JPH0231684A - 光学活性１，３―ブタンジオールの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は光学活性１．３−ブタンジオールの製造方法に
関する。更に詳しくは、４−ヒドロキシ−２−ブタノン
を（Ｒ）−１，３−ブタンジオール、或いは（Ｓ）−１
，３−ブタンジオールに不斉的に還元する能力を有する
微生物、或いはその処理物を４−ヒドロキシ−２−ブタ
ノンに作用させ、生成する（Ｒ）−１，３−ブタンジオ
ール、或いは（Ｓ）−１，３−ブタンジオールを採取す
ることを特徴とする光学活性１．３−ブタンジオールの
製造方法に関する。

光学活性１．３−ブタンジオールは種々の医薬品例えば
、抗生物質等の重要合成原料である。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする課題〕従来、
光学活性１．３−ブタンジオールを製造する方法として
は、（１）化学的に合成されたラセミ体の１．３−ブタ
ンジオールを光学分割剤を用いて光学分割する方法（特
開昭６１−１９１６３１号公報）や、（２）光学活性化
合物で処理したラネーニッケル触媒を用いて４−ヒドロ
キシ−２−ブタノンから不斉合成する方法（特開昭５８
−２０４１８７号公報及びＢｕｌｌ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓ
ｏｃ、　Ｊｐｎ、＋　５３．１３５６−１３６０　（１
９８０）　）等が知られている。しかし、（１）、（２
）とも高価な光学分割剤、触媒を用いねばならないこと
、（２）は光学純度が低いこと等の欠点がある為、経済
的に優れ、且つ、簡便な手段で光学純度の高い光学活性
１．３−ブタンジオールを得る方法の確立が望まれてい
る。

〔課題を解決する為の手段〕

本発明者らは経済的に優れ、かつ簡便な方法で、光学純
度の高い光学活性１．３−ブタンジオールを得る方法と
して微生物による不斉還元方法に着目しこの目的に適し
た微生物を検索した結果、 アンフ゛ロシオジマ（Ａｓｂｒｏｓ　１ｏｚｙｓａ）属
バチルス（Ｂａｃｉｌ　１ｕｓ）属 キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属 シトロバクタ−（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属コリネバ
クテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃ　ｔｅｒ　ｉｕｍ）属
ハンセヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属 イサッチェンキア（Ｉｓｓａｔｃｈｅｎｋｉａ）Ｊｉク
ルイベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属ピ
キア（Ｐｉｃｈｉａ）属 プロタミノバクタ−（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ
）属シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）属ロ
ドトルラ（Ｐｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属セレノチラ（Ｓ
ｅｌｅｎａｔｉｌａ）属シゾサツカロミセス（Ｓｃｈｉ
ｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属ステヱファノアス
カス（Ｓｔｅｐｈａｎｏａｓｃｕｓ）属又はキサントモ
ナス（Ｘａｎｔｈｏ■ｏｎａｓ）属に属する微生物が４
−ヒドロキシ−２−ブタノンを不斉還元しくＲ）−１，
３−ブタンジオールを生成すること及び ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
属キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属 ゲオトリカム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｓ）属りレブジーラ
（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属ロデロマイセス（Ｌｏｄｄ
ｅｒｏｍｙｃｅｓ　）属す・νカ口マイコプシス（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｓｙｃｏｐｓ　ｉｓ）属又はトリコスポロ
ン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）属に属する微生物群が
４−ヒドロキシ−２−ブタノンを不斉還元しく５）−１
，３−ブタンジオールを生成することを見出し本発明を
完成したものである。

本発明に使用する微生物としては、 アンフ゛ロシオジマ（Ａｓｂｒｏｓｉｏｚｙｓ＋ａ）属
バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属 キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属 シトロバクタ−（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）ｏ属コリネ
バクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕａ）属ハ
ンセヌラ（）Ｉａｎｓｅｎｕｌａ）属イサッチェンキア
（Ｉｓｓａｔｃｈｅｎｋｉａ）属りルイベロマイセス（
Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属ピキア（Ｐｉｃｈｉａ
）属 プロタミノバクタ−（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ
）属シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｓｏｎａｓ　）属ロ
ドトルラ（ｐＨｏｄ□ｔｏｒｕｌａ）属セレノチラ（Ｓ
ｅｌｅｎｏｔｉｌａ）属シゾサツカロミセス（Ｓｃｈｉ
ｚｏｓａｃｃｈａｒｏｓｙｃｅｓ）属ステェファノアス
カス（Ｓｔｅｐｈａｎｏａｓｃｕｓ）属又はキサントモ
ナス（Ｘａｎｔｈｏａ＊ｏｎａｓ）属に属する微生物で
４−ヒドロキシ−２−ブタノンを不斉還元しく［１）−
１，３−ブタンジオールを生成する能力を有する微生物
、或いは フ゛レビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ
）属キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属 ゲオトリカム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）属りレブジーラ
（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属サッカロマイコプシス（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ）属又はトリコスポロ
ン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）属に属する微生物で４
−ヒドロキシ−２＝ブタノンを不斉還元しく５）−１，
３−ブタンジオールを生成する能力を有する微生物であ
ればいずれも使用可能である。

具体的には４−ヒドロキシ−２−ブタノンからｌ’Ｒ）
−１，３−ブタンジオールを生成しうる微生物としては
、 アンプロジオシマ・シカトリコサ （＾−ｂｒｏｓｉｏｚｙｓａ　　ｃｉｃａｔｒｉｃｏｓ
ａ）ＩＦＯ１８４６バチルス・セレウス （Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｅｒｅｕｓ）ＡＨＵ　１３５５
バチルス・サブチリス （Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）ＩＦＱ　３０
０７キヤンデイダ・キャリオシリグニコラ （Ｃａｎｄｉｄａ　ｃａｒｉｏｓｉｌｉｇｎｉｃｏｌａ
）ＤＳＭ　２１４８キヤンデイダ・アルボレア （Ｃａｎｄｉｄａ　ａｒｂｏｒｅａ）［ＡＭ　４１４７
キヤンデイダ・ケフィル（ベイジェリンク）（Ｃａｎｄ
ｉｄａ　ｋｅｆｙｒ（Ｂｅｉｊｅｒｉｎｃｋ）　）　Ｄ
ＳＭ　７００７３キヤンデイダ・クルセイ（キャステラ
一二）（Ｃａａｄｉｄａ　　ｋｒｕｓｅｉ（Ｃａｓｔｅ
ｌｌａｎｉ））口ＳＭ　　７００７５キヤンデイダ・ギ
リエルモンディ （Ｃａｎｄｉｄａ　　ｇｕｉｌｌｉｅｒｓｏｏｄｉｉ）
ＩＡＭ　　４４１２キヤンデイダ・スクシフィラ （Ｃａｎｄｉｄａ　ｓｕｃｃｉｐｈｉｌａ）ＤＳＭ　２
１４９キヤンデイダ・ウチルス （Ｃａｎｄｉｄａ　ｕｔｉｌｉｓ）ＩＦＯ０６３９キヤ
ンデイダ・ウチリス （Ｃａｎｄｉｄａ　ｕｔｉｌｉｓ）ＩＦＯ０６２６キヤ
ンデイダ・ウチリス （Ｃａｎｄｉｄａ　ｕｔｉｌｉｓ）ＩＡＭ　４２７７シ
トロバクター・フロインデイ （Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ　　ｆｒｅｕｎｄｉｉ）八Ｈ
ＩＪ　　１５３４コリネバクテリウム・ミシガネンス （Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ｍｉｃｂｉｇａ
ｎｅｎｓｅ）ＩＦＯ１３７６２ハンセヌラ・ポリモルフ
ァ （Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）八Ｔ
ＣＣ２６０１２ハンセヌラ・ミヌタ （Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　　ｍ１ｎｕｔａ）口ＳＭ　　７
０２７４ハンセヌラ・サブペリクロサ （Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　５ｕｂｐｅｌｌｉｃｕｌｏｓａ
）ＩＦＯ０８０８ハンセヌラ・ファビアニー （Ｈａｏｓｅｎｕｌａ　ｆａｂｉａｎｉｉ）ＩＦＯ１２
５４ハンセヌラ・ウィッケルハミー （Ｈａｎｓｅｏｕｌａ　ｗｉｃｋｅｒｈａｍｉｉ）ＤＳ
Ｍ　７０２８０ハンセヌラ・ウィンゲイ （Ｈａｎｓｅｎｕｌａ　　ｗｉｎｇｅｉ）口ＳＭ　　１
０２８１イサチエンキア・スクツラタ　パライティー・
スクツラタ（ＩｓｓａＬｃｂｅｎｋｉａ　５ｃｕｔｕｌ
ａｔａ　ｗａｒ。

５ｃｕｔｕｌａｔａ）ＩＰＯ１００７０。

イサチェンキア・スクツラタ　パライティー・スクツラ
タ（Ｉｓｓａｔｃｈｅｎｋｉａ　５ｃｕｔｕｌａｔａ　
ｖａｒ。

５ｃｕｔｕｌａｔａ）ＩＦＯ１００６９、クルイベロマ
イセス・ドロソフィラルム（Ｈｕｙｖｅｒｏｓｙｃｓｓ
　ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｗ）ＩＦＯ１０１２クルイ
ベロルイセス・ラクチス （Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　　１ａｃｔｉｓ）ｒＦ
ｏ　　１２６７タルイベロマイセス・ラクチス （Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ　Ｉａｃｔｉｓ）ＩＦＯ
１９０３ピキア・セロビオサ （Ｐｉｃｈｉａ　ｃｅｌｌｏｂｉｏｓａ）ＤＳＭ　２１
４７ビキア・ヒーディ （Ｐｉｃｈｉａ　ｈｅｅｄｉｉ）ＩＦＯ１００１９、ピ
キア・ヒーディ （Ｐｉｃｈｉａ　ｈｅｅｄｉｉ）ＩＦＯ１００２０、ピ
キア・リンドネリイ （Ｐｉｃｈｉａ　Ｉｉｎｄｎｅｒｉｉ）ＤＳＭ　７０７
１Ｂピキア・オプンティア　バライティー・サーモトレ
ランス（Ｐｉｃｈｉａ　ｏｐｕｎｔｉａｅ　ｖａｒ、　
ｔｈｅｒｓ＋ｏｔｏｌｅ−ｒａｎｓ）　ＩＦＯ１００２
５ ピキア・バストリス （Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ）ＤＳＭ　７０３８
２ピキア・トレハロフィア （Ｐｉｃｂｉａ　ｔｒｅｈａｌｏｐｈｉａ）ＤＳＭ　７
０３９１プロタミノバクタ−・ラバー （Ｐｒｏｔａｓｉｎｏｂａｃｔｅｒ　　ｒｕｂｅｒ）Ｊ
ＡＭ　　１０８１シユードモナス・ディミヌタ （Ｐｓｅｕｄｏｓｏｎａｓ　　ｄｉｍｉｎｕｔａ）ＩＰ
Ｏ１２６９７シユードモナス・フルオレセンス （Ｐｓｅｕｄｏｓｏｎａｓ　　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ
）ＩＦＯ３０８１シユードモナス・プチダ （Ｐｓｅｕｄｏｓｏｎａｓ　ｐｕｔｉｄａ）ＩＦＯ３７
３８０ドトルラ・ルブラ （Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ　　ｒｕｂｒａ）ＩＦｏ　０
３８３セレノチラ・ペルタタ （Ｓｅｌｅｎｏｔｉｌａ　ｐ＃Ｉｔａｔａ）ＤＳＭ　７
０５７９シゾサツカロミセス・ボンベ （ＳｃｈＬｚｏｓａｃｃｈａｒｏａｙｃｅｓ　　ｐｏａ
＋ｂｅ）ＩＦＯ０３６３ステエフアノアスカス・シフェ
リイ （Ｓｔｅｐｈａｎｏａｓｃｕｓ　ｃｉｆｅｒｒｉｉ）Ｉ
ＦＯ１８５４キサントモナス・マルトフィリア （Ｘａｎｔｈｏ■ｏｎａ　ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ）Ｉ
ＦＯ１２６９０また、４−ヒドロキシ−２−ブタノンか
ら（Ｓ）−１，３−ブタンジオールを生成しうる微生物
としては、 ブレビバクテリウム・イオディナム （Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　１ｏｄｉｎｕ−）
ＩＦＯ３５５８キヤンデイダ・ルゴサ （Ｃａｎｄｉｄａ　ｒｕｇｏｓａ）ＩＦＯ１３６４キヤ
ンデイダ・バラプシロシス （Ｃａｎｄｉｄａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）ＩＦＯ
０６４０キヤンデイダ・バラプシロシス （Ｃａｎｄｉｄａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）ＩＦＯ
０７０８キヤンデイダ・バラブシロシス （Ｃａｎｄｉｄａ　ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ）ＩＦＯ
１３９６ゲオトリカム・カンデイダム （Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　　ｃａｎｄｉｄｕｍ）ＩＦＯ
４６０１ゲオトリカム・カンデイダム （Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕ＋＋＋　　ｃａｎｄｉｄｕｍ）Ｉ
ＦＯ５７６７ゲオトリカム・カンデイダム （Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｓ　　ｃａｎｄｉｄｕｓ）ＩＦｏ
　　５３６８ゲオトリカム・レフタンブラツム （Ｇｅｏｔｒｉｃｂｕ＋ｓ　ｒｅｃｔａｎｇｕｌａｔｕ
ｗ＋）ＪＣＭ　１７５０ゲオトリカム・クレバニー （Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｋｌｅｂａｎｏｉｉ）ＪＣＭ
　２１７１ゲオトリカム・ファーメンタンス （Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　　ｆｅｒｓｅｎｔａｎｓ）Ｊ
ＣＭ　　２４６７ゲオトリカム・キャビチータム （Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｓ　　ｃａｐｉｔａｔｕｍ）ＪＣ
Ｍ　　３９０８ゲオトリカム・エリエンセ （Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｓ　ｅｒｉｅｎｓｅ）ＪＣＭ　３
９１２クレブジーラ・ニューモニアエ （Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ＩＰ
Ｏ１２０１９０ゾロマイセス・エロンジスボラス （Ｌｏｄｄｅｒｏｍｙｃｅｓ　ｅｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕ
ｓ）ＩＦＯ１６７６サツカロマイコプシス・リポリティ
力 （Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ　１ｉｐｏｌｙｔ
ｉｃａ）ＩＴＯ１５５０トリコスポロン・クタネウム （Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｃｕｔａｎｅｕｍ）ＩＰ
ｏ　１１９Ｂトリコスポロン・キャビチータム （Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ　ｃａｐｉｔａｔｕｍ）Ｉ
ＦＯ０７４３等を挙げることができる。

これらの微生物は、野生株、変異株、又は細胞融合もし
くは遺伝子操作法などの遺伝子手法により誘導される組
み替え株等、いずれの株でも好適に用いることができる
。

尚、ＩＦＯ番号の付された微生物は、（財）醗酵研究所
（ＩＦＯ）発行のＬｉ５ｔ　ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ、
第８版、第１巻（１９８８）に記載されており、該ＩＦ
Ｏから入手することができる。ＡＩＩＬ１番号の付され
た微生物は、日本微生物株保存連盟（ＪＦＣＣ）発行の
Ｃａｔａｌｏｇｕｅ　ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　、第４
版（１９８７）に記載されており、北海道大学農学部か
ら入手することができる。ＪＣＭ番号の付された微生物
は、理化学研究所微生物系保存施設発行の微生物株カタ
ログ第３版（１９８６年）に記載されており、該施設か
ら入手することができる。ＡＴＣＣ番号の付された微生
物は、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅＣ
ｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）発行のＣａｔａｌｏｇ
ｕｅ　ｏｆ　ＢａｃｔｅｒｉａＰｈａｇｅｓ　ｒＤＮＡ
シｅｃｔｏｒｓ＋第１６版（１９８５）及びＣａｔａｌ
ｏｇｕｅ　ｏｆ　Ｆｕｎｇｉ／Ｙｅａｓｔ、第１７版（
１９８７）に記載されており該Ａｒｃｃから入手するこ
とができる。

ＤＳＭ番号の付された微生物はＤｅｕｔｓｃｈ　Ｓａｍ
ｍｌｕｎｇｖｏｎ　Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ　
（ＤＳＭ）発行のＣａｔａｌｏｇ　ｏｆｓｔｒａｉｎｓ
（１９８３）に記載されており、該ＤＳＭから人手する
ことができる。ＩＡＭ番号の付された微生物は、東京大
学応用微生物学研究所から入手することができる。

本発明に用いる微生物を培養する為の培地はその微生物
が増殖し得るものであれば特に制限はない。例えば、炭
素源としては、上記微生物の利用可能であればいずれも
使用でき、具体的には、グルコース、フルクトース、シ
ュクロース、デキストリン等の糖類、ソルビトール、エ
タノール、グリセロール等のアルコール類、フマール酸
、クエン酸、酢酸、プロピオン酸等の有機酸類及びその
塩類、パラフィン等の炭化水素類等或いはこれらの混合
物を使用することができる。窒素源としては例えば、塩
化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウ
ム等の無機酸のアンモニウム塩、フマル酸アンモニウム
、クエン酸アンモニウム等の有機酸のアンモニウム塩、
肉エキス、酵母エキス、コーンステイープリカー、カゼ
イン加水分解物、尿素等の無機有機含窒素化合物、或い
はこれらの混合物を使用することができる。他に無機塩
、微量金属塩、ビタミン類等、通常の培養に用いられる
栄養源を適宜、混合して用いることができる。また必要
に応じて微生物の増殖を促進する因子、本発明の目的化
合物の生成能力を高める因子、あるいは培地のｐＨ保持
に有効な物質も添加できる。

培養方法としては培地ｐＨは３．０〜９．５、好ましく
は、４〜８、培養温度は２０〜４５°ｃ１好ましくは２
５〜３７°Ｃで、嫌気的或いは好気的に、その微生物の
生育に適した条件下５〜１２０′時間、好ましくは１２
〜７２時間程度培養する。

還元反応の方法としては培養液をそのまま用いる方法、
遠心分離等により、菌体を分離し、これをそのまま、或
いは、洗浄した後、緩衝液、水等に再懸濁したものに、
４−ヒトキロシー２−ブタノンを添加し反応させる方法
等がある。

この反応の際、グルコース、シュクロース等の炭素源を
エネルギー源として添加したほうが良い場合もある。ま
た、菌体は生菌体のままでも良いし、菌体破砕物、アセ
トン処理、凍結乾燥等の処理をほどこしたものでも良い
。また、これらの菌体或いは、菌体処理物を、例えば、
ポリアクリアミドゲル法、含硫多糖ゲル法（カラギーナ
ンゲル法等）、アルギン酸ゲル法、寒天ゲル法等の公知
の方法で固定化して用いることもできる。更に、菌体処
理物から、公知の方法を組み合わせて精製取得した酵素
も使用できる。

４−ヒドロキシ−２−ブタノンはそのまま、或いは、水
に溶解し、又は反応に影響を与えないような有機溶媒に
溶解したり、界面活性剤等に分散させたりして、反応始
めから一括に或いは分割して添加しても良い。

反応はｐＨ３〜９、好ましくはｐＨ５〜８の範囲で温度
は１０〜６０°Ｃ１好ましくは２０〜４０°Ｃの範囲で
、１〜１２０時間程度、撹拌下あるいは静置下で行う。

基質の使用濃度は特に制限されないが、０．１〜１０％
程度が好ましい。

反応によって生成した光学活性１，３−ブタンジオール
の採取は反応液から直接或いは菌体分離後、有機溶媒に
よる抽出、蒸留、カラムクロマトグラフィー等の通常の
精製方法を用いれば容易に得られる。

〔実施例〕

以下、本発明を具体的に実施例にて説明するが、本発明
はこれらの実施例のみに限定されるものではない。

なお、実施例に於ける反応液中の１．３−ブタンジオー
ルの定量はガスクロマトグラフィー（カラム−Ｔｈｅｒ
ｍｏｎ　３０００．（２ｍ）　、温度１３０°Ｃ）によ
り容易に行うことができ、光学純度は不斉還元反応によ
り得られた光学活性１．３−ブタンジオールを常法によ
り塩化アセチルでアセチル化した後、光学分割カラムを
用いた高速液体クロマトグラフィー（カラム：ダイセル
化学工業製キラルセルＯＢ、：容媒：ｎ−ヘキサン／２
−）。

ロバノール−１９：１、波長２２０ｎｍ　、流速０．５
ｍ７／分）により測定した。（保持時間；（Ｓ）体１５
分、（Ｒ）体１９．３分）。

実施例１ 酵母に属する菌株の場合はＹＭ培地（酵母エキス０．３
χ、麦芽エキス０．３χ、ペプトン０．５Ｘ、グルコー
ス２χ、ｐＨ６，０）　１００−を、又細菌に属する菌
株の場合はＹＰＭｆ音地（グルコース２％、酵母エキス
０．５％、ペプトン０．３％、肉エキス０．３％、（Ｎ
Ｈ４）ｚＨＰＯ４０，２％、ＫＨ２ＰＯ４０，１％、ｐ
Ｈ７）１０Ｍを５００ａＺ容坂ロフラスコに入れ、滅菌
後、表１に記載した微生物を植菌し、３０°Ｃで４８時
間往復振盪培養を行った。続いて遠心分離で菌体を分離
し、生理食塩水で１回洗浄し、生菌体を得た。

次に５００ａＺ容坂ロフラスコに蒸留水５０ｍ７を入れ
、これに上記生菌体を懸濁し、グルコースを５ｇ添加し
た。３０°Ｃで１０分間往復振盪させた後、４−ヒドロ
キシ−２−ブタノンを０．５ｇ添加し、３０’Ｃで２０
時間往復振盪反応させた。

反応終了後、遠心分離にて除菌し、得られた上澄を塩化
ナトリウムで飽和させた後、酢酸エチル５０−を用いて
抽出を行い、酢酸エチル層をガスクロマトグラフィーで
分析し、反応収率を調べた。

次に、酢酸エチル層を無水芒硝で脱水後、脱溶媒を行い
、シロップを得た。これを常法により塩化アセチルでア
セチル化した後、溶媒に溶解し、高速液体クロマトグラ
フィーにて生成物の絶対配置及び光学純度を測定した。

結果を表１に示す。

実施例２ ＹＭ培地５２を含む１０ｆｆｉ容ジヤーフアメンターに
キャンディダ・ウチルス［ＡＭ　４２７７を植菌し、３
０°Ｃで撹拌２５０ｒ、ｐ６ｍ、通気量０．５ｖ、ｖ、
ｍで４８時間培養を行った。

培養終了後、遠心分離で集菌し、菌体を水５２で洗浄し
た復水５００　ｍＺに懸濁した。この懸濁液に４−ヒド
ロキシ−２−ブタノン５ｇ、グルコース５０ｇを添加し
、３０°Ｃで２４時間、撹拌して反応させた。

反応終了後、遠心分離にて除菌し、得られた上澄液を塩
化ナトリウムで飽和させ、酢酸エチル２５０−を用いて
、二回抽出を行い、酢酸エチル層をガスクロマトグラフ
ィーで分析し、反応収率を調べたところ、８５％であっ
た。

次に、酢酸エチル層を無水芒硝で脱水後、減圧下、脱溶
媒を行い、４．０ｇのシロップを得た。

これについて更に蒸留を行うことにより無色透明な（１
？）−Ｌ３−ブタンジオールを得ることができた。

生成した１、３−ブタンジオールの絶対配置及び光学純
度をＨＰＬＣで測定したところ、絶対配置は（Ｒ）体で
あり、光学純度は９４％ｅ、ｅ、であった。

実施例３ 実施例２と全く同様にタルイベロマイセス・ラクチスＩ
ＦＯ１２６７について培養、反応、抽出を行い、４．５
ｇのシロップを得た。この際の、反応収率は９５％、生
成物した１−３−ブタンジオールの絶対配置は（Ｒ）体
、光学純度は９２％ｅ、ｅ、であった。

実施例４ 実施例２と全（同様にキャンディダ・パラプシロシスＩ
ＦＯ１３９６について培養、反応、抽出を行い、３．５
ｇのシロップを得た。この際の、反応収率は６４％、生
成物した１、３−ブタンジオールの絶対配置は（Ｓ）体
、光学純度は９８％ｅ、ｅ、であった。

実施例５ 実施例２と全く同様にゲオトリカム・カンデイダムＩＦ
Ｏ４６０１について培養、反応、抽出を行い、３．２ｇ
のシロップを得た。この際の、反応収率は７８％、生成
物した１、３−ブタンジオールの絶対配置は（Ｓ）体、
光学純度は８８％ｅ、ｅ、であった。

［発明の効果］ 本発明の微生物を用いた光学活性１．３−ブタンジオー
ルの製造方法は、簡便に光学純度の高い光学活性１，３
−ブタンジオールを製造することを可能にさせるもので
あり工業的に極めて有利である。

表１の続き 表１の続き

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　４−ヒドロキシ−２−ブタノンを（Ｒ）−１，３−
   ブタンジオール、或いは（Ｓ）−１，３−ブタンジオー
   ルに不斉的に還元する能力を有する微生物、或いはその
   処理物を４−ヒドロキシ−−２−ブタノンに作用させ、
   生成する（Ｒ）−１、３−ブタンジオール、或いは（Ｓ
   ）−１，３−ブタンジオールを採取することを特徴とす
   る光学活性１，３−ブタンジオールの製造方法。 ２　微生物が、 アンブロシオジマ（Ａｍｂｒｏｓｉｏｚｙｍａ）属バチ
   ルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属 キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属 シトロバクター（Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ）属コリネバ
   クテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属ハン
   セヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕｌａ）属 イサッチェンキア（Ｉｓｓａｔｃｈｅｎｋｉａ）属クル
   イベロマイセス（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）属ピキ
   ア（Ｐｉｃｈｉａ）属 プロタミノバクター（Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｃｔｅｒ
   ）属シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属ロド
   トルラ（Ｐｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ）属 セレノチラ（Ｓｅｌｅｎｏｔｉｌａ）属 シゾサッカロミセス（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍ
   ｙｃｅｓ）属ステェファノアスカス（Ｓｔｅｐｈａｎｏ
   ａｓｃｕｓ）属又はキサントモナス（Ｘａｎｔｈｏｍｏ
   ｎａｓ）属に属する微生物群から選ばれ、４−ヒドロキ
   シ−２−ブタノンを不斉還元して（Ｒ）−１，３−ブタ
   ンジオールを生成する能力を有する微生物である請求項
   １記載の製造法。 ３　微生物が、 ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
   属キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属 ゲオトリカム（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ）属 クレブジーラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属 ロデロマイセス（Ｌｏｄｄｅｒｏｍｙｃｅｓ）属サッカ
   ロマイコプシス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｏｐｓｉｓ）
   属 又はトリコスポロン（Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ）属に
   属する微生物群から選ばれ、４−ヒドロキシ−２−ブタ
   ノンを不斉還元して（Ｓ）−１，３−ブタンジオールを
   生成する能力を有する微生物である請求項１記載の製造
   法。