TWI225404B

TWI225404B - Pharmaceutical composition for treating hypercoagulable states or acquired protein C deficiency

Info

Publication number: TWI225404B
Application number: TW087117061A
Authority: TW
Inventors: Brian William Grinnell; Daniel Lawrence Hartman; Sau-Chi Betty Yan
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1997-10-20
Filing date: 1998-10-14
Publication date: 2004-12-21
Also published as: JP2005097313A; US6426071B2; HU224901B1; JP2001520199A; SI0913156T1; PL340096A1; US6008199A; WO1999020293A1; EP0913156A1; ES2239382T3; TR200001059T2; UA72194C2; US6037322A; IL135712A0; HUP0001237A2; DE69829721T2; BR9812965A; KR20010031217A; ZA989385B; EP1449537A3

Description

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本發明係有關馐學，特定言之治療與活化蛋白質C有關之凝血過快狀態或後天蛋白質c缺乏之方法。蛋白質C為一種絲胺酸蛋白酶及天然之抗凝血劑，其透過在一連串凝血過程中使“與^118因子不活化來阻斷凝血酶生成之能力而在調節止血作用上扮演一個角色。人類蛋白質C在活體内主要在肝中製造，為含461個胺基酸之單一多肽。此前體分子進行多項轉譯後之修飾作用，包括n 製解一段42個胺基酸之訊號序列；2)自一條鏈型酶原上第 155位置之離胺酸及156位置上之精胺酸殘質上進行蛋白質分解脫除，形成雙鏈型分子（亦即一條含155個胺基酸殘基之輕鏈利用二硫橋連附接含絲胺酸蛋白酶之含2 6 2個胺基酸殘基之重鏈），3)由群集在輕鏈上前42個胺基酸中之9個麩胺酸殘基依賴維生素K進行叛基化作用，產生9個叛基麩胺酸殘基；及4)於4個位置上附接碳水化合物（一個夂位置在輕鏈上，其他三個在重鏈上）。重鏈含有已完全確認為Asp 2 5 7、His 211與Ser 3 6 0之絲胺酸蛋白酶活體。最後，成環狀之雙鏈酶原於活體内，於鈣離子之存在下，於磷脂表面上、經凝血酶活化。由重鏈之N-末端處十肽脫除而造成活化，產生具有酵素活性之活化蛋白質C ( a p c )。 aPC與其他蛋、白質結合時，其功能可能作為凝血作用中最重要之向下調節物’以防止血栓。除了其抗凝血功能外，aPC經由其抑制細胞素（例如：TNF與IL-1 )生成作用而具有抗發炎效果，而且亦具有溶解血纖維蛋白原之性質，有助於溶解血塊。因此蛋白質C酵素系統代表抗凝血、抗

D:\55136.ptd 第4頁 1225404 五、發明說明（2) 發炎、及溶解血纖維蛋白之主要生理機轉。敗血病敗血病之定義為對感染之全身性發炎反應，與許多宿主防衛機轉（包括細胞素網路、白血球及補體與凝血/血纖維蛋白溶解系統）之活化作用有關並受其調節。[米斯特 (Mesters)等人，血液學（Bl00d) 8 8:8 8 1 _ 8 8 6，1 9 9 6 ]。敗血病/敗血丨生休克之早期症狀為多發性血管内凝血[D丨c ]，並於各種不同器官之微血管中有普遍血纖維蛋白沈積現象。DIC為多重器官衰竭症候群發展之重要調節劑，且對敗血病休克患者之預後有不良影響[弗利爾（F〇urrier)等人，胸腔學（Chest) 101:8 1 6-8 23 ,1 992]。已有文獻報告數項於各種動物模式中採用蛋白質c之令人舞鼓之臨床前試驗。由泰勒（Tayl〇r)等人於狒狒敗血7病模式中之研九[J· Clin. Invest, 79:918-25，1987]係採用衍生白血t之人類活化蛋白質C。動物接受預防性處理 (亦即在開始2小時期間，藉由輸液LD⑽大腸桿菌來投與 aPC) °五隻動物中有五隻存活七天，且認為應為該實驗法之永久存活者。在接受相同大腸桿菌輸液之對照組動物中’五隻動物中有五隻於24至32小時内死亡。有效劑量為 7至8毫克/公斤。 = 在老鼠之脂多醣（LPS ;大楊桿菌）敗血病模式中[慕拉卡米（Murakami)等人，血液學（Blood) 8 7:642- 647， 1996]，因LPS誘發之肺血官傷害可受1〇〇微克/公斤劑吾下之衍生自人類i漿之活化蛋白質C抑制。此外，在兔子^之

D:\55136.ptd 1225404 五、發明說明（3) --- 結紮與穿刺敗血病模式中，歐卡莫（〇kam〇t〇)等人[胃腸病學（Gastroenterology )1〇6: A747 ， 1994]證明衍生自血水之人類活化蛋白質C於1 2微克/公斤/小時劑量下投與9小 %呀，可有效預防動物發生凝血病變。由於aPC具品種專一性’因此此等動物所得之結果不一定可用於治療人類。人類活化蛋白質C之有效劑量變化相當大，且無法依所選用之動物模式預估。例如：人類活化蛋白質C在人體血清中之半衰期為30至40分鐘，相較於在狒狒之半衰期為8至1〇分鐘，在兔子體内則為9〇分鐘。近年來有諍多研究試圖治療敗血病，大部份係採用可阻斷與此疾病之病理生理學有關之發炎介體之藥劑。然而，許多阻斷發炎介體之藥劑之臨床研究均未成功[參見納坦森（Natanson)等人，Ann. Intern, Med· 1 2 0:7 7 1 - 7 8 3， 1994，吉巴地（Gibaldi)，藥理醫療學（pharmacotherapy) 1 3 : 3 0 2 - 3 0 8，1 9 9 3 ]。由於許多涉及發炎之介體為代償性反應，且因此有值待尊重的效果，許多研究者認為阻斷其作用之作法並不適當[例如：帕里洛（p a r r i 1 1 〇)，N. E n g 1. J· Med. 3 2 8 M 47 1 - 1 477，1 9 9 3 ]。近年來’已有人提出阻斷DIC之作法為敗血病臨床試驗之新目標（例如李維（Levi )等人，JAMA 270:975-979， 1 9 9 3 )。然而，單純地阻斷敗血病之凝缺陷並不足夠。如艾斯蒙（E s m 〇 n)之討論，[動脈硬化與血栓 (Arteriosclerosis & Thromb·) 12:135-145 ， 1992]，數種抗凝血劑在狒狒敗血病模式中並未展現功效，包括阻斷

D:\55136.ptd 第6頁 1225404 五、發明說明（4) 活性位置之Xa因子[泰勒（Tayi〇r)等人，血液學（M〇〇d) 78.364 368，1991]、血經素與hirulog[馬拉加法 (Maraganore) ’ 藥物發現與設計（perSpective in Drug Discovery and Design) 1:46 卜 47 8 ’1 9 94 ]。此等抗凝血劑分別可阻斷動物之耗損性凝血病變，但無法改善存活率。此外’日本的研究者[專利申請案JP7097335A]已提出使用衍生自血漿之活化蛋白質C治療與肝功能不足有關之凝血病變之方法，肝功能不足可能發展出類似D I C之症狀。目前，衍生自血漿之人類蛋白質C酶原已成功地用為積極傳統療法之輔藥，在處理之2 5位罹患細菌性敗血病之暴發性紫斑症時，有22位存活（奇爾森（Gerson)等人，小兒科學（Pediatrics) 9 1:4 1 8-422，1 9 9 3 ;史密特（Smith)等人，Thromb, Haemost，PS 1 7 0 9，p419，1 9 9 7 ;林塔拉 (Rintala)等人 ’Lancet 347:1767，1996 ;李瓦德 (Rivard)等人，J. Pediatr· 126:646-652，1995)。奇爾森等人（1 9 9 3 )說明一項治療經證實罹患格蘭陽性細菌血症及暴發性紫斑症之兒里之研究’該患者對積極性傳統療法沒有反應。以衍生自血漿之人類蛋白質C酶原（280微克/公斤大丸劑+ 4 0微克/公斤/小時輸液）治療患者時，連帶修正凝血病變與D I C，並遏止與敗血性休克有關之暴發性紫斑症之臨床症狀發展。林塔拉（Rintala)等人[1996]之報告提出治療2位罹患出現暴發性紫斑之腦膜炎球菌性敗血病之成人之方法。患者接受衍生自I漿之蛋白質C酶原，於

D:\55136.ptd 第7頁 1225404 五、發明說明（5) 4 0 0微克/公斤大丸劑劑量下，每6小時治療一次，共8至1 〇天。一位死亡，一位存活。李瓦德等人[·1 9 9 5 ]之報告指出，依人類蛋白質C酶原療法治療四位罹患出現暴發性紫斑之腦膜炎球菌血症患者時，全部存活。此等患者每6小時接受4 0 0微克/公斤大丸劑之劑量處理。雖然此等研究之樣本數少，但與出現暴發性紫斑症之腦膜炎球S血症有關之死亡率超過50 % [包瓦爾（Powars)等人，臨床傳染病學 (Clin· Infectious Diseases 17:254-261 ， 1993]。然而，由於此等研究係採用人類蛋白質C酶原進行，因此對活化蛋白質C療法應採用之劑量及時間期之建議不多。除了腦膜炎球菌血症外，暴發性紫斑症與/或D I C亦與數種細菌性、病毒性、或原蟲感染有關，其包括（但不限於）：由立克次體（洛磯山斑疹熱、壁蝨熱、斑疹傷寒，等等）[葛雷畢爾（Graybill)等人，南方醫學期刊（Southern Medical Journal)，66(4):410-413，1973 ;洛伯斯 (Loubser)等人，熱帶小兒科年報（Annals of Tropical Paediatrics) 13 : 2 7 7 - 2 8 0，1 9 9 3 ];沙門氏菌（傷寒、鼠疫）[高爾（Koul)等人，Acta Haematol ，93:13-19， 1995];肺炎球菌[卡本特（Carpenter)等人，Scand J Infect Dis ，2 9 : 47 9-48 3 ，1 9 9 7 ]、耶爾氏菌（Yersina pest is)(淋巴腺鼠疫）[布德勒（But ler)等人，傳染病期刊 (The Journal of Infectious Disease) j 129:578-584 ? 1974] ; Legionella pneumophila (Legiona.ires 症）；瘧原蟲（Plasmodium falciparuni)(腦型癔）[李卡里

D:\55136. ptd 第8頁 1225404 五、發明說明（6) (Lercari)等人 ’Journal of Clinical Apheres i s， 7:9 3 - 9 6，1 9 9 2 ];類鼻疽布克哈菌（Burkholderia pseudomallei)(類鼻疽）；類鼻疽假單胞菌（類鼻疽）[布特奇里（Puthucheary)等人，熱帶醫學與衛生皇家學會會報 (Transactions 〇f the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene) ’86:683-685，1992];鏈球菌 (齒質原感染）[Υ·歐塔（Ota)，日本感染病學會期刊（j. Japanese Assoc. Infect. Dis，68:157-161]；帶狀皰療病毒[尼克彥（N g u y e η )等人，歐洲小兒科期刊（E u r. J.Pediatr ’153:646-649，1994];炭疽芽泡桿菌（Bacillus anthracis)(炭疽）[法蘭S(Franz)等人，美國醫學會期刊 (Journal of the American Medical Assoc.)， 278(5):399-411，1997];細螺旋體（Leptospira interrogans)(細螺旋體病）[希爾（Hill)等人，呼吸感染症論文報告（Seminars in Respiratory Infections， 12(1):44-49 ’1997];葡萄球菌[Μ·李文（Levin)，小兒腎病學（Pediatric Nephrology) 8:2 23-2 2 9 ];埃及嗜血桿菌（Haemophilus aegyptius)(巴西紫斑熱）；奈瑟氏菌 (N e 1 s s e r i a )(淋球菌血症、腦膜尖球菌血症）；及結核桿菌（mycobacterium tuberculosis)(粟粒狀結核）。雖然敗血病/敗血性休克或其他感染症中之暴發性紫斑症、D I C或後天蛋白質C缺乏症等病症已如上述詳細說明於文獻中，但有關以此等活化蛋白質C治療此等患者之數據太少。由於蛋白質C之生物作用具品種專一性，因此很難

D:\55136.ptd 第9頁 1225404 五、發明說明（7) 由動物模式中以活化人類蛋白質C處理所產生臨床前藥理數據來確立人類劑量。移植汗多與移植有關之血栓性插塞併發症可能發生在骨髓移植（BMT)、肝、腎或其他器官移植之後[哈里（Ha i re)等人 ’JAMA 274:1289-1295 ’（1995);哈普（Harper)等人， Lancet 9 2 4- 9 2 7 ( 1 98 8 );及索倫森（Sorensen)等人，J, Inter· Med· 2 2 6:1 0 1 - 1 0 5 ( 1 9 8 9 );高登（Gordon)等人，骨髓移植（Bone Marrow Transplan 1 1:6 1 - 65 ( 1 9 9 3 )]。有報告指出在BMT[巴查巴奇（Bazarbachi)等人，Nouv Rev Fr Hematol 35:135-140 (1993);高登（Gordon)等人，骨驗移植11:61-65 (1993)]、腎移植[索倫森等人，j. Inter· Med· 226:101-105 (1989)]及肝移植[哈普等人， Lancet 924-927 (1988)]之後’循ί哀之蛋白質c含量減少。此蛋白質C缺乏造成凝血過快狀態，使得患者處於併發血栓性插塞之危險。例如：肝之靜脈閉塞症（V0D)為ΒΜΤ之移植前療程中主要受劑量限制之併發症。由於血管内有血纖維蛋白沈積，用此V0D可能為肝微靜脈内小堵塞之結果。[費歐尼（Fa ion i ) 等人，血液學（Blood) 81:34〇8_3462 (1993)]。此外， V0D導致BMT之後之發病率及死亡率相當高（柯林斯(Collins)等人，Throm and Haemo '72:28-33 (1994)]。已有報告指出蛋白質c含量下降之現象與V0D發生率之高峰一致。[哈普等人，骨髓移植5 : 3 9 - 4 2 ( 1 9 9 0 )]且似乎為造

D:\55136.ptd 第10頁 1225404 五、發明說明（8) 成此病症之因素。 BMT後之器官功能障礙包括肺、中樞神經系統、肝或月，為移植患者常出現之南百分比併發症。（哈里等人， JAMA 2 74:1 2 8 9 - 1 2 9 5 ( 1 9 9 5)]。BMT 中單一器官功能障礙為導致BMT患者死亡之多重器官功能障礙症候群（於〇])3)之強烈預測因素。因凝血系統大量活化所造成之多發性血管内凝血（D I C)及血纖維蛋白廣泛沈積在各種不同器官之微血營中之中現象為發展成MODS之重要介體（弗瑞爾 (Fourrier)等人，胸腔學（Chest) 1〇1:816_823 (1 9 9 2 )]。因此已進行骨髓移植或其他器官移植之患者之蛋白質C含量缺乏會造成凝血過快狀態，使患者容^併發靜脈血栓性插塞'器官功能障礙，目前需要決定一種利又活化蛋白質C治療羅患i哭官務措右μ 人類之方法。一-“多植有關之砝血過快狀態之燒傷長久以來即已知嚴重掉卢έ本山發症（柯里α町eri)等;^Α ^現與凝血過快有關之併 (19川]。燒傷患者具有超手正\Sum:161 — 163 經常發展出DIC，其特徵p妖：：试官内凝結活性’且纖維蛋白質、血小板、上發作擴散性出血；消耗血發性血纖維蛋白溶解； *子活性；血管内溶血；續斯（McMan i s )等人，|彳昨从血锃之活體檢視證據[麥卡尼 1 3:4 1 6 -422，1 9 7 3 ]期刊（J.〇nra剛）之蛋白質C含量大幅下=來^有報告指出，嚴重燒傷患者牛，^種天然抗凝血劑減少會提高

D:\55136.ptd 第Η頁 1225404 五、發明說明（9) ---------—«—_ DK之危險性[羅（L〇)等人，燒傷（Burns) 2 0:1 8 6 — 1 8 7 ( 1 9 94 )]此外，烏亞瑪（ueyama)等人在討論到燒傷早期之D I C發病丁蚪，其結論為凝血酶形成量增加及抗凝血活下降的程度可隨燒傷嚴重性呈比例變化（烏亞瑪人 Nippon Geka Gakkai Zasshi 9 2 : 9 0 7- 1 2 ( 1 9 9 1 )] DIC為嚴重燒傷患者常見之併發症之一。。、如上述文獻指出，嚴重燒傷患者會出現蛋白質c缺乏，然而，很少有數據提及蛋白質C置換療法是否有、使用活化蛋白質C治療此等患者。文$如何懷孕、2知懷孕會，致凝血系統出現多重變化，造成凝血過快狀恶。例如：懷孕期間及分娩後，靜脈血栓之危險率幾比未懷孕狀態高5倍導诜外，凝結因子增加、凝血作用之天然抑制劑減少、血纖維蛋白溶解系統發生變化、靜脈營滯提高、及分娩排出胎盤 '剖腹產或感染時之血管受傷辦加[巴伯（Barbour)等人，〇bstet Gynecol· 86:621-633， 1 9 9 5 ]。 …，雖然沒有任何危險因子之婦女因此凝血過快狀態而產生併發症之危險性很小，但有血栓性插塞病史的婦女則在卜牵孕時會提高會復發的危險性。此外，處於凝血過快狀離^ 婦女(包括最近發現對活化蛋白質C有遺傳性抗性者）亦有復發的高危險性[達貝克（Dahlback)，血液學（Bl〇〇d) 85 . 607-614 ， 1995] 。 * 因此，有人認為被發現缺乏抗凝血酶-I I I、蛋白質c或

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1225404 五、發明說明（ίο) 蛋白質S之靜脈血栓性插塞病史之婦女復發血栓之危險性相當大，且應接受預防性抗凝血療法[康拉德（Conrad)等人，Throm Haemost 63:319-320 ， 1990]。孕婦之初期子齋與子癲似羊為凝血病變提高之狀態，因為血纖維蛋白之形成增加、血纖維蛋白溶解系統活化、血小板活化及血小板數減少[C 1 i η 0 b s t e t G y n e c ο 1 3 a : 3 3 8 - 3 5 0，1 9 9 2 ]。初期子癲被視為因胎盤之n血管附著 π異常而致之子宮與胎盤缺血。初期子癲後果包括高血壓及D I C ’導致許多微血栓釋出，造成胎盤、腎、肝及腦損害（Rev· Fr Gynecol Obstet 86:158-163 ， 1991]。此外，初期子癲可能導致嚴重的致命病症，已知為HELLP症候群’其定義為併發血小板減少、溶血及肝功能障礙之初期子癲[拉格柏（Rathgeber)等人，Anasth Intensivther Notfallmed 25:2 0 6 - 2 1 1，1 9 9 0 ]。此外，已有文獻證實罹患嚴重初期子癲之孕婦相較於正常孕婦，具有減少之蛋白 kC 含 I[狄史帝务諾（j)e Stefano)等人，Thromb Haemost 74: 7 9 3 - 7 94，1 9 9 5 ]。因此，孕婦之主要顧慮為發生靜脈血栓性插塞併發症之危險’尤其是有血栓性插塞病史之婦女。雖然嚴重併發症 (如：初期子癲或D I C)之可能性相當低，但有人認為當一旦經診斷出即應開始治療D I C，開始抑制活化凝血系統。[拉柏格等人，Anasth Intensivther Notfallmed 2 5 · 2 0 6 - 2 1 1 ’ 1 9 9 0 ]。初期子癲或D I C之併發症類似敗血病所出現之症狀，亦即凝血過快狀態及蛋白質C含量下降。

D:\55136.ptd 第13頁 1225404 五、發明說明（11) 重大手術/創傷自重大手術或意外創傷中恢復之患者經常因誘發凝血過快狀態而發生金液凝結併發症（華金斯（Watkins)等人，

Klin Wochenschr 63:1019-1027 ，1985]。手術患者因靜脈血栓性插塞而致凝血過快狀態之情形逐漸增加[湯瑪斯

(Thomas)等人，Am J Surg, 158:49 卜 494，1989 ;J.R.李克拉克（L e C 1 e r c ) ’ C 1 i n A p p 1 T h r ο ni b 〇 s i s / H e m 〇 s t a s i s 3 ( 3 ) : 1 5 3 - 1 5 6，1 9 9 7 ]。此外，這種凝血過快狀態可能併發類似D I C之症狀，這種情形不常見，但一旦發生則會受害且經常致死。[柯林斯（Collins)等人，Am J Surg· 1 24: 3 7 5 - 3 8 0，1 9 9 7 ]。 —此外’進行冠狀動脈繞道移植（CABG)[孟格斯（Menges) 等人，J. Cardiothor Vase An· 10:482-489 ， 1996]、重大 24 脊柱手術[邁爾（Mayer)等人，Cl in Orthop. 0:83-89，1 9 8 9 ]、重大腹部手術[布拉米（Biamey)等人 ’Thromb· Haemost. 54:622-625，1985]、重大整形手

禽或下肢關節造形術[李克拉克，1 9 9 7 ]或其他型態的早術 [旬瑪斯等人，Am J. Surg. 1 5 8:4 9 1 -4 94，1 9 8 9 ]之患者’經常發展出靜脈血栓性插塞併發症。此外，日本的研九者已提出對成人使用1至1 〇毫克/天劑量（或較佳者’分成1至2次，每次2至6毫克）之衍生自血漿之蛋白質c，奚大丸刻或利用靜脈内輸液之方式，治療與脊柱傷害有關之微皿官贏检之方法[專利申請案JP8325161 A]。有人認為抗凝血療法為預防重大手術或創傷患者出現靜

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五、發明說明（12) 脈血栓性插塞之重要預防性療法[湯瑪斯等人，工9 8 ^ . 克拉克，1 9 9 7 ]。例如：許多因肺拾塞而死亡之患』9/李床證據顯示曾患血栓性插塞’且在診斷及治療^ ς 亡[李克拉克，1 9 9 7 ]。現有之預防方法例如：威化愈死 (warfarin)(係低分子量肝素）受限於如二或需要經常調整劑量。 ·殘邊之近側血栓

ARDS 成人呼吸困難症候群[ARDS]之特徵為肺水腫、微血栓、發炎細胞浸潤、及晚期纖維變性。此等多重細胞與發炎反應之重點在於活化凝血作用，造成凝血過快狀態。^見與 ARDS有關之/旋企病變包括血管内凝血及抑制血纖維蛋白溶解。因凝血系統活化及抑制血纖維蛋白溶解而形成之血纖維蛋白為急性肺傷害之發病原因。敗血病、創傷或其他重大疾病為k成ARDS之重要危險因子[哈加瓦（Hasegawa)等人’胸腔學（Chest) 105 (1):268-277 ，1994]。 ARDS與凝血作用活化及抑制血纖維蛋白溶解有關。現已有相當多臨床證據顯示肺部出現肺血管微血栓，此點類似 D 1 C出現之凝血過快狀態。因此目前需要有效治療與ARDS 有關之凝i過快狀態之方法。為了方便比較文獻及專利案件中說明之蛋白質C劑量，在表ί出示數項人類或非人類靈長類研究之規格化劑量。此5數據確遇高於或低於本發明所提供劑量之劑量。值得主思的是’人類研究中採用衍生自血漿之蛋白質C酶原，而非人類靈長類研究中採用重組之人類aPC進行。

1225404 五、發明說明（13) 表I 參考文獻公佈之劑量規格化劑量一泰勒(Taylor)等人，美國專利案 No,5,009,889 經靜脈內投與2至64微克aPC/公斤/分鐘;可另投與1至10毫克aPC 之大九劑[第5欄，第14-19行] 120微克/公斤/小時至3800微克/公斤/小時輸液8至10 小時李瓦德(Rivard) 等人，J. Ped. 126:646，1995 在急性期待，每6小時，於15至 20分鐘期間，經靜脈內投與100 IU*/公斤衍生自血漿之蛋白質C酶原，然後每天1至2次，共9天。 [p.648，第1攔，第1段] 15至20分鐘內 400微克/公斤易 ^^(Gersoii)寺人，Ped. 91:418-422 ，1993 每6小時經靜脈內投與大丸劑劑量 70 IU*/公斤衍生自血漿之蛋白質C 酶原。隨後連續輸液10 IU/公斤/ 小時共11天。 [ρ·419，第2欄，第1段] 每6天投與280 微克/公斤大丸劑，然後連續輸液40 微克/公斤/小時，共11天林塔拉(Rintala)等人，Lancet， 347:1767，1996 得到許可後3小時開始經靜脈內投藥，連續7天。每6小時100 IU*/ 公斤衍生自血漿之蛋白質C，隨後調整劑量至血漿蛋白質C活性 [p.1767,第2欄，第2段] 每6小時400 微克/公斤大九劑，共7天史密特(Smith)等人 ’Thromb. Haem.， PS-1709 ， 1997 每位患者之承載劑量爲100IU*/公斤衍生自血漿之蛋白質C酶原，然後連續輸液15 IU/公斤 [p.419，第 1欄，PS-1709] 4〇〇微克/公斤大九劑+ 60微克/公斤/ 小時(未出示輸液時間） _規格化劑量爲已轉換爲相當於微克/公斤/小時之報告齊懂等於約4微克PC *

D:\55136.ptd 第16頁五、發明說明（14) 表I (續) 參考文獻公佈之劑量規格化劑量· Fujiwara 等人，曰本專利案 JP7097335A 一般劑量爲20-1000 U**衍生自血漿之APC/公斤體重沃，或更高，以50至300 U/公斤較佳，分1至 2次投藥。投藥方法最常用靜脈內輸液法[ρ·9，第0016段] 4微克/公斤至 200微克/公斤未出示輸液時間 Okajima 等人曰本專利案 JP8325161A 衍生自血漿之PC或APC對成人之有效劑量爲1至10毫克/天，或最好分成1至2次共投與2至6 毫克。投藥方法可使用大九劑投藥 (單次投藥)或靜脈內輸液 [p.10，第 0013 段] 42微克/小時至 420微克/小時 Okajima 等人， Aner. J. of Hematology， 33:277-278 (1990) 投與衍生自血漿之APC (3毫克/天，共2天，然後6毫克/ 天，共3天） [p.278，第1欄，第一段全段] 2微克/公斤/小時及 · 4微克/公斤/小時班(Bang)等人，美國專利案 4,775,624 活化之蛋白質C之承載劑量範圍爲1至10毫克，然後連續輸液，劑量範圍爲3至30毫克/天 [第丨9欄，第55·59行] 1.8至18微克/公斤 /小時未出示輸液時間，IU之定義爲使正常人類血漿中活化凝血酶原時間(APTT)加倍時之劑

量。換算成約5單位/微克APO 第17頁 ΰ：\55136. ptd

1225404 五、發明說明（15) 然而儘官有了些報告，對罹患與敗血病、移植、燒傷、懷孕、重大手術、創傷或ARDS有關之後天凝Α過快狀態或後天蛋白質C缺乏之患者安全且有效療法之劑量療程卻仍不f。疋公研九然法頂估本發明重纟且活化蛋白質C於治療人類之凝血過快狀態或後天蛋白質c缺乏上之用途。本發明揭示aPC於嚴重敗血病患者之臨床試驗上之用途。此开思者中’ T-aPC處理組證實在器官功能、降低 D I C標記物及降低死亡罕上’均比安慰劑對照組有統計上顯者之改舌。嚴重敗血病思者採用之a P C劑吾為在4 8小時輸液中之12、18、24與30微克/公斤/小時。此研究中，μ 及1 8微克/公斤/小時之劑量無效。令人驚舒的是，此研究中採用之24與30微克/公斤/小時為有效劑量，且意外地大幅低於已公開之臨床前醫榮數據。此外，本申請者已發現，非人類靈長類之臨床毒物學試驗中指出輸液96小時之aPC之安全劑量上限為約5〇微克/公斤/小時=當與先前技藝比較時，此等數據亦令人意外3 子灵上，根據上述臨床前及臨床研究之人類之apC劑量將超過上述毒物學研究中所確立之毒性範圍。 μ +發明提供一種治療罹患後天隸血過快狀態或後天蛋白，貝c故乏之人類患者之方法，其包枯對該患者持續輸液約 24 ^約144小時之活化蛋白質C，其劑量為約20微克/公斤/ J Ί主Ά 〇 0微克/公斤/小時。本發明尚提供一種治療罹患後夭凝血過快狀態或後天蛋

1225404 五、發明說明（丨6) 量之活化蛋白質C，使活化蛋白質C之A漿含量達2毫微克/ 毫升至200亳微克/毫升之範圍。因此，本發明建立利用aPC治療人類患者與敗血病、暴發性紫斑症、及緇膜炎球菌血症有關之凝血過快狀態之方法。本發明建立利用aPC治療與嚴重燒傷有關之凝血過快狀態或蛋白質C缺乏之方法。本發明建立利用aPC治療與骨髓及其他器官移植有關之凝血過快狀態或蛋白質C缺乏之方法。本發明建立利用aPC治療與接受重大手術或嚴重創傷或自其中恢復之人類患者有關之凝血過侠狀態或蛋白質C缺乏之方法。本發明建立利用aPC治療與懷孕期間併發症有關之凝A 過快狀態或蛋白質C缺乏之方法。本發明尚提供一種治療人類患者與ARDS有關之後天凝血過快狀態或後天蛋白質C缺乏之方法。為了本發明之目的本文所說明及申請專利範圍所述之本發明目的，下列名詞之定義如下。 a P C或活化蛋白質〔係指重組活化蛋白質(3。3?0包括較佳者之人類蛋白質C，但aPC亦可包括具有完整蛋白質C蛋白質分解活性、趋胺基分解活性、詣分解活性、及生物活性 (抗凝血與溶解血纖維蛋白原）之其他物質或衍生物。蛋白質C衍生物實例已說明於葛立茲（Ge r 1 11 z )等人，美國專利案No. 5, 4 5 3, 3 7 3，及弗斯特（Foster)等人，美國專利案

D:\55136.ptd 第19頁 1225404 五、發明說明（17) No. 5, 516, 650，該等文獻之完整内容係以提及之方式併入本文中。重組活化蛋白質C可於試管内由活化重組人類蛋白質C酶原製造或直接分泌蛋白質C之活化型產生。蛋白質C可於細胞、真核細胞、導入外來基因之動物、或導入外來基因之植物中產生，包括例如：由人類腎2 9 3細胞分泌為酶原，然後利用相關技藝已知之技術純化及活化。治療-係說明為了對抗疾病、病症或病變而進行之處理與照護，包括預防性投與aPC，以防止該疾病、病症或病變之症狀或併發症開始出現，或投與aPC以消除該疾病、病症或病變。連續輸液-連續且實質上不間斷地在靜脈中輸入溶液一段指定的時間期。大丸劑注射-在一段至長約1 2 0分鐘之時間内注射指定量之藥物（稱為大丸劑）。適合投藥-指一種適合作為醫療劑投與之冷凍乾燥調配物或溶液。容器-指用於接收指定物質，亦即之aPC容器如：小瓶或大瓶。單位劑型-係指適合單位投藥給人類患者之物理性分離單位，每單位包含經計算可產生所需療效之預定量活性物質，與合適之醫藥賦形劑組合。凝血過快狀態-與多發性血管内凝jk作用、血栓前病症、凝血作用活化或先天或後天凝結因子（如a P C )缺之等有關之凝血過诀.。

D:\55136.ptd 第20頁 1225404 五、發明說明（18) 酶原-在本文中係指蛋白質C酶原，並指蛋白質C之分泌不活化型，不論一條鏈或兩條鏈。未成年-指包括（但不限於）18歲以下之新生兒、嬰兒及兒童之人類患者。有效量-某醫藥化合物之醫療有效量。暴發性紫斑症-與細菌性敗血症、病毒、細菌或原生ά 感染有關之瘀斑性皮膚損傷、發燒、低血壓。通常出現多發性血管内凝血。本發明係有關以活化蛋白質c治療或預防與敗Α病、移植、燒傷、懷孕、重大手術、創傷或ARDS有關之凝血過快狀態或後天蛋白質C缺乏之方法。aPC可依相關技藝習知之技術採用真核細胞株、導入外來基因之動物或導入外來基因之植物製備。相關技藝專家們咸了解，適當之宿主真核細胞株包括（但不限於）：HEPG*~2、LLC -MK2 'CH0-K1、 2 9 3、或AV 12細胞，其實例已說明葛林奈爾（Grinnel 1)之美國專利系N 〇, 5，6 8 1，9 3 2 ’該案係以提及之方式併入本文中。此外，重組蛋白質之導入外來基因式生產實例說明於達拉漢（Drohan)等人之美國專利案No. 5，589，604及阿奇巴德（Archibald)等人之美國專利案No. 5，650，503，該案係以提及之方式併入本文中。依此等任何方法製成之a PC為了可在本方法中完全活化及操作，必須進行後轉譯修飾，如：添加9個7 -羧基-麩胺酸鹽（r -羧酸化，亦即G 1 a含量），添加1個赤藓。/5 -羥基 -A S P ( /3 -羥基化），添加4個A s η -鏈結之寡聽（糖基化），排

D:\55136.ptd 第頁 !2254〇4 五、發明說明α9) 除前導序列（42個胺基酸殘基）及排除二肽Lys 156-Arg 1 57。若未經過這種後轉譯修飾時，aPC無法發揮其完全功貪匕或無功能。

Ape可根據已知方法調配成醫藥上適用之組合物。apc將依非經腸式投藥，依有效形式，利用連續輸液約24至約 144小時之方式注射適當劑量，以確實傳送至血流中。aPC 之投藥量約2 0微克/公斤/小時至約5 0微克/公斤/小時。更佳者，aPC之投藥量約22微克/公斤/小時至約40微克/公斤 /小時。甚至更佳者，a P C之投藥量為約2 2微克/公斤/小时至約30微克/公斤/小時。最佳之aPC之投藥量為約24微克/ 公斤/小時或約3 0微克/公斤/小時。或者，aPC之投藥量為每小時利用大丸劑注射約5分鐘至約1 2 0分鐘，注射一部份（1 / 3至1 / 2 )適當劑量後，連續輸液適當劑量約23小時至約1 44小時，使得在24小時至1 44小時期間内投與適當劑量。本申請者只在小心控制之臨床試驗及洋淘之貫驗研九之後方發現連續輸.入約2 0微克/公斤/小時至約5 0微克/公斤/ 小時之劑量約2 4小時至約1 4 4小時後，可產生有效醫療。治療本文所述罹患後天凝血過快狀態或後天蛋白質c缺乏之人類患者之最佳a P C投藥劑量為約2 4徵克/公斤/小吟3 製法1 人類蛋白質C之製法依相關技藝專家習知之技術’如楊（Yan)於美國專利案 Ν〇· 4, 981，9 5 2 (該案全部以提及之方式併入本文中）中說

D:\55136.ptd 第22頁 5404 五、發明說明（20) 明之技術，於人類腎2 9 3細胞中生產重組人類蛋白質c ( r 〜hPC)。編碼人類蛋白質c之基因已揭示於班（Bang)等人之美國專利案No· 4, 775, 624(該案全部以提及之方式併入本文中）中’並申頭寻利權。用於在293細胞中表現人類蛋白貝C之質體為質體p l p c，其係揭示於班等人之美國專利案 4，992, 373，該案全部以提及之方式併入本文中。質體 pLPC之構築法亦說明於歐洲專利公告#Ν〇· 〇 445 9 3 9，及葛林著爾（Grinnell)等人，1987，生物技術學 (Bio/Technology) 5:1 1 8 9 - 1 1 9 2，該案亦以提及之方式併入本文中。簡言之，將質體轉感染至2 9 3細胞中後，鑑別穩定之轉形體，次培養，並於無血清培養基中生長。醱酵後，經微過濾法得到無細胞之培養基。採用楊（YAN)述於美國專利案No. 4, 981，9 5 2之技術（該案全部以提及之方式併入本文中），自培養液中分離人類蛋白質C。澄清化之培養基先於EDTA中調至4 πιΜ後，再吸附在陰離子交換樹脂（快流Q，法馬公司（F a s t - F 1 〇 w Q， Pharmacia)上。以4 倍管柱體積之 20 m M Tris，200 m Μ

NaCl，pH 7. 4 及2 倍管柱體積之20 mM Tr is、150 mM N a C 1，p H 7 · 4 洗蘇後’以 2 0 m Μ T r i s、1 5 〇 m Μ N a C 1、1 〇 ni M C a C “，p H 7 . 4溶離結合之重組人類蛋白質C酶原。溶出之蛋白質於溶離後經過SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳法判斷之純度在9 5 %以上。蛋白質之進一步纯化法為由蛋白質於NaCl中調成3 Μ，然後吸附在已於20 niM Tris、3 M NaCl、10 mM CaCl2，

D:\55136.ptd 第23頁 1225404 五、發明說明（21) Ρ Η 7 . 4中平衡之疏水性父互作用樹脂上（了〇 y 〇 p e a Γ 1 Pheny 1 650 Μ，TosoHaas)。以2倍管柱體積不含CaCi2之平衡邊衝液洗蘇後，以2 0 nuM T r i s p Η 7 . 4溶出重組人類蛋白質C。所溶出之蛋白質經排除殘留之鈣而活化。使重組人類蛋白質C通過金屬親和性管柱（Chelex_1〇〇，Bi〇 — Rad)以排除舞’再度結合在陰離子交換劑上（快流Q，法馬公司）。這兩支管柱係接續排列，並於2〇 _ Tris、15〇 g NaCl、5 mM EDTA，PH 6·5中平衡。添加蛋白質後，以一倍管柱體積之相同緩衝液洗滌Cheiex-ioo管柱後才拆開。以3倍管柱體積之平衡缓衝液洗滌陰離子交換管柱後，以〇. 4 μ NaCl、20 mM Tris-乙酸鹽，pH 6. 5溶離蛋白質。分別以 U V 2 8 0 nm消光度Ε<)· L°二1 · 8 5或1. 9 5測定重組人類蛋白質C與重組活化蛋白質C溶液之蛋白質濃度。製法2 重組人翻I白曾p夕、;壬介由牛=^酶於5〇_肚？^，1)}17.5之存在下，於41 下 ’、 UCH賽弗洛斯（sepharose) 4B(法馬公司）偶合/於^裝填至管柱中之樹脂上，使闻约5〇〇〇單位凝血酶 /樹脂進行偽合反應。凝血酶溶液先流經管柱循環约3 小時後’方添加MEA至循環溶液中濃度達〇· 6毫升/升。含 Μ E A各液ττ如每1 〇至1 2小時，確使樹脂上未反應之胺完全封阻。封阻後’與凝血酶偶合之樹脂以1 〇倍管柱體積之1 M NaC1 2(3 mM Tris ’ pH 6. 5洗滌，以排除所有非專一性

O:\55136. ptcl 第24頁 1225404 五、發明說明（22) 結合之蛋白質，並於活化缓衝液中平衡後，用於活化反應。純化之r-hPC於EDTA中調至5 mM (以螫合任何殘留之鈣），並以20 mM Tris，pH 7. 4 或2 0 mM Tris-乙酸鹽，pH 6. 5稀釋至濃度2毫克/毫升。此物質流經已於37 °C下經50 mM NaCl 及 20 mM Tris pH 7.4 或 20 mM Tris-乙酸鹽，pH 6. 5平衡之凝血酶管柱。調整流速，使了-hPC與凝血酶樹脂之間之接觸時間約2 0分鐘。收集流出液，立即分析建胺基分解活性。若該物質之比活性（醯胺基分解活性）未相當於已知之aPC標準時，則再經凝血酶管柱循環，使r -hPC 完全活化。然後依上述以2 0 mM缓衝液稀釋物質1 : 1，其 p Η在7 . 4或6 · 0間（較低之p Η較適於防止自體分解），以係持 aPC在較低濃度下，同時等候用於下一個加工步騾。自a P C物質中排除濾出凝血酶之作法為由a P C結合在已於活化作用緩衝液（2 0 in Μ 丁 r i s，p Η 7 . 4或較佳者2 0 m Μ Tris-乙酸鹽，pH 6.5)中使用150 mM NaCl平衡之陰難子交換樹脂（快流Q 7法馬公司）上。使凝血酶通過管柱，以2 至6倍管柱體積之2 0 ππ\1平衡缓衝液洗滌時溶離出。結合之 a P C則使用含0 . 4 Μ N a C 1之5 m Μ T r i s -乙酸鹽，ρ Η 6 . 5或 2 0 mM Τη s，pH 7. 4分段梯度溶離出。使用更多倍管抂體積洗滌可更完全排出該十二肽。自此管柱溶離出之物質存放在冷凍溶液中（-2 0 °C )或呈冷凍乾燥粉末。 aPC之醯胺基分解活性（AU)測定法係採用貝克曼 (B e c k m a n ) D U - 7 4 0 0雙極排列光度計，測定合成性受質

D:\55136.ptd 第25頁 1225404

Η-D-Phe-Pip-Arg-對硝基醯基替关一 y 八、本 fe(S一 223 8 )(購自卡比非成么司（Kabi VUrum)釋出之對硝基醯美一位活化蛋白質C之定義為於25 °C及dH 7 4 土 " 早 > 久ΡΗ 7.4下，於1分鐘肉择出1微莫耳對硝基醯基替苯胺時所费主3 ' ^ 對石肖基基替苯胺於4 0 5 nm下之洁古作如达、：1 < ♦先係數為9 6 2 0 M^cnT1測定0 =化蛋曰質C之抗凝血活性t測定法為纟活化部份血酶原激酶時間（APTT)凝結分析法測定凝結時間延長程度。於稀釋緩衝液（1毫克/毫升放射免疫分析級BSA，？0 mM Tns，PH 7.4 ’150 mM IC1 ，0.02% NaN3)中，蛋白質濃度範圍在125至1000毫微克/毫升下’製備標準曲線’ 同時在此，度範圍内。於數種稀釋度下製備樣本。在每個樣本測光管中，添加5 0微升冷的馬血漿及5 〇微升再組合之活化部份促凝血酶原激酶時間試劑（APTT試劑，希袼馬藥廢（Sigma) ’於37 C下培養5分鐘。培養後，在各測光管中添加50微升適當樣本或標準物。測定基礎凝結時間時' 則改用稀釋缓衝液替代樣本或標準物，於3 7。〇下，添加5 ◦ 微升3 0 mM CaCl2至各樣本或標準物中，開始啟動血纖維蛋白測定計（f ibrometer)(美國實驗室之C〇A篩選器止血分析法（CoA Screener Hemostasis Analyzer ， American L a b o r ))之計時器。由標準西線之線性回歸方程式計算樣本中活化蛋白質C濃度。本文提出之凝結時間為至少三次重覆之平均值，包括標準西線標準物亦如此。相關技藝專家可根據上述說明製備aPC，並用於治療與

1225404 五、發明說明（24) (但不限於）敗jk病、移植、燒傷、懷孕、重大手術/創傷、及ARDS有關之凝血過快狀態或後天蛋白質C缺乏。實例1 人類血漿中aPC含量於24小時期間，為6位人類患者經靜脈内輸液aPC，1毫克/米2 /小時或約0. 0 24毫克/公斤/小時。投與之aPC為含 10毫克aPC、5 mM乙酸醯缓衝液、及100 mM氯化朝之冷康乾燥調配物，使用2毫升水再組成並調至Ph 6. 5。. 採用免疫捕捉-醯胺基分解分析法測定aPC之血槳濃度。於檸檬酸鹽抗凝血劑與苯曱眯（一種可逆性aPC抑制劑）之存在下收集血液。利用固定在微滴定板上之aPC專一性老鼠單株抗體C3捕捉血漿中之酵素。洗滌排除抑制劑，採用寡肽產色性受質測定醯胺基分解活性或aPC。隨後於37 t 下培養1 6至2 0小時。於4 0 5 nm下測定吸光度，利用加權線性曲線代入互除法分析數據。自濃度範圍在0至1 0 0毫徵克 /毫升之標準曲線估算aPC濃度。此分析法之定量極限為 1 . 0毫微克/毫升。於約24小時時測定aPC劑量及血漿濃度。0 . 0 2 4毫克/公斤/小時之劑量於2 4小時時產生约5 0毫微克/毫升之也漿濃度。實例2 敗血病人類患者之雙盲安慰劑-對照試驗，喑段1 此方法為嚴重敗血病患者之兩階段雙盲安慰劑-對照試驗，階段1中，共7 2位患者接受重組人類活化蛋白質C ( τ -a P C )輸液4 8小時。

D:\55136.ptd 第27頁 1225404 五、發明說明（25) 接受標準包括四項常見之敗血病中之三項（心跳速率、呼吸難易度 '體溫上升/下降、白血球數上升/下降）。患者亦必須證實有某種程度之器官功能障礙，其定義為休克、排尿量減少，或血氧過少。採用四種不同劑量：1 2、 18、24、30微克/公斤/小時。利用連續輸液法，輸入aPC 4 8小時。此研究之主要终點在於：安全性與劑量及投藥時間長短之函數關係；及T - aPC修正凝血病變之能力與劑量及投藥時間長之函數關係。死亡率資料包括所有劑量，甚至最低劑量，除非另有說明。其重點為應注意本試驗安慰劑死亡率與預期之安慰劑死亡率一致。接受安慰劑患者相對接受T - aPC患者比較之終點為全部死亡時之2 8天。整體觀察到之安慰劑死亡率為3 8 % (1 0 / 2 6 )，整體觀察到之r - aPC死亡率為20% (9/46)。另一小組涉及僅最高兩種7 - a P C劑量（2 4與3 0微克/公斤/小時）相對安慰劑患者觀察到之死亡率為13% (3/24)。第二小組分析包括患有後天蛋白質C换乏之患者。其定義為基礎線蛋白質C活性低於6 0 %。在可取得基礎線蛋白質 C活性數據之6 4位患者中，有6 1位或9 5 %患者在進入本試驗時患有後天蛋白質C缺乏，蛋白質C缺乏患者觀察到之安慰劑組死亡率為41 % (9/22)，而蛋白質C缺乏患者觀察到之 r -aPC 死亡率為18% (7/39)。有一項重要的資料顯示，低劑量了 - aPC處理有利於嚴重敗A病患者，包括安慰劑患者相對於處理組患者之平均死

D:\55136.ptd 第28頁 12254〇4 五 '發明說明（26) 亡日寸間比較。在安慰劑組死亡之丨〇位患者之平均死亡時間為6天。了 —aPC處理組患者之平均死亡時間為1 4天。此外’ .r - a P C處理組中9位死亡之患者中有4位存活了 2 1天或更久’且最後因與其第一次敗血病發作無關之病症死亡。四位罕父晚死亡之病例中有二位出現在低劑量組（1 2微克/公斤/小時）。這二位患者在整個試驗期間均留在I CU中並使用呼吸器，直到死亡為止（2 7天）。另二較晚死亡之患者則為南劍f ?且（3 0微克/公斤/小時），此二位患者初期有改善。二週内即拔掉呼吸器並離開丨C U。一週後，一位患者死於敗血病誘發之呼吸困難，在”不急救"（DNR)之請求丁死亡。等二位患者於與第二次敗血病發作有關之肺功能^ 足發作下死亡。此患者亦請求D N A狀態，因此未再插管處理。應注意，接受T _ a P C再處理且在2 8天期間第二：：欠發作嚴重敗血病之患者不合乎本試驗之資格。本試驗之死亡率資料令人驚奇且意外。沒有其他雙盲安慰劑對照敗血病試驗法在2 8天全部死亡率之數據中達到這種顯著減少的幅度。實例3 活化蛋白質C之調配物、活化蛋白質C之安定之冷凍乾燥調配物之製法包括由含約2 . 5毫克/毫升活化蛋白質C、約1 5毫克/毫升蔗糖 '約2 〇毫克/毫升N a C 1及p Η大於5 . 5但小於6 . 5之檸檬酸鈉缓衝旋之溶液冷凍乾燥。此外，活化蛋白質C之安定之冷凍乾淳、調配物包括由含約5堂克/毫升活化蛋白質C、約3 0堂克/臺

D:\55136.ptd 第29頁 1225404 五、發明說明（27) 升食糖、約3 8愛克/毫升N a C 1及ρ Η大於5 . 5但小於6 . 5之棒檬酸缓衝液之溶液冷凍乾燥。 a P C :鹽··填充劑比例（w : w : w)為調配適合冷；東乾燥法之調配物之重要因素。該比例隨aPC濃度、選用之鹽與濃度，及選用之填充劑與濃度而定。特定言之較佳比例為約1份活化蛋白質C對約7，6份鹽對約6份填充劑。適合經由連續輸液投藥之活化蛋白質C之單位劑量調配物之製法為混合活化蛋白質C、NaC 1、蔗糖、及檸檬酸鈉缓衝液。混合後，取4毫升溶液移至單位劑量容器中，冷凍乾燥。單位劑量容器中含約5毫克至約2 0毫克活化蛋白質C，適合為有此需要之患者投與約0 . 0 2毫克/公斤/小時至约0. 05毫克/公斤/小時之劑量，其密封後，保存至使用時為止。

D:\55136.ptd 第30頁申請曰期：面別·· |案號:87117〇i JL· a|

(以上各橱.由本爲填庄)_t ~~ -ί 修. U ; 發明專利說明書 1225綱、發明名稱中文 ’/台療凝血過快狀態或後天蛋白質c缺乏之醫藥組合物英文 C0MP0SITIU1N TREATING HYPERCOAGULABLE STATES OR ACQUIRED PROTEIN C DEFICIENCY 發明人姓名 (中文） 1. 布蘭威廉葛林尼爾 2. 丹尼爾勞倫斯哈特曼 3. 守崎貝蒂楊姓名 (英文） 1. BRIAN WILLIAM GRINNELL \ 2. DANIEL LAWRENCE HARTMAN 3. SAU-CHI BETTY YAN 國籍 Γ·美國2.美國3.美國 ~ ^ 住、居所 k f圍S1 ί1//1 f Ϊ f利市東七十一街3625號 f S ί 1 ί那州印第安那普利市歐克斯泊路6398號 3.吳國印第安那州印第安那普利市曼洛圓環東路813!號申請人姓名 (名稱） (中文3 1·美國禮來大藥廠姓名 (名稱） (英文） 1. ELI LILLY 屬 COMPANY' 國籍 1.美國 ( 住、居戶斤 (事務所) i.美國印第安那州印第受那普利市禮來公司中心代表人姓名〔中文) L彼得G.泛君格代表人姓名 (英文） l.FETER G. STRINGER

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Claims

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公备號本?1ΐ7061 Γ; 奇料偷领 ^ i 1. 一種治療或預防人類後天-凝厂命快或後天蛋白質 C缺乏之醫藥組合物，其包括2 0微克/公斤/小時至5 0微克/ 公斤/小時之劑量之人類活化蛋白質C ，其中投予該醫藥組合物時係將其連續灌注2 4至1 4 4小時。 2 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該凝血過快狀態或蛋白質C缺乏係與敗血病有關。 3 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該凝血過快狀態或蛋白質C缺乏係與暴發性紫斑症有關。 4.根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該凝血過快狀態或蛋白質C缺乏係與腦膜炎球菌血症有關。 5 .根據申請專利範圍第4項之醫藥組合物，其中該人類患者未成年。 6 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該凝血過快狀態或蛋白質C缺乏與燒傷有關。 7.根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該治療或預防係用於罹患與骨髓或其他器官移植有關之靜脈血栓性插塞併發症之人類。 8 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該治療或預防係用於罹患與手術或創傷有關之靜脈血栓性插塞併發症之人類。 9 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該治療係用於在懷孕期間罹患與靜脈血栓性插塞併發症有關之後天凝血過快狀態或蛋白質C缺乏之人類。 1 0 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該凝血

O:\55\55136-930702.ptc 第32頁 1225404 案號 87117061 年丨月修正々、申請專利範圍過快狀態或蛋白質C缺乏係與A R D S有關。 1 1 .根據申請專利範圍第1 0項之醫藥組合物，其中人類活化蛋白質C之劑量係為2 2微克/公斤/小時至3 0微克/公斤 /小時。 1 2 .根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物係經連續灌注2 4至1 4 4小時，使血漿中活化蛋白質C 濃度達到2毫微克/毫升至2 0 0毫微克/毫升之範圍。

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