KR20050118669A

KR20050118669A - 가용성 ａ-베타에 대한 항체를 생성하기 위한 능동 면역화

Info

Publication number: KR20050118669A
Application number: KR1020057014123A
Authority: KR
Inventors: 테드 예드녹; 니키 바스퀘즈; 피터 에이 슈베르트
Original assignee: 뉴랄랩 리미티드; 와이어쓰
Priority date: 2003-02-01
Filing date: 2004-01-31
Publication date: 2005-12-19
Also published as: PL378571A1; BRPI0407058A; RU2390350C2; AU2004209981A1; HRP20050670A2; UA87453C2; ECSP055939A; NO20053862D0; CN1745175A; ES2545765T3; EP1594969A4; MXPA05008156A; WO2004069182A3; EP1594969B1; AU2004209981B2; NO20053862L; CA2513722A1; ZA200505782B; CR7922A; US20080279873A1

Abstract

본 발명은 알츠하이머병을 예방 또는 치료하는 데 유용한 방법을 제공한다. 상기 방법은 A-베타의 중심 또는 C-말단 영역으로부터의 A-베타 단편을 투여하는 것을 포함한다. 상기 단편은 플라크에는 결합하지 않고 가용성 A-베타에 특이적으로 결합하는 항체의 폴리클로날 혼합물을 유도할 수 있다. 항체는 가용성 Aβ로부터 환자 뇌 속에 A-베타의 아밀로이드 침착물이 형성되는 것을 억제하여 질환을 예방하거나 치료할 수 있다. 항체의 고 역가를 생성하는 능력으로 인해 단편 A-베타 15-24 및 이의 5∼10개 인접 아미노산의 부분단편이 바람직한 면역원이다.

Description

가용성 Ａ-베타에 대한 항체를 생성하기 위한 능동 면역화{ACTIVE IMMUNIZATION TO GENERATE ANTIBODIES TO SOLUBLE A-BETA}

관련 출원에 대한 상호 참고

본 출원은 35 U.S.C. § 119(e) 하에 2003년 2월 1일에 출원된 미국 출원번호 제60/444,150호에 대하여 우선권을 주장하는 출원으로서, 모든 목적에 대해 그 전문이 참고 인용된다.

기술분야

본 발명은 면역학 및 의학 기술 분야에 속한다.

알츠하이머병(AD)은 노인성 치매의 원인이 되는 진행성 질환이다. 개괄적인 내용은 문헌 [Selkoe, TINS 16, 403-409(1993)]; [Hardy et al., WO 92/13069]; [Selkoe, J. Neuropathol. Exp. Neurol. 53, 438-447(1994)]; [Duff et al., Nature 373, 476-477(1995)]; [Games et al., Nature 373, 523(1995)]을 참조한다. 대략적으로, 이 질환은 2개의 범주로 나뉜다: 노년기(65세 이상)에 발생하는 지발성, 및 노년기 이전, 즉 35∼60세에 잘 발생하는 조발성. 상기 2가지 유형의 질환에서, 병리는 동일하지만, 어린 나이에 발병하는 경우 이상증세가 더 심각하게 퍼지는 경향이 있다. 이 질환은 뇌에 있어서 두 가지 유형 이상의 병변, 노인반(노인성 플라크) 및 신경원섬유 농축체가 나타나는 것이 특징이다. 노인반은 뇌 조직 단편을 현미경으로 분석하여 볼 수 있는 중앙에 세포외 아밀로이드 침착물을 가진 최대 150 ㎛ 직경의 비조직적인 신경망 영역이다. 신경원섬유 농축체는 서로 쌍으로 꼬인 2개의 필라멘트로 구성되는 미소관과 회합된 tau 단백질의 세포내 침착물이다.

플라크의 주성분은 Aβ 또는 β-아밀로이드 펩티드라 불리는 펩티드다. Aβ 펩티드는 아밀로이드 전구체 단백질(APP)로 불리는 전구체 단백질의 39∼43개 아미노산의 내부 단편이다. APP 단백질 내 여러 돌연변이가 알츠하이머병의 존재와 서로 연관지어졌다. 예를 들어, 문헌 [Goate et al., Nature 349, 704)(1991)(발린⁷¹⁷ → 이소루신)]; [Chartier Harlan et al. Nature 353, 844(1991))(발린⁷¹⁷ → 글리신)]; [Murrell et al., Science 254, 97(1991)(발린⁷¹⁷ → 페닐알라닌)]; [Mullan et al., Nature Genet. 1, 345(1992)(이중 돌연변이 변화: 리신⁵⁹⁵-메티오닌⁵⁹⁶ → 아스파라긴¹⁹⁵-루신⁵⁹¹)]을 참조한다. APP에서 Aβ로의 프로세싱 증가 또는 변형, 특히 APP에서 Aβ 장형(long form)(즉, Aβ1-42 및 Aβ1-43)으로의 프로세싱량 증가에 의해 상기 돌연변이가 알츠하이머병을 야기하는 것으로 생각된다. 다른 유전자(예, 프리세닐린(presenilin) 유전자, 즉 PS1 및 PS2)의 돌연변이는 APP의 프로세싱에 간접적으로 영향을 주어, 장형 Aβ의 양을 증가시키는 것으로 생각된다(Hardy, TINS 20, 154(1997) 참조). 이러한 관찰은 Aβ, 특히 이의 장형이 알츠하이머병의 원인 요소임을 나타낸다.

β-아밀로이드 펩티드(Aβ)에서 유래된 면역원으로 AD의 유전자도입(transgenic) 마우스 모델을 면역화하면, 마우스 뇌 속의 아밀로이드 플라크 형성을 억제하고/하거나 제거하는 항체 반응이 유도된다(Schenk et al., (1999) Nature 400, 173-177; Janus et al., (2000) Nature 408, 979-982, Morgan et al., (2000) Nature 408, 982-985, Sigurdsson et al., (2001) Am. J. Pathol. 159, 439-447. 1-4). Aβ에 대한 항체를 투여하는 수동 면역화도 유사한 효과를 유도하였다. 소교 세포 및/또는 대식세포에 의한 항체-매개성, Fc-의존성 식작용이, 존재하는 아밀로이드 플라크를 제거하기 위한 한 기작인 것으로 제안되었다(Bard et al., (2000) Nat. Med., 6, 916-919). 이 제안은 말초 기관에 투여된 Aβ에 대한 특정 항체가 유전자도입 마우스의 CNS로 진입하여, 아밀로이드 플라크를 형성하고, 플라크 제거를 유도한다는 결과에 기초한다. 또한, 플라크 제거 활성을 측정하기 위한 PDAPP 또는 알츠하이머병(AD) 뇌의 절편을 사용한 생체내 및 생체외 분석에서 효과가 있는 것으로 나타난 항체들 간에는 밀접한 상관성이 있는 것으로 보고되었다. 소교 세포 상의 Fc 수용체는 생체외 분석에서 제거 반응을 일으켰다. 그러나, 항체 효능을 Fc 상호작용과 무관한 기작으로 생체내에서도 얻을 수 있다는 것이 또한 보고되었다(Bacskai et al., (2002) J. Neurosci., 22, 7873-7878). 아밀로이드 플라크를 인식할 수 없는 Aβ의 중앙부에 대해 유도된 항체는 가용성 Aβ에 결합하고 플라크 침착을 감소시킨다고 보고되었다(DeMattos et al., (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98, 8850-8855). 상기 항체를 이용한 단기 치료가 아밀로이드 침착량(amyloid burden)에 영향을 주지 않고 목적 인식 역할의 수행을 개선시킨다는 것 또한 보고되었다(Dodart et al., (2002) Nat. NeuroSci., 5, 452-457).

본 출원은 2000년 5월 26일에 출원된 WO 00/72880, 1998년 11월 30일에 출원된 WO 99/27944, 1997년 12월 2일에 출원된 미국 출원 제60/067,740호, 1998년 4월 7일에 출원된 미국 출원 제60/080,970호 및 1998년 11월 30일에 출원된 미국 출원 제09/201,430호와 관련이 있는 것으로, 상기 각 출원은 모든 목적에 대해 그 전문이 참고 인용된다.

도 1A-C. Aβ의 N-말단 단편을 이용한 면역화로 생성된 항체는 아밀로이드 플라크에 결합한다. 도 1A. Aβ1-42의 다양한 도메인을 포함하는 펩티드(서열 번호 1)(난알부민으로부터 유도된 T 세포 에피토프에 인접하여 합성됨)를 PDAPP 마우스를 면역화하는 데 사용하였다. 리버스머(reversemer) Aβ5-1(서열 번호 2)은 음성 대조군으로 사용하였다. 도 1B. 응집된 Aβ1-42에 대한 ELISA 역가는 Aβ1-5 그룹의 연구보다 Aβ5-11 및 Aβ5-24 그룹의 연구에서 모두 유의적으로 더 높았다(각각 1:14,457, p < 0.01 및 1:12,257, p < 0.05 대 1:3,647; ANOVA 검정 후 post hoc Tukey 검정 수행). 도 1C. 미처리 PDAPP 마우스 뇌로부터의 비고정된 동결 절편을 Aβ5-1, Aβ3-9, Aβ5-11 또는 Aβ15-24로 면역화된 마우스 혈청에 노출시켰다(역가는 염색에 대해 1:1000으로 표준화함). Aβ15-24에 대한 항체는 아밀로이드 플라크에 결합하지 않았다. 스케일 바(scale bar)는 500 ㎛를 나타낸다.

도 2A-C. 항체에 의한 가용성 Aβ1-42의 포착은 감소된 아밀로이드 침착량 또는 신경 병리와 관련되지 않는다. 도 2A. 방사능면역분석법에서 방사능 표지된 가용성 Aβ1-42를 포착하는 능력에 대해 Aβ의 단편으로 면역화된 마우스로부터의 혈청을 검사하였다. Aβ15-24로 면역화된 모든 동물로부터의 혈청은, Aβ1-5 그룹 27% 및 Aβ3-9 그룹 3%와 비교하여, 가용성 Aβ1-42를 포착할 수 있었다(한 혈청 샘플은 역가가 1:1,350 이상이고, 정확한 역가는 측정하지 않음). 도 2B-C. 아밀로이드 침착량(도 2B) 및 신경 병리(도 2C)는 실험 목적을 알리지 않은 현미경 사용자에 의한 이미지 분석으로 평가하였다. 값은 Aβ5-1 그룹(음성 대조군 리버스머 펩티드)의 평균에 대한 백분율로 나타낸다. Aβ5-11 그룹은 다른 그룹과는 별도로 평가하지만, 내부 기준으로서 동일한 음성 대조군 그룹과 함께 평가하였다(제2 Aβ5-1 리버스머 세트, 왼쪽). 아밀로이드 침착량은 Aβ1-5, Aβ3-9 및 Aβ5-11 그룹에서 유의적으로 감소하였다(p < 0.001). 바는 중간값을 나타내고, 가로 파선은 대조군 수준을 나타낸다. 신경 침착량은 Aβ3-9 및 Aβ5-11 그룹에서 유의적으로 감소하였다(p < 0.05). Aβ15-24 그룹에 의한 면역화에 의해 어떤 종점도 유의적으로 변경되지 않았다. 통계 분석은 제곱근 변환(비-모수적 분포를 표준화하기 위함)으로 수행하고, ANOVA로 분석하였다. 이어서 Dunnett 검정을 사용하여 다중 그룹 Aβ1-5, Aβ3-9, Aβ15-24 그룹과 이의 Aβ5-1 대조군을 비교하고, Aβ5-11 그룹과 이의 상응하는 Aβ5-1 리버스머 대조군에 대해서는 Mann-Whitney로 비교하였다.

Ｉ. 개요

본 발명은 Aβ의 중심 또는 C-말단 영역으로부터의 단편을 사용하여 아밀로이드 침착물과 관련된 질환을 방지하고, 예방하거나 치료하는 방법을 제공한다. 상기 단편은 플라크에 결합하지 않고 가용성 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체의 폴리클로날 혼합물을 유도할 수 있다. 항체는 가용성 Aβ로부터 환자 뇌 속에 Aβ의 아밀로이드 침착물이 형성되는 것을 억제하여, 질환을 예방하거나 치료할 수 있다. 항체의 고 역가를 생성하는 능력으로 인해 단편 Aβ15-24 및 이의 5∼10개 인접 아미노산의 부분단편이 바람직한 면역원이다.

Ⅱ. 정의

아미노산 치환을 보존성 또는 비보존성으로 분류할 목적으로, 아미노산을 다음과 같이 그룹화한다: 그룹 Ｉ(소수성 측쇄): 노르루신, met, ala, val, leu, ile; 그룹 Ⅱ(중성 친수성 측쇄): cys, ser, thr; 그룹 Ⅲ(산성 측쇄): asp, glu; 그룹 Ⅳ(염기성 측쇄): asn, gln, his, lys, arg; 그룹 Ⅴ(쇄 배향에 영향을 주는 잔기): gly, pro; 및 그룹 Ⅵ(방향족 측쇄): trp, tyr, phe. 보존성 치환은 동일한 클래스의 아미노산 간의 치환을 포함한다. 비보존성 치환은 상기 클래스 중 하나의 구성원을 다른 클래스의 구성원과 교환하는 것으로 구성된다.

용어 "모든-D(all-D)"는 ≥ 75%, ≥ 80%, ≥ 85%, ≥ 90%, ≥ 95% 및 100% D-배위 아미노산을 가지는 펩티드를 의미한다.

용어 "제제"는 약리학적 활성을 가지거나 가질 수 있는 화합물을 지칭하는 데 사용된다. 제제는 약물로 알려진 화합물, 약리학적 활성은 확인하였지만 추가 치료 평가가 진행 중인 화합물, 및 약리학적 활성에 대해 스크리닝된 집합소 및 라이브러리의 구성원인 화합물을 포함한다.

통상적으로 본 발명의 치료 제제는 바람직하지 않은 오염물질이 실질적으로 섞이지 않은 것이다. 이는 제제가 통상적으로 약 50 w/w(중량/중량)% 이상의 순도를 지닐 뿐 아니라 간섭 단백질 및 오염물질이 실질적으로 없음을 의미한다. 때때로 제제는 순도가 약 80 중량/중량% 이상, 더 바람직하게는 90 또는 약 95 중량/중량% 이상이다. 그러나, 종래의 단백질 정제 기법을 사용하여, 99 중량/중량% 이상의 균질한 펩티드를 얻을 수 있다. 본 발명의 치료 제제로 아밀로이드 침착물과 관련된 질환을 방지하고, 예방하거나 치료할 수 있다.

2개의 실체 사이의 특이적 결합은, 이 실체가 대조군(예, 무관한 항원)에 대한 실체의 친화력 또는 다른 항원에 대한 항체의 친화력보다 10배, 100배 또는 1000배 이상 더 큰, 서로에 대한 상호 친화력을 가짐을 의미한다. 2개의 실체의 서로에 대한 상호 친화력은 대개 10⁷, 10⁸, 10⁹ M^-1 또는 10¹⁰ M^-1 이상이다. 10⁸ M^-1 이상의 친화력이 바람직하다. Aβ 내의 에피토프에 대한 폴리클로날 항체의 특이적 결합은, Aβ의 다른 에피토프에는 결합하지 않고 Aβ의 한 에피토프에 특이적으로 결합하는 폴리클로날 항체 집단 중의 항체를 의미한다.

용어 "항체" 또는 "면역글로불린"은 완전한(intact) 항체 및 이의 결합 단편을 포함하는 것으로 사용된다. 통상적으로, 별개의 중쇄, 경쇄 Fab, Fab', F(ab')2, Fabc 및 Fv를 비롯하여 완전한 항체로부터 유도된 단편들은 항원 단편에 대한 특이적 결합에 대해 이들이 유도된 완전한 항체와 경쟁한다. 단편은 재조합 DNA 기법, 또는 완전한 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 분리로 생산한다. 용어 "항체"는 또한 다른 단백질에 화학적으로 접합되거나 또는 다른 단백질과의 융합 단백질로서 발현되는 하나 이상의 면역글로불린 쇄를 포함한다. 용어 "항체"는 또한 이특이성(bispecific) 항체를 포함한다. 이특이성 또는 이작용성(bifunctional) 항체는 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 가지는 인공 하이브리드 항체다. 이특이성 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 비롯한 다양한 방법으로 생산할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321 (1990)]; [Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)]을 참조한다.

β-아밀로이드 펩티드, 또는 A4 펩티드로도 알려진 Aβ(미국 특허 제4,666,829호; Glenner & Wong, Biochem. Biophys. Res. Commun., 120, 1131 (1984) 참조)는 39∼43개 아미노산의 펩티드로, 이는 알츠하이머병의 특징적인 플라크의 주성분이다. Aβ는 다양한 자연 발생적 형태를 가진다. Aβ의 본래 인간형은 Aβ39, Aβ40, Aβ41, Aβ42 및 Aβ43으로 칭한다. 이들 펩티드의 서열 및 APP 전구체에 대한 이들의 관계는 문헌 [Hardy et al., TINS 20, 155-158 (1997)]의 도 1에 예시되어 있다. 예를 들어, Aβ42는 하기 서열을 가진다:

H₂N-Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-OH(서열 번호 1).

Aβ41, Aβ40 및 Aβ39는 C-말단 끝에 각각 Ala, Ala-Ile 및 Ala-Ile-Val이 생략된 것이 Aβ42와 상이하다. Aβ43은 C-말단에 트레오닌 잔기가 존재하는 것이 Aβ42와 상이하다.

APP⁶⁹⁵, APP⁷⁵¹ 및 APP⁷⁷⁰은 각각 인간 APP 유전자에 의해 코딩된 695, 751 및 770 아미노산 잔기의 긴 폴리펩티드를 의미한다. 문헌 [Kang et al., Nature, 325, 773 (1987)]; [Ponte et al., Nature, 331, 525 (1988)]; 및 [Kitaguchi et al., Nature, 331, 530 (1988)]을 참조한다. 인간 아밀로이드 전구체 단백질(APP) 내의 아미노산은 APP770 동형체(isoform)의 서열에 따라 지정된 수이다. Aβ39, Aβ40, Aβ41, Aβ42 및 Aβ43과 같은 용어는 각각 아미노산 잔기 1-39, 1-40, 1-41, 1-42 및 1-43을 포함하는 Aβ 펩티드를 뜻한다.

탈응집된 Aβ 또는 이의 단편은 단량체 펩티드 단위를 의미한다. 탈응집된 Aβ 또는 이의 단편은 일반적으로 가용성으로, 자체 응집되어 가용성 올리고머를 형성할 수 있다. Aβ 및 이의 단편의 올리고머는 대개 가용성으로, 주로 알파-나선형 또는 무작위 코일형으로 존재한다. 단량체 Aβ를 제조하기 위한 한 방법은 초음파 분해로 순수 DMSO 중에 동결건조된 펩티드를 용해하는 것이다. 생성된 용액은 원심분리하여 임의의 불용성 미립자를 제거한다. 응집된 Aβ 또는 이의 단편은 Aβ 또는 이의 면역원성 단편의 올리고머를 의미하는 것으로, 단량체 단위는 비공유 결합에 의해 서로 결합되고, 불용성 베타-시트 어셈블리로 회합된다. 응집된 Aβ 또는 이의 단편은 또한 미소섬유 중합체를 의미한다. 미소섬유는 대개 불용성이다. 몇몇 항체는 가용성 Aβ 또는 이의 단편, 또는 응집된 Aβ 또는 이의 단편에 결합한다. 몇몇 항체는 가용성 Aβ 또는 이의 단편과 응집된 Aβ 또는 이의 단편 모두에 결합한다. 몇몇 항체는 플라크에는 결합하지 않고 가용성 Aβ에 결합한다.

"항원"은 항체가 특이적으로 결합하는 실체이다.

용어 "에피토프" 또는 "항원 결정인자"는 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 뜻한다. B-세포 에피토프는 단백질의 3차 폴딩(folding)에 의해 병렬된 인접 아미노산 또는 비인접 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 인접 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 통상적으로 변성 용매에 노출 시에 유지되지만, 3차 폴딩으로 형성된 에피토프는 통상적으로 변성 용매로 처리하면 잃게 된다. 에피토프는 통상적으로 독특한 공간 배위로 3개 이상, 대개 5개 또는 8∼10개 이상의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간 배위를 측정하는 방법은, 예를 들어 x-선 결정학적 분석 및 2차원 핵자기공명을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, Glenn E. Morris, Ed. (1996)]을 참조한다. 동일한 에피토프를 인식하는 항체는 표적 항원에 대해 한 항체가 다른 항체의 결합을 막는 능력을 보여주는 단순한 면역분석법으로 확인할 수 있다. T-세포는 CD8 세포의 경우 약 9개의 아미노산, 또는 CD4 세포의 경우 약 13∼15개의 아미노산의 연속 에피토프를 인식한다. 에피토프를 인식하는 T 세포는, 에피토프에 반응하여 자극된 T 세포(Burke et al., J. Inf. Dis., 170, 1110-19 (1994)), 항원-의존성 사멸(세포독성 T 림프구 분석, Tigges et al., J. Immunol., 156, 3901-3910) 또는 사이토카인 분비에 의한, ³H-티미딘 혼입량으로 측정된 항원-의존성 증식을 측정하는 시험관내 분석으로 확인할 수 있다.

Aβ의 N-말단 에피토프는 잔기 1-11을 가지는 에피토프를 의미한다. C-말단 영역 내의 에피토프는 잔기 29-43 내의 에피토프를 의미하고, 중심 영역 내의 에피토프는 잔기 12-28을 가지는 에피토프를 의미한다.

용어 "면역학적" 또는 "면역" 반응은 수용(recipient) 환자에서 아밀로이드 펩티드에 대해 유도된 이로운 체액(항체 매개성) 및/또는 세포(항원-특이성 T 세포 또는 이의 분비 생성물로 매개됨) 반응의 발생이다. 상기 반응은 면역원을 투여하여 유도한 능동 반응, 또는 항체 또는 자극된 T-세포를 투여하여 유도한 수동 반응일 수 있다. 세포 면역 반응은 항원-특이성 CD4⁺ T 헬퍼(helper) 세포 및/또는 CD8⁺ 세포독성 T 세포를 활성화시키기 위해 클래스 Ⅰ 또는 클래스 Ⅱ MHC 분자와 회합된 폴리펩티드 에피토프의 제시에 의해 유도된다. 반응은 또한 선천적 면역성의 단핵구, 대식세포, NK 세포, 호염구, 수상돌기 세포, 성상세포, 소교 세포, 호산구 또는 다른 성분의 활성화를 포함할 수 있다. 세포-매개성 면역 반응의 존재는 증식 분석(CD4⁺ T 세포) 또는 CTL(세포독성 T 림프구) 분석으로 결정할 수 있다(Burke, supra, Tigges, supra 참조). 면역원의 보호 또는 치료 효과에 대한 체액 및 세포 반응의 상대적 기여도는 면역화된 동계의 동물로부터 항체 및 T-세포를 별도로 분리하고, 제2 피험체에서 보호 또는 치료 효과를 측정하여 구별할 수 있다.

"면역원성 제제" 또는 "면역원"은 선택적으로 면역보조제와 함께 포유동물에 투여 시 그 자체에 대해 면역 반응을 유도할 수 있다.

용어 "네이키드(naked) 폴리뉴클레오티드"는 콜로이드성 물질과 복합체화되지 않는 폴리뉴클레오티드를 뜻한다. 네이키드 폴리뉴클레오티드는 플라스미드 벡터대로 종종 클로닝된다.

용어 "면역보조제(adjuvant)"는 항원과 함께 투여 시 항원에 대한 면역 반응을 증가시키지만, 단독 투여 시 항원에 대한 면역 반응을 생성하지 않는 화합물을 뜻한다. 면역보조제는 림프구 보충, B 및/또는 T 세포의 자극 및 대식세포 자극을 비롯한 다양한 기작에 의해 면역 반응을 증강시킬 수 있다.

용어 "환자"는 예방 또는 치료적 처치를 받는 인간 및 다른 포유동물 피험체를 포함한다.

항체 간의 경쟁은 시험 대상의 면역글로불린이 Aβ와 같은 공통 항원에 대한 기준 항체의 특이적인 결합을 억제하는 분석으로 측정한다. 경쟁적 결합 분석의 다양한 유형이 알려져 있는데, 예를 들어, 고상 직접 또는 간접 방사능면역분석법(RIA), 고상 직접 또는 간접 효소 면역분석법(EIA), 샌드위치 경쟁 분석법(Stahli et al., Methods in Enzymology, 9: 242-253 (1983) 참조); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA(Kirkland et al., J. Immunol. 137: 3614-3619 (1986) 참조); 고상 직접 표지 분석법, 고상 직접 표지 샌드위치 분석법(Harlow and Lane, "Antibodies, A Laboratory Manual," Cold Spring Harbor Press (1988) 참조); I-125 표지를 사용한 고상 직접 표지 RIA(Morel et al., Molec. Immunol. 25(1): 7-15 (1988) 참조); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA(Cheung et al., Virology, 176: 546-552 (1990) 참조); 및 직접 표지 RIA(Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol., 32: 77-82 (1990) 참조)이다. 통상적으로, 상기 분석법은 비표지된 시험 면역글로불린 및 표지된 기준 면역글로불린을 가진 고체 표면 또는 세포에 정제된 항원을 결합시켜 사용하는 것을 포함한다. 경쟁적 억제는 시험 면역글로불린의 존재 시 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정하여 측정한다. 대개, 시험 면역글로불린은 과량 존재한다. 경쟁적 분석법으로 확인된 항체(경쟁 항체)는 기준 항체와 동일한 에피토프 결합하는 항체, 및 입체적 방해가 일어나도록 기준 항체가 결합하는 에피토프에 충분히 근접한 인접 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다. 대개, 경쟁 항체가 과량 존재하는 경우, 공통의 항원에 대한 기준 항체의 특이적 결합을 50% 또는 75% 이상 억제할 것이다.

가용성 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체는 10⁷ M^-1 이상의 친화력으로 가용성 Aβ에 결합하는 항체를 의미한다. 몇몇 항체는 10⁸ M^-1∼10¹¹ M^-1의 친화력으로 가용성 Aβ에 결합한다.

플라크에는 특이적으로 결합하지 않고 가용성 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체는, 상기한 가용성 Aβ에 결합하고, 생전 알츠하이머 환자 또는 유전자도입 동물 모델의 사체로부터의 플라크(즉, 응집된 β-플리티드(pleated) 시트 형태의 Aβ)에 대한 특이적 결합 친화력이 적어도 10배 이상, 대개 적어도 100배 더 낮은 항체를 의미한다. 예를 들어, 상기 항체는 10⁹ M^-1의 친화력으로 가용성 Aβ에 결합하고, 10⁷ M^-1 미만의 친화력으로 플라크에 결합할 수 있다. 플라크에 대한 상기 항체의 친화력은 대개 10⁷ 또는 10⁶ M^-1 미만이다. 상기 항체는, 실시예 부분에서 기재되는 바와 같이, 항체를 플라크와 접촉시키고 형광 표지로 결합을 분석하였을 때의, 관계없는 대조군 항체(예, 항체 또는 리버스머 Aβ 펩티드에 대한 폴리클로날 항체의 혼합물)에 상대적인 형광 강도에 의해 추가로 또는 대안으로 정의된다. 플라크에 결합하지 않고 가용성 Aβ 펩티드에 결합하는 항체의 형광 강도는 대조군 항체의 형광 강도의 5배 내, 때때로 2배 내에 있으며, 때때로 실험 오차 범위 내에서 구별할 수 없는 경우도 있다.

하나 이상의 열거된 성분을 "포함하는" 조성물 또는 방법은 구체적으로 언급하지 않은 다른 성분을 포함할 수 있다. 예를 들어, Aβ 펩티드를 포함하는 조성물은 분리된 Aβ 펩티드 및 더 큰 폴리펩티드 서열의 한 성분으로서의 Aβ 펩티드 둘 다를 포함한다.

Ⅲ. 능동 면역화를 위한 Aβ 펩티드

본 발명의 방법에 사용하기 위한 Aβ 펩티드는 인간 환자 또는 동물에 투여 시 Aβ의 잔기 1-11 내의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 생성하지 않고, Aβ의 잔기 12-43 사이의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 생성하는 면역원성 펩티드이다. 잔기 12-43 사이의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 Aβ의 플라크에는 결합하지 않고 가용성 Aβ에 특이적으로 결합한다. 이들 항체 유형은 환자 또는 모델의 뇌 속의 Aβ 침착물의 플라크에는 특이적으로 결합하지 않고 환자 또는 모델 아밀로이드의 순환계 중의 가용성 Aβ에 특이적으로 결합할 수 있다. 가용성 Aβ에 대한 항체의 특이적인 결합은 Aβ가 플라크로 혼입되는 것을 억제하여, 환자 체내에 플라크가 발생하는 것을 억제하거나, 치료제를 투여하기 전 상기 플라크가 이미 발생했다면 플라크의 크기 또는 빈도가 더 증가하는 것을 억제한다.

바람직하게는, 투여된 Aβ의 단편은 이 단편에 대한 T-세포 반응을 생성하는 에피토프가 없다. 일반적으로, T-세포 에피토프는 10개 이상의 인접 아미노산이다. 그러므로, Aβ의 바람직한 단편은 5-10개, 바람직하게는 7-10개 크기의 인접 아미노산이다; 즉, T-세포 반응을 생성하지 않고 항체 반응을 일으키기에 충분한 길이임. T-세포 에피토프가 없는 것이 바람직한데, 이는 이들 에피토프가 단편의 면역원성 활성에 필요하지 않으며, 일부 환자 집단에서는 바람직하지 않은 염증 반응을 일으킬 수 있기 때문이다(Anderson et al., (2002) J. Immunol. 168, 3697-3701; Senior (2002) Lancet Neurol. 1, 3). 몇몇 방법에서, 단편은 Aβ13-28, 17-28, 25-35, 35-40, 33-42 또는 35-42 이외의 단편이다. 대부분의 T-세포 에피토프는 Aβ의 아미노산 14-30 내에 존재한다.

단편 Aβ15-24 및 이의 7-9개 인접 아미노산의 부분단편이 바람직한데, 이는 이들 펩티드가 Aβ 펩티드에 대한 높은 면역원성 반응을 일관되게 생성하기 때문이다. 이들 단편은 Aβ15-21, Aβ16-22, Aβ17-23, Aβ18-24, Aβ19-25, Aβ15-22, Aβ16-23, Aβ17-24, Aβ18-25, Aβ15-23, Aβ16-24, Aβ17-25, Aβ18-26, Aβ15-24, Aβ16-25 및 Aβ15-25를 포함한다. 예를 들어, Aβ15-21이란 명칭은, Aβ의 잔기 15-21은 포함하지만 Aβ의 다른 잔기는 결핍된 단편을 나타낸다. 또한 5∼10개, 바람직하게는 7∼10개 인접 아미노산의 Aβ42 또는 43의 C-말단 단편이 바람직하다. 이들 단편은 말단-특이적 항체를 포함하는 항체 반응을 생성할 수 있다. 이들 항체는 Aβ39-41에는 특이적으로 결합하지 않고 Aβ42 및 Aβ43에 특이적으로 결합한다는 점에서 유리하다. 이들 항체는 플라크에는 결합하지 않고 가용성 Aβ에 결합한다.

몇몇 방법에서, Aβ의 중심 또는 C-말단 영역으로부터의 단편은 N-말단 영역으로부터의 단편을 투여하는 것도 포함하는 투약법(regimen)으로 투여한다. 일반적으로, 상기 단편은 아밀로이드 플라크에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하고, 식세포를 통한 아밀로이드 플라크의 제거를 유도한다. 상기 반응은 존재하는 Aβ 침착물을 제거하는 데 특히 유용하다. 그러나, 일단 침착물이 제거되면, 가용성 Aβ에 대한 항체를 유도하기 위해 Aβ의 중심 또는 C-말단 영역으로부터의 단편을 이용한 추가 치료가 특정 환자에서 염증 부작용의 위험 없이 Aβ의 추가 침착을 방지하는 데 유용하다. Aβ의 잔기 1-3에서 시작하고 Aβ의 잔기 7-11에서 끝나는 N-말단 단편이 특히 바람직하다. 예시적인 N-말단 단편은 Aβ1-5, 1-6, 1-7, 1-10, 3-7, 1-3 및 1-4를 포함한다.

달리 나타내지 않는다면, Aβ로 지칭되는 것은 상기 나타낸 인간 천연 아미노산 뿐 아니라, 대립유전자 변이체, 종(species) 변이체 및 유도된 변이체를 비롯한 유사체를 포함한다. Aβ의 유사체는 천연 Aβ 펩티드(예, Aβ42)와 특이적으로 결합하는 항체를 유도한다. Aβ의 유사체는 통상적으로 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 위치 변화에 의해 최대 30%의 아미노산 위치에서 자연 발생적 펩티드와 상이하다. 천연 아미노산 잔기 각각의 결실 또는 치환은 위치 변화로 간주되며, 치환없이 잔기가 삽입된 것 역시 위치 변화로 간주된다. 아미노산 치환은 종종 보존성 치환이다.

달리 나타내지 않는다면, Aβ 단편으로 지칭되는 것은 상기 나타낸 인간 천연 아미노산 서열의 단편 뿐 아니라 대립유전자 변이체, 종 변이체 및 유도된 변이체를 포함한다. Aβ 단편의 유사체는 천연 Aβ 펩티드(예, Aβ42)와 특이적으로 결합하는 항체를 유도한다. Aβ 단편의 유사체는 통상적으로 아미노산 위치의 최대 약 30%까지 자연 발생적 펩티드 단편과 상이하다. 예를 들어, Aβ15-21의 유사체는 최대 1, 2, 3 또는 4, 10개 위치 변화까지 다양할 수 있다. 천연 아미노산 잔기 각각의 결실 또는 치환은 위치 변화로 간주되며, 치환 없이 잔기가 삽입된 것도 위치 변화로 간주한다. 아미노산 치환은 종종 보존성 치환이다.

Aβ 또는 Aβ 단편의 몇몇 유사체는 또한 비천연 아미노산 또는 1, 2, 5, 10개 위치 또는 심지어 모든 위치에서의 N-말단 또는 C-말단 아미노산 변형을 포함한다. 예를 들어, Aβ의 1번 및/또는 7번 위치에서의 천연 아스파르트산 잔기는 이소-아스파르트산으로 치환될 수 있다. 비천연 아미노산의 예는 D, 알파, 알파-이치환된 아미노산, N-알킬 아미노산, 락트산, 4-히드록시프롤린, 감마-카르복시글루타메이트, 엡실론-N,N,N-트리메틸리신, 엡실론-N-아세틸리신, O-포스포세린, N-아세틸세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-히드록시리신, 오메가-N-메틸아르기닌, β-알라닌, 오르니틴, 노르루신, 노르발린, 히드록시프롤린, 티록신, 감마-아미노 부티르산, 호모세린, 시트룰린 및 이소아스파르트산이다. 본 발명의 몇몇 치료 제제는 모든-D 펩티드(예, 모든-D Aβ 또는 모든-D Aβ 단편, 및 모든-D 펩티드 유사체)이다. 단편 및 유사체는 하기 기재된 바와 같이 미처리 또는 위약 대조군과 비교하여 유전자도입 동물 모델에서의 예방 또는 치료 효능에 대해 스크리닝할 수 있다.

Aβ, 이의 단편 및 유사체는 고상 펩티드 합성 또는 재조합 발현으로 합성할 수 있거나, 또는 천연 공급원에서 얻을 수 있다. 자동 펩티드 합성기는 다양한 공급원(예, Applied Biosystems, Foster City, California)으로부터 시판된다. 재조합 발현은 박테리아(예, 이. 콜라이(E. coli)), 효모, 곤충 세포 또는 포유동물 세포에서 실시할 수 있다. 재조합 발현에 대한 절차는 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual(C. S. H. P. Press, NY 2d ed., 1989)]에 기재되어 있다. 몇몇 Aβ 펩티드 형태 또한 시판된다(예, American Peptides Company, Inc., Sunnyvale, CA 및 California Peptide Research, Inc. Napa, CA).

치료 제제는 또한, 예를 들어, Aβ 펩티드 한쪽, 또는 한쪽 또는 양쪽에 측접(flanking)하는 하나 이상의 다른 아미노산과 함께 Aβ 펩티드의 면역원성 단편을 포함하는 더 긴 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 바람직한 제제는 이종성 아미노산 서열에 대한 헬퍼 T-세포 반응과 이에 의해 Aβ 분절에 대한 B-세포 반응을 유도하는 이종성 아미노산 서열에 융합된 Aβ의 분절을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 하나 이상의 측접 이종성 아미노산은 또한 제조, 저장 또는 사용 시 분해를 막기 위해 Aβ 펩티드를 캡핑(capping)하는 데 사용될 수 있다. 하기 기재된 바와 같은 미처리 대조군 또는 위약 대조군과 비교 시 동물 모델에서의 예방 또는 치료적 효능에 대해 상기 폴리펩티드를 스크리닝할 수 있다. 본 발명의 치료 제제는 폴리리신 서열에 의해 측접된 Aβ의 면역원성 단편을 포함한다. 상기 폴리리신 서열은 Aβ 또는 Aβ의 면역원성 단편의 N-말단, C-말단, 또는 N-말단 및 C-말단 모두에 융합될 수 있다. Aβ 펩티드, 유사체, 활성 단편 또는 다른 폴리펩티드는 회합형 또는 다량체(multimer) 형, 또는 분리형으로 투여할 수 있다. 치료 제제는 또한 단량체 면역원성 제제의 다량체를 포함한다.

추가 변형예로, Aβ의 면역원성 단편은 바이러스 또는 박테리아에 의해 면역원성 조성물의 일부로서 제공될 수 있다. 면역원성 펩티드를 코딩하는 핵산은 바이러스 또는 박테리아의 게놈 또는 에피솜에 혼입시킨다. 선택적으로, 핵산은, 펩티드가 디스플레이되도록 바이러스의 외부 표면 단백질 또는 박테리아의 막통과(transmembrane) 단백질과의 융합 단백질로서 또는 분비된 단백질로서 면역원성 펩티드가 발현되도록 혼입된다. 상기 방법에 사용된 바이러스 또는 박테리아는 비병원성이거나 약독화된 것이어야 한다. 적절한 바이러스는 아데노바이러스, HSV, 베네슈엘라 말 뇌염 바이러스 및 기타 알파 바이러스, 수포성 구내염 바이러스, 및 다른 랍도 바이러스, 백시니아 및 계두 바이러스를 포함한다. 적절한 박테리아는 살모넬라 및 시겔라를 포함한다. HBV의 HBsAg에 대한 면역원성 펩티드의 융합이 특히 적절하다.

치료 제제는 또한 Aβ와 유의적인 아미노산 서열 상동성을 가질 필요는 없지만, Aβ의 모방체로 작용하여 유사한 면역 반응을 유도하는 펩티드 및 다른 화합물을 포함한다. 예를 들어, β-플리티드 시트를 형성하는 임의의 펩티드 및 단백질을 적합성에 대해 스크리닝할 수 있다. Aβ 또는 다른 아밀로이드 생성성 펩티드에 대한 모노클로날 항체에 대한 항-이디오타입(anti-idiotypic) 항체 또한 사용할 수 있다. 상기 항-Id 항체는 항원을 모방하여 이에 대한 면역 반응을 생성한다(Essential Immunology(Roit ed., Blackwell Scientific Publications, Palo Alto, 6th ed.), p. 181 참조). Aβ 펩티드 외의 제제는 상기 열거한 Aβ의 바람직한 분절(예, 15-24) 중 하나 이상에 대한 면역원성 반응을 유도해야 한다. 바람직하게는, 상기 제제는 Aβ의 다른 분절에 대해서는 유도되지 않고 상기 분절 중 하나에 대해 특이적으로 유도되는 면역원성 반응을 유도한다.

적합성에 대해 펩티드 또는 다른 화합물의 무작위 라이브러리를 또한 스크리닝할 수 있다. 조합 라이브러리는 단계적 방식으로 합성될 수 있는 다양한 유형의 화합물에 대해 생산할 수 있다. 상기 화합물은 폴리펩티드, 베타-턴 모방체, 다당류, 인지질, 호르몬, 프로스타글란딘, 스테로이드, 방향족 화합물, 헤테로시클릭 화합물, 벤조디아제핀, 올리고머 N-치환된 글리신 및 올리고카르바메이트를 포함한다. 화합물의 대형 조합 라이브러리는 문헌 [Affymax, WO 95/12608], [Affymax, WO 93/06121], [Columbia University, WO 94/08051], [Pharmacopeia, WO 95/35503] 및 [Scripps, WO 95/30642](모든 목적에 대해 각각은 참고 인용됨)에 기재된 코딩된 합성 라이브러리(ESL) 방법으로 구성할 수 있다. 펩티드 라이브러리는 또한 파지 디스플레이 방법으로 생성할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Devlin, WO 91/18980]을 참조한다.

조합 라이브러리 및 다른 화합물은, Aβ 또는 다른 아밀로이드 생성성 펩티드에 대해 특이적이라고 알려진 항체 또는 림프구(B 또는 T)에 특이적으로 결합하는 이들의 능력을 결정하여, 초기에 적합성에 대해 스크리닝한다. 예를 들어, 초기 스크리닝은 Aβ 또는 이의 단편에 대한 임의의 폴리클로날 혈청 또는 모노클로날 항체를 이용하여 수행할 수 있다. 이어서 화합물은 Aβ 내의 특이적 에피토프(예, 15-24)에 대한 특이적 결합에 대해 스크리닝할 수 있다. 화합물은 항체 에피토프 특이성의 맵핑(mapping)에 관해 기재된 것과 동일한 절차로 시험할 수 있다. 이어서 상기 스크리닝으로 확인한 화합물을 Aβ 또는 이의 단편에 대한 항체 또는 반응성 림프구를 유도하는 능력에 대해 추가 분석한다. 예를 들어, 혈청의 다중 희석액을 Aβ 또는 이의 단편으로 사전코팅된 미량적정 플레이트 상에서 시험할 수 있고, 표준 ELISA를 Aβ 또는 단편에 대한 반응성 항체에 대해 시험하기 위해 수행할 수 있다. 이어서 화합물은, 하기 실시예에 기재된 바와 같이, 아밀로이드 생성성 질환에 걸리기 쉬운 유전자도입 동물에서의 예방 및 치료 효능에 대해 시험할 수 있다. 상기 동물은, 예를 들어, 문헌 [Games et al., supra]에 기재된 APP의 717 돌연변이를 보유하는 마우스 및 문헌 [McConlogue et al., US 5,612,486] 및 [Hsiao et al., Science, 274, 99 (1996)]; [Staufenbiel et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 13287-13292 (1997)]; [Sturchler-Pierrat et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 13287-13292 (1997)]; [Borchelt et al., Neuron, 19: 939-945 (1997)]에 기재된 것과 같이 APP의 670/671 스웨덴식(Swedish) 돌연변이를 보유하는 마우스를 포함한다. 상기 기재된, Aβ의 다른 잠재적 제제 유사체 및 Aβ의 단편을 포함하는 더 긴 펩티드에 대하여 동일한 스크리닝 접근법을 사용할 수 있다.

Ⅳ. 접합체

면역 반응을 유도하기 위한 몇몇 제제는 LB에 대한 면역 반응을 유도하기 위한 적절한 에피토프를 포함하지만, 면역원성이 되기에는 너무 작다. 이러한 경우, 펩티드 면역원을 적절한 운반체 분자에 연결시켜 면역 반응 유발을 촉진하는 접합체를 형성할 수 있다. 단일 제제를 단일 운반체에 연결하거나, 복수 카피의 제제를 복수 카피의 운반체에 연결하고, 이들을 다시 서로 연결하거나, 복수 카피의 제제를 단일 카피의 운반체에 연결하거나, 또는 단일 카피의 제제를 복수 카피의 1종의 운반체 또는 다종의 운반체에 연결할 수 있다. 적절한 운반체는 혈청 알부민, 키홀 림펫 헤모시아닌, 면역글로불린 분자, 티로글로불린, 난알부민, 파상풍 톡소이드, 또는 다른 병원성 박테리아(예, 디프테리아, 이. 콜라이, 콜레라, 또는 에이치. 파이로리(H. pylori))로부터의 톡소이드, 또는 약독화된 독소 유도체를 포함한다. T 세포 에피토프 역시 적절한 운반체 분자이다. 몇몇 접합체는 본 발명의 제제를 면역자극성 중합체 분자(예, 트리팔미토일-S-글리세린 시스테인(Pam₃Cys), 만난(만노스 중합체) 또는 글루칸(베타 1 → 2 중합체)), 사이토카인(예, IL-1, IL-1 알파 및 베타 펩티드, IL-2, 감마-INF, IL-10, GM-CSF) 및 케모킨(예, MIP1알파 및 베타, 및 RANTES)에 연결하여 형성할 수 있다. 면역원성 제제는 또한, 문헌 [O'Mahony, WO 97/17613 및 WO 97/17614]에 기재된 바와 같이, 조직을 통한 수송을 강화하는 펩티드에 연결될 수 있다. 면역원은 스페이서(spacer) 아미노산(예, gly-gly)이 있거나 없는 운반체에 연결될 수 있다.

몇몇 접합체는 본 발명의 제제를 하나 이상의 T 세포 에피토프에 연결시켜 형성할 수 있다. 몇몇 T 세포 에피토프는 무차별적(promiscuous)이지만, 다른 T 세포 에피토프는 보편적(universal)이다. 무차별적인 T 세포 에피토프는 다양한 HLA 형태를 나타내는 광범위한 피험체에서 T 세포 면역의 유도를 강화할 수 있다. 무차별적 T 세포 에피토프와는 대조적으로, 보편적 T 세포 에피토프는 상이한 HLA-DR 대립 유전자에 의해 코딩된 다양한 HLA 분자를 나타내는 피험체의 많은 비율(%)(예, 75% 이상)에서 T 세포 면역의 유도를 강화할 수 있다.

다수의 자연 발생적 T-세포 에피토프, 예를 들어, 파상풍 톡소이드(예, P2 및 P30 에피토프), B형 간염 표면 항원, 백일해, 톡소이드, 홍역 바이러스 F 단백질, 클라미디아 트라코미티스(Chlamydia trachomitis) 주외막 단백질, 디프테리아 톡소이드, 플라스모듐 팔시파륨 서컴스포로자이트(Plasmodium falciparum circumsporozite) T, 플라스모듐 팔시파륨 CS 항원, 스키스토소마 만소니(Schistosoma mansoni) 트리오스 포스페이트 이소머라제, 에스케리치아 콜라이(Escherichia coli) TraT 및 인플루엔자 바이러스 헤마글루티닌(HA)이 존재한다. 본 발명의 면역원성 펩티드는 또한 문헌 [Sinigaglia F. et al., Nature, 336: 778-780 (1988)]; [Chicz R. M. et al., J. Exp. Med., 178: 27-47(1993)]; [Hammer J. et al., Cell 74: 197-203 (1993)]; [Falk K. et al., Immunogenetics, 39: 230-242 (1994)]; WO 98/23635; 및 [Southwood S. et al. J. Immunology, 160: 3363-3373 (1998)](모든 목적을 위해 각각은 본원에 참고 인용됨)에 기재된 T-세포 에피토프에 접합할 수 있다. 추가 예는 다음을 포함한다:

인플루엔자 헤마글루티닌: HA_307-319

말라리아 CS: T3 에피토프 EKKIAKMEKASSVFNV (서열 번호 4)

B형 간염 표면 항원: HBsAg_19-28 FFLLTRILTI (서열 번호 5)

열 충격 단백질 65: hsp65_153-171 DQSIGDLIAEAMDKVGNEG (서열 번호 6)

바실 칼메트-게랑: QVHFQPLPPAVVKL (서열 번호 7)

파상풍 톡소이드: TT_830-844 QYIKANSKFIGITEL (서열 번호 8)

파상풍 톡소이드: TT_947-967 FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE (서열 번호 9)

HIV gp120 T1: KQIINMWQEVGKAMYA (서열 번호 10).

대안으로, 접합체는 본 발명의 제제를 MHC 클래스 Ⅱ 분자(예, pan DR 에피토프("PADRE")) 대부분에 결합할 수 있는 하나 이상의 인공 T-세포 에피토프에 연결할 수 있다. PADRE는 US 5,736,141, WO 95/07707, 및 문헌 [Alexander J et al., Immunity, 1: 751-761 (1994)](모든 목적에 대해 각각은 본원에 참고 인용됨)에 기재되어 있다. 바람직한 PADRE 펩티드는 AKXVAAWTLKAAA(서열 번호 11)(공통된 잔기는 진하게 나타냄)로, 여기서 X는 바람직하게는 시클로헥실알라닌 티로신 또는 페닐알라닌으로, 시클로헥실알라닌이 가장 바람직하다.

면역원성 제제는 화학적 가교에 의해 운반체에 연결시킬 수 있다. 운반체에 면역원을 연결하기 위한 기법은 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜-티오)프로피오네이트(SPDP) 및 숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC)(이 펩티드에 설프히드릴기가 없다면, 시스테인 잔기를 추가하여 제공될 수 있음)를 사용한 이황화 결합의 형성을 포함한다. 상기 제제는 제제 자체와 한 단백질 상의 펩티드 시스테인 잔기 간의 이황화 결합을 형성하고, 리신 상의 엡실론-아미노, 또는 다른 아미노산 내의 다른 유리 아미노기를 통해 아미드 결합을 형성한다. 상기 다양한 이황화/아미드-형성 제제는 문헌 [Immun. Rev. 62, 185 (1982)]에 기재되어 있다. 다른 이작용성 커플링 제제는 이황화 결합보다 티오에테르를 형성한다. 이들 티오-에테르-형성 제제 중 다수는 시판되고 있으며, 6-말레이미도카프로산, 2-브로모아세트산 및 2-요오도아세트산, 4-(N-말레이미도-메틸)시클로헥산-1-카르복시산의 반응성 에스테르를 포함한다. 카르복실기는 숙신이미드 또는 1-히드록실-2-니트로-4-설폰산, 나트륨 염과 결합하여 활성화시킬 수 있다.

면역원성은 본 발명의 T_h 에피토프와 펩티드 면역원 간에 스페이서 잔기(예, Gly-Gly)를 추가하여 개선할 수 있다. B 세포 에피토프(즉, 펩티드 면역원)로부터 T_h 에피토프를 물리적으로 분리하는 것 외에도, 글리신 잔기는 펩티드 면역원과 T_h 에피토프의 결합에 의해 형성된 임의의 인공 2차 구조를 파괴하고, 이에 따라 T 및/또는 B 세포 반응 간의 간섭을 제거할 수 있다. 따라서 헬퍼 에피토프와 항체 생성 유도성 도메인 간의 배위적 분리는 제시된 면역원과 적절한 T_h 및 B 세포 간에 더 효율적인 상호 작용이 일어나게 한다.

많은 비율의 피험체에서 본 발명의 제제에 대해 다양한 HLA 유형을 나타내는 T 세포 면역의 유도를 강화하기 위해, 상이한 T_h 세포 에피토프를 가진 접합체의 혼합물을 제조할 수 있다. 혼합물은 상이한 T_h 세포 에피토프를 가진 둘 이상의 접합체의 혼합물, 상이한 T_h 세포 에피토프를 가진 셋 이상의 접합체의 혼합물, 또는 상이한 T_h 세포 에피토프를 가진 넷 이상의 접합체의 혼합물을 포함할 수 있다. 상기 혼합물은 면역보조제와 함께 투여할 수 있다.

면역원성 펩티드는 또한 운반체와의 융합 단백질(즉, 이종성 펩티드)로서 발현시킬 수 있다. 면역원성 펩티드는 이의 아미노 말단, 이의 카르복실 말단, 또는 둘 다를 운반체에 연결할 수 있다. 선택적으로, 면역원성 펩티드의 복수 반복체가 융합 단백질 내에 존재할 수 있다. 선택적으로, 면역원성 펩티드는, 예를 들어 펩티드의 N-말단 및 C-말단 모두에서, 복수 카피의 이종성 펩티드에 연결할 수 있다. 선택적으로, 복수 카피의 면역원성 펩티드를 복수 카피의 이종성 펩티드에 연결하고, 이들을 서로 연결할 수 있다. 몇몇 운반체 펩티드는 운반체 펩티드에 대해 헬퍼 T-세포 반응을 유도한다. 그 후 유도된 헬퍼 T-세포는 운반체에 연결된 면역원성 펩티드에 대한 B-세포 반응을 유도한다.

본 발명에서 사용하기에 적절한 융합 단백질의 몇몇 예는 하기에 나타나 있다. 이들 융합 단백질의 일부는 US 5,196,512, EP 378,881 및 EP 427,347에 기재된 바와 같이 파상풍 톡소이드 에피토프에 연결된 Aβ의 분절을 포함한다. 몇몇 융합 단백질은 US 5,736,142에 기재된 하나 이상의 PADRE 펩티드에 연결된 Aβ의 분절을 포함한다. 몇몇 이종성 펩티드는 무차별적 T-세포 에피토프지만, 다른 이종성 펩티드는 보편적인 T-세포 에피토프이다. 몇몇 방법에서, 투여용 제제는 단순히 직선형 배위로 이종성 단편에 연결된 Aβ 분절을 가진 단일 융합 단백질이다. 본 발명의 치료 제제는 화학식을 사용하여 나타낼 수 있다. 예를 들어, 몇몇 방법에서, 제제는 화학식 2^x로 나타낸 융합 단백질의 다량체로, x는 정수 1∼5이다. 바람직하게, x는 1, 2 또는 3이고, 2가 가장 바람직하다. x가 2인 경우, 상기 다량체는 MAP4로 지칭되는, 바람직한 배위로 연결된 4개의 융합 단백질을 가진다(US 5,229,490 참조).

MAP4 배위는 하기에 나타나 있으며, 분지형 구조는 리신의 N 말단 아민과 측쇄 아민 둘 다에서 펩티드 합성을 개시하여 생성된다. 리신이 서열에 혼입되어 분지화되는 횟수에 따라, 생성된 구조가 다중 N 말단에 존재할 것이다. 이 예에서, 4개의 동일한 N 말단이 분지형 리신-함유 코어 상에서 생성되었다. 상기 다중성은 동족 B 세포의 반응성을 크게 강화시킨다. 하기 예에서, Z는 Aβ의 면역원성 단편을, Z1-4는 Aβ의 면역원성 단편(들)을 뜻한다. 단편은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.

융합 단백질의 다른 예는 다음을 포함한다:

MAP4 배위의 Z-파상풍 톡소이드 830-844:

Z-QYIKANSKFIGITEL(서열 번호 12)

MAP4 배위의 Z-파상풍 톡소이드 947-967:

Z-FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE(서열 번호 13)

MAP4 배위의 Z-파상풍 톡소이드 830-844:

Z-QYIKANSKFIGITEL(서열 번호 14)

직선 배위의 Z-파상풍 톡소이드 830-844 + 947-967:

Z-QYIKANSKFIGITELFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE(서열 번호 15)

PADRE 펩티드(모두 직선 배위임)[여기서 X는 바람직하게 시클로헥실알라닌, 티로신 또는 페닐알라닌으로, 가장 바람직한 Z는 시클로헥실알라닌임]:

AKXVAAWTLKAAA-Z(서열 번호 16)

Z x 3-PADRE 펩티드:

Z-Z-Z-AKXVAAWTLKAAA(서열 번호 17)

직선 배위의 Z-난알부민 323-339:

Z-ISQAVHAAHAEINEAGR(서열 번호 20).

융합 단백질의 추가 예는 다음을 포함한다:

AKXVAAWTLKAAA-Z-Z-Z-Z(서열 번호 18)

Z-AKXVAAWTLKAAA(서열 번호19)

PKYVKQNTLKLAT-Z-Z-Z(서열 번호 21)

Z-PKYVKQNTLKLAT-Z(서열 번호 22)

Z-Z-Z-PKYVKQNTLKLAT(서열 번호 23)

Z-Z-PKYVKQNTLKLAT(서열 번호 24)

Z-PKYVKQNTLKLAT-EKKIAKMEKASSVFNV-QYIKANSKFIGITEL-FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-Z-Z-Z-Z-QYIKANSKFIGITEL-FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE(서열 번호 25)

Z-QYIKANSKFIGITELCFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-Z-QYIKANSKFIGITELCFNNFTVSFWLRVPKVSASHLE-Z(서열 번호 26)

2 분지형 수지 상에서의 Z-QYIKANSKFIGITEL(서열 번호 27): 단편은 서로 동일하거나 상이할 수 있다.

동일하거나 유사한 운반체 단백질 및 결합 방법은 Aβ 또는 Aβ의 면역원성 단편에 대한 항체를 생성하는 데 사용되는 면역원을 생성하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 운반체에 연결된 Aβ 또는 Aβ의 면역원성 단편은 Aβ 또는 Aβ의 면역원성 단편에 대한 모노클로날 항체의 생산 시 실험 동물에게 투여할 수 있다.

Ⅴ. 치료 제제를 코딩하는 핵산

아밀로이드 침착물에 대한 면역 반응은 Aβ 펩티드의 분절, 및 이의 단편, 다른 펩티드 면역원을 코딩하는 핵산을 투여하거나 또는 수동 면역화를 위해 사용되는 항체 및 이의 성분 쇄를 투여하여 유도할 수도 있다. 상기 핵산은 DNA 또는 RNA일 수 있다. 면역원을 코딩하는 핵산 분절은 통상적으로 환자의 의도된 표적 세포에서 DNA 분절을 발현하도록 하는 조절 요소(예, 프로모터 및 인핸서)에 연결한다. 면역 반응의 유도를 위해 바람직한 것처럼, 혈액 세포에서의 발현을 위해, 경쇄 또는 중쇄 면역글로불린 유전자로부터의 프로모터 및 인핸서 요소, 또는 CMV 주요 중간 초기 프로모터 및 인핸서가 발현을 유도하기에 적절하다. 연결된 조절 요소 및 코딩 서열은 종종 벡터로 클로닝된다. 이중-쇄 항체의 투여를 위해, 2개의 쇄를 동일 또는 별도의 벡터로 클로닝할 수 있다. 본 발명의 치료 제제를 코딩하는 핵산 또한 하나 이상의 T 세포 에피토프를 코딩할 수 있다. 면역보조제의 사용 및 운반체의 사용과 관련하여 본원에 기술된 내용은 본 발명의 치료 제제를 코딩하는 핵산과 함께 사용되는 경우에도 필요한 변경을 가하여 적용된다.

레트로바이러스 시스템(예, Lawrie and Tumin, Cur. Opin. Genet. Develop. 3, 102-109 (1993) 참조); 아데노바이러스 벡터(예, Bett et al., J. Virol. 67, 5911 (1993) 참조); 아데노-관련 바이러스 벡터(예, Zhou et al., J. Exp. Med. 179, 1867 (1994) 참조), 백시니아 바이러스 및 계두 바이러스를 비롯한 천연두(pox) 패밀리로부터의 바이러스 벡터, 신드비스 및 셈리키 포레스트 바이러스로부터 유도된 것과 같은 알파 바이러스 속으로부터의 바이러스 벡터(예, Dubensky et al., J. Virol. 70, 508-519 (1996) 참조), 베네수엘라 말 뇌염 바이러스(US 5,643,576 참조), 및 수포성구내염 바이러스(WO 96/34625 참조) 및 유두종 바이러스(Ohe et al., Human Gene Therapy 6, 325-333 (1995); Woo et al., WO 94/12629 및 Xiao & Brandsma, Nucleic Acids. Res. 24, 2630-2622 (1996))와 같은 랍도바이러스를 비롯하여, 다수의 바이러스 벡터 시스템을 이용할 수 있다.

면역원을 코딩하는 DNA, 또는 상기 DNA를 함유하는 벡터를 리포솜으로 패키징할 수 있다. 적절한 지질 및 관련된 유사체는 US 5,208,036, 5,264,618, 5,279,833 및 5,283,185에 기재되어 있다. 면역원을 코딩하는 벡터 및 DNA는 또한 미립자 운반체(예, 폴리메틸 메타크릴레이트 중합체 및 폴리락티드 및 폴리(락티드-코-글리콜라이드를 포함)에 흡수되거나 이와 결합시킬 수 있으며, 이에 대해서는 예를 들어, 문헌 [McGee et al., J. Micro Encap.(1996)]을 참조한다.

개별 환자에게, 통상적으로는 전신 투여(예, 정맥내, 복강내, 비내, 위, 피내, 근내, 피하 또는 두개내 주입)로 또는 국소 적용(예, US 5,399,346 참조)으로 투여하여 유전자 요법 벡터 또는 네이키드 DNA를 생체내에 전달할 수 있다. 상기 벡터는 또한 부피바신(bupivacine)과 같은 촉진 제제를 포함할 수 있다(US 5,593,970). DNA는 또한 유전자 총(gun)을 이용하여 투여할 수 있다(문헌 [Xiao & Brandsma, supra.] 참조). 면역원을 코딩하는 DNA는 극미세 금속 비드의 표면 상에 침전시킨다. 유전자총(microprojectile)은 충격파로 또는 헬륨 기체를 팽창시켜 가속화되어, 여러 세포층 깊이로 조직에 침투한다. 예를 들어, [Agacetus, Inc. Middleton WI]에서 제조한 Accel^TM Gene Delivery Device가 적절하다. 대안으로, 네이키드 DNA는 화학적 또는 기계적 자극으로 피부 상에 DNA를 스폿팅(spotting)함으로써 간단히 피부를 통해 혈류로 전달할 수 있다(WO 95/05853 참조).

추가 변형예로, 면역원을 코딩하는 벡터를, 생체 외의 세포, 예컨대 개별 환자로부터 외식된 세포(예, 림프구, 골수 흡인물, 조직 생검) 또는 만능 공여 조혈모 세포와 같은 세포로 전달한 뒤, 대개 혼입된 벡터를 갖는 세포를 선별한 후, 환자에게 그 세포를 재이식할 수 있다.

Ⅵ. 면역보조제

본 발명의 면역원성 제제(예, 펩티드)는 종종 면역보조제와 조합하여 투여된다. 면역보조제는, 펩티드만을 사용한 경우에 비해 유도된 항체의 역가 및/또는 유도된 항체의 결합 친화력을 증가시킨다. 다양한 면역보조제가 면역 반응을 유도하는 Aβ의 면역원성 단편과 함께 사용될 수 있다. 바람직한 면역보조제는 반응의 정성적 형태에 영향을 주는 면역원의 배위 변화를 유발하지 않고 면역원에 대한 고유 반응을 증가시킨다. 바람직한 면역보조제는 수산화알루미늄 및 인산알루미늄, 3 De-O-아크릴화 모노포스포릴 지질 A(MPL^TM)(GB 2220211(RIBI ImmunoChem Research Inc., Hamilton, Montana, now part of Corixa) 참조)를 포함한다. Stimulon^TM QS-21은 남미에서 발견된 키라야 사포나리아 몰리나(Quillaja Saponaria Molina) 나무의 껍질에서 분리한 트리터핀 글리코시드 또는 사포닌이다(Kensil et al., in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach(eds. Powell & Newman, Plenum Press, NY, 1995); 미국 특허 제5,057,540호 참조) (Aquila BioPharmaceuticals, Framingham, MA). 다른 면역보조제는 선택적으로 면역 자극제(예, 모노포스포릴 지질 A)(Stoute et al., N. Engl. J Med. 336, 86-91 (1997) 참조), 플루로닉 중합체 및 사멸된 마이코박테리아와 조합된 수중유형(oil in water) 에멀션(예, 스쿠알렌 또는 땅콩유)이다. 다른 면역보조제는 CpG(WO 98/40100)다. 면역보조제는 활성 제제와 함께 치료 조성물의 한 성분으로서 투여할 수 있거나, 치료 제제의 투여와 별도로, 그 전에, 동시에 또는 그 후에 투여할 수 있다.

면역보조제의 바람직한 부류는 알루미늄 염(명반; alum), 예를 들어, 수산화명반, 인산명반, 황산명반이다. 상기 면역보조제는 다른 특이적인 면역자극 제제(예, MPL 또는 3-DMP), QS-21, 중합체 또는 단량체 아미노산(예, 폴리글루탐산 또는 폴리리신)과 함께 또는 이를 제외하고 사용할 수 있다. 면역보조제의 다른 부류는 수중유형 에멀션 제형이다. 상기 면역보조제는, 뮤라밀 펩티드(예, N-아세틸뮤라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-노르뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타민(nor-MDP), N-아세틸뮤라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'디팔미토일-sn-글리세로-3-히드록시포스포릴옥시)-에틸아민(MTP-PE), N-아세틸글룩사미닐-N-아세틸뮤라밀-L-Al-D-이소글루-L-Ala-디팔미톡시 프로필아미드(DTP-DPP)테라미드TM)와 같은 다른 특이적인 면역자극 제제, 또는 다른 박테리아 세포 벽 성분과 함께 또는 이를 제외하고 사용할 수 있다. 수중유형 에멀션은 (a) Model 110Y 마이크로유체기(microfluidizer)(Microfluidics, Newton MA)와 같은 마이크로유체기를 사용하여 초미세 입자로 제형화한, 5% 스쿠알렌, 0.5% Tween 80 및 0.5% Span 85(선택적으로 다양한 양의 MTP-PE를 함유)를 함유하는 MF59(WO 90/14837), (b) 더 큰 입자 크기의 에멀션을 생성하기 위해 초미세 입자 에멀션으로 마이크로유체화하거나 와동(vortex)된, 10% 스쿠알렌, 0.4% Tween 80, 5% 플루로닉-차단된 중합체 L121 및 thr-MDP를 함유하는 SAF 및 (c) 모노포스포릴리피드 A(MPL), 트레할로스 디미콜레이트(TDM) 및 세포 벽 골격(CWS), 바람직하게는 MPL + CWS(Detox^TM)로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 박테리아 세포 벽 성분, 2% 스쿠알렌 및 0.2% Tween 80을 함유하는 Ribi^TM 면역보조제 시스템(RAS), (Ribi ImmunoChem, Hamilton, MT)을 포함한다.

바람직한 면역보조제의 다른 부류는 사포닌 면역보조제, 예를 들어, Stimulon^TM(QS-21, Aquila, Framingham, MA) 또는 그로부터 생성된 입자(예, ISCOM(면역자극성 복합체) 및 ISCOMATRIX)이다. 다른 면역보조제는 RC-529, GM-CSF 및 완전 프로인트 보조제(CFA) 및 불완전 프로인트 보조제(IFA)를 포함한다. 다른 면역보조제는 인터류킨(예, IL-1 α 및 β 펩티드, IL-2, IL-4, IL-6, IL-12, IL-13 및 IL-15), 대식세포 콜로니 자극 인자(M-CSF), 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF), 종양 괴사 인자(TNF), 케모킨(예, MIP1α 및 β) 및 RANTES와 같은 사이토카인을 포함한다. 면역보조제의 다른 부류는 면역 조절제 또는 면역보조제로서, 아미노산에 의해 각각 당 잔기에서 치환된, N-글리코실아미드, N-글리코실우레아 및 N-글리코실카르바메이트를 비롯한 당지질 유사체이다(미국 특허 제4,855,283호 참조). 열 충격 단백질(예, HSP70 및 HSP90)은 또한 면역보조제로 사용될 수 있다.

면역보조제는 단일 조성물로서 면역원과 함께 투여할 수 있거나, 면역원의 투여 전, 동시에 또는 후에 투여할 수 있다. 면역원 및 면역보조제는 동일한 유리병에 포장하여 공급할 수 있거나, 별도의 유리병에 포장하여 사용 전 혼합할 수 있다. 면역원 및 면역보조제는 통상적으로 의도한 치료 용도를 나타내는 표지를 부착하여 포장한다. 면역원 및 면역보조제가 따로 포장되는 경우, 포장은 통상적으로 사용 전 혼합에 대한 설명서를 포함한다. 면역보조제 및/또는 운반체의 선택은 면역보조제를 함유하는 면역원성 제형의 안정성, 투여 경로, 투여 일정, 백신 접종하려는 종에 대한 면역보조제의 효능에 좌우되며, 인간의 경우 약학적 허용 면역보조제는 관련 규제 기관에 의해 인간 투여용으로 승인되었거나 승인될 수 있는 것이다. 예를 들어, 완전 프로인트 보조제는 인간 투여용으로 적절하지 않다. 명반, MPL 및 QS-21이 바람직하다. 선택적으로, 둘 이상의 상이한 면역보조제를 동시에 사용할 수 있다. 바람직한 조합은 MPL과 명반, QS-21과 명반, QS-21과 MPL, GM-CSF와 MPL 또는 RC-529, 및 명반, QS-21 및 MPL의 조합을 포함한다. 또한, 불완전 프로인트 보조제는 선택적으로 명반, QS-21 및 MPL 중 어느 하나와 조합하여, 또한 상기한 모든 것과 조합하여 사용할 수 있다(Chang et al., Advanced Drug Delivery Reviews 32, 173-186 (1998)).

Ⅶ. 항체의 수동 투여

Aβ의 단편을 이용한 능동 면역화는 항체의 수동 투여와 병용될 수 있다. 수동 투여용으로 사용된 항체는 플라크의 포식 제거 반응을 유도하기 위한 Aβ의 N-말단 에피토프에 대한 항체일 수 있거나, 가용성 Aβ를 제거하기 위한 Aβ의 중심 또는 C-말단 영역에 대한 항체일 수 있다. 몇몇 방법에서, 존재하는 아밀로이드 침착물을 제거하기 위해 우선 N-말단 영역 항체에 대한 항체를 이용한 수동 투여를 수행한다. 이어서, Aβ의 중심 또는 C-말단 영역으로부터의 단편을 투여하여 가용성 Aβ로부터의 아밀로이드 침착물의 추가 침착을 방지한다. 다른 방법으로, Aβ의 중심 또는 C-말단 부분에 대한 단편을 이용한 능동 투여를 우선 수행하여 가용성 Aβ를 제거하는 항체를 생성한다. 이어서, 혈액 중 항체 수준이 감소하기 시작할 때, 추가 투여량은 Aβ의 중심 또는 C-말단 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 수동 투여로 공급한다.

수동 투여에 사용하기 적절한 항체는 참고 인용된 WO 00/72880 및 WO 02/46237에 기재되어 있다. Aβ의 N-말단 에피토프에 특이적으로 결합하는 바람직한 항체는 Aβ의 잔기 1-3에서 시작하고 잔기 7-11에서 끝나는 에피토프에 결합한다. 몇몇 바람직한 항체는 아미노산 1-3, 1-4, 1-5, 1-6, 1-7 또는 3-7 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 몇몇 바람직한 항체는 Aβ의 잔기 1-3에서 시작하고 잔기 7-11에서 끝나는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 상기 항체는 통상적으로 아밀로이드 침착물에 특이적으로 결합하지만, 가용성 Aβ에는 결합할 수도, 하지 않을 수도 있다. Aβ의 C-말단 에피토프에 특이적으로 결합하는 몇몇 바람직한 항체는 자연 발생적 단형 Aβ(즉, Aβ39, 40 또는 41)에는 특이적으로 결합하지 않고, 자연 발생적 장형 Aβ(즉, Aβ42 및 Aβ43)에 특이적으로 결합한다. 통상적으로 C-말단 및 중심 에피토프에 대한 항체는 아밀로이드 침착물에 대해 특이적으로 결합하지 않는 가용성 Aβ에 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 항체가 지정된 잔기(예, Aβ1-5) 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다고 할 경우, 이는 항체가 지정된 잔기(즉, 이 예에서는 Aβ1-5)를 함유하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다는 것을 의미한다. 상기 항체는 반드시 Aβ1-5 내의 모든 잔기와 접촉하는 것은 아니다. Aβ1-5 내의 모든 단일 아미노산 치환 또는 결실이 반드시 결합 친화력에 유의적으로 영향을 미치는 것은 아니다. 항체의 에피토프 특이성은, 예를 들어 WO 00/72880에 기재된 바와 같이 측정할 수 있다.

항체는 폴리클로날 또는 모노클로날일 수 있다. 폴리클로날 혈청은 통상적으로 Aβ의 길이를 따라 존재하는 여러 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체의 혼합된 집단을 함유한다. 그러나, 폴리클로날 혈청은 Aβ의 특정 분절(예, Aβ1-10)에 특이적일 수 있다. 바람직한 항체는 키메라 항체, 인간화 항체(Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 10029-10033 (1989) 및 WO 90/07861, US 5,693,762, US 5,693,761, US 5,585,089, US 5,530,101 및 Winter, US 5,225,539 참조), 또는 인간 항체(Lonberg et al., W0 93/12227 (1993); US 5,877,397, US 5,874,299, US 5,814,318, US 5,789,650, US 5,770,429, US 5,661,016, US 5,633,425, US 5,625,126, US 5,569,825, US 5,545,806, Nature 148, 1547-1553 (1994), Nature Biotechnology 14, 826 (1996), Kucherlapati, WO 91/10741 (1991) 참조)이다. 상이한 결합 특이성의 여러 마우스 항체는 인간화 항체를 제조하기 위한 출발 물질로 이용할 수 있다. 인간 이소타입(isotype) IgG1은 N-말단 영역에 대한 항체로 바람직한데, 이는 IgG1이 포식성 세포 상의 FcRI 수용체에 대해 인간 이소타입 중 최대 친화력을 가지기 때문이다. 몇몇 항체는 약 10⁷, 10⁸, 10⁹ 또는 10¹⁰ M^-1 이상의 결합 친화력으로 Aβ에 특이적으로 결합한다.

Ⅷ. 치료 가능한 환자

치료 가능한 환자는 현재 증상을 보이는 환자 뿐 아니라, 증상을 보이지는 않지만 질환에 대한 위험이 있는 개체를 포함한다. 알츠하이머병의 경우, 장수한 사람이라면, 실질적으로 누구나 알츠하이머병을 앓을 위험을 가지고 있다. 그러므로, 본 방법은 피험체 환자의 위험에 대한 임의의 평가를 할 필요가 없이 일반적인 집단에 대해 예방 차원으로 투여할 수 있다. 본 방법은 알츠하이머병에 대해 알려진 유전적 위험인자를 가진 개체에 특히 유용하다. 상기 개체는 이 질환을 앓은 친척이 있고, 유전적 또는 생화학적 마커 분석으로 위험인자가 확인된 개체를 포함한다. 알츠하이머병에 대한 유전적 위험 마커는 APP 유전자에서의 돌연변이, 특히 각각 Hardy 및 스웨덴식 돌연변이로 지칭되는 717번 위치 및 670번 위치 및 671번 위치에서의 돌연변이를 포함한다(Hardy, TINS, supra 참조). 다른 위험 마커는 프리세닐린 유전자(PS 1 및 PS2) 및 ApoE4 내 돌연변이, AD, 고콜레스테롤혈증 또는 아테롬성 동맥 경화증의 가족력이다. 현재 알츠하이머병을 앓고 있는 개체는 상기한 위험 인자의 존재 뿐 아니라 특징적인 치매 증상으로부터 인식할 수 있다. 또한, AD를 앓는 개체를 확인하기 위해 다수의 진단 테스트를 사용할 수 있다. 이 테스트는 CSF tau 및 Aβ42 수준의 측정을 포함한다. 증가된 tau 및 감소된 Aβ42 수준은 AD의 존재를 의미한다. 알츠하이머병을 앓는 개체는 또한 WO 00/72880에서 논의된 바와 같이, ADRDA 기준으로 진단할 수 있다.

무증상성인 환자의 경우, 치료는 어떠한 연령(예, 10세, 20세, 30세)에서도 시작할 수 있다. 그러나, 대개, 환자가 40세, 50세, 60세 또는 70세가 될 때까지 치료를 시작할 필요는 없다. 통상적으로 치료는 일정 기간 동안 다회 투여량을 투여하는 것을 포함한다. 치료는 치료 제제(예, Aβ 펩티드)에 대한 항체, 또는 활성화된 T-세포(부작용) 또는 B-세포 반응을 경시적으로 분석하여 모니터할 수 있다. 반응의 감소는, 추가 접종해야 함을 의미한다. 잠재적 다운 증후군 환자의 경우, 산모에게 또는 출생 후 즉시 치료 제제를 투여하여 출생 전에 치료를 시작할 수 있다.

IX. 치료 투약법

일반적으로 치료 투약법은 Aβ, 바람직하게는 Aβ의 면역원성 단편에 대한 면역원성 반응을 유도하는 데 효과적인 제제를 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 예방 용도로, 알츠하이머병에 걸리기 쉽거나 위험한 상태에 있는 환자에게, 상기 질환의 진행 도중 나타나는 질환의 생리학적, 생화학적, 조직학적 및/또는 행동적 증상, 질환의 합병증 및 중간 병리적 표현형을 비롯하여, 상기 질환의 위험을 제거하거나 줄이고, 심각성을 완화하거나 발병을 지연시키기에 충분한 양으로 약학 조성물 또는 약제를 투여한다. 치료 용도로, 상기 질환을 앓고 있다고 의심되는 환자나 이미 앓고 있는 환자에게 상기 투약법으로 제제를 투여하는데, 이 투약법은 질환 진행 시 이의 합병증 및 중간 병리 표현형을 비롯한, (생리학적, 생화학적, 조직학적 및/또는 행동적) 질환 증상을 치료하거나, 또는 적어도 부분적으로 저지하거나 또는 그 악화를 억제하기 충분한 제제의 투여량 및 빈도를 포함한다. 몇몇 방법에서, 제제의 투여는 특징적인 알츠하이머 병리가 아직 발병되지 않은 환자에서 근인지 장애를 감소시키거나 제거한다. 치료 또는 예방 치료를 성취하기에 적절한 양은 치료적 또는 예방적으로 효과적인 투여량으로 정의된다. 치료 또는 예방 치료를 성취하는 데 적절한 양 및 투여량 빈도의 조합은 치료적 또는 예방적으로 효과적인 투약법으로 정의된다. 예방 및 치료 투약법 모두에서, 충분한 면역 반응을 얻을 때까지, 대개 제제를 수 회 투여량으로 투여한다. 치료 또는 예방 치료을 성취하기 위한 적절한 투여의 투여량 및 빈도는 치료적 또는 예방적으로 효과적인 투약법으로 정의된다. 통상적으로, 환자의 면역 반응을 모니터하고, 이 면역 반응이 감소하기 시작하면 투여량을 반복 제공한다. 면역 반응은 환자의 혈액에서 AB에 대한 항체를 검출하고, 뇌에서 플라크 또는 AB의 수준 또는 심리 측정 기준(예, MMSE) 및 알츠하이머병의 상태 및 기능을 가진 환자를 평가하기 위한 종합 척도인 ADAS에 의한 증상을 검측하여 모니터할 수 있다.

상기 기재된 병태의 치료를 위한, 본 발명의 제제 및 조성물의 유효 투여량은 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간인지 동물인지의 여부, 투여된 다른 약제, 및 치료가 예방용인지 치료용인지를 비롯하여, 다수의 상이한 요인에 따라 다양하다. 대개, 환자는 인간이지만, 유전자도입 포유동물을 비롯한 비인간 포유동물도 치료할 수 있다. 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 치료 투여량을 적정하는 것이 필요하다. 면역원의 양은 면역보조제도 투여하는지에 따라 좌우되는데, 면역보조제가 없으면 투여량이 더 많이 필요하게 된다. 투여용 면역원의 양은 때때로 환자 당 1∼500 ㎍, 대개 인간 투여용 주사 당 5∼500 ㎍으로 다양하다. 간혹, 주사 당 1∼2 mg의 더 높은 투여량이 사용된다. 통상적으로, 각각의 인간 주사용으로 10, 20, 50 또는 100 ㎍ 이상이 사용된다. 면역원의 질량은 또한 전체 면역원의 질량에 대해 면역원 내의 면역원성 에피토프의 질량 비에 좌우된다. 통상적으로, 면역원성 에피토프 10^-3∼10^-5 μmol이 면역원(㎍)에 대해 사용된다. 주사 시점은 1일 1회에서부터 1년 1회, 10년 1회에 이르기까지 상당히 다양할 수 있다. 면역원의 투여량을 투여하는 어느 날이든, 면역보조제도 투여할 경우의 투여량은 1 ㎍/환자 이상, 대개 10 ㎍/환자 이상이고, 면역보조제를 투여하지 않을 경우는 10 ㎍/환자 이상, 대개 100 ㎍/환자 이상이다. 통상적인 투약법은 면역화 뒤 시간 간격(예, 6주 간격)을 둔 추가 항원 자극(booster) 주사로 구성된다. 다른 투약법은 면역화 뒤 1, 2 및 12개월 후의 추가 항원 자극 주사로 구성된다. 다른 투약법은 생존하는 동안 2개월마다 주사하는 것을 포함한다. 대안으로, 추가 항원 자극 주사는 면역 반응을 모니터하여 나타낸 바와 같이 불규칙하게 주사할 수 있다.

면역원을 코딩하는 핵산에 대한 투여량은 환자 당 약 10 ng∼1 g, 100 ng∼100 mg, 1 ㎍∼10 mg 또는 30∼300 ㎍ DNA 범위이다. 감염성 바이러스 벡터에 대한 투여량은 투여 당 10∼100개, 또는 그 이상의 비리온으로 다양하다.

항체를 이용한 수동 면역화에 대해(조합 요법에서), 투여량은 숙주 체중을 기준으로 약 0.0001∼100 mg/kg, 대개 0.01∼5 mg/kg 범위이다. 예를 들어, 투여량은 1 mg/kg 체중 또는 10 mg/kg 체중 또는 1∼10 mg/kg 범위일 수 있거나, 달리 말해, 70 kg 환자에 대해 각각 70 mg 또는 700 mg 또는 70∼700 mg 범위일 수 있다. 예시적인 치료 투약법은 2주마다 1회 또는 1개월에 1회, 또는 3∼6개월마다 1회 투여하는 것을 포함한다. 몇몇 방법에서, 상이한 결합 특이성을 가진 둘 이상의 모노클로날 항체를 동시에 투여하는데, 이 경우 각 항체의 투여량은 상기한 범위 내에 속한다. 항체는 보통 여러 번 투여한다. 단일 투여 사이의 간격은 주, 개월, 년 단위일 수 있다. 간격은 또한 환자에서 Aβ에 대한 항체의 혈액 수준을 측정하여 나타낸 바와 같이 불규칙적일 수 있다. 몇몇 방법에서, 투여량은 1∼1000 ㎍/㎖, 몇몇 방법에서는 25∼300 ㎍/㎖의 혈장 항체 농도를 얻도록 조정한다. 대안으로, 항체는 지속적인 방출 제형으로 투여할 수 있는데, 이 경우 필요한 투여 빈도는 줄어든다. 투여량 및 빈도는 환자에서 항체의 반감기에 따라 다양하다. 일반적으로, 인간 항체가 최장 반감기를 나타내고, 이어서 인간화 항체, 키메라 항체 및 비인간 항체 순으로 나타난다. 투여의 투여량 및 빈도는 치료가 예방용인지 치료용인지에 따라 다양할 수 있다. 예방 용도에서는, 장기간 동안 비교적 간격을 길게 하여 상대적으로 적은 투여량을 투여한다. 몇몇 환자는 남은 생존 기간 동안 계속 치료를 받는다. 치료 용도에서는, 질환의 진행이 감소하거나 종결될 때까지, 바람직하게는 환자의 질환 증상이 부분적 또는 완전하게 개선될 때까지, 상대적으로 짧은 간격으로 상대적으로 많은 투여량을 종종 필요로 한다. 그 후, 환자에게 예방 투여법을 실시할 수 있다.

면역 반응을 유도하는 제제는 예방 및/또는 요법적 치료를 위해 비경구, 국소, 정맥내, 경구, 피하, 동맥내, 두개내, 복강내, 비내용 또는 근내 수단으로 투여할 수 있다. 면역원성 제제 투여의 가장 보편적인 경로는 피하지만, 다른 경로도 동일하게 효과적일 수 있다. 그 다음의 가장 공통적인 경로는 근내 주사다. 이 형태는 팔 또는 다리 근육에 주사하는 것이 가장 보편적이다. 몇몇 방법에서, 침착물이 축적되는 특정 조직으로 제제를 직접 주사하는데, 예를 들어, 두개내 주사가 있다. 근내 주사 또는 정맥내 주입이 항체 투여에 대해 바람직하다(조합 요법에서). 몇몇 방법에서, 특정 치료적 항체를 두개내로 직접 주사할 수 있다. 몇몇 방법에서, 항체는 지속적인 방출 조성물 또는 장치(예, Medipad^Tm 장치)로 투여된다.

본 발명의 제제는 종종 활성 치료 제제, 및 다양한 다른 약학적 허용 성분을 포함하는 약학 조성물로서 투여된다. 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science(15th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 1980)]을 참조한다. 바람직한 형태는 의도한 투여 방식 및 치료 용도에 좌우된다. 목적하는 제형에 따라, 조성물은 또한 약학적 허용 비독성 운반체 또는 희석제를 포함할 수 있으며, 이는 동물 또는 인간 투여를 위한 약학 조성물을 제형화하는 데 보편적으로 사용되는 비히클로 정의된다. 희석제는 상기 조합의 생물 활성에 영향을 주지 않도록 선택된다. 상기 희석제의 예는 증류수, 생리학적 인산-완충 염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 및 Hank's 용액이다. 또한, 약학 조성물 또는 제형은 다른 운반체, 면역보조제, 또는 비독성, 비치료성, 비면역원성 안정제 등을 또한 포함할 수 있다.

약학 조성물은 또한 단백질, 다당류(예, 키토산, 폴리락트산, 폴리글리콜산 및 공중합체(예, 라텍스 작용화 세파로스(TM), 아가로스, 셀룰로스 등)), 중합체 아미노산, 아미노산 공중합체, 및 지질 응집체(예, 오일 액적 또는 리포솜)와 같이 크고 천천히 대사되는 거대분자를 포함할 수 있다. 또한, 이들 운반체는 면역자극 제제(예, 면역보조제)로서 작용할 수 있다.

비경구 투여를 위한 본 발명의 제제는 멸균 액체(예, 물, 오일, 염수, 글리세롤, 또는 에탄올)일 수 있는 약학 운반체와 생리학적 허용 희석제 중 성분의 용액 또는 현탁액을 주사가능한 투여량으로 투여할 수 있다. 또한, 부속 성분(예, 습윤제 또는 유화제, 계면활성제, pH 완충 성분 등)이 조성물에 존재할 수 있다. 약학 조성물의 다른 성분은 석유, 동물, 식물원 또는 합성원(예, 땅콩유, 대두유 및 광유)의 성분이다. 일반적으로, 글리콜(예, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜)이 특히 주사용 용액에 대해 바람직한 액체 운반체이다. 항체는 활성 성분의 지속 방출을 허용하는 방식으로 제형화할 수 있는 데포 주사(depot injection) 또는 임플란트 제제 형태로 투여할 수 있다. 예시적인 조성물은 HCl을 이용해 pH 6.0으로 조정된, 50 mM L-히스티딘, 150 mM NaCl로 구성된 수성 완충제에서 제형화된, 5 ㎎/㎖의 모노클로날 항체를 포함한다. 통상적으로 비경구 투여용 조성물은 실질적으로 멸균 등장성으로, FDA 또는 유사 법인의 GMP 조건 하에 제조된다.

통상적으로, 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로 주사 가능하게 제조한다; 주사 전에 액체 비히클 중의 용액 또는 현탁액으로 적합한 고형을 또한 제조할 수 있다. 제제는 또한, 상기 논의된 바와 같이, 리포솜 또는 미세 입자(예, 폴리락티드, 폴리글리콜라이드 또는 강화된 면역보조제 효과를 위한 공중합체)에 유화되거나 캡슐화될 수 있다(Langer, Science 249, 1527 (1990) and Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28, 97-119 (1997) 참조). 본 발명의 제제는 활성 성분의 지속적이거나 박동성 방출을 허용하는 방식으로 제형화할 수 있는 데포 주사 또는 임플란트 제제 형태로 투여할 수 있다.

다른 투여 방식으로 적절한 추가 제형은 경구용, 비내용, 및 폐용 제형, 좌약, 및 경피용의 것을 포함한다.

좌약에 대해, 결합제 및 운반체는, 예를 들어, 폴리알킬렌 글리콜 또는 트리글리세라이드를 포함하고; 상기 좌약은 0.5%∼10%, 바람직하게는 1%∼2% 범위로 활성 성분을 함유하는 혼합물로 형성할 수 있다. 경구 제형은 만니톨, 락토스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 사카린, 셀룰로스 및 탄산마그네슘의 약학 등급과 같은, 부형제를 포함한다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 정제, 알약, 캡슐, 지속 방출형 제형 또는 분말의 형태로 하고, 활성 성분 10%∼95%, 바람직하게는 25%∼70%를 함유한다.

국소 용도는 경피성 또는 피내로 전달할 수 있다. 국소 투여는 상기 제제를 콜레라 독소 또는 해독된 유도체 또는 이의 서브유니트 또는 다른 유사 박테리아 독소와 동시 투여하여 촉진할 수 있다(Glenn et al., Nature 391, 851 (1998) 참조). 동시-투여는 혼합물로서 또는 화학 가교로 얻은 연결 분자로서의 성분을 사용하거나 또는 융합 단백질로의 발현을 이용하여 얻을 수 있다.

대안으로, 경피성 전달은 피부 경로 또는 트랜스페로솜(transferosome)을 사용하여 이룰 수 있다(Paul et al., Eur. J Immunol. 25, 3521-24 (1995); Cevc et al., Biochem. Biophys. Acta 1368, 201-15 (1998)).

X. 모니터 방법

본 발명은 아밀로이드 생성성 질환을 앓거나 앓기 쉬운 환자에서 Aβ 펩티드에 대한 항체 반응의 검출 방법을 제공한다. 이 방법은 환자에게 실시하고 있는 치료 과정을 모니터하는 데 특히 유용하다. 이 방법은 증상성인 환자에 대한 요법 치료 및 무증상성인 환자에 대한 예방 치료 모두를 모니터하는 데 사용할 수 있다. 몇몇 방법은 면역원성 제제의 투여량을 투여하기 전 환자의 항체 반응 기준값을 측정하고, 이를 치료 후 면역 반응 값과 비교하는 것을 포함한다. 항체 반응 값의 유의적인 증가(즉, 실험의 평균값으로부터 표준 편차로 나타내어지는, 동일한 샘플의 반복 측정 시의 통상적인 실험 오차보다 큰 증가값)는 긍정적인 치료 결과(즉, 제제의 투여로 면역 반응을 얻거나 증가시킴)를 나타내는 것이다. 항체 반응에 대한 값이 유의적으로 변하지 않거나 감소하지 않는다면, 부정적인 치료 결과를 나타내는 것이다. 일반적으로, 면역원성 제제를 이용한 치료의 초기 과정을 거친 환자는 연속 투여량에 따라 항체 반응의 증가를 나타내고, 결국 정체기에 도달할 것이라 기대된다. 항체 반응이 증가하는 동안, 일반적으로 제제의 투여를 계속한다. 정체기의 도달은 치료의 실시를 중지하거나, 투여량 또는 빈도를 줄일 수 있음을 나타내는 것이다.

다른 방법으로, 항체 반응의 대조값(즉, 평균 및 표준 편차)을 대조군 집단에 대해 측정한다. 통상적으로, 대조군 집단의 개체는 사전 치료를 받지 않았다. 이어서 치료 제제를 투여한 후 환자에서의 항체 반응 측정 값을 대조값과 비교한다. 대조값에 비한 유의적인 증가(예, 평균으로부터의 표준 편차보다 큰 증가값)는 긍정적인 치료 결과를 나타내는 것이다. 유의적인 증가 또는 감소의 결핍은 부정적인 치료 결과를 나타내는 것이다. 일반적으로 대조값에 비해 항체 반응이 증가하는 동안 제제를 계속 투여한다. 상기한 바와 같이, 대조값에 비교한 정체기에의 도달은 치료제의 투여를 중지하거나, 투여량 또는 빈도를 줄일 수 있음을 나타내는 것이다.

다른 방법으로, 항체 반응의 대조값(예, 평균 및 표준 편차)은, 치료 제제로 치료를 받고 치료에 대한 반응으로 개체의 항체 반응이 정체기에 도달한 개체의 대조 집단으로부터 결정한다. 환자에서의 항체 반응의 측정값을 대조값과 비교한다. 환자에서의 측정 수준이 대조값과 유의적으로 다르지 않다면(예, 표준 편차 이상이 아니라면), 치료를 중지할 수 있다. 환자에서의 수준이 대조값보다 유의적으로 낮다면, 제제의 연속 투여가 허용된다. 환자에서의 수준이 대조값 이하로 계속 유지된다면, 치료제 투약법(예, 상이한 면역보조제, 단편의 사용 또는 수동 투여로의 전환)을 변경할 수 있다.

다른 방법으로, 현재 치료를 받고 있지 않지만 이전에 치료 과정을 겪은 환자에 대해 치료 재개가 필요한지 결정하기 위해 항체 반응을 모니터한다. 환자에서의 항체 반응의 측정값은 이전 치료 과정 후 환자에서 얻은 사전 항체 반응값과 비교할 수 있다. 사전 측정값에 비해 유의적인 감소(즉, 동일한 샘플의 반복 측정 시 일반적인 오차보다 큰 감소)는 치료를 재개할 수 있다는 표시이다. 대안으로, 환자에서 측정된 값은 치료 과정을 겪은 후의 환자 집단에서 측정된 대조값(평균+표준 편차)과 비교할 수 있다. 대안으로, 환자에서의 측정값은 질환의 증상을 보이지 않는 예방 치료된 환자 집단, 또는 질환 특성의 개선을 보이는 요법 치료된 환자 집단에서의 대조값과 비교할 수 있다. 상기 경우 모두에 있어서, 대조군 수준에 비해 유의적인 감소(즉, 표준 편차 이상)는 환자에 대해 치료를 재개해야 함을 의미한다.

분석을 위한 조직 샘플은 통상적으로 환자의 혈액, 혈장, 혈청, 점액 또는 뇌척수액이다. Aβ 펩티드, 통상적으로 Aβ42 또는 면역화에 사용되는 펩티드의 임의의 형태에 대한 면역 반응을 나타내기 위해 샘플을 분석한다. 면역 반응은 Aβ 펩티드에 특이적으로 결합하는 항체의 존재로부터 결정할 수 있다. 항체는 이 항체에 특이적으로 결합하는 리간드에 대한 결합 분석으로 검출할 수 있다. 통상적으로, 리간드는 고정된다. 결합은 표지된 항-이디오타입 항체를 사용하여 검출할 수 있다.

능동 및 수동 투여 모두를 사용하는 조합 투약법에서, WO 00/72880에 기재된 바와 같은 수동 투여로 생성된 항체의 수준을 모니터하기 위해 유사한 접근법을 사용할 수 있다.

재료 및 방법

Aβ 단편. 문헌 [Tam, J. P. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 5409-5413]에 기재된 바와 같이, Aβ1-5, Aβ3-9, Aβ5-11, Aβ15-24 및 역서열 Aβ5-1에 해당하는 펩티드를 분지형 펩티드 골격(4개의 펩티드 암(arm)을 가진 삼중 리신 코어) 상에서 난알부민(아미노산 323-339 - ISQAVHAAHAEINEAGR(서열 번호 3))으로부터 유도된 17-아미노산 T 세포 에피토프에 인접하게 합성하여 다중-항원 펩티드를 생산하였다. 문헌 [Bard, F. et al., (2000) Nat. Med. 6, 916-919]에 이미 기재된 바와 같이, 폴리클로날 항체(Pab) Aβ1-42를 제조하고, 면역글로불린 분획을 분리하였다. 상기 기재된 바와 같이, 분지형 골격 상에서 합성된 Aβ1-7, Aβ15-24 및 Aβ3-9에 각각 해당하는 펩티드로 면역화한 PDAPP 마우스의 혈청으로부터 폴리클로날 Pab-EL16, Pab-EL17 및 Pab-EL20을 얻었다. Aβ(7-1)-42로 면역화한 마우스의 혈청으로부터 Pab-EL26을 얻었다. 펩티드는 [AnaSpec, San Jose, CA, USA]에 의해 합성하였다.

면역화 절차. 완전 프로인트 보조제 중 Aβ 단편 100 ㎍을 복강내 주사로 투여한 뒤, 2주 및 4주 째, 그 뒤 매달 불완전 프로인트 보조제 중 펩티드 100 ㎍을 추가 항원 자극 주사로 투여하였다.

응집형 및 가용성 Aβ1-42에 결합한 항체. 혈청 역가(연속 희석으로 측정) 및 응집된 합성 Aβ1-42에 결합한 모노클로날 항체는 문헌 [Schenk D. et al., (1999) Nature 400, 173-177]에 이미 기재된 바와 같이 ELISA로 수행하였다. 가용성 Aβ1-42는 디메틸 설폭시드 중에서 초음파 처리된 합성 Aβ1-42 펩티드를 뜻한다. 항체의 연속 희석액은 실온에서 밤새 ¹²⁵I-Aβ1-42 50,000 cpm과 함께 항온배양하였다. 75 ㎎/㎖ 단백질 A 세파로스(Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden)/200 ㎍ 토끼 항-마우스 IgG(H+L)(Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, USA)를 함유하는 슬러리 50 ㎕를 실온에서 1시간 동안 희석된 항체와 함께 항온배양하고, 2회 세척하고, Wallac 감마 계수장치(PerkinElmer Life Science, Grove, IL, USA)로 계수하였다. 모든 단계는 10 mM Tris, 0.5 M NaCl, 1 ㎎/㎖ 젤라틴 및 0.5% Nonidet P-40, pH 8.0으로 구성된 방사선면역분석 완충제에서 수행하였다.

결과

생체내에서 효과적인 항체 반응을 유발하는 펩티드의 능력에 대해 일련의 펩티드를 비교하였다. 12∼13개월령 PDAPP 마우스를 3개의 N-말단 펩티드 단편(Aβ1-5, Aβ3-9, 또는 Aβ5-11) 중 하나 또는 펩티드의 내부 영역에서 유도한 단편(Aβ15-24)으로 면역화하였다(도 1a). 내부 펩티드 Aβ15-24는 항체 266의 에피토프를 포함하는데, 이는 가용성 Aβ에 대한 높은 친화력을 나타내고(Seubert et al., (1992) Nature 359, 325-327), 비고정형 AD 또는 PDAPP 조직의 단편에서 플라크를 인식하지 않는다. 따라서, 이 펩티드에 대해 유도된 폴리클로날 반응이 플라크를 인식할 수 있는 항체를 생성할 수 있는지, 또는 가용성 Aβ만을 이용한 반응성이 효능을 제공하기에 충분한지를 결정하는 것이 관심사였다. 본 연구에서, 역서열 Aβ5-1을 가진 펩티드는 음성 대조군으로 사용하였다. 펩티드는 난알부민으로부터 유도된 17-아미노산 T-세포 에피토프에 인접하게 합성되고, 동일한 다가 배열로 제공되었다(재료 및 방법 참조). 모든 펩티드(Aβ5-1 리버스머 제외)는 ELISA에 의해 응집된 합성 Aβ1-42를 인식하는 혈청을 생산하지만, Aβ5-11 및 Aβ15-24는 Aβ1-5보다 유의적으로 더 높은 역가를 생산하였다(각각 p < 0.01 및 p < 0.05)(도 1b). 대조적으로, N-말단 펩티드에 대한 혈청만 플라크 내의 Aβ를 인식할 수 있고; Aβ15-24에 대한 항혈청은 합성 응집된 펩티드와의 강한 반응성에도 불구하고 플라크에 결합하지 않았다(도 1c). 또한 가용성 Aβ를 포착하는 능력에서 혈청 그룹 간의 차이는 없었다(도 2a). Aβ1-5 또는 Aβ3-9로 면역화한 마우스로부터의 혈청 30% 미만은 가용성 펩티드를 포착하였다(각각 27% 및 5%). 대조적으로, Aβ5-11로 면역화한 동물의 약 절반으로부터의 혈청, 및 Aβ15-24로 면역화한 동물 모두는 가용성 Aβ1-42를 포착하였다.

Aβ 침착의 정도가 PDAPP 마우스의 연령에 따라 상당히 다양할 수 있기 때문에, 생체내 연구는 그룹당 동물 30마리 이상으로 지정하였다. 효능 데이터는 개별 마우스에 대해 나타내고, 대조군 평균(100%로 지정)에 대한 아밀로이드 침착량 또는 신경 이영양증의 백분율로 나타낸다. 3개의 N-말단 펩티드 각각을 이용한 면역화는 아밀로이드 침착량을 유의적으로 감소시킨다(46∼61%, p < 0.002)(도 2b). 또한, Aβ3-9 및 Aβ5-11은 신경 병리를 상당히 감소시킨다(각각 34% 및 41%, p < 0.05) (도 2c). Aβ15-24를 이용한 면역화는 아밀로이드 침착량 또는 신경 병리에 대한 어떠한 보호도 제공하지 않는다. 이들 결과는 항체 효능에 대한 한 기작으로서의 플라크 결합을 지지한다. 또한 이들 결과는, Aβ3-9에 대한 항체 반응이 신경 이영양증에 대한 높은 수준의 보호 및 강한 플라크 반응성을 제공하지만 가용성 펩티드를 매우 약하게 인식하기 때문에, 가용성 Aβ의 포착이 신경 병리의 감소에 필요하지 않음을 나타낸다. 플라크에 결합하지 않고 가용성 Aβ에 결합하는 항체는 또한, 더 높은 역가에서 또는 장기간 투여될 경우 상기 활성을 가질 수 있다. 플라크에 결합하지 않고 가용성 Aβ에 결합하는 항체는 또한 Aβ의 형성 및/또는 추가 침착을 방지하는 데 유용할 수 있다. Aβ15-24로 면역화하여 생성된 고 역가의 항체는, 그 단편 및 이의 부분단편이 이 목적을 위한 고 역가의 가용성 항체를 생성하는 데 특히 유용하다는 것을 나타낸다.

명확한 이해를 위해 상기 발명을 자세하게 설명하였지만, 첨부한 청구의 범위 내에서 특정 변형을 실행할 수 있음은 명백할 것이다. 본원에 인용된 모든 공보 및 특허 문서는, 각각을 개별적으로 나타냈듯이, 동일한 범위에서 모든 목적에 대해 그 전문이 본원에 참고 인용된다. 본원에서 달리 명백하게 나타내지 않더라도, 본 발명의 각각의 성분, 특징 또는 구체예는 임의의 다른 것과 조합하여 사용할 수 있다.

Claims

Aβ의 단편을 유효 투약법으로 투여함으로써 질환을 예방하는 것을 포함하는, 환자 뇌 속의 Aβ의 아밀로이드 침착물과 관련된 질환의 예방 방법으로서, 상기 단편은 잔기 1-11 사이의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 유도하지 않고 잔기 12-43 사이의 하나 이상의 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하고, 이 단편은 Aβ13-28, 17-28, 25-35, 35-40, 33-42 또는 35-42는 아니며, 유도된 항체는 환자 체내의 가용성 Aβ에 특이적으로 결합하여 가용성 Aβ로부터 뇌 속에 Aβ의 아밀로이드 침착물이 형성되는 것을 억제하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 단편에는 Aβ에 대한 T-세포 반응을 유도하는 완전한(intact) T-세포 에피토프가 없는 것인 방법.
제1항에 있어서, 유도된 항체는 Aβ의 아밀로이드 침착물에 특이적으로 결합하는 능력이 결핍된 것인 방법.
제1항에 있어서, 단편은 Aβ의 5∼10개 인접 아미노산의 분절을 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 단편은 Aβ15-24 내의 5∼10개 인접 아미노산의 분절을 포함하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 단편은 Aβ15-21, Aβ16-22, Aβ17-23, Aβ18-24, Aβ19-25, Aβ15-22, Aβ16-23, Aβ17-24, Aβ18-25, Aβ15-23, Aβ16-24, Aβ17-25, Aβ18-26, Aβ15-24, Aβ16-25 및 Aβ15-25로 구성되는 군에서 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, 단편은 Aβ39, 40 또는 41에는 특이적으로 결합하지 않고 Aβ42 및/또는 Aβ43에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하는 C-말단 단편인 방법.
Aβ의 단편을 유효 투약법으로 투여함으로써 질환을 예방하는 것을 포함하는, 환자 뇌 속의 Aβ의 아밀로이드 침착물과 관련된 질환의 예방 방법으로서, 상기 단편은 Aβ15-21, Aβ16-22, Aβ17-23, Aβ18-24, Aβ19-25, Aβ15-22, Aβ16-23, Aβ17-24, Aβ18-25, Aβ15-23, Aβ16-24, Aβ17-25, Aβ18-26, Aβ15-24, Aβ16-25 및 Aβ15-25로 구성되는 군에서 선택되는 것인 방법.
제1항에 있어서, Aβ1-11을 가지는 하나 이상의 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하는 Aβ의 단편을 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
제9항에 있어서, 단편이 잔기 12-43 사이의 하나 이상의 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하기 전에, Aβ1-11을 가지는 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하는 Aβ의 단편을 투여하는 것인 방법.
제1항에 있어서, Aβ1-11을 가지는 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 단편이 잔기 12-43 사이의 하나 이상의 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하기 전에, Aβ1-11을 가지는 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 질환은 인지 장애를 특징으로 하는 것인 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 질환은 알츠하이머병인 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 질환은 다운 증후군인 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 질환은 경도(mild) 인지 장애인 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 인간인 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 환자 체내의 유도된 항체를 모니터하는 것을 더 포함하는 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 무증상성인 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 증상을 보이고, 투여는 환자의 증상의 악화를 억제하는 것인 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 50세 이하인 방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 알츠하이머병에 대한 감수성을 나타내는 유전적 위험 인자를 보유하는 것인 방법.
제19항에 있어서, 첫 투여 단계를 실행한 뒤 환자는 5년간 검출가능한 증상이 발병하지 않는 것인 방법.
제1항 내지 제21항 및 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 알츠하이머병에 대해 공지된 위험 인자를 보유하고 있지 않은 것인 방법.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약법은 단편 50 ㎍ 이상의 투여량을 수일간 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 단편은 이 단편에 의해 유도된 항체의 수준을 증가시키는 면역보조제(adjuvant)와 함께 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 단편은 복강내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 피하 투여, 근내 투여, 국소 투여 또는 정맥내 투여로 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 단편은 이 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투여하여 투여되고, 상기 폴리뉴클레오티드는 발현되어 환자 체내에서 단편을 생성하는 것인 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 환자 혈액 중 유도된 항체의 수준에 대해 환자를 모니터하는 것을 더 포함하는 방법.
제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 단편은 3개월 이상의 기간 동안 다회 투여량으로 투여하는 것인 방법.
제30항에 있어서, 투여량은 50 ㎍ 이상인 방법.
제1항에 있어서, 단편은 운반체(carrier) 분자에 연결하여 접합체를 형성하는 것인 방법.
제32항에 있어서, 운반체는 이종성 폴리펩티드인 방법.
제32항에 있어서, 복수 카피(copy)의 단편을 운반체 분자에 연결하여 접합체를 형성하는 것인 방법.
제32항에 있어서, 복수 카피의 단편을 복수 카피의 운반체 분자에 연결하고, 이들을 서로 연결하는 것인 방법.
제33항에 있어서, 이종성 폴리펩티드는 QYIKANSKFIGITEL(서열 번호 8)을 포함하는 것인 방법.
제33항에 있어서, 이종성 폴리펩티드는 아미노산 서열 AKXVAAWTLKAAA(서열 번호 11)를 포함하는 것인 방법.
제33항에 있어서, 폴리펩티드는 이종성 폴리펩티드에 대한 T-세포 반응과 이에 의해 단편에 대한 B-세포 반응을 유도하는 것인 방법.
제1항에 있어서, 단편만 투여한 것에 비해 유도된 항체의 역가 및/또는 결합 친화력을 강화하는 면역보조제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
제39항에 있어서, 면역보조제 및 폴리펩티드는 조성물로서 함께 투여하는 것인 방법.
제39항에 있어서, 면역보조제는 폴리펩티드 투여 전에 투여하는 것인 방법.
제39항에 있어서, 면역보조제는 폴리펩티드 투여 후에 투여하는 것인 방법.
제39항에 있어서, 면역보조제는 명반(alum)인 방법.
제39항에 있어서, 면역보조제는 MPL인 방법.
제39항에 있어서, 면역보조제는 QS-21인 방법.
제39항에 있어서, 면역보조제는 불완전 프로인트 보조제(Incomplete Freund's Adjuvant)인 방법.
제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 단편의 투여량은 10 ㎍ 이상인 방법.
Aβ의 단편을 유효 투약법으로 투여함으로써 질환을 치료하는 것을 포함하는, 환자 뇌 속의 Aβ의 아밀로이드 침착물과 관련된 질환의 치료 방법으로서, 상기 단편은 잔기 1-11 사이의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 유도하지 않고 잔기 12-43 사이의 하나 이상의 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하고, 이 단편은 Aβ33-42, 13-28, 17-28, 25-35, 35-40 또는 35-42는 아니며, 유도된 항체는 환자 체내의 가용성 Aβ에 특이적으로 결합하여 가용성 Aβ로부터 뇌 속에 Aβ의 아밀로이드 침착물이 형성되는 것을 억제하는 것인 방법.
제48항에 있어서, 단편에는 Aβ에 대한 T-세포 반응을 유도하는 완전한 T-세포 에피토프가 없는 것인 방법.
제48항에 있어서, 유도된 항체는 Aβ의 아밀로이드 침착물에 특이적으로 결합하는 능력이 결핍된 것인 방법.
제48항에 있어서, 단편은 Aβ의 5∼10개 인접 아미노산의 분절을 포함하는 것인 방법.
제48항에 있어서, 단편은 Aβ15-24 내의 5∼10개 인접 아미노산의 분절을 포함하는 것인 방법.
제48항에 있어서, 단편은 Aβ15-21, Aβ16-22, Aβ17-23, Aβ18-24, Aβ19-25, Aβ15-22, Aβ16-23, Aβ17-24, Aβ18-25, Aβ15-23, Aβ16-24, Aβ17-25, Aβ18-26, Aβ15-24, Aβ16-25 및 Aβ15-25로 구성되는 군에서 선택되는 것인 방법.
제48항에 있어서, 단편은 Aβ39, 40 또는 41에는 특이적으로 결합하지 않고 Aβ42 및/또는 Aβ43에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하는 C-말단 단편인 방법.
Aβ의 단편을 유효 투약법으로 투여함으로써 질환을 치료하는 것을 포함하는, 환자 뇌 속의 Aβ의 아밀로이드 침착물과 관련된 질환의 치료 방법으로서, 상기 단편은 Aβ15-21, Aβ16-22, Aβ17-23, Aβ18-24, Aβ19-25, Aβ15-22, Aβ16-23, Aβ17-24, Aβ18-25, Aβ15-23, Aβ16-24, Aβ17-25, β18-26, Aβ15-24, Aβ16-25 및 Aβ15-25로 구성되는 군에서 선택되는 것인 방법.
제55항에 있어서, Aβ1-11을 가지는 하나 이상의 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하는 Aβ의 단편을 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
제56항에 있어서, 단편이 잔기 12-43 사이의 하나 이상의 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하기 전에, Aβ1-11을 가지는 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하는 Aβ의 단편을 투여하는 것인 방법.
제48항에 있어서, Aβ1-11을 가지는 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 것을 더 포함하는 방법.
제48항에 있어서, 단편이 잔기 12-43 사이의 하나 이상의 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하기 전에, Aβ1-11을 가지는 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 질환은 인지 장애를 특징으로 하는 것인 방법.
제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 질환은 알츠하이머병인 방법.
제1항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 질환은 다운 증후군인 방법.
제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 질환은 경도 인지 장애인 방법.
제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 인간인 방법.
제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 환자 체내의 유도된 항체를 모니터하는 것을 더 포함하는 방법.
제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 무증상성인 방법.
제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 증상을 보이고, 투여는 환자 증상의 악화를 억제하는 것인 방법.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 50세 이하인 방법.
제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 알츠하이머병에 대한 감수성을 나타내는 유전적 위험 인자를 보유하는 것인 방법.
제66항에 있어서, 첫 투여 단계를 실행한 뒤 환자는 5년간 검출가능한 증상이 발병하지 않는 것인 방법.
제1항 내지 제68항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 알츠하이머병에 대해 공지된 위험 인자를 보유하고 있지 않은 것인 방법.
제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약법은 단편 50 ㎍ 이상의 투여량을 수일간 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 단편은 이 단편에 의해 유도된 항체의 수준을 증가시키는 면역보조제와 함께 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 단편은 복강내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 피하 투여, 근내 투여, 국소 투여 또는 정맥내 투여로 투여하는 것인 방법.
제1항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 단편은 이 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투여하여 투여되고, 상기 폴리뉴클레오티드는 발현되어 환자 체내에서 단편을 생성하는 것인 방법.
제1항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 환자 혈액 중 유도된 항체의 수준에 대해 환자를 모니터하는 것을 더 포함하는 방법.
제1항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 단편은 3개월 이상의 기간 동안 다회 투여량으로 투여하는 것인 방법.
제77항에 있어서, 투여량은 50 ㎍ 이상인 방법.
제55항에 있어서, 단편은 운반체에 연결하여 접합체를 형성하는 것인 방법.
제79항에 있어서, 운반체는 이종성 폴리펩티드인 방법.
제79항에 있어서, 복수 카피의 단편을 운반체에 연결하여 접합체를 형성하는 것인 방법.
제79항에 있어서, 복수 카피의 단편을 복수 카피의 운반체 분자에 연결하고, 이들을 서로 연결하는 것인 방법.
제80항에 있어서, 이종성 폴리펩티드는 QYIKANSKFIGITEL(서열 번호 8)을 포함하는 것인 방법.
제80항에 있어서, 이종성 폴리펩티드는 아미노산 서열 AKXVAAWTLKAAA(서열 번호 11)를 포함하는 것인 방법.
제80항에 있어서, 폴리펩티드는 이종성 폴리펩티드에 대한 T-세포 반응과 이에 의해 단편에 대한 B-세포 반응을 유도하는 것인 방법.
제55항에 있어서, 단편만 투여한 것에 비해 유도된 항체의 역가 및/또는 결합 친화력을 강화하는 면역보조제를 투여하는 것을 더 포함하는 방법
제86항에 있어서, 면역보조제 및 폴리펩티드는 조성물로서 함께 투여하는 것인 방법.
제86항에 있어서, 면역보조제는 폴리펩티드 투여 전에 투여하는 것인 방법.
제86항에 있어서, 면역보조제는 폴리펩티드 투여 후에 투여하는 것인 방법.
제86항에 있어서, 면역보조제는 명반인 방법.
제86항에 있어서, 면역보조제는 MPL인 방법.
제86항에 있어서, 면역보조제는 QS-21인 방법.
제86항에 있어서, 면역보조제는 불완전 프로인트 보조제인 방법.
제1항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 단편의 투여량은 10 ㎍ 이상인 방법.
제48항 내지 제55항 중 어느 한 항에 정의된 Aβ의 단편 및 면역보조제를 포함하는 약학 조성물.
약제의 제조 시 환자 뇌 속의 Aβ의 아밀로이드 침착물과 관련된 질환을 치료하거나 예방하는 데 효과적인 Aβ의 단편의 용도로서, 상기 Aβ 단편은 잔기 1-11 사이의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 유도하지 않고 잔기 12-43 사이의 하나 이상의 에피토프에서 Aβ에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하고, 이 단편은 Aβ13-28, 17-28, 25-35, 35-40 또는 35-42는 아니며, 유도된 항체는 환자 체내의 가용성 Aβ에 특이적으로 결합하여 가용성 Aβ로부터 뇌 속에 Aβ의 아밀로이드 침착물이 형성되는 것을 억제하여, 질환을 예방하는 것인 용도.
제96항에 있어서, 단편에는 Aβ에 대한 T-세포 반응을 유도하는 완전한 T-세포 에피토프가 없는 것인 용도.
제96항에 있어서, 유도된 항체는 Aβ의 아밀로이드 침착물에 특이적으로 결합하는 능력이 결핍된 것인 용도.
제96항에 있어서, 단편은 Aβ의 5∼10개 인접 아미노산의 분절을 포함하는 것인 용도.
제96항에 있어서, 단편은 Aβ15-24 내의 5∼10개 인접 아미노산의 분절을 포함하는 것인 용도.
제96항에 있어서, 단편은 Aβ15-21, Aβ16-22, Aβ17-23, Aβ18-24, Aβ19-25, Aβ15-22, Aβ16-23, Aβ17-24, Aβ18-25, Aβ15-23, Aβ16-24, Aβ17-25, Aβ18-26, Aβ15-24, Aβ16-25 및 Aβ15-25로 구성되는 군에서 선택되는 것인 용도.
제96항에 있어서, 단편은 Aβ39, 40 또는 41에는 특이적으로 결합하지 않고 Aβ42 및/또는 Aβ43에 특이적으로 결합하는 항체를 유도하는 C-말단 단편인 용도.