PL204878B1 - Zastosowanie analogu autologicznego zwierzęcego Aβ albo polipeptydu APP lub sekwencji kodującej taki analog lub mikroorganizmu lub wirusa, który niesie nukleotydową sekwencję kodującą taki analog, analog polipeptydu amyloidogennego, immunogenna kompozycja, fragment kwasu nukleinowego kodujący analog, wektor, stransformowana komórka, kompozycja do indukowania produkcji przeciwciał i stabilna linia komórkowa - Google Patents
Zastosowanie analogu autologicznego zwierzęcego Aβ albo polipeptydu APP lub sekwencji kodującej taki analog lub mikroorganizmu lub wirusa, który niesie nukleotydową sekwencję kodującą taki analog, analog polipeptydu amyloidogennego, immunogenna kompozycja, fragment kwasu nukleinowego kodujący analog, wektor, stransformowana komórka, kompozycja do indukowania produkcji przeciwciał i stabilna linia komórkowaInfo
- Publication number
- PL204878B1 PL204878B1 PL362889A PL36288901A PL204878B1 PL 204878 B1 PL204878 B1 PL 204878B1 PL 362889 A PL362889 A PL 362889A PL 36288901 A PL36288901 A PL 36288901A PL 204878 B1 PL204878 B1 PL 204878B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- cell
- analog
- epitope
- nucleic acid
- amino acid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 255
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 225
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 209
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 157
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 157
- 230000003942 amyloidogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 143
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 110
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 110
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 100
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 91
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 83
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 53
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 53
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 48
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 43
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 39
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 35
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 33
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 21
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 claims abstract description 7
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract 3
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 119
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 claims description 77
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 claims description 72
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 claims description 72
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 claims description 72
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 56
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 51
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 50
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 44
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 42
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 39
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 30
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 28
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 26
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 24
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 23
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 23
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 19
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 18
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 18
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 17
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 17
- 238000007792 addition Methods 0.000 claims description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 13
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 13
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 13
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 13
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 12
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 11
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 11
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 11
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 11
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 10
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 9
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 8
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 7
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 7
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 claims description 7
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 6
- 102100029968 Calreticulin Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000549 Calreticulin Proteins 0.000 claims description 6
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 6
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims description 6
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 6
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 6
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 6
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 claims description 6
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 claims description 6
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 102100031132 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 claims description 5
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 claims description 5
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 claims description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 5
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 5
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 4
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 claims description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 4
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 claims description 3
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 claims description 3
- 102100039328 Endoplasmin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010036652 HSC70 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 claims description 3
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 claims description 3
- 102100027421 Heat shock cognate 71 kDa protein Human genes 0.000 claims description 3
- 101710113864 Heat shock protein 90 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 claims description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims description 3
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 claims description 3
- 241000223960 Plasmodium falciparum Species 0.000 claims description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 125000004030 farnesyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000002686 geranylgeranyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 108010017007 glucose-regulated proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 claims description 3
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 claims description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 3
- 125000001421 myristyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 3
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 3
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 claims description 2
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 claims description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 claims description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 claims 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 66
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 15
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 abstract 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 35
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 33
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 30
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 27
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 25
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 22
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 21
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 17
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 16
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 15
- 230000003941 amyloidogenesis Effects 0.000 description 15
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 13
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 12
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 12
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 11
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 11
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 11
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 11
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 11
- 102100026882 Alpha-synuclein Human genes 0.000 description 10
- 108010050254 Presenilins Proteins 0.000 description 10
- 108090000185 alpha-Synuclein Proteins 0.000 description 10
- 206010002022 amyloidosis Diseases 0.000 description 10
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 10
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 10
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 10
- -1 trehalose diesters Chemical class 0.000 description 10
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 9
- 102000018713 Histocompatibility Antigens Class II Human genes 0.000 description 9
- 102000015499 Presenilins Human genes 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 208000023697 ABri amyloidosis Diseases 0.000 description 8
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 8
- 201000000162 ITM2B-related cerebral amyloid angiopathy 1 Diseases 0.000 description 8
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 8
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 8
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 8
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 8
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 8
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 7
- 108010027412 Histocompatibility Antigens Class II Proteins 0.000 description 7
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 7
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 7
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 7
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 7
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 6
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 description 6
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 6
- 208000024777 Prion disease Diseases 0.000 description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 6
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 6
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 5
- 102000001049 Amyloid Human genes 0.000 description 5
- 108010094108 Amyloid Proteins 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 5
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 5
- 102100022033 Presenilin-1 Human genes 0.000 description 5
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 108010092114 histidylphenylalanine Proteins 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 5
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 5
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 5
- PHRHXTTZZWUGNN-UHFFFAOYSA-N 3-amino-3-methylbutan-1-ol Chemical compound CC(C)(N)CCO PHRHXTTZZWUGNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CCDFBRZVTDDJNM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- 241000193449 Clostridium tetani Species 0.000 description 4
- 102100021752 Corticoliberin Human genes 0.000 description 4
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 4
- YPHPEHMXOYTEQG-LAEOZQHASA-N Glu-Val-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YPHPEHMXOYTEQG-LAEOZQHASA-N 0.000 description 4
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Proteins 0.000 description 4
- 101000823051 Homo sapiens Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 4
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 4
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 108010036933 Presenilin-1 Proteins 0.000 description 4
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 4
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 4
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 4
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 102000046783 human APP Human genes 0.000 description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 4
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 4
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 4
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 4
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 4
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical group 0.000 description 4
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 4
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 4
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonyl chloride Chemical compound FC(F)(F)CS(Cl)(=O)=O CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 description 3
- 102100027058 Bleomycin hydrolase Human genes 0.000 description 3
- 108010025544 Bleomycin hydrolase Proteins 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100032165 Corticotropin-releasing factor-binding protein Human genes 0.000 description 3
- MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N Glu-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N MPZWMIIOPAPAKE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 3
- MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N Glu-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O MWMJCGBSIORNCD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 3
- RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O RLFSBAPJTYKSLG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N Gly-Leu-Thr Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LHYJCVCQPWRMKZ-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 3
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 3
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 108010036908 Presenilin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000012419 Presenilin-2 Human genes 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 3
- 102000019355 Synuclein Human genes 0.000 description 3
- 108050006783 Synuclein Proteins 0.000 description 3
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 3
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 3
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 3
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 3
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 3
- 108010083720 corticotropin releasing factor-binding protein Proteins 0.000 description 3
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 3
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 3
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 3
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 3
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 208000022256 primary systemic amyloidosis Diseases 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N Ala-Arg-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- FXKNPWNXPQZLES-ZLUOBGJFSA-N Ala-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FXKNPWNXPQZLES-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Asp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KXEVYGKATAMXJJ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- IETUUAHKCHOQHP-KZVJFYERSA-N Ala-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)N)[C@@H](C)O)C(O)=O IETUUAHKCHOQHP-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N Ala-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OMSKGWFGWCQFBD-KZVJFYERSA-N 0.000 description 2
- 102100034452 Alternative prion protein Human genes 0.000 description 2
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 2
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 2
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 2
- 102100040055 Amyloid beta precursor like protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000005666 Apolipoprotein A-I Human genes 0.000 description 2
- 108010059886 Apolipoprotein A-I Proteins 0.000 description 2
- 101710095339 Apolipoprotein E Proteins 0.000 description 2
- 108010060159 Apolipoprotein E4 Proteins 0.000 description 2
- HQIZDMIGUJOSNI-IUCAKERBSA-N Arg-Gly-Arg Chemical compound N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O HQIZDMIGUJOSNI-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- NVCIXQYNWYTLDO-IHRRRGAJSA-N Arg-His-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N NVCIXQYNWYTLDO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- SUMJNGAMIQSNGX-TUAOUCFPSA-N Arg-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O SUMJNGAMIQSNGX-TUAOUCFPSA-N 0.000 description 2
- OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- UDSVWSUXKYXSTR-QWRGUYRKSA-N Asn-Gly-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O UDSVWSUXKYXSTR-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O NYGILGUOUOXGMJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- PXLNPFOJZQMXAT-BYULHYEWSA-N Asp-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O PXLNPFOJZQMXAT-BYULHYEWSA-N 0.000 description 2
- OQMGSMNZVHYDTQ-ZKWXMUAHSA-N Asp-Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N OQMGSMNZVHYDTQ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000005145 Cerebral amyloid angiopathy Diseases 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 2
- MXZYQNJCBVJHSR-KATARQTJSA-N Cys-Lys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CS)N)O MXZYQNJCBVJHSR-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 206010016202 Familial Amyloidosis Diseases 0.000 description 2
- RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N Glu-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O RUFHOVYUYSNDNY-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- KEBACWCLVOXFNC-DCAQKATOSA-N Glu-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O KEBACWCLVOXFNC-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N Glu-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N Glu-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O LXAUHIRMWXQRKI-XHNCKOQMSA-N 0.000 description 2
- ZPASCJBSSCRWMC-GVXVVHGQSA-N Glu-His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZPASCJBSSCRWMC-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- SUIAHERNFYRBDZ-GVXVVHGQSA-N Glu-Lys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SUIAHERNFYRBDZ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N Glu-Pro-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O TWYFJOHWGCCRIR-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- DDXZHOHEABQXSE-NKIYYHGXSA-N Glu-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O DDXZHOHEABQXSE-NKIYYHGXSA-N 0.000 description 2
- ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZYRXTRTUCAVNBQ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- QRWPTXLWHHTOCO-DZKIICNBSA-N Glu-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O QRWPTXLWHHTOCO-DZKIICNBSA-N 0.000 description 2
- UVTSZKIATYSKIR-RYUDHWBXSA-N Gly-Tyr-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UVTSZKIATYSKIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 2
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 2
- JIUYRPFQJJRSJB-QWRGUYRKSA-N His-His-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CN=CN1 JIUYRPFQJJRSJB-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N His-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XMAUFHMAAVTODF-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- XIGFLVCAVQQGNS-IHRRRGAJSA-N His-Pro-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 XIGFLVCAVQQGNS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N His-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- VCSBGUACOYUIGD-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O VCSBGUACOYUIGD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- LKXANTUNFMVCNF-IHPCNDPISA-N Leu-His-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O LKXANTUNFMVCNF-IHPCNDPISA-N 0.000 description 2
- KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O KPYAOIVPJKPIOU-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- FLCMXEFCTLXBTL-DCAQKATOSA-N Lys-Asp-Arg Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N FLCMXEFCTLXBTL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- MWVUEPNEPWMFBD-SRVKXCTJSA-N Lys-Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MWVUEPNEPWMFBD-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- ZMMDPRTXLAEMOD-BZSNNMDCSA-N Lys-His-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O ZMMDPRTXLAEMOD-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 2
- ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN ATIPDCIQTUXABX-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 2
- QVTDVTONTRSQMF-WDCWCFNPSA-N Lys-Thr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN QVTDVTONTRSQMF-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 2
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 2
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 2
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 2
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 2
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 206010034719 Personality change Diseases 0.000 description 2
- HTTYNOXBBOWZTB-SRVKXCTJSA-N Phe-Asn-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N HTTYNOXBBOWZTB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- ALHULIGNEXGFRM-QWRGUYRKSA-N Phe-Cys-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALHULIGNEXGFRM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- RYQWALWYQWBUKN-FHWLQOOXSA-N Phe-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RYQWALWYQWBUKN-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 2
- MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N Phe-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MSSXKZBDKZAHCX-UNQGMJICSA-N 0.000 description 2
- 208000000609 Pick Disease of the Brain Diseases 0.000 description 2
- 108010071690 Prealbumin Proteins 0.000 description 2
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 2
- FRKBNXCFJBPJOL-GUBZILKMSA-N Pro-Glu-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FRKBNXCFJBPJOL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- NXEYSLRNNPWCRN-SRVKXCTJSA-N Pro-Glu-Leu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NXEYSLRNNPWCRN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- RJTUIDFUUHPJMP-FHWLQOOXSA-N Pro-Trp-His Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)N[C@@H](CC4=CN=CN4)C(=O)O RJTUIDFUUHPJMP-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 2
- YDTUEBLEAVANFH-RCWTZXSCSA-N Pro-Val-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 YDTUEBLEAVANFH-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N Thr-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BSNZTJXVDOINSR-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 2
- BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)O BQBCIBCLXBKYHW-CSMHCCOUSA-N 0.000 description 2
- SCSVNSNWUTYSFO-WDCWCFNPSA-N Thr-Lys-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SCSVNSNWUTYSFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 2
- CJEHCEOXPLASCK-MEYUZBJRSA-N Thr-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@H](O)C)CC1=CC=C(O)C=C1 CJEHCEOXPLASCK-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 2
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 102000009190 Transthyretin Human genes 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- XEHGAHOCTDKOKP-XIRDDKMYSA-N Trp-Cys-Lys Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N XEHGAHOCTDKOKP-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 2
- CDHQEOXPWBDFPL-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CDHQEOXPWBDFPL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- WSFXJLFSJSXGMQ-MGHWNKPDSA-N Tyr-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N WSFXJLFSJSXGMQ-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 2
- MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N Tyr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MFEVVAXTBZELLL-GGVZMXCHSA-N 0.000 description 2
- MJUTYRIMFIICKL-JYJNAYRXSA-N Tyr-Val-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MJUTYRIMFIICKL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 2
- UDNYEPLJTRDMEJ-RCOVLWMOSA-N Val-Asn-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)NCC(=O)O)N UDNYEPLJTRDMEJ-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 2
- DHINLYMWMXQGMQ-IHRRRGAJSA-N Val-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 DHINLYMWMXQGMQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- BCBFMJYTNKDALA-UFYCRDLUSA-N Val-Phe-Phe Chemical compound N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O BCBFMJYTNKDALA-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 2
- XBJKAZATRJBDCU-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XBJKAZATRJBDCU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N Val-Pro-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N ZXYPHBKIZLAQTL-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 2
- MIKHIIQMRFYVOR-RCWTZXSCSA-N Val-Pro-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](C(C)C)N)O MIKHIIQMRFYVOR-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- 208000018756 Variant Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001594 aberrant effect Effects 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 230000006991 amyloid degrading activity Effects 0.000 description 2
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000001896 anti-amyloidogenic effect Effects 0.000 description 2
- 101150031224 app gene Proteins 0.000 description 2
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 2
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010092854 aspartyllysine Proteins 0.000 description 2
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 208000005881 bovine spongiform encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 2
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 208000017105 hereditary amyloidosis Diseases 0.000 description 2
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 208000021005 inheritance pattern Diseases 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 206010023497 kuru Diseases 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 2
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 2
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 2
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 2
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 230000007138 neurofibrillary change Effects 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 108010031491 threonyl-lysyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010029384 tryptophyl-histidine Proteins 0.000 description 2
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006269 (delayed) early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 1
- QZCJOXAIQXPLNS-UHFFFAOYSA-N 1,1,2,2,3,3,4,4,4a,5,5,6,6,7,7,8,8,8a-octadecafluoronaphthalene 4-(2-aminoethyl)benzene-1,2-diol Chemical compound NCCc1ccc(O)c(O)c1.FC1(F)C(F)(F)C(F)(F)C2(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C2(F)C1(F)F QZCJOXAIQXPLNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 2-(ethylamino)ethanol Chemical compound CCNCCO MIJDSYMOBYNHOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710122462 65 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 208000023769 AA amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 208000022385 ALys amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 101150037123 APOE gene Proteins 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N Ala-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N 0.000 description 1
- SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N Ala-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SSSROGPPPVTHLX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- GORKKVHIBWAQHM-GCJQMDKQSA-N Ala-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GORKKVHIBWAQHM-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N Ala-Asp-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N Ala-Asp-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN LSLIRHLIUDVNBN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N Ala-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WKOBSJOZRJJVRZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- FBHOPGDGELNWRH-DRZSPHRISA-N Ala-Glu-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O FBHOPGDGELNWRH-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N Ala-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- AJBVYEYZVYPFCF-CIUDSAMLSA-N Ala-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AJBVYEYZVYPFCF-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NHWYNIZWLJYZAG-XVYDVKMFSA-N Ala-Ser-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N NHWYNIZWLJYZAG-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- BOKLLPVAQDSLHC-FXQIFTODSA-N Ala-Val-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N BOKLLPVAQDSLHC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ANNKVZSFQJGVDY-XUXIUFHCSA-N Ala-Val-Pro-Pro Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 ANNKVZSFQJGVDY-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101710187573 Alcohol dehydrogenase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101710133776 Alcohol dehydrogenase class-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100022524 Alpha-1-antichymotrypsin Human genes 0.000 description 1
- 102100033312 Alpha-2-macroglobulin Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 101710168919 Amyloid beta precursor like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000014303 Amyloid beta-Protein Precursor Human genes 0.000 description 1
- 108010079054 Amyloid beta-Protein Precursor Proteins 0.000 description 1
- 206010002023 Amyloidoses Diseases 0.000 description 1
- 108010025628 Apolipoproteins E Proteins 0.000 description 1
- 102000013918 Apolipoproteins E Human genes 0.000 description 1
- 102100021569 Apoptosis regulator Bcl-2 Human genes 0.000 description 1
- IGULQRCJLQQPSM-DCAQKATOSA-N Arg-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IGULQRCJLQQPSM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- JQFJNGVSGOUQDH-XIRDDKMYSA-N Arg-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 JQFJNGVSGOUQDH-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- NKNILFJYKKHBKE-WPRPVWTQSA-N Arg-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NKNILFJYKKHBKE-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- BMNVSPMWMICFRV-DCAQKATOSA-N Arg-His-Asp Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)CC1=CN=CN1 BMNVSPMWMICFRV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- UHFUZWSZQKMDSX-DCAQKATOSA-N Arg-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N UHFUZWSZQKMDSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZEBDYGZVMMKZNB-SRVKXCTJSA-N Arg-Met-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N ZEBDYGZVMMKZNB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N Arg-Pro-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O WKPXXXUSUHAXDE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N Arg-Pro-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O HGKHPCFTRQDHCU-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N Arg-Val-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ULBHWNVWSCJLCO-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- HZPSDHRYYIORKR-WHFBIAKZSA-N Asn-Ala-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O HZPSDHRYYIORKR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- DMLSCRJBWUEALP-LAEOZQHASA-N Asn-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DMLSCRJBWUEALP-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- MYCSPQIARXTUTP-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MYCSPQIARXTUTP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AEZCCDMZZJOGII-DCAQKATOSA-N Asn-Met-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AEZCCDMZZJOGII-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZUFPUBYQYWCMDB-NUMRIWBASA-N Asn-Thr-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZUFPUBYQYWCMDB-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N Asn-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FYRVDDJMNISIKJ-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BEHQTVDBCLSCBY-CFMVVWHZSA-N Asn-Tyr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BEHQTVDBCLSCBY-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- DPWDPEVGACCWTC-SRVKXCTJSA-N Asn-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O DPWDPEVGACCWTC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O KWBQPGIYEZKDEG-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SBHUBSDEZQFJHJ-CIUDSAMLSA-N Asp-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O SBHUBSDEZQFJHJ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QXHVOUSPVAWEMX-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QXHVOUSPVAWEMX-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JUWZKMBALYLZCK-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- YWLDTBBUHZJQHW-KKUMJFAQSA-N Asp-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N YWLDTBBUHZJQHW-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N Asp-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FAUPLTGRUBTXNU-FXQIFTODSA-N Asp-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FAUPLTGRUBTXNU-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000589969 Borreliella burgdorferi Species 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000010792 Chromogranin A Human genes 0.000 description 1
- 108010038447 Chromogranin A Proteins 0.000 description 1
- 102000003780 Clusterin Human genes 0.000 description 1
- 108090000197 Clusterin Proteins 0.000 description 1
- 241000037164 Collema parvum Species 0.000 description 1
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 208000011990 Corticobasal Degeneration Diseases 0.000 description 1
- 108010022152 Corticotropin-Releasing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 1
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 1
- OHLLDUNVMPPUMD-DCAQKATOSA-N Cys-Leu-Val Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N OHLLDUNVMPPUMD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 102000015833 Cystatin Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000255601 Drosophila melanogaster Species 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 208000034846 Familial Amyloid Neuropathies Diseases 0.000 description 1
- 208000007487 Familial Cerebral Amyloid Angiopathy Diseases 0.000 description 1
- 102400000524 Fibrinogen alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 101710137044 Fibrinogen alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000004878 Gelsolin Human genes 0.000 description 1
- 108090001064 Gelsolin Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N Glu-Arg-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KKCUFHUTMKQQCF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KJBGAZSLZAQDPV-KKUMJFAQSA-N Glu-Phe-Arg Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N KJBGAZSLZAQDPV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- FGSGPLRPQCZBSQ-AVGNSLFASA-N Glu-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FGSGPLRPQCZBSQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N Glu-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SYWCGQOIIARSIX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NNQDRRUXFJYCCJ-NHCYSSNCSA-N Glu-Pro-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NNQDRRUXFJYCCJ-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LWYUQLZOIORFFJ-XKBZYTNZSA-N Glu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O LWYUQLZOIORFFJ-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- DTLLNDVORUEOTM-WDCWCFNPSA-N Glu-Thr-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O DTLLNDVORUEOTM-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- 108010021582 Glucokinase Proteins 0.000 description 1
- 102000030595 Glucokinase Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N Gly-Asp Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O SCCPDJAQCXWPTF-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- LHRXAHLCRMQBGJ-RYUDHWBXSA-N Gly-Glu-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)CN LHRXAHLCRMQBGJ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Leu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- SCWYHUQOOFRVHP-MBLNEYKQSA-N Gly-Ile-Thr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SCWYHUQOOFRVHP-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- YHYDTTUSJXGTQK-UWVGGRQHSA-N Gly-Met-Leu Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YHYDTTUSJXGTQK-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N Gly-Ser-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Lys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN XHVONGZZVUUORG-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N Gly-Val-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CN KSOBNUBCYHGUKH-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 108010062347 HLA-DQ Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101710165610 Heat-stable 19 kDa antigen Proteins 0.000 description 1
- 102000008055 Heparan Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 206010019889 Hereditary neuropathic amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N His-Ala-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 IPIVXQQRZXEUGW-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- SKYULSWNBYAQMG-IHRRRGAJSA-N His-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SKYULSWNBYAQMG-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- OQDLKDUVMTUPPG-AVGNSLFASA-N His-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OQDLKDUVMTUPPG-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- VXZZUXWAOMWWJH-QTKMDUPCSA-N His-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VXZZUXWAOMWWJH-QTKMDUPCSA-N 0.000 description 1
- GGXUJBKENKVYNV-ULQDDVLXSA-N His-Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N GGXUJBKENKVYNV-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- 101100268553 Homo sapiens APP gene Proteins 0.000 description 1
- 101000890407 Homo sapiens Amyloid beta precursor like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000971171 Homo sapiens Apoptosis regulator Bcl-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000934372 Homo sapiens Macrosialin Proteins 0.000 description 1
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 1
- 102000016252 Huntingtin Human genes 0.000 description 1
- 108050004784 Huntingtin Proteins 0.000 description 1
- WUEIUSDAECDLQO-NAKRPEOUSA-N Ile-Ala-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N WUEIUSDAECDLQO-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- NULSANWBUWLTKN-NAKRPEOUSA-N Ile-Arg-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N NULSANWBUWLTKN-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- XOZOSAUOGRPCES-STECZYCISA-N Ile-Pro-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XOZOSAUOGRPCES-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010021639 Incontinence Diseases 0.000 description 1
- 102000036770 Islet Amyloid Polypeptide Human genes 0.000 description 1
- 108010041872 Islet Amyloid Polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 1
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N L-Met-L-Phe Natural products CSCCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 HGCNKOLVKRAVHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- RIMMMMYKGIBOSN-DCAQKATOSA-N Leu-Asn-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O RIMMMMYKGIBOSN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N Leu-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N LXKNSJLSGPNHSK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNRPTBRHRRZCMA-RWMBFGLXSA-N Leu-Met-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N GNRPTBRHRRZCMA-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- HGUUMQWGYCVPKG-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N HGUUMQWGYCVPKG-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- YRRCOJOXAJNSAX-IHRRRGAJSA-N Leu-Pro-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YRRCOJOXAJNSAX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PWPBLZXWFXJFHE-RHYQMDGZSA-N Leu-Pro-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PWPBLZXWFXJFHE-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O LFSQWRSVPNKJGP-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- WUHBLPVELFTPQK-KKUMJFAQSA-N Leu-Tyr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WUHBLPVELFTPQK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WSXTWLJHTLRFLW-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WSXTWLJHTLRFLW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IRNSXVOWSXSULE-DCAQKATOSA-N Lys-Ala-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN IRNSXVOWSXSULE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WGLAORUKDGRINI-WDCWCFNPSA-N Lys-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O WGLAORUKDGRINI-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- KNKJPYAZQUFLQK-IHRRRGAJSA-N Lys-His-Arg Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N KNKJPYAZQUFLQK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- XOQMURBBIXRRCR-SRVKXCTJSA-N Lys-Lys-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN XOQMURBBIXRRCR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LMGNWHDWJDIOPK-DKIMLUQUSA-N Lys-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LMGNWHDWJDIOPK-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- MIFFFXHMAHFACR-KATARQTJSA-N Lys-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN MIFFFXHMAHFACR-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- TVOOGUNBIWAURO-KATARQTJSA-N Lys-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O TVOOGUNBIWAURO-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N Lys-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102100025136 Macrosialin Human genes 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000009018 Medullary thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- OHMKUHXCDSCOMT-QXEWZRGKSA-N Met-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OHMKUHXCDSCOMT-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- FWAHLGXNBLWIKB-NAKRPEOUSA-N Met-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCSC FWAHLGXNBLWIKB-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- 208000016285 Movement disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 101100440173 Mus musculus Clu gene Proteins 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241001644525 Nastus productus Species 0.000 description 1
- 101100342977 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108700006640 OspA Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 description 1
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010087702 Penicillinase Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- METZZBCMDXHFMK-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N METZZBCMDXHFMK-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- AOKZOUGUMLBPSS-PMVMPFDFSA-N Phe-Trp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AOKZOUGUMLBPSS-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- 102000018890 Phospholipase C delta Human genes 0.000 description 1
- 108010013144 Phospholipase C delta Proteins 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 1
- FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FMLRRBDLBJLJIK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZYJMLBCDFPIGNL-JYJNAYRXSA-N Pro-Tyr-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O ZYJMLBCDFPIGNL-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- IIRBTQHFVNGPMQ-AVGNSLFASA-N Pro-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 IIRBTQHFVNGPMQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 1
- 108010011939 Pyruvate Decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 102000013008 Semaphorin-3A Human genes 0.000 description 1
- 108010090319 Semaphorin-3A Proteins 0.000 description 1
- OHKLFYXEOGGGCK-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O OHKLFYXEOGGGCK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N Ser-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O MUJQWSAWLLRJCE-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- MHVXPTAMDHLTHB-IHPCNDPISA-N Ser-Phe-Trp Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MHVXPTAMDHLTHB-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- ANOQEBQWIAYIMV-AEJSXWLSSA-N Ser-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N ANOQEBQWIAYIMV-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- 108700028909 Serum Amyloid A Proteins 0.000 description 1
- 102000054727 Serum Amyloid A Human genes 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 102000004874 Synaptophysin Human genes 0.000 description 1
- 108090001076 Synaptophysin Proteins 0.000 description 1
- 108090000054 Syndecan-2 Proteins 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 208000034799 Tauopathies Diseases 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N Thr-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O MQCPGOZXFSYJPS-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- GZYNMZQXFRWDFH-YTWAJWBKSA-N Thr-Arg-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O GZYNMZQXFRWDFH-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 1
- PZVGOVRNGKEFCB-KKHAAJSZSA-N Thr-Asn-Val Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N)O PZVGOVRNGKEFCB-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- LHEZGZQRLDBSRR-WDCWCFNPSA-N Thr-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O LHEZGZQRLDBSRR-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- AYCQVUUPIJHJTA-IXOXFDKPSA-N Thr-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AYCQVUUPIJHJTA-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N Thr-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWQNAFHCXKVZKZ-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- NDXSOKGYKCGYKT-VEVYYDQMSA-N Thr-Pro-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NDXSOKGYKCGYKT-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N Thr-Thr-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O LECUEEHKUFYOOV-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N Thr-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KPMIQCXJDVKWKO-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 1
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 206010044688 Trisomy 21 Diseases 0.000 description 1
- LTLBNCDNXQCOLB-UBHSHLNASA-N Trp-Asp-Ser Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)=CNC2=C1 LTLBNCDNXQCOLB-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- WNGMGTMSUBARLB-RXVVDRJESA-N Trp-Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC=3C4=CC=CC=C4NC=3)N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 WNGMGTMSUBARLB-RXVVDRJESA-N 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- BURPTJBFWIOHEY-UWJYBYFXSA-N Tyr-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 BURPTJBFWIOHEY-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- WJKJJGXZRHDNTN-UWVGGRQHSA-N Tyr-Cys Chemical compound SC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 WJKJJGXZRHDNTN-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- XQYHLZNPOTXRMQ-KKUMJFAQSA-N Tyr-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O XQYHLZNPOTXRMQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- YFOCMOVJBQDBCE-NRPADANISA-N Val-Ala-Glu Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N YFOCMOVJBQDBCE-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- RUCNAYOMFXRIKJ-DCAQKATOSA-N Val-Ala-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN RUCNAYOMFXRIKJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BMGOFDMKDVVGJG-NHCYSSNCSA-N Val-Asp-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N BMGOFDMKDVVGJG-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- DDNIHOWRDOXXPF-NGZCFLSTSA-N Val-Asp-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N DDNIHOWRDOXXPF-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 1
- YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N Val-Asp-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YODDULVCGFQRFZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- ICFRWCLVYFKHJV-FXQIFTODSA-N Val-Cys-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N ICFRWCLVYFKHJV-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N Val-Glu-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O XGJLNBNZNMVJRS-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- WDIGUPHXPBMODF-UMNHJUIQSA-N Val-Glu-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N WDIGUPHXPBMODF-UMNHJUIQSA-N 0.000 description 1
- PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N Val-Gly-Gly Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O PIFJAFRUVWZRKR-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- BZWUSZGQOILYEU-STECZYCISA-N Val-Ile-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BZWUSZGQOILYEU-STECZYCISA-N 0.000 description 1
- QPPZEDOTPZOSEC-RCWTZXSCSA-N Val-Met-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O QPPZEDOTPZOSEC-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N Valylglycine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000036626 alertness Effects 0.000 description 1
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010091628 alpha 1-Antichymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 108010001271 arginyl-glutamyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 1
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical group N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 235000012255 calcium oxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N cyclandelate Chemical compound C1C(C)(C)CC(C)CC1OC(=O)C(O)C1=CC=CC=C1 WZHCOOQXZCIUNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108050004038 cystatin Proteins 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 208000015756 familial Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 235000019162 flavin adenine dinucleotide Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000009395 genetic defect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 108010078326 glycyl-glycyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 210000004295 hippocampal neuron Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011167 hydrochloric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000568 immunological adjuvant Substances 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000009655 industrial fermentation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 235000014413 iron hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L iron(ii) hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Fe+2] NCNCGGDMXMBVIA-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000155 isotopic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 150000002703 mannose derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 208000023356 medullary thyroid gland carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003923 mental ability Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 108010068488 methionylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004088 microvessel Anatomy 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 230000006764 neuronal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229940099789 ospa protein Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 229950009506 penicillinase Drugs 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000003016 phosphoric acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 108010040003 polyglutamine Proteins 0.000 description 1
- 229920000155 polyglutamine Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 201000002212 progressive supranuclear palsy Diseases 0.000 description 1
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 208000008864 scrapie Diseases 0.000 description 1
- 230000006403 short-term memory Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N tetrafluoromethane Chemical compound FC(F)(F)F TXEYQDLBPFQVAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 201000007905 transthyretin amyloidosis Diseases 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 101150108727 trpl gene Proteins 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 231100000216 vascular lesion Toxicity 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0007—Nervous system antigens; Prions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6087—Polysaccharides; Lipopolysaccharides [LPS]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/64—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the architecture of the carrier-antigen complex, e.g. repetition of carrier-antigen units
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/47—Assays involving proteins of known structure or function as defined in the subgroups
- G01N2333/4701—Details
- G01N2333/4709—Amyloid plaque core protein
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/04—Screening involving studying the effect of compounds C directly on molecule A (e.g. C are potential ligands for a receptor A, or potential substrates for an enzyme A)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
Description
Przedmiotem niniejszego wynalazku jest zastosowanie analogu autologicznego zwierzęcego Αβ albo polipeptydu APP lub sekwencji kodującej taki analog lub mikroorganizmu lub wirusa, który niesie nukleotydową sekwencję kodującą taki analog, analog polipeptydu amyloidogennego, immunogenna kompozycja, fragment kwasu nukleinowego kodujący analog, wektor, stransformowana komórka, kompozycja do indukowania produkcji przeciwciał i stabilna linia komórkowa.
Niniejszy wynalazek dotyczy poprawy w leczeniu i zapobieganiu chorobie Alzheimera (AD) i innym chorobom, które charakteryzują się odkładaniem amyloidu, np. charakteryzują się odkładaniem amyloidu w ośrodkowym układzie nerwowym (OUN).
Konkretniej, niniejszy wynalazek dostarcza sposobu obniżania poziomu (niepożądanych) złogów amyloidowych przez umożliwienie wytwarzania przeciwciał przeciwko stosownemu białku lub jego komponentom u osobników cierpiących na, lub zagrożonych cierpieniem z powodu choroby o patologii związanej z odkładaniem amyloidu.
Skrobiawica jest to zewnątrzkomórkowe odkładanie nierozpuszczalnych włókien białkowych prowadzące do uszkodzenia tkanki i choroby (Pepys, 1996; Tan i wsp., 1995; Kelly, 1996). Włókna tworzą się wówczas, gdy normalnie rozpuszczalne białka i peptydy samo-asocjują w nieprawidłowy sposób (Kelly, 1997).
Amyloid jest związany z poważnymi chorobami obejmującymi systemową skrobiawicę, AD, cukrzycę dorosłych, chorobę Parkinsona, chorobę Huntingtona, otępienie czołowo-skroniowe oraz przenoszoną przez cząsteczki typu prion encefalopatię gąbczastą (kuru i choroba Creutzfeldta-Jacoba u ludzi oraz trzęsawka (ang. Scrapie) i BSE odpowiednio u owiec i bydła), a tworzenie płytki amyloidowej przykładowo w Alzheimerze, wydaje się być ściśle związane z postępem ludzkiej choroby. Wykazano, w modelach zwierzęcych, że nadprodukcja czy wytwarzanie przez ekspresję zmodyfikowanych postaci białek znalezionych w złogach, jak białko β-amyloidowe, indukuje różne objawy choroby, np. objawy podobne do Alzheimera. Nie istnieje specyficzne leczenie złogów amyloidowych i choroby te są zazwyczaj śmiertelne.
Podjednostki włókien amyloidowych mogą być typu dzikiego, odmianą lub uciętą postacią białek, a podobne włókna można wytwarzać in vitro z oligopeptydów i białek zdenaturowanych (Bradbury i wsp., 1960; Filshie i wsp., 1964; Burke & Rougvie, 1972). Charakter skrobiawicy określany jest przez naturę polipeptydowego składnika włókien. Pomimo dużych różnic w rozmiarze, strukturze natywnej i funkcji białek amyloidowych, wszystkie włókna amyloidowe mają nieokreśloną długość, są nierozgałęzione, o średnicy 0,007 μm do 0,012 μm i wykazują charakterystyczne barwienie czerwienią Kongo (Pepys, 1996). Charakteryzują się strukturą krzyża β (Pauling i Corey, 1951), w której łańcuch polipeptydowy jest zorganizowany w β-harmonijki. Chociaż białka amyloidowe mają bardzo różne struktury prekursorowe, wszystkie one mogą podlegać strukturalnej konwersji, prawdopodobnie na podobnej drodze, do źle sfałdowanej postaci, która jest budulcowym blokiem protofilamentalnej helisy β-harmonijki.
Ten zróżnicowany wzór włókien prowadzi do skrobiawic nazywanych β-fibrylozami (Glenner, 1980 a,b), a białko włókienkowe z AD nazwano białkiem β, zanim poznana została jego struktura drugorzędowa (Glenner i Wong, 1984). Charakterystyczny wzór dyfrakcji krzyża β, wraz z pojawieniem się włókien i właściwościami barwienia są obecnie zaakceptowaną próbą diagnostyczną dla amyloidu i sugeruje się, że włókna, chociaż tworzone z całkiem różnych prekursorów białkowych, mają wspólny stopień podobieństwa strukturalnego i obejmują strukturalną nadrodzinę niezależnie od natury ich białek prekursorowych (Sunde M, Serpell LC, Bartlam M, Fraser PE, Pepys MB, Blake CCFJ Mol Biol 1997 Oct 31; 273(3): 729-739).
Jedną z najbardziej rozpowszechnionych i najlepiej poznanych chorób, w której jak się sugeruje, złogi amyloidowe w ośrodkowym układzie nerwowym odgrywają kluczową rolę w postępowaniu choroby, jest AD.
AD
Choroba Alzheimera (AD) jest nieodwracalnym, postępującym zaburzeniem mózgu, które pojawia się stopniowo i w wyniku którego dochodzi do utraty pamięci, zmian behawioralnych i osobowościowych oraz utraty zdolności umysłowych. Utraty te związane są ze śmiercią komórek mózgu i przerwaniem połączeń pomiędzy nimi. Przebieg choroby różni się u różnych osób i różna jest szybkość zaniku. Średnio, pacjenci z AD żyją przez 8 do 10 lat od zdiagnozowania, chociaż choroba może trwać aż do 20 lat.
PL 204 878 B1
AD postępuje etapami, od wczesnego, łagodnego zaniku pamięci, do ostrej utraty funkcji umysłowych. Utrata ta jest znana jako otępienie. U większość ludzi z AD, symptomy po raz pierwszy pojawiają się w wieku po 60, lecz wcześniejsze początki nie są rzadkie. Najwcześniejsze objawy często obejmują utratę pamięci świeżej, nieprawidłowe rozumowanie oraz zmiany osobowościowe. Często, ludzie we wczesnym etapie AD myślą mniej klarownie i zapominają nazw bliskich osób i codziennych przedmiotów. W późniejszej chorobie mogą zapominać wykonywania prostych czynności. W końcu, ludzie z AD tracą wszelką zdolność rozumowania i stają się zależni w codziennej opiece od innych ludzi. Ostatecznie choroba tak osłabia, że pacjenci są przykuci do łóżka i podatni na rozwinięcie innych chorób i infekcji. Najczęściej ludzie z AD umierają na zapalenie płuc.
Chociaż ryzyko rozwoju AD wzrasta z wiekiem, AD i objawy otępienia nie są częścią normalnego starzenia się. AD i inne zaburzenia powodujące otępienie wywołane są chorobami, które działają na mózg. W normalnym procesie starzenia komórki nerwowe w mózgu nie giną w dużej liczbie. Dla kontrastu, AD uszkadza trzy procesy kluczowe: komunikację, metabolizm i naprawę komórek nerwowych. Uszkodzenie to ostatecznie powoduje zahamowanie działania wielu komórek nerwowych, utratę połączeń z innymi komórkami nerwowymi i śmierć.
Po pierwsze, AD niszczy neurony w częściach mózgu kontrolujących pamięć, w szczególności w hipokampie i w strukturach pokrewnych. Ponieważ komórki nerwowe hipokampa przestają wł a ściwie funkcjonować, zanika pamięć krótkoterminowa i często zaczyna zanikać zdolność osoby do wykonywania prostych i znanych zadań. AD atakuje także korę mózgową, w szczególności w obszarach odpowiedzialnych za mowę i rozumienie. W końcu dotkniętych jest wiele innych obszarów mózgu, wszystkie one zanikają (kurczą się) i pacjent z AD staje się przykuty do łóżka, nie trzymający moczu i stolca i całkowicie bezradny i nie reagujący na świat zewnętrzny (źródło: National Institute on Aging Progress Report on Alzheimer's Disease, 1999).
Wpływ AD
AD jest najpowszechniejszą przyczyną otępienia wśród ludzi w wieku 65 lat i starszych. Przedstawia poważny problem zdrowotny ze względu na ogromny wpływ na pacjentów, rodziny, system opieki zdrowotnej i społeczeństwo jako całość. Naukowcy szacują, że do 4 milionów, ludzi cierpi obecnie na chorobę i liczba przypadków podwaja się co każde 5 lat w wieku powyżej 65 lat. Szacuje się także, że w przybliżeniu 360000 nowych przypadków (zapadalność) będzie pojawiać się każdego roku, chociaż liczba ta będzie wzrastać wraz ze starzeniem się populacji (Brookmeyer i wsp., 1998).
AD nakłada poważny ciężar ekonomiczny na społeczeństwo. W ostatnich badaniach przeprowadzonych w Stanach Zjednoczonych oszacowano, że coroczny koszt opieki ponoszony na jednego pacjenta z AD wynosi 18408$ dla pacjenta z łagodną AD, 30096$ dla pacjenta z umiarkowaną AD i 36132$ dla pacjenta z ostrą AD. Coroczny koszt narodowy ponoszony na opiekę nad pacjentami z AD w USA jest szacowany na nieco powyż ej 50 miliardów $ (Leon i wsp., 1998).
W przybliż eniu 4 miliony Amerykanów jest w wieku 85 lat lub w starszym i w wię kszoś ci krajów uprzemysłowionych ta grupa wiekowa jest najszybciej powiększającą się częścią populacji. Szacuje się, że w USA grupa ta będzie liczyła prawie 8,5 m.in. Do roku 2030; niektórzy eksperci, którzy badają trendy w populacji sugerują, że liczba ta będzie jeszcze większa. Ponieważ coraz więcej ludzi żyje dłużej, liczba ludzi dotkniętych chorobami wieku starczego, w tym AD, będzie ciągle wzrastała. Na przykład, badania pokazują, że prawa wszystkich ludzi w wieku 85 lat i starszych ma jakąś postać otępienia (National Institute on Aging Progress Report on Alzheimer's Disease, 1999).
Główne cechy AD
Cechami charakterystycznymi dla AD są dwie nieprawidłowe struktury w mózgu: płytki amyloidowe i sploty neurofibrylarne (NTF). Płytki są gęstymi, w większości nierozpuszczalnymi złogami białka i materiału komórkowego na zewnątrz i wokół neuronów mózgu. Sploty są nierozpuszczalnymi skręconymi włóknami wytworzonymi wewnątrz neuronów.
Istnieją dwa typy AD: rodzinna (FAD), która przebiega według określonego wzoru dziedziczenia oraz rzadka AD, gdzie nie obserwuje się oczywistego wzoru dziedziczenia. Ze względu na różnice wieku, w którym zaczyna się choroba, AD jest dalej opisywana jako choroba wczesnego początku (pojawiająca się u ludzi młodszych, poniżej 65 lat) lub późnego początku (pojawiająca się u ludzi w wieku 65 lat i starszych). AD wczesnego począ tku jest rzadka (okoł o 10 procent przypadków) i na ogół dotyka ludzi w wieku 30 do 60 lat. Niektóre postacie AD wczesnego początku są dziedziczne i przebiegają rodzinnie. AD wczesnego początku często postępuje szybciej niż bardziej powszechna postać późnego początku.
PL 204 878 B1
Wszystkie znane do tej pory FAD mają wczesny początek i obecnie wiadomo, że aż 50 procent przypadków FAD jest wywołanych zaburzeniami w trzech genach położonych na trzech różnych chromosomach. Są to mutacje w genie APP na chromosomie 21; mutacje w genie na chromosomie 14, nazwanym preseniliną 1 i mutacje w genie na chromosomie 1, nazwanym preseniliną 2. Jednakże do tej pory nie ma dowodu, czy którakolwiek z tych mutacji odgrywa główną rolę w bardziej powszechnej, rzadkiej lub nierodzinnej postaci AD późnego początku (National Institute on Aging Progress Report on Alzheimer's Disease, 1999).
Płytki amyloidowe
W AD, p ł ytki amyloidowe rozwijają się najpierw w obszarach mózgu uż ywanych do pamię ci i innych funkcji poznawczych. Składają się one w większości z nierozpuszczalnych złogów amyloidu beta (dalej oznaczanego tu jako Αβ) - fragmentu większego białka zwanego amyloidowym białkiem prekursorowym (APP, którego sekwencję aminokwasową przedstawiono na SEK. NR ID.: 2) - zmieszanych z częściami neuronów i z nienerwowymi komórkami, takimi jak mikroglej i astrocyty. Nie wiadomo czy płytki amyloidowe same stanowią główną przyczynę AD, czy są produktem ubocznym procesu AD. Z pewnością zmiany w białku APP mogą powodować AD, jak pokazano w dziedzicznej postaci AD wywoływanej przez mutacje w genie APP, a tworzenie płytki Ae wydaje się być ściśle związane z postępowaniem choroby ludzkiej (Lippa C.F. i wsp., 1998).
APP
APP jest jednym z wielu białek związanych z błonami komórkowymi. Po wytworzeniu, APP jest osadzone w błonie komórki nerwowej, częściowo wewnątrz, a częściowo na zewnątrz komórki. Ostatnie badania wykorzystujące myszy transgeniczne pokazały, że APP odgrywa ważną rolę we wzroście i przeżywaniu neuronów. Na przykład, pewne postacie i ilości APP mogą chronić neurony zarówno przed krótko- jak i długoterminowym uszkodzeniem oraz mogą sprawiać, że uszkodzone neurony są bardziej zdolne do samonaprawy i pomagają częściom neuronów wzrastać po uszkodzeniu mózgu.
Podczas gdy APP jest osadzone w błonie komórkowej, proteazy działają na określone miejsca w APP, tnąc je na fragmenty białkowe. Jedna proteaza pomaga ciąć APP do postaci Ae, a inna proteaza tnie APP w środku fragmentu amyloidowego tak, że nie może powstać Ae. Tworzony Ae ma dwie różne długości, krótszy 40 (lub 41) aminokwasowy Ae, który jest stosunkowo rozpuszczalny i agreguje powoli i niewiele dłuższy, 42- aminokwasowy, „lepki” Ae, który szybko tworzy nierozpuszczalne skupiska. Nie wiadomo jeszcze dokładnie, jak utworzony Ae przemieszcza się przez lub wokół komórek nerwowych. W końcowym etapie tego procesu, „lepki” Ae agreguje w długie włókna na zewnątrz komórki i wzdłuż fragmentów martwych lub umierających neuronów oraz mikrogleju i astrocytów tworząc płytki, które są charakterystyczne dla AD w tkance mózgowej.
Istnieją pewne dowody na to, że mutacje w APP zwiększają prawdopodobieństwo wycinania Ae z prekursora APP, co prowadzi do wytwarzania albo większej ilości całkowitego Ae lub stosunkowo więcej „lepkiej” postaci. Wydaje się także, że mutacje w genach preseniliny mogą przyczyniać się do degeneracji neuronów na co najmniej dwa sposoby: przez modyfikowanie wytwarzania Ae lub przez zapoczątkowanie śmierci komórek bardziej bezpośrednio. Inni badacze sugerują, że zmutowane preseniliny 1 i 2 mogą być włączone w przyspieszenie tempa apoptozy.
Oczekuje się, że wraz z postępem choroby będzie tworzyć się coraz więcej płytek, wypełniających coraz bardziej mózg. Badania sugerują, że może być tak, iż Ae agreguje i rozpada się w tym samym czasie w rodzaju równowagi dynamicznej. Zwiększa to nadzieję, że będzie możliwe zniszczenie płytek nawet po ich utworzeniu (National Institute on Aging Progress Report on Alzheimer's Disease, 1999).
Przypuszcza się, że Ae jest toksyczny dla neuronów. W pracach na hodowlach tkankowych badacze zaobserwowali wzrost śmierci komórek neuronowych hipokampa przekonstruowanych do nadwyrażania zmutowanych form ludzkiego APP w porównaniu z neuronami nadwyrażającymi prawidłowy ludzki APP (Luo i wsp., 1999).
Ponadto, w modelach zwierzęcych pokazano, że nadwyrażanie lub wyrażanie zmodyfikowanych form białka Ae indukuje objawy typu Alzheimera (Hsiao K. i wsp., 1998).
Jeśli wzrost wytwarzania Ae, jego agregowanie w płytki i wynikająca z tego neurotoksyczność mogą prowadzić do AD, w wynalezienie warunków, w których agregowanie Ae w płytki może być spowolnione lub nawet zablokowane, ma znaczenie terapeutyczne.
Preseniliny
Liczba mutacji w presenilinie-1 (S-180) wynosi około 50% wszystkich przypadków rodzinnej AD o wczesnym początku (FAD). Zidentyfikowano około 30 mutacji, które są przyczyną AD. Początek AD
PL 204 878 B1 różni się w zależności od mutacji. Mutacje w presenilinie-2 stanowią znacznie mniejszą część przypadków FAD, lecz jest to ciągle znaczący czynnik. Nie wiadomo, czy preseniliny są włączone w rzadką nie rodzinną AD. Funkcja presenilin nie jest znana, lecz wydaje się, że są one włączone w obróbkę APP do Αβ-42 (dłuższej, lepkiej formy peptydu, SEK. NR ID.: 2, reszty 673-714), ponieważ pacjenci z AD z mutacjami w presenilinie mają podwyższone poziomy tego peptydu. Nie jest jasne, czy preseniliny odgrywają także rolę w wywoływaniu wytwarzania NFT. Niektórzy sugerują, że preseniliny mogą także odgrywać bardziej bezpośrednią rolę w degeneracji neuronów i w śmierci neuronów. Presenilina-1 leży na chromosomie 14, podczas gdy presenilina-2 jest związana z chromosomem 1. Jeżeli osoba niesie zmutowaną wersję tylko jednego z tych genów jest prawie pewne, że u niego lub u niej rozwinie się AD o wczesnym początku.
Istnieje pewna wątpliwość czy presenilina-1 nie jest identyczna z hipotetyczną gamma-sekretazą włączoną w obróbkę APP (Naruse i wsp., 1998).
Apolipoproteina E
Apolipoproteina E zazwyczaj towarzyszy cholesterolowi, lecz znaleziono ją także w płytkach i splątkach w mózgach z AD. Podczas gdy allele 1-3 nie wydają się być związane z AD, istnieje znacząca korelacja między obecnością allelu APOE-e4 i rozwojem późnej AD (Strittmatter i wsp., 1993). Jest to jednak czynnik ryzyka a nie bezpośrednia przyczyna, jak w przypadku mutacji preseniliny i APP i nie jest on ograniczony do rodzinnej AD.
Drogi, którymi białko ApoE e4 zwiększa prawdopodobieństwo rozwoju AD, nie są z pewnością znane, lecz jedną z możliwych teorii jest, że ułatwia ono narastanie Ae i to przyczynia się do obniżenia wieku początku AD, lub że obecność lub brak określonych alleli APOE może działać na drogę, którą neurony odpowiadają na uszkodzenie (Buttini i wsp., 1999).
Pokazano, że także Apo A1 jest amylogenna. Nieuszkodzona apo A1 może sama tworzyć włókienka typu amyloidowego in vitro, pozytywne w barwieniu czerwienią Kongo (Am J Pathol 147 (2): 238-244 (Aug 1995), Wisniewski T, Golabek AA, Kida E, Wisniewski KE, Frangione B).
Wydaje się, że istnieją sprzeczne wyniki wskazujące na istnienie pozytywnego wpływu allelu APOE-e4 na zmniejszenie objawów utraty władz umysłowych, w porównaniu z innymi allelami (Stern, Brandt, 1997, Annals of Neurology 41).
Splątki neurofibrylarne
Tą drugą cechą charakterystyczną AD są nieprawidłowe zbiory skręconych nitek znalezionych wewnątrz komórek nerwowych. Głównym składnikiem splątków jest jedna postać białka zwanego tau (t). W ośrodkowym układzie nerwowym, białka tau są najlepiej poznane ze względu na ich zdolność do wiązania i pomocy w stabilizacji mikrotubul, które są elementem wewnętrznej struktury podtrzymującej komórki lub szkieletu. Jednak w AD tau jest chemicznie zmienione i to zmienione tau nie może dłużej stabilizować mikrotubul prowadząc do ich dezintegracji. To załamanie systemu transportu może najpierw powodować wadliwą komunikację między komórkami nerwowymi, a później może prowadzić do śmierci neuronów.
W AD, chemicznie zmienione tau skręca się w sparowane helikalne filamenty - dwie nici tau, które są zwinięte wokół siebie. Filamenty te są główną substancją znalezioną w splątkach neurofibrylarnych. W ostatnich badaniach, naukowcy znaleźli zmiany neurofibrylarne w poniżej 6 procentach neuronów w określonej części hipokampów w mózgach zdrowych, w ponad 43 procentach tych neuronów u ludzi, którzy umarli na łagodną AD i w 71 procentach tych neuronów u ludzi, którzy umarli na ostrą AD. Gdy badano utratę neuronów, znaleziono podobną progresję. Dowody tego typu potwierdzają ideę, że tworzenie splątków i utrata neuronów postępują jednocześnie w czasie przebiegu AD (National Institute on Aging Progress Report on Alzheimer's Disease, 1999).
Tauopatie i splątki
Agregowanie tau w nierozpuszczalne filamenty w neuronach i neurogleju, prowadzące do zaburzeń czynności i śmierci charakteryzuje szereg chorób neurodegeracyjnych, innych niż AD. Bardzo niedawno, szereg grup badaczy badających rodziny z różnorodnymi dziedzicznymi otępieniami innymi niż AD, znalazło pierwsze mutacje w genie tau na chromosomie 17 (Clark i wsp., 1998; Hutton i wsp., 1998; Poorkaj i wsp., 1998; Spillantini i wsp., 1998). W rodzinach tych mutacje w genie tau powodują śmierć komórek neuronów i otępienie. Zaburzenia te, mające niektóre cechy wspólne z AD lecz różniące się pod wieloma ważnymi względami, są wspólnie nazwane „otępieniem czołowo-skroniowym i parkinsonizmem sprzężonymi z chromosomem 17 (FTDP-17). Są to choroby, takie jak choroba Parkinsona, niektóre postacie stwardnienia zanikowego bocznego (ALS), zwyrodnienie korowo-podstawne,
PL 204 878 B1 postępujące porażenie nadjądrowe oraz choroba Picka i wszystkie one charakteryzują się nieprawidłowym agregowaniem białka tau.
Inne choroby neurologiczne podobne do AD
Istnieją ważne analogie między AD i innymi chorobami neurologicznymi, w tym, choroby prionowe (jak kuru i choroba Creutzfelda-Jakoba oraz bydlęca encefalopatia gąbczasta), choroba Parkinsona, choroba Huntingtona i otępienie czołowo-skroniowe. Wszystkie związane są ze złogami nieprawidłowych białek w mózgu. AD i choroby prionowe powodują otępienie oraz śmierć i obie są związane z tworzeniem nierozpuszczalnych włókienek amyloidowych, ale z białek błonowych, które różnią się od siebie.
Naukowcy badający chorobę Parkinsona, drugie najbardziej powszechne zaburzenie neurodegeneracyjne po AD, znaleźli pierwszy gen sprzężony z tą chorobą. Gen ten koduje białko nazwane synukleiną które, intrygująco, znaleziono także w płytkach amyloidowych z mózgów pacjentów z AD (Lavedan C, 1998, Genome Res. 8(9): 871-80). Badacze odkryli także, że defekty genetyczne w chorobie Huntingtona, innym postępującym zaburzeniu neurodegeneracyjnym powodującym otępienie, wywołuje białko Huntingtona tworzące nierozpuszczalne włókna bardzo podobne do włókienek Αβ z AD oraz włókienek białkowych w chorobie prionowej (Scherzinger E, i wsp., 1999, PNAS U.S.A. 96(8): 4604-9).
Naukowcy znaleźli także nowy gen, który, gdy jest zmutowany, odpowiada za rodzinne otępienie brytyjskie (FBD), rzadką chorobę dziedziczną wywołującą ciężkie zaburzenia ruchowe i postępujące otępienie podobne do tego widocznego w AD. W badaniu biochemicznym włókienek amyloidowych znalezionych w płytkach FBD znaleziono unikalny peptyd nazwany ABri (Vidal i wsp., 1999). Mutacja w określonym punkcie wzdłuż tego genu prowadzi do produkcji dłuższego niż normalne białka Bri. Peptyd ABri, który jest odcinany ze zmutowanego końca białka Bri, jest odkładany jako włókienka amyloidowe. Uważa się, że płytki te prowadzą do dysfunkcji neuronów i otępienia charakteryzującego FBD.
Immunizacja za pomocą Ae
Układ odpornościowy normalnie bierze udział w oczyszczaniu z obcego białka i cząstek białkopodobnych w organizmie, lecz złogi związane ze wspomnianymi powyżej chorobami składają się głównie z własnych białek, przez co rola układu odpornościowego w kontrolowaniu tych chorób jest mniej oczywista. Ponadto, złogi są umiejscowione w kompartmencie (OUN) normalnie oddzielonym od układu odpornościowego: oba fakty sugerują, że jakakolwiek szczepionka czy podejście immunoterapeutyczne mogą być niepomyślne.
Pomimo tego, naukowcy spróbowali ostatnio immunizowania myszy szczepionką składającą się z heterologicznego ludzkiego Ae i substancji, o której wiadomo, że pobudza układ odpornościowy (Schenk i wsp., 1999 i WO 99/27944). Szczepionkę testowano w częściowym modelu AD myszy transgenicznej ze zmutowanym ludzkim genem dla APP wprowadzonym do mysiego DNA. Myszy wytwarzały zmodyfikowane białko APP i rozwijały płytki amyloidowe w miarę starzenia się. Ten model mysi użyto do testowania, czy szczepienie przeciwko zmodyfikowanemu transgenicznemu ludzkiemu APP ma wpływ na budowanie płytek. W pierwszym doświadczeniu, grupie myszy transgenicznych podawano co miesiąc iniekcje szczepionki zaczynając od wieku 6 tygodni i kończąc na wieku 11 miesięcy. Druga grupa myszy transgenicznych nie otrzymała zastrzyków i stanowiła grupę kontrolną. W wieku 13 miesięcy myszy w grupie kontrolnej miały płytki pokrywające 2 do 6 procent ich mózgów. Dla kontrastu, myszy immunizowane praktycznie nie miały płytek.
W drugim doświadczeniu, badacze rozpoczęli podawanie iniekcji w wieku 11 miesięcy, kiedy niektóre płytki już były rozwinięte. Po okresie 7 miesięcy kontrolne myszy transgeniczne miały 17 razy podwyższoną liczbę płytek w swoich mózgach, podczas gdy te, które otrzymały szczepionkę, miały 99 procentowe obniżenie w porównaniu z 18 miesięcznymi kontrolnymi myszami transgenicznymi. Wydaje się, że u niektórych myszy, pewne istniejące wcześniej złogi płytek zostały usunięte przez leczenie. Stwierdzono również, że w wyniku immunizacji zmniejszyły się inne uszkodzenia towarzyszące płytkom, takie jak zapalenie i nieprawidłowe procesy komórek nerwowych.
Powyższe badanie jest badaniem wstępnym u myszy i przykładowo, naukowcy muszą stwierdzić czy szczepione myszy pozostaną zdrowe pod innymi względami oraz czy u tych zaszczepionych pozostanie normalna pamięć. Ponadto, ponieważ model mysi nie jest w pełni odwzorowaniem AD (zwierzęta nie rozwijają splątków neurofibrylarnych i nie umiera tak wiele ich neuronów), konieczne będą dodatkowe badania dla określenia, czy u ludzi występują reakcje takie same jak u myszy czy inne. Inną kwestią do rozważenia jest taka, że metoda być może może „leczyć” złogi, lecz nie hamować rozwoju otępienia.
PL 204 878 B1
Także kwestie techniczne nakładają poważne wyzwania. Przykładowo, nie rokuje nadziei, nawet gdyby było to możliwe, użycie tej technologii do wytworzenia szczepionki umożliwiającej ludziom wytwarzanie przeciwciał przeciwko ich własnym białkom. Dlatego szereg kwestii dotyczących bezpieczeństwa i skuteczności trzeba będzie rozwiązać przed podjęciem jakichkolwiek testów na ludziach.
Praca Schenka i wsp. pokazuje zatem, że gdyby było możliwe wytworzenie silnej odpowiedzi odpornościowej skierowanej przeciwko własnym białkom w złogach białkopodobnych w ośrodkowym układzie nerwowym, takich jak płytki tworzone w AD, możliwe byłoby zarówno zapobieganie tworzeniu złogów jak i prawdopodobnie także usuwanie już utworzonych płytek.
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie środków dla terapii przeciwko stanom charakteryzującym się odkładaniem amyloidu, takim jak AD. Ponadto celem jest wytworzenie autoszczepionki przeciwko amyloidowi, w celu uzyskania nowego leczenia AD i innych zaburzeń patologicznych, w których zachodzi odkładanie amyloidu.
Wynalazek obejmuje zastosowanie czynnika wybranego z:
a) co najmniej jednego zwierzęcego analogu autologicznego Αβ (beta amyloidu) albo polipeptydu APP (amyloidowego białka prekursorowego) u zwierzęcia, zmodyfikowanego przez wprowadzenie przynajmniej jednego izolowanego obcego epitopu T pomocniczego (epitop TH) na drodze insercji, addycji, delecji albo substytucji aminokwasu, przy czym obcy epitop TH jest wolny od aminokwasów-D i jest wprowadzony do autologicznego Ae lub APP jak schematycznie pokazano dla epitopów P2 i P30 na Fig. 1,
b) nukleotydowej sekwencji kodującej co najmniej jeden analog określony w a) i
c) niepatogennego mikroorganizmu lub wirusa, który niesie fragment kwasu nukleinowego określonego w b do wytwarzania leku do leczenia i/lub zapobiegania i/lub łagodzenia choroby Alzheimera lub innych chorób i stanów charakteryzujących się odkładaniem Ae u zwierzęcia.
Korzystnie w wyniku wprowadzenia obcego epitopu TH zasadnicza część epitopów komórki B Ae albo APP jest zachowana oraz,
- jest wprowadzone przynajmniej jedno pierwsze ugrupowanie, które powoduje kierowanie analogu do komórki prezentującej antygen (APC) albo do limfocytu B i/albo
- jest wprowadzone przynajmniej jedno drugie ugrupowanie, które stymuluje układ odpornościowy i/albo
- jest wprowadzone przynajmniej jedno trzecie ugrupowanie, które optymalizuje prezentowanie analogu układowi odpornościowemu.
Korzystnie analog jest modyfikowany przez wprowadzenie pierwszego i/albo drugiego i/lub trzeciego ugrupowania jako grup bocznych i przez kowalencyjne albo niekowalencyjne wiązanie z odpowiednimi grupami chemicznymi w Ae, APP albo w jego fragmencie.
Korzystnie analog zawiera podwojony co najmniej jeden epitop komórki B Ae lub APP i/lub wprowadzony hapten.
Korzystnie obcy epitop komórki T jest immunodominujący w zwierzęciu.
Korzystnie obcy epitop komórki T jest epitopem mieszanym, takim jak obcy epitop komórki T, który jest wybrany z naturalnego mieszanego epitopu komórki T oraz sztucznej sekwencji peptydu wiążącego MHC-II.
Korzystnie naturalny epitop komórki T jest wybrany spośród epitopu anatoksyny tężca, jak P2 albo P30, epitopu anatoksyny błonicy, epitopu hemaglutyniny wirusa grypy i epitopu CS z P. falciparum.
Korzystnie, pierwsze ugrupowanie, które jest wprowadzone do analogu, jest zasadniczo swoiście wiążącym partnerem dla specyficznego antygenu powierzchniowego limfocytu B albo dla specyficznego antygenu powierzchniowego APC, takiego jak hapten lub węglowodan, dla których istnieje receptor na limfocycie B lub na APC.
Korzystnie, drugie ugrupowanie jest wybrane spośród cytokin, takich jak interferon γ (IFN- γ) lub jego skuteczna część, Flt3L lub jego skuteczna część, interleukina 1 (IL-1) lub jej skuteczna część, interleukina 2 (IL-2) lub jej skuteczna część, interleukina 4 (IL-4) lub jej skuteczna część, interleukina 6 (IL-6) lub jej skuteczna część, interleukina 12 (IL-12) lub jej skuteczna część, interleukina 13 (IL-13) lub jej skuteczna część, interleukina 15 (IL-15) lub jej skuteczna część, oraz czynnik stymulujący kolonie granulocytów i makrofagów (GM-CSF) lub jego skuteczna część; hormonu; oraz białek szoku cieplnego takich, jak HSP70 lub jego skuteczna część, HSP90 lub jego skuteczna część, HSC70 lub jego skuteczna część, GRP94 lub jego skuteczna część oraz kalretikulina (CRT) lub jej skuteczna część.
PL 204 878 B1
Korzystnie, trzecie ugrupowanie ma charakter lipidowy i jest takie, jak grupa palmitoilowa, grupa mirystylowa, grupa farnezylowa, grupa geranylo-geranylowa, kotwica GPI i grupa N-acylodiglicerydowa lub takie ugrupowanie jest polihydroksypolimerem, takim jak polisacharyd.
Korzystnie, autologiczny Αβ albo APP jest tak zmodyfikowany, że zachowuje epitopy komórki B, które nie są eksponowane na fazę zewnątrzkomórkową, gdy są obecne w postaci związanego z komórką autologicznego APP.
Korzystnie, Ae albo APP jest tak zmodyfikowany, że brakuje co najmniej jednego epitopu komórki B, który jest eksponowany na fazę zewnątrzkomórkową, gdy jest obecny w postaci związanego z komórką autologicznego APP.
Korzystnie, w analogu, z którego wytwarza się lek wytworzony zgodnie z zastosowaniem według wynalazku następuje substytucja przynajmniej jednej sekwencji aminokwasowej w obrębie autologicznego Ae albo APP sekwencją aminokwasową o równej lub różnej długości, która tworzy obcy epitop TH w analogu.
Korzystnie, analog obejmuje sekwencję aminokwasową odpowiadającą aminokwasom 672-714 w SEK. NR ID.: 2, do której jest wprowadzona sekwencja aminokwasowa prowadząca do powstania obcego epitopu TH w analogu albo analog obejmuje sekwencję aminokwasową odpowiadającą aminokwasom 672-714 w SEK. NR ID.: 2, w której przynajmniej jedna sekwencja aminokwasowa jest podstawiona sekwencją aminokwasową o równej lub różnej długości, co prowadzi do powstania obcego epitopu TH.
Korzystnie, analog od N-końca do C-końca składa się z reszt aminokwasowych 672-714 SEK. NR ID.: 2, po których następuje SEK. NR ID.: 4, po której następują reszty aminokwasowe 672-714 sekwencji SEK. NR ID.: 2, po których następuje SEK. NR ID.: 6 po których następują reszty aminokwasowe 672-714 z SEK. NR ID.: 2.
Korzystnie, analog od N-końca do C-końca składa się z reszt aminokwasowych 630-634 SEK. NR ID.: 2, po których następuje SEK. Id. Nr: 6, po której następuje SEK. NR ID.: 4 po której następują reszty aminokwasowe 672-714 z SEK. NR ID.: 2.
Korzystnie, analog od N-końca do C-końca składa się z reszt aminokwasowych 672-713 z SEK. Id. Nr: 2, po których następuje SEK. NR ID.: 6, po której następują reszty aminokwasowe 729-734 sekwencji z SEK. NR ID.: 2, po których następuje SEK. NR ID.: 4 po której następują reszty aminokwasowe 750-770 z SEK. NR ID.: 2.
Korzystnie, co najmniej dwie kopie analogu są kowalencyjnie lub niekowalencyjnie połączone z cząsteczką nośnika zdolną do skutecznej prezentacji wielu kopii determinant antygenowych.
Korzystnie, analog jest sformułowany z adiuwantem ułatwiającym przerwanie autotolerancji na autoantygeny.
Korzystnie, lek wytwarzany zgodnie z zastosowaniem według wynalazku, zawierający skuteczną ilość analogu, jest podawany zwierzęciu na drodze wybranej spośród drogi pozajelitowej takiej jak śródskórna, podskórna i domięśniowa; dootrzewnowej; doustnej; dopoliczkowej, podjęzykowej; nadtwardówkowej; dokręgowej; doodbytniczej oraz wewnątrzczaszkowej.
Korzystnie, skuteczna ilość analogu jest w zakresie 0,5 μg - 2000 μg.
Korzystniej, analog jest zawarty w urządzeniu będącym wirtualnym węzłem chłonnym (VLN).
Korzystnie, lek jest przeznaczony do wprowadzenia kwasu(ów) nukleinowego(ych) kodującego analog do komórek zwierzęcych i tym samym uzyskania ekspresji in vivo w komórkach, do których wprowadzono kwas(y) nukleinowy(e).
Korzystnie, wprowadzany kwas(y) nukleinowy(e) jest/są wybrany(e) spośród nagiego DNA, DNA sformułowanego z lipidami z ładunkiem lub bez ładunku, DNA sformułowanego w liposomach, DNA zawartego w wektorze wirusowym, DNA sformułowanego z białkiem lub polipeptydem ułatwiającym transfekcję, DNA sformułowanego z białkiem lub polipeptydem naprowadzającym, DNA sformułowanego z czynnikami wytrącającymi wapń, DNA sprzężonego z obojętną cząsteczką nośnikową, DNA enkapsulowanego w chitynie albo chitozanie, oraz DNA sformułowanego z adiuwantem.
Bardziej korzystnie, kwas(y) nukleinowy(e) jest/są zawarty(e) w urządzeniu VLN.
Korzystnie, lek jest podawany/wprowadzany przynajmniej raz na rok, przykładowo przynajmniej 2, przynajmniej 3, przynajmniej 4, przynajmniej 6 i przynajmniej 12 podań/wprowadzeń.
Korzystnie lek do leczenia zapobiegania i/lub łagodzenia zawiera niepatogenny mikroorganizm lub wirus, który niesie fragment kwasu nukleinowego kodujący lub wyrażający analog.
W zakres wynalazku wchodzi również analog polipeptydu amyloidogennego pochodzący ze zwierzęcego Ae (beta amyloidu) albo APP (białka prekursorowego amyloidu), do którego wprowadzoPL 204 878 B1 no przynajmniej jeden izolowany obcy epitop TH jak pokazano schematycznie dla epitopów P2 i P30 na Fig. 1, w wyniku czego immunizacja zwierzęcia analogiem indukuje wytwarzanie przeciwciał skierowanych przeciwko polipeptydowi amyloidogennemu.
Korzystnie modyfikacja jest zdefiniowana powyżej.
Wynalazek dotyczy również immunogennej kompozycji, obejmującej skuteczną immunogennie ilość analogu określonego powyżej, i farmaceutycznie i immunologicznie dopuszczalny nośnik i/lub zaróbkę i ewentualnie adiuwant.
Ponadto wynalazek dotyczy fragmentu kwasu nukleinowego kodującego analog według wynalazku.
W zakres wynalazku wchodzi również wektor niosący fragment kwasu nukleinowego według wynalazku zdolny do autonomicznej replikacji.
Korzystnie, wektor jest wybrany z grupy składającej się z plazmidu, faga, kosmidu, minichromosomu i wirusa.
Korzystnie wektor obejmuje, w kierunku 5' >3' funkcjonalnie połączone, promotor kierujący ekspresją fragmentu kwasu nukleinowego według wynalazku, ewentualnie sekwencję kwasu nukleinowego kodującą peptyd liderowy umożliwiający wydzielanie lub integrację z błoną fragmentu polipeptydu, fragment kwasu nukleinowego według wynalazku i ewentualnie terminator.
Korzystnie, wektor wprowadzony do komórki gospodarza jest zdolny lub niezdolny do integracji z genomem komórki gospodarza, a promotor kieruje ekspresją w komórce eukariotycznej i/albo w komórce prokariotycznej.
Wynalazek dotyczy również stransformowanej komórki niosącej wektor według wynalazku, która jest zdolna do replikacji fragmentu kwasu nukleinowego według wynalazku.
Korzystnie, stransformowana komórka jest mikroorganizmem wybranym z bakterii, drożdży, protozoa albo jest komórką pochodzącą z organizmu wielokomórkowego wybraną spośród komórki grzyba, komórki owadziej takiej, jak komórka S2 lub SF, komórki roślinnej i komórki ssaka.
Korzystnie, stransformowana komórka wyraża fragment kwasu nukleinowego według wynalazku, i jest taka jak stransformowana komórka, która wydziela lub niesie na swojej powierzchni analog według wynalazku.
W zakres wynalazku wchodzi też kompozycja do indukowania produkcji przeciwciał skierowanych przeciwko Ae albo APP u zwierzęcia obejmująca:
- fragment kwasu nukleinowego według wynalazku albo wektor według wynalazku oraz
- farmaceutycznie i immunologicznie dopuszczalny nośnik i/albo zaróbkę i/lub adiuwant.
Wynalazek dotyczy ponadto stabilnej linii komórkowej niosącej wektor według wynalazku i wyrażającej fragment kwasu nukleinowego według wynalazku i ewentualnie wydzielającej lub niosącej na swojej powierzchni analog według wynalazku.
Poniżej opisane jest wykorzystanie technologii autoszczepienia w celu wytworzenia silnej odpowiedzi odpornościowej przeciwko skądinąd nie immunogennym własnym białkom, zawartym w związanych z patologią złogach amyloidowych. Tym samym, wytwarzana jest silna odpowiedź odpornościowa przeciwko albo amyloidowi, przeciwko jednej lub większej liczbie komponent znajdujących się w złogach albo przeciwko jednemu lub większej liczbie białek odpowiedzialnych za tworzenie amyloidu. Także opisano wytwarzanie takich szczepionek do zapobiegania, leczenia i łagodzenia objawów takich chorób związanych ze złogami amyloidowymi.
Opis rysunków
Fig. 1: Schematyczne przedstawienie wariantów Autovac otrzymanych z białka prekursorowego amyloidu w celu wytworzenia odpowiedzi przeciwciała przeciwko białku Ae, Ae-43 (lub C-100). APP przedstawiono schematycznie na górze figury, pozostałe schematyczne konstrukty pokazują, że modelowe epitopy P2 i P30 są podstawiane lub wprowadzone do różnych obciętych form APP. Na figurze, czarny wzór wskazuje sygnałową sekwencję z APP, dwukierunkowe kreskowanie przekroju jest zewnątrzkomórkową częścią APP, ciemne pionowe kreskowanie jest transbłonową domeną APP, jasne pionowe kreskowanie jest wewnątrzkomórkową domeną APP, grube kreskowanie wskazuje epitop P30, a cienkie kreskowanie wskazuje epitop P2. Ramka o linii ciągłej wskazuje Ae-42/43, a ramka o linii ciągłej i ramka o kropkowanej linii razem wskazują C-100. „Abeta” oznacza Ae.
Definicje
Poniżej zostaną zdefiniowane i wyjaśnione w szczegółach liczne terminy stosowane w niniejszym opisie i w zastrzeżeniach, w celu wyraźnego określenia zakresu wynalazku.
Terminy „amyloid” i „białko amyloidowe”, które są tu stosowane wymiennie, oznaczają klasę nierozgałęzionych włókien białkopodobnych o nieokreślonej długości. Włókna amyloidowe wykazują
PL 204 878 B1 charakterystyczne barwienie czerwienią Kongo i mają wspólną strukturę krzyża β, w której łańcuch polipeptydowy jest zorganizowany w harmonijki-β. Amyloid zasadniczo pochodzi z białek amyloidogennych, które mają bardzo różne struktury prekursorowi, lecz z których wszystkie przechodzą przekształcenie strukturalne do nieprawidłowo sfałdowanej postaci, która jest budulcem protofilamentu helisy harmonijki β. Normalnie, średnica włókien amyloidowych waha się pomiędzy 0,007 μm a 0,012 μm.
Termin „białko amyloidogenne” ma określać polipeptyd, który jest włączony w tworzenie złogów amyloidowych, albo będąc częścią złogów jako takich albo będąc częścią szlaku biosyntetycznego prowadzącego do tworzenia złogów. Stąd, przykładami białek amyloidogennych są APP i Ae, ale również białka zaangażowane w ich metabolizm mogą być białkami amyloidogennymi. Wiele polipeptydów amyloidogennych jest tu szczegółowo omówionych.
„Polipeptyd amyloidowy” ma tu określać polipeptydy obejmujące sekwencję aminokwasową z omawianych powyżej białek amyloidogennych pochodzących od ludzi lub innych ssaków (lub ich postaci obciętych mających wspólną zasadniczą ilość epitopów dla komórki B z nienaruszonym białkiem amyloidogennym) - zatem polipeptyd amyloidogenny może np. obejmować zasadnicze części prekursora dla polipeptydu amyloidogennego (w przypadku Ae, jeden możliwy polipeptyd amyloidowy mógłby pochodzić od APP). W granicach tego terminu zawarte są także nie glikozylowane postacie polipeptydów amyloidogennych, które są wytwarzane w systemie prokariotycznym, jak również w granicach tego określenia są postacie o zmiennych wzorach glikozylacji ze względu na zastosowanie np. drożdżowych lub niessaczych eukariotycznych systemów ekspresji. Należy, jednakże, zaznaczyć, że użycie terminu „polipeptyd amyloidogenny” ma na celu określenie, że polipeptyd, o którym mowa, jest normalnie nieimmunogenny, gdy jest prezentowany zwierzęciu, które ma być leczone. Innymi słowy, polipeptyd amyloidogenny jest własnym białkiem lub jest analogiem takiego własnego białka, które nie będzie normalnie dawało odpowiedzi odpornościowej przeciwko amyloidogennemu polipeptydowi zwierzęcia, o którym mowa.
„Analog polipeptydu amyloidogennego” jest polipeptydem amyloidogennym, który poddano zmianom w jego strukturze pierwszorzędowej. Zmiana taka może być np. w postaci fuzji polipeptydu amyloidowego z odpowiednim partnerem fuzyjnym (tj. zmiana w strukturze pierwszorzędowej wyłącznie obejmują addycję reszt aminokwasowych na końcu C- i/lub N) i/lub może to być zmiana w postaci insercji i/lub delecji i/lub substytucji w sekwencji aminokwasowej polipeptydu amyloidogennego. Terminem tym objęte są także derywatyzowane cząsteczki amyloidogenne, porównaj dyskusja o modyfikacjach polipeptydów amyloidogennych, poniżej. W przypadku, gdy polipeptydem amyloidogennym jest amyloid lub jego prekursor, analog można tak skonstruować, aby był mniej zdolny lub nawet niezdolny do wywołania przeciwciał przeciwko normalnemu białku(kom) prekursorowemu amyloidu, w ten sposób unikając niepożądanego oddziaływania z (normalną fizjologicznie) niezagregowaną postacią polipeptydu będącego prekursorem białka amyloidowego.
Należy zauważyć, że można sobie wyobrazić użycie jako szczepionki u ludzi kseno-analogu (np. analogu psiego lub świńskiego) ludzkiego polipeptydu amyloidogennego do wytwarzania pożądanej odporności przeciwko polipeptydowi amyloidogennemu. Takie użycie kseno-analogu do immunizacji jest także rozważaną w niniejszym wynalazku.
Termin „polipeptyd” w obecnym kontekście określa zarówno krótkie peptydy z 2 do 10 resztami aminokwasowymi, oligopeptydy zawierające 11 do 100 reszt aminokwasowych i polipeptydy zawierające powyżej 100 reszt aminokwasowych. Ponadto, termin obejmuje objęcie też białka, tzn. funkcjonalne biocząsteczki obejmujące przynajmniej jeden polipeptyd; gdy obejmują przynajmniej dwa polipeptydy, mogą one tworzyć kompleksy, mogą być połączone kowalencyjnie, lub mogą być połączone niekowalencyjnie. Polipeptyd(y) w białku może być glikozylowany i/lub lipidowany i/lub może obejmować grupy prostetyczne.
Terminy „limfocyt T” i „komórka T” są stosowane wymiennie dla limfocytów pochodzenia grasiczego, które są odpowiedzialne za różne odpowiedzi odpornościowe, w których pośredniczą komórki, jak również dla aktywności pomocniczej w humoralnej odpowiedzi odpornościowej. Podobnie, terminy „limfocyt B” i „komórka B”, będą stosowane wymiennie dla limfocytów produkujących przeciwciała.
Termin „subsekwencja” oznacza dowolny nie-przerwany ciąg przynajmniej 3 aminokwasów lub, odpowiednio, przynajmniej 3 nukleotydów, pochodzący, bezpośrednio z naturalnie występującej amyloidowej sekwencji aminokwasowej lub z sekwencji kwasu nukleinowego.
Termin „zwierzę” w obecnym kontekście ma ogólnie określać gatunki zwierząt (korzystnie ssaka), takie jak Homo sapiens, Canis domesticus, itp., a nie tylko pojedyncze zwierzę. Chociaż termin określa także populację takich gatunków zwierząt, ponieważ ważne jest aby wszystkie osobniki
PL 204 878 B1 immunizowane niosły zasadniczo ten sam polipeptyd amyloidogenny pozwalający na immunizację zwierząt tym samym immunogenem(ami). Jeśli dla przykładu, w różnych ludzkich populacjach istnieją odmiany genetyczne amyloidogenno polipeptydu może być konieczne użycie różnych immunogenów w tych różnych populacjach można było przerwać autotolerancję na polipeptyd amyloidogenny w każdej populacji w optymalny sposób. Będzie jasne dla specjalisty, że zwierzę w obecnym kontekście jest istotą żywą, która ma układ odpornościowy. Korzystne jest, jeśli zwierzę jest kręgowcem, takim jak ssak.
Przez termin „obniżanie poziomu amyloidu in vivo” rozumie się zmniejszenie w żyjącym organizmie całkowitej ilości odłożonego amyloidu stosownego typu. Obniżenie poziomu można uzyskać za pomocą kilku mechanizmów: najprostszym z nich jest proste oddziaływanie z amyloidem przez wiązanie przeciwciała, tak aby zapobiec nieprawidłowej agregacji. W wyniku związania przeciwciała może też następować usunięcie amyloidu przez komórki oczyszczające (jak makrofagi i inne komórki fagocytujące) i przeciwciała oddziałują z innymi polipeptydami amyloidogennymi, które prowadzą do tworzenia amyloidu.
Wyrażenie „skuteczna prezentacja ... układowi odpornościowemu” ma na celu określenie, że układ odpornościowy zwierzęcia jest wystawiony na wyzwanie immunogenu w sposób kontrolowany.
Jak będzie to zrozumiałe z ujawnienia poniżej, na takie wyzwanie układu odpornościowego można wpływać różnymi drogami, z których najważniejszą jest szczepienie polipeptydem zawierającym „farmacyny” (tj. szczepionką, która jest podawana w celu leczenia lub łagodzenia trwającej choroby) i szczepienie „farmacyną” kwasu nukleinowego. Ważne jest osiągnięcie takiego wyniku aby komórki kompetentne immunologicznie u zwierzęcia były skonfrontowane z antygenem w sposób skuteczny immunologicznie, natomiast dokładny sposób osiągnięcia tego wyniku jest mniej istotny dla wynalazczej idei stanowiącej podstawę niniejszego wynalazku.
Termin „immunogennie skuteczna ilość” ma swoje typowe znaczenie w dziedzinie, tj. oznacza ilość immunogenu, która jest zdolna do zaindukowania odpowiedzi odpornościowej, która znacząco angażuje czynniki patogenne mające wspólne z immunogenem cechy immunologiczne.
Gdy stosuje się wyrażenie, że polipeptyd amyloidogenny został „zmodyfikowany” to oznacza tu chemiczną modyfikację polipeptydu, stanowiącego szkielet polipeptydu amyloidogennego. Modyfikacją taką może być np. derywatyzacja (np. alkilacja) pewnych reszt aminokwasowych w sekwencji polipeptydu amyloidogennego, lecz jak będzie wynikało z ujawnienia poniżej, korzystne modyfikacje obejmują zmiany struktury pierwszorzędowej sekwencji aminokwasowej.
Omawiana „autotolerancja na polipeptyd amyloidogenny” jest rozumiana tak, że ponieważ polipeptyd amyloidogenny jest własnym białkiem w populacji do szczepienia, normalne osobniki w populacji nie wytworzą odpowiedzi odpornościowej przeciwko polipeptydowi amyloidogennemu; chociaż nie można wykluczyć, że sporadyczne osobniki w populacji zwierzęcej mogą być zdolne do wytwarzania przeciwciał przeciwko natywnemu polipeptydowi amyloidogennemu, np. jako część zaburzenia autoodpornościowego. W każdym razie, zwierzę będzie normalnie jedynie autotolerancyjne w stosunku do własnego polipeptydu amyloidogennego, lecz nie można wykluczyć, że analogi pochodzące od innych gatunków zwierząt lub innej populacji mającej inny fenotyp, będą także tolerowane przez omawiane zwierzę.
„Obcy epitop komórki T” (lub „obcy epitop dla limfocytu T”) jest peptydem, który jest zdolny do wiązania się z cząsteczką MHC i który stymuluje komórki T w gatunku zwierzęcia. Korzystnymi obcymi epitopami komórki T w zastosowaniach według wynalazku są epitopy „mieszane” tzn. epitopy, które wiążą się z konkretną frakcją określonej klasy cząsteczek MHC w gatunku zwierzęcym lub w populacji. Znana jest bardzo ograniczona liczba takich mieszanych epitopów komórki T i zostaną one omówione szczegółowo poniżej. Mieszane epitopy komórki T są także określane jako „uniwersalne” epitopy komórki T. Należy zauważyć, że aby immunogeny, które są wykorzystane zgodnie z zastosowaniem według niniejszego wynalazku, były skuteczne w możliwie dużej frakcji populacji zwierzęcej, może być konieczne 1) wstawienie kilku obcych epitopów dla komórki T do tego samego analogu lub 2) wytworzenie kilku analogów, gdzie każdy analog ma wstawiony inny epitop mieszany. Należy także zauważyć, że koncepcja obcych epitopów dla komórki T obejmuje także użycie kryptycznych epitopów dla komórki T, tzn. epitopów, które pochodzą z własnego białka, i które wykazują immunogenne zachowanie jedynie, gdy istnieją w formie wyizolowanej nie będąc częścią wspomnianego własnego białka.
„Obcy epitop dla limfocytu T pomocniczego” (obcy epitop TH) jest obcym epitopem dla komórki T, który wiąże się z cząsteczką MHC klasy II i może być prezentowany na powierzchni komórki prezentującej antygen (APC) związanej z cząsteczką MHC klasy II.
PL 204 878 B1 „Funkcjonalna część” (bio)cząsteczki w obecnym kontekście określa część cząsteczki, która jest odpowiedzialna za przynajmniej jedno działanie biochemiczne lub fizjologiczne wywierane przez cząsteczkę. Jest dobrze znane w dziedzinie, że wiele enzymów i innych cząsteczek efektorowych posiada aktywne miejsce, które jest odpowiedzialne za działania wywierane przez wspomnianą cząsteczkę. Inne części cząsteczki mogą służyć celom wzmocnienia stabilizacji lub solubilizacji, a zatem mogą być odrzucone, o ile takie cele nie są istotne w kontekście określonego wykonania niniejszego wynalazku. Na przykład, możliwe jest użycie pewnych cytokin jako cząstek modyfikujących w polipeptydzie amyloidogennym (porównaj szczegółowa dyskusja poniżej) i w takim przypadku, uzyskanie stabilności może nie być wymagane, ponieważ sprzężenie z polipeptydem amyloidogennym może zapewniać konieczną stabilność.
Termin „adiuwant” ma swoje typowe znaczenie w dziedzinie technologii szczepionek, tj. jest to substancja lub kompozycja substancji, która 1) sama nie jest zdolna do wywoływania swoistej odpowiedzi odpornościowej przeciwko immunogenowi szczepionki, lecz która 2) niemniej jednak jest zdolna do wzmocnienia odpowiedzi odpornościowej przeciwko immunogenowi. Lub, innymi słowy, szczepienie samym adiuwantem nie dostarcza odpowiedzi odpornościowej przeciwko immunogenowi, szczepienie immunogenem może lub nie, dawać podniesienie odpowiedzi odpornościowej przeciwko immunogenowi, lecz połączone szczepienie immunogenem i adiuwantem indukuje odpowiedź odpornościową przeciwko immunogenowi, która jest silniejsza od tej indukowanej przez sam immunogen.
„Kierowanie” cząsteczki ma na celu w niniejszym kontekście określenie sytuacji, gdzie cząsteczka wprowadzana do zwierzęcia będzie pojawiała się w określonej tkance(ach) lub będzie korzystnie wiązać się z pewnymi komórkami lub typami komórek. Wynik taki można osiągnąć wieloma drogami obejmującymi formułowanie cząsteczki w kompozycji ułatwiającej kierowanie lub przez wprowadzenie do cząsteczki grup ułatwiających kierowanie. Takie rozwiązania będą szczegółowo omówione poniżej.
„Stymulacja układu odpornościowego” oznacza, że substancja lub kompozycja substancji wykazuje zasadniczo nie swoiste działanie immunostymulujące. Szereg adiuwantów i przypuszczalnych adiuwantów (jak pewne cytokiny) ma wspólną zdolność stymulowania układu odpornościowego. W wyniku uż ycia czynnika immunostymulują cego podniesiona zostaje „czujność” ukł adu odpornościowego, co oznacza, że jednoczesna lub późniejsza immunizacja immunogenem indukuje znacząco bardziej skuteczną odpowiedź immunologiczną w porównaniu z oddzielnym użyciem immunogenu.
Korzystne wykonania obniżania poziomu amyloidu
Polipeptyd amyloidogenny stosowany jako immunogen w zastosowaniu według wynalazku jest zmodyfikowaną cząsteczką, w której obecna jest przynajmniej jedna zmiana w sekwencji aminokwasowej polipeptydu amyloidogennego, ponieważ zmiany dające wszystkie ważne przełamania autotoleracji w stosunku do polipeptydu amyloidogennego są tą drogą ułatwione jest to np. oczywiste w świetle wyników przedstawionych tu w przykładzie 2, gdzie immunizacja za pomocą Αβ typu dzikiego jest porównana z immunizacją za pomocą cząsteczki będącej wariantem Ae. Należy zauważyć, że zastosowanie zmodyfikowanej cząsteczki nie wyklucza możliwości użycia takiego zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego w preparatach, które dodatkowo ułatwiają przełamanie autotolerancji przeciwko polipeptydowi amyloidogennemu, np. w preparatach zawierających adiuwanty.
Wykazano (w Dalum I i wsp., 1996, J. Immunol. 157: 4796-4804), że potencjalnie samoreaktywne limfocyty B rozpoznające własne białka są obecne fizjologicznie u zdrowych osobników. Jednakże w celu zaindukowania tych limfocytów B do faktycznej produkcji przeciwciał reagujących ze stosownymi własnymi białkami wymagana jest pomoc limfocytów T pomocniczych produkujących cytokinę (komórki TH lub limfocyty TH). Normalnie pomoc ta nie jest dostarczana, ponieważ limfocyty T generalnie nie rozpoznają epitopów dla komórki T pochodzących z własnych białek, gdy są prezentowane przez komórki prezentujące antygen (APC). Jednakże, przez wprowadzenie elementu „obcości” do własnego białka (tzn. przez wprowadzenie immunologicznie znaczącej modyfikacji), aktywowane są komórki T rozpoznające obcy element po rozpoznaniu obcego epitopu na APC (takiej jak, wstępnie, komórka monojądzrasta). Limfocyty B poliklonalne (które także są APC) zdolne do rozpoznawania własnych epitopów na zmodyfikowanym własnym białku także internalizują antygen, a następnie prezentują jego obcy epitop(y) dla komórki T i aktywowane limfocyty T dostarczają następnie pomocy w postaci cytokiny tym samoreaktywnym poliklonalnym limfocytom B. Ponieważ przeciwciała produkowane przez te poliklonalne limfocyty B reagują z różnymi epitopami na zmodyfikowanym polipeptydzie, w tym z tymi, które są także obecne w natywnym polipeptydzie, indukowane jest przeciwciało reagujące krzyżowo z niezmodyfikowanym własnym białkiem. Podsumowując, można tak pokierować
PL 204 878 B1 działaniem limfocytów T, aby populacja poliklonalnych limfocytów B rozpoznawała zupełnie obcy antygen, podczas gdy faktycznie jedynie wprowadzony epitop(y) jest/są obcy(e) dla gospodarza. W ten sposób indukowane są przeciwciała zdolne do reakcji krzyżowej z niezmodyfikowanymi własnymi antygenami.
Specjalistom znane są liczne sposoby modyfikujące własny antygen peptydowy w celu uzyskania przerwania autotolerancji. Zatem, zgodnie z niniejszym wynalazkiem, modyfikacje obejmują:
- wprowadzenie przynajmniej jednegon obcego epitopu dla komórki T i ewentualnie
- wprowadzenie przynajmniej jednego pierwszego ugrupowania, które wpływa na kierowanie zmodyfikowanej cząsteczki do komórki prezentującej antygen (APC) i ewentualnie
- wprowadzenia przynajmniej jednego drugiego ugrupowania, które stymuluje układ odpornościowy i ewentualnie
- wprowadzenie przynajmniej jednego trzeciego ugrupowania, które optymalizuje prezentację zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego układowi odpornościowemu.
Jednakże wszystkie te modyfikacje powinny być przeprowadzone z utrzymywaniem konkretnej frakcji pierwotnych epitopów dla limfocytu B w polipeptydzie amyloidogennym, ponieważ dzięki temu wzmocnione jest rozpoznawanie przez limfocyt B natywnej cząsteczki.
W korzystnym wykonaniu, grupy boczne (w formie obcych epitopów dla komórki T lub wspomnianych powyżej ugrupowań pierwszego, drugiego i trzeciego) są wprowadzone kowalencyjnie lub niekowalencyjnie. Oznacza to, że ciągi reszt aminokwasowych pochodzące z polipeptydu amyloidogennego są derywatyzowane bez zmiany pierwotnej sekwencji aminokwasowej, lub przynajmniej bez wprowadzania zmian w wiązaniach peptydowych pomiędzy poszczególnymi aminokwasami w łańcuchu.
Alternatywnie, i korzystnie, w wykonaniu wykorzystuje się substytucję aminokwasową i/lub delecję, i/lub inercję, i/lub addycję (które można uzyskać sposobami rekombinacji lub sposobami syntezy peptydu; modyfikacje dotyczące dłuższych ciągów aminokwasowych mogą prowadzić do powstania fuzji polipeptydowych). Jedną szczególnie korzystną wersją wykonania jest technika opisana w WO 95/05849, która ujawnia sposób obniżania poziomu własnych białek przez immunizowanie analogami własnych białek, przy czym kilka sekwencji aminokwasowych podstawiono odpowiednią liczbą sekwencji aminokwasowych, z których każda obejmująe obcy immunodominujący epitop dla komórki T, utrzymując w tym samym czasie ogólną strukturę trzeciorzędową własnego białka w analogu. Dla celów niniejszego wynalazku jest jednakże wystarczające, jeśli modyfikacja (niech to będzie insercja, addycja, delecja czy substytucja) prowadzi do powstania obcego epitopu dla komórki T i w tym samym czasie zachowuje zasadniczą ilość epitopów dla komórki B w polipeptydzie amyloidogennym. Jednakże w celu uzyskania maksymalnej skuteczności wzbudzenia odpowiedzi odpornościowej korzystne jest utrzymanie ogólnej struktury trzeciorzędowej amyloidogennego polipeptydu w zmodyfikowanej cząsteczce. Następujący wzór opisuje konstrukty molekularne:
(MOD1)si (amyloidei)ni (MOD2)s2(amyloide2)n2. „.MODx)sx(amyloidex)nx (I) gdzie amyloide1-amyloidex są x epitopem dla komórek B zawierającym sekwencje polipeptydu amyloidogennego, które niezależnie są identyczne lub nie i które mogą lub nie zawierać obce grupy boczne, x jest liczbą całkowitą > 3, n1-nx są x liczb całkowitych > 0 (co najmniej jedna jest > 1), MOD1-MODx jest to x modyfikacji wprowadzonych między zachowanymi epitopami dla komórki B, a s1-sx są x liczb całkowitych > 0 (co najmniej jedna jest > 1 jeśli nie są wprowadzone grupy boczne do sekwencji amyloiduex). Zatem mając dane ogólne funkcjonalne ograniczenia dla immunogenności konstruktów, wynalazek pozwala na różnego rodzaju permutacje oryginalnej sekwencji polipeptydu amyloidogennego i rodzaje jego modyfikacji. Zatem, wynalazek obejmuje zmodyfikowane polipeptydy amyloidogenne wytworzone przez pominięcie części sekwencji polipeptydu amyloidogennego np. wykazujących przeciwne skutki in vivo lub pominięcie części, które są normalnie wewnątrzkomórkowe i tym samym mogą prowadzić do powstania niepożądanych reakcji immunologicznych.
Jedną korzystną wersją konstruktów opisanych powyżej są, gdy ma to zastosowanie, te, gdzie epitop dla komórki B zawierający subsekwencję białka amyloidowego nie jest eksponowany zewnątrzkomórkowo w polipeptydzie prekursorowym, z którego pochodzi amyloid. Wybór takich epitopów amyloidowych zapewnia, że nie są wytwarzane przeciwciała, które mogłyby oddziaływać z komórkami produkującymi prekursor amyloidowy, a tym samym odpowiedź odpornościowa, która jest wytwarzana, jest ograniczona do odpowiedzi odpornościowej przeciwko niepożądanym złogom amyloidowym. Podobnego wyboru można dokonać, gdy ma to zastosowanie, dla innych niż amyloid polipeptydów amyloidogennych. W tych przypadkach będzie, np. możliwe zaindukowanie odpowiedzi przeciwko
PL 204 878 B1 tylko tym epitopom polipeptydu amyloidogennego, które są eksponowane na fazę zewnątrzkomórkową, gdy są wolne od jakiegokolwiek sprzężenia z komórkami, w których są produkowane.
Utrzymanie konkretnej frakcji epitopów dla komórki B, czy nawet ogólnej struktury trzeciorzędowej białka, które jest poddane modyfikacji jak tu opisano, można osiągnąć wieloma drogami. Jedną jest poprostu łatwą jest przygotowanie poliklonalnej surowicy odpornościowej skierowanej przeciwko polipeptydowi amyloidogennemu (np. surowica odpornościowa wytworzona w króliku), a następnie wykorzystanie tej surowicy odpornościowej jako czynnika testującego (np. w kompetycyjnym teście ELISA) przeciwko zmodyfikowanym białkom, które są produkowane. Zmodyfikowane wersje (analogi), które reagują w takim samym stopniu z surowicą odpornościową jak polipeptyd amyloidogenny trzeba uważać za mające taką samą ogólną strukturę trzeciorzędową jak polipeptyd amyloidogenny, podczas gdy analogi wykazujące ograniczoną (lecz ciągle znaczącą i swoistą) reaktywność z taką surowicą odpornościową są uważane za utrzymujące znaczną frakcję oryginalnych epitopów dla komórek B.
Alternatywnie, selekcję przeciwciał monoklonalnych reagujących z różnymi epitopami na polipeptydzie amyloidogennym można przygotować i użyć w postaci panelu testowego. Podejście to ma tę zaletę, że pozwala na 1) mapowanie epitopów polipeptydu amyloidogennego i 2) mapowanie epitopów, które są utrzymywane w przygotowanych analogach.
Oczywiście, trzecim podejściem byłoby poznanie trójwymiarowej struktury polipeptydu amyloidogennego lub jego biologicznie aktywnej obciętej postaci (porównaj powyżej) i porównanie jej z poznaną trójwymiarową strukturą przygotowanych analogów. Strukturę trójwymiarową można poznać za pomocą badań dyfrakcji promieniowania rentgenowskiego i spektroskopii NMR. Dodatkowe informacje dotyczące struktury trzeciorzędowej można do pewnego stopnia uzyskać z badań nad dichroizmem kołowym, który ma tę zaletę, że wymaga jedynie polipeptydu w czystej formie (podczas gdy dyfrakcja promieniowania rentgenowskiego wymaga dostarczenia skrystalizowanego polipeptydu, a NMR wymaga dostarczenia izotopowych wariantów polipeptydu) w celu uzyskania przydatnych informacji o strukturze trzeciorzędowej danej cząsteczki. Jednakże, w końcu dyfrakcja promieniowania rentgenowskiego i/lub NMR są konieczne do uzyskania roztrzygających danych, podczas gdy dichroizm kołowy dostarcza tylko pośredniego dowodu poprawnej struktury trójwymiarowej przez informację o elementach struktury drugorzędowej.
Korzystnie wykorzystuje się wielokrotne prezentacje epitopów dla limfocytu B z polipeptydu amyloidogennego (tj. wzór I, gdzie co najmniej jeden epitop dla komórki B jest obecny w dwóch pozycjach). Wynik taki można osiągnąć różnymi drogami, np. przez proste wytworzenie fuzji polipeptydowej obejmującej strukturę (polipeptyd amyloidogenny)m, gdzie m jest liczbą całkowitą > 2, a następnie wprowadzenie modyfikacji tu omówionych do przynajmniej jednej sekwencji amyloidowej. Korzystnie, jeśli wprowadzone modyfikacje obejmują przynajmniej jedną duplikację epitopu dla limfocytu B i/lub wprowadzenie haptenu. Wykonania obejmujące wielokrotne prezentacje wybranych epitopów są szczególnie korzystne w sytuacjach, gdzie jedynie mniejsze części polipeptydu amyloidogennego są przydatne jako składniki w czynniku szczepionkowym.
Jak wspomniano powyżej wprowadzenie obcego epitopu dla komórki T można osiągnąć przez wprowadzenie przynajmniej jedno-aminokwasowej insercji, addycji, delecji czy substytucji. Oczywiście normalną sytuacją będzie wprowadzenie więcej niż jednej zmiany do sekwencji aminokwasowej (np. insercja lub substytucja całego epitopu dla komórki T) lecz ważnym celem do osiągnięcia jest to, aby analog, po obróbce przez komórkę prezentującą antygen (APC) prowadził do powstania obcego immunodominującego epitopu dla komórki T prezentowanego w kontekście cząsteczki MHC klasy II na powierzchni APC. Zatem, jeśli sekwencja aminokwasowa polipeptydu amyloidogennego w odpowiednich pozycjach obejmuje szereg reszt aminokwasowych, które można także znaleźć w obcym epitopie TH, to wprowadzenie obcego epitopu TH można osiągnąć przez dostarczenie pozostałych aminokwasów obcego epitopu przez insercję, addycję, delecję i substytucję aminokwasową. Innymi słowy, nie jest konieczne wprowadzanie całego epitopu TH przez insercję lub substytucję dla spełnienia celu niniejszego wynalazku.
Korzystnie liczba aminokwasowych insercji, delecji, substytucji lub addycji wynosi przynajmniej 2 tak jak 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 i 25 insercji, substytucji, addycji lub delecji. Ponadto, korzystnie liczba aminokwasowych insercji, substytucji, addycji lub delecji nie przekracza 150, tak jak najwyżej 100, najwyżej 90, najwyżej 80 i najwyżej 70. Szczególnie korzystnie liczba substytucji, insercji, delecji lub addycji nie przekracza 60, a w szczególności liczba nie powinna przekraczać 50, a nawet 40. Najkorzystniejsza jest liczba nie większa niż 30. W odniesieniu do addycji
PL 204 878 B1 aminokwasowych, należy zauważyć że te, gdzie uzyskany konstrukt występuje w formie fuzji polipeptydowej, są często większe niż 150.
Korzystnie modyfikacje wprowadzenie przynajmniej jednego obcego, immunodominującego epitopu dla komórki T. Będzie zrozumiałe, że kwestia immunodominacji epitopu dla komórki T zależy od gatunku zwierzęcia, o którym mowa. Użyty tu termin „immunodominacja” odnosi się po prostu do epitopów, które w szczepionych osobnikach/populacjach prowadzą do powstania znaczącej odpowiedzi odpornościowej, lecz jest dobrze znany fakt, że epitop dla komórki T, który jest immunodominujący w jednym osobniku/populacji, nie jest koniecznie immunodominujący w innym osobniku tego samego gatunku, nawet jeśli jest w stanie wiązać cząsteczki MHC-II w tym osobniku. Zatem, dla celów niniejszego wynalazku, immunodominujący epitop dla komórki T jest epitopem dla komórki T, który będzie skuteczny w pomaganiu komórce T, gdy jest obecny w antygenie. Zazwyczaj, nieodłączną właściwością immunodominującą epitopów dla komórki T jest to, że zasadniczo zawsze są prezentowane jako związane z cząsteczką MHC klasy II, niezależnie od polipeptydu, na którym występują.
Innym ważnym punktem jest kwestia ograniczenia MHC dla epitopów dla komórki T. Zazwyczaj, naturalnie występujące epitopy dla komórki T są ograniczone do MHC, tj. pewne peptydy tworzące epitop dla komórki T będą tylko wiązać się skutecznie z podzbiorem cząsteczek MHC klasy II. To z kolei ma wpływ na to, że w większości przypadków użycie jednego swoistego epitopu dla komórki T będzie dawało w szczepionce składnik, który jest skuteczny tylko w części populacji i zależnie od rozmiaru takiej frakcji, może być konieczne włączenie większej liczby epitopów dla komórki T do tej samej cząsteczki lub alternatywnie przygotowanie wieloskładnikowej szczepionki, gdzie składniki są wariantami polipeptydu amyloidogennego, które różnią się między sobą charakterem wprowadzonych epitopów dla komórki T.
Jeśli ograniczenie MHC dla użytych komórek T jest całkowicie nieznane (przykładowo w sytuacji, gdzie zaszczepione zwierzę ma słabo zdefiniowany skład MHC), część populacji pokryta przez swoistą kompozycję szczepionkową może być określona za pomocą następującego wzoru:
n fpopulacji = 1 -Π(1 - Pi ) (II) i =1
- gdzie pi oznacza częstość odpowiedzi w populacji na i-ty obcy epitop dla komórki T obecny w kompozycji szczepionkowej, a n jest całkowitą liczbą obcych epitopów dla komórek T w kompozycji szczepionkowej. Zatem, kompozycja szczepionkowa zawierająca 3 obce epitopy dla komórki T, o częstości odpowiedzi w populacji odpowiednio 0,8, 0,7 i 0,6 dałaby
- 0,2 x 0,3 x 0,4 - 0, 976
- tj. 97,6 procent populacji będzie statystycznie dawać odpowiedź na szczepionkę za pośrednictwem MHC-II.
Powyższy wzór nie ma zastosowania w sytuacjach, gdzie znany jest mniej lub bardziej dokładny wzór ograniczenia MHC. Jeśli, na przykład, pewien peptyd wiąże się jedynie z ludzkimi cząsteczkami MHC-II kodowanymi przez allele HLA-DR-DR1, DR3, DR5 i DR7, to zastosowanie tego peptydu razem z innym peptydem, który wiąże się z pozostałymi cząsteczkami MHC-II kodowanymi przez allele HLA-DR będzie dawało 100% pokrycie w populacji, o której mowa. Podobnie, jeśli drugi peptyd wiąże się jedynie z DR3 i DR5, dodanie tego peptydu wcale nie zwiększy pokrycia. Jeśli jedyną podstawą obliczania odpowiedzi populacji jest wyłącznie ograniczenie MHC dla epitopów dla komórki T w szczepionce, część populacji pokrytej swoistą kompozycją szczepionkową może być określona za pomocą następującego wzoru:
fpopulacji = 1-Π(1-Κ>2 (III) j=1 gdzie φ] oznacza sumę częstości w populacji haplotypów allelicznych kodujących cząsteczki MHC, które wiążą się z dowolnymi epitopami dla komórki T w szczepionce i które należą do j-tych z 3 znanych loci HLA (DP, DR i DQ); w praktyce najpierw określa się, które cząsteczki MHC będą rozpoznawały każdy epitop dla komórki T w szczepionce, a następnie przypisuje się je typowi (DP, DR i DQ) następnie, poszczególne częstości różnie przypisanych allelicznych haplotypów są sumowane dla każdego typu, dając tym samym φ1, φ2 i φ3.
PL 204 878 B1
Może się zdarzyć, że wartość pi we wzorze II przewyższa teoretyczną wartość pi:
32 π i = 1-Π(1-ν j) (IV) j=1 gdzie Vj jest sumą częstości w populacji haplotypów allelicznych kodujących cząsteczki MHC, które wiążą się z i-tym epitopem dla komórki T w szczepionce i które należą do j-tych z 3 znanych loci HLA (DP, DR i DQ). Oznacza to, że 1-pi populacje jest częstością respondentów dla fpozostałych-i = (pi-pi)/(1-pi). Zatem, wzór III można tak dostosować,tak aby dał wzór V:
fpopulacji = 1-n(1-^j) +ί1-Π(1-fpozostało i)] (V j=1 k i=1 J
- gdzie składnik 1^ozosiaych-ii jest ustalony jako zero, jeśli jest ujemny. Należy zauważyć, że wzór V wymaga aby wszystkie epitopy były zmapowane haplotypowo przeciwko identycznym zestawom haplotypów.
Zatem, przy wyborze epitopów dla komórki T, które mają być wprowadzone do analogu ważne jest zawarcie całej dostępnej wiedzy o epitopach: 1) częstości respondentów dla każdego epitopu w populacji, 2) danych o ograniczeniu MHC oraz 3) częstości stosownych haplotypów w populacji.
Istnieje szereg naturalnie występujących „mieszanych” epitopów dla komórki T, które są aktywne u dużej części osobników gatunków zwierzęcych lub populacji zwierzęcych i te są korzystnie wprowadzane do szczepionki zmniejszając tym samym konieczność użycia dużej liczby różnych analogów w tej samej szczepionce.
Epitop mieszany może zgodnie z wynalazkiem być naturalnie występującym epitopem dla ludzkiej komórki T, takim jak epitopy z anatoksyny tężca (np. epitopy P2 i P30), anatoksyny błonicy, hemaglutyniny wirusa grypy (HA) oraz antygenu CS z P. falciparum.
Przez lata zidentyfikowano szereg innych mieszanych epitopów dla komórki T. Zwłaszcza zostały zidentyfikowane peptydy zdolne do wiązania dużej części cząsteczek HLA-DR kodowanych przez różne allele HLA-DR i wszystkie one mogą być epitopami dla komórki T, które można wprowadzić do analogów, których zastosowania dotyczy niniejszy wynalazek. Porównaj również epitopy omówione w następujących odnośnikach: WO 98/23635 (Frazer IH i wsp., przekazany do The University of Queensland); Southwood S i wsp, 1998, J. Immunol. 160: 3363-3373; Sinigaglia F i wsp., 1988, Nature 336:ł778-780; Chicz RM i wsp., 1993, J. Exp. Med 178: 27-47; Hammer J i wsp., 1993, Cell 74: 197-203 i Falk Kł i wsp., 1994, Immunogenetics 39: 230-242. Ostatni odnośnik dotyczy także ligandów dla HLA-DQ i -DP. Wszystkie epitopy przedstawione w tych 5 odnośnikach są stosowne jako kandydaci epitopów naturalnych do wykorzystania w zastosowaniach według niniejszego wynalazku, ponieważ są epitopami, które mają wspólne z nimi motywy.
Alternatywnie, epitop może być sztucznym epitopem dla komórki T, który jest zdolny do wiązania się z dużą częścią cząsteczek MHC klasy II. W tym kontekście interesującymi kandydatami na epitopy do wykorzystania w zastosowaniach według niniejszego wynalazku są peptydy epitopu pan DR („PADRE”) opisane w WO 95/07707 oraz odpowiadającej publikacji Alexander J i wsp., 1994, Immunity 1: 751-761. Należy zauważyć, że najskuteczniejsze peptydy PADRE ujawnione w tych publikacjach niosą D-aminokwasy na końcach C i N w celu poprawienia stabilności przy podawaniu. Jednakże, niniejszy wynalazek głównie skierowany jest na wprowadzanie stosownych epitopów jako części zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego, który powinien być następnie przecięty enzymatycznie w lizosomie komórek APC, aby umożliwić następnie prezentację w kontekście cząsteczki MHC-II i tym samym nie jest wskazane wprowadzanie D-aminokwasów do epitopów stosowanych w modyfikacji analogów według niniejszego wynalazku.
Jednym szczególnie korzystnym peptydem PADRE jest taki, który ma sekwencję aminokwasową AKFVAAWTLKAAA lub jego skuteczną immunologicznie subsekwencję. Zatem, inne epitopy mające ten sam brak ograniczenia MHC są korzystnymi epitopami dla komórki T, które powinny być obecne w analogach według wynalazku. Takie bardzo mieszane epitopy pozwalają na najprostsze wykonania według wynalazku, gdzie tylko jeden pojedynczo zmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny jest prezentowany układowi odpornościowemu zaszczepionego zwierzęcia.
PL 204 878 B1
Jak wspomniano powyżej, modyfikacja polipeptydu amyloidogennego może także obejmować wprowadzenie pierwszego ugrupowania, które kieruje zmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny do APC lub limfocytu B. Na przykład, pierwsze ugrupowanie może być partnerem swoiście wiążącym swoisty antygen powierzchniowy z limfocytu B lub swoisty antygen powierzchniowy z APC. Znanych jest wiele takich swoistych antygenów powierzchniowych. Na przykład, ugrupowanie może być węglowodanem, dla którego istnieje receptor na limfocycie B czy na APC (np. mannan lub mannoza). Alternatywnie drugie ugrupowanie może być haptenem. Jako pierwsze ugrupowanie może także być użyty fragment przeciwciała, który swoiście rozpoznaje cząsteczkę powierzchniową na komórkach APC lub limfocytach (cząsteczką powierzchniową może być np. receptor FCy z makrofagów i monocytów, taki jak FCyRI lub alternatywnie dowolny inny swoisty marker powierzchniowy, jak CD40 lub CTLA-4). Należy zauważyć, że wszystkie te przykładowe cząsteczki kierujące można także zastosować jako część adiuwanta, porównaj poniżej.
Jako alternatywę lub uzupełnienie dla kierowania zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego do określonego typu komórek w celu uzyskania wzmocnienia odpowiedzi odpornościowej, możliwe jest podniesienie poziomu odpowiedzi układu odpornościowego przez wprowadzenie wspomnianego powyżej drugiego ugrupowania, które stymuluje układ odpornościowy. Typowymi przykładami takich drugich ugrupowań są cytokiny oraz białka szoku cieplnego lub molekularne chaperony, jak również ich efektywne części.
Odpowiednie do zastosowania zgodnie z wynalazkiem są te cytokiny, które będą normalnie funkcjonować także jako adiuwanty w kompozycji szczepionkowej, tj. przykładowo interferon γ (IFN-γ), interleukina 1 (IL-1), interleukina 2 (IL-2), interleukina 4 (IL-4), interleukina 6 (IL-6), interleukina 12 (IL-12), interleukina 13 (IL-13), interleukina 15 (IL-15) i czynnik stymulujący kolonie granulocytów-makrofagów (GM-CSF); alternatywnie, funkcjonalna część cząsteczki cytokiny może wystarczyć jako drugie ugrupowanie. Odnośnie do użycia takich cytokin jako substancji adiuwanta porównaj dyskusję poniżej.
Zgodnie z wynalazkiem, stosownymi białkami szoku cieplnego lub molekularnymi chaperonami stosowanymi jako drugie ugrupowanie, mogą być HSP70, HSP90, HSC70, GRP94 (znane także jako gp96, porównaj Wearsch PA i wsp. 1998, Biochemistry 37: 5709-19) i CRT (kalretikulina).
Alternatywnie, drugim ugrupowaniem może być toksyna, taka jak listeriolicyna (LLO), lipid A oraz enterotoksyna wrażliwa na ciepło. Także interesującymi możliwościami są liczne pochodne mykobakteryjne, takie jak MDP (dipeptyd muramylowy), CFA (kompletny adiuwant Freunda) oraz diestry trehalozy TDM i TDE.
Także ważnym wykonaniem według wynalazku jest możliwość wprowadzenia trzeciego ugrupowania, które wzmacnia prezentację zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego układowi odpornościowemu. Przedstawiono szereg przykładów tego składnika. Przykładowo, wiadomo, że może być wykorzystana lipidowana kotwica palmitoilowa w białku OspA z Borrelia burgdorferi, co dostarcza samo-wspomagające się polipeptydy (porównaj WO 96/40718) - wydaje się, że lipidowane białka tworzą struktury typu micelli, z rdzeniem składającym się z części lipidowanej kotwicy polipeptydów i wystającymi pozostałymi częściami, w wyniku czego zachodzi wielokrotna prezentacja determinant antygenowych. Zatem, zastosowania takich i podobnych podejść przy użyciu różnie lipidowanych kotwic (np. z grupą mirystylową, grupą farnezylową, grupą geranylo-geranylową, kotwicą GPI i grupą N-acylodiglicerydową) są korzystnymi wykonaniami wynalazku, w szczególności, ponieważ dostarczenie takiej lipidowanej kotwicy w białku wytworzonym na drodze rekombinacji jest zupełnie bezpośrednie i wymaga jedynie użycia np. naturalnie występującej sekwencji sygnałowej jako partnera fuzji dla zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego. Inną możliwością jest użycie fragmentu C3d z czynnika komplementu C3 lub samego czynnika C3 (porównaj Dempsey i wsp., 1996, Science 271, 348-350 i Lou & Kohler, 1998, Nature Biotechnology 16, 458-462).
Alternatywnym wykonaniem według wynalazku, w wyniku którego również zachodzi korzystna prezentacja układowi odpornościowemu wielu (np. co najmniej 2) kopii ważnych regionów epitopowych z polipeptydu amyloidogennego, jest kowalencyjne sprzężenie polipeptydu amyloidogennego, jego części lub wariantów do określonych cząsteczek. Na przykład, można zastosować polimery np. węglowodany, takie jak dekstran, porównaj np. Lees A i wsp., 1994, Vaccine 12: 1160-1166; Lees A i wsp., 1990, J Immunol. 145: 3594-3600, lecz także alternatywnie przydatne są mannoza i mannan. Białka zintegrowane z błoną z np. E. coli i innych bakterii są także przydatnymi partnerami koniugacji. Tradycyjne cząsteczki nośnikowe, takie jak hemocyjanina skałoczepu (KLH), anatoksyna tężca, anatoksyna błonicy oraz bydlęca albumina surowicza (BSA), są także korzystnymi i przydatnymi partnerami koniugacji.
PL 204 878 B1
Korzystne wykonania kowalencyjnego sprzężenia polipeptydu amyloidogennego z polihydroksypolimerami, takimi jak węglowodany, wymagają użycia przynajmniej jednego polipeptydu amyloidogennego i przynajmniej jednego obcego epitopu dla komórki T pomocniczej, który jest sprzężony oddzielnie z polihydroksypolimerem (tj. obcy epitop dla komórki T pomocniczej i polipeptyd amyloidogenny nie występują w fuzji ze sobą lecz są raczej związane z polihydroksypolimerem, który służy zatem za szkielet nośnikowy). Znowu, wykonanie takie jest najkorzystniejsze wówczas, gdy odpowiednie regiony z polipeptydu amyloidogennego niosące epitop dla komórki B są utworzone przez krótkie ciągi peptydowe - dlatego, że takie podejście jest bardzo dogodną drogą osiągnięcia wielokrotnych prezentacji wybranych epitopów w uzyskanym czynniku immunogennym.
Wyjątkowo korzystne jest sprzęgnięcie obcego epitopu dla komórki T pomocniczej z (poli)peptydem amyloidogennym przez wiązanie amidowe, które można przeciąć peptydazą. Strategia ta prowadzi do tego, że komórki APC będą w stanie pobrać koniugat i w tym samym czasie będą w stanie przetworzyć koniugat, a następnie zaprezentować obcy epitop dla komórek T w kontekście MHC klasy II.
Jedną drogą uzyskiwania sprzężenia peptydów (zarówno polipeptydu amyloidogennego jak i obcego epitopu) jest aktywowanie odpowiedniego polihydroksypolimeru grupami tresylowymi; jest np. możliwe wytworzenie polisacharydów tresylowanych, jak opisano w WO 00/05316 i w opisie patentowym USA 5874469 i sprzężenie ich z polipeptydami amyloidogennymi oraz epitopami dla komórki T wytworzonymi za pomocą tradycyjnych technik syntezy peptydu w fazie stałej lub ciekłej. Uzyskany produkt składa się ze szkieletu polihydroksypolimerowego (np. szkieletu dekstranowego), który ma podłączone do siebie, przez końce N lub przez inne dostępne ugrupowania azotowe, polipeptydy amyloidogenne i obce epitopy dla komórki T. Jeśli pożądane, możliwa jest synteza polipeptydów amyloidogennych, w której chroni się wszystkie dostępne grupy aminowe oprócz tej na końcu N, następnie sprzężenie uzyskanych chronionych peptydów z ugrupowaniem tresylowanego dekstranu i w końcu usunięcie ochrony z uzyskanego koniugatu. Specyficzny przykład tego podejścia opisano w przykładach poniżej.
Zamiast stosowania rozpuszczalnych w wodzie cząsteczek polisacharydów jak wskazano w WO 00/05316 i w opisie patentowym USA 5874469, jest również możliwe wykorzystanie usieciowanych cząsteczek polisacharydowych, a tym samym uzyskanie złożonego z drobno rozdrobnionych cząsteczek koniugatu między polipeptydami i polisacharydem, co jak się uważa, prowadzi to do lepszej prezentacji polipeptydów układowi odpornościowemu, ponieważ osiągnięte są dwa cele, mianowicie uzyskanie po wstrzyknięciu koniugatu wpływu na miejscowy złóg oraz uzyskanie cząstek, które są celami przyciągającymi komórki APC. Podejście wykorzystujące takie drobno rozdrobnione systemy także opisano szczegółowo w przykładach.
Przy wyborze obszarów do wprowadzenia modyfikacji w polipeptydach amyloidogennych brane jest pod uwagę a) zachowanie znanych i przewidywanych epitopów dla komórki B, b) zachowanie struktury trzeciorzędowej, c) unikanie obecności epitopów dla komórki B na „komórkach producenta” itd. Za każdym razem, jak omówiono powyżej, jest zupełnie łatwe przeszukanie zestawu zmodyfikowanych cząsteczek amyloidogennych, do których wprowadzono epitop dla komórki T w różne miejsca.
Ponieważ najkorzystniejsze wykonania wynalazku wymagają obniżenia poziomu ludzkiego Ae, konsekwentnie korzystne jest, aby omówiony powyżej polipeptyd amyloidowy był ludzkim polipeptydem Ae. W tym wykonaniu, szczególnie korzystnie ludzki polipeptyd amyloidogenny jest zmodyfikowany przez substytucję przynajmniej jednej sekwencji aminokwasowej w SEK. NR ID.: 2 przez przynajmniej jedną sekwencję aminokwasową o równej lub różnej długości i zawierającą obcy epitop TH. Korzystne przykłady zmodyfikowanych amyloidogennych APP i Ae przedstawiono schematycznie na Fig. 1 przy użyciu epitopów P2 i P30 jako przykładowych. Racje przemawiające za takimi konstruktami są omówione w szczegółach w przykładzie.
Bardziej konkretnie, TH zawierający (lub dopełniający) sekwencję aminokwasową wprowadzoną do SEK. NR ID.: 2 może być wprowadzony przy dowolnym aminokwasie w SEK. NR ID.: 2. To znaczy, wprowadzenie jest możliwe po dowolnym z aminokwasów 1-770, lecz korzystnie po dowolnym z aminokwasów 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 696, 697, 698, 699, 700, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708,
709, 710, 711, 712, 713, i 714 w SEK. NR ID.: 2. Może to być w kombinacji z delecją dowolnego lub wszystkich aminokwasów 1-671, lub dowolnego ze wszystkich aminokwasów 715-770. Ponadto, przy wykorzystaniu techniki substytucji, dowolny z aminokwasów 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678,
679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 696, 697, 698,
PL 204 878 B1
699, 700, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 710, 711, 712, 713 i 714 w SEK. NR ID.: 2 może być usunięty w połączeniu z wprowadzeniem.
Formulacje polipeptydu amyloidogennego oraz zmodyfikowanych polipeptydów amyloidogennych
Formulacja polipeptydu spełnia zasady ogólnie uznane w dziedzinie, gdy po jej podaniu zwierzęciu wpływa na prezentację polipeptydu amyloidogennego lub zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego zwierzęcemu układowi odpornościowemu.
Wytworzenie szczepionek, które zawierają sekwencje peptydowe jako aktywne składniki, jest ogólnie dobrze znane w dziedzinie, jak przedstawiono w opisach patentowych USA 4608251, 4601903, 4599231, 4599230, 4596792 i 4578770. Zazwyczaj szczepionki takie są wytwarzane w postaci stosowanej do iniekcji albo jako ciekłe roztwory lub zawiesiny; można także przygotować postacie stałe dogodne do rozpuszczenia lub zawieszenia w cieczy przed iniekcją. Preparaty mogą mieć także postać emulsji. Aktywny składnik immunogenny jest często mieszany z zarobkami, które są dopuszczalne farmaceutycznie i zgodne z aktywnym składnikiem. Odpowiednimi zaróbkami są, przykładowo, woda, roztwór soli, dekstroza, glicerol, etanol i im podobne oraz ich kombinacje. Dodatkowo, jeśli konieczne, szczepionka może zawierać niewielkie ilości substancji pomocniczych, jak czynniki nawilżające i emulgujące, czynniki buforujące pH lub adiuwanty, które wzmacniają skuteczność szczepionek; porównaj szczegółowe omówienie adiuwantów poniżej.
Szczepionki są tradycyjnie podawane pozajelitowo, przez iniekcję, przykładowo, podskórną, doskórną, śródskórną, doskórną lub domięśniową. Dodatkowe preparaty, stosowne do podawania innymi sposobami obejmują czopki i, w niektórych przypadkach, preparaty do podawania doustnego, dopoliczkowego, podjęzykowego, dootrzewnowego, dowaginalnego, doodbytniczego, nadtwardówkowego, dokręgosłupowego, oraz wewnątrzczaszkowego. Czopki mogą zawierać tradycyjne substancje wiążące i nośniki, na przykład, glikole polialkilenowe lub triglicerydy; takie czopki można wytworzać z mieszanin zawierających aktywny składnik w zakresie 0,5% do 10%, korzystnie 1-2%. Preparaty doustne obejmują takie normalnie stosowane zaróbki jak, na przykład, gatunki farmaceutyczne mannitolu, laktozy, skrobii, stearynianu magnezu, sacharynianu sodu, celulozy, węglanu magnezowego i im podobne. Kompozycje mogą przybierać postać roztworów, zawiesin, tabletek, pigułek, kapsułek, preparatów o przedłużonym uwalnianiu lub proszków i zawierają 10-95% substancji aktywnej, korzystnie 25-70%. Interesującym składnikiem preparatu (a także możliwym partnerem koniugacyjnym) do podawania doustnego jest toksyna cholery.
Polipeptydy mogą być formułowane do szczepionki w postaci naturalnej lub w postaci soli. Farmaceutycznie dopuszczane sole obejmują sole addycyjne z kwasami (utworzone z wolnymi grupami aminowymi peptydu), które są wytworzone z kwasami nieorganicznymi, takimi jak, na przykład, kwasy chlorowodorowy lub fosforowy, lub takimi kwasami organicznymi, jak kwas octowy, szczawiowy, winowy, migdałowy i im podobne. Sole wytworzone z wolnymi grupami karboksylowymi mogą także pochodzić od zasad nieorganicznych, takich jak, na przykład, wodorotlenek sodu, potasu, amonu, wapnia czy żelaza oraz takich organicznych zasad, jak izopropyloamina, trimetyloamina, 2-etyloaminoetanol, histydyna, prokaina i im podobne.
Szczepionki podawane są w sposób zgodny z dawką preparatu i w takiej ilości, która będzie aktywna terapeutycznie i immunogenna. Podawana ilość zależy od leczonego osobnika, w tym np. od zdolności układu odpornościowego osobnika do wywołania odpowiedzi odpornościowej, oraz od stopnia żądanej ochrony. Stosowne zakresy dawki są rzędu kilkuset mikrogramów aktywnego składnika na szczepienie, z korzystnym zakresem od około 0,1 μg do 2000 μg (chociaż nawet rozpatrywane są wyższe ilości w zakresie 1-10 mg), takim jak zakres od około 0,5 μg do 1000 μg, korzystnie w zakresie od 1 μg do 500 μg, a zwłaszcza w zakresie od około 10 μg do 100 μg. Odpowiednie reżimy wstępnego podawania i przypominania są także zmienne, lecz przebiegają od wstępnego podania przez następujące po nim doszczepienie lub według innego podawania.
Sposób podawania może być znacznie zróżnicowany. Stosowane są dowolne tradycyjne sposoby podawania szczepionki. Obejmują one podawanie doustne na stałej fizjologicznie dopuszczanej bazie lub w fizjologicznie dopuszczalnych dyspersjach, pozajelitowe, przez iniekcję lub tym podobne. Dawka szczepionki będzie zależała od drogi podania i będzie różniła się w zależności od wieku osoby, która ma być zaszczepiona i preparatu antygenu.
Niektóre polipeptydy szczepionki są wystarczająco immunogenne w szczepionce lecz dla innych odpowiedź odpornościowa będzie wzmocniona, jeśli szczepionka dodatkowo zawiera substancję adiuwanta.
PL 204 878 B1
Znane są różne sposoby uzyskania wpływu adiuwanta na szczepionkę. Ogólne założenia i sposoby są szczegółowo przedstawione w „The Theory and Practical Application of Adjuvants”, 1995, Duncan E.S. Stewart-Tull (wyd.), John Wiley & Sons Ltd, ISBN 0-471-95170-6, a także w „Vaccines: New Generationn Immunological Adjuvants”, 1995, Gregoriadis G i wsp. (wyd.), Plenum Press, New York, ISBN 0-306-45283-9.
Szczególnie korzystne jest użycie adiuwanta, dla którego można wykazać, że ułatwia przerwanie autotolerancji na autoantygeny; faktycznie, jest to istotne w przypadkach, gdzie jako aktywny składnik w autoszczepionce stosowany jest niezmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny. Nie-ograniczające przykłady stosownych adiuwantów wybrano z grupy obejmującej: immunologiczny adiuwant kierujący; immunologiczny adiuwant modulujący, taki jak toksyna, cytokina i pochodne mykobakteryjne; preparat olejowy; polimer; adiuwant tworzący micele; saponina; macierz kompleksu immunostymulującego (ISCOM matrix); cząstka; DDA; adiuwanty glinowe; adiuwanty DNA; γ-inulina i adiuwant enkapsulujący. Na ogół należy zauważyć, że powyższe ujawnienia odnoszące się do związków i czynników przydatnych jako ugrupowania pierwsze, drugie i trzecie w analogach, także dotyczą mutatis mutandis (po dokonaniu niezbędnych zmian) dla ich użycia w adiuwancie szczepionki.
Zastosowanie adiuwantów obejmuje użycie czynników, takich jak wodorotlenek lub fosforan glinu (alum), powszechnie stosowany jako roztwór 0,05 do 0,1 procentowy w buforowanym roztworze soli, mieszanka z syntetycznymi polimerami cukrów (np. Carbopol®) stosowana, jako 0,25 % roztwór; możliwe jest także agregowanie białka w szczepionce przez traktowanie cieplne w temperaturach w zakresie omiędzy 70° do 101°C przez okres, odpowiednio, 30 sekund do 2 minut oraz agregowanie za pomocą czynników sieciujących. Można także zastosować agregowanie przez reaktywację przeciwciałami traktowanymi pepsyną (fragmenty Fab) do albuminy, mieszaniną komórek bakteryjnych, takich jak C.parvum lub endotoksyną lub składnikami lipopolisacharydowymi bakterii gram-ujemnych, emulsją w fizjologicznie akceptowanym nośniku olejowym, jak monooleinian mannidowy (Aracel A) lub emulsją z 20 procentowym roztworem perfluorowęgla (Fluosol-DA) stosowanego jako substytut blokowy. Korzystna jest także domieszka olejów jak skwalen i IFA.
Zgodnie z wynalazkiem interesującym kandydatem na adiuwant jest DDA (bromek dimetylodioktadecyloamoniowy) lub DNA i γ-inulina, lecz także kompletny i niekompletny adiuwant Freunda, jak również jako RIBI interesujące są saponiny kwilaja, takie jak QuilA i QS21. Ponadto możliwe są lipid A monofosforylowy (MPL) oraz wspomniane powyżej C3 i C3d i dipeptyd muramylowy (MDP).
Preparaty liposomowe są także znane jako nadające efekt adiuwanta i dlatego adiuwanty liposomowe są korzystne.
Także adiuwanty typu macierzy kompleksu immunostymulującego (ISCOM® matrix) są korzystne, w szczególności od kiedy wykazano, że ten typ adiuwantów jest zdolny do podniesienia poziomu ekspresji MHC klasy II w komórkach APC. ISCOM® matrix składa się z (ewentualnie frakcjonowanych) saponin (triterpenoidów) z Quillaja saponaria, cholesterolu i fosfolipidu. Po zmieszaniu z białkiem immunogennym, powstający, złożony z cząstek preparat jest znany jako cząstka ISCOM, gdzie saponina stanowi 60-70% wagowych cholesterol i fosfolipid 10-15% wagowych, a białko 10-15% wagowych. Szczegóły dotyczące kompozycji i stosowania kompleksu immunostymulującego, które można np. znaleźć we wspomnianych powyżej podręcznikach dotyczących adiuwantów, lecz także w Morein B i wsp., 1995, Clin. Immunother. 3: 461-475 jak również w Barr IG and Mitchell GF, 1996, Immunol. and Cell Biol. 74: 8-25, dostarczają przydatnych instrukcji do wytwarzania kompletnych kompleksów immunostymulujących.
Inną bardzo interesującą (a zatem korzystną) możliwością uzyskania działania adiuwanta jest wykorzystanie techniki opisanej w Gosselin i wsp. 1992. W skrócie, prezentacja stosownego antygenu, takiego jak antygen w zastosowaniu według wynalazku, może być wzmocniona przez skoniugowanie antygenu z przeciwciałami (lub z fragmentami przeciwciała wiążącymi antygen) skierowanymi przeciwko receptorom Fcy na monocytach/makrofagach. Wykazano, że szczególnie koniugaty pomiędzy antygenem i anty-FcYRI wzmacniają immunogenność na skutek szczepienia.
Inne możliwości wymagają użycia immunologicznych substancji kierujących i stymulujących (np. cytokiny), wspomnianych powyżej jako kandydatów na pierwsze i drugie ugrupowania w zmodyfikowanych wersjach polipeptydów amyloidogennych. W związku z tym możliwe są także syntetyczne induktory cytokin jak poli I:C.
Odpowiednie pochodne mykobakteryjne są wybrane z grupy składającej się z dipeptydu muramylowego, kompletnego adiuwantu Freunda, RIBI oraz diesteru trehalozy, takiego jak TDM i TDE.
PL 204 878 B1
Odpowiednie immunologiczne adiuwanty kierujące są wybrane z grupy składającej się z liganda CD40 i przeciwciała przeciwko CD40 lub ich swoiście wiążących fragmentów (porównaj dyskusja powyżej), mannozy, fragmentu Fab i CTLA-4.
Odpowiednie adiuwanty polimerowe są wybrane z grupy składającej się z węglowodanu, takiego jak dekstran, PEG, skrobia, mannan, mannoza; polimerów, takich jak lateks, jako kulki lateksowe.
Jeszcze inną interesującą drogą modulowania odpowiedzi immunologicznej jest włączenie immunogenu (ewentualnie wraz z adiuwantami i farmaceutycznie akceptowalnymi nośnikami i zaróbkami) do „sztucznego węzła chłonnego” (VLN) (opatentowanego urządzenia medycznego wykonanego przez ImmunoTherapy, Inc., 360 Lexington Avenue, New York, NY 10017-6501). VLN (cienkie tubularne urządzenie) naśladuje strukturę i funkcję węzła chłonnego. Wprowadzenie VLN pod skórę tworzy miejsce sterylnego zapalenia, do którego napływają gwałtownie cytokiny i chemokiny. Komórki T i B, jak również komórki APC szybko odpowiadają na niebezpieczne sygnały, ogniskują się w miejscu zapalnym i gromadzą wewnątrz porowatej macierzy VLN. Wykazano, że konieczna dawka antygenu wymagana do wywołania odpowiedzi odpornościowej na antygen jest zmniejszona, gdy zastosowany jest VLN, a ochrona immunologiczna nadana przez szczepienie z zastosowaniem VLN przewyższa tradycyjną immunizację z zastosowaniem Ribi jako adiuwanta. Technologia jest np. opisana krótko w Gelber C i wsp., 1998, „Elicitation of Robust Cellular and Humoral Immune Responses to Small Amounts of Immunogens Using a Novel Medical Device Designated the Virtual Lymph Node”, w: „From the Laboratory to the Clinic, Book of Abstracts, October 12th - 15th 1998, Seascape Resort, Aptos, Kalifornia”.
Pokazano, że preparat mikroczastek ze szczepionkami w wielu przypadkach podnosi immunogenność antygenów białkowych i jest zatem innym korzystnym wykonaniem wynalazku. Mikrocząstki są wytworzone albo jako ko-preparaty antygenu i polimeru, lipidu, węglowodanu i innych cząsteczek odpowiednich do wytworzenia cząstek lub mikrocząstek mogą być homogennymi cząstkami składającymi się tylko z samego antygenu.
Przykładami mikrocząstek na bazie polimerów są cząstki oparte na PLGA i PVP (Gupta, R.K. i wsp., 1998), gdzie polimer i antygen są skondensowane w cząstkę stałą. Cząstki oparte na lipidach można wytworzyć jako micelle z lipidów (zwane liposomami) wychwytujące antygen w obrębie miceli (Pietrobon, P.J., 1995). Cząstki oparte na węglowodanach są zazwyczaj wykonane z odpowiedniego, podlegającego degradacji węglowodanu, takiego jak skrobia lub chitosan. Węglowodan i antygen są mieszane i kondensowane w cząstki w procesie podobnym do używanego dla cząstek polimerowych (Kas, H.S. i wsp., 1997).
Cząstki składające się wyłącznie z antygenu można wytwarzać różnymi technikami rozpylania i liofilizacji. Szczególnie odpowiednia do celów według niniejszego wynalazku jest nadkrytyczna technologia cieczowa, która jest stosowana do wytwarzania bardzo jednolitych cząstek o kontrolowanym rozmiarze (York, P. 1999 & Shekunov, B. i wsp. 1999).
Oczekuje się, że szczepionka powinna być podawana 1-6 razy w roku, tak jak 1, 2, 3, 4, 5 lub 6 razy w roku osobnikowi, który jej potrzebuje. Wykazano wcześniej, że odporność zapamiętana wywołana przez zastosowanie korzystnych autoszczepionek nie jest permanentna i dlatego układ odpornościowy potrzebuje cyklicznego prowokowania polipeptydem amyloidogennym lub zmodyfikowanymi polipeptydami amyloidogennymi.
Z powodu zmienności genetycznej, różne osobniki mogą reagować odpowiedzią odpornościową o różnej sile na ten sam polipeptyd. Zatem, szczepionka może obejmować wiele różnych polipeptydów w celu podniesienia odpowiedzi odpornościowej, porównaj także dyskusję powyżej dotyczącą wyboru obcego epitopu dla komórki T. Szczepionka może obejmować dwa lub więcej polipeptydów, z których wszystkie są zdefiniowane powyżej.
Szczepionka może w konsekwencji obejmować 3-20 różnych zmodyfikowanych lub niezmodyfikowanych polipeptydów, jak 3-10 różnych polipeptydów.
Szczepienie kwasem nukleinowym
Alternatywna, do klasycznego podawania szczepionki na bazie peptydu, technologia szczepienia kwasem nukleinowym (znana także jako „immunizacja kwasem nukleinowym”, „immunizacja genetyczna” i „immunizacja genowa”) oferuje szereg atrakcyjnych właściwości.
Po pierwsze, dla kontrastu z tradycyjnym podejściem szczepionkowym, szczepienie kwasem nukleinowym nie wymaga produkcji na dużą skalę immunogennego antygenu (np. w formie fermentacji na skalę przemysłową mikroorganizmów produkujących zmodyfikowane polipeptydy amyloidogenne) zużywającej środki. Ponadto, nie ma potrzeby stosowania do oczyszczania urządzenia i schematów
PL 204 878 B1 ponownego fałdowania immunogenu. W końcu, ponieważ szczepienie kwasem nukleinowym opiera się na aparacie biochemicznym szczepionego osobnika w celu wytworzenia ekspresji produktu dla wprowadzonego kwasu nukleinowego, oczekuje się, że nastąpi optymalna obróbka post-translacyjna wytworzonego produktu; jest to szczególnie ważne w przypadku autoszczepienia, ponieważ jak wspomniano powyżej, istotna frakcja oryginalnych epitopów dla komórki B powinna być chroniona w zmodyfikowanej cząsteczce oraz dlatego, że epitopy dla komórki B w szczególności mogą być tworzone przez części dowolnej (bio)cząsteczki (np. węglowodanu, lipidu, białka itd.). Zatem, natywny wzór glikozylacji i lipidacji w immunogenie może być bardzo ważny dla ogólnej immunogenności i jest to najlepiej zapewnione przez produkowanie immunogenu w gospodarzu.
Zatem, korzystne wykonanie wynalazku obejmuje skuteczną prezentację zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego układowi odpornościowemu przez wprowadzenie kwasu(ów) nukleinowego(ych) kodującego zmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny do komórek zwierzęcych i tym samym uzyskanie ekspresji in vivo kwasu(ów) nukleinowego(ych) wprowadzonego do komórek.
W wykonaniu tym, wprowadzanym kwasem nukleinowym jest korzystnie DNA, który może być w postaci nagiego DNA, DNA sformułowanego z naładowanymi lub nie naładowanymi lipidami, DNA sformułowanego w liposomach, DNA zawartego w wektorze wirusowym, DNA sformułowanego z białkiem lub polipeptydem ułatwiającym transfekcję, DNA sformułowanego z białkiem lub polipeptydem kierującym, DNA sformułowanego z czynnikami wytrącającymi wapń, DNA sprzężonego z nieczynną cząsteczką nośnikową, DNA enkapsulowanego w polimerze, np. w PLGA (porównaj technologia mikroenkapsulacji opisana w WO 98/31398) lub w chitynie czy chitozanie oraz DNA sformułowanego z adiuwantem. W tym kontekście ważne jest, że praktycznie wszystkie uwagi odnoszące się do użycia adiuwantów w preparacie tradycyjnej szczepionki, mają zastosowanie do preparatów szczepionek DNA. Zatem, wszystkie przedstawione tu ujawnienia odnoszące się do zastosowania adiuwantów w kontekście szczepionek na bazie peptydu mają zastosowanie, z koniecznymi odmianami i zmianami, przy ich użyciu w technologii szczepienia kwasem nukleinowym.
Drogi podawania i schematy podawania szczepionek na bazie polipeptydu, które wyszczególniono powyżej, mają także zastosowanie do szczepionek z kwasów nukleinowych i wszystkie powyższe dyskusje odnoszące się do dróg podawania i schematów podawania polipeptydów mają zastosowanie z koniecznymi zmianami i odmianami do kwasów nukleinowych. Powinno się do tego dodać, że szczepionki z kwasów nukleinowych mogą być odpowiednio podawane dożylnie i dotętniczo. Ponadto, dobrze wiadomo specjalistom, że szczepionki z kwasu nukleinowego można podawać stosując tak zwaną. W końcu, informowano także, że użycie VLN w podawaniu kwasów nukleinowych daje dobre wyniki, a zatem ten specyficzny sposób podawania jest szczególnie korzystny.
Ponadto, kwas(y) nukleinowy stosowany jako czynnik immunizujący może zawierać regiony kodujące 1-wszą, 2-gą i/lub 3-cią cząstkę, np. w formie substancji immunostymulujących substancji opisanych powyżej, takich jak cytokiny omawiane jako przydatne adiuwanty. Korzystna wersja tego wykonania obejmuje posiadanie regionu kodującego analog i regionu kodującego immunomodulator w różnych ramkach odczytu lub przynajmniej pod kontrolą różnych promotorów. Tym samym unika się tego, że analog lub epitop jest wytwarzany jako partner w fuzji z immunomodulatorem. Alternatywnie, można użyć dwóch różnych fragmentów nukleotydowów, lecz jest to mniej korzystne ze względu na lepsze zapewnienie jednoczesnej ekspresji, gdy oba regiony kodujące zawarte są w tej samej cząsteczce.
Zgodnie zatem, wynalazek także dotyczy kompozycji indukującej produkcję przeciwciał skierowanych przeciwko polipeptydowi amyloidogennemu, która obejmuje:
- fragment kwasu nukleinowego lub wektor według wynalazku (porównaj dyskusja o wektorach poniżej) oraz
- farmaceutycznie i immunologicznie dopuszczalną zaróbkę i/lub nośnik, i/lub adiuwant, jak omówiono powyżej.
W normalnych warunkach, kwas nukleinowy kodujący wariant jest wprowadzany w postaci wektora, w którym ekspresja znajduje się pod kontrolą promotora wirusowego. Dla bardziej szczegółowych informacji o wektorach według wynalazku porównaj dyskusję poniżej. Także dostępne są szczegółowe ujawnienia odnoszące się do wytwarzania i stosowania szczepionek z kwasu nukleinowego, porównaj Donnelly JJ i wsp, 1997, Annu. Rev. Immunol. 15: 617-648 oraz Donnelly JJ i wsp., 1997, Life Sciences 60: 163-172.
Żywe szczepionki
Trzecią alternatywą skutecznej prezentacji zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego układowi odpornościowemu jest użycie technologii żywej szczepionki. W szczepieniu żywą szczepionką,
PL 204 878 B1 prezentacja układowi odpornościowemu jest wywołana przez podanie zwierzęciu niepatogennego mikroorganizmu, który został stransformowany fragmentem kwasu nukleinowego kodującym zmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny lub wektorem wprowadzającym taki fragment kwasu nukleinowego. Niepatogennym mikroorganizmem może być dowolny odpowiedni atenuowany szczep bakteryjny (atenuowany przez pasażowanie lub przez usunięcie za pomocą technik rekombinacji DNA patogennych produktów ekspresji), np. Mycobacterium bovis BCG., niepatogenny Streptococcus spp., E. coli, Salmonella spp., Vibrio cholerae, Shigella, itd. Prace przeglądowe dotyczące wytwarzania przez specjalistów żywych szczepionek można np. znaleźć w Saliou P, 1995, Rev. Prat. 45: 1492-1496 i Walker PD, 1992, Vaccine 10: 977-990. Szczegóły na temat fragmentów kwasu nukleinowego i stosowanych w żywych szczepionkach wektorów patrz omówienie poniżej.
Jako alternatywę dla żywych szczepionek bakteryjnych, fragment kwasu nukleinowego według wynalazku omówiony poniżej można wprowadzić do niewirulentnego wirusowego wektora szczepionkowego, takiego jak szczep krowianki lub inne odpowiednie wirusy ospy.
Normalnie, niepatogenny mikroorganizm lub wirus jest podawany zwierzęciu tylko raz, lecz w pewnych przypadkach może zajść konieczność podania mikroorganizmu więcej niż raz w czasie życia, w celu podtrzymania odporności ochronnej. Jest nawet rozważane, czy schematy immunizacji, jak te przedstawione szczegółowo powyżej, dla szczepienia polipeptydem, będą przydatne przy stosowaniu szczepionek żywych lub wirusowych.
Alternatywnie szczepienie szczepionką żywą lub wirusową można prowadzić w kombinacji z wcześniejszym lub następującym później szczepieniem polipeptydem i/lub kwasem nukleinowym. Na przykład, można przeprowadzić główną immunizację za pomocą szczepionki żywej lub wirusowej, a następnie wzmocnienie immunizacji przy użyciu polipeptydu lub kwasu nukleinowego.
Mikroorganizm lub wirus może być stransformowany kwasem(ami) nukleinowym(i) zawierającym regiony kodujące 1-wsze, 2-gie i/lub 3-cie ugrupowanie, np. w formie substancji immunomodulujących opisanych powyżej, takich jak cytokiny omawiane jako przydatne adiuwanty. Korzystna wersja tego wykonania obejmuje posiadanie regionu kodującego analog i regionu kodującego immunomodulator w różnych ramkach odczytu lub przynajmniej pod kontrolą różnych promotorów. Tym samym unika się tego, że analog lub epitopy są wytwarzane jako partnerzy w fuzji z, immunomodulatorem. Alternatywnie, jako czynników transformujących można użyć dwóch różnych fragmentów nukleotydowych. Oczywiście posiadając 1-wsze, 2-gie i/lub 3-cie ugrupowanie w tej samej ramce odczytu, analog według wynalazku, można dostarczyć jako produkt ekspresji i takie wykonanie jest szczególnie korzystne według niniejszego wynalazku.
Wykorzystanie wynalazku w leczeniu choroby
Jak wynika z dyskusji powyżej, wynalazek umożliwia kontrolowanie chorób charakteryzujących się złogami amyloidowymi. W tym kontekście, AD jest kluczowym celem dla wynalazku, lecz możliwymi celami są także inne choroby charakteryzujące się złogami amyloidowymi. Zatem, zastosowanie i inne przedmioty wynalazku umożliwiają obniżanie poziomu aktywności amyloidowej i leczenie i/lub zapobieganie, i/lub łagodzenie AD i innych chorób charakteryzujących się złogami amyloidowymi. Wynalazek umożliwia obniżenie poziomu amyloidu do takiego stopnia, że ilość amyloidu jest znacząco zmniejszona.
Szczególnie korzystne jest to, że zmniejszenie ilości amyloidu daje w efekcie odwrócenie równowagi między tworzeniem amyloidu a degradacją/usuwaniem amyloidu, tj. że szybkość degradacji/usuwania amyloidu przewyższa szybkość tworzenia amyloidu. Przez uważne kontrolowanie ilości i immunologicznej siły immunizacji osobnika będącego w potrzebie, będzie możliwe uzyskanie równowagi w czasie, która spowoduje wypadkowe zmniejszenie złogów amyloidowych bez zbytniego szkodliwego działania ubocznego.
Alternatywnie, jeśli u osobnika nie można usunąć lub zmniejszyć istniejących złogów amyloidowych, wynalazek można wykorzystać do uzyskania klinicznie znaczącej redukcji tworzenia nowego amyloidu, tym samym znacząco przedłużyć czas, w którym choroba nie jest wyniszczająca. Powinno być możliwe monitorowanie odkładania amyloidu albo przez pomiar stężenia amyloidu w surowicy (który uważa się za równoważny z materiałem odkładanym) lub przez użycie skanowania pozytronową emisyjną tomografią (PET), porównaj Small GW, i wsp., 1996, Ann N Y Acad Sci 802: 70-78.
Inne choroby i stany, w których leczeniu i łagodzeniu można zastosować środki według wynalazku analogicznymi drogami, wymieniono: powyżej. Skrobiawica układowa, AD, cukrzyca dorosłych, choroba Parkinsona, choroba Huntingtona, otępienie czołowo-skroniowe oraz przenoszona przez
PL 204 878 B1 cząsteczki typu prion encefalopatia gąbczasta) lub są przedstawione poniżej w sekcji zatytułowanej „Inne choroby amyloidowe i związane z nimi białka”.
Peptydy, polipeptydy i kompozycje
Jak wynika z powyższego, niniejszy wynalazek opiera się na koncepcji immunizacji osobników przeciwko antygenowi amyloidogennemu w celu uzyskania zmniejszonej ilości złogów amyloidowych związanych z patologią. Korzystną drogą uzyskania takiej immunizacji jest zastosowanie zmodyfikowanych wersji polipeptydu amyloidogennego, a tym samym dostarczenie cząsteczek, które wcześniej nie były ujawnione w stanie techniki.
Należy zauważyć, że korzystnie zmodyfikowane cząsteczki amyloidogenne obejmują modyfikacje dające polipeptyd mający przynajmniej 70% identyczności sekwencji z białkiem amyloidogennym lub jego częścią o długości przynajmniej 10 aminokwasów. Korzystne są wyższe identyczności sekwencji, np. przynajmniej 75% lub nawet przynajmniej 80, 85, 90 czy 95%. Identyczność sekwencji białek i kwasów nukleinowych można obliczyć jako (Nref - Ndif) · 100/Nref, gdzie Ndif jest liczbą wszystkich nieidentycznych reszt w dwóch przyrównywanych sekwencjach, a Nref jest liczbą reszt w jednej z sekwencji. Zatem sekwencja DNA, AGTCAGTC będzie miała 75% identyczności z sekwencją AATCAATC (Ndif=2 i Nref=8).
Wynalazek dotyczy także kompozycji immunogennej zawierającej skuteczną immunogennie ilość analogu amyloidowego zdefiniowanego powyżej, oraz farmaceutycznie i immunologicznie dopuszczalny rozcieńczalnik i/lub podłoże, i/lub nośnik, i/lub zaróbkę i ewentualnie adiuwant. Innymi słowy, ta część wynalazku odnosi się do preparatów zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego, zasadniczo jak opisano powyżej. Wybór adiuwantów, nośników, podłoży jest zgodny z linią omówioną powyżej w odniesieniu do wytwarzania zmodyfikowanego i niezmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego do zastosowania w obniżaniu poziomu amyloidu.
Polipeptydy są wytwarzane zgodnie z metodami dobrze znanymi specjalistom w dziedzinie. Dłuższe polipeptydy są zwykle wytworzone sposobami technologii rekombinacji genów, w tym wprowadzenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej analog do odpowiedniego wektora, transformacja odpowiedniej komórki gospodarza tym wektorem, ekspresję sekwencji kwasu nukleinowego przez komórkę gospodarza, odzyskanie wytworzonego produktu ekspresji z komórek gospodarza lub z supernatantu z ich hodowli, a następnie oczyszczenie i ewentualnie dalsza modyfikacja, np. ponowne fałdowanie lub derywatyzacja.
Krótsze peptydy są korzystnie wytworzone dobrze znanymi sposobami syntezy peptydów w fazie stałej i ciekłej. Jednakże, ostatnie ulepszenia tej technologii dają możliwość produkcji tymi sposobami polipeptydów i białek o pełnej długości, a zatem według wynalazku mogą być wytwarzane długie konstrukty sposobami syntezy.
Fragmenty kwasów nukleinowych i wektory według wynalazku
Z powyższego ujawnienia wynika, że zmodyfikowane polipeptydy amyloidogenne można wytwarzać sposobami technologii rekombinacji genów, a także sposobami chemicznej syntezy lub semisyntezy: dwie ostatnie możliwości są szczególnie odpowiednie, gdy modyfikacja polega na sprzęganiu z nośnikami białkowymi (taki jak KHL, anatoksyna błonicy, anatoksyna tężca i BSA) i cząsteczkami, które nie są białkopodobne, jak polimery węglowodanowe i oczywiście także wtedy, gdy modyfikacja obejmuje dodanie łańcuchów bocznych lub grup bocznych do łańcucha peptydowego będącego pochodną polipeptydu amyloidogennego.
Dla technologii rekombinacji genów, oraz oczywiście także dla immunizacji kwasem nukleinowym, istotnymi produktami chemicznymi są fragmenty kwasu nukleinowego kodujące zmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny. Zatem, ważna część wynalazku odnosi się do fragmentu kwasu nukleinowego, który koduje analog polipeptydu amyloidogennego np. polipeptyd będący pochodną polipeptydu amyloidogennego, który albo zawiera naturalną sekwencję, do której został dodany albo wprowadzony partner fuzji, albo korzystnie polipeptyd będący pochodną polipeptydu amyloidogennego ma wprowadzony obcy epitop dla komórki T przez insercję i/lub addycję, korzystnie przez substytucję i/lub delecję. Fragmenty kwasów nukleinowych według wynalazku są fragmentami DNA lub RNA.
Fragmenty kwasów nukleinowych według wynalazku będą normalnie wprowadzane do odpowiednich wektorów tworząc wektory do klonowania i ekspresji niosące fragmenty kwasów nukleinowych według wynalazku; takie nowe wektory także są częścią wynalazku. Szczegóły dotyczące konstrukcji tych wektorów według wynalazku będą omówione poniżej, w odniesieniu do transformowanych
PL 204 878 B1 komórek i mikroorganizmów. Wektory, w zależności od celu i typu zastosowania, mogą być w postaci plazmidów, fagów, kosmidów, mini-chromosomów lub wirusów lecz także nagi DNA, który ulega tylko przejściowej ekspresji w określonych komórkach, jest ważnym wektorem. Korzystne wektory do klonowania i ekspresji według wynalazku są zdolne do autonomicznej replikacji, co umożliwia występowanie w wysokiej liczbie kopii istotne dla wysokowydajnej ekspresji lub wysokowydajnej replikacji umożliwiającej dalsze klonowanie.
Ogólny szkic wektora według wynalazku obejmuje następujące cechy w kierunku 5' >3' i funkcjonalne połączenie: promotor kierujący ekspresją fragmentu kwasu nukleinowego według wynalazku, ewentualnie sekwencja kwasu nukleinowego kodująca peptyd liderowy umożliwiający sekrecję (do fazy zewnątrzkomórkowej lub, gdzie stosowne, do periplazmy) lub integrację fragmentu polipeptydu z błoną, fragment kwasu nukleinowego według wynalazku i ewentualnie sekwencja kwasu nukleinowego kodująca terminator. Gdy operuje się wektorami ekspresyjnymi w szczepach lub liniach komórkowych producenta w celu uzyskania stabilności genetycznej stransformowanych komórek, korzystnie wektor po wprowadzeniu do komórki gospodarza integruje do jej genomu. Dla kontrastu, gdy pracuje się z wektorami stosowanymi do skutecznej ekspresji in vivo u zwierzęcia (tj. gdy stosuje się wektory w szczepieniach z DNA), z powodów bezpieczeństwa korzystne, jest aby wektory nie były w stanie integrować do genomu komórki gospodarza; zazwyczaj stosuje się nagi DNA i nieintegrujące wektory wirusowe, których wybór jest dobrze znany specjaliście.
Wektory według wynalazku są stosowane do transformacji komórek gospodarza w celu produkowania zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego według wynalazku. Takie stransformowane komórki, które także są częścią wynalazku, mogą być hodowlami komórkowymi lub liniami komórkowymi stosowanymi do namnażania fragmentów kwasów nukleinowych i wektorów według wynalazku lub mogą być stosowane do rekombinacyjnej produkcji zmodyfikowanych polipeptydów amyloidogennych. Alternatywnie stransformowane komórki mogą być odpowiednimi szczepami żywych szczepionek, do których wprowadzono fragment kwasu nukleinowego (w jednej lub w wielu kopiach), aby uzyskać sekrecję lub integrację zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego z błoną bakteryjną lub ścianą komórkową.
Korzystnymi stransformowanymi komórkami według wynalazku są mikroorganizmy, takie jak bakterie (jak gatunki Escherichia [np. E. coli], Bacillus [np. Bacillus subtilis], Salmonella lub Mycobacterium [korzystnie niepatogenne, np. M. bovis BCG]), drożdże (takie jak Saccharomyces cerevisiae) i protozoa. Alternatywnie, stransformowane komórki pochodzą z organizmu wielokomórkowego, takiego jak grzyb, komórka owadzia, komórka roślinna lub komórka ssacza. Najbardziej korzystne są komórki pochodzące od ludzi, porównaj omówienie linii komórkowych i wektorów poniżej. Bardzo obiecujące są ostatnie wyniki uzyskane dla handlowo dostępnej linii komórkowej Drosophila melanogaster (system linii komórkowej Schneider 2 (S2) i wektora, udostępniony przez Invitrogen) do rekombinacyjnej produkcji polipeptydów w laboratorium zgłaszających, zatem ten system ekspresji jest szczególnie korzystny.
W celu klonowania i/lub optymalizacji ekspresji korzystnie stransformowana komórka jest zdolna do replikacji fragmentu kwasu nukleinowego według wynalazku. Komórki, w których zachodzi ekspresja fragmentu nukleinowego, są korzystnymi przydatnymi wykonaniami według wynalazku; można je stosować do produkcji na małą i dużą skalę zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego lub w przypadku bakterii niepatogennych jako składniki żywej szczepionki.
Gdy produkowane są zmodyfikowane cząsteczki przy użyciu stransformowanych komórek, wygodne jest, choć dalekie od koniecznego, aby wytwarzany produkt albo był eksportowany do pożywki hodowlanej albo był niesiony na powierzchni stransformowanej komórki.
Po zidentyfikowaniu komórki wydajnego producenta korzystnie, na jej podstawie ustala się stabilną linię komórkową, która niesie wektor według wynalazku, i w której zachodzi ekspresja fragmentu kwasu nukleinowego kodującego zmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny. Korzystnie, stabilna linia komórkowa będzie wydzielać lub nieść analog według wynalazku, ułatwiając tym samym jego oczyszczenie.
Zasadniczo, wektory plazmidowe zawierające replikon i sekwencje kontrolne, które pochodzą z gatunku zgodnego z komórką gospodarza, są stosowane w połączeniu z gospodarzami. Wektor zwykle niesie miejsce startu replikacji, jak również sekwencje markerowe, które umożliwiają fenotypową selekcję w stransformowanych komórkach. Na przykład, E. coli jest zazwyczaj transformowana przy użyciu pBR322, plazmidu pochodzącego z gatunku E. coli (patrz, np., Bolivar i wsp., 1977). Plazmid pBR322 zawiera geny oporności na ampicylinę i tetracyklinę i w ten sposób dostarcza łatwego sposobu identyfikacji stransformowanych komórek. Plazmid pBR lub inny plazmid mikrobiologiczny lub
PL 204 878 B1 fag muszą także zawierać, lub być zmodyfikowane, aby zawierać, promotory, które mogą być użyte do ekspresji przez mikroorganizm prokariotyczny.
Takie powszechnie stosowane promotory w konstruktach z rekombinowanym DNA obejmują systemy promotorów e-laktamazowego (penicylinazowego) laktozowego (Chang i wsp., 1978; Itakura i wsp., 1977; Goeddel i wsp., 1979) i system promotora tryptofanowego (trp) (Goeddel i wsp., 1979; EP-A-0 036 776). Pomimo, że promotory te są powszechnie stosowane inne promotory z mikroorganizmów są odkryte i stosowane, a szczegóły dotyczące ich sekwencji nukleotydowych zostały opublikowane, co umożliwia specjalistom łączyć je funkcjonalnie z wektorami plazmidowymi (Siebwenlist i wsp., 1980). Pewne geny prokariotyczne mogą ulegać wydajnej ekspresji w E. coli ze swoich własnych sekwencji promotorowych, co wyklucza konieczność dodawania innego promotora w sposób sztuczny.
Dodatkowo do prokariontów, można także zastosować mikroorganizmy eukariotyczne, takie jak hodowle drożdży i tu promotor powinien być w stanie kierować ekspresją. Saccharomyces cerevisiae lub powszechne drożdże piekarnicze, są najczęściej stosowanym organizmem wśród mikroorganizmów eukariotycznych, chociaż powszechnie dostępne są liczne inne szczepy. Do ekspresji w Saccharomyces powszechnie stosowanym plazmidem jest, przykładowo, plazmid YRp7, (Stinchcomb i wsp., 1979; Kingsman i wsp., 1979; Tschemper i wsp., 1980). Plazmid ten zawiera już gen trpl, który dostarcza markera selekcyjnego dla szczepu mutanta drożdży, który utracił zdolność wzrostu bez tryptofanu, przykładowo ATCC Nr 44076 lub PEP4-1 (Jones, 1977). Obecność uszkodzenia w trpl jest charakterystyczna dla genomu drożdżowej komórki gospodarza i dlatego dostarcza użytecznego środowiska dla wykrywania transformacji przez wzrost w nieobecności tryptofanu.
Stosowne sekwencje pobudzające w wektorach drożdżowych obejmują promotory kinazy 3-fosfoglicerynianowej (Hitzman i wsp., 1980) lub innych enzymów glikolitycznych (Hess i wsp., 1968; Holland i wsp., 1978), takich jak enolaza, dehydrogenaza gliceraldehydo-3-fosforanu, heksokinaza, dekarboksylaza pirogronianowa, fosfofruktokinaza, izomeraza glukozo-6-fosforanu, mutaza 3-fosfoglicerynianowa, kinaza pirogronianowa, izomeraza triozofosforanowa, izomeraza fosfoglukozowa i glukokinaza. Przy konstruowaniu odpowiednich plazmidów ekspresyjnych, sekwencje terminacyjne związane z tymi genami są także włączane za pomocą reakcji ligacji do wektora ekspresyjnego na końcu 3' sekwencji, której ekspresja jest żądana, w celu poliadenylacji mRNA i terminacji.
Innymi promotorami, które mają dodatkową przewagę w kontrolowaniu transkrypcji za pomocą warunków wzrostowych, są regiony promotorowe dehydrogenazy alkoholowej 2, izocytochromu C, fosfatazy kwaśnej, enzymów rozkładających związanych z metabolizmem azotu oraz wspomnianej wcześniej dehydrogenazy gliceraldehydo-3-fosforanowej oraz enzymów odpowiedzialnych za wykorzystanie maltozy i galaktozy. Odpowiedni jest każdy wektor plazmidowy zawierający promotor zgodny dla drożdży, miejsce startu replikacji i sekwencje terminacyjne.
Dodatkowo do mikroorganizmów jako gospodarzy można także stosować hodowle komórek pochodzących z organizmów wielokomórkowych. W zasadzie, każdą z takich hodowli można przeprowadzić, zarówno hodowlę komórek kręgowców jak i bezkręgowców. Chociaż bardziej interesujące są komórki kręgowców, a namnażanie komórek kręgowców w hodowli (hodowle tkankowe) stało się rutynową procedurą w ostatnich latach (Tissue Culture, 1973). Przykładami takich przydatnych linii komórkowych gospodarzy są komórki VERO i HeLa, linie komórkowe z jajnika chomika chińskiego (CHO) i komórki W138, BHK, COS-7 293, Spodoptera frugiperda (SF) (handlowo dostępne w postaci całych systemów do ekspresji z np. Protein Sciences, 1000 Research Parkway, Meriden, CT 06450, U.S.A. i z Invitrogen) oraz linie komórkowe MDCK. W niniejszym wynalazku szczególnie korzystna jest linia komórkowa S2, dostępna w Invitrogen, PO Box 2312, 9704 CH Groningen, Holandia.
Wektory ekspresyjne do takich komórek zwykle zawierają (jeśli konieczne) miejsce startu replikacji, promotor położony przed genem, który ma ulec ekspresji, wraz z koniecznymi miejscami wiązania rybosomu, miejsca splicingu RNA, miejsce poliadenylacji i sekwencje terminatora transkrypcji.
Funkcje kontrolne w wektorach ekspresyjnych stosowanych w komórkach ssaczych są często dostarczane przez materiał wirusowy. Na przykład, powszechnie stosowanymi promotorami są pochodzące z wirusa Polyoma, Adenowirusa 2 oraz najczęściej z małpiego wirusa 40 (SV40). Wczesny i późny promotor wirusa SV40 są szczególnie przydatne, ponieważ oba są z łatwością uzyskiwane z wirusa w postaci fragmentu zawierającego także miejsce startu replikacji dla wirusa SV40 (Fiers i wsp., 1978). Można także zastosować mniejsze i większe fragmenty SV40, dostarczające zawartą sekwencję około 250 bp, rozciągającą się od miejsca Hindlll do miejsca Bgll w wirusowym miejscu startu replikacji. Ponadto możliwe jest także, i często pożądane, wykorzystanie promotora lub sekwencji
PL 204 878 B1 kontrolnych normalnie związanych z sekwencją żądanego genu, pod warunkiem, że takie sekwencje kontrolne są zgodne z systemami komórki gospodarza.
Miejsce startu replikacji można dostarczyć albo przez skonstruowanie wektora zawierającego egzogenne miejsce startu, jakim może być pochodzące z SV40 lub innego wirusa (np., Polyoma, Adeno, VSV, BPV) lub miejsce startu replikacji może być dostarczone przez mechanizm replikacji chromosomu w komórce gospodarza. Ten ostatni sposób jest często wystarczający, o ile wektor integruje się z chromosomem komórki gospodarza.
Identyfikacja przydatnych analogów
Będzie jasne dla specjalistów, że nie wszystkie możliwe warianty lub modyfikacje naturalnie występujących polipeptydów amyloidogennych będą miały zdolność wywoływania w zwierzęciu przeciwciał, które będą reagowały krzyżowo z formą naturalną. Nie jest jednakże trudne ustalenie wydajnego standardowego przeszukiwania zmodyfikowanych cząsteczek amyloidogennych, które spełniają minimalne wymagania omawianej tu reaktywności immunologicznej. Sposób identyfikacji zmodyfikowanego polipeptydu amyloidogennego, który może indukować przeciwciała skierowane przeciwko niezmodyfikowanemu polipeptydowi amyloidogennemu w gatunku zwierzęcym, gdzie niezmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny jest (nie-immunogennym) własnym białkiem obejmuje:
- wytworzenie, sposobami syntezy peptydów lub technikami inżynierii genetycznej, zestawu różniących się wzajemnie zmodyfikowanych polipeptydów amyloidogennych, w których dodano, wstawiono, usunięto lub podstawiono aminokwasy w sekwencji aminokwasowej polipeptydu amyloidogennego gatunku zwierzęcego, co prowadzi do powstania sekwencji aminokwasowych w zestawie, które obejmują epitopy dla komórki T, obce dla gatunku zwierzęcego lub wytworzenie zestawu fragmentów kwasów nukleinowych kodujących zestaw różniących się wzajemnie zmodyfikowanych polipeptydów amyloidogennych,
- testowanie przedstawicieli zestawu zmodyfikowanych polipeptydów amyloidogennych lub fragmentów kwasów nukleinowych pod kątem ich zdolności do indukowania produkcji przeciwciał przez gatunek zwierzęcy skierowanych przeciwko niezmodyfikowanemu polipeptydowi amyloidogennemu, oraz
- identyfikowanie i ewentualnie izolowanie przedstawiciela(i) zestawu zmodyfikowanych polipeptydów amyloidogennych, który znacząco indukuje produkcję przeciwciała skierowanego przeciwko niezmodyfikowanemu polipeptydowi amyloidogennemu w gatunku lub identyfikowanie i ewentualnie izolowanie polipeptydowych produktów ekspresji, kodowanych przez przedstawicieli zestawu fragmentów kwasów nukleinowych, które znacząco indukują produkcję przeciwciała skierowanego przeciwko niezmodyfikowanemu polipeptydowi amyloidogennemu w gatunku zwierzęcym.
W tym kontekście, „zestaw różniących się wzajemnie zmodyfikowanych polipeptydów amyloidogennych” jest zbiorem nieidentycznych zmodyfikowanych polipeptydów amyloidogennych, które zostały np. wyselekcjonowane na podstawie kryteriów omówionych powyżej (np. w połączeniu z badaniem dichroizmu kołowego, spektroskopii NMR i/lub wzorów dyfrakcji promieniowania rentgenowskiego). Zestaw może składać się tylko z kilku przedstawicieli, lecz może też zawierając kilkaset przedstawicieli.
Testowanie członków zestawu można ostatecznie przeprowadzić in vivo, lecz można zastosować szereg testów in vitro, które zawężą ilość zmodyfikowanych cząsteczek.
Ponieważ celem wprowadzenia obcych epitopów dla komórki T jest podtrzymanie odpowiedzi komórki B przez komórkę T pomocniczą, wstępnym warunkiem jest, że proliferacja komórki T jest indukowana przez zmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny. Proliferację komórki T można badać przez standaryzowane testy proliferacji in vitro. Pokrótce, od osobnika pobiera się próbkę wzbogaconą w komórki T, a następnie utrzymuje się w hodowli. Hodowane komórki T kontaktuje się z pochodzącymi od osobnika komórkami APC, które wcześniej pobrały zmodyfikowaną cząsteczkę i obrobiły ją tak, że prezentują jej epitopy dla komórki T. Proliferacja komórek T jest monitorowana i porównywana z odpowiednią kontrolą (np. komórkami T w hodowli kontaktowanymi z komórkami APC, które przeprocesowały cały, natywny polipeptyd amyloidogenny). Alternatywnie, proliferację można zmierzyć przez określenie stężenia stosownych cytokin uwalnianych przez komórki T w odpowiedzi na ich rozpoznawanie obcych komórek T.
Po wykazaniu z wysokim prawdopodobieństwem, że przynajmniej jeden zmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny z każdego typu zestawu jest zdolny do indukowania produkcji przeciwciała skierowanego przeciwko polipeptydowi amyloidogennemu, możliwe jest wytworzenie kompozycji immunogennej, obejmującej przynajmniej jeden zmodyfikowany polipeptyd amyloidowy, która jest zdolna
PL 204 878 B1 do indukowania przeciwciał skierowanych przeciwko niezmodyfikowanemu polipeptydowi amyloidogennemu w gatunku zwierzęcym, gdzie niezmodyfikowany polipeptyd amyloidogenny jest własnym białkiem. Sposób wytwarzania takiej kompozycji obejmuje zmieszanie członka(ów) zestawu, który znacząco indukuje produkcję w gatunku zwierzęcym przeciwciał, które reagują z polipeptydem amyloidogennym, farmaceutycznie i immunologicznie dopuszczalnego nośnika i/lub podłoża, i/lub rozcieńczalnika, i/lub zaróbki, ewentualnie w kombinacji z przynajmniej jednym farmaceutycznie i immunologicznie dopuszczalnym adiuwantem.
Testowanie zestawów polipeptydowych dogodnie prowadzi się przez wstępne przygotowanie pewnej ilości różniących się wzajemnie sekwencji kwasów nukleinowych lub wektorów według wynalazku, wprowadzenie ich do odpowiednich wektorów ekspresyjnych, transformowanie odpowiednich komórek gospodarza (lub gospodarzy zwierzęcych) wektorami i uzyskiwanie ekspresji sekwencji kwasów nukleinowych według wynalazku. Po tych etapach można przeprowadzić izolację wyrażanych produktów. Korzystnie, sekwencje kwasów nukleinowych i/lub wektory są wytwarzane sposobami obejmującymi stosowanie techniki amplifikacji molekularnej, takiej jak PCR lub sposobami syntezy kwasów nukleinowych.
Specyficzne cele amyloidogenne
Oprócz białek najczęściej związanych z alzheimerowymi APP, ApoE4 i Tau, istnieje długa lista innych białek, powiązanych w pewien sposób z AD, albo przez ich bezpośrednią obecność w płytkach lub splątkach w mózgach AD albo przez ich widoczne powiązanie genetyczne podnoszące ryzyko wystąpienia AD. Większość, o ile nie wszystkie, z tych antygenów, wraz z omówionymi powyżej Ae, APP, preseniliną i ApoE4 są przypuszczalnymi białkami docelowymi.
Alfa1-antychymotrypsyna (ACT) jest głównym składnikiem SP i sugeruje się, że odgrywa ważną rolę w patogenezie zmian chorobowych w AD i amyloidozie naczyniowo-mózgowej (CA) (Acta Neuropathol, 1998, 96: 628-36). Oddziałuje z Ae in vitro i stymuluje zarówno tworzenie jak i przerwanie włókienek Ae-42 (JBC, 1998, 273: 28360-4).
Alfa2-makroglobulinę znaleziono przez immunobarwienie rdzeni płytkowych w mózgach AD. Fragment transbłonowy z podjednostki beta znaleziono w rdzeniach płytkowych, podczas gdy rozpuszczalny fragment alfa znaleziono na zewnątrz komórek w płytkach. Acta Neuropathol, 1998, 96: 628-36 i Brain Res., 1997, 777: 223-227.
ABAD (peptyd Αβ wiążący dehydrogenazę alkoholową) wiąże się z Ae wewnątrz komórki. Jest enzymem neuronalnym obecnym w normalnych komórkach, lecz jest nadwyrażany w neuronach dotkniętych AD. Ae jest bardziej toksyczny dla komórek, które nadwyrażają ABAD. ABAD jest sprzężony z chromosomem X. Yan, 1997, Nature 389.
APLP1 i -2 (białko 1 i -2 podobne do prekursora amyloidu): Oba białka należą do nadrodziny białek homologów APP, lecz utraciły region peptydowy Ae. Pomimo tego, zachodzi znaczące barwienie APLP w płytkach neurytowych. Acta Neuropathol, 1997, 94: 519-524.
AMY117 jest nowym białkiem znalezionym w zmianach chorobowych podobnych do płytek w mózgach ludzi z AD, które wydają się być obfite, rozległe i „ wysoce specyficzne” dla choroby. Podejrzewa się, że białko AMY117 może odgrywać decydującą rolę w rozwoju i postępowaniu AD, przez tworzenie tych płytek. Interesujące, że płytki zawierające AMY117 nie mają wspólnej lokalizacji z płytkami zawierającymi Ae, zatem określają nowy charakterystyczny objaw AD, oprócz dobrze poznanych płytek zawierających Ae i splątków zawierających Tau. Płytki pozytywne pod względem AMY117 znaleziono w dużej ilości w mózgach sporadycznych przypadków AD i w mózgach pochodzących od ludzi z zespołem Downa, lecz są one „rzadkie lub nieobecne” w mózgach od osobników kontrolnych i od osobników z innymi chorobami neurodegeneracyjnymi (Am J Pathol 1997; 151: 69,80).
Bax: Przeciwciała monoklonalne wykryły Bax jako składnik płytek starczych w mózgach AD. Jest ono także nadwyrażane w neurytach dystroficznych. Acta Neuropathol. 1998, 95: 407-412.
Bcl-2 pełni niejasną rolę. Jest nadwyrażane w komórkach glejowych otaczających płytki. Acta Neuropathol. 1998, 95: 407-412.
Hydrolaza bleomycynowa jest prawdopodobnie sekretazą-beta. Stwierdzono immunoreaktywność skierowaną przeciwko hydrolazie bleomycynowej w SP w AD (Brain Res. 1999, 830: 200-202). Pewne genotypy hydrolazy bleomycynowej towarzyszą podniesionemu ryzyku wystąpienia AD w niektórych przypadkach, podczas gdy w innych nie znaleziono korelacji. (Ann Neurol, 1998, 44: 808-811 i Ann Neurol, 1999, 46: 136-137).
BRI/ABRI: ABRI jest fragmentem 4 000u z przypuszczalnego transbłonowego białka, kodowanego przez gen BRI z chromosomu 13, znalezionym w płytkach amyloidowych osób z rodzinnym otępieniem
PL 204 878 B1 brytyjskim (FBD). Pacjenci ci mają mutację w kodonie stop genu BRI, która powoduje powstanie dłuższej otwartej ramki odczytu. Uwolnienie 34 aminokwasów z końca karboksylowego zmienionego białka generuje powstanie podjednostki amyloidowej ABRI. Przeciwciała skierowane przeciwko ABRI rozpoznają zarówno miąższowe jak i naczyniowe zmiany chorobowe w mózgach pacjentów z FBD. Peptyd ABri jest odkładany jako włókienka amyloidowe i uważa się, że powstające płytki prowadzą do dysfunkcji neuronów otępienia charakteryzującego FBD (Vidal, R i wsp., 1999, Nature 399).
Chromogranina A została wykryta w niektórych rozproszonych złogach amyloidowych i w otaczających je neurytach dystroficznych (Brain Res, 1991, 539: 143-50).
Klusteryna/apoJ: Jest to gen często izolowany za pomocą przeszukiwania różnicowego w laboratoriach z różnych dziedzin biologii molekularnej, ponieważ ulega on nadekspresji w wielu przypadkach chorób degeneracyjnych, takich jak AD i chorobie szalonych krów (gąbczastej encefalopatii bydła) (Biochem J 1997 Nov 15; 328(1): 45-50 Michel D, Chatelain G, North S, Brun G).
Białko wiążące CRF (czynnik uwalniający kortykotropinę) wiąże się z 41 aminokwasowym peptydem CRF, który jest w mózgu ważnym czynnikiem regulatorowym w odpowiedzi na stres. Ponieważ większość CRF jest związana z białkiem wiążącym CRF, usunięcie białka wiążącego CRF (przez immunoterapię) mogłoby prowadzić do wzrostu poziomu wolnego CRF, co przypuszczalnie może mieć korzystny wpływ na AD. Behan, 1997, J. Neurochemistry, 68: 2053-2060.
EDTF (czynnik toksyczny pochodzenia śródbłonkowego): Białko wytwarzane przez mikronaczynia u pacjentów z AD. Jest swoiście toksyczny dla neuronów. WO 99/24468.
Proteoglikany siarczanu heparanu wykazują wspólną lokalizację z Ae w SP. Badania na szczurach pokazują, że glikozoaminoglikan siarczanu heparanu jest wymagany do tworzenia amyloidu (Neuron, 1994, 12: 219-234 i Acta Neuropathol, 1998, 96: 628-36).
Ludzkie mediatorowe białko-2 odpowiedzi na kolapsynę jest białkiem o 65 kDa rozpoznawanym w splątkach neurofibrylarnych przez monoklonalne przeciwciało. Wprowadzenie do splątków może usuwać rozpuszczalne białko i prowadzić do powstawania nieprawidłowych wypustek neurytów, zatem przyspieszać degradację neuronalną. JBC, 1998, 273: 9761-8.
Huntingtina (białko choroby Huntingtona): W HD, białko huntingtina jest powiększone na końcu N o poliiglutaminę. Taką formę huntingtiny znaleziono również w NFT w mózgach z AD i w chorobie Picka (Exp. Neurol, 1998, 150: 213-222).
ICAM-I jest gromadzone w SP. Acta Neuropathol, 1998, 96: 628-36 i Am. J Pathol. 1994, 144: 104-16.
IL-6 jest związane ze zmianami neurofibrylarnymi i zostało znalezione w środku płytek. Zaproponowano, że jest czynnikiem wyzwalającym zdarzenia w AD. Jest silnie amplifikowane w astrocytach przez aktywny peptyd 25-35 z Ae. Brain Res., 1997, 777: 223-227 i Behav Brain Res, 1996, 78: 37-41.
Antygen CD68 związany z lizosomem jest rozpoznawany przez przeciwciało KP-1 w NFT i SP. Zatem, lizosomy mogą odgrywać rolę w tworzeniu splątków i płytek. Dement Geriatr Cogn Disord, 1998, 9: 13-19.
P21 ras jest wymagany w pierwszym etapie podnoszenia ilości czynników wzrostowych i mitogenów obserwowanych we wstępnych stadiach rozwoju AD. Neuroscience, 1999, 91: 1-5.
PLC-delta 1 (izoenzym delta 1 fospholipazy C) jest nieprawidłowo akumulowany w NFT I i neurytach otaczających rdzenie płytek. Jest wewnątrzkomórkowy. Alzheimer Dis Assoc Disord, 1995,
9: 15-22.
Składnik surowiczego amyloidu P (SAP) jest normalnym składnikiem osocza obecnym we wszystkich typach złogów amyloidowych, włączając te występujące w AD (JBC, 1995, 270: 26041-4). Jest obserwowany zarówno w SP jak i w NFT. W niektórych badaniach wykazano, że pobudza agregowanie AP i zapobiega proteolizie włókienek (Biochem Biophys Res commun, 1995, 211: 349v-53 i PNAS, 1995, 92: 4299-4303), podczas gdy inne badania wykazują, że SAP hamuje tworzenie włókienek Ae (JBC, 1995, 270: 26041-4).
Synaptofizynę wykryto w niektórych rozproszonych złogach amyloidowych i w otaczających je neurytach dystroficznych. (Brain Res, 1991, 539: 143-50).
Synukleina (alfa-synukleina lub NACP): Składnik amyloidu AD nie będący składnikiem A- beta (NAC) zidentyfikowano biochemicznie jako drugi główny składnik amyloidu oczyszczonego z tkanki mózgowej pacjentów z AD. NAC, pochodzący od swojego prekursora, NACP, o długości 140 aminokwasów, ma długość przynajmniej 35 aminokwasów (NAC35)/chociaż jego koniec aminowy nie jest ściśle określony. Monoklonalne przeciwciało dla NAC barwi immunologicznie SP w mózgachz AD, lecz nie reaguje z NACP (Biochemistry 34 (32): 10139-10145 (Aug 15 1995) Iwai A, Yoshimoto M, Masliah E, Saitoh T). NAC oligomeryzuje ze sobą w obecności Ae. Nowy dowód wskazuje na potencjalną
PL 204 878 B1 rolę tej cząsteczki w niszczeniu synaps i w neurotoksyczności przez tworzenie włókienek podobnych do amyloidu i zaburzanie funkcji. Brain Pathol 1999 Oct; 9 (4): 707-20. FEBS Lett, 1998, 421: 73-76. Część NACP ma wysoką homologię z końcem C fragmentu amyloidowego z APP i z regionem białka prionu w chorobie szalonych krów (PrPSc). Synukleina jest głównym czynnikiem przyczynowym Parkinsona (Chem Biol, 1995, 2: 163-9).
TGF-b1 (transformujący czynnik wzrostu b1): Nadekspresja TGF-b1 ze zmutowanym APP w myszach TG przyspiesza odkładanie Ae. Zatem uważa się, że TGF-b1 jest wymagany w rozpoczynaniu lub pobudzaniu tworzenia płytki amyloidowej. (Wyss-Coray, 1997, Nature 389).
Inne choroby amyloidowe i związane z nimi białka
Oprócz wymienionych powyżej białek, które mogą być potencjalnie zaangażowane w AD i chorobach podobnych do AD (Huntington, Parkinson, FBD i inne formy otępienia), istnieje stosunkowo duża liczba chorób innych niż AD, w których tworzenie amyloidu wyzwala chorobę lub wywołuje objawy choroby. Chociaż, białka związane z tymi chorobami różnią się naturą, mają te same cechy określające amyloid, porównaj powyżej. W poniższej tabeli przedstawiono listę szeregu tych zaburzeń amyloidowych i wywołujących je białek.
Różnorodność białek włókienek amyloidowych
Zespół kliniczny | Podjednostka włókienka | Struktura prekursora |
Mózgowa angiopatia amyloidowa (CAA) | Ae | Cała β |
Układowa skrobiawica z białkiem monoklonalnym (AL) | Domena V o pełnej długości lub jej fragment z lekkiego łańcucha IG | Cała β |
Układowa skrobiawica reaktywna (AA) | Fragment z 76 reszt N-końca białka amyloidu A | α/β |
Rodzinna polineuropatia amyloidozowa | pełnej długości lub fragmenty wariantów transtyretyny | Cała β |
Dziedziczna skrobiawica z ApoA1 | N-końcowe fragmenty (~90 reszt) wariantów ApoA1 | (α/β) |
Dziedziczna skrobiawica lizozymowa | pełnej długości warianty lizozymu | α + β |
Typ II diabetes mellitus | Fragment z 37 reszt polipeptydu amyloidu wysepkowego | Nieznana |
Amyloid pokrewny insulinie | Insulina dzikiego typu o pełnej długości | α + β |
Przenoszona encefalopatia gąbczasta | Białko prionowe o pełnej długości lub jego fragmenty | α + β |
Rak rdzeniasty tarczycy | Fragmenty kalcytoniny | Nieznana |
Starcza skrobiawica układowa | Transtyretyna o pełnej długości lub jej fragmenty | Cała β |
Skrobiawica związana z hemodializą | e-2 mikroglobulina dzikiego typu o pełnej długości | Cała β |
Izolowana skrobiawica przedsionkowa | Przedsionkowy czynnik powodujący wydalanie sodu z moczem | Nieznana |
Dziedziczna mózgowa angiopatia amyloidowa | Fragment 110 reszt z wariantu cystatyny | α + β |
Dziedziczna skrobiawica fińska | Fragment 71 reszt z wariantów gelsoliny | α/β |
Dziedziczna skrobiawica z łańcuchem α | Fragmenty wariantów łańcucha α fibrynogenu | Nieznana |
Wszystkie te białka są, podobnie jak białka wymagane w AD, potencjalnymi celami dla proponowanej tu strategii immunizacji.
Rozważa się, że większość sposobów immunizowania przeciwko polipeptydom amyloidogennym powinna być ograniczona do immunizacji prowadzącej do powstawania przeciwciał reagujących krzyżowo z natywnym polipeptydem amyloidogennym. Niemniej jednak, w niektórych przypadkach będzie korzystne zaindukowanie odpowiedzi komórkowej w formie odpowiedzi CTL skierowanych przeciwko komórkom, które prezentują epitopy MHC Klasy I z polipeptydów amyloidowych - będzie to
PL 204 878 B1 wskazane w tych przypadkach, gdzie zmniejszenie liczby komórek wytwarzających polipeptydy amyloidogenne nie stanowi poważnego szkodliwego efektu ubocznego. W takich przypadkach, gdzie pożądane są odpowiedzi CTL, korzystne jest wykorzystanie technik ze zgłoszenia PCT/DK99/00525 (odpowiadającego zgłoszeniu USSN 09/413186).
W następujących nie ograniczających przykładach, skupiono się na wytworzeniu autoszczepionki na bazie Ae przeciwko AD. Jednak, przytoczone tu zasady mają takie samo zastosowanie do dowolnego białka amyloidowego.
P r z y k ł a d 1
Autoszczepienie w celu immunizacji przeciwko AD
Fakt, że myszy o znokautowanym białku Ae nie wykazują żadnych nieprawidłowości lub szkodliwych działań ubocznych sugeruje, że usunięcie lub obniżenie ilości Ae będzie bezpieczne, Zheng H. (1996).
Opublikowane doświadczenia, w których transgeniczne myszy są immunizowane przeciwko transgenicznemu ludzkiemu białku Ae sugerują, że gdyby było możliwe przerwanie własnej tolerancji, możliwe byłoby obniżenie poziomu Ae dzięki autoreaktywnym przeciwciałom. Doświadczenia te dodatkowo sugerują, że takie obniżenie poziomu Ae potencjalnie mogłoby zapobiegać tworzeniu płytek, a nawet usuwać już wytworzone płytki Ae z mózgu, porównaj Schenk i wsp. (1999). Lecz tradycyjnie jest możliwe wywołanie przeciwciał skierowanych przeciwko własnym białkom.
Opublikowane wyniki nie dostarczają zatem środków do przełamania naturalnej własnej tolerancji przeciwko naturalnym własnym białkom. Dane te nie dostarczają też informacji jak zapewnić, aby reakcja odpornościowa była skierowana wyłącznie lub w głównej mierze przeciwko złogom Ae, a nie przeciwko błonie komórkowej wiążącej białko prekursorowego Ae (APP), jeśli uważa się to za konieczne. Odpowiedź immunologiczna wytwarzana przy użyciu istniejących technologii mogłaby wywoływać przypuszczalnie odpowiedź immunologiczną przeciwko własnym białkom w sposób nie podlegający regulacji, zatem mogłaby być wytwarzana niechciana i nadmierna autoreaktywność przeciwko częściom białka Ae. Zatem, użycie istniejących strategii immunizacji najprawdopodobniej nie będzie w stanie wytwarzać silnych odpowiedzi odpornościowych przeciwko własnym białkom i będzie ponadto niebezpieczne ze względu na potencjalną silną reakcję krzyżową przeciwko błonie związanej z APP, które jest obecne na dużej liczbie komórek w OUN.
Niniejszy wynalazek dostarcza środków do skutecznego wytwarzania silnie regulowanej odpowiedzi odpornościowej przeciwko prawdziwym własnym białkom, które potencjalnie mogłyby tworzyć płytki i wywoływać poważne choroby w OUN lub w innych kompartmentach ciała. Przy użyciu tej technologii z ludzkiego białka Ae będzie wytworzona bezpieczna i skuteczna szczepionka terapeutyczna do leczenia AD.
W świetle tego, można oczekiwać, że AD, choroba przewidywana jako paraliżująca system opieki zdrowotnej w następnym wieku będzie uleczalna lub, że szczepionki, jak opisano, będą przynajmniej stanowić skuteczne podejście terapeutyczne w leczeniu objawów i postępowania choroby.
Technika ta stanowi w całości nowe podejście immunologiczne blokowania odkładania amyloidu w AD i również w innych chorobach neurologicznych.
W poniższej tabeli, przedstawiono 35 rozpatrywanych konstruktów. Wszystkie pozycje w tabeli podane są w stosunku do metioniny startu APP (pierwszy aminokwas w SEK. NR ID.: 2) i obejmują zarówno aminokwasy startu jak i końca, np. fragment 672-714 obejmuje zarówno aminokwas 672 jak i 714. Pozycje startu i końca dla P2 i P30 wskazują, że epitop zastępuje część fragmentu APP we wskazanych pozycjach (obie pozycje włączone do podstawienia) - w większości konstruktów wprowadzone epitopy podstawiają fragment długości epitopu. Gwiazdki w tabeli mają następujące znaczenie:
*) Tylko jedna pozycja dla P2 i P30 oznacza, że epitop został wprowadzony do pochodnej APP we wskazanej pozycji (epitop rozpoczyna się przy aminokwasie przylegającym po stronie C końca do danej pozycji).
**) Konstrukcja 34 zawiera trzy identyczne fragmenty APP rozdzielone odpowiednio przez P30 i P2.
***) Konstrukcja 35 zawiera dziewięć identycznych fragmentów APP rozdzielonych naprzemiennie przez epitopy P30 i P2.
PL 204 878 B1
Nr War | Start segmentu APP względem 1 aa z APP | Koniec segmentu APP względem 1 aa z APP | Pozycja epitopu P2 względem 1 aa z APP | Pozycja epitopu P30 względem 1 aa z APP | Długość cząsteczki |
1 | 630 | 770 | 656 - 670 | 635 - 655 | 141 |
2 | 630 | 714 | 656 - 670 | 635 - 655 | 85 |
3 | 672 | 770 | 735 - 749 | 714 - 728 | 99 |
4 | 672 | 770 | 714 - 728 | 99 | |
5 | 672 | 770 | 714 - 728 | 99 | |
6 | 672 | 770 | 723* | 723* | 135 |
7 | 672 | 770 | 723* | 120 | |
8 | 672 | 770 | 723* | 114 | |
9 | 672 | 714 | 672* | 64 | |
10 | 672 | 714 | 714* | 64 | |
11 | 672 | 714 | 672* | 58 | |
12 | 672 | 714 | 714* | 58 | |
13 | 672 | 714 | 714* | 672* | 79 |
14 | 672 | 714 | 680 - 694 | 43 | |
15 | 672 | 714 | 685 - 799 | 43 | |
16 | 672 | 714 | 690 - 704 | 43 | |
17 | 672 | 714 | 695 - 709 | 43 | |
18 | 672 | 714 | 675 - 695 | 43 | |
19 | 672 | 714 | 680 - 700 | 43 | |
20 | 672 | 714 | 685 - 705 | 43 | |
21 | 672 | 714 | 690 - 710 | 43 | |
22 | 672 | 714 | 680* | 680* | 79 |
23 | 672 | 714 | 690* | 690* | 79 |
24 | 672 | 714 | 700* | 700* | 79 |
25 | 672 | 714 | 710* | 710* | 79 |
26 | 672 | 714 | 680* | 64 | |
27 | 672 | 714 | 690* | 64 | |
28 | 672 | 714 | 700* | 64 | |
29 | 672 | 714 | 710* | 64 | |
30 | 672 | 714 | 680* | 58 | |
31 | 672 | 714 | 690* | 58 | |
32 | 672 | 714 | 700* | 58 | |
33 | 672 | 714 | 710* | 58 | |
34 | 672 | 714 | Po rep. 1** | Po rep. 2** | 165 |
35 | 67 2 | 714 | 34 x 3* | 34 x 3*** | 165 |
PL 204 878 B1
Część APP, przeciwko której wytworzenie odpowiedzi jest najbardziej interesujące, stanowi 43 aminokwasowy peptyd rdzeniowy Ae (Ae-43, odpowiadający resztom 672-714 w SEK. NR ID.: 2,), który jest głównym składnikiem płytek amyloidowych w mózgach AD. Ten fragment APP jest częścią wszystkich przedstawionych powyżej konstruktów.
Warianty 1 i 2 obejmują część APP położoną powyżej Ae-43, gdzie umieszczono epitopy modelowe P2 i P30. Wszystkie warianty 1 i 3-8 obejmują fragment C-100, który, jak wykazano, jest neurotoksyczny - fragment C-100 odpowiada resztom aminokwasowym 714-770 z SEK. NR ID.: 2. W wariantach 3-5 epitopy zastępują część fragmentu C-100, podczas gdy w wariantach 6-8 są wprowadzone do C-100.
Warianty 9-35 zawierają tylko białko rdzeniowe Ae-43. W wariantach 9-13, P2 i P30 są sfuzowane z dowolnym końcem z Ae-43; w 14-21 P2 i P30 zastępują część Ae-43; w 22-33 P2 i P30 są wprowadzone do Ae-43; 34 zawiera trzy identyczne fragmenty Ae-43 rozdzielone odpowiednio przez P30 i P2; 35 zawiera 9 powtórzeń Ae-43 rozdzielonych naprzemiennie przez epitopy P30 i P2.
Szczegóły patrz Fig. 1 i tabela powyżej.
Jeden dodatkowy typ konstruktu jest szczególnie korzystny. Ponieważ jednym z celów niniejszego wynalazku jest uniknięcie destrukcji komórek produkujących APP, podczas gdy pożądane jest usunięcie Ae, wydaje się wykonalne przygotowanie konstruktów autoszczepionki obejmujących jedynie te części Ae, które nie są wystawione na fazę zewnątrzkomórkową, gdy są obecne w APP. Zatem, konstrukty takie będą wymagały obecności przynajmniej jednego epitopu dla komórki B pochodzącego z fragmentu aminokwasowego zdefiniowanego przez aminokwasy 700-714 w SEK. NR ID.: 2. Ponieważ wydaje się, że taki krótki polipeptyd będzie słabo immunogenny, wobec tego korzystnie taki konstrukt autoszczepionki składa się z wielu kopii epitopu dla komórki B, np. w formie konstruktu mającego strukturę przedstawioną we wzorze I w szczegółowym ujawnieniu wynalazku, porównaj powyżej. W tej wersji wzoru I termin amyloide1-amyloidex są x epitopem dla komórki B zawierającym sekwencje aminokwasowe pochodzące z aminokwasów 700-714 z SEK. NR ID.: 2. Korzystną alternatywą jest, wyszczególniona powyżej, możliwość sprzęgnięcia (poli)peptydu amyloidogennego i wyselekcjonowanego obcego epitopu dla komórki T pomocniczej przez wiązanie amidowe z cząsteczką nośnika polisacharydowego - w ten sposób będzie możliwe zwielokrotnienie prezentacji „słabego” epitopu utworzonego przez aminokwasy 700-714 z SEK. NR ID.: 2, a także będzie możliwe wyselekcjonowanie optymalnej proporcji pomiędzy epitopami dla komórki B i dla komórki T.
P r z y k ł a d 2
Immunizacja myszy transgenicznych za pomocą Ae i białek zmodyfikowanych według wynalazku
Konstrukcja DNA kodującego hAB43+-34. Gen hAB43+-34 skonstruowano w kilku etapach. W pierwszym wytworzono fragment PCR ze starterami ME#801 (SEK. NR ID.: 10) i ME#802 (SEK. NR ID.: 11) stosując jako matrycę starter ME#800 (SEK. NR ID.: 9). ME#800 koduje ludzki fragment abeta-43 ze zoptymalizowanymi kodonami dla E. coli. ME#801 i 802 dodaje do fragmentu odpowiednie miejsca restrykcyjne.
Fragment PCR oczyszczono, strawiono Ncol i Hindlll, oczyszczono ponownie i sklonowano w strawionym Ncol-Hindlll i oczyszczonym wektorze ekspresyjnym pET28b+ dla E. coli. Uzyskano plazmid kodujący ludzki Ae-43 dzikiego typu, nazwany pAB1.
W następnym etapie do końca C cząsteczki dodano epitop P2 dla komórki T pomocniczej. Starter ME#806 (SEK. NR ID.: 12) zawiera sekwencję kodującą epitop P2, zatem wytwarza fuzję P2 z Abeta-43 w reakcji PCR.
Klonowanie przeprowadzono przez wytworzenie fragmentu PCR ze starterami ME#178 (SEK. NR ID.: 8) i ME#806 przy użyciu pAB1 jako matrycy. Fragment oczyszczono, strawiono Ncol i Hindlll, oczyszczono ponownie i sklonowano w strawionym Ncol-Hindlll i oczyszczonym wektorze pET28b+. Uzyskany plazmid nazwano pAB2.
W analogiczny sposób wytworzono inny plazmid niosący Ae-43, kodujący sekwencję z innym epitopem dla komórki T pomocniczej, P30, dodanym do końca N. Wykonano go przez wytworzenie fragmentu PCR ze starterami ME#105 (SEK. NR ID.: 7) i ME#807 (SEK. NR ID.: 13) przy użyciu jako matrycy pAB1.
Fragment oczyszczono, strawiono Ncol i Hindlll, oczyszczono ponownie i sklonowano w strawionym Ncol-Hindlll i oczyszczonym wektorze pET28b+. Uzyskany plazmid nazwano pAB3.
W trzecim etapie, na końcu C epitopu P2 z plazmidu pAB2 dodawane jest drugie powtórzenie Ae-43 za pomocą startera ME#809 (SEK. NR ID.: 14). W tym samym czasie ME#809 tworzy miejsce BamHI bezpośrednio za powtórzeniem Ae-43. Fragment PCR wytworzono ze starterami ME#178
PL 204 878 B1 i ME#809 przy użyciu pAB2 jako matrycy. Fragment strawiono Ncol i Hindlll, oczyszczono i sklonowano w strawionym Ncol-Hindlll i oczyszczonym wektorze pET28b+. Uzyskany plazmid nazwano pAB4.
W końcu, epitop 30 - sekwencja powtórzenia Ae-43 z pAB3 sklonowano w plazmidzie pAB4. Przeprowadzono to przez wytworzenie fragmentu PCR ze starterami ME#811 (SEK. NR ID.: 16) i ME#105 przy użyciu pAB3 jako matrycy. Fragment oczyszczono i zastosowano jako starter w następnej reakcji PCR z ME#810 (SEK. NR ID.: 15) przy użyciu pAB3 jako matrycy. Uzyskany fragment oczyszczono, strawiono BamHI i Hindlll, sklonowano w strawionym BamHI-Hindlll i oczyszczonym plazmidzie pAB4. Uzyskany plazmid, pAB5, koduje cząsteczkę hAB43+-34.
Wszystkie procedury reakcji PCR i klonowania przeprowadzono zasadniczo jak opisano w Sambrook, J., Fritsch, E.F. & Maniatis, T. 1989 „Molecular cloning: a laboratory manual”. Wyd. 2, Cold Spring Harbor Laboratory, N. Y.
Do procedur klonowania użyto komórki E. coli K-12, szczepu Top-10 F' (Stratagene, USA). Wektor pET28b+ nabyto z Novagen, USA. Wszystkie startery zsyntetyzowano w DNA Technology, Dania.
Wyrażanie i oczyszczanie hAB43+-34. Białko hAB43+-34 kodowane przez pAB5 wyrażono w komórkach E. coli BL21-Gold (Novagen), jak opisane przez dostawców systemu pET28b+ (Novagen).
Wyrażone białko hAB43+-34 oczyszczano do ponad 85% czystości przez wymycie ciał inkluzyjnych, a następnie chromatografię kationowymienną, przy użyciu zestawu do oczyszczania BioCad (PerSeptive Biosystems, USA) w obecności 6 M mocznika. Następnie mocznik usuwano za pomocą stopniowej dializy wobec roztworu zawierającego zmniejszającą się ilość mocznika. Buforem końcowym był 10 mM Tris, pH 8,5.
Badanie immunizacji. W badaniach stosowano myszy transgeniczne dla ludzkiego APP (białko prekursorowe Alzheimera). Myszy te, nazwane TgRND8+, wyrażają zmutowaną formę APP, która daje wysokie stężenie Ae-40 i Ae-42 w mysich mózgach (Janus, C. i wsp.).
Myszy (8-10 myszy na grupę) immunizowano albo Abeta-42 (SEK. NR ID.: 2, reszty 673-714, zsyntetyzowany środkami standardowej strategii Fmoc) albo wariantem hAB43+-34 (konstrukt 34 w tabeli w Przykładzie 1, wytworzony rekombinacyjnie) cztery razy w dwutygodniowych odstępach. Dawki wynosiły 100 mg dla Ae lub 50 mg dla hAB43+-34. Myszy skrwawiono w 43 dniu (po trzeciej iniekcji) i po 52 dniu (po czwartej iniekcji) i surowice stosowano do określenia poziomu mian swoistego anty-Ae-42 stosując bezpośredni test ELISA z Ae-42.
Tabela poniżej pokazuje średnie dotyczące mian anty-Abeta-42.
Immunogen | 43 dzień (po 3 immunizacjach) | 52 dzień (po 4 immunizacjach) |
Ae-42 | 4000 | 3000 |
hAB43+-34 | 16000 | 23000 |
Jak jasno wynika, miana przeciwciała uzyskanego, gdy immunizowano stosując wariant hAB43+-34 Ae, są 4-razy i 7,5-raza wyższe po, odpowiednio, 3 i 4 immunizacjach, niż miana uzyskane, gdy jako immunogen stosowano niezmieniony Ae-42 dzikiego typu. Fakt ten ma dalsze perspektywy, gdy weźmie się pod uwagę, iż ilość wariantu zastosowanego do immunizacji wynosiła tylko 50% ilości sekwencji dzikiego typu użytej do immunizacji.
P r z y k ł a d 3
Synteza szczepionki z kopolimeru peptydu Ae przy użyciu aktywowanego polihydroksypolimeru jako czynnika sieciującego
Wprowadzenie. Tradycyjna szczepionka sprzężona składa się z (poli)peptydu kowalencyjnie sprzężonego z białkiem nośnikowym. Peptyd zawiera epitop(y) dla komórki B i białko nośnikowe dostarczające epitopy dla komórki T pomocniczej. Jednakże, większość białka nośnikowego będzie zwykle nieodpowiednia jako źródło epitopów dla komórki T pomocniczej, ponieważ tylko niewielka część całej sekwencji zawiera stosowne epitopy dla komórki T pomocniczej. Epitopy takie można określić i zsyntetyzować jako peptydy składające się z np. 12-15 aminokwasów. Jeśli peptydy takie są kowalencyjnie połączone z peptydami zawierającymi epitopy dla komórki B, np. przez multiwalentny aktywowany polihydroksypolimer, można uzyskać cząsteczkę szczepionkową, która zawiera tylko stosowne części. Jest dalej możliwe dostarczenie koniugatu szczepionkowego, który zawiera zoptymalizowany stosunek epitopów dla komórki B do epitopów dla komórki T.
PL 204 878 B1
Synteza aktywowanego polihydroksypolimeru
Polihydroksypolimery, takie jak dekstran, skrobia, agaroza itd. można aktywować chlorkiem 2,2,2-trifluoroetanosulfonylu (chlorek tresylu) albo sposobami syntezy homogennej (dekstran) rozpuszczony w N-metylopirolidynonie (NMP) lub środkami syntezy heterogennej (skrobia, agaroza, usieciowany dekstran) w np. acetonie.
225 ml suchego N-metylopirolidynonu (NMP) dodaje się w suchych warunkach do zliofilizowanego, rozpuszczalnego w wodzie dekstranu (4,5 g, 83 mmol, klasa kliniczna, średni Mw 78000) w 500 ml kolbie okrągłodennej zaopatrzonej w magnez do mieszania. Kolbę umieszcza się w łaźni olejowej w 60°C z mieszaniem magnetycznym. Temperaturę podnosi się do 92°C przez okres 20 minut. Gdy dekstran jest rozpuszczony, kolbę natychmiast wyjmuje się z łaźni olejowej i obniża się temperaturę w łaźni do 40°C. Kolbę ponownie umieszcza się w łaźni olejowej, wciąż z mieszaniem magnetycznym i dodaje się kroplami chlorek tresylu (2,764 ml, 25 mmol). Po 15 minutach, dodaje się kroplami suchą pirydynę (bezwodna, 2,020 ml, 25 mmol). Kolbę wyjmuje się z łaźni olejowej i miesza przez 1 godz. w temperaturze pokojowej. Produkt (dekstran aktywowany tresylem, TAD) wytrąca się 1200 ml zimnego etanolu (99,9%). Supernatant zlewa się, a precypitat zbiera w 50 ml probówkach polipropylenowych i wiruje przy 2000 obr./min. Precypitat rozpuszcza się w 50 ml 0,5% kwasu octowego, dializuje dwa razy wobec 5000 ml 0,5% kwasu octowego i liofilizuje. TAD można przechowywać jako zliofilizowany proszek w -20°C.
Nierozpuszczalny polihydroksypolimer, taki jak agaroza lub usieciowany dekstran, można poddawać aktywacji tresylem przez wytworzenie zawiesiny polihydroksypolimeru w np. acetonie i przeprowadzenie syntezy w postaci syntezy na fazie stałej. Aktywowany polihydroksypolimer można także zbierać przez filtrowanie. Dogodne sposoby opisano w np. Nilsson K i Mosbach K (1987), Methods in Enzymology 135, str. 67 oraz w Hermansson GT i wsp. (1992), w „Immobilized Affinity Ligand Techniques”, Academic Press, Inc., str. 87.
Synteza szczepionek z kopolimerów peptydu A Beta. TAD (10 mg) rozpuszcza się w 100 μl H2O i dodaje się 1000 μl buforu węglanowego, pH 9,6, zawierającego 5 mg Ae-42 (SEK. NR ID.: 2, reszty 673-714), 2,5 mg P2 (SEK. NR ID.: 4) i 2,5 mg P30 (SEK. NR ID.: 6). Wszystkie peptydy Ae-42 oraz P2 i P30 zawierają chronione grupy lizynowe: są one w formie grup lizynowych chronionych 1-(4,4-dimetylo-2,6-dioksocykloheks-1-ylideno)etylem (Dde). Peptydy są produkowane sposobami standardowej strategii Fmoc, gdzie tradycyjny Fmoc-Lys(Boc)-OH został zamieniony przez Fmoc-Lys(Dde)OH (uzyskany z Novabiochem, nr kat. 04-12-1121), tj grupa ε-aminowa w lizynie jest chroniona przez Dde zamiast Boc.
Mierzy się wartość pH i doprowadza do 9,6 przy użyciu 1 M HCl. Po 2,5 godzinach w temperaturze pokojowej, dodaje się hydrazynę z roztworu 80% do końcowego stężenia 8% i roztwór inkubuje się przez kolejne 30 minut w temperaturze pokojowej i natychmiast po tym liofilizuje. Zliofilizowany produkt rozpuszcza siew H2O i dializuje ekstensywnie wobec H2O przed końcową liofilizacją.
Stosunek epitopów dla komórki B (Ae) i epitopów dla komórki T pomocniczej (P2 i P30) w produkcie końcowym może być różny, w związku z użyciem różnych stężeń tych peptydów w etapie syntezy. Ponadto, produkt końcowy można wyznakować np. mannozą (tak aby kierowany był do komórek APC) przez dodanie aminowanej mannozy do buforu węglanowego w etapie syntezy.
Jeśli do łączenia polipeptydów zawierających epitop dla komórki B i epitopy dla komórki T pomocniczej stosowany jest nierozpuszczalny aktywowany polihydroksypolimer sprzęganie z polimerem można przeprowadzać jako syntezę na fazie stałej, a produkt końcowy zbiera się i oczyszcza przez płukanie i filtrację.
Literatura
Brookmeyer, R.; Gray, S.; Kawas, C. (1998). Projections of Alzheimer's Disease in the United States and the Public Health Impact of Delaying Disease Onset. American Journal of Public Health, 88(9), 1337-1342.
Buttini, M.; Orth, M.; Bellosta, S.; Akeefe, H.; Pitas, R.E.; Wyss-Coray, T.; Mucke, L.; Mahley, R.W. (1999). Expression of Human Apolipoprotein E3 or E4 in the Brains of Apoe-/-Mice: Isoform-Specific Effects on Neurodegeneration. Journal of Neuroscience, 19, 4867-4880.
Clark, L.N.; Poorkaj, P.; Wszolek, Z.; Geschwind, D.H.; Nasreddine, Z.S.; Miller, B.; Li, D.; Payami, H.; Awert, F.; Markopoulou, K.; Andreadis, A.; D'Souza, I.; Lee, V.M.; Reed, L.; Trojanowski, J.Q.; Zhukareva, V.; Bird, T.; Schellenberg, G.; Wilhelmsen, K.C. (1998). Pathogenic Implications of Mutations in the Tau Gene in Pallido-Ponto-Nigral Degeneration and Related Neurodegenerative Disorders Linked to Chromosome 17. Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A., 95(22), 13103-13107.
PL 204 878 B1
Gupta, R. K. i wsp. (1998), Dev Biol Stand. 92: 63-78.
Hsiao K. i wsp. (1998) Transgenic mice expressing Alzheimer amyloid precursor proteins”, Exp. Gerontol. 33 (7-8), 883-889 Hutton, M.; Lendon, C.L.; Rizzu, P.; Baker, M.; Froelich, S.; Houlden, H.; Pickering-Brown, S.; Chakraverty, S.; Isaacs, A.; Grover, A.; Hackett, J.; Adamson, J.; Lincoln, S.; Dickson, D.; Davies, P.; Petersen, R.C.; Stevens, M.; de Graaff, E.; Wauters, E.; van Baren, J.; Hillebrand, M.; Joosse, M.; Kwon, J.M.; Nowotny, P.; Che, L.K.; Norton, J.; Morris, J.C.; Reed, L.E.; Trojanowski, J.; Basun, H.; Lannfelt, L.; Neystat, M.; Fahn, S.; Dark, F.; Tannenberg, T.; Dodd, P.; Hayward, N.; Kwok, J.B.J.; Schofield, P.R.; Andreadis, A.; Snowden, J.; Craufurd, D.; Neary, D.; Owen, F.; Oostra, B.A.; Hardy, J.; Goate, A.; van Swieten, J.; Mann, D.; Lynch, T.; Heutink, P. (1998). Association of Missense and 5'-Splice-Site Mutations in Tau with the Inherited Dementia FTDP-17. Nature, 393, 702-705.
Janus, C. i wsp. (2000), Nature 408: 979-982.
Kas, H.S. (1997) J Microencapsul 14: 689-711
Leon, J.; Cheng, C.K.; Neumann, P.J. (1998). Alzheimer's Disease Care: Costs and Potential Savings. Health Affairs, 17(6), 206-216.
Lippa C. F. i wsp. (1998) Ab-42 deposition precedes other changes in PS-1 Alzheimer's disease. Lancet 352, 1117-1118 Luo, J.-J.; Wallace, W.; Riccioni, T.; Ingram, D.K.; Roth, G.S.; Kusiak, J.W. (1999). Death of PC12 Cells and Hippocampal Neurons Induced by Adenoviral-Mediated FAD Human Amyloid Precursor Protein Gene Expression. Journal of Neuroscience Research, 55(5), 629-642.
Naruse, S.; Thinakaran, G.; Luo, J.-J.; Kusiak, J.W.; Tomita, T.; Iwatsubo, T.; Qian, X.; Ginty, D.D.; Price, D.L.; Borchelt, D.R.; Wong, P.C.; Sisodia, S.S. (1998). Effects of PS1 Deficiency on Membrane Protein Trafficking in Neurons. Neuron, 21(5), 1213-1231.
National Institute on Aging Progress Report on Alzheimer's Disease, 1999, NIH Publication No. 99-4664.
Pietrobon, P.J. (1995), Pharm Biotechnol. 6: 347-61 Poorkaj, P.; Bird, T.D.; Wijsman, E.; Nemens, E.; Garruto, R.M.; Anderson, L.; Andreadis, A.; Wiederhold, W.C.; Raskind, M.; Schellenberg, G.D. (1998). Tau Is a Candidate Gene for Chromosome 17 Frontotemporal Dementia. Annals of Neurology, 43, 815-825.
Schenk, D.; Barbour, R.; Dunn, W.; Gordon, G.; Grajeda, H.; Guido, T.; Hu, K.; Huang, J.; Johnson-Wood, K.; Khan, K.; Kholodenko, D.; Lee, M.; Liao, Z.; Lieberburg, I.; Motter, R.; Mutter, L.; Soriano, F.; Shopp, G.; Vasquez, N.; Vandevert, C; Walker, S.; Wogulis, M.; Yednock, T.; Games, D.; Seubert, P. (1999). Immunization with A-beta Attenuates Alzheimer's Disease-Like Pathology in the PDAPP Mouse. Nature, 400(6740), 173-177.
Shekunov, B. i wsp. (1999), J. Crystal Growth 198/199: 1345 -1351.
Spillantini, M.G.; Murrell, J.R.; Goedert, M.; Farlow, M.R.; Klug, A.; Ghetti, B. (1998). Mutation in the Tau Gene in Familial Multiple System Tauopathy with Presenile Dementia. Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A., 95(13), 7737-7741.
Strittmatter, W.J.; Saunders, A.M.; Schmechel, D.; Pericak-Vance, M.; Enghild, J.; Salvesen, G.S.; Roses, A.D. (1993). Apolipoprotein E: High-Avidity Binding to Ae and Increased Frequency of Type 4 Allele in Late-Onset Familial Alzheimer Disease. Proceedings of the National Academy of Sciences U.S.A., 90, 1977-1981.
Vidal, R.; Frangione, B.; Rostagno, A.; Mead, S.; Revesz, T.; Plant, G.; Ghiso, J. (1999). A Stop-Codon Mutation in the BRI Gene Associated with Familial British Dementia. Nature, 399: 776-781.
Zheng H. (1996) Mice deficient for the amyloid precursor protein gene. Ann. N Y Acad. Sci.,
777, 421-426.
York, P. (1999), PSTT 11: 430-440.
PL 204 878 B1
Lista sekwencji <110> M&E Biotech A/S <120> Nowy sposób obniżania poziomu amyloidu <130> P1009PC1 <140>
<141>
<160> 16 <170> Patentln wer. 3.0 <210> 1 <211> 2313 <212> DNA <213> Homo sapiens <220>
<221> CDS <222> (1) . . (2313) <220>
<221> cecha_dowolna <222> (2098) . . (2169) <223> nukleotydy kodujące region transbłonowy <220>
<221> cecha_dowolna <222> (2014) . . (2313) <223> nukleotydy kodujące C-100 <220>
<221> cecha_dowolna <222> (2016) . . (2144) <223> Abeta 42/43 <220>
<221> cecha_dowolna
PL 204 878 B1 <222> (2014) . . (2142) <223> Abeta 42/43 <400> 1
atg | ctg ccc | ggt | ttg | gca | ctg | ctc | ctg | ctg | gcc | gcc | tgg | acg | gct | cgg |
Met | Leu Pro | Gly | Leu | Ala | Leu | Leu | Leu | Leu | Ala | Ala | Trp | Thr | Ala | Arg |
1 | 5 | 10 | 15 |
gcg | ctg | gag | gta | ccc act | gat | ggt | aat | gct | ggc | ctg | ctg | gct | gaa ccc |
Ala | Leu | Glu | Val | Pro Thr | Asp | Gly | Asn | Ala | Gly | Leu | Leu | Ala | Glu Pro |
20 | 25 | 30 |
cag | att | gcc | atg | ttc | tgt | ggc | aga | ctg aac | atg | cac | atg | aat | gtc | cag |
Gin | Ile | Ala | Met | Phe | Cys | Gly | Arg | Leu Asn | Met | His | Met | Asn | Val | Gin |
35 | 40 | 45 |
144
aat | ggg | aag | tgg | gat | tca | gat | cca tca | ggg | acc | aaa | acc | tgc | att | gat |
Asn | Gly | Lys | Trp | Asp | Ser | Asp | Pro Ser | Gly | Thr | Lys | Thr | Cys | Ile | Asp |
50 | 55 | 60 |
192
acc | aag | gaa | ggc | atc | ctg | cag | tat | tgc | caa | gaa | gtc | tac | cct | gaa | ctg |
Thr | Lys | Glu | Gly | Ile | Leu | Gin | Tyr | Cys | Gin | Glu | Val | Tyr | Pro | Glu | Leu |
65 | 70 | 75 | 80 |
240
cag | atc | acc | aat | gtg | gta | gaa | gcc | aac | caa | cca | gtg | acc | atc | cag | aac |
Gin | Ile | Thr | Asn | Val | Val | Glu | Ala | Asn | Gin | Pro | Val | Thr | Ile | Gin | Asn |
85 | 90 | 95 |
288
tgg | tgc | aag | cgg | ggc | cgc | aag | cag | tgc | aag | acc cat | ccc cac | ttt | gtg |
Trp | Cys | Lys | Arg | Gly | Arg | Lys | Gin | Cys | Lys | Thr His | Pro His | Phe | Val |
100 | 105 | 110 |
336
att | ccc tac | cgc | tgc | tta | gtt | ggt | gag | ttt | gta | agt | gat | gcc | ctt | ctc |
Ile | Pro Tyr | Arg | Cys | Leu | Val | Gly | Glu | Phe | Val | Ser | Asp | Ala | Leu | Leu |
115 | 120 | 125 |
384
gtt | cct | gac | aag | tgc | aaa | ttc | tta | cac | cag | gag | agg | atg | gat | gtt | tgc |
Val | Pro | Asp | Lys | Cys | Lys | Phe | Leu | His | Gin | Glu | Arg | Met | Asp | Val | Cys |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
gaa | act | cat | ctt | cac | tgg | cac | acc | gtc | gcc | aaa | gag | aca | tgc | agt | gag |
Glu | Thr | His | Leu | His | Trp | His | Thr | Val | Ala | Lys | Glu | Thr | Cys | Ser | Glu |
432
480
PL 204 878 B1
PL 204 878 B1
tac Tyr | ggc Gly | gga Gly | tgt Cys | ggc Gly 325 | ggc Gly | aac Asn | cgg Arg | aac Asn | aac Asn 330 | ttt Phe | gac Asp | aca Thr | gaa Glu | gag Glu 335 | tac Tyr | 1008 |
tgc | atg | gcc | gtg | tgt | ggc | agc | gcc | atg | tcc | caa | agt | tta | ctc | aag | act | 1056 |
Cys | Met | Ala | Val | Cys | Gly | Ser | Ala | Met | Ser | Gin | Ser | Leu | Leu | Lys | Thr | |
340 | 345 | 350 | ||||||||||||||
acc | cag | gaa | cct | ctt | gcc | ega | gat | cct | gtt | aaa | ctt | cct | aca | aca | gca | 1104 |
Thr | Gin | Glu | Pro | Leu | Ala | Arg | Asp | Pro | Val | Lys | Leu | Pro | Thr | Thr | Ala | |
355 | 360 | 365 | ||||||||||||||
gcc | agt | acc | cct | gat | gcc | gtt | gac | aag | tat | etc | gag | aca | cct | ggg | gat | 1152 |
Ala | Ser | Thr | Pro | Asp | Ala | Val | Asp | Lys | Tyr | Leu | Glu | Thr | Pro | Gly | Asp | |
370 | 375 | 380 | ||||||||||||||
gag | aat | gaa | cat | gcc | cat | ttc | cag | aaa | gcc | aaa | gag | agg | ctt | gag | gcc | 1200 |
Glu | Asn | Glu | His | Ala | His | Phe | Gin | Lys | Ala | Lys | Glu | Arg | Leu | Glu | Ala | |
385 | 390 | 395 | 400 | |||||||||||||
aag | cac | ega | gag | aga | atg | tcc | cag | gtc | atg | aga | gaa | tgg | gaa | gag | gca | 1248 |
Lys | His | Arg | Glu | Arg | Met | Ser | Gin | Val | Met | Arg | Glu | Trp | Glu | Glu | Ala | |
405 | 410 | 415 | ||||||||||||||
gaa | cgt | caa | gca | aag | aac | ttg | cct | aaa | get | gat | aag | aag | gca | gtt | atc | 1296 |
Glu | Arg | Gin | Ala | Lys | Asn | Leu | Pro | Lys | Ala | Asp | Lys | Lys | Ala | Val | Ile | |
420 | 425 | 430 | ||||||||||||||
cag | cat | ttc | cag | gag | aaa | gtg | gaa | tet | ttg | gaa | cag | gaa | gca | gcc | aac | 1344 |
Gin | His | Phe | Gin | Glu | Lys | Val | Glu | Ser | Leu | Glu | Gin | Glu | Ala | Ala | Asn | |
435 | 440 | 445 | ||||||||||||||
gag | aga | cag | cag | ctg | gtg | gag | aca | cac | atg | gcc | aga | gtg | gaa | gcc | atg | 1392 |
Glu | Arg | Gin | Gin | Leu | Val | Glu | Thr | His | Met | Ala | Arg | Val | Glu | Ala | Met | |
450 | 455 | 460 | ||||||||||||||
ctc | aat | gac | ege | ege | ege | ctg | gcc | ctg | gag | aac | tac | atc | acc | get | ctg | 1440 |
Leu | Asn | Asp | Arg | Arg | Arg | Leu | Ala | Leu | Glu | Asn | Tyr | Ile | Thr | Ala | Leu | |
465 | 470 | 475 | 480 |
PL 204 878 B1
cag Gin | gct Ala | gtt Val | cct Pro | cct Pro 485 | cgg Arg | cct Pro | cgt Arg | cac His | gtg Val 490 | ttc Phe | aat Asn | atg Met | eta Leu | aag Lys 495 | aag Lys | 1488 |
tat | gtc | cgc | gca | gaa | cag | aag | gac | aga | cag | cac | acc | eta | aag | cat | ttc | 1536 |
Tyr | Val | Arg | Ala | Glu | Gin | Lys | Asp | Arg | Gin | His | Thr | Leu | Lys | His | Phe | |
500 | 505 | 510 | ||||||||||||||
gag | cat | gtg | cgc | atg | gtg | gat | ccc | aag | aaa | gcc | gct | cag | atc | cgg | tcc | 1584 |
Glu | His | Val | Arg | Met | Val | Asp | Pro | Lys | Lys | Ala | Ala | Gin | Ile | Arg | Ser | |
515 | 520 | 525 | ||||||||||||||
cag | gtt | atg | aca | cac | ctc | cgt | gtg | att | tat | gag | cgc | atg | aat | cag | tct | 1632 |
Gin | Val | Met | Thr | His | Leu | Arg | Val | Ile | Tyr | Glu | Arg | Met | Asn | Gin | Ser | |
530 | 535 | 540 | ||||||||||||||
ctc | tcc | ctg | ctc | tac | aac | gtg | cct | gca | gtg | gcc | gag | gag | att | cag | gat | 1680 |
Leu | Ser | Leu | Leu | Tyr | Asn | Val | Pro | Ala | Val | Ala | Glu | Glu | Ile | Gin | Asp | |
545 | 550 | 555 | 560 | |||||||||||||
gaa | gtt | gat | gag | ctg | ctt | cag | aaa | gag | caa | aac | tat | tea | gat | gac | gtc | 1728 |
Glu | Val | Asp | Glu | Leu | Leu | Gin | Lys | Glu | Gin | Asn | Tyr | Ser | Asp | Asp | Val | |
565 | 570 | 575 | ||||||||||||||
ttg | gcc | aac | atg | att | agt | gaa | cca | agg | atc | agt | tac | gga | aac | gat | gct | 1776 |
Leu | Ala | Asn | Met | Ile | Ser | Glu | Pro | Arg | Ile | Ser | Tyr | Gly | Asn | Asp | Ala | |
580 | 585 | 590 | ||||||||||||||
ctc | atg | cca | tct | ttg | acc | gaa | acg | aaa | acc | acc | gtg | gag | ctc | ctt | ccc | 1824 |
Leu | Met | Pro | Ser | Leu | Thr | Glu | Thr | Lys | Thr | Thr | Val | Glu | Leu | Leu | Pro | |
595 | 600 | 605 | ||||||||||||||
gtg | aat | gga | gag | ttc | agc | ctg | gac | gat | ctc | cag | ccg | tgg | cat | tct | ttt | 1872 |
Val | Asn | Gly | Glu | Phe | Ser | Leu | Asp | Asp | Leu | Gin | Pro | Trp | His | Ser | Phe | |
610 | 615 | 620 | ||||||||||||||
ggg | gct | gac | tct | gtg | cca | gcc | aac | aca | gaa | aac | gaa | gtt | gag | cct | gtt | 1920 |
Gly | Ala | Asp | Ser | Val | Pro | Ala | Asn | Thr | Glu | Asn | Glu | Val | Glu | Pro | Val | |
625 | 630 | 635 | 640 | |||||||||||||
gat | gcc | cgc | cct | gct | gcc | gac | ega | gga | ctg | acc | act | ega | cca | ggt | tct | 1968 |
PL 204 878 B1
2016
Asp Ala Arg | Pro Ala Ala Asp 645 | Arg Gly Leu Thr Thr 650 | Arg | Pro | Gly 655 | Ser | |||||||||
ggg | ttg | aca | aat | atc | aag | acg | gag | gag | atc | tet | gaa | gtg | aag | atg | gat |
Gly | Leu | Thr | Asn | Ile | Lys | Thr | Glu | Glu | Ile | Ser | Glu | Val | Lys | Met | Asp |
660 | 665 | 670 | |||||||||||||
gca | gaa | ttc | ega | cat | gac | tea | gga | tat | gaa | gtt | cat | cat | caa | aaa | ttg |
Ala | Glu | Phe | Arg | His | Asp | Ser | Gly | Tyr | Glu | Val | His | His | Gin | Lys | Leu |
675 | 680 | 685 | |||||||||||||
gtg | ttc | ttt | gca | gaa | gat | gtg | ggt | tea | aac | aaa | ggt | gca | atc | att | gga |
Val | Phe | Phe | Ala | Glu | Asp | Val | Gly | Ser | Asn | Lys | Gly | Ala | Ile | Ile | Gly |
690 | 695 | 700 | |||||||||||||
ctc | atg | gtg | ggc | ggt | gtt | gtc | ata | gcg | aca | gtg | atc | gtc | atc | acc | ttg |
Leu | Met | Val | Gly | Gly | Val | Val | Ile | Ala | Thr | Val | Ile | Val | Ile | Thr | Leu |
705 | 710 | 715 | 720 | ||||||||||||
gtg | atg | ctg | aag | aag | aaa | cag | tac | aca | tcc | att | cat | cat | ggt | gtg | gtg |
Val | Met | Leu | Lys | Lys | Lys | Gin | Tyr | Thr | Ser | Ile | His | His | Gly | Val | Val |
725 | 730 | 735 | |||||||||||||
gag | gtt | gac | gee | get | gtc | acc | cca | gag | gag | ege | cac | ctg | tcc | aag | atg |
Glu | Val | Asp | Ala | Ala | Val | Thr | Pro | Glu | Glu | Arg | His | Leu | Ser | Lys | Met |
740 | 745 | 750 | |||||||||||||
cag | cag | aac | ggc | tac | gaa | aat | cca | acc | tac | aag | ttc | ttt | gag | cag | atg |
Gin | Gin | Asn | Gly | Tyr | Glu | Asn | Pro | Thr | Tyr | Lys | Phe | Phe | Glu | Gin | Met |
755 | 760 | 765 |
2064
2112
2160
2208
2256
2304 cag aac tag Gin Asn
770
2313
<210> | 2 |
<211> | 770 |
<212> | PRT |
<213> | Homo sapiens |
PL 204 878 B1 <400> 2
Met Leu Pro Gly Leu Ala Leu Leu 1 5
Ala Leu Glu Val Pro Thr Asp Gly 20
Gin Ile Ala Met Phe Cys Gly Arg 35 40
Asn Gly Lys Trp Asp Ser Asp Pro 50 55
Thr Lys Glu Gly Ile Leu Gin Tyr 65 70
Gin Ile Thr Asn Val Val Glu Ala
Trp Cys Lys Arg Gly Arg Lys Gin 100
Ile Pro Tyr Arg Cys Leu Val Gly 115 120
Val Pro Asp Lys Cys Lys Phe Leu 130 135
Glu Thr His Leu His Trp His Thr 145 150
Lys Ser Thr Asn Leu His Asp Tyr 165
Asp Lys Phe Arg Gly Val Glu Phe 180
Ser Asp Asn Val Asp Ser Ala Asp 195 200
Trp Trp Gly Gly Ala Asp Thr Asp
Leu Leu Ala Ala Trp Thr Ala Arg 10 15
Asn Ala Gly Leu Leu Ala Glu Pro 25 30
Leu Asn Met His Met Asn Val Gin
Ser Gly Thr Lys Thr Cys Ile Asp 60
Cys Gin Glu Val Tyr Pro Glu Leu 75 80
Asn Gin Pro Val Thr Ile Gin Asn
95
Cys Lys Thr His Pro His Phe Val 105 110
Glu Phe Val Ser Asp Ala Leu Leu 125
His Gin Glu Arg Met Asp Val Cys 140
Val Ala Lys Glu Thr Cys Ser Glu 155 160
Gly Met Leu Leu Pro Cys Gly Ile 170 175
Val Cys Cys Pro Leu Ala Glu Glu 185 190
Ala Glu Glu Asp Asp Ser Asp Val 205
Tyr Ala Asp Gly Ser Glu Asp Lys
PL 204 878 B1
PL 204 878 B1
Gin His Phe Gin Glu Lys Val Glu Ser Leu Glu Gin Glu Ala Ala Asn 435 440 445
Glu Arg Gin Gin Leu Val Glu Thr His Met Ala Arg Val Glu Ala Met 450 455 460
Leu Asn Asp Arg Arg Arg Leu Ala Leu Glu Asn Tyr Ile Thr Ala Leu
465 470 475 480
Gin Ala Val Pro Pro Arg Pro Arg His Val Phe Asn Met Leu Lys Lys
485 490 495
Tyr Val Arg Ala Glu Gin Lys Asp Arg Gin His Thr Leu Lys His Phe 500 505 510
Glu His Val Arg Met Val Asp Pro Lys Lys Ala Ala Gin Ile Arg Ser 515 520 525
Gin Val Met Thr His Leu Arg Val Ile Tyr Glu Arg Met Asn Gin Ser 530 535 540
Leu Ser Leu Leu Tyr Asn Val Pro Ala Val Ala Glu Glu Ile Gin Asp
545 550 ' 555 560
Glu Val Asp Glu Leu Leu Gin Lys Glu Gin Asn Tyr Ser Asp Asp Val
565 570 575
Leu Ala Asn Met Ile Ser Glu Pro Arg Ile Ser Tyr Gly Asn Asp Ala 580 585 590
Leu Met Pro Ser Leu Thr Glu Thr Lys Thr Thr Val Glu Leu Leu Pro 595 600 605
Val Asn Gly Glu Phe Ser Leu Asp Asp Leu Gin Pro Trp His Ser Phe 610 615 620
Gly Ala Asp Ser Val Pro Ala Asn Thr Glu Asn Glu Val Glu Pro Val
625 630 635 640
Asp Ala Arg Pro Ala Ala Asp Arg Gly Leu Thr Thr Arg Pro Gly Ser
645 650 655
PL 204 878 B1
Gly Leu Thr Asn | Ile | Lys | Thr | Glu Glu 665 | Ile | Ser | Glu | Val | Lys 670 | Met | Asp | ||||
660 | |||||||||||||||
Ala | Glu | Phe | Arg | His | Asp | Ser | Gly | Tyr | Glu | Val | His | His | Gin | Lys | Leu |
675 | 680 | 685 | |||||||||||||
Val | Phe | Phe | Ala | Glu | Asp | Val | Gly | Ser | Asn | Lys | Gly | Ala | Ile | Ile | Gly |
690 | 695 | 700 | |||||||||||||
Leu | Met | Val | Gly | Gly | Val | Val | Ile | Ala | Thr | Val | Ile | Val | Ile | Thr | Leu |
705 | 710 | 715 | 720 | ||||||||||||
Val | Met | Leu | Lys | Lys | Lys | Gin | Tyr | Thr | Ser | Ile | His | His | Gly | Val | Val |
725 | 730 | 735 | |||||||||||||
Glu | Val | Asp | Ala | Ala | Val | Thr | Pro | Glu | Glu | Arg | His | Leu | Ser | Lys | Met |
740 | 745 | 750 | |||||||||||||
Gin | Gin | Asn | Gly | Tyr | Glu | Asn | Pro | Thr | Tyr | Lys | Phe | Phe | Glu | Gin | Met |
Ί55 760 765
Gin Asn
770 <210> 3 <211> 45 <212> DNA <213> Clostridium tetani
<220> | |||||||||
<221> | CDS | ||||||||
<222> | (1)··(45) | ||||||||
<223> | DNA kodujący epitop P2 | ||||||||
<400> | 3 | ||||||||
cag tac atc aaa gct aac tcc aaa | ttc | atc | ggt | atc | acc | gag | ctg | 45 | |
Gin Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys | Phe | Ile | Gly | Ile | Thr | Glu | Leu | ||
1 | 5 | 10 | 15 |
PL 204 878 B1 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> Clostridium tetani <400> 4
Gin Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Leu 15 10 15 <210> 5 <211> 63 <212> DNA <213> Clostridium tetani <220>
<221> CDS <222> (1) . . (63) <223> DNA kodujący epitop P30 <400> 5
ttc | aac | aac | ttc | acc | gta | agc | ttc | tgg | ctg | cgt | gtt | ccg | aaa | gtt | agc |
Phe | Asn | Asn | Phe | Thr | Val | Ser | Phe | Trp | Leu | Arg | Val | Pro | Lys | Val | Ser |
1 | 5 | 10 | 15 |
gct | agc | cac | ctg | gaa | 63 |
Ala | Ser | His | Leu | Glu | |
20 |
<210> 6 <211> 21 <212> PRT <213> Clostridium tetani <400> 6
Phe Asn Asn Phe Thr Val Ser Phe Trp Leu Arg Val Pro Lys Val Ser 15 10 15
Ala Ser His Leu Glu
PL 204 878 B1
<210> | 7 |
<211> | 21 |
<212> | DNA |
<213> | syntetyczny |
<400> 7 caactcagct tcctttcggg c
<210> | 8 |
<211> | 21 |
<212> | DNA |
<213> | syntetyczny |
<400> | 8 |
agatctcgat cccgcgaaat t
<210> | 9 |
<211> | 135 |
<212> | DNA |
<213> | syntetyczny |
<400> 9 atggatgcag ttcgcagaag gttatcgcga aattccgtca cgactccggt atgttggttc caacaaaggt cctag tacgaagttc accaccagaa actggttttc gcaatcatcg gtctgatggt tggcggtgtt
120
135
<210> | 10 |
<211> | 31 |
<212> | DNA |
<213> | syntetyczny |
<400> 10 gccggccatg gatgcagaat tccgtcacga c
<210> | 11 |
<211> | 39 |
<212> | DNA |
PL 204 878 B1 <213> syntetyczny <400> 11 gccggaagct tctaggtcgc gataacaaca ccgccaacc
<210> | 12 |
<211> | 84 |
<212> | DNA |
<213> | syntetyczny |
<400> 12 ccggcaagct tctacagctc ggtgataccg atgaatttgg agttagcttt gatgtactgg 60 gtcgcgataa caacaccgcc aacc 84 <210> 13 <211> 101 <212> DNA <213> syntetyczny <400> 13 gccggccatg ggtttcaaca acttcaccgt tagcttctgg ctgcgtgttc cgaaagttag 60 cgcgagccac ctggaagatg cagaattccg tcacgactcc g 101 <210> 14 <211> 172 <212> DNA <213> syntetyczny
<400> | 14 | ||||||
gggccaagct | tggatccggt | cgcgataaca | acaccgccaa | ccatcagacc | gatgattgca | 60 | |
cctttgttgg | aaccaacatc | ttctgcgaag | aaaaccagtt | tctggtggtg | aacttcgtaa | 120 | |
ccggagtcgt | gacggaactc | tgcatccagc | tcggtgatac | cgatgaattt | 99 | 172 | |
<210> | 15 | ||||||
<211> | 30 | ||||||
<212> | DNA | ||||||
<213> | syntetyczny |
PL 204 878 B1 <400> 15 ctggaagatg cagagttccg tcacgactcc 30 <210> 16 <211> 35 <212> DNA <213> syntetyczny <400> 16 gcgccggatc cttcaacaac ttcaccgtta gcttc 35
Claims (41)
1. Zastosowanie czynnika wybranego spośród:
a) co najmniej jednego analogu zwierzęcego autologicznego Ae (beta amyloidu) albo polipeptydu APP (amyloidowego białka prekursorowego), zmodyfikowanego przez wprowadzenie przynajmniej jednego izolowanego obcego epitopu dla limfocytu pomocniczego T (epitop TH) na drodze insercji, addycji, delecji albo substytucji aminokwasu, przy czym obcy epitop TH jest wolny od aminokwasów-D i jest wprowadzony do autologicznego Ae lub APP jak schematycznie pokazano dla epitopów P2 i P30 na Fig. 1,
b) nukleotydowej sekwencji kodującej co najmniej jeden analog określony w a) i
c) niepatogennego mikroorganizmu lub wirusa, który niesie fragment kwasu nukleinowego określonego w b) do wytwarzania leku do leczenia i/lub zapobiegania, i/lub łagodzenia choroby Alzheimera lub innych chorób i stanów charakteryzujących się odkładaniem Ae u zwierzęcia.
2. Zastosowanie według zastrz. 1, znamienne tym, że w wyniku wprowadzenia obcego epitopu TH zasadnicza część epitopów komórki B Ae albo APP jest zachowana oraz, że
- jest wprowadzone przynajmniej jedno pierwsze ugrupowanie, które powoduje kierowanie analogu do komórki prezentującej antygen (APC) albo do limfocytu B i/albo
- jest wprowadzone przynajmniej jedno drugie ugrupowanie, które stymuluje układ odpornościowy i/albo
- jest wprowadzone przynajmniej jedno trzecie ugrupowanie, które optymalizuje prezentowanie analogu układowi odpornościowemu.
3. Zastosowanie według zastrz. 2, znamienne tym, że analog jest modyfikowany przez wprowadzenie pierwszego i/albo drugiego i/lub trzeciego ugrupowania jako grup bocznych i kowalencyjne albo niekowalencyjne wiązanie z odpowiednimi grupami chemicznymi w Ae, APP albo w jego fragmencie.
4. Zastosowanie według zastrz. 1-3, znamienne tym, że analog zawiera co najmniej jeden epitop komórki B Ae lub APP podwojony i/lub wprowadzony hapten.
5. Zastosowanie według zastrz. 1-4, znamienne tym, że obcy epitop komórki T jest immunodominujący w zwierzęciu.
6. Zastosowanie według zastrz. 1-5, znamienne tym, że obcy epitop komórki T jest epitopem mieszanym, takim jak obcy epitop komórki T, który jest wybrany z naturalnego mieszanego epitopu komórki T oraz sztucznej sekwencji peptydu wiążącego MHC-II.
7. Zastosowanie według zastrz. 6, znamienne tym, że naturalny epitop komórki T jest wybrany spośród epitopu anatoksyny tężca, jak P2 albo P30, epitopu anatoksyny błonicy, epitopu hemaglutyniny wirusa grypy i epitopu CS z P. falciparum.
8. Zastosowanie według z zastrz. 2-7, znamienne tym, że pierwsze ugrupowanie jest zasadniczo swoiście wiążącym partnerem dla specyficznego antygenu powierzchniowego limfocytu B albo dla specyficznego antygenu powierzchniowego APC, takiego jak hapten lub węglowodan, dla których istnieje receptor na limfocycie B lub na APC.
PL 204 878 B1
9. Zastosowanie według zastrz. 2-8, znamienne tym, że drugie ugrupowanie jest wybrane spośród cytokin, takich jak interferon γ (IFN-γ) lub jego skuteczna część, Flt3L lub jego skuteczna część, interleukina 1 (IL-1) lub jej skuteczna część, interleukina 2 (IL-2) lub jej skuteczna część, interleukina 4 (IL-4) lub jej skuteczna część, interleukina 6 (IL-6) lub jej skuteczna część, interleukina 12 (IL-12) lub jej skuteczna część, interleukina 13 (IL-13) lub jej skuteczna część, interleukina 15 (IL-15) lub jej skuteczna część, oraz czynnik stymulujący kolonie granulocytów i makrofagów (GM-CSF) lub jego skuteczna część; hormonu; oraz białek szoku cieplnego takich, jak HSP70 lub jego skuteczna część, HSP90 lub jego skuteczna część, HSC70 lub jego skuteczna część, GRP94 lub jego skuteczna część oraz kalretikulina (CRT) lub jej skuteczna część.
10. Zastosowanie według zastrz. 2-9, znamienne tym, że trzecie ugrupowanie ma charakter lipidowy i jest takie, jak grupa palmitoilowa, grupa mirystylowa, grupa farnezylowa, grupa geranylo-geranylowa, kotwica GPI i grupa N-acylodiglicerydowa lub takie ugrupowanie jest polihydroksypolimerem, takim jak polisacharyd.
11. Zastosowanie według zastrz. 1-10, znamienne tym, że autologiczny Ae albo APP jest tak zmodyfikowany, że zachowuje epitopy komórki B, które nie są eksponowane na fazę zewnątrzkomórkową, gdy są obecne w postaci związanego z komórką autologicznego APP.
12. Zastosowanie według zastrz. 11, znamienne tym, że Ae albo APP jest tak zmodyfikowany, że brakuje co najmniej jednego epitopu komórki B, który jest eksponowany na fazę zewnątrzkomórkową, gdy jest obecny w postaci związanego z komórką autologicznego APP.
13. Zastosowanie według zastrz. 1-12, znamienne tym, że obejmuje substytucję przynajmniej jednej sekwencji aminokwasowej w obrębie autologicznego Ae albo APP sekwencją aminokwasową o równej lub różnej długości, która tworzy obcy epitop TH w analogu.
14. Zastosowanie według zastrz. 1-13, znamienne tym, że analog obejmuje sekwencję aminokwasową odpowiadającą aminokwasom 672-714 w SEK. NR ID.: 2, do której jest wprowadzona sekwencja aminokwasowa prowadząca do powstania obcego epitopu TH w analogu albo analog obejmuje sekwencję aminokwasową odpowiadającą aminokwasom 672-714 w SEK. NR ID.: 2, w której przynajmniej jedna sekwencja aminokwasowa jest podstawiona sekwencją aminokwasową o równej lub różnej długości, co prowadzi do powstania obcego epitopu TH.
15. Zastosowanie według zastrz.1-13, znamienne tym, że analog od N-końca do C-końca składa się z reszt aminokwasowych 672-714 SEK. NR ID.: 2, po których następuje SEK. NR ID.: 4, po której następują reszty aminokwasowe 672-714 sekwencji SEK. NR ID.: 2, po których następuje Sek. NR ID.: 6 po których następują reszty aminokwasowe 672-714 z SEK. NR ID.: 2.
16. Zastosowanie zastrz. 1-13, znamienne tym, że analog od N-końca do C-końca składa się z reszt aminokwasowych 630-634 SEK. NR ID.: 2, po których następuje SEK. Id. Nr: 6, po której następuje SEK. NR ID.: 4 po której następują reszty aminokwasowe 672-714 z SEK. NR ID.: 2.
17. Zastosowanie zastrz. 1-13, znamienne tym, że analog od N-końca do C-końca składa się z reszt aminokwasowych 672-713 z SEK. Id. Nr: 2, po których następuje SEK. NR ID.: 6, po której następują reszty aminokwasowe 729-734 sekwencji z SEK. NR ID.: 2, po których następuje SEK. NR ID.: 4 po której następują reszty aminokwasowe 750-770 z SEK. NR ID.: 2.
18. Zastosowanie według zastrz. 1-17, znamienne tym, że co najmniej dwie kopie analogu są kowalencyjnie lub niekowalencyjnie połączone z cząsteczką nośnika zdolną do skutecznej prezentacji wielu kopii determinant antygenowych.
19. Zastosowanie według zastrz. 1-18, znamienne tym, że analog jest sformułowany z adiuwantem ułatwiającym przerwanie autotolerancji na autoantygeny.
20. Zastosowanie według zastrz. 1-19, znamienne tym, że lek zawierający skuteczną ilość analogu jest podawany zwierzęciu na drodze wybranej spośród drogi pozajelitowej, takiej jak śródskórna, podskórna i domięśniowa; dootrzewnowej; doustnej; dopoliczkowej, podjęzykowej; nadtwardówkowej; dokręgowej; doodbytniczej oraz wewnątrzczaszkowej.
21. Zastosowanie według zastrz. 20, znamienne tym, że skuteczna ilość analogu jest w zakresie 0,5 μg - 2000 μg.
22. Zastosowanie według zastrz. 20 albo 21, znamienne tym, że analog jest zawarty w urządzeniu będącym wirtualnym węzłem chłonnym (VLN).
23. Zastosowanie według zastrz. 1-17, znamienne tym, że lek jest przeznaczony do wprowadzenia kwasu(ów) nukleinowego(ych) kodującego analog do komórek zwierzęcych i tym samym uzyskania ekspresji in vivo w komórkach, do których wprowadzono kwas(y) nukleinowy(e).
PL 204 878 B1
24. Zastosowanie według zastrz. 23, znamienne tym, że wprowadzany kwas(y) nukleinowy(e) jest/są wybrany(e) spośród nagiego DNA, DNA sformułowanego z lipidami z ładunkiem lub bez ładunku, DNA sformułowanego w liposomach, DNA zawartego w wektorze wirusowym, DNA sformułowanego z białkiem lub polipeptydem ułatwiającym transfekcję, DNA sformułowanego z białkiem lub polipeptydem naprowadzającym, DNA sformułowanego z czynnikami wytrącającymi wapń, DNA sprzężonego z obojętną cząsteczką nośnikową, DNA enkapsulowanego w chitynie albo chitozanie, oraz DNA sformułowanego z adiuwantem.
25. Zastosowanie według zastrz. 24, znamienne tym, że kwas(y) nukleinowy(e) jest/są zawarty(e) w urządzeniu VLN.
26. Zastosowanie według zastrz. 21-25, znamienne tym, że lek jest podawany/wprowadzany przynajmniej raz na rok, przykładowo przynajmniej 2, przynajmniej 3, przynajmniej 4, przynajmniej 6 i przynajmniej 12 podań/wprowadzeń.
27. Zastosowanie według zastrz. 1-17, znamienne tym, że lek do zapobiegania i/lub łagodzenia zawiera niepatogenny mikroorganizm lub wirus, który niesie fragment kwasu nukleinowego kodujący lub wyrażający analog.
28. Analog polipeptydu amyloidogennego pochodzący ze zwierzęcego Ae (beta amyloidu) albo APP (białka prekursorowego amyloidu), do którego wprowadzono przynajmniej jeden izolowany obcy epitop TH jak pokazano schematycznie dla epitopów P2 i P30 na Fig. 1, w wyniku czego immunizacja zwierzęcia analogiem indukuje wytwarzanie przeciwciał skierowanych przeciwko polipeptydowi amyloidogennemu.
29. Analog według zastrz. 28, znamienny tym, że modyfikacja jest określona w zastrz. 2-17.
30. Immunogenna kompozycja, znamienna tym, że obejmuje skuteczną immunogennie ilość analogu określonego w zastrz. 28 albo 29 i farmaceutycznie i immunologicznie dopuszczalny nośnik i/lub zaróbkę i ewentualnie adiuwant.
31. Fragment kwasu nukleinowego kodujący analog określony w zastrz. 28 albo 29.
32. Wektor niosący fragment kwasu nukleinowego określony w zastrz. 31 zdolny do autonomicznej replikacji.
33. Wektor według zastrz. 32, znamienny tym, że jest wybrany z grupy składającej się z plazmidu, faga, kosmidu, minichromosomu i wirusa.
34. Wektor według zastrz. 32 albo 33, znamienny tym, że obejmuje, w kierunku 5' >3' funkcjonalnie połączone, promotor kierujący ekspresją fragmentu kwasu nukleinowego określonego w zastrz. 31, ewentualnie sekwencję kwasu nukleinowego kodującą peptyd liderowy umożliwiający wydzielanie lub integrację z błoną fragmentu polipeptydu, fragment kwasu nukleinowego określony w zastrz. 31 i ewentualnie terminator.
35. Wektor według zastrz. 32-34, znamienny tym, że wprowadzony do komórki gospodarza jest zdolny lub niezdolny do integracji z genomem komórki gospodarza.
36. Wektor według zastrz. 34 albo 35, znamienny tym, że promotor kieruje ekspresją w komórce eukariotycznej i/albo w komórce prokariotycznej.
37. Stransformowana komórka niosąca wektor określony w zastrz. 32-36, znamienna tym, że jest zdolna do replikacji fragmentu kwasu nukleinowego określonego w zastrz. 31.
38. Stransformowana komórka według zastrz. 37, znamienna tym, że jest mikroorganizmem wybranym z bakterii, drożdży, protozoa albo jest komórką pochodzącą z organizmu wielokomórkowego wybraną spośród komórki grzyba, komórki owadziej takiej, jak komórka S2 lub SF, komórki roślinnej i komórki ssaka.
39. Stransformowana komórka według zastrz. 37 albo 38, znamienna tym, że wyraża fragment kwasu nukleinowego określony w zastrz. 31, i jest taka jak stransformowana komórka, która wydziela lub niesie na swojej powierzchni analog określony w zastrz. 28 albo 29.
40. Kompozycja do indukowania produkcji przeciwciał skierowanych przeciwko Ae albo APP u zwierzęcia, znamienna tym, że obejmuje:
- fragment kwasu nukleinowego określony w zastrz. 31 albo wektor określony w zastrz. 32-36 oraz
- farmaceutycznie i immunologicznie dopuszczalny nośnik i/albo zaróbkę i/lub adiuwant.
41. Stabilna linia komórkowa niosąca wektor określony w zastrz. 32-36 i wyrażająca fragment kwasu nukleinowego określonego w zastrz. 31 i ewentualnie wydzielająca lub niosąca na swojej powierzchni analog określony w zastrz. 28 albo 29.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DKPA200000265 | 2000-02-21 | ||
PCT/DK2001/000113 WO2001062284A2 (en) | 2000-02-21 | 2001-02-19 | Novel method for down-regulation of amyloid |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL362889A1 PL362889A1 (pl) | 2004-11-02 |
PL204878B1 true PL204878B1 (pl) | 2010-02-26 |
Family
ID=8159174
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL362889A PL204878B1 (pl) | 2000-02-21 | 2001-02-19 | Zastosowanie analogu autologicznego zwierzęcego Aβ albo polipeptydu APP lub sekwencji kodującej taki analog lub mikroorganizmu lub wirusa, który niesie nukleotydową sekwencję kodującą taki analog, analog polipeptydu amyloidogennego, immunogenna kompozycja, fragment kwasu nukleinowego kodujący analog, wektor, stransformowana komórka, kompozycja do indukowania produkcji przeciwciał i stabilna linia komórkowa |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20030086938A1 (pl) |
EP (2) | EP1259251B1 (pl) |
JP (1) | JP5025871B2 (pl) |
CN (1) | CN1279971C (pl) |
AR (1) | AR027947A1 (pl) |
AT (1) | ATE306933T1 (pl) |
BR (1) | BR0108566A (pl) |
CO (1) | CO5280094A1 (pl) |
DE (1) | DE60114157T2 (pl) |
DK (1) | DK1259251T3 (pl) |
EA (1) | EA008762B1 (pl) |
EE (1) | EE200200444A (pl) |
EG (1) | EG25830A (pl) |
ES (1) | ES2248283T3 (pl) |
GC (1) | GC0000355A (pl) |
HK (1) | HK1054865B (pl) |
HU (1) | HUP0300067A3 (pl) |
IL (3) | IL150066A0 (pl) |
IS (1) | IS6446A (pl) |
ME (2) | MEP30408A (pl) |
MY (1) | MY131826A (pl) |
NO (1) | NO20023961L (pl) |
NZ (1) | NZ521442A (pl) |
PL (1) | PL204878B1 (pl) |
RS (1) | RS51164B (pl) |
SI (1) | SI1259251T1 (pl) |
SK (1) | SK287468B6 (pl) |
WO (1) | WO2001062284A2 (pl) |
ZA (1) | ZA200204830B (pl) |
Families Citing this family (91)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7427392B1 (en) | 1994-11-14 | 2008-09-23 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Methods for aiding in the diagnosis of alzheimer's disease by measuring amyloid-β peptide (x-≧41) and tau |
US6787523B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
US20080050367A1 (en) | 1998-04-07 | 2008-02-28 | Guriq Basi | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US6750324B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-06-15 | Neuralab Limited | Humanized and chimeric N-terminal amyloid beta-antibodies |
US6743427B1 (en) | 1997-12-02 | 2004-06-01 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
TWI239847B (en) | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
US7964192B1 (en) | 1997-12-02 | 2011-06-21 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidgenic disease |
US6761888B1 (en) | 2000-05-26 | 2004-07-13 | Neuralab Limited | Passive immunization treatment of Alzheimer's disease |
US7790856B2 (en) | 1998-04-07 | 2010-09-07 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US20030147882A1 (en) | 1998-05-21 | 2003-08-07 | Alan Solomon | Methods for amyloid removal using anti-amyloid antibodies |
US6787637B1 (en) | 1999-05-28 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | N-Terminal amyloid-β antibodies |
UA81216C2 (en) | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
US6689753B1 (en) * | 1999-11-05 | 2004-02-10 | Axonyx, Inc. | β sheet breaker peptide analogs that inhibit β pleated sheet formation in amyloid β-peptide |
CZ20022748A3 (cs) * | 2000-02-21 | 2004-03-17 | Pharmexa A/S | Nová metoda regulace obsahu amyloidu |
EE200200444A (et) * | 2000-02-21 | 2003-12-15 | Pharmexa A/S | Meetod autoloogse beeta-amüloidvaigu in vivo mahasurumiseks, amüloidogeense polüpeptiidi analoog, seda kodeeriv nukleiinhappefragment ning kasutamineimmunogeense kompositsiooni valmistamiseks |
US7700751B2 (en) | 2000-12-06 | 2010-04-20 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Humanized antibodies that recognize β-amyloid peptide |
US7320793B2 (en) | 2001-01-19 | 2008-01-22 | Cytos Biotechnology Ag | Molecular antigen array |
US7128911B2 (en) | 2001-01-19 | 2006-10-31 | Cytos Biotechnology Ag | Antigen arrays for treatment of bone disease |
US7094409B2 (en) | 2001-01-19 | 2006-08-22 | Cytos Biotechnology Ag | Antigen arrays for treatment of allergic eosinophilic diseases |
DE60121729T2 (de) * | 2001-04-19 | 2007-11-29 | Dr. Hermann Schätzl | Prion Proteindimere für Impfungen |
MY144532A (en) * | 2001-08-20 | 2011-09-30 | Lundbeck & Co As H | Novel method for down-regulation of amyloid |
US7115266B2 (en) | 2001-10-05 | 2006-10-03 | Cytos Biotechnology Ag | Angiotensin peptide-carrier conjugates and uses thereof |
EP1820806A1 (en) * | 2006-02-16 | 2007-08-22 | Crossbeta Biosciences B.V. | Affinity regions |
MY139983A (en) | 2002-03-12 | 2009-11-30 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
EP1380290A1 (en) * | 2002-07-09 | 2004-01-14 | Universitair Medisch Centrum Utrecht | Cross-beta structure pathway and its therapeutic relevance |
US20070003552A1 (en) * | 2002-07-09 | 2007-01-04 | Gebbink Martijn F B | Cross-beta structure comprising amyloid binding proteins and methods for detection of the cross-beta structure, for modulating cross-beta structures fibril formation and for modulating cross-beta structure-mediated toxicity and method for interfering with blood coagulation |
MXPA05000277A (es) | 2002-07-17 | 2005-03-31 | Cytos Biotechnology Ag | Configuraciones de antigenos moleculares de usan una particula tipo virus derivada de la proteina de recurimiento ap205. |
KR101228376B1 (ko) | 2002-07-18 | 2013-01-31 | 사이토스 바이오테크놀로지 아게 | 합텐-캐리어 컨쥬게이트 및 그의 용도 |
WO2004016282A1 (en) | 2002-07-19 | 2004-02-26 | Cytos Biotechnology Ag | Vaccine compositions containing amyloid beta1-6 antigen arrays |
US20080014194A1 (en) * | 2003-10-31 | 2008-01-17 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Prevention and Treatment of Synucleinopathic and Amyloidogenic Disease |
US8697082B2 (en) * | 2002-11-01 | 2014-04-15 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
US9034337B2 (en) * | 2003-10-31 | 2015-05-19 | Prothena Biosciences Limited | Treatment and delay of outset of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
US8506959B2 (en) * | 2002-11-01 | 2013-08-13 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
TW200509968A (en) * | 2002-11-01 | 2005-03-16 | Elan Pharm Inc | Prevention and treatment of synucleinopathic disease |
DE10303974A1 (de) | 2003-01-31 | 2004-08-05 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
US8663650B2 (en) | 2003-02-21 | 2014-03-04 | Ac Immune Sa | Methods and compositions comprising supramolecular constructs |
US7358331B2 (en) * | 2003-05-19 | 2008-04-15 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Truncated fragments of alpha-synuclein in Lewy body disease |
TWI374893B (en) | 2003-05-30 | 2012-10-21 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Humanized antibodies that recognize beta amyloid peptide |
US7807171B2 (en) | 2003-07-25 | 2010-10-05 | Ac Immune Sa | Therapeutic vaccine targeted against P-glycoprotein 170 for inhibiting multidrug resistance in the treatment of cancers |
US7674599B2 (en) | 2003-11-08 | 2010-03-09 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Methods of using antibodies to detect alpha-synuclein in fluid samples |
SG182189A1 (en) | 2003-12-17 | 2012-07-30 | Elan Pharma Int Ltd | A(beta) immunogenic peptide carrier conjugates and methods of producing same |
GB0424563D0 (en) | 2004-11-05 | 2004-12-08 | Novartis Ag | Organic compounds |
CA2590337C (en) | 2004-12-15 | 2017-07-11 | Neuralab Limited | Humanized amyloid beta antibodies for use in improving cognition |
CN101228272A (zh) * | 2005-04-20 | 2008-07-23 | 生物载体株式会社 | 用于治疗阿尔茨海默病的具有较高安全性的经鼻腔内给药基因疫苗 |
AU2006267174A1 (en) * | 2005-07-13 | 2007-01-18 | Crossbeta Biosciences B.V. | Adjuvation through cross-beta structure |
EP2386861A3 (en) * | 2005-07-13 | 2012-07-18 | Crossbeta Biosciences B.V. | Cross-ß structure binding compounds |
US8114832B2 (en) * | 2005-07-13 | 2012-02-14 | Crossbeta Biosciences B.V. | Method for detecting and/or removing a protein comprising a cross-beta structure from a pharmaceutical composition |
US20070015133A1 (en) * | 2005-07-13 | 2007-01-18 | Umc Utrecht Holding B.V. | Method for detecting and/or removing protein and/or peptide comprising a cross-beta structure from an aqueous solution comprising a protein |
PT1954718E (pt) | 2005-11-30 | 2014-12-16 | Abbvie Inc | Anticorpos anti-globulómeros aβ, suas porções de ligação ao antigénio, correspondentes hibridomas, ácidos nucleicos, vectores, células hospedeiras, métodos de produção dos ditos anticorpos, composições compreendendo os ditos anticorpos, usos dos ditos anticorpos e métodos para uso dos ditos anticorpos |
DK1976877T4 (en) | 2005-11-30 | 2017-01-16 | Abbvie Inc | Monoclonal antibodies to amyloid beta protein and uses thereof |
US8784810B2 (en) | 2006-04-18 | 2014-07-22 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of amyloidogenic diseases |
JP2007300856A (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Hiroshi Mori | アミロイドタンパク質模倣物 |
WO2008040759A1 (en) * | 2006-10-03 | 2008-04-10 | Pharmexa A/S | Method for down-regulation of cripto |
WO2008070284A2 (en) | 2006-10-16 | 2008-06-12 | Johnnie B. Byrd, Sr. Alzheimer's Center And Research Institute | Amyloid beta peptides and methods of uses thereof |
US8455626B2 (en) | 2006-11-30 | 2013-06-04 | Abbott Laboratories | Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies |
DK3067066T3 (da) * | 2007-02-23 | 2019-05-20 | Prothena Biosciences Ltd | Forebyggelse og behandling af synukleinopatisk og amyloidogenisk sygdom |
US8147833B2 (en) * | 2007-02-23 | 2012-04-03 | Neotope Biosciences Limited | Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease |
WO2008104386A2 (en) | 2007-02-27 | 2008-09-04 | Abbott Gmbh & Co. Kg | Method for the treatment of amyloidoses |
US7618944B2 (en) * | 2007-03-01 | 2009-11-17 | Intezyne Technologies, Inc. | Encapsulated amyloid-beta peptides |
US8003097B2 (en) | 2007-04-18 | 2011-08-23 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Treatment of cerebral amyloid angiopathy |
PT2182983E (pt) | 2007-07-27 | 2014-09-01 | Janssen Alzheimer Immunotherap | Tratamento de doenças amiloidogénicas com anticorpos anti-abeta humanizados |
JO3076B1 (ar) | 2007-10-17 | 2017-03-15 | Janssen Alzheimer Immunotherap | نظم العلاج المناعي المعتمد على حالة apoe |
EP2058001A1 (en) * | 2007-11-08 | 2009-05-13 | Crossbeta Biosciences B.V. | Enhancement of immunogenicity of antigens |
EP2058000A1 (en) * | 2007-11-08 | 2009-05-13 | Crossbeta Biosciences B.V. | Immunogenic compositions capable of activating T cells |
DK2310046T3 (da) | 2008-06-27 | 2016-04-25 | Zoetis Services Llc | Hidtil ukendte adjuvanssammensætninger |
US8491890B2 (en) | 2008-07-09 | 2013-07-23 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Methods and compositions for inhibiting diseases of the central nervous system |
US9067981B1 (en) | 2008-10-30 | 2015-06-30 | Janssen Sciences Ireland Uc | Hybrid amyloid-beta antibodies |
US9925282B2 (en) | 2009-01-29 | 2018-03-27 | The General Hospital Corporation | Cromolyn derivatives and related methods of imaging and treatment |
EP2258398A1 (en) | 2009-05-26 | 2010-12-08 | Araclón Biotech, S. L. | Albumin-amyloid peptide conjugates and uses thereof |
CN101858910B (zh) * | 2010-03-25 | 2013-03-27 | 辽宁大学 | 一种在蛋白质水平精确定量检测抗朊病毒药物作用效果的方法 |
MX360403B (es) | 2010-04-15 | 2018-10-31 | Abbvie Inc | Proteinas de union a amiloide beta. |
WO2012020124A1 (en) | 2010-08-12 | 2012-02-16 | Ac Immune S.A. | Vaccine engineering |
EP2603524A1 (en) | 2010-08-14 | 2013-06-19 | AbbVie Inc. | Amyloid-beta binding proteins |
CN103189050B (zh) | 2010-10-26 | 2017-09-29 | Ac免疫有限公司 | 包含通过疏水部分修饰的肽的基于脂质体的构建体 |
US20120328605A1 (en) * | 2010-10-27 | 2012-12-27 | Daniel Larocque | Compositions and uses |
CN109846862A (zh) | 2012-10-25 | 2019-06-07 | 通用医疗公司 | 治疗阿尔茨海默病及相关疾病的组合疗法 |
US10058530B2 (en) | 2012-10-25 | 2018-08-28 | The General Hospital Corporation | Combination therapies for the treatment of Alzheimer's disease and related disorders |
US10525005B2 (en) | 2013-05-23 | 2020-01-07 | The General Hospital Corporation | Cromolyn compositions and methods thereof |
EP3046580A2 (en) | 2013-09-19 | 2016-07-27 | Zoetis Services LLC | Oil-based adjuvants |
CN110305095A (zh) | 2013-10-22 | 2019-10-08 | 综合医院公司 | 色甘酸衍生物以及成像和治疗的相关方法 |
CN114081946A (zh) * | 2014-03-12 | 2022-02-25 | 耶达研究与开发有限公司 | 降低系统性调节性t细胞水平或活性来治疗cns疾病和损伤 |
PT3244920T (pt) | 2015-01-16 | 2023-07-28 | Zoetis Services Llc | Vacina contra a febre aftosa |
CA3063061A1 (en) * | 2016-05-12 | 2017-11-16 | Ohio State Innovation Foundation | Peptides and methods for treating neurodegenerative disorders |
US20190240194A1 (en) | 2016-08-31 | 2019-08-08 | The General Hospital Corporation | Macrophages/microglia in neuro-inflammation associated with neurodegenerative diseases |
CN106854233B (zh) * | 2017-03-03 | 2020-07-17 | 国家纳米科学中心 | 一种类肽及其制备方法和应用 |
CN107412782B (zh) * | 2017-04-27 | 2020-09-08 | 国家纳米科学中心 | 一种多肽聚合物纳米材料及其制备方法和应用 |
RU2020103379A (ru) | 2017-07-04 | 2021-08-04 | Куревак Аг | Новые молекулы нуклеиновых кислот |
US10561612B2 (en) | 2017-07-20 | 2020-02-18 | The General Hospital Corporation | Powdered formulations of cromolyn sodium and ibuprofen |
TW202003031A (zh) | 2018-04-10 | 2020-01-16 | 瑞士商Ac免疫有限公司 | 抗Aβ治療性疫苗 |
KR20210071943A (ko) | 2018-07-02 | 2021-06-16 | 더 제너럴 하스피탈 코포레이션 | 크로몰린 소듐 및 α-락토스의 분말화된 제형 |
CN112210003A (zh) * | 2019-07-09 | 2021-01-12 | 厦门德馨尚品医疗科技有限公司 | 一种重组载脂蛋白j及其类似物的晶体结构及应用 |
Family Cites Families (47)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4596792A (en) * | 1981-09-04 | 1986-06-24 | The Regents Of The University Of California | Safe vaccine for hepatitis containing polymerized serum albumin |
JPS5938877A (ja) * | 1982-08-30 | 1984-03-02 | Musashi Eng Kk | 紙葉判別方法 |
US4599231A (en) * | 1984-03-09 | 1986-07-08 | Scripps Clinic And Research Foundation | Synthetic hepatitis B virus vaccine including both T cell and B cell determinants |
US4599230A (en) * | 1984-03-09 | 1986-07-08 | Scripps Clinic And Research Foundation | Synthetic hepatitis B virus vaccine including both T cell and B cell determinants |
US4608251A (en) * | 1984-11-09 | 1986-08-26 | Pitman-Moore, Inc. | LHRH analogues useful in stimulating anti-LHRH antibodies and vaccines containing such analogues |
US4601903A (en) * | 1985-05-01 | 1986-07-22 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vaccine against Neisseria meningitidis Group B serotype 2 invasive disease |
US5223482A (en) * | 1986-11-17 | 1993-06-29 | Scios Nova Inc. | Recombinant Alzheimer's protease inhibitory amyloid protein and method of use |
US5278056A (en) * | 1988-02-05 | 1994-01-11 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Retroviral packaging cell lines and process of using same |
US5192688A (en) * | 1988-08-15 | 1993-03-09 | Switzer Iii Robert C | Histological analysis method |
US5753624A (en) * | 1990-04-27 | 1998-05-19 | Milkhaus Laboratory, Inc. | Materials and methods for treatment of plaquing disease |
US5200339A (en) * | 1990-08-17 | 1993-04-06 | Abraham Carmela R | Proteases causing abnormal degradation of amyloid β-protein precursor |
US5780587A (en) * | 1990-08-24 | 1998-07-14 | President And Fellows Of Harvard College | Compounds and methods for inhibiting β-protein filament formation and neurotoxicity |
US5780036A (en) * | 1991-08-26 | 1998-07-14 | The Scripps Research Institute | Peptides for inducing cytotoxic T lymphocyte responses to hepattis B virus |
US5851787A (en) * | 1992-04-20 | 1998-12-22 | The General Hospital Corporation | Nucleic acid encoding amyloid precursor-like protein and uses thereof |
US5958883A (en) * | 1992-09-23 | 1999-09-28 | Board Of Regents Of The University Of Washington Office Of Technology | Animal models of human amyloidoses |
US5747323A (en) * | 1992-12-31 | 1998-05-05 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Retroviral vectors comprising a VL30-derived psi region |
DK96493D0 (da) * | 1993-08-26 | 1993-08-26 | Mouritsen Og Elsner Aps | Fremgangsmaade til at inducere antistofresponser mod selvproteiner og autovaccine fremstillet ved fremgangsmaaden |
DE69435171D1 (de) * | 1993-09-14 | 2009-01-08 | Pharmexa Inc | Pan dr-bindeproteinen zur erhöhung der immunantwort |
AUPM411994A0 (en) * | 1994-02-25 | 1994-03-24 | Deakin Research Limited | Epitopes |
US5709995A (en) * | 1994-03-17 | 1998-01-20 | The Scripps Research Institute | Hepatitis C virus-derived peptides capable of inducing cytotoxic T lymphocyte responses |
US5573916A (en) * | 1994-05-19 | 1996-11-12 | Coretech, Inc. | Immunogenic constructs comprising b-cell and t-cell epitopes on common carrier |
US5589154A (en) * | 1994-11-22 | 1996-12-31 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Methods for the prevention or treatment of vascular hemorrhaging and Alzheimer's disease |
ES2175083T3 (es) * | 1995-03-14 | 2002-11-16 | Praecis Pharm Inc | Moduladores de la agregacion de amiloides. |
US5874469A (en) * | 1996-01-05 | 1999-02-23 | Alcon Laboratories, Inc. | Fluoroalkyl hydrocarbons for administering water insoluble or unstable drugs |
US5854469A (en) * | 1996-06-28 | 1998-12-29 | Gabay; David | Heating unit for therapeutic instrument |
US5985581A (en) * | 1996-07-25 | 1999-11-16 | The Mclean Hospital Corporation | Use of presenilin-1 for diagnosis of alzheimers disease |
IT1293511B1 (it) * | 1997-07-30 | 1999-03-01 | Gentili Ist Spa | Anticorpi monoclonali catalitici ad attivita' proteasica per la lisi selettiva della componente proteica di placche e aggregati correlati |
US7964192B1 (en) * | 1997-12-02 | 2011-06-21 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | Prevention and treatment of amyloidgenic disease |
US6761888B1 (en) * | 2000-05-26 | 2004-07-13 | Neuralab Limited | Passive immunization treatment of Alzheimer's disease |
US6787523B1 (en) * | 1997-12-02 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
TWI239847B (en) * | 1997-12-02 | 2005-09-21 | Elan Pharm Inc | N-terminal fragment of Abeta peptide and an adjuvant for preventing and treating amyloidogenic disease |
US20040062802A1 (en) * | 1998-04-02 | 2004-04-01 | Hermelin Victor M. | Maximizing effectiveness of substances used to improve health and well being |
US20050059802A1 (en) * | 1998-04-07 | 2005-03-17 | Neuralab Ltd | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
CN1318105A (zh) * | 1998-09-15 | 2001-10-17 | M&E生物技术公司 | 负调节Osteoprotegerin配体活性的方法 |
JP2002526419A (ja) * | 1998-10-05 | 2002-08-20 | ファーメクサ エイ/エス | 治療上のワクチン注射のための新規な方法 |
PT1187629E (pt) * | 1999-04-19 | 2005-02-28 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Composicao adjuvante que compreende saponina e um oligonucleotido imunoestimulador |
US6787637B1 (en) * | 1999-05-28 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | N-Terminal amyloid-β antibodies |
CA2393763A1 (en) * | 1999-12-08 | 2001-06-14 | Mindset Biopharmaceuticals (Usa), Inc. | Chimeric peptides as immunogens, antibodies thereto, and methods for immunization using chimeric peptides or antibodies |
EE200200444A (et) * | 2000-02-21 | 2003-12-15 | Pharmexa A/S | Meetod autoloogse beeta-amüloidvaigu in vivo mahasurumiseks, amüloidogeense polüpeptiidi analoog, seda kodeeriv nukleiinhappefragment ning kasutamineimmunogeense kompositsiooni valmistamiseks |
CZ20022748A3 (cs) * | 2000-02-21 | 2004-03-17 | Pharmexa A/S | Nová metoda regulace obsahu amyloidu |
DE60108111T2 (de) * | 2000-05-22 | 2005-12-08 | New York University | Synthetische immunogene jedoch nicht amyloidogene peptide, die homolog zu amyloid beta sind und deren verwendung zur induktion einer immunantwort gegen amyloid beta und amyloidaggregate |
US7097837B2 (en) * | 2001-02-19 | 2006-08-29 | Pharmexa A/S | Synthetic vaccine agents |
US6906169B2 (en) * | 2001-05-25 | 2005-06-14 | United Biomedical, Inc. | Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide |
MY144532A (en) * | 2001-08-20 | 2011-09-30 | Lundbeck & Co As H | Novel method for down-regulation of amyloid |
US20030185845A1 (en) * | 2001-11-16 | 2003-10-02 | Steen Klysner | Novel immunogenic mimetics of multimer proteins |
AU2003208314A1 (en) * | 2002-03-11 | 2003-09-22 | Pharmexa A/S | Novel application of vaccination against tnf-alpha |
CA2493119A1 (en) * | 2002-07-17 | 2004-01-22 | Mindset Biopharmaceuticals Usa Inc. | Peptides and methods of screening immunogenic peptide vaccines against alzheimer's disease |
-
2001
- 2001-02-19 EE EEP200200444A patent/EE200200444A/xx unknown
- 2001-02-19 SI SI200130471T patent/SI1259251T1/sl unknown
- 2001-02-19 IL IL15006601A patent/IL150066A0/xx active IP Right Grant
- 2001-02-19 DK DK01905632T patent/DK1259251T3/da active
- 2001-02-19 BR BR0108566-2A patent/BR0108566A/pt not_active Withdrawn
- 2001-02-19 JP JP2001561348A patent/JP5025871B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-19 PL PL362889A patent/PL204878B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2001-02-19 SK SK1178-2002A patent/SK287468B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2001-02-19 CN CNB018053602A patent/CN1279971C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-19 DE DE60114157T patent/DE60114157T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-19 HU HU0300067A patent/HUP0300067A3/hu unknown
- 2001-02-19 EP EP01905632A patent/EP1259251B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-19 AT AT01905632T patent/ATE306933T1/de active
- 2001-02-19 EP EP05021931A patent/EP1632242A3/en not_active Withdrawn
- 2001-02-19 WO PCT/DK2001/000113 patent/WO2001062284A2/en active Application Filing
- 2001-02-19 NZ NZ521442A patent/NZ521442A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-02-19 EA EA200200889A patent/EA008762B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-02-19 RS YUP-577/02A patent/RS51164B/sr unknown
- 2001-02-19 ME MEP-304/08A patent/MEP30408A/xx unknown
- 2001-02-19 ME MEP-2008-304A patent/ME00183B/me unknown
- 2001-02-19 US US10/204,362 patent/US20030086938A1/en not_active Abandoned
- 2001-02-19 ES ES01905632T patent/ES2248283T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-21 CO CO01013743A patent/CO5280094A1/es not_active Application Discontinuation
- 2001-02-21 EG EG2001020170A patent/EG25830A/xx active
- 2001-02-21 GC GCP20011189 patent/GC0000355A/en active
- 2001-02-21 MY MYPI20010770A patent/MY131826A/en unknown
- 2001-02-21 AR ARP010100765A patent/AR027947A1/es unknown
-
2002
- 2002-06-06 IL IL150066A patent/IL150066A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-06-14 ZA ZA200204830A patent/ZA200204830B/xx unknown
- 2002-06-26 IS IS6446A patent/IS6446A/is unknown
- 2002-08-20 NO NO20023961A patent/NO20023961L/no not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-09-20 HK HK03106763.9A patent/HK1054865B/zh not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-09-29 US US11/537,566 patent/US20070041945A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-02-21 IL IL189646A patent/IL189646A0/en unknown
-
2009
- 2009-01-28 US US12/360,962 patent/US20090311281A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CA2400838C (en) | Novel method for down-regulation of amyloid | |
JP5025871B2 (ja) | アミロイドの新規なダウン−レギュレート方法 | |
EP1420815B1 (en) | Beta-amyloid-analogue - t-cell epitop vaccine | |
AU2002325199A1 (en) | Beta-amyloid-analogue-T-cell epitop vaccine |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20140219 |