TWI299731B - Selected fused pyrrolocarbazoles - Google Patents

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A7 1299731 ____ Β7____ 五、發明說明（/ ) 發明領域 本發明一般係有關於經選擇稠合之吡咯並咔唑類，包 括其藥學組成物及以其治療疾病之方法。本發明也有關於 製造這些稠合之吡咯並咔唑類之中間產物及方法。 發明背景 本發明整篇揭露內容所引述之出版物，其完整內容在 此處作爲參考資料。 具有生物活性並且在此技藝中一般已知爲“稠合之D比 咯並咔唑類”之各種合成的小型有機分子已有製備（參見 美國專利第5,475，110號；第5,591，855號；以及第 5,616,724號）。此外，美國專利第5,705,511號揭露具有 各種功能性藥學活性的稠合之毗咯並咔唑類化合物。此等 稠合之吡咯並咔唑類係經揭露而以各種方式使用之，包括 ••單獨或聯合神經營養因子及/或蚓哚並咔唑類而增強神經 元家系之細胞的功能及/或存活；增強營養因子誘導的活性 ;蛋白質激酶C ( “PKC”）活性之抑制；d酪胺酸蛋白 質激酶活性之抑制；前列腺癌細胞系增生之抑制；涉及發 炎過程之細胞途徑之抑制；以及具有死亡風險之神經元細 胞的存活之增強。 本發明人已經發現特定的經選擇稠合之吡咯並咔哩類 ，相較於美國專利第5,705,51 1號所揭露之化合物而言’ 係具有令人驚訝且非可預期之生物活性，其係選自美國專 利第5,705,51 1的一般式，但並未被特定揭露於其中。 發明摘述 _____3----- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） L. (請先閱讀背面之注意事項再1^ 本頁) -裝 --線- 1299731 A7 _____B7_______ 五、發明說明（2 ) 因此，本發明之目的是提供由一般式1所表示之新穎 的稠合吡咯並咔唑類化合物： a .

式I 式I之組成員詳細揭露如下。 較佳的稠合毗咯並咔唑類係由以下的式II所表示：

(請先閱讀背面之注意事項再13^1^4頁) · -1線·

式II 式II之建構成員詳細揭露如下。 本發明之稠合的毗咯並咔唑類可以各種方式使用’包 括：血管生成之抑制；抗腫瘤劑；單獨或聯合神經營養因 子及/或吲睬並咔唑類而增強神經元家系之細胞的功能及/ 或存活；增強營養因子誘導的活性；激酶之抑制；血管內 皮生長因子受體（VEGFR)激酶之抑制，較佳爲VEGFR2 ___ 4 __ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1299731 __B7___ 五、發明說明（）） ;混合家系激酶（MLK)之抑制；激酶；血小板衍生的 生長因子受體（PDGFR)激酶之抑制；神經生長因子-刺激 的^磷酸化作用之抑制；蛋白質激酶C ( “PKC”）活性 之抑制；酪胺酸蛋白質激酶活性之抑制；前列腺癌細胞 系增生之抑制；涉及發炎過程之細胞途徑之抑制；以及具 有死亡風險之神經元細胞的存活之增強。此外，此等稠合 之吡咯並咔唑類可有效用於c_met、okit及在近膜功能區 域中含有內部並列重複之突變Flt-3之抑制。由於這些各種 不同的活性，所揭露的化合物在各種背景中具有效用，包 括硏究及治療的環境。 本發明之另一目的是提供包括本發明之稠合吡咯並咔 唑類之藥學組成物，其中該組成物包括藥學上可接受的賦 形劑或載體以及至少一種治療上有效量的本發明化合物， 或其藥學上可接受的鹽類或酯類形式。 本發明之另一目的是提供治療或預防疾病或病症之方 法，包括將至少一種治療或預防有效量的本發明之化合物 給藥至有需要的患者。 此等稠合之吡咯並咔唑類之這些或其他目的、特徵及 優點，將揭露於以下本專利揭露內容之詳細說明中。 較佳具體實施例之詳細說明 本發明之一具體實施例是由式I所表示的稠合批咯並 咔唑類·· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） -L— I------— — — — — — --- (請先閱讀背面之注意事項再13^本頁) · i線- 1299731 A7 B7 五、發明說明（> )

R1 R2 式I 其中： R1及R2是相同或不同的，且獨立地選擇自Η或1-8 個碳（包括）之烷基，較佳爲1-4個碳（包括）之烷基， 經-0Η或-OR4取代，其中R4是i_4個碳（包括）之烷基、 芳基’較佳爲苯基或萘基，或經移除羧基的羥基後之胺基 酸殘基；以及 R3 是-CH2〇H ; -CH2OR7 ; -(CH2)nSR5 ; -(CH2)nS(0)yR5 ;-CHJR5 ;或l_8個碳（包括）之烷基，較佳爲卜4個碳 (包括）之烷基，經 _〇H、_〇R5、_〇r8、_CH2〇R7、_ S(0)yR6或-SR6取代；以及其中·· R5是1-4個碳（包括）之烷基或芳基，較佳爲苯基或 萘基； R6是H、1_4個碳（包括）之烷基、6-10個碳之芳基 ，較佳爲苯基或萘基或雜芳基； R7是Η或1-4個碳（包括）之烷基； R8是經移除羧基的羥基後之胺基酸殘基； η是1-4 (包括）之整數；以及 (請先閱讀背面之注意事項再13^本頁) -裝 · :線. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1299731 _____B7 ___ 五、發明說明（f ) y是1或2。 在特定較佳具體實施例中，式I化合物是式Π之化合 物： Η Μ /-Ν

其中，Rl、R2及R3是如以上式I所定義。 在特定較佳具體實施例中，R1是1-4個碳（包括）之 烷基，經-0H或-OR4取代，其中以是w個碳（包括）之 烷基、芳基’較佳爲苯基或萘基，或經移除羧基的羥基後 之胺基酸殘基； R2 是 Η ;以及 R3 是_Ch2〇h ; _CH2OR7 ; _(CH2)nSR5 ; -(CH2)nS(0)yR5 ; -CI^SR5 ;或 ι-s 個碳（包括）之院基， 較佳爲1-4個碳（包括）之烷基，經-〇η、_〇R5、-0R8、_ CH2OR7、-S(0)yR6 或-SR6 取代； 其中，R5、R6、R7以及R8是以上式I所定義。 在其他特定較佳具體實施例中，R1是-CH2CH2CH2OH 或-CH2CH2CH2OCOCH2N(CH3)2，R2 是 η，以及 R3 是· CH2OR7 ;其中R7是1_4個碳（包括）之烷基。 在另一特定較佳具體實施例中，式I及式II的稠合之 吡咯並咔唑類係爲表I所示者。 ____7 __ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再15^?本頁) -裝 ίΡΡ太 -I線· 1299731 A7 B7 五、發明說明（& ) 表I 化合物 R1 R2 R3 1 CH2CH2CH2OH H CH2OCH2CH3 2 CH2CH2CH2OH H CH2OCH3 3 CH2CH2CH2OH H CH2OCH(CH3)2 4 CH2CH2CH2OH H ch2och(ch3)ch2ch3 5 CH2CH2CH2OH H (s)-ch2och(ch3)ch2ch3 6 CH2CH2CH2OH H (r)-ch2och(ch3)ch2ch3 7 CH2CHOHCH3 H CH20CH2CH3 8 CH2CH2CH2OH H CH20CH2CH2CH3 9 CH2CH2CH2OH H CH20CH2CH2CH2CH3 10 CH2CH2CH2OH H CH(CH3)OCH2CH3 11 CH2CH2CH2OH H (非對稱)ch(ch3)och2ch3 —12 CH2CH2CH2OH H (非對稱)ch(ch3)och2ch3 一13 CH2CH2CH2OH H CH(CH3)OCH3 14 Η ch2chohch3 CH20CH2CH3 ~?5 CH2CH2CH2OH H CH(CH3)OCH2CH2CH2CH3 16 CH2CH2CH2OH H CH(CH3)OCH(CH3)2 17 CH2CH2CH2OH H ch2oc(ch3)3 Ϊ8 CH2CH2CH2OCOCH2NH2 H CH2OCH(CH3)2 19 ch2ch2ch2ococh_2)_ ch2ch2ch2ch2nh2 H ch2och(ch3)2 20 CH2CH2CH20COCH2CH2NH2 H CH2OCH(CH3)2 21 CH2CH2CH20COCH2CH2- ch2n(ch3)2 H CH2OCH(CH3)2 22 ch2ch2ch2ococh2n(ch3)2 H CH2OCH(CH3)2 23 CH2CH2CH20COCH2CH2- CH2CH2CH2CH2NH2 H CH2OCH(CH3)2 24 CH2CH20H H CH2SCH2CH3 25 CH2CH2CH20H H CH2SCH2CH3 26 ch2ch2ch2oh H CH2S(0)CH(CH3)2 27 CH2CH2CH20H H CH2SCH(CH3)2 28 CH2CH20H H ch2oh 29 CH2CH2CH20H H CH2OH 30 H H CH2OH 31 H H CH2OCH2CH3 32 H H ch2och(ch3)2 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 8 (請先閱讀背面之注意事項再本頁)

I . --線· 1299731 A7 B7 五、發明說明（7 ) 33 CH2CH2CH2OH Η CH(OH)CH3 34 CH2CH2CH2OH Η CH(OH)CH2CH3 35 Η Η CH(OH)CH3 36 Η Η (+/-) ch(och3)ch3 37 CH2CH2CH2OCOCF3 Η CH2SCH2CH2CH3 38 CH2CH2CH2OH Η CH2S(2-毗啶基） 39 CH2CH2CH2OH Η CH2S(2-嘧啶基） 40 CH2CH2CH2OH CH2OH CH2OCH(CH3)2 較佳的式II之稠合毗咯並咔唑類係以構造式顯示於表II:

(請先閱讀背面之注意事項再本頁) -裝 · 9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 1299731 五、發明說明（2 ) A7 B7

(請先閱讀背面之注意事項再頁) 訂，· 線· _10 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 五、發明說明（？） A7 B7 11 手性 V Η 、OH 12 手性 Η 、ΟΗ 13 、ΟΗ 14 A人Η 15 +/- Η ό=° kXftO 、ΟΗ 16 \xfc . 、ΟΗ (請先閱讀背面之注意‘ 事項再 裝 頁) -1線· __11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 A7 B7 五、發明說明（β )

(請先閱讀背面之注意事項再 I --- . · -1線· __12 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 五、發明說明（（丨） A7 B7

(請先閱讀背面之注意事項再本頁) · __ η 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 A7 _B7 五、發明說明（A )

(請先閱讀背面之注意事項再 I --- 本 i : . -·線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 1299731 A7 B7

(請先閱讀背面之注意事項再1?^本頁) 訂： |線_ 1299731 五、發明說明（#) A7 B7

(請先閱讀背面之注意事項再本頁) -裝 太 表II之特定較佳具體實施例包括化合物1、3、4、5、 6、7及22，其中最佳爲化合物3及22。 •線· 式I及Η所代表的化合物及表I及表II所描述的化合 物亦在此處作爲“該化合物”、“本發明之化合物”、“ 該稠合之吡咯並咔唑類，，、“本發明之稠合的吡略並咔哩 類”及其類似物。 --—__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1299731 五、發明說明（σ) 美國專利第5,705,51 1號之特定化合物說明於表Ila。

表Ila 化合物 結構 A N OH B N 0^0 C α& NH2 \ D ^XXRO 1 H (請先閱讀背面之注意事項再 -裝—— 頁 \ 訂： -1線· _U_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1299731 五、發明說明（1 此處所使用的關於R1及R2之定義，名詞“胺基酸” 是表示包含胺基及羧基兩者之分子。它包括具有其一般意 義之“ α -胺基酸”，如同在相鄰羧基的碳上帶有胺官能。 α-胺基酸可以是天然發生或非天然發生的。胺基酸也包括 “二胜肽”，其在此處定義爲兩個以胜肽鏈連結的胺基酸 。二胜肽的組成員並不限於胺基酸’並且可以是包含胺 基及羧基兩者之任何分子。較佳的是^ -胺基酸、二胜肽（ 例如，離胺醯基-/S-丙胺酸）以及2-8個碳之胺基烷酸（ 例如，3-二甲基胺基丁酸）。 本發明之稠合的吡咯並咔唑類之藥學上可接受的鹽類 ，也是在此處所揭露的化合物之範疇內。此處所使用的名 詞“藥學上可接受的鹽類”是指無機酸加成鹽（例如，氫 氯酸鹽、硫酸鹽及磷酸鹽）或有機酸加成鹽（例如，醋酸 鹽、順式丁烯二酸鹽、反式丁烯二酸鹽、酒石酸鹽及檸檬 酸鹽）。藥學上可接受的金屬鹽之實例是鹼金屬鹽（例如 ’鈉鹽及鉀鹽）、鹼土金屬鹽（例如，鎂鹽、鈣鹽、鋁鹽 及鋅鹽）。藥學上可接受的銨鹽之實例是銨鹽及四甲基鏡 鹽。藥學上可接受的有機胺加成鹽之實例是嗎啉及呢啶的 鹽類。藥學上可接受的胺基酸加成鹽之實例是離胺酸、甘 胺酸及苯丙胺酸的鹽類。 此處所提供之化合物可藉由與藥學上可接受的非毒性 賦形劑或載體混合，而賦形成藥學組成物。如上所述，可 製備這樣的組成物以用於非腸胃道給藥（特別是以液體溶 液或懸浮液的形式）；或口服給藥（特別是以錠劑或膠囊 本紙張用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 29Γ公餐)— ----- (請先閱讀背面之注意事項再1?^?本頁) 訂： A7 B7 1299731 五、發明說明（Q ) 的形式）；或鼻內給藥（特別是以粉末、鼻滴劑或氣溶膠 的形式）；或經皮給藥（例如，藉由經皮貼片）。 --------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再頁} 因此，本發明的另一形態是包括本發明化合物之藥學 組成物，可視需要地與一種或多種藥學上可接受的賦形劑 或載體混合。較佳地，藥學組成物包括式II之化合物。更 佳地，藥學組成物包括表I或表II之化合物。 在特定較佳的藥學組成物中，組成物是用於抑制一種 或多種的激酶活性、血管內皮生長因子受體激酶活性 、蛋白質激酶C或血小板衍生的生長因子受體活性，其中 組成物包括式I、式II、表I或表II之化合物，以及可視 需要地一種或多種藥學上可接受的載體。在其他較佳的藥 學組成物中，組成物是用於增強營養因子或脊椎神經的 ChAT活性，其中組成物包括式I、式II、表I或表π之化 合物，以及一藥學上可接受的載體。 ;線- 在其他較佳的藥學組成物中，組成物是用於治療或預 防血管生成或血管生成的症狀，例如，硬腫瘤之癌症、子 宮內膜組織異位、視網膜病、糖尿病性視網膜病、牛皮癬 、血管母細胞瘤、眼睛疾病或斑點變性。在其他較佳的藥 學組成物中，組成物是用於治療或預防瘤形成、類風濕性 關節炎、肺部纖維病變、骨髓纖維病變、異常的創傷癒合 、動脈粥瘤硬化或再狹窄症。在其他較佳的藥學組成物中 ’組成物是用於治療或預防神經退化疾病及症狀、阿滋海 默氏症、肌萎縮性脊髓側索硬化症、帕金森氏症、中風、 局部缺血、亨丁頓氏症、AIDS癡呆、癲癇、多發性硬化症 (_____is.___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 B7 五、發明說明（1 ) 、周圍神經疾病、化學治療誘發之周圍神經疾病、AIDS相 關之周圍神經疾病或腦部或脊椎神經受損。在其他較佳的 藥學組成物中，組成物是用於治療或預防前列腺疾病，例 如，前列腺癌或良性的前列腺增殖。仍是在其他較佳的藥 學組成物中，組成物是用於治療或預防多發性骨髓癌或白 血病，包括，但並不限於，急性骨髓性白血病、慢性骨髓 性白血病、急性淋巴球性白血病以及慢性淋巴球性白血病 〇 組成物可合宜地以單位劑量的形式給藥，並可藉由任 何熟悉於製藥技藝中之人士所熟知的方法而製備，例如， 參見Remington’s藥學科學之說明（Mack出版公司，伊士 頓，賓州，1980)。用於非腸胃道給藥的配方可包含常見 的賦形'劑：無菌水或鹽溶液、聚亞烴基甘醇（例如，聚乙 二醇）、油脂及植物來源、氫化的萘以及類似物。特別地 ，生物相容的、生物可分解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交 酯共聚物或聚氧化乙烯-聚氧化丙烯共聚物，也可以是有效 的賦形劑，以控制活性化合物之釋放。其他用於這些活性 化合物之可能有效的非腸胃道傳遞系統，包括乙烯-乙烯基 醋酸酯共聚物顆粒、滲透幫浦、可植入的注入系統以及微 脂粒。用於吸入給藥的配方包含賦形劑（例如，乳糖）， 或者可以是包含，例如，聚氧化乙烯-9-十二烷基醚、甘膽 酸及去氧膽酸之液體溶液，或是油狀溶液，以用於鼻滴劑 的形式而給藥，或用於鼻內塗抹的凝膠。非腸胃道給藥的 配方也可包括甘膽酸以用於頰部給藥；水楊酸以用於直腸 ______2Ω______ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再ίΡΡ本頁) . 線· A7 1299731 --------- 五、發明說明（ι7 ) 給藥；或檸檬酸以用於陰道給藥。經皮貼片的配方較佳是 親脂性的乳液。 本發明之化合物可在藥物中使用作爲單獨的活性作用 劑’或可與其他的活性成份結合使用，例如，其他的生長 因子，其可促進疾病或症狀之神經元的存活或軸索再生； 或是其他的血管生成或抗腫瘤作用劑。 此處所說明之在治療或藥學組成物中之化合物的濃度 ’可根據許多的因素而改變，包括給藥的藥物之劑量、使 用的化合物之化學特性（例如，厭水性）以及給藥途徑。 一般而言，本發明之化合物可提供於水溶性生理緩衝溶液 ，其包含大約0.1到10% (重量/體積）的化合物，以用於 非腸胃道給藥。典型的劑量範圍是從大約每日1微克/公斤 到大約1克/公斤體重；較佳的劑量範圍是從大約每日〇.〇1 毫克/公斤到大約100毫克/公斤體重。給藥的藥物之較佳 劑量要適當地根據變數而決定，例如，疾病或症狀進展的 類型或程度、特定病患的整體健康狀態、所選擇的化合物 之相關生物性功效、及化合物賦形劑之配方以及其給藥的 途徑。 在其他具體實施例中，本發明提供一種抑制&A：激酶 活性之方法，包括以一足以產生抑制效果的量提供本發明 之化合物。在一較佳具體實施例中，提供本發明之化合物 以治療發炎，例如，神經發炎及慢性的關節炎發炎。在另 一較佳具體實施例中，激酶受體是HtA。 在其他具體實施例中，本發明提供一種治療或預防前 ________2J_— ------- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) ·. --線· A7 1299731 _____B7 _ 五、發明說明（γ ) 列腺疾病之方法，其包括將一治療有效量的本發明之化合 物’給藥至需要這樣的治療或預防之宿主。在一較佳具體 實施例中，前列腺疾病是前列腺癌或良性的前列腺增殖。 在其他具體實施例中，本發明提供一種治療或預防血 管生成的症狀之方法，其中血管內皮生長因子受體激酶活 性是促成病理症狀的原因，此方法包括以一足以產生血管 內皮生長因子受體與有效抑制量的化合物接觸的量，提供 本發明之化合物。在另一具體實施例中，本發明提供一種 治療或預防血管生成的症狀之方法，其包括將一治療有效 量的本發明之化合物，給藥至需要這樣的治療或預防之宿 主。在一較佳具體實施例中，血管生成的症狀是硬腫瘤之 癌症、眼睛疾病、斑點變性、子宮內膜組織異位、糖尿病 性視網膜病、牛皮癬或血管母細胞瘤。 在其他具體實施例中，本發明提供一種治療或預防病 理症狀之方法，其中血小板衍生的生長因子受體活性是促 成病理症狀的原因，此方法包括以一足以產生血小板衍生 的生長因子受體與有效抑制量的化合物接觸的量，提供本 發明之化合物。在另一具體實施例中，本發明提供一種治 療或預防病理症狀之方法，其包括將一治療有效量的本發 明之化合物，給藥至需要這樣的治療或預防之宿主。在較 佳具體實施例中，病理症狀是瘤形成、類風濕性關節炎、 慢性關節炎、肺部纖維病變、骨髓纖維病變、異常的創傷 癒合、動脈粥瘤硬化或再狹窄症。 在其他具體實施例中，本發明提供一種治療疾病之方 _22 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) -裝 女 訂· · --線· 1299731 五、發明說明（W) - - - - - - - ----- I I (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 法，該疾病的特徵在於營養因子反應細胞之異常的活性， 該方法包括以一足以產生營養因子細胞受體與有效活性誘 導量的化合物接觸的量，提供本發明之化合物。在較佳具 體實施例中，營養因子反應細胞之活性是ChAT活性。在 另一具體實施例中，本發明提供一種治療或預防神經退化 疾病及症狀、阿滋海默氏症、肌萎縮性脊髓側索硬化症、 帕金森氏症、中風、局部缺血、亨丁頓氏症、AIDS癡呆、 癲癇、多發性硬化症、周圍神經疾病、化學治療誘發之周 圍神經疾病、AID相關之周圍神經疾病或腦部或脊椎神經 受損之方法，其包括將一治療有效量的式I、式II、表I及 表Π之化合物，給藥至需要這樣的治療或預防之宿主。 線· 當用於修飾名詞“功能”及“存活”時，此處所使用 的名詞“效果”是指正向或負向的改變或變化。此處正向 的效果可以是指“增強”或“強化”，以及此處負向的效 果可以是指“抑制”或“約束”。 當用於修飾名詞“功能”及“存活”時，此處所使用 的名詞“增強”或“強化”是指稠合之吡略並咔唑類的存 在，對於營養因子反應細胞的功能及/或存活具有正向的效 果，相較於不含稠合之毗咯並咔唑類的細胞而言。例如， 但並非用以限定，關於例如，膽鹼神經元之存活，稠合之 吡咯並咔唑類將顯示：具有死亡風險（導源於，例如，受 傷、疾病症狀、變性症狀或自然的發展）之膽鹼神經元族 群的存活之增強，相較於不存在有這樣的稠合之吡咯並咔 唑類之膽鹼神經元族群，治療的族群比未治療的族群具有 _22_____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 B7 五、發明說明（>Z) 相對較大的官能度之期間。如同另一實施例’仍然非用以 限定，關於例如，感覺神經元之功能，稠合之吡咯並咔哩 類將顯示：感覺神經元族群的功能之增強（例如’神經軸 索延伸），相較於不存在有這樣的稠合之毗咯並咔唑類之 感覺神經元族群，治療的族群之神經軸索延伸是相對較大 於未治療的族群之神經軸索延伸。 此處所使用的“抑制”或“約束”是指在本發明的稠 合之吡咯並咔唑類存在時，指定的物質之明確反應（例如 ，酵素活性）是相對降低的。 此處所使用的名詞“神經元”、“神經元家系之細胞 ”以及“神經元細胞”包括，但並不限於，具有單一或多 種傳遞物質及/或單一或多種功能的神經元類型之異質性族 群；較佳地，這些是膽鹼及感覺神經元。此處所使用的片 語“膽鹼神經元”是指中樞神經系統（CNS)及周圍神經 系統（PNS)之神經元，其神經傳遞物質是乙醯膽鹼；實 例是底前腦及脊椎神經的神經元。此處所使用的片語“感 覺神經元”包括從例如，皮膚、肌肉及關節，而對環境信 號（例如，溫度、移動）有反應之神經元；實例是DRG之 神經元。 此處所使用的“營養因子”是直接或間接影響營養因 子反應細胞的存活或功能之分子。營養因子的實例包括纖 毛神經營養因子（CNTF)、基礎纖維母細胞生長因子（ bFGF)、胰島素及類胰島素生長因子（例如，IGF_：[、：[GF-II、IGF-III)、干擾素、介百素、細胞激素以及神經營養 ----24 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 裝 . Ϊ線· 1299731 μ __B7 _ 五、發明說明（/ ) 素，其包括神經生長因子（NGF)、神經營養素-3 (NT-3 )、神經營養素-4/5 (NT-4/5)以及腦衍生的營養因子（ BDNF)。 此處所定義的“營養因子反應細胞”是包括一受體的 細胞，其中營養因子可專一性地與其結合；實例包括神經 元（例如，膽鹼及感覺神經元）以及非神經元細胞（例如 ，單核球細胞及瘤細胞）。 此處所使用的“營養因子活性”以及“營養因子誘導 的活性”是定義爲直接或間接導源於營養因子（例如，神 經生長因子）與包括營養因子受體的細胞（例如，包括 之神經元）之結合所產生的任何反應。例如，在神經生長 因子與irA結合的例子中，反應的實例將包括irA酪胺酸殘 基之自體磷酸化作用，導致增加的ChAT活性，其產生增 強的神經元存活及/或功能。 如同在片語“營養因子活性”以及“營養因子誘導的 活性”中所使用的，名詞“營養因子”包括內源性及外源 性的營養因子，其中“內源性”是指營養因子是正常存在 的，“外源性”是指營養因子加到一系統。如此處之定義 ，“營養因子誘導的活性”包括誘導自··（1)內源性營養 因子；（2)外源性營養因子；以及（3)內源性及外源性 營養因子的組合之活性。 此處所使用的名詞是指高度親和性神經營養素 受體之家族，目前包括及/甿C，以及其他神經 營養素可結合之細胞膜相關蛋白質。 __—____21_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） — — — — — — — — — — — — — . I I (請先閱讀背面之注意事項再本頁) . 線- A7 1299731 __B7______一 五、發明說明（>今） 關於名詞“細胞”，此處所使用的片語“過度增殖狀 態”是指不受調控及/或異常生長的細胞，可導致不想要的 症狀之發展，例如，癌症的症狀或牛皮癖的症狀。 此處所使用的“癌症”及“癌症的”是指晡乳動物的 細胞之任何惡性的增殖。實例包括前列腺癌、良性的前列 腺增殖、卵巢癌、乳癌以及其他認識的癌症。此處所使用 的名詞“牛皮癬”及“牛皮癬的症狀”是指牽涉到角化細 胞過度增殖、發炎細胞滲入以及細胞激素改變之疾病。 此處所使用的片語“具有死亡風險”結合一生物有形 體，例如細胞（例如，神經元），是指負向衝擊生物有形 體的狀態或症狀，使得該有形體具有由於這樣的狀態或症 狀之增加的死亡可能性。例如，本發明所揭露的化合物可 “挽救”或增強運動神經元的存活，其在程式細胞死亡的 在卵內模式中具有天然的死亡風險。相似地，例 如，神經元可能由於天然的老化過程而具有死亡風險，其 引起神經元的死亡，或是由於受傷（例如，頭部外傷）， 其使得受到這樣的外傷衝擊之，例如，神經元及/或神經膠 質具有死亡風險。此外，例如，神經元可能由於疾病狀態 或症狀而具有死亡風險，例子如同由疾病肌萎縮性脊髓側 索硬化症（ALS )所引起的神經元之死亡風險。因此，藉 由使用本發明的化合物之增強具有死亡風險的細胞之存活 ，是指這樣的化合物可降低或預防細胞的死亡風險。 此處所使用的名詞“接觸”是指直接或間接將分子置 於一起，使得分子直接或間接地互相進行物理結合，藉此 ___26_____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） " " (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -. · 線· A7 1299731 ______B7_____ 五、發明說明（W) 達到所想要的結果。因此，如此處所使用的，任何人可將 標的細胞與本發明所揭露的化合物“接觸”，但化合物及 細胞並不需要物理性地連結在一起（例如，如同配體及受 體物理性地連結在一起的例子），只要可達到所想要的結 果即可（例如，細胞的存活之增強）。因此，接觸包括， 例如，將分子一起置於容器中的動作（例如，將本發明所 揭露的化合物加到包括細胞的容器中，以用於活體外的硏 究），以及將化合物給藥至一標的個體（例如，將本發明 所揭露的化合物注射至實驗室動物，以用於活體內的測試 ，或注射至人類，以用於治療或診療之目的）。 此處所使用的“前藥物”是包括任何共價鍵結的載體 ，當這樣的前藥物給藥至一哺乳動物患者時，其活體內釋 放出活性的母體藥物，如同本發明之化合物。由於前藥物 已知可增強許多想要的藥物性質（例如，溶解度、生物利 用率、製造等等），因此，本發明之化合物可以前藥物的 形式而傳遞。因此，本發明包括本發明的化合物之前藥物 、包含此前藥物之組成物、以及以這樣的前藥物治療疾病 或症狀之方法。本發明的化合物之前藥物（例如，式I) 可藉由修飾存在於化合物中之官能基而製備，修飾的方式 是以例行的操作或活體內將母體化合物切割。因此，前藥 物包括，例如，本發明之化合物，其中羥基、胺基或羧基 鍵結至任何的基團，當前藥物給藥至哺乳動物患者時，其 切割以分別形成游離的羥基、游離的胺基或羧基。實例包 括，但並不限於，將羧基的羥基移除後之胺基酸殘基；醇 ____27 ____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再本頁) · i線· 1299731 B7 五、發明說明（d) 及胺官能基之醋酸鹽、甲酸鹽及苯甲酸鹽衍生物；以及烷 基、碳環、芳基及烷基芳基酯，例如，甲基、乙基、丙基 、異丙基、丁基、異丁基、第二-丁基、第三-丁基、環丙 基、苯基、苄基以及苯乙基酯，以及其類似物。 本發明的稠合之吡咯並咔唑類具有重要的功能性藥理 活性，其在各種的背景中具有效用，包括在硏究以及治療 的領域。爲了易於表達，以及爲了不限定這些可描繪的化 合物之效用範圍，我們一般性地說明稠合之吡咯並咔唑類 之活性如下： A. 酵素活性之抑制。 B. 對於營養因子反應細胞的功能及/或存活之影響。 C. 與發炎有關的反應之抑制。 D. 與過度增殖狀態有關的細胞生長之抑制。 E. 發育性程式運動神經元死亡之抑制。 酵素活性的抑制可利用，例如，血管內皮生長因子受 體抑制（例如，VEGFR2抑制）、混合家系激酶抑制（例 如，MLK1、MLK2或MLK3抑制）、血小板衍生的生長 因子受體激酶抑制、神經生長因子-刺激之磷酸化作用、蛋 白質激酶C抑制或int酪胺酸激酶抑制分析而測定。對於 營養因子反應細胞（神經元家系細胞）的功能及/或存活之 影響，可藉由使用以下任何一種分析而建立：（1)培養的 脊椎神經膽鹼乙醯轉移酶（“ChAT”）分析；（2)培養 的背根神經節（“DRG”）神經軸索延伸分析；（3)培養 的底前腦神經元（“BFN”）ChAT活性分析。與發炎有關 ___28____ >紙張尺度適用中國S家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -- - - - --------- I I (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 訂· --線· A7 1299731 ___B7 ___ 五、發明說明（>7) ----------------- (請先閱讀背面之注意事項再ilm本頁) 的反應之抑制可利用吲哚胺基-2,3-二氧酶（“IDO”）信 使RNA (mR>iA)分析而建立。與過度增殖狀態有關的細 胞生長之抑制可藉由測量有興趣的細胞株（例如’在前列 腺癌的例子中之AT2細胞株）之生長而測定。發育性程式 運動神經元死亡之抑制可利用胚胎的雞之體細胞運動神經 元，其細胞在胚胎的第6日到第10日之間歷經天然發生的 死亡，並且分析由本發明揭露的化合物所調節之這樣的天 然發生之死亡的抑制而在卵內評估。 藉由本發明之稠合的吡咯並咔唑類化合物之酵素活性 的抑制，可利用，例如，以下的分析而測定： 血管內皮生長因子受體抑制分析。 混合家系激酶抑制分析。 蛋白質激酶C活性抑制分析。 酪胺酸激酶活性抑制分析。 線· 在全細胞製劑中神經生長因子-刺激的irA磷酸化作用 之抑制。 血小板衍生的生長因子受體（PDGFR)抑制分析。 特別地，血管內皮生長因子受體（VEGFR)的抑制暗 示有效於，例如，血管生成扮演重要角色的疾病，例如， 硬腫瘤之癌症、子宮內膜組織異位、糖尿病性視網膜病、 牛皮癖、血管母細胞瘤以及其他的眼睛疾病及癌症。混合 家系激酶的抑制暗示有效於，例如，神經性疾病。的抑 制暗示有效於，例如，前列腺之疾病，例如，前列腺癌或 良性的前列腺增殖，以及發炎疼痛之治療。血小板衍生的 ---22____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 A7 _____B7______ 五、發明說明（婧） 生長因子受體（PDGFR)的抑制暗示有效於，例如，各種 形式的瘤形成、類風濕性關節炎、肺部纖維病變、骨髓纖 維病變、異常的創傷癒合、具有心血管末端之疾病（例如 ，動脈粥瘤硬化、再狹窄症、血管修復術後之再狹窄症以 及類似疾病）。 稠合之吡咯並咔唑類也已顯示藉由提升神經元的存活 ，而對於營養因子反應細胞的功能及存活具有正向的影響 。例如，關於膽鹼神經元的存活，化合物可保存具有死亡 風險（導源於，例如，受傷、疾病症狀、變性症狀或自然 的發展）之膽鹼神經元族群的存活，相較於不存在有這樣 的化合物之膽鹼神經元族群，治療的族群比未治療的族群 具有相對較大的官能度之期間。 各種神經性疾病的特徵在於神經元細胞是老化、受傷 、功能性妥協、經歷軸索退化、具有死亡風險等等。這些 疾病包括，但並不限於，神經性疾病及症狀；阿滋海默氏 症；運動神經元疾病（例如，肌萎縮性脊髓側索硬化症） •，帕金森氏症；腦血管疾病（例如，中風、局部缺血）； 亨丁頓氏症；AIDS癡呆；癲癇；多發性硬化症；周圍神經 疾病（例如，與化學治療有關之周圍神經疾病中影響DRG 神經元之疾病），包括糖尿病性神經疾病以及AIDS相關 之周圍神經疾病；由刺激性胺基酸所誘發之疾病；以及與 腦部或脊椎神經之震盪性或穿透性受損有關之疾病。 這些化合物不僅有效於增強營養反應細胞（例如，膽 鹼神經元）之營養因子誘導的活性，同時也可對於其他的 ____3〇 ___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注咅？事項再本頁) -裝 . 1299731 B7 五、發明說明（4 ) 神經元細胞類型（例如，多巴胺或麩胺酸型）作爲促進存 活的作用劑。生長因子可藉由向下發出小的GTP結合蛋白 質ras、rac及cdc42之系列反應，而調控神經元的存活（ Denhardt, D.T. ^ Biochem. J. 318 ： 729 ^ 1996)。特別地， ras的活化導致細胞外受體活化的激酶（ERK)之磷酸化及 活化，其已連接至生物性生長及分化的過程。 rac/cdc42之刺激導致JNK及p38的活化、與壓力、 細胞凋亡及發炎有關的反應之增加。雖然生長因子的反應 主要是經由ERK途徑，但影響這些後面的過程可能導致神 經元存活的另一個機轉，其可能相似於生長因子增強存活 的性質（Xia等人，⑼ce 270 ·· 1326，1995 )。本發明 之化合物也可作爲神經元及非神經元細胞之促進存活的作 用劑，其係藉由相關於，但也不同於生長因子調節的存活 之機轉，例如，JNK及p38 MAPK途徑的抑制，其可藉由 抑制凋亡性的細胞死亡過程而導致存活。 本發明之化合物也有效於治療與減少的ChAT活性有 關之及疾病、或死亡、脊椎神經運動神經元之受傷，以及 也有效於，例如，與中樞及周圍神經系統、免疫系統之凋 亡性的細胞死亡有關之疾病，以及也有效於發炎疾病。 ChAT催化神經傳遞物質乙醯膽鹼之合成，它被認爲是功 能性膽鹼神經元之酵素標誌。功能性的神經元也可存活。 神經元存活是藉由染劑（例如，綠螢光細胞膜標誌（ calcein AM))被活體神經元之專一性攝取及酵素轉換的 定量而分析。本發明所說明之化合物也可具有治療涉及惡 ----------------- (請先閱讀背面之注意事項再ιΛ本頁) · —線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1299731 五、發明說明（P ) 性細胞增殖的疾病症狀（例如，許多癌症）之效用。 由於它們多樣的效用，因此，異構形的稠合之吡咯並 咔唑類以及異吲哚滿酮也可用於其他的背景，例如，硏究 目的。例如，化合物可用於發展神經元細胞存活、功能、 鑑定之活體外模式，或用於篩選其他的合成化合物，其具 有相似於異構形的稠合之吡咯並咔唑類以及異吲哚滿酮化 合物之活性。因此，本發明所提供之化合物是有效於作爲 標準的或參考的化合物，以用於測定藥學硏究計畫中之作 用劑的活性之測試或分析。 化合物也可用於調查、定義及測定與功能性反應有關 之分子標的物。例如，藉由放射性標示與特定細胞功能（ 例如，有絲分裂形成）有關之異構形的稠合之毗咯並咔唑 類以及異吲哚滿酮化合物，可鑑定、分離及純化與衍生物 結合之標的物本體的特徵。藉由進一步的說明，化合物可 用於發展分析及模式，以進一步增強對於絲胺酸/息寧胺酸 或酪胺酸蛋白質激酶（例如，蛋白質激酶C、id酪胺酸激 酶）之抑制在疾病或症狀有關的機轉形態中扮演的角色之 了解。因此，本發明之化合物是有效於在診斷分析中作爲 診斷試劑，例如，此處所說明之分析。 在血管內皮生長因子受體及混合家系激酶分析中所得 到的結果將在以下提出。其他的分析也將進一步地說明。 它們並非用於，也不能解釋爲限定本發明之範疇。用於說 明以下結果之特定的縮寫，其定義如下：“//g”代表微克 ;“mg”代表毫克；“g”代表公克；“//L”代表微升； -----'Ύ ___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) -裝 · A7 1299731 ^-------B7_____ 五、發明說明〇丨） ‘mL”代表毫升；“L”代表公升；“nM，，代表奈（nan〇 )莫耳濃度；“ # M”代表微莫耳濃度；“mM，，代表毫莫 耳濃度；“M”代表莫耳濃度；以及“nm，，代表毫微米。 合成 本發明也提供一種製備本發明稠合之吡咯並咔唑類的 方法。本發明之化合物可藉由在此技藝中之人士所熟知的 S午多方法而製備。這些化合物可藉由，例如，以下圖解中 所說明之方法而合成，或藉由熟悉於此技藝者所理解之變 異方法而合成。對於熟悉於此技藝者而言，適當的修飾以 及取代是顯而易見且熟知的，或可易於從科學文獻中獲得 。所有與本發明有關之揭露方法，都可以任何的規模而實 施’包括亳克、公克、數克、公斤、數公斤或商業的工業 級規模。 應了解的是，本發明之化合物可包含一種或多種不對 稱取代的碳原子，以及可以光學活性或外消旋的形式而分 離。因此，除非有特別指明特定的立體化學或異構物形式 ’否則，結構之所有的非對稱形（chiral)、非對映異構物 、外消旋形式以及所有的幾何異構物形式，都是在本發明 的預期中。如何製備這樣的光學活性形式，對於在此技藝 中之人士是熟知的。例如，立體異構物的混合物可藉由標 準的技術而製備，包括，但並不限於，外消旋形式之離析 ;正常、反向及非對稱的色層分析；優先的鹽形成；再結 晶以及類似技術；或可藉由從活性的起始物質之非對稱合 成而製備，或藉由標的中心之謹慎的非對稱合成而製備。 ——______22___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) - · -線_ A7 B7 1299731 五、發明說明（P ) 如同將可易於了解者，存在於本發明的化合物上之官 能基可包含保護基團。例如，化合物之胺基酸側鏈取代基 ，可以保護基團而取代，例如，节基氧幾基或第三-丁氧基 羰基。保護基團就其本身而言是已知如同可選擇性附加在 官能度以及從官能度中移除之化學官能基，例如，羥基或 羧基。這些基團是存在於一化合物中，使得這樣的官能度 對於該化合物所暴露的化學反應環境是惰性的。本發明可 使用各種保護基團中的任何一種。較佳的保護基團包括节 基氧簾基（Cbz ; Z)以及第三·丁氧基幾基（Boc)基團。 根據本發明，其他較佳的保護基團可參見Greene，T.W.及 Wilts，P.G.M·之“有機合成之保護基團”，第二版，wiley & Sons ， 1991 〇 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) · •線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 A7 B7 五、發明說明（以 圖解1

GKO

CH3CN DBU 丙烯酸乙基酯

pT5〇H OM0-OH NMP 苯

Ui 1.UBH4 THF(IV) (請先閱讀背面之注意事項再 I --- 本冑\

CO NaOAc PdCi2(PPh3)2 Br· 2-甲氧基乙醇 155〇C

THF

訂： -1線· 35 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） 1299731 五、發明說明（外） 圖解2 A7 B7

X

XVI

xvn

(請先閱讀背面之注意事項再本頁) ^u0*1. 圖解3 \—/· 赛

= Hf (CI^3〇H

» R2 = (〇H2)3〇H XH R2 = H 賓施例 30 R2=h.R7:H 實施例 35 ρ^Ητρ^Μβ 實施例 34 R2=：<CH2)3OH,R7 = Et 實施例 33 R2*(CH2)3〇H.R7 =晌 36 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 五、發明說明（β) 圖解4 A7 B7

(請先閱讀背面之注意事項再15^本頁)

It * . 丨線· _37 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1299731 五、發明說明（4 ) 圖解5

NaH

DMF OMs

XIII

超級氫化物 THF

HO 實施例7 (請先閱讀背面之注意 -事項再i|ll本頁) 裝

-ir°J 圖解6 lj)M8 κΐ

CH2CVM^〇H

CsCOa

•線·

38 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 A7 B7 五、發明說明（) 圖解7 Η

三硝基甲苯B/卩比〇£ 仲甲醛 (請先閱讀背面之注意事 項再ijUl本頁： 裝 Η

實施例40 iFrOH, TMSa

XIX --線· 39 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1299731 A7 _______B7 五、發明說明（Q) 圖解8

實施例 18 R= CH2NH2 實施例 19 R= CH(NH2)(CH2)4NH2 實施例 20 R= (CH2)2NH2 實施例 21 R= (CH2)3N(CH3)2 實施例 22 R= CH2N(CH3)2 實施例 23 R= (CH2)5NH2 - - - - ------I I I I --I (請先閱讀背面之注意事項再iml本頁) 訂： i線- 合成之說明 化合物A及B是藉由將吲哚I以2-溴乙基苄基醚（a )或以3-溴丙基苄基醚（B)，使用溶於二甲基甲醯胺（ DMF)之氫化鈉而院基化’然後如美國專利第5,7〇5，511 號之說明進行去苄基化作用（Pd(OH)2/H2)而製備。參考 化合物C是藉由將B與Boc-白胺酸連結，然後使用熟悉於 有機合成技藝中之人士所熟知的標準方法，將B〇c基團去 保護而製備。化合物B也可藉由將酯IV以還原劑（例如 ，LiBH4)還原，然後移除二苯基甲醇保護基團而製備。 [___40 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公ίΐ ^'—- 1299731 a7 _ B7____ 五、發明說明（”） 製備苄基醚及锍醚的途徑是槪述於圖解中。使用兩種方法 以製備3-羥基甲基中間產物28-30、33-35。圖解1 (方法 A)描述羰基化之途徑，而圖解2 (方法B)則利用甲醯化 之方法。在圖解1中，I與丙烯酸乙基酯及鹼（例如， DBU)的邁克（Michael)反應產生II，然後以二甲氧基二 苯基甲醇進行內醯胺氮保護成ΠΙ。利用還原劑（例如，氫 硼化鋰）將乙基酯還原，然後以N-溴琥珀醯亞胺溴化，而 以優異的整體產率提供中間產物V。在甲氧基乙醇中鈀催 化的V之羰基化反應，得到甲氧基乙氧基酯VI。在去保護 成VII之後，酯可以還原劑（例如，二異丁基鋁氫化物； DIBAL-H)還原，得到二元醇29。至羥基甲基化合物之甲 醯化途徑（方法B，圖解2)使用，例如，在三氟醋酸（ TFA)中的HMTA或α,α-二氯甲基甲基醚以及路易士酸 。可將醛利用還原劑（例如，氫硼化鈉或二異丁基鋁氫化 物）而還原成羥基甲基化合物。甲基醚或锍醚的實施例， 可利用圖解4中所槪述之一般方法而製備。例如，在一種 方法中，二元醇29可利用三氟醋酸酐及鹼（例如，三乙基 胺）而轉換成三-三氟醋酸中間產物，然後將此中間產物以 一適合之烷基醇或烷基锍處理，以直接得到苄基醚（丨_25 、27、31、32、36-40)。在特定例子中，可分離—元醇之 三氟醋酸酯。在這些實施例中，醇可藉由將三氟醋酸以鹼 (例如’氫氧化鋰）處理而分離。在另一方法中，醚及疏 醚可藉由將二元醇（例如，28或29)以醇及溶於溶劑（例 如，二氯甲烷、甲苯或二氯乙烷）之酸催化劑（例如 —_______4]___ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐) ------- L . (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 裝 訂： -線· 1299731 a7 __B7_ 五、發明說明（V ) ，對-甲苯磺酸或樟腦磺酸）還原而製備。 醇33_35是用於製備醚實施例1〇_13、15、16及％。 實施例33-35是從酮XI及ΧΠ而製備，如圖解3所槪述。 醚及疏醚是利用先則說明的方法以及圖解4所槪述之方法 而製備。 實施例7是如圖解5所示之方法而製備。將實施例31 以甲磺醯縮水甘油而烷基化，得到化合物XIII。以在四氫 呋喃（THF)中之三乙基氫硼化物還原，產生實施例二元 醇7。實施例14是藉由將化合物χιν以碳酸絶以及在二氯 甲烷/甲醇中之乙醛處理而製備（圖解6)。實施例40是如 圖解7所示之方法而製備。二-TBS保護的XVIII，是利用 三硝基甲苯B (triton B) /吡啶而以仲甲醛烷基化，然後利 用TMSCI去保護以得到實施例40。胺基酸酯（實施例18-23)是從實施例3以及對應的羧酸中，利用熟悉於有機合 成技藝中之人士所熟知的標準連結反應而製備。 在以下的示範的具體實施例之說明過程中，本發明之 其他特徵將變得顯而易見。這些實施例僅是提供作爲舉例 說明本發明之用，而非用以限定其範疇。 實施例 此處所使用的特定縮寫定義如下：“°C”是攝氏溫度 ;“d”代表二連；“dd”代表兩個二連；“t”代表三連 ;“m”代表多連；“eq”代表當量；“g”代表公克；“ mg”代表毫克；“ml”代表毫升；“H”代表氫；“hr” 代表小時；“Μ”代表莫耳濃度；“min”代表分鐘；“ __4? ------—- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再ΐΛ本- 裝 頁) -t-r°J· -·線· A7 1299731 B7 -------- 五、發明說明（W ) MHz”代表兆赫；“MS”代表質譜；“nmr，，或“NMR” 代表核磁共振光譜。 化合物Π之製備： 將丙嫌酸乙基醋（4.19毫升，〇·387莫耳）在室溫及 氮氣下，加到在乙腈（ 300毫升）中之I的懸浮液（8.〇克 ’ 0.258旲耳）’然後加入1，8-二氮雜雙環[5·4·〇]__|^一碳_7-嫌（DBU) ( 1.93毫升，0.013夷耳）。在加入〇Βυ之後 ，反應的顏色從橙色變成綠色。將反應混合物加熱迴流隔 夜。將混合物在整個反應期間維持異相並且顏色變深。在 18小時之後將少量分裝物移除’並將固體藉由過濾而收集 。樣品的in NMR顯示沒有起始材料的剩餘。將反應混合 物冷卻至室溫，並將固體藉由過濾而收集。將固體以冷的 乙腈淸洗數次，並在55°C的真空中乾燥，得到淺橙色固體 (5.4 克，78%產率）。4 NMR (DMS〇-d6，300 MHz) ·· 5 9·72 ( t，3H，6·8)，2·87 ( m，2H)，3.89 ( q，2H，J =6.8)，4.49 ( s，2H)，4.88 ( s，2H)，（92 ( m，2H)， 7.29-7.48 (m，3H)，7·50_7·73 (m，3H)，7.96 (d，1H，J = 7.33)，8.56( s，lH)，9.47( d，lH，J= 7.33)。 化合物in之製備： 將對-甲苯磺酸單水合物（2.48克，0.013莫耳）及 4,4’-二甲氧基二苯基甲醇（3·19克，0.013莫耳）在室溫 及氮氣下，加到在苯（300毫升）及Ν-甲基姐咯烷（ΝΜΡ )(60毫升）中之II的懸浮液（5·62克，〇·〇ΐ37莫耳）。 將錐形瓶的內容物加熱迴流達8小時。在45分鐘之後，一 ------42____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1 I I I------------ (請先閱讀背面之注意事項再本頁) « - —線· A7 1299731 B7 五、發明說明（ ifX ) 開始異相的反應混合物變成均相。將反應混合物冷卻至室 溫，以乙酸乙酯（ 300毫升）稀釋，並以飽和的重碳酸g 溶液、水及濃鹽水淸洗。將有機層在硫酸鎂上乾燥，過濾 ，並在真空中乾燥成橙色固體（8.31克，95%產率）。ιΗ NMR ( CDC13，300 MHz) ： δ 1.18 ( t5 3Η? J= 7.1)，2·84 (m，2Η)，3.80 (s，6Η)，4·12 (q，2Η，J= 7·1)，4.38 ( s，2H)，4·72 (s，2H)，4.94 (m，2H)，6.90 ( d，4H， 8.5)，6.955 (s，1H)，7.26 ( d，4H，J= 8.5 )，7.34-7.49 (m，5H)，7·61 (d，1H，J= 7.4)，7.69 (d，1H，J二 7.7) ，9.65 ( d，1H，J= 7.8)。 化合物IV之製備： 將氫硼化鋰（2.0M的溶液18·9毫升，0.0379莫耳） 逐滴加到在四氫呋喃（ 480毫升）及甲醇（93毫升）中之 攪拌的III溶液（7.8克，0.0122莫耳）。反應混合物〜開 始是均相的，然而，隨著反應的進行，混合物變成異相。 當所有的起始材料以消耗完時，將反應混合物在冰浴中冷 谷口，並小心地以2Ν鹽酸（60毫升）終止反應。反應混合 物變成均相，以及顏色成爲淺橙色。將水（ 750毫升）加 到混合物中，並形成乳白色的沈澱物。將沈澱物藉由過濾 而收集，並在真空中乾燥，得到鬆軟的白色固體（7.2克， 99%產率）。4 NMR ( DMSO-d6，300 MHz) : (5 1.93 ( m，2H)，3·66 (m，2H)，3.71 (s，6H)，4.55 (s，2H) ，4.73 (m，2H)，4.79 (s，2H)，6.70 (s，1H)，6·93 ( d，4H，J= 8·44)，7·22 ( d，4H，J= 8·4)，7.26 (m，1H) -------44_____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） *!1!!!! i » (請先閱讀背面之注意事項再本頁) a^T· --線· 1299731 A7 B7__ 五、發明說明（β ) ’ 7·34·7·46 (m，2H)，7.49 (m，1H)，7·65 (d，1H，J= 7·01)，7.70( d，lH，J二 8.26)，7.86( d，lH，J二 7.82)， 9.49 ( d，1H，J= 7.49)。 化合物V之製備： 將N-溴琥珀醯亞胺（〇·63克，〇_〇〇36莫耳）在室溫及 氮氣下，一次加到在四氫呋喃（131毫升）中之IV的懸浮 液（2.02克，〇·〇〇34莫耳）。將反應混合物在室溫攪拌隔 夜。將反應溶劑在真空中移除，留下淡黃色的固體。將固 體以冷的甲醇磨碎，並藉由過濾而收集。將固體在真空中 乾燥，得到淡黃色固體（1·98克，87%產率）。WNMR ( 〇MSO-d6，300 MHz) : 5 1·91 (m，2H)，3.44 (m，2H) 5 3.72 ( s5 6H)，4.53 (s，2H)，4.74 (m，2H)，4.87 ( s，2H) ，6·71 (s，1H) ，6.93 (d，4H，8·1) ，7·37 (m， 2H)，7.59-7.69 (m，3H)，8·08 (s，1H)，9.50 ( d，1H， J= 7.01) 〇 化合物VI之製備： 將在甲氧基乙醇（25毫升）中之V (0·79克，0.0017 莫耳）裝入Schlenk試管中，然後裝入醋酸鈉（0.57克， 0.00702莫耳）及二氯雙（三苯基膦）_鈀（11) (0·082克， 0.000117莫耳）。將試管的空氣排空並裝滿一氧化碳。將 密封試管中之反應混合物在155°C的油浴中加熱3小時。 將反應冷卻至室溫，並加入另外的一氧化碳。將混合物再 次加熱至l5〇°C另外3小時。加入另外的一氧化碳以及 PdClKPPh3)2 ’並將混合物加熱4小時。將反應混合物以二 ___ 45 __ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） " ------- ----I I I I I-----· I I (請先閱讀背面之注意事項再本頁) . A7 1299731 「 _B7______ 五、發明說明 氯甲烷稀釋，並且經過寅式鹽（celite)墊而沖洗。將濾液 在真空中濃縮成殘留物，其溶解於乙酸乙酯中並以水淸洗 。將有機層在硫酸鎂上乾燥，過濾，並在真空中乾燥成一 固體，其以乙醚磨碎並藉由過濾而收集，得到淺橙色固體 (〇·7 克，85%產率）。咕 NMR ( CDC13，300 ΜΗζ) ： δ 2.14 (m，2Η)，3·44 ( s，3Η)，3.67-3.78 ( m，4Η )，3.81 (s，6H)，4·44 (s，2H)，4.51 (m，2H)，4_81 (m，4H )，6·91 (d，4H，J= 8.53) ，6.98 (s，1H) ，7.28 ( d，4H， J= 8.6)，7·34_7·61 (m，4H)，8.21 (d，1H，J= 8.32)， 8.42 ( s，1H) ，9.67 ( d，1H，7.61 )。 化合物VII之製備： 將苯硫基甲烷（3.2毫升，0.110莫耳）在0°c氮氣下 ，加到在二氯甲烷（30毫升）中之VI的溶液（0.96克， 0.00138莫耳），然後加入三氟醋酸（8.5毫升，0.0276莫 耳）。在加入三氟醋酸後，反應混合物的顏色變成紅色。 將混合物在0°C攪拌1小時，並回溫至室溫隔夜。將反應 溶劑在真空中移除，留下暗紅色的油狀物。將乙醚加到油 狀物中，反應混合物的顏色變成黃色，棕褐色的固體在溶 液中沈澱。將固體藉由過濾而收集（0_6克，92%產率）。 4 NMR (DMSO-d6，300 MHz) : 5 2.29 (m，2H)，3.3 (m，2H)，3·73 (m，2H)，4·45 (m，2H)，4.54 (m，3H )，4·82 (m，2H)，4.99 (s，2H)，7·40 (m，2H)，7·58 (d，1H)，7.85 (d，1Η)，8.13 (d，1H)，8.52 (s，1H) ，8.6 ( s，1H)，9.49 ( d，1H)。 _____4L·___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 裝 · _ -線· A7 1299731 _______ 五、發明說明) 實施例29(方法A):將DIBAL-H在0°C氮氣下，緩 慢地逐滴加到在二氯甲院（ 220毫升）中攪拌的VII懸浮 液（4.4克，0.00935莫耳）。反應逐漸變成均相。將橙色 的反應混合物在〇°C攪拌1小時，然後回溫至室溫並攪拌6 小時。將混合物冷卻至0°C的冰浴中，並且一開始非常緩 慢地加入水（50毫升）。觀察到氣體劇烈地排出。加入氫 氧化鈉水溶液（1M ’ 300毫升），並將反應混合物在室溫 中攪拌1小時。沈澱物形成，並藉由過濾而收集，得到棕 褐色的固體（3.6克，96%產率）。iH nMR (DMSO-d6， 300 MHz) : 5 1.92 ( m，2H)，3.46 ( m, 2H)，4·50 ( s， 2H)，4·65 (s，2H)，4.71 (m，2H)，4·88 (s，2H)， 7.32-7.39 (m，2H)，7.47 (d，1H，J= 8.34)，7.65 (m，2H )’ 7.89 (s，1H) ’ 8.53 (s，ih)，9.49 (d，1H，J二 7.44 )° 化合物X之製備： 將氯化錫（15當量）及^^二氯甲基甲基醚（2〇當 量），加到在二氯甲烷/甲苯（3 : i，3〇/1〇毫升）中之攪 拌的II溶液（2·77克，6.75毫奠耳）。混合物的顏色從橙 色變成暗綠色。反應混合物藉由高效能液相色層分析（ HPLC)監控起始材料的消失。將混合物冷卻至〇。〇，並以 鹽酸水溶液終止反應。將材料轉移至圓底的錐形瓶中，並 在真空中濃縮成綠-褐色的油狀物。加入另外的鹽酸及乙酸 乙酯，並將材料再次在真空中濃縮。呈褐色_粉紅色的固體 在ί谷液中沈澱。將固體以己烷磨碎並將溶劑倒出。重複此 ~———：-----------— 47 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇 X 297公------ 一 --------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項再本頁) · 線- A7 1299731 ___B7____ 五、發明說明（“） 步驟五次。將固體藉由過濾而收集並乾燥，得到淺帶桃紅 色-褐色固體 2.65 克（90% 產率）。MS (ESI) ·· m/e 439 (M+H)+，4 NMR ( DMSO-d6，300 MHz) ： δ 1.00 ( U 3H )，2.94 (m，2H)，3.93 (q，2H)，4·50 (s，2H)，4.97 (m，4H)，7.37 (m，2H)，7.65 (d，1H)，7.96 ( d，1H )，8_03 (d，1H)，8·52 (s，1H)，8·67 (s，1H)，9.48 (d，1H)，10.49 (s，1H)。 實施例29(方法B):將氫硼化鋰（10當量）在 氮氣下，加到在四氫呋喃（5〇毫升）中之化合物X的懸浮 液（2·37克，0.005莫耳）。將淺褐色的混合物在室溫擾 拌3·5小時，之後，藉由HPLC並無觀察到有起始材料。 將混合物冷卻至〇°C，並且非常緩慢地加入甲醇，直到、沒 有觀察到氣體排出爲止。混合物變成均相，然後沈澱物w 始形成。將混合物在真空中濃縮成淡黃色固體，其以水_ 碎，並藉由過濾而收集，得到產物2.0克（96%產率）。 化合物VIII之製備： 將三氟醋酸酐（3當量）在〇°C氮氣下，加到在二氯甲 烷（30毫升）中之化合物29的懸浮液（1.13毫莫耳，i胃 量），然後加入三乙基胺（3當量）。反應混合物遂漸變 成均相，並在〇°C攪拌1小時，然後回溫至室溫隔夜。將 混合物以二氯甲烷稀釋，並以水及濃鹽水淸洗。將有機相 在硫酸鎂上乾燥，過濾，並在真空中濃縮成固體。繼續便 用這個材料而無須純化。 醚形成之一般方法（一般結構IX): ___48____ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公釐) ^ (請先閱讀背面之注意事項再 -裝·1 本頁· · ··綠· A7 B7 1299731 五、發明說明（W ) 將VIII溶解在適當的醇（ 0.025M)，並在油浴中加熱 至80°C。監控反應混合物之起始材料的消失。將混合物冷 卻至室溫，並將溶劑在真空中移除，留下固體。將所得的 固體以醚磨碎，並藉由過濾而收集。在一些例子中，將產 物利用色層分析技術而進一步純化。 以下的化合物是根據上述的一般方法而製備： 實施例1 : R5= 〇Et，18%純化產率。MS ( m/z)： 427 (M++l) ； lR NMR ( 300 MHz ^ DMS0-d6) ： δ (ppm )1.148 (t，3H) ，1.94 (m，2H) ，3.46-3.52 ( m，4H)， 4.53 (s，2H)，4.60 (s，2H) ，4.73 ( m，2H) ，4_91 ( s， 2H)，7.36 (m，3H)，7.48 (d，1H)，7.64 (m，2H)， 7.90 ( s，1H)，8·55 ( s，1H)，9.47 ( d，1H)。 實施例 2 : R5= OMe，95% 產率。MS (m/z) : 413 (M++1)，435 (M++Na) ; 4 NMR ( 300 MHz，DMS0-d6) ：δ (ppm) 1.99 (m5 2H) ，3.36 (s，3H) ，3.54 (m，2H )，4.58 (s，2H)，4.66 (s，2H)，4.79 (m，2H)，4.96 (s，2H) ，7.40-7.49 ( m，2H)，7.52 (d，1H) ，7.65- 7.84 (m，2H)，7.98 (s，1H)，8.60 (s，1H)，9.51 (d， 1H)。 實施例 3 : R5= OiPr，31% 產率。MS ( m/z) ： 441 (M++l) ； lU NMR ( 300 MHz ^ DMS0-d6 ) · δ (ppm) 1·15 (d，6H)，1.92 (m，2H)，3.45 (m，2H)，3.67 (m， 1H)，4.52 (s，2H)，4·61 (s，2H)，4.73 (m，2H)， 4.89 ( s? 2H)，7.3-7.39 (m，2H)，7.47 (d，1H)，7_62- ____49 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 裝 丨線· A7 1299731 _____B7___ 五、發明說明（4 ) 7.69 (m，2H)，7_89 (s，1H)，8·54 (s，1H)，9·47 ( d， 1Η)。 實施例 4 : R5= OCH(CH3)CH2CH3，25% 產率。MS ( m/z) : 455 (M++1);咕 NMR ( 300 MHz，DMSO_d6) ： δ (ppm) 0.98 (t? 3H)，1.26 (d，3H)，1_65 (m，2H)， 2.03 (m? 2H) ，3.56 (m，2H) ，4.095 (m，1H) ，4.24 ( s，2H)，4.57 (m，2H)，4.70 (m，2H)，4.71 (s，2H) ，6.12 (s，1H)，7.33 (t，1H)，7.42-7.58 ( m，4H)， 7.75 ( s，1H)，9.48 ( d，1H) 〇 實施例 5 : R5= (R)-OCH(CH3)CH2CH3，61% 產率。 MS (m/z) ·· 455 (M++1);咕 NMR ( 300 MHz，DMSO_d6 )：5 ( ppm) 0.98 ( t? 3H) ，1.26 (d，3H) ，1.65 (m， 2H) ，2.03 (m，2H) ，3.56 (m，2H) ，4.095 (m，1H)， 4·24 (s，2H)，4.57 (m，2H)，4.70 (m，2H)，4.71 ( s， 2H)，6·12 (s，1H)，7.33 (t，1H)，7.42-7.58 ( m，4H) ，7.75 ( s，1H)，9.48 ( d，1H)。 實施例 6 : R5= (S)_OCH(CH3)CH2CH3，93% 產率。 MS ( m/z) : 455 (M++1) ; 4 NMR ( 300 MHz，DMSO-d6 ):(5 (ppm) 0.98 (t，3H)，1.26 (d，3H)，1.65 (m5 2H)，2.03 (m，2H)，3·56 (m，2H)，4.095 (m，1H)， 4.24 ( s, 2H)，4·57 (m，2H)，4_70 (m，2H)，4.71 (s， 2H)，6.12(s，lH)，7.33(t，lH)，7.42-7.58 ( m，4H ) ，7.75 ( s，1H)，9.48 ( d，1H)。 實施例 8 : R5= O-nPr，62% 產率。MS ( m/z) : 441 ----5Ω__ 一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） ----- - - · I I (請先閱讀背面之注意事項再本頁) . --線· 1299731 a7 __B7__ 五、發明說明（〇 ) (M++1)，462 (M++Na) ; 4 NMR ( 300 MHz，DMSO-d6) ----I--I I I I--I · I I (請先閱讀背面之注意事項再本頁) ：δ ( ppm) 0.88 ( t? 3H)，1.55 (m，2H)，1.933 (m， 2H)，3.36-3.58 ( m，4H)，4_53 ( s，2H)，4_61 ( s，2H) ，4.73 ( m，3H)，4·90 ( s，2H)，7.33-7.39 ( m，2H)， 7.47 (d，1H)，7.62-7.70 (m，2H)，8.54 (s，1H)，9·47 (d，1H)。 實施例 9 : R5= 0_nBu，92%產率。MS ( m/z) ： 441 (M++1) ; ^ NMR ( 300 MHz，DMSO-d6) ·· 5 ( ppm) 0.854 (t，3H)，1.34 (m，2H)，1.52 (m，2H)，1.93 ( m，2H)，3.48 (m，2H)，4·52 (s，2H)，4.60 (s，2H) ，4.73 (m，3H)，4.89 (s，2H)，7.30-7.42 (m，2H)， 7.47 (d，1H)，7.62-7.70 (m，2H)，7.89 (s，1H)，8.54 (s，1H)，9_47 ( d，1H) 〇 ··線· 實施例 17 : R5= O-tBu，35%產率。MS ( m/z) : 441 (M++1)，477(M++Na) ; (H NMR ( 300 MHz，DMSO-d6): δ (ppm) 1.28 ( s? 9H)，1.97 (m，2H)，3.62 (m，2H) ，4.56 (s，2H)，4.52 (s5 2H)，4.77 (m，3H)，4.94 ( s，2H)，7.35-7.72 ( 3m，3H)，7.72 (m，2H)，7.90 (s， 1H)，8.57 (s，1H)，9.50 (d，1H)。 實施例 25 : R6= SEt，96% 產率。MS ( m/z) : 443 (M++l) ； lR NMR ( 300 MHz ^ DMSO-d6 ) · δ (ppm) 1.17 (t，3H)，1.93 (m，2H)，2.42 (q，2H)，3.48 (m， 2H)，3.93 (s，2H)，4.52 (s，2H)，4·72 (m，3H)， 4.89 ( s，2H)，7.33-7.49 ( m，3H)，7_65 (m，2H)，7_88 ___51_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） A7 1299731 __B7______ 五、發明說明（打） (s，1H)，8.56 (s，1H)，9.46 (d，1H)。 (請先閱讀背面之注意事項再ΐΡΤ本頁) 實施例 26 ·· R6= SOCH(CH3)2，MS ( m/z ) ： 494 (M++Na) ; !H NMR ( 300 MHz，DMSO-d6 ) ·· δ ( ppm) 1.21 (dd，6H)，1.93 (m，2H)，2.82 (m，1H)，3.49 ( m，2H) ，4.12 ( d，1H) ，4.23 ( d，1H) ，2.52 ( s，2H)， 4.75 ( m，3H)，4.88 ( s5 2H)，7.33-7.45 ( m，2H)，7.55 (d，1H)，7.65 (d，1H)，7.71 (d，1H)，7.64 (s，1H) ，8·58 ( s，1H)，9.47 ( d，1H)。 實施例 27 : R6 = SCH(CH3)2，MS ( m/z ) : 457 (M++1)，479(M++Na) ; NMR ( 300 MHz，CDC13) : 5 (ppm) 1.31 (d，6H)，2.34 (m，2H)，2.86 (m，1H)， 3.98 (s，2H)，4.29 (s，2H)，4_45 (m，1H)，4.74 ( m， 2H)，4.92 (s，2H)，6.07 (s，1H)，7.39 (m，2H)， 7.51 (m，2H) ，7.57 (m，1H) ，7.80 (s，1H) ，9·53 ( d， 1H)。 實施例37 : R6= nPrS (三氟醋酸），66%產率；^ NMR (DMSO-d6，300 MHz) : 5 0.92 (t，3H) ，1·58 (q， 2H)，2.29 (m，2H)，2.44 (t，2H)，3.95 (s，2H)，4.53 (m，4H)，4.82( m，2H)，4.93(s，2H)，7.41(m，2H )，7.52 (d，1H)，7.60 (d，1H)，7.93 (s，1H)，8.62 (s，1H)，9.53 ( d，1H)。 實施例 38 ·· R6= S(C5H4N)，51%產率；MS (ESI): m/e 514 (M+Na)+，4 NMR (DMSO-d6，300 MHz) : 5 1.014 (m，2H)，3.45(m，2H)，4.51(s，2H)，4.60 ( s， ___52_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） A7 1299731 _B7__ 五、發明說明（Η ) 2H)，4.72 (m，3H)，4·85 (s，2H)，7.11 (m，1H)， 7·30-7.41 (m，3H)，7.54-7.67 (m，4H)，8·02 (s，1H) ，8.48 ( d，1H，J= 3·97)，8·55 (s，1H)，9.46 ( d，1H，J =7.36)。 實施例 39 : R6= S(C4H3N2)，52%產率；MS (m/z)： 493 (M++H) ; 4 NMR ( 300 MHz，DMSO-d6) ： 5 (ppm )1.93 (m, 2H)，3.45 (m，2H)，4_51 (s，3H)，4·60 ( s，2H)，4.72(m，2H)，4.88(s，2H)，7.22(t，lH)， 7.32-7.68 (m，6H)，8.05 (s，1H)，8.55 (s，1H)，8.66 (d，1H)，9_46 ( d，1H)。 實施例 30 ·· R5= H，44% 產率；NMR ( 300 MHz， DMSO-d6) : 5 (ppm) 4.13 (s，2H) ，4.64 (s，2H)， 4.89 ( s? 2H)，7.28-7.42 ( m，3H)，7_53 ( d，1H)，7.64 (d，1H)，7.89 (s，1H)，8.49 (s，1H)，9.43 (d，1H) ，11.83 ( s，1H)。 實施例 31 : R5= OEt，83%產率；4 NMR ( 300 MHz ，DMS0-d6) ： δ ( ppm) 1.18 ( t, 3H) ，3.55 (q，2H) ，4.62 (s，2H)，4.93 (s，2H)，7.34-7.46 ( m，3H)， 7.58 (d，1H)，7.68 (d，1H)，7.92 (s，1H)，8.54 ( s， 1H)，9.39 (d，1H)，11.91 (s，1H)。 實施例 32 : R5= OiPr，41%純化產率；1H NMR ( 300 MHz，DMSO-d6) ： δ ( ppm) 1.15 ( d? 6H)，3·68 ( m， 1H)，4.13 (s，2H)，4.59 (s, 2H)，4·89 (s5 2H)， 7.28-7.42 (m，3H) ，7.54 (d，1H) ，7.64 (d，1H) ，7.88 _ _52-_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） .!11111!1------ (請先閱讀背面之注意事項再本頁) - --線· A7 1299731 ___ B7____ 五、發明說明（A)

(s，1H)，8.49 (s，1H)，9.35 (d，1H)，11.87 (s，1H )° 化合物XI之製備： 將乙醯氯（3當量）在氮氣下加到在1，2-二氯乙烷/二 氯甲烷（1:1，8毫升）中之氯化鋁懸浮液（3當量）。反 應混合物變成均相，並且在冰浴中冷卻至〇°C。逐滴加入 在二氯甲烷（3毫升）中之B懸浮液（〇·84毫莫耳，1當 量），混合物的顏色變成褐色。將冰浴移除並將反應混合 物回溫至室溫。將混合物加熱迴流2小時，然後冷卻至室 溫。HPLC顯示沒有起始材料的存在。在冰水上倒入混合 物，並加入濃鹽酸（5毫升）。沈澱物形成並藉由過濾而 收集並且乾燥。340毫克（89%產率），MS (m/z) : 453 (M++1)，咕 NMR ( 300 MHz，DMSO-d6) : 5 (ppm) 2.02 (s，3H)，2.18 (m，2H)，2.74 (s，3H)，4·12 (m， 2H)，4·56 (s，2H)，4.83 (m，2H)，5.05 (s，2H)， 7·43 (m，2H)，7_68 (d，1H)，7.86 (d，1H)，8.17 (d， 1H)，8.56 (S，1H)，8.72( 1H) ,9.53 (d，lH)。 實施例33 :將氫硼化鋰（i〇當量）在氮氣下，加 到在四氫呋喃（6毫升）中之XI懸浮液（〇.18毫莫耳，1 當量）。反應混合物在0°C攪拌1小時，然後回溫至室溫4 小時。將混合物冷卻至0°C，並緩慢地逐滴加入甲醇。在 過量的氫硼化物終止期間觀察到氣體劇烈地排出。將混合 物在室溫攪拌隔夜。將反應混合物以乙酸乙酯稀釋，並以 水及濃鹽水淸洗。將有機層在硫酸鎂上乾燥，過濾，並在 -----54_______ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 一" 一 (請先閱讀背面之注意事項再1!^本頁) -^-Γν · --線· A7 1299731 ___B7____ 五、發明說明（B ) 真空中濃縮，得到白色固體69毫克（90%產率）。MS ( m/z) 413 ( M++1 )，435 (M++Na) ； lU NMR ( 300 MHz ，DMSO-d6) ： δ (ppm) 1.41 ( d? 3H)，1.92 (m，2H) ，3·46 (m，2H)，4.52 (s，2H)，4.71 (m，3H) ^ 4.89 ( s，3H)，5.18 (s，1H)，7.32-7.39 ( m，2H)，7.50 ( d， 1H)，7.64 (m，2H)，7.89 (s，1H)，8.55 (s，1H)， 9.46 ( d，1H ) o 以下的化合物是利用三-三氟醋酸中間產物，根據上述 醚形成的一般方法而製備： 實施例 10 : R5= OEt，68% 產率。MS ( m/z) ： 441 (M++1)，395 ( M+-OCH2CH3 );巾 NMR ( 300 MHz， DMS0-d6) : 5 (ppm) 1.08 (t，3H) ，1.41 (d，3H)， 1.93 (m，2H)，3.47 (m，2H)，4.52 (s，2H)，4.60 ( m， 1H)，4.73 (m，2H)，4.90 (m，2H)，7.33-7.39 ( m，2H )，7.47 (d，1H)，7_63 (d，1H)，7.69 (d，1H)，7.86 (s，lH)，8.55 (s，lH)，9.47 (d，lH)。 10的逆相高效能液相色層分析分離，得到異構物11 及12。 實施例 11 (非對稱）：R5= OEt，MS ( m/z) ： 441 (M++1)，395 (M+-OCH2CH3)。 實施例 12 (非對稱）：R5= OEt，MS ( m/z) ： 441 (M++1)，395 (M+-OCH2CH3)。 實施例 13 : R5= OMe，76% 產率。MS (m/z) ： 427 (M++l) ； NMR ( 300 MHz ^ DMSO-d6) ： δ (ppm) _________^_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再ϊΡί本頁) . 線· 1299731 A7 ___B7______五、發明說明（忖） 1.45 (d，3H)，1.98(m，2H)，3.14(s，3H)，3.50(m， 2H)，4·58 (m，3H)，7·75 (m，2H)，4·93 (s，2H)， 7.33 (m，2H) ，7·48 (d，1H) ，7.67 (d，1H) ，7.72 (d， 1H)，7.88(s，lH)，8.58 ( s5 1H)，9.49 ( d，1H)。 實施例 15 ·· R5= OBu，73%產率。4 NMR ( 300 MHz ，DMSO-d6) : 5 ( ppm) 0.81 ( t，3H)，1.27-1.43 ( m， 7H)，1.93 (m，2H)，3·48 (m，2H)，4.53 (s，2H)， 4_58 (m，1H)，4.73 (m，4H)，4_92 (m，2H)，7.33-7.39 (m，2H) ，7.46 (d，1H) ，7.63 (d，1H) ，7.69 ( d， 1H) ，7.86(s，lH) ，8.55(s，lH) ，9.47(d，lH)。 實施例 16 : R5= OiPr，63%產率。4 NMR ( 300 MHz ，DMSO-d6) ： δ (ppm) 1.01 ( d, 3H) ，1·10 d，3H)， 1.38 (d，3H)，1.95 (m，2H)，3.98 (q，1H)，4·26 ( m， 1H)，4.52 (s，2H)，4.74 (m，3H)，4.90 (m，2H)， 7.33-7.39 (m，2H) ，7.48 (d，1H) ，7.62-7.69 (m，2H) ，7_87 (s，1H)，8.54 (s，1H)，9.47 (d，1H)。 實施例 35 : R、H，98 % 產率。MS ( m/z ) : 455 (M++1)，337 (M+-H20) ; 4 NMR ( 300 MHz，DMSO-d6 )·· δ ( ppm) 1.45 (d，3H)，4.25 (m，3H)，4.86 ( s， 2H)，5.16 (d，1H)，7.28-7.39 (m，2H)，7.43 (d，1H )，7.56 (d，1H)，7.66 (d，1H)，7.92 (s，1H)，8.49 (s，lH)，9.35(d，lH)，11.78 (s，lH)。 實施例 36 : R5= OMe，50% 產率。MS ( m/z) : 369 (M++l) ； NMR ( 300 MHz ^ DMSO-d6 ) ： δ (ppm) ___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意 拳項再本 裝 頁) · 線· A7 1299731 _______BJ__ 五、發明說明（汉） 1.43 (d，3Η)，3_16 (s，3H)，4·15 (m，2H)，4·49 ( m， 1H)，4·93 (s，2H)，7.32-7.40 ( m，3H)，7.58 ( d，1H )，7·67 (d，1H)，7.84 (s，1H)，8_50 (s，1H)，9.44 (d，1H)，11.87 ( s，1H)。 實施例34:115=11(77%產率，兩步驟）；％3(111々 ):427 (M++1)，409 (M+-H20);咕 NMR ( 300 MHz， DMSO-d6) : 5 (ppm) 0.848 (t，3H) ，1.70 (m，2H)， 1.93 (m，2H)，3.47 (m，2H)，4.52 (s，2H)，4.61 (m， 1H)，4.72 (m，3H)，4.89 (s，2H)，5·14 (s，1H)， 7.29-7.39 ( m，2H)，7.44( d，lH)，7.64( m，2H)，7.87 (s，1H)，8.54 ( s，1H)，9.46 ( d，1H)。

實施例3的酯形成之一般方法：將化合物3 ( 148.6毫 莫耳）裝入烘乾的3公升、3頸圓底錐形瓶中，其配備有 機械攪拌子、連接至氬氣氣球之三向活塞以及浸沒的溫度 計，然後再裝入無水N，N-二甲基乙醯胺（ 654毫升）。將 4-(二甲基胺基)吡啶（DMAP) (0.5當量）、胺基酸（2.5 當量）以及1-[3-(二甲基胺基）丙基]-3-乙基碳化二亞胺氫 氯化物（2.5當量），依序在35°C加入至澄淸的紅色溶液 中。將反應懸浮液加熱至42-45°C兩小時，並依序加入另 外數量的4-(二甲基胺基)吡啶（0_08當量）、胺基酸（0·5 當量）以及1-[3-(二甲基胺基）丙基]-3-乙基碳化二亞胺氫 氯化物（0.5當量）。L5小時之後，將反應混合物冷卻至 〇-5°C，並以水終止反應。移除冷卻浴，並將所得之淡黃色 懸浮液在室溫攪拌1小時。將懸浮液過濾，以水淸洗至pH _____S7 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再 I --- 15^本頁) · -線· 1299731 A7 B7 五、發明說明（妗） 二8，並使用家用真空器乾燥隔夜。淡黃色固體沒有完全地 乾燥，將其溶解在二氯甲烷中’並將水層分離。將有機相 以濃鹽水淸洗，在硫酸鎂上乾燥，經寅式鹽過濾’並使用 旋轉蒸發器濃縮以得到粗固體。將粗材料再次溶解在二氯 甲烷中，並轉移至3公升、3頸圓底的錐形瓶中’其配備 有機械攪拌子。將乙酸乙酯（1公升）在室溫中逐滴加到 澄淸的紅色溶液達70分鐘，並持續地攪拌。在加入乙酸乙 酯（15毫升）之後形成沈澱物。將漿液攪拌2.5小時’然 後漿固體藉由過濾而收集。將沈澱物依序以乙酸乙酯、乙 酸乙酯/甲基·第三丁基醚（3 : 2)的混合物以及甲基-第三 丁基醚淸洗並乾燥，得到灰白色固體（78%產率）。 498 (M++1 ) 566 ( M++1 ) 569 (M++1) 512 ( M++1 ) 554 (M++1) 526 ( M++1 ) 實施例 18 : MS (m/z) 實施例 19 : MS (m/z) 實施例 20 : MS (m/z) 實施例 21 : MS (m/z) 實施例 22 : MS (m/z) 實施例 23 : MS (m/z) 實施例 24 : MS (m/z) : 554 (M++1)。 XIII之製備： 將實施例31 (0.33毫莫耳）溶解在二甲基甲醯胺（10 毫升），並將半數的體積藉由蒸餾而移除。將錐形瓶冷卻 至室溫，加入氫化鈉（1當量），並將混合物攪拌1小時 。加入甲磺醯縮水甘油（1.5當量），並將混合物回溫至 50°C24小時，然後冷卻至室溫。將混合物過濾並將溶劑在 58 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) •線· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1299731 ___B7__ 五、發明說明（切） 真空中移除。將反應混合物藉由二氧化矽膠體之管柱色層 分析而純化，得到XIII (73%產率）。1.19 (t，3H)， 2.78 ( U 1H)，3·53 (m，4H)，4_53 (s，2H)，4·65 ( s， 2Η)，4.78 (dd，1Η)，4.96 (s，2H)，5.20 (d，1H)， 7.35-7.47 (m，2H)，7.51 (d，1H)，7.68 (d，1H)，7.75 (d，lH) ，7.95 (s，lH) ,8.62 (s，lH) ，9.55 (d，lH) o 實施例7 :將化合物XIII ( 100毫克）溶解在四氫呋 喃（10毫升），並逐滴加入三乙基氫硼化物（2毫升）。 將反應混合物加熱至70°C4小時。將混合物冷卻至室溫並 加入1N鹽酸。將溶劑在真空中移除，並將材料溶在甲醇/ 水的混合物中。將所得的沈澱物藉由過濾而收集，並且乾 燥。1.19 (t，3H)，1·25 (d，3H)，3.55 (q，2H)，4·13 (m，2H)，4.58( s，2H)，4.61( s，2H)，4.64(s，2H) ，4.93 (s，2H) ，4.97 (t，1H)，7.34-7.45 ( m，2H)， 7_49 (d，1H)，7.69 (t，2H)，7.92 (s，1H)，8.57 ( s， 1H)，9_50 (d，1H) 〇 實施例14 :將碳酸鉋（4.0當量）加到在二氯甲烷/甲 醇/HMPA (4 : 2 : 1毫升）中之XIV懸浮液（0.75毫莫耳 )。將反應混合物攪拌30分鐘，然後加入乙醛。加入另外 的乙醛，可藉由薄層液相色層分析（TLC)觀察到些許變 化。將混合物以二氯甲烷稀釋，並以水及濃鹽水淸洗。將 有機相在硫酸鎂上乾燥，過濾，並在真空中濃縮。將粗產 物XV藉由管柱色層分析而分離（33%產率）。將XV ( __52L__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再1^?本頁) · 線· 1299731 a? _ __B7____ 五、發明說明（汐） 0.3毫莫耳）溶解在二氯甲烷中並冷卻至〇°C。將羥基乙疏 醇（2滴）以及三氟醋酸（TFA) (1滴）加到溶液’並將 混合物在0°C攪拌1小時。將混合物回溫至室溫並攪拌1 小時。加入另外的三氟醋酸（2滴）至反應混合物，30分 鐘後，結束反應。將產物利用二氯甲烷/乙酸乙酯，藉由二 氧化矽膠體之管柱色層分析而純化。分離出單一的非對映 異構物 65 毫克（53% 產率）°0.52(d，3H)，1.21(t，3H )，2.47(q，2H)，3.96( s，2H)，4.49(s，lH)，4.86 (m，1H)，4.94 (s，2H)，6.18 (s，1H)，7.35-7.45 ( m， 3H)，7.64 (d，1H)，7.72 (d，1H)，7.92 (s，1H)， 8.57 (s，1H)，9·41 (d，1H)，10.99 (s，1H)。 XVII之製備：將XVI (2.0克，4.6毫莫耳）在60-65 °C加到在三氟醋酸中之六亞甲基四胺之溶液（1·6克，11.4 毫莫耳）。攪拌2小時之後，將反應冷卻至室溫，然後逐 滴加入2Ν硫酸-丙酮（150毫升）（2 : 1 )。收集固體， 將其懸浮於二氧戊環（150毫升），並加熱迴流30分鐘。 將未溶解的材料藉由過濾而移除，並將溶劑濃縮至大約25 毫升。加入甲醇（50毫升）以沈澱出產物，將其收集並乾 燥，得到700毫克灰黃色固體。MS ES+ 467 ( Μ+1 )。 實施例28 :將固體氫硼化鈉（ 200毫克）加到在三氯 甲烷/甲醇（60毫升，5/1)中之XVII懸浮液（ 500毫克， 1.1毫莫耳）。將溶液在室溫攪拌4小時。將三氯甲烷在減 壓下移除，然後加入2N鹽酸。將溶液攪拌2小時，然後 收集並乾燥’得到420毫克灰白色固體。MS ES+ 469 ( 尺度適用中ϊ國家標準(^A4規格(210 x ' (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 丨裝 太 · 線· A7 1299731 --—__B7___ 五、發明說明（jrf ) M+l)。將粗醇懸浮於三氯甲烷-甲醇（25毫升+ 10毫升） ’然後加入〇_7毫升之1M NaOMe，接著在室溫攪拌12小 時。將溶劑濃縮，固體以甲醇磨碎並收集產物，得到二元 醇 420 毫克（84%) JHNMR(DMSO-d6,300 MHZ): 占 3.8 (m，2H)，4.55 (s，2H)，4.63 (d，2H)，4.75 ( m，2H)，4.97(s，2H)，5.0(m，lH)，5.23(m，lH)， 7.34-7.51 ( m，4H) ，7.68 ( m，2H) ，7.94 ( s，1H) ，8.57 (s，lH) ，9.51(d，lH) °MSES+ 385 (M+1)。 實施例24 :將樟腦磺酸（30毫克，0.26毫莫耳）及 羥基乙锍醇（0.39毫莫耳）加到在三氯甲烷中之實施例28 的懸浮液（50毫克，0.13毫莫耳），然後在氮氣下攪拌12 小時。加入過量的三氯甲烷，然後將溶液以2M碳酸鈉溶 液、水、濃鹽水淸洗，並且乾燥（硫酸鎂）。將溶劑濃縮 ’並在以甲醇磨碎後回收產物。1H NMR (DMSO-d6，300 MHz) ·· (51.1，2.3 (m，2H)，3.85 ( m，2H)，4·0 ( s，2H )，5.5 (s，2H)，4.8 (m，2H)，4.9 (s，2H)，5_0 ( t， 1H)，7.35-7.5 (m，4H)，7·7 (m，2H)，8.6 (s，1H)， 9.5(d，lH) 〇MS(ES+) 429,451 (M+l，+23) 〇 實施例4〇:將4-(二甲基胺基)D比啶（1毫克）、Et3N ( 267 微升，1.92 毫莫耳）及 tBDMSCI ( 220 毫克，1.47 毫莫耳）加到在二甲基甲醯胺（10毫升）中之實施例3的 溶液（210毫克，0.48毫莫耳）。攪拌20小時之後，將混 合物溶於乙酸乙酯，並依序以碳酸氫鈉水溶液、水以及濃 鹽水淸洗。將有機層在硫酸鎂上乾燥，過濾並蒸發以得到 _____ύΐ__ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 訂· -線· 1299731 A7 B7_ .- …—- ' — 五、發明說明（和） (請先閱讀背面之注意事項再iPP本頁) 殘留物，其藉由管柱色層分析（二氧化矽膠體，1〇%乙酸 乙酯/己烷）而純化，得到225.1毫克之中間產物χνπι ( 70% )。 --線- 將XVIII (68.1毫克’ 0.10笔吴耳）與在姐陡（4毫 升）中之仲甲醛（63·1毫克，2.1毫莫耳）的混合物，以 0.25Μ在吡啶中之三硝基甲苯B 〇riton β)溶液（1〇〇微 升，0.025毫莫耳）處理。攪拌2小時之後，加入另外的在 毗啶中之三硝基甲苯B ( 150微升，0.038毫莫耳）。丨小 時之後，將混合物溶於乙酸乙酯’並以硫酸銅水溶液徹底 淸洗。在以水、碳酸氫鈉水溶液及濃鹽水淸洗之後，將有 機層在硫酸鎂上乾燥，過濾並蒸發以得到殘留物，其藉由 管柱色層分析（二氧化矽膠體，22%乙酸乙酯/己烷）而純 化，得到45.2毫克之IXX ( 64% )’其具有下列之光譜性 質：4 NMR ( DMS0-d6，300 MHz) ·· 5 9.42 ( d，1H，J= 7.7)，7.97(s，lH)，7.75-7.72 ( m，2H)，7.52 ( d，1H， 8.5) ，7.44 (dd，1H，J= 7.7, 7·5) ，7.36 ( dd，1H，J= 7.7，7.5)，5_13 (m，1H)，5.04 (s，2H)，4_77 (m，1H )，4.70( s，2H)，4.10( m，lH)，3.76( sep.lH，J: 6.1 )，3.54 (m，1H)，3.44 (m，1H)，3.31 (m，3H)， 1·79 (m，2H)，1.22 (m，6H)，i.〇7 (s，9H)，〇·85 (s，

9H)，0.52 (s，6H)，〇.〇〇 (s，3H)，0.03 (s，3H) ; MS (m/z) 699 ( M+H)。 將TMSCI ( 100微升）加到在ipr〇H ( 1〇毫升）中之 XXI溶液（22.5毫克，0.032毫莫耳），然後將混合物攪拌 ______62 ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公£3- A7 1299731 ____B7___ 五、發明說明（έ>丨） 2.5小時。在蒸發溶劑之後，將殘留物以乙醚（3x1毫升） 磨碎並乾燥，得到10.8毫克之實施例40 ( 72% )，其具有 下列之光譜性質 ^HNMRCDMSO-A) : 5 9.49(d，lH，J -7.7)，8·59 (s，1H)，7.96 (s，1Η)，7.80 ( d，1H， 7.3 )，7.77 ( d，1H，J= 8.5)，7.55 ( d，1H，J= 7.3 )， 7·45 (m，1H)，7.37 (m，1H)，4.98 (m，3H)，4.78 ( m，2H)，4.70 (s，2H)，4.20-4.16 (m，lH)，3.76 (sep. 1H，J= 6.1)，3.38 (m，1H)，3·36·3·25 ( m，2H)，1.80 (m，2H)，1.23 (d，6H，J= 6·1) ； MS (m/z) 471 ( M+H )° 血管內皮生長因子受體激酶活性之抑制： 利用以下說明之/4A激酶的酵素連結免疫吸附分析（ ELISA)所說明之方法，檢驗稠合之毗咯並咔唑類化合物 對於桿狀病毒表現的血管內皮生長因子受體（人類flk-1， KDR，VEGFR2)激酶功能部位之激酶活性的抑制作用。 將激酶反應混合物（包含50 mM的HEPES (pH 7.4)、40 μΜ腺苷三磷酸、10 mM氯化錳、0.1%牛血淸白蛋白、2 %二甲基亞硼以及各種濃度之抑制劑）轉移至_PLC-r /GST-覆蓋的培養盤。加入血管內皮生長因子受體激酶，並 使反應在37°C持續15分鐘。磷酸化產物之偵測，是藉由 加入抗磷酸酪胺酸抗體（UBI)而達成。給予二次酵素連 結的抗體，以捕捉抗體-磷酸化的PLC-y/GST複合物。結 合的酵素之活性是藉由放大的偵測系統（Gibco-BRL)而 測量。在GraphPad Prism中使用S形的的劑量反應（變量 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) -裝 太 · •線- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1299731 _B7__ 五、發明說明（& ) 斜率）方程式而分析抑制數據。結果摘述於表III。 表 III ： 血管內皮生長因子受體抑制 化合物 VEGFR2 (在 300 nM 之 IC5G 或抑制％ ) A 107 B 48 C 17% D 200 1 4 2 17 3 7 4 12 5 12 6 19 7 25 8 13 9 18 10 83 11 65 12 240 13 73 14 72 15 130 16 411 17 11 18 23 19 60% 20 31 21 48% 22 18 23 57% 24 31% 25 21 26 31% 27 57 28 34% 29 208 __64 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再13^本頁) -裝 · -·線' A7 1299731 _____B7 五、發明說明（P ) 30 302 31 77 32 33% 33 111 34 7 35 37% 36 12% 37 37% 38 45% 39 13% 40 16 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 混合家系激酶-1 (MLK1)的活性之抑制： --線- MLK1的激酶活性是利用Millipore多螢幕TCA “盤內 ”格式而評估，如用於蛋白質激酶C之說明（Pitt & Lee， J. Biomol. Screening 5 1 · 47-61 ? 1996 )。簡言之，每個 50微升的分析混合物包含20 mM的HEPES (pH 7.2)、5 mM的EGTA、15 mM氯化鎂、25 mM /3 -甘油磷酸、60 // μ腺苷三磷酸、0.25微居禮[τ-32ρ]ατρ、0.1%牛血淸白蛋 白、500微克/毫升骨髓磷脂基本蛋白質（UBI編號13-104 )、2%二甲基亞礪、1//Μ之測試化合物以及1微克/毫升 的桿狀病毒GST-MLK1Kd。將樣品在37°C培養15分鐘。 反應是藉由加入冰冷的50%三氯醋酸而終止，並使蛋白質 在4°C沈澱30分鐘。然後將培養盤以冰冷的25%三氯醋酸 淸洗。加入混合均勻之閃爍計數液，並使培養盤平衡1-2 小時，然後利用Wallac MicroBeta 1450 PLUS閃爍計數器 而計數。 混合家系激酶-2 (MLK2)的活性之抑制： __65___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1299731 ___B7_ 五、發明說明（知） 如MLK1所說明之方法，以Millipore多螢幕盤格式 而進行分析。每個50微升的分析混合物包含20 mM的 HEPES (pH 7.2)、5 mM 的 EGTA、15 mM 氯化鎂、25 mM/3 -甘油磷酸、100//Μ腺苷三磷酸、0.25微居禮[r_ 32P]ATP、0.1%牛血淸白蛋白、500微克/毫升骨髓磷脂基 本蛋白質（UBI編號13-104)、2%二甲基亞硼、各種濃度 之測試化合物以及3微克/毫升的桿狀病毒GST-MLK1kd° 將樣品在37°C培養15分鐘。反應是藉由加入冰冷的50% 三氯醋酸而終止，並使蛋白質在4°C沈澱30分鐘。然後將 培養盤以冰冷的25%三氯醋酸淸洗。加入混合均勻之閃爍 計數液，並使培養盤平衡1-2小時，然後計數。 混合家系激酶-3 (MLK3)的活性之抑制： 如MLK1所說明之方法，以Millipore多螢幕盤格式 而進行分析。簡言之，每個50微升的分析混合物包含20 mM 的 HEPES (pH 7_2)、5 mM 的 EGTA、15 mM 氯化鎂 、25 mM/3 _甘油磷酸、100/z Μ腺苷三磷酸、0.25微居禮[ 7 -32Ρ]ΑΤΡ、0.1%牛血淸白蛋白、500微克/毫升骨髓磷脂 基本蛋白質（UBI編號13-104)、2%二甲基亞硼、各種濃 度之測試化合物以及2微克/毫升的桿狀病毒GST-MLK1kd 。將樣品在37°C培養15分鐘。反應是藉由加入冰冷的50 %三氯醋酸而終止，並使蛋白質在4°C沈澱30分鐘。然後 將培養盤以冰冷的25%三氯醋酸淸洗。加入混合均勻之閃 爍計數液，並使培養盤平衡1-2小時，然後計數。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再Λ本頁) · 丨線· A7 1299731 _B7 五、發明說明Ur ) 表IV :混合家系激酶（MLK)抑制 在100 nM之IC5G ( nM )或抑制％ 化合物 MLK1 MLK2 MLK3 A 22 39% 8 B 31 46% 17 C 8% 〇% 30% D 45 43% 1 21 4 2 15 8 3 17 9 4 15 4 5 27 45% 16 6 38 51% 19 7 85% 30 8 19 76% 13 9 26 15 10 37 15 11 78 20 12 28 131 16 13 20 62% 26 14 93% 9 15 41 27 16 66% 49% 17 35 50% 18 47 23 19 44% 28% 20 42 229 32 21 40% 22 74 170 28 23 31% 24 62% 55% 25 22 12 26 59 27 22 28 76 74 29 9 64% 5 67 請 先 閱 讀 背 © 之 注 意事 項 再 頁 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1299731 ____B7 五、發明說明（A ) 30 30 31 46 29 32 24 19 33 50 16 34 45% 32% 35 60% 62% 36 26 41% 37 17 38 58% 30 39 55% 56% 40 21 86 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) ίΚΑ酪胺酸激酶活性之抑制 經選擇異構形的稠合之毗咯並咔唑類以及異吲哚滿酮 ，可利用前述以酵素連結免疫吸附分析爲基準之分析（ Angeles 等人，/打“/·所236 ·· 49-55 ’ 1996) ’而測 -_線- 試其抑制桿狀病毒表現的人類ίΑΑ細胞質功能部位的激酶 活性之能力。簡言之，將96孔的微量盤覆蓋基質溶液（重 組的人類磷脂酶c-r 1/穀胱甘肽-硫-移轉酶融合蛋白質（ Rotin等人，五M50. J. 11 ·· 559-567))。抑制的硏究是在 100微升的分析混合物中進行，其包含50 mM的HEPES ( pH 7.4)、40//Μ腺苷三磷酸、10 mM氯化錳、〇·1 %牛血 淸白蛋白、2%二甲基亞硼以及各種濃度的抑制劑。反應是 藉由加入ίΑΑ激酶而開始，並在37°C持續15分鐘。然後 加入抗磷酸酪胺酸之抗體（UBI)，接著再加入二次酵素 連結的抗體，鹼性磷酸酶標示的山羊抗老鼠IgG (Bio-Rad )。結合的酵素之活性是藉由放大的偵測系統（Gibco-BRL)而測量。在GraphPad Prism中使用S形的的劑量-反 ____ 68_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1299731 _____B7___ 五、發明說明U9 ) 應（變量斜率）方程式而分析抑制數據。產生50%激酶活 性的抑制之濃度，稱爲“IC5Q”。 在全細胞製劑中神經生長因子-刺激的int磷酸化作用 之抑制： 藉由本發明化合物之id的神經生長因子-刺激之磷酸 化作用的抑制，可利用先前說明的方法（參見，美國專利 第5,516,771號）之修飾方法而進行，如下所述。以 轉染之ΝΙΗ3Τ3細胞生長在1〇〇公釐的培養皿。藉由置換 不含血淸之0.05%牛血淸白蛋白-DMEM，其包含化合物（ 100 ηΜ及1//Μ)或二甲基亞硼（加到對照組），在37°C 培養1小時，而使長到半滿的細胞變成是血淸飢餓的（ serum-starved )。然後將神經生長因子（Harlan/科學用生 物產品）以10奈克（ng) /毫升的濃度加到細胞5分鐘。 將細胞在包含淸潔劑及蛋白酶抑制劑的緩衝液中溶解。利 用BCA法以及以抗-id抗體免疫沈澱，而將澄淸的細胞溶 胞產物常態化成蛋白質。多株的抗-id抗體是以對抗對應 於竣基端的14個胺基酸之胜肽而製備（Martin_Zanca 等人，Mol· Cell Biol· 9 ·· 24-33，名9)。 在蛋白質A瓊脂糖小珠上（Sigma化學公司，聖路易 市，密蘇里）收集免疫複合物，藉由硫酸十二酯鈉聚丙烯 醯胺膠體電泳（SDS-PAGE)而分離，並轉移至聚偏二氟 乙烯（PVDF)膜。將此膜以抗磷酸酪胺酸抗體（UBI)而 免疫墨漬，然後與璋菜過氧化酶連結的山羊抗老鼠IgG ( Bio-Rad實驗室，海克力斯，加州）一起培養。磷酸化的 ____69_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1299731 ___B7__ 五、發明說明（〇 ) 蛋白質是利用ECL (Amersham生命科學公司，阿零頓’ 伊利諾州）而顯像。測量蛋白質條帶的面積，並與神 經生長因子-刺激的對照組比較。根據蛋白質條帶的減 少百分比，所使用的抑制計分系統可如下所述：沒有減 少；1= 1-25% ; 2= 26-49% ; 3二 50-75% ; 4= 76-100%。 血小板衍生的生長因子受體激酶活性之抑制： 異構形的稠合之毗咯並咔唑類以及異吲哚滿酮，可利 用上述/ΑΑ激酶之酵素連結免疫吸附分析，而檢測其對於 桿狀病毒表現的PDGF/5受體激酶功能部位的激酶活性之 抑制效果。分析是在覆蓋基質（PLC-r/GST)之96孔微 量盤中進行。每個1〇〇微升的反應混合物包含50 mM的 HEPES (pH 7·4)、20//M腺苷三磷酸、10 mM氯化錳、 0.1%牛血淸白蛋白、2%二甲基亞碾以及各種濃度的抑制 劑。反應是藉由加入磷酸化的重組人類酵素（10奈克/毫升 血小板衍生的生長因子受體Θ )而開始，並在37°C持續15 分鐘。使用前製備磷酸化的酵素，係將激酶在包含20//Μ 腺苷三磷酸及10 mM氯化錳的緩衝液中，以4°C培養1小 時。磷酸化產物的偵測是藉由加入璋菜過氧化酶（HRP) 連結的抗磷酸酪胺酸抗體（UBI)而完成。之後加入包含 3,3’，5,5’-四甲基聯苯胺以及過氧化氫的《^?基質，並將培 養盤在室溫中培養10分鐘。反應以酸終止，並利用微量盤 生物動力判讀儀（Bio-Tek儀器，EL 312e)，而在450 nm 讀取所得的吸光値。。在GraphPad Prism中使用S形的的 劑量·反應（變量斜率）方程式而分析抑制數據。 _70___ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再ιΡΙ本頁) 女 i線. 1299731 A7 _B7______五、發明說明（衿） 雖然本發明已相當詳細地說明，但熟悉於此技藝者將 可理解，可對本發明之具體實施例以及較佳具體實施例進 行各種的更動及潤飾，以及這樣的更動及潤飾可在不脫離 本發明的精神之外而進行。因此，附屬的申請專利範圍涵 蓋所有的等價變異物，都是在本發明的範疇之內。 (請先閱讀背面之注意事項再 -裝—— 本頁 丨線· 71 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

1. 73 9 9 2 A8S8D8 申凊專利範園 公告恭 種式I化合物·· 1補充

   其中： R1是Η或1-8個碳（包括）之烷基，經-0Η或_〇尺4取 代’其中r4是個碳（包括）之烷基、苯基或萘基，或 經移除羧基的羥基後之胺基酸殘基； R2是Η或經-OH取代之1-8個碳（包括）的烷基；以 及 R3 是-CH2OH ; -CH2OR7 ; -(CH2)nSR5 ; -(CH2)nS(0)yR5 …CH2SR5 ;或1-8個碳（包括）之烷基，其經-OH或-OR5 取代；以及其中： R5是1_4個碳（包括）之院基或苯基或萘基； R7是Η或I-4個碳（包括）之烷基； η是1-4 (包括）之整數；以及 y是1或2 ;且 前提爲當R1是-CH2CH2CH2OH及R2是Η時，R3不是 -CH2OCH2CH3、-CH2SCH2CH3 或-CH2OH。 2.如申請專利範圍第1項之化合物，其中該化合物具 ......................................訂...............— 線.·· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1本紙張尺用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) 1299731 A8 B8 C8 D8 、申請專利範圍 有式II :

   其中： R1是Η或1-8個碳（包括）之烷基，其經-0H或-OR4 取代，其中以是i-4個碳（包括）之烷基、苯基或萘基， 或經移除羧基的羥基後之胺基酸殘基； R2是Η或經-OH取代之1-8個碳（包括）的烷基；以 及 R3 是-CH2OH ; -CH2OR7 ; -(CH2)nSR5 ; -(CH2)nS(0)yR5 ;-CH2SR5 ;或1-8個碳（包括）之烷基，其經-OH或-OR5 取代；以及其中： R5是1-4個碳（包括）之院基或苯基或萘基； R7是Η或1-4個碳（包括）之烷基； η是1-4 (包括）之整數；以及 y是1或2 ;且 前提爲當R1是-CH2CH2CH2OH及R2是Η時，R3不是 -CH2OCH2CH3、-ch2sch2ch3 或-CH2OH。 3.如申請專利範圍第1項或第2項之化合物，其中： ^紙張尺度適肖目家鮮(CNS)A4規格⑽x 297公愛) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂： 線一I A8 B8 C8 D8 1299731 六、申請專利範園 R1是I-4個碳（包括）之烷基，經-OH或-OR4取代， 其中R4是經移除羧基的羥基後之胺基酸殘基； (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) R2是Η ;以及 R3 是_CH2OR7 ; _(CH2)nSR5 ; -(CH2)nS(0)yR5 ;或是經_ OH或-OR5取代的1-4個碳（包括）之烷基；以及其中： R5是1-4個碳（包括）之烷基或苯基或萘基；以及 R7是Η或1-4個碳（包括）之烷基。 4·如申請專利範圍第1項或第2項之化合物，其中： R1 是-CH2CH2CH2OH 或-CH2CH2CH2OCOCH2N(CH3)2 R2是Η;以及 R3是-CH2OR7，其中R7是1-4個碳（包括）之烷基。 5.如申請專利範圍第1項或第2項之化合物，其表示 於表I中： 表I 化合物 R1 R2 R3 2 CH2CH2CH2OH Η CH2OCH3 4 CH2CH2CH2OH Η CH2OCH(CH3)CH2CH3 5 CH2CH2CH2OH Η (s)-ch2och(ch3)ch2ch3 6 CH2CH2CH2OH Η (r)-ch2och(ch3)ch2ch3 7 CH2CHOHCH3 Η CH20CH2CH3 8 CH2CH2CH2OH Η CH20CH2CH2CH3 9 CH2CH2CH2OH Η CH20CH2CH2CH2CH3 10 CH2CH2CH2OH Η CH(CH3)OCH2CH3 11 CH2CH2CH2OH Η (非對稱)ch(ch3)och2ch3 12 CH2CH2CH2OH Η (非對稱)ch(ch3)och2ch3 13 CH2CH2CH2OH Η CH(CH3)OCH3 14 Η ch2chohch3 CH20CH2CH3 3 X 297公釐) 1299731 六、申請專利範圍 A8B8C8D8 15 CH2CH2CH2OH H CH(CH3)OCH2CH2CH2CH3 16 CH2CH2CH2OH H ch(ch3)och(ch3)2 17 CH2CH2CH2OH H ch2oc(ch3)3 18 CH2CH2CH2OCOCH2NH2 H CH2OCH(CH3)2 19 CH2CH2CH2OCOCH(NH2)- CH2CH2CH2CH2NH2 H CH2OCH(CH3)2 20 CH2CH2CH20COCH2CH2NH2 H CH2OCH(CH3)2 21 CH2CH2CH20COCH2CH2- CH2N(CH3)2 H CH2OCH(CH3)2 22 ch2ch2ch2ococh2n(ch3)2 H CH2OCH(CH3)2 23 CH2CH2CH20COCH2CH2- CH2CH2CH2CH2NH2 H ch2och(ch3)2 24 ch2ch2oh H CH2SCH2CH3 26 CH2CH2CH20H H ch2s(o)ch(ch3)2 27 CH2CH2CH2OH H ch2sch(ch3)2 28 CH2CH20H H ch2oh 30 H H CH2OH 31 H H CH20CH2CH3 32 H H CH2OCH(CH3)2 33 CH2CH2CH2OH H CH(OH)CH3 34 CH2CH2CH2OH H CH(OH)CH2CH3 35 H H CH(OH)CH3 36 H H (+/-) ch(och3)ch3 40 CH2CH2CH2OH CH2OH ch2och(ch3)2 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 6. —種具有下式的化合物

   4 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) A8 B8 C8 D8 1299731 六、申請專利範圍 7. —種具有下式之化合物

   8. —種具有下式之化合物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

   9. 一種具有下式之化合物 S. N

   本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐) A8B8C8D8 1299731 六、申請專利範圍 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 10· —種用於治療或預防前列腺疾病之藥學組成物， 其包括一治療有效量的申請專利範圍第1及6至9項中任 一項之化合物。 11·如申請專利範圍第10項之藥學組成物，其中該前 列腺疾病是前列腺癌或良性的前列腺增殖。 12· —種用於治療或預防血管生成的症狀之藥學組成 物，其包括一治療有效量的申請專利範圍第1及6至9項 中任一項之化合物。 13·如申請專利範圍第12項之藥學組成物，其中該血 管生成的症狀是硬腫瘤之癌症、眼睛疾病、斑點變性、子 宮內膜組織異位、糖尿病性視網膜病、牛皮癬或血管母細 胞瘤。 14· 一種用於治療或預防病理症狀之藥學組成物，其 包括一治療有效量的申請專利範圍第1及6至9項中任一 項之化合物。 15·如申請專利範圍第14項之藥學組成物，其中該病 理症狀是瘤形成、類風濕性關節炎、慢性關節炎、肺部纖 維病變、骨髓纖維病變、異常的創傷癒合、動脈粥瘤硬化 或再狹窄症。 16. —種用於治療或預防神經退化疾病及症狀、阿滋 海默氏症、肌萎縮性脊髓側索硬化症、帕金森氏症、中風 、局部缺血、亨丁頓氏症、AIDS癡呆、癲癇、多發性硬化 症、周圍神經疾病、化學治療誘發之周圍神經疾病、AID 相關之周圍神經疾病或腦部或脊椎神經受損之藥學組成物 6 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公爱0 1299731 藍 C8 D8 六、申請專利範圍 ，其包括一治療有效量的申請專利範圍第1及6至9項中 任一項之化合物。 17. —種用於治療或預防多發性骨髓癌或白血病之藥 學組成物，其包括一治療有效量的申請專利範圍第1及6 至9項中任一項之化合物。 18. 如申請專利範圍第17項之藥學組成物，其中該白 血病是急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴 球性白血病或慢性淋巴球性白血病。 .....................................#...........……線· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210 X 297公釐〉