SU471380A1

SU471380A1 - Способ получени ферментного препарата дл свертывани молока

Info

Publication number: SU471380A1
Application number: SU1960071A
Authority: SU
Inventors: Иван Яковлевич Веселов; Тамара Алексеевна Смирнова; Надежда Анатольевна Балашова
Original assignee: Московский ордена Трудового Красного Знамени технологический институт пищевой промышленности
Priority date: 1973-09-07
Filing date: 1973-09-07
Publication date: 1975-05-25

Description

1

Изобретение относитс к ферментной промышленности .

Известны способы получени ферментного препарата дл свертывани молока путем культивировани микроорганизмов, относ щихс к виду Bacillus polymyxa, на питательной среде, содержащей источники углерода, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний и углекислый кальций, с носледуюш;им отделением клеток микроорганизмов от культуральной среды, например центрифугированием и выделением фермента из фугата, например высаливанием сульфатом аммони до копцентрации 0,3-0,8% насыщени .

Однако такой препарат нар ду с молокосвертывающей активностью обладает и высоким протеолитическим действием на казеин. При использовании этого препарата при производстве сыра образуетс м гкое сырное зерно , которое плохо вымещиваетс .

Цель изобретени - увеличение активности получаемого фермента и снижение активности одновременно продуцируемых протеолитических ферментов.

Дл этого из вида Bacillus polymyxa используют щтамм , в качестве источника углерода используют крахмал, а в питательную среду дополнительно ввод т пептон, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый марганец и сернокислое железо, при этом указанные компоненты ввод т в среду з следующих соотношени х (%):

Крахмал2,0 Пептон1,0 Двузамещенный фосфорнокислый калий0,5 Однозамещенный фосфорнокислый калий0,5 Сернокислый магний0,05 Сернокислый марганец0,05 Сернокислое железо0,001 Углекислый кальций0,2 Остальноевода

Целесообразно перед отделением клеток микроорганизмов в культуральную жидкость добавл ть хлористый кальций до концентрации 0,05 М.

Предлагаемый способ заключаетс в том, что осуществл ют глубинное культивирование Bacillus polymyxa, в частности щтамма 13- 13, на питательной среде, содержащей источник углерода, в частности крахмал в количестве 2%, источник азота - 1% пептона и минеральные соли, такие как КН2РО4, К2НР04; MgSO4; MnSO4, - FeSOi, СаСОз - в количествах, соответственно равных (%): 0,5; 0,5; 0,05; 0,05; 0,001 и 0,2, в течение 1 - 4 суток.

Затем в культуральную жидкость добавл ют хлористый кальций до содержани 0,05 М и центрифугируют; клетки микроорганизмов удал ют.

Из фугата фермент осаждают сернокислым аммонием. Полученный осадок раствор ют в воде и диализуют.

Пример Штамм Bacillus polymyxa 13- 13 выращивают на стерильной питательной среде, содержащей 2% крахмала, 1% нептона , 0,5% фосфорнокислого однозамещенного кали , 0,5% двухзамещенного фосфорнокислого кали , 0,05% сернокислого марганца, 0,05% сернокислого магни , 0,001% сернокислого железа и 0,2% углекислого кальци в течение 4 суток при 20-25°С.

Молокосвертывающа активность полученной культуральной жидкости 3500 ед/мл, протеолитическа - 0,80 ед/мл.

В культуральную жидкость ввод т хлористый кальций до содержани 0,05 М и центрифугируют , клетки микроорганизмов удал ют , а из фугата выдел ют фермент.

Дл этого в него добавл ют сернокислый аммоний в концентрации 0,3-0,8% насыщени .

Образовавшийс осадок отдел ют и раствор ют в воде, а затем диализуют против дистиллированной воды при температуре О-5°С в течение 24 час. Полученный диализат лиофильно высущивают. Получают ферментный препарат, представл ющий собой порошок светло-серого цвета, растворимый в воде.

Выход препарата по активности 90%.

Молокосвертывающа активность препарата 300 000 ед/г, протеолитическа - 60 ед/г.

Молокосвертывающую активность определ ют по времени свертывани 100 мл молока в 1 мл 1%-ного раствора препарата и выражают Б единицах активности.

За единицу активности молокосвертывающего (сычужного) фермента прин то количество частей молока, свертывающихс одной частью фермента при 35°С в течение 40 мин.

Протеолитическую активность (ПА) определ ют стандартным методом на казеине по Гаммерстену при рН 6,5 (рН-молока).

За единицу ПА прин то такое количество фермента, которое за 1 мин при 30°С катализирует переход в неосаждаемое ТХУ состо ние количество субстрата, содержащее 1 мк моль тирозина.

Характеристика используемого штамма Bacillus polymyxa 13-13.

Штамм выделен из пастеризованного молока .

При определении вида использовали определитель ЦЕОН.

В насто щее врем штамм хранитс в музее культур микроорганизмов кафедры технической микробиологии МПИПП.

Морфологи . Палочки размером 0,45Х XI,75 - 7,0 мкм. Подвижные, перитрихи. Палочки располагаютс поодиночке и цепочками . Грамположительны.

Культуральные признаки

При выращивании на м сном, сусловом, крахмало-аммиачном, почвенном агаре - колонии круглые, серовато-белые, мелкозернистые , блест щие, дольчатые.

На косом агаре образует пышпый, серовато-белый налет.

При росте на желатине образуютс серовато-белые колонии, плоские, расплывающиес , блест щие, просвечивающие.

На желатипе уколом культура образует слабый, белый, толстый, поверхностный налет. Наблюдаетс мешковидное разжижение.

На картофеле растет нежным, серовато-белым налетом.

При выращивании бактерий на жидких средах (м сном бульоне по Готтпнгеру, суслобульоне , средах с углеводами) па поверхности образуетс серовата пленка. Наблюдаетс помутнение среды и хлопьевидный осадок.

Физиологические признаки

В аэробных услови х сбраживает глюкозу, лактозу, галактозу, ксилозу, арабинозу, мальтозу , сахарозу, фруктозу и крахмал с образованием кислоты и газа.

Желатин разжижает.

Крахмал гпдролизует.

При росте на средах с крахмалом клетки образуют гранулозу, дающую синюю окраску при обработке йодным раствором.

Явл етс факультативным аэробом.

Предмет изобретени

1. Способ получени ферментного препарата дл свертывани молока путем культивировани микроорганизмов, относ щихс к виду Bacillus polymyxa па питательной среде,

содержащей источник углерода, однозамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый магний и углекислый кальций, с последующим отделением клеток микроорганизмов и выделением фермента из культуральной жидкости , например высаливанием сульфатом аммони до 0,3-0,8% насыщени , отличающийс тем, что, с целью увеличени активности получаемого фермента и снижени активности одновременно продуцируемых протеолитических ферментов, из микроорганизмов Bacillus polymyxa используют штамм 13-13, в качестве источника углерода - крахмал, а в питательную среду дополнительно ввод т пептон, двузамещенный фосфорнокислый калий, сернокислый марганец и сернокислое железо, при этом указанные компоненты ввод т в среду в следующих соотношени х (%):

Крахмал2,0

Пептон1,0

Двузамещенный фосфорнокислый калий0,5 Однозамещенный фосфорнокислый калий0,5

Сернокислый магний0,05 5 Сернокислый марганец 0,05 Сернокислое железо 0,001 Углекислый кальций 0,2 Вода Остальное 471380 6 2. Способ по п. 1, отличающийс тем, что перед отделением клеток в культуральную жидкость ввод т хлористый кальций до концентрации 0,05 М.