TWI252233B - Immunogenic peptide composition for the prevention and treatment of Alzheimer's disease - Google Patents

Description

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本發明係關一種組合物，甘 其包括可用於預防和治療阿兹 海默氏症的胜肽免疫原。更 ..^ 之特疋而呂，涊胜肽免疫原包 含一個主要的功能/調節部处 U 匕疋说和具β多重第二類 MHC結合形式的助手τ如日^ 、 ’ L抗原決定基（T h)相連接之澱粉 狀蛋白/5 (A /5 )肽的n竑& π .、 崎片#又。菽胜肽免疫原能誘出一種 針對該Α《胜肽的功能/調節部位的免疫反應而產生抗體， 該抗體對於可溶性的A P 〇| ^ β Κ42胜肽和在阿茲海默氏症病患腦 邵形成的澱粉狀蛋白斑塊具有高度的交叉反應活性“里誘 出的抗體對AU生肽具有交又反應活性，能促進原纖維 散開並且抑制原纖維聚合，導致「可溶性人㈣生毒素」 免疫中和’且其對於殿粉狀蛋白斑塊具有交又反應活性， 會加速這些斑塊從腦部清除。因此本發明之包含肽免疫原 的组合物有用於預防和治療阿茲海默氏症。 發明背景 μ阿兹海默氏症（AD)是一種慢性的神經破壞性疾病，其特 效為病人失去認知能力和嚴重的行為異常，導致病患最終 叱1Γ目岫美國有2.5至4.0百萬名AD病患而全球有17至 25百萬名病患。它在西方文化裡為第四大死因，僅次於心 臟病、癌症和中風。ARICEPT⑧是一種乙醯膽鹼抑制劑， 其已被FD A核准用於減緩阿茲海默氏症病患衰退的速率。 二而^僅在有限的時段和某些病患身上生效。到目前對 此種破壞性的疾病尚沒有確定的醫療或治癒方法。 阿炫海默氏（Alois Alzheimer)鑑認出兩種微觀聚積物， -4- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇χ 297公釐) 1252233 A7 ____ B7 五、發明説明（2 ) 亦即神經纖維纏結（NFT)與老年性殿粉狀蛋白質斑塊為該 疾病之病理學印記。該神經纖維纏結包含兩條彼此扭轉環 繞對方的1 0笔微米寬纖維，稱為成對的螺旋纖維（pHFs), 其主要的成分是磷酸化的tau蛋白。tau蛋白之第262個胺基 酸-絲胺酸的磷酸化作用代表一個導致tau蛋白失去生理功 能的重要步驟。PHFS是在細胞内的並且在許多不正常的樹 突與軸突過程或形成老年性殿粉狀蛋白質斑塊周圍的神經 突裡被發現。泫老年性澱粉狀蛋白質斑塊包含了不整齊的 神經纖維，面積高達150微米切面，帶有細胞外的澱粉爿^蛋 白沉積核心。大腦的老年性澱粉狀蛋白質斑塊在超微結構 上迴異於PHFs，並且包含4-8毫微米寬未成對纏繞的纖 維。該斑塊核心包含了肽的集結物，起初稱為A4，具有相 對分子量（M)大約為 4000(Masters 等人，Proc Natl Acad Sci (PNAS) USA，1985 年，82:第 4245-4249 頁）。 一段A 4的部份序列，現在重予命名為澱粉狀蛋白質冷肽 (或A /3 !_42) ’顯示其相似於從阿茲海默氏症或唐氏症候群 病患大腦血管分離出的澱粉狀蛋白質冷肽（Glenner和 Wong , <<生化與生物物理研究通報〉〉，1984年；第12〇 期：885-890頁；第 122期：1131-1135 頁）。 因為許多理由A /3 ! ·42已被預設與a D相關。首先，在週圍 殿粉樣變性病，例如：一級輕鏈疾病或二級A A澱粉樣變性 病，與組織或器官功能不良強烈相關之大的澱粉狀蛋白質 負擔。其次，澱粉樣蛋白質斑塊的密度與A D的失智程度有 正相關。第三，A /3 1 ·42存積是A D和相關疾病如唐氏症候群 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) — -- 1252233 A7 B7

之最早期的神經病理學標記，其可進行NFT形成達2_3個十 年。第四，/3-澱粉樣變性病較為特定於AD和相關疾病。 第五’ A /3 “η對於神經元有毒性（Yankner等人，<< 科學 >〉，1990年；250 : 279_282 )。最後，在結構的澱粉狀: 白質前趨體蛋白（APP)基因上的錯誤意義之突變會引起家 族性AD的早發（Goate等人，<< 自然 >> ,第349期：7〇心 706頁（1991年）；Mullan等人，<< 自然-遺傳學>>，1992 年；1 : 345-347頁）。值得注意的是，一個這樣的突變會引 起戲劇化的A /3 U42過度生產（Citron等人，<〈自然〉〉， 1992 年，360 : 672-674 頁）。 在1987年，Kang等人，<< 自然〉〉，1987年；第325期： 733-737頁）和三個其他的研究群（請參考由Andert〇ii，<<自 ;’’、〉〉 1987 年，325 · 658-659 頁及 Barnes，<< 科學 >〉， 1 987年，235 : 846-847頁所報導的1987年之情況）各自獨立 的將基因從A々卜42的來源轉殖出來。這個基因，目前已知 為澱粉狀蛋白質前趨體蛋白（APP),係編碼具有分子量為 大約79,000之含695個胺基酸殘基的蛋白質，其實際上在所 有組織裡表現。APP至少有5種連接變異體，其中有4種含 β /3 -殿粉狀蛋白肤序列。 四種基因已被牽連在家族性的AD形式中。其中有三種基 因，/3 APP，presenilin I 和 preseniHn 2，當發生突變時會 引起AD的常染色體顯性的早期形式。第四種基因，不完全 脂蛋白E具有天然的多態形式，Ap〇E4，其代表發生此種疾 病的一項主要遺傳危機因子。在數種截然不同的基因中發 ___ -6- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1252233

生變化會引致A /3 1 -ο生產及其清除之間的慢性不平衡，先 造成4 2個殘基的肽然後是4 〇個殘基的肽集結成細胞毒性的 斑塊’這樣的概念被可獲得的證據所支持。該證據強力建 議在這四個基因之每一者中發生的破壞會預先處置Ad的表 現型’其藉由：（1)遞增Α/3ι·42肽的產生和/或存積，或（2) 減少ApoE4從組織中清除（Selk〇e，<<生物化學期刊>>， 1996 年；第 271 期：18295-18298 頁）。 從可獲得的數據顯示集結但非單元體的A石142肽可誘發 細胞功能異常並藉由廣泛假設相關的機制誘發細胞在體外 死亡。這些異常包括氧化性傷害（Th〇mas等人，<< 自然 〉> ’ 1996 年，第 380 期：168-171 頁；Behl 等人，<< 細胞 >>，1994年，第77期：817- 827頁），細胞中的鈣離子體内 平衡改變（Arispe等人，<<PNAS〉>，1993年；第90期： 567-57 1頁），以及細胞骨架重組（BuscigH〇等人，<< 神經 元〉>，1995年；第14期：第879-888頁）。對於澱粉狀蛋白 質誘發的級聯中某些主要步驟的充份知識已出現，雖然該 級聯假說被熱烈地爭辯。 藥理學上對於能抑制澱粉狀蛋白質誘發級聯中的一個或 另一步驟的少分子之鑑認方法目前已良好進行中。尤其令 人有興趣的兩種方法是：嘗試藉㈣低^142肽從神經: 和膠質細胞分泌以干擾AAw肽的集結，或抑制這些細胞 外的集結物在神經元和膠質細胞及其過程中產生的毒性。 第三種方法試圖控制顯然由集結的A 0 ! 所？丨發的特殊化 之發炎反應（包括微膠質刺激，活化傳統的互補級聯，組織

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介素釋出和具反應活性的星形細胞胞飲作用），其可能經證 實對於阿茲海默氏病患有益。 除了以上提到對於A D干擾的藥理學方法而外，亦有人已 寄试過免疫學的干擾方式。Soloman等人（<<PNAS〉>， 1996 年’第 93 期：452 - 455 頁；<<PNAS>>，1997 年，第 94期，4109-41 12頁）顯示有三種特定的單株抗體，導向人 頒A /3 ! _42肽的n _端區之一個部位，以變化的程度和預先形 成的纖維結合而導致其散開並抑制其神經毒性作用。該抗 體亦經發現能防止纖維狀的A 0 U42形成。s〇l〇mon等人 (W〇01/18169)亦嘗試製備一種能展現人冷卜42肽之抗原決 定基的噬菌體，並將展現抗原決定基或含該抗原決定基之 肽的噬菌體以腹膜内方式施用於老鼠以誘出抗A沒丨_ 4 2肽的 抗體。在體外試驗家鼠的表型色細胞瘤，顯示以1 : 5稀釋 抗血/¾说防止A /3 ! .η的神經毒性。以1 : 5和1 : 2 〇稀釋的 抗血清亦顯示會以廣泛破壞纖維的形態學來破壞A 0在體外 的纖維結構。然而，用於第一次注射的佐劑為完全的 Freund氏佐劑而用於第二次注射的則是不完全的心⑽以氏 佐劑。該使用之佐劑完全不適用於人體。而且，所產生的 抗體/辰度太低而典法有效’僅管在使用這些嚴苛的佐劑之 狀況下亦然。 緊接著’ Schenk等人（<< 自然>>，1999年；第4〇〇期： 1 7 3 - 1 7 7頁）顯示用A /3 ! _42肽進行免疫接種會抑制搬粉狀蛋 白質斑塊和關聯之營養不良神經突在A D的老鼠模式中形 成。然而’因為A 卜η肽的低致免疫性，所採用的方法必 ___-8- 木紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) I252233

需重覆施用抗原與嚴苛的破損形成佐劑以得到影響斑塊形 成所需之較高的抗-A /3 ! 斑塊抗體量。而且，要小心用 A /5 ! ·42進行免疫注射可能誘發更多毒性殿粉狀蛋白質本身 聚積（Araujo, dm & Cotman，CW，<< 大腦研究>>，1992 年；第 569 期；141-145 頁）。 雖有這些評論，其他在基因轉移的A D老鼠模式中透過相 似的活性免疫注射所做的研究已證明A d的免疫預防和免疫 治療方法。janus等人（<< 自然>>，2000年，第4〇8期： 979-982頁）說明a /5 !·42肽在A D之老鼠模式中的免疫作用降 低了行為傷；與斑塊。Morgan等人（<< 自然>>，2〇〇〇年； 第408期：982-985頁）說明了 A/5l_42肽疫苗用於預防老鼠模 式中的記憶喪失。 免疫療法之有效性的直接支持來自於以週圍施用抗體， (單株或多株的）對抗A 0肽能降低澱粉狀蛋白質的負擔（w〇 99/27944 ; Bard等人，<< 自然-醫學>〉，2〇〇〇年；第6期： 916-919頁）之觀察。雖然具較為中等的血清濃度，然而這 些被動施加的抗體，單株的3D6(抗-A/?i_5)和1〇〇5(抗_ A沒μ2)或多株抗-a /5丨·42能進入中樞神經系統。從而，該 抗體會與斑塊結合並誘發原本存在的澱粉狀蛋白質斑塊被 清除。Bard等人報導過當使用pDApp老鼠（亦即用App迷你 基因進行基因轉移的老鼠，該基因係受血小板衍生之生長 因子啟動子所驅動）的腦部切片或AD病患的腦組織進行體 外檢驗時，對抗A冷-肽的抗體會引發微膠質細胞經由Fc受 體調節的呑噬作用和緊接的肽分解而將斑塊清除掉。這項 -----— _-9- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公爱·） 1252233 A7 _______B7 五、發明説明（7 ) 研究證明被動施加之抗AU太和端區域的抗體 會降低斑塊存積在AD*鼠模式巾的程度；而由針對部位的 疫苗所誘出的單株抗體或多株抗體能以醫療上相關的濃度 進入CNS 〇 儘官有AD老鼠模式中之免疫學干涉的振奮發現，但是適 用於人類之抗AD疫苗仍有長路要走（Chapman，〈<自然 〉>，2000年；第408期：915-916頁）。主要的障礙在於設 計和調配免疫原組合物使有用於人類之所需的廣泛研究之 後才能達到可實用&AD疫苗。某些依賴實際數據做為引導 的論題為：（1 )什麼是A ^中用於抗體辨認之特定目標部 位？^2)&免疫原應以何種形式呈現？（3)在免疫原達到能誘 出醫療痕度的抗體之前，有哪些其他的部位必需包括在 内？（4)何為採用臨床上可接受的佐劑用於人類之有效疫苗 遞送系統？ 在文獻揭示的内容與尚待完成的研究之間存在著一道鴻 溝。什麼是主要的特定目標部位（亦即聚合的Α/3ι·42斑塊或 單元體的可溶Α Θ 1 ·42肽）和如何對該特定部位加工以進行免 疫干擾。僅管在過去十年裡有5,000件有關Α沒“η之發表文 章，殿粉狀蛋白質級聯假說仍被熱烈地辯論，而A $ 142應 使用何種形式以進行干擾的論題仍足以引起議論。Terry& 其同僚提出該問題的核心在於纖維狀澱粉樣蛋白質的負載 與神經學上官能不良之測定之間只有微弱的關連性（<< 阿 兹海默氏症的神經病理學及其變化的結構基礎 >>，由 Terry等人編校，<< 阿茲海默氏症〉〉，第頁， I___________-10- 表紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） A7 B7

1252233 五、發明説明（8

Lippincott Williams and Wilkins 公司出版，1999 年）。 在A D病患體内，殿粉狀蛋白質的存積經常是在遠離神缓 元傷害的部位形成的。其與病理學上的癡呆之最佳關連= 疋喪失神經鍵末梢。然而，失去神經鍵末梢與澱粉狀蛋白 質負載的相關性很微弱。若該疾病之表徵與澱粉狀蛋白質 負載的關係微弱，那麼A /3的角色為何？ Klein等人的文 章，標題為「小A/3l_42寡聚物之目標導向：阿茲海默氏症 謎語的解答」？（<<神經科學的研究趨勢〉〉，2〇〇1年·，第 24期：219-224頁），提出纖維並非A/5的唯一毒性形式罘 並且或許不是與八1)最為相關的神經毒素。小的寡聚物和強 親和性纖維，亦稱為八沒^2衍生之可擴散配體（ADDL^ , 亦可具有強而有力之有毒神經學活性。 用於成功之免疫干涉的AD疫苗需要一種經設計能誘出針 對部位之高親和力抗體的免疫原，該抗體會與脂部組織的 老年性斑塊結合，以加速膠質細胞清除斑塊，並且免疫中 和掉可溶性的A /3 -衍生之毒素。 培養抗微弱致免疫性之部位特定肽的高親和力之針對部 位柷體這個問題已被知道數十年了。免疫學家和疫苗專家 經常求助於傳統的半抗原[肽]-載體蛋白貧共軛物的方法， 如W0 99/27944所展示的。為了研發對抗人!）之針對部位的 疫备Frenkel等人意圖透過如以上提到過的「EFRH」-嗟 菌體施用方式進行對抗A0卜42斑塊的免疫作用（<<PNas>> ’ 2000 年；第 97期：1 1455-1 1459 頁，WO01/18169)。 利用A占“η肤集結物或a $ “η肽片段-載劑蛋白質共軛物 裴 茗丁

1252233 A7 B7 五、發明説明（9 ) (W〇99/27944)和利用絲狀之噬菌體展現之「EFRH肽」做 為用劑以誘發對抗病患體内一種澱粉狀蛋白質存積之免疫 反應的方法既累贅又無效。例如，在第四次免疫接種1 〇 1 1 個噬菌體展現之EFRH抗原決定基之後，有大於9 5 %的抗體 在天竺鼠的免疫血清中會對抗該噬菌體。只要少量（< 5 〇/0) 的抗體會對抗可溶性的A /3卜42肽（Frenkel等人，<< 疫苗 >>，2001 年，第！ 9期·· 261 5-2619 頁，W0 01/18169 號）。 較不累贅的方法說明於EP 526,5 1 1號和WO 99/27944號之 中，其揭示對發作前之AD病患施用八0卜42肽，並且對處於 產生「有利」的免疫反應在AD病患體内之條件下的病患施 用A /3 “η或其他免疫原。然而，WO 99/27944之研發報告 顯示在該論文中揭示的疫苗設計之中有很主要的缺失。 尤其，該問題在於缺少醫療上可接受並且有效的疫苗遞 送系統。WO 99/27944號揭示A/5卜η或是A冷卜42的活性片 段結合至一種載劑分子如作為活性疫苗成份的霍亂狐菌毒 素。請參考WO 99/27944號之第四頁。雖然第五頁教導我 們含有免疫原的醫藥組合物應該不含完全的Freund氏佐劑 [CFA ]，但是唯獨顯示A 0 N42疫苗對於治療基因轉移老氣 之A D效力的實例卻採用大劑量之存在於c F A中的集钟 A /3 4 2肽。雖然重複詳述須與所揭示之致免疫用劑併用以增 進免疫反應的較佳佐劑，但是實驗數據顯示只有採用 C F A /1C F A的調配物才能提供足夠高的抗體效價。請參考 W〇9 9/27944號之第2 5頁。在實施例1之中，A 3 1 42對ad 的預防效果是在PDAPP老鼠身上證明的。然而，該施用之 __-12-____ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) ' --- 1252233 A7 _____B7 _______ 五、發明説明（1〇 ) 調配物含有每劑1 〇 〇微克/每隻老鼠的集結A /? 42 ’乳化在冗 全的Freund氏佐劑[CFA](W〇 99/27944號之第34頁）之 中，接著使用多重加強注射同樣之A /3 1 _42肽乳化在不完全 Freund氏佐劑中的用劑。在實施例I X中，老鼠體内對於不 同佐劑的免疫反應經過試驗。當佐劑：MPL，礬，QS2 1和 CFA/ICFA與聲稱有效的免疫原AN1 792 (亦即集結的人類 A /3 4 2) —起始用時，對抗a /5 i .4之抗體的濃度降低到在統計 學上顯著的程度，這是與接受CFA/ICFA疫苗之老鼠相比的 結果。請參考表9，以及W0 99/27944號之第5 9-64頁。 在使用A /3 1 _ 4 2月大的片段的情形之中（人類A卢1 - 4 2月太的胺基 酸1 - 5，1 - 1 2，1 3 - 2 8和3 3 - 4 2 )，係將每一片段以羊的抗 老鼠IgG做為蛋白質載劑與之連接。在一項較近的專利揭示 中’抗體對A /3肽片段的效力只能由以單株抗體之被動免疫 來顯示（Bard等人，<< 自然-醫學〉〉，2000年，第6期： 9 1 6-9 1 9頁）。這些與羊的抗老鼠igG連接之片段的效力則未 顯示。因此，唯一顯示為有效的免疫原是集結的A /5卜42肽 存在CFAACFA之中者。 直到目前，所有顯示為有效的疫苗調配物均採用 CFA/ICFA做為佐劑。以a/3卜42做為目標之肽免疫原，因 此’早就用各種A /5 i _42片段與羊的抗老鼠免疫球蛋白連 接，經由間位-順丁烯二醯亞胺基芊醯基N -羥基琥珀醯亞胺 酯將合成的A冷13-28連接至抗-c D 3抗體或單獨用集結的 A冷卜η肽來製備。這些免疫原，亦即肽單獨或八/3卜42 月大-載劑蛋白質連接體，經以完全的Freund氏佐劑乳化用於 "13" 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1252233 A7 ___B7 五、發明説明（^ ^ " 第一次接種，緊接著用不完全Freund氏佐劑中的連接體進 行加強注射（Johnson-Wood等人，<<PNAS〉>，1997 年； 第 94 期：1550-1555 頁；Seubert.等人，<< 自然 >>，1992 年；第 359 期·· 325-327 頁；Schenk 等人，<< 自然 >>， 1999年，第 400 期·· 173-177 頁；Janus 等人，<< 自然 >> ; 2000年，第408期：979-982頁；和Morgan等人，<< 自然 >>，2000 年；第 408 期：982-985 頁）。揭示於 WO 99/27944 號或其他文獻的調配物使用CFA和ICF A做為佐劑者會造成 缺抽’並且用於人體過於嚴苛。因此，沒有一項說明於先 前技藝之AD的疫苗組合物適用於人體。 簡T之，雖然鑑於Kline之先前的專利揭示（EP第526,511 號）申明中建議人/3卜42肽對治療AD其潛力，但是卻沒有任 何鮮決問題的疫苗調配物真正在W〇99/27944號中提出以 解決這項主要的問題。 另一項使用肽-載劑蛋白質連接體和A /3卜42集結物的缺點 在於這些分子高度複雜而難以鑑認特徵，並且很難發展出 用於製程的有效品管方法。還有一項缺點是A 0 N42肽或其 片段是在施用到人體時自身的分子。因而，它們在人體内 較不具免疫原性質，或者是非致免疫的。因此，吾人必須 研發施用於人類的臨床可接受之疫苗組合物。 已知混雜的Th抗原決定基可被採用於引起有效之τ細胞 協助，且或可與差的致免疫B細胞抗原決定基合併而提供 有效的免疫原。經良好設計過的混雜Th/B細胞抗原決定基 嵌合型肽已被顯示其有用於誘出T h反應，且所產生的抗體 —- 14 - 本纸張尺度適用中國g家鮮(CNS) A4規格(21GX297公& ' -- 1252233 A7 _____B7 五、發明説明（12 ) 會在大多表現分歧之MHC單一型式的遺傳上歧異之群類之 中產生反應。混雜之得自數種病原體的T h ,如麻疹病毒F 蛋白質和B型肝炎病毒表面抗原為已知者。表1和表2列出 許多已知的混雜T h，已顯示有效於使短鍵之免疫原性質差 的肽，即含十個殘基之肽激素LHRH發揮潛力。（美國專利 第 5,759,55 1 號和 6,025,468 號）。 有效力之T h抗原決定基之大小在大約1 5 - 4 0個胺基酸殘 基的範圍，其通常共有普遍的結構特徵，並且可含特定的 地標序列。例如T h的一項普遍特徵是其含有兩性的螺旋結 構’即其厭水性的胺基酸殘基主佔螺旋體的一面，而具電 荷和極性的殘基主佔環繞的面之α -螺旋結構（Cease等人， <<PNSA>> , 1987 年，第 84期·· 4249-4253 頁）。Th抗原決 定基經常含有其他的一級胺基酸形式如G1 y或帶電荷之殘 基，而接著兩個到三個厭水性殘基，再接著是一個帶電荷 或極性的殘基。這種形式定義了稱為Rothbard氏序列的胺 基酸排列。T h抗原決定基經常遵循1，4，5，8的規則，一 個帶正電的殘基接在位於帶電荷殘基之後的第4 , 5和第8 個位置的厭水性殘基後面。因為所有這些結構是由常見的 厭水的、帶電荷的和極性的胺基酸所組成，每一結構可在 單一的T h抗原決定基中同時存在（partid〇s等人，< < 普通病 毒學期刊〉〉，1991年；第72期：1293頁）。絕大多數雜亂 的T細胞抗原決定基符合至少一種上述的週期性。這些特徵 可併入理想化之人工τ h部位的設計，包括重組的T h抗原決 定基。關於重組之Th部位設計，可改變位置的清單和較佳 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1252233 A7 ______ B7 五、發明説明（13 ) 的胺基酸對MHC -結合形式而言是可獲得的（Meister等人， <<疫苗〉〉，1995年；第13期：581-591頁）。還有，用於 生產重組T h的方法已被揭示用於重組資料庫胜肽，其乃稱 為具結構之合成抗原庫（Wang等人，W0 95/1 1998)。因 此’該1，4，5，8規則可與已知的MHC -結合形式一起施 用以指定重組T h部位中不變與簡併的位置，以及選擇用於 簡併位置的殘基以使人工Th之免疫反應能力最大化。請參 考表 2，W0 99/66957 號和 W0 95/1 1998 號。

Wang等人（美國專利案第5,759,55 1號）提出免疫刺激元素 使得自我蛋白質-澱粉不溶素（Amylin)具有免疫原性質。 Wang等人提出施用其免疫原性質的合成澱粉不溶素胜肽做 為用於治療非胰島素依賴型之糖尿病頰炎（NIDDM)，此乃 一種由於過度產生澱粉不溶素所造成的產生澱粉狀蛋白質 之疾病（美國專利案第5,759,55 1號，第1 9襴，第9 - 3 9行）。 澱粉不溶素是一種含有3 7個胺基酸殘基的胜肽激素，由蘭 氏小島中的/3細胞所生產。澱粉不溶素的過度生產會造成 不溶性澱粉狀蛋白質存積，導致胰臟内產生澱粉狀蛋白質 的疾病。類似殿粉不溶素的過度生產，A /3卜42之過度生產 會導致不溶性澱粉狀蛋白質在AD病患的腦部存積。然而， 在殿粉不溶素和A冷142胜肽之間有著受限之序列同源性。 只有短短一排澱粉不溶素Amyiin32_35的胺基酸殘基VGSN， 對等於A /3 a」7。吾人並不期望生產用於對抗澱粉不溶素胜 肽的抗體對可溶的A /3卜42胜肽有交又反應性，亦不指望其 能加速腦内澱粉狀蛋白質的清除，此乃鑑於s〇1〇man等人和 …- -16-本纸張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇χ 297公爱) '" 1252233 A7 ____ B7 i、發明説明（~~) " " '

Schenk等人的研究顯示該序列EFRH很重要。

本發明的目標是要研發一種能產生高量之對抗A • ^ 1-42 N端功能部位的高親和力抗體，其對於ad病患腦部的老年 性斑塊具有高度的交又反應性。藉著和A沒“η肽和老年性 斑塊結合，吾人期望該抗體能加速這些斑塊從腦部被清 除，促進原纖維分解，抑制原纖維之集結，並且免疫中和 「可溶性的A /3 -衍生毒素」（亦稱為a々衍生之可擴散配體 或 ADDLs) 〇 本發明還有一項目標就是研發一種適合於人類或獸醫之 預防和治療阿茲海默氏症用途的疫苗遞送載劑。 附圖之簡單說明 圖1a，1b，1 c，1 d, 1 e和1 f係顯示免疫過氧化酶染色 一系列得自2個A D腦切片的照像，其乃利用抗生物素蛋白-生物素連接的抗體複合物（ABC)法，以免疫和免疫前血清 1 : 1〇0稀釋而在10x放大倍率下得到的。圖la和Id顯示抗 體顯著地結合至老年性斑塊與A石斑塊（二者均標記為 「P」）於硫黃素S陽性的血管中（標示為「B v」）者。該抗 體是在天竺鼠體内產生，利用在13八51水油乳化物中製備的 A /5 ι·28- ε K-MVF Thl-16(序列辨識號碼：74)。圖 j b 和卜 顯示經培養對抗相同胜肽免疫原於cfa/icfa之抗體的交又 反應活性。圖1 c和丨f顯示用免疫前血清之腦切片。 圖2a，2b，2c，2d和2e係顯示免疫過氧化酶染色一系列 得自AD腦部切片的照像，其乃使用免疫和免疫前血清以 1 1 〇〇稀釋並且在4 0 X放大條件下得到的。圖2 a和2 d顯示 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公董) 1252233 A7 B7 15 五、發明説明（ 在以A/Si_28nMVF Thl-16(序列辨識號碼：74)免疫注 射的天竺鼠體内之抗體強烈地使t塊(P)M形成核心的形 式其中A/3 U8- 6 K-MVF TM-16是在ISA51油水乳化物中 製備的。圖2b是用同樣的抗原在CFA/iCFA調配物中對 豬腦切片所得染色形式的照片。抗血清主要與血管（BV)上 的斑塊反應。圖2 c是免疫前血清處理之天竺鼠腦部切片的 月?、像，其顯不沒有染色。圖2 e顯示用A占卜28胜肽單獨在 CF A / ICF A之中免疫注射所產生之高度免疫血清處理的腦切 片，其顯示令人驚奇之微弱染色形式，僅管用ELISa時其 與A冷I · 2 8有強烈的反應活性。 本發明之簡短說明 本發明係關於一種免疫原的組合物，其包含能誘發對抗 A冷胜肽主要功能/調節部位之抗體的合成胜肽，且與可溶 性Α冷“η胜肽和阿茲海默氏症（a D )病患腦内的斑塊有高度 的交叉反應性。當該免疫原組合物施用於A D病患或易罹患 A D者時’被期望能加速清除澱粉狀蛋白質斑塊和免疫中和 腦中的可溶性A /5衍生毒素以預防和治療a D。尤其，本發 明的肽免疫原包括一個選自含序列辨識號碼：1 - 6 4及其免 疫學功能類似物與一個短的N端A /3 ! _42肽片段連接的T h抗 原決定基’該N端A /3 i _42肽片段由1 0 · 2 8個胺基酸殘基所組 成，包含A /3 H2肽的EFRH，序列辨識號碼：6 5，或一個 A /3 ! _42肽片段的免疫學功能類似物。較好是該A冷！ _42胜肽 選自序列辨識號碼：6 6 - 6 9或一個其免疫學功能之類似 物。 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1252233 A7 B7

本發明尚提供一種免疫原組合物，其包含一種免疫學上 有效量的肽組合物在一種含有佐劑或乳化劑之醫藥上可接 受的疫苗調配物中，該佐劑或乳化劑選自包含脂合素 (Hposyn)，植物急素、麗埽、L121、乳化原單嶙 (MPL)水山梨酉父酿 8 0 ’ QS21，Montanide IS A51， IS A3 5，ISA 206和IS A 720以及其他有效的佐劑或乳化劑。 本發明尚提供一種誘使澱粉狀蛋白質斑塊加速清除並使 腦中之可溶性A /3衍生毒素清除以預防和治療哺乳動物身 上之阿.兹海默氏症的方法，其藉由對該哺乳動物一次施用 一種或更多免疫原胜肽，並且在足以誘發針對A占“η胜肽 之功能/調節部位之抗體的條件下進行。本發明之疫苗的典 型貫例為包含5 - 1 000微克肽免疫原在疫苗中的肽組合物， 該疫苗經調配為一種水油乳化物在醫療上可接受的佐劑和/ 或載劑之中。施用該疫苗的典型方法是以〇 · 5 _ 2毫升/每劑 肌内注射該疫苗調配物’而採〇，4和8週間隔之接種時間 表。 本發明還有另一方面是關於含有助平T細胞（T h)抗原決 定基之由大約3 0個至大約6 0個胺基酸組合，連接至N端 A /3 ! -η肽片段的免疫原合成肽，該片段係選自包含1 〇至2 8 個胺基酸的組群，而每一片段則包含A /3 ! _42胜肽的第1個胺 基酸殘基。請參考序列辨識號碼：6 5，其中D，天冬胺酸 係標註為第1個胺基酸殘基。較好是N端A /3卜42肽係選自序 列辨識號碼：6 6 - 6 9之組群或A /5 ! _42胜肽之N端片段的肽類 似物。視需要可包括使免疫原區位分開的胺基酸間隔序 _____-19- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（17 ) 列。以間隔序列分開的免疫原區位元素可共價方式以任何 順序結合，只要該肽半抗原本質上經保留或對於A $胜肽 的N端片段，可溶性a /3卜η胜肽及該斑塊的免疫反應活性 能產生。 一項影響N -端A /3 t —ο片段免疫原的合成肽之免疫原性質 的重要因素是其藉由T助手細胞抗原決定基（Th)出現在免 疫系統。此種Th最可靠之供應至肽免疫原的方式是藉由放 在分開之T h肽區位元素上的外來T h抗原決定基，而該元素 對目標A々肽而言是外源的。此種肽免疫原可藉由重組 DN A表現法以雜交體多肽的形式生產。其亦可更為簡單且 較不昂貴地以合成肽免疫原的方式供應，該合成之肽免疫 原包含得自A /3肽的目標半抗原B細胞部位和適用於宿主之 T助手抗原決定基（T h)。此種胜肽除了與抗體結合部位反 應之外，還會與助手T細胞受體和第二類MHC分子反應， (Babbitt 等人，<< 自然〉>，1985 年，317:359),因此能 刺激一種針對目標抗體結合部位之緊密的部位專一性抗體 反應。先前，此種T h供應給可運作之A /3 1 ·42胜肽免疫原的 方式是經由對於集結之充整長度的Α召胜肤而言内源的τ h (WO 99/66957 號；WO 1999/27944 號；Janus 等人，2000 年，Morgan等人，2000年）並且可由載劑蛋白質供應。一 種完全合成的肽免疫原要比A /3 ! _42胜肽集結物、載劑連接 體和重組多肽享有以下好處，在於該產物係以化學定義以 便於容易品質控制。該合成的胜肽免疫原是穩定的。不需 要複雜的下游加工，也不需要複雜的製造設備。該免疫反 __-20- 本紙浪尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1252233 A7 .....— _ B7 五、發明説明（18 ) 應是特定㈣位且針對μ目標而非_的。因此不希望發 生的反應如抗原決定基之抑制作用被免除掉。 合成之針對Ν端功能部位之Α錄月太免疫原的免疫原性質 可經由以下方式達到最佳··⑴合併職吖心胜肽片段與 經挑選疋大多數群類對其有反應之外來混雜了^^部位；和 合併A錢肽片段與Th，該Th之曲目、經重組法之化學放 大，從而能容納遺傳上歧異之群類的可變免疫反應性質。 吾人已發現本發明的胜肽組合物在刺激產生對抗A石胜肽 之主要功能/調節部位的抗體上具有效力，且對ad病患腦 =之斑塊和可溶性ALA有交又反應活性。根據得自^竺 鼠和狒狒的數據，以及對八1)病患腦部切片中之澱粉狀蛋白 質斑塊，以所得之特定免疫血清進行免疫過氧化酶染色所 仔的數據，吾人期望本發明之經調配得當的胜肽免疫原對 人體有效。應注意的是得自狒狒的數據尤為顯著，因為這 是一種免疫反應密切相似於人類的生物種類。 本—發明之詳細說明 本發明係導向用於產生高效價多株抗體之新穎胜肽組合 物，該抗體對於A0胜肽之主要功能/調節部位具專一性: 且對可溶性A /5丨_42和A D病患腦部的斑塊，具有交又反鹿、、舌 性。由該肽組合物所產生的抗體具有高度的部位專一性並 且會與A /3胜肽和腦部的澱粉狀蛋白質斑塊結合。因此，本 發明提供一種加速澱粉狀蛋白質斑塊清除和免疫中和腦中 可溶性A /3衍生毒素的方法以預防和治療a D。 選自含有1 0至2 8個胺基酸組群之n端A /3 “η胜肽片段是

1252233 A7 B7 五、發明説明（19 ) "" 短鏈的直線狀胜肽，其中每一片段均包含A $ ! Ο胜肤之 EFRH (序列辨識號碼：6 5 )，而其本身是不具免疫原性質 的。該短鏈的A /3 “η胜肽片段可藉化學方式與一種載劑蛋 白質偶合，例如與鎖孔蜮貝的血藍素（KLH )偶合，α戈碎由 重組DN Α表現法融合至一種載劑多肽，例如Β型肝炎的表 面抗原而具免疫潛勢。此種「A /5胜肽-载劑蛋白質疫苗 的缺點在於所產生之抗體的主要部份是導向載劑蛋白質之 不具功能的抗體。 本發明的免疫原是完全合成的肽免疫原，其包含1〇至28 個胺基酸組成的A /3 ! -ο肽的N端片段，而每一片段含有 A /5 1 _42胜肽的EFRH以共價方式與混雜的τ h抗原決定基連 接’而該抗原決定基係選自包含序列辨識號碼：1至6 4的 組群。本發明的免疫原會誘導特定於部位之與u肤與 其集結物結合的抗體產生，而該抗體會與腦中的澱粉狀蛋 白質斑塊交又反應提供殿粉狀蛋白質斑塊加速清除，並且 免疫中和掉腦中之可溶性A /3 -衍生毒素。因此本發明的免 疫原有用於預防和治療A D。 有用於本發明之助手T細胞抗原決定基（Th)包含多重第 一類MHC結合形式。本說明書提供共價連接至八冷“η胜肽 片段N端的Th之特定實例。得自以本發明之免疫原胜肽接 種之動物的抗血清結果證明有效之針對部位的對A沒胜肽具 反應活性之抗體被產生出來，在遺傳上歧異的宿主群類之 中。 般而㊂’本發明的合成免疫原胜肽大約為2 〇至1 〇 〇個胺 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 X 297公釐) 1252233 五、發明説明

基酸的長度，且包含： (〇選自包含序列辨識號碼：1至64之組群的助手τ細胞 (T h )抗原決定基；

(u )包含大約1 0個至大约2 8個胺基酸殘基的A A七肽的N 端片段，其中每一片段包含了 AL·42的EFRH ;並且 (in)視需要包含一種至少含一個胺基酸的間隔序列將免疫 原區位分開。 較好是A冷“η肽的N端片段選自包含序列辨識號碼：6 6 _ 69和其免疫學上有效的類似物之組群。該Th胜肽以共價方 式連接到A /3卜a胜肽之目標N端片段的N端或c端上，且視 需要含一個間隔序列（例如：Gly-Gly，e n Lys)。 本發明的胜肽免疫原由下式之一代表： (AKAA-u 胜肽的 N 端片段）-(B)〇-(Th)m-X ;或 (A)n-(Th)m-(B)〇，（ A /3 !·42 胜肽的 n端片段）-χ ; 其中 每一個Α獨立為一個胺基酸； 每一個B是選自包含一個胺基酸，gly-gly，（ α，ε N) lys，Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro(序列辨識號碼：73)之組 群的一個連接基團； 每一個T h包含一個由助手τ細胞抗原決定基或一種免 疫促進類似物或其片段組成的胺基酸序列； (A /5 ! ·42胜肽的N端片段）是一種合成的胜肽B細胞目標 部位抗原，並且是大約1 0個至大約2 8個胺基酸殘基的 片段，其中每一片段包含Α冷ι_42的EFRH或其免疫學功 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）

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線 ：W 1252233 A7 B7 五、發明説明（21 能的類似物； X是一個胺基酸的a - COOH或a - CONH2 ; η是0至大約1 Ο ; m是1至大約4 ; 〇是0至大約1 0。 本發明的肽免疫原包含從大約2 〇個至大約丨00個胺基酸殘 基’較好是從大約2 5個至大約6 〇個胺基酸殘基。較好是該 (Α冷bn胜肽的Ν端片段選自包含序列辨識號碼：6 6 - 6 9之 組群，且較好該T h抗原決定基是選自包含序列辨識號碼： 卜3，4，5“，？，^’^]。，3 8-40，47-51 和 52-54 之組群。較好是m=l，n=l且〇=1或2。 當A是一個胺基酸，它是一個非天然或天然的胺基酸。非 天然的胺基酸包括但不限於ε - N離胺酸、沒-丙胺酸，鳥胺 鉍、正-亮胺酸、正_纈胺酸、羥基浦胺、甲狀腺素、τ •胺 基丁酸、高絲胺酸、瓜胺酸及類似者。天然的胺基酸則包 括丙胺酸、精胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、半胱胺酸、麩 胺、越胺酿胺、甘胺酸、組胺酸、異亮胺酸、亮胺酸、 離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、浦胺酸、絲胺酸、蘇胺 酸、色胺酸、酪胺酸和纈胺酸。當m比丨大，且兩個或更多 A為胺基酸，則每一胺基酸可獨立為相同或相異者。（a )。 可包含一個間隔序列，例如G1 y - G1 y，e - N L y s。 B是一個間隔序列並且可是一種上述之天然或非天然的胺 基酸。每個B獨立為相同或互異。b的胺基酸亦提供一種間 隔序列，例如.Gly-Gly，ε -Lys，或離胺酸介在混雜的 ___ -24- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X 297公釐) 裝 訂

1252233 A7 B7 五、發明説明（22 T h抗原決定基和A冷！ —η胜肽的N端片段（例如··序列辨識號 碼：6 6 - 6 9 )或其免疫學功能的類似物。除了用物理方法將 T h柷原決足基與B細胞抗原決定基（亦即a冷i _ 4 2胜月太的n端 片段或其免疫學功能類似物）分開，Gly-Gly或ε - Lys間隔 序列可能會阻斷任何人造的二級結構之由T h抗原決定基與 A冷i ·42胜肽的N端片段或其免疫學上之功能類似物所結合 者，從而減低T h和/或Β細胞反應之間的干擾。β之胺基酸 亦可形成一種作用為可伸縮樞紐的間隔序列，其能促進T h 與A “η胜肽的N端片段分開。編碼可伸縮樞紐之序列的 實例在免疫原之重鏈樞紐區被發現。可伸縮的樞紐序列經 常是富含浦胺酸的。一項尤其有用的可伸縮樞紐係由Pr〇_ Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro(序列辨識號碼：77)所提供。其中xaa 是任何胺基酸，且較好是天冬胺酸。由B的胺基酸所提供 之構形上的分離使得存在之肽免疫原與適當的T細胞和B細 胞之間的交互作用更有效率，以俾促進對抗T h抗原決定基 和誘導抗體之抗原決定基或其免疫學上之功能類似物的免 疫反應。

Th是一段胺基酸（天然或非天然的胺基酸）序列，其包含 一個T h抗原決定基。一種T h抗原決定基可能是連續或不連 續的抗原決定基。在不連續的抗原決定基中，並非T h的每 一個胺基酸都是必需的。T h抗原決定基或類似物或其片段 能促進或刺激對抗A /3卜42肽之N端片段的免疫反應。具免 疫支配力和混雜的Th抗原決定基高度且廣泛地在具有大為 分歧之MHC型式的動物和人類群中有反應（Partidos等人， __-25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210 X 297公釐) 1252233 A7 _ B7 五、發明説明（~~) ~' — 1991年’美國專利案第5,759,55丨號）。主要胜肽之Th抗原 決定基大約為10個至50個胺基酸，較好是大約1〇個至3〇 個胺基酸。當多重T h抗原決定基存在時（亦即m ^ 2 ),每一 Th抗原決定基可相同或互異。Th片段包含7}1抗原決定基 的鄰接部份，其足以促進或刺激對於A/5i42肽之N端片段 的免疫反應。 本發明的抗原決定基包括得自外來病原體的抗原決定 基，其包括但不限於表1所提出的範例（序列辨識號碼：卜 21)。而且，Th抗原決定基包括理想化的人工Th和以人工 方式理想化之組合的Th，揭示於WO 99/66957號並以序列 辨識號碼：2 2 - 6 4登錄於本說明書的表2之中。包含組合 T h之胜肽同時以一種單一固相合成法與A冷“η胜肽的N端 片段，A與B，先後生產出來。Th抗原決定基亦包括其免 疫學的功能類似物，具有保留性取代，添加，刪除和插入1 個至大約1 〇個胺基酸殘基於其中，只要刺激T h的功能本質 上未經修改即可。 在本發明的合成肽中，Th抗原決定基係以共價方式經過 一個間隔序列B而連接到A冷i 胜肽的N端片段或其免疫學 之功能類似物之Ν端或C端。Α冷N42胜肽之Ν端片段的免疫 學之功能類似物可包含保守的取代、添加、刪除或插入一 個至大約4個胺基酸殘基，只要與胜肽有交又反應活 4生之免疫反應被誘發出來。該保守的取代、添加和插入可 用以上定義之天然或非天然的胺基酸來達成。 本發明之較佳肽免疫原是包含Α Θ卜42肽片段的N -端片段 ____-26- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（24 ) 者’該片段係選自包含序列辨識號碼：6 6 - 6 9或其免疫學 之功能類似物；一段間隔序列（例如，Gly-Gly，e -Lys); 選自包含HBsTh (序列辨識號碼：丨）之組群的τh抗原決定 基；HBcTh(序列辨識號碼·· 20)，MVF Th(序列辨識號碼： 8，9) ; PT Th(序列辨識號碼：4，5，7)，TT Th (序列辨 識號碼：3，4，6) ; CT Th(序列辨識號碼：12，21)，DT Th (序列辨識號碼：1 3，1 4 )，M VF Th衍生的人工T h，選 自包含序列辨識號碼：3 8 - 4 0，4 7 - 5 1) ; HB V Th衍生之人 工T h，選自包含序列辨識號碼：5 2 - 5 4之組群。請參考表 1和表2。 包含具有2種或更多Th抗原決定基之主要肽免疫原混合 物之胜肽組合物可增進在較廣群類中之免疫效果，因而提 供了對於A0卜42胜肽及其片段之增進的免疫反應。 本發明的胜肽免疫原可用具一般熟習本技藝者已詳知的 化學合成方法來製造。請參考例如Fields等人在<<人工合 成胜肽：使用者指引〉〉第3章，Grant編著，W.H· Freeman & Co (紐約）出版，1992年，第7 7頁。因此，胜肽可用自動 化的Merrifield氏固相合成技術以t-Boc或F-moc化學保護 α -NH2的方式來合成，該方式利用側鏈經保護的胺基酸在 例如Applied Biosystems公司出品的型號430A或431的肽合 成機上進行。包含Th抗原決定基之組合資料庫胜肽的肽建 構物的製備可藉由在某一可變位置上提供用於偶合之可選 擇的胺基酸來達成。在完全组合所需之胜肽免疫原以後， 根據標準法處理樹脂而將胜肽從樹脂上切下，並且使胺基 ______-27-____ 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）

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&鍵上的官能基除去保護。將自由的胜肽用HPLC純化並以 生化方/去鑑認特徵，例如··藉由胺基酸分析或定序方式進 订’用於胜肽的純化與鑑認特徵的方法對具有本技藝之一 般技巧者而言是詳知的。 士本發明的免疫原亦可藉由直接在分枝的聚離胺醯基核心 树知上5成所需的肽建構物而將其製備為分枝的聚合物 (Wang et al·，Science，1991; 254:285-288)。 或者，較長之合成肽免疫原可藉由已詳知的重組£)^^八技 術予以合成。此種技術以詳細的方法提供於著名的標準手 冊中。為了建構編碼本發明之胜肽的基因，吾人將胺基酸 序列反轉譯以獲得編碼該胺基酸序列的核酸序列，較好是 用於待表現之基因在其中之生物而言最佳的密碼子。其 久，若有需要則製備合成基因，典型上藉由合成編碼該肽 和任何調節元素的寡核荅酸來進行。將合成基因插入適當 的轉殖載體中，並且轉移感染到宿主細胞中。然後在對於 、.二挑選之表現系統和宿主適合的適當條件下表現該胜肽。 純化胜肽並以標準方法鑑認其特徵。 本發明之胜肽組合物的效力可藉由注射到動物，例如： 天三鼠身上，而以一種包含本發明之胜肽的免疫原組合物 來建立。請參考表4，序列辨識號碼：7 〇 _ 7 5。對於A万 胜肽之N端片段和可溶性A沒“η胜肽之體液反應則予監2 測。該使用方法之詳細說明提供於本說明書以下的實施二 中。 本發明的另一方面提供一種胜肽組合物，其包含免疫學 28- 本紙張尺度適用中國S家標準(CNS) A4規格(2l〇x 297公寶） 1252233 A7 B7 五、發明説明（26 ) 上有效量之一種或更多本發明的肽免疫原在一種醫藥上可 接受的遞送系統中。因此，主題之肽組合物可經調配成疫 苗，而利用慣例上採用於調配疫苗之醫藥上可接受的佐 劑、載劑或其他成分。在可使用於本發明的成份之中，有 佐劑或乳化劑包括··礬、脂合素、植物皂素、鯊晞、 L121、乳化原單磷酸脂A(MPL)，聚山梨酸酯80，QS21， Montanide ISA51，ISA35，ISA206 和 ISA 720 以及其他有 效的佐劑和乳化劑。該組合物可調配成立即釋出或持久性 釋出。該組合物亦可經調配用於誘發系統性的免疫，例如 藉由έ秀陷進入或以微顆粒輔助施用。此種調配物對具有本 技藝之一般技術者而言很容易獲得。 本發明的免疫原可經由傳統的途徑施用，如皮下，口 月良，肌内，腸胃外的或腸内的途徑施用。該免疫原可採單 劑或多劑施用。適當的接種時程表對於具有本技藝之一般 技術者而言很容易決定或獲得。 本發明的肽組合物包含有效量之一種或更多本發明的肽 免疫原和醫藥上可接受的載劑。此種呈適當用劑單位形式 的組合物一般而言含有大約〇 25微克至5〇0微克免疫原/每 公斤體重。在以多劑方式遞送時，每劑量單位之有效量可 以很方便地切分。例如，一種起始劑量，例如0.0025 -0.5 毫克/每公斤體重，較好是丨_ 5 〇微克/每公斤體重的肽免疫 原以注射’較好是肌内注射的方式施用，接著重複（追加） 相似量之用劑。劑量要視年齡、體重和對象的一般健康狀 況，如在疫苗與醫療之技藝中已知者。 _ -29- 本紙張尺度適财S S家標準(CNS) Α4·規格(2igx 297公爱)

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線 1252233 A7 B7 五、發明説明（27 ) 合成之A/3!·42肽免疫原的免疫反應可經由誘陷入生物可 分解的微顆粒中或其上而予增進，該微顆例型式由〇，Hagan 等人說明過（<< 疫苗》，1991年；第9期：768-771頁）。該 免疫原可有或可無生物可分解微粒中的佐劑予以加裝外 套，使免疫反應的潛勢增加，並且提供時間上經調控的釋 出，以便得到持久的或週期性的反應，和用於口服 (〇，Hagan 等人，1991 年；*Eldddge等人，1991 年；第28 期：287-294 頁）。 以下的實施例係提供用於說明本發明。本發明的範疇並 不受限於特定的肽免疫原和所提供的組合物。該實施例證 明本發明之肽免疫原有用於誘發針對部位之抗A占ιι〇和 A/3^4兩種片段之抗體，以及抗可溶性Α/3ι·42胜肽之交又 反應抗體’且在最初接種後四週之早期即可見效。 實施例1 合成本發明之Α芦肽免痦原的典型方法 登錄在表4上的肽免疫原（序列辨識號碼：7 〇 _ 7 6 )是藉由 Mernfield固相合成技術在Appiie(i Biosystems公司出品的 自動胜肽合成機（型號：430，431和433A)上利用Fmoc化 學法個別合成的。包含一種組合資料庫T h，亦即理想化的 人工T h部位如MvF衍生的T h 1 - 8 (序列辨識號碼：3 8 - 4 0 ) 之肽免疫原的製備可藉由提供所需之用於在某個設計中指 明的位置上進行化學偶合的胺基酸來達成，該樹脂係根據 標準法利用三氟乙酸處理以將胜肽從樹脂上切下，並且去 掉胺基酸側鏈上的保護基。經切下的、萃取並沖洗的胜肽 -30 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1252233

經由HPLC純化並且用質譜法和逆向hplc鑑認其特徵。 實施例2 主·發明之A /3肽免疫原的务疬原性質評兔 A冷衍生之肽兄疫原係以貫驗接種方法指明的數群天竺氣 進行評估，該方法列示於以下，並且藉由血清學檢驗測定 免疫原性質。 標準的實驗設計： 免疫原：（1 )個別的肽免疫原；或 (2 )在每一實施例中指明之等莫耳當量之肽免疫 原的混合物。 劑I · 1 00微克在〇 · 5毫升中/每次接種，除非另有指明 途徑：肌内注射，除非另有指明 佐劑：完全的Freund氏佐劑（CFA)/不完全的佐劑（IFA); 或水-油乳化物，除非另有指明。CFA/IFA的組在第 〇週接受CFA，而在緊接數週中接受IFA。 用劑時程表：第〇，3和6週或另有指明 抽血時程表：第〇，5和8週或另有指明 生物品種：Duncan-Hartley天竺鼠或另有指明 檢驗：用於測定每一免疫血清之抗胜肽活性的特定 ELIS As。該固相基質是a冷肽片段，例如：A /9 H4 或完整長度的A /3 ! _42 (序列辨識號碼：6 7和6 5 )。收 集血液並將之處理成為血清，在ELISA之前與目標 胜肽一起貯存。 經誘出對抗A /5胜肽和對抗可溶性a /5卜42胜肽的抗體之免 ___ ______· 31 - 本紙張尺度適用中S國家標邮卿Μ規格(21Q><297公董) 1252233 A7 B7 五 發明説明（29 疫反應活性係藉由ELIS As(酵素連接之免疫吸附檢驗）予以 測定，利用9 6孔平底微滴定盤，而該盤包覆了 A /3 ! -42胜肽 片段，序列辨識號碼：6 7或6 5做為免疫吸附劑。將該肽免 疫原溶液之一小部份（1 00微升）以5微克/毫升的濃度在3 7 t：下培育一小時。將此盤與3 %動物膠/ PBS溶液另外培育 在3 7 °C下經一小時以阻斷反應。然後使該反應阻斷後之盤 子乾燥並用於檢驗。將小部份（1 〇〇微升）試驗用的免疫血 清，以1 ·· 100稀釋比例開始稀釋在試樣稀釋緩衝液中，而 後以1 0倍連續稀釋後，添加到經肽包覆的盤子裡。將該盤 在3 7 °C下培育1小時。 用0.05% PBS/Tween®緩衝液沖洗該盤6次。添加以適當 稀釋在連接物稀釋緩衝液（磷酸鹽緩衝液，含〇·5Μ NaC1和 正常羊血清）之以辣根過氧化酶標記之羊抗特定生物物種之 抗體。將該盤培育在37 t下經1小時，然後如以上方式予 以沖洗。然後添加小部份（100微升）鄰-苯二胺受質溶液。 使顏色產生5-15分鐘，然後以添加5〇微升2N h2S〇4的方式 停止該酵素呈色反應。每一孔槽之内含物的八…⑽值則係以 平盤讀取機讀取之。根據對於吸收值之線性回歸分析，可 计异出ELISA的效價，而八492請的切分值設定在〇·5。該選 定的切分值是很嚴厲的，因為對稀釋過的正常對照組試樣 而言其吸收值小於0.15。 θ 7 (以胜肽為基疫苗設訐口 -32- 1252233 A7

為了要設計一種能產生高量之對抗A 0胜肽且對可溶性 A冷ι_42胜肽和AD病患腦部斑塊有高度交叉反應活性的高親 和力抗體之完全合成疫苗，吾人在起初便對和其N 端的免疫原性質進行特徵鑑認。為了測定Α/3ι·42胜肽中各 區的相對免疫學性質，故採用一種適用於人類用途的溫和 佐劑明礬在首次研究之中。Α/3ι_42胜肽和其Ν端的片段 Α冷之相對免疫原性質經比較。免疫原性質的評估係根 據實施例2所說明的方法進行的。未預期的Αία被發現要 比ALA胜肽更具致免疫性，這指出A/?29-42 c端片段具有 免疫抑制性質（表5 )。 緊接著，比較A/S!，28和A/3卜η之較短的N端片段Α/3ιι^々 免疫原性質。一項適用於人類用途之更為有效的佐劑 (Montanide ISA51，Seppic公司，法國巴黎）被採用於製備 水-油乳化物用以調配該疫苗。根據表6顯示之所得數據， 三種A0胜肽之相對免疫原性質（亦即，八^28和 八01-42)的排名為人/?1-28〉人01.42>八/31_14。令人驚奇的是， 失去A/3卜η之c端的14個胺基酸竟會增進而非降低免疫原 性質。抗A /3之抗體反應主要是針對N端區域，尤其是 A卢卜丨4 N端片段，如ELISA數據所示（表6)。然而進一步從 A/3卜η的C端修短形成的A冷，卻造成了免疫原性質的減 該短的A /3 片段包含為於a冷U42胜肽之第3 _6個位置上 的主要功能/調節部位，EFRH，如Solomon等人所報告的。 以抗體阻斷這個抗原決定基會調節集結作用的動態學，並 _____-33- 木紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210χ297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（31 ) 且使已形成的集結物再度被溶離（S〇l〇man等人， 〈〈PNAS〉〉’ 1996 年；第 93 期：452-455 頁；<<PNAS〉> ’1997年，第94期：4109-4112頁）。大多數抗-八紅28和 A石！ _4 2的抗體係對抗含有抗原決定基之a冷！ _42胜肽的n端 片段（表6 )。然而，A /3 i _42片段本身的致免疫性則很差。本 貝驗的結果建議A 0 ls·28片段中有一個内源的Th抗原決定 基。這個内源的Th抗原決定基解釋了 A/5 1-28和丨_42胜肽 在天竺鼠體内中度的免疫原性質。

Th抗原決定基之存在於αθ 15·28片段中是吾人所希望的。 但是’吾人希望能在面對受侷限之人類MHc分子適當的用 劑數目和答許供人類用途之佐劑形式的限制時，設計製作 出能成功做為人類疫苗之更有效的免疫原。因此，吾人試 圖將外來的或外源T h如得自ΗΒ V Th (序列辨識號碼：1 )的 T h連接到a /5 ! -η胜肽（序列辨識號碼：6 6 )的C端。該外源 的Th抗原決定基顯著地促進了 a々128片段的免疫原性質， 如表6所示。對抗具有八沒“28片段之修改過之免疫原的抗體 反應仍保持針對肽免疫原（序列辨識號碼：7〇)之功能性1^ 端片段，使得這項建構體成為比A/3丨·284Α/3丨·〇單獨存在 下更佳的免疫原。這種肽免疫原（序列辨識號碼：70)代表 具有下式之肽免疫原： (Α)η-(Α冷胜肽的Ν端片段）-(Bh-(Th)m 其中： A是α - NH2，以A/3丨.28為A/J卜42的N端片段； B是甘胺酸；

1252233 A7 B7 五、發明説明（32 T h是一個得自外來病原體的助手τ細胞抗原決定基， 即 HBsAg Th(序列辨識號碼：1)，且其中^是1，m是1和 〇是2 〇 實施例4 據A/3之合成AD疫苗的A/9 N端片段之下限_ 因為包含EFRH殘基之主要功能/調節部位居於A冷“42胜 月太的第3 - 6個位置（s〇l〇man等人，<<PNAS〉>，1996年； 第 93 期：452-455，頁，<<PNAS>>，1997 年；第 94 期： 4109-4112頁）’其有用於探索做為上之最佳b細胞目標 部位以供本發明之合成免疫原與之合併的最短A沒ι·42胜肽 之Ν端片段。 將數種Α/5之短的非致免疫ν端片段，A/3l-1〇 , AigN12， A ^ 1 · 1 4每一者與Α θ 1 ·28併入經設計具有代表性之理想化人 工T h (序列辨識號碼：5 1 )的免疫原中。經由一個ε ν - Lys 間隔序列進行連接。因為該短的A沒片段具有未料到的低致 免疫原性質，因此吾人將經修改的建構體與強的佐劑調配 在一起。該三種合成的建構體經調配在完全的和不完全的 Freund氏佐劑中’並根據實施例2中所說明的方法試驗其免 疫原性質。如表7所示。所有4種胜肽免疫原具高度致免疫 性具有範圍從4.3至5.6的Log1() ELISA效價（亦即104.3至 10 而對全長的A /3卜42胜肽在初次接種僅四週之後即 有非常高的交又反應活性。更重要的是，小如A冷！ -! 〇， A $ 1 -12和A冷1 -14的片段每一者連接至理想化的人工T h (序列 __ -35- 本紙張尺度適财a a家標準(CNS)八4規格(21G x 297公董) 1252233 A7 B7 五、發明説明（33 ) 辨識號碼.5 1 )時，經發現在連接到所揭示之人工τ匕抗原 決足基之後（表7 )有高度的致免疫性。這些肽免疫原係根據 下式設計的： (A)n-(A/3 胜肤的 N端片段）_(B)〇_(Th) 其中： . A是 αΝΗ2’ 其中N端片段！Α/3ι.|〇, Α/3ι ΐ2, A/3i.|4 或A冷1 .28 : B是ε -N Lys，它是一個經由其ε -胺基連接到下一個 胺基酸的間隔序列；

Th是一個得自理想化之人工Th，的助手τ細胞抗原決 定基，即MVF Th 1-16(序列辨識號碼·· 51)，其中 1，m是1和〇是1。 吾人發現進一步降低A /9之N端片段長度至少於丨〇個殘基 會造成更為受限’因而較差的免疫原性質。實驗顯示小於 1 0個胺基酸的胜肽在第二類MHC分子的受體辨識上會有問 題（<< 免疫學〉〉，第5版，R〇itt等人編校，1998年，偷敦

Mosby International 公司出版，第88-89頁）。 根據對A /3的這項研究，有用之得自A 0 “η的B細胞部位 必須在大約1 0個到大約2 8個殘基的大小範圍内。 實施例5 連接至人工合成Th抗原決定基之合成肽免疫目標之 針對部位的免疫原性質 非致免疫的N端片段如A々胜肽的A /3 ! ·!4係經—個ε N -離 胺酸間隔序列連接至一個標示為MVF Th 1 -1 6(序列辨識號 ___ - 36 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)

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線 1252233 五 發明説明（ 34 A7 B7 :二1}的人工月太上，或經由標準的化學偶合方法連 劑蛋白fKLH。在天竺鼠體内對這二種免疫 ，建構體評估其對於A綠肽之相對「針對部位」的抗原免 反性，、以及抗體對於個別載齋j，即人工叫尤々決定基或 KL>H載劑蛋白質所產生的相對反應活性，此乃根據實施例2 中況月的方法進仃。以短的A冷丨七肽單獨做為對照組免疫 '而和咸一種免疫原建構體調配在含佐劑ISA5 1的水油乳 化物中，這是一種適用於人類的調配物。如表8所示，正如 吾人所預期的N端八占卜"片段本身不具免疫原性質。包含 A/3bM片段和人工Th(序列辨識號碼：73)的合成免疫原被 發現在誘發對抗A 之針對部位的抗體上具有高度的致 免疫性。該抗體亦經發現對於可溶性入々^“胜肽早在初始 接種後4週即有高度的交叉反應活性（在初始接種之後4週和 6週的[〇心0效價分別為4.094和4.126)。當這些人/5反應性高 效價的免疫血清用ELISA在MVF Thl - 1 6胜肽（序列辨識號 碼：5 1 )包覆的盤上進行試驗時，它們被發現呈陰性反應 (在初始接種之後4週和6週的L〇g1G效價分別為〇·〇38和 0·064) ’顯示並未產生不相關的抗體。在表8中顯示之所得 數據清楚地證明本發明之肽免疫原高度特定之針對部位的 特徵。 帶有載劑蛋白質KLH的免疫原被發現與傳統的胜肽-載劑 蛋白質共軛體有高度的免疫反應活性（例如，在起始接種之 後4週和6週的Log1G效價分別為4.903和5.018)。然而，誘 生的抗體只有中度地與可溶性A 0 ^42胜肽交叉反應（例如， -37- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 A7

在初始接種之後4週和6週之L〇g|〇效價分別為 2.736)。這大約要比序列辨識號碼：73要低丨至— 未預期的是本發明的肽免疫原高度針對部位且集中。 重要之導向表U端片段上抗集結和去集結:: 體產生，而非導向無關之載劑部位者產生。 1施例6 魅行評 皮 使用具有斑塊和纏結之心病患的腦和硫黃素_性血管 (TSBV)之含有澱粉狀蛋白質斑塊者以天竺鼠和狒狒身上培 養之抗A鋒肽免疫原進行對聚合物老年性斑塊之交又反^ 活性評估。料與TSBV的反應活性係以免疫過氧化酶染^ 法，利用抗生物素蛋白-生物素連接的抗體複合物(abc)之 方法，或是藉由免疫螢光染色法，利用若丹明連接的特定 於物種之抗.IgG的Fab片段進行偵測。所有的天竺鼠血清均 以1 · 100的稀釋液試驗，而對某些試樣進行終點效價之測 定。所有狒狒血㈣以丨：5()之稀釋液試驗。免疫和免疫 前血清的評估承蒙Gaskin博士，在其編碼下如說明之方法 進行（Gaskin等人’ <<:實驗醫學期刊 >>，第165期，245 頁，1987 年）。 在圖1足宁，一系列得自2位AD病患腦部之切片起初以 1 0 X放大進行檢驗。切片（a )，（ b )和（c )係得自1號A 〇腦 部，而（d)，（e)，（f)得自2號ad腦部。免疫前的正常血清 和得自天竺鼠的免疫血清於初始接種後6週收集者，在富含 _______-38- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐) 1252233

斑塊與神經纖維糾結物（NFT)的A D顳皮質的冷凍切片上， 以免疫過氧化酶木色進行試驗。顯示於圖和1(；}之用於第 頁研九〜免疫皿清係得自以製備於ISA5丨水油乳化物中之 A /3 ε LMvF Th 1 - 1 6(序列辨識號碼：74)接種的動物 身上。泫結果顯tf顯著地結合至老年性斑塊與硫黃素s陽性 血官（TSBV)上之澱粉狀蛋白質斑塊。對抗製備於cfa/ ICFA中足對等免疫原而產生的免疫血清之交又反應活性顯 示於標本片圖1 b和1 d。令人未預料到的是，相對於使用 ISA51調製的疫苗所得之結果，吾人觀察到對抗cfa/kfa 疫苗所產生的血清對於血管（TSBV)上的A I n斑塊會優先 與 < 結合。這個結果意味著由IS Α5丨調配之這結果意味著由 ISA5 1凋配之疫苗誘出的抗體可與由調配在CFA/ICFA中之 疫苗所產生的抗體區分。而且，用根據本發明所調配的疫 苗生產的抗體提供了對於腦組織中老年性斑塊具有所需要 之較高交又活性的抗體。免疫前的血清在對應之連續切片 中未顯示任何染色，如附圖1 c和丨[之標本片所示。 用免疫前和免疫血清以1 : 1〇〇稀釋倍率進一步對Ad腦1 之連續切片所做的免疫過氧化酶染色以4 〇 X放大顯示在附 圖2a到2e。以ISA51水-油乳化物中製備的a ^Ν28_εκ-MvF T h 1 - 1 6 (序列辨識號碼：7 4)對動物接種所得到的血 清強烈地使該斑塊染色，形成如附圖2 a和2 d之標本片中所 示的核心模式。再度令人驚奇的是，用對抗對應之 CFA/ICFA调配物製備出的免疫血清染色會產生不同的染色 模式，其中與斑塊的反應活性如附圖2 b所示，主要發生在 _____ -39- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1252233 A7 B7 37 五、發明説明（ 血管，而九不是與腦組織中的斑塊作用。免疫前的血清不會 使切片木色，如附圖2 c所示。使a 0 Μ]胜肽單獨在 CFA/ICFA中接種所產生的過度免疫血清，儘管由得 知對A 0 i以有很強的反應活性，但卻在附圖2 e顯示的切片 中產生々人氣奇之微弱的染色模式。 / 用1 1種匯集足免疫和免疫前血清_AD腦組織進行相似的 免疫染色，該血清係以實施例3 , 4和5中說明的各種疫苗 凋配物對天竺鼠進行接種所得。同時藉由A冷“Μ ELIS a評 估其與功能性部位之抗體反應活性，並且藉由A /3卜42 ELISA評估其與可溶性人/51 η的抗體反應活性（表9)。一般 而吕，吾人發現在所有這三種檢驗中試驗的血清有平行的 趨勢。如表9之中所顯示的，免疫前血清與經培養對抗短鏈 月太A冷1 · 1 4單獨調配在IS A 5 1水油乳化物之血清的抗胜肽反 應活性以ELISA檢驗均低，並且其與斑塊之交叉反應活性 微不足道。吾人發現以A ^ 2 8胜肽單獨調配在明礬和 ISA51，和以A/?!」4連接至KLH並調配在ISA51接種之動物 血清有適度的反應活性。然而，吾人發現用本發明之合成 A冷/Th免疫原接種的動物血清會對功能性a $ N14部位、可 溶性A /5，和A D病患腦部組織切片上的斑塊與TSBV有顯著 之針對部位的反應活性。得自這些研究的結果因而證明了 包含Α/3 !·42的N端片段，具有1-28至大約1 -1 0的胺基酸， 且與外來的T h抗原決定基連接的肽免疫原具有優良和有用 的免疫原性質。而且，該結果顯示Th抗原決定基的存在會 促進本發明之肽免疫原之免疫原性質到一種令人驚異的程 -40- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4规格(210X297公釐） 1252233 A7 B7

度。本發明的肽免疫原在臨床上可接受的疫苗調配物中， 為人體可接受之用途下會產生具有所需之對於AD病患腦組 織中老年性斑塊的交又反應活性。 實施例7 直苴在狒狒體内之 病患免疫治瘙效果的預測丨 將代表性之合成免疫原八/^以-ε - K-MvF Th 1-16(序列 辨識號碼：7 4)，調配在ISA 5 1水油乳化物中，每劑濃度為 25微克/〇·5毫升，100微克/0·5毫升和4〇〇微克/〇·5毫升， 施用於二隻狒狒Υ299，Χ398，Χ1198，而自初始接種開始 採0，3和6週的時程表。免疫前的血清和初次接種後第5週 和第8週的血清（wpi)被收集起來。為了比較起見，施予第 4隻狒狒X798 100微克/0·5毫升劑量之等莫耳濃度的自由肽 A/5|_28和A/S丨·〇調配在明礬中之混合物，明礬是核准用於 人類的標準佐劑。用免疫前的血清做為負對照組。 收集所有4隻經接種動物的血清，並且以a $ N14 ELISA評 估其對於功能性部位的抗體反應活性，並以A /3 U42 ELISA 才估其對於可溶性A yj 1 _42的反應活性（對於〇，5和8 wpi收 集的血清）。如實施例6之說明以免疫染色法評估抗血清（只 有8 wpi)與老年性斑塊和硫黃素3陽性血管中之斑塊的交又 反應活性。取代抗狒狒之g，吾人所用的抗體偵測物是一 段得自抗人類IgG之Fab片段，其能辨認所有人類的同型抗 體’並且對狒狒的；[gG有交叉反應活性。 吾人以血清在所有這三種檢驗中試驗，再次發現平行的 _ -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公ΙΓ 1252233 A7

、。如表10所示’免疫前的血清呈陰性結果。吾人發現 1 Α^·2^Α/3"2調配在明礬中接種的動物X798身上 勺血清顯Μ度的EUSW應活性1而，此種血清對於 Μ老年性斑塊的反應活性卻很弱。相對的，㈣本發明 〈代表性組合物（序列辨識號碼：74miQQ微克Μ」毫升和 彻微克/0.5毫升調配在ISA51中接種之動物身上取得之初 =’接種後8週收集到的血清對於A/3iu的功能性部位，可 溶性A/3卜42和八〇病患腦部切片中的斑塊與丁svb有顧著之 針對部位的反應活性。4自這項狒狒研究的結果因此證實 了本發明的免疫原在適用於人類的疫苗調配物中有用。致 免疫性的增進（對於A石功能性部位之特定抗體效價增進 10X至100X)與先前技藝中的肽疫苗相車交至為碁員著，這是 用密切近似人類之狒狒的免疫反應性來進行比較的結果。 相似地，包含兩種至三種本發明之合成免疫原的混合物 可用於調配成疫苗，以大約25至1000微克/每劑在遺傳與 上歧異的人類體内誘生出抗-AL七抗體，以預防和治2 AD。吾人預期在人體内有廣泛的致免疫性，因為混雜之

Th抗原決足基存在於本發明的肽免疫原中能提供廣泛的 MHC辨識作用之達成。 -42 t紙浪尺度適财_轉#(CNS) A4規格(21〇X297公釐） 1252233 A7 B7 五、發明説明（40 ) 表1 得自病原體的混雜τ -協助細胞抗原決定基（T h)

Th的說明 胺基酸序列 序列辨識號碼: HBs Tha FFLLTRILTIPQSLD 1 PT1 Tha KKLRRLLYMIYMSGLAVRVHVSKEEQYYDY 2 ΤΤτ Tha KKQYIKANSKFIGITEL 3 TT2Tha KKFNNFTVSFWLRVPKVSASHL 4 PT^Th3 YMSGLAVRVHVSKEE 5 TT3Tha YDPNYLRTDSDKDRFLQTMVKLFNRIK 6 PT2 Tha GAYARCPNGTRALTVAELRGNAEL 7 MVF1 Tha· LSEIKGVIVHRLEGV 8 MVF2Tha GILESRGI KARITHVDTESY 9 TT4 Tha VWRDIIDDFTNESSQKT 10 TT5 Tha DVSTIVPYIGPALNHV 11 CTTh3 ALNIWDRFDVFCTLGATTGYLKGNS 12 ~ DT1 Tha DSETADNLEKTVAALSILPGHGC 13 DT2 Tha EEIVAQSIALSSLMVAQAIPLVGELVDIGFAATNFVESC 14 PFTha DHEKKHAKMEKASSVFNWNS 15 SM Tha KWFKTNAPNGVDEKHRH 16 TraT1 Tha GLQGKHADAVKAKG 17 T「aT2 Tha GLAAGLVGMAADAMVEDVN 18 T「aT3 Tha STETGNQHHYQTRWSNANK 19 HBC5〇.6gb SDFFPSVRDLLDTASALYRE 20 CTPn Thc TiNKPKGWGKE 21 a US 5,759,55 1 b Ferrari 等人，<<臨床研究雜語〉〉，199 1; 8 8:2 1 4 c Stagg等人，《免疫學雜誌>>,1993; 71:1 -43- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1252233 A7B7 五、發明説明（41 ) 表2 人工理想化的T h和合併基因庫理想化的人工τ h a . MVF Th和得自MVF之Th抗原決定基 Γ 鑑認者 胺基酸序列 :— 存列辨識號碼f MVF Th1 LSEIKGVIVHRLEGV ' 22 ' ·— DLSDLKGLLLHKLDGL 23 SSAL1 Thl El EI5 Ιϋ R!E 工 V V VW V V 24 25 F F FFF F F 2β ISEIKGVIVHKIEGI 27 MVF Thl-1 MT RT TRM TM 28 L L V , 29 MVF Thl-2 ISEIKGVIVHKIEGI T RT TR T 30 31 MVF Thl-3 MSEIKGVIVHKLEGM 32 LT MRT TRM TV 33 MVF Thl-4 ISEIKGVIVHKIEGI 34 MVF Thl-5 ITEIRTVIVTRIETI 35 MVF Thl-6 MSEMKGVIVHKMEGM 36 MVF Thl-7 LTEIRTVIVTRLETV 37 ISISEIKGVIVHKIEGILF 38 MVF Thl-8 MT RT TRM TM 39 L L V 40 MVF Thl-9 ISISEIKGVIVHKIEGILF T RT TR T 41 42 MVF Thl-10 ISLSEIKGVIVHKLEGMLF MT MRT TRM TV 43 * • 44 MVF Thl-11 IS LTEIRTVIVTRLETVLF I I I 45 46 MVF Thl-12 ISISEIKGVIVHKIEGILF 47 MVF Thl-13 ISITEIRTVIVTRIETILF 48 MVF Thl-14 ISMSEMKGVIVHKMEGMLF 49 MVF Thl-15 ISLTEIRTVIVTRLETVLF 50 MVF Thl-16 工SITEIKGVIVHRIETILF 51 b .HBsAg Th,原始型式和衍生物 鑑認者 „ 胺基酸序列' 序列辨識號碼' HbsAg-Thl FFLLTRILTIPQSLD 52 HbsAg-Thl-1 KKKF FLLTRILTIPQS LD 53 KbsAg-Thl-2 FFLLTRILTIPQSL 54 KKKLFLLTKLLTLPQSLD 55 RRRIKII RIX I L IR 56 SSAL2 Th2 VRYY V I V 57 F FF FF F V F 58 F 59 HbsAg Thl-3 KKKIITITRIITIITTID '6 0 HbsAg Thl-4 KKKIITITRIITIITTI 61 HbsAg Thl-5 KKKNMTMTRMITMITTID 62 HbsAg Txhl-6 FITMDTKFLLASTHIL 63 HbsAg Thl-7 KKKFITMDTKFLLASΤΗ 工 L 64 -44- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X 297公釐） 1252233 A7 B7 五、發明説明（42 ) 表3 A/3 !_42胜肽之胺基酸序列及其N-端片段

序列辨識號碼 *胺基酸序列 .. SEQ ID NO:65 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGWIA SEQ ID N〇:66 Αβΐ-28 DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK SEQ ID N〇:67 Αβΐ-14 DAEFRHDSGYEVHH SEQ ID NO:68 ApM2 DAEFRHDSGYEV SEQ ID NO:69 Αβι-ι〇 DAEFRHDSGY -45 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1252233 A7 B7 五、發明説明（43 表4 免疫原 " ! 胺基酸序列 序列辨· 識號碼 ^Pl-28-GG-H3V Th DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK-GG-FFLLTRILTIPQSLD 7 0 Αβ^,ο-εΚ-IS-MVF Thl-lS DAEFRHDSGY-£K-ISITEIKGVIVHRIETILF 71 Αβ:·ΐ2_εΚ-工 S-MVF Thl-16 DAEFRHDSGYEV-sK-ISITEIKGVIVHRIETILF 72 Αβ:·14_εΚ_ 工S_MVF Thl-15 DΑΞ FRHDSGYEVHH - εΚ - IS 工 ΊΈIKGVIVHR 工ETILF 73 APua-SK-IS-KVF Thl-16 DAEFRHDSGYSVHHQKLVFFAEDVGSNK-sK-ISITEIKGVIVKRIETIIiF 74 Αβ,.,,-εΚ-MVF DAE FRHD SGYEVHH - εΚ-ISISEI KGVIVHKI EG ILF 75 Thl-9 T RT TR T 76 -46 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（44 ) 表5 免疫原 佐劑 GP ID# ELISA 效價(Log1()) 4 WPI 6 WPI Αβΐ.14 Avg. Αβΐ-42 Avg. Αβΐ-14 Avg. ApM2 Avg. Αβΐ-28 (SEQ ID NO:66) 明礬 1630 1.244 2.326 0.878 2,401 0.888 1.966 1.202 2.405 1631 3.408 3.924 3.044 3.608 Αβΐ-42 (SEQ ID NO:65) 明礬 1634 0.773 1.124 0.680 1.461 1.062 1.784 1.203 1.807 1635 1.474 2.242 2.505 2.510 -47- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1252233 A7 B7 五、發明説明（45 ) 表6 免疫原 佐劑 GP ID# ELISA 效價(Log10) 4 WPI 6 WPI Αβΐ-14 Avg. Αβ·Μ2 Avg. Αβΐ-14 Avg. Αβΐ-42 Avg. Αβΐ.14 (SEQ ID NO: 67) ISA 51 1658 1.168 1.129 1.229 0.975 1.100 1.271 1.285 1.080 1659 1.090 0.720 1.441 0.874 Αβΐ-2β (SEQ ID NO： 66) ISA51 1632 2.341 2.291 3.656 3.382 2.276 2.715 3.359 3.455 1633 2.241 3.107 3.153 3.550 Αβτ，2Β~ GG-HBVTh 1 (SEQ ID NO： 70) ISA51 1642 4.792 4.612 4.526 4.582 4.548 4.498 4.441 4.261 1643 4.432 4.637 4.447 4.081 Αβΐ-42 (SEQ ID NO： 65) ISA51 1636 2.724 1.864 3.603 2.402 2.286 1.997 3.250 2.873 1637 1.004 1.201 1.707 2.495 -48- 裝

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1252233 AT B7 五、發明説明（46 表7 丄 免疫原； 佐劑 GP ID # EUSA 效價(Logio) 4 WPI ' 6 WPI Αβΐ-14 Avg. Αβί 一 2 Avg. Αβΐ-14 Avg. Αβι^2 Avg. Α0ι_ι〇-εΚ-Μ\/Ρ Th1-16 (SEQ ID NO: 71) CFA/IFA 1666 4.293 4.495 4.924 5.037 4.414 4.320 5.180 5.265 1667 4.696 5.250 4.225 5.350 Αβΐ-12-eK-MVF 丁 h1-1S (SEQ ID NO: 72) CFA/IFA 1664 4.577 4.495 5.100 4.891 5.320 4.545 6.000 5.278 1665 4.322 4.682 3.700 4.555 Th1-16 (SEQ ID NO: 73) cfa/ifa 1660 3.700 3.285 4.677 5.060 4.544 4.683 5.250 5.625 1661 4.764 5.443 4.822 6.000 Th1-16 (SEQ ID NO: 74) CFA/IFA 1584 3.355 3.201 4.610 4.328 2.743 3.592 4.487 4.901 1585 3.707 4.688 3.731 5.155 1586 2.545 3.685 4.304 5.061 -49- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 1252233 A7 B7 五、發明説明（47 ) 表8 免疫原' 佐劑 GP ID 林 £1^人效價(乙〇引0) 4 WPI 6 WPI Αβΐ-42 Avg. Th peptide or KLH Avg Αβκ Avg. Th peptide or KLH Avg Αβΐ-14 (SEQ ID NO: 67) ISA 51 1658 1.229 0.975 NA NA 1.285 1.080 NA NA 1659 0.720 NA 0.874 NA Api.i4-£K-MVF Th1-16 (SEQ ID NO: 73) ISA 51 1662 4.388 4.094 0.006 0.038 4.559 4.126 0.065 0.064 1663 . 3.800 0.070 3.693 0.063 KLH-(C) Αβι.ΐ4 (SEQ ID NO: 67) ISA 51 1670 3.181 3.342 4.672 4.903 2.625 2.736 4.876 5.018 1671 3.502 5.133 2.846 5.160 -50- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（48 4-9. 疫苗調配物 GP ID# ELISA 效價(L〇gl0) 免疫: 染色a—. 令凍切片 >腦組織 Αβι^2 Αβΐ-14 系列; 之AE Avg Avg Plaque TSBV Αβι,2θ in Afum 1630 0,878 2.401 1.244 .2.326 +1 +4 1631 3.924 3.408 Αβι.2θΐη ISA51 1632 3.686 3.397 2.341 2.291 +3 +5 1633 3.107 2.241 A3i.28-eK-MVF Th1-16 in CFA/IFA (SEQ ID NO: 74) 1584 4.610 4.328 3.355 3.201 +4 +6 1585 4.688 3.707 1586 3.685 2.540 Api.28-eK-MVF Th1-16 in ISA51 (SEQ ID NO: 74) 1642 3.603 4.582 2.724 3.510 +4 +6 1643 1.201 1.004 Αβι.14 in ISA51 1658 1.229 0.975 1.168 1.129 Neg Neg 1659 0.720 1.090 Api.i4-sK-MVF Th1-16 in CFA/IFA (SEQ ID NO: 73) 1660 4.677 5.060 3.700 4.232 +4 +6 1661 5.443 4.764 Api.14-£K-MVF Th1-16 in ISA51 (SEQ ID NO: 73) 1662 4.388 4.094 3.551 3.285. +4 +6 1663 3.800 3.018 ApweK-MVF 丁h1-16 in CFA/IFA (SEQ ID NO: 72) 1664 5.100 4.891 4.577 4.450 +4 +6 1665 4.682 4.322 Api.10-eK-MVF Th1-16 in CFA/IFA (SEQ ID NO: 71) 1666 4.924 5.087 4.293 4.455 +4 +5 1667 5.250 4.696 KLH-(C) Api.14in ISA51 1670 3.181 3.342 3.280 3.102 +2 +4 1635 3.502 2.924 負結果對照組 (預免疫血清） <0.5 <0.5 Neg Neg a:連續稀釋@1 : 1〇〇 -51 -本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格（210X 297公爱） 1252233 A7 B7 五、發明説明（49 ) 表1 0 組別 # 疫苗調配物 劑量 ELISA 效價(Log10) 免疫染色冷 凍切片之AD 腦(8 wpi) Αβΐ·42 Αβΐ，Η 0 WPI . 5 WPI 3 WPI 0 WPI 5 WPI 8 WPI 斑塊 TSBV 1 Api^s-eKV-MVF Th1-16 in ISA51 25 μς 0.394 2.962 2.736 0.665 1.745 2.706 +2 + 2 100 pg 0.610 2.987 3.640 0.794 2.816 4.800 +4 +6 3 400 μς 0.696 2.696 4.050 0.539 4.250 3.799 +4 +6 4 Αβι-28+ Αβ*ι.42 in Alum 100 pg 0.897 1.963 2.485 0.798 0.727 2.850 + + 5 ,負結果對照組 - - - - - - Neg Neg -52- 本紙浪尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（50 ) 序列一覽表 <110> Wang, Chang Yi <120〉用於預防及治療阿茲海默氏症之免疫原胜肽組合物 <130〉1 151-4167 <140〉TBA <141> 2001-5-25 <160> 76 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213〉B型肝炎病毒 <400〉 1

Phe Phe Leu Leu Thr Arg lie Leu Thr lie Pro Gin Ser Leu Asp 1 5 10 15

<210〉 2 <21 1> 30 <212> PRT <213〉副百日咳博德氏桿菌 <400> 2

Lys Lys Leu Arg Arg Leu Leu Tyr Met lie Tyr Met Ser Gly Leu Ala 1 5 10 15

Val Arg Val His Val Ser Lys Glu Glu Gin Tyr Tyr Asp Tyr 20 25 30 <210〉 3 <21 1> 17 <2 12> PRT <213〉破傷風桿菌 L______-53- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐) 裝 訂

1252233 A7 B7 五、發明説明（51 ) <400> 3

Lys Lys Gin Tyr lie Lys Ala Asn Ser Lys Phe lie Gly lie Thr Glu 15 10 15

Leu <210> 4 <21 1> 22 <212〉 PRT <213>破傷風桿菌 <4〇〇> 4

Lys Lys Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys 1 5 10 15

Val Ser Ala Ser His Leu 20

<210> 5 <211> 15 <212> PRT <213〉副百日咳博德氏桿菌 <400> 5

Tyr Met Ser Gly Leu Ala Val Arg Val His Val Ser Lys Glu Glu 1 5 10 15 <210> 6 <211> 27 <212〉 PRT <213〉破傷風桿菌 <400> 6

Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Arg Thr Asp Ser Asp Lys Asp Arg Phe Leu 15 10 15

Gin Thr Met Val Lys Leu Phe Asn Arg lie Lys 20 25 <210> 7 <21 1> 24 <212> PRT <213〉糙體雞皮衣 -54- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐） 1252233 A7 B7 五 發明説明（52 <400> 7

Gly Ala Tyr Ala Arg Cys Pro Asn Gly Thr Arg Ala Leu Thr Val Ala 1 5 10 15

Glu Leu Arg Gly Asn Ala Glu Leu 20 <210> 8 <2 1 1> 15 <212〉 PRT <213>麻療病毒 <400> 8

Leu Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Arg Leu Glu Gly Val 15 10 15 <210〉 9 <211〉 20 <212〉 PRT <213>大腸桿菌 <400> 9

Gly lie Leu Glu Ser Arg Gly lie Lys Ala Arg lie Thr His Val Asp 15 10 15

Thr Glu Ser Tyr 20 <210〉 10 <211〉 17 <212〉PRT <213〉破傷風桿菌 <400> 10

Trp Val Arg Asp lie lie Asp Asp Phe Thr Asn Glu Ser Ser Gin Lys 15 10 15

Thr

<210〉 11 <211> 16 <212〉 PRT -55- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐） 裝 訂

A7 B7 1252233 五、發明説明（53 ) <213>破傷風桿菌 <400> 11

Asp Val Ser Thr lie Val Pro Tyr lie Gly Pro Ala Leu Asn His Val 1 5 10 15 <210> 12 <211> 25 <212> PRT <213>砂眼披衣菌 <400> 12

Ala Leu Asn lie Trp Asp Arg Phe Asp Val Phe Cys Thr Leu Gly Ala 15 10 15

Thr Thr Gly Tyr Leu Lys Gly Asn Ser 20 25 <210〉 13 <211> 23 <212> PRT <2 1 3>白喉 <400> 13

Asp Ser Glu Thr Ala Asp Asn Leu Glu Lys Thr Val Ala Ala Leu Ser 15 10 15 lie Leu Pro Gly His Gly Cys 20 <210> 14 <211> 39 <212〉 PRT <2 1 3〉白喉 <400> 14

Glu Glu lie Val Ala Gin Ser lie Ala Leu Ser Ser Leu Met Val Ala 1 5 10 15

Gin Ala He Pro Leu Val Gly Glu Leu Val Asp lie Gly Phe Ala Ala 20 25 30

Thr Asn Phe Val Glu Ser Cys 35 -56- 衣紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 裝

1252233 A7 B7 五、發明説明（54 ) <210> 15 <21 1> 21 <212> PRT <213> 惡性瘧原蟲 <400> 15 Asp His Glu Lys Lys His Ala Lys Met Glu Lys Ala Ser Ser Val Phe 1 5 10 15 Asn Val Val Asn Ser 20 <210〉 16 <211〉 17 <212> PRT <213> 曼森血吸蟲 <400〉 16 Lys Trp Phe Lys Thr Asn Ala Pro Asn Gly Val Asp Glu Lys His Arg 1 5 10 15 His <210〉 17 <21 1> 14 <212〉 PRT <213> 大腸桿囷 <400> 17 Gly Leu Gin Gly Lys His Ala Asp Ala Val Lys Ala Lys Gly 1 5 10 <210> 18 <21 1> 19 <212> PRT <213> 大腸桿菌 <400〉 18 Gly Leu Ala Ala Gly Leu Val Gly Met Ala Ala Asp Ala Met Val Glu 1 5 10 15 Asp Val Asn -57 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（55 ) <210> 19 <211〉 20 <212> PRT <213> 大腸桿菌 <400> 19 Ser Thr Glu Thr Gly Asn Gin His His Tyr Gin Thr Arg Val Val Ser 1 5 10 15 Asn Ala Asn Lys 20 <210> 20 <21 1> 20 <212> PRT <213> B型肝炎病毒 <400〉 20 Ser Asp Phe Phe Pro Ser Val Arg Asp Leu Leu Asp Thr Ala Ser Ala 1 5 10 15 Leu Tyr Arg Glu 20 <210〉 21 <21 1> 12 <212> PRT <213> 砂眼披衣菌 <400> 21 Thr lie Asn Lys Pro Lys Gly r Γγτ Val Gly Lys Glu 1 5 10 <210> 22 <21 1> 15 <212> PRT <213> 麻療病毒 <400〉 22 Leu Ser Glu lie Lys Gly Val ] [le Val His Arg Leu Glu Gly Val 1 10 15 -58- 衣紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（56 <210〉 23 <211> 16 <212> PRT <2 1 3>麻疹病毒 <400> 23

Asp Leu Ser Asp Leu Lys Gly Leu Leu Leu His Lys Leu Asp Gly Leu 15 10 15 <210> 24 <211> 16 <212> PRT <213〉麻療病毒 <400> 24

Glu lie Ser Glu lie Arg Gly lie lie lie His Arg lie Glu Gly lie 15 10 15 <210> 25 <21 1> 16 <212> PRT < 2 1 3〉麻療病毒 <400> 25

Asp Val Ser Asp Val Lys Gly Val Val Val His Lys Val Asp Gly Val 1 5 10 15 <210> 26 <211〉 16 <212〉 PRT <213>麻疹病毒 <400> 26

Asp Phe Ser Asp Phe Lys Gly Phe Phe Phe His Lys Phe Asp Gly Phe 1 5 10 15

<210> 27 <211> 15 <212> PRT _-59- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210x 297公釐） 1252233 A7 B7 五、發明説明（57 ) < 2 1 3〉麻癌"病毒 <400> 27 lie Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys lie Glu Gly lie 15 10 15

<210> 28 <21 1> 15 <212> PRT < 2 1 3〉麻癌"病毒 <400> 28

Met Thr Glu lie Arg Thr Val lie Val Thr Arg Met Glu Thr Met 15 10 15 <210> 29 <211> 15 <212〉 PRT <213>麻疹病毒 <400> 29

Leu Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys Leu Glu Gly Val 15 10 15 <210〉 30 <211〉 15 <212〉 PRT <213〉麻疹病毒 <400> 30 lie Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys lie Glu Gly lie 1 5 10 15 <210> 31 <211> 15 <212> PRT <213〉麻療病毒 <400> 31 lie Thr Glu lie Arg Thr Val lie Val Thr Arg lie Glu Thr lie -60- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（58 ) 1 5 10 15 <210〉 32 <21 1> 15 <212> PRT <213> 麻療病毒 <400> 32 Met Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys Leu Glu Gly Met 1 5 10 15 <210〉 33 <21 1> 15 <212〉 PRT <213> 麻療病毒 <400〉 33 Leu Thr Glu Met Arg Thr Val lie Val Thr Arg Met Glu Thr Val 1 5 10 15 <210> 34 <211〉 15 <212> PRT <213> 麻療病毒 <400> 34 lie Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys lie Glu Gly lie 1 5 10 15 <210> 35 <21 1> 15 <212> PRT <213〉 麻療病毒 <400> 35 lie Thr Glu lie Arg Thr Val He Val Thr Arg lie Glu Thr lie 1 5 10 15 <210> 36 <2 1 1> 15 -61 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐)

1252233 A7 B7 五、發明説明（59 )

<212> PRT < 2 1 3〉麻療病毒 <400> 36

Met Ser Glu Met Lys Gly Val lie Val His Lys Met Glu Gly Met 1 5 10 15

<210> 37 <211> 15 <212> PRT < 2 1 3〉麻療病毒 <400> 37

Leu Thr Glu lie Arg Thr Val lie Val Thr Arg Leu Glu Thr Val 1 5 10 15

<210〉 38 <211> 19 <212〉 PRT < 2 1 3〉麻癌"病毒 <400> 38 lie Ser lie Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys lie Glu Gly 1 5 10 15 lie Leu Phe <210> 39 <211〉 19 <212> PRT <213>麻渗病毒 <400> 39 lie Ser Met Thr Glu lie Arg Thr Val lie Val Thr Arg Met Glu Thr 1 5 10 15

Met Leu Phe <210> 40 <211> 19 <212〉 PRT <213〉麻疹病毒 -62- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210X297公釐) 裝 訂

1252233 A7 B7 五、發明説明（60 ) <4〇〇〉 40

He Ser Leu Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys Leu Glu Gly 15 10 15

Val Leu Phe

<210> 41 <21 1> 19 <212〉 PRT < 2 1 3〉麻療病毒 <400> 41 lie Ser lie Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys lie Glu Gly 15 10 15 lie Leu Phe <210> 42 <211〉 19 <212〉 PRT <213>麻疹病毒 <400> 42 lie Ser lie Thr Glu lie Arg Thr Val lie Val Thr Arg lie Glu Thr 15 10 15 lie Leu Phe

<210> 43 <21 1> 19 <212〉 PRT < 2 1 3〉麻癌"病毒 <400> 43 lie Ser Leu Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Leu Glu Gly 15 10 15

Met Leu Phe

<210> 44 <211> 19 <212> PRT _ -63 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇x 297公釐） 1252233 A7 B7 五、發明説明（61 ) < 2 1 3〉麻病毒 <4〇〇> 44 lie Ser Met Thr Glu Met Arg Thr Val lie Val Thr Arg Met Glu Thr 15 10 15

Val Leu Phe <210> 45 <211〉 19 <212> PRT < 2 1 3〉麻癌"病毒 <400> 45 lie Ser Leu Thr Glu lie Arg Thr Val lie Val Thr Arg Leu Glu Thr 1 5 10 15

Val Leu Phe <210> 46 <211〉 19 <212〉 PRT <213〉麻疹病毒 <400> 46 lie Ser lie Thr Glu lie Arg Thr Val lie Val Thr Arg lie Glu Thr 15 10 15 lie Leu Phe <210> 47 <211〉 19 <212> PRT <213〉麻療病毒 <4〇〇> 47 lie Ser lie Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys lie Glu Gly 15 10 15 lie Leu Phe

<210> 48 <211〉 19 <212〉 PRT -64- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐） 1252233 A7 B7 五、發明説明（62 <213〉麻療病毒 <400> 48 lie Ser lie Thr Glu He Arg Thr Val lie Val Thr Arg lie Glu Thr 1 5 10 15 lie Leu Phe <210> 49 <211〉 19 <212> PRT <213〉麻療病毒 <400> 49 lie Ser Met Ser Glu Met Lys Gly Val lie Val His Lys Met Glu Gly 15 10 15

Met Leu Phe <210> 50 <211> 19 <212> PRT <213>麻疹病毒 <400> 50 lie Ser Leu Thr Glu lie Arg Thr Val lie Val Thr Arg Leu Glu Thr 15 10 15

Val Leu Phe <210> 51 <211〉 19 <212〉 PRT <213>麻療病毒 <400〉 51 lie Ser lie Thr Glu lie Lys Gly Val lie Val His Arg lie Glu Thr 15 10 15 lie Leu Phe

<210〉 52 <21 1> 15 <212> PRT ____-65 - 本紙浪尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐）

裝

1252233 A7 B7 五、發明説明（63 <213〉B型肝炎病毒 <400> 52

Phe Phe Leu Leu Thr Arg lie Leu Thr lie Pro Gin Ser Leu Asp 15 10 15 <210〉 53 <211> 18 <212> PRT <213> B型肝炎病毒 <400> 53

Lys Lys Lys Phe Phe Leu Leu Thr Arg lie Leu Thr lie Pro Gin Ser 15 10 15

Leu Asp <210> 54 <211〉 14 <212〉 PRT <213〉B型肝炎病毒 <400> 54

Phe Phe Leu Leu Thr Arg lie Leu Thr lie Pro Gin Ser Leu 1 5 10 <210> 55 <211〉 18 <212> PRT <213〉B型肝炎病毒 <400> 55

Lys Lys Lys Leu Phe Leu Leu Thr Lys Leu Leu Thr Leu Pro Gin Ser 15 10 15

Leu Asp <210> 56 <211> 18 <212〉 PRT <213> B型肝炎病毒 _ -66- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（64 ) <400> 56 Arg Arg Arg lie Lys lie lie Thr Arg lie lie Thr lie Pro Leu ί Ser 1 5 10 15 lie Arg .<210〉 57 <21 1> 18 <2 12〉 PRT <213> B型肝炎病毒 <400〉 57 Lys Lys Lys Val Arg Val Val Thr Lys Val Val Thr Val Pro lie Ser 1 5 10 15 Val Asp <210〉 58 <21 1> 18 <212> PRT <213> B型肝炎病毒 <400〉 58 Lys Lys Lys Phe Phe Phe Phe Thr Lys Phe Phe Thr Phe Pro Val Ser 1 5 10 15 Phe Asp <210> 59 <21 1> 18 <212> PRT <213> B型肝炎病毒 <400> 59 Lys Lys Lys Leu Phe Leu Leu Thr Lys Leu Leu Thr Leu Pro Phe Ser 1 5 10 15 Leu Asp <210> 60 <21 1> 18 <212> PRT <213> B型肝炎病毒 -67- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐) 1252233 A7 • ' B7 五、發明説明（65 <400> 60

Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie lie Thr lie lie Thr Thr 15 10 15

Ik Asp <210〉 61 <211> 17 <212> PRT <213〉B型肝炎病毒 <400〉 61

Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie lie Thr lie lie Thr Thr 15 10 15 lie <210〉 62 <21 1> 18 <212> PRT <213〉B型肝炎病毒 <400〉 62

Lys Lys Lys Met Met Thr Met Thr Arg Met lie Thr Met lie Thr Thr 15 10 15 lie Asp <210〉 63 <21 1〉16 <212〉 PRT <213> B型肝炎病毒 <400> 63

Phe lie Thr Met Asp Thr Lys Phe Leu Leu Ala Ser Thr His lie Leu 15 10 15 <210> 64 <211> 19 <212> PRT <213〉B型肝炎病毒 <400〉 64 _-68- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（

Lys Lys Lys Phe lie Thr Met Asp Thr Lys Phe Leu Leu Ala Ser Thr 15 10 15

His He Leu <210> 65 <2 1 1> 42 <212> PRT <213>人類 <400> 65

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gin Lys 1 5 10 15

Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala lie lie 20 25 30

Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val lie Ala 35 40 <210> 66 <211> 28 <212〉 PRT <213>人類 <400> 66

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gin Lys 1 5 10 15

Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys 20 25 <210〉 67 <211〉 14 <212〉 PRT <213〉人類 <400> 67

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His 1 5 l〇

<210> 68 <211> 12 <212> PRT -69- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐） 裝 訂 線- 1252233 A7 B7 五、發明説明（67 ) <213> 人類 <400〉 68 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly T>r Glu Val 1 5 10 <2 10> 69 <21 1> 10 <212> PRT <213> 人類 <400> 69 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr 1 5 10 <210〉 70 <21 1> 45 <212> PRT <213> B型肝炎病毒 <400> 70 Asp Ala l Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gin Lys 1 5 10 15 Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys ;Gly Gly Phe Phe 20 25 30 Leu Leu Thr Arg lie Leu Thr lie Pro Gin Ser Leu Asp 35 40 45 <210> 71 <21 1> 30 <212> PRT <213〉 麻療病毒 <400> 71 Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Lys lie ! Ser lie Thr Glu 1 5 10 15 lie Lys Gly Val lie Val His Arg lie Glu Thr lie Leu Phe 20 25 30 <210> 72 -70- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 A7 B7 五、發明説明（68 ) <21i> 32 <212> PRT < 2 1 3〉麻癌"病毒 <400> 72

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val Lys lie Ser lie 15 10 15

Thr Glu lie Lys Gly Val lie Val His Arg lie Glu Thr lie Leu Phe 20 25 3〇 <210> 73 <211〉 34 <212> PRT <2 1 3>麻療病毒 <400> 73

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Lys lie 1 5 10 15

Ser lie Thr Glu lie Lys Gly Val lie Val His Arg lie Glu Thr lie 20 25 30

Leu Phe <210> 74 <211> 48 <212> PRT <213〉麻療病毒 <400> 74

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gin Lys 1 5 l〇 15

Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Lys lie Ser lie 20 25 30

Thr Glu lie Lys Gly Val lie Val His Arg lie Glu Thr He Leu Phe 35 40 45 <210> 75 <211> 34 <212> PRT <213>麻疹病毒 ____-71 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 裝 訂

線* 1252233 A7 B7 五、發明説明（69 <400> 75

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Lys lie 15 10 15

Ser He Ser Glu lie Lys Gly Val lie Val His Lys lie Glu Gly lie 20 25 30

Leu Phe <210〉 76 <211> 34 <212> PRT < 2 1 3 >麻療病毒 <400> 76

Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly T>r Glu Val His His Lys lie 15 10 15

Ser lie Thr Glu lie Arg Thr Val lie Val Thr Arg lie Glu Thr He 20 25 30

Leu Phe -72- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 x 297公釐)

Claims (1)

125223??1105087號專利申請案 益 中文申請專利範圍替換本(94年10月）⑶ 六、申請專利範圍 毕月時(更)正本 1· 一種大約20至100個胺基酸的肽免疫原，其包含： (i ) 一種選自含有序列辨識號碼1至6 4之組群的助手τ細 胞（Th)抗原決定基； (ii) 一個A冷1-42肽的N端片段，即SEQ ID NO:65，其 包含10至28個胺基酸殘基，而其中每一片段包含八 /3 1 - 4 2月太的胺基酸殘基1 ;和 (111)視需要一種含有至少一個將免疫原區段分開的胺基 酸之間隔片段。 2·根據申請專利範圍第1項的肽免疫原，其中的間隔片段係 選自包含一個胺基酸，Gly-Gly，（ α，ε -N)-Lys，和Pr〇-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro(序列辨識號碼：73)的組群。 3·根據申請專利範圍第2項的肽免疫原，其中的間隔片段是 Gly-Gly 〇 4. 根據申請專利範圍第2項的肽免疫原，其中的間隔片段是 ε - N - Lys 〇 5. 根據申請專利範圍第1項的肽免疫原，其中a y? 1-42肽的N 端片段係選自包含SEQ ID NO :66-6 9的組群。 6·根據申請專利範圍第2，3或4項中任一項的肽免疫原， 其中A冷卜42肽的N端片段係選自包含SEQ ID NO : 66-6 9的組群。 7. 根據申請專利範圍第1項的肽.免疫原，其中τ h係選自包 #SEQIDNO:1，3’4，5，6，7，8，9，20，38-4 0，4 7 - 5 1 和 5 2 - 5 4 的組群。 8. 根據申睛專利範圍第2，3或4項中任一項的肤免疫原， 72987-941003.DOC _ 1 _ 本紙張尺度適用中國國冬標準(CNS) A4規格(210X 297公董) A8 B8 C8 D8 1252233 申清專利範圍 其中 Th 係選自包含 SEQIDN0:1，3,4,5,6,7, 8 ’ 9 ’ 20，38-40，47-51 和 52-54 的組群。 9’根據申請專利範圍第1項的肽免疫原，其係選自包含s E Q ID NO : 70，71，72，73 和 74 的組群。 10.根據申請專利範圍第9項的肽免疫原，其係包含s E Q ID NO : 73。 11·根據申請專利範圍第9項的肽免疫原，其係包含s E Q ID NO : 74 〇 12.根據申請專利範圍第1項的肽免疫原，其係以下式之一項表 示！ 肤的 n端片段）-(B)0-(Th)m-X ;或 (A)n-(Th)m-(B)0-(A冷1_42肽的N端片段）-X; 其中 每一 A獨立為一個胺基酸； 每一 B 係選自 Gly-Gly，（ α，ε -N)-Lys，和 Pro-Pro-Xaa-Pro-Xaa-Pro 的連接基團； T h包含一個由助手τ細胞抗原決定基所組成之胺基酸 序列，其係選自包含S E Q ID Ν Ο : 1 · 6 4 ; (A/3L42胜肽的Ν端片段）是10到大約28個胺基酸殘 基，而其中每一片段包含Α冷^:肽#EFRH ; X是一個胺基酸的a - COOH或a -CONH2 ; η是從0至大約1 0 ; m是從1至大約4 ;而 〇是從0至大約1 0。 -2- 72987-941003.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) A8 B8 C8 D8 1252233 六、申請專利範圍 13.根據申請專利範圍第1 2項的肽免疫原，其中的間隔片段 是 Gly-Gly 〇 14·根據申請專利範圍第1 2項的肽免疫原，其中的間隔片段 是 β - N - Lys 〇 15. 根據申請專利範圍第1 2項的肽免疫原，其中a /3 bn肽的 N端片段係選自包含seQ ID NO ·· 66-69的組群。 16. 根據申請專利範圍第1 3或丨4項中任一項的肽免疫原，其 中AyShu肽的n端片段係選自包含SEQ ID NO : 66-69 的組群。 17·根據申請專利範圍第1 2項的肽免疫原，其中Th係選自包 含8£(^1〇购：1，3，4，5，6，7，8，9，20，38-4 〇，4 7 · 5 1 和 5 2 - 5 4 的組群。 18.根據申請專利範圍第1 3或1 4項中任一項的肽免疫原，其 中 Th 係選自包 SEQIDNO:l，3,4，5，6，7，8, 9，20，3 8-40，47-5 1 和 52-54 的組群。 19·根據申請專利範圍第15項的肽免疫原，其中Th係選自包 含 SEQ ID NO ·· 1，3，4，5，6，7，8，9，20，38 40，47-51 和 52-54 的組群。 2〇·根據申請專利範圍第16項的肽免疫原，其中Th係選自包 含 SEQ ID NO : 1，3，4，5，6，7，8，9，20，38_ 4 0，4 7 _ 5 1 和 5 2 - 5 4 的組群。 21· —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1項的肽免疫原和選自由明蓉、脂人素 植物惠素、I烯、L121 ，致乳化劑、單^酸脂 72987-941003.DOC - 3 -

A B c D 1252233 々、申請專利範圍 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 22. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第2項的肽免疫原和選自由明礬、脂合素、 植物皂素、鯊婦、L121 ，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 23. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第3項的肽免疫原和選自由明礬、脂合素、 植物皂素、鯊烯、L121 ，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酉旨80，QS21 ，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 24. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第4項的肽免疫原和選自由明礬、脂合素、 植物皂素、鯊晞、L121 ，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酉旨80，QS21 ，褐煤化物ISA51 ， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 25. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第5項的肽免疫原和選自由明礬、脂合素、 植物皂素、鯊烯、L121 ，致乳化劑、單磷酸脂 72987-941003.DOC - 4 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 8 8 8 8 A B c D 1252233 穴、申請專利祀圍 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 26. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第6項的肽免疫原和選自由明礬、脂合素、 植物皂素、鯊錦τ、L121 ，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酉旨80，QS21 ，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 27. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第7項的肽免疫原和選自由明礬、脂合素、 植物皂素、鯊烯、L121 ，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 28. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第8項的肽免疫原和選自由明蓉、脂合素、 植物皂素、鯊埽、L121 ，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酉旨80，QS21 ，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 29. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第9項的肽免疫原和選自由明礬、脂合素、 植物皂素、鯊烯、L121 ，致乳化劑、單磷酸脂 72987-941003.DOC - 5 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 bs 08 D8 六、申請專利範圍 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 30. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 0項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物皂素、鯊婦、L121，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 31. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 1項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物皂素、鯊烯、L121，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酉旨80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 32. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 2項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物皂素、鯊晞、L121，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酉旨80，QS21 ，褐煤化物ISA51 ， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 33. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 3項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物皂素、.鯊婦、L121，致乳化劑、單磷酸脂 -6- 72987-941003.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1252233 έ88 C8 D8 六、申請專利範圍 A(MPL)、聚山梨酸酉旨80，QS21 ，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 34. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 4項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物皂素、鯊締、L121，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 35. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 5項的肽免疫原和選自由明蓉、脂合 素、植物皂素、鯊晞、L121，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 36. —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 6項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物皂素、鯊婦、L121，致乳化劑、單f粦酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酉旨80，QS21，褐煤化物ISA51 ， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 37· —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 7項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物皂素、鯊烯、L121，致乳化劑、單磷酸脂 72987-941003.DOC - 7 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 έ88 C8 _____D8 _ 六、申請專利範園 A(MPL)、聚山梨酸醋80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 38· —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 8項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物皂素、鯊晞、L121，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 39· —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第1 9項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物皂素、鯊婦、L121，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酯80，QS21，褐煤化物ISA51， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 40· —種預防或治療阿茲海默氏症的之組合物，其包含根據 申請專利範圍第2 0項的肽免疫原和選自由明礬、脂合 素、植物惠素、鯊婦、L121，致乳化劑、單磷酸脂 A(MPL)、聚山梨酸酯80，qS2i，褐煤化物isa5i， ISA35，ISA206和ISA 720所組成之醫藥上可接受的佐劑 和/或載劑。 41· 一種根據申請專利範圍第21項之組合物於製備用於預防 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 42. —種根據申請專利範圍第22項之組合物於製備用於預防 -8- 72987-941003.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1252233χ、申請專利範園 8 8 8 8 A B c D 口療阿兹海默氏症之藥物的用途。 43. 、種根據申請專利範圍第2 3項之組合物於製備 j治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 44. 一種根據申請專利範圍第24項之組合物於製備 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 45·、種根據申請專利範圍第2 5項之組合物於製備 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 46·種根據申請專利範圍第2 6項之組合物於製備 或冶療阿茲海默氏症之藥物的用途。 47·種根據申請專利範園第2 7項之組合物於製備 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 48· 一種根據申請專利範圍第2 8項之組合物於製備 或冶療阿茲海默氏症之藥物的用途。 49·種根據申請專利範圍第2 9項之組合物於製備 或治療阿兹海默氏症之藥物的用途。 5〇· —種根據申請專利範圍第3 〇項之組合物於製備 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 51. —種根據申請專利範圍第3丨項之組合物於製備 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 52. —種根據申請專利範圍第3 2項之組合物於製備 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 53· 一種根據申請專利範圍第3 3項之組合物於製備 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 54· —種根據申請專利範圍第3 *項之組合物於製備 用於預防 用於預防 用於預防 用於預防 用於預防 用於預防 用於頂防 用於預防 用於預防 用於預防 用於預防 用於預防 72987-941003.DOC 9- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公爱） I2s2233

5或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 5 5. 一種根據申請專利範圍第3 5項之組合物於製備用於預防 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 56· 一種根據申請專利範圍第3 6項之組合物於製備用於預防 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 57· 一種根據申請專利範圍第3 7項之組合物於製備用於預防 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 58. 一種根據申請專利範圍第3 8項之組合物於製備用於預防 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 S9· 一種根據申請專利範圍第3 9項之組合物於製備用於預防 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 6〇. 一種根據申請專利範圍第4〇項之組合物於製備用於預防 或治療阿茲海默氏症之藥物的用途。 61· 一種根據申請專利範圍第2 1項之組合物於製備用於生產 對於可溶性Α Θ肤和從其所造成之I自組織斑塊具有交叉反 應活性之八点丨-乜肽之抗體的用途。 62· —種根據申請專利範圍第22項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A 0肽和從其所造成之腦組織斑槐具有交叉反 應活性之A /?丨-42肽之抗體的用途。 63. —種根據申請專利範圍第2 3項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A /3肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之A/3 h42肽之抗體的用途。 64· —種根據申請專利範圍第2 4項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A /3肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 -10- 72987-941003.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1252233 S C8 ____D8 六、申請專利範圍 " ' " 應活性之A /5卜42肽之抗體的用途。 6 5 · —種根據申請專利範圍第2 5項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A石肤和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之A /^-42肽之抗體的用途。 66. —種根據申請專利範圍第26項之組合物於製備用於生產 對於可溶性AyS肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之A /3丨_42肽之抗體的用途。 67. —種根據申請專利範圍第27項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A /3肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之肽之抗體的用途。 68· —種根據申請專利範圍第2 8項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A0肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之A 0丨_42肽之抗體的用途。 69· —種根據申請專利範圍第29項之組合物於製備用於生產 對於可;春性A /5肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之A Θ丨-42肽之抗體的用途。 70· —種根據申請專利範圍第3 〇項之組合物於製備用於生產 對於可溶性Α Θ肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之A/3 1-42肽之抗體的用途。 71· —種根據申請專利範圍第3 1項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A々肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之A ^丨-乜肽之抗體的用途。 72· —種根據申請專利範圍第3 2項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A占肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 -11 - 72987-941003.DOC 本紙張尺度適用巾國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公爱) A B c D I252233 、申請專利範圍 應活性之A /3 M2肽之抗體的用途。 73. -種根據申請專利範圍第33項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A /5肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之A /5丨-42肽之抗體的用途。 、人 74·:種根據中請專利範圍第34項之組合物於製備用於生產 對於可落性A /3肽和從其所造成之腦組織斑塊具有六叉反 應活性之A /3 b42肽之抗體的用途。 75. -種根據申請專利範圍第35項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A点肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之AyS i_42肽之抗體的用途。 、 76. -種根據中請專利範圍第36項之组合物於製備用於生產 對於可溶性A錄和&其所造成之腦、板織斑士鬼具有交叉反 應活性之A /5丨·42肽之抗體的用途。 、人 ：種根據申請專利範圍第37項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A沒肽和從其所造成之腦组織斑塊具|交叉反 應活性之A /3丨_42肽之抗體的用途。 78. -種根據申請專利範圍第38項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A/3肽和從其所造成之腦組織斑壤具有交叉反 應活性之A冷肽之抗體的用途。 79. -種根據申請專利範圍第39項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A万肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 應活性之A /5 i -η肽之抗體的用途。 80. -種根據申請專利範圍第4〇項之組合物於製備用於生產 對於可溶性A/3肽和從其所造成之腦組織斑塊具有交叉反 -12- 72987-941003.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公奢) 1252233 bs C8 D8 々、申請專利範圍 應活性之A /3^42肽之抗體的用途。 -13- 72987-941003.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)