BR112014001921B1

BR112014001921B1 - Formulação aquosa farmaceuticamente aceitável, método para aumentar a estabilidade de uma formulação aquosa farmaceuticamente aceitável e embalagem principal

Info

Publication number: BR112014001921B1
Application number: BR112014001921-5A
Authority: BR
Inventors: Bernt Pragl; Sabine Fuertinger
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 2011-07-25
Filing date: 2012-07-25
Publication date: 2022-05-10
Also published as: BR112014001921A2; EP2736490A1; US20140194356A1; WO2013014196A1; US20180256722A1; US11446381B2; JP6363949B2; JP2014528919A

Abstract

FORMULAÇÃO AQUOSA, MÉTODO PARA AUMENTAR A ESTABILIDADE DE UMA FORMULAÇÃO AQUOSA, USO DE UMA FORMULAÇÃO E EMBALAGEM PRINCIPAL. A presente invenção refere-se a uma formulação aquosa farmaceuticamente aceitável compreendendo pelo menos um sal neutro e uma proteína biofarmacêutica, em que a relação de concentração entre a proteína biofarmacêutica e o sal neutro está na faixa de (Maior igual) 0,7 e (Menor igual) 5. (Fig.19)

Description

[01] Em anos recentes, fármacos biofarmacêuticos entraram no mercado, particularmente fármacos de proteína, não só isolados a partir de recursos biológicos e/ou produzidos com meios recombinantes.

[02] O uso bem-sucedido de referidos biofarmacêuticos como agentes terapêuticos requer a preservação de suas atividades biológicas em todas as etapas do desenvolvimento incluindo armazenamento e envio. Comparado aos fármacos de baixo peso molecular convencionais, as proteínas acarretam em desafios adicionais na preservação de sua atividade pelo fato que as mesmas são muito maiores, contêm grupos relativamente lábeis, possuem estruturas tridimensionais frágeis, e podem adicionalmente ser sujeitas a processos metabólicos, por exemplo, por contaminações por microorganismos.

[03] A degradação pode ocorrer em diferentes modos, incluindo agregação de moléculas, desnaturação da estrutura terciária e desamidação de resíduos de amino ácido, por exemplo, asparagina e glutamina com suas cadeias laterais contendo amida. Em geral, todos os referidos processos de desagregação são acelerados sob condições de armazenamento sub-ótima, por exemplo, temperatura elevada, exposição a luz e/ou alta umidade relativa.

[04] A agregação pode ocorrer em forma de agregados visíveis e agregados sub visíveis. Uma vez formados, entretanto, os últimos podem agir como sementes de agregação para a formação de agregações maiores (então visíveis).

[05] Os referidos problemas são ainda mais agravados em caso de um biofarmacêutico ser proporcionado em formulação aquosa. O referido tipo de formulação pronta para usar é entretanto comum em virtude da facilidade e de segurança de administração, por exemplo, para anticorpos monoclonais assim como para biofarmacêuticos menores tais como insulina, eritropietina, ou hormônio de crescimento humano.

[06] Em virtude do fato que a produção de biofarmacêuticos ser um assunto altamente complexo, as instalações de produção são concentradas em grupos particulares onde os respectivos técnicos existem. As referidas instalações não são uniformemente distribuídas, geograficamente, como, por exemplo, instalações para a produção de pequenos fármacos moleculares. Adicionalmente, em virtude das capacidades de fabricação estarem em um curto fornecimento, a produção de um determinado fármaco acarreta com frequência em lugar em um lote relativamente grande, e então outras etapas de fármaco.

[07] Por essa razão, fármacos biofarmacêuticos são com frequência produzidos para estocar, e são assim submetidos a períodos de tempos de armazenamento relativamente longos e/ou têm que passar por longas vias de transporte antes de alcançarem o ponto de cuidado. Essa situação é ainda agravada pelo fato que em muitos casos não pode ser garantido que a cadeia de resfriamento permaneça inalterada durante armazenamento e/ou transporte.

[08] Sob essas condições, aumenta o risco de que os biofarmacêuticos alcancem o seu ponto de cuidado em um estado de avançada desagregação, e pode assim precisar ser descartado, o que envolve substanciais perdas financeiras, por exemplo, por parte da instituição que financia os cuidados com a saúde, em virtude dos preços relativamente altos do mercado para os biofarmacêuticos, e pode, no pior dos casos, isolar um paciente a partir de um tratamento essencial.

[09] É assim um objetivo da presente invenção se proporcionar formulações e métodos que ajudem a superar os problemas acima mencionados. Sumário da Invenção

[10] Antes da presente invenção ser descrita em detalhes, deve ser entendido que a presente invenção não é limitada às partes componentes particulares dos dispositivo descritos ou etapas de processo dos métodos descritos na medida em que os referidos dispositivos e métodos podem variar. Deve também ser entendido que a terminologia usada aqui é com o objetivo de descrever modalidades particulares apenas, e não pretende ser limitante. Deve ser observado que, como usado na presente especificação e nas reivindicações em anexo, as formas singulares “o”, “a”, “um” e “uma” incluem os referentes singular e/ou plural a não ser que o contexto indique claramente o contrário. Deve ainda ser entendido que, em caso de faixas de parâmetro serem dadas as quais são delimitadas por valores numéricos, as faixas são consideradas incluir os referidos valores de limite.

[11] De acordo com um aspecto da presente invenção, uma formulação aquosa farmaceuticamente aceitável compreendendo pelo menos um sal neutro e uma proteína biofarmacêutica, em que a relação de concentração entre a proteína biofarmacêutica e o sal neutro está na faixa de > 0,7 e < 5.

[12] Como usado aqui, o termo “proteína biofarmacêutica” se refere a proteínas fisiologicamente ativas não só isoladas a partir de recursos biológicos e/ou produzidos com meios recombinantes.

[13] Como usado aqui, o termo “concentração” se refere a o peso de uma determinada substância por volume, isto é, a concentração de peso. Por exemplo, a concentração de um biofarmacêutico é proporcionada em uma concentração de mg mL-1.

[14] É importante dizer que o peso de uma proteína biofarmacêutica se refere ao peso de uma proteína isolada, isto é, à uma ou mais cadeia de amino ácido que constitui a proteína, mais, se aplicável, os um ou mais padrões de glicosilação. Em caso a proteína é proporcionada em um sistema de envio, ou peguilada, ou modificada de algum outro modo, o peso não inclui as referidas modificações, que pode adicionar peso adicional substancial.

[15] Como usado aqui, o termo “relação de concentração” se refere à relação sem dimensão das concentrações de pelo menos duas substâncias. Em caso, por exemplo, do biofarmacêutico ser proporcionado em uma concentração de 10 mg mL-1 e o sal neutro ser proporcionado em uma concentração de 7,07 mg mL-1, a relação de concentração resultante entre a proteína biofarmacêutica e o sal neutro seria 10/7,07 = 1,416.

[16] Os inventores pela primeira vez mostraram em uma formulação aquosa compreendendo agregações biofarmacêuticas, particularmente agregações subvisíveis podem ser reduzidas em caso da referida particular relação de concentração entre o biofarmacêutico e o sal neutro é proporcionado.

[17] Preferivelmente, a referida relação de concentração é 0,7; 0,8; 0,9; 1,0; 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3; 2,4; 2,5; 2,6; 2,7; 2,8; 2,9; 3,0; 3,1; 3,32; 3,3; 3,4; 3,5; 3,6; 3,7; 3,8; 3,9; 4; 4,1; 4,2; 4,3; 4,4; 4,5; 4,6; 4,7; 4,8 4,9; ou 5,0.

[18] De acordo com uma modalidade preferida, a proteína biofarmacêutica tem entre > 150 e < 220 resíduos de amino ácido e/ou um peso molecular entre > 15 e < 26 kDaltons.

[19] Preferivelmente; a proteína tem 150; 151; 152; 153; 154; 155; 156; 157; 158; 159; 160; 1641; 162; 163; 164; 165; 166; 167; 168; 169; 170; 171; 172; 173; 174; 175; 176; 177; 178; 179; 180; 181; 182; 183; 184; 185; 186; 187; 188; 189; 190; 191; 192; 193; 194; 195; 196; 197; 198; 199; 200; 201; 202; 203; 204; 205; 206; 207; 208; 209; 210; 211; 212; 213; 214; 215; 216; 217; 218; 219 ou 220 resíduos de amino ácido; e/ou um peso molecular de 15; 16; 17; 18; 19; 20; 21; 22; 23; 24; 25 ou 26 kDaltons.

[20] De acordo com outra modalidade preferida, a proteína biofarmacêutica é um hormônio de crescimento humano (hGH). Hormônio de crescimento humano (hGH) é um hormônio de peptídeo com base em proteína que estimula o crescimento, reprodução celular e regeneração em humanos e outros animais. hGH é um polipeptídeo de cadeia única que é sintetizado, armazenado, e secretado por células somatotróficas dentro das aletas laterais da glândula pituitária anterior. hGH é principalmente usada para tratar desordens de crescimento em crianças e deficiência de hormônio de crescimento em adultos. Antes de sua produção por tecnologia de DNA recombinante, hormônio de crescimento foi extraído a partir de glândulas pituitárias humanas (hormônio de crescimento de cadáver, também referido como hormônio de crescimento NPA). Atualmente, hGH é principalmente produzido com tecnologia de DNA recombinante (rhGH, também referido como somatropina). rhGH, tipicamente, tem 191 resíduos de amino ácido. A sequência de amino ácido é disponível no banco de dados UniProt sob o número de acesso No. P01241. Outra variante é met-GH (“metionil-hormônio de crescimento”), que tem a mesma sequência de amino ácido que hGH, com uma metionina extra N-terminal.

[21] No contexto da presente invenção o termo hormônio de crescimento humano (hGH) engloba todas as variantes acima mencionadas.

[22] De acordo com outra modalidade preferida, a formulação adicionalmente compreende pelo menos um agente selecionado a partir do grupo que consiste de um tampão, um tensoativo não iônico, um tonificante e/ou um conservante.

[23] Preferivelmente, o referido tampão é selecionado a partir do grupo que consiste de: tampão de fosfato (Na3PO4, NaH2PO4 e/ou Na2HPO4), citrato, Tris, succinato, acetato e/ou histidina.

[24] De acordo com outra modalidade preferida, o referido tensoativo não iônico é selecionado a partir do grupo que consiste de: poloxâmero, preferivelmente Poloxâmero 188 ou Poloxâmero 184, Pluronic F-68 e/ou polisorbato, preferivelmente Polisorbato 20 ou Polisorbato 80

[25] O termo “tonificante”, como usado aqui, se refere a uma substância osmoticamente ativa que pode ser usada para afetar a osmolaridade de uma formulação farmacêutica. De acordo com outra modalidade preferida, o referido tonificante é selecionado a partir do grupo que consiste de: manitol, glicina, e/ou sorbitol.

[26] De acordo com outra modalidade preferida, o referido conservante é selecionado a partir do grupo que consiste de: fenol, meta-cresol, metil parabeno, propil parabeno, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio e/ou álcool benzílico.

[27] Concentrações adequadas para os tampões, tensoativos não iônicos, tonificantes, e/ou conservantes são, por exemplo, mostrados na Tabela 2.

[28] De acordo com outra modalidade preferida da formulação de acordo com a presente invenção, o hormônio de crescimento humano (hGH) está presente em uma concentração que varia entre > 3 e < 20 mg mL-1.

[29] Preferivelmente, hGH está presente em uma concentração de 3; 3,33; 4; 5; 6; 7; 8; 9; 10; 11; 12; 13; 14; 15; 16; 17; 18; 19 ou 20 mg mL-1.

[30] Concentrações particularmente preferidas para o hGH são, por exemplo, mostradas na Tabela 2.

[31] De acordo com outra modalidade preferida da formulação de acordo com a presente invenção, o referido sal neutro é selecionado a partir do grupo que consiste de: cloreto de sódio (NaCl)

[32] Preferivelmente, o referido sal neutro está presente em uma concentração que varia entre > 2 e < 100 mg mL-1. Preferivelmente, o referido sal neutro está presente em uma concentração de 2; 3; 4; 5; 6; 7; 8; 9; 10; 11; 12; 13; 14; 15; 16; 17; 18; 19; 20; 21; 22; 23; 24; 25; 26; 27; 28; 29; 30; 31; 32; 33; 34; 35; 36; 37; 38; 39; 40; 41; 42; 43; 44; 45; 46; 47; 48; 49; 50; 51; 52; 53; 54; 55; 56; 57; 58; 59; 60; 61; 62; 63; 64; 65; 66; 67; 68; 69; 70; 71; 72; 73; 74; 75; 76; 77; 78; 79; 80; 81; 82; 83; 84; 85; 86; 87; 88; 89; 90; 91; 92; 93; 94; 95; 96; 97; 98; 99 ou 100 mg mL-1.

[33] Concentrações particularmente preferidas para o sal neutro são, por exemplo, mostradas na Tabela 2.

[34] De acordo com outra modalidade preferida da formulação de acordo com a presente invenção, o pH da referida formulação está em uma faixa entre > 5,8 e < 6.2. Preferivelmente, o referido pH é 5,8; 5,9; 6; 6,1 ou 6,2. Valores de pH particularmente preferidos são, por exemplo, mostrados na Tabela 2.

[35] A formulação de acordo com a presente invenção tem uma estabilidade otimizada. A referida estabilidade otimizada resulta, por exemplo, em reduzida formação de agregados visíveis e sub visíveis, reduzida formação de precipitados, reduzida tendência de desenvolver túrbidasade, particularmente após longo armazenamento ou armazenamento sob condições sub ótimas.

[36] Essa característica é particularmente benéfica sob condições onde não pode ser garantido que a cadeia de resfriamento permanece inteira, como pode, por exemplo, ser o caso nos países em desenvolvimento e/ou mercado emergente.

[37] A formação de agregados pode, por exemplo, ser analisada com Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz, HPLC de exclusão de tamanho (SE- HPLC)e/ou Dispersão de luz dinâmica (DLS).

[38] A Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz (LOPC) é um método que ajuda a detectar e contar partículas. A natureza da contagem de partículas é com base seja na dispersão da luz ou no obscurecimento da luz. Uma fonte de luz de alta energia é usada para iluminar a partícula na medida em que a mesma passa através da câmara de detecção. A partícula passa através da fonte de luz (tipicamente a laser) e se dispersão da luz for usado, então a luz redirecionada é detectada pelo detector de foto, enquanto que, se obscurecimento da luz é usado, a perda de luz é detectada. A amplitude da luz dispersada ou luz bloqueada.

[39] HPLC de exclusão de tamanho (SE-HPLC) separa as partículas com base em tamanho. Ela funciona para por capturar moléculas menores nos poros das partículas de gel. As moléculas maiores simplesmente passam pelos poros na medida em que elas são muito grandes para penetrar nos poros. As moléculas maiores portanto fluem através da coluna mais rápidas do que as moléculas menores, ou seja, quanto menor a molécula, mais longo o tempo de retenção. SE-HPLC é com frequência usada para proporcionar análise quantitativa dos agregados de proteína e grampos, e assim desempenha um importante papel no controle de qualidade dos biofarmacêuticos.

[40] Dispersão de luz dinâmica (DLS) é uma técnica em física, que pode ser usada para determinar o perfil de distribuição e tamanho de partículas pequenas em suspensão ou polímeros em solução. A mesma pode também ser usada para sondar o comportamento dos fluidos complexos tais como soluções de polímeros concentradas.

[41] Quando a luz atinge as partículas pequenas a luz se dispersa em todas as direções (dispersão de Rayleigh) uma vez que as partículas são pequenas comparadas ao comprimento de onda (abaixo de 250 nm). Se a fonte de luz for um laser, e assim é monocromática e coerente, então se observa uma flutuação dependente do tempo na intensidade da dispersão. As referidas flutuações são em virtude do fato que as pequenas moléculas em soluções estão sofrendo movimento Browniano e assim sendo a distância entre os dispersadores na solução está constantemente mudando com o tempo. Essa luz dispersada então sofre interferência ou construtiva ou destrutiva pelas partículas circundantes e dentro dessa flutuação de intensidade, informação é contida sobre a escala de tempo de movimento dos dispersadores. A preparação da amostra seja por filtragem ou por centrifugação é fundamental para remover poeira e artefatos a partir da solução.

[42] Vale à pena mencionar que, embora SE HPLC seja um método padrão para o controle de qualidade em Biofarmacêuticos, DLS e LOPC têm a melhor resolução, isto é, os mesmos podem detectar mesmo sub-agregados visíveis que não podem ser detectados com SE HPLC. O presente estudo é o primeiro que faz uso de DLS e LOPC para a leitura de diferentes formulações para Biofarmacêuticos.

[43] Assim sendo, no presente estudo foi pela primeira vez mostrado que as agregações, particularmente agregações subvisíveis (que permaneceram não detectadas em caso SE HPLC ser usado) podem ser reduzidas em caso de uma relação particular entre um biofarmacêutico e um sal neutro é proporcionado.

[44] De acordo com outro aspecto da presente invenção, um método de aumentar a estabilidade de uma formulação aquosa farmaceuticamente aceitável compreendendo uma proteína biofarmacêutica é proporcionado. O referido método compreende proporcionar uma proteína biofarmacêutica e o sal neutro em uma relação de concentração final na faixa de > 0,7 e < 5.

[45] De acordo com a modalidade preferida, a proteína biofarmacêutica é hormônio de crescimento humano (hGH).

[46] Outras modalidades preferidas do referido método podem ser derivadas a partir da descrição acima com relação às modalidades preferidas da formulação de acordo com a presente invenção. a. De acordo com outro aspecto da presente invenção, o uso da formulação de acordo com a presente invenção para o tratamento de pelo menos uma condição selecionada a partir do grupo que consiste de deficiência de hormônio de crescimento, baixo para a idade gestacional (SGA) ou retardamento do desenvolvimento intrauterino (IUGR), baixa estatura idiopática, perda por AIDS e caquexia, baixa estatura causada por Síndrome de Turner, baixa estatura causada por Síndrome de Prader-Willi, problemas de crescimento causados por Síndrome de intestino curto, crescimento impróprio em crianças com doença renal, artrite reumatoide, osteoporose e raquitismo hipofosfatômico ligado a X.

[47] De acordo com outro aspecto da presente invenção, uma embalagem principal compreendendo a formulação de acordo com a presente invenção é proporcionada. A referida embalagem principal é preferivelmente um frasco, uma seringa pré-preenchida, uma cárpula, um frasco, ou um cartucho.

[48] Na tabela 1, diferentes formulações aquosas a partir da técnica anterior compreendendo cloreto de sódio como um sal neutro e hormônio de crescimento humano como um exemplo para o biofarmacêutico usado na formulação de acordo com a presente invenção são mostrados. Em todos os casos, a relação de concentração entre a proteína biofarmacêutica e o sal neutro é menor do que 0,7.

[49] Na tabela 2, diferentes formulações que forma desenvolvidas sob a luz da presente invenção são mostrados. Todas as referidas formulações tendo uma relação de concentração entre a proteína biofarmacêutica e o sal neutro é menor do que 0,7.

[50] A Tabela 3 mostra outras formulações aquosas a partir da técnica anterior compreendendo hormônio de crescimento humano, mas sem um sal neutro. Tabela 1: Formulações a partir da técnica anterior compreendendo um sal neutrom

Tabela 2: formulações exemplificativas, não restritivas de acordo com a presente invenção

Tabela 3: Formulações a partir da técnica anterior sem um sal neutron

Breve Descrição dos exemplos e dos desenhos

[51] Detalhes adicionais, características adicionais, características e vantagens do objeto da presente invenção são descritos nas subreivindicações, e na descrição a seguir das respectivas figures e exemplos, os quais, em um modo exemplificativo, mostram as modalidades preferidas da presente invenção. Entretanto, os referidos desenhos não devem de modo algum ser considerados como limitando o âmbito da presente invenção.

[52] Exemplo 1: Leitura Tonificante

[53] Seis lotes de desenvolvimento de formulação (sem tonificante, Glicina, Manitol, Sorbitol, e NaCl) foram comparadas. Lotes compreendendo 15 mg de hGH em solução aquosa (10,0 mg/mL, solução para injeção cartucho de 1,5 mL) foram armazenados por 18 meses a 5°C ± 3°C (“condição de armazenamento pretendida”), 3 meses a 25°C ± 2°C / 60% de umidade relativa (“condição de armazenamento acelerada”) e 2 semanas a 40°C ± 2°C (“condição de armazenamento tensionada”). As diferentes formulações são mostradas na Tabela 4. Tabela 4

[54] Todos os lotes testados apareceram como uma solução clara e incolor no ponto de tempo de partida. Durante o armazenamento a 25°C todas as formulações exceto #0821RS148-5 (vide tabela 4) contendo NaCl se tornaram túrbidas ou opalescentes. Após 2 meses de armazenamento a 5°C ± 3°C as formulações contendo Manitol e Sorbitol se tornaram progressivamente túrbidas/opalescentes enquanto a formulação #0821RS148-5 contendo NaCl permaneceu clara por todo o período de armazenamento. Todas as observações são suportadas por contagem de partículas e dados DLS. É digno de nota, que todos os processos de agregação podem não ser monitorados por SE-HPLC. Em condições aceleradas foi observado um aumento marginal em agregação por SE-HPLC. Durante o armazenamento a 25°C todas as formulações exceto #0821RS148-5 contendo NaCl se tornaram túrbidas ou opalescentes. Em condições tensionadas foi observado um relativo aumento em agregação por SE-HPLC. Durante o armazenamento a 40°C todas as formulações são claras.

[55] Os resultados são mostrados em Figs. 1, 2 e 3

[56] Exemplo 3: Leitura Tonificante

[57] 6 lotes de desenvolvimento de formulação (sem tonificante, Glicina, Manitol, Sorbitol, NaCl) foram comparados. Lotes compreendendo 15 mg de hGH em solução aquosa (10,0 mg/mL, solução para injeção cartucho de 1,5 mL) foram armazenados por 24 meses a 5°C ± 3°C (“condição de armazenamento pretendida”), 3 meses a 25°C ± 2°C / 60% de umidade relativa (“condição de armazenamento acelerada”) e 2 semanas a 40°C ± 2°C (“condição de armazenamento tensionada”). As diferentes formulações são mostradas na Tabela 5. Tabela 5

[58] Todos os lotes testados apareceram como uma solução clara e incolor no ponto de tempo de partida. Durante o armazenamento a 25°C todas as formulações exceto #0831RS156-5 (tabela 5) contendo NaCl se tornaram túrbidas ou opalescentes. Após 2/3 meses de armazenamento a 5°C ± 3°C as formulações contendo Manitol e Sorbitol se tornaram progressivamente túrbidas/opalescentes enquanto a formulação #0831RS156-5 contendo NaCl permaneceu clara por todo o período de armazenamento. Todas as referidas observações são adicionalmente suportadas por contagem de partículas e dados DLS. É digno de nota, que todos os referidos processos de agregação podem não ser monitorados por SE-HPLC.

[59] Em condições aceleradas foi observado que um aumento marginal em agregação por SE-HPLC. Durante o armazenamento a 25°C todas as formulações exceto #0831RS156-5 contendo NaCl se tornaram túrbidas ou opalescentes. Em condições tensionadas foi observado um relativo aumento em agregação por SE-HPLC. Durante o armazenamento a 40°C todas as formulações são claras. Os resultados são mostrados nas figuras 4, 5 e 6.

[60] Exemplo 2: Otimização da concentração de sal neutro

[61] 8 lotes de desenvolvimento de formulação (His/Manitol, His/Fosfato/Manitol, Arginina/ Fosfato/Manitol, Fosfato/Manitol/0,41 mg/mL NaCl; Fosfato/Manitol/3,5 mg/mL NaCl, Fosfato/7,07 mg/mL NaCl, Fosfato/Manitol/14 mg/mL NaCl e Fosfato/0,41 mg/mL NaCl) foram comparados. Lotes compreendendo 15 mg de hGH em solução aquosa (10,0 mg/mL, solução para injeção cartucho de 1,5 mL) foram armazenados por 24 meses a 5°C ± 3°C (“condição de armazenamento pretendida”) e 3 meses a 25°C ± 2°C / 60% de umidade relativa (“condição acelerada”). As diferentes formulações são mostradas na Tabela 6. Tabela 6

[62] Todos os lotes testados apareceram como uma solução clara e incolor no ponto de tempo de partida. Durante o armazenamento a 25°C todas as formulações exceto #0835RS158-5, 6 e 7 contendo 3,5 mg/mL, 7,07 mg/mL e 14 mg/mL NaCl se tornaram túrbidas ou opalescentes.

[63] Após armazenamento a 5°C ± 3°C as formulações #0835RS158-5, 6 e 7 permaneceram claras enquanto todas as outras formulações se tornaram progressivamente túrbidas/opalescentes. Todas as referidas observações são adicionalmente suportadas por contagem de partículas e dados DLS. É digno de nota que todos os referidos processos de agregação podem não ser monitorados por SE-HPLC.

[64] Em condições aceleradas foi observado um aumento marginal em agregação por SE-HPLC. Durante o armazenamento a 25°C todas as formulações exceto #0835RS158-5, 6 e 7 se tornaram túrbidas ou opalescentes. Os resultados são mostrados nas figuras 7 e 8

[65] Figuras

[66] Figura 1: Distribuição de partícula de amostras armazenadas a 5°C no primeiro experimento de leitura tonificante (exemplo 1, “condição de armazenamento pretendida”), conforme determinado com Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz. Em geral, os níveis de partículas subvisíveis foram altos no ponto de tempo de partida e mostraram níveis elevados para formulações contendo nenhum tonificante, Glicina, Manitol e Sorbitol. As formulações contendo NaCl mostraram os níveis mais baixos de partículas subvisíveis. Os referidos achados são adicionalmente suportados por dados DLS e dados de aparência.

[67] Figura 2: Distribuição de partícula de amostras armazenadas a 25°C no primeiro experimento de leitura tonificante (exemplo 1, “condição de armazenamento acelerada”), conforme determinado com Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz. Em geral, os níveis de partículas subvisíveis foram altos no ponto de tempo de partida mas permaneceram em níveis elevados para as formulações contendo nenhum tonificante, Glicina e Sorbitol. As formulações contendo NaCl mostraram os níveis mais baixos de partículas subvisíveis. Os referidos achados são adicionalmente suportados por dados DLS e dados de aparência.

[68] Figura 3: Distribuição de partícula de amostras armazenadas a 40°C no primeiro experimento de leitura tonificante (exemplo 1, “condições de armazenamento tensionadas”), conforme determinado com Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz. Em geral, os níveis de partículas subvisíveis foram os mais altos no ponto de tempo de partida. Todas as formulações armazenado por 1 semana e 2 semanas a 40°C mostraram uma redução significante nos níveis de partículas subvisíveis.

[69] Figura 4: Distribuição de partícula de amostras armazenadas a 5°C no segundo experimento de leitura tonificante (exemplo 3, “condição de armazenamento pretendida”), conforme determinado com Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz. Em geral, as partículas subvisíveis progressivamente aumentam para as formulações contendo nenhum tonificante e Glicina e são pronunciadas para as formulações contendo Sorbitol e Manitol. As formulações contendo NaCl mostraram os níveis mais baixos de partículas subvisíveis. Os referidos achados são adicionalmente suportados por dados DLS e dados de aparência.

[70] Figura 5: Distribuição de partícula de amostras armazenadas a 25°C no segundo experimento de leitura tonificante (exemplo 3, “condição de armazenamento acelerada”), conforme determinado com Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz. Em geral, as partículas subvisíveis permaneceram em níveis elevados para as formulações contendo nenhum tonificante, Glicina, Sorbitol e Manitol. As formulações contendo NaCl mostraram os níveis mais baixos de partículas subvisíveis. Os referidos achados são adicionalmente suportados por dados DLS e dados de aparência.

[71] Figura 6: Distribuição de partícula de amostras armazenadas a 40°C no segundo experimento de leitura tonificante (exemplo 3, “condição de armazenamento tensionada”), conforme determinado com Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz. Em geral, os níveis de partículas subvisíveis foram os mais elevados no final do armazenamento após 2 semanas a 40°C. As partículas subvisíveis foram em níveis elevados para as formulações contendo nenhum tonificante, Glicina, Sorbitol e Manitol. As formulações contendo NaCl mostraram os níveis mais baixos de partículas subvisíveis. Os referidos achados são adicionalmente suportados por dados DLS e dados de aparência.

[72] Figura 7: Distribuição de partícula de amostras armazenadas a 5°C no experimento de otimização da concentração de sal neutro (exemplo 2, “condição de armazenamento pretendida”), conforme determinado com Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz. Os níveis de partículas subvisíveis foram elevados para todos os lotes exceto para as formulações contendo 3,5 mg/mL, 7,07 mg/mL e 14 mg/mL NaCl durante o armazenamento a 5°C. O referido achado é adicionalmente suportado por dados DLS (dados não mostrados).

[73] Figura 8: Distribuição de partícula de amostras armazenadas a 25°C no experimento de otimização da concentração de sal neutro (exemplo 2, “condição acelerada”), conforme determinado com Contagem de Partículas por Obscurecimento da Luz. Os níveis de partículas subvisíveis foram elevados para todos os lotes exceto para as formulações contendo 3,5 mg/mL, 7,07 mg/mL e 14 mg/mL NaCl Durante o armazenamento a 25°C. O referido achado é adicionalmente suportado por dados DLS (data não mostrados). Métodos Métodos experimentais são mostrados nas tabelas e listagens a seguir:

Claims

1. Formulação aquosa farmaceuticamente aceitável, caracterizada pelo fato que compreende cloreto de sódio, um hormônio de crescimento humano (hGH) como ingrediente ativo, e poloxâmero como tensoativo não iônico, fenol como conservante e um tampão de fosfato, em que a razão de concentração de hormônio de crescimento humano (hGH) para NaCl está na faixa de > 1,4 e < 2,86, em que o hormônio de crescimento humano (hGH) está presente em uma concentração que varia entre > 3 e < 20 mg mL-1, e em que NaCl está presente em uma concentração que varia entre > 2 e < 100 mg mL-1.

2. Formulação, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato que o hormônio de crescimento humano (hGH) tem entre > 150 e < 220 resíduos de amino ácido e/ou um peso molecular entre > 15 e < 26 kDaltons.

3. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 - 2, caracterizada pelo fato que o referido tampão de fosfato é selecionado a partir do grupo que consiste em Na3PO4, NaH2PO4 e/ou Na2HPO4.

4. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 - 3, caracterizada pelo fato que o pH da referida formulação é na faixa entre > 5,8 e < 6,2.

5. Método para aumentar a estabilidade de uma formulação aquosa farmaceuticamente aceitável compreendendo um hormônio de crescimento humano (hGH) como ingrediente ativo, cloreto de sódio, poloxâmero como tensoativo não iônico, fenol como conservante e um tampão de fosfato, cujo método compreende fornecer um relação de concentração final de hormônio de crescimento humano (hGH) para NaCl na faixa de > 1,4 e < 2,86.

6. Formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 - 4 para o tratamento de uma condição selecionada a partir do grupo que consiste em: • Deficiência de Hormônio do Crescimento • pequeno para a idade gestacional (PIG) ou retardo de crescimento intrauterino (RCIU) • Baixa Estatura Idiopática • Perda da AIDS e Caquexia • Baixa Estatura Causada pela Síndrome de Turner • Baixa Estatura Causada pela Síndrome de Prader-Willi • Problemas de crescimento causados pela síndrome do intestino curto • Crescimento Impróprio em Crianças com Doença Renal • Artrite reumatoide • Osteoporose • Raquitismo Hipofosfatêmico Ligado ao X.

7. Embalagem principal, caracterizada pelo fato que compreende a formulação, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 - 4.