3溶液洗涤且干燥(盐水;MgSO4)有机相,过滤并在真空中浓缩。对所得粗材料进行快速色谱法(硅胶;50-100% EtOAc/己烷),得到呈淡橙色泡沫状的(1R,3S,5R)-3-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(3.01 g,7.96 mmol,63.3%产率),其不经进一步提纯即使用。反应亦得到847 mg较低纯度之相同产物。进一步通过制备型HPLC(C-18/30-100% CH3CN-水+0.1% NH4OAc)提纯所收集物质的等分试样,获得分析样品。LC-MS停留时间1.248分钟;C17H21BrN3O2的计算值:378.08,m/z实测值: 380.05 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体26
(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
向含有(1R,3S,5R)-3-(6-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(2.0 g,5.3 mmol)与双戊酰二硼(bis(pinacolato)diboron)(2.69 g,10.6 mmol)于1,4-二噁烷(50 mL)中的混合物的压力烧瓶中添加乙酸钾(0.78 g,7.9 mmol)。在真空中使反应烧瓶脱气10分钟且用氮气吹扫。将Pd(Ph3P)4(305 mg,0.264 mmol)添加至反应混合物中,将烧瓶加盖且用油浴在85℃(浴温度)下加热16小时。在真空中浓缩反应混合物且使粗材料分配于CH2Cl2(150 mL)与水性介质(50 mL水+10 mL饱和NaHCO3溶液)之间。用CH2Cl2萃取水层且干燥(Na2SO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩。用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用20-100%乙酸乙酯/己烷洗脱),得到呈白色泡沫状的(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(1.74 g,77%产率)。进一步通过制备型HPLC(C-18/30-100% CH3CN-水+0.1% NH4OAc)提纯所收集物质的等分试样。LC-MS停留时间1.78分钟;C23H32BN32的计算值:425.25,m/z实测值: 426.21 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mmol乙酸铵且溶剂B为95%乙腈/5%水/10 mmol乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯)
向(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(1.50 g,3.53 mmol)及2,6-二溴萘(403 mg,1.41 mmol)于1,2-二甲氧基乙烷(21.7 mL)及水(6.50 mL)中的混合物中添加NaHCO3(356 mg,4.23 mmol)。在真空中使反应混合物脱气10分钟且用氮气冲洗。添加Pd(Ph3P)4(82 mg,0.071 mmol)且用油浴在100℃下加热反应混合物16小时,接着在真空中移除挥发性组分。使残余物分配于CH2Cl2与水(30 mL)之间且用CH2Cl2萃取水相数次。用盐水洗涤合并的有机相,干燥(Na2SO4),过滤并在真空中浓缩。用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用0-70%乙酸乙酯/CH2Cl2洗脱),得到呈黄色固体状的(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯)(377 mg)。LC-MS停留时间1.49分钟;C44H46N6O4的计算值:722.36,m/z实测值: 723.26 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
以上反应亦得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(418 mg)。LC-MS停留时间1.90分钟;C27H26BrN3O2的计算值:503.12,m/z实测值: 506.05 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘
在环境条件下将(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯)(360 mg,0.498 mmol)与TFA(2 mL)于CH2Cl2(10 mL)中的混合物搅拌3小时。在真空中移除挥发性组分且将所得物质装载于MCX柱上,用甲醇冲洗,用2.0 M NH3/甲醇洗脱并浓缩,得到呈黄色固体状的2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(253 mg)。LC-MS停留时间1.07分钟;C34H30N6的计算值:522.25,m/z实测值: 523.19 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体30
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯双-三氟乙酸盐
与中间体31
(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯双-三氟乙酸盐的混合物
向含(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐与(S)-2-(6-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐的混合物(190 mg)、(S)-2-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯(专利申请案:WO 2008/021928, WO 2008/021936及WO 2008/021927)(213 mg,0.499 mmol)的1,2-二甲氧基乙烷(10.0 mL)及水(2.0 mL)中添加NaHCO3(140 mg,1.663 mmol)。在真空中使反应混合物脱气5分钟且用氮气冲洗。添加Pd(Ph3P)4(19 mg,0.017 mmol)且将压力烧瓶加盖并用油浴在85℃下加热16小时。在真空中移除挥发性组分且使残余物分配于乙酸乙酯与水之间。分离各层且用乙酸乙酯萃取水相数次。干燥(Na2SO4)合并的有机相,过滤并在真空中浓缩。用快速色谱法提纯所得物质(将样品干式装载于硅胶上且用0-5%甲醇/CH2Cl2洗脱),得到部分提纯产物。进一步通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯残余物,得到(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯的三氟乙酸盐与(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯的三氟乙酸盐的混合物(381 mg),其不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间1.54分钟;C47H46N6O4的计算值:758.36,m/z实测值: 759.37 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中间体32
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯
与中间体33
(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯的混合物
在环境条件下将含(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯的三氟乙酸盐与(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯的三氟乙酸盐的混合物(381 mg)及TFA(2 mL)的CH2Cl2(10 mL)搅拌4小时。在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(0至50%水/乙腈/NH4OAc)提纯粗材料,得到呈黄色油状的(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯与(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯的混合物(70 mg,21%产率)。LC-MS停留时间2.87分钟;C42H38N6O2的计算值:658.31,m/z实测值: 659.47 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、80%溶剂A/20%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/ 95%水/10 mmol乙酸且溶剂B为95%乙腈/5%水/10 mmol NH4OAc。
中间体34
2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(6-(4-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑四-三氟乙酸盐
与中间体35
2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(7-(4-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑四-三氟乙酸盐
在环境温度下向(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯与(S)-2-(5-(4-(7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸苯甲酯的混合物(70 mg,0.057 mmol)及碳酸钾(K2CO3)于甲醇(5 mL)中的溶液中添加钯/碳(10%,11 mg)的甲醇(2 mL)浆料。真空吹扫反应器且用氢气回填。在氢气球下搅拌反应物16小时。在真空下经由硅藻土(CELITE?)垫过滤混合物且在真空中蒸发滤液。通过反相HPLC(0至50%水/乙腈/TFA)提纯粗材料,得到呈白色固体状的2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(6-(4-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸盐(50 mg)及呈白色固体状的2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(7-(4-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸盐(24 mg)。
中间体34的分析数据:LC-MS停留时间1.06分钟;C34H32N6的计算值:524.27,m/z实测值: 525.26 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、80%溶剂A/20%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
中间体35的分析数据:LC-MS停留时间1.13分钟;C34H32N6的计算值:524.27,m/z实测值: 525.24 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、80%溶剂A/20%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将HATU(3.64 g,9.57 mmol)添加至经搅拌的5-溴吡啶-2,3-二胺(1.64 g,8.70 mmol)及(S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-甲酸(1.87 g,8.70 mmol)于DMF(50 mL)及DIPEA (3.19 mL,18.3 mmol)中的溶液中。在室温下搅拌反应混合物3天,用水(400 mL)稀释且用EtOAc(150 mL)萃取。用盐水(50 mL)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩。通过快速色谱法(110 g SiO2,1-4% MeOH/DCM)部分提纯粗材料,得到3.36 g凝固泡沫。将物质溶解于AcOH(35.0 mL)中且在100℃下加热8小时。使反应物冷却至室温,浓缩且通过快速色谱法(用DCM装载,80 g SiO2,20-40% EtOAc/己烷)提纯,得到呈黄色固体状的(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.73 g)。LC-MS停留时间1.33分钟;m/z 365, 367 (1:1) (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体37
(S)-2-(6-溴-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
与中间体38
(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物
将60% NaH分散液(0.120 g,3.00 mmol)添加至经搅拌的(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.0 g,2.7 mmol)的DMF(25 mL)溶液中且在室温下搅拌反应物1.5小时。添加SEM-Cl(0.483 mL,2.72 mmol)且搅拌反应物16小时。用水(约30 mL)及EtOAc(约35 mL)稀释反应物,分离各层且用盐水(30 mL)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩。通过快速色谱法(80 g SiO2,20-30% EtOAc/己烷)提纯残余粗黄色油状物,得到呈黄色油状的(S)-2-(6-溴-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯与(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物(838 mg)。混合物不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间2.54分钟;m/z 497, 499 (1:1) (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体39
(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
与中间体40
(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在微波小瓶中,将2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘(57 mg,0.150 mmol)、(S)-2-(6-溴-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯与(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的混合物(112 mg)、碳酸铯(147 mg,0.450 mmol)及二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(12.3 mg,0.030 mmol)溶解于THF(3 mL)及水(0.3 mL)中。再添加1.5 mL THF且用鼓泡氮气向反应物充气直至蒸发掉约2 mL。向透明溶液中添加乙酸钯(II)(3.37 mg,0.015 mmol)。用氮气冲洗该小瓶,密封,接着用微波辐射在120℃下加热30分钟。用EtOAc(约3 mL)稀释反应物且用水(2 mL)及盐水(2 mL)洗涤。干燥(MgSO4)反应物,过滤并浓缩成黄色油状物,通过快速色谱法(12 g SiO2,25-75% EtOAc/己烷)提纯,得到呈透明无色油状的(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(74 mg)(SEM区域异构体的混合物)及呈无色油状的(S)-2-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(32 mg)(SEM区域异构体的混合物)。各者均不经进一步提纯即使用。
中间体39的分析数据:LC-MS停留时间3.42分钟;m/z 961.9 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体40的分析数据:LC-MS停留时间3.15分钟;m/z 671.5 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)萘
将4 M盐酸(2.0 mL,8.0 mmol)的二噁烷溶液添加至经搅拌的(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(萘-2,6-二基)双(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(74 mg,0.077 mmol)(SEM区域异构体的混合物)的甲醇(1 mL)溶液中。在室温下搅拌反应物16小时,接着浓缩至干,得到呈黄色固体状的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)萘(51.1 mg),其不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间0.83分钟;m/z 501.13 (MH+)。在配备有Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%水/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将HATU(5.05 g,13.3 mmol)添加至经搅拌的5-溴吡嗪-2,3-二胺(2.28 g,12.1 mmol)及(S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-甲酸(2.60 g,12.0 mmol)于DMF(50 mL)及DIPEA (4.42 mL,25.3 mmol)中的溶液中。在室温下搅拌反应混合物3天,接着在90℃下搅拌1天。用水(350 mL)稀释反应混合物且用EtOAc(200 mL)萃取。用盐水(100 mL)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩。通过快速色谱法(110 g SiO2,1-4% MeOH/DCM)部分提纯粗材料,得到1.9 g凝固泡沫。将物质溶解于AcOH(35.0 mL)中且在95℃下加热8小时。使反应物冷却至室温,浓缩并通过快速色谱法(用DCM装载,80 g SiO2,20-30% EtOAc/己烷)提纯,得到呈黄色凝固泡沫状的(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(760 mg,2.06 mmol,17%产率)。LC-MS停留时间1.28分钟;m/z 366, 368 (1:1) (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体43
(S)-2-(5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
与中间体44
(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将60% NaH分散液(75 mg,1.9 mmol)添加至经搅拌的(S)-2-(6-溴-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(627 mg,1.70 mmol)的DMF(15 mL)溶液中且在室温下搅拌反应物1.5小时。接着添加SEM-Cl(0.30 mL,1.7 mmol)且搅拌反应物过夜。用水(约30 mL)及EtOAc(约35 mL)稀释反应物,分离各层且用盐水(30 mL)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩。通过快速色谱法(40 g SiO2,20-30% EtOAc/己烷)提纯粗黄色油状物,得到呈透明无色油状的(S)-2-(5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(421 mg)及呈透明无色油状的(S)-2-(6-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(345 mg)。SEM基团的绝对区域化学未明确地确定,名称(及结构)在这些中间体中可交换。
中间体43的分析数据:LC-MS停留时间2.43分钟;m/z 496, 498 (1:1) (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/ 10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体44的分析数据:LC-MS停留时间2.41分钟;m/z 496, 498 (1:1) (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/ 10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体45
(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基)双(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
与中间体46
(S)-2-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在微波小瓶中,将2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘(149 mg,0.393 mmol)、(S)-2-(5-溴-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(294 mg,0.590 mmol)(或SEM区域异构体)、碳酸铯(384 mg,1.18 mmol)及二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(32.3 mg,0.079 mmol)溶解于THF(4 mL)及水(0.4 mL)中。再添加1.5 mL THF且用鼓泡氮气向反应物充气直至蒸发掉1.5 mL。向透明溶液中添加乙酸钯(II)(8.83 mg,0.039 mmol)。用氮气冲洗该小瓶,密封,接着用微波辐射在120℃下加热30分钟。用EtOAc(约3 mL)稀释反应物且用水(2 mL)及盐水(2 mL)洗涤。干燥(MgSO4)反应物,过滤并浓缩成黄色油状物,通过快速色谱法(12 g SiO2,25-75% EtOAc/己烷)提纯,得到呈黄色凝固泡沫状的(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基)双(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(或SEM区域异构体)(210 mg)及呈无色油状的(S)-2-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(或SEM区域异构体)(53.5 mg)。
中间体45的分析数据:LC-MS停留时间3.27分钟;m/z 963.89 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体45的分析数据:LC-MS停留时间3.07分钟;m/z 672.52 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)萘
将4 M盐酸(6.0 mL,24 mmol)的二噁烷溶液添加至经搅拌的(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基)双(1-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(210 mg,0.218 mmol)(SEM的绝对区域化学未确定)的甲醇(3 mL)溶液中。在室温下搅拌反应物16小时并浓缩至干,得到呈橙色固体状的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)萘(143 mg),其不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间0.90分钟;m/z 503.21 (MH+)。在配备有Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/ 0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1%三氟乙酸且溶剂B为10%水/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
在室温下向2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(885 mg,1.78 mmol)、DMAP(10.8 mg,0.089 mmol)及三乙胺(1.2 mL,8.9 mmol)于DMF(30 mL)中的溶液中整份添加二碳酸二叔丁酯(387 mg,1.78 mmol)。在室温下搅拌反应混合物过夜且在BIOTAGE?上提纯(干式装载于80 g硅胶滤筒上且用含0至50% DCM的MeOH的梯度洗脱),得到呈橙色固体状的(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(500 mg,0.835 mmol,47.1%产率)。LC-MS停留时间1.207分钟;m/z 599.25 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/ min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
向(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(400 mg,0.668 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(176 mg,1.00 mmol)及DIEA(0.583 mL,3.34 mmol)于DMF(10 mL)中的溶液中添加HATU(381 mg,1.00 mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时,接着通过制备型HPLC提纯(使用Waters Sunfire C18柱30×150 mm 5u,用0至50% ACN-水+0.1% TFA的梯度洗脱),得到呈黄色固体状的(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(445 mg)。LC-MS停留时间1.317分钟;m/z 756.28 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/ 0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-甲基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯
在室温下向(2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-缬氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(445 mg)于DCM(10 mL)中的溶液中添加TFA(1 mL,13 mmol)。在室温下搅拌混合物3小时,浓缩,且用MeOH稀释残余物,装载于Strata XC MCX滤筒上且用甲醇洗涤。通过用2 M氨的甲醇溶液洗脱,自该滤筒释放化合物,接着在减压下蒸发,产生呈橙色固体状的((1S)-2-甲基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯(275 mg)。LC-MS停留时间1.120分钟;m/z 656.27 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体51
(S)-2-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
与中间体52
(2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(萘-2,6-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将含2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘(2.00 g,5.26 mmol)、(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(2.10 g,5.79 mmol)及Pd(Ph3P)4(0.058 g,0.05 mmol)的DME(47.8 mL)及水(4.8 mL)装入配备有磁性搅拌棒的100 mL压力容器中。在真空下使溶液脱气5分钟且用氮气回填反应器。密封该容器且在120℃下加热反应混合物过夜。使反应物冷却至室温且移除挥发性物质。使残余物分配于水与EtOAc之间且再用EtOAc萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并浓缩。用BIOTAGE?提纯粗产物(干式装载于90 g硅胶滤筒上且用含0至30% EtOAc的DCM的梯度洗脱)且再用BIOTAGE?提纯(干式装载于80 g硅胶滤筒上且用含0至50% EtOAc的DCM的梯度洗脱),得到呈黄色固体状的(S)-2-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(949 mg)。该物质(受(2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(萘-2,6-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯污染)不经进一步提纯即用于下一步骤中。LC-MS停留时间1.760分钟;m/z 490.21 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/ 10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
来自下一反应的制备型HPLC得到呈黄色固体状的(2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(萘-2,6-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(92 mg,0.111 mmol,11%产率)。LC-MS停留时间1.113分钟;m/z 599.24 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将含(S)-2-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(500 mg,1.02 mmol)、(S)-2-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(601 mg,1.53 mmol)及Pd(Ph3P)4(58 mg,0.05 mmol)的DME(10 mL)及水(1.0 mL)装入配备有磁性搅拌棒的100 mL压力容器中。在真空下使溶液脱气5分钟且用氮气回填反应器。在120℃下加热混合物8小时,再添加Pd(Ph3P)4(57.8 mg,0.05 mmol),使混合物脱气并在130℃下搅拌过夜。使反应物冷却至室温且在真空下移除挥发性物质。使残余物分配于水与EtOAc之间且再用EtOAc萃取水层。干燥(Na2SO4)合并的有机层,过滤并浓缩。在BIOTAGE?上提纯粗产物(干式装载于90 g硅胶滤筒上且用含5至100% EtOAc的DCM的梯度洗脱),接着再通过制备型HPLC提纯(使用Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用MeOH-水+0.1% TFA洗脱),得到(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(50 mg)。LC-MS停留时间1.278分钟;m/z 675.70 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((2S)-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑
向(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(50 mg)于DCM(10 mL)中的溶液中整份添加TFA(2.0 mL,26 mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。在真空下浓缩反应物,得到呈橙色固体状的2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑的三氟乙酸盐(51.5 mg),其不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间0.978分钟;m/z 475.19 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。使用Waters Sunfire C18柱4.6×50 mm 5u的HPLC-MS (TFA)78457-087显示反应完成,在RT=0.978分钟处发现峰。
4,4'-(2,6-萘二基)双(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑)
在室温下向(2S,2'S)-2,2'-(4,4'-(萘-2,6-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(82 mg)于DCM(2 mL)中的溶液中整份添加TFA(2.0 mL,26 mmol)。在室温下搅拌混合物3小时,通过制备型HPLC (Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用5至90% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯且再通过制备型HPLC (PHENOMENEX? Luna C18柱30×100 mm 10u,用10至90%甲醇-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯,得到呈棕褐色固体状的4,4'-(2,6-萘二基)双(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑)的三氟乙酸盐(68 mg)。LC-MS停留时间0.978分钟;m/z 399.18 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/ 90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(750 mg,2.07 mmol)及碘化铜(I)(79 mg,0.41 mmol)溶解于DMF(20 mL)及三乙胺(1.439 mL,10.33 mmol)中。真空冲洗反应溶液10分钟(抽气器真空,用氮气冲洗),接着添加乙炔基三甲基硅烷(1.2 mL,8.3 mmol),最后添加Pd(PPh3)4(119 mg,0.103 mmol)。用氮气冲洗烧瓶,密封且在50℃下加热过夜。浓缩反应物成粗黑色焦油状物,溶解于DCM中且经由BIOTAGE? Horizon(80 g SiO2,20-40% EtOAc/己烷)提纯,得到呈黄色固体状的(S)-2-(5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(546 mg,1.64 mmol,79%产率)。此物质不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间1.393分钟;m/z 332.33 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将(S)-2-(5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(537 mg,1.61 mmol)溶解于MeOH(20 mL)中,接着添加碳酸钾(22 mg,0.16 mmol)且在室温下搅拌反应物3小时。浓缩反应物,溶解于二氯甲烷中,装载于SiO2柱上且通过BIOTAGE? Horizon(30-50% EtOAc/己烷)提纯,得到呈灰白色固体状的(S)-2-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(346 mg,1.32 mmol,82%产率)。LC-MS停留时间0.878分钟;m/z 260.35 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/ 95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-(叔丁氧羰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
用DMF(10 mL)及三乙胺(0.54 mL,3.9 mmol)将(S)-2-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(340 mg,1.30 mmol)、2,6-二溴萘(744 mg,2.60 mmol)及碘化铜(I)(12.39 mg,0.065 mmol)制成浆料。用氮气真空冲洗溶液(5次),用Pd(PPh3)4(75 mg,0.065 mmol)处理,接着用氮气真空冲洗(2次)。在室温下在氮气下搅拌混浊黄色溶液3小时。浓缩反应物成黄橙色半固体,用DMF/MeOH(约1:1)制成浆料,过滤且以5次注射通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水,15-100%)提纯。合并含有所需产物的级分并浓缩,得到呈淡黄色固体状的(2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-(叔丁氧羰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(70 mg,0.11 mmol,18%产率)。LC-MS停留时间1.448分钟;m/z 647.45 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
4,4'-(2,6-萘二基二-2,1-乙炔二基)双(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑)
将(2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基双(乙炔-2,1-二基))双(1H-咪唑-5,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(32 mg,0.049 mmol)溶解于二氯乙烷(2 mL)中,接着添加TFA(1 mL,13 mmol)。在室温下搅拌溶液1小时。将反应物浓缩至干,得到呈棕褐色固体状的4,4'-(2,6-萘二基二-2,1-乙炔二基)双(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑)(41.6 mg)。
(1R,5R)-3-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将亨氏碱(7.69 mL,44.0 mmol)添加至经搅拌的2-溴-1-(4-溴苯基)乙酮(12.23 g,44.0 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(10 g,44 mmol)于无水MeCN(400 mL)中的溶液中。在室温下搅拌混合物16小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于乙酸乙酯中,用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤,干燥(硫酸钠),过滤并浓缩。在压力容器中,将残余物溶解于二甲苯(400 mL)中且添加乙酸铵(33.9 g,440 mmol)。密封容器并在140℃下加热2小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于乙酸乙酯中,用饱和碳酸氢钠溶液(pH=9)、盐水洗涤,经硫酸钠干燥并浓缩。将呈红橙色泡沫状的粗产物溶解于二氯甲烷中且置于300 g汤普森硅胶滤筒(Thompson silica gel cartridge)上(用20% B至100% B洗脱,经4000 mL,其中溶剂B=乙酸乙酯且溶剂A=己烷),得到呈金棕色泡沫状的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(16.67 g,39.1 mmol,88.8%产率)。LC-MS停留时间1.762分钟;m/z 403.94 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna S10 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下经30分钟向(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(9.85 g,43.3 mmol)于THF(200 mL)中的溶液中逐滴添加甲硼烷-甲基硫化物(borane-methyl sulfide)复合物(282 mL,563 mmol)。移除冰浴,搅拌混合物1小时,接着在回流下加热2小时。使混合物冷却至0℃,用甲醇(约200 mL)缓慢淬灭且在真空下浓缩。将残余物溶解于DCM中且用水(乳液)、1 N HCl、饱和NaHCO3水溶液及盐水洗涤。经Na2SO4干燥有机层,过滤并浓缩,得到呈无色油状的(1R,3S,5R)-3-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(8.43 g,39.5 mmol,91%产率)。LC-MS停留时间1.398分钟;m/z 236.20[M+Na]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%甲醇/10%水/ 0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-甲酰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下向(1R,3S,5R)-3-(羟基甲基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(4.85 g,22.74 mmol)于DCM(125 mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martin periodinane) (11.57 g,27.3 mmol)。使反应物升温至室温且搅拌3小时。将反应物倾倒于饱和NaHCO3水溶液中,接着添加约20 g Na2S2O3并搅拌1小时。分离各层且用DCM萃取水层数次。经Na2SO4干燥合并的有机萃取物并在真空中蒸发。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),用0至40% EtOAc/己烷的梯度洗脱来提纯残余物,得到呈无色油状的(1R,3S,5R)-3-甲酰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(4.47 g,21.2 mmol,93%产率)。LC-MS停留时间0.813分钟;m/z未离子化(MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下将氢氧化铵(16.40 mL,421 mmol)逐滴添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-甲酰基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(4.4 g)的甲醇(15 mL)溶液中。使反应物升温至室温且搅拌45分钟。接着逐滴添加40%乙二醛(oxalaldehyde)水溶液(5.32 mL,46.3 mmol)且搅拌反应混合物过夜。反应物颜色随时间变成棕色。用盐水稀释反应物并浓缩以移除挥发性溶剂。接着用乙酸乙酯萃取剩余水层数次。经Na2SO4干燥合并的有机层,在真空下蒸发。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),用0至70% EtOAc/己烷洗脱来提纯残余物,得到呈白色固体状的(1R,3S,5R)-3-(1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(3.71 g,14.9 mmol,71%产率)。LC-MS停留时间0.772分钟;m/z 250.20 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将碘(I2,12.43 g,49.0 mmol)添加至3-(1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸酯(5.55 g,22.3 mmol)及碳酸钠(7.08 g,66.8 mmol)于二噁烷(56 mL)及水(56 mL)中的溶液中且在室温下在黑暗中搅拌反应混合物16小时。用EtOAc稀释反应混合物且用饱和硫代硫酸钠水溶液洗涤。分离各层且用EtOAc萃取水层。经Na2SO4干燥合并的有机层并在真空下蒸发。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),用0至100% EtOAc/己烷洗脱来提纯残余物,得到呈白色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(8.3 g,16 mmol,71%产率)。LC-MS停留时间1.455分钟;m/z 502.07 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将(1R,3S,5R)-3-(4,5-二碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(8.3 g,17 mmol)于EtOH(83 mL)及水(83 mL)中的溶液装入配备有搅拌棒的250 mL压力烧瓶中。接着添加亚硫酸钠(20.88 g,166 mmol)且在90℃下加热混合物16小时。用EtOAc萃取反应混合物且经Na2SO4干燥合并的有机层,并在真空下蒸发。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),用0至15% EtOAc/DCM的梯度洗脱来提纯残余物,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(3.84 g,10.2 mmol,62%产率)以及完全还原产物(1R,3S,5R)-3-(1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(550 mg,2.21 mmol,13%产率)。LC-MS停留时间0.932分钟;m/z 376.22 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
与中间体67
(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(5,5'-(4,4'-(萘-2,6-二基)双(4,1-亚苯基))双(1H-咪唑-5,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯)
在真空下使2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘(1.0 g,2.6 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(1.06 g,2.63 mmol)、Na2CO3(0.837 g,7.89 mmol)于DME(20 mL)及水(2 mL)中的溶液脱气10分钟。在80℃下加热混合物,接着在氮气流下添加Pd(Ph3P)4(0.152 g,0.132 mmol)。密封反应器且在120℃下进一步进行加热16小时。在真空中移除DME且使粗材料分配于EtOAc/H2O之间。分离各层且用EtOAc萃取水层数次。经Na2SO4干燥合并的有机萃取物并在真空中蒸发。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),用0%至5% MeOH/DCM的梯度洗脱来提纯残余物,得到受反应副产物污染的部分纯的标靶产物。再次通过快速柱色谱(BIOTAGE?),用50至100% EtOAc/己烷的梯度洗脱来提纯不纯产物,接着用10% MeOH/DCM冲洗柱,得到呈黄色泡沫状的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(606 mg)。LC-MS停留时间1.608分钟;m/z 578.4 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在真空下使(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(568 mg)、(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(369 mg,0.983 mmol)、Na2CO3(313 mg,2.95 mmol)于DME(10 mL)及水(2 mL)中的溶液脱气10分钟。在80℃下加热混合物,接着在氮气流下添加Pd(Ph3P)4(114 mg,0.098 mmol)。密封反应器且在130℃下进一步进行加热过夜。在真空中移除DME且使粗材料分配于EtOAc/H2O之间。分离各层且用EtOAc萃取水层数次。经Na2SO4干燥合并的有机萃取物并在真空中蒸发。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),依序用20至100% EtOAc/己烷的梯度、10% MeOH/DCM洗脱来提纯残余物,得到部分纯的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(277 mg)。LC-MS停留时间1.578分钟;m/z 699.56 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
向(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(275 mg)于DCM(10 mL)中的溶液中添加TFA(2 mL,26.0 mmol)。在室温下搅拌混合物2小时。在真空下移除挥发性物质且通过反相HPLC(水/MeOH/TFA),得到呈棕褐色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的三氟乙酸盐(106 mg)。LC-MS停留时间1.153分钟;m/z 499.36 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
中间体70
(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
向经脱气的6-溴-2-氯喹啉(30 mg,0.12 mmol)、Na2CO3(39.3 mg,0.371 mmol)及(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(116 mg,0.272 mmol)于二噁烷(1 mL)及H2O(0.2 mL)中的溶液中添加Pd(Ph3P)4(14.3 mg,0.012 mmol)且在110℃下搅拌混合物2小时。用MeOH稀释反应混合物,且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(60.6 mg,0.057 mmol,46.3%产率)。LC-MS停留时间2.05分钟;m/z 724 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉
将(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(51 mg,0.054 mmol)与HCl的二噁烷溶液(0.5 mL,2.00 mmol)混合且在室温下搅拌2小时。移除挥发性物质,得到呈黄色固体状的2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉的盐酸盐(53 mg)。LC-MS停留时间1.20分钟;m/z 524 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹喔啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将Pd(Ph3P)4(14.24 mg,0.012 mmol)添加至经脱气的6-溴-2-氯喹喔啉(30 mg,0.123 mmol)、NaHCO3(31.1 mg,0.370 mmol)及(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(131 mg,0.308 mmol)于二噁烷(1.0 mL)及H2O(0.2 mL)中的溶液中且在100℃下搅拌混合物2小时,接着在110℃下搅拌2小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯滤液,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹喔啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(67.6 mg)。LC-MS停留时间2.13分钟;m/z 725 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉
将TFA(0.25 mL,3.24 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-6-喹喔啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(65 mg)的DCM(0.5 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。移除挥发性物质且用Et2O研磨残余物。经由过滤漏斗收集所得固体且用Et2O冲洗,得到呈黄色固体状的2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉的三氟乙酸盐(60 mg)。LC-MS停留时间1.51分钟;m/z 525 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(S)-2-(5-(4-溴苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将NCS(0.51 g,3.82 mmol)添加至2-(5-(4-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.0 g,2.55 mmol)的DMF(25 mL)溶液中且在50℃下加热混合物过夜。在真空下移除挥发性物质。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),用0至10% EtOAc/DCM的梯度洗脱来提纯残余物,得到呈黄色泡沫状的部分纯的(S)-2-(5-(4-溴苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.04 g)。LC-MS停留时间1.99分钟;m/z 427.12 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在真空下使(S)-2-(5-(4-溴苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(1.04 g,2.44 mmol)及2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘(0.926 g,2.44 mmol)于DME(10 mL)及水(2 mL)中的溶液脱气10分钟。在约80℃下加热混合物,在氮气流下添加Pd(Ph3P)4(0.282 g,0.244 mmol)且密封反应器。进一步进行加热至130℃后维持8小时。再添加Pd(PPh3)4(100 mg)且进行加热过夜。在真空中移除DME且使粗材料分配于EtOAc/H2O之间。分离各层且用EtOAc萃取水层数次。经Na2SO4干燥合并的有机萃取物并在真空中蒸发。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),用0至100% EtOAc/己烷的梯度洗脱来提纯残余物,得到受三苯基膦污染的部分纯的(S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(292 mg)。进一步通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯少量等分试样,得到纯标题物质。残余物质不经进一步提纯即用于后续步骤中。LC-MS停留时间2.227分钟;m/z 598.46 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在真空下使(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(163 mg,0.450 mmol)、(S)-2-(5-碘-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(163 mg,0.450 mmol)、碳酸氢钠(113 mg,1.350 mmol)于DME(10 mL)与水(2 mL)的溶剂混合物中的溶液脱气10分钟。在80℃下加热混合物,接着添加Pd(Ph3P)4(52.0 mg,0.045 mmol),用氮气冲洗反应器并密封。进一步加热至120℃后维持16小时。使烧瓶冷却至室温,在真空中移除DME且使粗材料分配于DCM/H2O之间。分离各层且用DCM萃取水层数次。经Na2SO4干燥合并的有机萃取物并在真空中蒸发。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),用0至100% EtOAc/己烷的梯度洗脱来提纯残余物,得到受三苯基膦污染的部分纯的(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(77 mg)。LC-MS停留时间1.830分钟;m/z 709.43 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
4-氯-2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑
将TFA(2 mL)添加至(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-4-氯-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(75 mg)的DCM(10 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物2小时。在真空中移除溶剂且将残余物溶解于1:1甲醇/CH2Cl2的溶剂混合物中并经由MCX滤筒(Strata XC)过滤。用甲醇洗涤该滤筒且用NH3的甲醇溶液(2 M)洗脱化合物。在真空中浓缩适当级分,得到呈黄色固体状的4-氯-2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(40 mg,0.079 mmol)。LC-MS停留时间1.353分钟;m/z 509.32 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-4,5-二氢-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
在真空下使(S)-2-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(402 mg,0.821 mmol)、(S)-2-(7-溴-4,5-二氢-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(344 mg,0.821 mmol)及碳酸氢钠(207 mg,2.46 mmol)于DME(14 mL)及水(1.8 mL)中的溶液脱气10分钟。在80℃下加热混合物,此时打开烧瓶且添加Pd(Ph3P)4(76 mg,0.066 mmol)。用氮气冲洗烧瓶,密封并在120℃下加热16小时。使烧瓶冷却至室温,在真空中移除DME且使粗材料分配于DCM与H2O之间。分离各层且用DCM萃取水层数次。经Na2SO4干燥合并的有机萃取物并在真空中蒸发。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),依序用20至100% EtOAc/己烷及0至10%甲醇/DCM的梯度洗脱来提纯残余物,得到(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-4,5-二氢-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(183 mg)。LC-MS停留时间1.543分钟;m/z 701.47 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将氧化锰(IV)(1.53 g,17.6 mmol)添加至(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-4,5-二氢-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(183 mg,0.196 mmol)的DCM(5 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物过夜。经由硅藻土(CELITE?)垫过滤反应混合物且用甲醇/DCM 1:1溶液洗涤。在真空下使用旋转蒸发器移除挥发性物质,得到呈棕褐色固体状的(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(163 mg)。LC-MS停留时间1.523分钟;m/z 699.53 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((S)-吡咯烷-2-基)-7-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑
在室温下将TFA(2 mL,26.0 mmol)整份添加至经搅拌的(S)-2-(7-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(137 mg)的CH2Cl2(10 mL)溶液中。于室温下搅拌混合物2小时,接着在真空中移除溶剂。将残余物溶解于50%甲醇/CH2Cl2中且经由MCX滤筒(Strata XC)过滤。用甲醇洗涤该滤筒且用NH3的甲醇溶液(2 M)洗脱化合物。在真空中浓缩适当级分,得到呈橙色固体状的2-((S)-吡咯烷-2-基)-7-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑(98 mg,0.20 mmol)。LC-MS停留时间1.245分钟;m/z 499.30 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将Pd(Ph3P)4(19.06 mg,0.016 mmol)添加至经脱气的6-溴-2-氯喹啉(40 mg,0.165 mmol)、(S)-2-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(150 mg,0.363 mmol)及NaHCO3(41.6 mg,0.495 mmol)于二噁烷(1 mL)及H2O(0.2 mL)中的溶液中。接着在110℃下加热反应混合物2小时,冷却至室温,用MeOH稀释且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(73 mg)。LC-MS停留时间2.02分钟;m/z 700 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉
将TFA(0.25 mL,3.24 mmol)添加至(2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))二吡咯烷-1-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(65 mg)的DCM(0.5 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物2小时。在真空下移除挥发性物质且用Et2O研磨残余物。经由过滤收集所得固体且用Et2O冲洗,得到呈黄色固体状的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉的三氟乙酸盐(61 mg)。LC-MS停留时间1.12分钟;m/z 500 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/ min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在80℃下将Pd(Ph3P)4(0.382 g,0.330 mmol)添加至经脱气的2,6-双(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘(2.51 g,6.61 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-溴-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(2.5 g,6.6 mmol)及碳酸钠(2.78 g,33.0 mmol)于DME(52.9 mL)及水(13.2 mL)中的溶液中。用氮气回填反应物,密封且在100℃下加热过夜。在真空下移除挥发性物质且将残余物溶解于EtOAc中,用水洗涤,并用EtOAc萃取水层。经由硅藻土(CELITE?)垫过滤合并的有机层并经Na2SO4干燥,浓缩且在BIOTAGE?上提纯(干式装载于硅胶上,装入90 g硅胶滤筒中且用含0至70%乙酸乙酯的己烷的梯度洗脱,接着用10% MeOH/DCM冲洗),得到呈浅黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(1.8 g,3.3 mmol,49%产率)。LC-MS停留时间1.905分钟;m/z 552.47 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将含(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(795 mg,1.44 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(538 mg,1.43 mmol)及碳酸氢钠(502 mg,5.97 mmol)的DME(9.5 mL)及水(2.4 mL)装入配备有磁性搅拌棒的200 mL压力圆底烧瓶中。在真空下使溶液脱气5分钟且用N2回填反应器。接着在N2流下添加Pd(Ph3P)4(110 mg,0.096 mmol),密封反应器并在120℃下加热过夜。使反应物冷却至室温且在真空下移除挥发性物质。使残余物分配于EtOAc与水之间且用EtOAc萃取水层。经由硅藻土(CELITE?)垫过滤合并的有机层,经Na2SO4干燥且在真空下移除挥发性物质。通过快速柱色谱(BIOTAGE?),依序用50至100% EtOAc/己烷的梯度及10%甲醇/DCM洗脱来提纯残余物,得到受起始物质、经还原的起始物质及其它反应副产物污染的部分纯的标靶产物。进一步通过制备型HPLC(ACN/水,0.1% TFA)提纯残余物,得到(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(200.5 mg)。亦自同一反应混合物收集副产物,其经鉴别为(1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2,2'-联萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸酯的三氟乙酸盐(108 mg)。LC-MS停留时间1.497分钟;m/z 673.52 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2,2'-联萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸酯
提纯来自中间体85合成的反应混合物后,获得呈三氟乙酸盐形式的副产物(108 mg)。LC-MS停留时间1.882分钟;m/z 849.84 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/ 90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑
将4 M HCl的二噁烷溶液(10 mL,40.0 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(151 mg)的DCM(3 mL)溶液中。立即形成沉淀物。搅拌悬浮液30分钟。在真空下蒸发挥发性组分。将粗残余物溶解于DCM(3 mL)中且添加TFA(2 mL)。搅拌溶液1小时。在减压下蒸发挥发性组分。将残余物溶解于MeOH中且经由Strata XC MCX滤筒过滤。用甲醇洗涤该滤筒且通过用2 M氨/甲醇溶液洗脱来自滤筒释放化合物。在减压下蒸发氨/甲醇滤液,得到呈黄色固体状的6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑(79 mg,0.17 mmol)。LC-MS停留时间1.130分钟;m/z 473.35 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/ 90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
6,6'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2,2'-联萘
将TFA(2.0 mL,26 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2,2'-联萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸酯的三氟乙酸盐(108 mg)于DCM(5 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。接着浓缩反应混合物,得到呈棕褐色固体状的6,6'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2,2'-联萘的三氟乙酸盐(22 mg)。LC-MS停留时间1.722分钟;m/z 649.54 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-1,5-萘啶-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将四(三苯基膦)钯(0)(17.4 mg,0.015 mmol)添加至2,6-二氯-1,5-萘啶(30 mg,0.151 mmol)、碳酸氢钠(38.0 mg,0.452 mmol)及(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(141 mg,0.332 mmol)于二噁烷(1.0 mL)及H2O(0.2 mL)中的溶液中且在110℃下加热及搅拌混合物2小时。用MeOH稀释反应物,过滤,浓缩且通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈白色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-1,5-萘啶-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(22.3 mg,0.030 mmol)。LC-MS停留时间2.11分钟;m/z 725 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1,5-萘啶
将TFA(0.25 mL,3.2 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-1,5-萘啶-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(20 mg,0.028 mmol)的DCM(0.5 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。在真空下移除挥发性物质且用Et2O研磨残余物。经由过滤收集所得固体且用Et2O冲洗,得到呈黄色固体状的2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1,5-萘啶的三氟乙酸盐(26 mg,0.022 mmol,78%产率)。LC-MS停留时间1.41分钟;m/z 525 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-5-氯-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在室温下将NCS(20 mg,0.15 mmol)逐份添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(183 mg,0.272 mmol)的DMF(5 mL)溶液中。接着在50℃下加热反应混合物3小时。使反应物冷却至0℃,再添加NCS(15 mg,0.112 mmol),且在50℃下搅拌混合物2小时。用水(2 mL)及甲醇(2 mL)稀释反应物,移除挥发性物质且通过制备型HPLC(TFA)提纯粗产物,得到呈橙色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-5-氯-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(140.4 mg)。LC-MS停留时间1.822分钟;m/z 707.54 (1:1) (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 μm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-4-氯-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑
将TFA(2 mL,26.0 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-5-氯-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(131 mg,0.140 mmol)的DCM(10 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物3小时。在真空下移除挥发性物质且将残余物溶解于MeOH中并经由Strata XC MCX滤筒过滤。用甲醇洗涤该滤筒且通过用2 M氨/甲醇溶液洗脱来自滤筒释放化合物。在减压下蒸发氨/甲醇滤液,得到呈棕褐色固体状的2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-4-氯-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑(55 mg,0.11 mmol)。LC-MS停留时间1.375分钟;m/z 507.33 (1:1) (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 μm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(3-溴苯基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯
将DIPEA(2.79 mL,16.0 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(2.00 g,8.80 mmol)及2-溴-1-(3-溴苯基)乙酮(2.22 g,8.00 mmol)于乙腈(25 mL)中的浆料中(溶液变成透明琥珀色)且搅拌反应混合物过夜。浓缩反应物且经由BIOTAGE? (80 g SiO2,10-25% EtOAc/己烷)提纯,得到呈粘性淡黄色油状的(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(3-溴苯基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(3.37 g,7.94 mmol)。LC-MS停留时间1.853分钟;m/z 423及425.98 (1:1) (MH+)。在配备有waters XTERRA? MS 7u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(3-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在350 mL高压容器中,将乙酸铵(5.94 g,77 mmol)添加至(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(3-溴苯基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(3.33 g,7.85 mmol)的二甲苯(75 mL)溶液中且在氮气下搅拌5分钟。密封容器,接着置于已加热至140℃的油浴中(反应物变成深棕色)且使反应物在140℃下保持11小时。再添加乙酸铵(3.0 g)且在145℃下搅拌反应物8小时,冷却至室温并搅拌(根据LCMS转化率>90%)。在高真空下将反应物浓缩成棕色油状物,使其分配于DCM(约200 mL)与半饱和碳酸氢钠(约200 mL)之间。干燥(MgSO4)有机层,过滤并浓缩。在BIOTAGE? Horizon(20-50% EtOAc/己烷,160 g SiO2)上提纯粗橙色凝固泡沫,得到呈黄色凝固泡沫状的(1R,3S,5R)-3-(4-(3-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(2.03 g,5.02 mmol)。LC-MS停留时间2.450分钟;m/z 404及406.06 (1:1) (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在100 mL压力烧瓶中在真空下使(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(220 mg,0.395 mmol)(以与中间体51相同的方式由中间体55制备)、(1R,3S,5R)-3-(4-(3-溴苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(192 mg,0.474 mmol)及碳酸铯(386 mg,1.185 mmol)于THF(4 mL)及水(4 mL)中的溶液脱气5分钟,接着用氮气回填。添加乙酸钯(II)(8.9 mg,0.039 mmol)且在120℃下加热混合物4小时。将反应混合物冷却至室温,用水稀释并用EtOAc及DCM萃取。用盐水洗涤合并的有机层,干燥(Na2SO4),过滤并浓缩。在BIOTAGE?系统上(90 g硅胶滤筒,用含0至100% EtOAc的己烷的梯度洗脱)提纯粗残余物,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(142 mg,0.203 mmol)。LC-MS停留时间1.585分钟;m/z 699.57 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 um柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将TFA(2 mL,26.0 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(130 mg,0.20 mmol)的DCM(2 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物2小时。在真空下移除挥发性物质且通过制备型HPLC(甲醇/水,0.1% TFA)提纯粗产物,得到呈棕褐色固体的(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的三氟乙酸盐(103 mg)。LC-MS停留时间1.303分钟;m/z 499.13 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 μm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/ 90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴喹喔啉-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将Pd(Ph3P)4(28.5 mg,0.025 mmol)添加至经脱气的6-溴-2-氯喹喔啉(60 mg,0.246 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(115 mg,0.271 mmol)及碳酸氢钠(62.1 mg,0.739 mmol)于二噁烷(1 mL)及H2O(0.2 mL)中的溶液中且在110℃下搅拌混合物2小时,接着在120℃下搅拌2小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈亮黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴喹喔啉-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(102.2 mg,0.202 mmol,82%产率)。LC-MS停留时间2.31分钟;m/z 506 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉-6-基硼酸
将Pd(Ph3P)4(23.28 mg,0.020 mmol)添加至经脱气的(1R,3S,5R)-3-(6-(6-溴喹喔啉-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(102 mg,0.201 mmol)、KOAc(49.4 mg,0.504 mmol)及双戊酰二硼(bis(pinacolato)diboron)(113 mg,0.443 mmol)于二噁烷(2 mL)中的溶液中且在83℃下搅拌反应物16小时。使反应混合物分配于EtOAc(20 mL)与饱和NH4Cl(水溶液)(5 mL)之间。干燥(MgSO4)有机层,过滤并浓缩成橙色油状物,通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈橙色固体状的2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉-6-基硼酸(57 mg,0.121 mmol,60.0%产率)。LC-MS停留时间1.94分钟;m/z 472 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将Pd(OAc)2(2.67 mg,0.012 mmol)添加至经脱气的2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉-6-基硼酸(56 mg,0.119 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(66.9 mg,0.178 mmol)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(9.76 mg,0.024 mmol)及K2CO3(49.3 mg,0.356 mmol)于THF(1 mL)及水(0.25 mL)中的溶液中且在120℃下搅拌混合物2小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉-6-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(32 mg,0.047 mmol)。LC-MS停留时间1.89分钟;m/z 675 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=95%水/5%甲醇/10 mM 乙酸铵。溶剂B=5%水/ 95%甲醇/10 mM 乙酸铵。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=2分钟。波长=220)。
2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)喹喔啉
将TFA(0.25 mL,3.24 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉-6-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(30 mg,0.044 mmol)的DCM(0.5 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。在真空下移除挥发性物质且用Et2O研磨残余物,得到呈黄色固体状的2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喔啉的三氟乙酸盐(32.7 mg)。LC-MS停留时间1.33分钟;m/z 475 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
在室温下将TFA(1 mL,12.98 mmol)逐滴添加至(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(450 mg,1.20 mmol)的DCM(5 mL)溶液中。在室温下搅拌混合物2小时,接着移除挥发性物质且将残余物溶解于MeOH(5 mL)中并经由Strata XC MCX滤筒过滤。用甲醇(30 mL)洗涤该滤筒且通过用2 M氨/甲醇溶液(40 mL)洗脱来自滤筒释放化合物并浓缩,产生呈白色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(283 mg,1.03 mmol,86%产率)。LC-MS停留时间0.448分钟;m/z 275.94 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯
将HATU(464 mg,1.22 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(280 mg,1.02 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(214 mg,1.22 mmol)及DIEA(1.8 mL,10 mmol)于DMF(3 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应混合物2小时,接着用MeOH(5 mL)及水(5 mL)稀释。在真空下移除挥发性物质且用快速色谱法提纯残余物(将样品干式装载于硅胶上且用0-100乙酸乙酯/己烷洗脱),得到呈浅黄色油状的(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(500 mg,0.925 mmol,91%产率)。LC-MS停留时间0.850分钟;m/z 432.97 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[D]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下在真空下使(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(573 mg,1.04 mmol)、(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(374 mg,0.87 mmol)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(SPHOS,71.0 mg,0.173 mmol)及碳酸铯(846 mg,2.60 mmol)于THF(7.9 mL)及水(0.8 mL)中的溶液脱气5分钟,接着用氮气回填反应器。添加乙酸钯(II)(19.4 mg,0.087 mmol)且在100℃下加热反应混合物3小时。将水添加至经冷却的溶液中且进一步用EtOAc(15 mL)稀释反应物。分离各相且用EtOAc(15 mL)萃取水层。经Na2SO4干燥合并的有机层,经由硅藻土(CELITE?)垫过滤且在减压下移除挥发性物质。用快速色谱法提纯残余物(将样品干式装载于硅胶上且依序用20-100%乙酸乙酯/己烷、5% MeOH/DCM洗脱),得到(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(246 mg,0.337 mmol,39.0%产率)。LC-MS停留时间1.448分钟;m/z 730.21 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯
将TFA(2 mL)添加至(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(226 mg,0.310 mmol)的DCM(5 mL)溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。在真空下浓缩溶液,将残余物溶解于MeOH(10 mL)中,经由Strata XC MCX滤筒过滤且用甲醇(25 mL)洗涤。通过用2 M氨/甲醇溶液(10 mL)洗涤柱自滤筒释放化合物并在减压下浓缩,产生呈棕褐色固体状的(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(131 mg,0.208 mmol)。LC-MS停留时间1.235分钟;m/z 630.17 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸甲酯
将HATU(846 mg,2.23 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(510 mg,1.85 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(483 mg,2.23 mmol)及DIEA(3.24 mL,18.5 mmol)于DMF(5 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用MeOH(5 mL)及水(5 mL)稀释反应混合物。在真空下移除挥发性物质且用快速色谱法提纯残余物(将样品干式装载于硅胶上且依序用0-100%乙酸乙酯/己烷、10% MeOH/DCM洗脱),得到呈白色泡沫状的(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸甲酯(370 mg,0.780 mmol,42.1%产率)。进一步在反相HPLC(水/甲醇,0.1% TFA)上提纯不纯物质,得到呈无色油状的(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(387 mg)。LC-MS停留时间0.690分钟;m/z 474.95 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
在0℃下在真空下使(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(407 mg,0.738 mmol)、(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(350 mg)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(60.6 mg,0.148 mmol)及碳酸铯(721 mg,2.21 mmol)于THF(6.7 mL)及水(0.7 mL)中的浆料脱气5分钟,接着用氮气回填反应器。添加乙酸酯钯(II)(16.6 mg,0.074 mmol)且在100℃下加热混合物3小时。在真空下移除挥发性物质且用水(20 mL)及EtOAc(20 mL)稀释混合物。分离各相且用EtOAc(20 mL)萃取水层。经Na2SO4干燥合并的有机层,过滤并在真空下蒸发。用快速色谱法提纯残余物(将样品干式装载于硅胶上且依序用20-100%乙酸乙酯/己烷、10% MeOH/DCM洗脱)。再次在反相HPLC(水/甲醇,0.1% TFA)上提纯残余物,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(231 mg)。LC-MS停留时间1.395分钟;m/z 772.31 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/ 90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸甲酯
将TFA(2 mL,26.0 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(150 mg)的DCM溶液中且在室温下搅拌混合物2小时。在真空下移除挥发性物质且将残余物溶解于MeOH(15 mL)中,经由Strata XC MCX滤筒(1 g)过滤且用甲醇洗涤。通过用2 M氨/甲醇溶液(20 mL)洗涤柱来自滤筒释放化合物并浓缩,产生呈白色固体状的(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸甲酯(100 mg,0.149 mmol)。LC-MS停留时间1.772分钟;m/z 670.36 (M-H+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为10%水/90%甲醇/10 mM乙酸铵及溶剂。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹喔啉
将二氯双(三苯基膦)-钯(II)(17.30 mg,0.025 mmol)添加至6-溴-2-氯喹喔啉(60 mg,0.246 mmol)及三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(107 mg,0.296 mmol)于二噁烷(1.5 mL)中的溶液中且在110℃下搅拌混合物2小时。用MeOH稀释反应物,且通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈白色固体状的6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹喔啉(36 mg,0.129 mmol,52.3%产率)。LC-MS停留时间2.76分钟;m/z 279 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/ min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
2-溴-1-(6-溴喹喔啉-2-基)乙酮
将NBS(55.1 mg,0.310 mmol)添加至6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹喔啉(72 mg,0.26 mmol)于THF(2 mL)及水(0.500 mL)中的溶液中且在室温下搅拌混合物2小时。用MeOH稀释反应物且通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈白色固体状的2-溴-1-(6-溴喹喔啉-2-基)乙酮(50 mg,0.15 mmol,59%产率)。LC-MS停留时间2.40分钟;m/z 329 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹喔啉-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯
将DIPEA(0.040 mL,0.227 mmol)添加至2-溴-1-(6-溴喹喔啉-2-基)乙酮(50 mg,0.152 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(37.9 mg,0.167 mmol)于乙腈(1.5 mL)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。蒸发溶剂且使残余物分配于EtOAc(20 mL)/饱和NaHCO3水溶液(5 mL)之间。干燥(MgSO4)有机层,过滤并浓缩,得到呈橙色固体状的粗(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹喔啉-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(63 mg)。LC-MS停留时间2.74分钟;m/z 476 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴喹喔啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将NH4OAc(102 mg,1.323 mmol)添加至(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹喔啉-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(63 mg,0.13 mmol)的甲苯(3 mL)溶液中且在120℃下搅拌混合物4小时。再添加NH4OAc (102 mg,1.323 mmol)且进一步在120℃下加热反应物4小时。用EtOAc(20 mL)及饱和NaHCO3水溶液(5 mL)稀释反应物。干燥(MgSO4)有机层,过滤,浓缩,接着通过快速二氧化硅色谱(用1:2 EtOAc/己烷洗脱)提纯,得到呈红橙色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴喹喔啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(25 mg,0.055 mmol)。LC-MS停留时间2.07分钟;m/z 456 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸酯
将Pd(OAc)2(1.230 mg,5.48 μmol)添加至经脱气的(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴喹喔啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(25 mg,0.055 mmol)、K2CO3(22.71 mg,0.164 mmol)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(4.50 mg,10.96 μmol)及(1R,3S,5R)-3-(6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(30.3 mg,0.071 mmol)于THF(1 mL)及水(0.250 mL)中的悬浮液中且在110℃下搅拌混合物2小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(12 mg,0.018 mmol,33%产率)。LC-MS停留时间1.90分钟;m/z 675 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=95%水/5%甲醇/10 mM乙酸铵。溶剂B=5%水/95%甲醇/10 mM乙酸铵。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=2分钟。波长=220)。
6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)喹喔啉
将TFA(0.25 mL,3.24 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(10 mg,0.015 mmol)的DCM(0.5 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。在真空下移除挥发性物质且用Et2O研磨残余物。用Et2O冲洗所得固体,得到呈黄色固体状的6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喔啉的三氟乙酸盐(10.5 mg)。LC-MS停留时间1.32分钟;m/z 475 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(2S)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((苯甲基氧基)羰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯烷甲酸苯甲酯
以类似于中间体39的方式,使用(S)-1-(苯甲基氧基羰基)吡咯烷-2-甲酸作为起始物质而非(S)-1-(叔丁氧羰基)吡咯烷-2-甲酸来制备且不用SEM保护中间体。制备呈白色固体状的(2S)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((苯甲基氧基)羰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯烷甲酸苯甲酯(20.8 mg)。LC-MS停留时间1.742分钟;m/z 769.41 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(59 mg,0.15 mmol)添加至2,7-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(37 mg)、二异丙基乙胺(68 μL,0.40 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(27 mg,0.15 mmol)于DMF(2 mL)中的混合物中且在环境条件下搅拌所得混合物2.5小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且搅拌15分钟。在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)及反相HPLC (水/乙腈/NH4OAc)提纯残余物两次,得到所需产物,将其悬浮于甲醇及TFA中。在真空中移除挥发性物质,得到呈棕褐色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(11.3 mg)。LC-MS停留时间1.34分钟;C46H52N8O6的计算值:812.4,m/z实测值: 813.42 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(82 mg,0.217 mmol)添加至含2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(69 mg)、二异丙基乙胺(126 μL,0.723 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(51 mg,0.29 mmol)的DMF(2 mL)中且在环境条件下搅拌所得混合物2.5小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。接着在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯残余物,得到呈棕褐色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(47 mg)。LC-MS停留时间1.30分钟;C46H52N8O6的计算值:812.40,m/z实测值: 813.42 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-(1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(39 mg,0.10 mmol)添加至2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(6-(4-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸盐(50 mg)、二异丙基乙胺(89 μL,0.51 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(27 mg,0.15 mmol)于DMF(2 mL)中的混合物中且在环境条件下搅拌所得混合物2.5小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。接着在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯残余物,得到呈棕褐色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-(1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(31.4 mg)。LC-MS停留时间1.37分钟;C48H54N8O6的计算值:838.42,m/z实测值: 839.36 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(29 mg,0.076 mmol)添加至2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(7-(4-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸盐(25 mg)、二异丙基乙胺(45 μL,0.26 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(13 mg,0.76 mmol)于DMF(2 mL)中的混合物中且在环境条件下搅拌所得混合物2.5小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。接着在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯残余物,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(14.2 mg)。LC-MS停留时间1.40分钟;C48H54N8O6的计算值:838.42,m/z实测值: 839.36 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-丙氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(74.5 mg,0.196 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(40 mg)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)丙酸(28.8 mg,0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL,0.653 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物9小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水)提纯,得到呈白色固体状的((1S)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-丙氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(35.9 mg)。LC-MS停留时间1.12分钟;C42H44N8O6的计算值:756.34,m/z实测值: 757.20 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(2,6-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯烷二基((1R)-2-氧代-1-苯基-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
将HATU(74.5 mg,0.196 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(40 mg)、(R)-2-(甲氧羰基氨基)-2-苯基乙酸(41.0 mg,0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL,0.653 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物9小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水),接着通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水)提纯,得到呈白色固体状的(2,6-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯烷二基((1R)-2-氧代-1-苯基-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯(32.3 mg)。LC-MS停留时间1.43分钟;C52H48N8O6的计算值:880.37,m/z实测值: 881.23 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
5,5'-(2,6-萘二基)双(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑)
将HATU(74.5 mg,0.196 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(40 mg)、(R)-2-苯基-2-(哌啶-1-基)乙酸(43.0 mg,0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL,0.653 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物9小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水),接着通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水)提纯,得到呈白色固体状的5,5'-(2,6-萘二基)双(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑)(44.3 mg)。LC-MS停留时间1.18分钟; [M+H]+C58H50N8O2的计算值:900.48,m/z实测值: 451.33[1/2 M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-N,N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺
将HATU(74.5 mg,0.196 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(40 mg,0.065 mmol)、(R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酸(35.1 mg)及DIEA(0.114 mL,0.653 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物9小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水),接着通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水)提纯,得到呈灰白色固体的(1R)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2R)-2-(二甲基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-N,N-二甲基-2-氧代-1-苯基乙胺(44.3 mg)。LC-MS停留时间1.07分钟;C52H52N8O2的计算值:820.42,m/z实测值: 821.29 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S,2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(74.5 mg,0.196 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(40 mg)、(2S,3R)-3-甲氧基-2-(甲氧羰基氨基)丁酸(37.4 mg,0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL,0.653 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物9小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水),接着通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水)提纯,得到呈白色固体状的((1S,2R)-2-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯(9.3 mg)。LC-MS停留时间1.22分钟; [M+H]+ C46H52N8O8的计算值:844.39,m/z实测值: 845.25 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S)-3-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-高丝氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(74.5 mg,0.196 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(40 mg)、(S)-4-甲氧基-2-(甲氧羰基氨基)丁酸(37.4 mg,0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL,0.653 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物9小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-3-甲氧基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-高丝氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(28.6 mg)。LC-MS停留时间1.18分钟;[M+H]+C46H52N8O8的计算值:844.39,m/z实测值: 845.22 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
(2,6-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯烷二基((1S)-1-环丙基-2-氧代-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
将HATU(74.5 mg,0.196 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(40 mg,0.065 mmol)、(S)-2-环丙基-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(33.9 mg,0.196 mmol)及DIEA(0.114 mL,0.653 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物9小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水)提纯,得到呈白色固体状的(1S,1'S)-2,2'-((2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))双(吡咯烷-2,1-二基))双(1-环丙基-2-氧代乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(34.9 mg,0.038 mmol,58%产率)。LC-MS停留时间1.23分钟;C46H48N8O6的计算值:808.37,m/z实测值: 809.22 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/ 0.1% TFA。
(2,7-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯烷二基((1R)-2-氧代-1-苯基-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
将HATU(56.2 mg,0.148 mmol)添加至经搅拌的2-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(47 mg)、(R)-2-(甲氧羰基氨基)-2-苯基乙酸(30.9 mg,0.148 mmol)及DIEA(0.086 mL,0.49 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物4小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水)提纯,得到呈淡黄色固体状的(1R,1'R)-2,2'-((2S,2'S)-2,2'-(5,5'-(萘-2,7-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-5,2-二基))双(吡咯烷-2,1-二基))双(2-氧代-1-苯基乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(38 mg)。LC-MS停留时间1.45分钟;C52H48N8O6的计算值:880.37,m/z实测值: 881.26 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S)-2-((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-丙氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(56.2 mg,0.148 mmol)添加至经搅拌的2-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(47 mg)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)丙酸(21.7 mg,0.148 mmol)及DIEA (0.086 mL,0.49 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物5小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水),接着通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水)提纯,得到呈白色固体状的((1S)-2-((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-(N-(甲氧羰基)-L-丙氨酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-1-甲基-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯(20.9 mg)。LC-MS停留时间1.16分钟;C42H44N8O6的计算值:756.34,m/z实测值: 757.27 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1R)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2R)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(56.2 mg,0.148 mmol)添加至经搅拌的2-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(47 mg)、(R)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(25.9 mg,0.148 mmol)及DIEA(0.086 mL,0.49 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物5小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水),接着通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水)提纯,得到呈米色固体状的((1R)-1-(((2S)-2-(5-(7-(2-((2S)-1-((2R)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(25 mg)。LC-MS停留时间1.36分钟;C46H52N8O6的计算值:812.40,m/z实测值: 813.36 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
5,5'-(2,7-萘二基)双(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑)
将HATU(56.2 mg,0.148 mmol)添加至经搅拌的2-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘的三氟乙酸盐(47 mg)、(R)-2-苯基-2-(哌啶-1-基)乙酸(32.4 mg,0.148 mmol)及DIEA(0.086 mL,0.49 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物5小时,用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释,浓缩以移除挥发性物质且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水),接着通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水)提纯,得到呈白色固体状的5,5'-(2,7-萘二基)双(2-((2S)-1-((2R)-2-苯基-2-(1-哌啶基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑)(16.4 mg)。LC-MS停留时间1.21分钟; [M+H]+C58H60N8O6的计算值:900.48,m/z实测值: 451.43 1/2 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(40 mg,0.11 mmol)添加至2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸盐(32 mg)、二异丙基乙胺(62 μL,0.35 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(19 mg,0.106 mmol)于DMF(2 mL)中的混合物中且在环境条件下搅拌所得混合物9小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(用含10 mM乙酸铵的水/乙腈一次及用含0.1% TFA的水/乙腈两次)提纯残余物,得到呈白色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(21 mg)。LC-MS停留时间1.17分钟;C42H50N8O6的计算值:762.39,m/z实测值: 763.34 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(20 mg,0.053 mmol)添加至2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(7-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸盐(16 mg)、二异丙基乙胺(31 μL,0.18 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(9.3 mg,0.053 mmol)于DMF(2 mL)中的混合物中且在环境条件下搅拌所得混合物9小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(含0.1% TFA的水/乙腈)提纯残余物,得到呈白色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(4-(7-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(7.9 mg)。LC-MS停留时间1.20分钟;C42H50N8O6的计算值:762.39,m/z实测值: 763.35 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(218 mg,0.574 mmol)添加至2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(100 mg)、二异丙基乙胺(334 μL,1.91 mmol)与(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(101 mg,0.574 mmol)于DMF(2 mL)中的混合物中且在环境下搅拌所得混合物4小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。接着在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(含0.1% TFA的水/乙腈)提纯残余物,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(85 mg)。LC-MS停留时间1.33分钟;C48H52N8O6的计算值:836.4,m/z实测值: 837.32 [M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/ 10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2R)-2-(二乙基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-N,N-二乙基-2-氧代-1-苯基乙胺
将HATU(109 mg,0.287 mmol)添加至2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(50 mg)、二异丙基乙胺(0.167 mL,0.957 mmol)及(R)-2-(二乙基氨基)-2-苯基乙酸盐酸盐(70.0 mg,0.287 mmol)于DMF(2 mL)中的混合物中且在环境下搅拌所得混合物5小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。接着在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(含0.1% TFA的水/乙腈),接着通过反相HPLC(含10 mM乙酸铵的水/乙腈),最后通过反相HPLC(含0.1% TFA的水/乙腈)提纯残余物,得到呈白色粉末状的(1R)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2R)-2-(二乙基氨基)-2-苯基乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-6-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-N,N-二乙基-2-氧代-1-苯基乙胺的三氟乙酸盐(25.2 mg)。LC-MS停留时间1.15分钟;[M+H]+C58H60N8O2的计算值:900.48,m/z实测值: 451.46[1/2 M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
实施例20
((1R)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-苯基乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸甲酯
及实施例21
(2,6-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基((1R)-2-氧代-1-苯基-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
将HATU(109 mg,0.287 mmol)添加至2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(50 mg)、二异丙基乙胺(0.167 mL,0.957 mmol)及(R)-2-(甲氧羰基氨基)-2-苯基乙酸(60.0 mg,0.287 mmol)于DMF(2 mL)中的混合物中且在环境下搅拌所得混合物5小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。接着在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(含0.1% TFA的水/乙腈),接着通过反相HPLC(含10 mM乙酸铵的水/乙腈),最后通过反相HPLC(含0.1% TFA的水/乙腈)提纯残余物,得到呈白色固体状的((1R)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-苯基乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(6.9 mg)及呈白色固体状的(2,6-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基((1R)-2-氧代-1-苯基-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(12.5 mg)。
实施例20的分析数据:LC-MS停留时间1.46分钟;C54H48N8O6的计算值:904.37,m/z实测值: 453.35[1/2 M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
实施例21的分析数据:LC-MS停留时间1.48分钟;[M+H]+ C54H48N8O6的计算值:904.37,m/z实测值: 453.35[1/2 M+H]+。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/ 0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
实施例22
((1S)-1-(((2S)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
及实施例23
((1S)-1-(((2R)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(63.5 mg,0.167 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)萘的盐酸盐(45 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(29.3 mg,0.167 mmol)于DMF(1 mL)及DIPEA(0.122 mL,0.696 mmol)中的浆料中。在室温下搅拌反应混合物16小时,用MeOH稀释,过滤且通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水)提纯,得到呈白色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(19.2 mg)及呈白色固体状的((1S)-1-(((2R)-2-(6-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡啶-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(16.5 mg)(若在此步骤期间或在前一步骤中吡咯烷立体异构中心外消旋化,则不确定)。通过手性HPLC拆分2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-6-基)萘显示宽峰,但个别非对映异构体在试验条件下无法拆分。
实施例22的分析数据:LC-MS停留时间1.407分钟;m/z 815.60 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
实施例23的分析数据:LC-MS停留时间1.442分钟;m/z 815.59 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
实施例24
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
及实施例25A
((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
及实施例25B
((1S)-1-(((2R)-2-(5-(6-(2-((2R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(63 mg,0.17 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)萘的盐酸盐(45 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(29 mg,0.17 mmol)于DMF(1 mL)及DIPEA(0.12 mL,0.69 mmol)中的浆料中。在室温下搅拌反应混合物16小时,用MeOH稀释,过滤且通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的乙腈/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(11.2 mg)、呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(17.3 mg)及呈黄色固体状的((1S)-1-(((2R)-2-(5-(6-(2-((2R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(6.7 mg)(若在此步骤期间或在前一步骤中吡咯烷立体异构中心外消旋化,则未确定)。通过手性HPLC拆分2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑并[4,5-b]吡嗪-5-基)萘显示宽峰,但个别非对映异构体在试验条件下无法拆分。
实施例24的分析数据:LC-MS停留时间1.420分钟;m/z 817.59 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
实施例25A的分析数据:LC-MS停留时间1.507分钟;m/z 817.56 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
实施例25B的分析数据:LC-MS停留时间1.562分钟;m/z 817.58 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为5%水/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2,6-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯烷二基((1S)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
将HATU(114 mg,0.301 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(50 mg)、二异丙基乙胺(175 μL,1.0 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(65 mg,0.30 mmol)于DMF(5 mL)中的溶液中且在环境条件下搅拌所得混合物2小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。接着在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯残余物,得到呈浅黄色固体状的(2,6-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(2S)-2,1-吡咯烷二基((1S)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(51.5 mg)。LC-MS停留时间1.117分钟;m/z 897.31 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(87 mg,0.23 mmol)添加至经搅拌的((1S)-2-甲基-1-(((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯(50 mg)、二异丙基乙胺(133 μL,0.76 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(50 mg,0.23 mmol)于DMF(3 mL)中的溶液中且在环境条件下搅拌所得混合物2小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。接着在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯残余物,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((2S)-2-(5-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(36 mg)。LC-MS停留时间1.177分钟;m/z 855.30 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/ 10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S)-2-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(36.6 mg,0.096 mmol)添加至经搅拌的2-((S)-吡咯烷-2-基)-6-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-苯并[d]咪唑的三氟乙酸盐(29 mg)、二异丙基乙胺(56 μL,0.32 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(21 mg,0.10 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中且在环境条件下搅拌所得混合物2小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。接着在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/乙腈/TFA)提纯残余物,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((2S)-2-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(16.3 mg)。LC-MS停留时间1.023分钟;m/z 847.31 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(57.6 mg,0.152 mmol)添加至经搅拌的2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑的三氟乙酸盐(47 mg)、二异丙基乙胺(88 μL,0.51 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(26.5 mg,0.152 mmol)于DMF(4 mL)中的溶液中且在环境条件下搅拌所得混合物2小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/甲醇/TFA)提纯残余物,通过反相HPLC(水/乙腈/乙酸铵)再提纯,最后通过反相HPLC(水/甲醇/TFA)再提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(33.3 mg)。LC-MS停留时间1.237分钟;m/z 789.29 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2,6-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
将HATU(54.6 mg,0.144 mmol)添加至经搅拌的2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘(25 mg)、二异丙基乙胺(84 μL,0.48 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(31.2 mg,0.144 mmol)于DMF(5 mL)中的溶液中且在环境条件下搅拌所得混合物4小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。在真空中移除挥发性组分且通过反相HPLC(水/甲醇/TFA)提纯残余物,通过反相HPLC(水/乙腈/乙酸铵)再提纯,最后通过反相HPLC(水/甲醇/TFA)再提纯,得到呈灰白色固体状的(2,6-萘二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(8.2 mg)。LC-MS停留时间1.220分钟;m/z 461.3[1/2 M+H+]。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10%乙腈/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%乙腈/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(47.6 mg,0.125 mmol)添加至含2,6-双((2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)萘的三氟乙酸盐(38 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(22 mg,0.13 mmol)的DMF(0.7 mL)及TEA(0.047 mL,0.33 mmol)中且透明黄色溶液在室温下过夜。用MeOH(1 mL)稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(15-100% MeOH/水/TFA缓冲液)提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(37.1 mg)。LC-MS停留时间2.530分钟;m/z 759.61 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/ 95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将4,4'-(2,6-萘二基)双(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑)的三氟乙酸盐(21 mg,0.025 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(12.9 mg)溶解于DMF(3 mL)及DIEA(0.043 mL,0.246 mmol)中。接着添加HATU(28.0 mg,0.074 mmol)且在室温下搅拌反应混合物2小时。在真空下移除挥发性物质且通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用0至90% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯粗产物,得到呈灰白色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(4-((6-((2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(10.4 mg)。LC-MS停留时间1.158分钟;m/z 713.60 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/ 90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(120 mg,0.316 mmol)添加至经搅拌的2-((2S)-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑的三氟乙酸盐(50 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(68.7 mg,0.316 mmol)于DMF(5 mL)及DIEA(0.18 mL,1.1 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空下移除挥发性物质。通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用10至90% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯残余物,接着通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×150 mm 5u,用至% ACN-水+0.1% TFA的梯度洗脱)再提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(96 mg)。LC-MS停留时间1.207分钟;m/z 873.63 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用5 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(57 mg,0.150 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(25 mg,0.050 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(33 mg)于DMF(3 mL)及DIEA(0.078 mL,0.50 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空下移除挥发性物质。通过制备型HPLC (Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用10至100% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯残余物,得到呈浅黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(27 mg)。LC-MS停留时间1.280分钟;m/z 897.65 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(57 mg,0.150 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(25 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(26 mg,0.15 mmol)于DMF(3 mL)及DIEA(0.070 mL,0.40 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空下移除挥发性物质。通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用10至100% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯残余物,得到呈浅黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(34.8 mg)。LC-MS停留时间1.402分钟;m/z 813.69 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(32.7 mg,0.086 mmol)添加至2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉的盐酸盐(25 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(15 mg,0.086 mmol)于DMF(1 mL)及DIPEA(0.059 mL,0.34 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。用MeOH稀释反应物,且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(3-甲基-1-氧代丁烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(8.3 mg)。LC-MS停留时间1.88分钟;m/z 838 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喔啉基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(25 mg,0.066 mmol)添加至2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉的三氟乙酸盐(28 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(11.5 mg,0.066 mmol)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.045 mL,0.26 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物2小时。用MeOH稀释反应物,且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(喹喔啉-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(3-甲基-1-氧代丁烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(27 mg)。LC-MS停留时间1.94分钟;m/z 839 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(2,6-喹喔啉二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
将HATU(25.9 mg,0.068 mmol)添加至2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹喔啉的三氟乙酸盐(29 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(14.8 mg,0.068 mmol)于DMF (0.5 mL)及DIPEA(0.046 mL,0.27 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。用MeOH稀释反应物,且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(喹喔啉-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(32.5 mg)。LC-MS停留时间1.74分钟;m/z 462 [1/2 M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(2,6-喹啉二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
将HATU(34.0 mg,0.089 mmol)添加至2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉的盐酸盐(26 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(19.4 mg,0.089 mmol)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.061 mL,0.350 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。用MeOH稀释反应物且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(6.0 mg)。LC-MS停留时间1.65分钟;m/z 462 [1/2 M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
((1S)-2-((2S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(45 mg,0.118 mmol)添加至4-氯-2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(20 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(25.6 mg,0.118 mmol)于DMF(3 mL)及DIEA(0.070 mL,0.40 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空下移除挥发性物质。通过制备型HPLC (Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用10至100% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯残余物,接着通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×150 mm 5u,用10至100% ACN-水+0.1% TFA的梯度洗脱)再提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((2S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(12.9 mg)。LC-MS停留时间1.595分钟;m/z 907.39 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(4-(4-氯-2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(45 mg,0.118 mmol)添加至4-氯-2-((S)-吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(20 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(20.7 mg,0.118 mmol)于DMF(3 mL)及DIEA(0.070 mL,0.40 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空下移除挥发性物质。通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用10至100% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯残余物,接着通过HPLC(Waters Sunfire C18柱30×150 mm 5u,用10至100% ACN-水+0.1% TFA的梯度洗脱)再提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(4-(4-氯-2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(3.6 mg)。LC-MS停留时间1.715分钟;m/z 823.49 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(7-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(103 mg,0.271 mmol)添加至2-((S)-吡咯烷-2-基)-7-(6-(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑(45 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(58.8 mg,0.271 mmol)于DMF(3 mL)及DIEA(0.16 mL,0.90 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空下移除挥发性物质。通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用10至100% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯残余物,接着通过HPLC (Waters Sunfire C18柱30×150 mm 5u,用0至90% ACN-水+0.1% TFA的梯度洗脱)再提纯,得到呈白色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(7-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(8.7 mg)。LC-MS停留时间1.307分钟;m/z 897.67 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(7-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-萘并[1,2-d]咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(24.5 mg,0.065 mmol)添加至2,6-双(2-((S)-吡咯烷-2-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)喹啉的三氟乙酸盐(30 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(11.3 mg,0.065 mmol)于DMF(1 mL)及DIPEA(0.044 mL,0.252 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物2小时。用MeOH稀释反应物,且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(2S,2'S)-1,1'-((2S,2'S)-2,2'-(6,6'-(喹啉-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(吡咯烷-2,1-二基))双(3-甲基-1-氧代丁烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(34 mg)。LC-MS停留时间1.82分钟;m/z 814 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(82 mg,0.22 mmol)添加至6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑(34 mg)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(37.8 mg,0.216 mmol)及DIEA(0.13 mL,0.72 mmol)于DMF(3 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。在真空下移除挥发性物质。通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×150 mm 5u,用10至80% ACN-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯残余物,得到呈浅黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(49.8 mg)。LC-MS停留时间1.357分钟;m/z 787.65 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/ 0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(82 mg,0.216 mmol)添加至6-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)-2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑(34 mg)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(46.9 mg,0.216 mmol)及DIEA(0.13 mL,0.72 mmol)于DMF(3 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。在真空下移除挥发性物质。通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×150 mm 5u,用10至80% ACN-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯残余物,得到呈浅黄色固体的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(38 mg)。LC-MS停留时间1.240分钟;m/z 871.66 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/ 0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2,2'-联萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(22.7 mg,0.060 mmol)添加至6,6'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-5-基)-2,2'-联萘的三氟乙酸盐(22 mg)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(10.5 mg,0.060 mmol)及DIEA(0.035 mL,0.20 mmol)于DMF(3 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空下移除挥发性物质。通过制备型HPLC(Waters Sunfire C18柱30×100 mm 5u,用10至80% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱)提纯残余物,得到呈棕褐色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2,2'-联萘-6-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(15.6 mg)。LC-MS停留时间1.765分钟;m/z 482.68 (1/2 M+H+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-1,5-萘啶-2-基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(8.7 mg,0.023 mmol)添加至2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1,5-萘啶的三氟乙酸盐(12 mg,9.93 μmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(4.2 mg)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.017 mL,0.099 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。用MeOH稀释反应物,且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(2S,2'S)-1,1'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(1,5-萘啶-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(3-甲基-1-氧代丁烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(5.6 mg)。LC-MS停留时间1.91分钟;m/z 420 [1/2M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
(1,5-萘啶-2,6-二基双(1H-苯并咪唑-5,2-二基(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基((1S)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-2,1-乙烷二基)))双氨基甲酸二甲酯
将HATU(8.68 mg,0.023 mmol)添加至2,6-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-1,5-萘啶的三氟乙酸盐(12 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(5.0 mg,0.023 mmol)于DMF (0.5 mL)及DIPEA(0.016 mL,0.089 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物3小时。用MeOH稀释反应物且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的(1S,1'S)-2,2'-((1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(6,6'-(1,5-萘啶-2,6-二基)双(1H-苯并[d]咪唑-6,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3,2-二基))双(2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙烷-2,1-二基)二氨基甲酸二甲酯的三氟乙酸盐(11 mg)。LC-MS停留时间1.73分钟;m/z 462 [1/2 M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(76 mg,0.20 mmol)添加至2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-4-氯-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑(34 mg)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(35.2 mg,0.201 mmol)及DIEA(0.12 mL,0.67 mmol)于DMF(3 mL)中的溶液中且在环境温度下搅拌所得混合物2小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空中移除挥发性组分。通过反相制备型HPLC(水/甲醇,0.1% TFA)提纯残余物,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(41.3 mg)。LC-MS停留时间1.717分钟;m/z 821.58 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/ 90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(45.0 mg,0.118 mmol)添加至2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-4-氯-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑(20 mg,0.039 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(25.7 mg)及DIEA(0.069 mL,0.39 mmol)于DMF(3 mL)中的溶液中且在环境温度下搅拌所得混合物2小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空中移除挥发性组分。通过反相制备型HPLC(水/甲醇,0.1% TFA)提纯残余物,得到呈浅黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(28.1 mg)。LC-MS停留时间1.597分钟;m/z 905.67 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm 5 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/ 90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(4-(6-(3-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(47.8 mg,0.126 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(3-(6-(2-((1S,3R,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的三氟乙酸盐(40 mg)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(22 mg,0.13 mmol)及DIEA(0.073 mL,0.42 mmol)于DMF(3 mL)中的混合物中且在环境温度下搅拌所得混合物2小时。用甲醇(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物且在真空中移除挥发性组分。通过反相HPLC(水/甲醇,0.1% TFA)部分提纯残余物,接着通过反相HPLC(水/乙腈,0.1% TFA)再提纯,得到呈白色固体状的((1S)-1-(((1S,3R,5S)-3-(4-(6-(3-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(45 mg)。LC-MS停留时间1.458分钟;m/z 813.30 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/10 mM乙酸铵且溶剂B为10%水/90%甲醇/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(13.16 mg,0.035 mmol)添加至2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喔啉的三氟乙酸盐(14 mg,0.015 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(6.1 mg)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.024 mL,0.135 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。用MeOH稀释反应物且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(11.8 mg)。LC-MS停留时间1.77分钟;m/z 789 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(15.0 mg,0.040 mmol)添加至2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喔啉的三氟乙酸盐(16 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(8.6 mg,0.040 mmol)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.027 mL,0.16 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。用MeOH稀释反应物,且通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(2-(2-((1R,3S,5R)- 2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-6-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(14.5 mg)。LC-MS停留时间1.58分钟;m/z 873 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(157 mg,0.413 mmol)添加至(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(130 mg )、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(90 mg,0.41 mmol)及DIEA(0.36 mL,2.1 mmol)于DMF(4 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。在真空下移除挥发性物质。在反相HPLC(水/甲醇,0.1% TFA)上提纯物质,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)- 2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(194 mg)。LC-MS停留时间1.307分钟;m/z 829.27 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(100 mg,0.263 mmol)添加至(S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基氨基甲酸甲酯(118 mg)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(46.2 mg,0.263 mmol)及DIEA(0.31 mL,1.8 mmol)于DMF(4 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用MeOH(2 mL)及水(2 mL)稀释反应混合物。使用旋转蒸发器在真空下移除挥发性物质且在反相HPLC(水/甲醇,0.1% TFA)上提纯残余物,得到((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(55.3 mg)。LC-MS停留时间1.320分钟;m/z 829.42 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/ 0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将NCS(14.98 mg,0.112 mmol)添加至((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(93 mg)的DMF溶液中且在50℃(油浴温度)下加热反应混合物2小时。在反相HPLC(水/甲醇,0.1% TFA)上提纯粗反应混合物,得到((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(102.8 mg)。LC-MS停留时间1.648分钟;m/z 863.32 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将NCS(10.31 mg,0.077 mmol)添加至((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(64 mg)的DMF(2 mL)溶液中且在50℃下加热反应混合物2小时。在反相HPLC(水/甲醇,0.1% TFA)上部分提纯粗反应混合物且在反相HPLC(水/ACN,0.1% TFA)上再提纯,得到呈棕褐色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)-1H-苯并咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(44.7 mg)。LC-MS停留时间1.63分钟;m/z 863.39 (MH+)。在配备有Waters Sunfire C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为10%水/ 90%甲醇/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(5.64 mg,0.015 mmol)添加至6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喔啉的三氟乙酸盐(6.0 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(3.2 mg)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(10.13 μL,0.058 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。移除溶剂且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯残余物,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(5.5 mg)。LC-MS停留时间1.60分钟;m/z 873 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=95%水/5%甲醇/10 mM乙酸铵。溶剂B=5%水/95%甲醇/10 mM 乙酸铵。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=2分钟。波长=220)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(5.64 mg,0.015 mmol)添加至6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)-2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)喹喔啉的三氟乙酸盐(6.0 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(2.60 mg,0.015 mmol)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(10.13 μL,0.058 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。移除溶剂且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯残余物,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-苯并咪唑-5-基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(3.6 mg)。LC-MS停留时间1.75分钟;m/z 789 [M+H]+。(柱PHENOMENEX? Luna 3.0×50 mm S10。溶剂A=90%水:10%甲醇:0.1% TFA。溶剂B=10%水:90%甲醇:0.1% TFA。流速=4 mL/min。起始% B=0。最终% B=100。梯度时间=3分钟。波长=220)。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
在室温下将NCS(13.0 mg,0.097 mmol)添加至((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(79 mg)的DMF(2 mL)溶液中且在50℃下加热混合物16小时。通过制备型HPLC(TFA),使用Waters Sunfire C18柱30×150 mm 5u,用30至90% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱来提纯粗产物,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(20.2 mg)及两种一氯化物产物的混合物,通过SFC,在CHIRALPAK? IB柱上分离该混合物,接着个别地通过制备型HPLC (TFA),使用Waters Sunfire C18柱30×150 mm 5u,用25至100% MeOH-水+0.1% TFA的梯度洗脱来再提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(11.1 mg)及呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(11.4 mg)。
对于实施例60:LC-MS停留时间2.133分钟;m/z 883.35 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
对于实施例62:LC-MS停留时间1.745分钟;m/z 847.33 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
对于实施例63:LC-MS停留时间1.753分钟;m/z 847.32 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
中间体105与适当硼酸(以类似于中间体66的方式,使用适当起始物质制备)经由类似于制备中间体106的耦合反应的反应,得到呈浅黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(91 mg)。LC-MS停留时间1.362分钟;m/z 855.31 (MH+)。在配备有Waters Sunfire 5u C18 4.6×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1% TFA且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
1-(4-(6-乙酰基萘-2-基)苯基)乙酮
将碳酸钠(5.43 g,51.3 mmol)的水(35 mL)溶液添加至经搅拌的1-(6-溴萘-2-基)乙酮(2.554 g,10.25 mmol)及4-乙酰基苯基硼酸(2.017 g,12.30 mmol)于甲苯(35.0 mL)及乙醇(35.0 mL)中的溶液中且将氮气鼓泡通过反应混合物15分钟。接着添加Pd(PPh3)4(0.237 g,0.205 mmol),用氮气冲洗反应物且在95℃下在氮气下加热8小时,接着在室温下搅拌过夜。在高真空下将反应物浓缩至干,接着分配于DCM(约200 mL)与水(约150 mL)之间。接着用盐水(约100 mL)洗涤有机层,干燥(MsSO4),过滤并浓缩。用MeOH(约120 mL)研磨残余物且将剩余固体再溶解于DCM中并浓缩至干(约2.7 g橙色固体)。将此物质溶解于热EtOAc(80 mL)中且使其冷却。通过过滤收集所得固体且用Et2O冲洗,得到1-(4-(6-乙酰基萘-2-基)苯基)乙酮(1.84 g)。LC-MS停留时间2.443分钟;m/z 288.98 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮
将溴(0.669 mL,13.0 mmol)的DCM(10 mL)溶液添加至经搅拌的1-(4-(6-乙酰基萘-2-基)苯基)乙酮(1.827 g,6.34 mmol)的DCM(30 mL)溶液中且在室温下搅拌反应物1天。用DCM(约20 mL)稀释反应混合物并浓缩至干,得到2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(2.83 g),其不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间2.708分钟;m/z 446.71 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/ 95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,5S)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)萘-2-基)苯基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯
将亨氏碱(1.662 mL,9.52 mmol)添加至经搅拌的2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(1.42 g,3.17 mmol)及(2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(1.45 g,6.34 mmol)于乙腈(60 mL)中的浆料中。在室温下搅拌反应物1天(慢慢变透明),浓缩透明橙色溶液且在BIOTAGE? Horizon(160 g SiO2,30-40% EtOAc/己烷)上提纯,得到呈灰白色凝固泡沫状的(2S,5S)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)萘-2-基)苯基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯(1.81 g)。LC-MS停留时间3.126分钟;m/z 765.87 (M+Na)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
将乙酸铵(3.76 g,48.7 mmol)添加至经搅拌的(2S,5S)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)萘-2-基)苯基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯(1.81 g,2.437 mmol)的甲苯(40 mL)溶液中且在室温下搅拌浆料10分钟,随后在100℃下加热12小时。使反应物冷却至室温,浓缩至干且使残余物分配于DCM(约150 mL)与半饱和NaHCO3(水溶液)(约150 mL)之间。用盐水(约100 mL)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩成棕色凝固泡沫,通过BIOTAGE? Horizon(160 g SiO2,1.5-3% MeOH/DCM)提纯,得到呈黄橙色凝固泡沫状的(2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(1.46 g)。LC-MS停留时间2.92分钟;m/z 703.32 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑
将TFA(0.500 mL,6.49 mmol)逐滴添加至经搅拌的(2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(228 mg,0.324 mmol)的DCE (6 mL)溶液中。在添加期间,形成沉淀物,其防碍搅拌。添加DCM(约10 mL)且搅拌浆料,同时添加剩余TFA。在室温下搅拌反应物30分钟,再添加TFA(约0.5 mL)并搅拌反应物3小时。浓缩反应物,得到呈橙色固体状的2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑的三氟乙酸盐(102 mg,113 mg,114 mg)。LC-MS停留时间2.756分钟;m/z 503.14 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/ 95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-溴-1-(6-溴萘-2-基)乙酮
将溴(0.682 mL,13.3 mmol)的DCM(20 mL)溶液添加至1-(6-溴萘-2-基)乙酮(3.30 g,13.3 mmol)(>90%纯度)的DCM(60 mL)溶液中且在室温下搅拌反应物过夜。浓缩反应混合物,得到呈灰白色固体状的2-溴-1-(6-溴萘-2-基)乙酮(4.35 g),其不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间2.177分钟;m/z 342.92 (MNa+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴萘-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯
将DIPEA(3.47 mL,19.88 mmol)添加至经搅拌的粗2-溴-1-(6-溴萘-2-基)乙酮(4.35 g,13.3 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(3.01 g,13.25 mmol)于乙腈(80 mL)中的浆料中且在室温下搅拌反应物过夜。将反应物浓缩至干且通过BIOTAGE? Horizon (160 g SiO2,10-20% EtOAc/己烷)提纯。使含有所需产物的级分静置3天。一些级分具有已破碎的大晶体(收集240 mg,根据1H NMR为纯的所需产物)。收集含有所需产物的所有级分并浓缩成黄色凝固泡沫,用Et2O(约40 mL)制成浆料。通过过滤收集所形成的白色固体且用Et2O冲洗,得到(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴萘-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(3.24 g)。LC-MS停留时间2.760分钟;m/z 472, 474.02 (1:1) (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴萘-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(3.46 g,7.28 mmol)及乙酸铵(11.2 g,146 mmol)溶解于甲苯(100 mL)中并搅拌。接着将反应物置于已预加热至100℃的油浴中且在该温度下搅拌12小时。使反应物冷却至室温,浓缩并分配于DCM(约200 mL)与半饱和NaHCO3水溶液(约150 mL)之间。用盐水(约100 mL)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩成棕褐色凝固泡沫。在BIOTAGE? Horizon(160 g SiO2,用DCM装载,30-50% EtOAc/己烷)上提纯此物质,得到呈黄色凝固泡沫状的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(3.05 g)。LC-MS停留时间2.238分钟;m/z 452.07、454.02 (1:1) (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将氮气鼓泡通过(1R,3S,5R)-3-(5-碘-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(1.65 g,4.40 mmol)及Cu(I)I(168 mg,0.880 mmol)于三乙胺(3.07 mL,22.0 mmol)及DMF(40 mL)中的溶液20分钟。接着添加乙炔基三甲基硅烷(2.16 g,22.0 mmol)及Pd(PPh3)4(254 mg,0.220 mmol),用氮气冲洗反应物,密封且在室温下搅拌24小时。将反应物浓缩成棕色油状物,且通过BIOTAGE? Horizon(160 g SiO2,20-40% EtOAc/己烷)提纯,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(980 mg)。LC-MS停留时间3.230分钟;m/z 346.17 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将碳酸钾(194 mg,1.40 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(970 mg,2.81 mmol)的MeOH(30 mL)溶液中且在氮气下搅拌反应物,接着在50℃(浴温度)下加热4小时。浓缩反应物至约5 mL体积,用DCM(约40 mL)稀释且用半饱和盐水(约20 mL)洗涤。干燥(MgSO4)有机层,过滤并浓缩成棕褐色固体。通过BIOTAGE? Horizon (40 g SiO2,用DCM装载,35-45% EtOAc/己烷)提纯此物质,得到呈淡黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(747 mg)。LC-MS停留时间2.866分钟;m/z 272.12 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将氮气鼓泡通过(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(400 mg,0.880 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(313 mg,1.14 mmol)及Cu(I)I(8.4 mg,0.044 mmol)于三乙胺(0.37 mL,2.6 mmol)及DMF(8 mL)中的溶液历时10分钟。接着添加Pd(PPh3)4 (50.9 mg,0.044 mmol),将氮气鼓泡通过反应混合物1分钟,接着密封烧瓶并在50℃下加热16小时。在高真空下浓缩反应物,用EtOAc(约5 mL)研磨剩余固体且通过过滤收集(用EtOAc及己烷冲洗),得到呈淡黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(595 mg)。该物质不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间3.140分钟;m/z 647.35 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将4 M HCl(1.546 mL,6.18 mmol)的二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(200 mg,0.309 mmol)的二噁烷(3 mL)溶液中且用力搅拌反应物4小时。浓缩反应浆料,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的盐酸盐(177 mg)。LC-MS停留时间3.403分钟;m/z 893.29 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯
将氮气鼓泡通过(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(以类似于中间体26的方式制备)(2.0 g,4.12 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(1.872 g,4.12 mmol)及Na2CO3(2.184 g,20.60 mmol)于EtOH(16.0 mL)、甲苯(16.0 mL)及水(16.0 mL)的混合物中的两相溶液历时15分钟。接着添加Pd(PPh3)4(0.143 g,0.124 mmol),用氮气冲洗反应物,密封,接着在95℃下加热10小时。用水(约20 mL)稀释粗浆料且用EtOAc(约100 mL)萃取。用盐水洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩成黄色泡沫。将此物质溶解于最少量的DCM中,且在BIOTAGE? Horizon(110 g SiO2,70-85% EtOAc/己烷)上提纯,得到呈淡黄色凝固泡沫状的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(2.257 g)。LC-MS停留时间4.158分钟;m/z 733.17 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将10% Pd/C(0.022 g,0.021 mmol)装入(1R,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(0.305 g,0.416 mmol)及NaHCO2(0.070 g,0.832 mmol)于MeOH(15 mL)中的溶液中。用N2(3次)真空冲洗所得悬浮液且在室温下置于1 atm H2(气球)下3小时。接着经由硅藻土(CELITE?)垫过滤混合物且在真空下浓缩。回收对应于(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(0.235 g)的灰白色固体且其不经进一步提纯即使用。LC/MS [M+H]+=599;Rt=1.96分钟为产物。柱Luna 3u C18 2×50 mm;起始% B:0,最终% B:100,溶剂A:10%乙腈/90% H2O+1% TFA;溶剂B:90%乙腈/10% H2O+1% TFA;流速4 mL/min。操作时间:5分钟。纯度=94%。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将HATU(0.164 g,0.432 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(0.235 g,0.392 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(0.069 g,0.39 mmol)及DIEA(0.137 mL,0.785 mmol)于DMF(10 mL)中的溶液中且在室温下搅拌所得黄色溶液过夜。在减压下移除溶剂且将残余物溶解于甲醇中,过滤且通过制备型HPLC(溶剂A:10% MeOH/90%水/0.1% TFA;溶剂B:90% MeOH/10%水/0.1% TFA;柱:Sunfire Prep MS C18 30×100 mm 5u;波长:220 nM;流速:30 ml/min;梯度:0% B至100% B,经30分钟,保持时间2分钟)提纯,得到呈白色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(0.10 g)。LC/MS [M+H]+=756;Rt=2.14分钟为产物。柱Luna 3u C18 2×50 mm;起始% B:0,最终% B:100,溶剂A:10%乙腈/90% H2O+1% TFA;溶剂B:90%乙腈/10% H2O+1% TFA;流速4 mL/min。操作时间:5分钟。纯度=96%。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯
将4N HCl的二噁烷溶液(2 mL,8.00 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(0.10 g,0.12 mmol)的CH2Cl2(20 mL)溶液中且在室温下搅拌所得黄色悬浮液2小时。在真空下浓缩反应物且用Et2O研磨所得残余物,得到呈黄色固体状的(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2- 氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯HCl盐(47 mg)。LC/MS [M+H]+=656;Rt=1.73分钟为产物。柱Luna 3u C18 2×50 mm;起始% B:0,最终% B:100,溶剂A:10%乙腈/90% H2O+1% TFA;溶剂B:90%乙腈/10% H2O+1% TFA;流速4 mL/min。操作时间:5分钟。纯度=95%。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯
将4.0 M HCl(1.167 mL,4.67 mmol)的二噁烷溶液添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(228 mg,0.311 mmol)的二噁烷(3 mL)溶液中且在室温下用力搅拌反应物3小时。浓缩反应物,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯的盐酸盐(233 mg)。LC-MS停留时间3.988分钟;m/z 633.18 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯
将HATU(203 mg,0.533 mmol)添加至经搅拌的(1R,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(225 mg)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(93 mg,0.53 mmol)于DMF(3 mL)及DIPEA(0.37 mL,2.1 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物3小时。在氮气流下浓缩粗反应物,将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含乙酸铵缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的(1R,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(200 mg)。LC-MS停留时间4.053分钟;m/z 790.25 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯
将10%钯/碳(100 mg,0.094 mmol)添加至(1R,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸苯甲酯(190 mg,0.241 mmol)及Na2CO3(50 mg,0.472 mmol)于THF(10 mL)中的溶液中且依序用氮气(3次)及用氢气(5次)真空冲洗反应混合物。使反应混合物在氢气球下搅拌2小时,经由硅藻土(CELITE?)过滤并浓缩。再使残余物在室温下经受反应条件(使用50 mg 10% Pd/C)过夜,随后经由硅藻土(CELITE?)过滤并浓缩。将残余物溶解于DMSO/ MeOH中,过滤并通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeOH/ H2O)提纯,得到(2S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,5R)-2- 氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(55 mg)。LC-MS停留时间2.147分钟;m/z 656.21 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(2,2'-联萘-6,6'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯)
将氮气鼓泡至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(250 mg,0.550 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-联(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷)(69.9 mg,0.275 mmol)、1,1'-双(二苯基膦基)-二茂铁(15.42 mg,0.028 mmol)及K2CO3(228 mg,1.651 mmol)于DMSO(12 mL)中的溶液中历时10分钟。接着将二氯化1,1'-双(二苯基膦基)-二茂铁)钯(22.63 mg,0.028 mmol)添加至反应混合物中且继续氮气鼓泡10分钟,随后密封反应物,接着在110℃下加热20小时。使反应物分配于水(60 mL)与DCM(60 mL)之间且分离有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩。通过BIOTAGE? Horizon(40 g SiO2,70-100% EtOAc/己烷)提纯粗残余物,得到呈黄色固体状的(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(2,2'-联萘-6,6'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯)(67 mg)。LC-MS停留时间4.348分钟;m/z 749.29 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
6,6'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-联萘
将4.0 M HCl(1.0 mL,4.00 mmol)的二噁烷溶液添加至经搅拌的(1R,1'R,3S,3'S,5R,5'R)-3,3'-(4,4'-(2,2'-联萘-6,6'-二基)双(1H-咪唑-4,2-二基))双(2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯)(62 mg,0.083 mmol)的二噁烷(2 mL)溶液中且用力搅拌反应浆料3小时。用MeOH稀释浆料并浓缩至干,得到呈淡黄色固体状的6,6'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-联萘的盐酸盐(56 mg)。LC-MS停留时间3.971分钟;m/z 547.25 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹啉
将二氯双(三苯基膦)-钯(II)(0.289 g,0.412 mmol)添加至6-溴-2-氯喹啉(1.0 g,4.1 mmol)及三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(1.79 g,4.95 mmol)于二噁烷(8 mL)中的溶液中且在100℃下搅拌混合物5小时,通过LCMS鉴别所需产物。浓缩粗反应混合物且通过快速硅胶色谱(用1:1己烷/DCM洗脱)提纯,得到呈白色固体状的产物6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹啉(720 mg)。LC-MS停留时间4.091分钟;m/z 279.84 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-溴-1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮
将NBS(407 mg,2.287 mmol)添加至6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹啉(530 mg,1.91 mmol)于THF(10 mL)及水(2.5 mL)的溶液中且在室温下搅拌混合物2小时。使反应混合物分配于EtOAc与盐水之间且浓缩有机层。通过快速硅胶色谱(用Et2O/己烷洗脱,梯度为0%至5% Et2O)提纯粗材料,得到呈白色固体状的2-溴-1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮(380 mg)。LC-MS停留时间3.988分钟;m/z 329.84 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹啉-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯
将DIPEA(0.21 mL,1.2 mmol)添加至2-溴-1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮(268 mg,0.815 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(204 mg,0.896 mmol)于乙腈(8 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物16小时。用饱和NaHCO3水溶液(5 mL)稀释反应混合物且用EtOAc(2×20 mL)萃取。用盐水洗涤合并的有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩。通过快速硅胶色谱(使用DCM作为装载溶剂,用Et2O/己烷洗脱,梯度为10%至30% Et2O)提纯粗产物,得到呈白色固体状的(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹啉-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(332 mg)。LC-MS停留时间4.283分钟;m/z 476.88 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将乙酸铵(990 mg,12.8 mmol)添加至(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹啉-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(407 mg,0.856 mmol)于甲苯(10 mL)中的溶液中且在120℃下搅拌混合物3小时。用饱和NaHCO3水溶液(10 mL)稀释反应混合物且用EtOAc(50 mL)萃取。用盐水洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩。通过快速硅胶色谱(用1:1 EtOAc/己烷洗脱)提纯粗材料,得到呈淡黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(272 mg)。LC-MS停留时间3.306分钟;m/z 456.99 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将Pd(OAc)2(7.40 mg,0.033 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(150 mg,0.329 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(149 mg,0.329 mmol)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(27.0 mg,0.066 mmol)及K2CO3(137 mg,0.988 mmol)于THF(2 mL)及水(0.50 mL)中的溶液中且在110℃下搅拌反应混合物2小时。用MeOH稀释反应混合物,过滤且通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈亮黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(140 mg)。LC-MS停留时间3.150分钟;m/z 700.36 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉
将4 M HCl(1 mL,4.00 mmol)的二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(130 mg,0.186 mmol)于二噁烷(3 mL)、MeOH(0.5 mL)及DCM(3 mL)中的悬浮液中且在室温下搅拌混合物2小时。浓缩反应物,得到呈黄色固体状的2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉的盐酸盐(140 mg)。LC-MS停留时间2.063分钟;m/z 500.37 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
1-(4-(5-乙酰基萘-1-基)苯基)乙酮
将碳酸钠(2.55 g,24.09 mmol)的水(20 mL)溶液添加至1-(5-溴萘-1-基)乙酮(1.2 g,4.8 mmol)及4-乙酰基苯基硼酸(1.03 g,6.26 mmol)于甲苯(20 mL)及乙醇(20 mL)中的溶液中,接着在氮气鼓泡下用力搅拌异质溶液15分钟。接着添加Pd(PPh3)4(0.111 g,0.096 mmol),密封反应容器且在回流下加热6小时。冷却反应物并浓缩至干。将粗残余物溶解于EtOAc(约150 mL)及水(约100 mL)中。分离各层且用盐水洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩成橙色固体。在BIOTAGE? Horizon(40 g SiO2,DCM)上提纯橙色固体,得到呈灰白色固体状的1-(4-(5-乙酰基萘-1-基)苯基)乙酮(1.31 g)。LC-MS停留时间3.736分钟;m/z 289.19 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-溴-1-(4-(5-(2-溴乙酰基)萘-1-基)苯基)乙酮
将溴(0.47 mL,9.1 mmol)的DCM(10 mL)溶液添加至1-(4-(5-乙酰基萘-1-基)苯基)乙酮(1.285 g,4.46 mmol)的DCM(20 mL)溶液中且在室温下搅拌反应物1天。将反应物浓缩成粘性淡橙色油状物(约1.92 g)。根据1H NMR,主要产物似乎为所需产物,峰对应于两个单溴化区域异构体(约10%)。粗材料不经提纯即使用。
(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羰基氧基)乙酰基)萘-1-基)苯基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯
将DIPEA(2.337 mL,13.38 mmol)添加至粗2-溴-1-(4-(5-(2-溴乙酰基)萘-1-基)苯基)乙酮(1.99 g,4.46 mmol)及(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(2.03 g,8.92 mmol)于乙腈(50 mL)的溶液中且在室温下搅拌透明黄色溶液过夜。将反应物浓缩成黄色凝固泡沫,在BIOTAGE? Horizon(SiO2,EtOAc/己烷)上提纯,得到呈白色绒毛状固体的(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羰基氧基)乙酰基)萘-1-基)苯基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(2.95 g)。LC-MS停留时间4.363分钟;m/z 737.38 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
搅拌(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-羰基氧基)乙酰基)萘-1-基)苯基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯(2.01 g,2.72 mmol)及乙酸铵(4.19 g,54.4 mmol)于甲苯(40 mL)中的溶液且在100℃下加热过夜。将反应物浓缩至干且使棕色固体分配于DCM(150 mL)与半饱和NaHCO3水溶液(100 mL)之间。干燥(MgSO4)有机层,过滤并浓缩。粗材料不易通过快速柱色谱提纯,因此收集含有所需产物或起始物质的所有级分,浓缩并再经受反应条件(现为110℃过夜)。浓缩反应物且使棕色固体分配于DCM(150 mL)与半饱和NaHCO3(100 mL)之间。干燥(MgSO4)有机层,过滤并浓缩。通过制备型HPLC提纯约30-35%物质(溶解于MeOH中,过滤,80-100% MeOH/水,乙酸铵缓冲液),得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(148 mg)。通过制备型HPLC提纯剩余物质(溶解于MeOH中,过滤,60-100% MeOH/水,TFA缓冲液),得到(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(299 mg)。LC-MS停留时间3.100分钟;m/z 699.56 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将4 M HCl(0.757 mL,3.03 mmol)的二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(141 mg,0.202 mmol)的二噁烷(3.0 mL)溶液中且在室温下搅拌反应物6小时。用MeOH沿小瓶侧面向下洗涤固体且在氮气流下浓缩反应物,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的盐酸盐(119 mg)。LC-MS停留时间2.333分钟;m/z 499.57 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,3aS,6aS)-六氢环戊二烯并(cyclopenta)[b]吡咯-1,2(2H)-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-(叔丁氧羰基)-八氢环戊二烯并[b]吡咯-2-羰基氧基)乙酰基)萘-2-基)苯基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯
将纯DIPEA(0.068 mL,0.388 mmol)添加至经搅拌的2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(79 mg,0.176 mmol)及(2S,3aS,6aS)-1-(叔丁氧羰基)八氢环戊二烯并[b]吡咯-2-甲酸(90 mg,0.353 mmol)于乙腈(1.5 mL)及氯仿(1.5 mL)中的悬浮液中且在室温下搅拌混合物过夜。将反应混合物蒸发至干,接着通过硅胶FCC(含3% MeOH的DCM)提纯,得到呈棕褐色固体的中间体145。LC-MS停留时间:2.480分钟;m/z 793.7 (M-H)-。
(2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-(叔丁氧羰基)-八氢环戊二烯并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)六氢环戊二烯并[b]吡咯-1(2H)-甲酸叔丁酯
在140℃下将经搅拌的(2S,3aS,6aS)-六氢环戊二烯并[b]吡咯-1,2(2H)-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-(叔丁氧羰基)八氢环戊二烯并[b]吡咯-2-羰基氧基)乙酰基)萘-2-基)苯基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯(140 mg,0.176 mmol)及乙酸铵(272 mg,3.52 mmol)于二甲苯(4 mL)中的悬浮液加热2小时。将反应混合物冷却至室温,用EtOAc(20 mL)稀释,用饱和NaHCO3、水、盐水洗涤并干燥(Na2SO4),得到棕色固体,通过硅胶FCC(含3-5% MeOH的DCM)提纯,得到中间体146。LC-MS停留时间:2.577分钟;m/z 755.7 (M+H)+。
(2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-八氢环戊二烯并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)八氢环戊二烯并[b]吡咯
将4 N HCl的二噁烷溶液(20当量)添加至中间体146的DCM溶液中且在室温下搅拌混合物2-3小时。将无水甲苯添加至所得黄色悬浮液中,接着蒸发至干,得到呈米色固体状的中间体147且以四盐酸盐形式分离:LC-MS停留时间:2.343分钟;m/z 555 (M+H)+。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将TFA(1.028 mL,13.34 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(中间体120)(606 mg,1.334 mmol)的DCE(20 mL)溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。接着再添加TFA(1 mL)且在室温下搅拌反应物4小时。将反应物浓缩至干,将粗棕色油状物溶解于乙醚中且在真空下浓缩(2次),得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的三氟乙酸盐(786 mg)。该物质不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间2.558分钟;m/z 352.03、354.05 (1:1) (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯
将HATU(411 mg,1.082 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的三氟乙酸盐(525 mg,0.902 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(190 mg,1.08 mmol)于DMF(10 mL)及DIPEA (0.79 mL,4.5 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物4小时。用EtOAc(约80 mL)稀释反应物且用饱和NaHCO3水溶液、水(30 mL)及盐水(30 mL)洗涤。接着干燥(MgSO4)有机层,过滤并浓缩成棕色油状物(625 mg)。在BIOTAGE? Horizon(40 g SiO2,40-80% EtOAc/己烷)上提纯此物质,得到呈黄色玻璃状的(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(412 mg)。LC-MS停留时间1.843分钟;m/z 511.24、513.12 (1:1) (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1.0 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将氮气鼓泡通过(1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(中间体122)(118 mg,0.432 mmol)、(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(170 mg,0.332 mmol)及CuI(3.17 mg,0.017 mmol)于DMF(4 mL)及TEA(0.14 mL,0.10 mmol)中的混合物历时15分钟。接着添加Pd(PPh3)4(19.2 mg,0.017 mmol),密封反应容器且在60℃下加热过夜。冷却反应物,接着再将CuI(5 mg)及TEA(100 μL)添加至反应物中且将氮气鼓泡通过反应物历时15分钟。接着再添加Pd(PPh3)4(12 mg),密封反应物且在70℃下搅拌24小时。在高真空下浓缩反应物且使残余物分配于DCM(25 mL)与水(25 mL)之间。用DCM(2×10 mL)萃取水层且用盐水(约20 mL)洗涤合并的有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩成粘性深色油状物。将物质溶解于MeOH中,过滤且通过制备型HPLC(MeOH/水,乙酸铵缓冲液)提纯得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(187.4 mg)。该物质不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间1.720分钟;m/z 704.59 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1.0 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,5S)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(6-溴萘-2-基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯
将DIPEA(0.823 mL,4.71 mmol)添加至经搅拌的2-溴-1-(6-溴萘-2-基)乙酮(中间体118)(1.03 g,3.14 mmol)及(2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(0.720 g,3.14 mmol)于乙腈(50 mL)中的浆料中且在室温下搅拌反应物过夜。将反应物浓缩至干且通过BIOTAGE? Horizon(40 g SiO2,10-20% EtOAc/己烷)提纯,得到呈黄色凝固泡沫状的(2S,5S)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(6-溴萘-2-基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯(1.09 g)。LC-MS停留时间4.413分钟;m/z 476, 478.20 (1:1) (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,5S)-2-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将乙酸铵(3.79 g,49.1 mmol)添加至(2S,5S)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(6-溴萘-2-基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯(1.17 g,2.47 mmol)的甲苯(30 mL)溶液中,将反应物置于已预加热至100℃的油浴中且在该温度下搅拌过夜。使反应物冷却至室温,浓缩且分配于DCM(100 mL)与半饱和NaHCO3水溶液(75 mL)之间。用盐水(约50 mL)洗涤有机层,干燥(MgSO4),过滤并浓缩成棕褐色凝固泡沫。在BIOTAGE? Horizon(160 g SiO2,用DCM装载,20-35% EtOAc/己烷)上提纯此物质,得到呈棕褐色凝固泡沫状的(2S,5S)-2-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(893 mg)。LC-MS停留时间3.410分钟;m/z 456、458.22 (1:1) (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将氮气鼓泡通过(2S,5S)-2-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(127 mg,0.277 mmol)、(1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(91 mg,0.33 mmol)及CuI(2.6 mg,0.014 mmol)于DMF(3 mL)及TEA(0.12 mL,0.83 mmol)中的溶液历时15分钟。接着添加Pd(PPh3)4(16 mg,0.014 mmol)且用氮气冲洗反应容器,密封并在50℃下加热过夜。使反应物冷却至室温,将氮气鼓泡通过反应混合物历时20分钟,接着再添加CuI(约4 mg)及Pd(PPh3)4(15 mg)。用氮气冲洗反应物5分钟,密封并在60℃下加热1天。将反应物冷却至室温,用甲醇稀释,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(56.7 mg)。LC-MS停留时间3.161分钟;m/z 649.62 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将4 M HCl(0.611 mL,2.445 mmol)的二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(53.6 mg,0.061 mmol)于二噁烷(1.5 mL)中的混合物中且用力搅拌反应物2小时。在氮气流下浓缩反应物过夜,得到(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的盐酸盐(37 mg),其不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间2.302分钟;m/z 449.40 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将TFA(500 μl,6.49 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(299 mg,0.865 mmol)的DCE(5 mL)溶液中且在室温下搅拌反应物30分钟。将反应物浓缩至干,接着再经受反应条件5小时。浓缩反应物,得到呈粘性棕色油状的(1R,3S,5R)-3-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的三氟乙酸盐,其不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间2.755分钟;m/z 246.25 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-3-甲基-1-氧代-1-((1R,3S,5R)-3-(4-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)丁-2-基氨基甲酸甲酯
将HATU(428 mg,1.125 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(212 mg,0.865 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(197 mg,1.125 mmol)于DMF(3 mL)及DIPEA(1.2 mL,6.9 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物过夜。将反应物浓缩至干,接着用BIOTAGE? Horizon(25 g SiO2,40-60% EtOAc/己烷)提纯,得到呈黄色玻璃状的(S)-3-甲基-1-氧代-1-((1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)丁-2-基氨基甲酸甲酯(203 mg)。LC-MS停留时间3.095分钟;m/z 403.29 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(4-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯
将碳酸钾(34.3 mg,0.248 mmol)添加至(S)-3-甲基-1-氧代-1-((1R,3S,5R)-3-(5-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)丁-2-基氨基甲酸甲酯(200 mg,0.497 mmol)的甲醇(5 mL)溶液中且用氮气冲洗反应物,密封,接着在50℃下加热4小时,接着在室温下搅拌过夜。将反应物浓缩至干,接着在BIOTAGE? Horizon(12 g SiO2,70-90% EtOAc/己烷)上提纯,得到呈黄色玻璃状的(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(151 mg)。LC-MS停留时间1.788分钟;m/z 331.32 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
经10分钟用氮气(6次)真空冲洗(1R,3S,5R)-3-(5-(6-溴萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(208 mg,0.457 mmol)、(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-乙炔基-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(151 mg,0.457 mmol)及CuI(8.70 mg,0.046 mmol)于DMF(4 mL)及TEA(0.19 mL,1.4 mmol)中的混合物。接着添加Pd(PPh3)4(53 mg,0.046 mmol)且用氮气(3次)真空冲洗反应混合物,密封且在60℃下加热20小时。在氮气流下浓缩反应物过夜,接着通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的40-80% MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(270 mg)。LC-MS停留时间2.995分钟;m/z 704.70 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮
将3 M HCl(水溶液)(10 mL,30.0 mmol)添加至6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹啉(780 mg,2.80 mmol)的丙酮(20 mL)悬浮液中且在室温下搅拌反应混合物5小时。浓缩反应混合物,溶解于THF(20 mL)中且用3 N HCl(水溶液)(5 mL)处理,在60℃下搅拌透明反应溶液5小时。冷却反应物,用NaOH水溶液及NaHCO3中和且用EtOAc萃取。干燥有机层并浓缩,得到呈白色固体状的粗1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮(710 mg)。LC-MS停留时间3.703分钟;m/z 250、251.99 (1:1) (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
1-(6-(4-乙酰基苯基)喹啉-2-基)乙酮
将Pd(OAc)2(62.9 mg,0.280 mmol)添加至4-乙酰基苯基硼酸(689 mg,4.20 mmol)、1-(6-溴喹啉-2-基)乙酮(700 mg,2.8 mmol)、二环己基(2',6'-二甲氧基联苯-2-基)膦(230 mg,0.560 mmol)及K2CO3(1.16 g,8.40 mmol)于二噁烷(10 mL)及水(2.500 mL)中的溶液中且在110℃下使反应混合物回流5小时。将反应混合物冷却至室温且分配于饱和NH4Cl水溶液与EtOAc之间。用NaHCO3及盐水洗涤有机层,接着干燥(MgSO4),过滤,浓缩且通过快速硅胶色谱(装载溶剂:DCM,用0~20% EtOAc/己烷洗脱)提纯,得到呈白色固体状的1-(6-(4-乙酰基苯基)喹啉-2-基)乙酮(781 mg)。LC-MS停留时间3.776分钟;m/z 290.29 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-溴-1-(6-(4-(2-溴乙酰基)苯基)喹啉-2-基)乙酮
将三溴化吡啶鎓(221 mg,0.691 mmol)添加至1-(6-(4-乙酰基苯基)喹啉-2-基)乙酮(100 mg,0.346 mmol)及HBr (0.061 mL,0.35 mmol)于乙酸(3 mL)中的悬浮液中,在70℃下搅拌反应混合物6小时。在真空下浓缩反应物且使残余物分配于NaHCO3水溶液(15 mL)与EtOAc(30 mL+10 mL+10 mL)之间。合并有机层,用盐水洗涤,干燥,过滤并浓缩,得到呈白色固体状的粗2-溴-1-(6-(4-(2-溴乙酰基)苯基)喹啉-2-基)乙酮(120 mg)。LC-MS停留时间4.138分钟;m/z 448.01 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,4S)-4-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)苯基)喹啉-2-基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯
将DIPEA(0.094 mL,0.537 mmol)添加至2-溴-1-(6-(4-(2-溴乙酰基)苯基)喹啉-2-基)乙酮(60 mg,0.134 mmol)及(2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-甲酸(64.6 mg,0.282 mmol)于乙腈(2 mL)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。使反应混合物分配于EtOAc(20 mL+20 mL)/ NaHCO3水溶液(5 mL)之间。用NaHCO3水溶液、盐水洗涤合并的有机层,干燥,过滤并浓缩,得到呈橙色固体状的粗(2S,4S)-4-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)苯基)喹啉-2-基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯(100 mg)。此物质不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间4.558分钟;m/z 742.36 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,4S)-2-(5-(4-(2-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)喹啉-6-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将乙酸铵(207 mg,2.69 mmol)添加至(2S,4S)-4-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)苯基)喹啉-2-基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯(100 mg,0.134 mmol)的甲苯(3 mL)溶液中且在120℃下(微波反应器)搅拌反应混合物3小时。使反应物分配于EtOAc(20 mL+10 mL+10 mL)与NaHCO3水溶液(10 mL)之间且干燥合并的有机层,过滤并浓缩。通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-CH3CN)提纯粗产物,得到呈黄色固体状的产物(2S,4S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(16.6 mg)。LC-MS停留时间3.270分钟;m/z 704.72 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉
将4 M HCl(0.2 mL,0.800 mmol)的二噁烷溶液添加至(2S,4S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(16.6 mg,0.024 mmol)的二噁烷(1 mL)溶液中且在室温下搅拌反应混合物3天。浓缩反应混合物,得到呈黄色固体状的粗2-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-6-(4-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉的盐酸盐(19.1 mg)。LC-MS停留时间2.765分钟;m/z 504.47 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,5S)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)苯基)喹啉-2-基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯
将DIPEA(0.059 mL,0.335 mmol)添加至2-溴-1-(6-(4-(2-溴乙酰基)苯基)喹啉-2-基)乙酮(50 mg,0.11 mmol)及(2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(54 mg,0.24 mmol)于乙腈(2 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物16小时。使反应物分配于EtOAc(20+20 mL)/ NaHCO3水溶液(5 mL)之间。用饱和NaHCO3水溶液、盐水洗涤合并的有机层,干燥,过滤并浓缩,得到呈橙色固体状的粗(2S,5S)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)苯基)喹啉-2-基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯(69 mg)。此粗材料不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间4.483分钟;m/z 744.61 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,5S)-2-(5-(4-(2-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)喹啉-6-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
将乙酸铵(107 mg,1.39 mmol)添加至(2S,5S)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)苯基)喹啉-2-基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯(69 mg,0.093 mmol)于甲苯(体积:2 mL)中的悬浮液中且在120℃下(微波反应器)搅拌反应混合物3小时。使反应物分配于EtOAc(10 mL+5 mL+5 mL)与NaHCO3水溶液(5 mL)之间。干燥合并的有机层,过滤并浓缩,通过制备型HPLC(含10 mM NH4OAc缓冲液的H2O-CH3CN)提纯粗产物,得到呈黄色固体状的产物(2S,5S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(13.4 mg)。LC-MS停留时间4.350 min;m/z 702.29 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉
将4 M HCl(0.2 mL,0.8 mmol)的二噁烷溶液添加至(2S,5S)-2-(5-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉-2-基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(12.7 mg,0.018 mmol)的二噁烷(1 mL)溶液中且在室温下搅拌混合物3天。浓缩反应混合物,得到呈黄色固体状的粗2-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-6-(4-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉的盐酸盐(18.1 mg)。LC-MS停留时间2.597分钟;m/z 504.46 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
以类似于中间体139的方式,在流程35中通过使用6-溴-2-氯喹喔啉作为起始物质而非6-溴-2-氯喹啉来制备中间体173。下文显示分析数据。
6-溴-2-(1-乙氧基乙烯基)喹喔啉
反应得到呈白色固体状的所需产物(380 mg)。LC-MS停留时间4.178分钟;m/z 278.9、280.98 (1:1) (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-溴-1-(6-溴喹喔啉-2-基)乙酮
反应得到呈白色固体状的所需产物(390 mg)。LC-MS停留时间3.743分钟;m/z 331.12 (1:2:1) (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2,3-二甲酸3-(2-(6-溴喹喔啉-2-基)-2-氧代乙基)酯2-叔丁酯
反应得到呈粉红色/橙色固体状的所需产物(270 mg)。LC-MS停留时间4.115分钟;m/z 473、475.81 (1:1) (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-溴-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
反应得到呈红色/橙色固体状的所需产物(125 mg)。LC-MS停留时间3.958分钟;m/z 453.90、455.87 (1:1) (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/ 10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
反应得到呈亮黄色固体状的所需产物(64.4 mg)。LC-MS停留时间3.696分钟;m/z 699.3 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
反应得到呈黄色固体状的所需产物的盐酸盐(80 mg)。LC-MS停留时间2.915分钟;m/z 501.42 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸-叔丁酯
以类似于中间体153的方式,以适当起始物质制备化合物,得到呈黄色玻璃状的标题化合物的三氟乙酸盐(121 mg)。LC-MS停留时间4.100分钟;m/z 647.37 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将2 M HCl(0.33 mL,0.66 mmol)的二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯的三氟乙酸盐(115 mg,0.131 mmol)的二噁烷(2 mL)溶液中且用力搅拌反应物过夜。浓缩反应物,得到(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的盐酸盐(87 mg),其不经进一步提纯即使用。LC-MS停留时间2.793分钟;m/z 449.41 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
以类似于制备中间体117的方式,在流程29中使用(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酸作为起始物质而非(2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸来制备中间体178。下文显示中间体的分析数据。
(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酸2-(4-(6-(2-((S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁酰氧基)乙酰基)萘-2-基)苯基)-2-氧代乙酯
反应得到呈棕褐色固体的所需产物(700 mg)。LC-MS停留时间2.243分钟;m/z 717.5 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1.0 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)氨基甲酸叔丁酯
反应得到呈黄色固体状的所需产物(453 mg)。LC-MS停留时间2.407分钟;m/z 677.6 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1.0 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-1-(5-(4-(6-(2-((S)-1-氨基-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙-1-胺
反应得到呈黄色固体状的所需产物的盐酸盐(390 mg)。LC-MS停留时间2.080分钟;m/z 477.4 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1.0 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
以类似于制备中间体117的方式,在流程29中使用(S)-4-(叔丁氧羰基)吗啉-3-甲酸作为起始物质而非(2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸来制备中间体181。下文显示中间体的分析数据。
(S)-吗啉-3,4-二甲酸3-(2-(4-(6-(2-((S)-4-(叔丁氧羰基)吗啉-3-羰基氧基)乙酰基)萘-2-基)苯基)-2-氧代乙基)酯4-叔丁酯
反应得到呈灰白色固体泡沫状的所需产物的盐酸盐(1.60 g)。LC-MS停留时间4.413分钟;m/z 770.29 (MNa+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(R)-3-(5-(4-(6-(2-((R)-4-(叔丁氧羰基)吗啉-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吗啉-4-甲酸叔丁酯
反应得到呈橙色固体状的所需产物(1.12 g)。LC-MS停留时间3.608分钟;m/z 707.94 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(R)-3-(5-(4-(6-(2-((R)-吗啉-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吗啉
反应得到呈黄色固体状的所需产物的盐酸盐(312 mg)。LC-MS停留时间2.988分钟;m/z 507.72 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
以类似于制备中间体117的方式,在流程29中使用(S)-1-(叔丁氧羰基)哌啶-2-甲酸作为起始物质而非(2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸来制备中间体184。下文显示中间体的分析数据。
(S)-哌啶-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)哌啶-2-羰基氧基)乙酰基)萘-2-基)苯基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯
反应得到呈淡黄色凝固泡沫状的所需产物(1.67 g)。LC-MS停留时间4.850分钟;m/z 766.37 (MNa+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-1-(叔丁氧羰基)哌啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶-1-甲酸叔丁酯
反应得到呈亮黄色固体状的所需产物(1.18 g)。LC-MS停留时间3.778分钟;m/z 703.97 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-哌啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶
反应得到呈黄色固体状的所需产物的盐酸盐(280 mg)。LC-MS停留时间3.015分钟;m/z 503.69 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
以类似于制备中间体117的方式,在流程29中使用(2S,5R)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸(根据JOC 1995第5011页制备)作为起始物质而非(2S,5S)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-甲酸来制备中间体187。下文显示中间体的分析数据。
(2S,5R)-5-甲基吡咯烷-1,2-二甲酸2-(2-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-羰基氧基)乙酰基)萘-2-基)苯基)-2-氧代乙基)酯1-叔丁酯
反应得到所需产物(979 mg)。LC-MS停留时间4.796分钟;m/z 766.19 (MNa+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,5R)-2-(5-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-(叔丁氧羰基)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
反应得到呈橙色固体泡沫状的所需产物(561 mg)。LC-MS停留时间3.673分钟;m/z 703.95 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((2S,5R)-5-甲基吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((2S,5R)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑
反应得到呈淡橙色固体状的所需产物的盐酸盐(157 mg)。LC-MS停留时间2.975分钟;m/z 503.71 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
如流程49中所示,使用(S)-1-(叔丁氧羰基)-4-亚甲基吡咯烷-2-甲酸作为起始物质来制备中间体189。下文显示中间体的分析数据。
(2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-(叔丁氧羰基)-4-亚甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-亚甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
将亨氏碱(0.43 mL,2.47 mmol)添加至经搅拌的(S)-1-(叔丁氧羰基)-4-亚甲基吡咯烷-2-甲酸(509 mg,2.241 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(500 mg,1.121 mmol)于MeCN(25 mL)中的溶液中。在室温下搅拌混合物18小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于乙酸乙酯中且用水、饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将残余物溶解于二甲苯(25 mL)中且添加乙酸铵(1.3 g,16.85 mmol)。密封压力容器且在140℃下加热2.5小时。将反应混合物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将粗产物装入(二氯甲烷)80 g汤姆逊硅胶滤筒中(用15% B至100% B洗脱,经1 L,其中溶剂B=乙酸乙酯且溶剂A=己烷),得到(2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-(叔丁氧羰基)-4-亚甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-亚甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(380 mg,45%产率)。LC-MS停留时间3.32分钟;C42H47N6O4的计算值:699.36,m/z实测值: 699.41 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((S)-4-亚甲基吡咯烷-2-基)-4-(4-(6-(2-((S)-4-亚甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑
将4 N HCl的二噁烷溶液(10 mL)添加至含(2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-(叔丁氧羰基)-4-亚甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-亚甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(380 mg,0.544 mmol)的MeOH(10 mL)中且在环境条件下搅拌4小时,浓缩并在真空下干燥。四盐酸盐(假设理论值:350 mg)。LC-MS停留时间2.68分钟;C32H31N6的计算值:499.26,m/z实测值: 499.21 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
如流程50中所示,使用(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸作为起始物质来制备中间体191。下文显示中间体的分析数据。
((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将亨氏碱(0.39 mL,2.24 mmol)添加至经搅拌的(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)丙酸(424 mg,2.24 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(500 mg,1.121 mmol)于MeCN(50 mL)中的溶液中。在室温下搅拌混合物18小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于乙酸乙酯中且用水、饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将残余物溶解于二甲苯(25 mL)中且添加乙酸铵(1.5 g,20.18 mmol)。密封压力容器且在140℃下加热3.5小时。将反应混合物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将粗产物装入(二氯甲烷)90 g汤姆逊硅胶滤筒中(用15% B至100% B洗脱,经1 L,其中溶剂B=乙酸乙酯且溶剂A=己烷),得到((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(368 mg,47%产率)。应注意,样品仅部分溶解于二氯甲烷中。LC-MS停留时间3.24分钟;C36H43N6O4的计算值:623.33,m/z实测值: 623.37 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-氨基乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺
将4 N HCl的二噁烷溶液(10 mL)添加至含((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(368 mg,0.59 mmol)的MeOH(10 mL)中且在环境条件下搅拌5小时,浓缩并在真空下干燥。四盐酸盐(假设理论值:334 mg)。LC-MS停留时间1.33分钟;C26H27N6的计算值:423.23,m/z实测值: 423.17 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
如流程51中所示,使用(S)-2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)丙酸作为起始物质来制备中间体193。下文显示中间体的分析数据。
((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯
将亨氏碱(0.78 mL,4.48 mmol)添加至经搅拌的(S)-2-(叔丁氧羰基(甲基)氨基)丙酸(456 mg,2.241 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(500 mg,1.121 mmol)于MeCN(50 mL)中的溶液中。在室温下搅拌混合物18小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于乙酸乙酯中且用水、饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将残余物溶解于二甲苯(25 mL)中且添加乙酸铵(859 mg,11.15 mmol)。密封压力容器且在140℃下加热3小时。将反应混合物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将粗产物装入(二氯甲烷)90 g汤姆逊硅胶滤筒中(用15% B至100% B洗脱,经1 L,其中溶剂B=乙酸乙酯且溶剂A=己烷),得到((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯(460 mg,58%产率)。LC-MS停留时间3.28分钟;C38H47N6O4的计算值:651.37,m/z实测值: 651.34 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(S)-N-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-(甲基氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺
将4 N HCl的二噁烷溶液(10 mL)添加至含((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯(434 mg,0.667 mmol)的MeOH(10 mL)中且在环境条件下搅拌3小时,浓缩并在真空下干燥。四盐酸盐(假设理论值:396 mg)。LC-MS停留时间1.44分钟;的计算值:C28H31N6: 451.26,m/z实测值: 451.17 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
如流程52中所示,使用(2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-甲酸作为起始物质来制备中间体196。下文显示中间体的分析数据。
(2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-甲酸
将(S)-1-(叔丁氧羰基)-4-亚甲基吡咯烷-2-甲酸(4 g,17.60 mmol)的2-丙醇(10 mL)溶液添加至经氮气吹扫的10%钯/碳(936 mg)的2-丙醇(240 mL)悬浮液中且向烧瓶中装入氢气(1 atm)。搅拌18后,通过经CELITE?过滤来移除催化剂且浓缩滤液。LC分析显示样品含有约14%反式异构体,且自甲苯中再结晶使顺式异构体富集至96%(16:1)。LC-MS停留时间3.26分钟;C11H20N6O4的计算值:230.14,m/z实测值: 252.14 [M+Na]+。在配备有PHENOMENEX? 2×5 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10%甲醇/90%水/0.1% TFA且溶剂B为90%甲醇/10%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
将亨氏碱(0.381 mL,2.181 mmol)添加至经搅拌的(2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-甲酸(500 mg,2.18 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(486 mg,1.09 mmol)于乙腈(11 mL)中的溶液中。在室温下搅拌异质混合物18小时且再添加亨氏碱(1当量)并搅拌混合物24小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于二氯甲烷中且用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤,并经硫酸钠干燥。重复洗涤2次。将所分离的呈棕褐色泡沫状的粗产物溶解于二甲苯(15 mL)中且添加乙酸铵(1.261 g,16.36 mmol)。密封压力容器,置于预加热油浴(140℃)中并搅拌2小时。将反应混合物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将粗产物装入(二氯甲烷)80 g汤姆逊硅胶滤筒(用25% B至100% B洗脱,经1.5 L且保持0.5 L B。溶剂B=乙酸乙酯且溶剂A=己烷),得到呈黄色泡沫状的(2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(214.2 mg,27.9%)。LC-MS停留时间3.32分钟;C42H51N6O4的计算值:703.40,m/z实测值: 703.28 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑
将4 N HCl的二噁烷溶液(15 mL)添加至含(2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(200 mg,0.285 mmol)的MeOH(5 mL)中且在环境条件下搅拌2小时,浓缩并在真空下干燥。四盐酸盐(假设理论值:185 mg)。LC-MS停留时间2.64分钟;C32H35N6的计算值:503.29,m/z实测值: 503.20 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
如流程53中所示,使用(2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-甲酸作为起始物质来制备中间体201。下文显示中间体的分析数据。
自可根据Tetrahedron Letters, 2003, 3203-3205中所述的程序由(S)-2-甲基-5-氧代吡咯烷-1,2-二甲酸1-叔丁酯的碘代甲烷烷基化获得的顺式、反式及二甲基类似物的混合物分离反式异构体。
将甲硼烷-甲基硫化物复合物(17.67 mL,35.3 mmol)添加至中间体197(6.06 g,23.55 mmol)的THF(180 mL)溶液中,且在40℃下加热反应混合物16小时。在真空中移除溶剂且使残余物分配于EtOAc与水(各250 mL)之间。用EtOAc(2×60 mL)萃取水层,用Na2SO4干燥合并的有机相,且在真空中浓缩。用快速色谱法(10-65% EtOAc/己烷)提纯所得无色油状物,得到呈无色油状的中间体198(3.65 g)。
(2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-甲酸
向酯中间体198(3.63 g,14.92 mmol)的乙醇(36 mL)溶液中添加LiOH(0.393 g,10.42 mmol)的水(18.00 mL)溶液,且在室温下搅拌反应混合物22小时。在真空中蒸发有机溶剂,用水(30 mL)稀释残余物且用乙酸乙酯(50 mL)洗涤。在冰水浴中冷却,且用1 N HCl酸化至约2的pH值范围。接着用EtOAc(50 mL,2次)萃取。用Na2SO4干燥有机层且在真空中浓缩,得到呈无色油状的中间体199,其在长时间暴露于高真空后变成白色固体(3.3 g)。
(2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯
将亨氏碱(0.381 mL,2.181 mmol)添加至经搅拌的(2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基吡咯烷-2-甲酸(500 mg,2.18 mmol)及2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(486 mg,1.09 mmol)于乙腈(11 mL)中的溶液中。在室温下搅拌异质混合物18小时且再添加亨氏碱(1当量)并搅拌混合物24小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于二氯甲烷中且用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤,并经硫酸钠干燥。重复洗涤2次。将所分离的呈棕褐色泡沫状的粗产物溶解于二甲苯(15 mL)中且添加乙酸铵(1.261 g,16.36 mmol)。密封压力容器且置于预加热油浴(140℃)中并搅拌2小时。将反应混合物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将粗产物装入(二氯甲烷)80 g汤姆逊硅胶滤筒(用25% B至100% B洗脱,经1.5 L且保持0.5 L B。溶剂B=乙酸乙酯且溶剂A=己烷),得到呈黄色泡沫状的(2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(214.2 mg,27.9%)。LC-MS停留时间3.32分钟;C42H51N6O4的计算值:703.40,m/z实测值: 703.28 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((2S,4R)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4R)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑
将4 N HCl的二噁烷溶液(15 mL)添加至含(2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-(叔丁氧羰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷甲酸叔丁酯(200 mg,0.285 mmol)的MeOH(5 mL)中且在环境条件下搅拌2小时,浓缩并在真空下干燥。四盐酸盐(假设理论值:185 mg)。LC-MS停留时间2.64分钟;C32H35N6的计算值:503.29,m/z实测值: 503.20 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
如流程54中所示,使用(1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(其可根据WO 2004/052850制备)作为起始物质来制备中间体203。下文显示中间体的分析数据。
(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将亨氏碱(0.384 mL,2.2 mmol)添加至经搅拌的2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(0.491 g,1.100 mmol)及(1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(500 mg,1.1 mmol)于乙腈(11 mL)中的溶液中。在室温下搅拌异质混合物20小时,在真空中移除溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤,并经硫酸钠干燥。重复洗涤2次。将粗产物溶解于二甲苯(11 mL)中且添加乙酸铵(1.27 g,16.5 mmol)。密封压力容器且置于预加热油浴(140℃)中并搅拌2小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将粗产物装入(二氯甲烷)80 g汤姆逊硅胶滤筒(用25% B至100% B洗脱,经1.5 L且保持0.5 L B。溶剂B=乙酸乙酯且溶剂A=己烷),得到呈淡黄色固体状的(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(418.9 mg,43%)。LC-MS停留时间3.46分钟;C42H47N6O4的计算值:699.37,m/z实测值: 699.33 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将4 N HCl的二噁烷溶液(10 mL)添加至含(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(375 mg,0.537 mmol)的MeOH(3 mL)中且在环境条件下搅拌2小时,浓缩并在真空下干燥。四盐酸盐(假设理论值:346 mg)。LC-MS停留时间2.75分钟;C32H31N6的计算值:499.26,m/z实测值: 499.22 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
如流程55中所示,使用(1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(其可根据WO 2004/052850制备)作为起始物质来制备中间体209。下文显示中间体的分析数据。
在-50℃下在干冰/丙酮浴中经10分钟向中间体197的非对映异构混合物(在带有甲基的碳处)(4.75 g,18.46 mmol)的溶液中逐滴添加超氢化物(19.20 mL,19.20 mmol)。添加亨氏碱(13.58 mL,78 mmol),搅拌10分钟,添加呈固体状的DMAP(0.122 g,0.997 mmol),搅拌15分钟,且经15分钟逐滴添加三氟乙酸酐(2.98 mL,21.08 mmol)。移除干冰/丙酮浴且搅拌反应混合物4小时,同时使其升温至室温。用水(50 mL)、饱和NaCl(30 mL)洗涤反应混合物且在真空中浓缩。通过快速色谱法(8-60% EtOAc/己烷)提纯所得粗材料,得到呈黄色油状的酯中间体204(2.85 g)。
经20分钟将二乙基锌(1.1 M甲苯溶液,59.1 mL,65.0 mmol)逐滴添加至经冷却(-23℃)的中间体203(5.23 g,21.68 mmol)的甲苯(60 mL)溶液中且搅拌10分钟。经10分钟逐滴添加氯碘甲烷(9.44 mL,130 mmol),且在-21℃下搅拌反应混合物16小时。将饱和NaHCO3(60 mL)添加至反应混合物中,移除冷却浴,且搅拌混合物10分钟。接着过滤并用甲苯(50 mL)洗涤滤饼。分配滤液,用Na2SO4干燥有机层,且在真空中浓缩。用快速色谱法提纯(2-10% EtOAc/己烷)所得粗材料,得到中间体205(第一洗脱物;无色油状物;2.88 g)及中间体206(第二洗脱物;无色油状物;1.01 g)。基于NOE研究进行相对立体化学指定。
(1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸
向中间体205(2.88 g,11.28 mmol)的乙醇(20 mL)溶液中添加LiOH(0.324 g,13.54 mmol)的水(10.00 mL)溶液,且在室温下搅拌混合物6小时。在真空中移除大部分挥发性组分,且使残余物分配于水(20 mL)与乙醚(20 mL)之间。在冰水浴中冷却水层,用1 N HCl酸化至2的pH值区,且用EtOAc(30 mL,4次)萃取。用Na2SO4干燥合并的有机相,在真空中蒸发,产生呈粘性固体状的中间体207(2.55 g)。
(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将亨氏碱(0.475 mL,2.72 mmol)添加至经搅拌的2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(0.607 g,1.36 mmol)及(1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(729.0 mg,2.72 mmol)于无水乙腈(12 mL)中的溶液中。在室温下搅拌异质混合物20小时,在真空中移除溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤,并经硫酸钠干燥。重复洗涤2次。将粗产物溶解于二甲苯(12 mL)中且添加乙酸铵(1.57 g,20.39 mmol)。密封压力容器且置于预加热油浴(140℃)中并搅拌2小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将粗产物装入(二氯甲烷)80 g汤姆逊硅胶滤筒(用25% B至100% B洗脱,经1.5 L且保持0.5 L B。溶剂B=乙酸乙酯且溶剂A=己烷),得到呈淡黄色固体状的(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(279 mg,27%)。LC-MS停留时间3.56分钟;C44H51N6O4的计算值:727.40,m/z实测值: 727.41 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1S,3S,5S)-5-甲基-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将4 N HCl的二噁烷溶液(15 mL)添加至含(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(250 mg,0.344 mmol)的MeOH(5 mL)中且在环境条件下搅拌2小时,浓缩并在真空下干燥。四盐酸盐(假设理论值:231 mg)。LC-MS停留时间3.09分钟;C34H35N6的计算值:527.29,m/z实测值: 527.35 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
如流程56中所示,使用(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(其可根据WO 2004/052850制备)作为起始物质来制备中间体212。下文显示中间体的分析数据。
(1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸
如上文对于中间体207所述,由中间体206制备中间体210。
(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯
将亨氏碱(0.29 mL,1.66 mmol)添加至经搅拌的2-溴-1-(4-(6-(2-溴乙酰基)萘-2-基)苯基)乙酮(0.37 g,0.83 mmol)及(1R,3R,5S)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸(0.40 g,1.66 mmol)于无水乙腈(9 mL)中的溶液中。在室温下搅拌异质混合物20小时,在真空中移除溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液、盐水洗涤,并经硫酸钠干燥。重复洗涤2次。将粗产物溶解于二甲苯(9 mL)中且添加乙酸铵(1.3 g,16.6 mmol)。密封压力容器且置于预加热油浴(140℃)中并搅拌2小时。在真空中移除溶剂,将残余物溶解于乙酸乙酯中且用饱和碳酸氢钠溶液及盐水洗涤。浓缩后,将粗产物装入(二氯甲烷)90 g汤姆逊硅胶滤筒(用25% B至100% B洗脱,经1.5 L且保持0.5 L B。溶剂B=乙酸乙酯且溶剂A=己烷),得到(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(80 mg,10%)。LC-MS停留时间3.37分钟;C44H51N6O4的计算值:727.40,m/z实测值: 727.38 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-5-甲基-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将4 N HCl的二噁烷溶液(15 mL)添加至含(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(48 mg,0.066 mmol)的MeOH(1 mL)中且在环境条件下搅拌2小时,浓缩并在真空下干燥。四盐酸盐(假设理论值:44 mg)。LC-MS停留时间2.82分钟;C34H35N6的计算值:527.29,m/z实测值: 527.26 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5%甲醇/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95%甲醇/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将N-氯丁二酰亚胺(10.4 mg,0.078 mmol)添加至经搅拌的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(实施例61)(60 mg,0.071 mmol)的DMF(1.5 mL)溶液中且密封反应容器并在50℃下加热16小时。冷却反应物,部分浓缩,接着用MeOH稀释。过滤溶液且通过制备型HPLC(MeOH/H2O,含0.1% TFA)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)- 2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(21.4 mg)。LC-MS停留时间2.798分钟;m/z 462.34 (1/2 MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(4,4-二氟环己基)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(67.3 mg,0.177 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体69)的盐酸盐(38.0 mg,0.059 mmol)及(S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(44.5 mg,0.177 mmol)于DMF(0.7 mL)及DIPEA(0.103 mL,0.590 mmol)中的溶液中。用MeOH稀释反应物,过滤,通过制备型HPLC(含0.1% TFA的水/MeOH)提纯且通过制备型HPLC(含10 mM乙酸铵的水/MeOH)再提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-1-(4,4-二氟环己基)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯(22.1 mg)。LC-MS停留时间2.713分钟;m/z 483.13 (1/2 MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(89 mg,0.24 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体69)的三氟乙酸盐(80 mg,0.084 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)丁酸(37.8 mg,0.235 mmol)于DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.15 mL,0.84 mmol)中的溶液中。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的水/ MeOH)提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(70.1 mg)。LC-MS停留时间1.688分钟;m/z 785.55 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(101 mg,0.266 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体117)的三氟乙酸盐(102 mg,0.106 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(46.6 mg,0.266 mmol)于DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.189 mL,1.1 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用MeOH稀释反应混合物且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeOH/H2O)提纯,接着通过制备型HPLC(含0.1% TFA的乙腈/水)再提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(63.8 mg)。LC-MS停留时间1.900分钟;m/z 817.59 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。1H NMR呈现为区域异构体的约4:1混合物。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
及
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
自制备((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(实施例64)的三氟乙酸盐的同一反应分离呈三氟乙酸盐形式的两种氯咪唑区域异构体(实施例68及69)的混合物(21.4 mg)。使用SCF色谱(2-乙基吡啶SCF柱(4.6×250 mm,5 μm)及80% CO2-20% EtOH/ 0.1% DEA)以多次注射分离该两种区位异构化合物。通过HMBC相关性测定所分离物质的绝对区域化学。反应得到((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)- 2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(7.4 mg)及((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(4.5 mg),各呈灰白色固体状。对于实施例68:LC-MS停留时间2.683分钟;m/z 889.17 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。对于实施例69:LC-MS停留时间2.695分钟;m/z 889.22 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(73.3 mg,0.193 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体117)的三氟乙酸盐(73.9 mg,0.077 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(41.9 mg,0.193 mmol)于DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.14 mL,0.77 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物30分钟。用MeOH稀释反应混合物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeOH/H2O)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(51.2 mg)。LC-MS停留时间1.897分钟;m/z 901.39 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(4,4-二氟环己基)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(70.8 mg,0.186 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体117)的三氟乙酸盐(71.4 mg,0.074 mmol)及(S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(46.8 mg,0.186 mmol)于DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.13 mL,0.75 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物1.5小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeOH/H2O)提纯,得到呈淡黄色固体状的所需产物((1S)-1-(4,4-二氟环己基)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-(4,4-二氟环己基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(43.3 mg)。LC-MS停留时间2.828分钟;m/z 485.22 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将N-氯丁二酰亚胺(7.1 mg,0.053 mmol)添加至经搅拌的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(实施例34)(22.7 mg,0.025 mmol)的DMF(0.5 mL)溶液中且密封反应容器并在50℃下加热反应物12小时。使反应物冷却至室温,再添加N-氯丁二酰亚胺(约3 mg),密封反应容器并在50℃下搅拌2小时。使反应物冷却至室温,用MeOH稀释,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的甲醇/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(12 mg)。LC-MS停留时间2.708分钟;m/z 483.25 (1/2 MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S,2R)-2-甲氧基-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(65.7 mg,0.173 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体133)的三氟乙酸盐(66 mg,0.069 mmol)及(2S,3R)-3-甲氧基-2-(甲氧羰基氨基)丁酸(33.0 mg,0.173 mmol)于DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.121 mL,0.691 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物过夜。用MeOH稀释反应物,过滤且制备型HPLC(含10 nM乙酸铵的甲醇/水)提纯,得到呈灰白色固体状的((1S,2R)-2-甲氧基-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-(N-(甲氧羰基)-O-甲基-L-苏氨酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(51.9 mg,0.048 mmol,98%产率)。LC-MS停留时间2.383分钟;m/z 845.42 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 10u C18 3.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用4 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、3分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及4分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(193 mg,0.506 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体124)的盐酸盐(100 mg,0.169 mmol)及(R)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(89 mg,0.51 mmol)于DMF(1.5 mL)及DIPEA(0.24 mL,1.4 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌透明橙色溶液3小时。用甲醇稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含乙酸铵缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(71 mg)。LC-MS停留时间3.706分钟;m/z 761.22 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(((甲氧羰基)氨基)(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(110 mg,0.289 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体124)的盐酸盐(57 mg,0.096 mmol)及外消旋2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(62.7 mg,0.289 mmol)于DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.134 mL,0.770 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌透明橙色溶液3小时。用甲醇稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含乙酸铵缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状且呈非对映异构体混合物形式的(2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(((甲氧羰基)氨基)(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(37.3 mg)。LC-MS停留时间1.522分钟;m/z 845.36 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。非对映异构体混合物。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-((4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将N-氯丁二酰亚胺(13.3 mg,0.100 mmol)添加至经搅拌的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(38 mg,0.050 mmol)的DMF(1 mL)溶液中,接着用氮气冲洗反应容器,密封并在50℃下加热16小时。使反应物冷却至室温且再添加N-氯丁二酰亚胺(7.4 mg)。在50℃下再加热反应物3小时,冷却至室温,用MeOH(约0.5 mL)稀释,过滤且通过制备型HPLC(MeOH/水,TFA缓冲液)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-((4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(5.0 mg)。LC-MS停留时间4.153分钟;m/z 831.02 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(25.4 mg,0.067 mmol)添加至经搅拌的(S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(中间体128)的盐酸盐(42 mg,0.061 mmol)、2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(Cap-179立体异构体2)(14.9 mg,0.061 mmol)及DIEA(0.053 mL,0.30 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中且在室温下搅拌所得浅黄色溶液2小时。在减压下浓缩反应物,将残余物再溶解于甲醇中且通过制备型HPLC(溶剂A:05% MeCN/95%水/10 mM NH4Ac;溶剂B:95% MeCN/5%水/10 mM NH4Ac;柱:Sunfire Prep MS C18 30×100 mm S10;波长:220 nM;流速:40 ml/min;梯度:0% B至80% B,经30分钟,保持时间5分钟)提纯,得到呈白色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(26 mg)。LC/MS [M+H]+=883;Rt=2.99分钟为产物。柱Luna 3u C18 2×50 mm;起始% B:0,最后% B:100,溶剂A:5% ACN/95% H2O+10 mM乙酸铵;溶剂B:95% ACN/5% H2O+10 mM乙酸铵;流速为4 ml/min。操作时间:5分钟。纯度=97%。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-联萘-6-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(91 mg,0.240 mmol)添加至经搅拌的6,6'-双(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-联萘(中间体133)(43.9 mg,0.080 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(42.0 mg,0.240 mmol)于DMF(1 mL)及DIPEA(0.14 mL,0.80 mmol)中的溶液中且搅拌透明棕色溶液2小时。用MeOH稀释反应混合物且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6'-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2,2'-联萘-6-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(28.9 mg)。LC-MS停留时间1.788分钟;m/z 863.46 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(35.4 mg,0.093 mmol)添加至经搅拌的(2S)-1-((1R,3S,5R)-3-(5-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(47 mg,0.072 mmol)及(S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(23 mg,0.093 mmol)于DMF(1 mL)及DIPEA(0.050 mL,0.29 mmol)中的溶液中且搅拌反应物3小时。用MeOH稀释反应混合物且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeOH/水提纯),得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(31.3 mg)。LC-MS停留时间1.670分钟;m/z 883.43 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(64.1 mg,0.169 mmol)添加至2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉(中间体139)的盐酸盐(50 mg,0.073 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(29.5 mg,0.169 mmol)于DMF(1 mL)及DIPEA(0.115 mL,0.660 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物16小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(55.3 mg)。LC-MS停留时间2.883分钟;m/z 814.65 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(64.1 mg,0.169 mmol)添加至2-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)喹啉(中间体139)的盐酸盐(50 mg,0.073 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(36.6 mg,0.169 mmol)于DMF(1 mL)及DIPEA(0.12 mL,0.66 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)- 3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(64.8 mg)。LC-MS停留时间2.553分钟;m/z 898.70 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(102 mg,0.269 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的盐酸盐(60 mg,0.134 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(58.4 mg,0.269 mmol)于DMF(1.2 mL)及DIPEA(0.19 mL,1.1 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用甲醇稀释反应物且通过制备型HPLC(含乙酸铵缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)- 2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(48.9 mg)。LC-MS停留时间2.572分钟;m/z 845.65 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(27.8 mg,0.073 mmol)添加至(2S)-1-((1R,3S,5R)- 3-(5-(6-(4-(2-((1R,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸甲酯(中间体131)(40 mg,0.061 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(15.90 mg,0.073 mmol)溶解于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.053 mL,0.31 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用甲醇稀释反应物且通过制备型HPLC(含乙酸铵缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-2-((1R,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(3.5 mg)。LC-MS停留时间2.785分钟;m/z 855.74 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
及
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将N-氯丁二酰亚胺(6.01 mg,0.045 mmol)添加至经搅拌的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(实施例80)的三氟乙酸盐(26 mg,0.022 mmol)的DMF(0.5 mL)溶液中且在50℃下搅拌反应混合物16小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到两种产物:1)呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(12.4 mg)。LC-MS停留时间3.871分钟;m/z 882.55 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据.
2)呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(4.8 mg)。LC-MS停留时间2.98分钟;m/z 848.60 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将N-氯丁二酰亚胺(6.68 mg,0.050 mmol)添加至((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(实施例81)的三氟乙酸盐(31 mg,0.025 mmol)的DMF(0.5 mL)溶液中且在50℃下搅拌反应混合物16小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(12.1 mg)。LC-MS停留时间3.511分钟;m/z 484.17 (1/2 MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将N-氯丁二酰亚胺(18.88 mg,0.141 mmol)添加至经搅拌的((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(105 mg,0.129 mmol)的DMF(3.0 mL)溶液中,接着用氮气冲洗反应物,密封并在50℃下加热过夜。根据LCMS为1.3:1.6:1的起始物质:单氯(可能两种区域异构体:二氯)。浓缩反应物,溶解于MeOH中,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到回收的起始物质(36.2 mg)、两种单氯咪唑区域异构体(56.6 mg)(实施例94及实施例95)的混合物,及呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(20.4 mg)。LC-MS停留时间2.482分钟;m/z 885.84 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-1-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(62.8 mg,0.165 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体144)的盐酸盐(42.6 mg,0.066 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(28.9 mg,0.165 mmol)于DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.092 mL,0.53 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈灰白色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-1-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(53.7 mg)。LC-MS停留时间2.821分钟;m/z 813.88 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-1-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(62.8 mg,0.165 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-1-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体144)的盐酸盐(42.6 mg,0.066 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(35.9 mg,0.165 mmol)于DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.092 mL,0.53 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物4小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含乙酸铵缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈灰白色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(5-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-1-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(42.6 mg,0.066 mmol)。LC-MS停留时间1.965分钟;m/z 897.59 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95% MeOH/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯
将(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体124)的盐酸盐(50 mg,0.073 mmol)、2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(Cap-179立体异构体2)(36.9 mg,0.151 mmol)、HATU(58.6 mg,0.154 mmol)及DIEA(0.077 mL,0.441 mmol)于DMF(3 mL)中组合且在室温下搅拌所得黄色溶液15小时。在减压下移除挥发性物质,将残余物再溶解于甲醇中且通过制备型HPLC(溶剂A:10% MeOH/90%水/0.1% TFA;溶剂B:90% MeOH/10%水/ 0.1% TFA;柱:Sunfire Prep MS C18 30×100 mm 5u;波长:220 nM;流速:40 ml/min;梯度:10% B至80% B,经30分钟,保持时间5分钟)提纯,得到呈白色固体状的((1S)-1-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(43 mg)。LC/MS [M+H]+=902;Rt=1.93分钟为产物。柱PHENOMENEX? 10u C18 3.0×50 mm;起始% B:0,最后% B:100,溶剂A:10% MeOH/90% H2O+1% TFA;溶剂B:90% MeOH/ 10% H2O+1% TFA;流速为4 mL/min。操作时间:5分钟。纯度=98%。
((1S)-1-(((2S,3aS,6aS)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,3aS,6aS)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)八氢环戊二烯并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)六氢环戊二烯并[b]吡咯-1(2H)-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(60.9 mg,0.160 mmol)添加至经搅拌的(2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-八氢环戊二烯并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)八氢环戊二烯并[b]吡咯的盐酸盐(51 mg,0.073 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(中间体147)(28.1 mg,0.160 mmol)及DIPEA(0.076 mL,0.44 mmol)于DCM(1.5 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。将粗反应混合物浓缩至干且通过制备型HPLC(TFA缓冲液)提纯,得到呈白色固体状的((1S)-1-(((2S,3aS,6aS)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,3aS,6aS)- 1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)八氢环戊二烯并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)六氢环戊二烯并[b]吡咯-1(2H)-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(23.7 mg)。LC-MS停留时间2.462分钟;m/z 867.8 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)六氢环戊二烯并[b]吡咯-2(2H)-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)六氢环戊二烯并[b]吡咯-1(2H)-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(62.1 mg,0.163 mmol)添加至经搅拌的(2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-八氢环戊二烯并[b]吡咯-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)八氢环戊二烯并[b]吡咯的盐酸盐(51 mg,0.073 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(中间体147)(52 mg,0.074 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(35.5 mg,0.163 mmol)及DIPEA(0.078 mL,0.45 mmol)于DCM(1.5 mL)中的溶液中且在室温下搅拌混合物2小时。将粗反应混合物浓缩至干且通过制备型HPLC(TFA缓冲液)提纯,得到呈白色固体状的((1S)-2-((2S,3aS,6aS)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,3aS,6aS)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)六氢环戊二烯并[b]吡咯-2(2H)-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)六氢环戊二烯并[b]吡咯-1(2H)-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(25.8 mg)。LC-MS停留时间2.350分钟;m/z 477.5 (1/2 MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
3-氯-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((3-氯-5-甲氧基-1-异喹啉基)羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-5-甲氧基异喹啉
将HATU(48.1 mg,0.127 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体124)的盐酸盐(30 mg,0.051 mmol)及3-氯-5-甲氧基异喹啉-1-甲酸(30.1 mg,0.127 mmol)于DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.071 mL,0.45 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌过夜。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含NH4OAc缓冲液的MeOH/水)提纯并通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)再提纯,得到呈黄色固体状的3-氯-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((3-氯-5-甲氧基-1-异喹啉基)羰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-5-甲氧基异喹啉的三氟乙酸盐(40.9 mg)。LC-MS停留时间3.621分钟;m/z 887.34 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
及
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
在制备((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(实施例87)的反应中制备此两种化合物且其以单氯咪唑区域异构体的混合物形式分离。通过SCFC,在CHIRALCEL? OJ-H柱(30×250 mm,5 μm)上,使用溶剂:75% CO2-25% EtOH/0.1% DEA分离两种区域异构体。不确定两种单氯咪唑区域异构体的绝对区域化学,因此各自随意指定。实施例94:分离出呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(4-氯-2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(18.6 mg)。LC-MS停留时间3.756分钟;m/z 851.62 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。实施例95:分离出呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-氯-5-(4-(6-(2-((2S,5S)- 1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(24.1 mg)。LC-MS停留时间3.770分钟;m/z 851.64 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将4 M HCl(0.370 mL,1.48 mmol)的二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(中间体150)(69 mg,0.074 mmol)的二噁烷(2 mL)溶液中且搅拌浆料1.5小时。接着在氮气流下浓缩反应混合物且用(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(20.9 mg,0.096 mmol)、DMF(1.5 mL)、DIPEA (0.078 mL,0.44 mmol)及最后HATU(36.6 mg,0.096 mmol)处理中间产物。在室温下搅拌反应混合物过夜,用MeOH稀释,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(35.3 mg)。LC-MS停留时间2.726分钟;m/z 803.74 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将4 M HCl(0.34 mL,1.3 mmol)的二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-((6-(2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(中间体150)(62.7 mg,0.067 mmol)的二噁烷(2 mL)溶液中,搅拌浆料1.5小时。接着在氮气流下将反应物浓缩至干,接着用2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(Cap-179立体异构体2)(21.45 mg,0.087 mmol)、DMF(1.5 mL)、DIPEA(0.071 mL,0.40 mmol)及最后HATU(33.3 mg,0.087 mmol)处理。在室温下搅拌反应混合物过夜,用MeOH稀释,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)- 2-((2S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(28 mg)。LC-MS停留时间2.898分钟;m/z 831.80 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S,5S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(43.2 mg,0.114 mmol)添加至含(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体154)的盐酸盐(27 mg,0.045 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(24.7 mg,0.114 mmol)的DMF(1 mL)及DIPEA(0.056 mL,0.32 mmol)中且在室温下搅拌反应混合物2小时。在氮气流下浓缩反应物,溶解于MeOH中,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((2S,5S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(31.4 mg)。LC-MS停留时间2.658分钟;m/z 847.80 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。1H NMR呈现为旋转异构体的约1:3.5混合物。主要旋转异构体的1H NMR为:
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(43.2 mg,0.114 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体154)的盐酸盐(10.1 mg,0.017 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(7.44 mg,0.042 mmol)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.021 mL,0.119 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。浓缩反应物,溶解于MeOH中,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)- 3-(4-((6-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(9.3 mg)。LC-MS停留时间2.930分钟;m/z 763.75 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。1H NMR呈现为旋转异构体的约1:3混合物,主要旋转异构体的数据为:
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将4 M HCl(0.32 mL,1.3 mmol)的二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(中间体158)的三氟乙酸盐(60 mg,0.064 mmol)于二噁烷(0.5 mL)中的混合物中且用力搅拌反应物4小时。将反应物浓缩至干。接着将(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(18.2 mg,0.084 mmol)、DMF(0.5 mL)、DIPEA(0.067 mL,0.39 mmol)及最后HATU(31.8 mg)添加至粗材料中且在室温下搅拌反应物1小时。用氮气流部分浓缩反应物,用MeOH稀释,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,接着通过制备型HPLC(含乙酸铵缓冲液的MeOH/水)再提纯。第三次通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯物质,得到呈白色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(27.7 mg)。LC-MS停留时间3.291分钟;m/z 803.67 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-((3S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将4 M HCl(0.3 mL,1.3 mmol)的二噁烷溶液添加至(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸叔丁酯(中间体158)的三氟乙酸盐(60 mg,0.064 mmol)于二噁烷(0.5 mL)中的混合物中且用力搅拌反应物4小时。将反应物浓缩至干。接着将(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-((S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙酸(Cap-177a)(18.2 mg,0.084 mmol)、DMF(0.5 mL)、DIPEA(0.067 mL,0.39 mmol)及最后HATU(32 mg,0.084 mmol)添加至粗材料中且在室温下搅拌反应物1小时。部分浓缩反应物,用MeOH稀释,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯且以一次注射通过制备型HPLC(含乙酸铵缓冲液的MeOH/水)再提纯,得到呈白色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)- 3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-((3S)-四氢-2H-吡喃-3-基)乙基)氨基甲酸甲酯(30.5 mg)。LC-MS停留时间3.376分钟;m/z 803.66 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(20.99 mg,0.055 mmol)添加至2-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-6-(4-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉(中间体164)的盐酸盐(16.5 mg,0.024 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(9.7 mg,0.055 mmol)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.038 mL,0.22 mmol)的溶液中且在室温下搅拌反应混合物16小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(8.3 mg,6.94 μmol,28.9%产率)。LC-MS停留时间3.555分钟;m/z 818.78 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(15.74 mg,0.041 mmol)添加至粗2-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)-6-(4-(2-((2S,5S)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉(中间体167)的盐酸盐(12.35 mg,0.018 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(7.25 mg,0.041 mmol)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.028 mL,0.16 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物16小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((2S,5S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,5S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(3.9 mg)。LC-MS停留时间3.616分钟;m/z 818.73 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(50.7 mg,0.133 mmol)添加至((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(中间体173)的盐酸盐(41.7 mg,0.058 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(23.4 mg,0.133 mmol)于DMF(1 mL)及DIPEA(0.09 mL,0.5 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物16小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(22.3 mg)。LC-MS停留时间3.451分钟;m/z 815.72 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(12.24 mg,0.032 mmol)添加至((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯(中间体173)的盐酸盐(10.1 mg,0.014 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(7.0 mg,0.032 mmol)于DMF(0.5 mL)及DIPEA (0.022 mL,0.13 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-(4-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹喔啉基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(7.3 mg)。LC-MS停留时间3.251分钟;m/z 899.79 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-((4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将N-氯丁二酰亚胺(6.97 mg,0.052 mmol)添加至经搅拌的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯(实施例82)(21.0 mg,0.025 mmol)的DMF溶液中,接着用氮气流冲洗反应容器,密封且在50℃下加热3小时。再添加N-氯丁二酰亚胺(5.0 mg)且用氮气冲洗反应容器,密封且在50℃下加热3小时,接着冷却反应物并在氮气流下浓缩。将残余物溶解于MeOH中,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((1R,3S,5R)-3-(4-氯-5-(6-((4-氯-2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-5-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(8.1 mg)。LC-MS停留时间4.276分钟;m/z 457.47 (1/2 MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)氨甲酰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(77 mg,0.20 mmol)添加至经搅拌的(S)-1-(5-(4-(6-(2-((S)-1-氨基-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙-1-胺(中间体178)的盐酸盐(57.4 mg,0.092 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(35.4 mg,0.202 mmol)及DIPEA(0.096 mL,0.55 mmol)于DCM(1.5 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。将粗反应混合物浓缩至干且通过制备型HPLC(TFA缓冲液)提纯,得到呈白色固体状的((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氨基)-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙基)氨甲酰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(60.4 mg)。LC-MS停留时间2.253分钟;m/z 759.6 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
3-甲基-N-((1S)-2-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-2-甲基-1-((3-甲基丁酰基)氨基)丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)丙基)丁酰胺
将HATU(119 mg,0.313 mmol)添加至经搅拌的(S)-1-(5-(4-(6-(2-((S)-1-氨基-2-甲基丙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-甲基丙-1-胺(中间体178)的盐酸盐(89 mg,0.142 mmol)、3-甲基丁酸(32 mg,0.31 mmol)及DIPEA(0.149 mL,0.855 mmol)于DCM(2 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2小时。将粗反应混合物浓缩至干且通过制备型HPLC(TFA缓冲液)提纯两次,得到呈米色固体状的3-甲基-N-((1S)-2-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-2-甲基-1-((3-甲基丁酰基)氨基)丙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)丙基)丁酰胺的三氟乙酸盐(54.6 mg)。LC-MS停留时间2.375分钟;m/z 645.6 (MH-)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5%乙腈/95% H2O/10 mM乙酸铵且溶剂B为5% H2O/95%乙腈/10 mM乙酸铵。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((2S,5S)-1-乙酰基-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-乙酰基-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑
将HATU(63.2 mg,0.166 mmol)添加至2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体117)(受乙酸铵污染)(38 mg,0.076 mmol)及(S)-2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(40.8 mg,0.166 mmol)于DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.053 mL,0.30 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物过夜。用MeOH稀释反应混合物,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的2-((2S,5S)-1-乙酰基-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-乙酰基-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑的三氟乙酸盐(20 mg)。LC-MS停留时间3.123分钟;m/z 587.62 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(61.9 mg,0.163 mmol)添加至2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,5S)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体117)的盐酸盐(48 mg,0.074 mmol)及2-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(Cap-179立体异构体2)(39.9 mg,0.163 mmol)于DMF(0.8 mL)及DIPEA(0.09 mL,0.52 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物2小时。用MeOH稀释反应物,过滤且以两次注射通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈淡黄色固体状的(1-((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-((2S,5S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5S)-1-(((2R,4r,6S)-2,6-二甲基四氢-2H-吡喃-4-基)((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(55.5 mg)。LC-MS停留时间3.506分钟;m/z 479.54 (1/2 MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。1H NMR呈现为旋转异构体的复杂混合物。
((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(23.99 mg,0.063 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体175)的盐酸盐(15 mg,0.025 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(13.70 mg,0.063 mmol)于DMF(0.4 mL)及DIPEA(0.03 mL,0.2 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌反应物1.5小时。用MeOH稀释反应物,过滤且以两次注射通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(12.0 mg)。LC-MS停留时间3.040分钟;m/z 847.76 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(60.8 mg,0.160 mmol)添加至(1R,3S,5R)-3-(4-((6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)乙炔基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体175)的盐酸盐(38 mg,0.064 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(28.0 mg,0.160 mmol)于DMF(0.7 mL)及DIPEA(0.08 mL,0.4 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌1.5小时。用MeOH稀释反应物,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯两次,得到呈灰白色固体状的((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(19.1 mg)。LC-MS停留时间3.288分钟;m/z 763.74 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
2-((2S,4S)-4-甲基-1-(3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-1-(3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑
将HATU(76 mg,0.200 mmol)添加至2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中间体196)的盐酸盐(64.8 mg,0.1 mmol)、3-甲基丁酸(22.5 mg,0.220 mmol)及DIPEA(0.122 mL,0.700 mmol)于DCM(2 mL)中的溶液中且在室温下搅拌混合物过夜。将反应混合物蒸发至干,接着通过制备型HPLC提纯,得到呈灰白色固体状的2-((2S,4S)-4-甲基-1-(3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-1-(3-甲基丁酰基)-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑的三氟乙酸盐(61.7 mg)。LC-MS停留时间1.853分钟;m/z 671.64 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(12.75 mg,0.034 mmol)添加至2-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)-6-(4-(2-((2S,4S)-4-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-5-基)苯基)喹啉(中间体164)(10 mg,0.015 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(7.28 mg,0.034 mmol)于DMF(0.5 mL)及DIPEA(0.023 mL,0.13 mmol)中的溶液中且在室温下搅拌混合物16小时。浓缩反应物且通过制备型HPLC(含0.1% TFA缓冲液的H2O-MeOH)提纯残余物,得到呈黄色固体状的((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-喹啉基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(8.6 mg)。LC-MS停留时间3.243分钟;m/z 902.90 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((3R)-3-(4-(4-(6-(2-((3R)-4-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-3-吗啉基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-吗啉基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(96 mg,0.252 mmol)添加至(R)-3-(5-(4-(6-(2-((R)-吗啉-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吗啉(中间体181)的盐酸盐(71.6 mg,0.110 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(44.2 mg,0.252 mmol)于DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.13 mL,0.77 mmol)中的溶液中且用氮气冲洗反应混合物,密封并在室温下搅拌3小时。在氮气流下浓缩反应物过夜,用MeOH(约5 mL)稀释,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈灰白色固体状的((1S)-1-(((3R)-3-(4-(4-(6-(2-((3R)-4-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-3-吗啉基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-吗啉基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(75.5 mg)。LC-MS停留时间3.351分钟;m/z 822.07 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。1H NMR呈现为旋转异构体混合物。
((1S)-2-((3R)-3-(4-(4-(6-(2-((3R)-4-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-3-吗啉基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-吗啉基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(88 mg,0.231 mmol)添加至(R)-3-(5-(4-(6-(2-((R)-吗啉-3-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)吗啉(中间体181)的盐酸盐(65.5 mg,0.100 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(50.2 mg,0.231 mmol)于DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.12 mL,0.70 mmol)中的溶液中且用氮气冲洗反应混合物,密封并在室温下搅拌3小时。在氮气流下浓缩反应物过夜,用MeOH (约5 mL)稀释,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈灰白色固体状的((1S)-2-((3R)-3-(4-(4-(6-(2-((3R)-4-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-3-吗啉基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-吗啉基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(75 mg)。LC-MS停留时间3.120分钟;m/z 906.15 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1R,3S,5R)-2-(3-甲基丁酰基)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷
将HATU(74.8 mg,0.197 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(5-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)萘-2-基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体124)的盐酸盐(64.7 mg,0.098 mmol)、3-甲基丁酸(22.09 mg,0.216 mmol)及DIPEA (0.103 mL,0.590 mmol)于DCM(1.5 mL)中的溶液中且在室温下搅拌反应混合物2-3小时。将反应物浓缩至干且通过制备型HPLC(TFA缓冲液)提纯,得到呈米色凝固泡沫状的(1R,3S,5R)-2-(3-甲基丁酰基)-3-(4-(6-((2-((1R,3S,5R)-2-(3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)乙炔基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷的三氟乙酸盐(51.5 mg)。LC-MS停留时间1.775分钟;m/z 615.41 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-哌啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-哌啶基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(93 mg,0.245 mmol)添加至(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-哌啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶(中间体184)的盐酸盐(69.0 mg,0.106 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(42.9 mg,0.245 mmol)于DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.13 mL,0.75 mmol)中的溶液中且用氮气冲洗反应物,密封并在室温下搅拌1小时。在氮气流下浓缩反应物过夜,用MeOH(约5 mL)稀释,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-1-(((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-哌啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-哌啶基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(88.9 mg)。LC-MS停留时间3.530分钟;m/z 818.08 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。1H NMR呈现为旋转异构体混合物。
((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-哌啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-哌啶基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(84 mg,0.222 mmol)添加至(S)-2-(5-(4-(6-(2-((S)-哌啶-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)哌啶(中间体184)的盐酸盐(62.5 mg,0.096 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(48.2 mg,0.222 mmol)于DMF(1.0 mL)及DIPEA(0.12 mL,0.68 mmol)中的溶液中且用氮气冲洗反应物,密封并在室温下搅拌1小时。在氮气流下浓缩反应物过夜,用MeOH(约5 mL)稀释,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-2-哌啶基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-1-哌啶基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(71.2 mg)。LC-MS停留时间3.348分钟;m/z 902.10 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。1H NMR呈现为旋转异构体混合物。
((1S)-1-(((2S,5R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(62.0 mg,0.163 mmol)添加至2-((2S,5R)-5-甲基吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((2S,5R)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中间体187)的盐酸盐(46 mg,0.071 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(28.6 mg,0.163 mmol)于DMF(0.7 mL)及DIPEA(0.09 mL,0.5 mmol)中的溶液中且用氮气冲洗反应容器,密封并在室温下搅拌1小时。在氮气流下浓缩反应物过夜,用MeOH(约3 mL)稀释,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-1-(((2S,5R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(53.3 mg)。LC-MS停留时间3.255分钟;m/z 818.08 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。1H NMR呈现为旋转异构体的复杂混合物。
((1S)-2-((2S,5R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(55.8 mg,0.147 mmol)添加至2-((2S,5R)-5-甲基吡咯烷-2-基)-5-(4-(6-(2-((2S,5R)-5-甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中间体187)的盐酸盐(41.4 mg,0.064 mmol)及(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(31.9 mg,0.147 mmol)于DMF(0.7 mL)及DIPEA(0.08 mL,0.4 mmol)中的溶液中且用氮气冲洗反应容器,密封并在室温下搅拌1小时。在氮气流下浓缩反应物过夜,用MeOH(约3 mL)稀释,过滤且通过制备型HPLC(含TFA缓冲液的MeOH/水)提纯,得到呈淡黄色固体状的((1S)-2-((2S,5R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,5R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-5-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的三氟乙酸盐(27.6 mg)。LC-MS停留时间3.135分钟;m/z 902.15 (MH+)。在配备有PHENOMENEX? Luna 3u C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸且溶剂B为10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。根据1H NMR为旋转异构体混合物。
((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-亚甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-亚甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(102 mg,0.269 mmol)添加至经搅拌的2-((S)-4-亚甲基吡咯烷-2-基)-4-(4-(6-(2-((S)-4-亚甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中间体189)的四盐酸盐(86 mg,0.148 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(47.1 mg,0.269 mmol)及亨氏碱(0.234 mL,1.34 mmol)于DMF(6 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物4小时且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeOH/水)提纯,得到((1S)-1-(((2S)-2-(4-(6-(4-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-亚甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-亚甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(65 mg,46%)。LC-MS停留时间3.22分钟;C46H53N8O6的计算值:813.40,m/z实测值: 813.7 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeCN/95%水/10 mM NH4OAc且溶剂B为95% MeCN/5%水/10 mM NH4OAc。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-亚甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-亚甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(102 mg,0.269 mmol)添加至经搅拌的2-((S)-4-亚甲基吡咯烷-2-基)-4-(4-(6-(2-((S)-4-亚甲基吡咯烷-2-基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑(中间体189)的四盐酸盐(86 mg,0.148 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(58.4 mg,0.269 mmol)及亨氏碱(0.234 mL,1.34 mmol)于DMF(6 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物5小时且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-2-((2S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-亚甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-亚甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐。LC-MS停留时间2.81分钟;C50H57N8O8的计算值:897.43,m/z实测值: 897.41 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/ 0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)氨甲酰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(149 mg,0.393 mmol)添加至经搅拌的(S)-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-氨基乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺(中间体191)的四盐酸盐(111 mg,0.148 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(47.1 mg,0.196 mmol)及亨氏碱(0.343 mL,1.96 mmol)于DMF(8 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物4小时且通过制备型HPLC (含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)氨甲酰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(91 mg,47%)。LC-MS停留时间2.96分钟;C40H49N8O6的计算值:737.38,m/z实测值: 737.45 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)氨基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(149 mg,0.393 mmol)添加至经搅拌的(S)-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-氨基乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺(中间体191)的四盐酸盐(83 mg,0.196 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(85 mg,0.393 mmol)及亨氏碱(0.343 mL,1.96 mmol)于DMF(8 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物5小时且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-2-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)氨基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(89 mg,42%)。LC-MS停留时间2.64分钟;C44H53N8O8的计算值:821.40,m/z实测值: 821.80 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% AcCN/95%水/10 mM NH4OAc且溶剂B为95% AcCN/5%水/10 mM NH4OAc。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)(甲基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)(甲基)氨甲酰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(84 mg,0.222 mmol)添加至经搅拌的(S)-N-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-(甲基氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺(中间体193)的四盐酸盐(66 mg,0.111 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(38.9 mg,0.222 mmol)及亨氏碱(0.194 mL,1.11 mmol)于DMF (5 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物5小时且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)(甲基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)(甲基)氨甲酰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐。LC-MS停留时间1.78分钟;C42H53N8O6的计算值:765.41,m/z实测值: 765.41 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/ 0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)(甲基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)(甲基)氨基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(84 mg,0.222 mmol)添加至经搅拌的(S)-N-甲基-1-(4-(4-(6-(2-((S)-1-(甲基氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)萘-2-基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙胺(中间体193)的四盐酸盐(66 mg,0.111 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(48 mg,0.222 mmol)及亨氏碱(0.194 mL,1.11 mmol)于DMF(5 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物5小时且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-2-(((1S)-1-(4-(4-(6-(2-((1S)-1-(((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)(甲基)氨基)乙基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)乙基)(甲基)氨基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐。LC-MS停留时间1.58分钟;C46H57N8O8的计算值:849.43,m/z实测值: 849.46 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×30 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用1 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、2分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及3分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(32 mg,0.085 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体196)的四盐酸盐(25 mg,0.039 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(14.9 mg,0.085 mmol)及亨氏碱(0.054 mL,0.308 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(24.5 mg,57.8%)。LC-MS停留时间3.05分钟;C46H57N8O6的计算值:817.44,m/z实测值: 817.36 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(((甲氧羰基)氨基)(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(64.5 mg,0.170 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体196)的四盐酸盐(50 mg,0.077 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(36.8 mg,0.170 mmol)及亨氏碱(0.11 mL,0.617 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到(2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(((甲氧羰基)氨基)(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐。LC-MS停留时间2.84分钟;C50H61N8O8的计算值:901.46,m/z实测值: 901.42 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
(1-环丙基-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(环丙基((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(39 mg,0.102 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体196)的四盐酸盐(30 mg,0.085 mmol)、(S)-2-环丙基-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(17.62 mg,0.102 mmol)及亨氏碱(0.065 mL,0.37 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到(1-环丙基-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-(环丙基((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(24.5 mg,57.8%)。LC-MS停留时间3.08分钟;C46H53N8O6的计算值:813.41,m/z实测值: 813.45 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(45 mg,0.119 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体196)的四盐酸盐(35 mg,0.054 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)丁酸(19.14 mg,0.119 mmol)及亨氏碱(0.075 mL,0.432 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(36.4 mg,61.7%)。LC-MS停留时间2.91分钟;C44H53N8O6的计算值:789.41,m/z实测值: 789.41 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-环丁基-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-环丁基-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(45 mg,0.119 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体196)的四盐酸盐(35 mg,0.054 mmol)、(S)-2-环丁基-2-(甲氧羰基氨基)乙酸(22.23 mg,0.119 mmol)(以类似于Cap-51方式,使用市售(S)-2-(叔丁氧羰基氨基)-2-环丁基乙酸作为起始物质来制备)及亨氏碱(0.075 mL,0.432 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-环丁基-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-环丁基-2-((甲氧羰基)氨基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(25.6 mg,43.6%)。LC-MS停留时间3.13分钟;C48H57N8O6的计算值:841.44,m/z实测值: 841.48 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-((2R,4S)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-1-((2S,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(32 mg,0.085 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体196)的四盐酸盐(25 mg,0.039 mmol)、2-(甲氧羰基氨基)-2-((2R,4S)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(Cap-178立体异构体1)(19.61 mg,0.085 mmol)及亨氏碱(0.054 mL,0.308 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-((2R,4S)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-1-((2S,4R)-2-甲基四氢-2H-吡喃-4-基)-2-氧代乙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(21.3 mg,45.2%)。LC-MS停留时间2.94分钟;C52H64N8O8的计算值:929.49,m/z实测值: 929.64 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(65 mg,0.171 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,4R)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4R)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体201)的四盐酸盐(50 mg,0.077 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(30 mg,0.170 mmol)及亨氏碱(0.108 mL,0.308 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-(((2S,4R)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4R)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(60.7 mg,71%)。LC-MS停留时间3.12分钟;C46H57N8O6的计算值:817.44,m/z实测值: 817.46 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(65 mg,0.171 mmol)添加至经搅拌的(1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体203)的四盐酸盐(50 mg,0.078 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(30 mg,0.111 mmol)及亨氏碱(0.108 mL,0.621 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-(((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(54 mg,63%)。LC-MS停留时间3.15分钟;C46H53N8O6的计算值:813.41,m/z实测值: 813.45 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/ 5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(62 mg,0.164 mmol)添加至经搅拌的(1S,3S,5S)-5-甲基-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体209)的四盐酸盐(50 mg,0.074 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(28.7 mg,0.164 mmol)及亨氏碱(0.104 mL,0.595 mmol)于DMF (1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-(((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(45 mg,54%)。LC-MS停留时间3.15分钟;C48H57N8O6的计算值:841.44,m/z实测值: 841.50 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/ 0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(62 mg,0.164 mmol)添加至经搅拌的(1S,3S,5S)-5-甲基-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-2-氮杂双环[3.1.0]己烷(中间体209)的四盐酸盐(50 mg,0.074 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(35.5 mg,0.164 mmol)及亨氏碱(0.104 mL,0.595 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-2-((1S,3S,5S)-3-(4-(4-(6-(2-((1S,3S,5S)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(46.3 mg,51%)。LC-MS停留时间3.15分钟;C52H61N8O86的计算值:925.46,m/z实测值: 463.36 [M/2+H]+。在配备有PHENOMENEX? C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/ 0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(31 mg,0.082 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸酯(中间体211)的四盐酸盐(25 mg,0.037 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(14 mg,0.082 mmol)及亨氏碱(0.052 mL,0.297 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(17 mg,41%)。LC-MS停留时间3.10分钟;C48H57N8O6的计算值:841.44,m/z实测值: 841.542 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/ 0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(34.8 mg,0.092 mmol)添加至经搅拌的(1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-(叔丁氧羰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-2-甲酸酯(中间体211)的四盐酸盐(28 mg,0.042 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(20 mg,0.092 mmol)及亨氏碱(0.085 mL,0.333 mmol)于DMF(2 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯,得到((1S)-1-(((1R,3S,5R)-3-(4-(4-(6-(2-((1R,3S,5R)-2-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-5-甲基-2-氮杂双环[3.1.0]己-2-基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(13 mg,25%)。LC-MS停留时间2.92分钟;C52H61N8O86的计算值:925.46,m/z实测值: 92.53 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将HATU(97 mg,0.254 mmol)添加至经搅拌的2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-4-(4-(6-(2-((2S,4S)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑(中间体196)的四盐酸盐(150 mg,0.231 mmol)、(S)-2-(甲氧羰基氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酸(50 mg,0.231 mmol)及亨氏碱(0.162 mL,0.925 mmol)于DMF(1 mL)中的溶液中。在室温下搅拌反应物1小时,随后添加(S)-2-(甲氧羰基氨基)-3-甲基丁酸(40.5 mg,0.231 mmol)并添加亨氏碱(0.162 mL,0.925 mmol)及HATU(97 mg,0.254 mmol)。进一步在室温下搅拌混合物1小时且通过氮气吹扫而部分浓缩。将残余物溶解于MeOH中且通过制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水)提纯。应用第二种色谱方法以分离异构体:SFC Diol-HL柱,含0.1% DEA的20%甲醇;4.6×250 mm,5 μm,移动相:含0.1% DEA的80% CO2-20%甲醇;温度:35℃;压力:150巴;流速:2 ml/min;在328 nm下监测UV。将分离的样品溶解于甲醇(3 mL)中且在室温下添加纯TFA(50 mL)。将混合物浓缩至干且置于高真空下,得到((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-2-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐(78.2 mg,29.5%产率)。LC-MS停留时间2.95分钟;C48H59N8O7的计算值:859.45,m/z实测值: 859.50 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/ 0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-2-((2S,4S)-2-(4-(4-(6-(2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-4-基)-2-萘基)苯基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)-2-氧代-1-(四氢-2H-吡喃-4-基)乙基)氨基甲酸甲酯
如实施例140中所报道的另一异构体。LC-MS停留时间2.98分钟;C48H59N8O7的计算值:859.45,m/z实测值: 859.58 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/ 0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基)氨基甲酸甲酯
将NCS(17.98 mg,0.135 mmol)添加至经氮气吹扫的实施例128(55 mg,0.067 mmol)的DMF(1 mL)溶液中且在50℃下搅拌反应混合物18小时。通过浓缩移除溶剂,将粗产物溶解于CH2Cl2中且装入4 g汤姆逊硅胶滤筒中。由5-100% B进行梯度洗脱,经1 L。A/B(A=CH2Cl2;B=10% MeOH/ EtOAc)。将提纯产物的样品溶解于MeOH中且进行制备型HPLC(含0.1% TFA的MeCN/水),得到((1S)-1-(((2S,4S)-2-(4-氯-5-(6-(4-(4-氯-2-((2S,4S)-1-((2S)-2-((甲氧羰基)氨基)-3-甲基丁酰基)-4-甲基-2-吡咯烷基)-1H-咪唑-5-基)苯基)-2-萘基)-1H-咪唑-2-基)-4-甲基-1-吡咯烷基)羰基)-2-甲基丙基) 氨基甲酸甲酯的双-三氟乙酸盐。LC-MS停留时间4.48分钟;C46H55Cl2N8O6的计算值:885.36,m/z实测值: 885.34 [M+H]+。在配备有PHENOMENEX? Luna C18 2.0×50 mm柱的Shimadzu LC-10AS液相色谱上,使用SPD-10AV UV-Vis监测器,在220 nM监测器波长下记录LC数据。洗脱条件使用0.8 mL/min的流速、100%溶剂A/0%溶剂B至0%溶剂A/100%溶剂B的梯度、4分钟的梯度时间、1分钟的保持时间及5分钟的分析时间,其中溶剂A为5% MeOH/95%水/0.1% TFA且溶剂B为95% MeOH/5%水/ 0.1% TFA。使用电喷雾模式的LC MICROMASS? Platform测定MS数据。
将二异丙基乙胺(6.75 g,52.3 mmol,2.07当量)装入经搅拌的实施例143(10.0 g,25.3 mmol)及Boc-L-脯氨酸(11.4 g,53.0 mmol,2.1当量)于100 mL乙腈中的悬浮液中。使所得混合物升温至35℃且使其搅拌3小时。使混合物冷却至20℃且用50 mL 13重量% NaCl水溶液洗涤有机相三次。经由真空蒸馏将富有机层流溶剂交换为纯甲苯,得到呈于约60 mL甲苯中的溶液形式的实施例144。将乙酸铵(38.9 g,504.9 mmol,20当量)、咪唑(6.9 g,101.0 mmol,4当量)及50 mL甲苯装入另一500 mL夹套反应器中。使所得悬浮液升温至92-95℃的内部温度。添加实施例144的甲苯溶液,同时维持92-95℃的温度。使所得混合物在92-95℃下搅拌15小时。使所得浆料冷却至55-60℃且添加甲醇(150 mL),同时维持55-60℃的温度。浆料在此温度下保持3小时,经1小时冷却至20℃且在20℃下再保持18小时。经由过滤收集晶体且用甲醇洗涤。使滤饼脱水2小时,接着在50-55℃下在真空下干燥18小时,得到12.1 g呈淡黄色固体状的实施例145(76.1%产率,HPLC AP为97.8)。
在500 mL反应器中,将实施例146(市售,17.5 g,1.00当量)溶解于THF(87.5 mL)中。使所得溶液冷却至-75℃且装入1.5 M DIBAL-H的甲苯溶液(61.3 mL,1.5当量),同时维持温度低于-70℃。在-70℃下搅拌所得溶液1小时。经10分钟装入三氟乙酸(2.3 mL,0.5当量),维持内部温度低于 -70℃。接着经15分钟装入三乙胺(51.3 mL,6当量),维持内部温度低于-70℃。经10分钟装入三氟乙酸酐(11.2 mL,1.3当量),维持内部温度低于-70℃。接着经90分钟使反应物升温至室温且经由反向添加至20重量%单水合柠檬酸水溶液(96.6 g,1.5当量)中来淬灭,同时维持温度低于15℃。在室温下搅拌所得混合物2小时,接着丢弃下部水层。用70 mL饱和碳酸氢钠水溶液洗涤富含产物的有机层两次。装入固体碳酸氢钠(1.7 g,每公克实施例146 0.1 g)且在真空下将溶液的溶剂更换为纯甲苯,得到呈于2 L/kg甲苯中的溶液形式的实施例147。
将实施例147(16.5 g,来自实施例146的理论值)的33 mL甲苯溶液精致过滤至250 mL反应器中。接着装入三氟甲苯(50 mL)及氯碘甲烷(43.2 g,4.0当量)且使所得溶液冷却至 -20℃。装入1.1 M二乙基锌的甲苯溶液(111 mL,2.0当量),同时维持内部温度低于-8℃。在-15至-20℃下搅拌所得溶液14小时。使反应混合物升温至0℃,接着经由反向添加至20重量%柠檬酸水溶液(135.7 g,2.3当量)中来淬灭。用甲苯(82 mL)冲洗反应器且将冲洗液添加至淬灭溶液中。搅拌所得两相混合物20分钟,接着分离下部水层并丢弃。依序用60 mL 13重量% NaCl水溶液、60 mL饱和NaHCO3洗涤富有机层两次。在真空下将所得溶液的溶剂更换为纯IPA,得到呈于10 L/kg IPA中的溶液形式的实施例148。
将实施例148(147 mL,14.7 g,来自实施例146的理论值)的IPA溶液装入250 mL反应器中。使溶液升温至35℃且添加固体氢氧化钠(6.2 g,3.0当量)。在35℃下搅拌所得混合物过夜。添加水(44 mL)且在真空下移除有机溶剂。添加MTBE(145 mL)且用6 N HCl水溶液将pH值调整至3.0。分离水层并丢弃。用60 mL水洗涤富含产物的有机层,接着经由添加恒定体积的MTBE,在真空下共沸式干燥。将溶液浓缩至55 mL且在50℃下搅拌30分钟。经1小时使溶液冷却至室温,在此期间形成浆料。经90分钟装入庚烷(90 mL)且使所得浆料熟化1小时。将固体收集于介质玻璃粉上且依序用22.5 mL 3:1庚烷:MTBE、22.5 mL庚烷洗涤。在50℃真空烘箱中干燥棕褐色固体,得到5.48 g(46%)实施例149,其LCAP纯度为94.9。
在50℃下将粗实施例149溶解于55 mL MTBE中。浓缩所得溶液至20 mL且经1小时冷却至室温。接着经90分钟添加庚烷(33 mL)。将所得固体收集于介质玻璃粉上,用庚烷(15 mL)洗涤,并在50℃真空烘箱中干燥,得到4.45 g(98.8 AP,98.8%手性纯度,37%来自实施例146)呈棕褐色粉末状的所需产物。
预期以上反应顺序(对于形成实施例149而言)将足够通用以便亦容许其它官能基。举例而言,实施例147的C2碳上的叔丁氧羰基可能经酰胺或另一酯置换。同样,氮上的叔丁氧羰基保护基可经其它保护基(诸如其它氨基甲酸酯、酰胺、烷基、芳基)置换或可能完全不存在(经氢置换)。
生物活性
在本发明中使用HCV复制子检定,且如共同拥有的PCT/US2006/022197及O'Boyle等人,Antimicrob. Agents Chemother., 49(4):1346-1353 (2005年4月)中所述来制备、进行及验证。亦如所述(Apath.com)使用并有荧光素酶报道基因的检定方法。
使用HCV-neo复制子细胞及在NS5A区中含有抗性取代的复制子细胞测试当前所述族的化合物。测出化合物对含有突变的细胞的抑制活性相对于针对野生型细胞的相应抑制效力具有不同程度的降低。因此,本发明的化合物可有效抑制HCV NS5A蛋白的功能且应理解为其组合形式如先前在申请案PCT/US2006/022197及共同拥有的WO 04/014852中所述有效。应了解本发明的化合物可抑制HCV的多种基因型。表2显示本发明的代表性化合物针对HCV 1b基因型的EC50(有效50%抑制浓度)值。在一实施方案中,本发明的化合物对1a、1b、2a、2b、3a、4a及5a基因型具有抑制性。对HCV 1b的EC50值如下:A=0.4 pM-10 pM;B=10.1 pM-1.00 nM;且C=1.01 nM-1 μM。
本发明的化合物可通过除NS5A抑制外或不同于NS5A抑制的机制来抑制HCV。在一实施方案中,本发明的化合物抑制HCV复制子且在另一实施方案中,本发明的化合物抑制NS5A。
本领域技术人员将显而易见,本发明并不限于上述说明性的实施例,且其可在不脱离其基本属性的情况下以其它特定形式实施。因此,期望的是这些实施例在所有方面中均视为说明性而非限制性的,参考随附的权利要求书,而非上述实施例,且因此在权利要求的等同体的含义及范围内的所有变化均欲涵盖在其中。