JPS63295A - ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、微生物からニコチンアミドアデニンジヌクレ
オチド（以下ＮＡＤと略称する。）を製造する方法に関
するものである。

（従来の技術） ＮＡＤは、生体内における多種多様な酸化還元酵素の補
酵素として生体内のエネルギー代謝、各種物質の補酵素
として古くから知られている。また近年では、臨床用試
薬、生化学試薬として生化学、医学方面に広範な用途が
拡大し、その需要は多いに高まってきている。

従来、ＮＡＤは酵母、細菌等を培養し、培養菌体から抽
出することで製造されてきた。近年では生産量の向上を
はかるため、培養方法に種々の工夫がこらされている。

例えば、培養過程にＮＡＤ前駆物質やＮＡＤ前駆物質と
共に界面活性剤を添加して菌体内又は培養液中にＮＡＤ
を蓄積させる方法（特公昭４７−１９７４８号公報、特
公昭４７−１９７４９号公報、特公昭４５−２９４３６
号公報、特開昭４８−５６８９１号公報参照）、あるい
は培養終了後培養液から菌体を一旦分離し、界面活性剤
で処理した後、ＮＡＤ前駆物質を含んだ溶液中でさらに
培養する方法（特開昭５４−８０４９３号公報、特開昭
５４−８０４９４号公報参照）が提案されている。

（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、上記のような従来法において用いられる
微生物は、いずれも炭水化物を炭素源及びエネルギー源
として生育するものに限られ、工集的規模での生産にお
ける原料としては現在の醗酵工業の共通の原料である廃
糖密あるいは澱粉糖化液を使わざるえず、これらの原料
は工業的見地から供給が不安定であり、均一な製品が得
られないため培養管理が難しく９強い着色のため廃液処
理にコストがかかるとともに目的物質の単離、精製が困
難である等の問題点を有しており、ひいては生産物の価
格上昇の大きな要因になっている。

このような背景の中で醗酵工業に共通した非糖質、非澱
粉系原料の導入に関する研究が盛んに進められ、その中
でもメタノールは安定した大量供給が可能で、均一な製
品が得られ、廃液処理の面でも容易である等の理由から
脚光を浴びている。

今までに微生物蛋白やある種のアミノ酸生産のための醗
酵原料としてメタノールを使用する報告や特許が数多く
提案されていることは周知の通りであるが、ＮＡＤの生
産にメタノールを利用した報告はなされていない。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、上記のごとき問題点を解決して安定した
大量供給が可能であり、均一な製品が得られ、廃液処理
の面でも容易であるメタノールを培養の炭素源とするＮ
ＡＤの製造法を提供することを目的として鋭意検討を重
ねた結果、キヤンデイダ属に属する酵母をメタノールを
炭素源とする培地で培養すると、高含量でＮＡＤが蓄積
され。

上記の目的が達成しうろことを見出し１本発明に到達し
たものである。

すなわち２本発明は、キヤンデイダ属に属する酵母をメ
タノールを主たる炭素源とする培地で培養し、培養物か
らニコチンアミドアデニンジヌクレオチドを採取するこ
とを特徴とするニコチンアミドアデニンジヌクレオチド
の製造法を要旨とするものである。

本発明に用いられるキヤンデイダ属に属する酵母として
は１例えば、キヤンデイダ（Ｃａｎｄｉｄａ）　２５−
へ微工研菌寄第８７２５号（ＦＥ間Ｐ−８７２５）　、
キヤンデイダ・メタノリカ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｍｅｔｈ
ａｎｏｌｉｃａ）ＡＴＣＣ２６１７５があげられる。

本発明においては、上記酵母をメタノールを主たる炭素
源とする培地で培養する。培養に当たっては、メタノー
ルを１〜３容量％程度含有する培地で培養させることが
好ましく、それ以外の培地組成はキヤンデイダ属に属す
る酵母で通常用いられる培地組成でよい。例えば、窒素
源としてペプトン、尿素、硫安、塩安、硝安、硝酸ソー
ダなどが用いられ、また、リン酸源としてリン酸２水素
ナトリウム、リン酸２水素カリウム、リン酸ｌ水素カリ
ウムなどが用いられる。さらに増殖促進因子として、ビ
オチン、チアミン、酵母エキス、あるいは鉄、カルシウ
ム、マンガン、亜鉛等の金属塩を微量添加することがで
きる。

本発明においては、培養をｐＨ４〜７．温度を２５〜３
５℃で２通気撹拌培養で実施することが好ましい。

このようにして培養菌体中には高含量のＮＡＤが蓄積さ
れることになるが、培養途中何れの時期でも培地にキノ
リン酸を添加することにより、ＮＡＤ含量をさらに飛躍
的に向上させることができる。このキノリン酸は０．１
〜０．５重量％程度添加することが最も効果的である。

次に得られた培養物からＮＡＤを単離精製するには９例
えば、まず培養物から遠心分離や濾過などで菌体を集菌
し１次いで集菌した菌体を常法。

すなわち菌体を破砕後、遠心分離して得られた上澄に有
機溶媒又は各種の塩類を加えて分画精製したり、担体に
吸着させて精製するなどの方法で行うことができる。

（実施例） 以下実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明する。

なお、実施例中の％は特に明記しない限りは重量％を示
す。

実施例１ グルコース１％、塩化アンモニウム０．４χ、リン酸２
水素カリウム０．ＩＸ、硫酸マグネシウム０．０５χ。

酵母エキス０．２χからなる組成の培地に、キヤンデイ
ダ（Ｃａｎｄｉｄａ）　２５−Ａｍ工研菌寄第８７２５
号（ＦＥＲＭＰ−８７２５）をｐ１１６．０にて２８℃
で２４時間振盪培養して種菌液を調製した。

次に、メタノ°−ル２容量％、塩化アンモニウＪＯ１４
χ、リン酸２水素カリウム０．１２．硫酸マグネうラム
０．０５χ、酵母エキス０．２χからなる組成の培地醗
酵培地）１００ｍＪを５００ｍ　ｌ容振盪フラスコに入
ネこれに上記の種菌液を１％になるように加えて２１℃
で振盪培養した。培養を開始して７０時間後にＶ母菌体
中には２．６ｍｇ／　ｇ乾燥菌体のＮＡＤが蓄積０れて
いた。

実施例２ メタノール２容量％、塩化アンモニウムＱ、５χ。

リン酸２水素カリウム０．１χ、リン酸１水素カリつム
０．ＩＺ、硫酸マグネシウム０．０５％、塩化第２鉄３
１μｇ　／　ｍ　ｌ　、塩化カルシウム１０μｇ／ｍＣ
硫だマンガンｌｏｔｔｇ／ｍ！！、硫酸亜鉛１０μｇ　
／　ｍ　１　。

チアミン塩酸塩２μｇ　／　ｍ　ｌ　、　　ビオチン０
．０２μｇ／　ｍ　Ａ’からなる組成の醗酵培地を用い
る以外はヌ施例１と同様にして培養したところ、酵母菌
体重には、　１．９ｍｇ／ｇ乾燥菌体のＮＡＤが蓄積さ
れて（た。

実施例３ 醗酵培地にキノリン酸を０．３χ添加した以外は実°　
　施例２と同様にして培養したところ、酵母菌体中：　
　には、　１０．６ｍｇ／　ｇ乾燥菌体のＮＡＤが蓄積
されて・　　いた。

（（発明の効果） 【　　　本発明によれば、安定した大量供給が可能であ
り、均一な製品が得られ、廃液処理の面でも容易なメタ
ノールを培養の炭素源としてＮＡＤを製造することがで
きる。

これにより、ＮＡＤが安価に製造することができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）キヤンデイダ属に属する酵母をメタノールを主た
   る炭素源とする培地で培養し、培養物からニコチンアミ
   ドアデニンジヌクレオチドを採取することを特徴とする
   ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドの製造法。