CN116063447B - 用于检测adap自身抗体的抗原多肽及其应用 - Google Patents
用于检测adap自身抗体的抗原多肽及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了用于检测阿尔兹海默病疾病相关蛋白(Alzheimer’sDisease Associated Protein,ADAP)自身抗体的抗原多肽及其应用，属于免疫学技术领域。本发明提供了8条ADAP抗原多肽分别对应8种ADAP自身抗体。应用ADAP抗原多肽检测阿尔兹海默病患者外周血中相应的特异性自身抗体，这种自身抗体可作为免疫标志物评估阿尔兹海默病的发病风险和痴呆相关的认知损害发展程度。这种抗原多肽及其抗体可用于制备阿尔兹海默病早期诊断试剂和开发治疗该疾病的靶向药物。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学技术领域，具体涉及用于检测ADAP自身抗体的抗原多肽及其应用。
背景技术
阿尔兹海默病(AD)是老年人痴呆的最常见原因，其在全球范围内发病率逐年上升。但至今为止，基于认知评定的临床方式仍是AD临床上鉴别诊断的最主要方式。淀粉样蛋白-β(Aβ)假说被广泛认为是AD最重要的发病机制。据信，Aβ异常积累到细胞外毒性斑块中是AD中神经变性和导致痴呆的重要基础。随着技术的进步，近年来涌现了一批围绕Aβ展开的AD新型诊断技术，如Aβ_PET-CT、脑脊液的Aβ水平测定、Aβ超高灵敏度质谱等。但这些技术存在一定的局限性：1)都是在Aβ沉积产生并积累一段时间后才能进行检测，这意味着由Aβ引起的神经退行性病变已经发生且不可逆转，无法做到疾病早期的风险预警；2)基于PET-CT或超高分辨率质谱等检测方式前期投入巨大，传导至受试者身上的单位检测价格很高，难以做到应检尽检；3)脑脊液检测需进行腰椎穿刺，受试者痛苦较大，且存在一定手术风险，因此临床上接受度不高。
研究证据表明，生物体的免疫机制在Aβ的清除中起重要作用。全基因组关联研究(GWAS)已经确定了130多个与AD相关的易感性位点，这些遗传发现提示了先天性和适应性免疫在AD发病机制中的作用，并表明细胞介导的Aβ清除的系统性失能促进了AD的发病和进展。围绕Aβ产生和积累过程中相关信号通路或生物学过程上关键靶点的自身免疫反应影响了Aβ的清除效率，在AD相关的神经退行性病变中发挥了关键作用。人体内源性蛋白抗原诱导产生的抗体被称为自身抗体，能够识别内源性蛋白分子，引起一系列免疫级联反应。在人体大脑中，小胶质细胞是清除Aβ的关键细胞。小胶质细胞与外周巨噬细胞同源，保留了较强的免疫应答功能。有研究表明，一些内源性蛋白分子的自身抗体能够激活小胶质细胞的吞噬功能。国外一些著名药企已开展AD相关的疫苗和治疗单抗临床研究(如罗氏的Aβ单抗crenezumab等)，但由于关注点都集中于Aβ本身，靶点选择面较窄，实际效果并不尽如人意。
本发明涉及8个阿尔兹海默病疾病相关蛋白(Alzheimer’s Disease AssociatedProtein,ADAP)自身抗体(SORL1，TMEM163，SPRED2，CLU，PTK2B，TSPAN14，FERMT2，ADAM10)：
Sortilin(SORL1)是一种在人类中由1号染色体上的SORT1基因编码的蛋白质。该蛋白是分选受体的液泡蛋白分选10蛋白(Vps10)家族中的一种I型膜糖蛋白。SORL1在许多组织中普遍表达，但在中枢神经系统中最为丰富。在细胞水平上，SORL1在高尔基体、内体、溶酶体和质膜之间的蛋白质转运中发挥作用。这种分子功能使SORL1能够参与各种生物过程，包括响应胰岛素将GLUT4转运到脂肪和骨骼肌细胞的质膜；介导proNGF和p75NTR:sortilin复合物之间的相互作用，通过充当共同受体来发出细胞死亡信号；对神经元存活所必需的脑源性神经营养因子(BDNF)具有精细调节功能。在AD中，SORL1是Vps10家族中首个被GWAS证明是迟发性AD风险基因的成员，其在迟发性AD和轻度认知障碍患者的大脑中表达水平降低。SORL1是逆转录酶的货物受体，能够将APP蛋白从内质网系统和BACE蛋白高活性的环境中转运至反面高尔基体进行重新修饰，也能直接调控APP的寡聚化来调控其蛋白水解过程。SORL1表达水平或活性的降低能够促进Aβ的积累。
TMEM163锌离子跨膜转运蛋白，是散发AD的一个GWAS风险基因。生物学功能上，TMEM163负责神经元突触上锌离子的内外流过程，包括参与突触小泡的释放。
SPRED2属于出芽蛋白家族Sprouty/SPRED family成员，参与由生长因子诱导的MAPK激酶级联过程的激活。遗传学上，SPRED2被证明是散发性AD的一个风险基因。本发明通过自行设计的SPRED2抗原表位多肽，检测AD患者血清及血浆中自身抗体水平并开发响应试剂，预测AD发生风险及病程发展程度，为临床治疗提供可靠参考。
CLU是脑内仅次于载脂蛋白APOE的第二大脂蛋白，是散发性AD的GWAS风险基因。生物学功能上，CLU可能参与β-淀粉样蛋白在脑与血浆之间的转运，在AD的致病机制中有助于调节大脑中β-淀粉样蛋白的清除。而β-淀粉样蛋白产生和清除的失衡是阿尔兹海默病发展的核心因素。
PTK2B是一种细胞质蛋白酪氨酸激酶，参与钙诱导的离子通道调节和激活图谱激酶信号通路。PTK2B作为代表增加钙通量的神经肽激活受体或神经递质之间的重要信号中间体，以及调节神经元活性的下游信号。其响应于细胞内钙浓度、烟碱乙酰胆碱受体激活、膜去极化或蛋白激酶C活化的增加，而经历快速的酪氨酸磷酸化和活化。在遗传学上，PTK2B是散发性AD的GWAS风险基因。磷酸化的PTK2B可与AD患者及转基因Tau鼠脑中磷酸化的Tau共定位，参与Tau的磷酸化和聚集等过程，是Tau毒性的早期标记物和体内调节剂。
TSPAN14是一个细胞膜表面四次跨膜蛋白，是散发AD的一个GWAS风险基因。生物学功能上，TSPAN14能够影响细胞膜内侧相关信号通路激酶的活性，包括对Notch信号通路的激活调控功能等。分布上，TSPAN14高表达于中枢神经系统和外周免疫细胞当中，具有调节神经免疫机制的功能。
FERMT2是细胞膜表面的粘着斑蛋白，是散发AD的一个GWAS风险基因。生物学功能上，FERMT2参与调控细胞骨架微管蛋白的结合活性，影响磷脂酰肌醇的结合活性，以及转化生长因子β受体的活性。在生物学过程中，FERMT2通过影响多个细胞表面受体参与的信号通路，参与如细胞分化、细胞局部合成等重要事件。FERMT2的功能调控异常在AD的疾病发展中起了关键作用。
ADAM10基因编码一个含有去整合素和金属蛋白酶结构域的蛋白质分子，是散发AD的一个GWAS风险基因，家族性AD中也发现多个ADAM10基因的功能性突变。在神经元中，ADAM10是最重要的酶之一，具有α-分泌酶活性，可用于淀粉样前体蛋白的蛋白水解加工。ADAM10与ADAM17一起切割骨髓细胞2(TREM2)上表达的触发受体的胞外域，产生可溶性TREM2(sTREM2)，是脑内Aβ42清除的关键分子之一。ADAM10的功能调控异常在AD的疾病发展中起了关键作用。
本发明通过自行设计的抗原表位多肽，检测AD患者血清及血浆中自身抗体水平并开发响应试剂，预测AD发生风险及病程发展程度，为临床治疗提供可靠参考。
发明内容
抗原抗体的结合实际上只发生在抗原决定簇和抗体的抗原结合位点之间，二者在空间结构和空间构型上完全互补。因此抗原决定簇就可以代表整个蛋白与抗体结合的状态与亲和特征。传统酶联免疫法(ELISA)检测自身抗体主要以重组蛋白为抗原，需经过载体构建、转染、表达、筛选、纯化等一系列繁琐过程，生产成本昂贵。且完整蛋白空间结构复杂、抗原表位不易暴露，因此抗原抗体结合的特异性不强，导致信号检出率低。
基于此，有必要提供了检测阿尔兹海默病标志物ADAP自身抗体的抗原多肽。
为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：
首先，提供了检测阿尔兹海默病标志物ADAP自身抗体的抗原多肽，所述抗原多肽包含如SEQ ID NO.1-8所示的氨基酸序列中的至少一种：
SORL1：CEVWTQRLHGGSAPLPQDRGFLVVQGDPR；
TMEM163：CIVVKAIHDLSTRLLPEVDDFLF；
SPRED2：MTEETHPDDDSYIVRVKAVVMTR；
CLU：TQGEDQYYLRVTTVASHTSDSDVPSG；
PTK2B：SGVSEPLSRVKLGTLRRPEGPAEPM；
TSPAN14：GVPFSCCVPDPAQKVVNTQCGYDVRIQ；
FERMT2：GIRMPDGCYADGTWELSVHVTDLNR；
ADAM10：FSDEFKVETSNKVLDYDTSHIYTGH；
或其片段、变体、融合物或衍生物、或所述其片段、变体或衍生物的融合物，所述变体包含与SEQ ID NO.1-8所示的氨基酸序列有至少55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％同源性的氨基酸序列，纯度＞95％，pH＞7.0。
进一步地，提供了所述的抗原多肽在制备用于检测ADAP自身抗体的产品中的应用。
进一步地，所述的抗原多肽和/或ADAP自身抗体在制备阿尔兹海默病早期诊断试剂盒中的应用。
优选的，检测样本为血清或血浆。
进一步地，还提供了一种用于检测ADAP自身抗体和/或阿尔兹海默病的试剂盒，包括所述的抗原多肽。
优选的，所述抗原多肽是被包被于酶标板中。
优选的，所述抗原多肽在酶标板中包被浓度为5.0μg/ml。
优选的，还包括包被液、阳性对照、阴性对照、洗涤缓冲液、样品稀释分析液、二抗标准液、终止缓冲液、底物显色液中的至少一种。
进一步地，还提供了编码所述抗原多肽的核酸分子。
进一步地，还提供了含有所述核酸分子的重组载体。
进一步地，还提供了所述的抗原多肽或ADAP自身抗体或所述的核酸分子或所述的重组载体在制备治疗阿尔兹海默病药物中的应用。
进一步地，还提供了一种体外非诊断目的的ADAP自身抗体检测方法，包括使用所述的抗原多肽或所述的试剂盒检测样品中的ADAP自身抗体。
优选的，包括以下步骤：
(1)使用包被有所述的抗原多肽的酶标板进行分步加样分析；
(2)用酶标仪检测每孔中的光密度值，并用阳性样品比值表示抗体水平。
基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：
本发明应用ADAP抗原多肽检测到AD患者血清及血浆中的特异性自身抗体，并且该反应具有高特异性和高灵敏性，这种自身抗体可作为免疫标志物评估阿尔兹海默病的发病风险和痴呆相关的认知损害发展程度。这种抗原多肽及其抗体可用于制备阿尔兹海默病早期诊断试剂和开发治疗该疾病的靶向药物。抗原多肽所含的氨基酸序列为简单的线性多肽氨基酸序列，其对于现有重组蛋白的抗原而言，获得成本显著降低，而且与ADAP自身抗体的结合特异性强。
附图说明
图1 AD患者与健康对照血浆ADAP自身IgG抗体检测水平；
图2血浆ADAP自身IgG抗体水平与受试者MMSE认知评分相关性；
图3 8种ADAP自身抗体单靶点诊断ROC曲线；
图4 8种ADAP自身抗体联合诊断ROC曲线。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
下述实施例所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所有的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
含有SEQ ID NO.1-8所示氨基酸序列的抗原多肽由于含有特定的抗原决定簇，使其能够与ADAP自身抗体抗原结合位点发生特异识别和结合，从而提高了上述抗原多肽与待测样本中所含的ADAP自身抗体之间的特异反应，并提高两者的特异结合率。这样，将其与待测样本——如血清或血浆——中的ADAP自身抗体特异识别和结合后，能够检测出待测样本中ADAP自身抗体的含量水平，通过对自身抗体的含量水平判断，从而间接判断待测样本来源体的阿尔兹海默病发病风险和进展。例如ADAP自身抗体水平降低预示患者可能出现了有ADAP介导的Aβ清除失能，可以预测AD的发生风险及发生进程，指导临床医生对AD的早期诊断。其中，ADAP自身抗体可以是ADAP的特异性自身IgG抗体。
另外，上述抗原多肽所含的SEQ ID NO.1-8所示氨基酸序列为简单的线性多肽氨基酸序列，其对于现有重组蛋白的抗原而言，获得成本显著降低，而且与ADAP自身抗体的结合特异性强。鉴于此，本发明在公开候选检测表位的同时，亦对ELISA的检测手段进行改进。发明人遵循以下原则设计线性多肽抗原：1)选择细胞膜蛋白表面区域；2)选择不形成α-helix的序列；3)避免蛋白内部重复；4)避免同源性强的肽段；5)必须包含人白细胞二类抗原(HLA-II)系统的限制性表位。
基于上述原则，本发明运用生物信息学预测手段结合多个表位预测模拟软件，综合分析与抗原性相关的参数，设计了如SEQ ID NO.1-8所示的线性氨基酸多肽序列，分别对应8种ADAP自身抗体，所设计的抗原多肽在空间结构和构型上与目标抗体完全互补。其中SORL1抗原蛋白(NP_003096.2sortilin-related receptor preproprotein[Homosapiens])的序列如下SEQ ID NO.9所示，加框部分是抗原多肽片段以及在SORL1蛋白中的位置：
其中TMEM163抗原蛋白(NP_112185.1transmembrane protein 163[Homosapiens])的序列如下SEQ ID NO.10所示，加框部分是抗原多肽片段以及在TMEM163蛋白中的位置：
其中SPRED2抗原蛋白(NP_861449.2 sprouty-related,EVH1 domain-containingprotein 2isoform a[Homo sapiens])的序列如下SEQ ID NO.11所示，加框部分是抗原多肽片段以及在SPRED2蛋白中的位置：
其中CLU抗原蛋白(NP_001822.3 clusterin isoform 1 preproprotein[Homosapiens])的序列如下SEQ ID NO.12所示，加框部分是抗原多肽片段以及在CLU蛋白中的位置：
其中PTK2B抗原蛋白(AAH42599.1 PTK2B protein tyrosine kinase 2 beta[Homo sapiens])的序列如下SEQ ID NO.13所示，加框部分是抗原多肽片段以及在PTK2B蛋白中的位置：
其中TSPAN14抗原蛋白(NP_001121781.1 tetraspanin-14 isoform 2[Homosapiens])的序列如下SEQ ID NO.14所示，加框部分是抗原多肽片段以及在TSPAN14蛋白中的位置：
其中FERMT2抗原蛋白(NP_006823.1 fermitin family homolog 2 isoform 1[Homo sapiens])的序列如下SEQ ID NO.15所示，加框部分是抗原多肽片段以及在FERMT2蛋白中的位置：
其中ADAM10抗原蛋白(NP_001101.1 disintegrin and metalloproteinasedomain-containing protein 10 isoform 1 preproprotein[Homo sapiens])的序列如下SEQ ID NO.16所示，加框部分是抗原多肽片段以及在ADAM10蛋白中的位置：
在上文的基础上，本领域技术人员可以理解的是，还可以对所述的抗原多肽进行化学修饰，以便增加ADAP抗原多肽的抗原性和有助于多肽的包被处理。
上述抗原多肽可通过化学合成得到，也可以通过基因工程技术得到，此技术为本领域技术人员所熟知。本领域技术人员可以理解的是，可以有效地通过常规合成方法，合成上述ADAP抗原多肽，从而代替重组表达的生物合成方式。
实施例1
1.受试者信息：样本收集56份AD患者外周血样本，匹配健康组56份；性别、年龄匹配，具有可比性(P＞0.05)。所有受试者均经MMSE认知评定和11C-labeled PittsburghCompound-B(PiB)PET检测后入组。基本人口学信息见表1。
表1：受试者基本人口学信息
2.利用抗原多肽进行检测：
(1)酶标板设计：每份血浆样本各设人ADAP抗原多肽双复孔，山羊多肽对照抗原(PC)双复孔和阴性对照双复孔(NC)。PC抗原与人类蛋白质组无同源性，目的是减低非特异性结合反应的干扰，PC的工作浓度范围10-20μg/ml。
(2)包被：抗原多肽用包被液(pH 7.4 0.01M PBS/0.1％NaN3)包被于96孔酶标板(COSTAR，美国)，每孔100μl。ADAP抗原多肽包被浓度5.0μg/ml，PC抗原包被浓度为15μg/ml，4℃过夜。
(3)血浆孵育：0.01M PBS/0.005％TWEEN-20清洗每孔3遍，利用分析液(0.01M PBS+1％BSA)将血浆1:500稀释，每孔100μl，4℃过夜。
(4)二抗孵育：0.01M PBS/0.005％TWEEN-20清洗每孔5遍，利用分析液(同前)稀释辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG(美国，Sigma)，每孔加200μl，25℃孵育2h。辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG ELISA工作范围：1:30000～1:50000。
(5)显色：0.01M PBS/0.005％TWEEN-20清洗每孔5遍，每孔加100μl3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)过氧化物酶底物(lnvtrogen,美国)，室温避光15～30min。
(6)检测：每孔加50μl 10％H2SO4为反应终止液，10min内使用酶标仪(BioTeck ELx800,美国)检测OD值，检测波长为450nm，参考波长为630nm。
(7)数据分析：采用SPSS或类似统计学软件进行数据统计分析处理。所有检测样品取双复孔均值进行计算。采用阳性样品比值(PSR)来判定抗原抗体的结合程度。PSR计算方法如下:
PSR＝[OD(ADAP)-OD(NC)]/[OD(PC)-OD(NC)]
获得各检测样本PSR数值后，采用秩和检验比较不同组别间的差异，以SBI平均值≥2倍方差(SD)，一类错误水平a<0.05为阳性判定阈值。采用受试者特征曲线(ROC)进行诊断效能评价。采用皮尔森相关性分析IgG抗体水平与受试者认知评分间的相关性。ROC曲线是根据一系列不同的二分类方式(分界值或判定阈值)，以真阳性率(灵敏度)为纵坐标，假阳性率(1-特异性)为横坐标绘制，以曲线下面积(AUC)判定诊断效能。AUC取值范围为0.5-1.0，越趋近于1，表征诊断效能越强。本发明采用统计学计算分析软件Graphpad Prism 7.0(Graphpad Software，美国)软件绘制ROC曲线，计算曲线下面积(AUC)，以健康人PSR平均值-2SD判为阳性，判定灵敏度和特异度；进行Fisher's精确检验，检验一类错误水准为a＝0.05。
(8)质控：各检测样本设置双复孔，取平均OD值。OD值离散度判定：离散度＝(OD1-OD2)/(OD1+OD2)≤0.1，为有效结果；离散度>0.1，为无效结果。取100份健康人血浆等体积混合作为质控血(QC)，代表人群本底水平。每个检测板设置2个QC血浆孔，以QC变异水平判定结果的稳定性。批内变异CV＝每日各板QC孔SD值/每日各板QC孔均值×100％；批内变异需<10％。批间变异CV＝所有批次QC孔SD值/所有批次QC孔均值×100％；批间变异需<20％。
3.检测结果：
如表2和图1所示，AD患者血浆中与8种ADAP抗原多肽结合的IgG抗体阳性率均显著低于健康对照组(P<0.001)。如表3和图2所示，血浆抗ADAP IgG抗体水平与受试者MMSE认知评分呈现显著正相关关系(P<0.001)，即血浆抗ADAP IgG抗体可以预测受试者AD相关的痴呆表型发展程度相关，抗体水平越低，认识损害程度越高。如表4和图3所示，AD患者血浆抗ADAP IgG抗体ROC曲线下面积(AUC)均大于0.7，以95％特异性时抗体水平作为阳性阈值判定，得到的灵敏度均大于20％。以上数据充分表明，利用本发明所设计的抗原多肽检测得到的AD患者自身抗体IgG水平与正常健康对照组有显著性统计学差异。
多靶点的联合诊断能有效提升生物标志物在疾病中的诊断效力。本发明通过建立逻辑回归线性模型，将8个血浆抗ADAP IgG抗体检测值进行拟合。拟合后AD患者与健康对照的逻辑回归曲线具有最显著的统计学差异(B＝10.449，P<1.0E-6)。ROC分析的曲线下面积AUC为0.89(见图4)，以95％特异性时抗体水平作为阳性阈值判定，得到的灵敏度为73.2％，诊断效能表现远高于单靶点的应用。
表2：AD患者与健康对照血浆ADAP自身IgG抗体检测对比分析结果
表3：血浆ADAP自身IgG抗体水平与受试者MMSE认知评分相关性分析结果
表4：AD患者与健康对照血浆ADAP自身IgG抗体检测ROC曲线分析结果
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (12)
1.一种抗原多肽组合物，其特征在于，所述抗原多肽组合物包含如SEQ ID NO.1-8所示的8种氨基酸序列：
SORL1：CEVWTQRLHGGSAPLPQDRGFLVVQGDPR；
TMEM163：CIVVKAIHDLSTRLLPEVDDFLF；
SPRED2：MTEETHPDDDSYIVRVKAVVMTR；
CLU：TQGEDQYYLRVTTVASHTSDSDVPSG；
PTK2B：SGVSEPLSRVKLGTLRRPEGPAEPM；
TSPAN14：GVPFSCCVPDPAQKVVNTQCGYDVRIQ；
FERMT2：GIRMPDGCYADGTWELSVHVTDLNR；
ADAM10：FSDEFKVETSNKVLDYDTSHIYTGH。
2.根据权利要求1所述的抗原多肽组合物，其特征在于，所述抗原多肽组合物用于检测阿尔兹海默病标志物ADAP自身抗体或用于检测阿尔兹海默病。
3.根据权利要求1或2所述的抗原多肽组合物在制备用于检测ADAP自身抗体的产品中的应用，所述ADAP为阿尔兹海默病疾病相关蛋白(Alzheimer’s Disease AssociatedProtein)，所述ADAP自身抗体为SORL1、TMEM163、SPRED2、CLU、PTK2B、TSPAN14、FERMT2或ADAM10的自身抗体。
4.根据权利要求1或2所述的抗原多肽组合物在制备阿尔兹海默病早期诊断试剂盒中的应用。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于，检测样本为血清或血浆。
6.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的抗原多肽组合物。
7.一种用于检测ADAP自身抗体和/或阿尔兹海默病的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1或2所述的抗原多肽组合物，所述ADAP为阿尔兹海默病疾病相关蛋白(Alzheimer’sDisease Associated Protein)，所述ADAP自身抗体为SORL1、TMEM163、SPRED2、CLU、PTK2B、TSPAN14、FERMT2或ADAM10的自身抗体。
8.根据权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述抗原多肽是被包被于酶标板中。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述抗原多肽在酶标板中包被浓度为5.0μg/ml。
10.根据权利要求6-9任一项所述的试剂盒，其特征在于，还包括包被液、阳性对照、阴性对照、洗涤缓冲液、样品稀释分析液、二抗标准液、终止缓冲液、底物显色液中的至少一种。
11.编码权利要求1或2所述抗原多肽组合物的核酸分子。
12.含有权利要求11所述核酸分子的重组载体。
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Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101372511A (zh) * | 2001-05-25 | 2009-02-25 | 美国联合生物医学公司 | 一种用于预防和治疗阿尔兹海默氏病的具有免疫原性的肽组合物 |
| CN105164536A (zh) * | 2013-03-05 | 2015-12-16 | 兰道克斯有限公司 | 阿尔兹海默症诊断的组合物和方法 |
| CN105641694A (zh) * | 2008-12-19 | 2016-06-08 | H.隆德贝克有限公司 | 用于治疗精神和行为障碍的对Vps10p-结构域受体家族的调节 |
| EP3070096A1 (en) * | 2015-03-19 | 2016-09-21 | Ludwig-Maximilians-Universität München | A peptide or collection of peptides derived from amyloid precursor protein |
| CN105969885A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-09-28 | 江苏雄鸣医药科技有限公司 | 一种阿尔兹海默症的基因诊断试剂盒 |
| CN106062563A (zh) * | 2014-01-28 | 2016-10-26 | 普雷德姆泰克有限公司 | 用于阿尔兹海默症的早期诊断的生物标志物及方法 |
| CN109738653A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-05-10 | 湖南诺琪生物科技有限公司 | 用于阿尔茨海默症的检测、诊断或风险预测的抗原蛋白组合以及包含其的试剂盒 |
| CN112162101A (zh) * | 2020-10-13 | 2021-01-01 | 南京立顶医疗科技有限公司 | 一种检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒及其检测方法 |
-
2022
- 2022-09-16 CN CN202211126807.0A patent/CN116063447B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101372511A (zh) * | 2001-05-25 | 2009-02-25 | 美国联合生物医学公司 | 一种用于预防和治疗阿尔兹海默氏病的具有免疫原性的肽组合物 |
| CN105641694A (zh) * | 2008-12-19 | 2016-06-08 | H.隆德贝克有限公司 | 用于治疗精神和行为障碍的对Vps10p-结构域受体家族的调节 |
| CN105164536A (zh) * | 2013-03-05 | 2015-12-16 | 兰道克斯有限公司 | 阿尔兹海默症诊断的组合物和方法 |
| CN106062563A (zh) * | 2014-01-28 | 2016-10-26 | 普雷德姆泰克有限公司 | 用于阿尔兹海默症的早期诊断的生物标志物及方法 |
| EP3070096A1 (en) * | 2015-03-19 | 2016-09-21 | Ludwig-Maximilians-Universität München | A peptide or collection of peptides derived from amyloid precursor protein |
| CN105969885A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-09-28 | 江苏雄鸣医药科技有限公司 | 一种阿尔兹海默症的基因诊断试剂盒 |
| CN109738653A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-05-10 | 湖南诺琪生物科技有限公司 | 用于阿尔茨海默症的检测、诊断或风险预测的抗原蛋白组合以及包含其的试剂盒 |
| CN112162101A (zh) * | 2020-10-13 | 2021-01-01 | 南京立顶医疗科技有限公司 | 一种检测阿尔兹海默病的生物标志物的试剂盒及其检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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