SU1144700A1 - Способ получени протаминов - Google Patents

Abstract

СПОШВ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТАМИНОВ, включающий очистку гонад рыб от жира з . и соединительной ткани, гомогенизацию , фильтрование, центрифугирование, промывку осадка раствором Рингера и повторную гомогенизацию с последующим вьщелением целевого продукта, отличающийс  тем, что, с целью сокращени  времени получени  и повышени  чистоты целевого продукта , повторную гомогенизацию провод т в натрий-ацетатном буфере рН 4,6, содержащем 1,4 М натри  хлорида, полученный гомогенизат обрабатывают ультразвуком в течение 2-3 мин и выдел ют целевой продукт сорбцией на катионообменнике. (О с

Description

| Изобретение относитс  к биохимии может быть использовано дл  получени  протаминов из гонад рыб. Известен способ получени  прота минов из молок рыб, заключающийс  в зкстракции сырь  водным раствором неорганических кислот, сорбции прот мина из полученного экстракта при рН 6-to ионитом в NH форме, представл ющем собой сополимер акрилони рита и дивинилбензола с содержанием последнего 15-40% и десорбции целевого продукта раствором неор.ганичес Кой кислоты 1 , Однако известный способ не обеспечивает получени  полностью обессо ленных белков. Известен также способ получени  (Протаминов, заключающийс  в том, что гонады рыб очищают от жира и со единительной ткани и гомогенизируют Б растворе Рингера (0,65% NaCl, 0,014% КС1, 0,012% CaClj, . КаНСОз, 0,001% NaHjPO), фильтруют через хлопковую ткань и центрифугируют . Осадок промывают раствором Рингера и повторно гомогенизируют в 2 М NaCl. К солевому раствору добавл ют насыщенный раствор сульфа та меди дл  осаждени  ДНК. К раствору добавл ют 1/8 М пикрата натри . Осадок пикрата протамина отдел ют центрифугированием и раствор ют в 67%-ном водном ацетоне, Протамин-сульфат осаждают этиловым спиртом после добавлени  нескольких капель 2 М серной кислоты. Дл  очистки от пикрат-иона протамин-сульфат переосаждают несколько раз из водно го раствора спиртом 2 , Такой способ позвол ет получить протамины в нативном виде, однако он трудоемок, требуетс  значительно врем  дл  получени  протаминов; дл  получени  пикрата натри  исполь зуетс  взрывоопасна:Я пикринова  кис лота. Кроме того, необходимость онистки от избытка пикрата натри  приводит к большому расходу спирта. Целью изобретени   вл етс  сокра щение времени и повьшение чистоты целевого продукта. Поставленна  цель достигаетс  тем, что согласно способу получени  протаминов, включающему очистку гонад рыб от жира и соединительной ткани, гомогенизацию, фильтрование, центрифугирование, промывку осадка раствором Рингера и повторную гомогенизацию с последующим выделением целевого пр одукта, повторную гомогенизацию провод т в натрий-ацетатном буфере рН 4,6, содержащем 1,4 М натри  хлорида, полученный гомогенизат обрабатывают ультразвуком в течение 2-3 мин и выдел ют целевой продукт сорбцией на катионообменнике. Пример 1. Гонады Acipenser Aellatus очищают от жира и соединительной ткани, 5 г полученного материала гомогенизируют в 30 мл раствора Рингеда и фильтруют через хлоп- ковую ткань. Осадок промывают раствором Рингера и центрифугируют при 8000 об/мин в течение 10 мин.. 100мг полученного нуклеопротамина (сухой вес) повторно гомогенизируют в 10 мл 0,05 М натрий-ацетатного буфера рН 4,6, содержащего 1,4 М NaCl. Полученный гомогенизат подвергают действию ультразвука на приборе УЗДН-1 с силой тока 0,4 А и рабочей частоте 22 кГц 2 мин и центрифугируют при 10000 об/мин в течение 20 мин. Нлдосадочную жидкость нанос т на колонку с катионообменником Амберлит ЦГ-50 (1,5x5,0 см), уравновешенную 0,05 М натрий-ацетатным буфером рН 4,6, содержащим 1,4 М NaCl. Колонку промывают последовательно исходным буфером, 0,2 н.уксусной кислотой и водой, Протамины злюируют 0,1 н. НС1 и рН быстро довод т до 5-6 с помощью анионообменника Амберлит 1РА-400 в ОН форме. Все операции провод т при . Полученные протамины высущивают лиофильйо. Аминокислотный состав вьщеленного протамина следующий, мольн.%: Arg51,8 His9,4 Lys14,1 Glx0,9 Thr2,4 Ser6,1 Pro0,9 Gly , 4,7 Ala6,6 Len2,8 Получилось 26 МГ хлоргидрата протамина . Пример 2, Осуществл ют то же, что в примере 1, при этсм врем  озвучивани  равн етс  1 мин, сила тока 0,6 А. Получилось 20 мг хлоргидрата протамина. Пример 3, Осуществл ют то же, что в примере 1, при этом врем  озвучивани  равн етс  3 ,мин, сила тока 0,8 А. Получилось 26 мг хлоргидрата протамина. Пример 4. Осуществл ют то же, что в примере 1, при этом врем  озвучивани  равн етс  5 мин, сила тока 0,8 А. Получилось 26 мг хлоргидрата протамина. Таким образом, при осуществлении предлагаемого способа упрощаетс  методика выделени  протаминов, что позвол ет исключить такие трудоемк операции как осаждение ДНК.сульфатом , меди осаждение протаминов пикра том натри , разрушение пикрата прот мина водным ацетоном, многократное 00. 4 переосаждение протаминов из водного раствора спиртом; полностью исключаетс  использование взрывоопасной пикриновой кислоты и спирта. Кроме того, сокращаетс  врем  получени  протаминов с 5-6 до 1,82 ,0 дней. Избирательное сорбирование на катионообменнике протаминов позвол ет полностью освободитьс  от балластньЬс белков и продуктов их деструкции и значительно повысить чистоту протаминов . Отсутствие операции переосаждени  протаминов ведет к интенсификации процесса.

Claims (1)

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТАМИНОВ, включающий очистку гонад рыб от жира и соединительной ткани, гомогенизацию, фильтрование, центрифугирование, промывку осадка раствором Рингера и повторную гомогенизацию с последующим выделением целевого продукта, отличающий ся тем, что, с целью сокращения времени получения и повышения чистоты целевого продукта, повторную гомогенизацию проводят в натрий-ацетатном буфере pH 4,6, содержащем 1,4 М натрия хлорида, полученный гомогенизат обрабатывают ультразвуком в течение 2-3 мин и выделяют целевой продукт сорбцией на катионообменнике.

   Г— (П)

   1 144700 2 генизацию с последующим выделением целевого продукта, повторную гомогенизацию проводят в натрий-ацетатном буфере pH 4,6, содержащем 1,4 М натрия хлорида, полученный гомогенизат обрабатывают ультразвуком в течение 2-3 мин и выделяют целевой продукт сорбцией на катионообменнике.

   Пример 1. Гонады Acipenser Aellatus очищают от жира и соединительной ткани, 5 г полученного материала гомогенизируют в 30 мл раствора Рингера и фильтруют через хлопковую ткань. Осадок промывают раствором Рингера и центрифугируют при 8000 об/мин в течение 10 мин. . 100мг полученного нуклеопротамина (сухой вес) повторно гомогенизируют в 10 мл 0,05 М натрий-ацетатного буфера pH 4,6, содержащего 1,4 М NaCl, Полученный гомогенизат подвергают действию ультразвука на приборе УЗДН-1 с силой тока 0,4 А и рабочей частоте 22 кГц 2 мин и центрифугируют при 10000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость наносят на колонку с катионообменником Амберлит ЦГ-50 (1,5x5,0 см), уравновешенную 0,05 М натрий-ацетатным буфером pH 4,6, содержащим 1,4 М NaCl. Колонку промывают последовательно исходным буфером, 0,2 н.уксусной кислотой и водой. Протамины элюируют 0,1 5-6 лит ции протамины высушивают лиофильПо.

   Аминокислотный состав выявленного протамина следующий, мольн.%: