522016 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明 ( 1 ) 1 1 I 發 明 之 領 域 1 1 I 本 發 明 為 有 關 含 有 人 生 長 激 素 之 針 劑 尤 其 溶 液 形 之 1 1 醫 藥 製 劑 〇 ，^、 請 1 先 1 發 明 之 背 景 閱 讀 1 背 1 人 生 長 激 素 (簡稱h G Η ) 為 ηα 早 鏈 多 肱 激 素 9 其 天 然 型 包 面· 之 1 含 19 1 胺 基 酸 殘 基 〇 hGH 常 以 生 物 學 活 性 tiVf 早 體 形 態 發 生 注 意 1 I Φ - 9 但 在 其 翳 藥 製 劑 振 盪 等 機 械 或 溫 度 窘 迫 下 聚 集 成 二 聚 再 1 I 合 物 乃 至 多 聚 合 物 而 喪 失 生 物 學 活 性 (B e c k e r , G .V • 本 1 裝 e t a 1 . (1 98 7) B i 0 t e c h η 〇 1 • App 1 • Bi 0 C h e m . 5 9 , P4 7 8 ) 〇 頁 1 | 他 方 面 已 知 長 期 貯 存 hGH 水 溶 液 引 起 漸 漸 産 生 脫 氨 1 1 品 而 較 少 形 成 hGH 之 聚 合 産 物 〇 脫 氨 之 hGH 其 生 物 學 活 1 1 性 雖 不 變 (B e c k e r , G .V e t a 1 - ( 1988)B i ο t e c h η 〇 1 . i r 訂 App 1 • Bi 0 C he m . 9 (〇 3 Ρ3 26 )但予人降低品質之印象而 [« I 使 醫 藥 産 品 不 佳 ， 故 常 附 說 明 其 内 容 Air 雛 虞 Ο 1 1 又 知 hGH 由 聚 集 之 變 質 主 要 在 物 理 窘 迫 下 發 生 5 而 由 1 I 脫 氨 之、 m 質 主 要 在 化 學 窘 迫 下 發 生 〇 1 1 線 1 由 於 這 些 問 題 hGH 之 最 適 水 性 製 劑 從 未 開 發 故 一 • 般 為 注 射 刖 溶 解 之 凍 乾 製 劑 〇 I 侏 儒 需 長 年 hGH 治 療 故 容 許 白 行 注 射 9 從 開 始 投 與 1 1 I 一 般 在 家 施 行 〇 用 hGH 之 凍 乾 製 劑 時 溶 在 添 附 之 溶 劑 1 1 後 由 病 人 本 身 (常為小孩） 或 其 家 人 來 皮 下 或 肌 肉 内 注 I 射 〇 故 病 人 或 其 家 人 進 行 凍 乾 製 劑 之 溶 解 〇 此 須 由 醫 師 1 給 予 適 當 之 指 導 如 何 溶 解 ί 以 免 形 成 聚 集 産 物 導 致 hGH 1 1 生 物 學 活 性 之 下 降 〇 其 産 品 -3 也 1 - 包 括 hGH 應 以 緩 和 之 圓 形 1 1 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公差）、 522016 Α7 Β7 五、發明説明（2 ) 蓮動來溶解之注意及解說。 聚集也在凍乾製劑之生產步驟形成，故有種種嘗試抑 制聚集之形成。但仍殷望開發更容易操作，比用前溶解 之習用劑型更安定之製劑。近年採用附針筒之套組型製 劑。但構造複雜，故凍乾h G Η之溶解係在針筒施行，須 特別小小及充分說明給病人或其家人如何使用。又無法 預知之錯誤操作之危險也難Κ清除。 因hGH常在家由病人或其家人注射，故消除溶解程序 之水性hGH製劑會增進方便性。如此適當之水性製劑因 無需用前需溶解之習知二管型，如包括凍乾hGH及分裝 溶劑之筆型製品等習用構造複雜裝置，故可減輕病人及 其家人之負擔。 對h G Η水性製劑之主要專利申請案如下。 在未審查專利公報5 0 8 1 5 6 / 1 9 9 4 , C A Β 1 ( Κ下稱C A Β I公 報）記載h G Η或其活性同類物之可注射組成物，Μ 2〜5 0 Μ檸*酸為緩衝劑調為ρ Η 5〜7，5 ,又記載磷酸鹽比檸檬 酸鹽可得更佳之安定性而ρ Η約6 . 0〜7 · 0較佳。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 上述C A Β I公報揭示至少安定1 2個月之製劑，但其所謂 之「安定」乃其中單體量維持不低於起初之85¾ 。惟單 體最一般須不低於90¾ ，故CABI之製麵難謂充分安定。 經本發明者們研究改良品質及安定性，與上逑CAB I不 同地發規，在製造溶液型h G Η製劑時P Η為重要因子，能 維持適官之Ρ Η 5〜7，尤宜ρ Η 5 . 5〜6 · 5之緩衝劑之使用， 及這種緩衝劑Κ如擰檬酸鹽有效（未審查專利公報92 1 25 一4一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（3 ) /1996) 〇 G e n e n t e c h公司在未審查專利公報5 0 9 7 1 9 / 1 9 9 5 ( K下 稱G e n e n t e c h公報）記載含有h G Η ,甘露醇，緩衝劑及非 離子界面活性劑之hGH液形製劑，其中Μ檸檬酸鹽緩衝 劑為適例。 在未審查專利公報507497/1993, Nova Nordisk記載 有二價陽離子如鋅之存在下加丙麵或乙醇使h G Η先结晶 後，凍乾而放入含有如磷酸鹽，乙酸鋅，甘油及苄醇之 P H fi , 1〜6 . 2懸浮液中來製成之製劑。經於2 2〜2 4 °C 6個 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 樣结物聚性。 ，改 。中合 我 B 式 Η 產多定要須之 得報適 在CA 之hG氨及安重所構 獲公但 。及 解由脫2¾之很晶結 劑該， 劑報 分驗中1.液晶结高 製在澱 製公 及試劑物溶結 Η 更 在。沈 性利 量製合之大hG或 俾性質 水專 脫含，聚成得為次 ，解白 Η 之 供之後二構獲雖二 製溶蛋hG們 LC物月，劑對劑之 精低造 之者 HP合個8%製子溶晶 之之製 良明 換聚 61.乾離性結 質劑 K 改發 交多至物凍鋅溶 Η 白溶用 究本 子及甚產用逑水hG蛋機於 研由 離物果氨習記等中。於有低 更述 K 合結脫從也醇液點用對度。們上 ，聚。二於報乙浮之常質濃劑者依 驗二液 ，低公或懸清為白之製明 ， 試供浮0¾均該酮在未醇蛋劑藥發法 性 C 懸 5 ，。丙及下乙用溶醫本方 定GP之為3¾果，如提留及利機之，之 安以成量0结、，無故嗣法有人此究 之及製含物驗外從 ，丙方種與鑑研 月，晶之合試此但變 此這投 們 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）- 522016 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明 (4 ) 公 報 用 檸 檬 酸 鹽 緩 衝 液 製 造 液 態 之 種 種 hGH 水 性 製 劑 > 而 在 種 種 期 間 試 驗 其 安 定 性 〇 v、、\ 後 注 意 任 何 製 劑 圼 現 稍 可 見 細 y 此 與 聚 集 體 可 分 別 〇 此 细 粉 可 用 〇. 22 U Π1滤 器 去 除 ， 但 長 期 貯 存 後 或 在 如 振 盪 之 窘 迫 下 可 能 再 出 琨 〇 形 成 這 種 细 粒 可 成 為 m 藥 產 物 之 品 質 問 題 9 在 開 發 新 水 性 製 劑 時 須 抑 劑 這 種 粒 之 形 成 〇 檸 檬 酸 鹽 廣 泛 用 於 針 劑 t 在 稍 或 弱 酸 性 條 件 下 當 作 緩 衝 劑 故 此 溶 液 作 皮 下 或 肌 肉 内 注 射 時 9 如 hGH 之 情 形 (未審杳專利公報5 10031/94) 會 引 起 疼 痛 〇 本 發 明 者 們 也 依 本 身 之 上 逑 未 審 查 專 利 公 報 及 C A B I 公 報 製 造 之 製 劑 來 試 拓厶 m 5 结 果 發 琨 含 檸 檬 酸 鹽 之 hGH 針 劑 輸 液 時 引 起 實 質 疼 痛 0 不 像 製 劑 之 安 定 性 問 韙 9 輸 液 時 之 疼 痛 9 從 製 劑 之 品 質 而 並 非 重 要 問 圈 〇 但 考 量 hGH 製 劑 為 長 期 頻 頻 注 射 目 病 人 為 小 孩 > 及 為 消 除 疼 痛 用 時 確 保 病 人 之 順 從 性 $ 當 希’ 望 注 射 液 m 本 身 無 痛 〇 至 今 仍 無 輸 液 時 無 痛 之 實 際 用 於 治 療 之 製 劑 〇 故 在 輸 液 時 疼 痛 而 .X-* 9 上 逑 C A Β I 公 報 及 Ge n e n t e c h 公 報 (後者記載檸檬酸鹽緩衝劑較佳） > 及 由 本 發 明 者 們 前 逑 公 報 之 製 劑 尚 有 改 良 之 餘 地 〇 疼 痛 之 消 除 或 降 低 對 病 人 有 利 〇 本 發 明 之 第 一 0 的 為 解 決 hGH 水 性 製 劑 之 月ϋ 逑 安 定 性 問 m 即 提 供 安 定 之 hGH 水 性 製 劑 其 脫 氨 9 聚 合 及 聚 集 充 分 被 抑 制 ， 前 逑 细 粒 之 形 成 也 被 抑 制 〇 本 發 明 之 另 一 巨 的 為 提 供 hGH 水 性 製 劑 f 其 在 皮 下 或 -6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 請 先 閱 讀 背 之 注 意 事 項 再 !· 頁 522016 A7 B7 五、發明説明（5 ) 肌肉注射當中由於組成物 在凍乾前不強力保持貯 們發現將h G Η溶在K馬來 6之水溶液，比Μ擰檬酸 (未審杳專利9 2 1 2 5 / 1 9 9 6 ) 聚合物，也不產生脫氨產 之最佳反映變化為用無大 定蜇_含量，用逆栢柱高 量，觀察pH測定之一般狀 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 熱窘迫下 從丙酮酸 馬來酸鹽 等緩衝劑 用這些 之安定。 察可偵'測 制細粒形 化苄乙氧 得知脫氨 製劑可用 P Η而含氯 就此稍 作此Ρ Η範 類似之多 及冷處貯 鹽，乙酸 等緩衝劑 有適當緩 適當緩衝 但若製劑 散光性稍 成之方法 銨能有效 ,聚合， 水性製劑 化苄乙氧 〜弱酸性 圍之緩衝 元羧酸鹽 存6個 鹽，磷 選出馬 衝能力 劑再確 在稍〜 可見细 檢查一 抑制细 聚集及 之某處 銨之溶 水性製 劑之檸 ,如馬 之疼痛被 存之種種 酸鹽或丁 鹽緩衝液 安定，且 物。所施 小高速液 速液體層 態。水性 月後，進 酸鹽，檸 來酸鹽， 〇 認在稍或 弱酸性條 粒而可與 些化合物 粒之形成 抑制細粒 方依h G Η 液來調製 劑更進一 檬酸鹽皮 來酸鹽或 一7 — 消除或降低。 h G Η製劑，本發明者 二酸鹽緩衝劑維持Ρ Η 維持同時Ρ Η之溶液 不產生二聚合物或多 行之試驗及h G Η品質 體層析（S Ε - Η P L C )測 析測定脫氧產物之含 製劑在生產當中，在 行密集研究之結果， 檬酸鹽，丁二酸鹽及 丁二酸鹽及檸檬酸鹽 弱酸性pH可達成hGH 件下作成時，接近觀 聚集體區別。故就抑 。结果發現低濃度氯 。據此發現更加研究 形成之安定hGH水性 溶在調為稍〜弱酸性 。終於完成本發明。 步研究而意外發現當 下注射時引發痛，但 丁二酸鹽卻幾乎無痛 請 先 閲 讀 背 之 注 意 事 項 再 頁 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 522016 A 7 , B7 五、發明説明（6 ) 。據此發現成功地調製適宜之含h G Η水性翳藥組成物， 安定性佳而幾乎無毒。 發明之要旨 故本發明提供溶在含氯化苄乙氧銨之稍〜弱酸性緩衝 液之h G Η注射用水性翳藥組成物。 此稍〜弱酸性Ρ Η宜等於或大於5而低於7 ,尤宜5 . 5 〜6 . 5，更宜5 . 7 5〜6 , 2 5，最好約ρ Η 6。 從安定性而言，含在本發明組成物中之氯化苄乙氧銨 含最只要在製造時及長期貯存中抑制細粒形成則可廣泛 決定。但皮下或肌肉注射用醫藥製劑容許〇.〇〇 2〜0.03, 宜 0,005〜0*02mg/ffll 。 至於緩衝劑宜調Ρ Η低於7宜不大於6 . 5 ,能維持ρ Η在 上逑低限之緩衝能力則不致於hGH沈澱。宜用有Η5〜7 ，心尤宜5 5〜6 . 5之緩衝作用之緩衝劑。其適例包括馬來 酸鹽，丁二酸_及擰檬酸鹽。 只要i能維持此鍰衝能力之緩衝劑之濃度則無特定，一 般宜1〜ΙΟΟπϊΜ,尤宜1〜50®M,更宜2〜20mM,在本文中 「濃度」等為關於緩衝劑時，乃指構成緩衝劑之自由有 機酸及由其初或進一步溶解形成之所有共軛鹼而成之化 學品之總濃度。 在這些緩衝劑中，尤宜馬來酸鹽及丁二酸鹽，蓋皮下 或肌肉内注射本發明組成物時幾乎無痛。尤其馬來酸鹽 當作皮下及肌肉内注射用緩衝劑有豐富之經驗。 故本發明更提供含有人生長激素之注射用水性醫藥組 一 8 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再本頁) 1,1衣. 太
、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 522016 A7 , B7 五、發明説明（7 ) 成物，其中人生長激素乃溶在含有氯化苄乙氧銨之稍〜 弱酸性緩衝溶液，而宜Μ馬來酸鹽或丁二酸鹽，尤宜以 馬來酸鹽為緩衝劑，使該組成物輸液時甚少疼痛。這種 紺成物不但保持h G Η之較高安定性，且各投與時病人大 大減少疼痛，故有更多優點。 詳细說明 在本發明，「人生長激素」或其簡寫「h G Η」包括1 9 1 胺基酸之天然型h G Η ,其來源不限定，可經如基因重組 技術或從腦下垂體萃取等任何途徑來獲得，更包括生理 活性型具有Ν -末端甲硫胺酸及1 9 2胺基酸者，係得自基 因葷組及其他變法，其中若干胺基酸被刪除，取代或添 加，但具有與天然型人生長激素幾乎相當之活性。 本發明組成物中人生長激素之含量無特定，故其上限 可為能溶在所用緩衝液之最大畺，而下限可為此製劑中 仟何通常量。hGH之量宜達這些製劑常用量約lOmg/inl。 製造發明組成物時，氯化苄乙氧銨可用液體或固體 者，只要作為翳藥製品之添加容容級者均可用。 注射劑之滲透壓在皮下及肌肉内注射尤其重要，故須 注意。若低或高滲透壓，則注射時會引發痛。一般推薦 之注射液之相對滲透壓為與生理食鹽水相當之0 . 9〜1 . 6 ，尤官1 · 0〜1 · 4。 D -甘露糖醇及中性鹽可單獨或併用，俾本發明組成物 調牵此相對滲透性。D -甘露糖醇可調相對滲透壓為〇 . 9〜 1.6，官10〜1.4,但其在本發明組成物之量為30〜100 一 9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 請 先 閲 讀 背 面 之 注 意 秦 項 頁 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 522016 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（8 ) m g / «1 1 c 〜1 * 6 , in g / m 1 c 因用 重/週， 存當中 防腐 。一般 用笨甲 用於前 物，蓋 之形成 防腐 甲酸納 又可加中性鹽，如氯化納，使相對滲透壓為0 . 9 官I 0〜1 , 4 ,但其在本發明組成物之量為5〜2 0 於翳藥製品之hGH劑量目前調為0.5[IU] /公斤體 故其凍乾製劑有時分多次注射。因此，為免貯 被细爾等污染而常加防腐劑。 劑之容許量為不影響hGH之品質而圼琨防腐效果 ，笨甲酸納為本發明首推適當之防腐劑，但也可 酸，酚等。苄醇，間甲酚及對羥苯甲酸甲酯一般 須溶解之凍乾h G Η製劑，而不推薦於本發明組成 與苯甲酸鈉，苯甲酸或鼢相較，會加速脫氨產物 0 劑之用量宜參照注射劑中常用量來調整。對於苯 ，本發明組成物中可用如0.1〜5，宜0.5〜3mg/ 本發Ί月之組成物可含非離子界面活性劑，如聚山梨酸 酯20或80，若在本發明組成物中添加量為0.5〜5rng/ffll, 尤官1〜2 m g / ffl 1 ,則可加強安定性。 本發明組成物之製造可依如下習用水性注射劑之製法 。本發明之組成物宜保持冷藏，尤其2〜8 °C。 本發明之組成物因係為水溶液，故比用前須溶解之習 用製劑更方便，其裝入供給容器可依製造單液型注射劑 之常法進行。為減少貯存當中振盪之影響K確保安定性 ,宜裝填後不留氣泡。 一 10 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 請 先 閲 讀 背 之 注 意 事 項 再 重· 頁 522016 A7 B7 五、發明説明（9 ) 〈安定性試驗〉 二聚合物，多聚合物及脫氨產物之形成為習知發生於 hGH之變化。前兩者可由無大小高速液體層析（SE-HPLC) ，而後者由逆相高速層析HPLC(RP-HPLC)。此外，用與 已知半物學活性之參考標準作其含量之生化測定為對 h G Η生物分析之適當變化測定，蓋h G Η之S E - Η P L C測出 之麗體之峰面積與其生物活性之間有相關（Y u k i等，醫 藥品研究，25:383(1994))。故用此二種HPLC評價hGH 不但能評價單體及脫氨產物，也能測定hGH之生物活性。 本發明者們由這些測定方法檢查本發明h G Η水性製劑 之安定性。結果雖檢出脫氨產物之漸次形成，但Μ 3 0〜 40°(^貯存後之結果為計算基礎，則在41〇,?1]5.5〜6.5 之貯存條件下一年後脫氨產物之量限於1 2¾内，此外， 也顯示在4 10貯存1年後，單體含量維持9 8 %以上。這 些結果表示本發明之h G Η水性醫藥組成物可在冷處貯存 之條件Ύ無需習用製品所需之凍乾也能Κ製品供應。詳 細安定性研究如下。 (測定方法） 依Y u k丨等之翳藥品研究，2 5 : 3 8 3 Π 9 9 4 )之方法施行 SE-HPLCRRP-HPLCo 1 . S E - Η P L C用下列柱及條件； ⑴柱：T S Κ 凝膠 G 3 0 0 0 S W ( 7 · 8 m in X 3 0 c m ) ⑵溶離液：0 , 2 Μ磷酸鈉緩衝劑（p Η 6 · 5 )，0 · 2 Μ氯化納 ⑶流速：0 . 6 hi 1 /分，柱溫··室溫，偵測波長♦♦ 2 8 0 n in -11- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 OX 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再^^本頁) |裝· •^1太 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 522016 A7 B7 五、發明説明（10 ) 2 . R P - Η P L C用下列柱及條件： ⑴柱：Vydac 214ΤΡ 5 4(4.6minX25cin) ⑵溶離液：5 0mM THs-HCl緩衝劑（ρΗ7·5):正丙醇= 71:29 (3)流速：0 . 5 in 1 /分，柱溫：4 5 °C ,偵測波長2 8 0 n m 〈試驗例1 > [緩衝液1 ] 20fnM檸檬酸_緩衝液，每ml含0.02i«g氯化苄乙氧銨及 lOOmg D-甘露糖醇（ρΗ6·0)ϋ [鍰衝液2 ] 20πιΜ檸檬酸鹽緩衝液，每ml含lOOmgD -甘露糖醇（pH 6.0) 〇 [緩衝液3 ] 2 0 m Μ馬來酸鹽緩衝液，每！π 1含0 . 0 2 m g氯化苄乙氧銨及 lOOmg D -甘露糖醇（PH6.0)。 [緩衝i 4 ]
20mM馬來酸鹽緩衝液，每rnl含lOOmgD -甘露糖醇（pH 6 . 0) 〇 [緩衝液5 ] 2 0 m Μ 丁二酸鹽媛衝液，每in 1含0 . 0 2 in g氯化苄乙氧銨及 lOOmg D-甘露糖醇（ρΗ6·0)。 [緩衝液6 ]
20ιπΜ 丁二酸鹽緩衝液，每ml含lOOmgD-甘露糖醇（pH 6.0) 〇 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁)
、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 522016 A7 B7 於上 溶液而 各通過 氣泡而 上述 2 0 m m , 水性 射器而 加氯化 器而密 之形成 振盪前 結果顯 成之有 五、發明説明（11 列6種緩衝液各加等容量6 . 8 m g / m 1天然型h G Η水 緩和地混合，各得水性組成物1 - 6 (最後ρ Η 6 )。次 孔徑0 . 2 2 u in m之濾器而抽入注射器各1 m 1 ,去除 密封得樣品。 水性製劑各取出部分，在2〜81水平振盪（振幅 220循環/分）24小時，結果如表1 。 製劑2 , 4及6均不含氯化苄乙氧銨，分配至注 密封當中形成微量细粒且隨振盪而增量。反觀添 苄乙氧銨之水性製劑1 , 3及5 ，在分配至注射 封當中不見細粒形成且甚至激烈振盪也抑制细粒 。單體由SE-HPLC或脫氨產物由RP-HPLC來定量， 後不見差異，添加氯化苄乙氧銨也不引起差異。 示氯化苄乙氧銨為在含h G Η水性製劑抑制细粒形 效安定性。 請 先 閱 讀 背 之 注 意 事 項 頁 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 一 13 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（12 ) 表1 安定性與在緩衝液中有氯化苄乙氧銨存在之關係 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 水 分散及封閉時 24小時振盪後 η 製 單背醫 脫氨 一般外覲 單體 脫氨 一般外觀 劑 含量 品量 含量 品量 ⑴ ⑴ 1 99.1 2.9 無色，清澄 99,1 3.0 無色，清澄 無細粒 無细粒 2 99.2 2.9 無色，清澄 99,2 3.1 無色，清澄 稍有细粒 细粒增加 3 99,2 2,8 無色，清澄 99.2 2.9 無色，清澄 無细粒 無细粒 4 99.2 2.8 無色，清澄 99.2 2.9 無色，清澄 稍有细粒 细粒增加 5 99.1 2.5 無色，清澄 99.1 2.7 無色，清澄 無細粒 無细粒 6 99.2 2.4 無色，清澄 99.1 3.0 無色，清澄 稍有细粒 细粒増加 —14— (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 、11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（U ) 〈試驗例2 > 於2 0 m Μ檸檬酸鹽緩衝劑（p Η 6 . 0 )及馬來酸鹽緩衝劑（p Η 6.0)均含氯化苄乙氧銨0.002〜O.lmg/ml及D -甘露糖醇 1 0 0 hi g / m 1，各加等容量6 , 8 in g / m 1天然型h G Η水溶液而緩 和地混合（最後Ρ Η 6 . 0 ),次各通過孔徑0 . 2 2 /i in之濾器而 抽入注射器各1 1 ,去除氣泡而密封。各依一般外觀評 價而測定有效抑制細粒形成所需之氯化苄乙氧銨之量。 结果如表2 。當每ml製劑中氯化苄乙氧銨之量為0.002 〜0 . 0 3 ra g時有效抑制。 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（w) 表2 氯化苄乙氧銨濃度與抑制细粒形成之關係 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 氯化苄乙氧銨 (m g / m 1 ) 檸檬酸鹽緩衝液 馬來酸鹽緩衝液 一般外觀 一般外觀 0.05 稍濁 無色，清澄 無细粒 0.03 無色，清澄 無细粒 無色，清澄 無细粒 0.02 無色，清澄 無细粒 無色，清澄 無細粒 0.01 無色，清澄 無细粒 無色，清澄 無細粒 0.005 無色，清澄 無细粒 無色，清澄 無细粒 0.002 無色，清澄 無细粒 無色，清澄 無細粒 0,001 無色，清澄 有细粒 無色，清澄 有細粒 0 無色，清澄 有细粒 無色，清澄 有细粒 —16— I----------裝-- (請先閱讀背面之注意事項再頁)
、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（IS ) 〈試驗例3 > (請先閲讀背面之注意事項再本頁) 將試驗例1之各水性製劑1 , 3及5在保溫箱作40 υ 及50 °C貯存0 , 3 , 7 , 10, 14及21日後，去除密封而 在RP-HPLC及SE-HPLC分析。結果如表3 。依安定性評估 式計算RP-HPLC之结果，顯示雖發生脫氨產物之漸次形 成，但若脫氨產物之上限設在1 2 %時，這些製劑至少一 年安定。另從S E - Η P L C之结果，即使在2〜8 °C貯存1年 後，蜇含量可維持等於或大於9 8 %。從貯存期採樣之 比較，也從這些HPLC測定之結果，這些型緩衝液無差別。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 - 17 - 本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) A4規格（210X297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（l6 ) 表3 在4010及5〇υ貯存後，水性製劑1，3及5之安定性 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 水 性 製 劑 貯存在 40t! 單體量U) (SE-HPLC) 單體量U) (RP-HPLC) 初日 7曰 14曰 21曰 初曰 7曰 U曰 21日 1 99.1 99.1 99.1 99.0 2.9 13.4 22.7 28.9 3 99.2 99,3 99.2 99.0 2.8 13*5 22.6 28.9 5 99*1 99.0 98.8 98.8 2.5 13.3 23.0 28.7 水 性 製 劑 貯存在 5〇υ 單_量⑴ (SE-HPLC) 單體量（¾) (RP-HPLC) 初日 7曰 14曰 21曰 初曰 7日 14曰 21曰 1 99.1 98,8 98.5 98.3 2.9 29,7 36.3 38.9 3 99.2 99*0 98.9 98.6 2.8 29.9 36.5 39.1 5 99.1 98.8 98.3 97.5 2.5 30.0 36.5 39,0 -18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再^^本頁) —裝· 本 訂 522016 A7 B7 五、發明説明（U ) 〈試驗例4 > (請先閱讀背面之注意事項再本頁) [緩衝液7 ] 20mM檸檬酸鹽緩衝液，每ml含0.02nig氯化苄乙氧銨及 lOOoig D -甘露糖醇 ίρΗ6,0)。 [緩衝液8 ] 20mM馬來酸鹽緩衝液，每ml含0.02ing氯化苄乙氧銨及 100mg D -甘露糖醇（ρΗ6·0)。 [緩衝液9 ] 20mM 丁二酸緩衝液，每ml含0,02mg氯化苄乙氧銨及 1 0 0 m g D _ 甘露糖醇（p Η 6 . 0 )。 於上列3種緩衝液各加等容畺6 + 8 m g / πι 1天然型h G Η水 溶液而緩和地混合，各得水性組成物7〜9 (最後ρ Η 6 )。次 各通過孔徑0.22a am之濾器而抽入注射器各linl,去除 氣泡而密封得樣品。各水溶液在2〜8 °C貯存6個月而貯 存0 ,, 3及6個月後之單體含量，脫氨產物之量及 一般外觀變化加Μ檢查。結果如表4 。任何這些水性製 劑均無細粒形成。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 - 19 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（18 ) 表4 水性製劑7〜9在2〜8它貯存6個月之结果 水 性 製 劑 單體量（％) (SE-HPLO 單體量（¾) (SE-HPLC) 初日 1個月 3個月 6個月 初曰 初曰 3個月 6個月 7 99.0 99,0 99.0 99,1 2.4 2.4 3.7 4.2 8 99,2 99.3 99.1 99.0 2.3 2*3 3.6 4,0 9 99.1 99.0 98.9 98.8 2.4 2.5 3.7 4*3 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 、1Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 〈試驗5 >輸液時疼痛試驗 為評價由於組成物皮下注射之疼痛，於檸檬酸鹽，馬 來酸鹽或丁二酸鹽緩衝液（最後PH6.0)各加適量D-甘露 糖醇足Μ得與生理食鹽水相當之相對滲透壓1 . 1來製造 注射器。但為試驗而不加h G Η ,俾檢查由於緩衝型之疼 痛。適當說明試驗目的後，對1 0名健康男性志願者試驗 注射下列三製劑時之疼痛強度。這些製劑乃予以育試。 疼痛強度Κ( + + )極痛，（+ )痛，（±)可能痛，（-)無痛 -2 0 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐）_ 522016 A7 B7 五、發明説明（19 ) 來表示。 處方檸檬酸鹽緩衝液+ D-甘露糖醇（ρΗ6·0) 處方2:10mM馬來酸鹽緩衝液+ D-甘露糖醇（ΡΗ6.0) 處方3 : 1 0 in Μ 丁二酸鹽緩衝液+ D -甘露糖醇（p Η 6 · 0 ) 表5 輸液時疼痛與緩衝液型之關係（每組1 〇名） 處 方 (㈠） (+ ) (士） (-） 處方1 10 0 0 0 處方2 0 0 0 10 處方3 0 0 1 9 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) —裝· 太 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 結果如表5 。表中數值乃指呈對應評價人數。檸檬酸 鹽之製劑1 0名均為「極痛」，馬來酸鹽之製劑1 0名均為 無痛，Ύ二酸鹽之製劑則9名「無痛」而1名「可能痛」 。這些結果顯示，馬來酸鹽或丁二酸鹽之製劑甚少或無 痛，反觀檸樣酸_之製劑則有強痛。 〈試驗例6 > [緩衝液1 0 ] 20mM檸檬酸鹽媛衝液，每ml含0.02mg氯化苄乙氧銨及 50mgD -甘露糖醇，5mg氯化納及2mg苯甲酸鈉（PH6.0)。 [緩衝液1 1 ] 2 0 m Μ馬來酸鹽緩衝液，每m 1含0 . 0 2 m g氯化苄乙氧銨及 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（2〇 ) 5 0nigD-甘露糖醇，氯化納及2mg苯甲酸鈉（ρΗ6·0)。 [緩衝液1 2 ] 20mM 丁二酸鹽緩衝液，每ml含0.02mg氯化苄乙氧銨及 50ingD-甘露糖醇，5mg氯化納及2mg苯甲酸納（PH6.0)。 於上列3種緩衝液各加等容量6 . 8 m g / m 1天然型h G Η水 溶液而緩和地混合，各得水性組成物1(Μ2 (最後ρ Η 6 )。次 各通過孔徑0.22 /i mm之濾器而抽入注射器各lml,去除 氣泡而密封得樣品。各水溶液在40 °C及50¾貯存，21曰 後打開而在RP-HPLC及SE-HPLC分析，结果如表6 。 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 522016 Α7 Β7 五、發明説明（21) 表6 水性製劑10〜12之分析结果 水 件 製 劑 厘體量（¾) (SE-HPLC) 單體量U) (SE-HPLC) A0V, 50°C 40 °C 501C 初曰 21日後 初曰 21日後 初日 21日後 初曰 21日後 10 99.2 99·] 99,2 98.5 2.3 28,0 2.3 38.1 11 99.4 99.2 99.4 98.5 2,3 27.9 2.3 37.9 12 9 97 2 98.9 99.2 98.0 2.4 28.0 2.4 38.3 (請先閲讀背面之注意事項再本頁) 、·ιτ 丨線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在40及5 0 °C貯存2 ]日後，單體量變化極少，如試驗例 3長期安定性足夠一年。 〈試驗例7 > [緩衝液〗3 ] 20mM馬來酸鹽緩衝液，每m丨含0.02mg氯化苄乙氧銨及 lOOmgD-甘露糖醇（ρΗ6·0)。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（22 ) 於上列緩衝液1 3加等容量2 0 . 4 m g / m 1天然型h G Η水溶 液而緩和地混合，得水性製劑1 3 (最後ρ Η 6 )。次通過孔 徑0.22^πιιη之濾器而抽入注射器各lml,去除氣泡而密 封得樣品。水性製劑在40 1C及50 °C貯存，2 1日後打開而 在RP-HPLCRSE-HPLC分析，結果如表7 。 表7 水性製劑13之安定性 水 性 製 劑 單體量（¾) (SE-HPLC) 單體量U) (SE-HPLC) 401C 5010 40 °C 501C 初百 21日後 初曰 21日後 初日 21日後 初曰 21日後 13 99.2 98.8 99.2 97.1 2·2 28.5 2.2 39.6 (請先閱讀背面之注意事項再
、·!! 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在40及50°C貯存21日後，單體量變化極少，如試驗例 1長期安定性足夠一年。 下面參照範例說明本發明。但本發明不限於此。所列 各成分可增減量或濃度，一種K上成分可K其他成分代 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 522016 A7 B7 0 . 0 2 Βΐ g 適量 lro 1 (PH6 · 0) 五、發明説明（23 替，或包栝追加成分。 〈例1 > 依下列處方混合成緩衝液後，加下述h G Η溶液，過濾 消毒而得注射劑（最後Ρ Η 6 . 0 )。 [緩衝液] 氯化苄乙氧銨 D -甘露糖醇 2 0 in Μ檸懞酸鹽緩衝液 共 [h G Η溶液] 6 · 8 ιη 1 / in 1天然型h G Η水溶液.....lml 〈例2 > 仿例1 i最後P Η 6 . 0 )依下列處方而得注射劑（最後p 6.0) ^ [緩衝液] (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 、1Τ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 氯fb节乙氧鞍 D-甘露糖醇 2 0 in M馬來酸鹽緩衝液 共 [h G Η溶液] 6 . 8 m 1 / in 1天然型h G Η水溶液.....1ml <例3 > 仿例1 (最後p Η 6 . 0 )依下列處方而得注射劑（最後p Η 0 . 0 2 ® g 1 0 0 in g 適量 lm 1 (pH6 ♦ 0) 線 6.0) 一 25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21 ΟΧ 297公釐） 522016 A7 B7 0 . 0 2 m g 1 0 0 m g 適量 1 m 1 ( p Η 6 · 0 ) 五、發明説明（24 ) [緩衝液] 氯化苄乙氧銨 D-甘露糖醇 20mM 丁二酸鹽緩衝液 共 [hGH溶液] 6.8m〗/ ml天然型hGH水溶液.....1ml 〈例4 > 仿例1 (最後P Η 6 . 0 )依下列處方而得注射劑（最後P Η 6 · 0)。 [緩衝液] (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 氯化 苄乙氧銨 0 . 0 2 m g D-甘 露糖醇 5 0 in g 苯甲 酸鈉 2 ro g 氯化 納 5 IR g 20mM檸檬酸鹽緩衝液 適量 共 Ini 1 (pH6 · 0) [h G Η溶液] 6.8ml/ πι 1天然型h G Η水溶液. ……1 m 1 <例5 > 仿例1 (最後Ρ Η 6 . 0 )依下列處 方而得注射劑（最 6.0)。 一 26- 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 522016 0 , 0 2 m g 5 0 in g 2 in g 5 hi g 適量 lin 1 (pH6 . 0) 1ml A7 B7 五、發明説明（25 ) [緩衝液] 氯化苄乙氧銨 D-甘露糖醇 苯甲酸納 氯化納 2 0 m Μ馬來酸鹽緩衝液 共 [hGH溶液] 6 . 8 m 1 / m 1天然型h G Η水溶液，.· 〈例6 > 仿例1 (最後Ρ Η 6 . 0 )依下列處方而得注射劑（最後Ρ 6.0)。 [媛衝液] (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 7--裝- 爭項再太 、1Τ 氯 化 苄 乙 氧 銨 0,02 IB g D- 甘 露 糖 醇 5 0 m δ 苯' 甲 酸 納 2 hi ε 氯 化 納 5 m g 20 πιΜ 丁 二 酸 鹽媛衝液 適量 :線‘ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 共 lm 1 (f>H6 ♦ 0) [hGH溶液] 6.8nil/inl天然型hGH水溶液.....Ιιπ 1 <例7 > 仿例1 (最後p Η 6 . 0 )依下列處方而得注射劑（最後p Η 6 ‘ 0)。 -27 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 522016 A7 B7 五、發明説明（26 ) [緩衝液] 氯化苄乙氧銨 D-甘露糖醇 2 0 m Μ馬來酸鹽緩衝液 共 [hGH溶液] 6 . 8 m 1 / m 1天然型h G Η水溶液，.. 〈例8 > 仿例1 (:最後Ρ Η 6 . 0 )依下列處方而得注射劑（最後ρ Η 6.0) 〇 0 * 0 2 in g 1 0 0 in g 適量 1 in 1 ( p Η 6 · 0 ) lml [緩衝液] 氯化苄乙氧銨 D -甘露糖醇 2 0 m Μ馬來酸鹽緩衝液 共 [h G Η丨容液] 6.8ml/ml天然型hGH水溶液.....lml 0 . 0 2 m g 1 0 0 in g 適量 lml (pH6. 0) (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 木
、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 一 2 8 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）