ES2259248T3 - Uso de la proteina c humana para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de trombocitopenia inducida por heparina. - Google Patents

Abstract

El uso de proteína C en la fabricación de un medicamento para tratamiento de un paciente que sufre de trombocitopenia inducida por heparina (HIT), en el que la cantidad de proteína C humana es 5 ìg/kg/h hasta 250 ìg/kg/h.

Description

Uso de la proteína C humana para la preparación de un medicamento para el tratamiento de trombocitopenia inducida por heparina.

Esta invención se refiere a ciencia médica, particularmente al tratamiento de trombocitopenia inducida por heparina con proteína C.

La proteína C es una serina proteasa dependiente de la vitamina K y anticoagulante que se produce de manera natural, que juega un papel en la regulación de la hemostasis mediante la inactivación de los Factores Va y VIIIa en la cascada de la coagulación. La proteína C humana circula como un zimógeno de 2 cadenas, pero funciona en la superficie endotelial y de la plaqueta después de conversión a proteína C activada (aPC) por proteolisis limitada con trombina en un complejo con la proteína de membrana de superficie de célula, trombomodulina.

Conjuntamente con otras proteínas, la aPC funciona posiblemente como el atenuador-regulador más importante de la coagulación de la sangre, proporcionando protección contra la trombosis. Además de sus funciones anti-coagulación, la aPC tiene efectos anti-inflamatorios debido a su inhibición de generación de citocina (p. ej., TNF y IL-1), e igualmente ejerce propiedades profibrinolíticas que facilitan la lisis del coágulo. De acuerdo con ello, el sistema de enzima de proteína C representa un mecanismo fisiológico principal de anti-coagulación, anti-inflamación y fibrinolisis.

La heparina es un anti-coagulante frecuentemente usado que prolonga el tiempo de coagulación de la sangre mediante la prevención de la formación de fibrina dada su capacidad para catalizar la anti-trombina-III (AT-III). El complejo heparina-AT-III inactiva la trombina y otras proteasas de la cascada de la coagulación.

La heparina se administra parenteralmente en cirugía vascular y en el tratamiento de la trombosis post-operativa y el embolismo. Aproximadamente 1 a 30% (5% de promedio) de pacientes que reciben heparina, tienen una reacción inmunológica que da como resultado trombocitopenia inducida por heparina (HIT) [Phillips, y otros, Annals of Pharmacotherapy, vol. 28, págs. 43-45, (1994)]. Estos efectos adversos pueden revelarse en forma de un síntoma conocido como trombocitopenia inducida por heparina y síndrome de trombosis (HITTS). Los pacientes con ITTS están en un riesgo substancial de debilitamiento o amenaza para la vida de trombosis arterial o venosa, tal como hinchamiento del miembro inferior o isquemia, apoplejía, o infarto de miocardio, con una mortalidad y una morbilidad principal combinadas reportada del 25% al 37% [Boshkov, y otros, British Journal of Heamatology, vol 84, págs. 322-328, (1993)].

La HIT es uno de los más importantes trastornos trombocitopénicos inmunes inducidos por medicamentos que un médico debe tratar. Su importancia es evidente por diversas razones, incluyendo, la alta prevalencia del uso de heparina; la alta frecuencia de la trombocitopenia; la falta de un agente anti-trombótico alternativo mejor; y la incidencia concomitante de complicaciones trombóticas. Se ha demostrado claramente que la HIT está causada por la activación y agregación de plaquetas inducida por anticuerpos específicos de la heparina. Las plaquetas activadas tienen potente actividad procoagulación y, por este mecanismo, pueden formar trombos de fibrina (que aparecen microscópicamente de color blanco pálido, en consecuencia, el "síndrome del coágulo blanco") [Arthur, y otros, Pathology, vol. 17, págs. 82-86, (1985)].

El tratamiento de la HIT incluye la interrupción de la heparina y la administración de terapia anti-trombótica alternativa. Desgraciadamente, los pacientes están soportando terapia de heparina porque tienen trombo-émbolos o están en alto riesgo de tromboembolismo y la interrupción de la heparina les deja sin anti-coagulación. Agentes tales como heparinas de bajo peso molecular, la heparinoide Org 10172, hirudina, o warfarina, han sido administradas después de cesar la terapia de la heparina [Ratnoff, y otros, Disorders of Hemostasis, Capítulo 8, W.B. Sanders Company, Philadelphia; Laposta, y otros, Arch. Pathol. Lab. Med., vol. 22, págs. 799-807, (1998)]. Sin embargo, dicha terapia no es eficaz en muchos pacientes porque la Org 10172 y las heparinas de bajo peso molecular pueden tener una reacción de entrecruzamiento con los anticuerpos específicos de la heparina de algunos pacientes con trombocitopenia inducida por heparina. Además, la warfarina necesita varios días para hacer efecto e igualmente se la ha relacionado con la gangrena venosa de las extremidades cuando se administraba a pacientes con HIT [Warkentin, y otros, Ann. Inter. Med., vol. 127, págs. 804-812, (1997)]. De acuerdo con ello, existe una necesidad de desarrollar una terapia eficaz para el tratamiento de la HIT.

La WO 94/05796, describe la provisión de un animal transgénico que produce en su leche proteína C recombinante que comprende un alto porcentaje de proteína activa. Pueden producirse las formas natural y modificada de la proteína C del factor de coagulación humano.

La presente invención es la primera en describir el tratamiento de la HIT con proteína C. La proteína C, con sus actividades anticoagulante y profibrinolítica, es útil para el tratamiento de la trombosis arterial y venosa, incluyendo el "síndrome del coágulo blanco" rico en fibrina, que ocurre en pacientes con HIT.

De acuerdo con la presente invención, se proporciona el uso de proteína C en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un paciente que sufre de trombocitopenia inducida por heparina (HIT), en el que la cantidad de proteína C humana es 5 \mug/kg/h hasta aproximadamente 250 \mug/kg/h.

La presente invención proporciona además el uso de proteína C activada en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un paciente que sufre de trombocitopenia inducida por heparina (HIT), en el que dicho medicamento es para administración en una cantidad suficiente para proporcionar un nivel en plasma de proteína C activada de aproximadamente 2 ng/ml hasta aproximadamente 300 ng/ml.

Para los fines de la presente invención, tal como se describe y reivindica aquí, los términos siguientes son tal como se definen a continuación.

La Proteína C se refiere a una serina proteasa dependiente de la vitamina K con propiedades anticoagulantes, anti-inflamatorias y profibrinolíticas que incluye, pero sin limitarse a ellas, proteína C producida recombinante y derivada de plasma. La proteína C incluye, y preferiblemente es, proteína C humana, aunque la proteína C puede igualmente incluir otras especies o derivados que tienen actividades proteolíticas, amidolíticas, esterolíticas, y biológicas (anticoagulantes, profibrinolíticas, y anti-inflamatorias) de la proteína C. Ejemplos de derivados de proteína C han sido descritos por Gerlitz, y otros, en la Patente de EE.UU. No. 5.453.373, y por Foster, y otros, en la Patente de EE.UU. No. 5.516.650.

Zimógeno, - precursor inactivo enzimáticamente de una enzima proteolítica. El zimógeno de proteína C, tal como aquí se usa, se refiere a formas inactivas, secretadas, tanto de una cadena como de dos cadenas, de proteína C.

La proteína C activada o aPC, se refiere a zimógeno de proteína C que ha sido convertido mediante proteolisis limitada en su forma activada. La aPC incluye, y preferiblemente es, proteína C humana, aunque la aPC puede igualmente incluir otras especies o derivados que tienen actividades proteolíticas, amidolíticas, esterolíticas, y biológicas (anticoagulantes o profibrinolíticas) de la proteína C. Ejemplos de derivados de proteína C han sido indicados anteriormente en la descripción de la proteína C.

HPC - zimógeno de proteína humana.

r-hPC - zimógeno de proteína C humana recombinante.

r-aPC - proteína C activada humana recombinante producida mediante activación de r-hPC in vitro o mediante secreción directa de la forma activada de proteína C procedente de células procarióticas, células eucarióticas, y animales o plantas transgénicos, incluyendo, por ejemplo, secreción procedente de células 293 de riñón humano como un zimógeno y, a continuación, purificadas y activadas mediante técnicas bien conocidas por el técnico experto y demostradas por Yan, en la Patente de EE.UU. No. 4.981.952, y por Cottingham, en la WO 97/20043.

Proteína C activada derivada de plasma - proteína C activada producida mediante activación de plasma HPC, tal como ha sido descrito por Eibl, en la Patente de EE.UU. No. 5.478.558.

Infusión continua - la introducción de manera continua substancialmente ininterrumpida de una solución dentro de una vena durante un período de tiempo especificado.

Inyección de bolo - la inyección de un medicamento en una cantidad definida (denominada un bolo) a lo largo de un período de tiempo de hasta aproximadamente 120 minutos.

Adecuada para administración - una formulación o solución liofilizada que es apropiada para ser administrada como un agente terapéutico.

Forma de dosificación unitaria - se refiere a unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para sujetos humanos, conteniendo cada unidad una cantidad predeterminada de material activo, calculada para producir el efecto terapéutico deseado, en asociación con un excipiente farmacéuticamente adecuado.

Cantidad eficaz farmacéuticamente - representa una cantidad de un compuesto de la invención que es capaz de inhibir la sepsis en humanos. La dosis particular del compuesto administrado de acuerdo con esta invención, será, por supuesto, determinada por el médico que le atienda, evaluando las circunstancias particulares que rodeen al
caso.

La presente invención proporciona el uso de proteína C activada en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trombocitopenia inducida por heparina (HIT), en el que la cantidad de proteína C humana es 5 \mug/kg/h hasta 250 \mug/kg/h. La proteína C, con sus actividades anticoagulantes y profibrinolíticas, es útil para el tratamiento de la trombosis arterial y venosa, incluyendo el "síndrome del coágulo blanco" rico en fibrina, que ocurre en pacientes con HIT.

La proteína C a ser administrada de acuerdo con esta invención, puede ser generada y/o aislada mediante cualquier medio conocido en la técnica, o tal como se describe en la Patente de EE.UU. No. 4.981.952, y la Patente de EE.UU. No. 5.550.036. Por ejemplo, la proteína C puede producirse mediante la secreción de proteína C soluble, de longitud completa, o variantes de polipéptidos biológicamente activos de proteína C procedente de una célula que comprende (a) la construcción de un vector que comprende DNA que codifica proteína C; (b) la transfección de la célula con el vector; y (c) el cultivo de la célula así transfectada en medio de cultivo bajo condiciones tales que se secreta proteína C soluble de longitud completa, o variantes de polipéptidos biológicamente activos de proteína C. Además, la célula es una célula eucariótica, p. ej., célula de mamífero tal como célula AV12 de hamster Sirio, célula 293 de embrión humano, o célula de riñón de hamster Baby.

La proteína C usada en el tratamiento de la HIT puede formularse de acuerdo con procedimientos conocidos para preparar composiciones útiles farmacéuticamente Por ejemplo, una formulación deseada sería una que fuera un producto liofilizado estable de alta pureza que comprendiera un agente de relleno tal como sacarosa, una sal tal como cloruro sódico, un tampón tal como citrato sódico y proteína C o aPC.

La proteína C se administrará parenteralmente para asegurar su suministro dentro de la corriente sanguínea en una forma eficaz, mediante inyección de la dosis apropiada como infusión continua durante aproximadamente 1 hora hasta aproximadamente 240 horas.

Los expertos en la técnica pueden fácilmente optimizar dosificaciones y regímenes de administración eficaces farmacéuticamente para composiciones farmacéuticas que comprenden proteína C, tal como se determine por la buena práctica médica y la afección clínica del paciente individual. La cantidad de proteína C a ser administrada será desde aproximadamente 5,0 \mug/kg/h hasta aproximadamente 250 \mug/kg/h. Preferiblemente, la proteína C usada en el tratamiento de la HIT es una proteína C activada. Más preferiblemente, la cantidad de aPC a ser administrada será aproximadamente 5,0 \mug/kg/h hasta aproximadamente 30 \mug/kg/h. Incluso más preferiblemente, la cantidad de aPC a ser administrada será aproximadamente 15 \mug/kg/h hasta 30 \mug/kg/h. Incluso aún más preferiblemente, la cantidad de aPC a ser administrada será aproximadamente 20 \mug/kg/h hasta 30 \mug/kg/h. La cantidad preferible de aPC a ser administrada será aproximadamente 24 \mug/kg/h. La cantidad más preferible de aPC a ser administrada será aproximadamente 48 \mug/kg/h. La dosis apropiada de aPC a ser administrada dará como resultado una reducción de las complicaciones trombóticas asociadas con la HIT.

Los intervalos de plasma obtenidos a partir de la cantidad de aPC administrada, serán aproximadamente de 2 ng/ml hasta aproximadamente 300 ng/ml. Los intervalos de plasma preferidos son desde aproximadamente 2 ng/ml hasta aproximadamente 200 ng/ml. Lo más preferiblemente, los intervalos de plasma son desde aproximadamente 30 ng/ml hasta aproximadamente 150 ng/ml, y aún más preferiblemente, aproximadamente 100 ng/ml.

Como alternativa, la aPC se administrará inyectando un tercio de la dosis apropiada por hora en forma de una inyección de bolo, seguido de los dos tercios restantes de la dosis horaria en forma de infusión continua de la dosis apropiada para veintitrés horas que dé como resultado la dosis apropiada administrada a lo largo de 24 horas. Además, la inyección de bolo se administrará mediante una bomba de goteo de bolsa intravenosa o una bomba de jeringa a una velocidad 2 veces la normal durante 45 minutos, seguido de una velocidad 1,5 veces la normal durante 45 minutos. A continuación, se continúa la velocidad normal, es decir, la velocidad que se ha determinado para administrar el nivel dosis apropiado del agente terapéutico por período de tiempo, durante hasta 240
horas.

El uso de proteína C en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la HIT tal como se presenta en la presente invención, proporcionará una terapia necesaria para un trastorno debilitante y potencialmente serio. El uso de proteína C es eficaz y evita las complicaciones tales como tendencia a la hemorragia, toxicidad y efectos secundarios de los agentes anti-coagulantes usualmente disponibles.

Lo ejemplos siguientes se proporcionan únicamente para ilustrar adicionalmente la presente invención. El alcance de la invención no debe considerarse que consiste únicamente en los ejemplos siguientes.

Preparación 1

Preparación de proteína humana C

Se produjo proteína C humana recombinante (r-hPC) en células 293 de riñón humano mediante técnicas conocidas por el técnico experto, tales como las establecidas por Yan, en la Patente de EE.UU. No. 4.981.952. El gen que codifica la proteína C humana ha sido descrito y reivindicado por Bang, y otros, en la Patente de EE.UU. No. 4.775.624. El plásmido usado para expresar la proteína humana en células 293 fue el pásmido pLPC, el cual ha sido descrito por Bang, y otros, en la Patente de EE.UU. No. 4.992.373. La construcción del plásmido pLPC ha sido igualmente descrita en la Solicitud de Patente Europea No. 0 445 938, y por Grinell, y otros, en Bio/Technology, vol. 5, págs. 1189-1192, (1987). En resumen, el plásmido se transfectó dentro de células 293 y, a continuación, se identificaron transformantes estables, se subcultivaron y se desarrollaron en medio libre de cultivo. Después de fermentación, se obtuvo medio libre de células mediante microfiltración.

La proteína C humana se separó del fluido de cultivo mediante una adaptación de las técnicas de Yan, Patente de EE.UU. No. 4.981.952. El medio clarificado se hizo 4 mM en EDTA antes de absorberlo en una resina de intercambio aniónico (Fast-Flow Q, Pharmacia). Después de lavado con 4 volúmenes de columna de Tris 20 mM, NaCl 200 M, pH 7,4 y 2 volúmenes de columna de Tris 20 mM NaCl 150 mM, pH 7,4, el zimógeno de proteína C humana recombinante unido se eluyó con Tris 20 mM, NaCl 150 mM, CaCl_{2} 10 mM, pH 7,4. La proteína eluida fue superior al 95% de pureza después de elución, tal como se determinó mediante electroforesis de gel de SDS-poliacrilamida.

La purificación adicional de la proteína se llevó a cabo haciendo la proteína 3 M en NaCl, seguido de adsorción en una resina de interacción hidrófoba (Toyopearl Phenyl 650 M Tosohaas), equilibrada en Tris 20 mM, NaCl 3 M, CaCl_{2} 10 mM, pH 7,4. Después de lavado con 2 volúmenes de columna de tampón de equilibrado sin CaCl_{2}, la proteína C humana recombinante se eluyó con Tris 20 mM, pH 7,4.

La proteína eluida se preparó para activación mediante separación del calcio residual. La proteína C humana recombinante se pasó sobre una columna de afinidad de metal (Chelex-100, Bio-Rad) para separar el calcio y nuevamente se unió a un intercambiador de aniones (Fast Flow Q, Pharmacia). Ambas columnas se dispusieron en serie y se equilibraron en Tris 20 mM, NaCl 150 mM, EDTA 5 mM, pH 7,4. Después de cargar la proteína, la columna Chelex-100 se lavó con un volumen de columna del mismo tampón antes de desconectarla de la serie. La columna de intercambio de aniones se lavó con 3 volúmenes de columna de tampón de equilibrado antes de eluir la proteína con NaCl 0,4 M, Tris-acetato 20 mM, pH 6,5. Las concentraciones de proteína de las soluciones de proteína C humana recombinante y proteína C activada recombinante, se midieron mediante extinción UV a 280 nm a E_{0,1%}= 1,81 ó 1,85, respectiva-
mente.

Preparación 2

Activación de proteína C humana recombinante

Se acopló trombina bovina a CH-Sepharose 4B activada (Pharmacia) en presencia de HEPES 50 mM, pH 7,5 a 4ºC. La reacción de acoplamiento se realizó sobre resina previamente empaquetada dentro de una columna usando 5000 unidades de trombina/ml de resina. La solución de trombina se circuló a través de la columna durante 3 horas aproximadamente antes de agregar 2-amino-etanol (MEA) a una concentración de 0,6 ml/l de solución en circulación. La solución que contenía MEA se circuló durante 10-12 horas más para asegurar el bloqueo completo de las aminas sin reaccionar sobre la resina. Después del bloqueo, la resina acoplada con trombina se lavó con 10 volúmenes de columna de NaCl 1 M, Tris 20 mM, pH 6,5 para separar toda proteína no unida específicamente, y se usó en reacciones de activación después de equilibrarla en tampón de activación.

La r-hPC purificada se hizo 5 mM en EDTA (para quelar todo el calcio residual) y se diluyó hasta una concentración de 2 mg/ml con Tris 20 mM, pH 7,4 o Tris-acetato 20 mM, pH 6,5. Este material se pasó a través de una columna de trombina equilibrada a 37ºC con NaCl 50 mM y o bien Tris 20 mM, pH 7,4 o bien Tris-acetato 20 mM, pH 6,5. La velocidad de flujo se ajustó para permitir 20 minutos aproximadamente de tiempo de contacto entre la r-hPC y la resina de trombina. Se recogió el efluente e inmediatamente se ensayó para determinar la actividad amidolítica. Si el material no tenía una actividad específica (amidolítica) comparable a un estándar establecido de proteína C, este se recicló sobre la columna de trombina para activar la r-hPC hasta su terminación. Esto fue seguido de dilución 1:1 del material con tampón 20 mM como anteriormente, con un pH o bien de 7,4 o bien 6,5, para mantener la proteína C a concentraciones bajas mientras aguardaba la siguiente etapa de tratamiento.

La separación de la trombina lixiviada del material de proteína C se realizó uniendo la proteína C a una resina de intercambio de aniones (Fast Flow Q, Pharmacia) equilibrada en tampón de activación (en Tris 20 mM, pH 7,4, o en Tris-acetato 20 mM, pH 6,5) con NaCl 150 mM. La trombina no reacciona con la resina de intercambio de aniones bajo estas condiciones, pero pasa a través de la columna dentro del efluente de aplicación de la muestra. Una vez que la proteína C se cargó sobre la columna, se realizó un lavado de 2-6 volúmenes de columna con tampón de equilibrado 20 mM antes de eluir la proteína C unida con una etapa de elución usando NaCl 0,4 M en Tris-acetato 5 mM, pH 6,5, o en Tris 20 mM, pH 7,4. Los lavados de volúmenes más altos de la columna facilitaron una más completa separación del dodecapéptido. El material eluido procedente de esta columna se almacenó en una solución congelada (-20ºC) o como un polvo liofilizado.

La actividad anticoagulante de la proteína C activada se determinó midiendo la prolongación del tiempo de coagulación en el ensayo de coagulación de tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT). Se preparó una curva estándar en tampón de dilución (1 mg/ml de albúmina de suero bovino de grado radioinmunoensayo [BSA], Tris 20 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, NaN_{3} al 0,02%) dentro del intervalo de concentración de proteína C de desde 125-1000 mg/ml, al mismo tiempo que se prepararon muestras a diversas diluciones en este intervalo de concentración. A cada cubeta de muestra, se agregaron 50 \mul de plasma de caballo frío y 50 \mul de reactivo de tiempo de tromboplastina parcial activada reconstituida (Reactivo APTT, Sigma) y se incubaron a 37ºC durante 5 minutos. Después de la incubación, se agregaron 50 \mul de las muestras o de los estándar apropiados a cada cubeta. Para determinar el tiempo de coagulación basal, se usó tampón de dilución en lugar de muestra o de estándar. El contador de tiempo del fibrómetro (CoA Screener Hemostasis Analyzer, American Labor) se puso en marcha inmediatamente después de la adición de 50 \mul a 37ºC de CaCl_{2} 30 mM a cada muestra o estándar. La concentración de proteína C activada en las muestras se calculó a partir de la ecuación de regresión lineal de la curva estándar. Los tiempos de coagulación registrados aquí fueron el promedio de un mínimo de tres muestras, incluyendo las muestras de la curva
estándar.

Las descripciones anteriores permiten a uno con la experiencia apropiada en la técnica preparar proteína C para uso en el tratamiento de trombocitopenia inducida por heparina.

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Preparación 3

Formulación de proteína C activada

Se preparó una formulación liofilizada estable de proteína C activada, mediante un procedimiento que comprende la liofilización de una solución que comprende aproximadamente 2,5 mg/ml de proteína C activada, aproximadamente 15 mg/ml de sacarosa, aproximadamente 20 mg/ml de NaCl, y un tampón de citrato sódico que tiene un pH superior a 5,5 pero menor de 6,5. Adicionalmente, la formulación liofilizada estable de proteína C activada comprende la liofilización de una solución que comprende aproximadamente 5 mg/ml de proteína C activada, aproximadamente 30 mg/ml de sacarosa, aproximadamente 38 mg/ml de NaCl, y un tampón de citrato que tiene un pH superior a 5,5 pero menor de 6,5.

La relación de proteína C:sal:agente de relleno (p:p:p) es un factor importante en una formulación adecuada para el procedimiento de criodesecación. La relación varía dependiendo de la concentración de proteína C, de la selección y concentración de la sal y de la selección y concentración del agente de relleno. En particular, un relación de aproximadamente 1 parte de proteína C activada a aproximadamente 7,6 partes de sal a aproximadamente 6 partes de agente de relleno, es la preferida.

Se preparó una formulación de dosificación unitaria de proteína C activada adecuada para administración mediante infusión continua, mezclando proteína C activada, NaCl, sacarosa, y tampón de citrato sódico. Después del mezclado, se transfirieron 4 ml de la solución a un receptáculo de dosificación unitaria y se liofilizó. El receptáculo de dosificación unitaria que contenía aproximadamente 5 mg hasta aproximadamente 20 mg de proteína C activada, adecuada para administración a una dosificación de aproximadamente 0,01 mg/kg/h hasta aproximadamente 0,05 mg/kg/h a pacientes que lo necesitaban, se selló y almacenó hasta su uso.

Ejemplo 1 Un ensayo ciego doble controlado por placebo de proteína C activada humana recombinante (rhAPC) LY203638 en pacientes con trombocitopenia inducida por heparina (HIT)

La trombocitopenia inducida por heparina (HIT) ocurre en 1% de pacientes tratados con heparina durante 7 días y en 3% de pacientes tratados con heparina durante 14 días. La trombosis venosa, o menos frecuentemente arterial, ocurre en 50% de pacientes con HIT, a pesar de la interrupción de la heparina. En pacientes afectados con HIT, la heparina conduce a la liberación del factor 4 de plaquetas procedente de plaquetas. La heparina en forma de complejo con el factor 4 de plaquetas inicia la liberación de la HIT-IgG. La HIT-IgG en forma de complejo con heparina y el factor 4 de plaquetas se une a los receptores Fc de plaquetas conduciendo a su activación.

La activación de plaquetas conduce a la formación de trombina mediante la liberación adicional de factor 4 de plaquetas. La HIT-IgG reconoce un complejo de factor 4 de plaquetas y sulfato de heparina endotelial que conduce a la expresión del factor de tejido sobre la superficie endotelial y la activación de la cascada de coagulación. El propio factor 4 de plaquetas conduce a la formación de trombina debido a su capacidad de neutralizar la heparina.

La vía de tratamiento a pacientes con trombocitopenia inducida por heparina (HIT), incluye no solamente la interrupción de la heparina, sino además la prevención de las secuelas trombóticas del síndrome. Los inhibidores de la síntesis de trombina son los agentes más idóneos para llevarla a cabo. La proteína C activada recombinante (r-aPC) es uno de dichos inhibidores de la síntesis de trombina. La r-aPC bloquea la formación de trombina mediante la inactivación de los Factores Va y VIIIa en la cascada de coagulación.. La infusión de r-aPC da como resultado una prolongación dependiente de la dosis del tiempo de tromboplastina parcial activada (APTT), lo que demuestra este efecto.

Este ensayo tiene por objeto mostrar que la infusión de r-aPC da como resultado una reducción significativa estadísticamente en el punto final combinado de mortalidad, nuevas trombosis, y amputaciones de extremidades, comparado con placebo en pacientes con trombocitopenia inducida por heparina.

Los criterios de inclusión incluyen pacientes con trombocitopenia inducida por heparina diagnosticada por: 1) un recuento de plaquetas del 50% respecto de la línea basal o menos de 150.000 después de 5 días o más de heparina; y 2) un ensayo positivo para IgG dependiente de heparina usando el ensayo de liberación de ^{14}C-serotonina.

Los pacientes que cumplen los criterios de inclusión para HIT y que no tienen criterios de exclusión, han interrumpido la heparina. Además de iniciar la terapia de warfarina, los pacientes reciben su placebo o r-aPC durante 96 horas. La r-aPC se administra en una dosis de 48 \mug/kg/h, la cual se ha mostrado en ensayos humanos previos que aumenta la APTT a 2X la línea basal.

El punto final primario del estudio es un punto final combinado de 30 días de incidencia de mortalidad, amputación de extremidades, y nuevas trombosis. La proporción del episodio del placebo se asume que es del 50%. La seguridad de la r-aPC es comparable al placebo con respecto a la incidencia de hemorragias significativas clínicamente como un punto final primario adicional. El punto final secundario del ensayo es el tiempo de recuperación de plaquetas.

Claims (14)

1. El uso de proteína C en la fabricación de un medicamento para tratamiento de un paciente que sufre de trombocitopenia inducida por heparina (HIT), en el que la cantidad de proteína C humana es 5 \mug/kg/h hasta 250 \mug/kg/h.

2. El uso de la Reivindicación 1, en el que la cantidad de proteína C humana es 15 \mug/kg/h hasta 30 \mug/kg/h.

3. El uso de la Reivindicación 2, en el que la cantidad de proteína C humana es 24 \mug/kg/h.

4. El uso de la Reivindicación 1, en el que la cantidad de proteína C humana es 48 \mug/kg/h.

5. El uso de una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4, en el que la proteína C humana es para ser administrada mediante infusión continua durante 1 a 240 horas.

6. El uso de una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, en el que la proteína C es zimógeno de proteína C humana.

7. El uso de una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 5, en el que la proteína C es proteína C activada humana.

8. El uso de proteína C activada en la fabricación de un medicamento para tratamiento de un paciente que sufre de trombocitopenia inducida por heparina (HIT), en el que dicho medicamento es para administración en una cantidad suficiente para proporcionar un nivel en plasma de proteína C activada de 2 ng/ml hasta 300 ng/ml.

9. El uso de la Reivindicación 8, en el que el medicamento es para administración en una cantidad suficiente para proporcionar un nivel en plasma de proteína C activada de 30 ng/ml hasta 150 ng/ml.

10. El uso de la Reivindicación 9, en el que el medicamento es para administración en una cantidad suficiente para proporcionar un nivel en plasma de proteína C activada de 100 ng/ml.

11. El uso de una cualquiera de las Reivindicaciones 8 a 10, en el que la proteína C activada es para administración como una inyección de bolo.

12. El uso de una cualquiera de las Reivindicaciones 8 a 10, en el que la proteína C activada es para administración mediante infusión continua durante 1 a 240 horas.

13. El uso de una cualquiera de las Reivindicaciones 8 a 10, en el que la proteína C activada es para administración primeramente como un bolo y, a continuación, como una infusión continua.

14. El uso de la Reivindicación 13, en el que un tercio de la proteína C activada requerida para lograr los niveles en plasma de proteína C activada dentro del intervalo de 2 ng/ml hasta 300 ng/ml es para administración en una inyección de bolo y los dos tercios restantes de la proteína C activada es para la subsiguiente administración mediante infusión continua.