JPS60248199A - グルタチオンの製造法 - Google Patents
グルタチオンの製造法Info
- Publication number
- JPS60248199A JPS60248199A JP10317484A JP10317484A JPS60248199A JP S60248199 A JPS60248199 A JP S60248199A JP 10317484 A JP10317484 A JP 10317484A JP 10317484 A JP10317484 A JP 10317484A JP S60248199 A JPS60248199 A JP S60248199A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glutathione
- resistant
- medium
- satucharomyces
- cultured
- Prior art date
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- Granted
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明のグルクチオンは、生体内の酸化還元系に関与す
るトリペプチドであり、肝機能の強化。
るトリペプチドであり、肝機能の強化。
解毒の為の医薬として利用することができる。
従来の技術
酵母によるグルタチオンの製造法に関しては、グルタチ
オンの前駆物質であるし一システィンを単独、またはそ
れにグルタミン酸、グリシンを培地に添加する方法（特
開昭４８−４４４８８． 同４８−９２５７９ 。
オンの前駆物質であるし一システィンを単独、またはそ
れにグルタミン酸、グリシンを培地に添加する方法（特
開昭４８−４４４８８． 同４８−９２５７９ 。
同５２−１５６９９４．同５３−９４０８９） 、メチ
オニンまたはＬ−システィンを培地に添加する方法（特
開昭４８−２２６８５゜同４８−４４４８７． 同５１
−１３９６１１５．同５２−１５６９９４） 、キャン
ディダ・ウチリスのし−またはり、Ｌ＝エチオニン感受
性株を用いる方法（特開昭５２−８７２９６） 、キャ
ンディダ・ウチリスのエチオニン耐性株を用いる方法（
特開昭５２−１２５６８７＞、サツカロミセス属の１゜
２、４− ）リアゾールおよびアジ化ナトリウム耐性株
を用いる方法（特開昭５８−８１７９７）などが知られ
ている。
オニンまたはＬ−システィンを培地に添加する方法（特
開昭４８−２２６８５゜同４８−４４４８７． 同５１
−１３９６１１５．同５２−１５６９９４） 、キャン
ディダ・ウチリスのし−またはり、Ｌ＝エチオニン感受
性株を用いる方法（特開昭５２−８７２９６） 、キャ
ンディダ・ウチリスのエチオニン耐性株を用いる方法（
特開昭５２−１２５６８７＞、サツカロミセス属の１゜
２、４− ）リアゾールおよびアジ化ナトリウム耐性株
を用いる方法（特開昭５８−８１７９７）などが知られ
ている。
発明が解決しようとする問題点
グルタチオンのより改良された菌株を得ることは、常に
められており、本発明者らは、グルタチオン生産性の高
い菌株の改良を行った。
められており、本発明者らは、グルタチオン生産性の高
い菌株の改良を行った。
問題点を解決するための手段
サツカロミセス属菌のグルタチオン生産能を改良すべく
研究を行った結果、アミド類またはインドフェノール類
の薬剤に対して抵抗性を有するサツカロミセス属菌を培
養すれば、培養物中にグルタチオンが著量蓄積されるこ
とを見出しイ本発明実施の態様 本発明によれば、サツカロミセス属に属し、アミド類ま
たはインドフェノール類に対して抵抗性を有し、かつグ
ルタチオン生産能を有する微生物を培地に培養し、培養
物中にグルクチオンを蓄積させ、該培養物からこれを採
取することによってタルクチオンを製造することができ
る。
研究を行った結果、アミド類またはインドフェノール類
の薬剤に対して抵抗性を有するサツカロミセス属菌を培
養すれば、培養物中にグルタチオンが著量蓄積されるこ
とを見出しイ本発明実施の態様 本発明によれば、サツカロミセス属に属し、アミド類ま
たはインドフェノール類に対して抵抗性を有し、かつグ
ルタチオン生産能を有する微生物を培地に培養し、培養
物中にグルクチオンを蓄積させ、該培養物からこれを採
取することによってタルクチオンを製造することができ
る。
本発明で用いる微生物は、天然から分離することもでき
るが、変異処理手段、たとえば薬剤処理、Ｘ線、Ｔ線、
Ｃｏ照射あるいは遺伝子組換などの方法によって変異処
理したものも用いることができる。薬剤抵抗性としては
、アミド類たとえばＮ。
るが、変異処理手段、たとえば薬剤処理、Ｘ線、Ｔ線、
Ｃｏ照射あるいは遺伝子組換などの方法によって変異処
理したものも用いることができる。薬剤抵抗性としては
、アミド類たとえばＮ。
Ｎ−ジアリル−２３２−ジクロロアセトアミド、インド
フェノール類たとえば２，６−ジクロロフエノールイン
ドフエノールなどに対する抵抗性があげられる。
フェノール類たとえば２，６−ジクロロフエノールイン
ドフエノールなどに対する抵抗性があげられる。
具体的に好適な菌株としては、サツカロミセス・セレビ
シェＡＴＣＣ７７５４から変異誘導されたＮ、Ｎ−ジア
リル−２，２−ジクロロアセトアミド抵抗性菌株である
サツカロミセス・セレビシェＲ−３（ＦＥＲＭ Ｐ−７
６１４）および２，６−ジクロロフェノールインドフェ
ノール抵抗性菌株であるサツカロミセス・セレビシより
ＣＩＰｉ９（ＦＥＲＭ Ｐ−７６１５）があげられる。
シェＡＴＣＣ７７５４から変異誘導されたＮ、Ｎ−ジア
リル−２，２−ジクロロアセトアミド抵抗性菌株である
サツカロミセス・セレビシェＲ−３（ＦＥＲＭ Ｐ−７
６１４）および２，６−ジクロロフェノールインドフェ
ノール抵抗性菌株であるサツカロミセス・セレビシより
ＣＩＰｉ９（ＦＥＲＭ Ｐ−７６１５）があげられる。
両菌株の取得方法は以下のとおりである。
サツカロミセス・セレビシェΔＴＣＣ７７５４を、グル
コース１ｇ／〃、酵母エキス０．３ｇ／ａ、麦芽エキス
０．３ ｇ ／”１ヘプ） ７０．５ ｇ ／ａオヨび
寒天２ｇ／ｄＲからなるスラント培地で、３０℃、２４
時間生育させた。菌体を生理食塩水で１回洗浄後１０８
個／ｍｌの菌濃度で２００〃ｇ／ｍｌのニトロソグアニ
ジンを含む０．０５ Ｍ ）リス・リンゴ酸緩衝液（ｐ
Ｈ５，０）に懸濁し、３０℃、３０分間インキュベート
した。処理後の菌体を生理食塩水で一回洗浄してから、
薬剤（第２表）を含有する下記組成（第１表）の最小寒
天培地（ｐ Ｈ５，５）に塗りつけ、３０℃で３〜７日
間培養した。出現したコロニーを薬剤抵抗性菌株として
選択した。
コース１ｇ／〃、酵母エキス０．３ｇ／ａ、麦芽エキス
０．３ ｇ ／”１ヘプ） ７０．５ ｇ ／ａオヨび
寒天２ｇ／ｄＲからなるスラント培地で、３０℃、２４
時間生育させた。菌体を生理食塩水で１回洗浄後１０８
個／ｍｌの菌濃度で２００〃ｇ／ｍｌのニトロソグアニ
ジンを含む０．０５ Ｍ ）リス・リンゴ酸緩衝液（ｐ
Ｈ５，０）に懸濁し、３０℃、３０分間インキュベート
した。処理後の菌体を生理食塩水で一回洗浄してから、
薬剤（第２表）を含有する下記組成（第１表）の最小寒
天培地（ｐ Ｈ５，５）に塗りつけ、３０℃で３〜７日
間培養した。出現したコロニーを薬剤抵抗性菌株として
選択した。
第１表 最小寒天培地組成
りルコース ２０ ｇ／ｊ２
Ｌ−アスパラギン ２ ／／
（ＮＨ，）２ Ｓｏｌ ２ ／／
ＫＨ，ＰＯ２，１，５〃
ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，５〃
Ｃｏ ＣＲ２・２Ｈ２００，３３”
ＭｎＳＯ４・ｎＨａ ○ ０．０４ ”８３ＢＯ３０，
６” ＺｎＳ○、・ ７Ｈ２００，３１〃 サイアミン塩酸塩 ２００ μｇ／β ハントテン酸カルシウム ２００ ” ニコチン酸 ２００〃 ピリドキシン塩酸塩 ２００〃 ｐ−アミノ安息香酸 ５０〃 ビ オ チ ン ２ 〃 第２表 添加した薬剤濃度 ２．６−ジクロロフェノールインド ０．０５フエノー
ル 得られた変異株の薬剤抵抗性を確認するために以下の実
験を行った。
６” ＺｎＳ○、・ ７Ｈ２００，３１〃 サイアミン塩酸塩 ２００ μｇ／β ハントテン酸カルシウム ２００ ” ニコチン酸 ２００〃 ピリドキシン塩酸塩 ２００〃 ｐ−アミノ安息香酸 ５０〃 ビ オ チ ン ２ 〃 第２表 添加した薬剤濃度 ２．６−ジクロロフェノールインド ０．０５フエノー
ル 得られた変異株の薬剤抵抗性を確認するために以下の実
験を行った。
親株のサツカロミセス・セレビシェＡＴＣＣ７７５４と
これから誘導した薬剤抵抗性株を第３゜４表に示す濃度
で含有する最小液体培地（第１表の培地より寒天を除い
た培地）に５ Ｘｌ０６個／ｍｌの濃度で植菌し、３０
℃、２１時間振盪培養した。
これから誘導した薬剤抵抗性株を第３゜４表に示す濃度
で含有する最小液体培地（第１表の培地より寒天を除い
た培地）に５ Ｘｌ０６個／ｍｌの濃度で植菌し、３０
℃、２１時間振盪培養した。
この時点の生育度（光学的濁度）を６６０７ｍで測定し
た。薬剤無添加のときの生育度を１００としたときの相
対生育度を第３，４表に示す。
た。薬剤無添加のときの生育度を１００としたときの相
対生育度を第３，４表に示す。
第 ３ 表
０．５ ６６．５ ７７．０
１ ５１．０ ５３．９
第４表
０．０１ ８３．５ ９４．３
０．０２５ ７７．８ ８５．０
０．０５ ５２．３ ６５．５
０．１ １３．８ １４．１
グルタチオン生産のために用いられる培地としては、炭
素源、窒素源、無機塩、生育促進物質などを含むもので
あれば、天然培地１合成培地のいずれも用いることがで
きる。
素源、窒素源、無機塩、生育促進物質などを含むもので
あれば、天然培地１合成培地のいずれも用いることがで
きる。
炭素源としては、グルコース、シスクロース。
でんぷん加水分解物、糖蜜などの糖類、酢酸、クエン酸
などの有機酸、エタノール、メタノールなどのアルコー
ル、などが用いられる。
などの有機酸、エタノール、メタノールなどのアルコー
ル、などが用いられる。
窒素源としては、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム
、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素などの
無機含窒素化合物や、カザミノ酸。
、リン酸アンモニウム、硝酸アンモニウム、尿素などの
無機含窒素化合物や、カザミノ酸。
ペプトン、肉エキスなどの有機窒素含有物などが用いら
れる。
れる。
無機塩としては、リン酸塩、硫酸塩、マグネシウム塩、
カリウム塩、鉄塩、マンガン塩などが用いられる。
カリウム塩、鉄塩、マンガン塩などが用いられる。
生育促進物質としては、酵母エキス、麦芽エキス、コー
ンステイープリカー、大豆粕酸分解物などの有機栄養源
が用いられる。
ンステイープリカー、大豆粕酸分解物などの有機栄養源
が用いられる。
栄養要求性株を用いるときは、当該要求物質を培地に添
加する。
加する。
培養は、２０〜４０℃、ｐｆ１３〜８で好気的条件下で
行われる。
行われる。
グルクチオンは、培養物、とくに培養菌体に蓄積するの
で、これを採取する。菌体からのグルタチオンの採取は
、公知の手法によって行えばよい。
で、これを採取する。菌体からのグルタチオンの採取は
、公知の手法によって行えばよい。
たとえば、遠心分離により回収した菌体を熱水、硫酸な
どにより抽出処理し、抽出物に亜酸化銅を添加してグル
タチオン銅塩とする。この銅塩より、銅を除去して遊離
のグルクチオンを得る。得られたグルタチオンの確Ｓ忍
は、各種の溶媒によるペーパークロマトク゛ラフイー、
赤外線吸収スペクトル分析２兄素分析、アミノ酸分析、
核磁気共鳴スペクトル分析などにより行う。
どにより抽出処理し、抽出物に亜酸化銅を添加してグル
タチオン銅塩とする。この銅塩より、銅を除去して遊離
のグルクチオンを得る。得られたグルタチオンの確Ｓ忍
は、各種の溶媒によるペーパークロマトク゛ラフイー、
赤外線吸収スペクトル分析２兄素分析、アミノ酸分析、
核磁気共鳴スペクトル分析などにより行う。
発明の効果
本発明によれば、グルタチオンを高収率で製造すること
ができる。
ができる。
実施例１゜
サツカロミセス・セレビシェＲ−３ヲ糖ｌ１２．５ｇ／
ａｃ糖換算）、硫酸アンモニウム０２５ｇ／ａ、’）ン
酸−カリウム０．２５ ｇ ／ ａの前培養培地に植菌
し、３０℃で２４時間振盪培養した。
ａｃ糖換算）、硫酸アンモニウム０２５ｇ／ａ、’）ン
酸−カリウム０．２５ ｇ ／ ａの前培養培地に植菌
し、３０℃で２４時間振盪培養した。
第５表の発酵培地２０ｍ１を、２５０１ＴＩＩ容三角フ
ラスコに分注して殺菌し、冷却後、前培養液を１０％（
Ｖ／ν）の植菌量で摂取し、３０℃で２４時間振盪培養
した。
ラスコに分注して殺菌し、冷却後、前培養液を１０％（
Ｖ／ν）の植菌量で摂取し、３０℃で２４時間振盪培養
した。
第５表 発酵培地組成
糖蜜（糖換算） ６０ ｇ／Ａ
（Ｎｌ＋、）２Ｓ［）、 Ｉ Ｏ１ｌ
ＮＨ４１１２Ｐ１． ２ ”
Ｋ、ＳＱ、 ２．５ ”
ＭｇＳ［］４・７Ｈ２００，５／／
ＦｅＳ［］＋ ・７Ｈ２０８ｍｇ ／ ’ＭｎＳＯ４・
ｎＨａｏ ８ ” コーンステイープリカー ２．５〃 培養終了後の培養物２１から遠心分離により４８．２ｇ
（乾燥菌体換算）の菌体を得た。菌体中のグルタチオン
含量は３３％（Ｉｌｌ／ｌ’ｌ乾燥菌体換算）であった
。この菌体より硫酸でグルクチオンを抽出し、抽出液に
亜酸化銅を加え、グルクチオン銅塩を１等だ。この銅塩
を水洗した後、水に懸濁して、硫化水素を吹き込み、水
溶液中にグルタチオンを遊離させ、硫酸イオンの除去後
、減圧濃縮してグルタチオン０．９５ ｇを得た。
ｎＨａｏ ８ ” コーンステイープリカー ２．５〃 培養終了後の培養物２１から遠心分離により４８．２ｇ
（乾燥菌体換算）の菌体を得た。菌体中のグルタチオン
含量は３３％（Ｉｌｌ／ｌ’ｌ乾燥菌体換算）であった
。この菌体より硫酸でグルクチオンを抽出し、抽出液に
亜酸化銅を加え、グルクチオン銅塩を１等だ。この銅塩
を水洗した後、水に懸濁して、硫化水素を吹き込み、水
溶液中にグルタチオンを遊離させ、硫酸イオンの除去後
、減圧濃縮してグルタチオン０．９５ ｇを得た。
親株のサツカロミセス・セレビシェＡＴＣＣ７７５４を
用い同様に行った場合は、菌体５５．８ｇ（乾燥菌体換
算）を１等だ。菌体中のグルクチオン含量は０．９５％
で、上記操作によって０．３２ ｇバ＼Ｈ’＋１．ＩＩ
：ロートリ占くり月、「−÷１すψ実施例２゜ サツカロミセス・セレビシよりＣＩＰ−４９を用いる他
は実施例１と同様に行って、菌体４９０ｇ（乾燥菌体換
算）を得た。菌体中のグルクチオン含量は２５５％で、
実施例１と同様に精製し０、７５ ｇのグルタチオンが
得られた。
用い同様に行った場合は、菌体５５．８ｇ（乾燥菌体換
算）を１等だ。菌体中のグルクチオン含量は０．９５％
で、上記操作によって０．３２ ｇバ＼Ｈ’＋１．ＩＩ
：ロートリ占くり月、「−÷１すψ実施例２゜ サツカロミセス・セレビシよりＣＩＰ−４９を用いる他
は実施例１と同様に行って、菌体４９０ｇ（乾燥菌体換
算）を得た。菌体中のグルクチオン含量は２５５％で、
実施例１と同様に精製し０、７５ ｇのグルタチオンが
得られた。
Claims (3)
- （１） サツカロミセス属に属し、アミド類またはイン
ドフェノール類に対して抵抗性を有し、かつグルタチオ
ン生産能を有する微生物を培地に培養し、培養物中にグ
ルタチオンを蓄積させ、該培養物からこれを採取するこ
とを特徴とするグルタチオンの製造法。 - （２） アミド類がＮ、Ｎ−ジアリル−２，２−ジクロ
ロアセトアミドである特許請求の範囲第１項の製造法。 - （３）インドフェノール類が２゜６−シクロロフエノー
ルインドフエノールである特許請求の範囲第１項の製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10317484A JPS60248199A (ja) | 1984-05-22 | 1984-05-22 | グルタチオンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10317484A JPS60248199A (ja) | 1984-05-22 | 1984-05-22 | グルタチオンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60248199A true JPS60248199A (ja) | 1985-12-07 |
| JPH0379993B2 JPH0379993B2 (ja) | 1991-12-20 |
Family
ID=14347141
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10317484A Granted JPS60248199A (ja) | 1984-05-22 | 1984-05-22 | グルタチオンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60248199A (ja) |
-
1984
- 1984-05-22 JP JP10317484A patent/JPS60248199A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0379993B2 (ja) | 1991-12-20 |
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