JPH06511481A - 気泡を取り込む超微小非凝集多孔質粒子 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 気泡を取り込む超微小非凝集多孔質粒子発明の分野 本発明は、再構成したときに取り込まれた気泡を含有する所定の均一な寸法を存 する超微小の実質的に非凝集多孔質粒子に関する。超微小多孔質粒子は充てん剤 等として、そして適当な超音波液体に懸濁させたとき超音波造影剤として使用す るのに適している。本発明さらに超微小の均一な多孔質粒子を製造し且つ使用す る方法に関する。

発明の背景 分散媒体において低い溶解度を有する化合物の粒子は医薬、セラミック、塗料、 インキ、染料、潤滑剤、農薬、殺虫剤、殺菌剤、肥料、クロマトグラフィカラム 、化粧品、軟膏、および洗剤を包含する広い種々の適用分野において通常使用さ れる。粒子の水性分散液は有機溶媒に伴なう引火性および毒性のような危険性を 避けるために多くの場合において使用される。そのような分散液は典型的には広 い範囲の粒子寸法を有する。

多くの場合において製品の性能は粒子寸法分布をコントロールすることにより改 良される。一般により小さな粒子の化合物は一層均一な分散液を提供しそしてよ り大きな粒子の同じ化合物より速く溶解するだろう。したがって、粒子寸法のコ ン１−ロールは溶解速度をコントロールするにあたって重要である。

多くの薬剤は、持続放出性に従う経口、エーロゾル、皮下、筋肉内または投与の 他の経路のために粒子として配合されて来た。粒子寸法はこれらの薬剤の放出速 度に影響を与える一つの重要な因子である。当業者は上に挙げた物質についての 生成物性能をコントロールするために用いる粒子寸法についての他の例を認識で きるであろう。

水中に不溶性である薬剤は３ミクロンより小さい直径の粒子の安定な懸濁液とし て配合された場合に重要な利点を有する可能性かある。この粒子形態において、 薬剤は静脈内に注射され、血液中を循環しそして、例えは細網内皮システム中に 優先的に蓄積され、そこで薬剤は解毒のような通常の細網内皮機能を容易にする ことかできる。別法として、その薬剤は細網内皮細胞に存在していて、そこで薬 剤は、活性形態に溶解化されるかまたは代謝されて血液中を他の組織まで循環し て、その効能を発揮するまで貯蔵されることができる。活性薬剤のこの“ゆっく りとした”放出は数時間、数日、数週間、または数ケ月の期間にわたって血漿中 に一層一定した薬剤濃度を提供して改良された治療効能を生ずることができる。

放射線不透過性であるかまたはラジオアイソトープで標識化された生分解可能な 粒子は固定された細網内皮細胞の高い濃度で、肝臓および牌臓のような器官の診 断的画像形成のために有用である。

固体の生分解可能な粒子はまた、超音波を用いて肝臓および牌臓の診断的超音波 画像形成のために有用であり得る。これらの粒子は、もしそれらがまわりの組織 とは非常に異なる密度または圧縮性を存し、それにより後方散乱増大に応答可能 なインピーダンス不整合を生ずるならば、有効であり得る。腫瘍及び他の病変は 一般に固定された細網内皮細胞を含有しないので粒子はこれらの病変組織に蓄積 されず、その結果実質組織のみの後方散乱が増大し、実質組織と病変組織との間 のエコー反射性（ｅｃｈｏｇｅｎｉｃｉ　ｔｙ）において大きな差を生じさせ、 それにより超音波により病変の検出および診断を容易にする。例えばＰａｒｋｅ ｒ、　Ｋ、　Ｊ、等による、Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ　ｉｎ　Ｍｅｄ、　＆　Ｂｉ ｏｌ、　１３　（９）第５５５頁〜第５６６頁（１９８７）参孔 明らかに超音波造影剤の最も簡単な形は遊離気泡である。そのような気泡は液体 ビヒクル中に予かしめ存在してもよくあるいは注射相の間のキャビテーションを 介して導入されることができる。どうなメカニズムであれ、多くの液体は、管ま たは脈管に迅速に注射されたとき、多量の空気泡を発生することができ、これは 部分的または完全な体腔内音波造影化を生ずるのに十分なエコーを生ずることか できることは明らかである。

遊離気泡の使用についての最初の報告はＧｒａｍｉａｋ、　Ｒ，および５ｈａｈ 、　Ｐ、　Ｊ、にょるＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ　Ｒａｄｉｏｌｏｇｙ　３第 ３５６頁〜第３６６頁（１９６８）の報告であるように思われる。彼らは、彼ら か連続エコー心拍動記録中直接生理学的食塩水注入により心臓エコーの大動脈起 源の解剖学的実証を得たと報告している。注入は大動脈ルートの平行シグナルに より描写されたエコーの陰影を生じた。また例えば米国特許第４，２７６．８８ ５号参匙にｒｅｍｋａｎ、　Ｆ、　Ｗ、等によるＡｍ、　Ｊ。

Ｒｏｅｎｔｇｅｎｄ、、３　：　１５９　（１９６８）はまた彼らが食塩水注射 からそして自己血液注射から心臓内エコーを得たと報告している。彼らは注射処 理自体中に、空気泡が発生しＩＪることを立証している。Ｚｉｓｋｉｎ　Ｍ、　 Ｃ，等によるＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅＲａｄｉｏｌｏｇｙ　７第５００頁〜 第５０５頁（１９７２）は動脈からの増大したドツプラー信号により検出された あらゆる場合におけるエコーの存在を立証するためにレッグラフイン（ｒｅｎｏ ｇｒａｆｉｎ）　、炭酸水、および（体温で沸騰する）エーテルのような種々の 液体の使用を報告している。最近において、Ｃｈｉａｎｇ、　Ｃ，Ｗ、等による Ｃｈｅｓｔ　８９　（５）第７２３頁〜第７２６頁（１９８６）　、Ｒｉｚａｙ ｅｖ、　Ｍ、　Ｎ、およびＡｚａｔｙａｎ、　Ｔ、　Ｓ、によるＨｅａｒｔ　Ｊ 、、　１０　（６）第１３０８頁〜第１３１０頁（１９８５）　、Ｆｅ１ｎｓｔ ｅｉｎ、　Ｓ、　Ｂ、等によるＪ、　Ａｍ、　Ｃｏ１１．　Ｃａｒｄｉｏｌ、、 ３　（１）第１４頁〜第２０頁（１９８４）　、Ｋｏｎｏｄｏ、　Ｓ、等による Ｊ、　Ａｍ、　Ｃｏ比Ｃａｒｄｉｏｌ　４第１４９頁〜第１５６頁（１９８４） 　、Ｔｅｎ−Ｃａｔｅ、　Ｆ、　Ｊ、等によるＪ、　Ａｍ、　Ｃａ１ｌ。

Ｃａｒｄｉｏｌ、、３　（１）第２１頁〜第２７頁（＋　９８４）　、Ｍａｕｒ ｅｒ、　Ｂ、等によるＣ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ　Ｇ　９　（２）第４１８頁〜第 ４２９頁（１９８４）　、　Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ、　Ｗ。

Ｆ８等によるＪ、　Ａｍ、　Ｃｏ１１．　Ｃａｒｄｉｏｌ、　２　（１）第６３ 頁〜第６９頁（１９８３）、Ｔｅｉ、　Ｃ，等によるＪ、　Ａｍ、　Ｃａ１１． 　Ｃａｒｄｉｏｌ、　３　（１）第３９頁〜第４６頁（１９８４）　、Ａｒｍ５ けｏｎｇ、　Ｗ、　Ｆ、等による、Ｃ１ｒｃｕｌａｔｉｏｎ　６６　（＋）第１ ６６頁〜第１７３頁（１９８２）　、Ｍｅｌｔｚｅｒ　Ｒ，Ｓ、等によるＢｒ、 　Ｈｅａｔ　Ｊ、　４４　（４）第３９０頁〜第３９４頁（＋　９８０　ａ）　 、Ｍｅｌｔｚｅｒ、　Ｒ，Ｓ、等によるＪ、　Ｃｌ１ｎ、　Ｕｌｔｒａｓ、、　 ９（３）第１２７頁〜第１３１頁（１９８＋）、ＷｉｓｅＮ、　Ｋ、等によるＣ １ｒｃｕｌａｔｉｏｎ６３（５）第１１００頁〜第１１０３頁（１９８３）　、 Ｍｅｌｔｚｅｒ、　Ｒ，Ｓ、等によるＵｌｔｒａｓｏｕｎｄ　Ｍｅｄ、　Ｂｉｏ ｌ、、　６　（３）第２６３頁〜第２６９頁（１９８０ｂ）のような多くの研究 は胆管造影法における通常の胆管の不透明化（造影）のためのインドシアニング リーンの使用を報告している。恐らくは、液体中に含有されそして注射相中に発 生された顕微鏡的空気泡は観察された効果に対して応答可能である。

Ｍｅｙｅｒ−５ｃｈｗｉｃｋｅｒａｔｈ、　Ｍ、およびＦｒ１ｔｚｓｃｈ、　Ｔ 、によるＵｌｔｒａｓｃｈａｌｌ　Ｍｅｄ、７第３４頁〜第３６頁（１９８６） は微小泡担体として固体粒子を導入する新しい市販の薬剤の泌尿器適用を報告し ている。

遊離気泡は音エネルギーの非常に有効な散乱剤であるけれども、それらは肺によ り有効に取り除かれる事実によりそして肺における圧力の変化によりそれらの利 用は限られる。したかって静脈注射を経て軟組織中に造影を誘発するために微小 泡を用いるのは実際的ではない。

遊離気泡の若干の限界を克服しようとの努力において、カプセルに封入された気 泡か造られそして腫瘍を有するうさぎにおける頚動脈に直接注射された。

Ｃａｒｒｏｌｌ、　Ｂ、　Ａ、等によるＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ　Ｒａｄｉ ｏｌｏｇｙ　ｌ　５　（３）第２６０頁〜第２６６頁（１９８０）参匙これらは ８０ミクロンゼラチンカプセル中に取り込まれた窒素ガスからなっていた。Ｃａ ｒｒｏｌｌ等はＶＸ２癌を有するうさぎの腫瘍端の超音波増大を報告している。

大きな寸法のこれらの粒子は末梢循環系中へのそれらの投与を可能にしない。残 念なことには、肺をきれいに出来る小さい（２〜３ミクロン）のガス充てんカプ セルの製造はガスか拡蔽するカプセル壁の極度の薄さに起因して困難である。

他の代りのものとして、米国特許第４．４４２，８４３号、同第４，６５７゜７ ５６号および同第４，６８１．１１９号は血液中に微小気泡を生成し、気泡を通 って伝達された電磁波および音波への伝達特性を変えるためのガスの担体として の凝集体の使用を開示している。残念なことには凝集体はそのような大きな寸法 、即ち約２０〜２５０ミクロンの程度のものであるので、不可能ではないとして もそのような凝集体か肺や心臓を通って移動することか困難であり、それにより 超音波造影剤としてのそれらの有用性か制限される。さらに、凝集体を形成する 固体材料は一般に短かい時間で体液に溶解するので肺および心臓中て超音波影像 を増大するためのそれらの能力は短かい寿命である。さらに、凝集体が形成され る各々の粒子はそれらの凝集化されていない形態で泡を発生する能力かはとんと ない。

したかって静脈注射後動脈および器官の超音波画像増大のために良好な長期間安 定性を存する増大した気泡エコー反射性を提供する造影剤についての要求が超音 波産業界にある。

要するに、本発明は再構成したときに、取り込んだ気泡を含有する実質的に均一 な寸法の新規な超微小の実質的に非凝集、非結晶性の多孔質粒子、そしてそれを 製造し且つ使用する方法の発見により、当業界の現在の状態の上記問題および欠 点を緩和し且つ克服する。

本発明の新規な超微小非凝集多孔質粒子は適当な生理学的に許容できる液体で再 構成したときに、超音波画像増大剤として使用するためにそしてドツプラー技術 のような超音波測定のためにユニークに適している。まったく驚くべきことに新 規な超微小非凝集多孔質粒子は静脈注射後動脈および器官の超音波画像増大のた めの良好な長期間安定性を存するユニークな気泡エコー反射を提供する。さらに 丸くべきことに本発明の超微小多孔質粒子は微小気泡を発生させて超音波画像形 成を増大するために凝集体を形成させねばならないことなしにこれを達成させる ことか出来る。

またまったく斃＜へきことに本発明の新規な超微小非凝集多孔質粒子は、それら が液体中に懸濁されるときそれらの固体マトリックスやまたは細孔内に空気やま たはヘリウム気泡のような気泡を取り込む結果として増大したおよび長期間超音 波後方散乱を生ずることがまた見い出された。固体マトリックスまたは細孔は現 在手に入れることかできる超音波造影剤によっては今まで達成されながったユニ ークな持続したエコー反射性のための安定性を提供すると信じられる。そして本 発明の新規な超微小多孔質粒子は凝集する傾向を実質的に有しないので、それら は血管および動物の全体にわたる軟組織または器官における超音波画像を増大さ せるための造影剤として使用するのにユニークに適している。換言すると、新規 な超微小多孔質粒子は動物の体の全体にわたって循環する能力を存するので超音 波造影剤としてのそれらの適合性は、肺および心臓を超えて例えは、肝臓、０臓 、心筋、腎臓、脳等にまで拡大される。

本発明によれば、本発明の超微小多孔質粒子は周囲の温度で安定であり、凝集す る傾向かはとんとないか全くなく、そしてヒトのような生体の血液流に導入され たとき非毒性で且つ生理学的に許容できると信しられる。本発明の超微小の多孔 質の粒子−の寸法は典型的には約１０ミクロン以下、好ましくは約ｏ、　０１　 ミクロン−約５．０ミクロンそしてさらに好ましくは約０．１ミクロン−約２． ０ミクロンの範囲にある。

本発明の好ましい超微小の、実質的に非凝集性、非結晶性多孔質粒子は例えば約 ０．５〜約２ミクロンの程度の実質的に均一な平均直径を存しそして液体ビヒク ル中に再靜濁した後それらの細孔内に気泡を取り込む能力を存するヨーシバミド エチルエステル（ｉｏｄｉｐａｍｉｄｅ　ｅｔｈｙｌ　ｅｓｔｅｒ）粒子である 。

本発明の別の特徴に従えば実質的に均一な寸法の超微小の多孔質粒子は、第１に 、２種の化合物のための適当な溶媒中の上記２種の別々の固体化合物の溶液を造 り、第２に、約−５０°Ｃ〜約１００°Ｃの温度でそして５０ｍ１の単位容量あ たり約０．０１　ｍｌ／分〜約３０００ｍｌ／分の注入速度で該溶液中に沈でん 用液体を注入し、しかも、粒子寸法か溶液の温度に直接関係しそして注入速度に 逆比例するように、約１０ミクロン以下の範囲から選ばれた実質的に均一な平均 粒径を有する実質的に非凝集粒子の形態で沈殿した固体化合物の懸濁液を製造す るように、前記２種の固体化合物は前記性てん用液体中への溶解性を本質的にほ とんど有せずそして前記溶媒は前記性てん用液体中に混和性であり、第３に、溶 媒から共沈でん粒子を分離しそして第４に、第２の化合物及びあらゆる残留溶媒 を選択的に可溶性にし、且つ除去するのに役に立つ洗浄用液体て共沈でん粒子を 洗浄し、それにより第１の化合物からのみなるかまたは第１の化合物からほとん どなる多孔質マトリックスからなる粒子を製造することにより造られる。例えば 本発明に従って、超微小な多孔質のヨーツバミド　エチルエステル（ＩＤＥ）粒 子のような超微小多孔質粒子を製造する場合、洗浄工程後形成されたＩＤＥ多孔 質粒子はほとんとＩＤＥであると信しられるかしかしＩＤＥ粒子のマトリックス は例えば若干のヨーシバミック　アシッド（ｉｏｄｉｐａｍｉｃ　ａｃｉｄ）　 （ＩＤＦ）を含む可能性がある。

超微小“多孔質”粒子懸濁液は次に例えは増大した圧力でガスにさらされるがま たは乾燥されて出来るだけ多くの水分を除去してそして液体ビヒクル中に粒子を 懸濁させた際にそれらの多孔質マトリックス内にガスを取り込むことを粒子に可 能にする。本発明の超微小多孔質粒子は同し方法に従って単鶏に造られた純粋な 固体粒子よりもずっと小さい密度である。

乾燥した超微小多孔質粒子を再構成、即ち適当な液体中に懸濁すると、それらは 完全に再分散するか、今度は少量の空気、又はヘリウムの如き他のガスか粒子の 裂は目又は気孔中に捕捉されることが当業者には認められるであろう。それら裂 は目又は気孔は、最初第二化合物が存在していた所である。裂は目又は気孔に捕 捉された空気は、液体ビヒクル中に再懸濁した後でも数時間留まっていると考え られる。更に、裂は目又は気孔は非常に小さいので、懸濁液体の表面張力にょっ て直ぐには満たされないと考えられる。従って、そのような再構成された懸濁物 は超音波造影（ｃｏｎｔｒａｓｔ）剤として用いるのに特異的に適している。な ぜなら、固体多孔質粒子内に捕捉されたエコー反射性気泡は、現在利用されてい る他の競合する超音波造影剤を破壊するのが典型的である心臓の圧力変化に対し てさえも安定だからである。

本発明の超音波多孔質粒子を製造する方法を実施する場合、洗浄溶液中の溶解し 易い化合物に対する溶解しにくい化合物の好ましい重量比は約２：ｌ〜約ｌＯ： １である。更に、粒子洗浄中に溶解及び除去される溶解し易い化合物の量は、沈 澱後であるか洗浄前の粒子中に存在する溶解し易い化合物の量の約１０％〜約１ ００％にすることかできる。

一つの好ましい態様として、洗浄溶液中に溶解しにくい化合物はヨーシバミドエ チルエステル（ＩＤＥ）であり、洗浄溶液中に溶解し易い化合物はヨーシバミッ ク　アシッド（［）Ａ）である。沈澱用液体は約ｐＨ５の水であり、洗浄用液体 は約ｐＨＩ＋の水性０．１％ＰＶＰである。本発明の方法に従い共沈粒子を洗浄 する場合、殆と又は全てのＩＤＡか除去されるまで続けることかできるが、ＩＤ Ｅの殆と又は全てか残っており、それは、例えば超微小多孔質ＩＤＥ粒子を生成 した時、約３．３〜約３．４のｐＨであるのか好ましい。洗浄を約３．３〜約３ ．４のｐＨて止めた時、超微小多孔質ＩＤＥ粒子の収率及びエコー反射性は向上 する。

本発明の更に別な特徴に従い、超微小多孔質粒子を、ヒト血清アルブミン又は選 択された抗体の如き種々の物質で被覆し、粒子の表面特性を変え、例えば、それ らの生体相容性又は希望の部位を標的にする能力を改善することができる。

従って、本発明は、今まで入手されてきた超音波造影剤及び方法に伴われる欠点 を解決するために長い間求められてきた超音波技術に対する解答を与えるもので あることは当業者に認められるであろう。

本発明の上記特徴及び利点は、下に記載する図面、詳細な記述及び実施例を参照 することにより一層よく理解されるであろう。本発明の超微小多孔質粒子及び方 法は単なる例示的なものであり、本発明を限定するものと見做すべきではないこ とも分かるであろう。

図面の簡単な説明 本発明の実施例を次に図面を参照して一層完全に記述する。

第１図は、ＩＤＡを溶解除去する前の配合混合物中のヨーシバミック　アシッド （ＩＤＡ）対ヨーシバミド　エチノはステル（ＩＤＥ）の重量比に対しプロット した、５．２■／ｍｌでのインビトロ気泡／ＩＤＥ粒子懸濁物の未修正（ｒａｗ ）後方散乱値（ＲＭＳ）のグラフである。

これらのデーターは、ＩＤＡ／ＩＤＥの比力吠きくなるに従ってエコー反射性（ 気孔率）か増大することを示している。

第２図は、ウシ血漿と混合した後の、時間に対しプロットした５、２．９．１及 び１３．１■／ｍｌでのインビトロ気泡／ＩＤＥ粒子懸濁物の未修正後方散乱値 （ＲＭＳ）のグラフである。これらのデーターは、粒子濃度が大きくなるに従っ て後方散乱か増大することを示している。これらのデーターは、ウシ血漿と混合 した後、僅か数秒から数分しか存続しない他の気泡材と比較して、この後方散乱 が極めて長く持続することも示している。

第３図は、時間に対しプロットした５、　２ｍｇ／ｍｌでのインビトロ気泡／Ｉ ＤＥ粒子、及び＋　２．２ｍｇ／ｍｌでの標準固体ＩＤＥ粒子の未修正後方散乱 値（ＲＭＳ）のグラフである。これらのデーターは、固体ＩＤＥ粒子の場合と比 較して、気泡／ＩＤＥＩＤＥ粒子大したエコー反射性が得られることを示してい る。この増大したエコー反射性は、気泡／ＩＤＥＩＤＥ粒子ＩＤＥ粒子の濃度の 半分より低くても観察されている。

第４図は、気泡／ＩＤＥ造影剤を注入する前の胆嚢を有する正常なウサギ肝臓、 の５ＭＨｚてのＢ−走査像の図である。

第５図は、気泡／ＩＤＥ造影剤を静脈注射した後６ｏ分後の胆嚢を有する正常な ウサギ肝臓の５ＭＨｚでのＢ−走査像の図である。柔組織エコー反射性のエンハ ンスメントが、造影剤投与後少なくとも１２０分間観察された。

第６図は、一定温度で、撹拌速度（ｒｐｍ）と有機溶液の全体積Ｃ１’）の積の 関数として示した注入速度（ｍ１／分）（水性沈澱用液体の）グラフである。関 係　水性注入速度（ｍ１／分）＝２３＋Ｏ，＋４［撹拌速度（ｒｐｍ）Ｘ有機溶 液体積（１）］は、一定温度（４°Ｃ）及びジメチルスルホキシド／エタノール での１μ直径のヨーシバミド　エチルエステル粒子の生成のためのパラメーター を定める。

第７図は、水性沈澱用液体の注入速度対［撹拌速度（ｒｐｍ）　ｘ打機溶液体積 ］の一定比での温度の関数としてヨーシバミド　エチルエステル粒子の粒径を示 すグラフである。

第８図は、ヨーシバミド　エチルエステル溶液の一定の温度及び撹拌速度での水 性沈澱用液体の注入速度を変えることによる粒径に対する影響を示すグラフであ る。

第９図は、５．２ｍｇ／ｍｌてのインビトロ気泡／ＩＤＥ粒子懸濁物の未修正後 方散乱値（ＲＭＳ）を示すグラフである。これらのデーターは、後方散乱か濃度 と共に直線的に増大することを示している。

本発明の詳細な説明 本発明及びそれに付随する多くの利点を例示し、それらを一層完全に理解できる ように、新規な超微小の実質的に凝集していない非結晶質多孔質粒子及びそれら 粒子の製造方法及び利用方法に関連して次に詳細な記述を与える。

本発明は、予め定められた均一な粒径の非凝集多孔質粒子を製造することに関す る。本発明の一つの態様は、ビヒクル中で予め定められた粒径の均一な粒子を製 造することに関し、その場合、ビヒクル中の化合物の濃度かそのビヒクル中の該 化合物の溶解度よりも大きくなっている。化合物か溶解する溶媒から、適当な沈 澱用液体中へ化合物を注意深く制御して沈澱させることにより粒子を形成する。

本発明の第二の態様は、溶解し易い化合物を溶解することかでき、共沈した粒子 の洗浄中に溶解しにくい化合物から除去することかできるように、指定された洗 浄用溶液中でかなり異なった溶解度を存する二種類の化合物を同時に共沈させる 。多孔質粒子は、もし望むならば、次に被覆して表面特性を変化させてもよい。

多孔質粒子は、次にそれら粒子から殆と全ての水分を除去し、低密度の多孔質粒 子を生ずるようにしてもよい。そのような乾燥状態の粒子は、高強度低重量材料 に有用である。

約１μ以下の直径を持つ粒子は、それら粒子を再湿潤した時に迅速には満たされ ない位小さな気孔を有する。このようにして、粒子中に空気（又は他のガス）を 捕捉することかできる。そのような粒子は、エコー反射性超音波造影剤としして 有用である。

本発明の基礎になっている重要な原理は、共沈のために選択された二種類の化合 物の溶解度差にある。例えば、エステル及びそれが合成された酸は、共に水溶液 中で例えばｐＨ５〜７て可溶性にすることができる。しかし、酸はｐＨ１０〜１ １て著しく一層大きな溶解度を有し、そのため塩基性ｐＨて洗浄すると、酸を溶 解し、エステル化合物だけから、又は殆どそれだけからなる多孔質粒子を生ずる 。アミドの如き他の酸誘導体を、エステル化合物の代オつりに用いることができ るか、洗浄溶液は効果かあるようにするためには一層低いｐＨにしなければなら ないことを念頭に入れる。

同様に、二種類の化合物を、を機溶媒で洗浄することができるように選択するこ とかできる。但しそれら二種類の化合物かその溶媒中でかなり異なった溶解度を 有するものとする。

本発明は、与えられた洗浄溶液に対し溶解度か桁数で異なっている化合物を用い て実施することかできる。しかし、溶解度の差は小さくてもよい（２桁以下）か 、洗浄条件を、多孔質粒子を生ずるように調節しなければならない。

溶解し易い成分対溶解しにくい成分の比率を変えることにより、得られる粒子の 性質を変えることができる。例えば、ヨーシバミック　アシッド（ＴＤＡ）対ヨ ーシバミド　エチルエステル（ＬＤＥ）の比を２．１から８．１に変化させると 、第１図に示す如く、１辱られる粒子のエコー反射性を著しく増大する。第１図 に例示したこれらのデーターは、４．７ｍｇ／ｍｌで得られたものである。

粒子の濃度を変化させても、懸濁物のエコー反射性に影響を与える。第２図に示 した如く、粒子の濃度を５．２から１３．１■／ｍｌに増大すると、血漿中の粒 子のＲＭＳ後方散乱は０．４から１．２に増大する。

本発明の超微小多孔質粒子を、それらの表面特性を変化させる物質で被覆しても よい。例えば、粒子を血清アルブミンで被覆すると、それら粒子の生体相容性を 改良することかできる。抗体で被覆すると、粒子の希望の部位に対する標的性を 改良することかできる。そのような粒子の粒子表面の湿潤性、帯電性、又は透過 性を変化させる被覆を、希望の表面特性を達成するために乾燥前に適用してもよ い。

乾燥は当業者に知られた多くの方法のいずれによって達成してもよい。化合物（ 一種又は多種）及びそれら粒子の用途により、真空、スプレー、或は凍結乾燥を 用いることかできる。

乾燥後、粒子を、それら粒子か溶解しないどのような液体によって再構成しても よい。超音波造影剤のためには、液体は一般に水又は成る他の適当な水溶液であ ろう。他の液体か他の用途に適していることもある。

乾燥以外の方法を用いて多孔質粒子中にガスを導入することができる。例えば、 過飽和及び音響照射（ａｃｏｕｓｔｉｃ　１ｒｒａｄｉａｔｉｏｎ）下での整流 拡散（ｒｅｃｔｉｆｉｅｄｄｉｆｆｕｓｉｏｎ）は、その場でのガス空洞形成の ための核として多孔質粒子を用いることができる。

好ましい［）Ｅ／ＩＤＡ粒子は、コンピューター断層写真（ＣＴ）及び超音波の 両方で診断造影に有用であると考えられる。ＩＤＥ固体マトリックス中の沃素は 、ＣＴに対する効果的な減衰剤であるのに対し、捕捉空気は超音波に対する効果 的な散乱剤である。同様な粒子は、磁気共鳴造影に対しても同様に有用である。

このことは、乾燥粒子をガドリニウムキレートの如き常磁性材料を含有する液体 で再構成することにより可能になるであろう。常磁性材料が粒子の気孔中で平衡 状態になるのに充分な時間を与えた後、それら粒子を組織、例えば肝臓の高感度 磁性共鳴造影に用いることかでき、その場合捕捉された常磁性材料の生体分布は 、バルク液体生体分布よりはむしろ粒子によって調節される。このことは、ガド リニウムＥＤＴＡ　（Ｇｄ　ＥＤＴＡ）の如き常磁性材料中に乾燥多孔質粒子を 懸濁させることにより達成することかできると考えられる。例えば、一度び多孔 質粒子をガドリニウムＥＤＴＡ中に懸濁させたならば、それらを有効な１動物中 に導入し、それら多孔質粒子及びＧｄ　ＥＤＴＡか肝臓中の食細胞中に蓄積し、 一方残りのＧｄ　ＥＤＴＡは通常分散し、動物から迅速に無くなるようにするこ とかできる。

肝臓中に蓄積したＧｄ　ＥＤＴＡは成る時間食細胞中に留まり、造影中肝臓柔組 織をエンハンスするであろう。しかし、腫瘍及び転移細胞は、造影の際にエンハ ンスされず、それによってそれらの検出が改良されるであろう。他の組合せ、例 えば診断剤及び治療剤を、本発明の実施で用いることができる。

本発明に含まれると考えられる物理化学的原理は、系の自由エネルギーが、化合 物か粒状状態又は結晶状態で存在する場合よりも、化合物か打機溶媒中に溶解し ている場合に一層高くなることを示唆している。沈澱中、化合物は当然結晶形（ 最低の自由エネルギー状態）へ、それか準安定な粒子状態で捕捉されていない限 り転化する。粒子状態は、その自由エネルギーが溶液と結晶相との間の中間にあ る状態である。適切に実施した場合、本発明により、結晶状態へ転移するのを防 ぎ、準安定な粒子状態で化合物を捕捉することができる。

共沈中に形成された粒子の粒径分布は、共沈の開始と完了との間の時間間隔に関 係させることができる。非常に短い時間間隔は均一な粒径の粒子を生成する結果 になるが、非常に長い時間間隔は広い粒径分布を与える結果になると考えられる 。中間的条件は、中間的粒径分布を生ずる。

本発明を利用する際の重要なパラメーターは、沈澱用液体に対する化合物の溶解 度である。本質的に水性溶液に対する溶解度を殆ど持たない化合物、即ち、ｌｏ 、ｏｏ　ｏ分の１より小さい水性溶解度を存する化合物は、水性溶液中で沈澱し て優れた収率を与える。水に一層溶解する化合物でも、水性沈澱用液体を用いる ことができる。しかし、化合物の溶解度は大きくなるに従って、それら化合物の 幾らかか水性相に溶解し、一層安定な結晶状態に転移する可能性が大きくなる。

また、水性相中への再溶解により粒径分布を広くすることができる。これらの理 由から、水性沈澱用液体を、１０，０００分の１より小さい水に対する溶解度を 有する化合物に対して用いるのが好ましい。

水性溶液に余り溶けない化合物、即ち約１０．０００分の１〜約１００分の１の 溶解度を存する化合物の懸濁物を調製することができ、それら化合物が水の場合 よりも低い溶解度を示す許容可能な沈澱用液体を用いることにより優れた収率を 与えることか判明している。その沈澱用液体に比較して、水に対するそれら化合 物の溶解度の差は、収率に関して顕著であるために大きい必要はない。均一で予 め定められた粒径の粒子を製造するために、適当な溶媒中に固体化合物を入れた 溶液を調製する。その溶液を、化合物を沈澱させない非溶媒で希釈してもよい。

沈澱用液体も、好ましくは表面活性剤を用いて、それら化合物を共沈させると共 に、それら化合物の粒子の得られた懸濁物が凝集しないように、安定化するのに 充分な量で調製する。沈澱用液体は、凝集しない化合物が用いられた場合には、 単独で用いることかできる。沈澱用液体を、注意深く制御された条件下で、化合 物か溶解された溶液中に注入する。それら条件には、有機溶液の撹拌速度、水溶 液の注入速度、有機溶液の体積、及び溶液及び懸濁物の温度が含まれる。例えば 、沈澱用液体を標準ゲージの針を通して注入してもよい。

粒径を調節するための種々の因子についての研究で、三つの有用な関係が発見さ れた＝　（１）溶液を一層多くの非溶媒で希釈すると大きな粒子を生じ、少ない 非溶媒で希釈すると小さな粒子を生ずる。（２）沈澱中の溶液の温度を高くする と大きな粒子を生し、沈澱中の溶液の温度を低くすると小さな粒子を生ずる：及 び（３）有機溶液の撹拌速度を一定にして、沈澱用液体の注入速度を速くすると 小さな粒子を生し、注入速度を小さくすると大きな粒子を生ずる。

共沈か完了した時、均一な粒径の粒子を洗浄して、即ち遠心分離、濾過等により 、溶媒及び可溶性化合物を除去し、本発明の多孔質粒子を生ずる。殆との場合、 粒子は結晶形に転移するのを防ぐため迅速に溶媒から分離すべきである。

多くの化合物にとって有用な水性沈澱用液体には、ヨーシバミド　エチルエステ ル、ヨータラメート（ｉｏｔｈａｌａ−ｍａｔｅ）エチルエステル、ヨーセファ メート（ｉｏｓｅｆａｍａｔｅ）エチルエステル、２．　２’、４．　４’−テ トラ−ヒドロキシベンゾフェノン、ＲＳニトロセルロロープロゲステロン（ｐｒ ｏｇｅｓｔｅｒｏ口ｅ）、β−２゜４、　６−１−リョートー３−ジメチル　ホ ルムアミジノフェニル　プロピオン酸エチルエステル、Ｎ−（トリフルオロアセ チル）アトリミソン（Ａｄｒｉｍｙｃｉｎ）　ｌ　４バレレート、１，２−シア ミノソクロヘキサン　マリネート白金（■）、ルチステロン（ｎｏｒｅｔｈｉｓ ｊｅｒｏｎｅ）、アセチルサリチル酸、ワファリン（ｗａｆａｒｉｎ）、ヘパリ ンートリトデシルメチルアンモニウムクロリト錯体、スルファメトキサゾール、 セファレキンン（ｃｅｐｈａｌｅｘｉｎ）、プレドニソロン（ｐｒｅｄｎｉｓｏ ｌｏｎｅ）アセテート、ジアゼパム（ｄｉａｚｅｐａｍ）、クロナセバム（ｃｌ ｏｎａｚｅｐａｍ）、メチトン（ｍｅｔｈｉｄｏｎｅ）、ナロキソン（ｎａｌｏ ｘｏｎｅ）　、ジスルフィラム（ｄｉｓｕｌｆｉｒａｍ）　、メルカプトプリン （ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）、クギ１゛キシン（ｄｉｇｉ−ｔｏｘｉｎ） 、ブリマグイン（ｐｒｉｍａｇｕｉｎｅ）、メフロキン（ｍｅｆ　１ｏｑｕｉｎ ｅ）、アトロビン（ａｔｒｏｐｉｎｅ）、スコポラミン（ｓｃｏｐｏｌａｍｉｎ ｅ）、チアジド（ｔｈｉａｚｉｄｅ）、フロセミド（ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ）、 プロバナロール（ｐｒｏｐａｎａｌｏｌ）、メチルメタクリレート、ポリメチル メタクリレート、５−フルオロデオキシウリジン、ソトシンアラビノシド（ｃｙ ｔｏｓｊｎｅ　ａｒａｂｉｎｏｓｉｄｅ）、アシクロビール（ａｃｙｃｌｏｖｉ ｒ）、及びレボノルゲストレル（ｌｅｖｏｎｏｒｇｅｓｔｒｅｌ）の如き有機化 合物；及び六水和塩化アルミニウム、鉄、銅、マンガン及び錫の酸化物の如き無 機化合物か含まれるか、それらに限定されるものではない。

非水性沈澱用液体を用いた沈澱のために一層よく適した化合物には、ミチンドミ ト（ｍｉ　ｔ　ｉｎｄｏｍｉ　ｄｅ）、イソプロピルピロリジン（ＩＰＰ、又は カルバミン酸、（ｌ−メチルエチオール）−、（５−（３，４−ジクロロフェノ ール）−２，３−ジヒト七−１．Ｈ−ピロリジン−６−１７−ジイル）ビス（− メチレンエステル）の如き加水分解的に不安定な化合物の如き有機化合物；及び クエン酸鉄、沃素酸鉄、ピロ燐酸カルシウム、サリチル酸カルシウム、二塩化白 金、及びピロ燐酸ナトリウムの如き無機化合物か含まれる。

第一工程は、二種類の化合物で、その一方の化合物が重要であるものを、それら 化合物に適した溶媒中に入れた溶液を調製する。これは、選択された溶媒中にそ れら化合物を単に溶解することにより行われる。

溶媒は化合物に適するように選択される。例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭ Ｆ）は、ヨータラメート　エチルエステル（ＩＥＥ）及びヨーセファメートエチ ルエステル（ＩＦＥ）に対する溶媒であり、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ） はヨーシバミド　エチルエステル（ＩＤＥ）及びＩＥＥに対する溶媒である。

ＤＭＳＯはミチンドミトの如き化合物に対し適した溶媒でもある。多くの化合物 、特にＩＰＰに適した別の溶媒はテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）である。

次に溶液を、化合物を沈澱させない非溶媒で任意に希釈する。非溶媒は化合物の 液相に溶解した分子を一層よく分散させる。溶液の非溶媒による希釈度力吠きい 程大きな粒子を生じ、非溶媒による溶液の希釈度が低い程小さい粒子を生ずる。

非溶媒は、それを溶液に添加した時化合物を沈澱させるべきではない。エタノー ルの如き低級脂肪族アルコールは、ＤＭＳＯに入れたＩＤＥ及びＩＥＥの溶液に 対する効果的な非溶媒である。トリヨード安息香酸のエチルエステルの場合、２ 以上の比の非溶媒対溶媒の割合で、１〜３μの粒径の粒子（他のパラメーターに よる）を生ずることができる。２より小さな比率では、少なくともエタノールで 希釈したＤＭＳＯ溶液に適用したように、サブミクロンの粒子を生ずることかで きる。

溶液から希望の粒径で化合物を共沈させるため、表面活性剤の溶液を、化合物の 完全な沈澱を行わせ、そして化合物の粒子の得られた懸濁物を凝集しないように 安定化するのに充分な量で調製するのか好ましい。表面活性剤は凝集に対する安 定化を与え、一方適当な沈澱剤は化合物の共沈を起こす。液体中に懸濁した共沈 粒子か凝集しないように確実に安定化するためには過剰の表面活性剤溶液を存在 させる方かよい。凝集は不適切な大きい粒径の凝集物を形成する。殆どの場合、 表面活性剤を用いるか、成る化合物は表面活性剤を用いなくても実質的に凝集し ない安定な粒子を形成するように見える。そのような非凝集性化合物の例はある ヘパリン錯体である。

比較的大きな表面電荷を有する粒子は、沈澱用溶液中に表面活性剤を入れる必要 は少ないように、で、われる。粒子の表面電荷は時々そのζ電位として言及され 、その電荷の影響は距離と共に低下する。ζ電位の閾値が存在し、その値より大 きいと表面活性剤は不必要になり、その値より低いと沈澱粒子を凝集しないよう に維持するのに表面活性剤か必要になる。ζ電位は化合物の極性即ち真の電荷量 に直接関係している。例えは、沈澱用溶液中の表面活性剤に対する必要性は、本 発明の方法で用いられる化合物の帯電量又は極性の程度から予測することができ る。

例えば、ヘパリン錯体は高度に帯電しており、水で沈澱させた時、凝集しない安 定な粒子を形成する。

一般にそのような理論かあるにも拘わらず、経験的方法で充分である。即ち、先 ず水で沈澱を行わせ、もし凝集か起きれば、表面活性剤を入れた共沈を行うよう にする。表面活性剤はそれらの化合物との相容性及び化合物粒子の懸濁物を安定 化させるそれらの能力によって選択される。ＩＥＥ及びＩＤＥ薬剤と共に行うた めには、５％のポリビニルピロリドン（Ｃ−３ＯＬ０．１％のポリビニルピロリ ドン（Ｃ−１５）　、又は０．１％のヒト血清アルブミンの溶液か好ましい。ま た、０．１％のプル口＝　ツク（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）　Ｆ−６８、〔ボロキサマ ー（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ）　Ｉ　８８、ポリ（オキシエチレン−ＣＯ−オキシプ ロピレン）重合体）　、０．３３％のゼラチン、０．３３％のゼラチン＋０．６ ％のへタスターチ（Ｈｅｔａｓｔａｒｃｈ）　、０．３３％のゼラチン＋０．０ ０２％のプロピレングリコール、及び０．３％のゼラチン＋２％のシュクロース 、又は当業者に知られた他の表面活性剤も用いることができる。

希望の粒径て化合物の粒子を共沈させるため、沈澱用液体及び溶液を、温度、沈 澱用液体と共に注入される溶液は撹拌されるのか好ましい。このことは、撹拌、 層重、注入それ自体、及び当業者に知られた他の方法により達成することができ る。この効果は、沈澱用液体の流れと溶液の流れとを一緒にすることにより達成 することもできる。

化合物の共沈は発熱的に起き、溶液及び得られる懸濁物を加熱する。溶液及び得 られる懸濁物の温度は、沈澱物の希望の粒径が得られるように調節する。沈澱中 の溶液の温度が高くなる程大きな粒子を生じ、沈澱中の溶液の温度が低くなる程 小さな粒子を生ずる。多くの化合物は低い温度では溶解しにくいので、一般に収 率を最大にするために低い温度で沈澱用液体の注入を行うのが好ましい。共沈を 行うことができる温度の最低限度は、勿論、溶媒、沈澱用液体の凝固点及び経済 性に依存する。

また、有機溶液の撹拌速度を一定にして注入速度を太き（すると小さな粒子を生 じ、注入速度を低くすると大きな粒子を生ずる。

第６図〜第８図は、５％のポリビニルピロリドンの水溶液を用いて１部の溶液対 ２部のエタノールで希釈したＤＭＳＯ溶液からＩＤＥを沈澱させる際の、異なっ た注入速度及び温度での種々のパラメーター０粒径に与える影響を示す図である 。

第６図は、有機化合物ヨーシバミド　エチルエステルとジメチルスルホキシド／ エタノール溶液の体積及び撹拌速度を増大した時、表面活性剤水溶液の注入速度 は、４°Ｃてｌμの直径の粒子を生成させるためには次のように定義される割合 で増大させなけれはならないことを示している：注入速度（ｍｌ／分）＝２３＋ ０．１４［体積（Ｉり×撹拌速度（ｒｐｍ）］第７図は、注入速度対［撹拌速度 ×体積］の比を一定にして、沈澱温度を高くすると大きな粒子を生ずることを示 している。

第８図は、低い注入速度では大きな粒子が形成されることを示す曲線に近似して 、打機溶液に沈澱用液体を注入する速度について３点をプロットしたものであり 、温度対し撹拌速度Ｘ体、１１の比を一定にして、粒径は沈澱用液体の注入速度 に逆比例的に関係していることを示している。

第６図〜第８図を一緒に考慮すると、それらは、温度が高くなり、混合速度が低 くなると大きな粒子を生じ、温度か低く、混合速度が大きくなると小さな粒子を 生ずることを明らかに示している。粒径に影響を与えるように変化させることが できるもの以外のパラメーターは、共沈か起きる前の溶液の希釈量である。

共沈が完了した時、過剰の表面活性剤溶液を添加して、懸濁した粒子を凝集しな いように更に安定化することかできる。過剰の溶液は速い速度で添加することが できる。なぜなら、本質的に全ての化合物が今や均一な粒径の粒子として共沈し ているからである。沈澱した粒子を溶媒から迅速に分離して、粒子の再溶解及び 望ましくない粒径での再沈澱を防ぐようにする。分離を行うのに好ましい方法は 遠心分離である。膜濾過、逆浸透、及び当業者に知られた他の方法を含めた他の 方法を用いて望ましくない物質を除去してもよい。

粒子を分離したすぐ後で、最初に溶解した二種類の化合物の一方か溶解する溶液 で粒子を洗浄又は濯ぎ又は滴定し、溶媒及び過剰の表面活性剤を除去し、そのよ うな可溶化した化合物を沈澱粒子から除去又は抽出し、上で述べた如く乾燥する 。

上て概鮎述へた方法に従い製造された乾燥多孔質粒子は、適当な懸濁ビヒクル中 に再懸濁することかできる。そのビヒクルは、状況に従い、水性溶液又は非水性 溶液にすることかできる。例えば、形成された多孔質粒子が非経口投与のための 医薬化合物からなる場合、多孔質粒子は無菌塩類溶液の如き水溶液中に最終的に 再懸濁する。しかし、そのようにする場合、空気の泡の如き気泡が粒子の裂は目 或は気孔中に捕捉されるであろう。他の場合として、粒子は軟膏、ゲル等の如き 保持剤中に懸濁してもよい。化合物は、沈澱用液体と同じ範囲の懸濁ビヒクル中 での溶解度範囲を有するのか好ましい。

米国特許第４．８２６．６８９号及び第４．９９７．４５４号明細書に開示され た方法及び超微小非凝集性固体粒子は、本発明を改良する教示を与え、従って、 参考のため全体的にここに入れである。

本発明の超微小で実質的に凝集していない多孔質粒子の例を、次の実施例を参照 して更に例示する。

実施例１ 約０．５μの実質的に均一な平均直径を存する超微ｚＮト凝集多孔質ヨーシバミ ドエチルエステル（ＩＤＥ）粒子を、下に述べるようにして調製し、ウシ血漿− 蒸留水（１：　ｌ）溶液中に懸濁し、小さなプラスチックピペットに入れた。

パルスエコー法を用いて相対的後方散乱を決定した。ＪＳＲパルス発生機で駆動 した広帯域中心周波数１０ＭＨｚバナメトリックス（Ｐａｎａｍｅｔｒｊｃｓ） 　トランスデユーサ−（直径１．３ｃｍ、５点点）を用いてｒｆ走査線を得た。

インビトロ測定の場合、平均後方散乱（２乗平均、ＲＭＳ）を、夫々長さ約４ｎ ｉｎに相当する８本の関連しない走査線について計算した。

気泡／ＩＤＥ粒子懸濁物のインビトロ分析により、第９図に示すように、後方散 乱か濃度と共に単調に増大することか判明している。

ウシ血漿と混合した後の気泡／ＩＤＥ粒子懸濁物及び標準固体ＩＤＥ粒子懸濁物 のインビトロ分析により、第３図に示すように、固体ＩＤＥ粒子の場合よりも気 泡／ＩＤＥＦｎ子から一層大きな後方散乱が得られることが判明している。更に 、これらのデーターは気泡／ＴＤＥ粒子の高いエコー反射性が、ウシ血漿と混合 した後でも何時間も持続することを示している。

気泡／ＩＤＥ懸濁物を調製するため、約２５０ｍｇの固体ヨーシバミド　エチル エステル（ＩＤＥ）及び５００ｍｇのヨーシバミック　アシッド（ＩＤＡ）を、 １”　Ｘ５／１６”テフロン被覆棒を存する５００ｍ１ビーカーに入れた。約５ ｍｌのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加し、溶解するまで約１０〜１５ 分間撹拌した。その溶液に、約６．２５ｍ１の無水エタノールを添加した。次に ビーカーをアセトン／ドライアイス浴中て冷却した。冷却しながら混合物を、は ねかえさないようにして迅速に撹拌した。約４．５ｍｌの約ｐＨ５の水を約０． ５ｍｌずつ混合物中に、その温度を約Ｏ′Ｃに保ちなからゆっくり注入した。次 に約８ｍｌの約ｐＨ５の水を、約０°Ｃから出発して約５ｍ１／分の速度で混合 物中に注入した。このようにして、合計１２．５ｍｌの水を混合物中に注入した 。バーバード・注入ポンプ（ｔ（ａｒｖａｒｄ　１ｎｆｕｓｉｏｎ　ｐｕｍｐ） 、６０ｃｃプラスチツク注射器及び１９ゲージ注入セツト（バタフライ）を用い て水を注入した。混合物に約６．５ｍｌの水を注入した後、約ビＣの温度て共沈 か起きた。共沈後、約１５０ｍ１の約ｐＨ７，４の１％ポリビニルピロリドン（ ＰＶＰ）を添加することにより懸濁物を安定化し、約ｌθ℃の温度に維持した。

次に懸濁物を２５０ｍ１遠心分離瓶（約３１．２５ｍ１）中に注入し、約２５０ ０ｒｐｍで約３０分間遠心分離にかけた。上澄み液を捨てた。遠心分離瓶中の沈 澱物を次に約ｐＨ１１の約３１．２５ｍ１の約０．１％ＰＶＰて、その洗浄液が 約ＩＯのｐＨに達するまで繰り返し洗浄し、ＩＤＥ粒子からＩＤＡを抽出し、超 微小非凝集多孔質の非結晶質ＩＤＥ粒子を生成させた。次に実施例３に従いヒト 血清アルブミンで処理し、次に実施例４に記載する手順に従い、凍結乾燥した。

実施例２ ２〜４ｋｇの重量のニューシーラント白ウサギ〔ハゼルトン・ラボラトリーズ（ Ｈａｚｅｌｔｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））を麻酔させ、実質的に均一な 約０．５μの平均直径を有するヨーシバミド　エチルエステル（ＩＤＥ）多孔質 粒子の８〜１０ｍ１（ウサギの重量による）懸濁物を約１　ｍｌ／分の速度で静 脈注射した。気泡／ＩＤＥ粒子懸濁物の最終濃度は約１００ｍｇ／ｍｌであった 。気泡／ＩＤＥ粒子懸濁物の注射量は、ウサギの体重１ｋｇ当たり約ＩＤＥ２５ ０ｍｇであった。ＩＤＥ粒子は、それらの裂は目或は気孔内に捕捉された気泡を 含んでいた。

ウサギを周期的に走査した。気泡／ＴＤＥ粒子靜濁物を含む、又は含まないウサ ギ肝臓のＢ−走査像を第４図及び第５図に示す。これらの像は５．０ＭＨｚアク ソン・スキャナー（Ａｃｕｓｏｎ　５ｃａｎｎｅｒ）により、１２０分の検査中 全ての設定を一定に維持して得られた。

気泡／ＩＤＥ粒子懸濁物の静脈内投与に続く肝臓エコー反射性は、第４図及び第 ５図から明らかなように、造影剤を含まない場合と比較して著しく向上している 。これらのウサギによる結果は、安定化／エコー反射性ガスか肝臓に運ばれ、造 影剤を用いないか、或は標準固体ＩＤＥｔｉ子を用いて得られた肝臓よりも遥か に後方散乱を増大することを示している。気泡／ＩＤＥ粒子を用いることにより 今や強力な超音波による肝臓病巣検出を改良することかできる。

気泡／ＩＤＥ粒子懸濁物を調製するため、約５０００ｍｇの固体ヨーシバミドエ チルエステル（ＩＤＥ）及び約１０．０００ｍｇのヨーシバミック　アシッド（ ＩＤＡ）を、２’Ｘ５／１．６“テフロン被覆撹拌棒を存する８００ｍ１のビー カーに入れた。約１００ｍ１のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を添加し、溶 解するまで約１０〜１５分間撹拌した。その溶液に、約１２５ｍ１の無水エタノ ールを添加した。次にビーカーをアセトン／ドライアイス浴中て冷却した。冷却 しながら混合物を、はねかえさないようにして迅速に撹拌した。約９０ｍ１の約 ｐＨ５の水を約１０ｍ１ずつ混合物中に、その温度を約０°Ｃに保ちながらゆっ くり注入した。次に約１６０ｍ１の約ｐＨ５の水を、約Ｏ″Ｃから出発して約１ ００ｍ１／分の速度で混合物中に注入した。このようにして、合計２５０ｍ１の 水を混合物中に注入した。

バーバード・注入ポンプ、６０ｃｃプラスチツク注射器及び１９ゲージ注入セツ ト（バタフライ）を用いて水を注入した。混合物に約１２５ｍ１の水を注入した 後、約２°Ｃの温度て共沈か起きた。共沈後、約１５０ｍ１の約ｐＨ７，４の約 １％ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）を添力Ｕすることにより懸濁物を安定化し 、約１０℃の温度に維持した。次に懸濁物を５個の２５０ｍ１遠心分離瓶（１本 の瓶、約１２５ｍ１）中に注入し、約２５００ｒｐｍで約３０分間遠心分離にか けた。上澄み液を捨てた。５個の遠心分離瓶中に残留している沈澱物を次に約ｐ Ｈ１１の約１２５ｍ１の約０．　Ｉ％ＰＶＰて、その洗浄液か約１０のｐＨに達 するまで繰り返し洗浄し、粒子からＩＤＡを抽出し、超微小非凝集多孔質の非結 晶質ＩＤＥ粒子を形成した。

次に実施例３に従いヒト血清アルブミンで処理し、次に実施例４に記載する手順 に従い、凍結乾燥した。

実施例３ 実施例１及び２のＩＤＥ粒子をヒト血清アルブミンで被覆し、それらの粒子の生 体相容性を改良した。

ＩＤＥ粒子を被覆するため、大略の量の（例えば、２５０ｍｇ又は５ｇ）のＩＤ Ｅ懸濁物をピペットにより５０ｍ１の遠心分離管に入れた。その管を２５００ｒ ｐｍで３０分間遠心分離にかけ、上澄み液を捨てた。５ｇ又は２５０ｍｇのＩＤ Ｅ多孔質粒子に、夫々ｌｏＯｍｌ又は５ｍｌの約２５％ヒト血清アルブミン（Ｈ ３Ａ）を添加し、渦流混合器で完全に混合した。本発明による好ましいＨ３Ａ／ ＩＤＥ比は約２：１〜約５：ｌである。Ｈ３Δ混合物を約２時間室温で放置した 。放置後、約３０分ずつ渦流混合器で完全に混合し、次に４０°Ｃて一晩貯蔵し た。貯蔵した混合物を約３０００ｒｐｍで１２０分間遠心分離にかけた。上澄み 液を捨てた。ピペットによりＩＤＥ２５０ｍｇに対しては約２．０ｍｌ、ＩＤＥ ５ｇに対しては約１５ｍ１の約ｐＨ７，４の約０．１％ＰＶＰを添加し、渦流混 合器て完全に混合した。

実施例４ 実施例１又は２のＩＤＥ粒子を凍結乾燥するため、ドライアイス／アセトン浴中 に遠心分離管を入れ、出来るだけ速く懸濁物を凍結した。薄い凍結層を形成し易 くするため、懸濁物を遠心分離管の下側上で回転させてもよい。

一度び冷凍したならば、それら冷凍管を出来るだけ速く凍結乾燥機中に入れ、凍 結乾燥をした。典型的な凍結乾燥機の設定条件には次のものが含まれる：凍結・ 乾燥器温度は約−５５°Ｃに等しい：棚温度は約−４０℃に等しい：真空度は約 ｌθ〜５０μｍＨｇである。冷凍懸濁物は、残留水分が約２％以下になるまで凍 結乾燥されるへきである。凍結乾燥機から取り出した時、直ちに遠心分離管に蓋 をし、必要になるまで約５°Ｃの冷凍機中に保存した。

別法として、実施例１又は２のＩＤＥ粒子、マニトールの如き化合物、又は凍結 乾燥ケーキの形成を促進するのに適切な当業者に知られた他の促進剤を凍結乾燥 するため、懸濁用ヒヒクルに添加した。次に約４ｍｌ以下の懸濁物を約１０ｍ１ の凍結乾燥ガラス瓶（又は一層大きな体積のための同等の比率）に入れ、ガラス 瓶内容物を瞬間乾燥した。次にそれらの瓶を真空乾燥するため凍結乾燥機を入れ た。

作動条件には、凝縮器温度約−５５°Ｃ１及び真空友釣ｌθ〜５０μｍＨｇが含 まれていた。棚温度を約４８時間約−４０°Ｃに調節し、次に約２時間室温に上 昇させ、次に約８時間約２０°Ｃに調節した。残留水分が約２％以下になる限り 、他の操作条件でも許容出来る。ガラス瓶を密封し、凍結乾燥機から取り出し、 必要になるまで約５°Ｃて保存した。

実施例５ １二６バビクル（ｂｕｂｂｉｃｌｅｓＸ多孔質粒子）懸濁物（実施例Ｉ６、表Ｉ ）を調製するため、約１０ｇのヨーシバミド　エチルエステル（ＩＤＥ）及び約 ６０ｇのヨーシバミック　アンプｌ’　（Ｉ　ＤＡ）を、２！のビーカーに入れ た。約２００ｍ１のジメチルスルホギノト（ＤＭＳＯ）をビーカーに添加し、全 ての固体か溶解するまで約１時間撹拌した。その溶液に、約２５０ｍ１のエタノ ールを添加し、その溶液を混合した。次にその溶液の入ったビーカーをドライア イス／アセトン浴中に入れ、約１０°Ｃに冷却しなから迅速に撹拌した。約２２ ０ｍ１の水（約ｐ　Ｈ５）を、バーバート・注入ポンプ、６０ｃｃプラスチツク 注射器及び１９ゲージバタフライ七ノドを用いて約１５０ｍｌ／分の速度で注入 した。水（約ｐＨ５）を約２０ｍ１ずつ撹拌し一カー中へ注入し、各添加後温度 か約ｌＯ°Ｃに戻るようにした、次にビーカー中の溶液を約８°Ｃに冷却し、約 ６０ｍ１の水（約ｐＨ５）を約１００ｍ１／分の速度で注入し、約２５０ｍ１の 全注入体積及び約９°Ｃの温度で沈澱か起きた。

次に更に２２０ｍ！の水（約ｐＨ５）を約１５０ｍｌ／分の速度でビーカーに注 入した。共沈したハビクル（多孔質粒子）を、次に約３００ｍ１の１％ＰＶＰ（ 約ｐＨ７，４）を添加することにより安定化した。

その材料を次に６本の２５０ｍ１遠心分離瓶（瓶１本約２０８ｍ１）中に注入し 、約２５００ｒｐｍで約４５分間遠心分離にかけた。上澄み液を捨て、各組を約 １２５ｍ１の約０．１％ＰＶＰ（約ｐＨＩ＋）中に再懸濁した。次にそれらの瓶 を更に２回遠心分離にかけ（約２５００ｒｐｍで約３０分間）、１瓶当たり約１ ２５ｍ１の約０．１％ｐｖｐ　＜約ｐＨ１１）及び最終的に１瓶を当たり約５０ ｍ１の約０．１％ｐｖＰ（約ｐＨ１１）の両方で再懸濁した。約１２５ｍ１の約 ０．ＩＮ水酸化ナトリウムを次に各組に添加した。次にそれらの瓶を、約２５０ ０ｒｐｍで約３０分間遠心分離にかけ、約Ｑ、１％ｐｖｐ　＜約ｐＨ７，４）で 再懸濁することにより１１回洗浄した。材料を全て洗浄した後直ちに、その材料 を再び遠心分離にかけ、約０．１％ＰＶＰ、約１０％マニトール（約ｐＨ７，４ ）で再懸濁し、マニトール溶液で約５０ｍｇ／ｍｌに希釈し、実施例４に記載し たように、ｌｏｍｌのガラス瓶当たり４ｍｌの量で凍結乾燥した。

下の表Ｉは、実施例１及び５による超微小多孔質ＩＤＥ粒子の製造を例示してい る。特に表Ｉ中の例６〜ｌＯは一般に実施例１て概説した手順に従ったものであ るのに対し、表１中の例１１〜Ｉ４は実施例１の手順に概ね従っているか、ＩＤ Ｅ／ＩＤＡ比を変化した場合を例示している。表１中の例１５は、例１３に比較 して、多孔質粒子の直径が温度を上昇させることによりとのように増大するかを 示している。例１５及び１６は、多孔質粒子の製造が、粒子直径を一定に保ちな からとのように規模を増大することかできるかを示している。

本発明は、勿論本発明の本質及び必須の特徴から離れることなく、ここに記載し たものとは異なった特定の仕方で実施することができる。従って、本発明の態様 は、あらゆる点て例示的なものであって限定的なものと考えるべきてはなく、請 求の範囲の意味及び同等の範囲内に入る全ての変化は本発明に含まれるものであ る。

ＷＥＩＧＨＴ　ＲＡＴＩＯＩＯＡ／ＩＣ）Ｅ　ＦＩＧ、　１１ＮＦＵｓＩＯＮ　 ＲＡＴＥ　（ｍｌ／ｍ１ｎ）ＰＡＦＩＴＩＣＬＥ　５ＩＺＥ　＾Ｓ＾ｔＥＭｐｃ ＲＡＴｕ＊ｃ　（”ｃ） ＦＩＧ、　７ ＰＡＲＴＩＣＬ！：　５ＩＺＥ　Ａｓ　Ａ　ＦＬＦＮＣＴＩＯＮ　ＯＦ　ＩＮＦ υ５１０８　ＲＡＴＥＦＩＧ、８ （１Ｍ５） 手続補正書（自発） □、ヤ〜！Ｗ＃　”’°”°１”′１ １、事件の表示 ２、発明の名称 克泡を取り込む超微小ｌｐ凝集多孔質粒子３、補正をする者 事件との間係　特許出願人 氏名（名称）　ユニパーシティ　オプ　ロチニスター６、補正により増加する請 求項の数 ７、補正の対象 明細書１Ｍ求の範囲及び要約書翻訳文 ８、補正の内容　別紙のとおり 明細書、請求の範囲及び！約書簡訳文の浄書（内容に変更なし）国際調査報告 国際調査報告 フロントページの続き （８１）指定国　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ 、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、ＴＤ、ＴＧ ）、ＡＴ、　ＡＵ、　ＢＢ、　ＢＧ、　ＢＲ，ＣＡ、　ＣＨ，Ｃ３，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＩ、ＧＢ、ＨＵ、ＪＰ、ＫＰ、ＫＲ，ＬＫ、ＬＵ、ＭＧ、ＭＮ、 ＭＷ、ＮＬ、Ｎｏ、ＰＬ、ＲＯ、ＲＵ、ＳＤ、ＳＥ、ＵＳ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．約１０μまでの粒径範囲から選択された実質的に均一な粒径を有する超微小 で実質的に凝集していない非結晶質多孔質粒子であって、液体中に懸濁した時そ の多孔質マトリックス中に気泡を捕捉することができ、動物の血流中に導入する と、血管及び柔組織の医学的造影を向上させる能力を有する超微小多孔質粒子。 ２．平均粒径が約０．０１μ〜約５．０μの範囲から選択される請求項１に記載 の超微小多孔質粒子。 ３．平均粒径が約０．１μ〜約２．０μの範囲から選択される請求項１に記載の 超微小多孔質粒子。 ４．粒子が多孔質ヨージパミドエチルエステル粒子である請求項１に記載の超微 小多孔質粒子。 ５．粒子が液体中に恋濁され、それらの多孔質マトリックス内に捕捉された気泡 を有する請求項１に記載の超微小多孔質粒子。 ６．粒子が表面に被覆を有する請求項１に記載の超微小多孔質粒子。 ７．約１０μ以下の粒径範囲から選択された実質的に均一な粒径を有する超微小 で実質的に凝集していない非結晶質多孔質粒子であって、（ａ）第一及び第二固 体化合物を、それら二種類の化合物のための適当な溶媒中に入れた溶液を調製し 、然も、 （ｂ）沈澱用液体を前記溶液中に、均一５０℃〜約１００℃の温度で、溶液５０ ｍ１単位体積当たり約０．０１ｍｌ／分〜約３０００ｍｌ／分の注入速度で注入 し、然も、前記二種類の固体化合物は前記沈澱用液体には本質的に殆ど溶解せず 、前記溶媒は前記沈澱用液体と混和することができ、その結果約１０μまでの粒 径範囲から選択された均一な粒径の実質的に凝集していない粒子の形の沈澱無定 形非結晶質固体化合物の懸濁物を生成させ、前記粒径は沈澱中の溶液温度に比例 的に関係し、注入速度には逆比例的に関係しており、そして（ｃ）前記粒子を適 当な洗浄液体中で洗浄し、前記第一化合物はその洗浄液体に本質的に殆ど溶解せ ず、前記第二化合物は前記洗浄用液体に対し可溶性であり、その結果前記第二化 合物か前記第一化合物から抽出されて、超微小で実質的に凝集物していない非結 晶質多孔質粒子を生成する、ことからなる方法により製造された超微小多孔質粒 子。 ８．洗浄前又は洗浄中、溶媒から共沈粒子を分離する工程を更に含む請求項７に 記載の超微小多孔質粒子。 ９．粒子を洗浄する前に、懸濁物に付加的沈澱用液体を漆加する請求項７に記載 の超微小多孔質粒子。 １０．粒子を遠心分離、膜濾過、又は逆浸透により分離する請求項８に記載の超 微小多孔質粒子。 Ｈ．沈澱用液体が表面活性剤溶液である請求項７に記載の超微小多孔質粒子。 １２．二種類の固体化合物の濃度が溶媒中のそれらの溶解度限界に近いように溶 液を調製する請求項７に記載の超微小多孔質粒子。 １３．第一固体化合物がヨージバミドエチルエステルであり、第二固体化合物が ヨージパミックアシッドであり、溶媒がＤＭＳＯであり、沈澱用液体がｐＨ約５ ．０の水であり、洗浄用液体がｐＨ約１１のポリビニルピロリドンの水溶液であ る請求項７に記載の超微小多孔質粒子。 １４．平均粒径が約０．０１μ〜約５．０μの範囲から選択される請求項７に記 載の超微小多孔質粒子。 １５．平均粒径が約０．１μ〜約２．０μの範囲から選択される請求項７に記載 の超微小多孔質粒子。 １６．粒径分布が約４０％の最大相対的標準偏差を有する請求項７に記載の超微 小多孔質粒子。 １７．洗浄用流体に可溶性の第二化合物対洗浄用流体に不溶性の第一化合物の重 量比が約２：１〜約１０：１の範囲にある請求項７に記載の超微小多孔質粒子。 １８．超微小多孔質粒子を乾燥する工程を更に含む請求項７に記載の超微小多孔 質粒子。 １９．超微小多孔質粒子が液体中に懸濁され、それらの多孔質マトリックス中に 捕捉されたガス又は医学的に有用な化合物を有する請求項７に記載の超微小多孔 質粒子。 ２０．超微小多孔質粒子を被覆する工程を更に含む請求項７に記載の超微小多孔 質粒子。 ２１．血管及び柔組織超音波造影のための気泡エコー反射性を与えるために動物 の血流内に注入するのに用いられるユニット投与量型（ｕｎｉｔ　ｄｏｓａｇｅ 　ｆｏｒｍ）の注入可能な無菌流体組成物において、請求項１に記載の超微小多 孔質粒子を、非毒性で生理学的に許容出来るキャリヤー液体中に懸濁させたもの からなり、前記超微小多孔質粒子が少なくとも一時的に安定である流体組成物。 ２２．超微小多孔質粒子がヨージパミドエチルエステル粒子である請求項２１に 記載の組成物。 ２３．ヨージパミドエチルエステル粒子が約０．５μの平均粒径を有する実質的 に均一な粒径を持つ請求項２２に記載の組成物。 ２４．超微小多孔質粒子が被覆されている請求項２１に記載の組成物。 ２５、動物の血管及び柔組織の超音波造影を促進する方法において、請求項２１ に記載の組成物を有効な量動物に導入し、そして前記動物を超音波スキャナーで 走査して超音波影像を発生させる、ことからなる超音波影像促進法。 ２６．約１０μまでの粒径範囲から選択された実質的に均一な粒径を有する超微 小で実質的に凝集していない非結晶質多孔質粒子の製造方法において、（ａ）第 一及び第二固体化合物を、それら二種類の化合物に適した溶媒中に入れた溶液を 調製し、 （ｂ）沈澱用液体を前記溶液中に、約−５０℃〜約１００℃の温度で、溶液５０ ｍｌ単位体積当たり約０．０１ｍｌ／分〜約３０００ｍｌ／分の注入速度で注入 し、然も、前記二種類の固体化合物は前記沈澱用液体には本質的に殆ど溶解せず 、前記溶媒は前記沈澱用液体と混和することができ、その結果約１０μ以下の粒 径範囲から選択された均一な粒径の実質的に凝集していない粒子の形の沈澱無定 形非結晶質固体化合物の懸濁物を生成させ、前記粒径は沈澱中の溶液温度に比例 的に関係し、注入速度には逆比例的に関係しており、そして（ｃ）前記粒子を適 当な洗浄液体中で洗浄し、前記第一化合物はその洗浄液体に本質的に殆ど溶解せ ず、前記第二化合物は前記洗浄用液体に対し大きな溶解度を有し、その結果前記 第二化合物が前記第一化合物から抽出されて、超微小で実質的に凝集していない 非結晶質多孔質粒子を生成する、ことからなる製造方法。 ２７．洗浄前に溶媒から共沈粒子を分離する工程を更に含む請求項２６に記載の 方法。 ２８．超微小多孔質粒子を乾燥する工程を更に含む請求項２６に記載の方法。 ２９．超微小多孔質粒子を被覆する工程を更に含む請求項２６に記載の方法。 ３０．超微小多孔質粒子を液体中に懸濁する工程を更に含む請求項２６に記載の 方法。 ３１．ガス又は医学的に有用な化合物を超微小多孔質粒子中に導入する工程を更 に含む請求項２６に記載の方法。