SU473720A1 - Способ совместного получени протамин-сульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к области медицины .

Известен способ получени  протаминсульфата из молок лососевых рыб, заключающийс  в том, что молоки вар т, измельчают, обрабатывают ацетоном, экстрагируют серной кислотой и водой, экстракты объедин ют, нагревают до 80°С и очищают путем добавлени  активированного угл , затем раствор обессоливают при помощи ионообменных смол и ацетоном осаждают целевой продукт из элюата .

Известен также способ получени  дезоксирибонуклеиновой кислоты, заключающийс  п том, что молоки измельчают в присутствин этанола, удал ют спирт, к остатку прибавл ют холодную воду и кристаллический хлористый натрий, массу нагревают до 75-80°С, отфильтровывают осадок и выдел ют целевой продукт из фильтрата осаждением этанолом.

Предлагаемый способ позвол ет одновременно получить протаминсульфат и дезоксирибонуклеиновую кислоту. Это достигаетс  тем, что измельченные молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлор стого натри  и выдел ют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстракта известными приемами, а отработанные молоки экстрагируют серной кислотой и выдел ют протампнсульфат известными приемами.

Пример. Отделение РНК- 1 кг свежемороженных молок кеты с содержанием в них протаминсульфата 7,5% и ДНК 21% измельчают в м сорубке, загружают в экстрактор с

мешалкой, заливают 3 л 0,15 ЛГ раствора хлористого натри  и тщательно перемещивают в течение 10 мин при О-10°С.

Извлечение. Сливают декантацией и промывку провод т еще дважды. Гомогенат пропускают через проточную центрифугу и отдел ют РНК.

Получение ДНК. После отделени  РНК остаток перенос т в экстрактор, заливают 5 л 2М раствора хлористого натри  и перемешивают в течение 30 мин при той же температуре . К раствору добавл ют равный объем этанола (1:1) и центрифугируют. Осадок, содержапий ДНК, дл  очистки смещивают в соотношении 1 : 1 со смесью хлороформ-изоамиловы ; спирт (24: 1) и неремещивают в течение 15 мин при О-10С. Очистку ДНК провод т трижды. Смесь центрифугируют. Водную фазу обрабатывают этанолом в соотнощении 1:1 и осаждают Д1П. Дл  удалени  хлористого натри  ДНК трижды (по 500 мл) промывают 70%-нь1м раствором этанола, затем 500 мл 95%-ного этанола. Сущку ДНК ведут с ;есью спирт-эфир (1:1). ДНК осторох но перенос т иа эмалированный противень и су.

Ц:ат в сущильном щкафу при ЯО°С.

Выход целевого прод)кта от исходного сырого сырь  составл ет 11,3%.

Получение протаминсульфата. Остаток после отделени  ДНК центрифугированием обрабатывают 5%-ным pacTBOpOiM серной кислоты в соотношении 1 : 5 (вес : объем) и цри медленном перемешивании оставл ют на 30 мин. Затем раствор подают в центрифугу дл  отделени  кислых белков. Полученный раствор перенос т на друк-фильтр и протаминсульфат осаждают ацетоном в соотношении 1 : 3. Осадок сырца протаминсульфата очищают многократным растворением в гор чей воде, подщелоченной 25%-ным раствором аммиака до рН 8-9, и центрифугированием при 100 об/мин.

Очищенный раствор протаминсульфата смещивают с ацетоном в соотношении 1 : 2 и препарат отдел ют на друк-фильтре. Протаминсульфат сушат в сушильном шкафу при 30- 4b°C.

Выход протаминсульфата от исходного сырь  составл ет 4,6%.

Предмет изобретени 

Способ совместного получени  протаминсульфата и дезоксирибонуклеиновой кислоты, отличающийс  тем, что измельченные молоки, например, лососевых рыб экстрагируют раствором хлористого натри  и выдел ют дезоксирибонуклеиновую кислоту из экстракта известными приемами, а отработанные молоки экстрагируют серной кислотой и выдел ют протаминсульфат известными приемами.