JPS5943157B2 - ピキア属菌によるソルビト−ルの製造法 - Google Patents
ピキア属菌によるソルビト−ルの製造法Info
- Publication number
- JPS5943157B2 JPS5943157B2 JP19005382A JP19005382A JPS5943157B2 JP S5943157 B2 JPS5943157 B2 JP S5943157B2 JP 19005382 A JP19005382 A JP 19005382A JP 19005382 A JP19005382 A JP 19005382A JP S5943157 B2 JPS5943157 B2 JP S5943157B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pichia
- sorbitol
- bacterial cells
- producing sorbitol
- glucose
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はブドウ糖から微生物的手法によってソルビトー
ルを製造する方法に関し、より詳しくはピキア属微生物
の生菌体、処理菌体、菌体破砕物および菌体抽出物等を
用いて還元型ニコチンアミド アデニン ジヌクレオチ
ド ホスフェイト（以下ＮＡＤＰＨとする）の存在下に
ブドウ糖からソルビトールを効率よく製造する方法に関
する。
ルを製造する方法に関し、より詳しくはピキア属微生物
の生菌体、処理菌体、菌体破砕物および菌体抽出物等を
用いて還元型ニコチンアミド アデニン ジヌクレオチ
ド ホスフェイト（以下ＮＡＤＰＨとする）の存在下に
ブドウ糖からソルビトールを効率よく製造する方法に関
する。
ソルビトールは特有の甘味を有すると共に反応性ｙＣ乏
しく、無害であって、湿潤調節作用を有するため、その
まま食品、歯みがき、化粧品等に添加物として使用され
る他、ビタミンＣ１界面活性剤製造の中間原料として広
く使用されている。
しく、無害であって、湿潤調節作用を有するため、その
まま食品、歯みがき、化粧品等に添加物として使用され
る他、ビタミンＣ１界面活性剤製造の中間原料として広
く使用されている。
ソルビトールは現在、工業的にはブドウ糖をラネーニッ
ケル等のＮｉ触媒を用いて接触還元して製造されている
が、このような方法によれば反応条件が必然的に高温（
１６０℃）、高圧（１７０ｋｇ ／ｃｒｌＬ）となりエ
ネルギーを多く消費する他、耐圧容器を必要とし、更に
水素を取扱う関係上爆発ノ危険が内在している。
ケル等のＮｉ触媒を用いて接触還元して製造されている
が、このような方法によれば反応条件が必然的に高温（
１６０℃）、高圧（１７０ｋｇ ／ｃｒｌＬ）となりエ
ネルギーを多く消費する他、耐圧容器を必要とし、更に
水素を取扱う関係上爆発ノ危険が内在している。
本発明者らは上記方法とは発想を異にし、グルコースを
微生物学的に還元することにより緩和な条件でソルビト
ールを製造する方法を試みた。
微生物学的に還元することにより緩和な条件でソルビト
ールを製造する方法を試みた。
ブドウ糖をソルビトールに還元する機構は動物細胞系で
は羊の精のう中（ＨｏＧ、Ｈｅｒｓ Ｂ ｉｏｃｈｗ
。
は羊の精のう中（ＨｏＧ、Ｈｅｒｓ Ｂ ｉｏｃｈｗ
。
Ｂ １ｏｐｈｙｓ、Ａ ｃｔａ ３７ （１９６０）
１２７−１３８）あるいはレンズ中（Ｍ、Ｌ ｏｕ
Ｂ ｉｏｃｈｅｍ。
１２７−１３８）あるいはレンズ中（Ｍ、Ｌ ｏｕ
Ｂ ｉｏｃｈｅｍ。
Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ １４１ （１９６７）５４
７−５５９）に存在することは知られているが、微生物
では、わずかに特公昭４５−２４８３４号及び４６−２
３０３８号にキシロースをキリシトールに好気的に醗酵
して還元する方法が開示されているにすぎない。
７−５５９）に存在することは知られているが、微生物
では、わずかに特公昭４５−２４８３４号及び４６−２
３０３８号にキシロースをキリシトールに好気的に醗酵
して還元する方法が開示されているにすぎない。
また、上記発明に開示された菌株をグルコース培地中で
培養してもソルビトールを得ることはできなかった。
培養してもソルビトールを得ることはできなかった。
そこで本発明者らは多種類の微生物について試験を行っ
た結果、五炭糖中で培養増殖せしめたビキア属の菌体、
あるいは菌体抽出物、凍結乾燥菌体ＮＡＤＰＨの存在下
に基質グルコースをソルビトールに高収率に還元するこ
とを見出して本発明を完成するに至った。
た結果、五炭糖中で培養増殖せしめたビキア属の菌体、
あるいは菌体抽出物、凍結乾燥菌体ＮＡＤＰＨの存在下
に基質グルコースをソルビトールに高収率に還元するこ
とを見出して本発明を完成するに至った。
本発明に用いるピキア属としてはピキア・ケルクラム（
Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｅｒｃｕｕｍ ） ＩＦ’００９４
９゜ピキア・キシロサ（Ｐ １ｃｈｉａ ｘｙｌｏｓａ
） Ｉ Ｆ ００９５０等が挙げられるが、中でもピ
キア・キシロサＩＦＯＯ９５０が好ましい。
Ｐｉｃｈｉａ ｇｕｅｒｃｕｕｍ ） ＩＦ’００９４
９゜ピキア・キシロサ（Ｐ １ｃｈｉａ ｘｙｌｏｓａ
） Ｉ Ｆ ００９５０等が挙げられるが、中でもピ
キア・キシロサＩＦＯＯ９５０が好ましい。
本発明に係る菌を増殖させるにあたっては炭素源として
２〜１５％、Ｄ−キシロース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−
リボース等の五炭糖を含有し、イーストエキス又はコー
ンステイープリカー等ヲ添付した液体培地中Ｃ２５〜３
５℃で２〜１０日間培養する。
２〜１５％、Ｄ−キシロース、Ｄ−アラビノース、Ｄ−
リボース等の五炭糖を含有し、イーストエキス又はコー
ンステイープリカー等ヲ添付した液体培地中Ｃ２５〜３
５℃で２〜１０日間培養する。
培養法は通気培養、振盪培養、回転ドラム法等好気的条
件であればいずれも採用Ｃきる。
件であればいずれも採用Ｃきる。
また、培地に上記成分の他各種ビタミン、無機質、ペプ
トンおよびイーストエキス等の有機物を加えてより増殖
率を高めることもできる。
トンおよびイーストエキス等の有機物を加えてより増殖
率を高めることもできる。
このようにして増殖した菌体を集菌、洗滌して得た生菌
をそのまま使用してもある程度の効果は認められるが凍
結乾燥菌体、凍結融解菌体、アセトン、エーテル等の有
機溶媒処理した菌体等の処理菌体を用いた方がはるかに
効果的である。
をそのまま使用してもある程度の効果は認められるが凍
結乾燥菌体、凍結融解菌体、アセトン、エーテル等の有
機溶媒処理した菌体等の処理菌体を用いた方がはるかに
効果的である。
また、超音波処理、ビブロゲンセルミル等の破砕機を用
いて調製した菌体破砕物および菌体抽出物を用いること
もできる。
いて調製した菌体破砕物および菌体抽出物を用いること
もできる。
ソルビトールを製造するにあたっては、上記方法で得ら
れた処理菌体、菌体破砕物又はこれから分離した菌体抽
出物あるいはこれらの混合物？１〜６０％濃度のブドウ
糖液に加え、１０〜６０°Ｃ１望ましくは２５〜３５℃
で反応させるー、この際補酵素としてＮＡＤＰＨを共存
させることによってソルビトールの生産性は飛躍的に向
上する。
れた処理菌体、菌体破砕物又はこれから分離した菌体抽
出物あるいはこれらの混合物？１〜６０％濃度のブドウ
糖液に加え、１０〜６０°Ｃ１望ましくは２５〜３５℃
で反応させるー、この際補酵素としてＮＡＤＰＨを共存
させることによってソルビトールの生産性は飛躍的に向
上する。
ＮＡＤＰＨの添加量は使用する菌体の調製法あるいは菌
体の抽出操作により大幅に異り、ブドウ糖１モル当り０
．１ミリモル〜２０モル望ましくは０．１モル〜１０モ
ルである。
体の抽出操作により大幅に異り、ブドウ糖１モル当り０
．１ミリモル〜２０モル望ましくは０．１モル〜１０モ
ルである。
反応に要する時間もまた条件により大きく変動し、例え
ば菌体抽出物を用いた場合、３０分ないし１４日で反応
は完了する。
ば菌体抽出物を用いた場合、３０分ないし１４日で反応
は完了する。
反応終了後、母液からソルビトールを分離する。
ソルビトールの分離精製にあたっては遠心分離法、限外
濾過法、イオン交換法等公知の方法を組合せて利用する
。
濾過法、イオン交換法等公知の方法を組合せて利用する
。
以下、実施例を挙げて本発明の詳細な説明する。
実施例 １
５００ｍｌ容消化フラスコに滅菌した表１に示す組成の
培地５０ｍ１を入れどキア・ケルクウムＩＦＯＯ９４９
株およびピキア・キシロサＩＦ００９５０株をそれぞれ
１白金耳植菌し、３０°Ｃ１６日間培養した。
培地５０ｍ１を入れどキア・ケルクウムＩＦＯＯ９４９
株およびピキア・キシロサＩＦ００９５０株をそれぞれ
１白金耳植菌し、３０°Ｃ１６日間培養した。
培養菌体をリン酸緩衝液で２回洗滌し、６１０ ｎｍに
おける濁度が２５になるようにリン酸緩衝液に懸濁した
。
おける濁度が２５になるようにリン酸緩衝液に懸濁した
。
この菌体懸濁液を２０分間超音波処理し、１４０００ｇ
、２０分間遠心分離し、その上溝両分をソルビトールの
生産に供した。
、２０分間遠心分離し、その上溝両分をソルビトールの
生産に供した。
上記操作で得た上清両分を用いて表２に示す組成の反応
液を調製し、ｐ Ｈ７，５とし、３０℃で６時間反応さ
せた。
液を調製し、ｐ Ｈ７，５とし、３０℃で６時間反応さ
せた。
ピキア・ケルクラム ＩＦ００９４９株では２１μｍｏ
ｌｅｓ、 ピキア・キシロサ Ｉ Ｆ ００９５０株
では８１ μｍＤｌｅｓのソルビトールがそれぞれ得ら
れた。
ｌｅｓ、 ピキア・キシロサ Ｉ Ｆ ００９５０株
では８１ μｍＤｌｅｓのソルビトールがそれぞれ得ら
れた。
表１
Ｄ−Ｘｙｌｏｓｅ ８ ｇ
ＫＨ２ＰＯ４０，１ｇ
ｉＶｌｇ Ｓ ０４・７Ｈ２００，０５ｇＣａ Ｃ１２
・２Ｈ２００，０１ｇ ＮａＣｌ 、 ０．０１ｇ カザミノ酸 ０．４ｇ イーストエキス Ｏ，１ｇ ｐＨ５，０１００ｍ１ 表２ 遠心上清液 ５ ｍｌ グルコース ３．６ ｍｎｏｌｅｓＮ Ａ
Ｄ Ｐ Ｈ０，２ｍｍｏｌｅｓ リン酸緩衝液 ０．７ ｍｍｏｌｅｓ蒸溜水
５ｍ１ Ｔａｔａｌ ｖｏｌ １０ｍｌ 生産物の確認は薄層クロマトグラフィー、高速液体クロ
マトグラフィーおよびガスクロマトグラフィーによって
行った。
・２Ｈ２００，０１ｇ ＮａＣｌ 、 ０．０１ｇ カザミノ酸 ０．４ｇ イーストエキス Ｏ，１ｇ ｐＨ５，０１００ｍ１ 表２ 遠心上清液 ５ ｍｌ グルコース ３．６ ｍｎｏｌｅｓＮ Ａ
Ｄ Ｐ Ｈ０，２ｍｍｏｌｅｓ リン酸緩衝液 ０．７ ｍｍｏｌｅｓ蒸溜水
５ｍ１ Ｔａｔａｌ ｖｏｌ １０ｍｌ 生産物の確認は薄層クロマトグラフィー、高速液体クロ
マトグラフィーおよびガスクロマトグラフィーによって
行った。
また、定量は高速液体クロマトグラフィーで行った。
実施例 ２
実施例１と同様に培養して得られたピキア・キシロサ
ＩＦＯＯ９５０の菌体をリン酸緩衝液で２回洗滌した後
、凍結乾燥した。
ＩＦＯＯ９５０の菌体をリン酸緩衝液で２回洗滌した後
、凍結乾燥した。
得られた凍結乾燥菌体を用いて表３に示した反応組成液
を調製し、３０℃で１６時間反応させた。
を調製し、３０℃で１６時間反応させた。
その反応液から１２１μｍｏｌｅｓのソルビトールが得
られた。
られた。
表３
凍結乾燥菌体 ０．５ｇ
グルコース １０ ｍｍｏｌｅｓＮ
ＡＤＰＨ２ｍｍｏｌｅｓ リン酸緩衝液 ３．５ ｍｍｏｌｅｓ蒸
溜水 ４０ｍ１ 実施例 ３ ピギア・キシロサ ＩＦＯＯ９５０株を用いて実施例１
の方法で得た反応液２０ｍ１をイオン交換樹脂（アミネ
ツクスＡ５：商品名）のカラムに通してソルビトールを
精製した。
ＡＤＰＨ２ｍｍｏｌｅｓ リン酸緩衝液 ３．５ ｍｍｏｌｅｓ蒸
溜水 ４０ｍ１ 実施例 ３ ピギア・キシロサ ＩＦＯＯ９５０株を用いて実施例１
の方法で得た反応液２０ｍ１をイオン交換樹脂（アミネ
ツクスＡ５：商品名）のカラムに通してソルビトールを
精製した。
得られたソルビトールは６５μｍｏｌｅｓであった。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ ピキア属微生物を五炭糖を主栄養源とする培地を用
いて好気的に培養１−で得られた生菌体、処理菌体、菌
体破砕物及び菌体抽出物の少くとも１種を還元型ニコチ
ンアミド アデニン ジヌクレオチド ホスフェイトの
共存下にブドウ糖に作用せしめてソルビトールを製造す
ることを特徴とする微生物によるソルビトールの製造法
７ ２ ピキア属微生物がピキア・ケルクラム、ピキア・キ
シロサであ０特許請求の範囲第１項の微生物によるソル
ビトールの製造法。 ３ ピキア・ケルクラムがＩＦＯ０９４９，ピキア・キ
シロサがＩＦＯ０９５０である特許請求の範囲第２項の
微生物によるソルビトールの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19005382A JPS5943157B2 (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | ピキア属菌によるソルビト−ルの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19005382A JPS5943157B2 (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | ピキア属菌によるソルビト−ルの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5982088A JPS5982088A (ja) | 1984-05-11 |
| JPS5943157B2 true JPS5943157B2 (ja) | 1984-10-19 |
Family
ID=16251554
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19005382A Expired JPS5943157B2 (ja) | 1982-10-29 | 1982-10-29 | ピキア属菌によるソルビト−ルの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5943157B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6440662U (ja) * | 1987-09-04 | 1989-03-10 | ||
| US11401595B2 (en) | 2016-08-31 | 2022-08-02 | Jfe Steel Corporation | High-strength steel sheet and production method therefor |
| US11578381B2 (en) | 2016-08-31 | 2023-02-14 | Jfe Steel Corporation | Production method for high-strength steel sheet |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2817400B2 (ja) * | 1993-10-28 | 1998-10-30 | 味の素株式会社 | 物質の製造法 |
-
1982
- 1982-10-29 JP JP19005382A patent/JPS5943157B2/ja not_active Expired
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6440662U (ja) * | 1987-09-04 | 1989-03-10 | ||
| US11401595B2 (en) | 2016-08-31 | 2022-08-02 | Jfe Steel Corporation | High-strength steel sheet and production method therefor |
| US11578381B2 (en) | 2016-08-31 | 2023-02-14 | Jfe Steel Corporation | Production method for high-strength steel sheet |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5982088A (ja) | 1984-05-11 |
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