TW394688B - Microcapsule preparations made of biodegradable copolymers - Google Patents

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A 7 B7 五、發明説明（f ) 本發明係關如申請專利範圍所予特徵化之目的，亦即由 生物聚合物、可聚合的單體、活性成分及/或可以診斷方 式檢知的成分產製的徽膠囊；及製法；及其用於診斷與治 療之用法，特別用於超音波診斷作對比介質。 已知直徑比紅血球小或在紅血球大小範圍之粒子，注射 入循環徑路後可在循環糸统內循環。因此此等徽膠囊之藥 學製劑適用於注射入循環系統内作藥物内之活性成分或診 斷劑的載媒劑糸統。至於載媒劑物枓，原則上全部生物可 -降解的相容的非水溶性物質皆屬適宜。迄今為止 > 特別曾 說明脂肪類，蠟類，脂質類（如大豆卵磷脂），變性生物 聚合物（如白蛋白，明膠）和合成的可生物降解的聚合物 (如聚乳酸，聚羥丁酸，聚烷基氰基丙烯酸酯類，聚-L -離胺酸）。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 微膠囊在循環徑路內循環被單核细胞呑喔糸统（Μ P S )姻 胞，因其物理及化學性質而予辨認並攝取（主要攝取於肝 、肺、脾）時之速度快慢和數目有差異。粒子電荷，粒子 大小，被吸附物質之粒子表面性質（分子量，親兩性）， Μ及粒子表面對血中成分（如纖維連接素f i b r ο n e c t U ， 白蛋白）之親和力被視為決定徽膠囊被Μ P S细胞吸收動力 學的主要因素。藉特殊改變徽粒之物理化學表面性質，吞 噬作甩的動力學可受Μ P S细胞和對應器官（即肝、肺、脾 、骨髓）内的粒子濃度影響（被動鎖定目標）。目標组織 或身體结構（非屬RES器官）內之徽膠囊特定濃度就此方 式而言並不可能。反而僅能藉由徵膠囊與具位置持異性， 结搆特異性或姐織特異性结合性質的物質姐合而達成（返 -3 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（〉） 家裝置）。但前述用於超音波診斷的粒子用與返家裝置組 合製劑之適合程度不足。 因此，Μ E P 0 4 5 8 0 7 9和D E 3 8 0 3 9 7 2所述之對比介 質為例，必須接受其僅能Μ昂貴的製法生產，製法中必須 使用有機溶劑而因環保與工作場所安全理由故，有襆溶劑 之使用不利。此外，於製劑使用前必須確保將供藥罔的產 物内已不再含有有機溶劑。此外，生產時需要用表面活性 佐劑物質（如界面活性劑），此等物質於注射劑之例中常 被視為有害者。又復，於此等粒子之例中不可能控制其於 各種器官内之濃度表現，欲尋求D Ε 3 8 0 3 9 7 2粒子與選擇 性堆積化合物（所謂的返家裝置，如單株抗體）間之關聯 並不可能。 由於（尚未明瞭的）生物可降解性故，D Ε 4 0 0 4 4 3 0所 述聚合醛類製成的徽膠囊也適用作物質特異性或结構特異 性物質之載媒劑。另一缺點為：在此情況下，粒子的產製 上也需界面活性佐劑物質。 ΕΡ 0 224 934所述之蛋白質特別白蛋白製之微膠囊僅具 有極低的試管試驗和活體試驗安定性。 因此，本發明之目的係提供特別可供超音波診斷用之歡 膠囊製劑，其製備上無需使用生理有害溶劑或佐劑物質（ 如界面活性劑），其容易產製及具生物可降解性，其含有 具位置特異性、结構持異性或姐織特異性结合性之物質於 其壁材料內或可與此等物質共價结合，及其具有足夠的試 管試驗和活體試驗安定性。 根據本發明此目的可藉歡膠囊而達成，而撤膠囊之榖由 -4 - (請先閲讀背面之注意事項再资寫本頁) •裝- 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（彡） 生物聚合物（較好多胜肽-也涇糖基化）與合成物之组合 於產製期間聚合而生成。 因此，由至少一種合成聚合物與至少一種生物聚合物之 共聚物製之徽膠囊乃屬本發明之一目的；及多胜肽，較好 為天然者，或Μ合成或半合成方式生產者，或藉基因工程 而得者作生物聚合物，例如白蛋白，膠原分解產物，明膠 ，纖維蛋白原，纖维連接素，polygeline，氧聚明膠，其 分解產物及聚-L -離胺酸皆屬適宜。生物聚合物也可經糖 基化。至於可聚合單體較好Μ烷基氰基丙烯酸酯類，丙烯 酸，丙烯藤胺，丙烯藤氯和丙烯酸甘油酯為適宜。 本發明微膠囊適用於藉包涵氣體而生產氣體飽和溶液， 特別作超音波研究之對比介質。由於包涵氣體抆，其作為 超音波業界之高度有效的散射元體。此外，其可被診斷用 超音波激發而放射出獨立信號，例如可借肋於色彩都卜勒 (D ο ρ ρ 1 e r )技術而評估。 至於氣體，Μ空氣、氮、二氧化碳、氧、氦、氬、氬、 氪或其混合物為宜。饋入對應氣體或氣體混合物之方式ί糸 在飽和Κ個別氣體或氣體混合物之水溶液内生產粒子。 微膠囊也可以（視情況可額外）含有可借助於醫蔡用診 斷程序檢測的其它物質；診斷程序之例有磁共振斷層攝影 術，磁共振光譜術，閃爍攝影術，或Μ適當磁儀作高敏磁 場測量（生物磁學）;微膠囊可經微包膠置於壁材料内且 (視情況需要可借助於合宜物質如螯合劑）與壁材料偶合 。如此，例如可在放射性同位素使用中，將本發明截膠囊 用於閃墚攝影術。同理，經由將徽膠囊徽包膠或摻混於適 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------裝-- - C, (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -線 五、發明説明（名 A7 B7 當順磁，超順磁，鐵氧磁（f e r r i m a g n e t i c )或ϋ磁（ ferromagnetic)物質之壁材料内，使徽膠囊可甩於磁共振 斷層攝影術，磁共振光譜術或磁場之測量中作對比介質。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 出人意外地 足夠的生物聚 性劑。如此代 主的微膠囊製 預防粒子聚集 ，因此在有機 殘餘含量為止 至於本發明 變的粒子性質 製程參收而予 分布，循環徑 影響或受生物 酐類（如丁二 稀二酸酐）進 進行乙藤化反 又復，壁材 ，藉此可影響 途。此含量可 如此，舉例， 製之壁材料係 含 1 % ( V / V ) 丁 發現在本發明之粒子之生產過程中（欲維持 合物濃度）無需加入界面活性物質如界面活 表本發明製法優於先前已知之以合成聚合物 法之決定性優異處，歸因於減低界面張力與 通常所需的界面-活性劑在生理上被視為有害 體使用前必須再度從製劑中被移除至相容的 0 之微膠囊製劑之又一優點，值得一提者為多 可配合個別用途|而粒子性質易藉改變各種 控制。如此徽膠囊製劑之藥力學參數（器官 路内之滯留期）可受選用的個別生物聚合物 聚合物官能基改變之影響（例如，Μ二羧酸 酸，二乙醇酸*戊二酸，順丁烯二酸或反丁 行醯化反應；或Μ —羧酸酐類如乙酐或丙酐 應）3 料內之生物聚合物含量可在廣泛範圍内改變 膠囊物料之活體內生物降解並配合期望的用 藉生產溶液中之生物聚合物部分直接控制。 包含本發明微膠囊之5 5 % ( Μ / Μ )生物聚合物 由實例1生產之徽膠囊製成，此微膠囊係由 基氰基丙烯酸和5 % 明膠之經高壓加熱的水 6 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 請 k, ' 閱ik 意 事 項 再 %J裝 頁

II JESaaMi1^ 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 B7 五、發明説明（>/) 溶液製備；但同樣使用丁基氯基丙烯酸酯，由2 . 5 ?名高壓 加熱明膠水溶液製成徽膠囊時壁材料包含3 5 % ( M / Μ )生物 聚合物；而由7 . 5 %高壓加熱明膠水溶液製成微膠囊時壁 材枓包含6 5 % ( Μ / Μ )生物聚合物。 岀人意外地·，本發明微膠囊可無需加入通常用作凍晶乾 燥的骨幹生成劑等其它輔助物質（如乳糖、甘露糖醇或山 梨糖醇）即可凍晶乾燥。此等骨幹生成劑於乾燥後造成大 部分徽膠囊的機械崩解，隨後即不再用於顯影。相反地， Κ本發明之微膠囊為例，壁材-料中過量使用旳的生物聚合 物可用作骨幹生成劑，藉此可大為改進完整的-對-破壞 的徽膠囊之比。由於此種更有利的比值，顯然可降低顯影 所需劑量。 但根據本發明之微膠囊也可（視情況需要可額外）含有 摻混的藥學活性成分，例如經由將不透明劑（於超音波研 究之對比介質之例中，此處涉及氣體或氣體混合物）及一 種或一種以上之活性成分摻混於接受微包膠的粒子內。較 好，活性成分也可使用對位置特異性。结構特異性或组織 特異性物質所述方法摻混於壁材料内。若活性成分為生物 聚合物，也可部分構成壁材料本身，生物聚合物可完全用 於生產，或與其它合宜生物聚合物（如明膠，白蛋白，纖 雄連接素，聚-L -離胺酸）混合用作撤膠囊製劑之起始物 料並添加可聚合單體或寡聚物。活性成分與膠囊物料之生 物聚合物部分偶合之特殊優點在於下述事實：活性成分例 如藉胜肽鐽而與膠囊物料之生物聚合物部分结合，可於活 體内藉酶催分解而釋放。 (請先閱讀背面之注意事項再楨窝本頁) -裝 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 B7 五、發明説明（·έ ) 根據本發明之微膠囊特別用於檢測或治療血栓和動脈粥 瘤硬化變化。此種情況下，使用抗下列各蛋白之抗體作返 家裝置特別有利：纖维蛋白，纖維蛋白结合的血槳蛋白或 其部分構造，组織胞質素原活化劑或其部分構造（如I型 同糸物與圏餅序列），脂蛋白之蛋白質成分（也含其部分 構造）。 根據本發明之微膠囊之其它應用領域也可用於：激素功 能的診斷或治療（本例中，使用胜肽激素或具受器黏合能 力的改質產物作返家裝置被視為特別有利），或血管内皮 病變的診斷或治療（此例中，使用抗整合素-i n t e s r i η群 物質之抗體或抗體斷片，特別選擇素-s e 1 e c t ί n如L A Μ - 1 ，EUH-1和GMP-140 ;或使用整合素群物質受器或其黏合 賦與斷片，特別選擇素如L A Μ - 1，E L A Μ - 1和G Μ P - 1 4 0作返家 裝置被視為特別有利）。此外，本發明微膠囊也可用於腫 瘤之診斷或治療，係利用抗腫瘤表面抗原之抗體或抗體混 合物作返家裝置。 本發明之徽膠囊之產製方式係經由令適宜的反應性單體 或寡聚物（如氰基丙烯酸丁酯，氰基丙烯酸異丁詣，氰基 丙晞酸異丙酯，氰基丙烯酸丙酯，氰基丙烯酸異己酯，氰 基丙烯酸己酯，氰基丙烯酸甲酯，丙烯酸，丙烯醯胺，丙 烯酸甘油酯，丙烯藤氮）K相對於產製溶液之總容積為 0 . (H - 1 0 % ( m / V )(較好0 .卜1 0 % )之濃度於適當條件（如 選擇P Η，加入基圑及照射紫外光）下聚合而製備 > 聚合物 勻散於水相其中含有生物聚合物，如白蛋白，明膠*氧聚 明膠，polygeline，纖维連接素，聚-L-離胺酸Μ -8 - 本紙浪尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） ----------裝— - r (請先閲讀背面之注意事項再境穹本頁) 訂 -線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 B7 五、發明説明（/) Ο . 5 - 2 Ο % (m / V )(較好1 % - 1 5 % ( m / V ))溶解。經由使甩膠 原分解產物如明膠，Ρ ο 1 y g e 1 i n e，或氧聚明膠，涇常較好 生產徽膠囊之前將溶液高壓加熱。聚合反應完成後，所得 微膠囊藉由一次或重複離心，過濾或浮選依密度和粒徑分 .離，視情況需要可藉滲析進一步純化，並懸浮於生理相容 的懸浮劑（較好注射用水）至所需濃度。懸浮液可藉加入 適當水溶性物質（如葡萄糖，甘露糖醇，山梨糖醇，食H ，半乳糖，乳糖，果糖，海藻糖）而調整為等張。 製程中發展出的微膠囊之尺-寸分布可藉所用攪拌裝置類 型與轉速控制在廣泛範圍内。 充氣微膠囊之生產ί糸藉於飽和Μ期望氣體的溶液内進行 反應。就此方面而言，所得微膠囊密度，即壁材料與氣體 部分間之比可經由攪拌條件及特別經由生產過程中生物聚 合物部分而予控制。 若欲獲得微膠囊，其中芯材料與殼相同者，則生產中注 意選擇適當攪拌装置與適當轉速，可避免反應溶液發泡。 與位置特異性、结構特異性或姐織特異性物質姐合係為 確保徽膠囊進一步集中在R E S器官外側的目標區内（返家 裝置）；此组合能力係經由該等物質與共同生成穀材枓的 多胜肽偶合而得，此偶合係在徽膠囊製備之前或之後使用 生物化學業界已知之胺基酸偶合方法進行如W . Κ ο η i g , R . Geiger： Eine neue Methode zur Synthese von P e p t i d e n ： Aktivierung d e r Carboxylgruppe m i t Dicyclohexylcabodi imid unter Z u s a t z von 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再资寫本頁) 裝 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（於） 1 - h y d r ο X y - b e η ζ 〇 t r i a ζ ο 1 e η [胜狀之新合成方法：添加. 卜羥苯并三唑之同時Κ二環己基甲二_亞胺活化羧基]， C h e m . B e r . 1 0 3，7 δ 8 - 7 9 8 ( 1 9 7 0 ));或者若位置持異性、 结構特異性或組織特異性物質代表多胜肽，則於該物質水 溶液內生成徽膠囊，因此該物質直接甩作殼材料之一種成 分。 至於可與徽膠囊偶合或共同生成殼材料之位置持異性， 结構特異性或姐織特異性物質，較好為抗體，共軛接合的 抗體，激素.（特別胜呔激素）-，轉移鐵素（t r a n s f e r r i η ) ，纖維連接素，肝素，轉移氰鈷銨明，表皮生長因子，脂 蛋白，血槳蛋白，及其賦與特異性之部分结構；及寡聚胜 肽如R G D , R G D S , R G D V和R G D Τ皆屬適宜。 至於可與徵膠囊偶合之螯合配合基，以二伸乙基三胺五 乙酸或其衍生物為宜。配合基與粒子之聯结ί糸藉業界已知 方式進行[113?131；(^丨(：!1等人，科學220( 1 983 ) 613]。然後 ，粒子與所需金屬離子反應而成個別粒子固定的金屬錯合 物。 所用金屬離子係依期望的使用區域抉擇。N M R診斷領域 中，根據本發明偏好使用原子序2 1 - 2 9與5 9 - 7 0元素之順磁 金屬離子，特別釓（Μ )離子。供閃爍攝影之用，可使用合 宜的放射線放射元素，較好uMn或9SraTc, 1231和1311。 製妥的徽膠囊懸浮液可直接用於個別的預定周途，但已 證實可有利地改進儲存安定性；也可經冷凍後凍乾懸浮液 同時加入骨幹生成劑（如海藻糖*聚乙烯基吡咯詷，乳楗 -10 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） ----------裝-- ' - __ (請先閱讀背面之注意事項再填窝本頁) 訂 -線 A7 B7 五、發明説明（ P . ，甘露糖醇，山梨糖醇 :已證實使用生物聚合 有利。兩種情況下，冷 降或漂浮使粒子於冷凍 製劑·生產即用的注射用 物再度懸浮於下列藥學 種或一種Μ上 液），單_或雙酿水溶 甘露糖醇.），但較好於 質總濃度為0-20%重量 即用對比介質濃度可 6 m g粒子/ m 1懸浮液介 |於容器內之超音波診 10至100« g粒子/ kg體 研究肝脾在5 0至1 0 0 0， 。本發明將藉下列實例 ，甘胺酸），其他可用 物本身且過量用作骨幹 凍期間適合移動懸浮液 物料内之分布不均勻。 懸浮液之方式係經由將 可接受性懸浮介質内而 無機鹽之水溶液（如生 液（如葡萄糖或乳糖） 注射用水。視情況可任 比。 設定於0.01至20mg，較 質。注射劑量將根據個 斷研究中係在1至5 0 0 w 重之範圍；利用色彩都 較好 2 0 0 至 6 0 0 g / k g 而予解說： K設定張力 生成劑特別 Μ防止因沈 由凍晶乾燥 凍晶乾燥產 得，如水 理電解質溶 ，糖醇（如 意溶解的物 好0 . 5至 別用途而定 g ，較好 卜勒聲譜術 體重之範圍 請 閱 讀 背— 意 事 項 再 填 . f裝 頁 1 丁 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 富例1 3 0 0 m 1蒸餾水中溶解1 5 s明膠（3 0 0朵花）及Μ鹽酸調整 至Ρ Η 3 . 0 。溶液於1 2 1 °C 高壓加熱3 0分鐘。冷卻至室溫後 ，溶液之P Η (以氫氧化納溶液）矯正至p Η 5 . 0及於2 0 0 0 ml燒杯内Μ快轉攪拌器於lOOOOrpm攪拌。3ml氡基丙烯酸 丁醋藉攪拌徐徐（1 0分鐘）滴加入溶液內。所生成之擞膠 囊又持續攪拌60分鐘。然後懸浮液於分液漏斗内浮選2日 5排放下沈液而上清液補充以蒸餾水至1 0 0 m 1 。懸浮液含 11 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（_\。） 有大小約0.1-之充氣音波活性徽膠囊，若有所需藉額 外浮選或過濾可將粒徑進一步濃縮（如濃縮至0.5 -m)。微膠囊之膠囊壁包含約55% (M/M)多胜眯類和約45% (M/M)聚氰基丙烯酸丁酯。無需添加界面活性佐劑，粒子 可勻散於水中。粒子不易聚集。藉加入適當佐劑（如葡萄 糖，氯化納，甘露糖醇，乳糖，半乳糖）可將懸浮液調整 為等張。 若有所需懸浮液可經凍乾俾提高儲存安定性而未喪失其 作超音波研究之對比介質之合適性，較好於加入低溫保護 劑（如轧糖，聚乙烯基吡咯嗣，甘露糖醇，甘胺酸）後凍 乾0 窨例2 5 0 0 m g聚-L -離胺酸（M G 5 0 0 0 )溶解於2 0 m 1蒸餾水並以磷 酸鹽緩衝液調整至P Η 4 . 5 。加入1 0 0 m g丙烯酸甘油I旨，混 合物於冷卻至2 0 °C下以快轉攪拌器攪拌。加入1 0 m g過氧二 硫酸銨和0.1ml Ν,Ν,Ν’，Ν’-四伸甲基二胺。又搜拌90分鐘 :所得充氣徽膠囊藉浮選分離。徽膠囊之粒徑介於0.2與 丨3 u m間。 富钏3 7 . 5 g聚明膠溶解於2 0 0 m 1水供注射用。溶液Μ隣酸調整 至Ρ Η 3 . 0並補充Μ注射用水至3 0 0 m 1 。溶液通過0 , 2 2 w tn 過濾膜過濾滅菌並Μ快轉溶解器於6000γ·ρπι攪拌。於攪拌 下徐徐滴注1 . 5 m 1氰基丙烯酸異丙酯與1 . 5 m 1氰基丙烯酸 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） - i (I (請先閱讀背面之注意事項再禎寫本頁)

.-killF 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 B7 五、發明説明（i / ) 丁酯之混合物。持續攪拌1 2 0分鐘。所生成之懸浮液於分 液漏斗內浮選3日。其餘操作過程相當於實洌1 .。所得饋 膠囊含有氣體。其適甩作超音波研究之對比介質。其壁材 包含約2 2 % ( Μ / Μ )生物聚合物，約4 0 % (Μ / Μ )聚氰基丙烯 酸丁酯，和約3 8 % ( Μ / Μ )聚氰基丙烯酸異丙酯。微膠囊可 無需添加界面活佐劑即勻散於水且未聚集。粒徑約為 實例4 - 1 0 g人血清白蛋白溶解於2 0 0 m 1注射用水。溶液Μ鹽酸 調整至Ρ Η 4 . 0並補充Μ注射甩水至30 0 m 1 。溶液通過 0 . 2 2 w m過濾膜過滹滅菌並Μ快轉溶解器於1 0 0 0 0 r p m攪拌 。於攪拌下徐徐滴注2ml氰基丙烯酸異丙酯。持續攪拌 60分鐘。所生成之懸浮液於分液漏斗內浮選3日。其餘操 作過程相當於實例1 。所得微膠囊含有氣《。其適用作超 音波研究之對比介質。其壁材包含約3 0 % ( M / Μ )人血清白 蛋白，和約70%(Μ/Μ)聚氰基丙烯酸異丙酯。微膠囊可無 需添加界面活性佐劑即勻散於水且未出現聚集。粒徑平均 約為 0.2-3w m。 冒例！5 250ml氧聚明膠溶液Μ鹽酸調整至pH2.5並補充以注射 用水至3 0 0 m 1 。溶液通過0 . 2 2 w ra過濾膜過遽滅菌並以抉 轉轉子-定子-攪拌器於8 0 0 0 r pm攪拌。於攪拌下徐徐滴 注3 m 1氰基丙烯酸丁龍。持續攪拌9 0分鐘。所生成之懸浮 -13 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填^本頁) 裝· 訂 線 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 B7 五、發明説明（丨> ) 液於分液漏斗內浮選3日。其餘操作過程相當於實例1 。 所得微膠囊含有氣體。其適用作超音波研究之對比介質。 其壁材包含約2 5 % ( M / Μ )氧聚明膠和約7 5 % ( M / Μ )聚氰基 丙晞酸丁酯。徽膠囊可無需添加界面活性佐劑即勻散於水 且未出現聚集Ό粒徑平均約為0 . 2 - 4 w m。 窨例β 5 0 0 m g纖維連接素（f i b r ο n e c t i η )溶解於5 m 1蒸餾水並 M鹽酸調整至P Η 3 . 5 。溶液通過Ο . 2 2 w m過濾膜過濾滅菌 並使用快轉轉子-定子-攪拌器於冷卻的1 5 m 1容器（1 5 °C )內於8 0 0 0 r p m攪拌。於攪拌下徐徐滴注0 . 3 m 1氰基丙烯 酸丁齒。持續攪拌90分鐘。所得懸浮液於分液漏斗內浮選 3日。上清液懸浮於2 m i注射用水其中含有1 0 0 m g甘露糖 醇。.懸浮液Μ振搖於-50Ό 冷凍及凍乾。使用前撤膠囊Κ 2 m 1注射用水再度勻散。徽膠囊粒徑平均為0 . 8 /i m。其適 用作超音波研究之對比介質。微膠囊之壁材包含約3 5 % (M / Μ )纖維連接素和約6 5 % ( M / Μ )聚氰基丙烯酸丁酯。 富例7 1 Ο Ο πι g抗纖维蛋白抗體溶解於4 nd磷酸II緩衝寂 (P Η 4 . 5 )。溶液通過Q . 2 2 w m過濾膜過濾滅菌並於雙層壁 式攪拌器容器（容量1 0 m 1 )內使用快轉式溶解器-攪拌器 於冷卻下於6000rpm攪拌。攪拌中緩慢滴注0.2ml氣基丙 烯酸丁酯。持續攪拌60分鐘。所得懸浮液於分液漏斗內浮 選2日。排放下沈液，上清液與2 0 0 m g乳糖和2 m 1注射用 -14 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ----------裝— - (請先閲讀背面之注意事項再禎寫本頁 丁 -線 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（1多） 水琨合。懸浮液於冷浴中於-40 °C冷凍伴以振搖，然後凍 晶乾燦。使用前微膠囊M2ral注射用水再度懸浮.。徽膠+囊 內充氣適用作超音披研究之對比介質。粒徑平均約為1w m '微膠囊壁材包含約20% (M/M)抗體和約80% (M/M)聚 氰基丙烯酸丁酯。 富例8 1 5 g聚明膠溶解於5 0 m 1注射，用水，於p Η控制下逐滴加入 2 Ν氫氧化納溶液°緩慢加入總計2 g二乙§|酸酐及ρ Η维持於 7 , 5至8 . 0間。反應完成後藉反複超濾（排除限度 M G 1 0 0 0 )而由溶液中去除過量二乙醇酸。藤化 Ρ ο 1;/ g e 1 i n e溶液補充Μ注射用水至3 0 0 m 1及通過0 . 2 2 w m 過濾膜過瀘。徐徐加入3 m 1氰基丙烯酸丁酯伴以於 1 0 0 0 0 r p m攪拌。添加完成後，持續搅拌6 0分鐘。所得充氣 微膠囊藉著於1 5 0 0 r p m離心（3 0分鐘）分離並攝入5 0 m 1注射 用水。微膠囊無需加入界面活性佐劑即可勻散於水中而未 聚集。粒徑約為0 . 1 - 6 w m。微膠囊壁材包含約4 5 % ( M / Μ ) _化Ρ ο 1 y g e 1 i n e和約5 5 % ( Μ / Μ )聚氰基丙烯酸丁諸。 霄例9 2 0 m 1根據實例3生產之充氣微粒攝入2 0 m 1 p Η 4 . 5之磷酸 鹽緩衝液内。懸浮液於4 °C (1 0 0 r ρ m)攪拌及將2 5 in g ( 3 -二 甲基胺基丙基）-N ’ -乙基甲二庭亞胺-H C 1加入混合物内。 60分鐘後25mg纖维連接素（事先溶解於1 〇m 1磷酸a緩衝液 )加入微膠嚢懸浮液内。於4 °C攪拌<5 〇分鐘又於室溫攪拌 -15" 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 装. 訂 A7 B7 五、發明説明（ 120分鐘。然後，懸浮液對pH4.5之磷酸鹽緩衝液滲析三 次（排除限度MG 1 000 )及於分液漏斗内浮選2日。上清液 攝入2 0 m U主射用水，與5 %聚乙烯基吡咯酮（m / V :)混合， 於-40°C冷凍伴Μ振搖及凍晶乾燥。 富例1 0 實例9之凍乾產物以2 0 m 1 5 %葡萄糖溶液再懸浮。其中 0 . 1 m 1加入1 0 m 1 3 7 °C之P B S溶液內，溶液含有新製的纖維 蛋白凝塊（直徑1 m m )。於水浴牛培育1 0分鐘伴Μ振搖後， 移出凝塊，Μ各1 〇 m 1 P B S ( ρ Η 7 . 4 )洗五次然後作聲譜方面 研究。在色彩都卜勒（D ο ρ ρ 1 e r )可明白偵測知黏性微膠囊 的信號。程序與實例3之粒子相同（而未與實例9所示之 纖维連接素反應）。而於凝塊之聲譜方面研究中未檢知黏 性微膠囊（也在色彩都卜勒）。 請 先 閲 讀 背 意 事 項 再 寫 本 頁 裝 訂 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 富例1 1 5 m 1根據實例3生產之充氣跆粒攝入5 ro 1 p Η 4 . 5之磷酸 .鹽緩衝液内。懸浮液於45C (lOOrpm)攒拌及將10mg (3 -二 甲基胺基丙基：）-N ·-乙基甲二i畜亞胺-H C 1加入混合物内。 5分鐘後3 5 m g抗纖维蛋白抗體（第0 5 4 1號純株Ε 8 , I m m u η 〇 t e c h ，法國馬賽）（事先溶解於1 m 1隣酸盩緩衝液 )加入徵膠囊懸浮液內。於4=0搜拌60鐘又於室溫攪拌 120分鐘。然後，懸浮液對PH4.5磷酸鹽媛衝液滲析三次 (排除限度M G 1 0 0 0 )及於分液漏斗内浮選2日。上清液攝 入2 ra 1注射用水，與5 % 聚乙烯基吡咯酮（m / V )混合，於 16 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ^ΞΗΒΕ2ι\ 線 A7 B7 五、發明説明（ί/) -4 0 ;C 冷凍伴Μ振搖及凍晶乾燥。 窨例1 ? ，實例1 1之凍乾產物Μ 2 m 1 5 % 葡萄糖溶液再度懸浮=其 中0 . 1 m 1加入1 0 m 1 3 7 t之P B S溶液內，溶液含有新製的纖 維蛋白凝塊（直徑1 m m )。於水浴中培育1 0分鐘伴Μ振搖後 ，移出凝瑰Μ各1 0 m 1 P B S ( ρ Η 7 . 4 )洗五次然後作聲譜方面 研究。在色彩都卜勒（D ο ρ ρ 1 e r )可明白偵測知黏性微膠囊 的信號。程序與實例3之粒子相同（而未與實例1 1所示之 抗纖維蛋白抗體反應）。而於凝瑰之聲譜方面研究中未檢 知黏性徽膠囊（也在色彩都卜勒）。 奮例1 於類似實例11之實驗组合中對0 . 1 m 1實例6之經再度懸 浮的粒子檢視其纖維蛋白黏合情形。聲譜方面研究中可明 白檢測得與凝塊结合的微膠囊。 富例1 4 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 於類Μ實例1 1之實驗姐合中對0 . 1 m 1實例7之經再度懸浮 的粒子檢視其纖維蛋白黏合情形。聲譜方面研究中可明白 檢測得與凝瑰结合的徽膠囊。 富例1 5 1 0 m 1根據實例8生產之徽膠囊攝人1 0 m 1 p Η 4 . 5之磷酸K 緩衝液内及加入2 0 m g 1 -羥苯駢三唑。冷卻至4 °C 後經攪 -17 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（/έ) 拌加入10mg (3 -二甲基胺基丙基）-Ν· -乙基甲二醒亞胺 -H C 1。於4 °C持續搜拌6 0分鐘。然後又於室溫攪拌6 〇分鐘 。於室溫將1 0 m g胰酶明（P a n c r e 〇 z y m ί η )(事先溶解於5 m 1 磷酸藍緩衝液）加入懸浮液内。懸浮液於室溫攪拌1 2 0分 鐘。然後，懸浮液對PH4.5之磷酸鹽緩衝液滲析三次（排 除限度M G 1 0 0 0 )及於分液漏斗内浮選2日。上清液攝入 1 0 m 1注射用水，與5 %聚乙烯基吡咯酮（m / V )混合，於-4 0 °C冷凍以振搖及然後凍晶乾燥。

實例1 R 實例1 5之凍乾產物K 1 0 m 1注射甩水再度懸浮。0 . 1 m 1懸 浮液打入大鼠尾靜脈。1 0分鐘後取出胰臟於水浴中進行聲 譜方面研究。於色彩都卜勒可檢測得徽膠囊之超音波信號 管例1 7 5 m 1根據實洌3生產之充氣徽粒攝入5 m 1 p Η 4 . 5之磷酸 鹽缓衝液内。懸浮液於4 °C (1 0 0 r ρ m )攪拌及將1 0 m g ( 3 -二 甲基胺基丙基）-N ’ -乙基甲二藤亞胺-H C 1加入混合物：5 分鐘後5 m g t P A (事先溶解於1 0 m 1磷酸鹽緩衝液）加入微 膠囊懸浮液内。於4t：持續攪拌24小時。然後，懸浮液對 p Η 4 . 5之磷酸緩衝疲滲析三次（排除限度MG 1 0 0 0 )，及於 分液漏斗內浮選二日。上清液攝入2ml注射用水。 霄例1 8 -18 _ 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） --------—^! (請先閱讀背面之注意事項再填貧本頁) 訂 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（/ 7) 製成二纖維蛋白凝瑰（各重約5 0 in g )力D入2 0 m 1血漿內。 根據實例1 7生成的0 . 0 5 in 1粒子懸浮液加至凝塊。1 0分鐘後 由血漿中取出凝塊，聲譜方面研究中於色彩都卜勒出現黏 性徽膠囊信號。 窨例1 0 . 6 g明膠溶解於2 0 m 1磁鐵礦粒子水懸浮液《'約2 0 m m ο 1鐵 / m 1，粒子直徑約2 0 n m )内。溶液Μ鹽酸調整至p Η 3 。Μ 搜拌（3 0 0 0 r p m )緩慢加入0 . 2 ηι4氰基丙烯酸異丁酯：添加 完成後持續攪拌9 0分鐘。離心懸浮液（2 0 0 0 r p m，6 0分鐘 )。拋棄上清液，下沈液攝入1 0 m 1 p Η 7 . 4之P B S (1 0 in m ο 1 ) 内。懸浮液冷卻至4 °C 並以攪拌（1 Ο 0 r p m )加入10 mg ( 3 -二甲基胺基丙基）-N ’ -乙基甲二瞌亞胺-H C 1。於4 t〕持 續攪拌60分鐘。然後加入5mg抗纖維蛋白抗體（第0541號 純株.E 8，I in m u η 〇 t e c h，法國馬賽），於4 f 持續攪伴6 0分 鐘然後於室溫援拌1 2 0分鐘。懸浮液對ρ Η 7 . 4之 P B S ( 1 0 m m ο 1 )超滹（排除限度M G 5 0 0 0 )五次。然後，離心 懸浮液（2 0 0 0 r· p m，6 0分鐘）。下沈液攝入5 nt 1注射周水其 含有5 %甘露糖醇（tn / V )並通過5 w m過瀘膜過濾。遽液於 -4 0 °C 冷凍然後凍晶乾燥。 奮例？ 0 1 5 g明膠（3 0 0朵花）於8 Ο 溶解於1 5 0 m 1注射用水。冷 卻後溶液Μ 0 . 1 N H C 1調整至p Η 2 . 5及補充JiU主射用水至 3 0 0 m 1 。溶液經高壓加熱（製程A 1 2 1，德國藥典第9版） -19 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填'寫本頁) -裝_ 訂 線 394688 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（丨3 ) 。經高壓加熱的溶液之p Η經控制且若有所需調整至p Η 2 . 5 3 Μ攪拌將3 m 1氰基丙烯酸異丁酯加入溶液内°持續搜拌 9 0分鐘。所生成之徽膠囊懸浮液於1 〇 〇 〇「P >«離心6 0分鐘， 上清液攝入5 0 m 1注射用水並於1 〇 〇 〇「i> m再度離心6 0分鐘。 如此計重複5次。末次離心之上清液攝入5 0 m 1 P B S (p Η 7 . Ο )並Κ攪拌加入Ο . 1 m g固體二伸乙基三胺五乙酸二酐（ 參見：Hnatowich et al. (1983) S. c_Le』c_s_ 2.2..0 : 613)。 攪拌5分鐘。懸浮液於1 0 〇 〇 r p m離心6 0分鐘，上清液攝入 5 0 m 1注射用水内。對注射用水雜心又重複4次。末次離心 之上清液以5 0 m 1注射用水攝取並通過過滤柱藉孔徑7 0 ’ 4 0，2 0和ί〇 w m之H D C孔隙過滤膜過丨慮。濾液含有約2 X 1 〇 s 粒子/ ra 1其表面有DTPA基。平均粒徑約為2 a m。粒子可藉 已知方法標_ Μ放射性金屬離子（如I η - 1 11或T c - 9 9 )。 冒例？ 1 . 纖維蛋白凝瑰作聲頻應用範例，僅使用伽瑪計數器偵測 而非都卜勒。m m 22 7 . 5 g Ρ ο 1 y g e 1 ί n e於3 Ot溶解於1 5 0 m 1注射用水。冷卻 後溶液Μ 0 . 1 N H C 1調整至p Η 3及補充Μ注射用水至3 0 0 m 1 。溶液經高壓加熱（製程A 1 2 1，德國藥典第9販）。經高 壓加熱的溶液之P Η經調整至p Η 2 。K攪拌將3 m 1氰基丙烯 酸異丁酯加入溶液內。持續攪拌9 0分鐘。所生成之截膠囊 懸浮液於1 0 0 0 r P m離心6 0分鐘，上清液攝入5 0 ra 1注射用水 -20 - ----------- " A “ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 線 參 .ir 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

市许離ί丨、、6 0分鐘。如此自十重複5次。末次離 並於1 0 0 0 r P m再度離心、b ϋ对理 ^ 1 DR^inH? 0)内並冷卻主4 C 。於4 心之上清液攝入5〇ml PBS(pH(.〇) u =C Μ攪拌加入50^鍵_菌抗生物素及5nS EDC 。持續攪拌 1小時。懸浮液離心3次（1〇〇吖㈣，60分鐘）。各次離 # 1「λ 1 PR$ir>H7 0 lOmrool 鱗酸發〉內。根 心後上清液攝入5〇ml PBS(plw• ’ • η- r-h Pt a 1 Nuc 1 · Med . 2A( 1 987 ), 據 D. J. Hnatovitch et ai.， 1294- 1 302之方法，抗纖維蛋白抗體M 1 : 5箅耳比標織以 硫基丁二_亞胺基-δ-(生物素醯胺基）_己酸鹽（NHS_LC -生物素）。 _ I---------裝--. -I (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作衽印製 冒例2 3 0 . 5mS實例22之經以生物素標崎的抗纖維蛋白抗體經靜 脈注射入兔體，兔接受含膽固醇之膳食。3小時後注射實 例22之粒子。10分鐘後由先殺死的動物體取出頸動脈’粥 瘤硬化動脈切片於水浴中於都卜勒模式下檢視對比介質信 號。可清楚檢知黏性粒子的聲頻信號。 富例？d a ) 2 0 m 1根據實例8生產的徽膠囊懸浮液Μ 5 m丨鱗酸IS IS 衝液調整至Ρ Η 4 . 5 ，然後與.5 〇 mg 1 2 5 I標幟的抗纖维蛋白 抗體（5 w C ί )混合。於4 °C以、攪拌將5 0 0 m g ( 3 -二甲基胺基 丙基）-N，-乙基甲二醯亞胺H C 1加入反應混合物内c然後 於冷卻下持續搜拌8小時，藉離心分離徽膠囊，每次Μ 2 〇 m 1注射用水總共洗3次，個別洗滌過程之方式為粒子再 度懸浮於水中然後離心.。末次洗滌過程後粒子再度懸浮於 21 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X 297公釐） 訂 -線 _ -e—isB-- 394688 A7 B7 五、發明説明（W) 2 0 m 1注射用水。 抗體與粒子之结合程度使用伽瑪計數器基於1 2 5】活性測 定。然後測知抗體之原始用量之9 3 %與粒子表面永久结合 0 b )根據D E 3 8 0 3 9 7 2實例4產製之徽膠囊以對應實例 24a)之數量與5〇mg125I標幟的抗纖維蛋白抗體’（5 w Ci)於 完全相同的條件下反應。 比較其與根據實例2 4 a )粒子之结合程度顯示顯著較低值 .,僅為1 %。 - ---------—装-- ^ 0 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 丁 、-'° —線 β 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -22 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）

Claims (1)

1. 經濟部中央榇準局員工消費合作社印製 六、申請專利範圍 394688 1. 一種生物可降解共^物_之供诊斷及/或治療用之微膠囊 ，其特徵在於：壁材料由一種由至少一種合成聚合物材 料及至少一種生物聚合物所組成之共聚物製成，該合成 聚合物材.料係由單體糸丙稀酸，丙稀_胺，丙希藤氯， 丙烯酸甘油酯或單體糸烷基氰基丙烯酸酯製成，而該生 物聚合物，其 .a )可展現位置特異性、结搆特異性或組織特異性，或 b)具有官能基，藉其位置特異性、结構特異性或組織特 異性物質结合； - 且其中膠囊芯由氣體或氣體混合物组成 其限制條件為：該合成聚合物材料非由可聚合的醒類製 備，且該情況需要可由生物聚合物之官能基结合的位置 特異性、结構特異性和組織特異性物質為：抗體，共軛 接合抗體*激素，轉移鐵素（transferrin)，纖維連接 素•肝素*.轉移氰鈷鞍明（transcobalamin)，表皮生長 因子，脂蛋白，血漿蛋白，胜肽或寡胜妝，其較好含有 胺基酸序列RGD，RGDS.RGDV或RGDT;生物聚合物對合 成聚合物之重量比係在1 0 : 9 0至8 0 : 2 0之範圍；及微膠 囊大小為0 . 5至8微米。 2 . 根據申請專利範圍第1項之微膠囊，其中該生物聚合物 為視情況需要可經糖基化之多胜肽，較好為白蛋白，纖 維蛋白原，纖維連接素（f i b r ο n e c t i η )或膠原分解產物 較好為明膠，polygeline，氧聚明膠，或聚-L-離胺酸 0 3· 根據申請專利範圍第1項之微膠囊，其中該生物聚合物為 -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） --E---Γ------ 礴 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、YS Jm

   經濟部中央榇準局員工消費合作社印製 六、申請專利範圍 394688 1. 一種生物可降解共^物_之供诊斷及/或治療用之微膠囊 ，其特徵在於：壁材料由一種由至少一種合成聚合物材 料及至少一種生物聚合物所組成之共聚物製成，該合成 聚合物材.料係由單體糸丙稀酸，丙稀_胺，丙希藤氯， 丙烯酸甘油酯或單體糸烷基氰基丙烯酸酯製成，而該生 物聚合物，其 .a )可展現位置特異性、结搆特異性或組織特異性，或 b)具有官能基，藉其位置特異性、结構特異性或組織特 異性物質结合； - 且其中膠囊芯由氣體或氣體混合物组成 其限制條件為：該合成聚合物材料非由可聚合的醒類製 備，且該情況需要可由生物聚合物之官能基结合的位置 特異性、结構特異性和組織特異性物質為：抗體，共軛 接合抗體*激素，轉移鐵素（transferrin)，纖維連接 素•肝素*.轉移氰鈷鞍明（transcobalamin)，表皮生長 因子，脂蛋白，血漿蛋白，胜肽或寡胜妝，其較好含有 胺基酸序列RGD，RGDS.RGDV或RGDT;生物聚合物對合 成聚合物之重量比係在1 0 : 9 0至8 0 : 2 0之範圍；及微膠 囊大小為0 . 5至8微米。 2 . 根據申請專利範圍第1項之微膠囊，其中該生物聚合物 為視情況需要可經糖基化之多胜肽，較好為白蛋白，纖 維蛋白原，纖維連接素（f i b r ο n e c t i η )或膠原分解產物 較好為明膠，polygeline，氧聚明膠，或聚-L-離胺酸 0 3· 根據申請專利範圍第1項之微膠囊，其中該生物聚合物為 -23 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） --E---Γ------ 礴 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、YS Jm 394688 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 具位置特異性、结構特異性和組織持異性之多胜狀。 4. 根據申請專利範圍第1 - 3項中任一項之徽膠囊，像供超 音波診斷用，其中該壁材料包含一種氣體，較佳為空氣 ，氮，二氧化碳，氧，k，氖，氬，氪或此等氣體中之 至少兩者之混合物。 5 . 根據申請專利範圍第1 - 3項中任一項之微膠囊，其中該 由生物聚合物官能基结合的基圑為螯合作用配合子。 6. 根據申請專利範圍第1 - 3項中任一項之微膠囊，含有伸 乙基二胺五乙酸基團或其衍生物作螯合配合子。 7 . 根據申請專利範圍第1 - 3項中任一項之徽膠囊，其中該 由生物聚合物官能基结合的基圑為金_離子之螯合錯合 物。 ^ 8 . 根據申請專利範圍第7項之微膠囊，其中該與錯合物结合 的金屬離子為順磁性者，較佳為釓離子。 9 . 根據申請專利範圍第7項之徽膠囊，係供N MR診斷甩。 I 0 .根據申請專利範圍第7項之微膠囊，其中該與錯合物结 合的金屬離子為放射性同位素，較佳為3 θ m #或1 11銦 離子。 II .根據申請專利範圍第1 0項之微膠囊，係供閃爍光譜術用 -24 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 丨-?---Γ----^^—丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 394688 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 具位置特異性、结構特異性和組織持異性之多胜狀。 4. 根據申請專利範圍第1 - 3項中任一項之徽膠囊，像供超 音波診斷用，其中該壁材料包含一種氣體，較佳為空氣 ，氮，二氧化碳，氧，k，氖，氬，氪或此等氣體中之 至少兩者之混合物。 5 . 根據申請專利範圍第1 - 3項中任一項之微膠囊，其中該 由生物聚合物官能基结合的基圑為螯合作用配合子。 6. 根據申請專利範圍第1 - 3項中任一項之微膠囊，含有伸 乙基二胺五乙酸基團或其衍生物作螯合配合子。 7 . 根據申請專利範圍第1 - 3項中任一項之徽膠囊，其中該 由生物聚合物官能基结合的基圑為金_離子之螯合錯合 物。 ^ 8 . 根據申請專利範圍第7項之微膠囊，其中該與錯合物结合 的金屬離子為順磁性者，較佳為釓離子。 9 . 根據申請專利範圍第7項之徽膠囊，係供N MR診斷甩。 I 0 .根據申請專利範圍第7項之微膠囊，其中該與錯合物结 合的金屬離子為放射性同位素，較佳為3 θ m #或1 11銦 離子。 II .根據申請專利範圍第1 0項之微膠囊，係供閃爍光譜術用 -24 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 丨-?---Γ----^^—丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製