SU1028237A3

SU1028237A3 - Способ получени гепарина

Info

Publication number: SU1028237A3
Application number: SU772531003A
Authority: SU
Inventors: Видик Ханс-Ерг
Original assignee: Шеринг Аг (Фирма)
Priority date: 1976-11-12
Filing date: 1977-10-19
Publication date: 1983-07-07
Also published as: NL179481B; IT1088965B; ATA806677A; SE7712732L; JPS5844082B2; ZA776753B; LU78488A1; IS2410A7; YU260677A; PL202036A1; NL179481C; GB1592806A; IL53254A0; AR214759A1; DK142059C; AU515671B2; IL53254A; FI773285A; CS208735B2; FR2370757A1

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАРИНА путем обработки животного сырь раствором поваренной соли с последующим его выделением известным путем,о т л и чающийс тем, что, с целью повышени чистоггы целевого продукта и упрощени способа, в качестве сырь используют освобожденные от слизи кишки.и обработку провод т твердой поваре;нной солью нли ее раст вором в нейтральной, среде при 1625 С .

Description

1§

Изобретение относитс к медицине кой промышленности и касаетс производства гепарина, который используетс в медицине в качестве антикоагулирующего средства,

Известен способ получени герарина путем обработки животного сырь раствором поваренной соли с последующим его выделением известным путем { 1.

Однако известный способ трудоемкий , длительный и не обеспечивает высокой чистоты целевого продукта .

Цель изобретени - повышение чистоты целевого продукта и упрощение способа.

Цель достигаетс тем, что при осуществлении способа получени гепарина путем обработки животного сырь раствором поваренной соли с последующим его выделением известным рутем, в качестве сырь используют освобожденные от слизи кишки и обработку провод т твердой поваренной солью -или еераствором в нейтральной среде при 1б-25с.

С целью консервировани и обезвоживани кишок животных особенно пригодны растворы повас.Ш1Ной соли с содержанием ее от 0,5 МГ до количества молей насыщени предпочтительно от 3 моль до количества молей насыщени . Под количеством молей насыщени подразумеваетс количество молей, которое содержит концентрированный водный раствор при комнатной температуре (резки на скотобойне) растворенной поваренной соли. Концентрированный водный расвор поваренной соли вл етс примерно 26,4%-ным его получают путём посыпани кишок животных поваренной солью.

Кишки животных после удалени слизи обрабатывают от 2 ч до 3 дней растворами поваренной соли. В большинстве случаев обработка кишок животных завершаетс уже через 3-24 ч После удалени консервированных и обезвоженных кишок животных из раствора поваренной соли получаю кишечный рассол, обладающий высоким .содержанием гепарина.

,Пример. 1. В 1500-литровой мешалке перемешивают в течение получаса при комнатной температуре 600 л рассола с 600 л метанола. Затем продолжают перемешивание еще полчаса и оставл ют на 1 ч. Затем декантируют верхнюю жидкость во второй сосуд и дают выпасть осадку соли. Полученную суспензию оставл ют на 2 дн . После этого снова декантируют, верхнюю жидкость выб-расывают и осадок отдел ют центрифугированией После сушки в вакууме получают 1,68 кг продукта, имею:

щего активность 11 USP-ед/мг. Он содержит еще около 60% поваренной соли.

Пример 2. 3л рассола под-кисл ют при перемешивании уксусной кислотой до рН 3,1-3,2 (около 50 мл Через несколько часов декантируют и остаток центрифугируют. Осадок выбрасывают и очищенные растворы нейтрализуют едким натрием и затем медленно при перемешивании смешивают с выпавшей поваренной солью. Эту суспензию оставл ют на несколько часов, декантируют верхнюю жидкость и центрифугируют- осадок. Осадок высушивают в вакууме и получают 3,76 г продукта с активностью 23 USP-ед/мг.

Пример 3.3л рассола разбавл ют 14 л воды. Затем добавл ют 50 г кизельгура и раствор 7 г безетониум хлорида в 100 мл воды. Через несколько часов жидкость декантируют и остаток отсасывают. После промывки водой еще влажный осадок экстрагируют три раза 200 мл 2 М раствора поваренной соли. Объединенные экстракты осаж,цают 2 об.ч. метанола. Выделенный и высушенный отаток весит 560 мг и имеет активность 163 иЗР-ед/мг.

Пример 4. 3л рассола довод т до рН 3,1-3,2 добавлением уксусной кислоты при перемешивании. Через несколько часов раствор декантируют и остаток центрифугируют. Объединенные растворы разбавл ют водой до 15,5 л и добавл ют 40 г кизельгура и 7 г бензентониум хлорида . Через несколько часов осадок ; выдел ют как в примере 3 и перера: батывают далее. Получают 796 мл проI дукта с активностью 105 :иЗР ед/мг.

П р и м е р 5. 3 -л рассола разбавл ют 13 л воды. Затем раствор

: подкисл ют уКСуСНОЙ КИСЛОТОЙ ДО

рН 3,2 (около 50 мл). Через несколько часов выдел етс осадок, который после декантации прозрачной жидкости центрифугируют,, После сушки получают 16,6 г неочищенного гепарина с активностью 5,5 и5Р--ед/мг.

Пример 6. 10 л рассола разбавл ют 50 л воды. Егютвор пропускают с помвщью Hacocci через фильтр в виде ионообменной колонки диаметром 26 и длиной 380 мм (около 3 л/ч). Примен ют ионообменную микропористую средней основности в хлорированной форме (леватит СА 9249). Могут также прцМен тьс другие анионообменные смолы , например смола Довекс 1-Х-1.

Затем смолу удал ют из колонки, промывают 2 раза 500 мл 0,9 М раствора поваренной соли и зшюируют 400 мл 2 М раствора поваренной соли 5 ч при и перемешивании. Этот раствор осаждают 1,5 ч объема метанола. Выделенный и высушенный осадок весит 1,5 г и имеет активность 152 USP-ед/мг. Пример 7. Аликвоту неочи щенного гепарина из примера 1,,соо ветствующей активностью 425 OOUSP|ей/мг или 38,65 г, экстрагируют 3 раза 200 мл 2 М раствора поварен ной соли, причем каждый раз t дово д т до 60с. Объединенные экстракты разбавл ют водой до содержани в растворе хлорионов 0,9 моль/л. Затем добавл ют 200 мл анионообменной смолы леватит СА 9249 в хлорированной форме и перемшпивают 1 ч. Смолу отсасывают и промывают 200 мл 0,9 М раствора повдренной соли. Пос ле этого ионообменную смолу элюиру ют 5 ч 2 М раствором поваренной соли при , отсасывают и промывают 2 М раствором поваренной соли. Элюированный раствор объедин ют с промывным раствором и осаждают 1,5 объемом метанола. Осадок центрифугируют , сначала промывают 50 м водного метанола (1:1,5 по объему) и получают 1,91 г геиарината натри с активностью 102 USP-ед/мг. Пример 8. 15 г полученно го согласно примеру 7 гепарината на ри с активностью 200 ИЗР-ед/мг раствор ют в 200 мл 2 М раствора пова;ренной соли. Раствор отсасывают на нутче и остаток сначала промыва ют 30 мл 2м раствора поваренной с ли и затем 250 мл полностью обессо ленной воды. Объединенные растворы полностью обессоленной водой довод т до мол рное ти 0,9 (по хлорид .|и6ну).. Затем аналогично примеру 7 очистку повтор ют с 1л леватита СА 9249. Объединенный элюат и промывной раствор перерабатывают как указано После промывки и сушки осадка получают 11,1 г гепарината натри с активностью 254 USP-ед/мг. Пример 9. 600 л рассола обрабатывают 600 л метанола в реакторе с мешалкой вместимостью 1500 л при перемешивании при комнат ной температуре в течение получаса Перемешивают еще в течение получаса , после чего смесь выдерживают примерно 1ч. Декантируют верхний мутный слой во вторую емкость и выпавший солевойостаток сливают обратно. Полученную суспензию выдерживают два дн . Затем ее снова декантируют, верхний отстой отбрасывают и остаток отдел ют центрифуги эованием. После сушки под разрежением полу чают 1,44 М кг продукта, обладающего активностью около 10 iIJSP-ед/мг Продукт еще содержит.примерно 45% поваренной соли. Лликвотное количество полученного таким образом неочищенного гепарина fcooTBCTCTBeHно ойоло 425000 lUSP-едили 42,5 г) трижды экстрагируют, каждый раз примен по 200 мл 2 М раствора поваренной соли, причем по мере надобности перемешивают 1 ч, при . Объединенные экстракты разбавл ют водой до тех пор, пока раствор не будет содержать около 0.,9 моль/л ионов хлорида. Затем прибавл ют 200 мл анионообменной cifcjttiLe wo-ti4 СА 9249) в форме хлорида и перемешивают 1,4. Затем отфильтровывают под разрежением и промывают примерно 200 мл 0,9 М раствора поваренной соли. Ионообменную смолу затем перемешивают 5 ч с 2 М раствором поваренной соли при 40С, отфильтровывают под разрежением и промывают 2 М раствором поваренной соли. Вымываемый раствор объедин ют с промывочной водой и высаждают 1,5-кратным объеме метанола. Остаток отдел ют «на центрифуге, сначала промывают примерно 50 мл воды - метанола Cl+lf5 об.чг), затем примерно 50 МП метанола и высушивают . . Получают 198 г Na-гепарината с 19505р-ед/мг, 15,5 г гепарината натри 200 ед.USP/мг), полученное го указанным способом, раствор ют , в 200 мл 2 М раствора поваренной соли. Раствор отсасывают через нутч-фильтр и остаток промывают сначала 300 мл 2 М раствора поваренной соли, затем примерно 250 мл полностью деминерализованной воды до мол рности хлорид-иона . 0,9. Повтор ют очистку действием 1 л lewatit СА 9249; сОгласно описанному. . Объединенные вымываемый и промы врчный раствор обрабатывак)Т соглас-но описанному. После промывюл и сушки осадок содержит 11,2 г гепарината натри , обладающего активностью 251 USP-ед/мг. Пример 10. 30 л рассола разбавл ют 120 л воды до мол рности хлорида около 0,85 М, затем подкисл ют уксусной кислотой (около 50 мл) до рН 3,2. Через несколько часов выпадает остаток, который отдел ют центрифугированием после декантации прозрачного верхнего отсто . После сушки получают 111 г- неочищенного гепарина активностью 6,5 УЗР-ед/мг. Аликвотное количество полученного таким образом неочищенного гепарина (соответственно около 425000 jliSP- ед или 65,5 г) очищают сначала аналогично примеру 1. . После Первой стадии очистки через ионообменную смолу получают 196г гепарината натри с 198 ед USP/мг. 15 г гепарината натри , полученного описанным способом, активностью около 200 ед OSP/мг раствор ют в 200 мл 2 М раствора хлорида кальци . Раствор отдел ют фильтрацией через нутч-фильтр и остаток промывают сначала 30 мл 2 н. раствора хлористого кальци , затем примерно 250 мл полностью деминерализованной воды. Объединенные растворы промывают полностью деминирализованной воды до мол рности хлорида 0,9. Согласно описанному перемешивают с 1 л Lewatit СЛ 9249. Вымываемый и промывочный растворы обр батывают вместо раствора поваренной соли раствором 2 н. СаСЕ Объединенные вымываемый И промывочный растворы обрабатывают соглас но описанному. После промывки и сушки осадка получают 10,7 г гепарината кальци с активностью 260 USP-ед/мг, Предложенный способ позвол ет увеличить чистоту целевого продукта , получаемый гепарин обладает высокой активностью (250-290 IJSPед/мг ) по сравнению с известным способом (140-170 USP-ед/мг), а также упростить и сократить обработку животного сырь (при низких температурах продолжительность обработки 24 при повышенных до б ч) кроме того, после обработки животное сырье может быть пригодным дл использовани при производстве колбасных изделий.

Claims

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАРИНА · путем обработки животного сырья раствором поваренной соли с последующим его выделением известным путем,о т лича ю щ и ft с я тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта и упрощения способа, в качестве сырья используют освобожденные от слизи кишки.и обработку проводят твердой поваренной солью или ее раствором в нейтральной, среде при 1625*С.