JPS5858071B2 - 細菌菌体の製造方法 - Google Patents
細菌菌体の製造方法Info
- Publication number
- JPS5858071B2 JPS5858071B2 JP19479181A JP19479181A JPS5858071B2 JP S5858071 B2 JPS5858071 B2 JP S5858071B2 JP 19479181 A JP19479181 A JP 19479181A JP 19479181 A JP19479181 A JP 19479181A JP S5858071 B2 JPS5858071 B2 JP S5858071B2
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- Japan
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- bacterial cells
- methanol
- culture solution
- culture
- cells
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、メタノール資化性細菌によって細菌菌体を製
造する方法に関する。
造する方法に関する。
細菌菌体は、飼料もしくは食品または医薬用原料もしく
は工業用原料として多重に使用されている。
は工業用原料として多重に使用されている。
従来、微生物菌体の製造原料としては、糖蜜、亜硫酸パ
ルプ廃液およびｎ−パラフィンなどが使用されてきた。
ルプ廃液およびｎ−パラフィンなどが使用されてきた。
しかしながらこれらの物質は醗酵原料としては供給量お
よび価格の点でそれぞれ不安定であり問題がある。
よび価格の点でそれぞれ不安定であり問題がある。
さらに、ｎ−パラフィンは水に難溶性乃至不溶性である
ことおよび微生物菌体の生産に多量の酸素が必要とされ
る点などで培養上問題が多い。
ことおよび微生物菌体の生産に多量の酸素が必要とされ
る点などで培養上問題が多い。
一方、メタノールは化学工業により大量に得られ、しか
も水溶性が犬であることなどから、醗酵原料として好ま
しい物質である。
も水溶性が犬であることなどから、醗酵原料として好ま
しい物質である。
本発明者は、他の炭素源の不存在下でもメタノールのみ
を炭素源として強力に資化する細菌の検索を行なったと
ころ、ミコプラナ ルブラ（Ｍｙ−ｃｏｐ １ａｎａ
ｒｕｂｒａ）ＮＣＩ Ｂｌ ０４０９ （”ＡＮＮＡＬ
−ＢＳ ＢＯＯＯＲＩＥＮＳＥＳ、ＶＯＬ、 １
．ＰＡＲＴ ２゜１９５３ｐ５３〜６０）がメタノー
ルを主炭素源として資化して生育、増殖することを見出
し、この新知見にもとづいて本発明を完成した。
を炭素源として強力に資化する細菌の検索を行なったと
ころ、ミコプラナ ルブラ（Ｍｙ−ｃｏｐ １ａｎａ
ｒｕｂｒａ）ＮＣＩ Ｂｌ ０４０９ （”ＡＮＮＡＬ
−ＢＳ ＢＯＯＯＲＩＥＮＳＥＳ、ＶＯＬ、 １
．ＰＡＲＴ ２゜１９５３ｐ５３〜６０）がメタノー
ルを主炭素源として資化して生育、増殖することを見出
し、この新知見にもとづいて本発明を完成した。
なお、上記において’ＮＣＩＢ’”は、「ナショナル
コレクション インダストリアル バクテリア（Ｎａｔ
ｉｏｎａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｓ
ｔｒｉ −ａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ−人ｂｅｒｄｅｅｎ
＋ Ｓｃｏ ｔ ｔａｎｄ）Ｊの略称であり、細菌が
この機関に保存されていることを示す。
コレクション インダストリアル バクテリア（Ｎａｔ
ｉｏｎａｌ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｕｓ
ｔｒｉ −ａｌ Ｂａｃｔｅｒｉａ−人ｂｅｒｄｅｅｎ
＋ Ｓｃｏ ｔ ｔａｎｄ）Ｊの略称であり、細菌が
この機関に保存されていることを示す。
すなわち、本発明はミコプラナ属に属し、メタノールを
資化しうる細菌を、メタノールを主たる炭素源として含
有する培地を培養し、該培養液から細菌の菌体を分離す
ることを特徴とする細菌菌体の製造方法である。
資化しうる細菌を、メタノールを主たる炭素源として含
有する培地を培養し、該培養液から細菌の菌体を分離す
ることを特徴とする細菌菌体の製造方法である。
本発明において、ミコプラナ属に属しメタノールを資化
しうる細菌として、通常、ミコプラナルブラが使用され
る。
しうる細菌として、通常、ミコプラナルブラが使用され
る。
メタノール資化性の有無および強さを検討するために次
の組成の液体培地を用いた。
の組成の液体培地を用いた。
すなわち、（ＮＨ４）２ＳＯ４３Ｐ、、ＫＨ２ＰＯ４１
，４グ、Ｎ ａ ２ＨＰＯ４２，１？、Ｍｇ５０４−７
Ｈ２００，２：？、ＣａＣｌ２ ・２Ｈ２０３０ｍ９．
ＦｅＣ６０７・ＸＨ２Ｏ３０■、ＭｎＣｌ２ ・４Ｈ
２０５ｍｌ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０５１７＋＆、 Ｃｕ
ＳＯ４・５Ｈ２０Ｑ、５■および酵母エキス０．１１を
純水１ｔに溶解し、ｐＨを６．５に調整して１’ｆｌＧ
で２０分間殺菌したのち、メタノールを１０Ｐ添加した
。
，４グ、Ｎ ａ ２ＨＰＯ４２，１？、Ｍｇ５０４−７
Ｈ２００，２：？、ＣａＣｌ２ ・２Ｈ２０３０ｍ９．
ＦｅＣ６０７・ＸＨ２Ｏ３０■、ＭｎＣｌ２ ・４Ｈ
２０５ｍｌ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２０５１７＋＆、 Ｃｕ
ＳＯ４・５Ｈ２０Ｑ、５■および酵母エキス０．１１を
純水１ｔに溶解し、ｐＨを６．５に調整して１’ｆｌＧ
で２０分間殺菌したのち、メタノールを１０Ｐ添加した
。
本細菌の培養に使用する培地は、メタノールを主たる炭
素源として含有していることを要する。
素源として含有していることを要する。
なおメタノール以外の炭素源たとえば糖質などを併用す
ることもできる。
ることもできる。
炭素源のほかにさらに窒素源および無機物などの適量を
含有する培地ならば合成培地または天然培地のいずれで
もよい。
含有する培地ならば合成培地または天然培地のいずれで
もよい。
培養液中のメタノール濃度は６重量饅以下が好ましく、
菌の生育および増殖の良好さからは３重量多塩下である
ことが特に好ましい。
菌の生育および増殖の良好さからは３重量多塩下である
ことが特に好ましい。
窒素源としては、たとえばアンモニウム塩および硝酸塩
などの無機窒素化合物または、たとえば尿素、コーン・
ステイープ・リカー、カゼイン、ペプトン、酵母エキス
および肉エキスなどの有機窒素含有物が用いられる。
などの無機窒素化合物または、たとえば尿素、コーン・
ステイープ・リカー、カゼイン、ペプトン、酵母エキス
および肉エキスなどの有機窒素含有物が用いられる。
その他の無機化合物として、たとえばカルシウム塩、マ
グネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、リン酸城マ
ンガン塩、亜鉛塩、鉄塩、調風モリブデン塩およびコバ
ルト塩、ならびにほう素化合物およびよう素化合物など
が用いられる。
グネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、リン酸城マ
ンガン塩、亜鉛塩、鉄塩、調風モリブデン塩およびコバ
ルト塩、ならびにほう素化合物およびよう素化合物など
が用いられる。
またさらにビタミン類などを添加してもよい。培養条件
は、温度２０〜４０℃、好ましくは２５〜３７℃、およ
びｐＨば５〜９、好ましくは６〜８である。
は、温度２０〜４０℃、好ましくは２５〜３７℃、およ
びｐＨば５〜９、好ましくは６〜８である。
このような条件で好気的に培養を行なう。
これらの条件をはずれて培養した場合には、本細菌の増
殖は悪くなる。
殖は悪くなる。
また、培養液中の溶存酸素濃度には特に制限はないが、
通常／／′ｉ０．５〜２０ｐｐＩＩｌが好ましい。
通常／／′ｉ０．５〜２０ｐｐＩＩｌが好ましい。
そのために通気量を調節したり、撹拌したり、また培養
槽内の圧力を高めるなどの手段が採用される。
槽内の圧力を高めるなどの手段が採用される。
また培養方式は、回分培養および連続培養のいずれでも
よい。
よい。
窒素源としてアンモニウム塩を利用する場合は、培養期
間中にアンモニアが菌体生成のため消費されて培養液の
ｐＨが低下する。
間中にアンモニアが菌体生成のため消費されて培養液の
ｐＨが低下する。
従って培養液のｐＨを一定に保つためにアンモニア、苛
性カリまたは苛性ソーダなどのアルカリを添加する。
性カリまたは苛性ソーダなどのアルカリを添加する。
これらのうち、アンモニアを添加することが好ましい。
このようにして細菌を培養した後、菌体を培養液より分
離する。
離する。
分離の方法としては、培養液そのままを遠心分離すると
の手段、培養液中に本細菌よりも大きい他の微生物の細
胞をろ過助剤として加えたり、あるいはプレコートする
ことにより培養液から菌体をろ過分離するとの手段、培
養液中に種々の凝集剤を加え菌体を凝集させ、これをろ
過あるいは遠心分離により培養液から菌体を分離すると
の手段、培養液のｐＨを５以下にすることにより、もし
くはｐＨを５以下にし、さらに５０〜１００℃で加熱す
ることにより菌体を凝集させ、これをろ過あるいは遠心
分離により菌体を分離するとの手段などを適用しつる。
の手段、培養液中に本細菌よりも大きい他の微生物の細
胞をろ過助剤として加えたり、あるいはプレコートする
ことにより培養液から菌体をろ過分離するとの手段、培
養液中に種々の凝集剤を加え菌体を凝集させ、これをろ
過あるいは遠心分離により培養液から菌体を分離すると
の手段、培養液のｐＨを５以下にすることにより、もし
くはｐＨを５以下にし、さらに５０〜１００℃で加熱す
ることにより菌体を凝集させ、これをろ過あるいは遠心
分離により菌体を分離するとの手段などを適用しつる。
分離された菌体は必要ならば各種の有機溶剤あるいは水
で洗浄され湿潤菌体を得る。
で洗浄され湿潤菌体を得る。
湿潤菌体は乾燥され、そのままあるいは、さらに種々の
処理がほどこされた後、飼料として利用される。
処理がほどこされた後、飼料として利用される。
また得られた菌体からさらに核酸、ビタミン類、補酵素
、蛋白質または脂質などの菌体含有物質が単独の物質と
して、またはこれらの相互の混合物として抽出され、飼
料、食品、医薬品および工業原料などに使用される。
、蛋白質または脂質などの菌体含有物質が単独の物質と
して、またはこれらの相互の混合物として抽出され、飼
料、食品、医薬品および工業原料などに使用される。
本発明によって、工業生産により容易に入手しうる物質
であるメタノールを原料として使用することができ、し
かも高収率で蛋白含量の高い菌体を得ることが出来、か
つ、原料物質のメタノールは水溶性であるため培養が容
易であり、簡単な後処理で清浄な菌体を得ることが出来
、工業上極めて有利な方法である。
であるメタノールを原料として使用することができ、し
かも高収率で蛋白含量の高い菌体を得ることが出来、か
つ、原料物質のメタノールは水溶性であるため培養が容
易であり、簡単な後処理で清浄な菌体を得ることが出来
、工業上極めて有利な方法である。
実施例によって、さらに具体的に説明する。
実施例 １
純水１ｔあたり（ＮＨ４） ２ ＳＯ４３グ、ＫＨ２Ｐ
Ｏ４１，４１、Ｎａ２ＨＰＯ４２，１？、、ＭｎＣｔ２
・４Ｈ２０５■、Ｚｎ５０４−７Ｈ２０５ｍｇ、ＣｕＳ
Ｏ４・５Ｈ２００、５弘Ｍｇ ８０４ ・７Ｈ２０Ｑ２
Ｓ’、ＣａＣｌ２・２Ｈ２０３０ｍ９およびＦｅＣ６Ｈ
５０７・ＸＨ２Ｏ３０ｍ９を溶解し、ｐＨが６５に調整
された液５００就を１を容ミニ・ジャーに入れ１２０℃
で２０分間殺菌した後、メタノール ５１を無菌的に添
加し、これを培地とした。
Ｏ４１，４１、Ｎａ２ＨＰＯ４２，１？、、ＭｎＣｔ２
・４Ｈ２０５■、Ｚｎ５０４−７Ｈ２０５ｍｇ、ＣｕＳ
Ｏ４・５Ｈ２００、５弘Ｍｇ ８０４ ・７Ｈ２０Ｑ２
Ｓ’、ＣａＣｌ２・２Ｈ２０３０ｍ９およびＦｅＣ６Ｈ
５０７・ＸＨ２Ｏ３０ｍ９を溶解し、ｐＨが６５に調整
された液５００就を１を容ミニ・ジャーに入れ１２０℃
で２０分間殺菌した後、メタノール ５１を無菌的に添
加し、これを培地とした。
これに、前記と同様な培地を用いて３０℃で４８時間前
培養されたミコプラナ ルブラ ＮＣＩＢ １０４０
９の菌体を含む前培養液を前記の培地に３容量饅接種し
、培養期間中の培養液のｐＨが６５に維持されるように
アンモニア水を添加しながら、３０℃で通気撹拌培養を
行なった。
培養されたミコプラナ ルブラ ＮＣＩＢ １０４０
９の菌体を含む前培養液を前記の培地に３容量饅接種し
、培養期間中の培養液のｐＨが６５に維持されるように
アンモニア水を添加しながら、３０℃で通気撹拌培養を
行なった。
１２時間の増殖誘導期間の後、対数増殖期となり対数増
殖期では世代時間４時間で増殖し、培養開始４８時間後
に培養液中のメタノール濃度は０．００１ｗｔ％以下と
なった。
殖期では世代時間４時間で増殖し、培養開始４８時間後
に培養液中のメタノール濃度は０．００１ｗｔ％以下と
なった。
この培養液を遠心分離して菌体を分離回収し、こ０菌体
を１０５°Ｃで２４時間乾燥して、培養液１ｔあたり３
７１の乾燥菌体を得た。
を１０５°Ｃで２４時間乾燥して、培養液１ｔあたり３
７１の乾燥菌体を得た。
培養液と同量の水を含む回収槽に排ガニスを通じて培養
中に蒸散するメタノール０．６Ｐ（培養液１ｔあたり１
．２１に相当する）を回収した。
中に蒸散するメタノール０．６Ｐ（培養液１ｔあたり１
．２１に相当する）を回収した。
菌体収率は４２％であった。得られた菌体の粗蛋白含量
は約７８φであった。
は約７８φであった。
Claims (1)
- １ ミコプラナ属に属し、メタノールを資化しうる細菌
をメタノールを主たる炭素源とする培地に培養し、該培
養液から細菌の菌体を分離することを特徴とする細菌菌
体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19479181A JPS5858071B2 (ja) | 1981-12-03 | 1981-12-03 | 細菌菌体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19479181A JPS5858071B2 (ja) | 1981-12-03 | 1981-12-03 | 細菌菌体の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5898088A JPS5898088A (ja) | 1983-06-10 |
| JPS5858071B2 true JPS5858071B2 (ja) | 1983-12-23 |
Family
ID=16330314
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19479181A Expired JPS5858071B2 (ja) | 1981-12-03 | 1981-12-03 | 細菌菌体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5858071B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03107961U (ja) * | 1990-02-20 | 1991-11-06 |
-
1981
- 1981-12-03 JP JP19479181A patent/JPS5858071B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03107961U (ja) * | 1990-02-20 | 1991-11-06 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5898088A (ja) | 1983-06-10 |
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