CN107641161A - 一种肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺，该最佳制取工艺包括如下步骤：（1）原料处理；（2）酶解提取；（3）絮凝处理；（4）树脂吸附；（5）树脂洗涤；（6）肝素洗脱；（7）醇沉；（8）肝素钠粗品复溶；（9）超滤；（10）脱色；（11）氧化、醇沉和干燥。本发明的优点在于：本发明制取工艺能够水解完全、产品纯度高及收率高。

Description

一种肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺

技术领域

本发明属于药物制备领域，特别涉及一种肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺。

背景技术

肝素钠是一种粘多糖硫酸酯类抗凝血药，主要用于治疗急性梗塞，能够减轻不稳定型心绞痛、抗血栓形成及降血脂、降胆固醇的作用。1916年人们在肝脏中首次发现了肝素，接着，又发现该物质广泛的存在于动物肝、肺和小肠粘膜中。由于我国猪资源丰富，小肠粘膜价格低廉，因此，人们常以猪小肠为原料生产肝素钠。

目前，传统的肝素钠生产工艺包括原料处理、酶解提取、离子交换吸附和精制，该工艺存在水解不完全、产品纯度低和收率低等缺点。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种能够水解完全、产品纯度高

及收率高的肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案为：一种肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺，其创新点在于：所述最佳制取工艺包括如下步骤：

（1）原料处理：将新鲜的猪肠用清水仔细清洗去除内外污物和外部皮肤脂肪后，绞碎成肉糜状；

（2）酶解提取：向步骤（1）中得到的肉糜状中加入8～10倍的水，再加入2%～3%的胰蛋白酶，加30%～40%的NaOH调节pH至8～9之间，搅拌反应40～60min后，再加入3%～5%的NaCl，置于反应锅中，提取时间为10～16min，结束后，过滤，得到酶解液；

（3）絮凝处理：在上述酶解液中加入3%～5%的壳聚糖絮凝剂，以100～110r/min的速度搅拌混合液20～30min，室温静置4～6h后，送入离心机离心过滤，得到含有肝素钠的上清液；

（4）树脂吸附：采用强碱性阴离子交换树脂吸附上清液，树脂的用量占母液的质量比为0.8%～1.2%，搅拌吸附7～9h，然后收集强碱性阴离子交换树脂，弃去废液；

（5）树脂洗涤：先用自来水及温水洗涤，然后用4～6度的盐水溶液洗涤强碱性阴离子交换树脂30～40min，以去除树脂表面杂质；

（6）肝素洗脱：以3～4倍体积的5%～8%的氯化钠溶液洗脱上树脂，洗脱时间为3～4h，再用2倍体积的3%～5%的氯化钠溶液洗脱3～5h，将两次洗脱液合并；

（7）醇沉：将上述洗脱液，加入2～3倍体积的80%～90%的乙醇，搅拌20～30min，然后沉淀处理20～24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素钠粗品；

（8）肝素钠粗品复溶：将肝素钠粗品溶解于水中，加入体积比为1～3%的氯化钠溶液和0.5～0.9%的碱性蛋白酶，在30～40℃下搅拌2～3h，酶解后，采用高速离心机，以7000～8000r/min的转速，时间为16～20min离心除杂质，得到酶解液；

（9）超滤：将上述酶解液使用孔径为8000～10000分子量的中空纤维超滤膜，在0.1～0.2MPa的压力下进行膜过滤，除去蛋白质和菌丝体；

（10）脱色：将步骤（9）所得滤液加入3～4wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3～5h后，过滤除树脂，收集澄清的滤液，吸附色素的树脂用有机溶剂洗脱，再以清水漂洗下次备用；

（11）氧化、醇沉和干燥：将步骤（10）所得的脱色滤液，按照常规的氧化、醇沉和干燥步骤处理得到精制的肝素钠。

本发明的优点在于：本发明肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺，本发明对肝素钠酶解液进行絮凝处理，使酶解液中的蛋白质、核酸、菌丝体等大分子物质产生絮凝，沉淀下来，为后续分离过程奠定基础，降低后续除杂的难度；本发明中通过树脂洗涤后，再对肝素洗脱，进而减少了肝素钠中的杂质，使得洗脱液中的杂质也相对减少；肝素钠粗品复溶的预处理后，首先采用超滤膜除杂蛋白，再用大孔吸附树脂吸附色素，最后经过常规氧化、醇沉和干燥步骤得到精制的肝素钠，本发明提取的肝素钠效价值高于250IU/g，色素去除率达到95%以上，蛋白质去除率高于99%。

具体实施方式

下面的实施例可以使本专业的技术人员更全面地理解本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

实施例1

本实施例肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺，该最佳制取工艺包括如下步骤：

（1）原料处理：将新鲜的猪肠用清水仔细清洗去除内外污物和外部皮肤脂肪后，绞碎成肉糜状；

（2）酶解提取：向步骤（1）中得到的肉糜状中加入8倍的水，再加入2%的胰蛋白酶，加30%的NaOH调节pH至8之间，搅拌反应40min后，再加入3%的NaCl，置于反应锅中，提取时间为10min，结束后，过滤，得到酶解液；

（3）絮凝处理：在上述酶解液中加入3%的壳聚糖絮凝剂，以100r/min的速度搅拌混合液20min，室温静置4h后，送入离心机离心过滤，得到含有肝素钠的上清液；

（4）树脂吸附：采用强碱性阴离子交换树脂吸附上清液，树脂的用量占母液的质量比为0.8%，搅拌吸附7h，然后收集强碱性阴离子交换树脂，弃去废液；

（5）树脂洗涤：先用自来水及温水洗涤，然后用4度的盐水溶液洗涤强碱性阴离子交换树脂30min，以去除树脂表面杂质；

（6）肝素洗脱：以3倍体积的5%的氯化钠溶液洗脱上树脂，洗脱时间为3h，再用2倍体积的3%的氯化钠溶液洗脱3h，将两次洗脱液合并；

（7）醇沉：将上述洗脱液，加入2倍体积的80%的乙醇，搅拌20min，然后沉淀处理20h，收集沉淀物，干燥后得到肝素钠粗品；

（8）肝素钠粗品复溶：将肝素钠粗品溶解于水中，加入体积比为1%的氯化钠溶液和0.5%的碱性蛋白酶，在30℃下搅拌2h，酶解后，采用高速离心机，以7000r/min的转速，时间为16min离心除杂质，得到酶解液；

（9）超滤：将上述酶解液使用孔径为8000分子量的中空纤维超滤膜，在0.1MPa的压力下进行膜过滤，除去蛋白质和菌丝体；

（10）脱色：将步骤（9）所得滤液加入3wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3h后，过滤除树脂，收集澄清的滤液，吸附色素的树脂用有机溶剂洗脱，再以清水漂洗下次备用；

（11）氧化、醇沉和干燥：将步骤（10）所得的脱色滤液，按照常规的氧化、醇沉和干燥步骤处理得到精制的肝素钠。

实施例2

本实施例肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺，该最佳制取工艺包括如下步骤：

（1）原料处理：将新鲜的猪肠用清水仔细清洗去除内外污物和外部皮肤脂肪后，绞碎成肉糜状；

（2）酶解提取：向步骤（1）中得到的肉糜状中加入10倍的水，再加入3%的胰蛋白酶，加40%的NaOH调节pH至9之间，搅拌反应60min后，再加入5%的NaCl，置于反应锅中，提取时间为16min，结束后，过滤，得到酶解液；

（3）絮凝处理：在上述酶解液中加入5%的壳聚糖絮凝剂，以110r/min的速度搅拌混合液30min，室温静置6h后，送入离心机离心过滤，得到含有肝素钠的上清液；

（4）树脂吸附：采用强碱性阴离子交换树脂吸附上清液，树脂的用量占母液的质量比为1.2%，搅拌吸附9h，然后收集强碱性阴离子交换树脂，弃去废液；

（5）树脂洗涤：先用自来水及温水洗涤，然后用6度的盐水溶液洗涤强碱性阴离子交换树脂40min，以去除树脂表面杂质；

（6）肝素洗脱：以4倍体积的8%的氯化钠溶液洗脱上树脂，洗脱时间为4h，再用2倍体积的5%的氯化钠溶液洗脱5h，将两次洗脱液合并；

（7）醇沉：将上述洗脱液，加入3倍体积的90%的乙醇，搅拌30min，然后沉淀处理24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素钠粗品；

（8）肝素钠粗品复溶：将肝素钠粗品溶解于水中，加入体积比为3%的氯化钠溶液和0.9%的碱性蛋白酶，在40℃下搅拌3h，酶解后，采用高速离心机，以8000r/min的转速，时间为20min离心除杂质，得到酶解液；

（9）超滤：将上述酶解液使用孔径为10000分子量的中空纤维超滤膜，在0.2MPa的压力下进行膜过滤，除去蛋白质和菌丝体；

（10）脱色：将步骤（9）所得滤液加入4wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理5h后，过滤除树脂，收集澄清的滤液，吸附色素的树脂用有机溶剂洗脱，再以清水漂洗下次备用；

（11）氧化、醇沉和干燥：将步骤（10）所得的脱色滤液，按照常规的氧化、醇沉和干燥步骤处理得到精制的肝素钠。

实施例3

本实施例肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺，该最佳制取工艺包括如下步骤：

（1）原料处理：将新鲜的猪肠用清水仔细清洗去除内外污物和外部皮肤脂肪后，绞碎成肉糜状；

（2）酶解提取：向步骤（1）中得到的肉糜状中加入9倍的水，再加入2.5%的胰蛋白酶，加35%的NaOH调节pH至8.5之间，搅拌反应50min后，再加入4%的NaCl，置于反应锅中，提取时间为13min，结束后，过滤，得到酶解液；

（3）絮凝处理：在上述酶解液中加入4%的壳聚糖絮凝剂，以105r/min的速度搅拌混合液25min，室温静置5h后，送入离心机离心过滤，得到含有肝素钠的上清液；

（4）树脂吸附：采用强碱性阴离子交换树脂吸附上清液，树脂的用量占母液的质量比为1.0%，搅拌吸附8h，然后收集强碱性阴离子交换树脂，弃去废液；

（5）树脂洗涤：先用自来水及温水洗涤，然后用5度的盐水溶液洗涤强碱性阴离子交换树脂35min，以去除树脂表面杂质；

（6）肝素洗脱：以3.5倍体积的6%的氯化钠溶液洗脱上树脂，洗脱时间为3.5h，再用2倍体积的4%的氯化钠溶液洗脱4h，将两次洗脱液合并；

（7）醇沉：将上述洗脱液，加入2.5倍体积的85%的乙醇，搅拌25min，然后沉淀处理22h，收集沉淀物，干燥后得到肝素钠粗品；

（8）肝素钠粗品复溶：将肝素钠粗品溶解于水中，加入体积比为2%的氯化钠溶液和0.7%的碱性蛋白酶，在35℃下搅拌2.5h，酶解后，采用高速离心机，以7500r/min的转速，时间为18min离心除杂质，得到酶解液；

（9）超滤：将上述酶解液使用孔径为9000分子量的中空纤维超滤膜，在0.15MPa的压力下进行膜过滤，除去蛋白质和菌丝体；

（10）脱色：将步骤（9）所得滤液加入3.5wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理4h后，过滤除树脂，收集澄清的滤液，吸附色素的树脂用有机溶剂洗脱，再以清水漂洗下次备用；

（11）氧化、醇沉和干燥：将步骤（10）所得的脱色滤液，按照常规的氧化、醇沉和干燥步骤处理得到精制的肝素钠。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (1)

1.一种肠衣副产物肝素钠的最佳制取工艺，其特征在于：所述最佳制取工艺包括如下步骤：

（1）原料处理：将新鲜的猪肠用清水仔细清洗去除内外污物和外部皮肤脂肪后，绞碎成肉糜状；

（2）酶解提取：向步骤（1）中得到的肉糜状中加入8～10倍的水，再加入2%～3%的胰蛋白酶，加30%～40%的NaOH调节pH至8～9之间，搅拌反应40～60min后，再加入3%～5%的NaCl，置于反应锅中，提取时间为10～16min，结束后，过滤，得到酶解液；

（3）絮凝处理：在上述酶解液中加入3%～5%的壳聚糖絮凝剂，以100～110r/min的速度搅拌混合液20～30min，室温静置4～6h后，送入离心机离心过滤，得到含有肝素钠的上清液；

（4）树脂吸附：采用强碱性阴离子交换树脂吸附上清液，树脂的用量占母液的质量比为0.8%～1.2%，搅拌吸附7～9h，然后收集强碱性阴离子交换树脂，弃去废液；

（5）树脂洗涤：先用自来水及温水洗涤，然后用4～6度的盐水溶液洗涤强碱性阴离子交换树脂30～40min，以去除树脂表面杂质；

（6）肝素洗脱：以3～4倍体积的5%～8%的氯化钠溶液洗脱上树脂，洗脱时间为3～4h，再用2倍体积的3%～5%的氯化钠溶液洗脱3～5h，将两次洗脱液合并；

（7）醇沉：将上述洗脱液，加入2～3倍体积的80%～90%的乙醇，搅拌20～30min，然后沉淀处理20～24h，收集沉淀物，干燥后得到肝素钠粗品；

（8）肝素钠粗品复溶：将肝素钠粗品溶解于水中，加入体积比为1～3%的氯化钠溶液和0.5～0.9%的碱性蛋白酶，在30～40℃下搅拌2～3h，酶解后，采用高速离心机，以7000～8000r/min的转速，时间为16～20min离心除杂质，得到酶解液；

（9）超滤：将上述酶解液使用孔径为8000～10000分子量的中空纤维超滤膜，在0.1～0.2MPa的压力下进行膜过滤，除去蛋白质和菌丝体；

（10）脱色：将步骤（9）所得滤液加入3～4wt%的大孔吸附树脂，在常温下，搅拌混合液，脱色处理3～5h后，过滤除树脂，收集澄清的滤液，吸附色素的树脂用有机溶剂洗脱，再以清水漂洗下次备用；

（11）氧化、醇沉和干燥：将步骤（10）所得的脱色滤液，按照常规的氧化、醇沉和干燥步骤处理得到精制的肝素钠。