SU767196A1

SU767196A1 - Способ выращивани продуцентов литических ферментов

Info

Publication number: SU767196A1
Application number: SU782689091A
Authority: SU
Inventors: Берта Асатуровна Маргарян; Ольга Владимировна Кислухина; Татьяна Александровна Кузнецова
Original assignee: Всесоюзный Научно-Исследовательский Биотехнический Институт
Priority date: 1978-11-24
Filing date: 1978-11-24
Publication date: 1980-09-30

Description

t

Изобретение относитс к ферМентной отрасли микробиологичес-. кой пpo 4ЫIIШ ннocти и может быть использовано при получении препаратов литических ферментов путём 5 глубинного культивировани микроорганизмов , в частности бактерий рода BaclE us.

Известны способы получени литических ферментов путем глубин- 10 ного культивировани микрооргаийз- мов на различных питательных средах, содержащих источники органических соединений углерода и азота в суммарной концентрации до 10% и ми- )5 неральные соли. Культивирование проводитс одностадийно или в две стадии соответственно без корректировки или с корректировкой состава питательной среды в ходе фер- 20 ментации 1.

Наиболее близким по своей технической сущности к за вленному вл етс способ, согласно которсту 25 продуцентов литических ферментов выращивают глубинным методом на питательных средах, содержани х ассик«лируемые источники органических соединений, углерода и азота в суммарноЛ концентрации не ниже 2% и минеральные соли, причём за 2-6 ч до окончани ферментации объем культуральной жидкости увеличивают в 1,5-2,5 раза за счет введени KCMimoHeHTOB питательной среды, не содержащих органических источников углерода и азота. В качестве таких компонентов используют водопроводную воду или водные растворы всех или ч&сггй «йнёра;лб них компонентов основной питательной среды в концентраци х, не превышающих их концентрации i основной питательной среде 2.

Недостатком известного способа вл етс ТО, что увеличение культуральной жидкости за счет компонентов , не содержас их органических источников питани , приводит к сокращению продолжительности продуктивного состо ни и автолизу клеток микроорганизмов вследствие снижени осмотического давлени среды. Результатом этого вл етс недостаточно высока активность литиче ских ферментов, продуцируемых микроорганизмгши. I Целью изобретени вл етс пре дотвращеиие автолиза клеток продуЧЙЙ й -- 5 (- - --- - -йХ5 - 1----- --i- - ------------ - -- V---- - - ...--; И повшиение активности целе orortip&ffytcfa:- --..,Поставленна цель достигаетс тем, что одновременно с разбавлением культуры в питательную Ьрёду ввод т ингибитор автолиза, представл ющий собой экстракт ферментрлиэа биомассы бактерий, в концентрации , О, 02-0,10 %„ по ртношению к конечному объему культуральной жидкости.

Ингибиторы автолИза получают к9 биомассы продуцента или других бактерий известным способом.

Дл выделени регул торов может использоватьс биомасса любой бактерии при условии, что выделенные регул торы обладают отрицательным знаком действи на интенсивность ав

толйза продуцента лйтическ их ферментов , то есть снижают интенсиЬность

аШолйза.

Предлагаемый способ можетбыть исдальэован при получении литических ферментов путём глубиннбгб культивировани ми.кроорганизмов, например бактерий B.subtiBis и В. mesentericus , на различных питательных средах, содержащих в начальный момент культивировани ассимилируемые источники углерода и азота в суммарной концентрации 2-5%.

Введение в культуральную жидкость растворов ингибиторов автолиза приводит к стабилизации бактериальных клеток, увеличениюих жизнеспо- собнрсти и продолжительности продуктдвногр состо ни в услови х обедненной питательной ..среды, следствием чего вл етс повышение ак тйвности литических ферментов в культуральной жидкости.

Пример 1. Глубинную культуру B.subtiBis 402 выращивают в колбах емкостью 750 мл, срдержащих 40 мл среды следующего состава, г/л: ферментативный гидролизат дрожжей БВК 12; лактоза 10; (NH4)2HPO4 4; КС6 0,6; CaCKz 0,1; 0,1 при рН 7,0. После стерилизации и засева среды колбы инкубируют в течение 14 ч., на качалке при температуре 37.Затем в 4 контрольные колбы внос т дополнительно по 40 мл стерильной водопроводной воды, а в 4 о.пытные колбы- . по 40 мл стерильного водного раствора (вода водопроводна ),содержащего йО мг йнгйб итора автолиза, вьщелённогр из биомассы B.subtiBis 402 (конечна концентрацйй ингибитора в культураль ной жидкости - 0,1%). Контррльные и опытные колбы вновЬ ; ставй н1с11 качалку njpii той же температурё , инкубируют 4 ч, а затем оП1рёдел ют литическую активности по методу Кислухиной.

Средн литическа активнЬсть в Хонтрйлбных колбах составила 13500 ед/мл, в опытных колбах 20800 ед/мл, или 154% по отношениюк контролю.

Пример 2. Глубинную культуру В. subti8 is 402 в течение первых 14 ч вьаращивают так же, как в примере 1. Затем в 4 контрольные

5 колбы внос т по 40 мл стерильного водного раствора солей, содержащегр , г/л: МдВОД-7Нг,0 0,1 . В 4 опытные кЬлбы внос т по 40 мл такого же солевого раствора, содержащего дополнительно по 60 мг . ингибитора автолиза, выделенного из культуры BaciSCus megateriun 400 (конечна концентраци ингибитора в культуральной жидкости - 0,075%).

5 Контрольные и опытные колбы инкубируют на качалке-.4 ч при температуре

37 С, после чего.определ ют литическую активность.

Средн литичерка активность в

0 Контрольных колбах составила 12000 ед/мл, в .опытных колбах 18000 ед/мл или 150% по отношению к контвдлю.

П р и м е р . 3. Глубинную культуру B.subtifiis R 2 выращивают в

колбах объемом 750 мл на 50 мл среды л еду1Ьщего состава, в г/л: гидролизат бактериальной биомассы 10; мальтоза 10; (ЫН)а, HPOv4;KC 0,6; MgSO« .7HiO 0,1; CaCfj 0,1 при рН 7,2.

0 После стерилизации и засева колбы инкубир|уют в течение 12 ч на качалке при температуре . Затем, в контрольные колбы внос т по 50 мл стерильной водопроводной воды, а в

5 опытные - пр 50 мл стерильного водного раствора, содержащего по 30 мг ингибитора автолиза, выделенного из StseptococcHS Еactis (конечна концентраци ингибитора в культуральQ ной жидкости 0,03%). Контрольные и опытные колбы инкубируют на. качалке 5 ч, затем определ ют литическую активность.

Средн литическа активность в

контрольных колбах составила

5 5330 ед/мл, в опытных - 7200 ед/мл или 135% по отношению к контролю.

Таким образом, использование предлагаемого спосо.ба позвол ет Q порыси ь активнрсть литических ферментов в культуральной жидкости на 35-54%.

Claims

Формула изобретени

Способ выращивани продуцентов литических ферментов путем культивировани микроорганизмов рода на питательной среде, соДер5к1ащей источники органических соединений.углерода и азота в суммарной концентрации 2-5% с разбавлением культуры в процессе культивировани в 1,5-2,5 раза за 2-6 ч до .окончани ферментов путем введени 5 76719 растворов, не содержащих ассимилирчёмые источники углерода и азота, отличающийс тем, что, с целью предотвращени автолиза клеток продуцента и повышени активности целевого продукта, одновременно с с разбавлением культуры в питательную среду ввод т ингибитор автолиза, представл ющий собой экстракт Ферментолизата биомассы тех же или других бактерий, в концентрации 66 0,02-0,10% по отношению к конечному объему культур льной жидкости. Источники информации, прин тые но внимание при экспертизе I. Авторское свидетельство СССР по за вке 2595302/28-13, кл. С 12 D 13/10, 1978. 2, Авторское свидетельство СССР по за вке 2648462/28-13, ,кл. С 12 D 13/10, 1978 (прототип).