JPS6053598B2 - 蛋白質の製造法 - Google Patents
蛋白質の製造法Info
- Publication number
- JPS6053598B2 JPS6053598B2 JP57039974A JP3997482A JPS6053598B2 JP S6053598 B2 JPS6053598 B2 JP S6053598B2 JP 57039974 A JP57039974 A JP 57039974A JP 3997482 A JP3997482 A JP 3997482A JP S6053598 B2 JPS6053598 B2 JP S6053598B2
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- methanol
- bacteria
- culture
- proteins
- bacterial
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- Expired
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、蛋白質の製造法に関するものである。
さらに詳しくは、メタノール資化性細菌第１グループに
属する細菌であるメチロモナス エスペクシーを培養し
、この細菌が菌体外に産生した蛋白質を分離採取する蛋
白質の製造法に関するものである。 ある種の微生物が
蛋白物を産生することはよく知られており、たとえば、
Ａｇｒ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、辿５２３（１９７６）
には、数多くの細菌が菌体外に蛋白質を産生することを
示している。
属する細菌であるメチロモナス エスペクシーを培養し
、この細菌が菌体外に産生した蛋白質を分離採取する蛋
白質の製造法に関するものである。 ある種の微生物が
蛋白物を産生することはよく知られており、たとえば、
Ａｇｒ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、辿５２３（１９７６）
には、数多くの細菌が菌体外に蛋白質を産生することを
示している。
一方、微生物の培養に際して、炭素源としてぶどう糖な
どの炭水化物、これらの炭水化物を含有する廃糖蜜など
の天然物ならびにパラフィンなどの炭化水素などが使用
されているが、これらはいずれも価格が不安定であり一
般には高価であり、またその供給量も不安定であり工業
原料としては好ましくない。これに対しメタノールは工
業的に大量に生産され価格も安定しておりしかも安価で
あり、かつ安定して供給されるので、メタノールを炭素
源としメタノール資化性細菌を使用して各種の有用物質
を製造することが工業上は好ましい。 しかしながら、
メタノールを主炭素源とする培地中で生育した細菌が菌
体外に蛋白質に産生した文献は、見られず、本発明が最
初である。
どの炭水化物、これらの炭水化物を含有する廃糖蜜など
の天然物ならびにパラフィンなどの炭化水素などが使用
されているが、これらはいずれも価格が不安定であり一
般には高価であり、またその供給量も不安定であり工業
原料としては好ましくない。これに対しメタノールは工
業的に大量に生産され価格も安定しておりしかも安価で
あり、かつ安定して供給されるので、メタノールを炭素
源としメタノール資化性細菌を使用して各種の有用物質
を製造することが工業上は好ましい。 しかしながら、
メタノールを主炭素源とする培地中で生育した細菌が菌
体外に蛋白質に産生した文献は、見られず、本発明が最
初である。
本発明者は、メタノールから蛋白質を製造することを
、目的として研究した結果、本発明に到達した。
、目的として研究した結果、本発明に到達した。
すなわち、本発明は、メタノール資化性細菌第１グル
ープのメチロモナス エスペクシーに属し、菌体外に蛋
白質を産生することのできる細菌を、メタノールを主炭
素源とする培地で培養して、培地中に蛋白質を産生、蓄
積させ、この蛋白質を分離採取することを特徴とする蛋
白質の製造法である。
ープのメチロモナス エスペクシーに属し、菌体外に蛋
白質を産生することのできる細菌を、メタノールを主炭
素源とする培地で培養して、培地中に蛋白質を産生、蓄
積させ、この蛋白質を分離採取することを特徴とする蛋
白質の製造法である。
本発明で使用され菌株としては、メタノール資化性細
菌第１グループのメチロモナス エスペクシーに属し、
菌体外に蛋白質を産生することのできる細菌であれば、
どのような菌株でもよい。
菌第１グループのメチロモナス エスペクシーに属し、
菌体外に蛋白質を産生することのできる細菌であれば、
どのような菌株でもよい。
メタノール資化性細菌は、近年、研究が進められたた
め従来の分類体系は不完全である。たとえばバージイス
・マニユアルオブデターミネーテイヴ・バクテリオロジ
第８版によれば、Ｃ−１資化性細菌として、メチロモナ
スおよびメタノコツカス、の２属しか記載されておらず
、また、そのすべてがメタンをも資化する菌株である。
近年、浦上および駒形は数多くのメタノール資化性細
菌について、分類学的検討を加え、培養特性、補酵素Ｑ
タイプおよび菌体脂肪酸組成などを基準としてグラム陰
性のメタノール資化性細菌を９つに分けることができ、
従来のアクロモバクター、メチロバチルス、シュードモ
ナス、メタノモナス、メチロモナスおよびプロタミノバ
クターの各属に属するメタノール資化性細菌中のある種
の菌株が、その菌学的性質が類似していることが判つた
。
め従来の分類体系は不完全である。たとえばバージイス
・マニユアルオブデターミネーテイヴ・バクテリオロジ
第８版によれば、Ｃ−１資化性細菌として、メチロモナ
スおよびメタノコツカス、の２属しか記載されておらず
、また、そのすべてがメタンをも資化する菌株である。
近年、浦上および駒形は数多くのメタノール資化性細
菌について、分類学的検討を加え、培養特性、補酵素Ｑ
タイプおよび菌体脂肪酸組成などを基準としてグラム陰
性のメタノール資化性細菌を９つに分けることができ、
従来のアクロモバクター、メチロバチルス、シュードモ
ナス、メタノモナス、メチロモナスおよびプロタミノバ
クターの各属に属するメタノール資化性細菌中のある種
の菌株が、その菌学的性質が類似していることが判つた
。
すなわちこれらの菌株は、グラム陰性の桿菌で、肉汁培
地に生育できなく、メタノールを資化するとの共通性を
有している。またＣＯｅ厄押ＥＱタイプがｑであり、Ｃ
ｌ６：０１（炭素数１ｅＫ二重重結合有さず）およびＣ
ｌ６：１（炭素数１６、二重結合１ケ）の脂肪酸を主成
分とする菌体脂肪酸組成を有するという共通の性質を有
しておりこれらを一括してメタノール資化性細菌グルー
プＩの菌株と呼んでいる。［Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．Ｍ
ｉｅｒＯｂｌＯｌ．、？、３４３（１９７９）、Ａｂｓ
ｔ．Ｉｎｔ．ＳｙＴＴｌｐ．ＭｉｃｒＯｂｉａｌＧｒＯ
ｗｔｈＯｎＣｌ一ＣＯｍｐｄ．、Ｐ．３４９（１９８０
）、Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．ＭｉｃｒＯｂｉＯｌ．、？
、３８１（１９８１）］本発明で使用されるメチロモナ
ス エスペクシーはメタノール資化性細菌第１グループ
に属する細菌であり、代表的な菌株には、たとえばメチ
ロモナス エスペクシイＢ−１８５（微工研菌寄第２６
６汚）（特開昭５１−２２８７汚公報）がある。
地に生育できなく、メタノールを資化するとの共通性を
有している。またＣＯｅ厄押ＥＱタイプがｑであり、Ｃ
ｌ６：０１（炭素数１ｅＫ二重重結合有さず）およびＣ
ｌ６：１（炭素数１６、二重結合１ケ）の脂肪酸を主成
分とする菌体脂肪酸組成を有するという共通の性質を有
しておりこれらを一括してメタノール資化性細菌グルー
プＩの菌株と呼んでいる。［Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．Ｍ
ｉｅｒＯｂｌＯｌ．、？、３４３（１９７９）、Ａｂｓ
ｔ．Ｉｎｔ．ＳｙＴＴｌｐ．ＭｉｃｒＯｂｉａｌＧｒＯ
ｗｔｈＯｎＣｌ一ＣＯｍｐｄ．、Ｐ．３４９（１９８０
）、Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐｌ．ＭｉｃｒＯｂｉＯｌ．、？
、３８１（１９８１）］本発明で使用されるメチロモナ
ス エスペクシーはメタノール資化性細菌第１グループ
に属する細菌であり、代表的な菌株には、たとえばメチ
ロモナス エスペクシイＢ−１８５（微工研菌寄第２６
６汚）（特開昭５１−２２８７汚公報）がある。
これらの細菌の培養に使用する培地は、メタノールを主
たる炭素源として含有していることを要し、さらに窒素
源、無機物およびビタミンその他生長促進物質などの適
量を含有する培地ならば合成培地または天然培地のいず
れでもよい。培養液中のメタノール濃度は６重量％以下
が好ましく、菌の生育および増殖の良好さからは３重量
％以不であることが特に好ましい。
たる炭素源として含有していることを要し、さらに窒素
源、無機物およびビタミンその他生長促進物質などの適
量を含有する培地ならば合成培地または天然培地のいず
れでもよい。培養液中のメタノール濃度は６重量％以下
が好ましく、菌の生育および増殖の良好さからは３重量
％以不であることが特に好ましい。
窒素源としてはたとえばアンモニウム塩、硝酸塩などの
無機窒素化合物および／またはたとえば尿素、コーン●
ステイプ●りカー、力ティン、ペプトン、酵母工キズお
よび、肉工キズなどの有機窒素含有物が用いられる。そ
の他無機塩としてたとえばカルシウム塩、マグネシウム
塩、カリウム塩、リン酸塩、マンガン塩、亜鉛塩、鉄塩
および銅塩などが用いられる。ビタミン類およびアミノ
酸などが菌株によつては生育に必ず要求される物質とし
てあるいは生長促進物質として添加される。培養条件は
使用する細菌が生育、増殖しうる条件であれば特に制限
はない。
無機窒素化合物および／またはたとえば尿素、コーン●
ステイプ●りカー、力ティン、ペプトン、酵母工キズお
よび、肉工キズなどの有機窒素含有物が用いられる。そ
の他無機塩としてたとえばカルシウム塩、マグネシウム
塩、カリウム塩、リン酸塩、マンガン塩、亜鉛塩、鉄塩
および銅塩などが用いられる。ビタミン類およびアミノ
酸などが菌株によつては生育に必ず要求される物質とし
てあるいは生長促進物質として添加される。培養条件は
使用する細菌が生育、増殖しうる条件であれば特に制限
はない。
培養温度は、たとえば２０〜４７℃であり、細菌の生育
の点から２５〜４５℃が好ましく、また、蛋白質の産生
の点から、４０℃以下が好ましい。
の点から２５〜４５℃が好ましく、また、蛋白質の産生
の点から、４０℃以下が好ましい。
また培養ＰＨは、たとえば５〜９であり、細菌の生育の
点からＰＨ６〜８が好ましく、また、蛋白質の産生の点
からＰＨ６．５以上が好ましい。
点からＰＨ６〜８が好ましく、また、蛋白質の産生の点
からＰＨ６．５以上が好ましい。
このような条件で好気的に培養を行なう。また、培養方
式は回分培養または連続培養のいずれでもよい。連続培
養を行なう場合は、蛋白質の産生の点から、希釈率を０
．２Ｆ１ｒ−１以下とすることが好ましい。窒素源とし
てアンモニウム塩を利用する場合は、培養期間中にアン
モニアが菌体生成のため消費されて培養液のＰＨが低下
する。従つて、培養液のＰＨを一定に保つためにアンモ
ニア、カセイカリまたはカセイソーダなどのアルカリを
添加する。これらのうちアンモニアを添加することが好
ましい。培地に生成蓄積した蛋白質の分離、採取方法は
、常法で行なわれる。すなわち、たとえば培養液そのま
まを濃縮または噴霧乾燥して菌体を含有するま）または
好ましくは菌体を分離したのち、上澄液に有機溶媒もし
くは強酸を添加したり、またはＰＨを等電点に調節し、
あるいは塩析等の通常の方法により分離することも出来
る。また、培養液中に生成蓄積した蛋白質は遠心分離し
て菌体を除き、上澄液と同量の１０％過塩素酸溶液を加
え、１紛後に、４００００ｆ刈紛間遠心分離して沈澱を
集め、１Ｎ苛性ソーダ水溶液で溶解してからＬＯｗｒｙ
法（Ｊ．ＢｌＯｌ．ｃｈｅｍ．、？、２６５（１９５１
））によつて定量を行なつた。得られた蛋白質は、その
まま、あるいは加水分解などの処理をほどこされた後、
飼料、食品、医薬品および工業原料などに使用される。
式は回分培養または連続培養のいずれでもよい。連続培
養を行なう場合は、蛋白質の産生の点から、希釈率を０
．２Ｆ１ｒ−１以下とすることが好ましい。窒素源とし
てアンモニウム塩を利用する場合は、培養期間中にアン
モニアが菌体生成のため消費されて培養液のＰＨが低下
する。従つて、培養液のＰＨを一定に保つためにアンモ
ニア、カセイカリまたはカセイソーダなどのアルカリを
添加する。これらのうちアンモニアを添加することが好
ましい。培地に生成蓄積した蛋白質の分離、採取方法は
、常法で行なわれる。すなわち、たとえば培養液そのま
まを濃縮または噴霧乾燥して菌体を含有するま）または
好ましくは菌体を分離したのち、上澄液に有機溶媒もし
くは強酸を添加したり、またはＰＨを等電点に調節し、
あるいは塩析等の通常の方法により分離することも出来
る。また、培養液中に生成蓄積した蛋白質は遠心分離し
て菌体を除き、上澄液と同量の１０％過塩素酸溶液を加
え、１紛後に、４００００ｆ刈紛間遠心分離して沈澱を
集め、１Ｎ苛性ソーダ水溶液で溶解してからＬＯｗｒｙ
法（Ｊ．ＢｌＯｌ．ｃｈｅｍ．、？、２６５（１９５１
））によつて定量を行なつた。得られた蛋白質は、その
まま、あるいは加水分解などの処理をほどこされた後、
飼料、食品、医薬品および工業原料などに使用される。
本発明によつて価格および供給量がともに安定しており
、工業原料として容易に入手しうるメタノールを原料と
して使用することが出来、しかも、純度の高い蛋白質が
菌体外に得られることにより、菌体の破砕に要するエネ
ルギーも不要であり分離、精製も容易であり、安価にか
つ安定して工業的に蛋白質を製造するためには極めて有
利な方法である。
、工業原料として容易に入手しうるメタノールを原料と
して使用することが出来、しかも、純度の高い蛋白質が
菌体外に得られることにより、菌体の破砕に要するエネ
ルギーも不要であり分離、精製も容易であり、安価にか
つ安定して工業的に蛋白質を製造するためには極めて有
利な方法である。
実施例によつてさらに具体的に説明する。
実施例１
純水１′あたり（ＮＨ４）２Ｓ０４３ｇ、ＫＨ２ＰＯ４
４ｆ．．ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００．４ｇ、ＣａＣｌ２−
２Ｈ２０５ｍ９、ＦｅＳＯｅ７Ｈ２Ｏ２Ｏｍ９、Ｚｎｓ
Ｏ４●７Ｈ２０５ｍ９、ＭｎＣＩ２●４Ｈ２０２ｍ９、
ＣｕＳＯ４・５Ｈ２００．２ｍ９およびＭａｃｌＯ．５
ｙを溶解し、ＰＨが６．８に調整された培地５００Ｔｎ
ｔを１ｅ容ミニ・シャーに入れ１２０℃で２０分間殺菌
した後、エタノール５ｙを無菌的に添加し、これに上記
と同様な培地を用いて３８℃で２４Ｆ１Ｖ間前培養され
たメチロモナス エスペクシイＢ−１８５の菌体を含む
前培養液を３Ｖ０１％接種し、培養期間中の培養液のＰ
Ｈが６．８に維持されるようにアンモニア水を添加しな
がら３８℃で通気攪拌培養を行なつた。
４ｆ．．ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００．４ｇ、ＣａＣｌ２−
２Ｈ２０５ｍ９、ＦｅＳＯｅ７Ｈ２Ｏ２Ｏｍ９、Ｚｎｓ
Ｏ４●７Ｈ２０５ｍ９、ＭｎＣＩ２●４Ｈ２０２ｍ９、
ＣｕＳＯ４・５Ｈ２００．２ｍ９およびＭａｃｌＯ．５
ｙを溶解し、ＰＨが６．８に調整された培地５００Ｔｎ
ｔを１ｅ容ミニ・シャーに入れ１２０℃で２０分間殺菌
した後、エタノール５ｙを無菌的に添加し、これに上記
と同様な培地を用いて３８℃で２４Ｆ１Ｖ間前培養され
たメチロモナス エスペクシイＢ−１８５の菌体を含む
前培養液を３Ｖ０１％接種し、培養期間中の培養液のＰ
Ｈが６．８に維持されるようにアンモニア水を添加しな
がら３８℃で通気攪拌培養を行なつた。
４８時間培養した後、この培養液を遠心分離して菌体を
取り除いた。
取り除いた。
この遠心分離液に、５００ｎｔの１０％過塩素酸溶液を
加え、ついで３紛後、４０００ｙ×１紛間遠心分離して
沈澱を集めた。
加え、ついで３紛後、４０００ｙ×１紛間遠心分離して
沈澱を集めた。
沈澱を水洗し、乾燥して、０．４５ダの蛋白質が得られ
た。
た。
Claims (1)
- １ メタノール資化性細菌第１グループのメチロモナス
エスペクシーに属し、菌体外に蛋白質を産生することの
できる細菌を、メタノールを主炭素源とする培地で培養
して、培地中に蛋白質を産生、蓄積させ、この蛋白質を
分離採取することを特徴とする蛋白質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57039974A JPS6053598B2 (ja) | 1982-03-13 | 1982-03-13 | 蛋白質の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57039974A JPS6053598B2 (ja) | 1982-03-13 | 1982-03-13 | 蛋白質の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58158198A JPS58158198A (ja) | 1983-09-20 |
| JPS6053598B2 true JPS6053598B2 (ja) | 1985-11-26 |
Family
ID=12567921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57039974A Expired JPS6053598B2 (ja) | 1982-03-13 | 1982-03-13 | 蛋白質の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6053598B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5863321B2 (ja) | 2011-08-08 | 2016-02-16 | 三菱重工コンプレッサ株式会社 | 回転機械の治具及び回転機械の輸送方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5196378A (ja) * | 1975-01-18 | 1976-08-24 | ||
| JPS5570704A (en) * | 1979-06-02 | 1980-05-28 | Yoshida Tsunehiro | Inspection unit for screw |
-
1982
- 1982-03-13 JP JP57039974A patent/JPS6053598B2/ja not_active Expired
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5196378A (ja) * | 1975-01-18 | 1976-08-24 | ||
| JPS5570704A (en) * | 1979-06-02 | 1980-05-28 | Yoshida Tsunehiro | Inspection unit for screw |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS58158198A (ja) | 1983-09-20 |
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