TR201802286T4 - Peptidle bağışıklık yanıtının arttırılması için yöntem. - Google Patents
Peptidle bağışıklık yanıtının arttırılması için yöntem. Download PDFInfo
- Publication number
- TR201802286T4 TR201802286T4 TR2018/02286T TR201802286T TR201802286T4 TR 201802286 T4 TR201802286 T4 TR 201802286T4 TR 2018/02286 T TR2018/02286 T TR 2018/02286T TR 201802286 T TR201802286 T TR 201802286T TR 201802286 T4 TR201802286 T4 TR 201802286T4
- Authority
- TR
- Turkey
- Prior art keywords
- peptide
- seq
- cysteine
- amino acid
- immune response
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 234
- 230000028993 immune response Effects 0.000 title claims abstract description 47
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 15
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 83
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 81
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 37
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 17
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 56
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 37
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 31
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 23
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 4
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 abstract description 19
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 66
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 66
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 60
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 45
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 41
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 39
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 39
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 32
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 32
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 29
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 29
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 28
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 27
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 26
- VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO VGNYHOBZJKWRGI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 21
- MQWISMJKHOUEMW-ULQDDVLXSA-N Phe-Arg-His Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MQWISMJKHOUEMW-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 19
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 18
- CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CPMKYMGGYUFOHS-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 17
- XOEDPXDZJHBQIX-ULQDDVLXSA-N Leu-Val-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XOEDPXDZJHBQIX-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 17
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M Pentobarbital sodium Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)[N-]C1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 17
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 17
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 16
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 15
- DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N Asp-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O DVUFTQLHHHJEMK-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 14
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 13
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 13
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 12
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 229960002275 pentobarbital sodium Drugs 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 9
- 210000000702 aorta abdominal Anatomy 0.000 description 9
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 9
- SICITCLFXRGKJW-IIZANFQQSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 SICITCLFXRGKJW-IIZANFQQSA-N 0.000 description 8
- 101100512078 Caenorhabditis elegans lys-1 gene Proteins 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 7
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 6
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 6
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 5
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 5
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 5
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 5
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 5
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 5
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 5
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 5
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 5
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N Asp-Val-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(O)=O XWKPSMRPIKKDDU-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 4
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 4
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 3
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- BCBFMJYTNKDALA-UFYCRDLUSA-N Val-Phe-Phe Chemical compound N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O BCBFMJYTNKDALA-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- JFUIHGAGFMFNRD-UHFFFAOYSA-N fica Chemical compound FC1=CC=C2NC(C(=O)NCCS)=CC2=C1 JFUIHGAGFMFNRD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- CFPQUJZTLUQUTJ-HTFCKZLJSA-N Ala-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](C)N CFPQUJZTLUQUTJ-HTFCKZLJSA-N 0.000 description 2
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 2
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WBPFYNYTYASCQP-CYDGBPFRSA-N Val-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)N WBPFYNYTYASCQP-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 2
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 230000007138 neurofibrillary change Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 2
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 206010061623 Adverse drug reaction Diseases 0.000 description 1
- 229910000838 Al alloy Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N Asn-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O QJMCHPGWFZZRID-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XEDQMTWEYFBOIK-ACZMJKKPSA-N Asp-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XEDQMTWEYFBOIK-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101100226898 Candida albicans (strain SC5314 / ATCC MYA-2876) FCA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000759568 Corixa Species 0.000 description 1
- 101100020227 Danio rerio klhl31 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- KJBGAZSLZAQDPV-KKUMJFAQSA-N Glu-Phe-Arg Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N KJBGAZSLZAQDPV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- UVTSZKIATYSKIR-RYUDHWBXSA-N Gly-Tyr-Glu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O UVTSZKIATYSKIR-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- ZZLWLWSUIBSMNP-CIUDSAMLSA-N His-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZZLWLWSUIBSMNP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- MDSUKZSLOATHMH-IUCAKERBSA-N Leu-Val Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C(C)C)C([O-])=O MDSUKZSLOATHMH-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100020229 Mus musculus Klhl31 gene Proteins 0.000 description 1
- MDSUKZSLOATHMH-UHFFFAOYSA-N N-L-leucyl-L-valine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(C)C)C(O)=O MDSUKZSLOATHMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029240 Neuritis Diseases 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 101800004193 Peptide P3 Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- YFXXRYFWJFQAFW-JHYOHUSXSA-N Phe-Thr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O YFXXRYFWJFQAFW-JHYOHUSXSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N Ser-Asn Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LTFSLKWFMWZEBD-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 241001104043 Syringa Species 0.000 description 1
- YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N Thr-Thr-Asp Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O YRJOLUDFVAUXLI-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 1
- DHINLYMWMXQGMQ-IHRRRGAJSA-N Val-His-His Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(O)=O)C1=CN=CN1 DHINLYMWMXQGMQ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 108010064397 amyloid beta-protein (1-40) Proteins 0.000 description 1
- 230000006933 amyloid-beta aggregation Effects 0.000 description 1
- FEWOUVRMGWFWIH-ILZZQXMPSA-N amyloid-beta polypeptide 40 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 FEWOUVRMGWFWIH-ILZZQXMPSA-N 0.000 description 1
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 229960000796 barbital sodium Drugs 0.000 description 1
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N barbitone sodium Natural products CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007596 consolidation process Methods 0.000 description 1
- 238000007428 craniotomy Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 201000011475 meningoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002025 microglial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000007171 neuropathology Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M sodium;5,5-diethylpyrimidin-3-ide-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCC1(CC)C([O-])=NC(=O)NC1=O RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0007—Nervous system antigens; Prions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/711—Natural deoxyribonucleic acids, i.e. containing only 2'-deoxyriboses attached to adenine, guanine, cytosine or thymine and having 3'-5' phosphodiester links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4711—Alzheimer's disease; Amyloid plaque core protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Mevcut buluşun bir amacı, bir bağışıklık yanıtının arttırılması için bir güvenli ve etkili yöntem ve arttırılmış bir bağışıklık yanıtını uyaran amiloid ß peptidi içeren Alzheimer hastalığının önlenmesi veya tedavi edilmesi için bir ilaç sağlanmasıdır. Sistein eklemesi veya katılması ile bir amiloid ß peptidi veya bir bölümü ve peptidi kullanan bir bağışıklık yanıtının arttırılması için bir yöntem veya bir adjuvanla birlikte peptidi kullanan bir bağışıklık yanıtının arttırılması için bir yöntem. Alzheimer hastalığının önlenmesi veya tedavi edilmesi için bir ilaç, arttırılmış bir bağışıklık yanıtını uyaran bir amiloid ß peptidi veya bir bölümünü içermektedir. Aynı etkiye sahip olabilen bir DNA aşısı, sistein eklemesi veya katılması ile arttırılmış bir bağışıklık yanıtını uyaran bir amiloid ß peptidi veya bir bölümünü kodlayan geni içermektedir.
Description
TEKNIK ALAN
Mevcut bulus, Alzheimer hastaliginin sebebi olan bir madde olan, amiloidden ß
(Aß) türetilen bir peptid veya sisteinin eklenmesi veya katilmasi ile onun bir
bölümünü içeren, bir arttirilmis immün yanita neden olan bir immunojen peptid
ile ilgilidir, sistein, bir amiloid ß peptid veya bir bölümünün N-ucundan sayilan
kalintilari arasina veya 28°inci ve 19”uncu amino asit kalintilari arasina
eklenmektedir. Mevcut bulus ayni zamanda, söz konusu peptidi bir aktif madde
olarak içeren Alzheimer hastaliginin önlenmesi veya tedavi edilmesi için bir ilaç
ile ilgilidir. Adjuvan olmadan kendisi arttirilmis bagisiklik yanita yeterli sekilde
neden oldugundan, mevcut bulusun immunojen peptidi, adjuvanin kullanimi ile
iliskili bir ters ilaç reaksiyonu olmadan önleme veya tedavi için bir ilaç olarak
güvenli sekilde kullanilabilmektedir.
ÖNCEKI TEKNIK
Bagisiklik, bakteri ve virüsler gibi istilaci yabanci organizmalara karsi kendini
koruyan biyolojik savunma mekanizmalarindan biridir ve lökositler vb`nin
fagositozu ile iliskili dogal bagisiklik ve belirli bir antijen/patojene karsi
kazanilmis bagisikligi içermektedir. Bir asi, bir patojene karsi kazanilmis
bagisikligin güvenli sekilde uyarilmasi için bir ilaçtir ve son zamanlarda, yalnizca
koruma için degil ayni zamanda tedavi için de kullanilmistir.
Bir asi, bir canli asi, bir inaktif asi, bir bilesen asisi ve benzerini içermektedir. Bir
canli asi, oldukça immunojendir ve uzatilmis bir immünolojik etkiye sahiptir
ancak ayni zamanda, patojenligin kalmasi veya geri dönmesi riskine sahiptir.
34819.04
Patojenligin ortadan kaldirilmasi için formalin vb ile virüslerin islenmesi ile
hazirlanan bir inaktif hale getirilmis asi, canli bir asidan daha güvenlidir ancak
elde edilen bagisikligin uzun olmama sorununa sahiptir.
Bir bilesen asi, bir ana bilesen olarak, bir patojenden bir asilama etkisine sahip
olan bir proteinin ekstrakte edilmesi ve aritilmasi ile hazirlanan veya genetik
mühendisligi teknikleri veya kimyasal süreçlerle hazirlanan bir antijenik protein
içermektedir ve istenmeyen proteinlerin kirlenmesinden uzak bir sekilde oldukça
güvenlidir. Son zamanlarda, bilesen asilardan biri olarak bir peptid asisi,
derinlemesine incelenmistir. Bir peptid, peptid bagi ile birbirine baglanan amino
asitlerden olusan bir moleküle karsilik gelmektedir. Genellikle, 10 veya daha az
amino asit kalintisi ile bir peptide, bir oligopeptid denilmektedir, 1007den az
amino asit kalintisi ile bir peptide, bir polipeptid denilmektedir (hem bir
oligopeptid hem de bir polipeptid burada bir “peptid” olarak anilmaktadir) ve 100
veya daha fazla amino asit kalintisina sahip olana bir protein denilmektedir.
Son zamanlarda, çesitli proteinlerin ve viral antijenik proteinlerin amino asit
dizileri, belirlenmektedir. Bu tür bir amino asit dizisine dayanarak yapay olarak
sentezlenen bir peptid, bir asi olarak kullanilmakta olup, bir peptid asisi olarak
anilmaktadir. Bir asi olarak bir peptidin kullanilmasinin avantaji, oldukça saf bir
antijenin, patojenik mikroorganizmalari kullanmadan yapay olarak elde
edilebilmesidir. Diger yandan, bir peptid küçük bir moleküler agirliga sahip
oldugundan ve dolayisiyla bagisiklamadaki canli vücutta bir yabanci madde
olarak fark edilmediginden yeterli bir bagisiklik etkisinin elde edilmesi zordur.
Dolayisiyla, bir peptid, bagisiklik etkisinin arttirilmasi için, bir yabanci madde
olarak fark edilmesi amaciyla bir tasiyici protein denilen büyük bir protein ile
birlestirilmektedir ve/veya bir adjuvanla (immünomodülatör) birlikte
uygulanmaktadir. Ancak, bu islemelerle, bir tasiyici proteine karsi bir antikorun
üretilebilmesi veya bir adjuvanin bir ters yan etkisine, beklenmedik sekilde neden
olunabilmesi mümkündür. Ayrica, bir adjuvanin arastirma seviyesinde etkili
oldugu ortaya çikarken, insanda kullanim için J aponya'da yalnizca bir alüminyum
34819.04
hidroksit jele izin verilmektedir.
Diger yandan, bir peptid asisi, Alzheimer hastaligi gibi hastaliklarin önlenmesi
ve/veya tedavi edilmesi için kullanim için denenmistir. Alzheimer hastaligi,
demans bozukluklarindan biridir ve temel belirtiler olarak bozulmus bilissel islev
ve kisilikte degisim ile iliskilendirilmektedir. Yaslanan popülasyonun hizli artisi
ile birlikte artan hasta sayisi, bir sosyal sorun haline gelmistir. Alzheimer
hastaliginin patolojik belirtileri, nöronlarda atrofi ve/veya bozulma, Aß
agregasyonu ve/veya depozisyonu nedeniyle yaslilik plaklarinin olusumu ve
anormal tau proteinleri nedeniyle nörofibriler degisimler olmak üzere üç özelligi
içermektedir. Alzheimer hastaliginin baslangici, Aß peptidlerinin depozisyonu ile
(yaslilik plaki olusumu) baslamakta olup, ardindan Aß depozisyonunda artisla
nöronlarin denatüre edilmesi ve bozulmasi gelmektedir. Sonra Aß peptidlerinin
depozisyonu, tau proteinlerinin depozisyonunu tetiklemekte olup, ardindan
nörofibriler degisimler gelmektedir. AB peptidi, beyinde ve vücutta bulunan bir
amiloid prekürsör peptidinden (APP) türetilmektedir. Normal süreçte, APP, ortada
a-sekretaz ile ve sonra, daha sonra tümüyle degrade edilen bir P3 peptidi
olusturmak için C-ucunda y-sekretaz ile bölünmektedir. Aß peptidi depozisyonu
durumunda, APP, ß-sekretaz ile ve sonra 40 veya 42 amino asit kalintisindan
olusan (Aß40, Aß42) Aß peptidlerinin olusturulmasi için C-ucunda 'y-sekretaz ile
bölünmektedir. Bunlar arasindan, kolay bir sekilde kümelenen ve biriken Aß42,
çözünmez hale gelmek için hücre disina salgilanmakta ve yaslilik plakalarinin
olusturulmasi için kümelenmekte ve birikmektedir. Aß42 peptidlerinin üretiminde
ve birikimindeki artis, bir sinapsi etkileyebilecektir. Ayrica, mikrogliyal hücreler
ve astrositler, kümelenmis Aß peptidleri etrafinda toplanmaktadir. Sinapsdaki ve
nöritteki hasarlarin, demansla sonuçlanan, nöronlarin dejenerasyonu ve hücre
ölümüne neden olmak üzere ilerledigi düsünülmektedir.
Simdilerde, bir tedavi yöntemi olan, Aß peptidlerinin hedeflenmesi, Aß
peptidlerinin azaltilmasi için degerlendirilmekte olup, örnek olarak, Aß
peptidlerini üreten sekretazlarin etkisinin inhibisyonu, üretilen Aß peptidlerini
34819.04
degrade edebilen bir Aß degrade edici enzimin kullanimi, hücre disina
salgilananlarin ve kümelenenlerin ve benzerinin ortadan kaldirilmasi için bir asi
veya bir antikorun kullanimini içermektedir.
Biriken AB peptidlerinin ortadan kaldirilmasi için AßSye karsi bir antikorun
üretilmesi için intramüsküler enjeksiyonla bir adjuvanla birlikte Aß42
peptidlerinin uygulanmasini içeren, Alzheimer hastaliginin bir asi ile tedavi
edilmesi yaklasimi ilk olarak Schenk ve digerleri (Patent olmayan referans 1)
tarafindan bildirilmektedir. Asi için bir klinik deneme, bir adjuvan olarak aritilmis
bir saponin ile birlikte Aß42 peptidini içeren bir ilacin intramüsküler olarak
uygulanmasi ile gerçeklestirilmektedir. Sonuç olarak, Aß peptidine özgü bir
antikorun, Alzheimer hastaligi hastalarinda, asinin uygulanmasi ile üretildigi ve
AB peptidine özgü antikorun üretiminin, Alzheimer hastaligi hastalarinda bilissel
rahatsizligin gelisimi geciktirebildigi gösterilmistir (Patent olmayan referans 2) ve
yaslilik plaklarinin yok oldugu kanitlanmistir (Patent olmayan referans 3). Ancak,
Ciddi meningoensefalit, bazi deneklerde gözlendiginden, klinik deney,
sonlandirilmistir. Ters yan etki nedenlerinden birinin, asida bulunan adjuvan
oldugu varsayilmaktadir. Dolayisiyla, bir peptid asisi için, etkili ve güvenli olan
bir formülasyonun gelistirilmesi, çok istenmektedir.
Daha önce, amiloid için özel maddeler, özellikle, amiloide özgü aptamerler, örn
Alzheimer hastaliginin teshisi ve/veya tedavisi için kullanimlari ile birlikte
açiklanirken, bu amiloide özgü aptamerlerin, nükleazlara karsi stabilize edildikleri
açiklanmaktadir (Patent referansi l).
Patent olmayan referans l: Schenk D, Barbour R, Dunn W, Gordon G, Grajeda
H, Guido T, et al., Immunization With amiloid-beta attenuates Alzheimer
disease -disease-like pathology in the PDAPP mouse. Nature 1999; 400:
Patent olmayan referans 2: Fox NC, Black RS, Gilman S, Rossor MN, Griffith
SG, Jenkins L, et al. Effects of A beta immunization (AN1792) on MRI
34819.04
measures of cerebral volume in Alzheimer disease. Neurology 2005; 64:
p.1563-1572
Patent olmayan referans 3: Nicoll JA, Wilkinson D, Holmes C, Steart P,
Markham H, Weller RO. Neuropathology of human Alzheimer disease after
immunization with amiloid-beta peptide: a case report. Nat Med 2003; 9:
p.448-452
BULUSUN AÇIKLAMASI
(Bulus ile çözülecek Teknik Sorun)
Yukarida bahsedildigi gibi, bir adjuvan etkisine sahip oldugu bilinen maddelerin,
adjuvan etkisinin aksine ters yan etkiler uygulayabilmesi endisesi bulunmaktadir.
Dolayisiyla, mevcut bulusun bir amaci, canli vücut için güvenli oldugu daha önce
dogrulanmis olan bir maddeyi ve söz konusu yöntemde kullanim için bir
arttirilmis bagisiklik yanitini uyaran bir immünojenik peptidi kullanan bir
bagisiklik yanitinin arttirilmasi için yeni bir yöntemin saglanmasidir.
(Sorunlarin Çözülmesi için Araçlar)
Mevcut mucitler, canli vücut için, güvenli, etkili ve ucuz olan bagisiklama için ve
bagisiklamanin arttirilmasi için bir yöntemi ciddiyetle arastirmistir ve sonuç
olarak, ilgili bir peptidin arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyarma kapasitesinin,
mevcut bulusun gerçeklestirilmesi için, bir sistein kalintisi, bir dogal olarak olusan
protein olusturan bir amino asidin eklenmesi veya katilmasi ile arttirilabildigini
bulmustur.
Dolayisiyla, Aß peptidine veya bir bölümüne sisteinin eklenmesi veya katilmasi
ile karakterize edilen, Alzheimer hastaligina neden olan bir madde veya onun bir
bölümü olan, Aß'den türetilen bir peptidin bir bagisiklik yaniti tetikleyici
34819.04
özelligin arttirilmasi için bir yöntem açiklanmaktadir. Mevcut bulus, istemlerde
karakterize edilmektedir. Dolayisiyla, asagidaki maddeler (1) ila (1 1) ile ilgilidir.
(l.) Peptide özgü bir antikorun tetiklenmesi ile arttirilmis bir bagisiklik
yanitina neden olan bir immünojenik peptid, söz konusu immünojenik peptid,
en azindan SEKANS KIMLIK NO:34`ün 28N-ucu amino asitlerini içeren ve
en az bir sisteinin bir eklenmesi veya katilmasina sahip olan bir amiloid ß
peptidi veya onun bir bölümünü içermektedir, sistein, söz konusu amiloid ß
peptidi veya bir bölümünün N-ucundan sayilan 18,inci ve l9”uncu amino asit
kalintilari arasina, 25sinci ve 26'nc1 amino asit kalintilari arasina veya 28linci
ve 29 uncu amino asit kalintilari arasina eklenmektedir.
NO: 12, SEQ. ID NO: 21, SEKANS KIMLIK NO: 23, SEKANS KIMLIK
NO: 52, SEKANS KIMLIK NO: 54 ve SEKANS KIMLIK NO: 56”dan olusan
gruplardan seçilen bir amino asit dizisinden olusan (l.)”in immünojenik
(3.) (1) veya (2),nin immünojenik peptidini içeren bir ilaç.
(4.) Bir adjuvanla birlikte (1) veya (2),nin immünojenik peptidini içeren bir
(5.) (1) veya (2),nin immünojenik peptidinin amino asit dizisini kodlayan bir
gen fragmentini içeren bir DNA asisi.
(6.) Bir immün yanitin arttirilmasinda kullanim için (1) veya (2),nin
immünojenik peptidi.
34819.04
(7.) Bir bagisiklik yanitinin arttinlmasinda kullanim için bir adjuvanla birlikte
(1) veya (2),nin immünojenik peptidi.
(8.) Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasinda kullanim için (1) veya (2)'nin
immünojenik peptidinin bir amino asit dizisini kodlayan bir gen fragmentini
içeren bir vektör içeren bir DNA asisi.
(9.) Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasi için bir ilacin hazirlanmasi için (1)
veya (2),nin immünojenik peptidinin kullanimi.
(10.) Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasi için bir ilacin hazirlanmasi için bir
adjuvanla birlikte (1) veya (2)7nin immünojenik peptidinin kullanimi.
(11.) Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasi için bir ilacin hazirlanmasi için (5)
veya (8),in DNA asisinin kullanimi.
BULUSUN ETKILERI
Mevcut bulus, bir adjuvan olmadan yalniz kullanilsa bile arttirilmis ve yeterli bir
bagisiklik yanitini uyaran bir immünojenik peptidi saglamaktadir. Mevcut bulusa
göre, sisteinin, bir amiloid ß peptidi veya bir bölümünün N-ucundan sayilan
kalintilari arasina veya 287inci ve 29 uncu amino asit kalintilari arasina eklendigi,
amiloid ß peptidi veya bir bölümüne sistein kalintilarinin eklenmesi veya
katilmasi ile, bir immünojenik peptidin antikor üretimi, arttirilabilmektedir.
Dolayisiyla, bir ilaç formülasyonunun daha kolay tasarlanmasina olanak
taninmasi için bir adjuvanin kullanimi ile iliskili bir dezavantaj bulunmamaktadir.
Canli vücuda uygulandiginda, arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran mevcut
bulusun immünojenik peptidi, kandaki peptide özgü bir antikoru hizli bir sekilde
34819.04
ve tamamen uyarabilmektedir. Sisteinin toksisitesi bilinmemektedir ancak bunun
yerine sistein ve ilgili maddelerinin, canli vücutta bir antitoksik etkiye sahip
oldugu bilinmektedir ve dolayisiyla arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran
mevcut bulusun immünojenik peptidi, vücutta çok güvenli bir sekilde
kullanilabilmektedir.
Bir peptid asisi olarak kullanildiginda, bir arttirilmis bagisiklik yanitini uyaran
mevcut bulusun immünojenik peptidi, bir aktif madde olarak yalnizca sistein
eklemesi veya katilmasi ile immünojenik peptid içeren en basit asi olabilmektedir.
Sistein eklemesi veya katilmasi ile bu tür bir immünojenik peptid, biyolojik sentez
olmadan kimyasal sentezle ve dolayisiyla geleneksel bilesen asilarindan daha
birörnek sekilde hazirlanabilmektedir. Ayrica, düsük toksisite, enfeksiyon riski ve
kirlenme nedeniyle kalitede azalma ile, daha güvenli bir asi saglanabilmektedir.
Arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran mevcut bulusun immünojenik peptidini
içeren bir peptid preparati, yalnizca subkütan veya intramüsküler uygulama gibi
enjeksiyonla degil ancak ayni zamanda siringa ignesinin neden oldugu stres ve
tibbi kazalari önleyecek oral, transnazal veya transdermal uygulama ile
uygulanabilmektedir.
BULUSUN GERÇEKLESTIRILMESI IÇIN EN IYI MOD
Arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran mevcut bulusun immünojenik peptidinin
hazirlanmasi için, bir sistein kalintisinin, AB peptidi veya bir bölümüne
eklenmekte olup, sistein, bir amiloid ß peptidi veya bir bölümünün N-ucundan
sayilan l8sinci ve 199uncu amino asit kalintilari arasina, 25'inci ve 263nci amino
asit kalintilari arasina veya 28,inci ve 29 uncu amino asit kalintilari arasina
eklenmektedir veya alternatif olarak, bir nükleotid dizisi kodlayan sistein,
ekspresyon için AB peptidi veya bir bölümünün DNA veya RNA dizisine
eklenebilmekte veya ilave edilebilmektedir. AB peptidi veya bir bölümünde sistein
eklenme veya insersiyon konumuna göre, ekleme durumunda, sisteinin, peptidin
34819.04
N-ucu veya C-ucu veya her ikisine eklenebildigi ve insersiyon durumunda,
sisteinin, peptidde herhangi bir konuma eklenebildigi açiklanmaktadir. Peptidin
C-ucuna ekleme tercih edilmektedir, 1 veya 2 sistein kalintisi eklenebilmektedir.
Ancak, bagisiklik yaniti arttici etkinin elde edilebildigi ölçüde, ekleme ve
insersiyon konumu veya sistein kalintilarinin sayisi özellikle sinirlanmamaktadir.
Mevcut bulusun bir baska yönünde, sistein yerine, sistein içeren bir peptid ayni
zamanda, peptidin C-ucuna eklenebilmektedir.
Aß peptidi, 42 amino asit kalintisindan (Aß42) olusmaktadir ve asagidaki amino
asit dizisine sahiptir:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA (SEKANS
KIMLIK NO: 34). Sistein (Cys), arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran mevcut
bulusun immünojenik peptidinin saglanmasi için AB peptidi veya bir bölümüne
eklenebilmekte veya ilave edilebilmektedir. Aß peptidinin bir bölümü, Aß42°nin
yukarida bahsedilen amino asit dizisinin en az l,inci-28,ineisini içeren bir amino
asit dizisinden olusanlari içermektedir. Alternatif olarak, sistein içeren bir peptid,
Aß peptidine veya bir bölümüne eklenebilmektedir. Arttirilmis bir bagisiklik
yanitini uyaran böylece elde edilen immünojenik peptid, Alzheimer hastaliginin
önlenmesi veya tedavi edilmesi için etkilidir.
Özellikle, arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran mevcut bulusun immünojenik
peptidinin tercih edilen bir örnegi, eklenmis veya ilave edilmis bir sistein
kalintisinin, vurgulandigi, sisteinin eklenmesi veya katilmasi ile asagidaki AB
peptidlerini içermektedir.
(l) C-ucuna l molekülün eklenmesi ile peptid
28AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKÇ (SEKANS KIMLIK NO: 6)
29AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGÇ (SEKANS KIMLIK NO: 8)
30AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAÇ (SEKANS KIMLIK NO: 10)
34819.04
31AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIÇ (SEKANS KIMLIK NO: 12)
35AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMÇ (SEKANS KIMLIK NO:
36AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAllGLMVQ(SEKANS KIMLIK
NO: 23) 37AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGÇ (SEKANS KIMLIK
NO: 25) 38AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGQ (SEKAN S KIMLIK
NO: 27) 39AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVC_(SEKANS
KIMLIK NO: 29) 40AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVÇ (SEKANS
KIMLIK NO: 32) 42AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIAQßEKANS
KIMLIK NO: 36)
(2) C-terminalde 2 molekülün eklenmesi ile peptit:
28AACysCys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKQSEKANS KIMLIK NO: 38)
(3)N-terminalde l molekülün eklenmesi ile peptit:
ÇDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK (SEKANS KIMLIK NO: 40)
(4) N-terminali ve C-terminalinde her bir ] molekülün eklenmesi ile peptit:
Cy328AACys:
ÇDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKÇ (SEKANS KIMLIK NO: 42)
(5) l molekülün eklenmesiyle peptit:
28AA18Cys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVCFFAEDVGSNK (SEKANS KIMLIK NO: 46)
28AA25Cys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGCSNK (SEKANS KIMLIK NO: 48)
33AA28Cys:
34819.04
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKCGAHG (SEKANS KIMLIK NO: 50)
35AA28Cys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKCGAIIGLM (SEKANS KIMLIK NO:
(6)C-terminalde l molekülün eklenmesiyle peptit + egzojen peptitin eklenmesi (Egzojen
peptiti, eklenen sistein kalintisinln C-terminalinde konumlandirilmistlr):
28AACysTTD:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKCT TD (SEKANS KIMLIK NO: 54)
28AACysEIFEFTTD:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSN KCEIFEFT TD (SEKANS KIMLIK NO:
Yukarida bahsedilen sisteinin eklenmesi veya katilmasi ile AB peptidleri arasinda,
sistein eklemesi ile 28-amino asitli Aß peptidi (28AACys: SEKANS KIMLIK
NO: 6), sistein eklemesi ile 29-amino asitli AB peptidi (29AACys: SEKANS
KIMLIK NO: 8), sistein eklemesi ile 3l-amin0 asitli Aß peptidi (3IAACys:
SEKANS KIMLIK NO: 12), sistein eklemesi ile 35-amin0 asitli Aß peptidi
(35AACys: SEKANS KIMLIK NO: 21), sistein eklemesi ile 36-amin0 asitli Aß
peptidi (36AACys: SEKANS KIMLIK NO: 23), sistein eklemesi ile 39-amin0
asitli Aß peptidi (39AACys: SEKANS KIMLIK NO: 29), sistein eklemesi ile 40-
amino asitli Aß peptidi (40AACys: SEKANS KIMLIK NO: 32), sistein eklemesi
ile 42-amin0 asitli Aß peptidi (42AACys: SEKANS KIMLIK NO: 36), C-ucuna 2
sistein eklemesi ile 28-amin0 asitli Aß peptidi (28AACys: SEKANS KIMLIK
NO: 38) ve 18°inCi-19Iuncu amino asit kalintilari arasina sisteinin katilmasi ile
28- amino asitli AB peptidi (28AA18Cys: SEKANS KIMLIK NO:46) özellikle,
arttirilmis bagisiklik yanitini uyarabilmektedir ve dolayisiyla, Azheimer
hastaliginin etkili bir sekilde önlenmesi ve tedavi edilmesi için
kullanilabilmektedir.
Mevcut bulusa göre, arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran bir peptid, bir
amiloid ß peptidi veya bir bölümünün N-ucundan sayilan 183inci ve 19”uncu
amino asit kalintilari arasina, 25iinci ve 263nci amino asit kalintilari arasina veya
34819.04
287inci ve 29 uncu amino asit kalintilari arasina sisteinin eklenmesi ile
hazirlanabilmektedir.
Sisteinin eklenmesi veya katilmasindan sonra elde edilen bir peptidin, bir
bagisiklik yaniti-arttirici etkisi uygulayip uygulamamasi, geleneksel teknikler
kullanarak ve kanda bir anti- Aß IgG antikoru titresi belirleyerek peptidle farenin
bagisiklamasi ile desteklenebilmektedir. Dolayisiyla, ayni zamanda, Aß peptidinin
veya bir bölümünün N -ucuna, C-ucuna veya N -ucu ve C-ucunun her ikisine de bir
veya daha fazla sistein eklenmesi veya peptide bir veya daha fazla sistein
eklenmesi, elde edilen peptidle bir hayvanin bagisiklanmasi ve sonra hayvanin
kaninda bir anti- Aß IgG antikoru titresi belirleme ile karakterize edilen arttirilmis
bir bagisiklik yanitini uyaran bir immünojenik peptidin hazirlanmasi için bir
yöntem açiklanmaktadir.
Arttirilmis bir bagisiklik yaniti uyarici özellige sahip olan mevcut bulusun
immünojenik peptidini içeren bir peptid preparati, subkütan, transdermal,
intramüsküler, oral veya transnazal gibi herhangi bir uygulama yolu ile
uygulanabilmektedir.
Arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran mevcut bulusun immünojenik peptidi, bir
adjuvansiz tek basina uygulansa bile yeterli bagisiklamayi saglayabilirken, ayrica,
bir adjuvanla birlikte oldugunda yeterli bagisiklama saglayabilmektedir.
Dolayisiyla, örn, bagisiklama arttirici bir etkiye önem veren bir adjuvan veya bir
güvenlige önem veren bir adjuvan gibi çesitli adjuvan tiplerinin seçilmesi
mümkün hale gelecektir.
Ayrica, Aß peptidi veya bir bölümüne sisteinin eklenmesi veya katilmasi ile elde
edilen arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran yukarida belirtildigi gibi mevcut
bulusun immünojenik peptidlerinin her birini kodlayan bir gen fragmentini içeren
bir vektör, Alzheimer hastaliginin etkili bir sekilde önlenmesi ve tedavi edilmesi
için bir DNA asisi olarak kullanilabilmektedir. Bir nükleotid dizisi kodlayan
34819.04
sistein, örn, tgt içermektedir ancak sisteini kodladigi kadariyla herhangi bir dizi
olabilmektedir. Yukarida bahsedilen 42 amino asit kalintisindan (SEKANS
KIMLIK NO: 34) olusan Aß peptidinin (Aß42) amino asit dizisini kodlayan bir
gen fragmenti, asagida açiklanmaktadir. Ancak, asagida açiklanan nükleotid
dizisi, AB peptidinin tipik bir gen dizisini göstermektedir ancak ayni amino asit
dizisini kodladigi için, herhangi bir gen dizisi kullanilabilmektedir.
atagcg (SEKANS KIMLIK NO: 35)
Aß peptidi veya bir bölümüne sisteinin eklenmesi veya katilmasi ile elde edilen
arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran yukarida belirtildigi gibi mevcut bulusun
immünojenik peptidlerinin her birini kodlayan bir gen fragmentinin bir örnegi
asagida açiklananlari içermektedir. Ancak, asagida açiklanan nükleotid diziler,
yukarida bahsedilen peptidlerin her birini kodlayan tipik bir gen dizisini
göstermektedir ancak ayni amino asit dizisini kodladigi için, herhangi bir gen
dizisi kullanilabilmektedir.
26AACvs>yi kodlayan gen fragmenti:
ggtgttcttt gcagaagatg tgggttcatgt (SEKANS KIMLIK NO: 2)
27AACVssvi kodlavan gen fragmenti:
gcagaagatg tgggttcaaa ctgt (SEKAN S KIMLIK NO: 4)
28AACVssvi kodlavan gen fragmenti:
34819.04
gcagaagatg tgggttcaaa caaaggg (SEKANS KIMLIK NO: 7)
29AACvs`yi kodlayan gen fragmenti::
gcagaagatg tgggttcaaa caaaggtggi (SEKANS KIMLIK NO: 9)
30AACVssvi kodlavan gen fragmenti:
gcagaagatg tgggttcaaa caaaggtgoa ggt_(SEKANS KIMLIK NO: 11)
31AACvs1yi kodlayan gen fragmenti:
gcagaagatg tgggttcaaa caaaggtgca atc:gL(SEKANS KIMLIK NO: 13)
32AACvs9vi kodlavan gen fragmenti:
gcagaagatg tgggttcaaa caaaggtgca atcattggt_(SEKANS KIMLIK NO: 15)
33AACvs'yi kodlayan gen fragmenti:
gcagaagatg tgggttcaaa caaaggtgca atcattggat gt (SEKANS KIMLIK NO:
34AACVssvi kodlavan gen fragmenti:
34819.04
KIMLIK NO: 19)
35AACvssvi kodlavan gen fragmenti::
gcagaagatg tgggttcaaa caaaggtgca atcattggac tcatgggi (SEKANS
KIMLIK NO: 22)
36AACys°yi kodlayan gen fragmenti:
gcagaagatg tgggttcaaa caaaggtgca atcattggac tcatggtgt_q_t (SEKANS
KIMLIK NO: 24)
37AACys'yi kodlayan gen fragmenti:
(SEKANS KIMLIK NO: 26)
38AACysIyi kodlayan gen fragmenti:
(SEKANS KIMLIK NO: 28)
39AACsz/i kodlavan gen fragmenti:
34819.04
(SEKANS KIMLIK NO: 30)
40AACVS,VI kodlavan gen fragmenti:
gg; (SEKANS KIMLIK NO: 33)
42AACVssvi kodlavan gen fragmenti:
atagcgggg (SEKANS KIMLIK NO: 37)
28AACVSCVS'VI kodlavan gen fragmenti:
tgggttcaaa caaatgttgt (SEKANS KIMLIK NO: 39)
CVSZSAA°V1 kodlavan gen fragmenti:
tttgcagaag atgtgggttc aaacaaa (SEKANS KIMLIK NO: 41)
Cvs28AACVs'vi kodlavan gen fragmenti:
tttgcagaag atgtgggttc aaacaaaigg (SEKANS KIMLIK NO: 43)
28AA18Cvs9vi kodlavan gen fragmenti:
34819.04
tttgcagaag atgtgggttc aaacaaa (SEKANS KIMLIK NO: 47)
28AA25CVS'VI kodlavan gen fragmenti:
gcagaagatg tgggtggitcaaa caaa (SEKANS KIMLIK NO: 49)
33AA28Cvs9vi kodlavan gen fragmenti:
gcagaagatg tgggttcaaa caaagggggt gcaatcattg ga (SEKANS KIMLIK NO:
35AA28Cvs'yi kodlayan gen fragmenti:
gactcatg (SEKANS KIMLIK NO: 53)
28AACVSTTD'VI kodlavan gen fragmenti:
ggtgttcttt gcagaagatg tgggttcaaa caaagggact actgac (SEKANS
KIMLIK NO: 55)
28AACVSEIFEF'TTDWI kodlavan gen fragmenti::
tcactactga c (SEKANS KIMLIK NO: 57)
34819.04
Mevcut bulus, asagidaki Örnekler araciligiyla daha ayrintili açiklanmaktadir
ancak bunlarla sinirlanacak sekilde yorumlanmamalidir.
Sisteinin eklenmesi ile ve eklenmeden AB peptidleri arasindaki antikor uyarma
yeteneginin karsilastirilmasi
(l) Sisteinin eklenmesi ile AB peptidlerinin hazirlanmasi
28AA:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK (SEKANS KIMLIK NO:
28AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKC_(SEKANS KIMLIK NO:
35AA:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLM (SEKANS
KIMLIK NO: 20) 35AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMÇ(SEKANS KIMLIK
Yukaridaki peptidler, sentezlenrnekte (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve bir
Smg/mL'lik stok çözeltinin elde edilmesi için salin ile seyreltilmektedir. IOOuL
stok çözeltiye, 0,5 mg/mL yogunlukta salinden 900iiL eklenmektedir ve karisim,
1,5mL7lik tüp (immünojen) içerisine bosaltilmaktadir ve kullanima kadar -80°C
veya altinda saklanmaktadir.
(2) Bagisiklanmis Fareler
Erkek C57BL/6 fare (7 haftalik, SPF), Japan Charles River C0., Ltd.”den
34819.04
alinmistir ve SPF ortaminda beslenmektedir.
(3) Bagisiklama Gruplari
16 fare, her biri 4 fare içeren 4 gruba bölünmektedir: 28AA uygulanan Grup 1;
28AACyS uygulanan Grup 2; 35AA uygulanan Grup 3 ve 35AACys uygulanan
(4) Bagisiklama ve çizelge
Bir immünojenden her 200uL/fare, fareye bir 1 lelik tüberkülin sinnga
kullanarak (Terumo, SS-01T2613s) intradermal olarak veya subkütan olarak
karma (fare basina doz: 10014 g) uygulanmaktadir. Fare, 3 kez 2 haftalik araliklarla
bagisiklanmaktadir.
(5) Kan Örnegi alimi
Ziinci bagisiklamanin 7 inci gününde, 50 ila 150uL kan, kuyruk damarindan
alinmaktadir. Ayrica, son 3`üncü bagisiklamadan sonra Tinci gün, kan, pento-
barbital sodyum ile (Kyoritsu Seiyaku Corporation, Somnopentyl) anestezi altinda
tüm farelerin abdominal aortundan alinmaktadir. Örnek kan, Microtainer'a
(Becton Dickinson Co., Ltd) aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda
gerçeklesmektedir ve sonra 5,000 rpm”de (dakikada devir sayisi) 10 dk.
santrifüjlenmektedir. Ayrilan serumun her biri, iki 0,5 lelik tüpe
bosaltilmaktadir ve ölçüme kadar -80 °C veya daha altinda saklanmaktadir.
(6) Anti-AB IgG antikorunun Ölçülmesi
0,1M karbonat tampon ile lOug/leye seyreltilen, pH 9,6 olan, AB peptidi (1-40
amino asit dizisi: Hokkaido System Science Co., Ltd. tarafindan sentezlenen
DAEFRHDS GYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV (SEKANS
34819.04
KIMLIK NO: 31)) 8 kuyulu seritlere (Nalge Nunc K.K., Immobilizer Amino)
lOOuL/kuyu oraninda eklenmektedir ve 4°C7de gece boyunca hareketsiz inkübe
edilmek üzere birakilmaktadir. Sonraki gün, her kuyu, 3 kez %0,05 Tween20
(PBST) içeren PBSlden 300uL ile yikanmaktadir, 300uL/kuyu oraninda 10mM
etanolamin eklenmektedir ve oda sicakliginda 1 saat inkübe edilmek üzere
birakilmaktadir.
1 saat sonra, 10 mM etanolamin tümüyle ortadan kaldirilmaktadir ve 50- ila
10000kat PBST ile seyreltilen bir örnek, 100uL/ kuyu oraninda her kuyuya
eklenmektedir. Oda sicakliginda 1 saat reaksiyondan sonra, eklenen seyreltilmis
serum, atilmaktadir ve her kuyu, 3 kez 300uL/kuyu PBST ile yikanmaktadir.
Yikamadan sonra, kuyudaki yikanma çözeltisi tümüyle alinmaktadir, 2000-kat
örnek seyrelti için çözelti ile seyreltilen bir HRP-etiketli anti-fare IgG keçi
antikoru (American Curlex, A131PS), 100uL/kuyu oraninda eklenmektedir,
ardindan 1 saat oda sicakliginda reaksiyon gelmektedir. Reaksiyondan sonra,
etiketli antikor seyreltisi için çözelti atilmaktadir ve her kuyu, 300pL/kuyu PBS
ile iki kez ve esit miktarda damitilmis su ile iki kez yikanmaktadir, buna,
lOOuL/kuyu'luk bir kromojenik substrat çözeltisi TMB+ (Dako Inc.)
eklenmektedir, ardindan gölge altinda oda sicakliginda 30 dakika reaksiyon
gelmektedir. Sonra, lOOuL/kuyu IN sülfürik asit, gelisimi basitmak için
eklenmektedir ve 450nm,de (OD459 value) optik yogunluk, ölçülmektedir.
AB (CHEMI-CON Corporation, MAB1560),ye ticari olarak mevcut bir
monoklonal antikor, standart serum olarak kullanilmaktadir. Standart serum,
antikor titresi ölçümü için standartlarin hazirlanmasi için PBST ile 0,156, 0,3125,
anti- Aß IgG antikoru belirlenmektedir ve es zamanli olarak her seyreltilmis
örnegin OD450 degeri ölçülmektedir. Her fare serumu Örneginin bir anti- Aß lgG
antikor titresi, elde edilen standartlarin birimini ve OD450 degerinin standart
egrisini kullanarak hesaplanmaktadir.
34819.04
Tablo 1, her bagisiklama grubundaki fare serumunun hesaplanan anti- Aß antikoru
titresini göstermektedir. Tablo l,de gösterildigi gibi, sistein eklenmeden (28AA,
35AA) Aß peptidi fragmentleri ile bagisiklamaya kiyasla, sistein eklemesi ile
(28AACys, 35AACys) Aß peptidi fragmentleri ile bagisiklama, Aß,ye karsi daha
yüksek bir antikor titresi saglamaktadir. Antikor titresindeki artis, sistein
eklenmesi ile 28AA için yaklasik 39 kat ve sistein eklenmesi ile 35AA için
yaklasik 26 kat gözlenmektedir.
34819.04
Grup Hayvan No. Antikor titresi (ng/mL)
3lüncü uygulamadan sonra 2,inci uygulamadan sonra 7. gün
7inci gün
1 216.6 35.1
2 149.7 21.0
1 78.7 34.4
Sistein eklemesi ile AB peptidi ve tasiyiciya bagli AB peptidi
gadjuvanli/adjuvansizi arasinda antikor uyarma yeteneginin karsilastirmasi
(1) Sistein eklemesi ile Aß peptidinin ve tasiyiciya bagli Aß peptidinin
hazirlanmasi28AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKC (SEKANS KIMLIK NO:
34819.04
28AA-KLH:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK-C-KLH
Yukaridaki peptidler sentezlenmektedir (KITAYAMA LABES Co., Ltd.) ve
kullanima kadar -80°C`de veya daha düsükte saklanan bir lmg/mUlik stok çözelti
elde edilmesi için salin ile seyreltilmektedir. KLH (keyhole limpet hemosiyanin),
60kDa,lik bir tasiyici proteindir. 28AA-KLH”de Cys, 28AA peptidi KLH ile
birlestirmek için bir baglayici olarak kullanilmaktadir ve bagisiklik yaniti etkisinin
arttirilmasini amaçlamamaktadir. Cys kullanarak bir tasiyici proteini immünojenik
peptidle birlestirmek, peptid bagisiklamasi için rutin bir yöntemdir.
(2) Adjuvan
Ticari olarak mevcut olan, tam Freund adjuvani (burada “FCA” olarak anilan),
tam olmayan Freund adjuvani (burada “FICA” olarak anilan), (GERBU, #1841,
(Brenntag) adjuvan olarak kullanilmaktadir.
(3) Uygulanan Fareler
Erkek C57BL/6 fareler (9 haftalik, SPF), Japan Charles River C0., Ltdfden
alinmistir ve SPF ortaminda beslenmektedir.
(4) Bagisiklama gruplari
fare, her biri 5 fare içeren 5 gruba bölünmektedir: 28AACys uygulanan Grup
1; 28AA-KLH uygulanan Grup 2; 28AA-KLH + FCA/FICA uygulanan Grup 3;
28AA-KLH + Gerbu adjuvani MM uygulanan Grup 4 ve 28AA-KLH +
Alhydrogel ,852% uygulanan Grup 5.
(5) Uygulama için örnegin dozu ve hazirlanmasi
34819.04
Aß peptidinin bir birincil dozu, hayvan basina 100ug°dir ve üçüncü doz, hayvan
basina 50 pgadir. Yani, 28AACys uygulanan grup için birinci] dozun hazirlanmasi
için, 28AACys,den 0,5 mL ve salinden 0,5mL karistirilmaktadir ve ikinci ve
üçüncü dozlarin hazirlanmasi için, 28AACys°den 0,25mL ve salinden 0,75mL
karistirilmaktadir. 28AA-KLH uygulanan grup için birincil dozun hazirlanmasi
için, 28AA-KLH,den 0,5 mL ve tuzdan 0,5mL karistirilmaktadir ve ikinci ve
üçüncü dozlarin hazirlanmasi için, 28AA-KLH,den 0,25mL ve salinden 0,75mL
karistirilmaktadir. 28AA-KLH + FCA/FICA uygulanan grup için birincil dozun
hazirlanmasi için, 28AA-KLH°nin 0,5mL ve FCA1dan 0,5mL, asiltilastirilmak
için karistirilmaktadir ve ikinci ve üçüncü dozlarin hazirlanmasi için, 28AA-
KLH”den 0,25mL, salinden 0,25 mL ve FICA7dan 0,5mL, asiltilastirilmak için
karistirilmaktadir. 28AA-KLH + Gerbu adjuvani MM uygulanan grup için birinci]
dozun hazirlanmasi için, 28AA-KLH°den 0,5mL, salinden 0,4mL ve Gerbu
adjuvani MM'den 0,1 mL karistirilmaktadir ve ikinci ve üçüncü dozlarin
hazirlanmasi için, 28AA-KLH`den 0,25mL, salinden 0,65mL ve Gerbu adjuvani
MMiden 0,1mL karistirilmaktadir. 28AA-KLH + Alhidrojel %”85,2 uygulanan
grup için ilk dozajin hazirlanmasi için, 28AA-KLH,den 0,5mL ve Alhidrojel
karistirilmaktadir.
(6) Bagisiklama ve çizelge
Bir immünojenden her ZOOpL/fare, fareye bir '1 mL'lik tüberkülin siringa
kullanarak (Temmo, SS-01T2613s) intradermal olarak veya subkütan olarak
karina (fare basina doz: lOOii g) uygulanmaktadir. Fare, 3 kez 2 haftalik araliklarla
bagisiklanmaktadir.
(7) Kan Örnegi Alimi
34819.04
Son 3üncü bagisiklamamn 7 inci gününde, kan, pentobarbital sodyum ile
(Kyoritsu Seiyaku Corporation, Somnopentyl) anestezi altinda tüm farelerin
abdominal aortundan alinmaktadir. Örnek kan, Microtainer'a (Becton Dickinson
Co., Ltd) aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda gerçeklesmektedir ve
sonra 5,000 rpm°de 10 dk. santrifüjlenmektedir. Ayrilan serumun her biri, iki 0,5
mL,lik tüpe bosaltilmaktadir ve ölçüme kadar -80 °C veya daha altinda
saklanmaktadir.
(8) Anti-AB IgG antikorunun ölçülmesi
Anti- AB IgG antikorunun ölçülmesi, yukarida açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir. Tablo 2, her bagisiklama grubunda fare serumunun
hesaplanan anti- Aß antikoru titresini göstermektedir. Tablo 2”de gösterildigi gibi,
tani/tam olmayan Freund adjuvani ile birlikte bir tasiyici KLHlnin eklenmesi ile
Aß peptidi fragmenti, Aßsye karsi en yüksek antikor titresini saglamaktadir. Ikinci
en yüksek antikor titresi, sistein eklemesi ile AB peptide fragmenti ile saglanmakta
olup, bir adjuvan olarak, Gerbu adjuvani MM (GERBU) veya Alhidrojel %85?
veya bir tasiyici KLH eklemesi ile Aß peptidi fragmentini kullananlardan büyük
oranda daha yüksektir.
Antikor titresi (ng/mL)
Grup Hayvan No. 1 2 3 4 5 Ortalama
Uzunlukta 26-40 amino asit dizisine sahip olan sistein eklemesi ile AB peptidleri
arasinda antikor uyarma yeteneginin karsilastirmasi
34819.04
(1) Sistein eklemesi ile AB peptidlerinin hazirlanmasi
26AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSC (SEKANS KIMLIK NO: 1)
27AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNC (SEKANS KIMLIK NO: 3)
28AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKC (SEKANS KIMLIK NO: 6)
29AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGC (SEKANS KIMLIK NO: 8)
30AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAC (SEKANS KIMLIK NO: 10)
31AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIC (SEKANS KIMLIK NO:
32AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIC (SEKANS KIMLIK NO:
33AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGC (SEKANS KIMLIK NO:
16) 34AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLC (SEKANS KIMLIK
NO: 18) 35AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMC (SEKANS KIMLIK
36AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVC (SEKANS KIMLIK
37AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGC (SEKANS
KIMLIK NO: 25)
38AACys:
34819.04
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGC (SEKANS
KIMLIK NO: 27)
39AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVC (SEKANS
KIMLIK NO: 29)
40AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVC (SEKANS KIMLIK
Yukaridaki peptidler sentezlenmekte (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve bir
Smg/mLWik stok çözeltinin elde edilmesi için salin ile seyreltilmektedir. lOOuL
stok çözeltiye, 0,5 mg/mL yogunlukta salinden 900uL eklenmektedir ve karisim,
1,5mL'lik tüp (immünojen) içerisine bosaltilmaktadir ve kullanima kadar -80°C
veya altinda saklanmaktadir.
(2) Bagisiklanmis Fareler
Erkek C57BL/6 fare (7 haftalik, SPF), Japan Charles River C0., Ltdfden
alinmistir ve SPF ortaminda beslenmektedir.
(3) Bagisiklama Gruplari
60 fare, her biri 4 fare içeren 15 gruba bölünmektedir: 26AACys uygulanan Grup
1; 27AACys uygulanan Grup 2; 28AACys uygulanan Grup 3; 29AACys
uygulanan Grup 4; 30AACys uygulanan Grup 5; 31AACys uygulanan Grup 6;
32AACys uygulanan Grup 7; 33AACys uygulanan Grup 8; 34AACys uygulanan
ve 4OAACys uygulanan Grup 15.
(4) Bagisiklama ve çizelge
34819.04
Bir immünojenden her 200uL/fare, fareye bir 1 mLslik tüberkülin siringa
kullanarak (Terumo, SS-01T2613s) intradermal olarak veya subkütan olarak
karina (fare basina doz: 10014 g) uygulanmaktadir. Fare, 3 kez 2 haftalik araliklarla
bagisiklanmaktadir.
(5) Kan Örnegi Alimi
Son 3,üncü bagisiklamadan sonra Tinci gün, kan, pentobarbital sodyum ile
(Kyoritsu Seiyaku Corporation, Somnopentyl) anestezi altinda tüm farelerin
abdominal aortundan alinmaktadir. Örnek kan, Microtainefa (Becton Dickinson
Co., Ltd) aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda gerçeklesmektedir ve
sonra 5,000 rpm7de 10 dk. santrifüjlenmektedir. Ayrilan serumun her biri, iki 0,5
mL'lik tüpe bosaltilmaktadir ve Ölçüme kadar -80 °C veya altinda saklanmaktadir.
(6) Anti-AB IgG antikorunun Ölçülmesi
Anti- AB lgG antikorunun ölçülmesi, yukarida açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir. Tablo 3, her bagisiklama grubunda fare serumunun
hesaplanan anti- Aß antikoru titresini göstermektedir. Tablo 37te gösterildigi gibi,
uzunlukta 26 ila 40 amino asit kalintisina sahip olan sistein eklemesi ile AB
peptidleri uygulanan gruplar arasindan, uzunlukta 28 veya daha fazla amino asit
kalintisina sahip olanlarin, Aß7ye karsi antikor uyarma yetenegine sahip oldugu
gözlenmektedir. Özellikle, 28AACys, 29AACys, 31AACys, 35AACys,
36AACys, 39AACys ve 40AACys en yüksek antikor titresini saglamaktadir.
Antikor titresi (ng/mL)
Grup Hayvan No. 1 2 3 4 Ortalama
34819.04
Sistein eklemesi olmadan, sisteinden l molekül eklemesi ile ve sisteinden 2
molekül eklemesi ile AB peptidleri arasinda antikor uyarma
yeteneginin
karsilastirmasi
(1) Sistein eklemesi
hazirlanmasi.
28AA:
olmadan ve
sistein eklemesi
peptidlerinin
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK (SEKANS KIMLIK NO:
28AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKC (SEKANS KIMLIK NO:
6) 28AACySCys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKCC (SEKANS KIMLIK
Yukaridaki peptidler, sentezlenmekte (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve bir
5mg/mL°lik stok çözeltinin elde edilmesi için salin ile seyreltilmektedir,
kullanima kadar -80°C veya altinda saklanmaktadir.
(2) Bagisiklanmis Fareler
34819.04
Erkek C57BL/6 fare (7 haftalik, SPF), Japan Charles River C0., Ltd.'den
alinmistir ve SFF ortaminda beslenmektedir.
(3) Bagisiklama Gruplari
12 fare, her biri 4 fare içeren 3 gruba bölünmektedir: 28AA uygulanan Grup 1;
28AACys uygulanan Grup 2 ve 28AACysCys uygulanan Grup 3.
(4) Bagisiklama ve çizelge
Bir immünojenden her 200uL/fare, fareye bir 1 lelik tüberkülin siringa
kullanarak (Terumo, SS-01T2613s) intradermal olarak veya subkütan olarak
karma (fare basina doz: 10014 g) uygulanmaktadir. Fare, 3 kez 2 haftalik araliklarla
bagisiklanmaktadir.
(5) Kan Örnegi Alimi
Son 4'üncü bagisiklamadan sonra Tinci gün, kan, pentobarbital sodyum ile
(Kyoritsu Seiyaku Corporation, Somnopentyl) anestezi altinda tüm farelerin
abdominal aortundan alinmaktadir. Örnek kan, Microtaineria (Becton Dickinson
Co., Ltd) aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda gerçeklesmektedir ve
sonra 5,000 rpm7de 10 dk. santrifüjlenmektedir. Ayrilan serumun her biri, iki 0,5
mL'lik tüpe bosaltilmaktadir ve ölçüme kadar -80 °C veya altinda saklanmaktadir.
(6) Anti-AB lgG antikorunun Ölçülmesi
Anti- Aß lgG antikorunun ölçülmesi, yukarida açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir. Tablo 4, her bagisiklama grubunda fare serumunun
hesaplanan anti- Aß antikoru titresini göstermektedir. Tablo 4Sde gösterildigi gibi,
neredeyse ayni antikoru uyarma yetenegi, 28AACys veya 28AACysCys
uygulanan gruplarda bulunmaktadir.
34819.04
Antikor titresi (ng/mL)
Grup Hayvan 1 2 3 4 Ortalama
C-ucu, N-ucu ve her iki uçta da sistein eklemesi ile AB peptidleri arasinda antikor
uvarma yeteneginin karsilastirmasi
(l) Sistein eklemesi ile AB peptidlerinin hazirlanmasi
28AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKC (SEKANS KIMLIK NO:
CysZSAA:
CDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK (SEKANS KIMLIK NO:
40) Cys28AACys:
CDAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKC (SEKANS KIMLIK
Yukaridaki peptidler, sentezlenmekte (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve
kullanima kadar -80°C veya altinda saklanan bir 5mg/mL,lik stok çözeltinin elde
edilmesi için salin ile seyreltilmektedir.
(2) Bagisiklanmis Fareler
Erkek C57BL/6 fare (7 haftalik, SPF), Japan Charles River C0., Ltd.”den
alinmistir ve SPF ortaminda beslenmektedir.
34819.04
(3) Bagisiklama Gruplari
12 fare, her biri 4 fare içeren 3 gruba bölünmektedir: 28AACys uygulanan Grup
1; Cys28AA uygulanan Grup 2 ve CysZSAACys uygulanan Grup 3.
(4) Bagisiklama ve çizelge
Bir immünojenden her 200pL/fare, fareye bir 1 mL,lik tüberkülin siringa
kullanarak (Terumo, SS-01T26l3s) intradermal olarak veya subkütan olarak
karina (fare basina doz: lOOii g) uygulanmaktadir. Fare, 3 kez 2 haftalik araliklarla
bagisiklanmaktadir.
(5) Kan Örnegi Alimi
Son 49üncü bagisiklamadan sonra 77inci gün, kan, pentobarbital sodyum ile
(Kyoritsu Seiyaku Corporation, Somnopentyl) anestezi altinda tüm farelerin
abdominal aortundan alinmaktadir ve kurban edilmektedir. Örnek kan,
Microtaineria (Becton Dickinson Co., Ltd) aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda
sicakliginda gerçeklesmektedir ve sonra 5 ,000 rpm,de 10 dk. santrifüjlenmektedir.
Ayrilan serumun her biri, iki 0,5 mL7lik tüpe bosaltilmaktadir ve ölçüme kadar -
80 °C veya altinda saklanmaktadir.
(6) Anti-Aß IgG antikorunun ölçülmesi
Anti- Aß IgG antikorunun ölçülmesi, yukarida açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir. Tablo 5, bagisiklama gruplarinin her birinde fare
serumunun hesaplanan anti-AB antikoru titresini göstermektedir. Tablo 5”de
gösterildigi gibi, Cys ekleme konumuna bakmaksizin, antikor uyarma yetenegi,
tüm gruplarda bulunmaktadir.
34819.04
Antikor titresi (ng/mL)
Grup Hayvan l 2 3 4 Ortalama
Sistein katilmasi ile AB peptidi dizileri arasinda antikor uyarma yeteneginin
karsilastirmasi
(1) Sistein katilmasi ile AB peptidlerinin hazirlamasi
28AA7Cys:
DAEFRHDÇSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK (SEKANS KIMLIK NO:
44) 28AA10Cys:
DAEFRHDSGYQEVHHQKLVFFAEDVGSNK (SEKANS KIMLIK NO:
45) 28AA18Cys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVÇFFAEDVGSNK (SEKANS KIMLIK NO:
46) 28AA25Cys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGÇSNK (SEKANS KIMLIK NO:
48) 33AA28Cys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKÇGAllG (SEKANS
KIMLIK NO: 50) 35AA28Cys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKCGAIIGLM (SEKANS KIMLIK
28AACys: DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKÇ (SEKANS
KIMLIK NO: 6)
Yukaridaki peptidler, sentezlenmekte (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve
kullanima kadar -80°C veya altinda saklanan bir 5mg/mL7lik stok çözeltinin elde
edilmesi için salin ile seyreltilmektedir.
34819.04
(2) Bagisiklanmis fareler
Erkek C57BL/6 fare (7 haftalik, SPF), Japan Charles River C0., Ltd.`den
alinmistir ve SPF ortaminda beslenmektedir.
(3) Bagisiklama Gruplari
28 fare, her biri 4 fare içeren 7 gruba bölünmektedir: 28AA7Cys uygulanan Grup
(4) Bagisiklama ve çizelge
Bir immünojenden her 200pL/fare, farelere bir 1 mL'lik tüberkülin siringa
kullanarak (Terumo, SS-01T2613s) intradermal olarak veya subkütan olarak
karina (fare basina doz: lOOug) uygulanmaktadir. Fareler, 3 kez 2 haftalik
araliklarla bagisiklanmaktadir.
(5) Kan Örnegi Alimi
Son 4,üncü bagisiklamadan sonra Tinci gün, kan, pentobarbital sodyum ile
(Kyoritsu Seiyaku Corporation, Somnopentyl) anestezi altinda tüm farelerin
abdominal aortundan alinmaktadir. Örnek kan, Microtainersa (Becton Dickinson
Co., Ltd) aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda gerçeklesmektedir ve
sonra 5,000 rpm,de 10 dk. santrifüjlenmektedir. Ayrilan serumun her biri, iki 0,5
mUlik tüpe bosaltilmaktadir ve Ölçüme kadar -80 °C veya altinda saklanmaktadir.
(6) Anti-Aß IgG antikorunun ölçülmesi
34819.04
Anti- Aß IgG antikorunun ölçülmesi, yukarida açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir. Tablo 6, bagisiklama gruplarinin her birinde fare
serumunun hesaplanan anti-AB antikor titresini göstermektedir. Sekil 6”da
gösterildigi gibi, antikor uyarma yetenegi, 28AA18Cys, 28AA25Cys,
Özellikle, yüksek bir antikor uyarma yetenegi, 28AACys, C-ucuna sistein
eklemesi ile 28 amino asitli Aß peptidi uygulanan gruba kiyasla, 28AA18Cys,
18'inci ve l9iuncu amino asit kalintisi arasina sistein katilmasi ile 28 amino asitli
Aß peptidi uygulanan grup için bulunmaktadir.
Antikor titresi (ng/mL)
Grup Hayvan 1 2 3 4 Ortalama
Eksoien amino asit dizisi eklemesi ile (AB peptidinden türetilmeyen) birlikte
sistein eklemesi ile AB peptidinin antikor uyarma yeteneginin degerlendirilmesi
(l) Sistein eklemesi ile ve sistein eklemesi olmadan AB peptidlerinin hazirlanmasi
28AA:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSN K (SEKAN S KIMLIK NO:
28AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKC (SEKANS KIMLIK NO:
6) 28AACysTTD:
34819.04
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKCTTD (SEKANS KIMLIK
NO: 54) 28AACySEIFEFTTD:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKCEIFEFTTD (SEKANS KIMLIK
Yukaridaki peptidler, sentezlenmekte (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve
kullanima kadar -80°C veya altinda saklanan bir Smg/mLilik stok çözeltinin elde
edilmesi için salin ile seyreltilmektedir.
(2) Bagisiklanmis Fareler
Erkek C57BL/6 fare (7 haftalik, SPF), Japan Charles River Co., Ltd.'den
alinmistir ve SPF ortaminda beslenmektedir.
(3) Bagisiklama Gruplari
16 fare, her biri 4 fare içeren 4 gruba bölünmektedir: 28AA uygulanan Grup 1;
28AACys uygulanan Grup 2; 28AACysTTD uygulanan Grup 3 ve 28AACysTTD
uygulanan Grup 4.
(4) Bagisiklama ve çizelge
Bir immünojenden her 200uL/fare, farelere bir 1 mL,lik tüberkülin Siringa
kullanarak (Terumo, SS-01T2613s) intradermal olarak veya subkütan olarak
karina (fare basina doz: lOOu g) uygulanmaktadir. Fare, 3 kez 2 haftalik araliklarla
bagisiklanmaktadir.
(5) Kan Örnegi Alimi
Son 4`üncü bagisiklamadan sonra Tinci gün, kan, pentobarbital sodyum ile
(Kyoritsu Seiyaku Corporation, Somnopentyl) anestezi altinda tüm farelerin
34819.04
abdominal aortundan alinmaktadir. Örnek kan, Microtainersa (Becton Dickinson
Co., Ltd) aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda gerçeklesmektedir ve
sonra 5,000 rpmide 10 dk. santrifüjlenmektedir. Ayrilan serumun her biri, iki 0,5
mL'lik tüpe bosaltilmaktadir ve ölçüme kadar -80 °C veya altinda saklanmaktadir.
(6) Anti-AB IgG antikorunun Ölçülmesi
Anti- AB lgG antikorunun ölçülmesi, yukarida açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir. Tablo 7, her bagisiklama grubunda fare serumunun
hesaplanan anti-Aß antikor titresini göstermektedir. Tablo 79de gösterildigi gibi,
antikor uyarma yetenegi, 28AACys, 28AACysTTD veya 28AACysEIFEFTTD
uygulanan gruplarda bulunmaktadir. Dolayisiyla, bir ek eksojen peptid dizisi söz
konusu Aß dizisine baglansa bile, Cys eklemesi ile Aß dizisinin antikor uyarma
yeteneginin devam ettigi bulunmaktadir.
34819.04
Antikor titresi (ng/mL)
Grup Hayvan l 2 3 4 Ortalama
Sistein eklemesi ile AB peptidin nazal, intradermal ve oral uygulamasi
(l) Sistein eklemesi ile AB peptidinin hazirlanmasi
35AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMC (SEKANS
KIMLIK NO: 21)
Yukaridaki peptidler, sentezlenmekte (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve
kullanima kadar -80°C veya altinda saklanan bir 5mg/mL,lik stok çözeltinin elde
edilmesi için salin ile seyreltilmektedir.
(2) Bagisiklanmis Fareler
Erkek C57BL/6 fare (7 haftalik, SPF), Japan Charles River C0., Ltd.'den
alinmistir ve SPF ortaminda beslenmektedir.
(3) Bagisiklama Gruplari
9 fare, her biri 3 fare içeren 3 gruba bölünmektedir: nazal olarak uygulanan Grup
1; intradermal olarak uygulanan Grup 2 ve oral olarak uygulanan Grup 3.
(4) Bagisiklama ve çizelge
34819.04
Birincil bagisiklama
Gruplarin her birinde ortak oldugu sekilde, 200 uL stok çözeltiye, 0,5 mg/mL
yogunlukta salinden lSOOuL eklenmektedir ve ZOOuL karisim, intradermal olarak
veya karma subkütan olarak lmL`lik bir tüberkülin siringa kullanarak (Temma,
SS-01T2613S) farelere uygulanmaktadir (fare basina doz: lOOug). Her grubun
farelerinin 2iinci, 3iüncü ve 4iüncü (son) bagisiklamalari, asagida açiklandigi gibi
birincil bagisiklamadan sonra haftalik araliklarla gerçeklestirilmektedir.
Grup 1: Nazal uygulama
Stok çözeltinin her 20uUsi, Pipetman P-20 (Gilson) kullanarak nazal kaviteden
farelere uygulanmaktadir (fare basina doz: lOOu g).
Grup 2: Intradermal uygulama
Uygulamadan önceki gün, farelerin sirti tras edilmektedir. Izofloran ile anestezi
altinda, tras edilmis alan, %70 alkol ile dezenfekte edilmektedir ve uygulamadan
önce kurutulmaktadir ve sonra ZOuL stok çözelti, Pipetman P-20 (Gilson)
kullanarak farelere damla damla uygulanmaktadir (fare basina doz: lOOp g).
Grup 3: Oral uygulama
2°inci ve 3süncü bagisiklamalar için, 200 uL stok çözeltisine, 0,2mg/mL
yogunlukta salinden 2300 pL eklenmektedir ve karisimdan her 500 uL/fare, 1 mL
tüberkülin siringaya (Terumo, SS-01T2613S) baglanan oral kullanim için bir
sonda kullanarak farelerin midesine uygulanmaktadir (fare basina doz: ZOOug).
4,üncü (son) bagisiklama için, 100 uL stok çözeltisine, 0,2mg/mL yogunlukta
salinden 2400 uL eklenmektedir ve karisimdan her 500 uL/fare, 1 mL tüberkülin
siringaya baglanan oral kullanim için bir sonda kullanarak farelerin midesine
3481904
uygulanmaktadir (fare basina doz: lOOu g).
(5) Kan Örnegi Alimi
Birinci] bagisiklamadan sonra 6inc1 gün, 2iinci bagisiklamadan sonra 6,nc1 gün ve
37üncü bagisiklamadan sonra 6,nci gün, 50 ila lSOpL kan, kuyruk damarindan
alinmaktadir. Sonra son 4”üncü bagisiklamadan sonra 7”inci gün, kan,
pentobarbital sodyumla (Kyoritsu Seiyaku Corporation) anestezi altinda tüm
farelerin abdominal aortundan alinmaktadir. Örnek kan, Microtainer'a (Becton
Dickinson Co., Ltd) aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda
gerçeklesmektedir ve sonra 5,000 rpm”de 10 dk santrifüjlenmektedir. Ayrilan
serumun her biri, iki 0,5 mL7lik tüpe bosaltilmaktadir ve ölçüme kadar -80 °C
veya altinda saklanmaktadir.
(6) Anti-AB IgG antikorunun Ölçülmesi
Anti-AB IgG antikorunun ölçülmesi, yukarida açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir. Tablo 8, bagisiklama gruplarinin her birinde fare
serumunun hesaplanan anti-AB antikoru titresini göstermektedir. Tablo 8°de
gösterildigi gibi, sistein eklemesi ile Aß peptidi fragmentinin, nazal, perkütanöz
veya oral uygulamaya bagli kalmaksizin AB“ye karsi antikor uyarma yetenegi
gösterdigi bulunmaktadir.
Antikor titresi (ng/mL)
Grup Hayvan Birincil 2°inci uygulamadan 3üncü 4üncü
No. uygulamadan sonra 6'nci gün uygulamadan sonra uygulamadan
34819.04
lntradermal uvgulamada, sistein eklemesi ile ve sistein eklemesi olmadan AB
peptidleri arasinda antikor uavrma yeteneginin karsilastirmasi
(1) Sistein eklemesi ile ve sistein eklemesi olmadan Aß peptidlerinin hazirlanmasi
35AA:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLM (SEKANS
KIMLIK NO: 20)
35AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMC (SEKANS
KIMLIK NO:21)
Yukaridaki peptidler, sentezlenmekte (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve
kullanima kadar -80°C veya altinda saklanan bir 5mg/mL,lik stok çözeltinin elde
edilmesi için salin ile seyreltilmektedir.
(2) Bagisiklanmis Fareler
Erkek C57BL/6 fare (7 haftalik, SPF), Japan Charles River C0., Ltd.'den
alinmistir ve SPF ortaminda beslenmektedir.
(3) Bagisiklama Gruplari
34819.04
fare, her biri 5 fare içeren 2 gruba bölünmektedir: sistein eklemesi ile 35 amino
asitli Aß peptidi uygulanan Grup 1 ve sistein eklemesi olmadan 35 amino asitli
AB peptidi uygulanan Grup 2.
(4) Bagisiklama ve çizelge
Primer bagisiklama, Örnek 8,de oldugu gibi gerçeklestirilmektedir. 2`inci, 33üncü
ve 4”üncü (son) bagisiklamalar, asagida açiklandigi gibi birincil bagisiklamadan
sonra haftalik araliklarla gerçeklestirilmektedir. Uygulamadan önceki gün,
farelerin sirti tras edilmektedir. Izofloran ile anestezi altinda, tras edilmis alan,
uygulama öncesinde %70 alkol ile dezenfekte edilmektedir, bir cerrahi bantin
(Nichiban Co.,Ltd) uygulanmasi/sökülmesi, epidermin kornea] tabakasinin
kaldirilmasi için 10 kez tekrarlanmaktadir ve sonra 20uL stok çözelti, Pipetman P-
(Gilson) kullanarak farelere damla damla uygulanmaktadir (fare basina doz:
(5) Kan Örnegi Alimi
Son 4”üncü bagisiklamadan sonra Tinci gün, kan, pentobarbital sodyumla
(Kyoritsu Seiyaku Corporation) anestezi altinda tüm farelerin abdominal
aortundan alinmaktadir. Örnek kan, Microtainer”a (Becton Dickinson Co., Ltd)
aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda gerçeklesmektedir ve sonra
,000 rpm°de 10 dk. santrifüjlenmektedir. Ayrilan serumun her biri, iki 0,5 mL'lik
tüpe bosaltilmaktadir ve ölçüme kadar -80 0C veya altinda saklanmaktadir.
(6) Anti- Aß IgG antikorunun ölçülmesi
Anti-AB IgG antikorunun ölçülmesi, yukari açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir. Tablo 9, her bagisiklama grubunda fare serumunun
hesaplanan anti-AB antikoru titresini göstermektedir. Tablo 9”da gösterildigi gibi,
34819.04
sistein eklemesi ile AB peptidi fragmentinin, sistein eklemesi olmadan Aß
peptidine kiyasla, 10 kat veya daha fazla yüksek bir antikor uyarma yetenegi
gösterdigi bulunmaktadir.
Anti kor titresi (ng/mL)
Adiuvan eklemesi ile ve adiuvan eklemesi olmadan arasinda sistein eklemesi
ile/eklemesi olmadan Aß peptidinin karsilastirmasi
(1) Sistein eklemesi ile/eklemesi olmadan Aß peptidlerinin hazirlanmasi
28AA:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNK (SEKANS
KIMLIK NO: 5)
28AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKC (SEKANS KIMLIK NO:
Yukaridaki peptidler sentezlenmekte (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve bir
Smg/ml stok çözeltisinin elde edilmesi için salinle seyreltilmektedir. lOOiiL stok
çözeltisine, 0,5 mg/mL yogunlukta 900uL salin eklenmektedir ve karisim 1,5mL
tüpe (immünojen) bosaltilmakta ve kullanima kadar -80°C veya daha düsükte
saklanmaktadir.
(2) Adjuvan
34819.04
Bir adjuvan olarak, ticari olarak mevcut Quil-A (Accurate Chemical & Scientific
Corporation) ve MPL+TDM siviasiltisi (Corixa) kullanilmaktadir. Quil-A, bir
stok çözeltiden 5mg/mL elde edilmesi için salinde çözündürülmektedir. Ayrica, 1
viyal MPL+TDM siviasiltisi, kullanima kadar 4°C°de saklanan, bir stok çözeltisi
elde edilmesi için 1 mL salinde çözündürülmektedir.
(3) Bagisiklanmis Fareler
Erkek C57BL/6 fare (9 haftalik, SPF), Japan Charles River Co., Ltd.`den
alinmistir ve SPF ortaminda beslenmektedir.
(4) Bagisiklama Gruplari
24 fare, her biri 4 fare içeren 6 gruba bölünmektedir: 28AA uygulanan Grup 1;
28AA+ Quil-A uygulanan Grup 2; 28AA + MPL + TDM siviasiltisi uygulanan
Grup 3; 28AACys uygulanan Grup 4; 28AACys+Quil-A uygulanan Grup 5 ve
28AACys + MPL + TDM siviasiltisi uygulanan Grup 6.
(5) Uygulama için örnegin dozu ve hazirlanmasi
Bir doz Aß peptidi, hayvan basina 100 ug7dir ve uygulama için örnekten
500ug/lelik 0,2 mL uygulanmaktadir. 28AA uygulanan grup ve 28AACys
uygulanan gruba göre, her stok çözeltiden 20uL ve salinden lSOuL
karistirilmaktadir ve karisim, uygulamaya kadar -80°C”de saklanmaktadir. 28AA
+ Quil-A uygulanan grup ve 28AACys + Quil-A uygulanan gruba göre, her stok
çözeltiden 20uL, Quil-A'nin 5mg/mLslik stok çözeltisinden lOuL (hayvan basina
50ug) ve salinden l70uL karistirilmaktadir ve karisim, uygulamaya kadar -
80°C'de saklanmaktadir. 28AA + MPL +TDM siviasiltisi uygulanan grup ve
28AACys + MPL + TDM siviasiltisi uygulanan gruba göre, her stok çözeltiden
90uL ve salinden 660uL, -80°C,de saklanan uygulama için stok çözeltisi
hazirlamak için karistirilmaktadir. 0,5mL MPL+TDM siviasilti stok çözeltisi,
34819.04
asilti elde edilmesi için uygulamadan hemen önce eklenmektedir (her biri için
4,5).
(6) Bagisiklama ve çizelge
Bir immünojenden her 200uL/fare, farelere bir 1 mL,lik tüberkülin siringa
kullanarak (Terumo, SS-01T2613s) intradermal olarak veya subkütan olarak
karina (fare basina doz: lOOug) uygulanmaktadir. Fare, 3 kez 2 haftalik araliklarla
bagisiklanmaktadir.
(7) Kan Örnegi Alimi
Son 35üncü bagisiklamadan sonra 7”nci gün, kan, pentobarbital sodyumla
(Kyoritsu Seiyaku Corporation) anestezi altinda tüm farelerin abdominal
aortundan alinmaktadir. Örnek kan, Microtainefa (Becton Dickinson Co., Ltd)
aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda gerçeklesmektedir ve sonra
,000 rpmsde 10 dk. santrifüjlenmektedir. Ayrilan serumun her biri, iki 0,5 mUlik
tüpe bosaltilmaktadir ve ölçüme kadar -80 °C veya altinda saklanmaktadir.
(8) Anti-AB IgG antikorunun ölçülmesi
Anti- Aß IgG antikorunun ölçülmesi, yukarida açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir. Tablo 10, bagisiklama gruplarinin her birinde fare
serumunun hesaplanan anti- Aß antikor titresini göstermektedir. Tablo lOSda
gösterildigi gibi, Aß`ye karsi antikorun uyarilmasinin, Quil-A ile birlikte 28AA
için nadiren gözlenebildigi ancak MPL+TDM siviasiltisi ile birlikte 28AA için
gözlenebildigi bulunmaktadir. 28AACys durumunda, bir yüksek antikor titresi, ya
Quil-A ile ya da MPL+TDM siviasiltisi ile gözlenebilmektedir. Tek basina
28AACyssnin antikor uyarimi, MPL+TDM siviasiltisi ile birlikte 28AAaninkine
benzerdir.
34819.04
Grup Antikor titresi (ng/mL)
Hayvan No. 1 2 3 4 Ortalama
Örnek 1 l
Alzheimer hastaligi modeli fareleri kullanarak sistein eklemesi ile AB peptdidinin
farmakoloiik degerlendirmesi
(l) Sistein eklemesi ile AB peptidin hazirlanmasi
35AACys:
DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMC (SEKANS
KIMLIK NO: 21)
Yukaridaki peptidler sentezlenmektedir (Hokkaido System Science Co., Ltd.) ve
bir 5mg/ml stok çözeltisinin elde edilmesi için salinle seyreltilmektedir. lOOuL
stok çözeltisine, 0,5 mg/mL yogunlukta 900uL salin eklenmektedir ve karisim
1,5mL tüpe (immünojen) bosaltilmakta ve kullanima kadar -80°C veya daha
düsükte saklanmaktadir.
(2) Bagisiklanmis Fareler
Bir insan Aß prekürsör proteinin ekspresyonu ile beyinde insan Aßisinin
birikmesi ile Alzheimer benzeri patolojik rahatsizlik gösteren transgenik fareler
(TG, Taconic Farms'dan alinmaktadir ve SPF
ortaminda beslenmektedir.
34819.04
(3) Bagisiklama gruplari
6 fare, her biri 3 fare içeren 2 gruba bölünmektedir: 35AACys uygulanan Grup 1
ve uygulanmayan Grup 2 (kontrol).
(4) Bagisiklama ve çizelge
Bir immünojenden her 200uL/fare, farelere bir 1 mLilik tüberkülin siringa
kullanarak (Terumo, SS-01T26l3s) intradermal olarak veya subkütan olarak
karina (fare basina doz: 100u g) uygulanmaktadir. Fareler, 18 haftaliktan itibaren 4
kez 2 haftalik araliklarla ve sonra toplam 11 bagisiklama ile aylik araliklarla
bagisiklanmaktadir.
(5) Kan Örnegi Alimi
Son bagisiklamadan sonra l3iüncü gün, kan, pentobarbital sodyumla (Kyoritsu
Seiyaku Corporation) anestezi altinda tüm farelerin abdominal aortundan
alinmaktadir. Örnek kan, Microtaineraa (Becton Dickinson Co., Ltd)
aktarilmaktadir, yeterli pihtilasma oda sicakliginda gerçeklesmektedir ve sonra
,000 rpm7de 10 dk. santrifüjlenmektedir. Ayrilan serumun her biri, iki 0,5 mL”lik
tüpe bosaltilmaktadir ve ölçüme kadar -80 °C veya altinda saklanmaktadir.
(6) Beyinde biriken insan Aß ekstraksiyonu
Kan örnegi alimindan sonra, beyin, kraniyotomi ile izole edilmektedir. Frontal
lobun bir bölümü, bölünmekte ve tartilmaktadir. Buna, 150 mg (beynin yas
agirligi)/mL,lik bir proteinaz inhibitörü (Roche, Tam Proteaz Inhibitörleri
marka) yapilan bir homojenlestirici ile homojenlestirilmektedir. Sonra, karisim,
34819.04
12,000glda 4°C7de 10 dk. santrifüjlenmektedir. Üst faz atilmaktadir ve elde edilen
çökelti, %1 TritonX-lOO/CP/TBS (yukaridaki CP/TBS ile ayni miktardaYde
yeniden askiya alinmaktadir ve asilti, 1 dk. vortekslenmektedir. Asilti, l2,000g”da
4°C'de 10 dk. santrifüjlenmektedir. Üst faz atilmaktadir ve elde edilen çökelti, %2
SDS/CP/T BS (yukaridaki CP/TBSsninkiyle ayni miktardaYde yeniden askiya
alinmaktadir ve asilti, 1 dk. voitekslenmektedir. Süspansiyon sonra, 12,000g,da
4°C”de 10 dk. santrifüjlenmektedir. Elde edilen üst faz, beyinde biriken insan
Aß3sini içeren bir örnek fraksiyon olarak kullanilmaktadir.
(7) Anti-AB IgG antikorunun ölçülmesi
Anti- Aß IgG antikorunun ölçülmesi, yukarida açiklandigi gibi
gerçeklestirilmektedir.
(8) Beyinde biriken insan Aßssinin ölçülmesi
Ölçüm, insan 0 amiloidi (1-42) ELISA kit WAKO (WAKO, kod numarasi 296-
ile hareketsizlestirilen bir mikrotitre plakasina, lOOii L/kuyusda 50-kat seyreltilmis
insan Aß”si içeren bir örnek eklenmektedir. 4°C,de gece boyunca reaksiyondan
sonra, eklenen seyreltilmis örneklerin her biri atilmaktadir ve mikrotitre plakasi, 5
kez kitteki 350iiL/ kuyuluk yikama çözeltisi ile yikanmaktadir. Bir HRP etiketli
antikor (BCOS) çözeltisi (IOOuL), kuyularin her birine eklenmekte olup ardindan
4°C,de 1 saat reaksiyon gelmektedir. Reaksiyondan sonra, etiketli antikor
çözeltisi atilmaktadir ve mikrotitre plakasi, 5 kez 350uL/ kuyuluk yikama
çözeltisi ile yikanmaktadir. Bir TMB çözeltisi (kromojenik madde; lOOpL),
kuyularin her birine eklenmekte olup, ardindan 30 dk. oda sicakliginda karanlikta
reaksiyon gelmektedir. Sonra, lOOuL/kuyu durdurma çözeltisi, enzimatik
reaksiyonun bastirilmasi için eklenmektedir ve 450nm,de optik yogunluk
ölçülmektedir (OD450 degeri). Baglanmis standart çözeltiyi kullanarak (insan [3
amiloid (1-42), 20pmoL/L) standart bir egri yapilmaktadir. Örneklerin ölçümünde,
34819.04
1,25, 2,5, 5, lOpmol/mL” ye seyreltilmektedir. Her seyreltilmis standart çözeltinin
OD450 degeri, örneklerin her birinin ölçülmesi ile eszamanli olarak
ölçülmektedir. Ömeklerin her birindeki bir insan AB yogunlugu, elde edilen
standart birimi ve OD450 degerinin standart egrisini kullanarak hesaplanmaktadir.
Tablolar 11 ve 12, fare serumunda hesaplanan anti- Aß antikoru titresini ve her
bagisiklama grubunun beyninde biriken insan Aßssinin yogunlugunu
göstermektedir. Tablo 11,de gösterildigi gibi, Aßsye karsi antikorun üretilmesi,
35AACys ile bagisiklanan Alzheimer modeli fareler için gözlenmektedir. Ayrica,
Tablo 12ide gösterildigi gibi, beyinde insan Aß (hAß) birikiminin bir
yogunlugunun, uygulama olmadan Alzheimer modeli fareleri ile olandan daha
düsük oldugu bulunmaktadir. Dolayisiyla, Cys eklemesi ile AB peptidinin,
yalnizca bir profilaktik olarak degil (peptid asisi) ancak ayni zamanda bir
terapötik madde olarak etkili oldugu gösterilmektedir.
34819.04
Antikor titresi (ng/mL)
hA ß conc. (pmol/mL) Ortalama
Grup Hayvan No. 1 2 3
ENDÜSTRIYEL UYGULANABILIRLIK
Sistein eklemesi veya katilmasi ile veya bir peptid içeren sistein eklemesi ile bir
Aß peptidi veya bir bölümünü ve mevcut bulusun söz konusu peptidini kodlayan
gen fragmentini içeren arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran immünojenik
peptid, bir peptid asisi, bir DNA asisi ve benzerinde bagisikligin uyarilmasi için
güvenli ve uygun bir araç olarak kullanilabilmektedir. Ayrica, mevcut bulusun bir
bagisiklik yanitini arttirmak için bir yöntemi ile hazirlanan, bir arttirilmis
bagisiklik yaniti veya bir bölümünü uyaran Ap peptidi, Alzheimer hastaliginin
önlenmesi veya tedavi edilmesi için etkili bir ilaç olabilmektedir.
SEKANS LISTESI
<110> Chemo- Sero- Therapeutic Research Institute (Kemo-Sero-Terapötik
Arastirma) Hukuki Kurumu
Peptitle bagisiklik yainitinin arttirilmasi için yöntem
<130> 668285
<150> JP
34819.04
<151>
<170> Patentln versiyon 3. 4
1›<2l2>P
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 1
Asp A1 21 Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Va] His
l 5 10Leu Val Phe Phe Al aGlu Asp Val
Gly Ser Cys25
<2lO>
<211>
34819.04
<2l3>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 2
<210>
<21 l›
<2 l 2›
<2 1 3›
Artific
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 3
Asp Ala G u Phe Arg His Asp Ser Cîy Tyr G u Val H 5 His Cin Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala GI u Asp Val Gy Ser Asn Oys
<210>
<2l2>
34819.04
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 4
<210>5
<211> 28
<212>PRT
<213> Homo sapiyen
<400>5
Lou Va Fm Fm N a I] J Asp Va 13;.' En' As-Ai Lys-
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400>6
Leu Val Phe Phe Al 3 Gu Asp Val Gy Ser Asn Lys Oys
34819.04
<2 1 2>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 7
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 8
34819.04
AspAlaGuPheArgHisAspSerGyTyrGuVal HsHisGnLys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala G u Asp Val Gy Ser Asn Lys Gy @s
25 30
<210>
<211>
<212>
<2 l 3›
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 9
<210>
<21 l›
<212>
<2 l 3›
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400>10
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr Gu Vai Hs His Cin Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gy Ser Asn Lys Gy Ala Oys
25 30
34819.04
<2 l 2›
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400>11
<210>
<212>
34819.04
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 12
Asp Ala G u Phe Arg His Asp Ser Cîy Tyr G u Val H 3 His Cin Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Ciu Asp Val Cîy Ser Asn Lys G y Ala lle Cys
25 30
<210>
<21 1›
<2 l 2›
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 13
<210><211><2l2>
<213>
34819.04
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 14
AspAlaGuPheArgHisAspSerGyTyrGuValHsHisGnLys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gy Ser Asn Lys Gy Ala ile Ile
<210> 15
<211><2l2>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 15
<210>
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 16
34819.04
AspAlaGuPheArgHisAspSerGyTyrGuVal HsHisGnL
1 5 10 15
LeuVal PhePheAlaGuAspValGySerAsnLysGyAlallel
(3 y @8
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 17
<2 l 0›
<21 l><212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 18
34819.04
Asp AlaGu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr GuVal Hs His Gn Lys
Leu Val Phe Phe Ala G u Asp Val
<220>
GySerAsnLysGyAlallelle
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 19
<210> 20
<2ll> 35
34819.04
<212> PRT
<2 1 3> Homo sapi yen
<400> 20
Leu Val Phe Phe Ala G u Asp Val
<210> 21
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 21
GyTyrGuValHsHisGnLys
GySerAsnLysGyAlallelle
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr GuVal Hs His Gn Lys
Leu Val Phe Phe Ala G u Asp Val
34819.04
>1<2>D
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA
kodlamasi
<400> 22
<210><211><212>
34819.04
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 23
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr GuVal HS His Gn Lys
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gy Ala Ile Ile
Oy Leu Mai ?lgl Oys
<210>
<211>
<2l2>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 24
<210><211>111
34819.04
<212>
<2 l 3›
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 25
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr Gu Val Hs His Gn Lys
1Leu Val Phe Phe îla Gu Asp ValGy1SgrAsn Lys Gy Ala :ise ile
25 30
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 26
34819.04
<210><2ll><212>
<213>
<220>
<223> Sentazlenmis Peptit
<400>27
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr Gu Val Hs His Gn Lys
1Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gy182r Asn Lys Gy Ala lîlse Ile
25 30
Gy Leu Mai Val Gy Gy (Ars<210><211>
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 28
<210>
34819.04
<2l l›
<2l2>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 29
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr GuVal Hs His Gn Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gy Ala Ile Ile
25 30
34819.04
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 30
<210> 31
<211 > 40
<2 l 2› PRT
<2l3> Homo sapiyen
<400> 31
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr GuVal Hs HisGnLys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gy Alalle Ile
25 30
Oy Leu Mat Va! GyGy Val Val
34819.04
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 32
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr Gu Val Hs His Gn Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gy Ser Asn Lys Gy Alalle Ile
25 30
(33/ Leu Mei Val GyGyVaI Val Oys
<2>l<2>D
34819.04
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 33
<210> 34
<211 > 42
<2l2> PRT
<2l3> Homo sapiyen
<400> 34
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr Gu Val Hs His Cin Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gy Ser Asn Lys Gy Alalle Ile
25 30
Gy Leu Ma! Val Gy Gy Val Val Ile Ala
<210>35
<21 l> 126
<212> DNA
<213> Homo sapiyen
<400> 35
<210>
<2l l›
<21 2>
34819.04
<2l3>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 36
Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr GuVal Hs His Gn Lys
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gy Ser Asn Lys Gy Ala ile ile
Gy Leu Me1VaI Gy Gy Val Val Ile Ala @s
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi Için DNA kodlamasi
<400> 37
<210>
<211>
<212>
34819.04
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 38
AspAlaGuPheArgHisAspSerGyTyrGuVal HsHisGnLys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala G u Asp Val Gy Ser Asn Lys @S @3
25 30
<210>
<21 l›
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 39
<210>
<21 l›
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 40
34819.04
Oys Asp Ala (Bu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr GuVaI Hs His Cin
Lys Leu Val Phe Phe AI a (3 u Asp Val Gy Ser Asn Lys
<210>
<2l l›<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 41
<210>
<211>
<2l2>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 42
1 5 10 15
Lys Leu Val Phe Phe Ala G u Asp Val G y Ser Asn Lys (
25 30
34819.04
<210>
<2l l›
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 43
<210>
<2l 1>
<2l2>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 44
Lys Leu Val Phe Phe Ala (3 u Asp Val Gy Ser Asn Lys
<210>
<21 1><212>
34819.04
<2l3>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 45
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr Oys Gu Val His His Cin
1 5 10 15
Lys Leu Val Phe Phe Ala (3 u Asp Val Gy Ser Asn Lys
34819.04
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 46
<220>
TyrGuVal HsHisGriLys
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 47
34819.04
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 48
34819.04
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr Gu Val Hs His Gn Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala G u Asp Val Gy @s Ser Asn Lys
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 49
<210>
34819.04
<212>
<2 l 3›
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 50
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr GuVaI Hs His Gn Lys
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gy Ser Asn Lys Qis Gy Ala ile
<210>
<211>
<2l2>
<2l3>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 51
<210>
<211>
<212>
<213>
34819.04
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400> 52
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr GuVaI Hs His Gn Lys
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gy Ser Asn Lys Qis Gy Ala ile
<210>
<2l l›
<2 l 2›
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 53
<210>
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
34819.04
<400> 54
MpAlaGuPheArgHisAspSerGyTyrGuValHsHisGnLys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala G u Asp Val Gy Ser Asn Lys Qis Thr Thr Asp
25 30
<210>
<211>
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 55
<210>
<21 1>
<212>
<213>
<220>
<223> Sentezlenmis Peptit
<400>56
Asp Ala Gu Phe Arg His Asp Ser Gy Tyr Gu Val Hs His Gn Lys
1 5 10 15
Leu Val Phe Phe Ala Gu Asp Val Gy Ser Asn Lys O/s Gu Ile Phe
25 30
(3 u Phe Thr Thr Asp
34819.04
<213> Yapay
<220>
<223> Sentezlenmis peptitin amino asit sekansi için DNA kodlamasi
<400> 57
Claims (1)
- ISTEMLER Peptide özel bir antikorun uyarilmasi ile arttirilmis bir bagisiklik yanitini uyaran bir immünojenik peptid olup; burada söz konusu immünojenik peptid, SEKANS KIMLIK NO:343ün en az 28 N-ucu amino asidini içeren ve en az bir sisteinin eklenmesi veya katilmasina sahip olan bir amiloid ß peptidi veya bunun bir bölümünü içermektedir; burada sistein, söz konusu amiloid ß peptidi veya bir bölümünün N-ucundan sayilan 18,inci ve 199uncu amino asit kalintilari arasina, 25,inci ve 26,nc1 amino asit kalintilari arasina veya 28”inci ve 29`uncu amino asit kalintilari arasina eklenmektedir. KIMLIK NO: 54 ve SEKANS KIMLIK NO: 56”dan olusan gruptan seçilen bir amino asit dizisinden olusan, Istem l*e göre immünojenik peptid. Istem 1 veya 2,ye göre immünojenik peptidi içeren bir ilaç. Bir adjuvanla birlikte Istem 1 veya ?ye göre immünojenik peptidi içeren bir Istem 1 veya ?ye göre immünojenik peptidin amino asit dizisini kodlayan bir gen fragmentini içeren bir DNA asisi. Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasinda kullanim için, Istem 1 veya 2lye göre immünojenik peptid. Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasinda kullanim için bir adjuvanla birlikte, Istem 1 veya 2,nin immünojenik peptidi. Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasinda kullanim için, Istem 1 veya Z`ye göre immünojenik peptidinin bir amino asit dizisini kodlayan bir gen fragmentine sahip olan bir vektör içeren bir DNA asisi. Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasi için bir ilacin hazirlanmasi için, Istem 1 veya 25ye göre immünojenik peptidin kullanimi. Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasi için bir ilacin hazirlanmasi için bir adjuvanla birlikte, Istem 1 veya ?ye göre immünojenik peptidinin kullanimi. Bir bagisiklik yanitinin arttirilmasi için bir ilacin hazirlanmasi için Istem 5 veya 8'e göre DNA asisinin kullanimi.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2007112060 | 2007-04-20 | ||
| JP2007279083 | 2007-10-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TR201802286T4 true TR201802286T4 (tr) | 2018-03-21 |
Family
ID=39925662
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TR2018/02286T TR201802286T4 (tr) | 2007-04-20 | 2008-04-18 | Peptidle bağışıklık yanıtının arttırılması için yöntem. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US8106015B2 (tr) |
| EP (1) | EP2149584B1 (tr) |
| JP (1) | JP5349297B2 (tr) |
| ES (1) | ES2655868T3 (tr) |
| TR (1) | TR201802286T4 (tr) |
| WO (1) | WO2008133208A1 (tr) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8106015B2 (en) | 2007-04-20 | 2012-01-31 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Method for enhancing immune response with peptide |
| KR101640147B1 (ko) * | 2008-10-16 | 2016-07-18 | 잇빤 자이단호진 가가쿠오요비겟세이료호겐쿠쇼 | 변성된 아밀로이드 베타 펩티드 |
| EP2258398A1 (en) * | 2009-05-26 | 2010-12-08 | Araclón Biotech, S. L. | Albumin-amyloid peptide conjugates and uses thereof |
| EP2471915B1 (en) * | 2009-08-28 | 2018-05-23 | The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Modified peptide vaccine derived from influenza m2 |
| WO2012124631A1 (ja) | 2011-03-11 | 2012-09-20 | 一般財団法人化学及血清療法研究所 | シトルリンを含有するアジュバント組成物 |
| EP2758433B1 (en) * | 2011-09-19 | 2017-10-18 | Axon Neuroscience SE | Protein-based therapy and diagnosis of tau-mediated pathology in alzheimer's disease |
| WO2013059322A2 (en) * | 2011-10-17 | 2013-04-25 | Lawrence Steinman | Amyloid beta peptide as a therapy for inflammation |
| JP2014040396A (ja) * | 2012-08-23 | 2014-03-06 | Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | 脂質異常症治療薬を含有するアジュバント組成物 |
| US10662226B2 (en) | 2016-10-28 | 2020-05-26 | The Regents of the University of Caiifomia | Synthetic beta-amyloid peptides capable of forming stable antigenic oligomers |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5589154A (en) * | 1994-11-22 | 1996-12-31 | Rutgers, The State University Of New Jersey | Methods for the prevention or treatment of vascular hemorrhaging and Alzheimer's disease |
| US6787523B1 (en) * | 1997-12-02 | 2004-09-07 | Neuralab Limited | Prevention and treatment of amyloidogenic disease |
| DE19916417A1 (de) * | 1999-04-01 | 2000-10-19 | Schering Ag | Amyloidspezifisches Aptamer |
| UA81216C2 (en) * | 1999-06-01 | 2007-12-25 | Prevention and treatment of amyloid disease | |
| IL149924A0 (en) | 1999-11-29 | 2002-11-10 | Neurochem Inc | Vaccine for the prevention and treatment of alzheimer's and amyloid related diseases |
| US6906169B2 (en) * | 2001-05-25 | 2005-06-14 | United Biomedical, Inc. | Immunogenic peptide composition comprising measles virus Fprotein Thelper cell epitope (MUFThl-16) and N-terminus of β-amyloid peptide |
| MY144532A (en) | 2001-08-20 | 2011-09-30 | Lundbeck & Co As H | Novel method for down-regulation of amyloid |
| WO2003040183A2 (en) | 2001-11-09 | 2003-05-15 | The Genetics Company, Inc | Compounds for the diagnosis/prevention/treatment of alzheimer's disease |
| EP2460813A1 (en) * | 2003-12-17 | 2012-06-06 | Janssen Alzheimer Immunotherapy | A beta immunogenic peptide carrier conjugates and methods of producing same |
| US20070172496A1 (en) | 2004-01-28 | 2007-07-26 | Curix Aps | Conjugates of amyloid proteins as vaccines for amyloid-related diseases |
| US8106015B2 (en) * | 2007-04-20 | 2012-01-31 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Method for enhancing immune response with peptide |
| KR101640147B1 (ko) | 2008-10-16 | 2016-07-18 | 잇빤 자이단호진 가가쿠오요비겟세이료호겐쿠쇼 | 변성된 아밀로이드 베타 펩티드 |
| EP2471915B1 (en) | 2009-08-28 | 2018-05-23 | The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Modified peptide vaccine derived from influenza m2 |
-
2008
- 2008-04-18 US US12/596,741 patent/US8106015B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-04-18 WO PCT/JP2008/057612 patent/WO2008133208A1/ja active Application Filing
- 2008-04-18 EP EP08751882.5A patent/EP2149584B1/en active Active
- 2008-04-18 JP JP2009511859A patent/JP5349297B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-04-18 ES ES08751882.5T patent/ES2655868T3/es active Active
- 2008-04-18 TR TR2018/02286T patent/TR201802286T4/tr unknown
-
2011
- 2011-08-29 US US13/220,452 patent/US8623374B2/en active Active
-
2013
- 2013-09-05 US US14/018,495 patent/US8940306B2/en active Active
-
2014
- 2014-06-24 US US14/313,007 patent/US20140343248A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP5349297B2 (ja) | 2013-11-20 |
| US20140044743A1 (en) | 2014-02-13 |
| WO2008133208A1 (ja) | 2008-11-06 |
| EP2149584A1 (en) | 2010-02-03 |
| EP2149584A4 (en) | 2010-07-07 |
| US8106015B2 (en) | 2012-01-31 |
| US20100291122A1 (en) | 2010-11-18 |
| US8623374B2 (en) | 2014-01-07 |
| US8940306B2 (en) | 2015-01-27 |
| US20140343248A1 (en) | 2014-11-20 |
| JPWO2008133208A1 (ja) | 2010-07-22 |
| EP2149584B1 (en) | 2017-12-13 |
| ES2655868T3 (es) | 2018-02-22 |
| US20120107334A1 (en) | 2012-05-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| TR201802286T4 (tr) | Peptidle bağışıklık yanıtının arttırılması için yöntem. | |
| US10517935B2 (en) | Mimotopes of alpha-synuclein and vaccines thereof for the treatment of neurodegenerative disorders | |
| AT506820B1 (de) | Vakzine gegen alzheimer-krankheit | |
| US9849165B2 (en) | Oligomer-specific amyloid beta epitope and antibodies | |
| TW200906852A (en) | Monoclonal antibody | |
| KR101640147B1 (ko) | 변성된 아밀로이드 베타 펩티드 | |
| TWI721440B (zh) | 抗-乙型澱粉樣蛋白抗體及其用途 | |
| AU2018201803B2 (en) | Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection | |
| TW201938585A (zh) | 阿茲海默氏症之新abeta變體、測定、方法及治療 | |
| WO2009073648A2 (en) | Compositions and methods for regulating entamoeba histolytica function |