SU871525A1 - Способ получени НАД-зависимой формиатдегидрогеназы - Google Patents

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАД-ЗАВИСИМОЙ ФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ , предусматривающий культивирование продуцирующих ее дрожжей рода Candida при аэрации на синтетической питательной среде, содержащей источники азота, фосфора, минеральные соли и. спирт в качестве источника углерода, с последующим выделением фермента, отличающийс  тем, что, с целью повышени  активности целевого продукта и эффективности процесса , в качестве продуцента используют штамм дрожжей Candida methylica ИБ4Ф1 У-670, культивирование ведут в проточных услови х, а в качестве источ ника углерода используют этиловый 8 спирт и формиат натри  в концентрации 0,01-0,1 и 0,03-0,07% соответственно от объема питательной сре:ды , при этом фоЕмиат натри  внос т при достижении i культурой, экспонен циальной фазы роста. ро 1 О1 KD СЛ

Description

Изобретение относитс  к микробиологической промьпютенности, а именно к способам получени  НЛД-зависимой формиатдегидрогеназы из дрожжей, и может найти применение в фармацевтической, медицинской промышленности , а также дл  научных исследований,

НАД-зависима  формиатдегидрогеназа катализирует окисление формиата до двуокиси углерода при сопр женном восстановлении НАД до НАДН. В св зи с этим формиатдегидрогеназа может найти применение в окислительно-восстановительных процессах, св занных с регенерацией кофактора, например при модификации стероидов, получейии аминокислот, а также в биоэлектрохимических системах окислени  органических соединений дл  создани  топливных элементов, в которых НАДН выполн л бы функцию переносчика электронов с органических соединений на электрод.

Известны высокоочищенные препараты формиатдегидрогеназы, выделенные цэ 1eтaнoлйcпoлъзy oщиx дрожжей Kloeckera sp. 2201 Cl и метанолиспользующих грамотрицательных бактерий штамма № 1 2. Однако указанные высокоочищенные ферментные препараты обладают недостаточно высокой каталитической активностью. Кроме того, в качестве источника углерода в питательной среде дл  культивировани  микроорганизмов-продуцентов используют метиловый спирт, что усложн ет процесс наращивани  биомассы и снижает его эффективность так как возникает необходимость очистки сточных вод.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к предлагаемому способу  вл етс  способ получени  НАД-зависимой формиатдегидрогеназы , предусматривающий культивирование продулирующих ее дрожжей рода Candida при аэрации на синтетической питательной среде, содержащей источники азота, фосфора, минеральные соли и 2%-ный метиловый спирт в качестве источника углерода , с последующим выделением фермента Сз 1.Недостатками способа  вл ютс  периодические услови  культивировани , которые не позвол ют поддерживать культуру в одном и том же физиологическом состо нии с высокой ферментативной активностью, а также недостаточно высока  активность фермента , составл юща  0,13 мкM/мин и белка дл  бесклеточного экстракта и 2,4 мкИ/минМГ белка дл  очищенного фермента.

Кроме того,, применение в качестве источника углерода метилового спирта усложн ет культивирование в

производственных услови х, так как он летуч и токсичен. В этом случае необходима очистка сточных вод от метанола.

Цель изобретени  - повышение ак5 тив ости целевого продукта и эффективности процесса.

Цель достигаетс  тем, что в способе получени  НАД-зависимой формиатдегидрогеназы , предусматривающем

10 культивирование продуцирующих ее дрожжей рода Candida при аэрации на синтетической питательной среде, содержащий источники азота, фосфора, минеральные соли и спирт в качестве

5 источника углерода, с последующим выделением фермента, в качестве продуцента используют штамм дрожжей Candida methylica ИБФМ У-670, культивирование ведут в проточных услоQ ВИЯХ, в качестве источника углерода используют этиловый спирт и формиат натри  в концентрации 0,01-0,1 и 0,03-0,07% соответственно от объема питательной среды, при этом формиат

с натри  внос т в среду при достижении культурой экспоненциальной фазы .роста.

Повышение эффективности процесса происходит в результате культивировани  в услови х протока, при

0 которых культура поддерживаетс  в одной и той же фазе рйста при посто нной концентрации источника углерода в среде, что  вл етс  необходимым условием дл  получени  высокой

5 формиатдегидрогеназной активности.

Проточное культивирование позвол ет получать большие количества биомассы, чем периодическое, а использование в качестве источника

0 углерода этилового спирта вместо метилового значительно упрощает технологию, что также приводит к увеличению эффективности процесса.

Способ осуществл ют следующим 5 рбразом.

Дрожжи Candida methylica ИБФМ y-67Q культивируют на синтетической питательной среде следующего состава, г/л: (NH.).2i НРО 0,5;

. (N114) , 1,5; KNO, 4j MgS04 0,25 дрожжевой автолизат 0,01j этиловый спирт 0,01-0,1% по объему. Культивирование провод т в ферментере в непрерывно-проточном режиме с коэффициентом разбавлени  0,1 , при

5 рн 6,0. Формиат натри  в концентрации 0,03-0,07% внос т в среду через 6-8 ч от начала культивировани  при достижении культурой экспоненциальной фазы роста.

0 Дл  выделени  фермента биомассу разрушают на СР-дезинтеграте путем растирани  со стекл нньми бусами .центрифугируют при 4 000 g в течение 1 ч. Надосадочную жидкость используют дл  выделени  и очистки

Claims (1)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАД-ЗАВИСИМОЙФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ, предусматривающий культивирование продуцирующих ее дрожжей рода Candida при аэрации на синтетической питательной среде, содержащей источники азота, фосфора, минеральные соли и- спирт в качестве источника углерода, с последующим выделением фермента, отличающийся тем, что, с целью повышения активности целевого продукта и эффективности процес* са, в качестве продуцента используют штамм дрожжей Candida methylica ИБФМ У-670, культивирование ведут в проточных условиях, а в качестве источ- _ ника углерода используют этиловый ф спирт и формиат натрия в концёнтрации 0,01-0,1 и 0,03-0,07% соответственно от объема питательной среды, при этом формиат натрия вносят при достижении; культурой экспоненциальной фазы роста.

   ь© ч

   Л N3 У1 >