JPH0565160B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、微生物からニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチド（以下NADと略称する。）を製造
する方法に関するものである。 （従来の技術） NADは、生体内における多種多様な酸化還元
酵素の補酵素として生体内のエネルギー代謝、各
種物質の補酵素として古くから知られている。ま
た近年では、臨床用試薬、生化学試薬として生化
学、医学方面に広範な用途が拡大し、その需要は
多いに高まつてきている。 従来、NADは酵母、細菌等を培養し、培養菌
体から抽出することで製造されてきた。近年では
生産量の向上をはかるため、培養方法に種々の工
夫がこらされている。例えば、培養過程にNAD
前駆物質やNAD前駆物質と共に界面活性剤を添
加して菌体内又は培養液中にNADを蓄積させる
方法（特公昭47−19748号公報、特公昭47−19749
号公報、特公昭45−29436号公報、特開昭48−
56891号公報参照）、あるいは培養終了後培養液か
ら菌体を一旦分離し、界面活性剤で処理した後、
NAD前駆物質を含んだ溶液中でさらに培養する
方法（特開昭54−80493号公報、特開昭54−80494
号公報参照）が提案されている。 （発明が解決しようとする問題点） しかしながら、上記のような従来法において用
いられる微生物は、いずれも炭水化物を炭素源及
びエネルギー源として生育するものに限られ、工
業的規模での生産における原料としては現在の醗
酵工業の共通の原料である廃糖密あるいは澱粉糖
化液を使わざるえず、これらの原料は工業的見地
から供給が不安定であり、均一な製品が得られな
いため培養管理が難しく、強い着色のため廃液処
理にコストがかかるとともに目的物質の単離、精
製が困難である等の問題点を有しており、ひいて
は生産物の価格上昇の大きな要因になつている。 このような背景の中で醗酵工業に共通した非糖
質、非澱粉系原料の導入に関する研究が盛んに進
められ、その中でもメタノールは安定した大量供
給が可能で、均一な製品が得られ、廃液処理の面
でも容易である等の理由から脚光を浴びている。
今までに微生物蛋白やある種のアミノ酸生産のた
めの醗酵原料としてメタノールを使用する報告や
特許が数多く提案されていることは周知の通りで
あるが、NADの生産にメタノールを利用した報
告はなされていない。 （問題点を解決するための手段） 本発明者らは、上記のごとき問題点を解決して
安定した大量供給が可能であり、均一な製品が得
られ、廃液処理の面でも容易であるメタノールを
培養の炭素源とするNADの製造法を提供するこ
とを目的として鋭意検討を重ねた結果、キヤンデ
イダ属に属する酵母をメタノールを炭素源とする
培地で培養すると、高含量でNADが蓄積され、
上記の目的が達成しうることを見出し、本発明に
到達したものである。 すなわち、本発明は、キヤンデイダ属に属する
酵母をメタノールを主たる炭素源とする培地で培
養し、培養物からニコチンアミドアデニンジヌク
レオチドを採取することを特徴とするニコチンア
ミドアデニンジヌクレオチドの製造法を要旨とす
るものである。 本発明に用いられるキヤンデイダ属に属する酵
母としては、例えば、キヤンデイダ（Candida）
25−Ａ微工研菌寄第8725号（FERMP−8725）、
キヤンデイダ・メタノリカ（Candida
methanolica）ATCC26175があげられる。 本発明においては、上記酵母をメタノールを主
たる炭素源とする培地で培養する。培養に当たつ
ては、メタノールを１〜３容量％程度含有する培
地で培養させることが好ましく、それ以外の培地
組成はキヤンデイダ属に属する酵母で通常用いら
れる培地組成でよい。例えば、窒素源としてペプ
トン、尿素、硫安、塩安、硝安、硝酸ソーダなど
が用いられ、また、リン酸源としてリン酸２水素
ナトリウム、リン酸２水素カリウム、リン酸１水
素カリウムなどが用いられる。さらに増殖促進因
子として、ビチオン、チアミン、酵母エキス、あ
るいは鉄、カルシウム、マンガン、亜鉛等の金属
塩を微量添加することができる。 本発明においては、培養をPH４〜７、温度を25
〜35℃で、通気攪拌培養で実施することが好まし
い。 このようにして培養菌体中には高含量のNAD
が蓄積されることになるが、培養途中何れの時期
でも培地にキノリン酸を添加することにより、
NAD含量をさらに飛躍的に向上させることがで
きる。このキノリン酸は0.1〜0.5重量％程度添加
することが最も効果的である。 次に得られた培養物からNADを単離精製する
には、例えば、まず培養物から遠心分離や濾過な
どで菌体を集菌し、次いで集菌した菌体を常法、
すなわち菌体を破砕後、遠心分離して得られた上
澄に有機溶媒又は各種の塩類を加えて分画精製し
たり、担体に吸着させて精製するなどの方法で行
うことができる。 （実施例） 以下実施例をあげて本発明をさらに具体的に説
明する。 なお、実施例中の％は特に明記しない限りは重
量％を示す。 実施例 １ グルコース１％、塩化アンモニウム0.4％、リ
ン酸２水素カリウム0.1％、硫酸マグネシウム
0.05％、酵母エキス0.2％からなる組成の培地に、
キヤンデイダ（Candida）25−Ａ微工研菌寄第
8725号（FERMP−8725）をPH6.0にて28℃で24
時間振盪培養して種菌液を調製した。 次に、メタノール２容量％、塩化アンモニウム
0.4％、リン酸２水素カリウム0.1％、硫酸マグネ
シウム0.05％、酵母エキス0.2％からなる組成の
培地（醗酵培地）100mlを500ml溶浸盪フラスコに
入れこれに上記の種菌液を１％になるように加え
て28℃で振盪培養した。培養を開始して70時間後
に酵母菌体中には2.6mg／ｇ乾燥菌体のNADが蓄
積されていた。 実施例 ２ メタノール２容量％、塩化アンモニウム0.5％、
リン酸２水素カリウム0.1％、リン酸１水素カリ
ウム0.1％、硫酸マグネシウム0.05％、塩化第２
鉄30μg／ml、塩化カルシウム10μg／ml、硫酸マ
ンガン10μg／ml、硫酸亜鉛10μg／ml、チアミン
塩酸塩2μg／ml、ビオチン0.02μg／mlからなる組
成の醗酵培地を用いる以外は実施例１と同様にし
て培養したところ、酵母菌体中には、1.9mg／ｇ
乾燥菌体のNADが蓄積されていた。 実施例 ３ 醗酵培地にキノリン酸を0.3％添加した以外は
実施例２と同様にして培養したところ、酵母菌体
中には、10.6mg／ｇ乾燥箘体のNADが蓄積され
ていた。 （発明の効果） 本発明によれば、安定した大量供給が可能であ
り、均一な製品が得られ、廃液処理の面でも容易
なメタノールを培養の炭素源としてNADを製造
することができる。 これにより、NADが安価に製造するこどがで
きる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ キヤンデイダ属に属する酵母をメタノールを
   主たる炭素源とする培地で培養し、培養物からニ
   コチンアミドアデニンジヌクレオチドを採取する
   ことを特徴とするニコチンアミドアデニンジヌク
   レオチドの製造法。