JPS58158198A - 蛋白質の製造法 - Google Patents
蛋白質の製造法Info
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- JPS58158198A JPS58158198A JP3997482A JP3997482A JPS58158198A JP S58158198 A JPS58158198 A JP S58158198A JP 3997482 A JP3997482 A JP 3997482A JP 3997482 A JP3997482 A JP 3997482A JP S58158198 A JPS58158198 A JP S58158198A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、蛋白質の製造法に関するものである。
さらに詳しくは、メタノール資化性ａｍ第１グループに
属する細菌を培養し、こｏ＃ｌＩｌ薗が画体外に産生じ
た蛋白質を分離採取する蛋白質の製造法に関するもので
ある。
属する細菌を培養し、こｏ＃ｌＩｌ薗が画体外に産生じ
た蛋白質を分離採取する蛋白質の製造法に関するもので
ある。
ある樵の微生物が蛋白質を産生ずることはよく知られて
おり、たとえば、Ａｇｒ、 １３１ｏ１． Ｃｈ＠ｍ、
、 ４０５２３（１９７６）には、数多（の細菌が１
体外に蛋白質を産生ずることを示している。
おり、たとえば、Ａｇｒ、 １３１ｏ１． Ｃｈ＠ｍ、
、 ４０５２３（１９７６）には、数多（の細菌が１
体外に蛋白質を産生ずることを示している。
しかしながら、メタノールを主炭素源とする培地中で生
育した細菌が菌体外に蛋白質を産生した例あるいは、メ
チ−モナス属などのメタノール資化性細論第１グループ
に属する細■が画体外に蛋白質を！ｉ幽した文献は、見
られず、本発明が乗切である。
育した細菌が菌体外に蛋白質を産生した例あるいは、メ
チ−モナス属などのメタノール資化性細論第１グループ
に属する細■が画体外に蛋白質を！ｉ幽した文献は、見
られず、本発明が乗切である。
本発明者は、メタノールから蛋白質を製造することを、
目的として研究した結果、本発明に到達した。
目的として研究した結果、本発明に到達した。
すなわち、本発明は、メタノール資化性＃Ｉ＊第１グル
ープに属し、菌体外に蛋白質を産生ずることのできる細
菌を、メタノールを主炭素源とする培地で培養して、培
地中に蛋白質を産生、蓄積させ、この蛋白質を分離採取
することを特徴とする蛋白質の製造法である。
ープに属し、菌体外に蛋白質を産生ずることのできる細
菌を、メタノールを主炭素源とする培地で培養して、培
地中に蛋白質を産生、蓄積させ、この蛋白質を分離採取
することを特徴とする蛋白質の製造法である。
本発明で使用され１株としては、メタノール資化性細菌
第１グループに属し、画体外に蛋白質を産生ずることの
できるｍ１ｎｉであれば、どのような菌株でもよい。
第１グループに属し、画体外に蛋白質を産生ずることの
できるｍ１ｎｉであれば、どのような菌株でもよい。
メタノール資化性縮重は、近年、研究が進められたため
従来の分類体系は不完全である。たとえばバージイス、
マニ＾アルオプデターミネーティグメクテリオｐジ第８
版によれば、ｃ−１資化性細菌として、メチロモナスお
よびメタノモナス、の２属しか記載されておらず、また
、そのすべてがメタンをも資化する１株である。
従来の分類体系は不完全である。たとえばバージイス、
マニ＾アルオプデターミネーティグメクテリオｐジ第８
版によれば、ｃ−１資化性細菌として、メチロモナスお
よびメタノモナス、の２属しか記載されておらず、また
、そのすべてがメタンをも資化する１株である。
近年、浦上および駒形は数多くのメタノール資化性細ｉ
１について、分類学的検討を加え、従来の７クロモバク
ター、メチ 、＜チルス、ミ為−ドモその菌学的性質が
類似していることが判った。すなわちこれらの菌株は、
ダラム陰性の桿菌で、肉汁培地に生育できな（、メタノ
ールを資化するとの共通性を有している。またＣｏ＠＋
Ｈｙｍｅ Ｑ タイプが偽であり、Ｇｌｓ：ｏ ｓ
（１１素数１６、二重枯合有さす）およびＣ１ａ：ｘ
（縦素数１６、二重結合１ケ）の脂肪酸を主成分とする
１体脂肪酸組成を有するという共通の性質を有しており
これらを一括してメタノール資化性細菌グループ！の菌
株と呼んでいる。
１について、分類学的検討を加え、従来の７クロモバク
ター、メチ 、＜チルス、ミ為−ドモその菌学的性質が
類似していることが判った。すなわちこれらの菌株は、
ダラム陰性の桿菌で、肉汁培地に生育できな（、メタノ
ールを資化するとの共通性を有している。またＣｏ＠＋
Ｈｙｍｅ Ｑ タイプが偽であり、Ｇｌｓ：ｏ ｓ
（１１素数１６、二重枯合有さす）およびＣ１ａ：ｘ
（縦素数１６、二重結合１ケ）の脂肪酸を主成分とする
１体脂肪酸組成を有するという共通の性質を有しており
これらを一括してメタノール資化性細菌グループ！の菌
株と呼んでいる。
Ａｂｅｔ−Ｉｎｔ、８７ｍｐ＊ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ
Ｇｒｏｗｔｈ ｏｎ Ｃ＋−Ｃｏｍｐｄ−＊
ｐ、３４９（１９８０）、Ｊ、Ｇｓｎ、Ａｐｐｌ、Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ、＊ ２７ ＊ ３８１（１９
８１） ］本発明で使用されるメタノール資化性細菌
第１グループに属する代表的な菌株には、たとえばアク
ｐモバクターメタノロフイラ Ａａｒｏｍｏｂａｅｔ＠
ｒｍ＠ｔｈａｔ＋ｏｌｏｐｈ目ａ ＡＴＣＣ２１２７
５、メチロバチルスグリフグネス Ｍ＠ｔｈｙｌｏｂａ
ｃｉｌｌｕｍ ｇｌｙａｏｇ＠ｎ＠５ＡＴＣＣ２９４
７５、シ為−ドモナス メチロトロ７アＰｓ＊ｕｄｏｍ
６ｎａｓ ｍ＠ｔｈｙＬｏｔｒｏｐｈａ ＮＣ！Ｂ
１０５０８、シ：Ｌ−トモナス メタノリス Ｐｓ＠ｕ
ｄｏｍｏｎａｓ ｍ＠ｔｈａｎｏｌｉａＩＮＫ−８４
（黴工研−寄１Ｉ４２２４７号）、メタノモナス メチ
−ボラ Ｍ＊ｔｈａｎｏｍｏｎａｍ ｍ＠ｔｈｙｌｏ
ｖｏｒａＡ Ｔ ＣＣ２１８５２、メチ−モナス メタ
ノリカＭ＠ｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ ｍ＠ｔｈａｎｏｌ
ｉｅａ Ｎ ＲＲＬ Ｂ−５４５８、メチロモナス エ
スペクシイ Ｍｓｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ＊ｓｐ＠ｘｉｉ
Ｂ −１８５（＠工１ＲｄＩ寄第ｚ６ａｌ）、ｔｉｔ
ｊＢ−３４１Ｃ砿工研−寄第２６６２号）、同ＢＵ−３
（黴工研菌寄第２６６３号）およびプータミノバクタ−
チ７ミノフ７−ガス Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｅｔ＠ｒ
ｔｈｉａｒｎｌｎｏｐｈａｇｕｓ ＡＴＣＣ２１
３７１などがある。これらのウチメチーモナス エスベ
クシイＢ−１８５（黴工研＊＊第２６６２号）（特開昭
５１−２２８７２号公報）が４！に好ましい。
Ｇｒｏｗｔｈ ｏｎ Ｃ＋−Ｃｏｍｐｄ−＊
ｐ、３４９（１９８０）、Ｊ、Ｇｓｎ、Ａｐｐｌ、Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌ、＊ ２７ ＊ ３８１（１９
８１） ］本発明で使用されるメタノール資化性細菌
第１グループに属する代表的な菌株には、たとえばアク
ｐモバクターメタノロフイラ Ａａｒｏｍｏｂａｅｔ＠
ｒｍ＠ｔｈａｔ＋ｏｌｏｐｈ目ａ ＡＴＣＣ２１２７
５、メチロバチルスグリフグネス Ｍ＠ｔｈｙｌｏｂａ
ｃｉｌｌｕｍ ｇｌｙａｏｇ＠ｎ＠５ＡＴＣＣ２９４
７５、シ為−ドモナス メチロトロ７アＰｓ＊ｕｄｏｍ
６ｎａｓ ｍ＠ｔｈｙＬｏｔｒｏｐｈａ ＮＣ！Ｂ
１０５０８、シ：Ｌ−トモナス メタノリス Ｐｓ＠ｕ
ｄｏｍｏｎａｓ ｍ＠ｔｈａｎｏｌｉａＩＮＫ−８４
（黴工研−寄１Ｉ４２２４７号）、メタノモナス メチ
−ボラ Ｍ＊ｔｈａｎｏｍｏｎａｍ ｍ＠ｔｈｙｌｏ
ｖｏｒａＡ Ｔ ＣＣ２１８５２、メチ−モナス メタ
ノリカＭ＠ｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ ｍ＠ｔｈａｎｏｌ
ｉｅａ Ｎ ＲＲＬ Ｂ−５４５８、メチロモナス エ
スペクシイ Ｍｓｔｈｙｌｏｍｏｎａｓ＊ｓｐ＠ｘｉｉ
Ｂ −１８５（＠工１ＲｄＩ寄第ｚ６ａｌ）、ｔｉｔ
ｊＢ−３４１Ｃ砿工研−寄第２６６２号）、同ＢＵ−３
（黴工研菌寄第２６６３号）およびプータミノバクタ−
チ７ミノフ７−ガス Ｐｒｏｔａｍｉｎｏｂａｅｔ＠ｒ
ｔｈｉａｒｎｌｎｏｐｈａｇｕｓ ＡＴＣＣ２１
３７１などがある。これらのウチメチーモナス エスベ
クシイＢ−１８５（黴工研＊＊第２６６２号）（特開昭
５１−２２８７２号公報）が４！に好ましい。
これらの細−の培養に使用する培地は、メタノールを主
たる炭素源として含有していることを要し、さらに−素
置、無機物およびビタミ／その他生長促進物質などの適
量を含有する培地ならば合成培地または天然培地のいず
れでもよい。
たる炭素源として含有していることを要し、さらに−素
置、無機物およびビタミ／その他生長促進物質などの適
量を含有する培地ならば合成培地または天然培地のいず
れでもよい。
培養液中のメタノール濃度は６重ｆ％以下が好ましく、
菌の生育および増殖の良好さからは３１ｉ瀘チ以下であ
ることが特に好ましい。窒素源としてはたとえばアンモ
ニウム塩、硝鐵塩などの無機窒素化合物および／または
たとえば尿素、コーン・ステイノ・リカー、カゼイ／、
ベソトン、酵母エキスおよび、肉エキスなどの有機Ｎ隼
含Ｍ物が用いられる。その他薫機塙としてたとえばカル
シウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、す／酸塩、マ
ンガン塩、亜鉛塩、鉄塩および銅塩などが用いられる。
菌の生育および増殖の良好さからは３１ｉ瀘チ以下であ
ることが特に好ましい。窒素源としてはたとえばアンモ
ニウム塩、硝鐵塩などの無機窒素化合物および／または
たとえば尿素、コーン・ステイノ・リカー、カゼイ／、
ベソトン、酵母エキスおよび、肉エキスなどの有機Ｎ隼
含Ｍ物が用いられる。その他薫機塙としてたとえばカル
シウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、す／酸塩、マ
ンガン塩、亜鉛塩、鉄塩および銅塩などが用いられる。
ビタミンＳおよびアミノ酸などが菌株によっては生育に
必ず要求される物質とし【あるいは生長促進物質として
添加される。
必ず要求される物質とし【あるいは生長促進物質として
添加される。
培讐条件は使用するｌ１ａｌ＃！ｉが生育、増殖し５る
条件であれば４１Ｈｍ蟻はない。
条件であれば４１Ｈｍ蟻はない。
培養温度は、たとえば２０〜４７＠Ｃであり、細菌の生
育の点から２５〜４５°Ｃが好ましく、また、蛋白質の
産生の点から、４０＠Ｃ以下が好ましい。
育の点から２５〜４５°Ｃが好ましく、また、蛋白質の
産生の点から、４０＠Ｃ以下が好ましい。
また培養ｐＨは、たとえば５〜９であり、ＩＩＡＩＩＩ
の生育の点から１１Ｈ６〜８が好ましく、また、蛋白質
の＊愈の点からｐＨ６，５以上が好ましい。このような
条件で好気的に培養を行なう。また、培養方式は回分培
養または連続培養のいずれでもよい、連続培養を行なう
場合は、蛋白質の産生の点から、希釈率を０．２ｈｒ−
１以下とすることが好ましい。
の生育の点から１１Ｈ６〜８が好ましく、また、蛋白質
の＊愈の点からｐＨ６，５以上が好ましい。このような
条件で好気的に培養を行なう。また、培養方式は回分培
養または連続培養のいずれでもよい、連続培養を行なう
場合は、蛋白質の産生の点から、希釈率を０．２ｈｒ−
１以下とすることが好ましい。
窒素源としてアンモニウム塩を利用する場合は、培養期
間中にアンモニアが１体生成のため消費されて培養液の
ｐＨが低丁する。従って、培養液のｐＨを一定に保つた
めにアンモニア、カセイヵリまたはカセイソーダなどの
アルカリな麟加する。これらのうちアンモニアを添加す
ることが好ましい。
間中にアンモニアが１体生成のため消費されて培養液の
ｐＨが低丁する。従って、培養液のｐＨを一定に保つた
めにアンモニア、カセイヵリまたはカセイソーダなどの
アルカリな麟加する。これらのうちアンモニアを添加す
ることが好ましい。
培地に生成蓄積した蛋白質の分離、採取方法番転常法で
行なわれる。すなわち、たとえば培養液そのままを濃縮
または噴−乾燥して１体を含有するまメまたは好ましく
は菌体を分離したのち、上澄Ｋｆ機溶媒もしくは強酸を
添加したり、またはｐＨを等電点Ｋ１１１節し、あるい
は塩析等の通常の方法により分離することも出来る。ま
た、培養液中に生成蓄積した蛋白質は遠心分離して一体
を除き、上澄液と同量の１０−過塩素酸溶液を加え、１
０分、後Ｋ、４，０００ｆＸ１０分関連心分離して沈澱
を集電ＩＮ苛性ソーダ水溶液で溶解してからＬｏｗｒｙ
法（Ｊ。
行なわれる。すなわち、たとえば培養液そのままを濃縮
または噴−乾燥して１体を含有するまメまたは好ましく
は菌体を分離したのち、上澄Ｋｆ機溶媒もしくは強酸を
添加したり、またはｐＨを等電点Ｋ１１１節し、あるい
は塩析等の通常の方法により分離することも出来る。ま
た、培養液中に生成蓄積した蛋白質は遠心分離して一体
を除き、上澄液と同量の１０−過塩素酸溶液を加え、１
０分、後Ｋ、４，０００ｆＸ１０分関連心分離して沈澱
を集電ＩＮ苛性ソーダ水溶液で溶解してからＬｏｗｒｙ
法（Ｊ。
Ｂｉｏｌ、ｃｈ＠ｍ、１９３，２６５ （１９５１））
Ｋよって定量を行なった。
Ｋよって定量を行なった。
得られた蛋白質は、そのまま、あるいは加水分解などの
処理をほどこされた後、飼料、で−品、医薬品および工
業原料などく使用される。
処理をほどこされた後、飼料、で−品、医薬品および工
業原料などく使用される。
、本発明によって工業的により容易に入手し５る物質を
原料として使用することが出来、しかも、純度の高い蛋
白質が菌体外に得られることＫより、一体の破砕Ｋｉｔ
するエネルギーも不畳であり分離、精製も容易であり、
工業上、極めて有利な方法である。
原料として使用することが出来、しかも、純度の高い蛋
白質が菌体外に得られることＫより、一体の破砕Ｋｉｔ
するエネルギーも不畳であり分離、精製も容易であり、
工業上、極めて有利な方法である。
実施例によってさらＫＡ体的に１１！明する。
実施例１゜
ｘ水１１ アｔ、： Ｑ （ＮＨ４）！８０４３ｔ ＊
ＫＨＢＰＯ４４ｔ＋Ｍｆ８０４４Ｈ１００，４ｆ ｗｃ
ｉｃｌｍ ２Ｈ２Ｏ２ｍｌ ＊Ｆ＠８０４一７ＨＨＯ
２０ｍＷ＋ｈ８０４−７Ｈ１０５ｍｆ＋ＭｎＣ１ｍ ・
４Ｊ０２ｍｆ＋Ｃｕ８０ｎ”５ＨｍＯＯ，２ｍＦおよび
ＮａｅｌＯ９５ｆを醇解し、ｐＨがｃｔ、８に＃ｌ贅さ
れた培地５００ｍ１ ｉｋ Ｉ Ｎ＠ｉ −−・’）ヤ
ーに入ｔｔ、１２０’Ｃテ２０分間殺曹した後、メタノ
ール５ｔを無値的に添加し、これに上記と同様な培地を
用いて３８°Ｃで２４時間前培養されたメチ−モナス
エスベクシイＢ −１８５の一体を含む前培養液を３ｖ
ｏ１％接種し、培養期間中の培養液のｐＨが６．８に維
持されるようにアンモニア水を添加しながら３８°Ｃで
通気攪拌培養を行なった。４８時間培養した後、この培
養液を遠心分離して１体を取り除いた。
ＫＨＢＰＯ４４ｔ＋Ｍｆ８０４４Ｈ１００，４ｆ ｗｃ
ｉｃｌｍ ２Ｈ２Ｏ２ｍｌ ＊Ｆ＠８０４一７ＨＨＯ
２０ｍＷ＋ｈ８０４−７Ｈ１０５ｍｆ＋ＭｎＣ１ｍ ・
４Ｊ０２ｍｆ＋Ｃｕ８０ｎ”５ＨｍＯＯ，２ｍＦおよび
ＮａｅｌＯ９５ｆを醇解し、ｐＨがｃｔ、８に＃ｌ贅さ
れた培地５００ｍ１ ｉｋ Ｉ Ｎ＠ｉ −−・’）ヤ
ーに入ｔｔ、１２０’Ｃテ２０分間殺曹した後、メタノ
ール５ｔを無値的に添加し、これに上記と同様な培地を
用いて３８°Ｃで２４時間前培養されたメチ−モナス
エスベクシイＢ −１８５の一体を含む前培養液を３ｖ
ｏ１％接種し、培養期間中の培養液のｐＨが６．８に維
持されるようにアンモニア水を添加しながら３８°Ｃで
通気攪拌培養を行なった。４８時間培養した後、この培
養液を遠心分離して１体を取り除いた。
この遠心分離液に、５００ ｍｊｌの１０％過塩素酸溶
液ｔｔｍえ、ついで３０分後、４，０００ｆＸ１５＋１
Ｍｌ遠心分離して沈澱を集めた。
液ｔｔｍえ、ついで３０分後、４，０００ｆＸ１５＋１
Ｍｌ遠心分離して沈澱を集めた。
沈澱を水洗し、乾燥して、０．４５９の蛋白質が得られ
た。
た。
特許出願人 三菱瓦斯化学株式会社
代表者長野和吉
Claims (1)
- メタノール資化性細１第１グループに属し、１体外に蛋
白質を産生ずることのできる細菌を、メタノールを主炭
素源とする培地で培養して、培地中に蛋白質を産生、蓄
積させ、この蛋白質を分離採取することを特徴とする蛋
白質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57039974A JPS6053598B2 (ja) | 1982-03-13 | 1982-03-13 | 蛋白質の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57039974A JPS6053598B2 (ja) | 1982-03-13 | 1982-03-13 | 蛋白質の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58158198A true JPS58158198A (ja) | 1983-09-20 |
| JPS6053598B2 JPS6053598B2 (ja) | 1985-11-26 |
Family
ID=12567921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57039974A Expired JPS6053598B2 (ja) | 1982-03-13 | 1982-03-13 | 蛋白質の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6053598B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9243645B2 (en) | 2011-08-08 | 2016-01-26 | Mitsubishi Heavy Industries Compressor Corporation | Fixture used in rotary machine and method for transporting rotary machine |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5196378A (ja) * | 1975-01-18 | 1976-08-24 | ||
| JPS5570704A (en) * | 1979-06-02 | 1980-05-28 | Yoshida Tsunehiro | Inspection unit for screw |
-
1982
- 1982-03-13 JP JP57039974A patent/JPS6053598B2/ja not_active Expired
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5196378A (ja) * | 1975-01-18 | 1976-08-24 | ||
| JPS5570704A (en) * | 1979-06-02 | 1980-05-28 | Yoshida Tsunehiro | Inspection unit for screw |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9243645B2 (en) | 2011-08-08 | 2016-01-26 | Mitsubishi Heavy Industries Compressor Corporation | Fixture used in rotary machine and method for transporting rotary machine |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6053598B2 (ja) | 1985-11-26 |
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