TWI229074B

TWI229074B - Substituted 1-oxo- and 1,3-dioxoisoindolines and method of reducing inflammatory cytokine levels

Info

Publication number: TWI229074B
Application number: TW089104963A
Authority: TW
Inventors: George Muller; David Stirling
Original assignee: Celgene Corp
Priority date: 1999-03-18
Filing date: 2000-05-29
Publication date: 2005-03-11
Also published as: JP2002539197A; HUP0200499A2; AU771015B2; FI119881B; NO20013982L; DE60023123D1; CZ20013338A3; KR100672892B1; DE60023123T2; NO20054581L; CA2361806A1; EP1163219B1; DK1163219T3; RU2001121987A; BR0010042A; EP1163219A1; NO320028B1; CA2361806C; HUP0200499A3; JP4728487B2

Description

1229074 五、發明說明（本發明係請求來自1999年3月18日提出申請之美國專利臨時申請案序號60/124,942之優先權。本發明係關於在異二氫氮雜茚環之參或5_位置上經取代之1·酮基-與1，3·二酮基-異二氫氮雜茚，在哺乳動物中經由其投藥，以降低炎症細胞素（譬如腫瘤壞死因子π)之含量，及治療炎性疾病、自身免疫疾病、腫瘤及癌症之方法，以及關於此種衍生物之醫藥組合物。登明背景腫瘤壞死因子w (TNF幻爲一種細胞素，其主要是藉由單核呑噬細胞釋出，以回應多種免疫刺激子。其係爲炎症級聯中之一種主要預發炎細胞素，其會造成其他細胞素與作用劑之產生及/或釋出。當投予動物或人類時，其會造成炎症、發熱、心與血管作用、出血、凝聚及類似在急性感染與休克狀態期間所見及之階段回應。因此，過量或未經調節之TNP>產生，係與多種疾病症狀有關聯，譬如同種異體反應’例如移植物_對_宿主（GVHD)，髓鞘脱失病，低血壓’血甘油三酯過多，糖尿病，骨質溶解，腫瘤形成，白血病’骨骑炎，胰腺炎，血栓形成疾病，炎性腸疾病，硬皮病’風濕性關節炎，骨關節炎及脈管炎。抗胃從治療已在風濕性關節炎與炎性腸疾病上，確認ΤΝΡ α抑制作用。其亦包括内毒血症及/或毒性休克徵候簇{Tracey等人，Nature 330, 662_664 (1987)，及 Hinshaw 等人，Circ· Shock 30, 279-292 (1990)};惡病質{Dezube 等人，Lancet，335 (869〇)，662 (1"〇)}，及成人呼吸困難徵候簇（ARDS)，其中TNFV濃度超過12,〇〇〇微 -4- 本捕尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格⑽x 297公爱 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------％經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1229074 A7 ___B7__ 五、發明說明（2 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 微克/毫升，已在得自ARDS病人之肺送氣中檢出{Millar等人，Lancet，2 (8665)，712_7H (I989)}。重組 TNF 從之系統灌注，亦會造成典型上在ARDS中見及之改變{Ferrai-Baliviera等人，Arch. Surg· 124 (12)，1400-1405 (1989)}。TNF> 似乎係涉及骨質耗損疾病，包括關節炎。當白血球被活化時，將會產生骨質耗損，資料指出此爲TNF α會助長之一種活性{Bertolini等人，Nature 319, 516-518 (1986)，及 Johnson 等人，Endocrinology 124 (3)， 1424-1427 (1989)}。TNFV亦已於活體外與活體内，經由刺激破骨細胞形成，及活化且合併抑制成骨細胞功能，而經証實會刺激骨質耗損及抑制骨骼形成。在移植物對宿主反應中，增加之血清TNF α含量係與急性同種異基因骨髓移植後之主要併發症有關聯{Holler等人，Blood，75⑷，1011-1016 (1990)}。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製寄生感染可藉由TNF α加以控制，例如癌疾或Legionella感染。腦型癔爲一種與高TNF α血液含量有關聯之致死過急性神經病徵候簇，且爲在瘧疾病人中發生之最嚴重併發症。血清TNF α含量，係直接與疾病之嚴重性，及在具有急性癔疾侵襲之病人中之預後有關聯{Grau等人，N. Engl. J. Med. 320 (24)，1586-1591 (1989)}。血管生成血管生成爲新血管發展與形成之過程，其在許多生理學事件中，正常與病理兩者，係扮演一項重要角色。血管生成係回應特定訊息而發生，且涉及複雜過程，其特徵爲基底層被血管内皮細胞浸入，以回應血管原生長訊息，内皮 -5- ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1229074 A7 B7 五、發明說明（3) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 細胞潛移朝向訊息來源，及微血管之隨後增殖與形成。血液流經新形成之微血管，係在内皮細胞與先前存在之微血管接觸與連接後起始。巨嗟細胞所引致之血管生成’已知係藉由TNF從所媒介。Leibovich 等人{Nature，329, 630-632 (1987)}註實 TNF α 會在老鼠角膜中引致活體内微血管形成，及在極低劑量下發展小雞絨毛膜尿囊膜，並指出TNF α爲在炎症、傷口修復及腫瘤生長中引致血管生成之候選者。TNF泛產生亦與癌之·症狀有關聯，譬如腫瘤溶解徵候簇、膀胱癌之再發生及特別是所引致之腫瘤{Ching 等人，Brit. J. Cancer，（1955) 72, 339-343 ’ 及 Koch，醫藥化學上之發展，22, I66·242 (I985)}。於血管生成之内源刺激子與抑制劑之間，天然形成之平衡係爲其中主要是抑制影嚮。Rastinejad等人，1989, Cell 56 : 345-355。在稀少情況中，其中新血管生成作用係發生在正常生理條件下，譬如傷口癒合、器官再生作用、胚胎發展及女性生殖過程，血管生成係被嚴厲地調節，且於空間上及暫時地被設限。在病理血管生成之狀態下，譬如特徵性固態腫瘤生長，此等調節控制失效。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製未經調節之血管生成會變成病理性，且維持許多贅生與非贅生疾病之進展。多種嚴重疾病係被異常新血管生成作用所主導，包括固態腫瘤生長與轉移，關節炎，某些類型之眼疾，及牛皮癬。參閲，例如Moses等人，1991，Biotech. 9 : 630-634 之回顧；Folkman 等人，1995, N. Engl. J. Med.，333 : 1757-1763 ; Auerbach 等人，1985, J. Microvasc· Res· 29 : 401-411 ; Folkman， -6- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 1229074 Α7 Β7 五、發明說明（4) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1985,癌症研究上之進展，Klein與Weinhouse編著，紐約大學出版社，第 175-203 頁；Patz，1982, Am. I Opthalmol. 94 ·· 715-743 ;及 Folkman等人，1983, Science 221 : 719-725。在多種病理學症狀中，血管生成之過程會助長此疾病狀態。例如，已累積可觀資料，其指出固態腫瘤之生長，係依賴血管生成。Folkman 與 Klagsbrun，1987, Science 235 : 442-447。角膜、晶狀體及小梁網狀組織之無血管狀態之維持，對於視覺以及對眼睛生理學，係爲重要的。參閱，例如 Waltman 等人，1978, Am. J. Ophthal· 85 : 704-710，及 Gartner 等人，1978, Surv. Ophthal. 22 : 291_312之回顧。目前，此等疾病之治療，尤其是一旦新血管生成作用已發生時，係爲不充分的，且經常造成失明。血管生成作用之抑制劑，在限制此過程助長其從屬疾病狀態之病理學進展，以及提供研究其病因學之一種有價値方式上，可具有重要治療角色。例如，會抑制腫瘤新血管生成作用之藥劑，在抑制轉移性腫瘤生長上，可扮演一項重要角色。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製已發現與血管内皮細胞增殖、潛移及侵入有關之血管生成之成份，係一部份被多肽生長因子所調節。於培養上之實驗，顯示曝露至含有適當生長因子之培養基之内皮細胞，可被謗發而引起一部份或全部血管原回應。具有活體外内皮生長促進活性之數種多肽，已被確認。其實例包括酸性與驗性成纖維細胞生長因子，轉變生長因子α與/?，血小板衍生之内皮細胞生長因子、粒性細胞菌落刺激因子、間白血球活素-8、肝細胞生長因子、多育曲菌素、血管内本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1229074 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（5) 皮生長因子及胎盤生長因子。參閲，例如Folkman等人，1995, N. Engl. J. Med.，333 ·· 1757-1763 之回顧。已使用數種化合物類型，以防止血管生成。Taylor等人已使用魚精蛋白以抑制血管生成，參閱Taylor等人，Nature 297 ·· 307 (1982)。魚精蛋白之毒性，限制其作爲治療劑之實際用途。Folkman等人已揭示使用肝素與類固醇，以控制血管生成。參閲Folkman等人，Science 221 : 719 (1983)，及美國專利 5,001，116與4,994,443。類固醇，譬如四氫皮質甾醇，其缺乏葡萄糖基與礦物類皮質激素活性，已發現其係爲血管原抑制劑。干擾素卢亦爲一種被同種異基因脾臟細胞所引致血管生成之有效抑制劑。參閲Sidky等人，癌症研究 (Cancer Research) 47 : 5155-5161 (1987)。人類重組從-干擾素，據報告係成功地使用於治療肺血管瘤病，其爲一種血管生成所引致之疾病。參閲White等人，New England J. Med. 320 : 1197-1200(1989) 〇已用以抑制血管生成之其他藥劑，包括抗壞血酸醚類及相關化合物。參閲日本專利Kokai Tokkyo Koho第58-131978號。硫酸化多醣DS 4152亦顯示血管原抑制作用。參閲日本專利 Kokai Tokkyo Koho第63-119500號。眞菌產物，富馬葛林 (fiunagillin)，爲一種有效活體外制血管劑。此化合物在活體内是有毒的，但一種合成衍生物，AGM 12470，已被使用於活體内，以治療膠原Π關節炎。富馬葛林與0-取代之富馬葛林衍生物，係揭示於EPO公告案號0325199A2與0357061A1 中〇 -8- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）麵 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -----I--^ ·11111111 1229074

、發明說明（6 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 美國專利5,874,081中，Parish陳述使用單株抗體，以抑制血管生成。在W0 92/12717中，Brem等人陳述一些四環素類’特別是二甲胺四環素、氣四環素、去甲金黴素及離胺甲基四甲ί承素，可作爲血管生成之抑制劑使用。在癌症研究期刊51，672-675，1991年1月15日中，&咖等人陳述二甲胺四環素會抑制血管生成，達相當於肝素與可體松組合療法之私度。在癌症研究期刊52, 67〇2_67〇4, 1992年12月i日中， feicher等人陳述當減少轉移之抗血管生成劑時，且當抗血管生成劑二甲胺四環素與癌症化學療法或放射療法搭配使用時’腫瘤生長係減少且轉移數目係降低。身體之所有不同細胞類型，均可被轉變成良性或惡性腫瘤細胞。最常見之腫瘤位置係爲肺臟，接著爲結腸直腸、乳房、前列腺、膀胱、胰臟，然後是卵巢。其他盛行之癌症類型，包括白血病，中樞神經系統癌症，包括腦癌，黑色素瘤，淋巴瘤，紅白血病，子宮癌及頭部與頸部癌。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製癌症目前主要是以三種療法之一或其組合進行治療：手術、放射及化學療法。手術係涉及整體移除疾病組織。雖然手術在移除位於某些位置處之腫瘤上，有時是有效的，例如在乳房、結腸及皮膚中，但其不能用於治療位於其他 C域（&如脊骨）中之腫瘤，亦不能用於治療散佈之贅生症狀’譬如白血病。化學療法係涉及細胞複製或細胞新陳代謝作用之瓦解。其最常用於治療白血病，以及乳房、肺臟及睪丸癌。

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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（7 ) 目前用於治療癌症之化學治療劑，有五種主要種類：天然產物及其衍生物；蒽環素類；烷基化劑；抗增殖劑（亦稱爲抗代謝物）；及内泌素劑。化學治療劑經常被稱爲抗腫瘤劑。咸認烷基化劑係經由使鳥嘌呤及在DNA中之可能的其他鹼烷基化與交聯，遏制細胞分裂，而發生作用。典型燒基化劑包括氮芥末類、乙晞亞胺化合物、烷基硫酸鹽、順氣胺鉑及各種亞硝基脲類。使用此等化合物之一項缺點，係爲其不僅會攻擊惡性細胞’而且會攻擊其他自然分裂之細胞，譬如骨髓、皮膚、胃腸黏膜及胎兒組織。抗代謝物典型上爲可逆或不可逆之酶抑制劑，或以其他方式干擾核酸之複製、轉譯或轉錄之化合物。數種顯示抗癌活性之合成核苷已被確認。一種具有強抗癌活性之習知核苷衍生物，係爲5_氟尿嘧啶。孓氟尿嘧啶已於臨床上用於治療惡性腫瘤，包括例如癌瘤、肉瘤、皮膚癌、消化器官癌及乳癌。但是，5-氟尿嘧啶會造成嚴重不利反應，譬如惡心、禿髮、腹瀉、口炎、白血球血小板減少症、食慾缺乏、色素沉著及水腫。具有抗癌活性之5_ 氟尿嘧啶衍生物，已被描述於美國專利4,336,381，及日本專利公告案號 50-50383、50-50384、50-64281、51-146482 及 53· 84981中。美國專利4,000，137揭示肌荅、腺甞或胞嘧啶核苷與甲醇或乙醇之過氧化氧化作用產物，具有抵抗淋巴球白血病之活性。阿拉伯糖胞替（Cytosine arabinoside)(亦稱爲 Cytarabin、araC 及 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------訂---------線表 -10-

1229074 Α7 Β7 五、發明說明（8

Cytosar)爲脱氧胞苷之核甞類似物，其係首次在195〇年合成，並於1963年引進臨床醫藥中。其目前爲一種治療急性骨髓白血病之重要藥物。其對急性淋巴球白血病亦有活性，且達較小程度，可使用於慢性骨髓細胞白血病及非H〇dgkin 氏淋巴瘤。araC之主要作用是抑制核DNA合成。 Handschumacher，R·與Cheng，Y·，”嘌呤與嘧啶抗代謝物，，癌症醫藥，第XV-1章，第3版，由J· Holland等人編輯，Lea與Febigol出版社。5-氮胞苷爲一種胞嘧啶核荅類似物，其主要是用於治療急性骨髓細胞白血病及脊髓發育不良徵候誤。 2-氟基腺甞_5^磷酸鹽（Fludara，亦稱爲FaraA)爲在慢性淋巴球白血病治療上最具活性藥劑之一。此化合物係經由抑制 DNA合成而發生作用。細胞以F-araA治療係伴隨著細胞蓄積在G1/S期邊界處及在S期中；因此，其係爲對細胞週期s期專一之藥物。掺入活性新陳代謝產物F-araATP，會阻止DNA 鏈伸長。F-araA亦爲核糖核甞酸還原酶之有效抑制劑，該還原酶爲負責dATP形成之主要酶。2·氣基脱氧腺甞可用於治療輕度B-細胞贅瘤，譬如慢性淋巴球白血病、非Hodgkin 氏淋巴瘤及有毛細胞白血病。其活性範圍係類似Fludara。此化合物會抑制成長細胞中之DNA合成，及抑制休眠細胞中之DNA修補。雖然有多種化學治療劑已被確認，且目前被使用於癌症治療，但仍在尋找有效且對健康細胞顯示低毒性之新藥劑。 TNF α在氣喘及其他慢性肺炎疾病領域上，亦扮演一項角色。矽石粒子之沉積，會導致矽土沈著病，此爲一種因 -11 - @張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公" ： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ϋ -ϋ ϋ I l *^tfJ· ϋ mmEm n I I 一經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1229074 A7 B7 五、發明說明（9) 纖維變性反應所造成之漸進式呼吸衰竭疾病。在老鼠中使用抗體對ΤΝί>之預治療，幾乎完全阻斷矽石所引致之肺纖維變性{Pignet 等人，Nature 344, 245_247 (1990)}。高含量之 TNF 從產生（在血清中，及在已分離之巨噬細胞中）已在矽石與石棉所引致纖維變性之動物模式中註實{Bissonnette等人，炎症（Inflammation) 13(3)，329-339 (1989)}。亦已發現，當與得自正常供體之巨噬細胞比較時，得自肺結節病患者之肺胞巨噬細胞，會自發性地釋出大量TNF π {Baughman等人，J. Lab. Clin. Med· 115(1)，36-42 (1990)}。 TNF π亦與再灌注後之炎性回應有關聯，其係稱爲再灌注傷害，且係爲血液流動喪失後組織傷害之一項主要原因 {Vedder等人，PNAS 87, 2043-2646 (1990)}。組織傷害亦可包括手術傷害與發炎，心臟移植後之問題，系統炎性回應徵候簇，及多重器官機能障礙徵候簇。TNP>亦會改變内皮細胞之性質，並具有各種預凝聚活性，譬如造成組織因子預凝聚活性增加，及抑制抗凝血蛋白質C途徑，以及向下調整血栓調節素之表現{Sherry 等人，J. Cell Biol· 1〇7,1269-1277 (1988)} 。TNFa具有伴隨著其早期產生之預發炎活性（在炎性事件最初階段期間），使其成爲在數種重要病症中組織傷害之可能介體，包括但不限於心肌梗塞、中風及循環性休克。其中特別重要者可爲TNF α所引致之黏連分子表現，譬如胞間黏連分子（ICAM)或内皮白血球黏連分子（ELAM)在内皮細胞上之表現{Munro 等人，Am· J· Path· 135(1)，121-132 (1989)}。 TNF從以單株抗TNF仪抗體阻斷，已被証實在風濕性關節 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·1111111 ^ 11111111 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1229074 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（1G) 炎上是有利的{Elliot 等人，Int· J· Pharmac. 1995 17(2)，141-145}。高含量TNF仪係伴隨著克隆氏病{von Dullemen等人，胃腸病學 (Gastroenterology) 1995, 109(1)，129-135}，且臨床利益已使用 TNFa 抗體治療而達成。

Moeller在美國專利5,231，024中描述雜種瘤細胞系，其係合成抵抗人類腫瘤壞死因子（TNF>)之高度專一單株抗體（mAb) 。Rubin在美國專利4,870，163中，描述會產生人類腫瘤壞死因子之單株抗體之雜種瘤。Barbanti在美國專利5,436，154中，指出抵抗TNFa之抗體，及可能亦抵抗TNF々之抗體，可於治療上使用於其中此等多肽施加致病作用之疾病狀態。爲成爲抵抗TNFa之治療上有用抗體，其應能夠中和活體内 TNP>之毒性作用。多株抗體可容易地得自超免疫動物之血清。但是，此等多株抗體製劑，並不適宜活體内使用，因其係爲含有不會中和TNFa抗體之抗體混合物，其係爲含有對相同抗原決定部位具有不同親和力之不同抗體之抗體混合物，且以藥效爲觀點，由於批次間之偏差，故其難以標準化。再者，已知TNF α爲逆轉錄酶病毒複製之有效活化劑，包括 HIV-1 之活化作用{Duh 等人，Proc. Nat. AcadSci. 86, 5974-5978 (1989) ; Poll 等人，proc. Nat. Acad. Sci. 87, 782_785 (1990) ; Monto 等人，血液（Blood) 79, 2670 (1990) ; Clouse 等人，J. Immunol· 142, 431-438 (1989) ; Poll 等人，AIDS Res· Hum. Retrovirus, 191-197 (1992)}。AIDS 係由於T淋巴細胞被人類免疫不全病毒（HIV)感染所造成。至少三種HIV類型或菌種已被確認，意即HIV-1、HIV-2及 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) !!!訂！！線表 1229074 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（11) HIV-3。由於HIV感染之結果，故T-細胞所媒介之免疫係受到傷害，且受感染之個人顯示嚴重之機會性感染及/或不尋常贅瘤。進入τ淋巴細胞中之mv，需要τ淋巴細胞活化作用。其他病毒，譬如mv-i、mv·2，會在τ-細胞活化作用後感染T淋巴細胞，且此種病毒蛋白質表現及/或複製 ’係藉由此種T·細胞活化作用所媒介或保持。一旦經活化之τ淋巴細胞被mv感染，則τ淋巴細胞必須持續被保持呈活化狀態，以允許HIV基因表現及/或HIV複製。細胞素，特別是TNF α，係經由在保持τ淋巴細胞活化作用中扮演一項角色，而與經活化Τ-細胞所媒介之HTV蛋白質表現及/ 或病毒複製有牽連。因此，在HIV-感染之個人中，干擾細胞素活性，譬如藉由防止或抑制細胞素產生，特別是胃 α ’有助於限制因fflV感染所造成之Τ淋巴細胞之維持。單細胞、巨嗟細胞及相關細胞，譬如庫弗氏與神經膠質細胞，亦與HIV感染之維持有關聯。此等細胞，就像τ_細胞一樣’係爲病毒複製之標的，且病毒複製之程度係依細胞之活化狀態而定{Rosenberg等人，HIV感染之免疫發病原理於免疫學上之進展，57(1989)}。細胞素，譬如TNF仪，已經註實會在單細胞及/或巨噬細胞中促進HTV複製{P〇li等人，Proc. Natl· Acad· Sci·，87, 782-784 (1990)}，因此細胞素產生或活性之防止或抑制，有助於限制T-細胞之HIV進展。其他研究已確認TNFa在HIV於活體外之活化作用上作爲共用因子，且已提供經由在細胞質中發現之核調節蛋白質之明顯作用機制（Osbom等人，PNAS 86, 2336_234〇)。此項証據指出，減少 •14· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 x 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) i ! I ! I 訂-! — — — — — — 1229074 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（12) TNFa合成，在HIV感染上可具有抗病毒作用，其方式是減少轉錄及因此是病毒產生。潛伏HIV在T-細胞與巨噬細胞系中之AIDS病毒複製，可被 TNF α 謗發{Folks 等人，PNAS 86, 2365_2368 (I989)}。關於病毒引致活性之分子機制，係藉由TNF從使細胞質中發現之基因調節蛋白（NFkB)活化之能力顯示，其會經由結合至病毒調節基因順序（LTR)而促進my複製{〇sb〇m等人，PNAS 86, 2336_234〇 (I989)}。在與AIDS有關聯惡病質中之tnf從，係藉由升南之血清TNF α ’及在得自病人末梢血液單細胞中之高含量自發性TNF從產生而顯示{Wright等人，J. Immunol. 141 (1)，99-104 (1988)}。TNFa會影嚮mV病人中之小胞子蟲病（在 HIV病人中慢性腹瀉之原因）及口瘡潰瘍。tnf從係以不同角色與病毒感染有關聯，譬如巨細胞病毒（CMV)、流行性感冒病毒、腺病毒及疵療族群之病毒，與所指出者之原因類似。一些病毒，譬如Sendai病毒及流行性感冒會引致TNF仪〇核因子kB (NFkB)係爲親多組織性轉錄活化劑（Lenardo等人，Cell 1989, 58, 227-29)。NFkB作爲轉錄活化劑，係與多種疾病及炎性狀態有關聯，且被認爲會調節細胞素含量，包括但不限於TNFa ，且亦爲HIV轉錄之活化劑（Dbaibo等人 ,J· Biol· Chem. 1993, 17762-66 ; Duh 等人，Proc. Natl. Acad. Sci· 1989, 86, 5974-78 ; Bachelerie 等人，Nature 1991，350, 709-12 ; Boswas 等人，後天免疫不全徵候簇期刊，1993, 6, 778-786 ; Suzuki等人，：^〇(：1^111· And Biophys. Res. Comm. 1993, 193, 277-83 ; Suzuki 等人，Biochem· -15 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ---1"--------· 11-----訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1229074 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（13)

And Biophys· Res. Comm· 1992, 189, 1709-15 ; Suzuki 等人，Biochem· Mol· Bio. Int. 1993, 31(4), 693-700 ； Shakhov 等人，Proc· Natl. Acad. Sci· USA 1990, 171，35-47 ;及 Staal 等人，Proc. Natl. Acad· Sci· USA 1990, 87, 994347)。因此，抑制NFkB結合可調節細胞素基因之轉錄，且經由此項調制及其他機制，可用於抑制許多疾病狀態。本文中所述之化合物可抑制NFkB在核中之作用，且因此可用於治療多種疾病，包括但不限於風濕性關節炎、風濕性脊椎炎、骨關節炎、其他關節炎症狀、敗血性休克、敗血病、内毒素休克、移植物對宿主疾病、虛損、克隆氏病、潰瘍性結腸炎、多發性硬化、系統狼瘡紅斑、在麻風中之 ENL、HIV、AIDS及在AIDS中之機會性感染。TNF以與NFkB 含量係被往復反饋回路所影嚮。如上述，本發明化合物會影嚮TNF α與NFkB兩者之含量。當然，含量係指活性程度，以及濃度含量或絕對含量。許多細胞功能係藉由腺甞環單磷酸鹽（cAMP)之含量所媒介。此種細胞功能可助長炎性症狀及疾病，包括氣喘、炎症及其他症狀（Lowe與Cheng，未來藥物，17 (9)，799-807, 1992) 。已証實在炎性白血球中升高c AMP會抑制其活化作用及隨後釋出之炎性介體，包括TNF>與NFkB。增加CAMP含量，亦會導致氣道平滑肌鬆弛。磷酸二酯酶會經由水解作用控制c AMP之含量，且已証實磷酸二酯酶之抑制劑會增加 cAMP含量。因此，降低TNF α含量及/或增加c AMP含量，係構成一種有價値之治療策略，用於治療許多炎性、傳染性、免疫 -16- 本紙張尺度適用中國國家鮮（CNS)A4規格（210 X 297公髮) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) !|訂------線在 1229074

五、發明說明（14) 或惡性疾病。纟包括但不限於敗血性休克、敗血病、内毒素休克、血液流動性休克與敗血病徵候簇、絕血再灌注後〈傷害、癔疾、分枝捍菌感染、腦膜炎、牛皮癬、營血性心衰竭、纖維變性疾病、惡病質、移植排斥、癌症、自身免疫性疾病、在AIDS中之機會性感染、風濕性關節炎、風濕性脊椎炎、骨關節炎、其他關節炎症狀、克隆氏病、潰瘍性結腸炎、多發性硬化、系統狼瘡紅斑、在麻風中之 ENL、輻射傷害及肺胞傷害。先前針對抑制沈作用之努力，其範圍係從利用類固醇類，譬如地塞米松與氫化潑尼松，至利用多株抗體與單株抗體兩者{Beutler等人，Science 234, 470-474 (1985) ; W0 92/11383}。詳細説明本發明係基於發現某些非多肽化合物種類（其係更完整地描述於本文中）會降低TNF>含量，增加cAMp含量，抑制血管生成’抑制腫瘤生長或抑制炎症細胞素。因此，本發明係關於1-酮基-二氫氮雜茚與1，3_二酮基二氫氮雜茚，兩者均在異二氫氮雜雖環之4-位置或5·位置上經取代，藉由投予此種衍生物及含有此種衍生物之醫藥組合物，以降低腫瘤壞死因子及其他炎症細胞素在哺乳動物中含量之方法。在活體内、在活體外及在可飲用培養基中，降低以含量及/或增加cAMP含量及/或抑制血管生成，亦構成有價値之治療策略。特定言之，本發明係關於 (a)下式1，3-二酮基二氫氮雜茚： -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------^--------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 01229074 A7 五、發明說明（15 ) Ο

N-〇i-(CH2)n-c-R1 II 2 C-R2

N (I) 其中被指稱爲ο之碳原子，係構成一個對掌中心（當η不肩零且R不爲r2時）；χ〗與X2之一係爲胺基、硝基、一 j 穴個碳之烷基或ΝΗ-Ζ，而另一個χι或X2爲氫；“與！^之肩一個係與另一個無關，爲羥基或ΝΗ-Ζ ; R3爲一至六個碳4 烷基、_基或氫；Ζ爲氫、芳基或一至六個碳之烷基或酿基；及η具有〇、1或2之數値；其條件是若χ1爲胺基，且】爲1或2，則Ri與R2不均爲羥基； (b)式I之鹽； ⑹下式1-酮基二氫氮雜茚： (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --------- 訂--------- 〇

•R 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (II) 其中被指稱爲C*之碳原子，當η不爲零且Rl不爲R2時，係構成一個對掌中心；X1與X2之一係爲胺基、硝基、一至六個碳之：1充基或NH-Z，而另一個X1或X2爲氫；R1與R2之每一個係與另一個無關，爲羥基或NH-Z ; R3爲一至六個碳之規 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 1229074 五、發明說明（16 基、鹵基或氫；Z爲氫、芳基或一至六個碳之烷基或醯基 ;及11具有0、1或2之數値； (d)式Π之鹽。除非另有定義，否則烷基一詞係表示單價飽和分枝狀或直烴鏈，含有一至六個碳原子。此種烷基之代表例爲甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二·丁基及第 —丁基。纟元乳基係指燒基經由醚性氧原子結合至此分子 <其餘部份。此種烷氧基之代表例爲甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、異丁氧基、第二-丁氧基及第二-丁氧基。卣基包括溴基、氣基、氟基及碘基。式I與式Π之鹽，包括含有能夠被質子化之氮原子之經取代1-酮基異二氫氮雜茚與經取代二酮基二氫氮雜茚之羧酸鹽及酸加成鹽。式I與II化合物係於有資格專家之監督下使用，以抑制 TNFa及其他炎症細胞素，包括^、正_6及^之不想要作用，及/或治療不想要之血管生成與腫瘤生長。料化合物可以口服、直腸或非經腸方式，單獨或併用其他治療劑’包括抗生素、類固醇、化學治療劑等，投予需要治療 ^哺乳㈣；例如，用於治療癌症、風濕性關節炎、^性腸疾病、肌肉營養不良、克隆氏病等。本發明化合物亦可局部用於治療或預防因過量聊從產生或炎症所個別媒介或加重之疾病狀態，譬如病毒感染，如因祕病毒所造成者，病毒結合膜炎，牛皮癖，異位性皮炎等。 -19- 2¥公釐）本紙張尺度適财咖讀準（CNS)A4規格（21〇；

1229074 五、發明說明（17) 此等化合物亦可用於需要預防或抑制產生之人類以外哺乳動物之獸醫治療。以治療方式或以預防方式，在動物中治療之™Fa所媒介之疾病，包括譬如上文指出之疾病狀態，但特別是病毒感染。實例包括貓免疫不全病毒、馬傳染性貧血病毒、山羊關節炎病毒、綿羊髓鞘脱落病毒及梅迪病毒，以及其他慢病毒。式I化合物可容易地經由多種途徑製成。在一項具體實施例中’係使越胺酸、熟醯胺、異楚醯胺、天門冬胺酸、天冬素或異天冬素，與經取代之苯二甲酸酐反應，該酸酐譬如1，3-二酮基異苯并吱喃，其係進一步在‘或5_位置上經取代：

其中被指稱爲C*之碳原子，當η不爲零，且R1不爲R2時，係構成一個對掌中心；χι與X2之一係爲胺基、硝基、一至六個碳之烷基或ΝΗ-Ζ，而另一個X1或X2爲氫；R1與R2之每一個係與另一個無關，爲羥基或R3爲一至六個碳之烷基、卣基或氫；Ζ爲氫、芳基或一至六個碳之烷基；及η -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） - ----------费--------tr---------&· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Ο

(CH2)nC〇R1

1229074 A7 --------B7_ 五、發明說明（18 ) 具有0、1或2之數値；其條件是若χΐ爲胺基，且η爲1或2 ，則R1與R2不爲羥基。可使用經取代之Ν_乙氧羰基鄰苯二甲醯亞胺（參閲實例1)，以取代該酐。式Π化合物易於經由多種途徑製成。在第一項具體實施例中，係使麩胺酸、麩醯胺、異麩醯胺、天門冬胺酸、天冬素或異天冬素，與四取代之苯基反應： V«2_^ + H2N-C* 其中被指稱爲C*之碳原子，當η爲零且時，係構成一個對掌中心；X2爲胺基、硝基、一至六個碳之烷基或ΝΗ·Ζ ’ χ3爲氫；R1與R2之每一個係與另一個無關，爲羥基或之’ R3爲一至六個碳之坑基或醯基、鹵基或氫；ζ爲氫、芳基或一至六個碳之烷基；及η具有〇、1或2之數値；其條件是若X1爲胺基，且η爲1或2，則R1與R2不均爲羥基。在製備式Π之第二項具體實施例中，係使麩胺酸、麩醯胺、異麩醯胺、天門冬胺酸、天冬素或異天冬素，與在3-或心位置上經取代之苯二甲酸二醛反應：一 -21 - 本、Λ張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公釐） -----1-----------^--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1229074 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（19)

其中被指稱爲C*之碳原子，當η不爲零且R1不爲R2時，係構成一個對掌中心，· χΐ與X2之一係爲胺基、硝基、一至六個碳之燒基或ΝΗ-Ζ，而另一個Xl或X2爲氫；Rl與R2之每一個係與另一個無關，爲羥基或; R3爲一至六個碳之嫁基、鹵基或氫；Z爲氫、芳基或一至六個碳之烷基或醯基 ;及11具有〇、！或2之數値；其條件是若χι爲胺基，且^爲 1或2，則R1與R2不爲羥基。在式I化合物中’ R3所結合之碳原子，當η不爲零且Rl爲與R不相同之基團時’係構成一個對掌中心，於是導致光學異構物。此等異構物之消旋物及個別異構物本身，以及非對映異構物兩者，當第二個對掌中心存在時，係在本發明之範圍内。消旋物可以本身使用，或可以機械方式分離成其個別異構物，譬如藉層析，使用對掌性吸收劑。或者，個別異構物可以對掌形式製成，或以化學方式自混合物分離，其方式是與對掌性酸或鹼形成鹽，譬如瓜樟腦磺酸、樟腦酸、心溴基樟腦酸、甲氧基醋酸、酒石酸、二乙醯基酒石酸、蘋果酸、四氳吡咯酮·5·羧酸等之個別對掌異構物，然後使已解析之鹼之一或兩者釋離，視情況重複此程 ---^------------I---—訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -22- Α7 Β7

1229074 五、發明說明（20 ) 序’以獲得任一個或兩者，實質上不含另—個；意即，呈具有光學純度>95%之形式。本發明亦關於式〗化合物之生理學上可接受之無毒酸加成鹽’其含有能夠被質子化之基團；例如，胺基。此種鹽包括衍生自有機與無機酸者，在不受限制下，譬如鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸、甲烷磺酸、醋酸、酒石酸、乳酸、琥踊酸、檸檬酸、蘋果酸、順丁烯二酸、花楸酸、烏頭酸、柳酸、鄰苯二甲酸、半雙羥莕酸、庚酸等。被包含在本發明中之化合物，其代表性實例如下： 2-(η-Χ-1，3·二酮基異二氫氮雜茚-2-基）戊二酸，其中^爲3或 4,且X爲硝基、胺基、Ν_甲胺基、甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基； 2-(η-Χ-1，3-二酮基異二氫氮雜茚-2-基）-4-胺甲醯基丁酸，其中η爲3或4，且X爲硝基、胺基、N-甲胺基、甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基； 4-(η-Χ-1，3-二酮基異二氫氮雜茚-2-基）-4-胺甲醯基丁酸，其中η爲3或4，且X爲硝基、胺基、N_甲胺基、甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基； 2_(n-X_l，3-二酮基異二氫氮雜茚-2-基）琥珀酸，其中11爲3或 4，且X爲硝基、胺基、N-甲胺基、甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基； 2·(η-Χ·1，3-二酮基異二氫氮雜茚-2-基）·3-胺甲醯基丙酸，其中η爲3或4，且X爲硝基、胺基、Ν-甲胺基、甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基； -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ; --------IT---------線# (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1229074 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明說明（21) 3- (n-X-l，3-二酮基異二氫氮雜莽-2·基）-3-胺甲醯基丙酸，其中η爲3或4，且X爲硝基、胺基、N-甲胺基、甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基，· 2-(η·Χ-1-酮基異二氫氮雜茚-2-基）戊二酸，其中η爲3或4，且X爲硝基、胺基、Ν-甲胺基、甲基、乙基、丙基、異而基或丁基； 2-(η_Χ_1_酮基異二氫氮雜茚-2-基）-4-胺甲醯基丁酸，其中η 爲3或4，且X爲硝基、胺基、Ν·甲胺基、甲基、乙基、兩基、異丙基或丁基； 4- (η-Χ-1-酮基異二氫氮雜茚·2·基）-4-胺甲醯基丁酸，其中η 爲3或4，且X爲硝基、胺基、Ν-甲胺基、甲基、乙基、兩基、異丙基或丁基； 2_(η·Χ-1-酮基異二氫氮雜茚-2-基）琥珀酸，其中η爲3或4，且X爲硝基、胺基、Ν·甲胺基、甲基、乙基、丙基、異两基或丁基； 2- (η-Χ_1·酮基異二氫氮雜茚-2-基）-3-胺甲醯基丙酸，其中η 爲3或4,且X爲硝基、胺基、Ν_甲胺基、甲基、乙基、两基、異丙基或丁基；及 3- (η-Χ-1-酬基異一鐵*氣雜雖-2-基）-3-胺甲酿基丙酸，其中^ 爲3或4，且X爲硝基、胺基、Ν-甲胺基、甲基、乙基、兩基、異丙基或丁基，係爲特佳的。本發明可用於癌症治療、免疫調節藥物、血管生成抑制作用及本文所列示之其他應用。口服劑量形式包括片劑、膠囊、糖衣錠，及類似形狀、 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —-------------------訂----I--丨_ 線^^· Γ%先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 1229074 A7 五、發明說明（^) 經壓縮之醫㈣式，每單位難含有⑴⑻毫克藥物。人有至_毫克/毫升之等滲性鹽水溶液，可用於非^ 投藥，其包括肌内、箱内、靜脈内及動脈内投藥途徑： =樂可經由使用從習用載劑(譬如可可豆脂)調配之栓劑醫藥組合物因此包含一或多種式j化合物，伴随著至心― 種藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。在製備此種組合物時，通常係將活性成份與賦形劑混合，或以其稀釋，或裝在可呈膠囊或小藥囊形式之載體中。當賦形劑充作稀釋劑時，其可爲固體、半固體或液體物質，其係充作活性成份I媒劑、載劑或媒質。因此，此等組合物可呈片劑、丸劑、粉末、酏劑、懸浮液、乳化液、溶液、糖漿、軟與硬明膠膠囊、栓劑、無菌可注射溶液及無菌包裝粉末形式。適當賦形劑之實例，包括乳糖、右旋糖、廉糖、花概醇、甘露醇、澱粉、阿拉伯膠、梦酸匈、微晶性纖維素聚乙烯基四氫吡咯酮、纖維素、水、糖漿及甲基纖維素，此等配方可另外包含潤滑劑，譬如滑石、硬脂酸鎂及礦油，潤濕劑，乳化與懸浮劑，保存劑，譬如羥基苯甲酸甲酯與丙酯，增甜劑或矯味劑。、此等組合物較佳係被調配成單位劑量形式，其意義是適合作爲單一劑量之物理上分立單位，或欲以單一或多重劑量服法投予人類病患及其他哺乳動物之單一劑量之預定部伤，各單位含有經計算以產生所要治療效果之預定量活性物質，且伴隨著適當醫藥賦形劑。此等組合物可採用此項 -25 本紙張尺度適用中_家標準（CNs)A4規格（ χ挪公董 1229074 A7 B7 五、發明說明（23 ) 技藝中所習知之程序調配，以在對病人投藥後，提供活性成份之立即、持續或延遲釋出。 TNF>之酶連結免疫吸著劑檢測识LISA)可以習用方式進行。PBMC係藉Ficoll_Hypaque密度離心法，自正常供體單離。將細胞在補充10% AB+血清、2 mML-麩醯胺、100 U /毫升青黴素及100毫克/毫升鏈黴素之RPMj中培養。使藥物溶於一甲亞颯（Sigma化學公司）中，及進一步在已補充之rpmj 中稀釋。於藥物存在或不存在下，在PBMC懸浮液中之最後二甲亞砜濃度，係爲0.25重量。/。。藥物係在半對數稀釋液下進行檢測，於50毫克/毫升下開始。在添加LPS之前一小時，將藥物添加至96井板中之PBMC (106個細胞/毫升）内。於藥物存在或不存在下，經由以得自明尼蘇達沙門氏菌R595 (List生物實驗室，Campbell，CA)之1毫克/毫升LPS處理，以刺激PBMC (106個細胞/毫升）。然後，使細胞在3yC下培養18-20小時。採集上層清液，並立即檢測_以含量，或在-70 C下保持冷凍（不超過4天）直到檢測爲止。TNp α在上層清液中之濃度，係藉由人類TNP> ELISA套件（ENDOGEN， Boston，ΜΑ)，根據製造者之指示進行測定。下述實例係用以進一步表現本發明之性質，但不應解釋爲其範圍之限制，其範圍僅由隨文所附之申請專利範園界實例1 1-(4-硝基·1，3_二酮基異二氫氮雜茚_2_基）丙烷义}二羧酸於麩胺酸（10毫莫耳）與碳酸納（1〇 5毫莫耳）在水（50毫升） _ -26- 本紙張尺度適用中國國豕標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線·· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1229074 A7 B7 五、發明說明（24 ) 中之經攪拌溶液内，添加孓硝基·L3-二酮基異二氫氮雜茚_2-羧酸乙酯（10毫莫耳）。將所形成之混合物攪拌3小時。過濾此混合物。然後，以4 N鹽酸，使濾液酸化至pH 1，而得 1-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚_2_基）丙烷_1，3_二羧酸。實例2 1-(4·甲基_1，3_二酮基異二氫氮雜茚-2-基）丙烷·1，3_二羧酸將麩胺酸（10毫莫耳）與4_甲基異苯并呋喃-1,3-二酮（下文使用鄰苯二甲酸酐）（10亳莫耳）在2〇毫升醋酸中之混合物，加熱至回流。然後，使已冷卻之反應物在眞空中濃縮。將殘留物在醋酸乙酯中配成漿液，並將所形成之漿液過濾，而得所要產物。可使用管柱層析以純化所要之產物，作爲漿液過濾之替代方式。實例3 4_(4_硝基_1，3_二酮基異二氫氮雜茚-2-基）·4-胺甲醯基丁酸將異麩醯胺（20毫莫耳）與3_硝基苯二甲酸酐（20毫莫耳）在醋酸中之混合物加熱至回流。使已冷卻之反應混合物濃縮，並將殘留物藉層析純化，而得2-(4-硝基·1，3·二酮基異二氫氮雜印-2-基）-4_胺甲酿基丁酸。實例4 2·(4-甲基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚：基）_4_胺甲醯基丁酸將麩醯胺（10毫莫耳）與4-甲基異苯幷呋喃-l，3-二酮（1〇亳莫耳）在15毫升醋酸中之混合物加熱至回流。使已冷卻之反應混合物濃縮，並將殘留物藉層析純化，而得2-(4_硝基·ι，3_ 二酮基異二氫氮雜茚-2-基)-4-胺甲醯基丁酸。 -27 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ----I--—訂---------. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製屋 q C V 丄 \ P 1- / 1229074

五、發明說明（25) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製實例5 2-(4-确基_1，3_二酮基異二氫氮雜茚j基）_3_胺甲醯基丁酸將天冬素（10耄莫耳）與3-硝基苯二甲酸酐（1〇毫莫耳）在15 毫升醋酸中之混合物加熱至回流。使已冷卻之反應混合物濃縮，並使殘留物純化，而得厶(4•硝基•二酮基異二氫氮雜茚基）_3_胺甲醯基丙酸。實例6 2-(4•胺基·1，3_二酮基異二氫氮雜茚基）各胺甲醯基丙酸將2-(4·硝基-1，3_二酮基異二氫氮雜茚_2_基>3_胺甲醯基丙酸 (7.5耄莫耳）與i〇〇/0 Pd/C (2〇〇毫克）在2〇毫升二甲基甲醯胺中之混合物’以60 psi氫，在帕爾型搖動器中處理，而得厶(4-胺基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚冬基)_3_胺甲醯基丙酸。實例7 2-(4·硝基_1，3_二酮基異二氫氮雜茚基）_4_胺甲醯基丁酸將麩醯胺（10毫莫耳）與3-硝基苯二甲酸酐（10毫莫耳）在15 毫升醋酸中之混合物加熱至回流。使已冷卻之反應混合物濃縮，並將殘留物藉層析純化，而得2-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚_2_基)-4-胺甲醯基丁酸。實例8 2-(4-胺基-1，3·二酮基異二氫氮雜茚-2-基）-4-胺甲醯基丁酸將2-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚_2·基）-4-胺甲醯基丁酸 (5毫莫耳）與10〇/〇 Pd/C (250毫克）在二甲基甲醯胺中之混合物，於60 psi氫下，在帕爾型搖動器中氫化，而得2-(4-胺基-1,3· 二酮基異二氫氮雜茚-2-基)-4-胺甲醯基丁酸。 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ---11--— ---I--—訂-------- -線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1229074 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

^ --------tr------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A7 B7 五、發明說明（26) 實例9 2-(4-硝基-1-酮基異二氫氮雜茚-2·基）戊二酸於麩胺酸（10毫莫耳）與碳酸鈉（1〇·5毫莫耳）在水（50毫升）中之經攪摔溶液内，添加1-酮基-4-硝基-異苯弁呋喃（1〇毫莫耳）。將所形成之混合物攪拌3小時。過濾此混合物。然後，以4Ν鹽酸，使濾液酸化至ρΗ 1，而得2-(4-硝基小酮基異二氫氮雜茚-2-基）戊二酸。實例10 2- (4-硝基-1-酮基異二氫氮雜茚_2基）·4·胺甲醯基丁酸 I 將越醯胺（1〇毫莫耳）與1·酮基-4-硝基-異苯并咬喃（1〇毫莫耳）在15毫升醋酸中之混合物加熱至回流。使已冷卻之反應混合物濃縮，並將殘留物藉層析純化，而得2_(4_硝基小酮基異二氫氮雜茚-2·基）·4-胺甲醯基丁酸。實例11 2_(4_硝基-1·酮基異二氫氮雜茚·2_基）琥珀酸將天門冬胺酸（10毫莫耳）與1-酮基冰硝基-異苯幷呋喃（1〇毫莫耳）在20亳升醋酸中之混合物加熱至回流。然後，使已冷卻之反應物在眞空中濃縮。將殘留物在醋酸乙酯中配成漿液’並將所形成之漿液過濾，而得所要產物。可使用模擬移動床層析，以純化所要產物，作爲漿液過濾之替代方式。實例12 3- (4•硝基+酮基異二氳氮雜茚-2-基)-3-胺甲醯基丙酸將異天冬素（10毫莫耳）與3-硝基苯二甲酸酐（10毫莫耳）在 I : 本紙張尺度中國國家規格⑵〇 χ — )------ 線·-· 1229074 A7 B7 五、發明說明（27 ) 15毫升醋酸中之混合物加熱至回流。使已冷卻之反應混合物濃縮，並將殘留物藉層析純化，而得3-(4-硝基-1-酮基異二氫氮雜茚-2-基）-3-胺甲醯基丙酸。實例13 1-(4-硝基-1_嗣基異二氮氣雜莽_2_基）丙燒-1,3_二幾酸二爷醋將3-硝基-2-(溴基甲基）苯甲酸甲酯（2.5克，9.12毫莫耳）、 L_麩胺酸二苄酯對-甲苯磺酸鹽（3.0克，9·12毫莫耳）及三乙胺（2.0克，20.0毫莫耳）在THF (50毫升）中之混合物，於回流下加熱16小時。將混合物以二氣甲烷（150毫升）稀釋，並以水(2x40毫升）、鹽水（40毫升）洗滌，乾燥及濃縮成油。將此油藉層析純化（矽膠，己烷：EtOAc 7 : 3)，而得1-(4-硝基-1·酮基異二氫氮雜茚_2_基）丙烷_1，3_二羧酸二芊酯（2.65克，59 % ) ; 1H NMR (CDC13 ) d 8.39 (d，J=7.8 Hz，1H)，8.16 (d，J=7.3 Hz，1H)， 7.69 (t, J=7.9 Hz9 1H)9 7.30 (m, 10H), 5.29 (s, 2H)? 5.29-5.13 (m9 1H)? 5.03 (s? 2H)，4.98 (d，J=19.1 Hz，1H)，4.85 (d，J=19.2 Hz，1H)，2.54-2.39 (m，4H); 13CNMR(CDC13) Θ 171.79, 169.92, 166.72, 143.47, 137.25, 135.49, 134.99, 130.17, 129.67, 128.62, 128.52, 128.29, 128.25, 128.23, 127.04, 67.49, 66.58， 53.70, 48.35, 30.87, 24.79. 實例14 1-(4-胺基-1_酮基異二氫氮雜莽_2-基）丙燒_ι，3·二叛酸將1·(4_硝基·1_酮基異二氫氮雜茚冬基）丙烷-1，3_二羧酸二苄基醚或酯（2.6克，5.3毫莫耳）、10% Pd/C (0.26克）及甲醇（50毫升）之混合物，於50 psi氫下氫化6小時。經過矽藻土過濾此混合物，並將矽藻土墊以甲醇（50毫升）洗滌。使濾液在眞 •30- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -———訂---------. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 &張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐) 一經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1229074 A7 ___ B7_ 五、發明說明（28 ) 空中濃縮，而得1-(4-胺基小酮基異二氫氮雜茚-2_基）丙烷-1，3-二羧酸（1.2 克，81%);熔點 183-185°C ; iHNMR^DMSOOd 7.17 (t，J=7.6 Hz，1H)，6.89 (d，J=7.3 Hz，1Η)，6.79 (d，J=7.8 Hz，1Η)，5.50 (b， 2H)，4.82_4.77(m，lH)，4.23(s，2H)，2.31-1.98(m，4H);13CNMR(DMSO-d6) d 173.46, 172.28, 168.98, 143.58, 132.21，128.73, 125.65, 116.24, 110.34, 52·83,45·19,3〇·32,24·42;對 C13H14N205之分析計算値；C，56.11 ;Η，5·07 ; N，10.07.實測値：C，55·95 ; H，5.37 ; Ν，9·73. 實例15 1-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚-2-基）丙烷·ι，3_二羧酸將3-硝基苯二甲酸酐（〗·5克，7· 77毫莫耳）與^麩胺酸（12 克’ 7.77毫莫耳）在DMF (15毫升）中之混合物，於85°C下加熱6小時。使混合物在眞空中濃縮，並將殘留物藉層析純化（矽膠，CH2C12 : CH3OH95: 5)，而得 1-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜雖-2-基）丙挽-1，3_二叛酸（1.51克，60 % ); 1H NMR (DMS0-d6 ) ά 8.32 (d? J=7.9 Hz? 1H)? 8.21 (d? J=7.3 Hz? 1H)? 8.10 (t，J=7.8 Hz，1H)，4·88·4·82 (dd，J=3.0 與 10·0 Hz，1H)，2.35_Z20 (m，4H). 實例16 1·(4_胺基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚·2·基）丙烷二羧酸使1-(4-硝基·1，3-二酮基異二氫氮雜茚_2_基）丙烷-；ι，3_二羧酸 (1.4克，4.34毫莫耳）與10% Pd/C (0.14克）在甲醇（50毫升）中之混合物，於50 psi氫下氫化2小時。經過矽藻土過濾此混合物，並將矽藻土墊以甲醇洗滌（40毫升）。使濾液濃縮，並將殘留物以醋酸乙酯（25毫升）與己烷（20毫升）配成聚液，而得K4_胺基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚_2_基）丙烷+3·二羧酸： --------IT--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -31 -

1229074 A7 B7 五、發明說明（29) (1.02 克，80% );熔點 198-200X： ; iHNMRpMSOO d 7.46 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (t，J=7.6Hz，lH)，7.02-6.97(m，2H)，6.49(s，2H)，4.72-4.68(m，lH)，2.38· 2.20 (m, 4H) ; 13 C NMR (DMS0-d6 ) ά 173.60, 170.60, 168.90, 167.64, 146.64, 135.33, 132.03, 121.56, 110.89, 108.68, 50.56, 30.39, 23.76 ;對 c13H12N2〇6之分析計算値：c，53.43 ; H，4.14; N，9.59.實測値 :C，53.37 ; H，4.41 ; N，9.43. 實例17 2-(4-硝基·1，3·二酮基異二氫氮雜茚_2_基)-4-胺甲醯基丁酸 (40761-10) 將3-硝基苯二甲酸酐（1.5克，7.8毫莫耳）與L-越醯胺（1.14 克，7.8毫莫耳）在DMF (15毫升）中之混合物，於85-90X：下加熱4小時。使混合物在眞空中濃縮，並將殘留物以水（30毫升）配成漿液。將所形成之漿液過濾，及以水（10毫升）洗滌固體，乾燥（60°C，<1毫米Hg)，而得2-(4-硝基·1，3-二酮基異二氫氮雜茚基）-4·胺甲醯基丁酸（1.82克，73% );熔點182· 184 °C ; 1H NMR (DMS0-d6 ) ά 8.33 (d, J=7.7 Hz, 1H)? 8.22 (d? J=7.0 Hz, 1H)? 8.11 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.19 (s? 1H), 6.73 (s, 1H)? 4.82-4.77 (dd, J=4.6 ^ 9·8 Hz，1H)，2.36-2.11 (m，4H) ; 13 C NMR (DMS0-d6) d 173.21，170.03, 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 165.43, 162.75, 144.45, 136.70, 132.98, 128.83, 127.25, 122.52, 51.87, 31.31， 23.87 ;對 #3()7之分析計算値：C，48.60 ; Η，3·45 ; N，13.08.實測値：C，48.52 ; H，3.28 ; N，13.05. 實例18 2-(4-胺基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚-2-基)-4-胺甲醯基丁酸 (40761-18) -32 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1229074 ______B7__ 五、發明說明（％ ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 使2-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚·2-基>4-胺甲醯基丁酸 (1.75克，5.45毫莫耳）與10% Pd/C (0.2克）在甲醇（52毫升）中之混合物，於50 psi氫下氫化2小時。經過矽藻土過濾此混合物，並將矽藻土墊以甲醇（30毫升）洗滌。使濾液於眞空中濃縮，並將殘留物以醋酸乙酯（20毫升）配成漿液，歷經30 分鐘。將所形成之漿液過濾，並以醋酸乙酯（10毫升）洗滌固體，及乾燥（60°C，<1毫米Hg)，而得2-(4-胺基-1，3-二酮基異二氫氮雜節-2-基）-4_胺甲酿基丁酸（1.39克，88% )，爲黃色固體，·溶點 165-167°C ; iHNMRpMSO-dJd 13.08 (b，lH)，7.46 (t，J=7.8 Hz，1H)，7.22 (s，1Η)，7·02·6·97 (dd，J=4.1 與 5·5 Hz，1H)，6.73 (s， 1H)，6.51 (s，2H)，4.68-4.62 (dd，J=4.5 與 10.5 Hz，1H)，2.50-1.99 (m，4H); 13CNMR(DMSO-d6) 173.07, 170.75, 168.88, 167.63, 146.66, 135.36, ΐ32·〇3, m·58· lio·87, ι〇8·63,5〇·74,3i·34,24·〇3 ;對 ci3Hi3N3〇5之分析計算値·· C，53.60 ; H，4.50 ; N，14·43·實測値：c，53.71 ; Η，4·40 ; N，14.31. 實例19 片劑，各含有50毫克1-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚·2· 基）丙烷·1，3-二羧酸，可以下述方式製備：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製組份（提供1，000顆片劑） 1-(4·硝基-ΐ，3-二酮基異二氫氮雜茚-2- 基）-丙烷·1,3_二羧酸...............................50.0克乳糖................................................................50.7克小麥澱粉.....................................................7.5克聚乙二醇6000............................................ 5.0克滑石................................................................5.0克硬脂酸鎂.....................................................1.8克脱礦質水......................................................適量 • 33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐^ 1229074 五經濟部智慧財產局員工消費合作社印製、發明說明（31) 首先使固體成份強制經過06亳米網目寬度之篩網。然後，將活性成份、乳糖、滑石、硬脂酸鎂及一半澱粉混合。使另一半澱粉懸浮於40毫升水中，並將此懸浮液添加至聚乙二醇在100毫升水中之沸騰溶液内。將所形成之糊劑添加至粉狀物質中，並使混合物粒化，若必要則添加水。使顆粒在35 C下乾燥過夜，強制經過12毫米網目寬度之篩網，並壓縮形成大約6毫米直徑之片劑，在其兩個侧面上爲下凹。實例20 明膠乾式充填膠囊，各含有1〇〇毫克2-(4-硝基二酮基異一氫氮雜茚-2-基）-4-胺甲醯基丁酸，可以下述方式製備：也合物(提供1，000個膠囊） 2-(4-硝基-i，3-二酮基異二氫氮雜茚基）_4·胺甲醯基丁酸............ 古微晶性纖維素.......................•…· 300 ^ 月桂基硫酸鈉............. 70 i 硬脂酸鎂............................：::===· ^ 使月桂基硫酸鈉經過〇·2毫米網目寬度之篩網，過篩至厶 (4-硝基·1，3-二酮基異二氫氮雜茚：基）冰胺甲醯基丁酸中，並將兩種成份岔、切混合10分鐘。然後，經過〇 9毫米網目寬度之篩網，添加微晶性纖維素，並將全體再一次密切混合 10分鐘。最後，經過〇·8亳米寬度之篩網，添加硬脂酸鎂，並於再混合3分鐘後，將混合物以每份14〇毫克引進〇號（細長）明膠乾式充填膠囊中。實例21 0.2%注射溶液可以例如下述方式製備： -34 - 1229074

2-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚_2· 五、發明說明（32) 基）-4_胺甲酿基丁酸..................................5 〇克氣化納..................... 22 5克磷酸鹽緩衝劑pH 7.4.................................. 300.0克脱礦質水至...................................................2500.0亳升使2-(4-硝基_1，3_二酮基異二氫氮雜茚_2-基）_4_胺甲醯基丁酸溶於1，000毫升水中，並經過微型過濾器過濾。添加緩衝溶液，並將整體以水補足至2,500毫升。爲製備劑量單位形式 ’將各1.0或2.5毫升部份，引進玻璃安瓿瓶中（各含有個別 2.0或5.0毫克醯亞胺）。 ------------------- I 訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 35 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims

A8 B8 C8 D8 现專利申請案中文申請專利範圍替換本(93年8月）申請專利範圍 1. 種化口物’選自包括下式U•二酮基異二氫氮雜雖： 0II 0

X 0II •R1 其中被指稱為C*之碳原子，當n不為零時，及當Κ不為¥ 時，係構成一個對掌中心； X與X之一為硝基，一至六個碳之烷基，或NH-Z，而另一個X1或X2為氳； R與R之每一個係與另一個無關，為羥基或; R3為一至六個碳之烷基、鹵基或氫； Z為氮、苯基、一至六個碳之醯基或一至六個碳之烷基；及 η具有0、1或2之數值；其條件是若X1與X2之一為硝基，且或2，則…與尺2 不為羥基；及其鹽。其中R1為羥基；R2 其中R1為胺基；R2 2·根據申請專利範圍第1項之化合物為胺基’ R3為氫；及η為1或2。 3·根據申请專利範圍第1項之化合物為羥基；R3為氫；及11為1或2。 4·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中丨，3•二酮基異二氣氮雜印為1-(4-硝基-i，3-二酮基異二氫氮雜印_2_基）丙燒_ 63319-930812.DOC a 本紙張尺細中國國家標準(CNS) A4規格(摩297公着) 1229074 申請專利範圍 A8 B8 C8 D8 i，3·二羧酸。 5·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中u_二酮基異二氫氮雜茚為1_(4_甲基-L3-二酮基異二氫氮雜茚冬基）丙烷· 1，3-二幾酸。 6·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中u-二酮基異二氫氮雜茚為4·(4·硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚冬基>4_胺甲酶基丁酸。 7.根據申請專利範圍第i項之化合物，其中二酮基異二氫氮雜茚為2-(4-甲基-1,3-二酮基異二氫氮雜茚·2_基）_4_胺甲驢基丁酸。 8·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中u-二酮基異二氫氮雜茚為2-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚4基）_3_胺甲聽基丁酸。 9·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中u_二酮基異二氫氮雜茚為2-(4-胺基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚冬基胺甲酿基丙酸。 1〇·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中1，3_二酮基異二氫氮雜茚為2-(4-硝基-1，3-二酮基異二氫氮雜茚基）冬胺甲醯基丁酸。 H·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中丨，3_二g同基異二氫氮雜碎為2-(4-胺基·1，3-二酮基異二氫氮雜茚基)冰胺甲醯基丁酸。 12· —種用於降低炎症細胞素在哺乳動物中含量的醫藥組合物，其包含有效量之根據申請專利範圍第1項之化合物 -2 - 63319-930812.DOC 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) Α4規格(210 X 297公釐) 1229074

.作為活性成份。 a 14 根據申請專利範圍第丨2項之醫藥組合物，其係以單_ 或多重劑量服用法投藥。一種化合物，選自包括下式μ酮基異二氫氮雜茚：

其中：裝被指稱為C*之碳原子，當η不為零且Ri不為R2時，係構成一個對掌中心；訂 X1與X2之一為胺基、硝基、一至六個碳之烷基或π-ζ，而另一個X1或X2為氫； R1與R2之每一個係與另一個無關，為羥基或 R3為一至六個碳之烷基、鹵基或氫； Ζ為氫、苯基、一至六個碳之醯基或一至六個碳之烷基； η具有〇、1或2之數值；其條件是若X1與X2之一為胺基或硝基，X1與X2之一為氫，且η為1或2，則R1與R2不均為羥基；及其鹽。 15. 根據申請專利範圍第1 4項之化合物，其中Ri為羥基；R2 為胺；R3為氫；及η為1或2。 16. 根據申請專利範圍第1 4項之化合物，其中Ri為胺；R2為 63319-930812.DOC - 3 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐） 1229074

I基，R3為氫；及η為1或2。 17·根據申請專利範圍第14項之化合物，其中μ酮基-異二氫氮雜茚為2_(4·硝基小酮基異二氫氮雜茚_2_基）戊二酸。 18·根據申請專利範圍第14項之化合物，其中丨_酮基_異二氫氮雜茚為2_(4_硝基_1_酮基異二氫氮雜茚_2_基）冰胺甲醯基丁酸。 19·根據申請專利範圍第i 4項之化合物，其中μ酮基_異二氫氮雜茚為4-(4-硝基小酮基異二氫氮雜茚_2_基）冬胺甲醯基丁酸。 2〇·根據申請專利範圍第1 4項之化合物，其中μ酮基-異二氫氮雜印為2-(4-硝基-1-酮基異二氫氮雜莽基）琥拍酸。 21·根據申請專利範圍第1 4項之化合物，其中卜酮基-異二氫氮雜茚為2-(4-硝基-1-酮基異二氫氮雜茚_2-基）-3-胺甲醯基丙酸。 22·根據申請專利範圍第丨4項之化合物，其中]μ酮基-異二氫氮雜茚為3·(4-硝基-1-酮基異二氫氮雜茚-2-基）-3-胺甲醯基丙酸。 23·根據申請專利範圍第1 4項之化合物，其中丨_酮基·異二氫氮雜茚為3-(4-胺基小酮基異二氫氮雜茚-2-基）-3-胺甲基丙酸。 24. 根據申請專利範圍第1 4項之化合物，其中ι_嗣基_異二氯氮雜？卩為3-(3-胺基-1-酮基異二氫氮雜莽-2-基）_3_胺甲酿基丙酸。 25. 根據申請專利範圍第1 4項之化合物，其中酿j基_異二氯 63319-930812.DOC - 4 · 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)' ' !229〇74 as B8 C8 ΠΤ-Γ---El κ、申請專利範圍 .氮雜印為2-(4-胺基·1-酮基異二氫氮雜茚_2_基）戊二酸。 26·，據申請專利範圍第14項之化合物，其中卜酮基-異二氯氮雜茚為2-(3-胺基-1·酮基異二氫氮雜茚么基）戊二酸。盯一種用於降低炎症細胞素在哺乳動物中含量的醫藥組人物，其包含有效量之根據申請專利範圍第14項之化: 物作為活性成份。 28. 根據申請專利範圍第27項之醫藥組合物，其係以單一或多重劑量法投藥。 29. 根據申請專利範圍第i項之化合物，其係用於抑制哺乳動物中之TNFa，其中χΐ與X2之一為胺基。 30·根據申請專利範圍第！項之化合物，其係作為免疫調節藥物使用，其中χΐ與X2之一為胺基。 31·根據申請專利範圍第1項之化合物，其係作為免疫調節藥物使用。 32·根據申請專利範圍第1項之化合物，其係用於抑制不想要之血管生成。 33. 根據中請專利範圍第14項之化合物，其係用於抑制不想要之血管生成。 34. 根據申請專利範圍第1項之化合物，其係用於抑制不想要之血管生成，其中χΐ與X2之一為胺基。 35·根據申請專利範圍第14項之化合物，其係用於抑制不想要之血管生成，其中χΐ與X2之一為胺基。 36·根據申請專利範圍第！項之化合物，其係用於治療癌症。 37·根據申請專利範圍第14項之化合物，其係用於治療癌 -5- 63319-930812.DOC 本紙張尺度適用中國國豕標準(CNS) A4規格(210X297公釐) 1229074

.症。 38·根據申請專利範園第i項之化合物症，其中χ1與X2之一為胺基。 39·根據申請專利範圍第1 4項之化合物症，其中χ1與X2之一為胺基。其係用於治療癌其係用於治療癌 4〇·根據申請專利範圍第1項之化合物，其係用於治療哺乳動物中之跡α，其中χ丨與—聽基。療哺礼 41.，據申請專利範圍第1項之化合物，S係作為免疫調節藥物使用，其中χΐ與X2之一為烷基。 42·根據申請專利範圍第1項之化合物，其係用於抑制不想要 <血管生成，其中X1與X2之一為烷基。 43·根據申請專利範圍第丨4項之化合物，其係用於抑制不想要之血管生成，其中X1與X2之一為烷基。 44·根據申請專利範圍第i項之化合物，其係用於治療癌症’其中X1與X2之一為烷基。 45.根據申請專利範圍第1 4項之化合物，其係用於治療癌症，其中X1與X2之一為烷基。 63319-930812.DOC -6 -

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