CN105348151B - 章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法 - Google Patents
章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105348151B CN105348151B CN201510675775.3A CN201510675775A CN105348151B CN 105348151 B CN105348151 B CN 105348151B CN 201510675775 A CN201510675775 A CN 201510675775A CN 105348151 B CN105348151 B CN 105348151B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- taurine
- octopus
- internal organ
- degreasing
- extract solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 210
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 title claims abstract description 105
- 241000238413 Octopus Species 0.000 title claims abstract description 53
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 title claims abstract description 51
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000926 separation method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000746 purification Methods 0.000 title claims abstract description 19
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 57
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 45
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 25
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 13
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 claims description 11
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N hexane Substances CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 6
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 6
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 claims description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 6
- 239000004519 grease Substances 0.000 claims description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 238000005352 clarification Methods 0.000 claims description 2
- 239000002035 hexane extract Substances 0.000 claims description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 abstract description 12
- 239000002699 waste material Substances 0.000 abstract description 3
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 53
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 6
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 4
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 241000238366 Cephalopoda Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]ethanone Chemical compound C1CN(CC2=NNN=C21)CC(=O)N3CCN(CC3)C4=CN=C(N=C4)NCC5=CC(=CC=C5)OC(F)(F)F LDXJRKWFNNFDSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CCNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 AFCARXCZXQIEQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229940023032 activated charcoal Drugs 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004641 brain development Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005909 ethyl alcohol group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 239000008236 heating water Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000007830 nerve conduction Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法，包括以下步骤：在章鱼脱脂内脏中加入蒸馏水进行匀浆，调节pH至4‑5后水浴提取，所得的牛磺酸提取液进行除蛋白处理，再利用二氯甲烷进行萃取除杂，除杂后牛磺酸提取液用粉末活性炭进行吸附脱色，最后重结晶，得牛磺酸(针状晶体)。采用本发明的方法能使章鱼脱脂内脏充分发挥其利用价值，从而实现变废为宝。
Description
技术领域
本发明涉及一种章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法。
背景技术
牛磺酸是人体必需的一种氨基酸，它以游离的形式存在动物机体中，在牡蛎、章鱼、蛤蛎等海洋生物中含量尤为丰富。牛磺酸作为一种重要的生物活性物质，其生理作用主要表现为：(1)促进大脑发育、(2)增强视力、(3)调节神经传导、(4)促进吸收、消化脂肪，参与胆汁酸盐的代谢；(5)维持正常的心脏、肝脏、内分泌系统的功能等；已被广泛应用于食品添加剂、医药及洗涤剂等行业。近年来随着对牛磺酸生理作用认识的深入，对其需求日益增加。
牛磺酸的来源主要依靠化学合成，但其存在原料(溶剂)毒性大和环境污染严重等问题，且合成牛磺酸的生物活性远不如天然牛磺酸。因此，寻找安全的牛磺酸资源十分重要，从海洋生物中提取天然牛磺酸成为倍受关注和研究的热点。
2008年的《章鱼下脚料中牛磺酸的提取及其生理功能研究》对章鱼下脚料中牛磺酸的提取进行了系统的研究。结果表明，牛磺酸的最佳提取条件为：新鲜下脚料匀浆后加4倍水在100℃下提取1.5h。采用等电点沉淀分离法去除提取液中的可溶性蛋白质。最优分离纯化条件为：pH 5.0，以6ml/min流速1次上柱，用80℃去离子水以9ml/min洗脱，收集电导率下降到稳定的那部分洗脱液。最佳结晶条件为：洗脱液浓缩到原体积的3％后用3倍体积无水乙醇在4℃下结晶0.5h，重结晶脱色后可得到高纯度牛磺酸产品。
2012年公开的《从章鱼下脚料中提取牛磺酸工艺的研究》得出了从章鱼下脚料中提取牛磺酸的最佳工艺条件：提取温度80℃，乙醇体积分数为80％，料液比1：12，提取时间120min，提取3次，在该条件下，牛磺酸的提取率为0.928％。
200810065777.0的发明《一种章鱼下脚料中提取分离天然牛磺酸的方法》包括如下内容：
A)、原料前处理；B)、牛磺酸提取：将章鱼浆体进行加热并不断搅拌，使下脚料中牛磺酸溶解到水中，并将固液分离，上清液转入下一步骤，固体物料作为饲料原料处理；C)、将上清液进行蒸馏，使其为原体积的1/3，得到提取液；D)、调节提取液的pH值到提取液所含水溶性蛋白质的等电点，将提取液中蛋白质沉淀分离出来，得到牛磺酸提取液；具体为：D1：用盐酸调节提取液的pH值到4.0，静置使酸性蛋白质充分沉淀，然后离心后用滤布将 酸性蛋白质分离；D2、将分离出酸性蛋白质后的提取液用碱性溶液调节pH值到10，静置使碱性蛋白质充分沉淀，离心后用滤布将碱性蛋白质分离，得到牛磺酸；E)、阴阳离子交换树脂除盐分离纯化牛磺酸：采用离子交换吸附法将牛磺酸提取液分离为牛磺酸和氨基酸溶液，所产生的氨基酸溶液直接罐装制成营养品，牛磺酸转入下一步骤；F)、乙醇沉淀:树脂吸附的牛磺酸用脱盐水进行洗脱，收集所得的洗脱液加入无水乙醇，即得到牛磺酸悬浊液；G)、结晶与纯化：将牛磺酸悬浊液进行蒸馆，喷雾，干燥处理，回收乙醇，并得到高纯度棒状天然牛磺酸结晶体。
201310501525.9的发明《从鱿鱼内脏中提取天然牛磺酸的方法》包括以下步骤：(1)原料匀浆，将清洗过的鱿鱼内脏放入组织匀浆机中匀浆成糊状，得到匀浆液；(2)酶解，将匀浆液放入恒温锅中，加中性蛋白酶解；(3)收集上清液，过滤步骤(2)中产物，收集上清液，并将上清液浓缩至原体积的1/4，得到提取液；(4)沉淀蛋白，用盐酸调节提取液的pH值到4.0，静置使酸性蛋白质充分沉淀，然后离心后去除酸性蛋白质，然后将提取液用碱性溶液调节pH值到10，静置使碱性蛋白质充分沉淀，离心后去除碱性蛋白质分离，得到牛磺酸提取液；(5)过阳离子交换树脂分离纯化牛磺酸，调节牛磺酸提取液pH值到5，采用强阳离子交换树脂，收集牛磺酸洗脱液；(6)结晶与纯化，牛磺酸洗脱液经浓缩后加入浓缩液体积3～5倍无水乙醇，得到牛磺酸混浊液，进行蒸馏，喷雾干燥后得到牛磺酸结晶体。
201310283654.5《一种从鲍鱼内脏中提取天然牛磺酸的简易方法》包括以下步骤：原料预处理：往鲍鱼内脏中加入2倍重量体积比的水，于高温下蒸煮，收集汤汁；活性炭处理：所述汤汁在室温下经过活性炭柱得到流出液，用于牛磺酸制备；乙醇除杂：向所述流出液中添加乙醇，离心得到沉淀物和上清液，优选添加浓度为95％；以上的乙醇至终浓度为60～80％(v/v)；将上清液浓缩得到浓缩液，往所述浓缩液中加入4～6倍体积无水乙醇后置于4℃静置12h以上，离心取沉淀；往沉淀中加入4～5倍重量体积比的70-80℃热水，溶解后加入活性炭搅拌，抽滤除去活性炭，得到滤液；结晶：往所述滤液中加入3倍体积的无水乙醇后立即抽滤除杂，滤液置于4℃静置结晶24h以上,经抽滤后将固形物烘干即得牛磺酸晶体。
但是目前尚没有利用章鱼脱脂内脏提取分离纯化牛磺酸的方法，原因是：章鱼脱脂内脏是来自章鱼内脏经用有机溶剂等分离提取其中脂类物质后的剩余部分，由于脂类是章鱼内脏中含量最丰富的部分，因此，提取后的剩余部分基质完全不同于可直接作为提取原料的章鱼内脏。章鱼脱脂内脏，目前基本没有什么利用价值，一般只能作废弃处理或者通过干燥、粉碎等再加工成低廉的动物饲料。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法，包括以下步骤：
1)、预处理：
章鱼脱脂内脏与蒸馏水按照1g:5～10ml的用量比(w/v)置于匀浆器中进行匀浆；
2)、提取：
将步骤1)所得的匀浆液调节pH至4-5(利用盐酸溶液进行调节)，置于60～80℃水浴中提取1.8～2.2h，离心除渣，所收集的离心液为牛磺酸提取液；
3)、除蛋白：
将牛磺酸提取液置40～50℃水浴中，减压浓缩至1/3-1/4体积后调节pH至2(利用盐酸溶液进行调节)，从而使酸性蛋白质沉淀；离心去酸性蛋白质后，再调节pH至11(利用NaOH溶液进行调节)，从而使碱性蛋白质沉淀；离心去碱性蛋白质后，所收集的离心液为除蛋白后的牛磺酸提取液；
4)、纯化：
除蛋白后的牛磺酸提取液利用二氯甲烷进行萃取除杂；
5)、脱色：
将步骤4)所得的除杂后牛磺酸提取液用比表面积≥1000m2/g的粉末活性炭搅拌吸附脱色，得澄清牛磺酸提取液；
6)、重结晶：
将步骤5)所得的澄清液(澄清牛磺酸提取液)调pH至4-5(利用盐酸溶液进行调节)，40～50℃水浴中，减压浓缩至1/3-1/4体积，加入为所得浓缩液3-4倍体积的无水乙醇，置于3～5℃，直至牛磺酸(针状晶体)析出。
备注说明：上述盐酸溶液为水与质量浓度为37％的浓盐酸按照1:1的体积比混合而得；上述NaOH溶液可选用5mol/L的NaOH溶液。
作为本发明的章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法的改进：
所述步骤4)的萃取除杂为：在除蛋白后的牛磺酸提取液中按照1:1的体积比加入二氯甲烷，均匀搅拌并静置30～60分钟(较佳为45分钟)后，去除二氯甲烷层(位于上层)。
备注说明：上述萃取除杂一般重复2～4次。
作为本发明的章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法的进一步改进：所述步骤6)置于3～5℃的时间为10～14小时。
作为本发明的章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法的进一步改进：所述步骤5)中：除杂后牛磺酸提取液与粉末活性炭的用量比为：10ml牛磺酸提取液配用0.5～0.6g粉末活性炭；吸附脱色的时间为1～1.5小时。
作为本发明的章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法的进一步改进：
所述步骤2)和步骤3)的离心均为：4000～6000rpm离心10～20min(例如为5000rpm离心15min)。
作为本发明的章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法的进一步改进：所述步骤3)和步骤6)中的减压浓缩均为：于40～50℃(较佳为45℃)水浴中，-0.05MPa到-0.08MPa进行减压浓缩。
作为本发明的章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法的进一步改进：
所述步骤2)为置于70℃水浴中提取2.0h；
所述步骤1)为章鱼脱脂内脏与蒸馏水的用量比为1g:7ml。
备注说明：章鱼内脏经如下处理后获得章鱼脱脂内脏：新鲜章鱼内脏用水清洗后加少量水捣碎，用物料：正己烷＝1:8(重量/体积，即，1g/8ml)常温下搅拌提取3小时，共3次，合并正己烷提取液，分离去除水层，浓缩回收正己烷得章鱼内脏油脂；分离提取油脂后的章鱼内脏即为章鱼脱脂内脏。一般而言，每2.5g的章鱼内脏经上述处理后得到1g的章鱼脱脂内脏。该内容属于公知技术。
本发明具备如下技术优势：
1、本发明的经过强酸性和强碱性条件去除蛋白质后的提取液巧妙地用二氯甲烷进行萃取除杂，不需要用繁复的柱分离或反复的无水乙醇处理，既节约时间提高提取率，又减少有机溶剂使用，降低成本减少污染。
2、本发明采用了独一无二的二氯甲烷萃取除杂技术，使后续的粉末活性炭搅拌吸附脱色和重结晶容易，并能一次性获得极高纯度的产品(一次重结晶产品的纯度就接近99％)和较高的提取率。
3、本发明采用了比较温和的70℃水浴加热提取方法。本发明在大量实验的基础上得知：由于章鱼脱脂内脏是章鱼内脏由大量有机溶剂等充分处理后所得，因此物质结构和存在形态已经发生了变化，因此无需酶解和高温蒸煮。
如果按照常规技术于高温(100℃)进行提取，不但不能提高收率，反而会使章鱼脱脂内脏的物质结构被破坏，导致牛磺酸提取率和纯度大大降低。
4、本发明采用了更强酸性和更强碱性条件去除蛋白质，为后续工艺去除杂质和纯化提供 了很好的物料环境。
5、变废为宝，使章鱼脱脂内脏充分发挥其利用价值。
具体实施方式
实施例1、一种章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法，依次进行以下步骤：
1)、预处理：
章鱼脱脂内脏与蒸馏水按照1g:7ml的用量比置于匀浆器中组织匀浆；
2)、提取：
将步骤1)所得的匀浆液用盐酸溶液调pH至4，置于70℃水浴中提取2.0h，离心(5000rpm，15min)除渣，所收集的离心液为牛磺酸提取液；
备注说明：所述盐酸溶液为水与质量浓度为37％的浓盐酸按照1:1的体积比混合而得；以下步骤同。
3)、除蛋白：
将牛磺酸提取液浓缩置45℃水浴中，-0.05MPa到-0.08MPa减压浓缩下至1/3体积后用盐酸溶液调节提取液pH至2，从而使致酸性蛋白质沉淀，5000rpm离心15min去酸性蛋白质，再用5mol/L的NaOH调节提取液pH至11，致碱性蛋白质沉淀，5000rpm离心15min去碱性蛋白质，所收集的离心液为除蛋白后的牛磺酸提取液；
4)、纯化：
在除蛋白后的牛磺酸提取液中加1:1(体积比)的二氯甲烷，进行萃取除杂，一般重复3-4次；
所述萃取除杂具体为：在除蛋白后的牛磺酸提取液中按照1:1的体积比加入二氯甲烷，均匀搅拌并静置45分钟后，去除位于上层的二氯甲烷层；上述萃取除杂再重复3-4次；
5)、脱色：
将步骤4)所得的除杂后的牛磺酸提取液用比表面积≥1000m2/g的粉末活性炭搅拌吸附脱色1小时至澄清；
所述牛磺酸提取液与粉末活性炭的用量比为：10ml牛磺酸提取液加0.5g粉末活性炭。
6)、重结晶：
将步骤5)所得的澄清液用盐酸溶液调pH至4，45℃水浴中，-0.05MPa到-0.08MPa减压浓缩下至1/3-1/4体积，加入为所得浓缩液3-4体积倍量的无水乙醇，置于4℃冰箱中过夜(约12小时)，至牛磺酸针状晶体析出，得率为0.87％，牛磺酸纯度经HPLC(高效液相色谱法)分析为98.9％。
对比例1-1、将实施例1步骤3)中的“调节提取液pH至2，从而使致酸性蛋白质沉淀，”改成“调节提取液pH至4，从而使致酸性蛋白质沉淀，”；其余等同于实施例1。
牛磺酸(以针状晶体析出)的得率为0.79％，牛磺酸纯度经HPLC分析为97.2％。
对比例1-2、将实施例1步骤3)中的“再用NaOH溶液调节pH至11，从而使碱性蛋白质沉淀，改成“再用NaOH溶液调节pH至10，从而使碱性蛋白质沉淀，”；其余等同于实施例1。
牛磺酸(以针状晶体析出)的得率为0.80％，牛磺酸纯度经HPLC分析为97.5％。
对比例2-1、取消步骤2)中的“将步骤1)所得的匀浆液用盐酸溶液调pH至4”，即，将步骤1)所得的匀浆液直接置于水浴提取；其余等同于实施例1。
牛磺酸(以针状晶体析出)的得率为0.76％，牛磺酸纯度经HPLC分析为95.0％。
对比例2-2、将实施例1步骤2)水浴的温度由70℃改成100℃，其余等同于实施例1。
牛磺酸(以针状晶体析出)的得率为0.45％，牛磺酸纯度经HPLC分析为57.8％。
对比例3-1、将步骤4)中萃取除杂中的二氯甲烷改成乙酸乙酯，用量不变；其余等同于实施例1。
牛磺酸(以针状晶体析出)的得率为0.77％，牛磺酸纯度经HPLC分析为95.6％。
对比例3-2、将步骤4)中萃取除杂中的二氯甲烷改成石油醚(沸程30-60℃)，用量不变；其余等同于实施例1。
牛磺酸(以针状晶体析出)的得率为0.58％，牛磺酸纯度经HPLC分析为92.3％。
对比例3-3、将步骤4)中萃取除杂中的二氯甲烷改成三氯甲烷(对人体毒性较大)，用量不变；其余等同于实施例1。注意：三氯甲烷层位于下层，牛磺酸提取液位于上层。
牛磺酸(以针状晶体析出)的得率为0.75％，牛磺酸纯度经HPLC分析为95.8％。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (4)
1.章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法，章鱼内脏经如下处理后获得章鱼脱脂内脏：新鲜章鱼内脏用水清洗后加水捣碎，按照物料：正己烷＝1g/8ml的料液比加入正己烷常温下搅拌提取3小时，共3次，合并正己烷提取液，分离去除水层，浓缩回收正己烷，得章鱼内脏油脂；分离提取油脂后的章鱼内脏为章鱼脱脂内脏；
其特征是包括以下步骤：
1)、预处理：
章鱼脱脂内脏与蒸馏水按照1g:7ml的用量比置于匀浆器中进行匀浆；
2)、提取：
将步骤1)所得的匀浆液调节pH至4-5，置于70℃水浴中提取2.0h，离心除渣，所收集的离心液为牛磺酸提取液；
3)、除蛋白：
将牛磺酸提取液置40～50℃水浴中，减压浓缩至1/3-1/4体积后调节pH至2，从而使酸性蛋白质沉淀；离心去酸性蛋白质后，再调节pH至11，从而使碱性蛋白质沉淀；离心去碱性蛋白质后，所收集的离心液为除蛋白后的牛磺酸提取液；
4)、纯化：
除蛋白后的牛磺酸提取液利用二氯甲烷进行萃取除杂；
所述萃取除杂为：在除蛋白后的牛磺酸提取液中按照1:1的体积比加入二氯甲烷，均匀搅拌并静置30～60分钟后，去除二氯甲烷层；
5)、脱色：
将步骤4)所得的除杂后牛磺酸提取液用比表面积≥1000m2/g的粉末活性炭搅拌吸附脱色，得澄清牛磺酸提取液；
除杂后牛磺酸提取液与粉末活性炭的用量比为：10ml牛磺酸提取液配用0.5～0.6g粉末活性炭；吸附脱色的时间为1～1.5小时；
6)、重结晶：
将步骤5)所得的澄清牛磺酸提取液调pH至4-5，40～50℃水浴中，减压浓缩至1/3-1/4体积，加入为所得浓缩液3-4倍体积的无水乙醇，置于3～5℃，直至牛磺酸析出。
2.根据权利要求1所述的章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法，其特征是：所述步骤6)置于3～5℃的时间为10～14小时。
3.根据权利要求2所述的章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法，其特征是：
所述步骤2)和步骤3)的离心均为：4000～6000rpm离心10～20min。
4.根据权利要求3所述的章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法，其特征是：所述步骤3)和步骤6)中的减压浓缩均为：于40～50℃水浴中，-0.05MPa到-0.08MPa进行减压浓缩。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510675775.3A CN105348151B (zh) | 2015-10-17 | 2015-10-17 | 章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510675775.3A CN105348151B (zh) | 2015-10-17 | 2015-10-17 | 章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105348151A CN105348151A (zh) | 2016-02-24 |
| CN105348151B true CN105348151B (zh) | 2017-12-12 |
Family
ID=55324238
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510675775.3A Expired - Fee Related CN105348151B (zh) | 2015-10-17 | 2015-10-17 | 章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105348151B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107604016B (zh) * | 2017-10-31 | 2021-05-28 | 荣成市日鑫水产有限公司 | 一种从章鱼内脏中提取牛磺酸的方法 |
| CN109574887A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-04-05 | 中港（福建）水产食品有限公司 | 一种从鲍鱼内脏中提取天然牛磺酸的方法 |
| CN109761861A (zh) * | 2018-12-29 | 2019-05-17 | 河北农业大学 | 一种从章鱼肝脏中提取牛磺酸的方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101525306A (zh) * | 2008-03-05 | 2009-09-09 | 深圳博广天兴食品有限公司 | 一种章鱼下脚料中提取分离天然牛磺酸的方法 |
-
2015
- 2015-10-17 CN CN201510675775.3A patent/CN105348151B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105348151A (zh) | 2016-02-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102351956B (zh) | 一种巴戟天多糖的提取方法 | |
| CN105348151B (zh) | 章鱼脱脂内脏中牛磺酸的提取分离纯化方法 | |
| CN101525306A (zh) | 一种章鱼下脚料中提取分离天然牛磺酸的方法 | |
| CN101961371A (zh) | 从甜味绞股蓝中提取分离人参皂苷、黄酮、多糖的方法 | |
| CN105732741B (zh) | 紫苏叶提取花色苷和熊果酸的方法 | |
| CN112266399B (zh) | 一种淫羊藿提取物的高纯度分离提取方法 | |
| CN101475620B (zh) | 高效节能的高纯度虫草素提取与生产方法 | |
| CN116606350B (zh) | 一种海参肽及其生产方法和应用 | |
| CN106119328A (zh) | 一种适合工业化生产的优质虾低聚肽粉制备方法 | |
| CN108159283A (zh) | 石斛叶片复合游离氨基酸的提取方法及用途 | |
| CN104404094A (zh) | 基于蛤利用酶转化法提取牛磺酸的方法 | |
| CN103012535B (zh) | 一种从蛋黄油中分离精制胆固醇的制备方法 | |
| CN104788509B (zh) | 一种从脱脂麦胚中提取制备高纯度棉子糖的工艺 | |
| CN104844676B (zh) | 一种从菠菜中提取蜕皮激素的方法 | |
| CN101289394B (zh) | 从葵粕中提取绿原酸、分离蛋白和蛋白小肽的工艺 | |
| CN1107065C (zh) | 从脱脂大豆粕中同时提取异黄酮、皂甙、低聚糖和蛋白的方法 | |
| CN102702038B (zh) | 一种从紫菜中提取天然牛磺酸的方法 | |
| CN105949088B (zh) | 从虾中提取天然牛磺酸的方法 | |
| CN1054788A (zh) | 一步浸取饼粕提取油脂和茶皂素工艺 | |
| CN114957118B (zh) | 盐酸青藤碱的提取方法 | |
| CN109384861A (zh) | 一种肝素钠废液提取硫酸皮肤素的方法 | |
| CN1234723C (zh) | 从海藻中提取岩藻甾醇的方法 | |
| CN100509757C (zh) | 15n-l-精氨酸的分离提纯方法 | |
| CN107602664A (zh) | 一种源于鮸鱼鱼鳔的降血脂五肽及其应用 | |
| CN102617727B (zh) | 一种胸腺法新化合物及其新制法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171212 Termination date: 20181017 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |