KR100287975B1 - 생분해성 공중합체로 제조된 미립자 제제 - Google Patents

생분해성 공중합체로 제조된 미립자 제제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 진단 및 치료용, 특히 초음파 진단용 생분해성 공중합체로 제조된 미립자 제제, 및 그의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

생분해성 공중합체로 제조된 미립자 제제
본 발명은 특허 청구의 범위에서 청구한 것, 즉 생중합체, 중합 가능한 단량체, 활성 성분 및(또는) 진단적으로 검출가능한 성분으로부터 제조된 미립자, 그의 제조 방법, 및 진단 및 치료에서의 그의 용도, 특히 초음파 진단에서의 조영 매질로서의 그의 용도에 관한 것이다.
직경이 적혈구 크기 이하인 입자는 순환계 경로에 주입된 후, 순환계 내에서 순환할 수 있다는 것이 공지되어 있다. 따라서, 이러한 미립자의 제약 제제는 의약의 활성 성분 또는 진단제용으로 순환계 내에 주입가능한 비히클 시스템으로 적합하다. 비히클 물질로는, 원칙적으로 모든 생분해성 물질, 적합성인 물질 및 비수용성 물질이 적합하다. 지금까지 특히 지방, 왁스, 지질 (예, 대두 레시틴), 변성 생중합체 (예, 알부민, 젤라틴) 및 합성 생분해성 중합체 (예, 폴리락트산, 폴리히드록시부티르산, 폴리알킬시아노아크릴레이트, 폴리-L-리신)이 개시되었다.
순환계 경로에서 순환하는 미립자가 단구 식작용 시스템 (monocytic phagocytizing system)(MPS)의 세포에 의해 그의 물리 및 화학 특성들의 함수로서 얼마나 급속히 그리고 어떠한 수효로 인식되고, (주로 간, 폐 및 비장에서) 용해되는 지에는 차이가 있다. 입자 전하, 입자 크기, 흡착된 물질의 입자 표면상의 특성들 (분자량, 앰피필리아 (amphiphilia)), 및 피브로넥틴, 알부민 등과 같은 혈성분에 대한 입자 표면의 친화도는 MPS의 세포가 미립자를 흡수하는 동력학을 결정하는 필수 인자로 여겨진다. 미립자의 표면 물리화학적 특성의 구체적인 변화에 의해 식작용의 동력학은 MPS의 세포와 대응 기관 (간, 폐, 비장, 골수) 내 입자의 농도의 정도에 의해 영향받을 수 있다 (수동 목표). 이런 식으로는 RES의 기관 중에 있지 않는 목표 조직 또는 신체 구조물 중의 미립자의 농도는 구체적으로는 불가능하다. 오히려 이것은 미립자를 위치-특이성, 구조-특이성 또는 조직-특이성인 결합성들을 갖는 물질 (귀착 장치 (homing device))와 조합하므로써만 달성할 수 있다. 그러나, 전술한 초음파 진단용 입자는 귀착 장치와의 조합에 적합한 제제로서는 적합성이 불충분할 뿐이다.
따라서, 유럽 특허 제0 458 079호와 독일연방공화국 특허 제38 03 972호에 기재된 조영 매질의 경우에 있어서, 이들은 환경 보호와 작업장 안전성을 이유로 사용하는 것이 유해한 유기 용매를 사용할 필요가 있는 값비싼 공정을 사용해서만 제조할 수 있다는 것을 받아들여야 했다. 또한, 제제를 사용하기 전, 사용된 유기용매가 제약학상 사용될 제품에 더 이상 함유되지 않는다는 보장이 있어야 했다. 또한, 표면-활성 보제제 (예, 계면활성제)는 빈번히 제품에 필요했는데, 이는 주사제의 경우에 유해한 것으로 여겨진다. 또한, 여러 기관의 농도 행태의 제어는 이들 입자의 경우에 조절될 수 없고, 독일연방공화국 제38 03 972호의 입자를 선택적으로 누적되는 화합물 (예를 들면, 모노클론 항체와 같은 소위 귀착 장치)와 결합하는 것은 불가능하다.
또한, 독일연방공화국 제40 04 430호에 기재된 중합된 알데히드로 제조된 미립자는 생분해성이 명백하지 않으므로 물질-특이성 또는 구조-특이성 물질용 비히클로 적합하지 않다. 또 다른 결점은 이 경우에 있어서도 입자를 제조하는데 표면-활성 보제제가 필요하다는 것이다.
유럽 특허 제0 224 934호에 기재된 단백질, 특히 알부민으로 제조된 미립자는 시험관내 및 생체내 안정성이 단지 매우 낮은 것으로 나타난다.
따라서, 본 발명의 목적은 생리적으로 유해한 용매 또는 보제제 (예, 계면활성제)를 사용하지 않고 수득되고, 용이하게 제조가능하고 생분해성이고, 벽 (wall) 재료 중 위치-특이성, 구조-특이성 또는 조직-특이성인 결합성들을 갖는 물질을 함유하거나 또는 이들과 공유적으로 결합될 수 있고, 시험관내 및 생체내 안정성을 충분히 나타내는, 특히 초음파 진단용 미립자를 제공하는 것이다.
본 발명에 따르면, 이러한 목적은 그의 외피 (shell)가 생중합체 (바람직하게는 (또한 글리코실화) 폴리펩티드)와 제조 공정 동안 중합되는 합성 물질을 조합하여 형성되는 미립자에 의해 성취될 수 있다.
따라서, 1종 이상의 합성 중합체와 1종 이상의 생중합체의 공중합체로 제조된 미립자가 본 발명의 목적이고, 합성적으로 또는 부분 합성적으로 제조되거나, 또는 예를 들면, 알부민, 교원질 분해 생성물, 젤라틴, 피브리노겐, 피브로넥틴, 폴리젤린, 옥시폴리젤라틴 등의 생중합체와 같은 유전 공학에 의해 수득되는 폴리펩티드, 바람직하게는 천연의 폴리펩티드, 그의 분해 생성물 및 폴리-L-리신이 적합하다. 또한 생중합체가 글리코실화될 수 있다. 중합가능한 단량체로는, 바람직하게는 알킬시아노아크릴레이트, 아크릴산, 아크릴아미드, 아크릴산 클로라이드 및 아크릴산 글리시드 에스테르가 적합하다.
본 발명에 따른 미립자는 특히 초음파 연구용 조영 매질로서, 기체를 함유시켜 기체-포화된 용액으로 제조하는데 적합하다. 이들은 함유된 기체로 인해 초음파 분야에서 매우 효과적인 산란 요소로 작용한다. 또한, 이들은 진단적 초음파에 의해 여기에서 독립 신호를 방사할 수 있고, 예를 들어, 칼라 도플러 (color Doppler) 기법에 의해 평가될 수 있다.
기체로는, 공기, 질소, 이산화탄소, 산소, 헬륨, 네온, 아르곤, 크립톤 또는 이들의 혼합물이 적합하다. 개별 기체 또는 기체 혼합물로 포화된 수용액으로 입자를 제조하여 대응하는 기체 또는 기체 혼합물로 충전한다.
또한, 미립자는 (임의로는 추가로) 자기 공명 단층촬영법, 자기 공명 분광학, 신티그래피 또는 적합한 자력계 (생자성)으로 고감도 자기장의 측정과 같은 의학적 진단 방법을 사용하여 검출가능한 다른 물질을 함유할 수 있으며, 벽 재료로 미세 캡슐화되고, (임의로 예를 들면, 킬레이트화제와 같은 적합한 물질에 의해) 벽 재료와 커플링된다. 따라서, 예를 들면 방사성 동위원소를 사용하는데 있어서, 신티그래피에서 본 발명에 따른 미립자를 사용하는 것이 가능하다. 마찬가지로, 적합한 파라-, 슈퍼파라-, 페리- 또는 페로자성 물질들로 된 벽 재료로 미세 캡슐화시키거나 또는 상기 벽 재료 중에 혼입시킴으로써, 자기 공명 단층촬영법, 자기 공명 분광학에 있어서 또는 자기장 측정에 있어서 조영 매질로 이것을 사용하는 것이 가능하다.
놀랍게도, 본 발명자들은 본 발명에 따른 입자의 제조에 있어서 (생중합체의 농도를 충분하게 유지시키는데 있어서), 예를 들면 계면활성제와 같은 표면-활성 물질을 첨가할 필요가 없다는 것을 밝혀내었다. 보통은 계면 장력을 감소시키고 입자 응집을 방지하는데 필요한 계면활성제는 생리적으로 유해하다고 여겨지므로 유기체에 사용하기 전에 제제로부터 다시 적합성인 잔류 함량까지 제거되어야 하기 때문에, 합성 중합체 기재의 미립자의 공지된 제조 방법과 비교하는 경우 이것은 결정적인 장점을 나타낸다.
본 발명에 따른 미립자 제제의 추가의 장점으로는, 개별 사용에 부합될 수 있고, 여러 제조 변수를 변화시켜 용이하게 조절할 수 있는 다양한 입자 특성을 언급할 수 있다. 따라서, 미립자 제제의 제약동력학 (pharmacokinetic) 변수 (기관 분포, 순환계 경로에서의 체류 기간)은 개별적으로 사용된 생중합체의 선택에 의하거나 또는 생중합체의 관능기의 변화에 의해 (예를 들면, 숙신산, 디클리콜산, 글루타르산, 말레산 또는 푸마르산 무수물과 같은 디카르복실산 무수물로 아크릴화시키거나 또는 아세트산 무수물 또는 프로피온산 무수물과 같은 모노카르복실산 무수물로 아세틸화시켜) 영향받을 수 있다.
또한, 벽 재료 중 생중합체의 함량을 광범위하게 변화시킬 수 있고, 이에 따라 생체내 캡슐 물질의 생분해 기간에 영향을 미치고 이것을 바람직한 용도에 부합시키는 것이 가능하다. 이 함량은 제조 용액 중 생중합체의 부분으로 직접 조절할 수 있다. 따라서, 예를 들면 벽 재료는 55% (M/M) 생중합체로 제조되고, 1% (V/V) 부틸시아노아크릴산과 5% 젤라틴을 함유하는 압열 멸균 (autoclaved) 수용액으로부터 실시예 1에 따라 제조된, 본 발명에 따른 미립자로 이루어지는 반면에, 2.5% 압열 멸균 수용액으로 제조된 미립자와 부틸시아노아크릴레이트를 동시에 사용하는 것에 대해서 벽 재료는 35% (M/M) 생중합체로 이루어지고, 7.5% 압열 멸균 젤라틴 수용액으로 제조된 미립자에 대해서 벽 재료는 65% (M/M) 생중합체로 이루어진다.
놀랍게도, 본 발명에 따른 미립자는 보통 동결-건조용 골격 형성제로 사용되므로, 락토스, 만니톨 또는 소르비톨과 같은 다른 보제제를 첨가하지 않고 동결-건조 시킬 수 있다. 건조 후, 이들 골격 형성제는 미세 캡슐의 상당 부분의 기계적 파괴를 감당하는데, 더 이상 화상화에 유용하지 않다. 이와는 반대로, 본 발명에 따른 미립자의 경우에 있어서, 과잉량으로 사용되는 벽 재료의 생중합체는 골격 형성제로 사용되고, 이에 따라 놀랍게도 파괴된 미세 캡슐에 대한 본래 미세 캡슐의 비율은 매우 향상된다. 이러한 보다 유리한 비율로 인해, 화상화에 필요한 투여량은 명백하게 감소될 수 있다.
그러나, 본 발명에 따른 미립자는 또한 예를 들면, 불투명제 (초음파 연구용 조영 매질의 경우에는, 기체 또는 기체 혼합물이 이에 포함됨)과 입자 중 1종 이상의 활성 성분이 미세 캡슐화되어, 혼입된 제약학상 활성 성분을 (임의로는 추가로) 함유할 수 있다. 바람직하게는, 활성 성분을 위치-특이성, 구조-특이성 또는 조직-특이성 물질에 대해 기술한 방법으로 벽 재료에 혼입시킬 수도 있다. 활성 성분들이 생중합체인 경우, 이들은 중합가능한 단량체 또는 올리고머를 첨가된 미립자 제제용 초기 물질로서, 기타 적합한 생중합체 (예, 젤라틴, 알부민, 피브로넥틴, 폴리-L-리신)과의 혼합물로 또는 독립적으로 제조에 사용되어 벽 재료 자체를 부분적으로 형성할 수도 있다. 캡슐 물질의 생중합체 부분에 활성 성분을 커플링시키는 특별한 장점은 예를 들면, 캡슐 물질의 생중합체 부분에 펩티드 결합으로 결합되는 활성 성분이 생체내 효소 분해에 의해 방출될 수 있다는 점에 있다.
본 발명에 따른 미립자는 특히 트롬보스 및 동맥 경화의 변화를 검출하거나 또는 처리하는데 사용된다. 이 경우에는, 귀착 장치로서 피브린에 대한 항체 또는 항체 조각, 피브린-결합 혈장 단백질 또는 그들의 부분 구조물, 그들의 조직 플라즈미노겐 활성화제 또는 부분 구조물 (예, 타입 Ⅰ-동족 및 도우넛 서열들), 지방단백질의 단백질 성분 (또한 부분 구조물)이 특히 유리한 것으로 여겨질 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 미립자의 다른 사용 분야는 예를 들면, 호르몬 작용의 진단 또는 치료 (이 경우에는, 귀착 장치로서 펩티드 호르몬 또는 수용체 결합의 가능성을 가진 그들의 변성 생성물을 사용하는 것이 특히 유리한 것으로 여겨짐), 또는 혈관 내피의 병변의 진단 또는 치료 (이 경우에는, 귀착 장치로서 인테그린기물질, 특히 예를 들면, LAM-1, ELAM-1 및 GMP-140과 같은 셀렉틴에 대한 항체 또는 항체 단편의 사용, 또는 인테그린기의 물질, 특히 예를 들면, LAM-1, ELAM-1 및 GMP-140과 같은 셀렉틴에 대한 수용체 또는 그의 결합-부여 단편의 사용이 특히 유리한 것으로 여겨짐)일 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 미립자는 종양의 표면 항원에 대한 귀착 장치로 사용되고 있는 항체 또는 항체 혼합물에 의해 종양을 진단하거나 또는 치료하는데 사용될 수도 있다.
본 발명에 따른 미립자는 적합한 반응성 단량체 또는 올리고머 (예, 시아노아크릴산 부틸 에스테르, 시아노아크릴산 이소부틸 에스테르, 시아노아크릴산 이소프로필 에스테르, 시아노아크릴산 프로필 에스테르, 시아노아크릴산 이소헥실 에스테르, 시아노아크릴산 헥실 에스테르, 시아노아크릴산 메틸 에스테르, 아크릴산, 아크릴아미드, 아크릴산 글리시드 에스테르, 아크릴산 클로라이드)를 적합한 조건(예, pH의 선택, 라디칼의 첨가, 및 UV 조사)하에 제조 용액의 총 부피에 대해 0.01 내지 10% (m/V) (바람직하게는 0.1 내지 10%)의 농도로 0.5 내지 20% (m/V) (바람직하게는 1 내지 15% (m/V))의 농도로 용해된, 예를 들면 알부민, 젤라틴, 옥시폴리젤라틴, 폴리젤린, 피브로넥틴, 폴리-L-리신 등의 생중합체를 함유하는 수상 분산액과 중합 반응시켜 제조한다. 예를 들면, 젤라틴, 폴리젤린 또는 옥시폴리젤라틴과 같은 교원질 분해 생성물을 사용하여, 용액을 압열 멸균시킨 후, 미립자를 제조하는 것이 종종 유리하다. 중합 반응을 완결한 후, 생성된 미립자를 원심분리법, 여과법, 침강법 또는 부유법을 1회 또는 수회 반복하여 밀도와 입자 크기에 따라 분리하고, 임의로 투석에 의해 더 정제하고, 생리 적합성인 현탁제 (바람직하게는, 주사제용 물)로 목적 농도로 현탁시킨다. 현탁액을 예를 들면, 글루코스, 만니톨, 소르비톨, 식염, 갈락토스, 락토스, 프룩토스, 트리할로스와 같은 적합한 수용성 물질을 첨가하여 등장화시킬 수 있다.
제조할 때 전개되는 미립자의 크기 분포는 사용되는 교반 장치의 타입과 회전수에 의해 광범위하게 조절할 수 있다.
기체-충전된 미립자는 바람직한 기체로 포화된 용액 중에서 반응을 행하여 제조한다. 이와 관련하여, 생성된 미립자로 밀도, 즉 벽 재료와 기체 부분 사이의 비율은 제조 과정 동안 교반 조건 및 특히 생중합체의 부분에 의해 조절할 수 있다.
코아가 외피와 동일한 재료로 이루어진 미립자를 수득하고자 할 경우, 제조할때 적합한 교반 장치와 적합한 교반 속도를 선택하므로써 반응 용액에 기포가 발생하지 않도록 하는 점에 주의해야 한다.
RES (귀착 장치)의 기관 바깥의 타겟 필드내의 미립자의 추가 농도를 보장하는, 위치-특이성, 구조-특이성 또는 조직-특이성 물질들과 조합하는데 필요한 능력은 아미노산을 커플링시키는 생화학의 공지된 방법 (예,, R. Geiger: Eine neue Methode zur Synthese von Peptiden: Aktivierung der Carboxylgruppe mit Dicyclohexylcarbodiimid unter Zusatz von 1-Hydroxy-benzotriazolen [A New Method to Synthesize Peptides: Activation of the Carboxyl Group with Dicyclohexylcarbodiimide while Adding 1-Hydroxy-benzotriazoles], Chem. Ber. 103, 788-798 (1970))으로 미립자를 제조하기 전이나 또는 제조한 후에 외피 재료를 공형성시키는 폴리펩티드에 그 물질을 커플링시키거나, 또는 후자가 폴리펩티드를 나타내는 경우 미립자가 위치-특이성, 구조-특이성 또는 조직-특이성 물질의 수용액 중에서 제조됨으로써 발생하여, 그 물질은 외피 재료의 성분으로 직접 사용된다.
미립자에 커플링시키거나 또는 외피 재료를 공형성시킬 수 있는 위치-특이성, 구조-특이성 또는 조직-특이성 물질로는, 바람직하게는 항체, 공역 항체, 호르몬(특히 펩티드 호르몬), 트랜스페린, 피브로넥틴, 헤파린, 트랜스코발라민, 표피 성장 인자, 지방단백질, 혈장 단백질 및 그들의 특이성-부여 부분 구조물 및 RGD, RGDS, RGDV 및 RGDT와 같은 올리고펩티드가 적합하다.
미립자에 커플링시킬 수 있는 킬레이트화 리간드로는, 디에틸렌트리아민펜타아세트산 또는 그의 유도체가 적합하다. 이들 리간드와 입자와의 결합은 문헌[Hanatowich et al., Science 220 (1983) 613]에 공지된 방식으로 수행한다. 그 결과, 입자들은 바람직한 금속 이온과 반응하여 개개의 입자-고정된 금속 복합체가 된다.
사용되는 금속 이온의 선택은 바람직한 사용 영역에 좌우된다. NMR 진단 분야에서, 본 발명에 따라 바람직한 원자 번호 21 내지 29 및 57 내지 70의 원소들의 상자성 금속 이온, 특히 가도리늄 (Ⅲ) 이온이 사용된다. 신티그래피에 사용하기에 적합한 방사성 복사의 방출제로는 바람직하게는111In 또는99mTc,123I 및131I가 사용된다.
마무리된 미립자 현탁액을 각각 소정의 용도에 직접 사용할 수 있지만, 골격 형성제 (예를 들면, 트리할로스, 폴리비닐피롤리돈, 락토스, 만니톨, 소르비톨, 글리신 등)을 첨가하여 저장 안정성을 향상시키고 현탁액을 동결시킨 다음 동결-건조 시키는 것이 유리한 것으로 입증되었고, 이는 또한 강장도를 설정하기 위해 사용할 수도 있다. 골격 형성제로는 그 자체로 과잉으로 사용되는 생중합체를 사용하는 것이 특히 유리한 것으로 입증되었다. 두 경우에서, 침강법 또는 부유법에 의해 동결된 물질 중의 요철상 입자 분포를 방지하기 위해 동결시키는 동안 현탁액을 움직여 주는 것이 적합하다. 동결-건조된 제제로부터 예를 들면, 물, 생리 전해질 용액과 같은 1종 이상의 무기염의 수용액, 글루코스 또는 락토스와 같은 단당류 또는 이당류의 수용액, 만니톨과 같은 당 알콜 등의 제약학상 허용되는 현탁액 매질 중에, 그러나 바람직하게는 주사제용 물 중에 동결 건조물을 재현탁시켜서 즉시 사용가능한 주사용 현탁액제를 제조한다. 임의로 용해되는 물질의 총 농도는 0 내지 20 중량%이다.
즉시 사용가능한 조영 매질의 농도는 현탁액 매질 1 ml당 0.01 내지 20 mg, 바람직하게는 0.5 내지 6 mg의 입자 범위로 설정할 수 있다. 주사되는 투여량은 개별 용도에 좌우된다; 혈관 연구의 초음파 진단 연구에서는 체중 1 kg당 1 내지 500 ㎍, 바람직하게는 10 내지 100 ㎍ 입자 범위이고, 칼라 도플러 소노그래피에 의한 간 및 비장의 연구에서는 체중 1 kg당 50 내지 1000 ㎍, 바람직하게는 200 내지 600 ㎍ 범위이다. 하기 실시예를 들어 본 발명을 설명하고자 한다:
증류수 300 ml 중에 젤라틴 15 g (300 블루움)을 용해시키고, 염산으로 pH를 3.0으로 조정한다. 이 용액을 120 ℃에서 30 분 동안 압열 멸균시킨다. 실온으로 냉각한 후, 이 용액의 pH를 (수산화나트륨 용액으로) 5.0으로 조정하고, 2000ml 비이커 중에서 고속 교반기로 10000 rpm으로 교반한다. 교반하면서 이 용액에 시아노아크릴산 부틸 에스테르 3 ml를 서서히 (10분 동안) 적가한다. 생성된 미립자를 60 분 동안 계속해서 교반한다. 그 다음, 현탁액을 분별 깔때기로 2일 동안 부유시킨다. 침강액을 버리고, 상징액에 증류수를 100 ml까지 보충한다. 현탁액은 크기가 약 0.1 내지 8 ㎛인 기체-충전된, 음파-활성 미립자를 함유하며, 필요한 경우 부유법 또는 여과법을 더 행하여 입자 크기를 더 농축시킬 수 있다 (예, 0.5 내지 3 ㎛). 미립자 물품의 캡슐 벽은 폴리펩티드 약 55% (M/M)와 폴리시아노아크릴산 부틸 에스테르 약 45% (M/M)로 이루어진다. 표면-활성 보제제를 첨가하지 않고도 입자를 물에 분산시킬 수 있다. 이들은 응집하는 경향이 없다. 적합한 보제제 (예, 글루코스, 염화나트륨, 만니톨, 락토스, 갈락토스)를 첨가하여 현탁액을 등장화시킬 수 있다.
필요한 경우, 바람직하게는 예를 들면 락토스, 폴리비닐피롤리돈, 만니톨, 글리신과 같은 동결 방지제를 첨가한 후 현탁액을 동결-건조시켜 초음파 진단용 조영매질로서의 그의 적합성을 잃지 않고도 저장 안정성을 증가시킬 수 있다.
[실시예 2]
증류수 20 ml 중에 폴리-L-리신 500 mg (MG 5000)을 용해시키고, 인산염 완충액으로 pH를 4.5로 조정한다. 이 용액에 아크릴산 글리시드 에스테르 100 mg을 첨가한 후, 혼합물을 20 ℃로 냉각하여 고속 교반기로 교반한다. 이 용액에 암모늄퍼옥시디설페이트 10 mg과 N,N,N',N'-테트라메틸렌디아민 0.1 ml를 가한다. 이 용액을 90 분 동안 더 교반한다. 생성된 기체-충전된 미립자를 부유법으로 분리한다. 미립자의 입자 크기는 0.2 내지 6 ㎛이다.
[실시예 3]
주사제용 물 200 ml 중에 폴리젤린 7.5 g을 용해시킨다. 이 용액을 인산으로 pH를 3.0으로 조정하고, 주사제용 물을 300 ml까지 보충한다. 용액을 멸균을 위해 여과법에 의해 0.22 ㎛ 필터로 여과하고, 고속 용해기로 6000 rpm으로 교반한다. 교반하면서, 시아노아크릴산 이소프로필 에스테르 1.5 ml와 시아노아크릴산 부틸에스테르 1.5 ml의 혼합물을 서서히 적가한다. 120분 동안 계속해서 교반한다. 생성된 현탁액을 분별 깔때기로 3 일 동안 부유시킨다. 추가의 행동 과정은 실시예 1에 대응한다. 생성된 미립자에는 기체가 함유되어 있다. 이들은 초음파 연구용 조영 매질로서 적합하다. 이들의 벽 재료는 생중합체 약 22% (M/M), 폴리시아노아크릴산 부틸 에스테르 약 40% (M/M) 및 폴리시아노아크릴산 이소프로필 에스테르 약 38% (M/M)로 이루어진다. 표면-활성 보제제를 첨가하지 않고도 응집이 없이 이들을 물에 분산시킬 수 있다. 이들의 입자 크기는 약 0.2 내지 6 ㎛이다.
[실시예 4]
주사제용 물 200 ml 중에 인체 혈청 알부민 10 g을 용해시킨다. 이 용액을 염산으로 pH를 4.0으로 조정하고, 주사제용 물을 300 ml까지 보충한다. 용액을 멸균을 위해 여과법에 의해 0.22 ㎛ 필터로 여과하고, 고속 용해기로 10000 rpm으로 교반한다. 교반하면서, 시아노아크릴산 이소프로필 에스테르 2 ml를 서서히 적가한다. 60분 동안 계속해서 교반한다. 생성된 현탁액을 분별 깔때기로 3 일 동안 부유시킨다. 추가의 행동 과정은 실시예 1에 대응한다. 생성된 미립자에는 기체가 함유되어 있다. 이들은 초음파 연구용 조영 매질로서 적합하다. 이들의 벽 재료는 인체 혈청 알부민 약 30% (M/M)와 폴리시아노아크릴산 이소프로필 에스테르 약 70% (M/M)로 이루어진다. 표면-활성 보제제를 첨가하지 않고도 응집이 없이 이들을 물에 분산시킬 수 있다. 이들의 입자 크기는 약 0.2 내지 3 ㎛이다.
[실시예 5]
옥시폴리젤라틴 용액 250 ml를 염산으로 pH를 2.5로 조정하고, 주사제용 물을 300 ml까지 보충한다. 용액을 멸균을 위해 여과법에 의해 0.22 ㎛ 필터로 여과하고, 고속 회전-고정자 교반기로 8000 rpm으로 교반한다. 교반하면서, 시아노아크릴산 부틸 에스테르 3 ml를 서서히 적가한다. 90 분 동안 계속해서 교반한다. 생성된 현탁액을 분별 깔때기로 3 일 동안 부유시킨다. 추가의 행동 과정은 실시예 1에 대응한다. 생성된 미립자에는 기체가 함유되어 있다. 이들은 초음파 연구용 조영 매질로서 적합하다. 이들의 벽 재료는 옥시폴리젤라틴 약 25% (M/M)와 폴리시아노아크릴산 부틸 에스테르 약 75% (M/M)로 이루어진다. 표면-활성 보제제를 첨가하지 않고도 응집이 없이 이들을 물에 분산시킬 수 있다. 이들의 입자 크기는 약 0.2 내지 4 ㎛이다.
[실시예 6]
증류수 5 ml 중에 피브로넥틴 500 ㎎을 용해시키고, 염산으로 pH를 3.5로 조정한다. 이 용액을 멸균을 위해 여과법에 의해 0.22 ㎛ 필터로 여과하고, 냉각시킨 15 ml 용기 (15 ℃)에서 고속 회전-고정자 교반기로 8000 rpm으로 교반한다. 교반하면서, 시아노아크릴산 부틸 에스테르 0.3 ml를 서서히 적가한다. 90 분 동안 계속해서 교반한다. 생성된 현탁액을 분별 깔때기로 3 일 동안 부유시킨다. 상징액을 만니톨 100 mg을 함유하는 주사제용 물 2 ml에 현탁시킨다. 이 현탁액을 진탕하면서 -50 ℃로 동결시켜 동결-건조한다. 사용하기 전에, 미립자를 주사제용 물 2 ml로 재분산시킨다. 미립자의 입자 크기는 평균 약 0.8 ㎛이다. 이들은 초음파 연구용 조영 매질로서 적합하다. 미립자의 벽 재료는 피브로넥틴 약 35% (M/M)와 폴리시아노아크릴산 부틸 에스테르 약 65% (M/M)로 이루어진다.
[실시예 7]
인산염 완충액 (pH 4.5) 4 ml 중에 피브린에 대한 항체 100 ㎎을 용해시킨다. 이 용액을 멸균을 위해 여과법에 의해 0.22 ㎛ 필터로 여과하고, 이중벽 교반 용기 (10 ml 용량)에서 냉각하에 고속 용해-교반기로 6000 rpm으로 교반한다. 교반하면서, 시아노아크릴산 부틸 에스테르 0.2 ml를 서서히 적가한다. 60 분 동안 계속해서 교반한다. 생성된 현탁액을 분별 깔때기로 2 일 동안 부유시킨다. 침강액을 버리고, 상징액을 락토스 200 mg 및 주사제용 물 2 ml와 혼합한다. 이 현탁액을 냉각조에서 진탕하면서 -40 ℃로 동결시킨 다음 동결-건조한다. 사용하기 전에, 미립자를 주사제용 물 2 ml로 재현탁시킨다. 이들은 기체가 충전되어 있고, 초음파 연구용 조영 매질로서 적합하다. 이들의 입자 크기는 평균 약 1 ㎛이다. 미립자의 벽 재료는 항체 약 20% (M/M)와 폴리시아노아크릴산 부틸 에스테르 약 80% (M/M)로 이루어진다.
[실시예 8]
폴리젤린 15 g을 주사제용 물 50 ml에 용해시키고, pH를 조절하면서 2 N 수산화나트륨 용액을 한 방울씩 가한다. 디글리콜산 무수물 총 2 g을 점진적으로 가하여, pH를 7.5 내지 8.0으로 유지시킨다. 반응을 완결한 후, 이 용액으로부터 초과량의 디글리콜산을 한외여과 (여과 한계 MG 1000)을 반복하여 제거한다. 아크릴레이트화 폴리젤린 용액에 주사제용 물을 300 ml까지 보충하고, 0.22 ㎛ 필터로 여과한다. 10000 rpm으로 교반하면서, 시아노아크릴산 부틸 에스테르 3 ml를 서서히 가한다. 모두 가한 후, 60 분 동안 계속해서 교반한다. 생성된 기체-충전된 미립자를 원심분리법으로 1500 rpm (30 분)으로 분리하여, 주사제용 물 50 ml에 용해시킨다. 표면-활성 보제제를 첨가하지 않고도 응집이 없이 이들을 물에 분산시킬 수 있다. 이들의 입자 크기는 대략 0.1 내지 6 ㎛이다. 미립자의 벽 재료는 아크릴레이트화 폴리젤린 약 45% (M/M)와 폴리시아노아크릴산 부틸 에스테르 약 55% (M/M)로 이루어진다.
[실시예 9]
실시예 3에 따라 제조된 기체-함유 미립자 20 ml를 pH가 4.5인 인산염 완충액 20 ml에 용해시킨다. 이 현탁액을 4 ℃ (100 rpm)에서 교반하고, (3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드-HCl 25 mg을 이 혼합물에 가한다. 60 분 후, 인산염 완충액 10 ml에 미리 용해시킨 피브로넥틴 25 mg을 미립자 현탁액에 가한다. 4 ℃에서 60 분 동안 교반하고, 실온에서 120 분 동안 더 교반한다. 그 다음, 이 현탁액을 pH가 4.5인 인산염 완충액 (여과 한계 MG 1000)에 대해 3회 투석시키고, 분별 깔때기로 2 일 동안 부유시킨다. 상징액을 주사제용 물 20 ml에 용해시켜서, 5% 폴리비닐피롤리돈 (m/V)와 혼합시키고, 진탕하면서 -40 ℃로 동결시켜, 동결-건조시킨다.
[실시예 10]
실시예 9의 동결 건조물을 5% 글루코스 용액 20 ml로 재현탁시킨다. 이 현탁액 0.1 ml를 새로 제조한 피브린 응혈 (직경 1 mm)를 함유하는 37 ℃의 PBS 용액 10 ml에 가한다. 수조에서 진탕하면서 10 분 동안 배양한 후, 응혈을 제거하고, PBS (pH 7.4) 각 10 ml로 5회 세척한 다음, 소노그래피적으로 연구한다. 칼라 도플러에 의해, 달라붙는 미립자의 신호가 명백하게 검출될 수 있다. 과정은 실시예 3 (실시예 9에 나타낸 피브로넥틴과의 반응이 없음)의 입자에 대해서와 유사하다. 응혈의 소노그래피 연구에서, 달라붙는 미립자는 검출될 수 없다 (칼라 도플러에 있어서도 그러함).
[실시예 11]
실시예 3에 따라 제조된 기체-함유 미립자 5 ml를 pH가 4.5인 인산염 완충액 5 ml에 용해시킨다. 이 현탁액을 4 ℃ (100 rpm)에서 교반하고, (3-디메탈아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드-HCl 10 mg을 이 혼합물에 가한다. 5 분 후, 인산염 완충액 1 ml에 미리 용해시킨 피브린 (No. 0541 clone E8, Immunotech, Marseilles, 프랑스공화국)에 대한 항체 2.5 mg을 미립자 현탁액에 가한다. 4 ℃에서 60 분 동안 교반하고, 실온에서 120 분 동안 더 교반한다. 그 다음, 이 현탁액을 pH가 4.5인 인산염 완충액 (여과 한계 MG 1000)에 대해 3회 투석시키고, 분별 깔때기로 2 일 동안 부유시킨다. 상징액을 주사제용 물 2 ml에 용해시키고, 5% 폴리비닐피롤리돈 (m/V)와 혼합시키고, 진탕하면서 -40 ℃로 동결시켜, 동결-건조시킨다.
[실시예 12]
실시예 11의 동결 건조물을 5% 글루코스 용액 2 ml로 재현탁시킨다. 이 현탁액 0.1 ml를 새로 제조한 피브린 응혈 (직경 1 mm)를 함유하는 37 ℃의 PBS 용액 10 ml에 가한다. 수조에서 진탕하면서 10 분 동안 배양한 후, 응혈을 제거하고, PBS (pH 7.4) 각 10 ml로 5회 세척한 다음, 소노그래피적으로 연구한다. 칼라 도플러에 의해, 달라붙는 미립자의 신호가 명백하게 검출될 수 있다. 실시예 3 (실시예 11에 나타낸 피브린에 대한 항체와의 반응이 없음)의 입자에 대해서 그 과정은 유사하다. 응혈의 소노그래피 연구에서, 달라붙는 미립자는 검출될 수 없다 (칼라 도플러에서도 그러함).
[실시예 13]
실시예 6의 재현탁된 입자 0.1 ml를 실시예 11과 유사한 실험 설정으로 이들의 피브린 결합을 조사한다. 소노그래피 연구에서, 응혈에 결합된 미립자가 명백히 검출될 수 있다.
[실시예 14]
실시예 7의 재현탁된 입자 0.1 ml를 실시예 11과 유사한 실험 설정으로 이들의 피브린 결합을 조사한다. 소노그래피 연구에서, 응혈에 결합된 미립자가 명백히 검출될 수 있다.
[실시예 15]
실시예 8에 따라 제조된 미립자 10 ml를 pH가 4.5인 인산염 완충액 10 ml에 용해시키고, 1-히드록시벤조트리아졸 20 mg을 가한다. 4 ℃로 냉각한 후, 교반하면서 (100 rpm), (3-디메탈아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드-HCl 10 mg을 가한다. 4 ℃에서 60 분 동안 계속해서 교반한다. 그 다음, 실온에서 60 분 동안 더 교반한다. 인산염 완충액 5 ml에 미리 용해시킨 판크레오지민 10 mg을 실온에서 현탁액에 가한다. 이 현탁액을 실온에서 120 분 동안 교반한다. 그 다음, 이 현탁액을 pH가 4.5인 인산염 완충액 (여과 한계 MG 1000)에 대해 5회 투석시키고, 분별 깔때기로 2 일 동안 부유시킨다. 상징액을 주사제용 물 10 ml에 용해시키고, 5% 폴리비닐피롤리돈 (m/V)와 혼합시키고, 진탕하면서 -40 ℃로 동결시킨 다음, 동결-건조시킨다.
[실시예 16]
실시예 15의 동결 건조물을 주사제용 물 10 ml로 재현탁시킨다. 이 현탁액 0.1 ml를 쥐의 꼬리 부분 정맥에 주사한다. 10 분 후, 췌장을 제거하여, 수조에서 소노그래피적으로 연구한다. 칼라 도플러에 있어서, 미립자의 초음파 신호가 검출될 수 있다.
[실시예 17]
실시예 3에 따라 제조된 기체-함유 미립자 5 ml를 pH가 4.5인 인산염 완충액 5 ml에 용해시킨다. 이 현탁액을 4 ℃ (100 rpm)에서 교반하고, (3-디메탈아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드-HCl 10 mg을 이 혼합물에 가한다. 5 분 후, 인산염 완충액 1 ml에 미리 용해시킨 tPA 5 mg을 미립자 현탁액에 가한다. 4 ℃에서 24 시간 동안 계속해서 교반한다. 그 다음, 이 현탁액을 pH가 4.5인 인산염 완충액 (여과 한계 MG 1000)에 대해 3회 투석시키고, 분별 깔때기로 2 일 동안 부유시킨다. 상징액을 주사제용 물 2 ml에 용해시킨다.
[실시예 18]
2개의 피브린 응혈 (각각 약 50 mg 중량)을 제조하여, 혈장 20 ml에 가한다. 실시예 17에 따라 제조된 입자 현탁액 0.05 ml를 응혈에 가한다. 10 분 후, 응혈을 혈장에서 제거하고, 소노그래피 연구에서 달라붙는 미립자의 신호가 칼라 도플러에서 나타난다.
[실시예 19]
젤라틴 0.6 g을 자철석 입자의 수현탁액 (약 철 20 밀리몰/ml, 입자 직경은 약 20 nm) 20 ml에 용해시킨다. 이 용액을 염산으로 pH를 3으로 조정한다. 교반하면서 (3000 rpm), 시아노아크릴산 이소부틸 에스테르 0.2 ml를 서서히 가한다. 모두 가한 후, 90 분 동안 계속해서 교반한다. 상징액을 버리고, 침강액을 pH가 7.4인 PBS 10 ml (10 밀리몰)에 용해시킨다. 이 현탁액을 4 ℃로 냉각하고, 교반하면서 (100 rpm), (3-디메탈아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드-HCl 10 mg을 가한다. 4 ℃에서 60 분 동안 계속해서 교반한다. 그 다음, 피브린 (No. 0541 clone E8, 이뮤노테크(Immunotech), Marseilles, 프랑스공화국]에 대한 항체 5 mg을 가한다. 4 ℃에서 60 분 동안 계속해서 교반한 다음, 실온에서 120 분 동안 더 교반한다. 이 현탁액을 pH가 7.4인 PBS (10 밀리몰)에 대해 한외여과 (여과 한계 MG 5000)를 5회 수행한다. 그 다음, 이 현탁액을 원심분리한다 (2000 rpm, 60 분). 침강액을 5% 만니톨 (m/V)를 함유하는 주사제용 물 5 ml에 용해시키고, 5 ㎛ 막 필터로 여과한다. 여액을 -40 ℃로 동결시킨 다음, 동결-건조시킨다.
[실시예 20]
주사제용 물 150 ml 중에 젤라틴 15 g (300 블루움)을 80 ℃에서 용해시킨다. 냉각 후, 이 용액을 0.1 N HCl로 pH를 2.5로 조정하고, 주사제용 물을 300 ml까지 보충한다. 이 용액을 압열 멸균시킨다 (process A 121, Deutsches Arzneibuch[German Pharmacopoeia] 9th Edition). 압열 멸균된 용액의 pH를 조정하여, 필요한 경우, pH 2.5 까지 조정한다. 시아노아크릴산 이소부틸 에스테르 3 ml를 이 용액에 교반하면서 가한다. 90 분 동안 계속해서 교반한다. 생성된 미립자 현탁액을 1000 rpm으로 60 분 동안 원심분리하여, 상징액을 주사제용 물 50 ml에 용해시키고, 다시 1000 rpm으로 60 분 동안 원심분리한다. 이와 같이 총 5회 반복한다. 최종 원심분리된 상징액을 PBS (pH 7.0) 50 ml에 용해시키고, 고형 디에틸렌트리아민펜타아세트산 이무수물 0.1 mg에 교반하면서 가한다 (참고: Hnatowich et al. (1983) Science 220: 613). 이 현탁액을 5 분 동안 교반한다. 현탁액을 1000 rpm으로 60 분 동안 원심분리하고, 상징액을 주사제용 물 50 ml에 용해시킨다. 주사제용 물에 대해 원심분리를 4회 더 반복한다. 최종 원심분리된 상징액을 주사제용 물 50 ml에 용해시키고, 포아 크기가 70, 40, 20 및 10 ㎛인 HDC-포아 필터의 필터 칼럼으로 여과한다. 여액은 그의 표면에 DTPA기를 갖는 약 2 ×109입자/ml를 함유한다. 평균 입자 크기는 약 2 ㎛이다. 입자는 공지된 방법에 의해 방사성 금속 이온 (예, In-111 또는 Tc-99)으로 나타낼 수 있다.
[실시예 21]
음파 적용에 대한 예로서 피브린 응혈에 의해 도플러 대신에 감마 카운터(gamma counter)에 대해서만 검출이 가능하다.
[실시예 22]
주사제용 물 150 ml 중에 폴리젤린 7.5 g을 80 ℃에서 용해시킨다. 냉각 후, 이 용액을 0.1 N HCl로 pH를 3으로 조정하고, 주사제용 물을 300 ml까지 보충한다. 이 용액을 압열 멸균시킨다 (process A 121, German Pharmacopoeia 9th Edition). 압열 멸균된 용액의 pH를 2로 조정한다. 시아노아크릴산 부틸 에스테르 3 ml를 이용액에 교반하면서 가한다. 90 분 동안 계속해서 교반한다. 생성된 미립자 현탁액을 1000 rpm으로 60 분 동안 원심분리하여, 상징액을 주사제용 물 50 ml에 용해시키고, 다시 1000 rpm으로 60 분 동안 원심분리한다. 이와 같이 총 5회 반복한다. 최종 원심분리된 상징액을 PBS (pH 7.4) 50 ml에 용액시키고, 4 ℃로 냉각한다. 4 ℃에서 교반하면서, 스트렙타비딘 50 mg과 EDC 5 mg을 가한다. 1시간 동안 계속해서 교반한다. 현탁액을 3회 원심분리한다 (1000 rpm, 60 분). 각 원심분리 후, 상징액을 PBS (pH 7.0, 인산염 10 밀리몰) 50 ml에 용해시킨다. 피브린에 대한 항체를 문헌 (D. J. Hnatovitch et al., J. Nucl. Med. 28 (1987), 1294-1302)의 방법에 따라 술포숙신이미딜-6-(바이오티나미도)-헥사노에이트(NHS-LC-비오틴)에 대해 1:5의 몰비로 표지화한다.
[실시예 23]
실시예 22의 비오틴 표지된, 피브린에 대한 항체 0.5 mg을 콜레스테롤을 함유하는 사료를 먹인 토끼에게 정맥내 주사한다. 3 시간이 경과한 다음, 실시예 22의 입자를 주사한다. 10 분 경과 후, 미리 죽인 동물에서 경동맥을 제거하고, 동맥 경화의 동맥 주위를 조영 매질 신호용 도플러 모드로 수조에서 조사한다. 달라붙는 입자의 음파 신호가 명백하게 검출될 수 있다.
[실시예 24]
a) 실시예 8에 따라 제조한 미립자 현탁액 20 ml를 인산염 완충액 5 ml로 pH를 4.5로 조정한 다음, 125-요오드 표지된, 피브린에 대한 항체 50 mg (5 μCi)와 혼합한다. 4 ℃에서 교반하면서, (3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 염산염 500 mg을 반응 혼합물에 가한다. 그 다음, 냉각하에 8 시간 동안 계속해서 교반하고, 미립자를 원심분리법으로 분리하고 주사제용 물 각 20 ml로 총 3회 세척하고, 각 개개의 세척 공정을 입자를 물에 재현탁시킨 다음 원심분리하는 식으로 행한다. 최종 세척 공정 후, 입자를 주사제용 물 20 ml에 재현탁시킨다.
입자에 대한 항체의 결합 정도를 125-요오드 활성에 근거한 감마 카운터로 결정한다. 그 다음, 최초 사용된 항체 양의 93%를 입자 표면에 영구적으로 결합시킨다.
b) 독일연방공화국 특허 제38 03 972호의 실시예 4에 따라 제조한 미립자를 다른 것은 동일한 반응 조건하에 125-요오드 표지된, 피브린에 대한 항체 50 mg (5μCi)와 실시예 24a)에 대응하는 양 만큼 반응시킨다.
실시예 24a)에 따른 입자와 결합 정도를 비교하면 1%의 상당히 작은 값을 나타낼 뿐이다.

Claims (25)

  1. 캡슐의 벽 재료가 1종 이상의 합성 중합체 물질과, 1종 이상의 생중합체로 제조된 공중합체로 이루어지며,
    a) 위치-특이성, 구조-특이성 또는 조직-특이성을 나타내거나 또는
    b) 킬레이트화 리간드 또는 그의 금속 착화합물 또는 위치-특이성, 구조-특이성 또는 조직-특이성 물질을 결합시킬 수 있는 관능기를 갖고,
    캡슐의 코아가
    a) 기체 또는 기체 혼합물 또는
    b) 제약학상 활성 성분 또는 활성 성분 혼합물 또는
    c) 캡슐 벽과 동일한 재료로 이루어지고,
    단, 합성 중합체 물질은 중합가능한 알데히드로 제조된 것이 아니며, 합성 중합체에 대한 생중합체의 중량비가 10:90 내지 80:20 범위이고, 캡슐 크기가 0.5 내지 8 ㎛인 것을 특징으로 하는, 생분해성 중합체의 진단 또는 치료용 미세 캡슐.
  2. 제1항에 있어서, 합성 중합체가 아크릴산, 아크릴아미드, 아크릴산 클로라이드, 아크릴산 글리시드 에스테르 또는 알킬시아노아크릴레이트 단량체로 제조된 것인 미세 캡슐.
  3. 제1항에 있어서, 생중합체가 알부민, 피브리노겐, 피브로넥틴 또는 교원질 분해 생성물인 미세 캡슐.
  4. 제1항에 있어서, 생중합체의 관능기에 의하여 결합될 수 있는 위치-특이성, 구조-특이성 및 조직-특이성 물질이 항체, 공역 항체, 호르몬, 트랜스페린, 피브로넥틴, 헤파린, 트랜스코발라민, 표피 성장 인자, 지방단백질, 혈장 단백질, 펩티드 또는 올리고펩티드인 미세 캡슐.
  5. 제1항에 있어서, 생중합체가 위치-특이성, 구조-특이성 및 조직-특이성 폴리펩티드인 미세 캡슐.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 벽 재료가 기체를 함유하는 것인 초음파 진단에 사용하기 위한 미세 캡슐.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 생중합체의 관능기에 의해 결합되는 라디칼이 킬레이트화 리간드인 미세 캡슐.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 킬레이트화 리간드로서 에틸렌디 아민펜타아세트산 라디칼 또는 그의 유도체를 포함하는 미세 캡슐.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 생중합체의 관능기에 의해 결합되는 라디칼이 금속 이온의 킬레이트 착화합물인 미세 캡슐.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 착화합물 결합 금속 이온이 상자성 이온인 미세 캡슐.
  11. 제9항에 있어서, NMR 진단에 사용하기 위한 미세 캡슐.
  12. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 착화합물 결합 금속 이온이 방사성 동위원소 이온인 미세 캡슐.
  13. 제12항에 있어서, 신티그래피에 사용하기 위한 미세 캡슐.
  14. 합성 중합체에 대한 생중합체의 중량비가 10:90 내지 80:20이라는 조건하에, 단량체를 제조 용액의 총 용적에 대해 0.01 내지 10% (m/V)의 농도로 0.5 내지 20% (m/V)의 농도로 용해된 생중합체를 함유하는 기체 포화되고 압열 멸균될 수 있는 수상 분산액과 중합 반응시키고, 중합 반응이 종료된 후, 생성된 미립자를 원심분리법, 여과법, 침강법 또는 부유법을 1회 또는 수회 반복하여 밀도와 입도에 따라 분리하는 것을 포함하는 제1항에 따른 미세 캡슐의 제조 방법.
  15. 제1항에 따른 미립자를 제약상 허용되는 현탁 매질에 재현탁시킨 조영 매질.
  16. 제15항에 있어서, 제약상 허용되는 현탁 매질로서 식염, 글루코스, 만니콜, 락토스 또는 다가 알콜 중 1종 이상을 함유할 수 있는 주사제용 물이 사용되는 조영 매질.
  17. 제1항에 있어서, 벽 재료 또는 코아가 1종 이상의 제약학상 활성 성분을 더 함유하는 미세 캡슐.
  18. 제1항에 있어서, 생중합체가 젤라틴, 폴리젤린, 옥시폴리젤라틴 또는 폴리-L-리신인 미세 캡슐.
  19. 제4항에 있어서, 올리고펩티드가 아미노산 서열 RGD, RGDS, RGDV 또는 RGDT인 미세 캡슐.
  20. 제6항에 있어서, 기체가 공기, 질소, 이산화탄소, 산소, 헬륨, 네온, 아르곤, 크립톤 또는 2종 이상의 이들 기체의 혼합물인 초음파 진단에 사용하기 위한 미세 캡슐.
  21. 제10항에 있어서, 상자성 이온이 가돌리늄 이온인 미세 캡슐.
  22. 제12항에 있어서, 방사성 동위원소 이온이99m테크네튬 또는111인듐 이온인 미세 캡슐.
  23. 제14항에 있어서, 수상 분산액이 자성 입자를 더 함유하는 방법.
  24. 합성 중합체에 대한 생중합체의 중량비가 10:90 내지 80:20이라는 조건하에, 단량체를 제조 용액의 총 용적에 대해 0.01 내지 10% (m/V)의 농도로 0.5 내지 20% (m/V)의 농도로 용해된 생중합체를 함유하는 기체 포화되고 압열 멸균될 수 있는 수상 분산액과 중합 반응시키고, 중합 반응이 종료된 후, 생성된 미립자를 원심분리법, 여과법, 침강법 또는 부유법을 1회 또는 수회 반복하여 밀도와 입도에 따라 분리하고, 투석에 의해 더 정제하고, 생리 상용성 현탁제중에 현탁시킨 다음, 킬레이트화제, 금속 킬레이트 또는 위치-특이성, 구조-특이성 또는 조직-특이성 물질과 반응시키고, 이 현탁액을 골격 형성제를 첨가한 후 동결건조시키는 것을 포함하는 제1항에 따른 미세 캡슐의 제조 방법.
  25. 최종의 동결건조 단계를 거치지 않고, 제24항에 기재한 방법에 따라 제조할 수 있는 조영 매질.
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