HU224901B1 - Methods for treating hypercoagulable states or acquired protein c deficiency - Google Patents

Methods for treating hypercoagulable states or acquired protein c deficiency Download PDF

Info

Publication number
HU224901B1
HU224901B1 HU0100025A HUP0100025A HU224901B1 HU 224901 B1 HU224901 B1 HU 224901B1 HU 0100025 A HU0100025 A HU 0100025A HU P0100025 A HUP0100025 A HU P0100025A HU 224901 B1 HU224901 B1 HU 224901B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
protein
dose
apc
human
activated
Prior art date
Application number
HU0100025A
Other languages
English (en)
Inventor
Brian William Grinnell
Daniel Lawrence Hartman
Sau-Chi Betty Yan
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of HUP0100025A2 publication Critical patent/HUP0100025A2/hu
Publication of HUP0100025A3 publication Critical patent/HUP0100025A3/hu
Publication of HU224901B1 publication Critical patent/HU224901B1/hu

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46Hydrolases (3)
    • A61K38/48Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4866Protein C (3.4.21.69)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46Hydrolases (3)
    • A61K38/48Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00Drugs for disorders of the respiratory system
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/02Nutrients, e.g. vitamins, minerals
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14Hydrolases (3)
    • C12N9/48Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/6464Protein C (3.4.21.69)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12YENZYMES
    • C12Y304/00Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21069Protein C activated (3.4.21.69)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

A jelen találmány az orvostudománnyal, részletesebben a hiperkoagulációs állapot vagy a szerzett C protein-hiányos állapot aktivált C proteinnel való kezelésével kapcsolatos.
A C protein egy szerinproteáz és természetesen előforduló alvadásgátló anyag, mely a vérzéscsillapítás szabályozásában játszik szerepet azon tulajdonsága révén, hogy képes megakadályozni a trombintermelés kiváltását oly módon, hogy inaktiválja az Va és Villa faktorokat a véralvadás folyamatában. A humán C protein in vivő elsősorban a májban jön létre 461 aminosavból álló egyedüli polipeptidként. Ez a prekurzormolekula többszörös poszttranszlációs módosításon esik át, ideértve 1. egy 42 aminosavból álló jelszekvencia hasítását; 2. a 155-ös pozícióban levő lizinmaradék és a 156-os pozícióban levő argininmaradék egyláncú zimogénjéről való proteolitikus eltávolítást a kétláncú molekulaforma létrehozása céljából (azaz a 155 aminosavmaradékból álló könnyű lánc egy diszulfidhídon keresztül a szerinproteázt tartalmazó 262 aminosavmaradékból álló nehéz lánchoz kapcsolódik); 3. a könnyű lánc első 42 aminosavába rendeződött kilenc glutaminsavmaradék K-vitamin-függő karboxilálása, ami 9 gamma-karboxi-glutaminsav-maradékokat eredményez; és 4. négy helyen szénhidrátkapcsolást (egyet a könnyű láncban és hármat a nehéz láncban). A nehéz lánc egy jól megalapozott, Asp 257, His 211 és Ser 360 szerinproteáz-triádot tartalmaz. Végül, a keringő kétláncú zimogént in vivő a trombin aktiválja egy foszfolipidfelszínen kalciumion jelenlétében. Az aktiválás egy dodecapeptid nehéz lánc N-terminusából való eltávolításából ered, így létrehozza az aktivált C proteint (aPC) feldolgozó enzimatikus aktivitást.
Más proteinekkel együtt az aPC talán a legfontosabb lefelé szabályozó véralvadást szabályozó protein, ami a trombózis elleni védelmet eredményezi. Alvadásgátló tulajdonságán túl az aPC gyulladásgátló hatásokkal is rendelkezik, mivel a citokinek (például a TNF és az IL—1) létrejöttének gátlásán keresztül, valamint profibrinolitikus tulajdonságokat is kifejt, melyek elősegítik az alvadt vércsomók lízisét. így a C protein enzimrendszer a véralvadás, a gyulladásgátló és fibrinolízis fő fiziológiai mechanizmusát képviseli.
Szepszis
A szepszist a fertőzésre adott szisztémás gyulladásos válaszként határozzák meg, mely a gazda védelmi mechanizmusai aktiválásával kapcsolatos, és ez közvetíti. Ebbe a mechanizmusba tartozik a citokinhálózat, a leukociták és a komplement és koagulációs/fibrinolízises rendszerek [Mesters, et al., Blood 88: 881-886, 1996], A különböző szervek mikroereiben a kiterjedt intravascularis véralvadás (DIC), széles körű ftbrinlerakódással a szepszis/szeptikus sokk korai megnyilvánulása. A DIC fontos közvetítője a többszörös szervelégtelenség kifejlődésének, és hozzájárul a szeptikus sokkban szenvedő beteg gyenge kórjóslatához (Fourrier, et al., Chest, 101: 816-823, 1992).
Számos biztató preklinikai vizsgálatról számoltak be, melyben C proteint használtak a szepszis állati modelljeiben. A pávián szepszises modellben Taylor és munkatársai (J. Clin. Invest. 79:918-25, 1987) plazmaeredetű humán aktivált C proteint használtak. Az állatokat profilaktikusan kezelték (azaz az aPC-t LD100 E. colival való infúzió után két órával adták). Öt állatból öt életben maradt 7 napon túl, és folyamatos túlélőknek értékelték a kísérleti eljárásban. A kontrollállatokban az azonos E. coli-infúzió hatására az öt állatból öt elpusztult 24-32 órán belül. A hatékony dózis 7-8 mg/kg volt.
Egy lipopoliszacharidos szepszises modellben patkányok esetén (Murakami, et al., Blood 87: 642-647, 1996) az LPS-sel indukált pulmonáris vascularis sérülést humán plazmaeredetű aktivált C proteinnel gátolták 100 pg/kg dózisban. Ezenkívül egy elkötéses és perforációs szepszises modellben nyulak esetében Okamoto et al. (Gastroenterology 106:A747, 1994) bemutatták, hogy a plazmaeredetű humán aktivált C protein hatékony volt, és megvédte az állatokat a coagulopathiától és a szervelégtelenségtől 12 pg/kg/óra dózisban kilenc órán keresztül. Az aPC fajspecifitásának köszönhetően az ezen állatokkal elért eredmények nem szükségszerűen jósolják meg az emberek kezelését. A humán aktivált C protein hatékony dózisszintje rendkívül változatos, megbecsülhetetlen és a kiválasztott állati modelltől függ. Például a humán aktivált C protein-szérum felezési ideje emberekben 30-40 perc, páviánokban 8-10 perc, nyulakban 90 perc.
Számos kísérletet tettek mostanában az emberi szepszis kezelésére, a legtöbb során olyan anyagot használtak, mely az ezen betegség patofiziológiájával kapcsolatos gyulladásközvetítőket gátolja. Azonban a különféle gyulladásközvetítőket blokkoló anyagokat használó klinikai vizsgálatok sikertelenek voltak (Natanson és munkatársai, Ann. Intern. Med. 120: 771-783, 1994; és Gibaldi adtak róla áttekintést, Pharmacotherapy 13: 302-308, 1993). Mivel számos, a gyulladásban részt vevő közvetítőanyag kompenzációs válasz, és ezért hasznos reakció, néhány kutató véleménye szerint működésük gátlása esetleg nem megfelelő (például Parrillo, N. Engl. J. Med. 328:1471-1477, 1996).
Nemrégiben a blokkoló DIC-et javasolták a szepszis klinikai vizsgálatainak új céljaként (például Levi et al., JAMA 270:975-979, 1993). Azonban a véralvadásos elégtelenség egyszerű gátlása szepszisben nem elegendő. Ahogy Esmon ismerteti (Arteriosclerosis & Thromb., 12:135-145, 1993), számos trombózis elleni szer bizonyult hatástalannak a páviánszepszis-modellben, ideértve az aktívhely-blokkolású Xa faktort (Taylor et al., Blood 78; 364-368, 1991), a hirudint és hirulogot (Maraganore, Perspective in Drug Discovery and Design 1:461-478, 1994). Ezen antitrombotikumok mindegyike képes blokkolni a pusztító coagulopathiát állatokban, de nem volt képes a túlélést javítani. Ezenkívül japán kutatók (JP7097335A szabadalmi bejelentés) azt javasolták, hogy a májelégtelenséggel kapcsolatos coagulopathiát, mely DIC-szerű tüneteket képes kifejleszteni, plazmaeredetű aktivált C proteinnel kezeljék.
Ez ideig a plazmaeredetű humán C protein-zimogént sikeres kiegészítőként használták az agresszív hagyományos terápiában 25 purpura fulminansban szen2
HU 224 901 Β1 védő beteg kezelése során bakteriális szepszisben, akik közül 22 életben maradt (Gerson, et al., Pediatrics 9a:418-422, 1993; Smith et al., Thromb. Haemost, PS1709, p419, 1997; Rintala et al., Láncét 347: 1767, 1996; Rivard et al., J. Pediatr. 126:646-652, 1995). Gerson és munkatársai (1993) egy esetvizsgálatot írtak le, melyben egy igazoltan Gram-pozitív bacteriaemiában és purpura fulminansban szenvedő gyereket kezeltek, aki nem reagált az agresszív hagyományos kezelésre. A beteget plazmaeredetű humán C protein-zimogénnel kezelték (280 pg/kg nagy dózis+40 pg/kg/óra infúzióval), és a coagulopathia és DIC kapcsolt javulását érték el, valamint a szeptikus sokkal kapcsolatos purpura fulminans kifejlődésének klinikai tünetei megfékezését. Rintala és munkatársai (1996) két felnőtt, purpura fulminanst mutató meningococcalis septikémiás beteg kezeléséről számoltak be. A beteget plazmaeredetű C protein-zimogénnel kezelték 400 pg/kg nagy dózissal minden hatodik órában 8-10 napon keresztül. Az egyik beteg meghalt, a másik életben maradt. Rivard és munkatársai (1995) négy meningococcaemiában és purpura fulminansban szenvedő beteg kezeléséről számoltak be, akik mindannyian életben maradtak a humán C protein-zimogénnel való terápiát követően. Ezeket a betegeket 400 pg/kg nagy dózissal kezelték minden hatodik órában. Bár ezekben a vizsgálatokban alacsony a mintaszám, a purpura fulminanst is mutató meningococcaemiával kapcsolatos mortalitás 50%-nál nagyobb (Powars et al., Clin. Infections Diseases 17:254-261, 1993). Azonban mivel ezeket a vizsgálatokat humán C protein-zimogénnel végezték, nem sok segítséget jelentenek az aktivált C proteinnel végzendő terápia dózisának és időtartamának becsléséhez.
A meningococcaemián túl a purpura fulminans és/vagy DIC kapcsolódik számos bakteriális, virális vagy protozoafertőzéshez, melyek közé az ezekre való korlátozás nélkül a következők tartoznak: Rickettsia (Rocky Mountain Spotted fever, kullancscsípéses láz, tífusz stb.) [Greybill et al., Southern Medical Journal 66(4): 410-413, 1973, Loubser et al., Annals of Tropical Paediatrics 13:277-280, 1993]; Salmonella (tífuszos láz, patkányharapási láz) (Koul et al., Acta Haematol, 93: 13-19, 1995); Pneumococci (Carpenter et al., Scand J. Infect. Dis. 29:479-483, 1997); Yersinia pestis (bubópestis) (Butler et al., The Journal of Infections Disease, 129: 578-584, 1974); Legionella pneumophila (légiós betegség); Plasmodium falciparum (agyi malária) (Lercari et al., Journal of Clinical Apheresis 7: 93-6, 1992); Burkholderia pseudomallei (melioidosis); Pseudomonas pseudomallei (melioidosis) (Puthucheary et al., Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 86: 683-685, 1992); Streptococci (odontogén fertőzések) (Óta, Y. J. Japanese Assoc. Infect. Dis. 68: 157-161); zostervírus (Nguyen et al., Eur. J. Pediatr. 153:646-649, 1994), Bacillus anthracis (lépfene) [Franz et al., Journal of the American Medical Assoc. 278(5):399-411, 1997]; Leptospira interrogans (leptospirosis) [Hill et al., Seminars in Respiratory Infections, 12(1):44-49, 1997]; Staphylococci (Levin. M., Pediatric Nephrology
8: 223-229); Haemophilus aegypticus (brazil bíbor láz); Neisseria (gonococcaemia, meningococcaemia);
és Mycobacterium tuberculosis (katonai tuberkulózis).
Még ha a purpura fulminanst, a DIC-et vagy a szerzett C protein-hiányos állapotokat szepszisben/szeptikus sokkban vagy más fertőzésekben jól dokumentálták is, ahogy azt fent jelöltük, kevés adat áll rendelkezésre arról, hogyan kell ezeket a betegeket aktivált C proteinnel kezelni. Az állatmodellekben aktivált humán C proteinnel történő kezelésből nyert preklinikai farmakológiai adatok alapján a humán dózisszintek megállapítása nehéz a C protein biológiai működése fajspecifikus tulajdonságainak köszönhetően.
Transzplantáció
Számos, a transzplantációval kapcsolatos thromboemboliás komplikáció fordulhat elő csontvelő-transzplantáció (BMT), máj-, vese- vagy más szervtranszplantációk után [Haire et al., JAMA 274: 1289-1295, (1995); Harper et al., Láncét 924-927 (1988); és Sorensen et al., J. Inter. Med. 226: 101-105 (1989); Gordon et. al., Boné Marrow Transplan. 11: 61-65 (1993)]. A keringő C protein szintjei csökkentek BMT után [Bazarbachi et al., Nouv Rév Fr Hematol 35: 135-140 (1993); Gordon et al., Boné Marrow Trans. 11: 61-65 (1993)], vesetranszplantáció után [Sorensen et al., J. Inter. Med. 226: 101-105 (1989)] és májtranszplantáció után [Harper et al., Láncét 924-927 (1988)]. A C protein ezen hiánya hozzájárul a hiperkoagulálható állapothoz, és a beteget a thromboembolikus komplikációk kockázatának teszi ki.
Például a máj vénás elzáródási betegsége (VÖD) a pretranszplantációs gyógyszerezés fő dóziskorlátozó komplikációja BMT esetén. A VÖD feltételezhetően a kis intrahepaticus venulák elzáródásának az eredménye, ami a fibrin intravascularis lerakódásaiból adódik [Faioni et al., Blood 81: 3458-3462 (1993)]. Ezenkívül a VÖD jelentős morbiditást és mortalitást okoz BMT után [Collins et al., Throm. and Haemo. 72: 28-33 (1994)]. A C protein csökkent szintjei egybeesnek a VÖD leggyakoribb bekövetkezéseivel [Harper et al., Boné Marrow Trans. 5: 39-42 (1990)], és úgy tűnik, hozzájárul ezen állapot létrejöttéhez.
A BMT utáni szervelégtelenség - ideértve a pulmonáris, a központi idegrendszeri, máj- vagy veseelégtelenséget - olyan komplikáció, mely a transzplantált betegek nagy százalékában bekövetkezik [Haire et al., JAMA 274: 1289-1295 (1995)]. A BMT-ben az egyetlen szervi elégtelenség erős jelzője a többszörös szervelégtelenség szindrómának (MODS), mely a leggyakoribb halálozási ok a BMT-betegek körében. A véralvadási rendszer erőteljes aktiválásának köszönhető kiterjedt intravascularis véralvadás (DIC) és a különböző szervek hajszálereiben bekövetkező széles körű fibrinlerakódás fontos közvetítői a MODS kialakulásának [Fourrier et al., Chest 101: 816-823 (1992)]. így a C protein-szintek hiánya olyan betegekben, akik csontvelő- vagy más szervátültetésen estek át, hiperkoagulálható állapothoz vezethet, mely hajlamossá teheti a betegeket a vénás trombózisos komplikációkra és szerv3
HU 224 901 Β1 elégtelenségekre. Jelenleg is igény van a szervátültetésekkel kapcsolatos hiperkoagulációs állapotú emberek aktivált C proteint felhasználó kezelési módszerének meghatározására.
Égések
Már régen felismerték, hogy a súlyos égési sérültek esetében hiperkoagulációval kapcsolatos komplikációk lépnek fel [Curreri et al., Ann. Surg. 181:161-163 (1974)]. Az égési sérültek szupranormális in vitro véralvadási aktivitással jellemezhetők, és gyakran fejlődik ki esetükben a DIC, mely a hirtelen fellépő diffúz vérzésekkel; a fibrinogén, a vérlemezkék és a Vili. faktor felhasználásával; intravascularis hemolízissel, szekunder fibrinolízissel; és a mikrotrombózisok biopsziabizonyítékaival jellemezhető [McManis et al., J. of Trauma 13: 416-422, (1973)]. Nemrégiben arról számoltak be, hogy a C protein szintjei drámaian csökkentek a súlyos égési sérültekben, és a természetes alvadásgátló ilyen csökkenése a DIC kockázatnövekedéséhez vezethet [Lo et al., Burns, 20: 186-187 (1994)]. Ezenkívül Ueyama és munkatársai a DIC égési sérülés korai stádiumában való patogenezisének tárgyalásakor azt a következtetetést vonták le, hogy erőteljes trombinképződés és az alvadásgátló aktivitás csökkenése következhet be a súlyos égések mértékében [Ueyama et al., Nippon Geka Gakkai Zasshi 92: 907-12 (1991)]. A DIC a súlyos égési sérültek egyik gyakori komplikációja.
A C protein-hiányról - a fentiek szerinti súlyos égési sérültek esetében - azonban kevés adat áll rendelkezésre arra vonatkozóan, hogy a C protein kiegészítő terápia hatékony lenne-e, vagy hogy hogyan kell ezeket a betegeket aktivált C proteinnel kezelni.
Terhesség
Ismeretes, hogy a terhesség többszörös változást okoz a véralvadási rendszerben, mely hiperkoagulálható állapothoz vezethet. Például a terhesség alatt vagy a szülés után a vénás trombózis kockázata majdnem ötszörösére emelkedik, mint a nem terhes állapotban. Ezenkívül a véralvadási faktorok száma nő, a véralvadás természetes inhibitorainak mennyisége csökken, a fibrinolitikus rendszerben is változás áll be, nő a vénás pangás, valamint nő a vascularis sérülés a szülés során a placentaszeparáció következtében, a császármetszésnél vagy fertőzés esetén [Barbour et al., Obstet Gynecol 86: 621-633 (1995)].
Bár rizikófaktor nélküli nőben a hiperkoagulálhatósági állapotnak köszönhető komplikáció kockázata kicsi, a thromboembolikus múlttal rendelkező nők esetén nő a kockázata az esemény újrabekövetkezésének, amikor ezek az asszonyok terhesek lesznek. Ezenkívül a hiperkoagulálható állapotban levő nőkben - ideértve a nemrégiben felfedezett aktivált C proteinnel szembeni örökletes rezisztenciát - szintén magasabb az újrabekövetkezés kockázata [Dahlback, Blood 85: 607-614 (1995)].
Ezért azt javasolták, hogy a vénás thromboemboliás múlttal rendelkező nők esetében, akiknél antitrombin-lll-hiányt, C protein- vagy S protein-hiányt fedeztek fel, és ezért az újrabekövetkezés észrevehető kockázatával rendelkeznek, profilaktikus terápia ajánlatos [Conrad et al., Throm Haemost 63: 319-320, (1990)].
Terhes nőkben az eclampsia és az eclampsia előtti állapotok, úgy tűnik, fokozott coagulopathiás állapotot jelentenek, ahogy azt a fokozott fibrinképződés, a fibrinogénrendszer aktiválása, a vérlemezke-aktiválás és a vérlemezkeszám csökkenése jelzi [Clin Obstet Gynecol 35: 338-350 (1992)]. A vélemények szerint a preeclampsia az uteroplacentáris ischaemia eredménye, ami a placenta „vascularis inzertációja” egy anomáliájának köszönhető. A preeclampsia következményei közé tartoznak a magas vérnyomás, valamint a DIC, ami számos mikrovérrög felszabadulásához vezet, ami azután placenta-, vese-, máj- és cerebrális léziót okozhat [Rév. Fr. Gynecol. Obstet. 86: 158-163 (1991)]. Ezenkívül a preeclampsia súlyos, életveszélyes, HELLP-szindrómaként ismert állapothoz vezethet, melyet thrombocytopeniával, hemolízissel és megzavart májfunkcióval komplikált preeclampsiaként határoznak meg [Rathgeber et al., Anasth Intensivther Notfallmed 25: 206-211 (1990)]. Ezenkívül azt is feljegyezték, hogy a C protein-szint csökken súlyos preeclampsiás terhes nők esetében a normális terhesekhez képest [De Stefano et al., Thromb Haemost 74: 793-794 (1995)].
így a terhes nők esetében előforduló vénás thromboemboliás komplikációk kockázata lényeges szempont, különösen a thromboembolikus múlttal rendelkező nők körében. Bár a súlyos komplikációk, mint a preeclampsia vagy a DIC valószínűsége viszonylag kicsi, azt javasolják, hogy a DIC terápiáját nagyon fontos azonnal elkezdeni, ahogy az aktivált véralvadási rendszer gátlásának kialakulását diagnosztizálták [Rathgeber et al., Anasth Intensivther Notfallmed 25: 206-211 (1990)]. A preeclampsia vagy a DIC komplikációi analógok a szepszisben előforduló helyzetekkel, mivel hiperkoagulálható állapot és a C protein szintjeinek csökkenése következik be mindkettőben.
Fontosabb sebészeti beavatkozás/trauma
A komolyabb sebészeti beavatkozásból vagy baleseti traumából felépülő betegek gyakran kerülnek szembe a véralvadási komplikációkkal az indukált hiperkoagulálható állapot következtében [Watkins et al., Kiin Wochenschr 63: 1019-1027 (1985)]. A hiperkoagulálható állapotot egyre inkább a vénás trhomboembolizmus okaként ismerik el a sebészeti betegek esetében [Thomas et al., Am. J. Surg. 158: 491-494 (1989); LeClerc, J. R., Clin Appl. Thrombosis/Hemostasis 3(3): 153-156 (1997)]. Ezenkívül ez a hiperkoagulálható állapot DIC-szerű tünetekkel járó komplikációkhoz vezethet, mely ritkán következik be, de ettől függetlenül pusztító hatású, és bekövetkezése esetén gyakran halálos kimenetelű [Collins et al., Am. J. Surg. 124: 375-380, (1977)].
Ezenkívül a koszorúérbypass-beültetésnél (CABG) [Menges et al., J. Cardiothor Vasc An. 10: 482-489, (1996)], a nagyobb gerincműtéteknél [Mayer et al., Clin Orthop 245: 83-89, (1989)], a nagyobb hasi műtéteknél
HU 224 901 Β1 [Blamey et al., Thromb Haemost. 54: 622-625 (1985)], a nagyobb ortopéd műtéteknél vagy az alsó végtagok arthroplasztikai műtétéinél [LeClerc (1997)] vagy más műtéteknél [Thomas et al., Am. J. Surg 158: 491-494 (1989)] alkalmanként vénás thromboemboliás kompli- 5 káció lép fel. Ezenkívül japán kutatók a gerincvelő-sérülésekkel kapcsolatos microvascularis thrombosis kezelésére plazmaeredetű C proteint javasolnak (JP8325161A szabadalmi bejelentés) 1-10 mg/nap dózisban felnőttek esetén, előnyösen 2-6 mg 1-2 alka- 10 lomra elosztott dózisban kimért adagú dózisként vagy intravénás infúzióként.
Úgy tartják, a véralvadásgátló terápia lényeges profilaktikus terápiaként szerepelhet a vénás thromboembolikus események megelőzésében fontosabb sebé- 15 szeti vagy traumás betegeknél [Thomas et al., (1989); LeClerc (1997)]. Például számos beteg, aki tüdőembólia miatt halt meg, nem rendelkezett klinikai bizonyítékokkal a thromboemboliás események megelőzésére, és meghalt a diagnózis felállítása és a kezelés beállítá- 20 sa előtt [LeClerc (1997)]. A rendelkezésre álló profilaktikus módszerek, például a warfarin, alacsony molekulatömegű heparinok, olyan megkötésekkel rendelkeznek, mint a maradvány proximális trombózis vagy a gyakori dóziskorrekció iránti igény. 25
ARDS
A felnőttkori respirációs distressz-szindrómát (ARDS) a tüdőödéma, a mikrovérrögök, gyulladásos sejtbeszűrődések és késői fibrosis jellemzik. Ezekben 30 a többszörös celluláris és gyulladásos válaszokban döntő fontosságú a véralvadás aktiválása, ami hiperkoagulálható állapotot eredményez. A gyakori ARDS-sel kapcsolatos véralvadási rendellenességek közé tartoznak az intravascularis véralvadás és a fibrinolízis gátlása. A véralvadási rendszer aktiválása révén képződött fibrin és a fibrinolízis gátlása feltételezhetően hozzájárul az akut tüdősérülés patogeneziséhez. A szepszis, a trauma és más kritikus betegségek olyan fontos rizikófaktorok, amelyek ARDS-hez vezetnek [Hasegawa et al., Chest 105(1):268-277, (1994)].
Az ARDS a véralvadás aktiválásával és a fibrinolízis gátlásával kapcsolatos. Figyelemre méltó klinikai bizonyítékok állnak rendelkezésre a pulmonáris vascularis mikrovérrögök jelenlétére, melyek analógok a DICben jelen levő hiperkoagulációval. Ezért jelenleg szükség van az ARDS-sel kapcsolatos hiperkoagulálható állapot hatékony kezelésére.
Az irodalomban és szabadalmakban megadott C protein-dózisszintek egyszerű összehasonlításához az I. táblázatban megadjuk a humán és nem humán főemlősök esetében a különböző vizsgálatban használt normalizált dózisszinteket. Ezek az adatok olyan dózisszinteket adnak meg, melyek alacsonyabbak vagy magasabbak, mint a jelen találmányban megadott dózisszintek. Lényeges, hogy a humán vizsgálatok során plazmaeredetű C protein-zimogén került felhasználásra, míg a nem humán főemlősökkel való vizsgálatok során rekombináns humán aPC került alkalmazásra.
/. táblázat
Referencia Publikált dózis Normalizált dózis*
Taylor et al., 5,009,889 számú US szabadalmi alkalmazás 2-64 μρ aPC/kg/perc közötti iv. alkalmazás; kimért adag 1 és 10 mg aPC között is alkalmazható ezenfelül (5. oszlop, 14-19 sorok) 120 pg/kg/óra-3800 μg/kg/óra 8-10 órán keresztül adott infúzióval
Rivard et al., J. Ped. 126: 646, 1995 100 IU*/kg plazmaeredetű C proteinzimogéndózis iv. alkalmazásban 15-20 percen keresztül minden 6. órában az akut fázis során, majd 1-2 alkalommal naponta 9 napig (p. 648 1. oszlop, 1. bekezdés) 400 μθ/kg 15-20 percen keresztül
Gerson et al., Ped. 91: 418—422, 1993 Iv. alkalmazás 70 IU*/kg plazmaeredetű C protein-zimogén kimért dózisban minden 6. órában. Ezt követően 10 lU/kg/óra folyamatos infúzió 11 napon keresztül (p. 419, 2. oszlop, 1. bekezdés) 280 μο/kg kimért adag minden 6. órában, majd 40 μg/kg/óra folyamatos infúzió 11 napon keresztül
Rintala et al., Láncét 347: 1767, 1996 lv. alkalmazás kezdődik 3 órával a kórházba szállítás után és 7 napon keresztül tart. 100 IU*/kg plazmaeredetű C protein-zimogén minden 6. órában, később a dózist a C proteinaktivitáshoz igazítják (p. 1767, 2. oszlop, 2. bekezdés) 400 μο/kg kimért adag minden 6. órában 7 napon keresztül
Smith et al., Thromb. Hae. PS-1709, 1997 Minden beteg 100 IU*/kg plazmaeredetű C protein-zimogéndózist kap, majd 15 lU/kg folyamatos infúziót (p. 419, 1. oszlop, PS-1709) 400 pg/kg kimért adag+60 μg/kg/óra (nem adták meg az infúziós időt)
HU 224 901 Β1
/. táblázat (folytatás)
Referencia Publikált dózis Normalizált dózis*
Fujiwara et al., JP7097335A japán szabadalom A szokásos dózis 20-1000 IU* plazmaeredetű aPC/kg testtömeg/nap, vagy még előnyösebben 50-300 U/kg 1-2-szeri osztott alkalmazással. Az alkalmazás módja: legmegfelelőbb az intravénás infúzió (p. 9,0016 bekezdés) 4 pg/kg-200 pg/kg. Az infúziós idő nincs megadva.
Okajima et al., JP8325161A japán szabadalom A plazmaeredetű PC vagy aPC hatékony dózisa 1-10 mg/nap felnőtt esetén vagy előnyösen 2-6 mg 1-2-szeri alkalmazásra szétosztva. Az alkalmazás módja: használható kimért adagú dózis (egyszeri alkalmazásban) vagy intravénás infúzió (p. 10, 0013. bekezdés) 42 pg/óra-420 pg/óra
Okajima et al., Amer. J. of Hematology 33: 277-278(1990) A plazmaeredetű aPC alkalmazása (3 mg/nap 2 napig, majd 6 mg/nap 3 napig) (p. 278, 1. oszlop, 1. teljes bekezdés) 2 pg/kg/óra és 4 pg/kg/óra
Bang et al., 4,775,624 számú US szabadalmi bejelentés Az aktivált C protein dózisa 1-10 mg határok közötti indulási dózis, majd folyamatos infúzió követi 3-30 mg/nap dózishatárok között (19. oszlop, 55-59. sorok) 1,8-18 pg/kg/óra Az infúziós idő nincs megadva.
+ a normális dózis a leírt dózis pg/kg/óra ekvivalensre való konverziója * 1 IU megközelftően 4 pg PC-vel egyenértékű
Ezen beszámolók ellenére a szepszissel, transzplantációval, égési sérülésekkel, terhességgel, komolyabb sebészeti beavatkozással, traumával vagy ARDS-sel kapcsolatos szerzett hiperkoagulálható állapotban vagy szerzett C protein-hiányban szenvedő beteg biztonsá- 35 gos és hatékony terápiájához való dózisértékek továbbra is ismeretlenek. Ezek a vizsgálatok nem jósolják meg a jelen találmány rekombináns aktivált C proteinjének használatát a hiperkoagulálható állapotú vagy a szerzett C protein-hiányos emberekben való kezelésében. 40
A jelen találmány leírja az aPC használatát súlyos szepszises betegek esetében, egy klinikai kísérletben. Ezekben a betegekben az r-aPC-kezelt csoport statisztikai javulást mutat szervfunkcióban, a DIC-markerek csökkenésében és a mortalitás csökkenésében a pia- 45 cebós kontrollcsoporthoz képest. A súlyos szepszises betegekben használt aPC dózisa 12, 18, 24 és 30 pg/kg/óra 48 órás infúzió során. A 12 és 18 pg/kg/óra dózisok nem voltak hatékonyak ebben a vizsgálatban. Meglepő módon a vizsgálatban használt 50 24 és 30 pg/kg/óra dózisok hatékonyak voltak, és jelentősek és meglepően alacsonyak a publikált preklinikai farmakológiai adatokkal összehasonlítva.
Ezenkívül a jelen találmány leírói azt találták, hogy a preklinikai toxikológiai vizsgálatok nem humán főem- 55 lősökben az aPC biztonságosságát jelzik 96 órás infúzióhoz, a csúcsdózist körülbelül 50 pg/kg/óra dózisban határozza meg. Ezekre az adatokra szintén nem számítottunk, a korábbi adatok alapján. Valójában az r-aPC dózisszintjeit emberek részére a korábbi prekli- 60 nikai vizsgálatokra alapozzuk, és a klinikai vizsgálatok fenti toxikológiai vizsgálatok alapján megállapított toxikológiai értékek fölöttiek lesznek.
A jelen találmány a szerzett hiperkoagulálható állapotban vagy szerzett C protein-hiányban szenvedő humán betegek kezelésére biztosít módszert, melynek során az említett betegnek folyamatos infúzióban körülbelül 24—körülbelül 144 órán keresztül körülbelül 20 pg/kg/óra-körülbelül 50 pg/kg/óra aktivált C protein-dózist adunk.
A jelen találmány a továbbiakban a szerzett hiperkoagulálható állapotban vagy szerzett C protein-hiányban szenvedő humán betegek kezelésére biztosít módszert, melynek során az említett betegnek az aktivált C protein hatékony mennyiségét adjuk, hogy az aktivált C protein plazmaszintjei 2 ng/ml-200 ng/ml határok között legyen.
így a jelen találmány olyan módszereket hoz létre, melyekben az aPC-t használjuk a szepszissel, a purpura fulminansszal és meningococcaemiával kapcsolatos hiperkoagulálható állapot és C protein-hiány humán betegben való kezelésére.
A jelen találmány olyan módszereket vezet be, melyekben az aPC-t súlyos égési sérüléssel kapcsolatos hiperkoagulálható állapot és C protein-hiány kezelésére használjuk.
A jelen találmány olyan módszereket vezet be, melyekben az aPC-t a csontvelő- és más szervátültetéssel kapcsolatos hiperkoagulálható állapot és C proteinhiány kezelésére használjuk.
HU 224 901 Β1
A jelen találmány olyan módszereket vezet be, melyekben az aPC-t a komoly sebészeti beavatkozásból vagy súlyos traumából gyógyuló humán betegekkel kapcsolatos hiperkoagulálható állapot és C proteinhiány kezelésére használjuk.
A jelen találmány olyan módszereket vezet be, melyekben az aPC-t a terhesség során fellépő komplikációkkal kapcsolatos hiperkoagulálható állapot és C protein-hiány kezelésére használjuk.
A jelen találmány olyan módszereket vezet be, melyekben az aPC-t az ARDS-sel kapcsolatos szerzett hiperkoagulálható állapot vagy szerzett C protein-hiány kezelésére használjuk.
A jelen találmány céljaira, amint azt leírtuk és az igénypontokban megadtuk, a következő kifejezések az alábbiak szerint határozhatók meg:
Az aPC vagy aktivált C protein - a rekombináns aktivált C proteinre utal. Az aPC magában foglalja és előnyösen a humán C proteint jelenti, bár az aPC magában foglalhat más fajokat is vagy a teljes C protein proteolitikus, amidolitikus, eszterolitikus és biológiai (véralvadásgátló vagy profibrinolitikus) aktivitásokkal rendelkező származékait is. A C protein származékokra szolgáló példák kerültek leírásra a következőkben: Gerlitz et al., 5,543,373 számú US szabadalmi bejelentés és Foster et al., 5,516,650 számú US szabadalmi bejelentés, melyek teljes leírása a hivatkozás révén részét képezi a találmánynak. A rekombináns aktivált C protein előállítható úgy, hogy a rekombináns humán C protein-zimogént in vitro aktiváljuk vagy a C protein aktivált formájának közvetlen szekréciójával. A C protein termeltethető sejtekben, eukarióta sejtekben, transzgenikus állatokban vagy transzgenikus növényekben, ideértve például a humán vese 293-as sejtekből való szekréciót zimogénként, majd a tudomány e területén átlagosan képzett szakember számára ismert technikával történő tisztítását és aktiválását.
A kezelés kifejezés - egy beteggel való foglalkozást és gondozást jelent egy betegség, állapot vagy rendellenesség leküzdésének céljából, és magában foglalja az aPC profilaktikus alkalmazását a tünetek kialakulásának vagy a betegség, állapot vagy rendellenesség komplikációinak megakadályozása céljából, vagy az aPC alkalmazását a betegség, állapot vagy rendellenesség megszüntetése céljából.
A folyamatos infúzió - meghatározott ideig egy oldat vénába való lényegében megszakítás nélküli bejuttatását jelenti.
A kimért adagú injekció - egy gyógyszer egy meghatározott mennyiségben (ezt hívjuk kimért adagnak) történő injektálását jelenti egy 120 percig terjedő időtartam alatt.
Az alkalmazáshoz megfelelő kifejezés - egy liofilezett készítményt vagy oldatot jelent, mely alkalmas a terápiás anyagként való használathoz.
A tartály kifejezés - olyan tartóeszközt jelent, például fiolát vagy üveget, melyet a tervezett anyag, azaz az aPC bejuttatásához használnak.
Egységdózisforma - egy fizikailag elkülönült egységre utal, mely alkalmas a humán alanyok egységdózissal való kezelésére, minden egység egy előre meghatározott mennyiségű aktív anyagot tartalmaz, melyet úgy számítottunk ki, hogy a kívánt terápiás hatást biztosítsa egy megfelelő gyógyszerészeti kötőanyaggal együtt.
A hiperkoagulálható állapot - túlzott koagulálhatóságot jelent, ami a kiterjedt intravascularis véralvadással, pretrombotikus állapotokkal, a véralvadás aktiválásával, vagy az örökölt vagy szerzett véralvadási faktorok, mint például az aPC hiányával kapcsolatos.
A zimogén - a C protein-zimogén, ahogy a jelen találmányban használjuk, a C protein akár egyszálú, akár kétszálú, szekretált inaktív formáira vonatkozik.
A fiatalkorú - olyan humán beteg, aki magában foglalja az ezekre való korlátozás nélkül az újszülötteket, a gyermekeket és a 18 évnél fiatalabb fiatalokat.
Hatékony mennyiség - a gyógyszerészeti készítmény terápiásán hatékony mennyiségét jelenti.
A purpura fulminans - ecchymoticus bőrléziókat, lázat, bakteriális szepszissel, virális, bakteriális vagy protozoafertőzéssel kapcsolatos alacsony vérnyomást jelent. A kiterjedt intravascularis véralvadás is általában jelen van.
A jelen találmány a szepszissel, transzplantációkkal, égési sérülésekkel, terhességgel, komolyabb sebészeti beavatkozással, traumával vagy ARDS-sel kapcsolatos hiperkoagulálható állapot vagy szerzett C protein-hiány aktivált C proteinnel való kezelésével vagy megelőzésével kapcsolatos. Az aPC a tudomány e területén jól ismert technikákkal állítható elő eukarióta sejtvonalak, transzgenikus állatok vagy transzgenikus növények felhasználásával. A tudomány e területén átlagosan képzett szakember könnyen elfogadja, hogy a megfelelő gazda-eukariótasejtvonalak közé az ezekre való korlátozás nélkül a következők tartoznak: HEPG-2, LLC-MK2, CHO-K1, 293 vagy az AV12 sejtek, melyekre a példákat Grinnell írta le az 5,681,932 számú US szabadalmi bejelentésben, mely a hivatkozás révén részét képezi a találmánynak. Ezenkívül a rekombináns proteinek transzgenikus termelésére szolgáló példákat Drohan és munkatársai írták le az 5,589,604 számú US szabadalmi bejelentésben, és Archibald és munkatársai az 5,650,503 számú US szabadalmi bejelentésben, melyek a hivatkozás révén részét képezik a találmánynak.
Ahhoz, hogy teljes mértékben aktív és működőképes legyen a jelen módszerekben, az ezen módszerek bármelyikével előállított aPC poszttranszlációs módosításokon kell átessen, mint például a kilenc gamma-karboxi-glutamátok (gamma-karboxilálás, például Gla-tartalom) hozzáadásán, egy eritro-beta-hidroxi-Asp (beta-hidroxilálás) hozzáadásán, négy Asn-kötött oligoszacharid (glikozilálás) hozzáadásán, a vezetőszekvencia eltávolításán (42 aminosavmaradék) és a dipeptid Lys 156-Arg 157 eltávolításán. Az ilyen poszttranszlációs módosítások nélkül az aPC nem teljesen működőképes vagy nem működőképes.
Az aPC ismert módszereknek megfelelően formulázható a gyógyszerészetileg hasznos készítmény előállítása céljából. Az aPC adható parenterálisan ahhoz,
HU 224 901 Β1 hogy biztosítsuk hatékony formában a véráramba való bejuttatását úgy, hogy a megfelelő dózist folyamatos infúzióként injektáljuk körülbelül 24 óra-körülbelül 144 órán keresztül. Az alkalmazott aPC mennyisége körülbelül 20 gg/kg/óra-körülbelül 50 gg/kg/óra. Még előnyösebben az alkalmazott aPC mennyisége körülbelül 22 gg/kg/óra-körülbelül 40 gg/kg/óra. Még előnyösebben az alkalmazott aPC mennyisége körülbelül 22 gg/kg/óra-körülbelül 30 gg/kg/óra. És legelőnyösebben az alkalmazott aPC mennyisége körülbelül 24 gg/kg/óra vagy körülbelül 30 gg/kg/óra.
Másik lehetőségként az aPC-t az óránkénti megfelelő dózis egy részének beinjektálásával kimért injekcióként adjuk körülbelül 5 perctől körülbelül 120 percig terjedő időtartam alatt, majd körülbelül 23 óra-körülbelül 144 óra alatt a megfelelő dózis folyamatos infúziójaként folytatjuk a kezelést, ami azt jelenti, hogy a megfelelő dózist 24-144 óra alatt adagoljuk.
Csak a gondosan ellenőrzött klinikai vizsgálatok és kimerítő kísérleti vizsgálatok után fedezték fel a találmány leírói, hogy a körülbelül 20 gg/kg/óra-körülbelül 50 gg/kg/óra dózisszint folyamatos infúzióval bejuttatva 24-144 óra alatt eredményez hatékony terápiát. A leginkább előnyös alkalmazandó aPC-dózisszint a szerzett hiperkoagulálható állapotú vagy a szerzett C protein-hiányos humán betegek kezeléséhez a leírtak szerint körülbelül 24 gg/kg/óra.
1. készítmény
A humán C protein előállítása
Rekombináns humán C proteint (r-hPC) termelünk Humán Kidney 293 sejtekben a tudomány e területén átlagosan képzett szakember számára ismert technikával, mint például a 4,981,952 számú US szabadalmi bejelentésben leírt technikákkal, mely leírás a hivatkozás révén részét képezi a találmánynak. A humán C proteint kódoló gént Bang és munkatársai írták le a 4,775,624 számú US szabadalmi bejelentésben, mely a hivatkozás révén részét képezi a találmánynak. A humán C protein 293 sejtekben való expresszálásához használt plazmid a pLPC plazmid, melyet Bang és munkatársai írtak le a 4,992,373 számú US szabadalmi bejelentésben, mely a hivatkozás révén részét képezi a találmánynak. A pLPC plazmid megszerkesztése a 0 445 939 számú európai szabadalmi bejelentésben került leírásra és a Grinnell et al., 1987 Bio/Technologyban 5: 1189-1192, mely leírás a hivatkozás révén részét képezi a találmánynak. Röviden, a plazmidot 293-as sejtekbe transzfektáljuk, majd a stabil transzformánsokat azonosítjuk, szérummentes tápközegbe oltjuk és szaporítjuk. A fermentáció után a sejtmentes tápközeget mikroszűréssel kinyerjük.
A humán C proteint a tenyészfolyadékból Yan technikáját (4,981,952 számú US szabadalmi bejelentés, mely a hivatkozás révén részét képezi a találmánynak) adaptálva választjuk szét. A tisztított tápközeget 4 mM-ossá tesszük EDTA-ban az anioncserés gyantára (Fast-Flow G, Pharmacia) való abszorpció előtt. A 4 oszloptérfogat 20 mM Trissel, 200 mM NaCI-dal (pH 7,4) és 2 oszloptérfogat 20 mM Trissel, 150 mM
NaCI-dal (pH 7,4) való mosás után a kötött rekombináns humán C protein-zimogént 20 mM Trissel, 150 mM NaCI-dal, 10 mM CaCI2-dal (pH 7,4) eluáljuk. Az eluált protein 95%-osnál tisztább volt az eluálás után, amint azt SDS-poliakrilamid gélelektroforézissel megállapítottuk.
A protein további tisztítását a protein NaCI-ban való 3 M-ossá tétele után végezzük el, majd egy 20 mM Trissel, 3 M NaCI-dal, 10 mM CaCI2-dal (pH 7,4) ekvilibrált hidrofób kölcsönhatású gyantán (Toyoperl Phenyl 650 M, TosoHaas) abszorbeáljuk. A 2 oszloptérfogatnyi CaCI2-mentes ekvilibrálópufferrel való mosás után a rekombináns humán C proteint 20 mM Trissel (pH 7,4) eluáljuk.
Az eluált proteint előkészítjük az aktiváláshoz a maradék kalcium eltávolításával. A rekombináns humán C proteint egy fém affinitási oszlopon (Chelex-100, BioRad) engedjük át a kalcium eltávolítása céljából, majd újra egy anioncserélőhöz (Fást Flow Q, Pharmacia) kötjük. Ezen oszlopok mindegyikét sorozatba rendezzük és 20 mM Trissel, 150 mM NaCI-dal, 5 mM EDTA-val (pH 6,5) ekvilibráljuk. A protein felrakása után a Chelex-100 oszlopot egy oszloptérfogatnyi azonos pufferrel mossuk, mielőtt a sorozatról lecsatlakoztatnánk. Az anioncserés oszlopot 3 oszloptérfogat ekvilibrációs pufferrel mossuk a protein 0,4 M NaCI-dal, 20 mM Tris-acetáttal (pH 6,5) való eluálása előtt. A rekombináns humán C protein és a rekombináns aktivált C protein-oldatok proteinkoncentrációit UV-extinkcióval mérjük 280 nm hullámhosszúságon, sorrendben E°'1%=1,85 vagy 1,95.
2. készítmény
A rekombináns humán C protein aktiválása
Szarvasmarhatrombint kapcsolunk aktivált CHSepharose 4B-hez (Pharmacia) 50 mM HEPES (pH 7,5) jelenlétében 4 °C hőmérsékleten. A párosítási reakciót az oszlopba már berakott gyantán végezzük körülbelül 5000 egység trombin/ml gyantát használva. A trombinoldatot az oszlopon keringetjük 3 órán keresztül, mielőtt a keringő oldat 0,6 ml/l koncentrációjához MEA-t adnánk. A MEA-tartalmú oldatot további 10-12 órán keresztül keringetjük az oszlopon levő nem reagált aminok teljes blokkolásának biztosítása céljából. A blokkolás után a trombinnal kapcsolt gyantát 10 oszloptérfogat 1 M NaCI-dal, 20 mM Trissel (pH 6,5) mossuk a nem specifikusan kötött összes protein eltávolítása céljából, és az aktiválási reakcióhoz használjuk az aktiválási pufferben való ekvilibrálás után.
A tisztított r-hPC-t 5 mM-ra készítjük EDTA-ban (bármilyen maradék kalcium kelálása céljából), és 2 mg/ml koncentrációra hígítjuk 20 mM Trissel (pH 7,4) vagy 20 mM Tris-acetáttal (pH 6,5). Ezt az anyagot 37 °C hőmérsékleten 50 mM NaCI-dal és vagy 20 mM Trissel (pH 7,4) vagy 20 mM Tris-acetáttal (pH 6,5) ekvilibrált trombinoszlopon engedjük át. Az átfolyási sebességet úgy állítjuk be, hogy körülbelül 20 perces érintkezési időt tegyen lehetővé az r-hPC és a trombingyanta között. A kifolyó anyagot összegyűjtjük és azonnal vizsgáljuk az amidolitikus aktivitást. Ha az anyag
HU 224 901 Β1 nem rendelkezik egy aPC megalapozott standardaktivitáshoz hasonlítható specifikus (amidolitikus) aktivitással, új ciklust indítunk a trombinoszlopon az r-hPC-aktiválás tökéletesítése céljából. Ezután az anyagot 1:1 arányban hígítjuk 20 mM fenti pufferrel, a pH-érték valahol 7,4 és 6,0 között van (az alacsonyabb pH-értéket részesítjük előnyben az autodegradáció megelőzése céljából), hogy az aPC-t alacsony koncentrációban tartsuk, míg a következő feldolgozási lépésre vár.
Az aPC-anyagból kimosott trombint úgy távol ltjuk el, hogy az aPCt egy aktiválási pufferrel (vagy 20 mM Tris, pH 7,4, vagy előnyösen 20 mM Tris-acetát, pH 6,5) 150 mM NaCI-dal ekvilibrált anioncserés gyantához (Fast-Flow Q, Pharmacia) kötjük. A trombin áthalad az oszlopon, és 2-6 oszloptérfogatnyi 20 mM ekvilibrációs pufferrel végzett mosás során eluálódik. A kötött aPC-t lépcsős gradienssel eluáljuk 0,4 M NaCI-ot használva vagy 5 mM Tris-acetátban (pH 6,5) vagy 20 mM Trisben (pH 7,4). Az oszlop nagyobb térfogatú mosásai kedvezően hatnak a dodekapeptid teljes eltávolítására. Az ezen oszlopról eluált anyagot vagy fagyasztott állapotban (-20 °C) tároljuk, vagy liofilezett porként.
Az aPC amidolitikus aktivitását (AU) a Kabi Vitrumtól vásárolt H-D-Phe-Pip-Arg-p-nitro-anilid (S-2238) szintetikus szubsztrátról való p-nitro-anilin-felszabadulással határozzuk meg Beckman DU-7400 diódasoros spektrométert használva. Az aktivált C protein egy egységét úgy határozzuk meg, mint azt az enzimmennyiséget, ami 1 pmol p-nitro-anilin 25 °C hőmérsékleten, pH 7,4 értéken 1 perc alatti felszabadításához szükséges, 405 nm hullámhosszúságon 9620 M_1cm_1 értékű p-nitro-anilin extinkciós koefficienst használunk.
Az aktivált C protein antikoaguláns aktivitását úgy határozzuk meg, hogy mérjük a véralvadási idő meghosszabbodását az aktivált részleges tromboplasztinidejű (APTT) véralvadási vizsgálatban. A hígítási pufferben standardgörbét veszünk fel (1 mg/ml radioimmunovizsgálati gradiens BSA, 20 mM Tris, pH 7,4, 150 mM NaCI, 0,02% NaN3), ami 125-1000 ng/ml C proteinkoncentrációk közé esik, míg a mintákat ezen koncentrációs határok között különböző hígításokban állítjuk elő. Az egyes mintaküvettákba 50 pl hideg lóplazmát és 50 μΙ előkészített aktivált részleges tromboplasztinidő-reagenst (APTT Reagent, Sigma) adunk, és 5 percig 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Inkubálás után 50 μΙ megfelelő mintát vagy standardot adunk az egyes küvettákba. Hígítási puffért adunk a minta vagy a standard helyett az alap-véralvadásiidő meghatározásához. A fibrometer óráját (CoA Screener Hemostasis Analyser, Americal Labor) az 50 μΙ 37 °C hőmérsékletű, 30 mM CaCI2 egyes mintákhoz vagy standardokhoz való hozzáadása után indítjuk el. Az aktivált C protein-mintában levő koncentrációját a standardgörbe lineáris regressziós egyenletéből számítjuk ki. Az itt bemutatott véralvadási idők három ismétlés, beleértve a standardmintákét is, minimumának átlagát jelentik.
A fenti leírás a megfelelően képzett szakembert képessé teszi arra, hogy aPC-t állítson elő, és ezt felhasználja a szepszissel, transzplantációval, égésekkel, terhességgel, nagyobb sebészeti beavatkozásokkal/traumával és ARDS-sel kapcsolatos (az ezekre való korlátozás nélkül) hiperkoagulálható állapot vagy szerzett C protein-hiányos állapot kezelésére.
1. példa
Az aPC humánplazma-szintjei
Hat humán beteg iv. aPC-infúziót kap 1 mg/m2/óra koncentrációban vagy körülbelül 0,024 mg/kg/óra dózisban 24 órás időtartam alatt. A használt aPC liofilezett készítmény, mely 10 mg aPC-t, 5 mM Tris-acetát-puffert és 100 mM nátrium-hidrokloridot tartalmaz, melyet 2 ml vízzel regenerálunk, és a pH-értéket 6,5-re állítjuk.
Az aPC plazmakoncentrációját Immunocapture-Amidolytic Assay-t (immunobefogó amidolitikus vizsgálat) használva mérjük. Vért gyűjtünk citrátantikoaguláns és benzamidin - az aPC reverzibilis inhibitora -jelenlétében. Az enzimet a plazmából befogjuk egy aPC-specifikus patkány monoklonális antitesttel, a C3-mal, és egy mikrotiterlemezen immobilizáljuk. Az inhibitort mosással eltávolítjuk, és az amidolitikus aktivitást vagy az aPC-t oligopeptid kromogén szubsztrátot használva mérjük. A 16-20 óráig tartó, 37 °C hőmérsékleten való inkubálás után az abszorbanciát 405 nm hullámhosszon mérjük, és az adatokat súlyozott lineáris görbére illeszkedő algoritmussal analizáljuk. Az aPC-koncentrációkat a 0-100 ng/ml koncentrációhatárok közötti standardgörbéből becsüljük. A vizsgálat mennyiségi meghatározásának határa 1,0 ng/ml. Az aPC-dózisszinteket és a plazmakoncentrációkat körülbelül a 24. órában mérjük. A 0,024 pg/kg/óra dózis körülbelül 50 ng/ml plazmakoncentrációt eredményez a 24. órában.
2. példa
Kettős vak placebokontrollált vizsgálat 1-es fázisú szepszises humán betegekben
Ez az eljárás egy kétlépéses, kettős vak placebokontrollált, súlyos szepszises betegekkel végzett vizsgálat. Az 1 -es fázisban összesen 72 beteg kap 48 órán keresztül rekombináns humán C proteines (r-aPC) infúziót.
A kísérletben való részvételi kritérium a négy általánosan elfogadott szepszises kritériumból hármat foglal magában (szívritmus, légzési nehézség, megnövekedett/csökkent hőmérséklet, megnövekedett/csökkent fehérvérsejtszám). A betegeknek bizonyos mértékű szervelégtelenséget is mutatniuk kell, mint például vagy sokkot, csökkent vizeletkiválasztást, vagy hypoxaemiát. Négy különböző dózist használunk, ezek a következők: 12, 18, 24, 30 pg/kg/óra. Az r-aPC-t 48 órán keresztül juttatjuk be infúzióval folyamatos infúziós módszert használva. A vizsgálat elsődleges végeredménye a következő: biztonságos a dózis és a dózis tartama tekintetében; az r-aPC képes korrigálni a coagulopathiát a dózis és dózistartam függvényében.
A mortalitási adatok magukban foglalják az összes dózist, még a legalacsonyabbat is, hacsak másként nem
HU 224 901 Β1 adjuk meg. Lényeges megemlíteni, hogy a placebomortalitás egybeesik a várt placebomortalitással. Egy 28 napos teljes oksági mortalitás volt a végpont a placebót kapó betegekben az r-aPC-t kapó betegekkel szemben.
A teljes megfigyelt placebo mortalitási arány 38% volt (10/26), és a teljes megfigyelt r-aPC mortalitási arány 20% (9/46). Az r-aPC csak csúcsdózisait (24 és 30 pg/kg/óra) magában foglaló alcsoport megfigyelt mortalitási aránya a placebós betegekkel szemben 13% (3/24).
A második alcsoportvizsgálat szerzett C proteinhiányos betegeket foglal magában, akiket úgy határoztunk meg, hogy az alapvonal C protein-aktivitás 60%-nál kevesebb. A 64 olyan beteg közül, akiknél rendelkezésre állnak az alapérték C protein-aktivitási adatok, 61 beteg vagy 95% szerzett C protein-hiánnyal rendelkezik a vizsgálatba lépés idején. A megfigyelt placebo mortalitási arány a C protein-hiányos betegek esetében 41% (9/22), és a megfigyelt r-aPC mortalitási arány a C protein-hiányos betegeknél 18% (7/39).
Jelentős mennyiségű információ sugallja, hogy az r-aPC-vel végzett alacsony dózisú kezelés előnyös a súlyos szepszises betegek esetében, magában foglalja a halálig eltelt átlagos időtartamot a placebós vs kezelt betegek esetében. A placebós csoportban meghalt 10 beteg közül az átlagos elhalálozási idő hat nap. Az r-aPC-vel kezelt betegek esetén az átlagos elhalálozási idő 14 nap. Ezenkívül az r-aPC-vel kezelt kilenc meghalt beteg közül 4 életben maradt 21 napig, és ezt követően került olyan állapotba, ami nem függött össze a szepszisük első fázisával. A négy késői halál közül kettő az alacsony kezelési dózisú (12 pg/kg/óra) csoportban következett be. Mindkét beteg az ICU-ban maradt, és mechanikailag lélegeztették a vizsgálat teljes időtartama alatt a halálukig (27. nap). A két másik később meghalt beteg a nagy dózisú csoportban volt (30 pg/kg/óra). Mindkét beteg kezdeti javulást mutatott. Két héten belül mindkettő kikerült a mesterséges lélegeztetés alól, és az ICU-ból átszállították őket. Az egyik beteg egy héttel később halt meg szepszis által kiváltott légzési distresszben, miután újraélesztési (DNR) utasítás életbe lépését kérte. A másik beteg a
28. napon halt meg, miután egy második szepszises epizóddal kapcsolatos légzési elégtelenség lépett fel nála. Ez a beteg is kérte a DNR státust, és ezért nem helyeztük lélegeztetőgépre. Meg kell említeni, hogy a súlyos szepszis második epizódját kifejlesztő betegek r-aPC-vel való újrakezelését a 28 napos vizsgálat során nem próbáltuk ki a kezelési eljárásban.
A vizsgálatban a mortalitási adat meglepő és váratlan. Nem hozott más kettős vak, placebóval szabályozott szepszises vizsgálat létre olyan adatokat, melyek ilyen erőteljes csökkenést mutattak volna a 28 napos teljes oksági mortalitásban.
3. példa
Az aktivált C protein formulázása
Az aktivált C protein stabil liofilezett készítményét olyan folyamat során állítjuk elő, mely magában foglalja a körülbelül 2,5 mg/ml aktivált C proteint, körülbelül mg/ml szacharózt, körülbelül 20 mg/ml NaCI-ot és egy nátrium-citrát-puffert (pH-értéke nagyobb 5,5-nél, de 6,5-nél kisebb) tartalmazó oldat liofilezését. Ezenkívül az aktivált C protein stabil liofilezett készítménye magában foglalja körülbelül 5 mg/ml aktivált C proteint, körülbelül 30 mg/ml szacharózt, körülbelül 38 mg/ml NaCI-ot és egy 5,5-nél nagyobb, de 6,5-nél kisebb pH-értékű citrátpuffert tartalmazó oldat liofilezését.
Az aPC:só:töltőanyag (w:w:w) aránya lényeges tényező a fagyasztva szárítási folyamathoz megfelelő készítmény esetében. Az arány az aPC koncentrációjától, a kiválasztott sótól és ennek koncentrációjától, valamint a kiválasztott töltőanyagtól és ennek koncentrációjától függ. Részletesebben, előnyös, ha az arány a következő: 1 rész aktivált C protein, körülbelül
7,6 rész só és körülbelül 6 rész töltőanyag.
A folyamatos infúzióhoz megfelelő aktivált C protein egységdózisát úgy állítjuk elő, hogy az aktivált C proteint NaCI-dal, szacharózzal és nátrium-citrát-pufferrel keverjük össze. Keverés után 4 ml oldatot juttatunk egy egységdózistartályba és liofilezzük. A körülbelül 5 mg-körülbelül 20 mg aktivált C proteint tartalmazó egységdózistartályt, mely alkalmas a körülbelül 0,02 mg/kg/óra-körülbelül 0,05 mg/kg/óra dózis erre igényt tartó betegnek való adagolására, lezárjuk és a használatig tároljuk.

Claims (10)

1. Rekombináns aktivált C protein alkalmazása szerzett hiperkoagulációra képes szepszissel összefüggő állapot kezelésére vagy megelőzésére szolgáló gyógyszer előállításában, melynek során a betegnek folyamatos infúzió útján 20-50 mg/kg/óra dózis humán aktivált C proteint adunk be 24-144 órán át, ahol az aktivált C proteint C protein-zimogén expresszálásával nyerjük HEK 923 sejtekben, in vitro aktiválást követően.
2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a beteg fiatalkorú.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer 22-50 pg/kg/óra dózis humán aktivált C protein adagolására alkalmas.
4. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer 22—40 pg/kg/óra dózis humán aktivált C protein adagolására alkalmas.
5. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer 22-30 pg/kg/óra dózis humán aktivált C protein adagolására alkalmas.
6. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer 24-50 pg/kg/óra dózis humán aktivált C protein adagolására alkalmas.
7. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer 24 pg/kg/óra dózis humán aktivált C protein adagolására alkalmas.
8. A 3. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a gyógyszer 30 pg/kg/óra dózis humán aktivált C protein adagolására alkalmas.
9. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a humán aktivált C protein megfelelő dózis per óra egy10
HU 224 901 Β1 harmadát vagy felét adagoljuk boluszinjekció formájában 5 perc és 120 perc közötti időtartamban, a megfelelő dózis 23-144 órán át tartó folyamatos infúziót követően, amely a megfelelő dózis 24-144 órás adagolását eredményezi. 5
10. Rekombináns aktivált C protein alkalmazása humán betegeknél szerzett hiperkoagulációra képes szepszissel összefüggő állapot kezelésére vagy megelőzésére szolgáló gyógyszer előállításában, ahol a gyógyszert olyan mennyiségben adagoljuk, hogy az aktivált C protein plazmaszintje 50 ng/ml legyen 24 órán át, ahol az aktivált C proteint C protein-zimogén expresszálásával nyerjük HEK 923 sejtekben, in vitro aktiválást követően.
HU0100025A 1997-10-20 1998-10-14 Methods for treating hypercoagulable states or acquired protein c deficiency HU224901B1 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US6254997P 1997-10-20 1997-10-20
US6476597P 1997-11-07 1997-11-07
PCT/US1998/021723 WO1999020293A1 (en) 1997-10-20 1998-10-14 Methods for treating hypercoagulable states or acquired protein c deficiency

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0100025A2 HUP0100025A2 (hu) 2001-05-28
HUP0100025A3 HUP0100025A3 (en) 2003-08-28
HU224901B1 true HU224901B1 (en) 2006-04-28

Family

ID=26742406

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0001237A HUP0001237A3 (en) 1997-10-20 1998-03-24 Methods for treating vascular disorders
HU0100025A HU224901B1 (en) 1997-10-20 1998-10-14 Methods for treating hypercoagulable states or acquired protein c deficiency

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0001237A HUP0001237A3 (en) 1997-10-20 1998-03-24 Methods for treating vascular disorders

Country Status (28)

Country Link
US (7) US6037322A (hu)
EP (2) EP1449537A3 (hu)
JP (2) JP3805981B2 (hu)
KR (1) KR100798174B1 (hu)
CN (1) CN1276726A (hu)
AT (1) ATE292979T1 (hu)
AU (1) AU748417B2 (hu)
BR (1) BR9812965A (hu)
CA (1) CA2306983A1 (hu)
DE (1) DE69829721T2 (hu)
DK (1) DK0913156T3 (hu)
EA (1) EA002496B1 (hu)
ES (1) ES2239382T3 (hu)
HK (1) HK1020529A1 (hu)
HU (2) HUP0001237A3 (hu)
ID (1) ID24901A (hu)
IL (2) IL135712A0 (hu)
MY (1) MY117655A (hu)
NO (1) NO20002005L (hu)
NZ (1) NZ504026A (hu)
PL (1) PL200515B1 (hu)
PT (1) PT913156E (hu)
SI (1) SI0913156T1 (hu)
TR (1) TR200001059T2 (hu)
TW (1) TWI225404B (hu)
UA (1) UA72194C2 (hu)
WO (1) WO1999020293A1 (hu)
ZA (1) ZA989385B (hu)

Families Citing this family (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6630137B1 (en) 1997-04-28 2003-10-07 Eli Lilly And Company Activated protein C formulations
BR9809304B1 (pt) 1997-04-28 2011-02-08 formulação liofilizada estável, processo para preparação da mesma, bem como forma de dosagem unitária.
HUP0001237A3 (en) * 1997-10-20 2002-01-28 Lilly Co Eli Methods for treating vascular disorders
US6921751B1 (en) 1998-05-20 2005-07-26 Erasmus Universiteit Rotterdam Immunoregulator
EP1138692A1 (en) 2000-03-29 2001-10-04 Erasmus Universiteit Rotterdam Fragments of human chorionic gonadotropin (hcg) as immunoregulator
US20050227925A1 (en) * 2004-04-08 2005-10-13 Robbert Benner Compositions capable of reducing elevated blood urea concentration
US20040202645A1 (en) * 2003-04-08 2004-10-14 Khan Nisar Ahmed Administration of gene-regulatory peptides
US6844315B2 (en) * 1998-05-20 2005-01-18 Erasmus Universiteit Rotterdam Immunoregulator
US20030220258A1 (en) * 2001-12-21 2003-11-27 Robbert Benner Treatment of ischemic events
US7175679B2 (en) * 2001-03-29 2007-02-13 Biotempt B.V. Oligopeptide treatment of NF-κB mediated inflammation
US8680059B2 (en) 1998-05-20 2014-03-25 Biotempt B.V. Oligopeptide acetate and formulations thereof
US20040199099A1 (en) * 1998-07-10 2004-10-07 Matson James R Hemofiltration systems, methods and devices used to treat inflammatory mediator related disease
US6287516B1 (en) 1998-07-10 2001-09-11 Immunocept, L.L.C. Hemofiltration systems, methods, and devices used to treat inflammatory mediator related disease
IL142248A0 (en) 1998-10-22 2002-03-10 Lilly Co Eli Methods for treating sepsis
IL142255A0 (en) * 1998-11-13 2002-03-10 Lilly Co Eli Method of treating heparin-induced thrombocytopenia
AU1723200A (en) * 1998-11-23 2000-06-13 Eli Lilly And Company Method of treating sickle cell disease and thalassemia
US7074402B2 (en) 2000-02-04 2006-07-11 The Scripps Research Institute Neuroprotective, antithrombotic and anti-inflammatory uses of activated protein C (APC)
US7291122B2 (en) * 2000-03-24 2007-11-06 Immunocept, L.L.C. Hemofiltration methods for treatment of diseases in a mammal
US6736972B1 (en) 2000-03-24 2004-05-18 Immunocept, L.L.C. Method and system for providing therapeutic agents with hemofiltration for reducing inflammatory mediator related diseases
US8535258B2 (en) * 2000-03-24 2013-09-17 Immunocept, L.L.C. Hemofiltration methods for treatment of diseases in a mammal
US7204981B2 (en) * 2000-03-28 2007-04-17 Eli Lilly And Company Methods of treating diseases with activated protein C
EP1267915B1 (en) * 2000-03-28 2005-06-22 Eli Lilly And Company Activated protein c for treating pancreatitis
US20050037430A1 (en) * 2000-03-29 2005-02-17 Biotempt B.V. Methods and uses for protein breakdown products
EP1300418A1 (en) 2001-10-04 2003-04-09 Erasmus Universiteit Rotterdam Gene regulation by oligopeptides
USRE43279E1 (en) 2000-03-29 2012-03-27 Biotemp B.V. Compositions capable of reducing elevated blood urea concentration
US7358330B2 (en) 2001-03-29 2008-04-15 Biotempt B.V. Immunoregulatory compositions
US7576174B2 (en) * 2000-03-29 2009-08-18 Biotempt B.V. Compositions capable of reducing elevated blood urea concentration
US6787040B2 (en) * 2000-05-16 2004-09-07 Immunocept, L.L.C. Method and system for colloid exchange therapy
US8597516B2 (en) * 2000-05-16 2013-12-03 Immunocept, L.L.C. Methods and systems for colloid exchange therapy
WO2001089558A2 (en) * 2000-05-24 2001-11-29 Eli Lilly And Company Formulations and use of activated protein c and protein c zymogen for treating hypercoagulable states
AU2001290553A1 (en) * 2000-09-18 2002-04-02 Eli Lilly And Company Method for using activated protein c for the treatment of coagulation-associated disorders
WO2002069232A2 (en) 2001-02-19 2002-09-06 Merck Patent Gmbh Method for identification of t-cell epitopes and use for preparing molecules with reeduced immunogenicity
WO2002085117A1 (en) * 2001-04-24 2002-10-31 Eisai Co., Ltd. Methods and compositions for preventing and treating septic shock and endotoxemia
WO2002100445A1 (en) * 2001-06-13 2002-12-19 The University Of Sydney Treatment and composition for wound healing
WO2003007686A2 (en) * 2001-07-19 2003-01-30 Dmi Biosciences, Inc. Use of copper chelators to inhibit the inactivation of protein c
US20030220259A1 (en) * 2001-12-21 2003-11-27 Robbert Benner Treatment of neurological disorders
HUP0501111A2 (en) 2001-10-15 2007-12-28 Chiron Corp Treatment of severe pneumonia by administration of tissue factor pathway inhibitor
US20030224995A1 (en) * 2001-12-21 2003-12-04 Khan Nisar Ahmed Treatment of burns
US20040013661A1 (en) * 2001-12-21 2004-01-22 Gert Wensvoort Stratification
US7501391B2 (en) * 2001-12-21 2009-03-10 Biotempt B.V. Treatment of transplant survival
US20030220260A1 (en) * 2001-12-21 2003-11-27 Khan Nisar Ahmed Peptide compositions
US20080318871A1 (en) * 2001-12-21 2008-12-25 Khan Nisar A Treatment of neurological disorders
US20030220257A1 (en) * 2001-12-21 2003-11-27 Robbert Benner Treatment of trauma
US20030220261A1 (en) * 2001-12-21 2003-11-27 Khan Nisar Ahmed Treatment of iatrogenic disease
US7560433B2 (en) * 2001-12-21 2009-07-14 Biotempt B.V. Treatment of multiple sclerosis (MS)
US7786084B2 (en) 2001-12-21 2010-08-31 Biotempt B.V. Treatment of burns
AU2003213146A1 (en) * 2002-03-08 2003-09-22 Eli Lilly And Company Activated protein c formulations
TW200407335A (en) * 2002-07-22 2004-05-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Non-neutralizing antibody to inhibit the inactivation of activated protein C
EP1545690A4 (en) * 2002-08-13 2006-04-12 Arbios Systems Inc SELECTIVE PLASMA EXCHANGE THERAPY
WO2004056309A2 (en) 2002-12-05 2004-07-08 Socratech L.L.C. Neuroprotective activity of activated protein c is independent of its anticoagulant activity
EP1598368A4 (en) * 2003-01-20 2007-07-25 Chugai Pharmaceutical Co Ltd ANTI-PCI neutralizing ANTIBODY
US20070142272A1 (en) * 2003-01-24 2007-06-21 Zlokovic Berislav V Neuroprotective activity of activated protein c independent of its anticoagulant activity
US7517529B2 (en) * 2003-04-08 2009-04-14 Biotempt B.V. Treatment of type I diabetes
EP2266606B1 (en) 2003-05-15 2014-09-10 Genentech, Inc. Methods and compositions for the prevention and treatment of sepsis
EP1651252B1 (en) * 2003-07-08 2014-11-26 The Scripps Research Institute Activated protein c variants with normal cytoprotective activity but reduced anticoagulant activity
US9192657B2 (en) * 2003-07-08 2015-11-24 The Scripps Research Institute Activated protein C variants with normal cytoprotective activity but reduced anticoagulant activity
US20090227669A1 (en) * 2004-01-23 2009-09-10 The University Of Toledo Compositions and Methods for Perioperative Bladder Instillation
AU2005244249A1 (en) * 2004-03-17 2005-11-24 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Treatment of severe community-acquired pneumonia by admistration of tissue factor pathway inhibitor (TFPI)
AU2005243161A1 (en) * 2004-05-11 2005-11-24 Heptest Laboratories, Inc. Compositions, kit and one-step method for monitoring compounds having anti-factor Xa and/or anti factor iia activities
EP1773371A4 (en) * 2004-07-23 2009-12-30 Univ Rochester ACTIVATED PROTEIN C INHIBITS SIDE EFFECTS OF PLASMINOGEN ACTIVATOR IN THE BRAIN
WO2006124770A2 (en) * 2005-05-13 2006-11-23 The Feinstein Institute For Medical Research Treatment of sepsis and inflammation with alpha2a adrenergic antagonists
US8088728B2 (en) * 2005-06-24 2012-01-03 Drugrecure Aps Airway administration of tissue factor pathway inhibitor in inflammatory conditions affecting the respiratory tract
JP4846799B2 (ja) 2005-07-05 2011-12-28 バイオテンプト ベー.フェー. 腫瘍の治療
EP1864692A1 (en) 2006-06-07 2007-12-12 Biotempt B.V. Use of peptides for the control of radiation injury
US7785857B2 (en) * 2006-08-31 2010-08-31 Saint Louis University Protein C variant
GR1005700B (el) * 2006-09-01 2007-10-22 (40%) ����� �������� Τροπος αντιμετωπισης της 1ης φασης του εγκαυματοσσε μη σηπτικους ασθενεις με συνεχη ενδοφλεβια χορηγηση ενεργοποιημενης πρωτεινης-c για 48 ωρες με στοχο τη μειωση της τελικης εγκαυματικης βλαβης καιαυξηση της ταχυτητας επουλωσης κατα τα πρωτα επτα μετεγκαυματικα 24ωρα
WO2008073603A2 (en) * 2006-10-31 2008-06-19 The Scripps Research Institute Dosing regimen of activated protein c and variants having reduced anticoagulant activity
RU2445365C1 (ru) * 2010-11-03 2012-03-20 Общество с ограниченной ответственностью "Инновационный Центр "Новые Технологии и Материалы" (ООО "ИЦ Новтехмат") Штамм гибридных культивируемых клеток mus musculus - продуцент моноклональных антител, специфичных к протеину с человека (варианты)
RU2490722C1 (ru) * 2012-04-24 2013-08-20 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) Способ восстановления кровотока в регионе тромбированной вены в эксперименте
US20150150954A1 (en) 2012-07-04 2015-06-04 The University Of Sydney Treatment of inflammatory skin disorders
AU2014391082B2 (en) 2014-04-16 2020-04-09 Zz Biotech Llc Treatment of abnormal cutaneous scarring
WO2019238787A1 (en) 2018-06-15 2019-12-19 Ab Sandvik Materials Technology A duplex stainless steel strip and method for producing thereof

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4775624A (en) * 1985-02-08 1988-10-04 Eli Lilly And Company Vectors and compounds for expression of human protein C
US5516650A (en) * 1985-06-27 1996-05-14 Zymogenetics, Inc. Production of activated protein C
US5084274A (en) * 1987-11-17 1992-01-28 Scripps Clinic And Research Foundation Inhibition of arterial thrombotic occlusion or thromboembolism
US4992373A (en) * 1987-12-04 1991-02-12 Eli Lilly And Company Vectors and compounds for direct expression of activated human protein C
US5009889A (en) * 1987-12-31 1991-04-23 Oklahoma Medical Research Foundation Treatment of dysfunctional vascular endothelium using activated protein C
GB8819607D0 (en) * 1988-08-17 1988-09-21 Wellcome Found Novel combination
US4981952A (en) * 1988-10-04 1991-01-01 Eli Lilly And Company Method for the purification of vitamin K-dependent proteins
US5254532A (en) * 1989-06-26 1993-10-19 Immuno Aktiengesellschaft Fur Chemisch-Medizinische Produkte Preparation for treating and preventing thromboses and thromboembolic complications, use of such a preparation and a method of producing the same
IL97312A (en) * 1990-02-23 1999-01-26 Lilly Co Eli A method of generating a polypeptide in an eukaryotic vector AND recombinant surrogate cell containing an enhanced transcriptional control unit based on the primary late adenovirus coefficient
AT402262B (de) * 1991-06-20 1997-03-25 Immuno Ag Arzneimittel enthaltend aktiviertes protein c
MY110664A (en) * 1992-05-21 1999-01-30 Lilly Co Eli Protein c derivatives
JP3434326B2 (ja) * 1992-08-25 2003-08-04 財団法人化学及血清療法研究所 成人呼吸窮迫症候群(ards)予防、治療剤
JP2825739B2 (ja) * 1993-09-20 1998-11-18 帝人株式会社 急性肝不全治療剤
JP3802104B2 (ja) * 1995-05-31 2006-07-26 財団法人化学及血清療法研究所 脊髄損傷に伴う神経障害の予防・治療剤
WO1997020043A1 (en) * 1995-11-30 1997-06-05 Zymogenetics, Inc. Protein c production in transgenic animals
BR9809304B1 (pt) * 1997-04-28 2011-02-08 formulação liofilizada estável, processo para preparação da mesma, bem como forma de dosagem unitária.
HUP0001237A3 (en) * 1997-10-20 2002-01-28 Lilly Co Eli Methods for treating vascular disorders

Also Published As

Publication number Publication date
JP2005097313A (ja) 2005-04-14
US6426071B2 (en) 2002-07-30
JP2001520199A (ja) 2001-10-30
SI0913156T1 (en) 2005-10-31
PL340096A1 (en) 2001-01-15
US6008199A (en) 1999-12-28
WO1999020293A1 (en) 1999-04-29
EP0913156A1 (en) 1999-05-06
ES2239382T3 (es) 2005-09-16
TR200001059T2 (tr) 2000-10-23
UA72194C2 (en) 2005-02-15
US6037322A (en) 2000-03-14
IL135712A0 (en) 2001-05-20
HUP0001237A2 (hu) 2000-08-28
DE69829721T2 (de) 2006-02-09
BR9812965A (pt) 2001-03-20
KR20010031217A (ko) 2001-04-16
ZA989385B (en) 2000-04-14
EP1449537A3 (en) 2005-09-21
MY117655A (en) 2004-07-31
NZ504026A (en) 2002-12-20
US6156734A (en) 2000-12-05
ID24901A (id) 2000-08-31
DK0913156T3 (da) 2005-06-27
EA002496B1 (ru) 2002-06-27
AU9804098A (en) 1999-05-10
EA200000445A1 (ru) 2000-10-30
TWI225404B (en) 2004-12-21
US20010036456A1 (en) 2001-11-01
HUP0100025A3 (en) 2003-08-28
NO20002005L (no) 2000-05-16
DE69829721D1 (de) 2005-05-19
IL135712A (en) 2010-12-30
NO20002005D0 (no) 2000-04-17
HUP0001237A3 (en) 2002-01-28
EP0913156B1 (en) 2005-04-13
US6489296B1 (en) 2002-12-03
PT913156E (pt) 2005-08-31
PL200515B1 (pl) 2009-01-30
ATE292979T1 (de) 2005-04-15
KR100798174B1 (ko) 2008-01-24
US6268344B1 (en) 2001-07-31
JP3805981B2 (ja) 2006-08-09
HUP0100025A2 (hu) 2001-05-28
CN1276726A (zh) 2000-12-13
EP1449537A2 (en) 2004-08-25
AU748417B2 (en) 2002-06-06
HK1020529A1 (en) 2000-05-12
CA2306983A1 (en) 1999-04-29
US6268337B1 (en) 2001-07-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3805981B2 (ja) 凝固亢進状態または後天性プロテインc欠乏症を処置する方法
AU768075B2 (en) Methods for treating sepsis
US7087578B2 (en) Formulations and methods for treating hypercoagulable states
US6372213B2 (en) Method of treating sickle cell disease or thalassemia
EP0872245B1 (en) Methods for treating vascular disorders with activated Protein C
EP1137432B1 (en) Use of protein c for the treatment of thrombocytopenic purpura and hemolytic uremic syndrome
MXPA00003805A (en) Methods for treating hypercoagulable states or acquired protein c deficiency
CZ20001392A3 (cs) kané nedostatečnosti proteinu C
WO2002024215A2 (en) Method for using activated protein c for the treatment of coagulation-associated disorders

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees