JP2002529515A - ヘパリンにより誘発される血小板減少症の処置法 - Google Patents
ヘパリンにより誘発される血小板減少症の処置法Info
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、プロテインＣを用いたヘパリンにより誘発される血小板減少症（ＨＩＴ）の処置法を提供する。特許請求する本発明は、合併症（例えば、出血傾向、毒性および現在に利用可能な抗凝固剤の通常の副作用）を避ける一方で、潜在的に深刻であって、且つ衰弱性である障害について要求される療法を提供する。
Description
【０００１】 （技術分野） 本発明は、医学、特にプロテインＣを用いたヘパリンにより誘発される血小板
減少症（heparin-induced thrombocytopenia）の処置に関する。
減少症（heparin-induced thrombocytopenia）の処置に関する。
【０００２】 （背景技術） プロテインＣはビタミンＫ依存型セリンプロテアーゼであり、天然に存在する
抗凝固物質であって、これは凝固カスケードのＶａ因子およびＶＩＩＩａ因子を
失活させることによって止血の調節に役割を果たしている。ヒトプロテインＣは
２本鎖チモーゲンとして循環するが、これは内皮表面および血小板表面で働き、
続いて細胞表面膜プロテインであるトロンボモジュリンとの複合体としてのトロ
ンビンによる限定的なタンパク分解反応によって活性化プロテインＣ（ａＰＣ）
に変換される。
抗凝固物質であって、これは凝固カスケードのＶａ因子およびＶＩＩＩａ因子を
失活させることによって止血の調節に役割を果たしている。ヒトプロテインＣは
２本鎖チモーゲンとして循環するが、これは内皮表面および血小板表面で働き、
続いて細胞表面膜プロテインであるトロンボモジュリンとの複合体としてのトロ
ンビンによる限定的なタンパク分解反応によって活性化プロテインＣ（ａＰＣ）
に変換される。
【０００３】 他のタンパク質と合わせて、ａＰＣはおそらく血液凝固作用の最も重要な下方
調節因子として働き、血栓症を防止するであろう。その抗凝固機能に加えて、ａ
ＰＣはサイトカイン（例えば、ＴＮＦおよびＩＬ−１）の生成を阻害することに
よって抗炎症効果を有し、またプロフィブリン溶解の性質を発揮して血塊の溶解
を容易にする。従って、プロテインＣ酵素系は、抗凝固作用、抗炎症作用および
フィブリン溶解の主要な生理学的機構である。
調節因子として働き、血栓症を防止するであろう。その抗凝固機能に加えて、ａ
ＰＣはサイトカイン（例えば、ＴＮＦおよびＩＬ−１）の生成を阻害することに
よって抗炎症効果を有し、またプロフィブリン溶解の性質を発揮して血塊の溶解
を容易にする。従って、プロテインＣ酵素系は、抗凝固作用、抗炎症作用および
フィブリン溶解の主要な生理学的機構である。
【０００４】 ヘパリンは、抗トロンビン−ＩＩＩ（ＡＴ−ＩＩＩ）を触媒化するその能力に
よって、フィブリンの形成を防止することで血液の凝固時間を長くする、よく用
いられる抗凝固作用物質である。ヘパリン−ＡＴ−ＩＩＩ複合体は抗凝固カスケ
ードのトロンビンおよび他のプロテアーゼを失活させる。
よって、フィブリンの形成を防止することで血液の凝固時間を長くする、よく用
いられる抗凝固作用物質である。ヘパリン−ＡＴ−ＩＩＩ複合体は抗凝固カスケ
ードのトロンビンおよび他のプロテアーゼを失活させる。
【０００５】 ヘパリンは、血管の手術において、および血栓症や塞栓症の手術後の処置にお
いて非経口的に投与される。ヘパリンを与えた患者の約１〜３０％（平均５％）
が、ヘパリンにより誘発される血小板減少症（ＨＩＴ）を引き起こす免疫反応を
有している［PhillipsらによるAnnals of Pharmacotherapy, 28: 43-45, 1994］
。これらの有害な影響は、ヘパリンにより誘発される血小板減少症および血栓症
症候群（ＨＩＴＴＳ）として知られる症候群にまで発展し得る。ＨＩＴＴＳの患
者は、衰弱させるか、または生命を脅かす静脈血栓症または動脈血栓症（例えば
、下肢の膨張、鬱血、卒中または心筋梗塞）の実質的な危険があり、報告されて
いる死亡率および主な羅患率は合わせて２５％〜３７％である［Boshkovらによ
るBritish Journal of Haematology, 84: 322-328, 1993］。
いて非経口的に投与される。ヘパリンを与えた患者の約１〜３０％（平均５％）
が、ヘパリンにより誘発される血小板減少症（ＨＩＴ）を引き起こす免疫反応を
有している［PhillipsらによるAnnals of Pharmacotherapy, 28: 43-45, 1994］
。これらの有害な影響は、ヘパリンにより誘発される血小板減少症および血栓症
症候群（ＨＩＴＴＳ）として知られる症候群にまで発展し得る。ＨＩＴＴＳの患
者は、衰弱させるか、または生命を脅かす静脈血栓症または動脈血栓症（例えば
、下肢の膨張、鬱血、卒中または心筋梗塞）の実質的な危険があり、報告されて
いる死亡率および主な羅患率は合わせて２５％〜３７％である［Boshkovらによ
るBritish Journal of Haematology, 84: 322-328, 1993］。
【０００６】 ＨＩＴは、医師によって管理されなければいけない最も重要な薬物によって誘
発される免疫血小板減少症の１つである。そのことの重要さは、例えばヘパリン
の使用の普及率が高いこと；血小板減少症の頻度が高いこと；別のより良い抗血
栓症剤が欠如していること；および血栓症の合併症が同時に発症することを含む
いくつかの理由から明白である。ヘパリンに特異的な抗体によって誘発される血
小板の活性化および凝集によってＨＩＴが起こることは、明確に実証されている
。活性化された血小板は強力な凝血促進活性を有し、この機構によってフィブリ
ン血栓（これは顕微鏡では淡白色であるが、結果的に「白血球血餅症候群（whit
e clot syndrome）」として現われる）が形成され得る［ArthurらによるPatholo
gy, 17: 82-86, 1985］。
発される免疫血小板減少症の１つである。そのことの重要さは、例えばヘパリン
の使用の普及率が高いこと；血小板減少症の頻度が高いこと；別のより良い抗血
栓症剤が欠如していること；および血栓症の合併症が同時に発症することを含む
いくつかの理由から明白である。ヘパリンに特異的な抗体によって誘発される血
小板の活性化および凝集によってＨＩＴが起こることは、明確に実証されている
。活性化された血小板は強力な凝血促進活性を有し、この機構によってフィブリ
ン血栓（これは顕微鏡では淡白色であるが、結果的に「白血球血餅症候群（whit
e clot syndrome）」として現われる）が形成され得る［ArthurらによるPatholo
gy, 17: 82-86, 1985］。
【０００７】 ＨＩＴの処置は、ヘパリンを中断すること、且つ別の抗血栓症療法を投与する
ことを含む。不幸にも、患者は血栓塞栓症を有するかまたは血栓塞栓症の危険が
高いという理由でヘパリン療法を受けており、そしてヘパリンを中断することに
より、抗凝固作用を有しない患者を残すこととなる。低分子量ヘパリン、ヘパリ
ノイド Org 10172、ヒルジンまたはワルファリンなどの試薬が、ヘパリン療法の
中断後に投与された［Ratnoffらによる, Disorders of Hemostasis, 8章, W. B.
Sanders Company, フィラデルフィア；LaposataらによるArch Pathol Lab Med,
22: 799-807, 1998］。しかしながら、Org 10172および低分子量ヘパリンはヘ
パリンにより誘発される血小板減少症を有する患者におけるヘパリンに特異的な
抗体と交差反応し得るので、それらの療法は多数の患者において有効ではない。
その上、ワルファリンは効果を示すのに数日間を要し、またＨＩＴの患者に投与
する場合には、静脈の壊疽と結合し得る［WarkentinらによるAnn Intern Med.,
127: 804-812, 1997］。従って、ＨＩＴの処置に有効な療法を開発する要求が存
在する。
ことを含む。不幸にも、患者は血栓塞栓症を有するかまたは血栓塞栓症の危険が
高いという理由でヘパリン療法を受けており、そしてヘパリンを中断することに
より、抗凝固作用を有しない患者を残すこととなる。低分子量ヘパリン、ヘパリ
ノイド Org 10172、ヒルジンまたはワルファリンなどの試薬が、ヘパリン療法の
中断後に投与された［Ratnoffらによる, Disorders of Hemostasis, 8章, W. B.
Sanders Company, フィラデルフィア；LaposataらによるArch Pathol Lab Med,
22: 799-807, 1998］。しかしながら、Org 10172および低分子量ヘパリンはヘ
パリンにより誘発される血小板減少症を有する患者におけるヘパリンに特異的な
抗体と交差反応し得るので、それらの療法は多数の患者において有効ではない。
その上、ワルファリンは効果を示すのに数日間を要し、またＨＩＴの患者に投与
する場合には、静脈の壊疽と結合し得る［WarkentinらによるAnn Intern Med.,
127: 804-812, 1997］。従って、ＨＩＴの処置に有効な療法を開発する要求が存
在する。
【０００８】 本発明は、第１にプロテインＣを用いたＨＩＴの処置について記載する。抗凝
固性およびプロフィブリン溶解活性を有するプロテインＣは、ＨＩＴ患者におい
て生じる、動脈血栓症および静脈血栓症（フィブリンが多い「白血球血餅症候群
」を含む）の処置に有用である。
固性およびプロフィブリン溶解活性を有するプロテインＣは、ＨＩＴ患者におい
て生じる、動脈血栓症および静脈血栓症（フィブリンが多い「白血球血餅症候群
」を含む）の処置に有用である。
【０００９】 本発明は、ヘパリンにより誘発される血小板減少症（ＨＩＴ）を患っている患
者の処置方法を提供し、該方法はその患者に医薬的に有効な量のプロテインＣを
投与することを含む。
者の処置方法を提供し、該方法はその患者に医薬的に有効な量のプロテインＣを
投与することを含む。
【００１０】 本発明は、処置が必要な患者におけるヘパリンにより誘発される血小板減少症
の処置方法を更に提供し、該方法は活性化プロテインＣの血中レベルが約２ｎｇ
／ｍＬ〜約３００ｎｇ／ｍＬに達するように、該患者に医薬的に有効な量の活性
化プロテインＣを投与することを含む。
の処置方法を更に提供し、該方法は活性化プロテインＣの血中レベルが約２ｎｇ
／ｍＬ〜約３００ｎｇ／ｍＬに達するように、該患者に医薬的に有効な量の活性
化プロテインＣを投与することを含む。
【００１１】 本明細書で開示し、特許請求する本発明の目的のために、次の用語は以下に定
義する通りである。
義する通りである。
【００１２】 プロテインＣは、抗凝固性、抗炎症性およびプロフィブリン溶解性を有するビ
タミンＫ依存型セリンプロテアーゼを意味し、このものは血漿由来のプロテイン
Ｃおよび組換え産生のプロテインＣを含むが、これらに限定しない。プロテイン
ＣはプロテインＣのタンパク質分解活性、アミド分解活性、エステル分解活性お
よび生物学的（抗凝固性、プロフィブリン溶解性および抗炎症性）活性を有する
他の類または他の誘導体をも含む得るが、プロテインＣはヒトプロテインＣを含
み、またヒトプロテインＣであることが好ましい。プロテインＣ誘導体の例は、
Gerlitzらによる米国特許第5,453,373号およびFosterらによる米国特許第5,516,
650号（これらの教示は本明細書の一部を構成する）に記載されている。
タミンＫ依存型セリンプロテアーゼを意味し、このものは血漿由来のプロテイン
Ｃおよび組換え産生のプロテインＣを含むが、これらに限定しない。プロテイン
ＣはプロテインＣのタンパク質分解活性、アミド分解活性、エステル分解活性お
よび生物学的（抗凝固性、プロフィブリン溶解性および抗炎症性）活性を有する
他の類または他の誘導体をも含む得るが、プロテインＣはヒトプロテインＣを含
み、またヒトプロテインＣであることが好ましい。プロテインＣ誘導体の例は、
Gerlitzらによる米国特許第5,453,373号およびFosterらによる米国特許第5,516,
650号（これらの教示は本明細書の一部を構成する）に記載されている。
【００１３】 チモーゲンとは、タンパク質分解酵素の酵素的に不活性な前駆体である。本明
細書で使用するプロテインＣチモーゲンは、分泌型で不活性な形態の１本鎖また
は２本鎖のプロテインＣを意味する。
細書で使用するプロテインＣチモーゲンは、分泌型で不活性な形態の１本鎖また
は２本鎖のプロテインＣを意味する。
【００１４】 活性化プロテインＣまたはａＰＣとは、限定的なタンパク質分解反応によって
その活性化形態に変換されるプロテインＣチモーゲンを意味する。ａＰＣはプロ
テインＣのタンパク質分解活性、アミド分解活性、エステル分解活性および生物
学的（抗凝固性またはプロフィブリン溶解性）活性を有する他の類または他の誘
導体をも含む得るが、ａＰＣはヒトプロテインＣを含み、またヒトプロテインＣ
であることが好ましい。プロテインＣ誘導体の例は、上記のプロテインＣに関す
る記載の通りである。 ＨＰＣ：ヒトプロテインＣチモーゲン。 ｒ−ｈＰＣ：組換えヒトプロテインＣチモーゲン。 ｒ−ａＰＣ：ｒ−ｈＰＣをインビトロで活性化することによって産生するか、
または原核生物細胞、真核生物細胞およびトランスジェニックな動物もしくは植
物から活性化型プロテインＣを直接に分泌させることによって製造した組換えヒ
ト活性化プロテインＣであり、チモーゲンとしてヒトの腎臓２９３細胞から分泌
させ、次いで当業者にとってよく知られる方法、およびYanによる米国特許第4,9
81,952号およびCottinghamによるWO97/20043（これらは本明細書の一部を構成す
る）に示された方法によって精製し、活性化させたものを含む。
その活性化形態に変換されるプロテインＣチモーゲンを意味する。ａＰＣはプロ
テインＣのタンパク質分解活性、アミド分解活性、エステル分解活性および生物
学的（抗凝固性またはプロフィブリン溶解性）活性を有する他の類または他の誘
導体をも含む得るが、ａＰＣはヒトプロテインＣを含み、またヒトプロテインＣ
であることが好ましい。プロテインＣ誘導体の例は、上記のプロテインＣに関す
る記載の通りである。 ＨＰＣ：ヒトプロテインＣチモーゲン。 ｒ−ｈＰＣ：組換えヒトプロテインＣチモーゲン。 ｒ−ａＰＣ：ｒ−ｈＰＣをインビトロで活性化することによって産生するか、
または原核生物細胞、真核生物細胞およびトランスジェニックな動物もしくは植
物から活性化型プロテインＣを直接に分泌させることによって製造した組換えヒ
ト活性化プロテインＣであり、チモーゲンとしてヒトの腎臓２９３細胞から分泌
させ、次いで当業者にとってよく知られる方法、およびYanによる米国特許第4,9
81,952号およびCottinghamによるWO97/20043（これらは本明細書の一部を構成す
る）に示された方法によって精製し、活性化させたものを含む。
【００１５】 血漿由来の活性化プロテインＣとは、Eiblによる米国特許第5,478,558号（こ
の教示は本明細書の一部を構成する）に記載されている通り、血漿ＨＰＣを活性
化することによって産生する活性化プロテインＣである。
の教示は本明細書の一部を構成する）に記載されている通り、血漿ＨＰＣを活性
化することによって産生する活性化プロテインＣである。
【００１６】 連続注入とは、一定の期間、静脈中に実質的に中断せずに、連続して溶液を導
入することである。
入することである。
【００１７】 ボーラス注入とは、決まった量（ボーラスと呼ばれる）の薬物を約１２０分間
までの時間に注入することである。
までの時間に注入することである。
【００１８】 投与に適当であるとは、治療学的薬剤として与えることが適当な凍結乾燥した
製剤および溶液である。
製剤および溶液である。
【００１９】 単位用量形態とは、ヒトの被験者にとって単一用量として適当な物理的に別個
の単位を言い、各単位は適当な医薬賦形剤と共に、目的の治療学的効果を得るよ
うに計算された、予め決定した量の活性物質を含む。
の単位を言い、各単位は適当な医薬賦形剤と共に、目的の治療学的効果を得るよ
うに計算された、予め決定した量の活性物質を含む。
【００２０】 医薬的に有効な量とは、ヒトの敗血症を阻害することができる本発明の化合物
の量を意味する。本発明に従って投与する化合物の用量は、当然に患者の置かれ
ている状況を考慮して、医師によって決定されるべきである。
の量を意味する。本発明に従って投与する化合物の用量は、当然に患者の置かれ
ている状況を考慮して、医師によって決定されるべきである。
【００２１】 本発明は、活性化プロテインＣを用いたヘパリンにより誘発される血小板減少
症（ＨＩＴ）の処置方法を提供する。抗凝固性およびプロフィブリン溶解活性を
有するプロテインＣは、ＨＩＴ患者において生じる動脈血栓症および静脈血栓症
（フィブリンが多い「白血球血餅症候群」を含む）の処置について有用である。
症（ＨＩＴ）の処置方法を提供する。抗凝固性およびプロフィブリン溶解活性を
有するプロテインＣは、ＨＩＴ患者において生じる動脈血栓症および静脈血栓症
（フィブリンが多い「白血球血餅症候群」を含む）の処置について有用である。
【００２２】 本発明に従って投与するプロテインＣは、当該分野で知られるか、または米国
特許第4,981,952号および米国特許第5,550,036号（これらは本明細書の一部を構
成する）に記載のいずれかの方法によって生成し、および／または単離すること
ができる。例えば、プロテインＣは細胞から完全鎖の溶解性プロテインＣ、また
はプロテインＣの生物学的に活性なポリペプチド変異体を分泌させることによっ
て生産することができ、その方法は（ａ）プロテインＣをコードしたＤＮＡを含
むベクターを構築し；（ｂ）そのベクターを用いて細胞をトランスフェクトし；
そして（ｃ）完全鎖の溶解性プロテインＣまたは生物学的に活性なプロテインＣ
のポリペプチド変異体が分泌される条件下で培地中で、トランスフェクトした細
胞を培養することを含む。更に、その細胞は真核生物細胞（例えば、シリアン（
Syrian）ハムスターのＡＶ１２細胞、ヒトの胚の２９３細胞または仔ハムスター
の腎臓細胞などの哺乳動物の細胞）である。
特許第4,981,952号および米国特許第5,550,036号（これらは本明細書の一部を構
成する）に記載のいずれかの方法によって生成し、および／または単離すること
ができる。例えば、プロテインＣは細胞から完全鎖の溶解性プロテインＣ、また
はプロテインＣの生物学的に活性なポリペプチド変異体を分泌させることによっ
て生産することができ、その方法は（ａ）プロテインＣをコードしたＤＮＡを含
むベクターを構築し；（ｂ）そのベクターを用いて細胞をトランスフェクトし；
そして（ｃ）完全鎖の溶解性プロテインＣまたは生物学的に活性なプロテインＣ
のポリペプチド変異体が分泌される条件下で培地中で、トランスフェクトした細
胞を培養することを含む。更に、その細胞は真核生物細胞（例えば、シリアン（
Syrian）ハムスターのＡＶ１２細胞、ヒトの胚の２９３細胞または仔ハムスター
の腎臓細胞などの哺乳動物の細胞）である。
【００２３】 ＨＩＴの処置において使用するプロテインＣは、公知の方法に従って製剤化を
行って医薬的に有用な組成物を製造することができる。例えば、目的の製剤は安
定な高純度の凍結乾燥した生成物であって、これはバルク剤（例えば、スクロー
ス）、塩（例えば、塩化ナトリウム）、バッファー（例えば、クエン酸ナトリウ
ム）およびプロテインＣもしくはａＰＣを含む。
行って医薬的に有用な組成物を製造することができる。例えば、目的の製剤は安
定な高純度の凍結乾燥した生成物であって、これはバルク剤（例えば、スクロー
ス）、塩（例えば、塩化ナトリウム）、バッファー（例えば、クエン酸ナトリウ
ム）およびプロテインＣもしくはａＰＣを含む。
【００２４】 プロテインＣは、有効な形態での血流中への運搬を保証するために、適量を約
１時間〜約２４０時間連続注入として注入することによって非経口投与する。
１時間〜約２４０時間連続注入として注入することによって非経口投与する。
【００２５】 良い医療と個々の患者の臨床学上の病状によって決まる通り、当該分野の当業
者は、プロテインＣを含む治療学的な組成物の医薬的に有効な量および投与レジ
メを容易に最適化することができる。通常、投与するプロテインＣの量は、約５
.０μｇ／ｋｇ／時間〜約２５０μｇ／ｋｇ／時間である。ＨＩＴの処置に使用
されるプロテインＣは活性化プロテインＣであることが好ましい。投与するａＰ
Ｃの量は約１.０μｇ／ｋｇ／時間〜約９６μｇ／ｋｇ／時間である。その投与
するａＰＣの量は、約１.０μｇ／ｋｇ／時間〜約５０μｇ／ｋｇ／時間である
ことがより好ましい。その投与するａＰＣの量は、約１.０μｇ／ｋｇ／時間〜
約３５μｇ／ｋｇ／時間であることがなおより好ましい。その投与するａＰＣの
量は、約５.０μｇ／ｋｇ／時間〜約３０μｇ／ｋｇ／時間であることがより一
層好ましい。その投与するａＰＣの量は、約１５μｇ／ｋｇ／時間〜約３０μｇ
／ｋｇ／時間であることがなおより一層好ましい。その投与するａＰＣの量は、
約２０μｇ／ｋｇ／時間〜３０μｇ／ｋｇ／時間であることが更により一層好ま
しい。その投与するａＰＣの好ましい量は約２４μｇ／ｋｇ／時間である。その
投与するａＰＣの最も好ましい量は、約４８μｇ／ｋｇ／時間である。適当な用
量のａＰＣを投与することにより、ＨＩＴに関係する血栓症の合併症は軽減され
る。
者は、プロテインＣを含む治療学的な組成物の医薬的に有効な量および投与レジ
メを容易に最適化することができる。通常、投与するプロテインＣの量は、約５
.０μｇ／ｋｇ／時間〜約２５０μｇ／ｋｇ／時間である。ＨＩＴの処置に使用
されるプロテインＣは活性化プロテインＣであることが好ましい。投与するａＰ
Ｃの量は約１.０μｇ／ｋｇ／時間〜約９６μｇ／ｋｇ／時間である。その投与
するａＰＣの量は、約１.０μｇ／ｋｇ／時間〜約５０μｇ／ｋｇ／時間である
ことがより好ましい。その投与するａＰＣの量は、約１.０μｇ／ｋｇ／時間〜
約３５μｇ／ｋｇ／時間であることがなおより好ましい。その投与するａＰＣの
量は、約５.０μｇ／ｋｇ／時間〜約３０μｇ／ｋｇ／時間であることがより一
層好ましい。その投与するａＰＣの量は、約１５μｇ／ｋｇ／時間〜約３０μｇ
／ｋｇ／時間であることがなおより一層好ましい。その投与するａＰＣの量は、
約２０μｇ／ｋｇ／時間〜３０μｇ／ｋｇ／時間であることが更により一層好ま
しい。その投与するａＰＣの好ましい量は約２４μｇ／ｋｇ／時間である。その
投与するａＰＣの最も好ましい量は、約４８μｇ／ｋｇ／時間である。適当な用
量のａＰＣを投与することにより、ＨＩＴに関係する血栓症の合併症は軽減され
る。
【００２６】 投与するａＰＣの量から得られる血中濃度の範囲は、約２ｎｇ／ｍＬ〜約３０
０ｎｇ／ｍＬである。その好ましい血中濃度の範囲は約２ｎｇ／ｍＬ〜約２００
ｎｇ／ｍＬである。その血中濃度は約３０ｎｇ／ｍＬ〜約１５０ｎｇ／ｍＬであ
ることが最も好ましく、約１００ｎｇ／ｍＬであることが一層より好ましい。
０ｎｇ／ｍＬである。その好ましい血中濃度の範囲は約２ｎｇ／ｍＬ〜約２００
ｎｇ／ｍＬである。その血中濃度は約３０ｎｇ／ｍＬ〜約１５０ｎｇ／ｍＬであ
ることが最も好ましく、約１００ｎｇ／ｍＬであることが一層より好ましい。
【００２７】 別法として、ａＰＣを１時間当りの適当な用量の１／３をボーラス注入として
投与し、続いてその１時間当りの用量の残り２／３を１時間で連続注入によって
投与し、続いてその適当な用量を２３時間連続注入することによって、結果とし
てその適当な用量を２４時間投与する。加えて、ボーラス注入は、通常の２倍の
速度で１５分間、続いて通常の１.５倍の速度で４５分間、静脈内持続点滴用ポ
ンプ（intravenous bag drip pump）またはシリンジ用ポンプによって投与する
。次いで、その通常の速度（すなわち、１時間につき適当な用量レベルの治療剤
を投与するように決められた速度）を２４０時間まで続ける。
投与し、続いてその１時間当りの用量の残り２／３を１時間で連続注入によって
投与し、続いてその適当な用量を２３時間連続注入することによって、結果とし
てその適当な用量を２４時間投与する。加えて、ボーラス注入は、通常の２倍の
速度で１５分間、続いて通常の１.５倍の速度で４５分間、静脈内持続点滴用ポ
ンプ（intravenous bag drip pump）またはシリンジ用ポンプによって投与する
。次いで、その通常の速度（すなわち、１時間につき適当な用量レベルの治療剤
を投与するように決められた速度）を２４０時間まで続ける。
【００２８】 本発明で示す、ＨＩＴの処置におけるプロテインＣの使用は、潜在的に深刻で
あって、且つ衰弱性である障害について要求される療法を提供する。プロテイン
Ｃの使用は効果があり、合併症（例えば、出血傾向、毒性および現在に利用可能
な抗凝固剤の通常の副作用）を避ける。
あって、且つ衰弱性である障害について要求される療法を提供する。プロテイン
Ｃの使用は効果があり、合併症（例えば、出血傾向、毒性および現在に利用可能
な抗凝固剤の通常の副作用）を避ける。
【００２９】 以下の実施例は更に本発明を例示するためにのみ提供する。本発明の範囲を以
下の実施例だけからなるものと解すべきではない。
下の実施例だけからなるものと解すべきではない。
【００３０】 製造例１ ヒトプロテインＣの調製 組換えヒトプロテインＣ（ｒ−ｈＰＣ）は、当業者にとってよく知られた技術
（例えば、前述のYanによる米国特許第4,981,952号、これは本明細書の一部を構
成する）によって、ヒト腎臓２９３細胞中で製造した。ヒトプロテインＣをコー
ドする遺伝子については、Bangらによる米国特許第4,755,624号（これは本明細
書の一部を構成する）に開示され、特許請求されている。２９３細胞中でヒトプ
ロテインＣを発現するのに使用するプラスミドはプラスミドｐＬＰＣであって、
これはBangらによる米国特許第4,992,373号（これは本明細書の一部を構成する
）に開示されている。プラスミドｐＬＰＣの構築については、欧州特許公報0445
939号およびGrinnellらによるBio/Technology 5: 1189-1192，1987 (1987)（こ
れらは本明細書の一部を構成する）にも記載されている。要するに、そのプラス
ミドを２９３細胞中にトランスフェクトし、次いで安定な形質転換物を同定し、
継代培養し、血清を含まない培地中で増殖させる。発酵後、ミクロろ過によって
細胞を含まない培地を得る。
（例えば、前述のYanによる米国特許第4,981,952号、これは本明細書の一部を構
成する）によって、ヒト腎臓２９３細胞中で製造した。ヒトプロテインＣをコー
ドする遺伝子については、Bangらによる米国特許第4,755,624号（これは本明細
書の一部を構成する）に開示され、特許請求されている。２９３細胞中でヒトプ
ロテインＣを発現するのに使用するプラスミドはプラスミドｐＬＰＣであって、
これはBangらによる米国特許第4,992,373号（これは本明細書の一部を構成する
）に開示されている。プラスミドｐＬＰＣの構築については、欧州特許公報0445
939号およびGrinnellらによるBio/Technology 5: 1189-1192，1987 (1987)（こ
れらは本明細書の一部を構成する）にも記載されている。要するに、そのプラス
ミドを２９３細胞中にトランスフェクトし、次いで安定な形質転換物を同定し、
継代培養し、血清を含まない培地中で増殖させる。発酵後、ミクロろ過によって
細胞を含まない培地を得る。
【００３１】 ヒトプロテインＣを、Yanによる米国特許第4,981,952号の教示を適応すること
によって培養液から分離した。アニオン交換樹脂（Fast-Flow Q、ファーマシア
）に吸着させる前に、清澄化した培地をＥＤＴＡ中で４ｍＭに調製した。カラム
の４倍量の２０ｍＭのトリス、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ ７.４、およびカ
ラムの２倍量の２０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ ７.４を用い
て洗浄後、２０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＣａＣｌ２、
ｐＨ ７.４を用いて、結合した組換えヒトプロテインＣチモーゲンを溶出した
。溶出後の溶出したタンパク質は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に
よって判定すると、純度は９５％より大きかった。
によって培養液から分離した。アニオン交換樹脂（Fast-Flow Q、ファーマシア
）に吸着させる前に、清澄化した培地をＥＤＴＡ中で４ｍＭに調製した。カラム
の４倍量の２０ｍＭのトリス、２００ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ ７.４、およびカ
ラムの２倍量の２０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ ７.４を用い
て洗浄後、２０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＣａＣｌ２、
ｐＨ ７.４を用いて、結合した組換えヒトプロテインＣチモーゲンを溶出した
。溶出後の溶出したタンパク質は、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に
よって判定すると、純度は９５％より大きかった。
【００３２】 タンパク質の更なる精製は、３Ｍのタンパク質のＮａＣｌ液を調製し、続いて
疎水的相互作用樹脂（Toyopearl Phenyl 650M、TosoHaas）（２０ｍＭのトリス
、３ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ ７.４で平衡化した）に吸着
させることによって達成した。カラムの２倍量のＣａＣｌ２を含まない平衡化バ
ッファーで洗浄後、組み換えヒトプロテインＣを２０ｍＭのトリス、ｐＨ ７.
４を用いて溶出した。
疎水的相互作用樹脂（Toyopearl Phenyl 650M、TosoHaas）（２０ｍＭのトリス
、３ＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＣａＣｌ２、ｐＨ ７.４で平衡化した）に吸着
させることによって達成した。カラムの２倍量のＣａＣｌ２を含まない平衡化バ
ッファーで洗浄後、組み換えヒトプロテインＣを２０ｍＭのトリス、ｐＨ ７.
４を用いて溶出した。
【００３３】 溶出したタンパク質を、残留カルシウムを除去することによって活性化のため
に準備した。その組換えヒトプロテインＣを金属アフィニティーカラム（Chelex
-100、Bio-Rad）を通してカルシウムを除き、再びアニオン交換体（Fast Flow Q
、ファーマシア）に結合させた。これら両方のカラムを直列に配置し、２０ｍＭ
のトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ ７.４中で平衡化
させた。タンパク質をロードした後、Chelex-100カラムを、その直列からはずす
前にカラムの１倍量の同一バッファーを用いて洗浄した。そのタンパク質を０.
４ＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのトリス−酢酸塩、ｐＨ ６.５を用いて溶出する前
に、そのアニオン交換カラムをカラムの３倍量の平衡バッファーを用いて洗浄し
た。組換えヒトプロテインＣ溶液および組換え活性化プロテインＣ溶液のタンパ
ク質濃度は、ＵＶ ２８０ｎｍでの吸光度によって測定し、それぞれＥ０.１％
＝１.８１または１.８５を得た。
に準備した。その組換えヒトプロテインＣを金属アフィニティーカラム（Chelex
-100、Bio-Rad）を通してカルシウムを除き、再びアニオン交換体（Fast Flow Q
、ファーマシア）に結合させた。これら両方のカラムを直列に配置し、２０ｍＭ
のトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ ７.４中で平衡化
させた。タンパク質をロードした後、Chelex-100カラムを、その直列からはずす
前にカラムの１倍量の同一バッファーを用いて洗浄した。そのタンパク質を０.
４ＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのトリス−酢酸塩、ｐＨ ６.５を用いて溶出する前
に、そのアニオン交換カラムをカラムの３倍量の平衡バッファーを用いて洗浄し
た。組換えヒトプロテインＣ溶液および組換え活性化プロテインＣ溶液のタンパ
ク質濃度は、ＵＶ ２８０ｎｍでの吸光度によって測定し、それぞれＥ０.１％
＝１.８１または１.８５を得た。
【００３４】 製造例２ 組換えヒトプロテインＣの活性化 ウシトロンビンを、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ ７.５、４℃）の存在下で
、活性化ＣＨ−セファロース４Ｂ（ファーマシア）に結合させた。その結合反応
を、カラムに既に充填した樹脂上で約５０００ユニットのトロンビン／樹脂ｍＬ
を用いて行った。２−アミノエタノール（ＭＥＡ）を加えて循環溶液の濃度を０
.６ｍＬ／Ｌとする前に、トロンビン溶液を該カラムに約３時間循環させた。樹
脂上の未反応のアミンを完全に遮断することを保証するために、そのＭＥＡを含
有する溶液を更に１０〜１２時間循環させた。遮断した後、トロンビンを結合さ
せた樹脂を、カラムの１０倍量の１ＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのトリス、ｐＨ ６
.５を用いて洗浄して、全ての非特異的に結合したタンパク質を除去し、そして
活性化バッファー中で平衡化の後、活性化反応液に使用した。
、活性化ＣＨ−セファロース４Ｂ（ファーマシア）に結合させた。その結合反応
を、カラムに既に充填した樹脂上で約５０００ユニットのトロンビン／樹脂ｍＬ
を用いて行った。２−アミノエタノール（ＭＥＡ）を加えて循環溶液の濃度を０
.６ｍＬ／Ｌとする前に、トロンビン溶液を該カラムに約３時間循環させた。樹
脂上の未反応のアミンを完全に遮断することを保証するために、そのＭＥＡを含
有する溶液を更に１０〜１２時間循環させた。遮断した後、トロンビンを結合さ
せた樹脂を、カラムの１０倍量の１ＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのトリス、ｐＨ ６
.５を用いて洗浄して、全ての非特異的に結合したタンパク質を除去し、そして
活性化バッファー中で平衡化の後、活性化反応液に使用した。
【００３５】 精製したｒ−ｈＰＣをＥＤＴＡ中で５ｍＭに調製し（残留カルシウムをキレー
トさせるため）、２０ｍＭのトリス（ｐＨ ７.４）または２０ｍＭのトリス−
酢酸塩（ｐＨ ６.５）を用いて２ｍｇ／ｍＬの濃度まで希釈した。この物質を
、５０ｍＭのＮａＣｌおよび、２０ｍＭのトリス（ｐＨ ７.４）または２０ｍ
Ｍのトリス−酢酸塩（ｐＨ ６.５）を用いて３７℃で平衡化したトロンビンカ
ラムを通した。流速は、ｒ−ｈＰＣとトロンビン樹脂の接触時間が約２０分とな
るように調節した。流出液を集め、直ちにアミド分解活性をアッセイした。その
物質が確立されたプロテインＣ標準液に匹敵する比活性（アミド分解性）を有し
ない場合、そのトロンビンカラムに再循環させて、そのｒ−ｈＰＣの活性化を完
結させた。これに続いて、次の処理工程を待つ間、プロテインＣをより低濃度に
保つために、上記の通り、２０ｍＭのバッファー（ｐＨは７.４または６.５）を
用いてその物質を１：１に希釈した。
トさせるため）、２０ｍＭのトリス（ｐＨ ７.４）または２０ｍＭのトリス−
酢酸塩（ｐＨ ６.５）を用いて２ｍｇ／ｍＬの濃度まで希釈した。この物質を
、５０ｍＭのＮａＣｌおよび、２０ｍＭのトリス（ｐＨ ７.４）または２０ｍ
Ｍのトリス−酢酸塩（ｐＨ ６.５）を用いて３７℃で平衡化したトロンビンカ
ラムを通した。流速は、ｒ−ｈＰＣとトロンビン樹脂の接触時間が約２０分とな
るように調節した。流出液を集め、直ちにアミド分解活性をアッセイした。その
物質が確立されたプロテインＣ標準液に匹敵する比活性（アミド分解性）を有し
ない場合、そのトロンビンカラムに再循環させて、そのｒ−ｈＰＣの活性化を完
結させた。これに続いて、次の処理工程を待つ間、プロテインＣをより低濃度に
保つために、上記の通り、２０ｍＭのバッファー（ｐＨは７.４または６.５）を
用いてその物質を１：１に希釈した。
【００３６】 １５０ｍＭのＮａＣｌを含む活性化バッファー（２０ｍＭのトリス（ｐＨ ７
.４）または２０ｍＭのトリス−酢酸塩（ｐＨ ６.５））中で平衡化させたアニ
オン交換樹脂（Fast Flow Q，ファルマシア）にプロテインＣを結合させること
によって、プロテインＣ物質から浸出したトロンビンを除去した。トロンビンは
これらの条件下でアニオン交換樹脂と相互作用せず、そのカラムを透過して試料
適用流出液に入る。プロテインＣをそのカラム上にロードしたら、５ｍＭのトリ
ス−酢酸塩（ｐＨ ６.５）または２０ｍＭのトリス（ｐＨ ７.４）中の０.４
ＭのＮａＣｌを用いた逐次溶出によって結合したプロテインＣを溶出する前に、
カラムの２〜６倍量の２０ｍＭの平衡バッファーを用いて洗浄を行う。カラムの
より高容量の洗液により、ドデカペプチドのより完全な除去が容易となった。こ
のカラムから溶出した物質を、凍結した溶液（−２０℃）または凍結乾燥した粉
末として保存した。
.４）または２０ｍＭのトリス−酢酸塩（ｐＨ ６.５））中で平衡化させたアニ
オン交換樹脂（Fast Flow Q，ファルマシア）にプロテインＣを結合させること
によって、プロテインＣ物質から浸出したトロンビンを除去した。トロンビンは
これらの条件下でアニオン交換樹脂と相互作用せず、そのカラムを透過して試料
適用流出液に入る。プロテインＣをそのカラム上にロードしたら、５ｍＭのトリ
ス−酢酸塩（ｐＨ ６.５）または２０ｍＭのトリス（ｐＨ ７.４）中の０.４
ＭのＮａＣｌを用いた逐次溶出によって結合したプロテインＣを溶出する前に、
カラムの２〜６倍量の２０ｍＭの平衡バッファーを用いて洗浄を行う。カラムの
より高容量の洗液により、ドデカペプチドのより完全な除去が容易となった。こ
のカラムから溶出した物質を、凍結した溶液（−２０℃）または凍結乾燥した粉
末として保存した。
【００３７】 活性化プロテインＣの抗凝固活性を、活性化部分トロンボプラスチン時間（Ａ
ＰＴＴ）凝固アッセイの凝固時間の延長を測定することによって測定した。プロ
テインＣの濃度が１２５〜１０００ｎｇ／ｍＬの範囲である希釈バッファー（１
ｍｇ／ｍＬのラジオイムノアッセイグレードウシ血清アルブミン［ＢＳＡ］、２
０ｍＭのトリス、ｐＨ ７.４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０.０２％のＮａＮ３）
で標準曲線を作製し、この濃度範囲内のいくつかの希釈液の試料を調製した。各
試料キュベットに、５０μＬの冷ホース血漿および５０μＬの再構成した活性部
分トロンボプラスチン時間試薬（ＡＰＴＴ試薬、シグマ）を加え、３７℃で５分
間インキュベートした。インキュベートした後、５０μＬの適当な試料および標
準液を各キュベットに加えた。基本（basal）凝固時間を測定するために、試料
または標準液の代わりに希釈バッファーを用いた。各試料または標準液にＣａＣ
ｌ２（５０μＬ、３７℃、３０ｍＭ）を加えた後、直ちに、フィブロメーター（
fibrometer）（CoA Screener Hemostasis Analyzer、American Labor）のタイマ
ーを開始させた。試料中の活性化プロテインＣの濃度は、標準曲線の直線回帰式
から算出した。本明細書で報告する凝固時間は、３つの反復試験（標準曲線用試
料を含む）の最小値の平均である。
ＰＴＴ）凝固アッセイの凝固時間の延長を測定することによって測定した。プロ
テインＣの濃度が１２５〜１０００ｎｇ／ｍＬの範囲である希釈バッファー（１
ｍｇ／ｍＬのラジオイムノアッセイグレードウシ血清アルブミン［ＢＳＡ］、２
０ｍＭのトリス、ｐＨ ７.４、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０.０２％のＮａＮ３）
で標準曲線を作製し、この濃度範囲内のいくつかの希釈液の試料を調製した。各
試料キュベットに、５０μＬの冷ホース血漿および５０μＬの再構成した活性部
分トロンボプラスチン時間試薬（ＡＰＴＴ試薬、シグマ）を加え、３７℃で５分
間インキュベートした。インキュベートした後、５０μＬの適当な試料および標
準液を各キュベットに加えた。基本（basal）凝固時間を測定するために、試料
または標準液の代わりに希釈バッファーを用いた。各試料または標準液にＣａＣ
ｌ２（５０μＬ、３７℃、３０ｍＭ）を加えた後、直ちに、フィブロメーター（
fibrometer）（CoA Screener Hemostasis Analyzer、American Labor）のタイマ
ーを開始させた。試料中の活性化プロテインＣの濃度は、標準曲線の直線回帰式
から算出した。本明細書で報告する凝固時間は、３つの反復試験（標準曲線用試
料を含む）の最小値の平均である。
【００３８】 上の記載により、当業者はヘパリンにより誘発される血小板減少症の処置にお
いて有用なプロテインＣを製造することが可能である。
いて有用なプロテインＣを製造することが可能である。
【００３９】 製造例３ 活性化プロテインＣの製剤化 活性化プロテインＣの安定な凍結乾燥製剤は、約２.５ｍｇ／ｍＬの活性化プ
ロテインＣ、約１５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約２０ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌおよ
びｐＨが５.５よりも高いが６.５よりも低いクエン酸ナトリウムバッファーを含
む溶液を凍結乾燥することを含む方法によって製造した。加えて、活性化プロテ
インＣの安定な凍結乾燥製剤化は、約５ｍｇ／ｍＬの活性化プロテインＣ、約３
０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約３８ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌおよびｐＨが５.５よ
り高いが６.５より低いクエン酸ナトリウムバッファーを含む溶液を凍結乾燥す
ることを含む。
ロテインＣ、約１５ｍｇ／ｍＬのスクロース、約２０ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌおよ
びｐＨが５.５よりも高いが６.５よりも低いクエン酸ナトリウムバッファーを含
む溶液を凍結乾燥することを含む方法によって製造した。加えて、活性化プロテ
インＣの安定な凍結乾燥製剤化は、約５ｍｇ／ｍＬの活性化プロテインＣ、約３
０ｍｇ／ｍＬのスクロース、約３８ｍｇ／ｍＬのＮａＣｌおよびｐＨが５.５よ
り高いが６.５より低いクエン酸ナトリウムバッファーを含む溶液を凍結乾燥す
ることを含む。
【００４０】 プロテインＣ：塩：バルク剤の重量比は、凍結乾燥法に適当な製剤化における
重要な因子である。その比は、プロテインＣの濃度、塩の選択およびその濃度、
並びにバルク剤の選択およびその濃度に応じて変わる。特に、活性化プロテイン
Ｃ：塩：バルク剤（約１：約７.６：約６）の比が好ましい。
重要な因子である。その比は、プロテインＣの濃度、塩の選択およびその濃度、
並びにバルク剤の選択およびその濃度に応じて変わる。特に、活性化プロテイン
Ｃ：塩：バルク剤（約１：約７.６：約６）の比が好ましい。
【００４１】 連続注入による投与が適当な活性化プロテインＣの単位用量製剤は、活性化プ
ロテインＣ、ＮａＣｌ、スクロースおよびクエン酸ナトリウムバッファーを混合
することによって製造される。混合した後、４ｍＬの溶液を単位用量容器に移し
、凍結乾燥した。それらの処置が必要な患者に約０.０１ｍｇ／ｋｇ／時間〜約
０.０５ｍｇ／ｋｇ／時間の用量を投与するのに適当な、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ
の活性化プロテインＣを含む単位用量容器を封して、使用するまで保存した。
ロテインＣ、ＮａＣｌ、スクロースおよびクエン酸ナトリウムバッファーを混合
することによって製造される。混合した後、４ｍＬの溶液を単位用量容器に移し
、凍結乾燥した。それらの処置が必要な患者に約０.０１ｍｇ／ｋｇ／時間〜約
０.０５ｍｇ／ｋｇ／時間の用量を投与するのに適当な、約５ｍｇ〜約２０ｍｇ
の活性化プロテインＣを含む単位用量容器を封して、使用するまで保存した。
【００４２】 実施例１ ヘパリンにより誘発される血小板減少症（ＨＩＴ）を有する患者におけるＬＹ２
０３６３８組換えヒト活性化プロテインＣ（ｒｈＡＰＣ）のプラシーボコントロ
ール二重盲試験 ヘパリンにより誘発される血小板減少症（ＨＩＴ）は、ヘパリンを用いて７日
間処置した患者の１％、およびヘパリンを用いて１４日間処置した患者の３％で
起こる。静脈血栓症（稀に動脈血栓症）は、ヘパリンを中断したにも関わらずＨ
ＩＴ患者の５０％で起こる。ＨＩＴを患っている患者の場合、ヘパリンにより、
血小板から血小板因子４の放出を生じる。血小板因子４との複合体中のへパリン
は、ＨＩＴ−ＩｇＧの放出を引き起こす。ヘパリンと血小板因子４との複合体中
のＨＩＴ−ＩｇＧは、血小板のＦｃ受容体と結合して活性化する。
０３６３８組換えヒト活性化プロテインＣ（ｒｈＡＰＣ）のプラシーボコントロ
ール二重盲試験 ヘパリンにより誘発される血小板減少症（ＨＩＴ）は、ヘパリンを用いて７日
間処置した患者の１％、およびヘパリンを用いて１４日間処置した患者の３％で
起こる。静脈血栓症（稀に動脈血栓症）は、ヘパリンを中断したにも関わらずＨ
ＩＴ患者の５０％で起こる。ＨＩＴを患っている患者の場合、ヘパリンにより、
血小板から血小板因子４の放出を生じる。血小板因子４との複合体中のへパリン
は、ＨＩＴ−ＩｇＧの放出を引き起こす。ヘパリンと血小板因子４との複合体中
のＨＩＴ−ＩｇＧは、血小板のＦｃ受容体と結合して活性化する。
【００４３】 更なる血小板因子４の放出によって血小板が活性化されることにより、トロン
ビンが形成する。ＨＩＴ−ＩｇＧは、血小板因子４と内皮ヘパリンスルフェート
との複合体を認識し、このことにより、内皮表面上での組織因子の発現および凝
固カスケードの活性化をもたらす。血小板因子４自身が、そのヘパリンを中和す
る能力によってトロンビンを形成する。
ビンが形成する。ＨＩＴ−ＩｇＧは、血小板因子４と内皮ヘパリンスルフェート
との複合体を認識し、このことにより、内皮表面上での組織因子の発現および凝
固カスケードの活性化をもたらす。血小板因子４自身が、そのヘパリンを中和す
る能力によってトロンビンを形成する。
【００４４】 ヘパリンにより誘発される血小板減少症（ＨＩＴ）を有する患者への処置の試
みは、ヘパリンを中断することだけではなく、その症候群における血栓症の後遺
症を防止することを含む。トロンビン合成の阻害物質は、これを行うのに最も可
能性のある試薬である。組換え活性化プロテインＣ（ｒ−ａＰＣ）はそれらトロ
ンビン合成の１つの阻害物質である。ｒ−ａＰＣは、凝固カスケードのＶａ因子
およびＶＩＩＩａ因子を失活させることによってトロンビンの形成を遮断する。
ｒ−ａＰＣを注入することにより、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴ
Ｔ）についての用量に依存する延長が生じ、このことはこの効果を実証する。
みは、ヘパリンを中断することだけではなく、その症候群における血栓症の後遺
症を防止することを含む。トロンビン合成の阻害物質は、これを行うのに最も可
能性のある試薬である。組換え活性化プロテインＣ（ｒ−ａＰＣ）はそれらトロ
ンビン合成の１つの阻害物質である。ｒ−ａＰＣは、凝固カスケードのＶａ因子
およびＶＩＩＩａ因子を失活させることによってトロンビンの形成を遮断する。
ｒ−ａＰＣを注入することにより、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴ
Ｔ）についての用量に依存する延長が生じ、このことはこの効果を実証する。
【００４５】 この試験は、ｒ−ａＰＣの注入により、ヘパリンにより誘発される血小板減少
症を有する患者において、プラシーボの場合と比べて、死亡率、新しい血栓症お
よび肢の切断を組み合わせた終点における統計学上の有意な減少を得ることを示
すのが目的である。
症を有する患者において、プラシーボの場合と比べて、死亡率、新しい血栓症お
よび肢の切断を組み合わせた終点における統計学上の有意な減少を得ることを示
すのが目的である。
【００４６】 包含基準は、１）ヘパリンを５日間以上注入後に、血小板の計数がベースライ
ンから５０％だけであるか、または１５０,０００より少ないと診断されたり；
および２）血小板の１４Ｃ−セロトニン放出アッセイを用いたヘパリン依存型Ｉ
ｇＧについての陽性試験によって診断される、ヘパリンにより誘発される血小板
減少症を有する患者を含むこととする。
ンから５０％だけであるか、または１５０,０００より少ないと診断されたり；
および２）血小板の１４Ｃ−セロトニン放出アッセイを用いたヘパリン依存型Ｉ
ｇＧについての陽性試験によって診断される、ヘパリンにより誘発される血小板
減少症を有する患者を含むこととする。
【００４７】 ＨＩＴとしての包含基準を満たし、且つ例外的な基準を有しない患者について
、ヘパリンを中断した。ワルファリン療法を開始することに加えて、患者にプラ
シーボまたはｒ−ａＰＣを９６時間与える。ｒ−ａＰＣを４８μｇ／ｋｇ／時間
の用量で与えると、このことにより先のヒト試験においてａＰＴＴがベースライ
ンの２倍にまで上昇することが分かった。
、ヘパリンを中断した。ワルファリン療法を開始することに加えて、患者にプラ
シーボまたはｒ−ａＰＣを９６時間与える。ｒ−ａＰＣを４８μｇ／ｋｇ／時間
の用量で与えると、このことにより先のヒト試験においてａＰＴＴがベースライ
ンの２倍にまで上昇することが分かった。
【００４８】 研究の第１の終点は、３０日での死亡の発生率、肢の切断および新しい血栓症
を組み合わせた終点である。プラシーボの事象の割合は５０％であると仮定する
。別の主要な終点として、臨床学的に重要な出血という現象についてｒ−ａＰＣ
の安全性をプラシーボと比較する。この試験の第２の終点は血小板が回復する時
間である。
を組み合わせた終点である。プラシーボの事象の割合は５０％であると仮定する
。別の主要な終点として、臨床学的に重要な出血という現象についてｒ−ａＰＣ
の安全性をプラシーボと比較する。この試験の第２の終点は血小板が回復する時
間である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 サウ−チ・ベティ・ヤン アメリカ合衆国46240インディアナ州イン ディアナポリス、メンロ・コート・イース ト・ドライブ8131番 Ｆターム(参考） 4C084 AA02 BA03 CA13 CA17 CA18 CA53 DC03 NA14 ZA532 ZC202
Claims (10)
- 【請求項１】 ヘパリンにより誘発される血小板減少症（ＨＩＴ）を患って
いる患者の処置法であって、該患者に医薬的に有効な量のプロテインＣを投与す
ることを含む方法。 - 【請求項２】 プロテインＣはヒトプロテインＣチモーゲンである、請求項
１に記載の方法。 - 【請求項３】 プロテインＣはヒト活性化プロテインＣである、請求項１に
記載の方法。 - 【請求項４】 ヒト活性化プロテインＣの量は、約１μｇ／ｋｇ／時間〜約
９６μｇ／ｋｇ／時間である、請求項３に記載の方法。 - 【請求項５】 ヒト活性化プロテインＣは、連続注入によって約１〜約２４
０時間投与する、請求項４に記載の方法。 - 【請求項６】 処置の必要な患者におけるヘパリンにより誘発される血小板
減少症の処置法であって、該患者に医薬的に有効な量の活性化プロテインＣを投
与し、その結果、活性化プロテインＣの血中レベルが約２ｎｇ／ｍｌ〜約３００
ｎｇ／ｍｌに達する方法。 - 【請求項７】 活性化プロテインＣをボーラス注入で投与する、請求項６に
記載の方法。 - 【請求項８】 活性化プロテインＣを、連続注入によって約１〜約２４０時
間投与する、請求項６に記載の方法。 - 【請求項９】 活性化プロテインＣを先ずボーラス注入として投与し、次い
で連続注入として投与する、請求項６に記載の方法。 - 【請求項１０】 活性化プロテインＣの血中レベルが約２ｎｇ／ｍｌ〜約３
００ｎｇ／ｍｌの範囲に達するのに必要な活性化プロテインＣの１／３をボーラ
ス注入で投与し、続いて該活性化プロテインＣの残り２／３を連続注入によって
投与する、請求項９に記載の方法。
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