JP2519980B2 - （ｓ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は（Ｓ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル−３
−ブテン酸の製造方法に関する。（Ｓ）−２−ヒドロキ
シ−４−フェニル−３−ブテン酸は種々の医薬品や光学
活性な生理活性物質、その誘導体等の重要中間体であ
る。

（従来技術及び発明が解決しようとする課題） 従来、（Ｓ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル−３−
ブテン酸を製造する方法としては、該酸のラセミ体をボ
ルニルアミンとジアステレオマーを生成させ、光学分割
する方法（Chem.Ber.89,671−677（1956））や、光学活
性なアミノ酸の金属塩が結合した担体を充填剤として用
いた液体クロマトグラフィによる光学分割法（特開昭61
−87640号）が知られているが、前者は操作が煩雑で工
業的に優れているとはいい難く、後者は、経済的に有利
な方法ではないため、簡便で経済的な方法が望まれてい
た。また、微生物の不斉還元能を利用して２−ケト−４
−フェニル−３−ブテン酸から（Ｓ）−２−ヒドロキシ
−４−フェニル−３−ブテン酸を得る方法は知られてい
ない。

（課題を解決する為の手段） 本発明は簡便な方法で、かつ光学純度の高い（Ｓ）−
２−ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸を得る方
法として微生物による不斉還元方法に着目し、この目的
に適した微生物を検索した結果、ラクトバチルス、ロイ
コノストック、ストレプトコッカス属に属する微生物が
本発明の目的を達成することを見出だし、本発明を完成
したものである。

即ち、本発明は２−ケト−４−フェニル−３−ブテン
酸を（Ｓ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテ
ン酸に不斉的に還元する能力を有するラクトバチルス、
ロイコノストック、ストレプトコッカス属に属する微生
物群から選ばれた微生物又はその処理物を２−ケト−４
−フェニル−３−ブテン酸に作用させ、生成する（Ｓ）
−２−ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸を採取
することを特徴とする（Ｓ）−２−ヒドロキシ−４−フ
ェニル−３−ブテン酸の製造方法である。

本発明に使用する微生物としては、ラクトバチルス、
ロイコノストック、ストレプトコックス属に属する微生
物で２−ケト−４−フェニル−３−ブテン酸を（Ｓ）−
２−ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸に不斉的
に還元する能力を有する物であればいずれも使用可能で
あるが、具体的にはラクトバチルス・プラントラム（La
ctobacbacillus plantrum）IFO3070、ストレプトコッカ
ス・ラクティス（Streptococcus lactis）NRIC1149、ロ
イコノストック・メゼンテロイデス（Leuconostoc mese
nteroides）AHU1416等を挙げることができる。また、こ
れらの変異株も用いることができる。

上記のうち、IFO番号の付された微生物は、（財）醗
酵研究所（IFO）発行のList of Cultures第８版第１巻
（1988）に記載されており、該IFOから入手することが
できる。

NRIC番号の付された微生物は、東京農業大学発行のCu
lture Collection of NODAI No.1（1985）に記載されて
おり、東京農業大学から入手することができる。

AHU番号の付された微生物は、日本微生物株保存連盟
（JFCO）発行のCatalogue of Cultures第４版（1987）
に記載されており、北海道大学農学部から入手すること
ができる。

本発明に用いる培地は菌が増殖し得る培地であれば特
に制限はない。例えばグルコース、シュクロース等の糖
類、エタノール、グリセロール等のアルコール類、酢
酸、プロピオン酸等の有機酸類、パラフィン等の炭化水
素類、その他の炭素源、又は、これらの混合物、窒素源
として、硫酸アンモニウム、酵母エキス、尿素等の無機
有機含窒素化合物、他に無機塩、微量金属塩、ビタミン
類等、通常の培養に用いられる栄養源を適宜、混合して
用いることができる。また必要に応じて微生物の増殖を
促進する因子あるいは培地のPH保持の為の化合物等を添
加することもできる。

培養方法としては培地pHを3.0〜9.5、培養温度は20〜
45℃の範囲にて好気的あるいは嫌気的に１〜５日間培養
するのが好ましい。

還元反応の方法としては（１）培養液をそのまま用い
る方法、（２）遠心分離等により、菌体を分離し、これ
をそのまま、或いは、洗浄した後、緩衝液、水等に再懸
濁したものに、２−ケト−４−フェニル−３−ブテン酸
を添加し反応させる方法（３）菌体破砕物、アセトン処
理、凍結乾燥等の処理をほどこしたもの生菌体の代わり
に用いる方法（４）これらの担体に固定化して用いる方
法等を適用できる。この反応の際、グルコース、シュク
ロース等の炭素源をエネルギー源として添加したほうが
収率が向上する場合が多い。

２−ケト−４−フェニル−３−ブテン酸はそのまま、
或いは、反応に影響を与えないような有機溶媒に溶解し
たり、界面活性剤等に分散させたりして、反応始めから
一括に或いは分割して添加しても良い。また、２−ケト
−４−フェニル−３−ブテン酸はナトリウム塩、カリウ
ム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩等として用いるこ
とができる。

反応はpH3〜９の範囲で10〜60℃の温度で行うのが好
ましく、１〜120時間、撹拌下で行う。基質の使用濃度
は特に制限されないが、0.1〜10％程度が好ましい。

反応によって生成した２−ヒドロキシ−４−フェニル
−３−ブテン酸の採取は反応液から直接或いは菌体分離
後、酸性にした後、有機溶媒で抽出し、カラムクロマト
グラフィー、蒸溜等の通常の精製方法を用いれば容易に
得られる。

（実施例） 以下、本発明を具体的に実施例にて説明するが、本発
明はこれらの実施例のみに限定されるものではない。

実施例における光学純度は反応生成物を有機溶媒にて
抽出した後、光学分割カラムを用いた高速液体クロマト
グラフィー（カラム：ダイセル化学工業製 キラルパッ
クWH（Ｌ−プロリンの銅塩が結合したシリカゲルを充填
したカラム,4.6mmID×250mm）、移動層:0.5mMCuSO₄/ア
セトニトリル＝4:1、検出;254nm、流速1.5ml/分）によ
り測定した。（保持時間；（Ｓ）体21分、（Ｒ）体24
分）また、収率は逆相系カラム（カラム：ヌクレオシル
10C18、（4.6mmID×250mm）移動層:40mMリン酸カリウ
ム、pH3.0/アセトニトリル＝4:1、検出;254nm、流速1.0
ml/分）を用いたた高速液体クロマトグラフィーにより
定量した。

実施例１ グルコース２％、酵母エキス1.0％、ペプトン1.0％、
MnSO₄10ppm、炭酸カルシウム１％より成る組成の培地10
0mlを500ml容三角フラスコに入れ、滅菌後、表１に示す
菌株をそれぞれ一白金線を植菌48時間回転振盪培養を行
った。培養終了後、遠心分離により菌体を分離、生理食
塩水で１回洗浄し生菌体を得た。500ml容三角フラスコ
に蒸留水50mlを入れ、これに上記生菌体を懸濁し、シュ
クロースを5g添加した。30℃で10分間振盪させた後、３
−ケト−１−フェニルブテン酸カリウム塩を0.5g添加
し、30℃で40時間回転振盪反応させた。反応終了後、硫
酸を加えpHを１以下とした後、酢酸エチル100mlで抽出
した。この抽出液を高速液体クロマトグラフィーにかけ
生成した２−ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸
を定量した。またこの抽出液の一定量を液圧濃縮した
後、高速液体クロマトグラフィーにかけ生成した２−ヒ
ドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸の光学純度を測
定した。

得られた結果を表１に示す。

（発明の効果） 本発明の微生物を用いた不斉還元法による（Ｓ）−２
−ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸の製造方法
は光学純度の高い（Ｓ）−２−ヒドロキシ−４−フェニ
ル−３−ブテン酸を簡便に製造できることを可能にさせ
るものであり、工業的製造方法として極めて有利であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 7/42 (Ｃ１２Ｐ 7/42 Ｃ１２Ｒ 1:46） Ｃ１２Ｒ 1:46）

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】２−ケト−４−フェニル−３−ブテン酸を
   （Ｓ）−２−ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸
   に不斉的に還元する能力を有するラクトバチルス（Lact
   obacillus）、ロイコノストック（Leuconostoc）、スト
   レプトコッカス（Streptococcus）属に属する微生物群
   から選ばれた微生物又はその処理物を２−ケト−４−フ
   ェニル−３−ブテン酸に作用させ、生成する（Ｓ）−２
   −ヒドロキシ−４−フェニル−３−ブテン酸を採取する
   ことを特徴とする（Ｓ）−２−ヒドロキシ−４−フェニ
   ル−３−ブテン酸の製造方法。