SK86994A3 - Amadori reactions compounds and products, process for their manufacture, and their use - Google Patents
Amadori reactions compounds and products, process for their manufacture, and their use Download PDFInfo
- Publication number
- SK86994A3 SK86994A3 SK869-94A SK86994A SK86994A3 SK 86994 A3 SK86994 A3 SK 86994A3 SK 86994 A SK86994 A SK 86994A SK 86994 A3 SK86994 A3 SK 86994A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- reaction
- group
- amino acid
- mixture
- daltons
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 30
- 238000003691 Amadori rearrangement reaction Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 15
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 13
- -1 treonine Chemical compound 0.000 claims abstract description 12
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 7
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229960002429 proline Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 claims abstract description 5
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims abstract description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 5
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 5
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960004295 valine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims abstract description 5
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims abstract description 4
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 4
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims abstract description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 4
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims abstract description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims abstract description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims abstract description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims abstract description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 6
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract 3
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims abstract 3
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims abstract 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims abstract 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 52
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 32
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 27
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 19
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 14
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 13
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 9
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 claims description 7
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 3
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 claims description 2
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 claims description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 2
- VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N (3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CC=O VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N 0.000 claims 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N alpha-D-ara-dHexp Natural products OCC1OC(O)CC(O)C1O PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 claims 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 230000004140 ketosis Effects 0.000 claims 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940081974 saccharin Drugs 0.000 claims 1
- 235000019204 saccharin Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000901 saccharin and its Na,K and Ca salt Substances 0.000 claims 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 abstract description 20
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 14
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 abstract description 8
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 abstract description 8
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 abstract description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 abstract description 5
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 abstract description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract description 4
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 abstract description 4
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 abstract description 4
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 abstract description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 abstract description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 abstract description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 abstract description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 abstract description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- SHZGCJCMOBCMKK-QYESYBIKSA-N 6-deoxyglucose Chemical compound C[C@@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-QYESYBIKSA-N 0.000 abstract 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 abstract 1
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 abstract 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 abstract 1
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 16
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 14
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 10
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 4
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 4
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 3
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 2
- CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl Chemical compound O[CH2] CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000000686 immunotropic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000000276 potassium ferrocyanide Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(2+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] XOGGUFAVLNCTRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000035859 Drug effect increased Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 235000014066 European mistletoe Nutrition 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010006464 Hemolysin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical class OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid Chemical compound OCC(CO)(CO)NCCS(O)(=O)=O JOCBASBOOFNAJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 235000012300 Rhipsalis cassutha Nutrition 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000007023 Thrombotic Thrombocytopenic Purpura Diseases 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000221012 Viscum Species 0.000 description 1
- 229930183665 actinomycin Natural products 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-rhamnose Chemical compound C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000007806 chemical reaction intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003228 hemolysin Substances 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002020 noncytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000263 nonmitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000006462 rearrangement reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000628 reference dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000007363 regulatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-M thiophene-2-carboxylate Chemical compound [O-]C(=O)C1=CC=CS1 QERYCTSHXKAMIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
- C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
- C07H7/02—Acyclic radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q5/00—Preparations for care of the hair
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Birds (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Description
Zlúčeniny a produkty Amadoriho reakcie, spôsob ich výroby a ich použitie
Tento vynález sa týka nových zlúčenín a produktov Ama-doriho reakcie, ich výroby a nového použitia týchto zlúčenín a produktov, u ktorých aspoň čiastočne došlo k Amadoriho prešmyku podľa nasledujúcej reakčnej schémy a/alebo k Maillardovej reakcii:
H OH H NH.R H
I / I / . I
| C ' 1 | C 1 | H | -C - NH. I | ||||||
| H - | C - 1 | □ H | H | -Ο- Ι | OH | Amadoriho | 1 c - 0 1 | ||
| HO - | c - 1 1 | H | + H2N-R | — >0H | -Ο- Ι | H | prešmyk | HO | - c - l-l 1 |
| H - | c - | □ H | H | - C - | □H | H | - C - OH | ||
| H | 1 C | . 0 | H | 1 - C | 0 1 | H | 1 - C - OH |
CHaOH CH2OH CH2OH
Sú
Produkty Amadoriho reakcie sú známe; sú to reakčné pro peptidu so sacharidom, oligosacharidom alebo polysacharidom, u ktorých došlo k Amadoriho prešmyku (J.Biol.Soc
215,
1955, Henri Borsook vo vode rozpustný glyktorý sa izoluje z e aminokyseliny a.sacharidu, semien Avena sativa. Ďalej EP-A—406087 popisuje vo vode rozpustné komplexy polysacharidov s glykopeptidmi, ktoré sú získané z bunkovej steny grampozitívnej baktérie,
1985, 260/9 tvrdí, že sa použila
NMR-spektroskopia na charakterizáciu produktov Amadoriho re akcie, vytvorených reakciou glukózy s voľnými aminoskupinami proteinu.
·< Tento vynález teraz popisuje špecifické nové zlúčeniny ji získané Amadoriho prešmykom, ako sú popísané v nároku 1. Vý~
hodné uskutočn.enia a zlepšenia sú popísané v nárokoch 2 až 4. Tieto zlúčeniny redukujú ferikyanid draselný, čo je testovacia reakcia pre biologicky aktívne látky vznikajúce pri reakcii sacharidu a aminokyseliny.
Vynález sa ďalej týka nového použitia takýchto zlúčenín a súčasne nového použitia produktov Amadoriho reakcie sacharidov a aminokyselín vo všeobecnosti, ako je popísané v nárokoch 11 až 17. V minulosti doteraz nikto netestoval rôzne stupne čistenia extraktu z produktu Amadoriho reakcie (aby sme sa zbavili balastných látok a nečistôt) na biologickú aktivitu.
Sú známe imunostimulačné drogy z prírodných zdrojov, ako sú extrakty z imela bieleho, z rašeliny atď., s nevýhodou potreby drahého spracovania veľkých množstiev suroviny, aby sme získali pár gramov aktívnej látky; nekontrolovateľnými nečistotami, ktoré by mohli viesť k toxicite a vedľajším účinkom, a preto ďalej k problémom pri podávaní pri praktickom používaní v dôsledku zložitej povahy a ťažko reprodukovateľného zloženia.
Porovnateľné produkty alebo zmesi produktov z umelých zdrojov, ako sú interferón alebo iné genetickoinžinierske metódy, sú dokonca ešte drahšie. Naviac, molekuly ľudského interferónu sú často príliš veľké na to, aby prenikli cez stenu ľudskej bunky, takže len zlomok podanej dávky sa stane efektívne aktívnym. Genetickoinžinierske produkty majú obyčajne tiež vedľajšie účinky a niektoré z nich sú dokonca toxické. Naviac, niektoré z nich z doteraz neznámych dôvodov pôsobia účinne v jeden deň, ale nie v nasledujúci deň.
S prekvapením sa teraz zistilo, že takmer žiadny jednoduchý komplex aminokyselina/sacharid, v ktorom aspoň čiastočne došlo k Amadoriho prešmyku, nevykazuje žiadnu z vyššie uvedených nevýhod, ale naopak, má prekvapujúco vysokú imunobiologickú aktivitu. Možno ich preto použiť vo farmaceutických formuláciách a v kozmetike. Tieto malé molekuly ľahko prenikajú cez stenu bunky a pôsobia prakticky ako živiny. Spôsobujú tvorbu prírodného interferónu a iných cytokínov,. vrátane nádorového nekrózového faktora. Dokonca tri dni po podaní stále vykazujú stimulačný účinok na biologickú aktivitu. Tento účinok sa zvyšuje so zväčšujúcou sa úplnosťou
Amadoriho prešmyku a opäť sa znižuje s narastajúcim rozkla dom komplexu.
Namiesto monosacharidov možno tiež použiť - s výhodou s malou molekulovou hmotnosťou, najmä menej než 1000 dalto nov - polysacharidy, napríklad dextrán, ktorý reaguje podobne. Polysacharidy vykazujú biologickú aktivitu a môžu si zachovať časť tejto aktivity po premene na oligosacharidy.
Doposiaľ bolo veľmi málo známe o biologickej aktivite týchto zlúčenín. Teraz sa zistilo, že kombinácie týchto zlúčenín v styku s ľudskými leukocytmi vytvárajú interferón a iné cytokíny. Toto sa nazýva polyklonálnou aktiváciou bun i e k .
Je možné testovať zlúčenín a určiť ich látky vznikajúce pod biologickú laktivitu v vplyvom týchto med z i n á rodn ý c h j ednotkách, relevantných pre špecifické cytokíny. Tieto zlú čeniny majú mimoriadne vysokú biologickú aktivitu v rozsahu koncentrácií čistej látky od 1 do 100 pg/ml. V molekule je špecifická povaha aminokyseliny dôležitejšia než povaha sacharidovej časti molekuly.
Reakčné produkty kyseliny L-aspartovej s glukózou alebo galaktózou - po prebehnutí Amadoriho prešmyku - v styku s ľudskými leukocytmi po 20-hodinovej inkubácii v médiu tkanivovej kultúry pri 37 °C a v atmosfére 5 / C02 vytvoria 30 · 1000 antivírusových jednotiek interferónu. Interferón sa meria pri bioteste s použitím ľudských rakovinových buniek.
Pod vplyvom týchto zlúčenín môžu vznikať zlúčeniny spôsobujúce nekrózu nádorov.
Produkty umožňujúce takéto neočakávané použitie majú všeobecný vzorec
R1'- NH - R2' kde
Ri' reprezentuje l-amino-l-deoxy-2~ketózový radikál, odvodený zo skupiny monosacharidov, oligo- a - s výhodou s malou molekulovou hmotnosťou, predovšetkým menej než 1000 daltonov - polysacharidov, a
Ro' reprezentuje aminokyselinu alebo - s výhodou s malou molekulovou hmotnosťou, predovšetkým menej než 1000 daltonov - peptidový radikál.
Teda skupina biologicky aktívnych zlúče'nín môže pokrý4 v a ť alebo špecifické zlúčeniny po Amadoriho prešmyku popísané vyššie, alebo N-substituované deriváty množstva rôznych z 1 ú č: e n í n a m i n o k y s e 1 í n a j e? d n é h o m o n o s a c h a r i cl m , o 1 i g o - a 1 e b o ..... s v ý h o dou s mal ou mole k u 1 ov ou hmo tn os ťou, p red o v še t k ý m menej než 1000 daltonov - polysacharidu, alebo N-subs ti tetované deriváty jednej zlúčeniny aminokyseliny a viacerých mono.....
sacharidov, oligo- a/alebo takých polysacharidov, alebo ľubovoľnú kombináciu takých derivátov, z ktorých každý má do.....
statočnú biologickú aktivitu.
R'i ' vo vyššie uvedenom vzorci môže byť s výhodou radikál vybraný z D-formy monosacharidov, najmä (ale nie výlučne) z D.....formy glukózy, xylózy, ga laktózy, ramnózy, fruktózy, m a n ó z y , ó.....d e o y g 1 u k ó z y , g 1 u k o z a m í n u a g a 1 a k t o z a m:(n u 5 R.·,? ' môže byť radikál vybraný z L.-formy zlúčenín aminokyselín·, ako sú serín, glycín, histidín, /arginín, glutamín, asparagin, alanín, kyselina ers P'äT'tcÄrá, kyselina glutámová, fenylaianín, treonín, cysteín, cystín, metionín, hydroxypro1 in, tryptofán, prolín, tyrozín, valín, izoleucín, leucín a lyzín alebo iné peptidy tvorené ľubovoľnou kombináciou týchto ami.....
nokyse1 í n.
Vynález sa ďalej týka spôsobu získania vyššie uvedených zlúčenín a produktov, ako je popísané v nároku 5, pričom sa t v o r í i n t e r m e cl i á t v z o ľ c a
R' - NH - R.'' k d e R' j e C1 1 - d e o :·: y r a d i k á 1 v 1 i n e á r n o m u h 1 í k o v o m r e ť a z c i alebo ľubovoľná O-premostená forma monosacharidu alebo oligo- alebo polysacharidu, a
R'' reprezentuje aminokyselinový alebo peptidový radi.....
kal, pričom v uvedenom intermediáte došlo aspoň čiastočne k Ama.....
clo r i ho prešmyku a/alebo Maillardovej reakcii stálym zahrie.....
vaním reakčnej zmesi - s výhodou pod tlakom - za súčasného alebo následného odstraňovania rozpúšťadiel. Výhodné uskutočnenia postupu sú popísané v nárokoch 6 až 10.
V niektorých pri pat d och, najmä, keď- sa použije aminokyselina s dvomi karboxylovými skupinami, je výhodné pridať clo procesu pufrovaciu soľ,' ako je hydrogénuh1 iči tan sodný, s výhodou v mólovom pomere 1:1.
Ďalej sa zistilo, že produkty Amadoriho prešmyku sú re latívne náchylné rozkladať sa a že produkty rozkladu majú povahu tmavohnedých a dechtových neidentifikovaných zlúčenín, ktoré stratili biologickú aktivitu. F'reto je výhodné zastaviť reakciu Amadoriho prešmyku v stave, kedy sa reakčná zmes sfarbí na svetlooranžovohnedo.
Je zaujímavé si všimnúť, že reakčné medziprodukty, vznikajúce, keď sa pôvodne nepriehľadný roztok aminokyseliny vyčistí (pred Amadoriho prešmykom), sa ľahko hydrolyzujú,
t.j. reakcia je reverzibiIná. S rastúcim podielom preusporiadania sa reverzi bi 1 i ta znižuje, t., j. produkty sa stávajú stálejšími, a farba sa postupne mení zo svetložltej na svet1ooranžovú, a napokon na oranžovohnedú, keď sa Amadoriho preusporiadania
Vzorky odobrané počas takejto reakcie a testované (rôznymi spô- sobmi popísanými že biologická aktivita sa s postupom Amadohrievania dochádza k rozkladu, ktorého znakom je zmena farby do tmavohnedá. Okamžitá redukcia ferikyanidu a výsledná fa rebná zmena sa objaví, ak reakčná zmes obsahuje iné ketoskupiny a/alebo aminokyseliny obsahujúce síru, ako je cysteín;
ináč sa objaví do 3 až 5 minút, čo je dobrým testom stupňa vývoja Amadoriho prešmyku. Nezreagované sacharidy by ukázali zmenu farby po pol hodine alebo až po niekoľkých hodinách.
Izolácia čistých produktov Amadoriho prešmyku sa vykonáva podľa známych metód, založených na viazaní zmesi na silný katiónomenič (ako je Amberlite(R) alebo Dowe:<(R) ) s následným vymytím čpavkovou vodou, odparením vybranej definovanej frakcie eluátu za zníženého tlaku a kryštalizáciou čistej zlúčeniny z bezvodého metanolu (J.E. Hodge a B.E. Fisher, ľíethods in Carbohydrate Chemistry, Vol. II, Reactions of Carbohydrates, Academic Press, N.Y., London 1963, str. 105-106; alebo Borsook a spol., ako boli citovaní vyššie; alebo J. Dubourg a F'. Devilliers.
F'ri postupe podľa tohto vynálezu všetky vyššie uvedené výhody týkajúce sa druhu radikálov odvodených od zlúčenín monosacharidov a aminokyselín zostávajú nezmenené. Naviac, výhodná zmes sacharidových substrátov obsahuje D-formy glukózy, xylózy, galaktózy, ramnózy a fruktózy v hmotnostnom pomere asi 20 : 10 ; 4 ; 1 s 1, zatiaľ čo výhodná zmes ami nokyselinových substrátov obsahuje L-formy serínu, glycínu, histidínu, arginínu, alanínu, pŕolínu, tyrozínu, valínu, leucínu, izoleucínu a Íyzínu v hmotnostnom pomere 20.5 : 35.8 : 35.8 : 132 : 180 : 360 : 216 : 160 : 72 : 68 : 780.
Ako sme už uviedli, produkty Amadoriho prešmyku sú schopné redukovať ferikyanid draselný, pričom takáto chemi cká testovacia reakcia predstavuje základ na rýchle určenie biologickej aktivity zmesi vytvorenej reakciou sacharidu a aminokyseliny.
Zistilo sa, že produkty Amadoriho reakcie sú zvlášť aktívne, ak zmes monosacharidov toho istého zloženia a v tom istom hmotnostnom pomere, ako sa vyskytujú v extraktoch z prírodnej 'rašeliny, reaguje so zmesou zlúčenín aminokyselín toho istého zloženia a v tom istom hmotnostnom pomere, ako sa vyskytujú v extraktoch z prírodnej rašeliny, v prítomnosti vodného rozpúšťadla, s výhodou s pridaním nižšieho alkoholu - a prípadne anorganických stopových prvkov, ktoré sa vyskytujú v takých prírodných rašelinových extraktoch - pri zvýšenej teplote (a prípadne pod tlakom), s následným predĺžením zahrievania, aby sa vyvolal Amadoriho prešmyk v získaných produktoch, za súčasného alebo následného vytláčania rozpúšťadiel, so zastavením prešmykovej reakcie v bode, kedy sa reakčná zmes sfarbí na svetlooranžovohnedo, sušením takto získaných produktov a ich vyčistením pomocou stĺpcovej chromatografie a zachytením frakcií, ktoré spôsobujú maximálnu redukciu ferikyanidu draselného.
ú jednom uskutočnení vynálezu rozpustné farmaceutické formulácie obsahujú ako aktívnu prísadu? najmenej jeden reakčný produkt vzorca Ri'-NH-Ra' alebo špecifickú zlúčeninu vzorca Ri-NH-Ra spolu s farmacauticky prijateľným nosičom a/alebo adjuvansom a/alebo prípadne s mastivom v hmotnostnom pomere aktívnej prísady ku zvyšným zložkám medzi 1:1 í
a 1:100, s výhodou medzi 1:8 až 1:20 a najvýhodnejšie okolo 1:9.
Iná výhodná farmacetická formulácia obsahuje - okrem aktívnej prísady - laktózu a mastivo s hmotnostným pomerom laktózy k mastivu medzi 20 : 1 a 100 s i, s výhodou 50 : 1.
Tieto farmaceutické prípravky sa používajú na liečenie a/alebo prevenciu hematologických a/alebo imunologických chorôb, a/alebo stimulujú imunitný systém ľudí a/alebo cicavcov vyvolaním tvorby cytokínov prísad je v kozmetických prípravkoch. Aktívna prísada je v ta ký c h to prípravkoch prítomná v množstve O,01 hmotn. 7., s výhodou zvyčajné vonné látky zvlášť v množstvách prípravky obsahujú nosiče, adjuvansy, popri hmotn aktívnej
7.. Tieto pri sade obohacujúce zložky a/alebo demonštrujeme ďalej na na sledujúcich príkladoch, ktoré neobmedzujú rozsah tohto vyná lesu v žiadnom ohľade ml-ová fľaša rotačnej odparky, umiestnenej do zahriateho vodného kúpeľa, sa naplnila
| 1.47 | 9 | (0.01 M) kyseliny L-glutámovej |
| 0. 84 | <3 | (0.01 M) NaHCOs |
| 0.91 | g | D-glukózy |
| 0.91 | g | galaktózy a |
| 3.00 | ml | redestilovanej vody. |
Zmes sa zahriala na 80 °C, čím sa - s výhodou za zníženého tlaku - odparilo 50 7. vody a potom - za atmosférického tlaku - sa zahrievala na teplotu 80 -- 85 °C, pri ktorej sa udržovala 120 minút, až kým sa sfarbila do oranžová. Sirupovitý koncentrovaný vodný roztok sa potom odparil dosucha za zníženého tlaku. Takto získaný oranžovočervený tuhý reakčný produkt bol označený symbolom D-10 a uschovaný pre biologické testy.
umiestnenej do za f
| 1.33 | g | (0.01. ΙΊ) kyseliny L-a&p-a |
| 0. 84 | g | (0.01 M) NaHCCh |
| 0.91 | g | D-glukózy |
| 0.91 | g | galaktózy a |
| 3. 00 | m 1 | redeétilovanej vody. |
Zmes sa zahriala na Θ0 °C za miešania (pomocou otáča8 nia), koncentrovala sa tlaku, čím sa odparilo celkove 1.5 ml vody, a potom sa udržovala sa atmosférického tlaku pri teplote 80 - 85 °C, až sa sfarbila do svetlooranžova; k tomu došlo v priebehu asi 60 minút. Reakčná zmes bola sirupovitým koncentrovaným vodným roztokom a vysušila sa sa zníženého tlaku. Výsledný reakčný produkt bol suchý, žltooranžový prášok. Bol označený symbolom D-ll a uschovaný pre biologické testy.
ml-ová fľaša rotačnej odparky, umiestnenej do zahriateho vodného kúpeľa, sa naplnila
| 1.05 | 9 | (0.01 M) L-serínu | |
| 0.91 | 9 | D-glukózy | |
| 0.91 | g | galaktózy a | |
| 2.50 | ml | redestilovanej vody. | |
| Zmes | sa z | ahr | iala na 85 - 92 °C za miešania (pomocou |
| otáčania). | F'o | 100 | minútach sa roztok sfarbil do oranžová. |
Znížil sa tlak a zmes ša odparila dosucha. Reakčný produkt na stenách fľaše vytvoril oranžovú priehľadnú vrstvu. Tento reakčný produkt sa soškrabal a ros prášková 1. Bol označený symbolom D-12 a uschovaný pre biologické testy.
E'.
hriateho vodného kúpeľa, (0.005
M) naplnila kyseliny Β-
0. 45 ml (0.005
M)
NaHCOs galaktózy redestilovanej vody tlaku, čím sa odparilo 1.5 ml vody, a potom sa udržovala- sa ho tlaku - pri teplote 85 °C. F’o 60 minútach zahrievania sa zmes sfarbila do oranžová; tlak sa znížil a výsledný sirupovitý koncentrovaný vodný roztok sa odparil dosucha. F'red tým, než sa zvyšok úplne vysušil, dvakrát sa pridalo do fľaše 10 ml bezvodého etanolu a odparilo, aby sa odstránila zvyšková vlhkosť. Takto získaný suchý reakčný produkt sa '?
rozpráš k oval ·, . bol označený symbolom D--· 13 a uschovaný pre b .1. □ 1 o g i c k é t e s t y .
E.iz±k.Lad....S
Aby sa získal -- syntetickým spôsobom -- ekvivalent biologicky aktívnej frakcie istého prírodného rašelinového e:·:.....
t. ľ a k t u , f ľ a š a r o t a č n ej o d p a r k y , u m i e s t n e n e j d o z a h r i. a t e h o
| vodného kúpeľa, | S3 | naplnila |
| 25. 5 | fng | L-serínu |
| 35.8 | mg | L-g 1 y c í n u |
| 35.8 | mg | L-histidí nu |
| 1 32.. 0 | mg | L-argin í nu |
| 180. 0 | mg | L-alanínu |
| 360» 0 | mg | L-prolínu |
| 216., 0 | m g | L-tyroz í nu |
| 160. 0 | mg | L-va1 i nu |
| 68. 0 | mg | L-i zo 1eucí nu |
| 72.0 | m g | L-leucínu |
| 780. 0 | mg | L-1 y z í nu |
| 2000.0 | mg | lľ.i- g 1 ukózy |
| 1000.0 | mg | D-:·: y lózy |
| 400.0 | mg | ga1 ak tézy |
| 100.0 | mg | D-ramnózy |
| 1 00. C> | mg | D.....f ruktézy |
| 6.0 | ml | redestilovanej vody. |
Zmes sa miešala pomocou otáčania a zahrievala pod tlakom 45 minút pri teplote stúpajúcej od 75 t>C po 86 °C. Počas tejto doby sa odparili asi 3 ml vody á substráty sa úplne rozpustili. Zmes sa potom udržovala 30 minút za atmosférického tlaku pri teplote 85 - 86 °C, aby sa vyvolal Amadoriho ; prešmyk. Počas tejto doby sa roztok rýchlo sfarbil do červe• nohneda. Tlak sa znížil a zahrievan.ie pri 84 °C pokračovalo,
I i teda súčasne sa odparovali rozpúšťadlá. Ku koncu odparovania !
| sa dvakrát pridalo 15 ml bezvodého. etanolu a reakčná zmes sa ’· priviedla do suchého stavu. Fľaša s vysušeným reakčným p r οι duktom sa umiestnila do exsikátôra nad chlorid vápenatý na j 18 hodín; potom sa reakčný produkt rozpráškova1. Získalo sa i
'í približne 4.5 g práškového produktu a označil sa symbolom
S
Časť 4.0-g tohto reakčného produktu sa rozpustila v 20 ml destilovanej vody a umiestnila na chromatograŤický stĺpec veľkosti 25 mm x 330 mm, naplnený sorbentom Amber1 ite<R1 XAD-2 analytickej kvality. Stĺpec sa eluoval 0.4 ml/min. destilovanou vodou. Zachytávali sa frakcie objemu 10 ml do celkového objemu 450 ml. Obsah frakcií sa monitoroval chronatograficky. Frakcie postupných čísel 11 - 13 sa skombinovali a odparili za zníženého tlaku. Tieto frakcie charakterizoval vysoký obsah produktov Amadoriho prešmyku (potvrdený testom redukcie ferikyanidu draselného). Produkt bol uschovaný pre biologické testy pod označením EKa-S-ll.
Biologické testy na určenie biologickej aktivity sa vykonali s imunizovanými myšami Balb/C oboch pohlaví, vo veku 8 - 10 týždňov. Imunizácia myší sa dosiahla peritoneálnym podaním 0.2 ml 10 Z-nej suspenzie ovčích erytrocytov (SRBC), t. j. 6 x 108 buniek. Erytrocyty sú fixované v sterilnom Alseverovom roztoku nasledujúceho zloženia:
glukóz ex 2.05 g citrát sodný 0.8 g chlorid sodný 0.42 g kyselina citrónová 0.055 g redestílovaná voda do 100 ml.
Do takéhoto Alseverovho roztoku sa zavedie aseptická vzorka buniek ovčej krvi v pomere 1:1a zmes sa udržuje najmenej 3 dni pri + 4°C. Takto stabilizované erytrocyty sa potom aseptický vzorkujú a zavedú sa do fosfátom pufrovaného soľného roztoku (PBS), aby sa vymyli'. Erytrocyty sa PBS premyjú dvakrát a odstreďujú sa v centrifúge 10 minút pri 2000 ot./min. Vymyté bunky sa používajú vo forme 10 Z-nej suspenzie v PBS. Takáto suspenzia sa používa na imunizáciu Balb/C myší.
Reakčný produkt, ktorý s raperitoneálne (i.p.) alebo v stanovených dávkach, .pričom hodiny pred imunizáciou myši dávky sa podali po imuhizácii
Každá testovaná skupina testovaného reakčného produkt' a 0.01 mg/kg. Kontrolná skúpil . mal testovať, bol podaný intperorálne (p.o.) štyri razy prvé podanie sa uskutočnilo 2 s SRBC, · zatiaľ čo ostatné tri v 24-hodinových intervaloch, zvierat dostávala rôzne dávky : 10 mg/kg, 1 mg/kg, 0.1 mg/kg a zvierat bola tiež imunizova-
ná s SRBC, ale namiesto testovanej látky sa podávali 0.2 ml PBS v tých istých časových intervaloch.
Každá skupina zvierat, kontrolné a testované skupiny, pri všetkých experimentoch pozostávala* z S -- 12 myší.
Ma štvrtý alebo (v prípade stanovenia protilátok typu 7S) desiaty deň po imunizácii boli myši ľahko anestetizované éterom a odobrala sa im krv vyňatím očnej gule. Krv sa zberala do skúmaviek. F'otom sa im pretrhla miecha a odstránila slezina. Krv sa použila* na získanie séra potrebného na určenie hemag1utinačných protilátok typu 19S+7S a 7S, zatiaľ čo sleziny boli použité na prípravu buniek užitočných na určenie percentuálneho zastúpenie* buniek schopných, vytvárať E-rozety a hemolytickej aktivity. Ma takéto použitie boli myšie sleziny rozotreté. Získané splenocyty sa suspendovali v približne 2 ml Hankovho média pri + 4 °C, rozvrstvili na F’icol 1-Uropolinovom gradiente s hustotou 1.077 a centrifúgovali 15 minút pri 3000 ot./min. pri. + 4 c>C. F'o separácii z medzifázy sa zrazený lymfocytový povlak vložil clo Hankovho média pri + 4 °C a dvakrát premyl s centrifúgovaním po každý raz 7 - 10 minút pri 1S00 ot./min.. Splenocyty sa* potom suspendovali v 1 ml Hankovho média pri takom pomere, že toto obsahovalo 1 :·: 10A buniek.
Pre každý test sa počet mŕtvych buniek stanovil zmiešaním kvapky testovanej suspenzie splenocytov s kvapkou narýchlo pripraveného roztoku farbiva, obsahujúceho 4 diely 0.2 “Z-ného roztoku trypánovej modrej a 1 diel 4.25X-ného roztoku MaCl. Pod mikroskopom sa určil percentuálny podiel mŕtvych splenocytov pre každých 100 buniek. Mŕtve bunky sú farby námorníckej modrej, zatiaľ čo priezračné bunky sú živé bunky. Prítomnosť viac ako 10 7. mŕtvych buniek je kritická; takú vzorku treba vylúčiť z ďalšieho použitia.
Všetky kroky vykonávané s bunkami, ktoré sa majú testovať, treba uskutočniť v sterilnej si 1ikonizovanej sklenej aparatúre, umiestnenej v ľadovom kúpeli.
Εηί±;.1ώ£ΐ_ώ
V prvom teste sa stc*novil účinok testovaných reakčných produktov na počet buniek produkujúcich hemolytické protilátky (PFC-IgM). Test sa vykonal nasledovne: K 0.5 ml 0.5
X--ného roztoku· agarózy v skúmavke udržiavanej v zahrievanom vodnom kúpeli pri 45 °C sa primiešalo 0.1 ml 10 X-nej suspenzie SRBC (pripravenej vyššie popísaným spôsobom). F'otom sa pridalo 0.1 ml suspenzie splenocytov s hustotou 1 :·: 10* buniek/ml, zmes sa rýchlo miešala a ihneď sa vyliala na podložné sklíčka pokryté agarózou. Podložné sklíčka sa inkubovali pri 37 0C dve hodiny. F'otom sa testované vzorky pokryli morčacím komplementom zriedeným v pomere í : 20 na ďalšie dve hodiny. F’o inkubácii testovaných vzoriek s týmto komplementom sa spočítal počet buniek vytvárajúcich škvrny (F'FC) a prepočítal na 1 10& splenocytov. Každý test sa vykonal dvak rát.
Najväčšie zosilnenie odozvy na SRBC vyjadrené nárastom počtu splenocytov, produkujúcich hemolyzíny IgM (F'FC) sa pozorovalo po podaní látky D-11 pri dávke 0.1 mg/kg. Zosilnenie bolo 119 /. Keď sa denná dávka zvýšila desaťkrát až na 1 mg/kg, zosilnenie odozvy sa znížilo na 53 X.
Reakčný produkt D-12 vykázal najsilnejšiu aktivitu - nárast 5Θ 7. - pri dávke 1 mg/kg.
Reakčný produkt EK2-S-II v tomto teste vykázal najsilnejšiu aktivitu pri dávke 0.1 mg/kg (nárast 65 X). Pri dávke desaťkrát vyššej, t.j. 1 mg/kg, bol nárast mierne nižší, t. j. 52 Z.
Reakčný produkt D-13, testovaný pri dávke 1 mg/kg, spôsobil nárast 40 X. Keď sa dávka zvýšila na 10 mg/kg, t.j. desaťnásobne, odozvou bol len 14 X-ný nárast.
Vykonal sa tiež aktívny hemag1utínačný test na stanovenie úrovne anti-SRBC typu 19S+7S a protilátok 7S. Aby sa stanovila úroveň protilátok typu 19S - IgM, myšacie sérum sa pripravilo na štvrtý deň po imunizácii pomocou SRBC, zatiaľ Čo na stanovenie úrovne protilátok typu 7S - ľgG sa takáto príprava uskutočnila na desiaty deň po imunizácii myší pomocou SRBC, ktorý sa vzťahuje na deň maximálneho počtu protilátok daného typu v myšiach imunizovaných pomocou SRBC.
A. Stanovenie počtu protilátok 19S + 7S
Vzorka krvi sa centrifúgovala minút pri 3500 ot./min. Z každej takto pripravenej vzorky sa odobralo sérum a vložilo sa do zohriateho vodného kúpeľa pri teplote 56 °Ľ na 30 minút, aby sa deaktivoval komplement. Potom sa pripravila séria roztokov každého testovaného séra s niekoľkými rôznymi zriedeniami (od 1 s 1 po 1 : 4096) s použitím mikrotitrátora a mikrosklíčok. tvaru U s objemom každého 250 pi. Zriedené séra sa inkubovali '1 hodinu pri laboratórnej teplote. Kvapka 1 %-nej suspenzie SRBC v PBS (pripravená, ako je popísané vyššie) sa pridala ku každému séru; zmesi sa inkubovali ďalšie 2 hodiny pri teplote 37 °C a potom sa uložili pri teplote + 4 °Č. Výsledky sa zisťovali v nasledujúci deň. Maximálne zriedenie, pri ktorom sa ešte spôsobuje hemaglutinácia, sa považovalo za množstvo protilátok. Prstenec na dne sklíčka je znakom, že sa vyskytuje hemaglutinácia. Gombíkový útvar na dne sklíčka sa považoval za negatívny výsledok ..... žiadna hemaglutinácia.
Pre štatistickú analýzu výsledkov sa nárast zriedenia séra v testovanej látke porovnával s nárastom v kontrolnej s k u p i n e.
Reakčný produkt D-ll pri dávke 1 mg/kg zvýšil množstvo IgM 2.57-krát. Pri desaťnásobne vyššej dávke sa stimulačný efekt zvýšil v porovnaní s kontrolnou skupinou 3.5-krát.
Reakčný produkt 0-12 v tomto teste vykázal slabšiu aktivitu. Pri dávke 0.1 mg/kg zvýšil množstvo IgM 2-krát, pri dávke 1 mg/kg 1.4-krát.
Reakčný produkt EK’n-S-ll vykázal najsilnejšiu aktivitu v tomto teste. Pri dávke 0.1 mg/kg zvýšil množstvo IgM 4.3-krát, pri dávke 1 mg/kg 3.6-krát.
Reakčný produkt D-13 pri dávke 1 mg/kg zvýšil množstvo IgM 3-krát, pri desaťnásobne vyššej dávke 1.5-krát.
B. Stanovenie množstva protilátok ?S
Testované inaktivované séra sa kombinovali - v pomere 1 : 1 - s 0. 1 M rpztokom 2-merkaptoetanolu a zmesi sa inkubovali 30 minút pri teplote 37 °C. '2-merkaptoetanol ničí imunoglobulíny typu 19S-(IgM), zatiaľ čo imunoglobulíny typu 7S-(IgG) nie sú citlivé na pôsobenie 2-merkaptoetanolu.
Po 30 minútach inkubácie sa redukčná reakcia zastavila pomocou ochladenia na teplotu,+ 4 °C na 15 minút. Potom sa pripravila séria zriedených roztokov podobným spôsobom, ako bolo popísané vyššie pri stanovovaní množstva protilátok
19S a skombinovala s 1 hodinách inkubácie pri 37 °C sa vzorky uložili pri teplote +· o C.
Výsledky sa vyhodnotili v nasledujúci deň podľa kritérií stanovenia množstva hemaglutinácie popísaných vyššie. Súčas ne sa vykonal kontrolný test's kombináciou 1 Z-nej suspenzie SRBC s F'BS v pomere 1:1.
Keď sa látka D-ll testovala vyššie popísaným spôsobom, pri dávke 1 mg/kg zvýšila produkciu protilátok I gG 3.16-krát. Pri dávke 10 mg/kg bolo zvýšenie 2.2-násobné.
Reakčný produkt D-12, testovaný pri dávkach 0.1 mg/kg a mg/kg, stimuloval produkciu protilátok IgG 1.3-krát, pri dávke 10 mg/kg 1.5-krát.
Reakčný produkt EKa-S-ll pri dávke 0.1 mg/kg stimuluje produkciu IgG 1.9-krát, pri dávke 1 mg/kg 2.89-krát (v porovnaní s kontrolou).
Výsledky testov A a B, získané pre každý podiel produkcie alebo každú frakciu biologicky aktívnych reakčných produktov, syntetizovaných podľa tohto vynálezu a vykazujúcich vyššie spomenutú imunologickú odozvu, boli podrobené štatistickej analýze t-Studentovým testom, a = 0.05. Získané výsledky pre každú testovanú dávku sa porovnávali s paralelným kontrolným testom a vykázali nárast biologickej aktivity.
Skupina biologicky aktívnych reakčných produktov, získaných podľa príkladov 1 až 5, sa tiež podrobila testu, v ktorom sa stnavilo percentuálne množstvo splenocytov, vytvárajúcich
E-rozety.
250 jj 1 1 Z-nej suspenzie SRBC a 250 jj 1 buniek, ktoré sa majú testovať, v koncentrácii 1 ,x ’104 uniek/ml sa pridalo k 550 jj 1 Hankovho média. Každá taká vzorka sa inkubovala v zahriatom vodnom kúpeli vybavenom trepačkou 15 minút pri teplote 37 °C. Potom sa uložila pri teplote + 4 °C na ďalších 20 hodín. Percentuálne množstvo splenocytov, tvoriacich
E-rozety s SRBC, sa stanovilo po zafarbení suspenzie 1 až kvapkami kryštálovej violeti.
U každej vzorky sa percentuálne množstvo splenocytov stanovovalo trikrát, pričom sa v každom prípade spočítalo
400 splenocytov. Splenocyt obkolesený najmenej 3 erytrocytmi sa považoval za E-rozetu
Ma štatistické vyhodnotenie sa porovnával percentuálny nárast počtu splenocytov s E-rozetami medzi testovanými láttomto teste vykázali najsilnejší stimulačný efekt re (70 Z) pri dávke 1 mg/kg. F’ri dávke desaťnásobne menšej,
t. j.
7..
Reakčný produkt D-12 pri dávke 1 mg/kg spôsobil nárast
7. v porovnaní s kontrolnou skupinou. Príslušná hodnota pre desaťnásobne menšiu dávku,
t.j. 0.1 mg/kg, bola
7.
Reakčný produkt ke 1 mg/kg (58.Z), zatiaľ čo pri vyšších dávkach je efekt o niečo menší
Biologická aktivita syntetizovaných zlúčenín sa výhodpodľa nasledujúcich testov:
na stanovenie percentuálneho množstva splenocytvoriacich E-rozety, uskutočnený podľa Bacha a Dardenneho (Ce11.Immuno1
1-16, 1972)
Test na stanovenie počtu buniek, produkujúcich hemolytické protilátky typu IgM, uskutočnený podľa Jerneho metódy, modifikovanej ľlishellom a Duttonom (ú.ExP.Med. 126, 423-442, 1967) a
Test na stanovenie množstva hemaglutinačných protilátok 19S + 7S a 7S, uskutočnený podľa Adlerových aktívnych hemaglutinačných metód (J.Immuno1. 95,
9-47,
1965) s použitím mikrosklíčok (J.Immunopharmacol. Ä, 43-52,
Do rotačnej odparky umiestnenej peli sa vložilo:
1.3 g (0.01 M)
L - a# par to/β j kyselín y
0.84 g (0.01 M)
NaHCCb
10.00 hydrolyzovaného dextránu s priemernou molekulovou hmotnosťou 3000 daltonov redestilovenej vody.
Zmes sa zahrievala pod tlakom pri teplote 70 °C, až kým sa tuhé látky úplne nerozpustili, pričom sa destiláciou odparili počas tejto doby asi 3 ml vody (zahrievacia doba bola asi 30 minút). Fľaša s roztokom sa voľne prikryla, umiestnila do parného steri1izátora a zahrievala pod tlakom pri teplote 121 °C 40 minút. Po ochladení sa výsledný žltooranžový roztok zriedil 15 ml vody, vyčíril a vysušil rozstrekovaním do vzduchu
160 °C a výstupnou teplotou + S5 °C.
pomocou centrifúgovania so vstupnou teplotou +
10.5 g svetlobéžového reakčného produktu, ktorý bol ľahko rozpustný vo vode.
Prítomnosť produktov Amadoriho prešmyku v tomto reakč nom produkte sa potvrdila testom metódou ferikyanidu draselného, popísanou Borsookom, Abramsom a Lowym, J.Biol.Chem.
215·. 111-124, 1955 a chromatografickými metódami.
Biologické testy podľa popisu v predchádzajúcich príkladoch potvrdili imunotropnú aktivitu vyššie uvedeného produktu, podobnú tej, ktorú vykazujú preparáty získané s mono sac haridmi.
Do kónickej fľaše sa vložilo;
5.0 g hydrolyzovaného dextránu s priemernou molekulovou hmotnosťou asi 5000 daltonov /
1.1 g L-prolí nu
4.0 ml redesti 1ovanej vody.
□ bsah sa rozpustil pomocou m,.iešania. Takto získaná homogénna zmes sa umiestnila do parného steri1izátora a zahrievala sa pod tlakom .pri teplote 110 °C 40 minút. Výsledný transparentný oranžový roztok sa zriedil 20 ml redestilovaM nej vody a vyčíril centrifúgovaním. Číry roztok sa vysušil rozstrekovaním.
Získalo sa 5.3 g vo vode ľahko rozpustného reakčného produktu. Imunotropná aktivita bola podobná ako pozorovaná pri iných experimentoch podľa predchádzajúcich príkladov.
Bežné metódy testujú biologickú aktivitu zlúčenín na myšiach a nie na ľuďoch. Z toho dôvodu’ sa zaviedli nové biotesty, ktoré merajú množstvo a aktivitu cytokínov, uvoľnených z leukocytov ľudskej periférnej krvi (PBL), na ktoré sa pôsobí reakčnými produktami podľa príkladov 1 až 5, 9a 10. Cytokíny sú hormónom podobné proteíny, ktoré hrajú dôležitú úlohu prakticky vo všetkých imunologických reakciách, ako aj v regulačných procesoch, zodpovedných za udržanie homeostáCytotoxicita reakčných produktov sa stanovila na bunkovej línii A549 ľudského pľúcneho adenokarcinómu (zahrnutej do Americkej zbierky typových kultúr - ATCC CCL 185). Bunkové monovrstvy sa trypsínovali, suspenzie 2 x 10E buniek/ml v Dul beccovom-modif ikovanom Eagleovom minimálnom základnom médiu (DMEM) plus 10 7. teľacieho séra (CS) sa zmiešali s rôznymi dávkami uvedených liečiv, naočkovali v plastických mikroskl íčkach, a inkubovali 48 hodín pri 37 °C. CDsc> bola minimálna koncentrácia zlúčeniny, ktorá spôsobila približne 50 7.--110 deštrukciu bunkovej kultúry, meranú sfarbením 0.015 7......ným roztokom neutrálnej červene v DMEM.
Zrazené povlaky sa získali od ..zdravých darcov krvi z regionálnych transfúznych staníc. Erytrocyty sa lýzovali pôsobením NH4CI podľa Cantella a spol. (Cantell K., Hirvonen S., Kauppinen H.L.: Príprava a čiastočné čistenie ľudského interferónu imunity. Meth.Enzymol. 119. 54, 1986). Použili sa leukocyty od jedného darcu s obsahom θ x 10ώ leukocytov/ml v médiu RF’MI 1640 doplnenom 10 7. fetálneho teľacieho séra (PCS), L-glutamínom á antibiotikami. Všetky vzorky FCS sa vopred testovali. Pre PBL kultúry sa použili len nemitogenické FCS. Cytokínové induktory sa pridali k 1 ml objemom týchto kultúr. Referenčnými cytokínovými induktormi boli fytohemaglutiní n (PHA) (Pharmacia Fine Chemicals, Švédsko) a LF'S z E. coli 0111:B4 (Difco Laboratories) . Indukované kultúry F'BL sa inkubovali v atmosfére 5 7. CGz vo vzduchu pri 37 °C 20 hodín a centrifúgovali. Supernatanty sa uložili pri °C a testovali na TNF a IFN aktivitu v priebehu jedného tý ž d i“ a.
Splývajúca monovrstva buniek ΑΞ49 sa pripravila na mikrosklíčkach v DMEM s 10 7. CS, L-glutamínom a antibiotikami (100 jednotiek/ml penicilínu a 100 pg/ml streptomycínu). K bunkovej monovrstve sa pridali vzorky IFN zriedené na sklíčkach a inkubovali pri 37 °C 20 hodín v 5 7. COa vo vzduchu. Bunky sa potom premyli .a zaviedol sa vírus encefalomyokarditídy. Titer IFN sa definoval ako zriedenie vzorky IFN, ktoré zredukovalo cytopatogenický účinok vírusu o 50 7. po 48 hodinách inkubácie. Metóda MTT (bromid
3-C 4,5-dimety ltiazol-2-y 1 ľl-2, 5-di f en y 1 tetrazól i a ) (Hansen M.B., Nielsen S.E. a Berg K.: Overenie a ďalší vývoj presnej a rýchlej metódy farbenia na meranie rastu buniek, Celí Ki11.J.Immuno.Meth. 119. 203-210, 1989) na meranie ničenia buniek v scanneri ELISA sa· požila taktiež. Vo všetkých testoch sa použili laboratórne štandardy: rekombinantný ľudský IFM-gama (Genentech Inc., USA, špecifická aktivita 2 x 10Q jednotiek/mg) , prírodný ľudský leukocyt IFN-ix (3 x 10& lU/ml) a IFN-gama (2 x 10ó IU/ml) získaný od Dr. K. Cantella, Helsinki, Fínsko.
Cytotoxická aktivita TNF sa merala na bunkách L929 podľa Flicka a Gifforda (Flick D. A., Gifford G.E. : Porovnanie in vitro bunkových cytotoxických testov na nádorový nekrózový faktor, J.Immunol.Meth. 167, 1984).
Vzorky a roztok aktinomycínu B sa pridali k monovrstvovým kultúram buniek. Po inkubácii 20 hodín pri 37 °C sa kultúry zafarbili kryštálovou violeťou a stanovili sa toxické účinky. Množstvo, ktoré spôsobilo približne 50 Z-nú deštrukciu bunkových kultúr, sa definovalo ako jedna jednotka aktivity TNF. Porovnanie s preparátom TNF-tx (Genentech Inc., USA) ukázalo, že 1 jednotka v našich testoch sa rovnala 100
200 pg/ml-TNF.
Použili sa antiséra: králičí anti-ľudský TNF--a, vzorka 2950-40 a králičí anti-ľudský TNF-gama, vzorka 2891-56 (Genentech Inc., USA), ovčí anti-ľudský IFN-α,β a ovčí anti-ľudský IFN-gama (získaný od Dr. K. Cantella, Fínsko). Na cytokínové preparáty sa pôsobilo sérom, zriedeným 1 : 200 v kultivačnom médiu a inkubovaným jednu hodinu pri labora tórnej teplote. Potom sa stanovili zvyškové aktivity IFN a TNE, ako bolo popísané.
Použilo sa päť rôznych šarží (Li až Lg ) PBL z krvi zdravých darcov. Zistilo sa, že pre testy je optimálna koncentrácia PBL. (3 10* buniek na jeden ml média (RPMI 1640 dplnené 10 7. fatálneho teľacieho séra a antibotikami) .
Inkubácia ľudského PBL. s novými reakčnými p rod u k tam i I.....XI vyústila do syntézy IFN a TNF. Pozorované odozvy záviseli od dávok v rozsahu 3 - 100 jjg/ml zlúčenín. Zlúčeniny použité v indikovaných koncentráciách boli necytotoxické. Vo všetkých biotestoch boli zahrnuté negatívne a pozitívne kontroly. Negatívne kontroly merali množstvo cytokínov (IFN a TNF) vzniknutých spontánne bez pridania vonkajších stimulátorov. Pozitívne kontroly indikovali množstvá cytokínu vzniknutého pri odozve na známy referenčný induktor; v našom prípade to bol f y tohemag 1 utin í n (PHA, F'harmacia, Švédsko, 10 jj g / m 1 ) .
Treba upozorniť, žecytokínová indukcia v ľudských PBL kultúrach obyčajne vykazuje značnú variabilitu výsledkov. Tento jav možno vysvetliť genetickou diferenciáciou ľudskej populácie. Naviac, PBL kul túry často tvoria IFN a TNF spontánne.
Inými slovami, medzi zdravými, darcami PBL sa bežne pozorujú jednotlivci s vysokou odozvou, s malou odozvou, alebo d o k on ca b e z od o z v y.
Napriek uvedeným obmedzeniam výsledky biotestov ukázali, že PBL. (Li až Le ) , na ktoré sa pôsobilo reakčnými produktami (I - XI), produkovali' IFN a/alebo TNF, ktoré bolo možné merať kvantitatívne.
V prípade Li, ktorá obsahovala leukocyty od jedinca s vysokou odozvou, sa zistilo, že reakčný produkt II (obsahujúci L-formu kyseliny aspartovej) bol výrazne aktívnejší ako cytokínový induktor, než reakčný produkt III (obsahujúci D-formu kyseliny aspartovej, ktorá je tiež o dva poriadky drahšia). Pozorovanie je signifikantné, pretože bunky ako prírodné substráty v biochemických reakciách rozpoznávajú najmä L-formy aminokyselín.
Ďalej, pre prejavenie sa biologickej aktivity reakčných produktov je oveľa dôležitejšia aminokyselinová Časť molekuly než forma sacharidu. Namiesto monosacharidov možno použiť - s výhodou nízkej molekulovej hmotnosti, najmä menej než 1000 daltonov - polysacharidy (ako sú dextrány, reakčné produkty X -XI.) a tieto reagujú podobne.
A vice verša, polysacharidy obsahujúce aminokyselinové zvyšky môžu mať biologickú aktivitu, a táto aktivita sa zachováva, keď sa rozložia na oligosacharidy s viazanou aminokyselinou (údaje nie sú uvedené).
Podobné výsledky možno pozorovať, ak sa vezme krátky peptid namiesto jednotlivej aminokyseliny a použije sa na stimuláciu leukocytov, aby produkovali cytokíny (údaje nie sú uvedené).
Sedem referenčných dávok testovaných nefrakcionovaných TTP vo viac ako 100 PBL kultúrach od rôznych darcov produkovalo od 10 do 1000 jednotiek IFM na ml, ča od 9 do 750 jednotiek TNF na ml. Frakcia EKa-S, pripravená zo zmesi zodpovedajúcej obsahu extraktu z prírodnej rašeliny (Príklad 5), sa testovala v ôsmich PBL kultúrach od ôsmich rôznych darcov krvi. Zistilo sa, že je to najaktívnejší' preparát pri induk/ cii oboch IFM a TNF (údaje nie sú uvedené).
Možnými aplikáciami uvedených reakčných produktov je ich použitie ako imunomodulátorov a takáto aktivita bola klinicky užitočná. R'egeneráciá tkaniva je ďalšou dokázanou l
aktivitou. Protirakovinová aktivita, pravdepodobne spojená s prítomnosťou indukovaného interferénu a nádorového nekrózového faktora, sa taktiež.pozorovala. Bola zistená aj antivírusová aktivita.
Hlavné použitie vyššie uvedených reakčných produktov zahrnuje perorálne podávanie, 'ale parenterálne liečenie je taktiež možné, napr. miestnou aplikáciou. Produkty sa javia byť relatívne stálymi
Tabuľka 1. Zoznam reakčných produktov
Látka
I (D-10) :i: í ( d.....11)
III (IJ--13) iv (n-12) v
VI
VII
V11 I
I x x
X I
E.c£Ll.ad_._12
glukóza, galaktóza glukóza, galaktóza glukóza, galaktóza
D-acpartová k y s e1 i n a,
| L-ser | in, glukóz | H 1 | galak tóza | |
| EK'2 | -•s | (-f r a k c i e | 11 | - 13) |
| E K2 - | -s | (-frakcie | 6 ·· | - 7) |
| E K s | -s | (-frakcie | S - | - 10) |
| El<2 · | -s | ( f rak.cie | 2G | -- 34) |
dextrán
L -- a s p a r-feevá ^kyselina + dextrán
(typ 1) (typ 2)
Farmaceutické formulácie obsahujúce ako aktívnu prísadu reakčné produkty podľa príkladov:., 1 až. 5, 9 a .10, sa pripra vili s použitím nasledujúcich reakčných produktov:
A. T a b 1 e t y / g r a n u 1 y :
i.O g reakčného produktu, získaného podľa príkladu 1 alebo 10 (aktívna látka),
444.0 g farmaceutický akceptovateľnej laktózy, .«'/‘X
1.0 g mastiva, napr; MÝVATEX<R> (/obchodná značka 'firmy
Eastman Kodak).
Prisady sa zmieša 1 i” á granulovali s 30 Z--ným vodným i i í
etanolom bežným spôsobom,; potom sq sušili pri 40 °C. Granuly sa použili na pr í pravú kapsúl,. í každé j s obsahom približne 450 mg granúl, t.j. .5· mg aktívnej látky. Alternatívne sa granuly použili na formovanie tabliet-, každej s hmotnosťou približne 450 mg a obsahom 5:mg:aktívnej látky.
B. Tým istým bežným s predchádza j ú c i c h p r í k ľadov < i't • ’’ ‘ ' ‘ ‘ ú-·'-.'' ’ spôsobom ;šá''aktívne látky, získané podľa í'ŕáž.^Si.9 a 10, formulovali do
'., l<···' .·?’ ., < ,1, ' . ‘; <
'-y . ' - ··t;?’ iných farmaceutických · formulácií s použitím vhodných nosičov.
| Tabuľka 2 | Biologická aktivita rt v ľudských F-'BL | ŕakäných produl· | t o v | I -X I | |||||||
| Dávka JJ g / m 1 | IFN jednotí' L. 1 Ľ.2 L-3 | . y / m 1 L.4 ľ-5 | TNI-· j c l—i La | 'dnotky / m 1 I... 3 l.-Zt | Le | ||||||
| Kontr. | 10 | < 10 | < 10 | 20 | < 10 | BO | 9 | 27 | 27 | < 9 | |
| FHA | i o | 100 | 30 | 30 | 60 | 100 | 250 | BO | 250 | 250 2 | 50 |
| I | 100 | 100 | < 10 | < 10 | 20 | - | 250 | 9 | 9 | 160 | |
| 30 | - | - | 30 | -- | -- | .... | 50 0 | .... | |||
| 10 | 3C> | < 10 | < 10 | 30 | - | BO | 9 | 1B | 16 ϋ | .... | |
| -- | - | - | 10 | - | ... | ... | 1 6 0 | ... | |||
| I I | 100 | 100 | 10 | < 10 | 10 | < 10 | 250 | 18 | 18 | 250 | < 9 |
| 30 | - | _. | 10 | < 10 | .... | .... | 250 | <9 | |||
| 10 | 1000 | 10 | 30 | 10 | 10 | 250 | 50 | ..y 4Ú / | 250 | <9 | |
| -I· | -- | - | 10 | < 10 | ... | 160 | / (y | ||||
| 111 | 100 | <10 | < 10 | 10 | 10 | < 10 | 250 | 9 | 18 | 250 | < 9 |
| 30 | - | - | 30 | < 10 | - | .... | .... | 250 | < 9 | ||
| 10 | < 10 | < 10 | < 10 | 10 | < 10 | BO | 27 | 18 | 250 | < v | |
| •2· | - | .... | - | 10 | < 10 | - | .... | - | 80 | < 9 | |
| IV | 100 | < 10 | 10 | 10. | 20 | < 10 | BO | 60 | 9 | 160 | <9 |
| 30 | - | - | - | 20 | < 1 0 | .... | ... | 27 | < 9 | ||
| 10 | < 10 | 30 | < 10 | 20 | <10 | BO | 50 | 10 | 80 | < 9 | |
| •w* | - | - | 20 | < 10 | .... | - | BO | < 9 | |||
| v | 100 | 30 | < 10 | < 10 | ó O | -· | BO | 50 | 1B | 250 | .... |
| 30 | - | 60 | - | _.. | BO | ||||||
| 10 | < 10 | <10 | <10 | 10 | ... | 80 | 27 | 9 | 80 | ||
| - | 10 | .... | ... | .... | 80 | ...j | |||||
| VI | 100 | < 10 | < 10 | < 10 | 20 | ... | 80 | 27 | 18 | 80 | |
| 30 | - | - | - | 10 | .... | 80 | |||||
| 10 | 10 | < 10 | <10 | 20 | - | 50 | 27 | :i.b | 160 | .... | |
| Tí | -- | - | - | 10 | - | .... | 250 | ||||
| VII | 100 | < 10 | <10 | < 10 | ... | - | 80 | 27 | 27 | ... | .... |
| 30 | ... | ... | - | - | ... | - | |||||
| í 0 | 10 | < 10 | < 10 | -- | - | 80 | 27 | 27 | -- | - | |
| ~J· | - | — | — | - | — | - | - | ||||
| VIII | 100 | < 10 | < 10 | < 10 | - | - | 80 | 160 | 27 | - | |
| 3 0 | - | - | - | ... | -- | -· | .... | ||||
| 1 0 | < 10 | < 10 | < 10 | ... | - | 750 | 80 | 27 | .... | ||
| T | .... | ,,,,, | .... | ___ | |||||||
| IX | 100 | 10 | < 10 | < 10 | 10 | 27 | 27 | 18 | BO | ... | |
| 30 | - | - | - | 20 | ... | - | 80 | .... | |||
| 10 | 100 | 30 | <10 | .20 | -- | 80 | 27 | 1B | 80 | - | |
| - | - | - | 10 | - | .... | .... | 50 | - | |||
| x | 100 | 100 | < 10 | 20 | 20 | - | 27 | 27 | 18 | 250 | -- |
| 30 | ... | ... | - | 30 | -- | - | - | BO | ... | ||
| 10 | < 10 | , 10 | < 10 | 30 | - | 18 | 50 | 27 | 50 | .... | |
| 3 | -- | ; - | - | 30 | ... | -- | ·- | .... | 250 | ||
| XI | 100 | < 10 | 10 | < 10 | 30 | -· | 1B | 27 | 27 | 50 | - |
| 3 0 | - | - | 10 | -- | - | ... | 250 | - | |||
| 10 | < 10 | 30 | < 10 | 10 | - | 18 | 80 | 80 | 80 | ... | |
| 3 | - | - | - | 20 | - | - | 750 | -· |
•S jT λ
EXjQiLaxL.13
A k t í v n e? lá t. k y , z í s k a n é p o cl ľ a p r e d c h á d z a j ú c i c: h p r í k 1 ά d o v až 5, 9 a 10, sa použili ako prospešná prísada do kozmetických prípravkov, určených na dennú starostlivosť o vlasy a telo, pričom obsah týchto látok bol v rozsahu O,01 ..... 10 hmotnostných 7. v závislosti od typu prípravku, metódy apli.....
kácie a frekvencie používania, predpokladanej pre špecifický prípravok.
Claims (14)
- P A T EN T O V'É MÁR O K Y
1. Z 1 ú č e n i n a po A m a d o r i h o p r e š m y k u v z o rc a R j _NH._ R 2 , kde Ri zahrnú j e 1 - a m i n o -1 -- d e o i·; y - 2 - ketózu, odvodenú od šacha ľ'i- dového radikálu, s výhodou v jeho D-f or m e ·, vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z glukózy, x y lózy , galaktózy, ramnózy, fruktózy, manózy , 2-deox : y - g 1 u k ó z; y, 6-deoxy- glukózy, glukozamínu a galaktozamínu, aRa zahrnuje aminokyselinu alebo - s výhodou s malou moleku.....lovou hmotnosťou, predovšetkým menej neí 1000 dal tonov- p e p t. i d ový radikál, s výhodou v jeho L-forme, vybraný zo skupiny, ktorá obsahuje serín, glycíyn, prplín, histi.....d í n , a r g i n í n , a 1 a n í n , k y se 1 i n a k y s e 1 i na g 1 u. támová, fenylalanín, treonín, cysteín, cystín, glutamín, asparagín, metionín, tyrozín, hydroxyproli n, tryptofán.valín, izoleucín, lyzín a leucín. - 2. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Ri zahrnuje? sacharide v ý r a d i k á 1, v y b r a n ý z o skúpi n y D -- g 1 u k ó z y a ú - g a 1 a k t ó z y ..
- 3. Zlúčenina podľa nároku 1 alebo 2, kde Ra zahrnuje a m i n o k y s e 1 i n o v ý r a d i k á 1 , v y b r a n ý. z o s k u p i n y k .y s e 1 i n y L-glutámovej, kyseliny L-<sfcŕSri^/^j a L-serínu.
- 4. Zmes zlúčenín podľa nároku 1.
- 5. Spôsob výroby najmenej jedného reakčného produktu vzorca R.t ' -NH-Ra ' > kde Rt ' zahrnuje 1 -•-amino-· 1-deoxy-2-ketózu, odvodenú od'monosacharidu, oligo-, alebo - s výho.....dou s malou molekulovou hmotnosťou, najmä menej než 1000 daltonov - polysacharidu, a Ra' zahrnuje aminokyse1inový alebo - s výhodou s malou molekulovou hmotnosťou, predovšetkým menej než 1000 daltonov -- peptidový radikál, kde najme.....nej jedna látka, vybraná zo skupiny aminokyselín a - s výhodou s malou molekulovou hmotnosťou, najmä menej než .1.000 daltonov - peptidov a najmenej jedna druhá látka, vybraná zo skupiny monosacharidov, oligo--, alebo - s výhodou s malou molekulovou hmotnosťou,' najmä menej než 1000 daltonov - polysacharidov, reagujú spolu pri zvýšenej teplote - prípadne pod tlakom - a/alebo.v prítomnosti nižšieho alkoholu, a potom sa intermediát<y) podrobí(ia) Amadoriho prešmyku a/alebo Maillardovej reakcii.
- 6. Spôsob podľa nároku 5, kde reakcia sa uskutoční v prítomnosti aminokyseliny, ktorá má dve karboxylové skupiny, a pufmvacej soli, s výhodou hydrogénuhl ičitanu sodného v môlovom pomere 1:1.
- 7. Spôsob.-^ podľa nároku 5 alebo 6, kde najmenej jeden monosacharid reaguje s' najmenej jednou monoaminokyse1 inou a mólový pomer monosacharidu(ov) k tejto(týmto) aminokyseline(ám) je medzi 2 : 1 a 1 : 1, s výhodou 1.5 : 1.13» Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 5 až 7, kde reakcia cukru(ov) -a/alebo polysacharidu(ov) s aminokyse1 i..... nou(ami) a/alebo peptidom(ami) sa uskutočňuje v koncentrovanom vodnom roztoku.· pri teplote 75 - 90 °C, a následný Amadoriho prešmyk sa uskutoční pŕ.i tej istej teplote ..... prípadne pod tlakom so súčasným alebo následným odstránením rozpúšťadiel - až kým reakčná zmes nenadobudne svetlooranžovohnedú farbu.
- 9« Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 5 až S, kde zmes monosacharidov toho istého zloženia a· v tom istom hmôt..... nostnom pomere, ako sa vyskytujú v extrakte z prírodnej rašeliny, sa kombinuje so zmesou zlúčenín aminokyselín toho istého zloženia a v tom istom hmotnostnom pomere, ako sa vyskytujú v uvedenom extrakte. - a prípadne s anorganickými stopovými- prvkami, ktoré sa vyskytujú v uvedenom extrakte -· pričom výsledná zmes látok -reaguje v prítomnosti vody ako rozpúšťadla pri zvýšenej teplote - a prípadne pod tlakom a/alebo v prítomnosti nižšieho alkoholu - a potom sa výsledné produkty rozpustia a reakcia pokračuje, aby došlo k Amadoriho prešmyku a/alebo Mai11ardovej reakcii, ktorá sa zastaví, keď reakčná zmes nadobudne oranžovohnedú farbu, a potom sa reakčná zmes suší.\26 10. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 5 až 9, kde sušený produkt sa čistí stĺpcovou chromatografiou, pričom sa zbierajú špecifické frakcie, spôsobujúce redukciu ferikyani.....du draselného.'1'1. Použitie najmenej jednej zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, alebo najmenej jedného N-substituovaného reakčného produktu všeobecného vzorca R-j. '.....M H.....R;.;', k d e R i za h r n u j e 1 - a m i n o --1 ·- d e □ ;·: y -- 2 - k e t ώ z o v ý r a d i k á 1, o d v o d e.....ný zo skupiny monosacharidov, oligo- a - s výhodou s malou molekulovou hmotnosťou, predovšetkým menej než 1000 dal tonov ..... polysacharidov, a Rz ' zahrnuje aminokyselinový alebo ..... s výhodou s malou molekulovou hmotnosťou, pred o vše t k ý m m e?..... nej než 1000 dal tonov - peptidový radikál, na výrobu farma.....ceutických prípravkov na indukovanie tvorby cytok ínov v ľud.....ských alebo cicavčích bunkách.
- 12. Použitie podľa nároku 11, kde uvedený reakčný pro.....dukt sa syntetizuje podľa ktoréhokoľvek z nárokov 5 až 9 a aspoň čiastočne v ňom prebehol Amadoriho prešmyk a/alebo ľ'l a i 11 a r d o v a r e a k c i a, na lieč e n i e a / a 1 e b o p r e v e n c i u h e m a t o 1 o.....gických a/alebo imunologických chorôb a/alebo stimulovanie i tn u n i t n é h o s y s tému ľudí a / a 1 e b o c i c a v c o v.
- 13. Použitie podľa nároku 11 alebo 12, kde Rj. ' je radi.....kál B-formy monosacharidu, s výhodou vybraného zo skupiny, z a h r n u j ú c e j g 1 u k ώ z u, ; ·; y 1 ó z u, g a 1 či k t ó z u, r a m n ó z u, f r u k t é z u, manózu, 2......deoxy-glukózu, 6-deaxy~ glukózu, glukózam í n a galaktozamín.
- 14. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 11 až k d e Rz ' j e r a d i k á 1 L - f o r m y s výhodou vybraných za skupiny cín, prolín, histidíri, arginín a tn i n o k y s e 1 i. n y ale b o p e p t i d u k torá a lanín obsahuje kyse1inu kyselinu glutámovú, fenylalanín, t r e o n í n , c y s t e í n , c y s t í n , glutamín, asparagín, metionín, tyrozín, hydroxyprolín, tryp..... tofán, valín, izoleucín, lyzín a leucín.
- 15. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 11 kde uvedený reakčný produkt je prítomný spolu s farmaceuti cký prijateľným nosičom a/alebo adjuvansom a/alebo pr í padne mastivom v hmotnostňom pomere reakčného produktu ku zvyšným zložkám medzi 1:1a 1 : 100, s výhodou 1 : 8 a 1 : 20, a najvýhodnejšie okolo 1 : 9.
- 16. Použitie podľa nároku 15, kde uvedené reakčné pro- dukty sú prítomné v zmesi s laktózou a mastivom, pričom hmotnostný pomer laktózy k mastivu je medzi '20 : 1 a lOOsl, s výhodou približne 50 : 1.
- 17. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 11 až 16, kde uvedené reakčné produkty sú prítomné v množstve 0,,01--10 h m o t n . Z, sv ý h o d o u 0,01-1 . h m o t n . 7. ·, n a j m ä 0 „ 0 5.....0.. 1 0 h m o t n ..Z v p r í p r a v k o c: h pri s p ô s o b e n ý c h p r e k o z m e t i c k é a p 1 i k á c i e..
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL29346492A PL171023B1 (pl) | 1992-02-13 | 1992-02-13 | Sposób wytwarzania nowych induktorów cytokin |
| EP92103614 | 1992-03-03 | ||
| PCT/EP1993/000327 WO1993016087A2 (en) | 1992-02-13 | 1993-02-11 | Amadori reaction compounds and products, process for their manufacture, and their use |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK86994A3 true SK86994A3 (en) | 1995-02-08 |
Family
ID=26130822
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK869-94A SK86994A3 (en) | 1992-02-13 | 1993-02-11 | Amadori reactions compounds and products, process for their manufacture, and their use |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5723504A (sk) |
| JP (1) | JPH07506344A (sk) |
| AT (1) | ATE187734T1 (sk) |
| AU (1) | AU672595B2 (sk) |
| BG (1) | BG62172B1 (sk) |
| BR (1) | BR9305878A (sk) |
| CA (1) | CA2130106A1 (sk) |
| CZ (1) | CZ285200B6 (sk) |
| DE (2) | DE69327310D1 (sk) |
| ES (1) | ES2072244T1 (sk) |
| FI (1) | FI943733A0 (sk) |
| GR (1) | GR950300017T1 (sk) |
| HU (1) | HUT70434A (sk) |
| MX (1) | MX9300759A (sk) |
| NO (1) | NO304026B1 (sk) |
| RO (1) | RO115633B1 (sk) |
| RU (1) | RU2141337C1 (sk) |
| SG (1) | SG52390A1 (sk) |
| SK (1) | SK86994A3 (sk) |
| TW (1) | TW302368B (sk) |
| WO (1) | WO1993016087A2 (sk) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5629412A (en) * | 1994-07-11 | 1997-05-13 | Glinskii; Guennadi V. | Synthetic glycoamines that promote or inhibit cell adhesion |
| FR2746316B1 (fr) * | 1996-03-19 | 1998-06-12 | Guerlain | Nouvelles compositions cosmetologiques ou dermatologiques |
| EP1014958A1 (en) * | 1996-06-27 | 2000-07-05 | The Picower Institute For Medical Research | 3-alkylamino-2-hydroxy-4-hydroxymethyl-2-cyclopenten-1-one advanced glycosylation endproducts and methods of use therefor |
| DE19705233A1 (de) * | 1997-02-12 | 1998-08-13 | Froelich Juergen C | Verfahren zur Herstellung einer Formulierung enthaltend Arginin |
| GB0319463D0 (en) * | 2003-08-20 | 2003-09-17 | Givaudan Sa | Compounds |
| TW200925268A (en) * | 2007-12-06 | 2009-06-16 | Mallinckrodt Baker Inc | Fluoride-containing photoresist stripper or residue removing cleaning compositions containing conjugate oligomeric or polymeric material of alpha-hydroxycarbonyl compound/amine or ammonia reaction |
| JP2012140360A (ja) * | 2010-12-28 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | 抗酸化剤、化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
| JP2012140378A (ja) * | 2010-12-29 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
| JP5835894B2 (ja) * | 2010-12-29 | 2015-12-24 | クラシエホームプロダクツ株式会社 | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
| JP2012140377A (ja) * | 2010-12-29 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1514910A (en) * | 1974-07-02 | 1978-06-21 | Unilever Ltd | Amadori compounds and their use to flavour foods |
| US4629692A (en) * | 1982-12-06 | 1986-12-16 | Miles Laboratories, Inc. | Immunoassay for nonenzymatically glucosylated proteins and protein fragments an index of glycemia |
| DE3405841A1 (de) * | 1984-02-17 | 1985-08-22 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | N-acylierte 1-alkylamino-1-desoxy-ketose-derivate, verfahren zur herstellung und ihre verwendung |
| DE3601472A1 (de) * | 1986-01-20 | 1987-07-23 | Fresenius Ag | Verwendung von umsetzungsprodukten von reduzierenden zuckern und serotonin oder serotonin-precursoren zur behandlung cerebraler stoerungen |
| GB2218102B (en) * | 1988-04-08 | 1992-09-16 | Sandoz Ltd | Calcitonin peptide derivatives |
| HU217370B (hu) * | 1991-03-16 | 2000-01-28 | Torf Establishment | Tőzegből származó, bioaktív termékek, hatóanyagként ezeket tartalmazó gyógyászati és kozmetikai készítmények, valamint eljárás e gyógyászati készítmények előállítására |
-
1993
- 1993-02-11 JP JP5513786A patent/JPH07506344A/ja not_active Ceased
- 1993-02-11 DE DE69327310T patent/DE69327310D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-02-11 RU RU94040167A patent/RU2141337C1/ru active
- 1993-02-11 SG SG1996003877A patent/SG52390A1/en unknown
- 1993-02-11 BR BR9305878A patent/BR9305878A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-02-11 CA CA002130106A patent/CA2130106A1/en not_active Abandoned
- 1993-02-11 AT AT93903950T patent/ATE187734T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-02-11 AU AU34966/93A patent/AU672595B2/en not_active Ceased
- 1993-02-11 WO PCT/EP1993/000327 patent/WO1993016087A2/en active IP Right Grant
- 1993-02-11 ES ES93903950T patent/ES2072244T1/es active Pending
- 1993-02-11 CZ CZ941945A patent/CZ285200B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-02-11 DE DE0632813T patent/DE632813T1/de active Pending
- 1993-02-11 HU HU9402347A patent/HUT70434A/hu unknown
- 1993-02-11 RO RO94-01361A patent/RO115633B1/ro unknown
- 1993-02-11 US US08/284,635 patent/US5723504A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-02-11 SK SK869-94A patent/SK86994A3/sk unknown
- 1993-02-12 MX MX9300759A patent/MX9300759A/es unknown
- 1993-03-23 TW TW082102133A patent/TW302368B/zh active
-
1994
- 1994-08-05 BG BG98956A patent/BG62172B1/bg unknown
- 1994-08-08 NO NO942930A patent/NO304026B1/no unknown
- 1994-08-12 FI FI943733A patent/FI943733A0/fi unknown
-
1995
- 1995-04-30 GR GR950300017T patent/GR950300017T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE632813T1 (de) | 1996-02-15 |
| SG52390A1 (en) | 1998-09-28 |
| CZ285200B6 (cs) | 1999-06-16 |
| AU672595B2 (en) | 1996-10-10 |
| NO942930L (no) | 1994-08-08 |
| JPH07506344A (ja) | 1995-07-13 |
| HUT70434A (en) | 1995-10-30 |
| US5723504A (en) | 1998-03-03 |
| RO115633B1 (ro) | 2000-04-28 |
| RU94040167A (ru) | 1996-07-10 |
| BR9305878A (pt) | 1997-08-19 |
| FI943733A (fi) | 1994-08-12 |
| FI943733A0 (fi) | 1994-08-12 |
| ATE187734T1 (de) | 2000-01-15 |
| HU9402347D0 (en) | 1994-10-28 |
| ES2072244T1 (es) | 1995-07-16 |
| CZ194594A3 (en) | 1994-12-15 |
| CA2130106A1 (en) | 1993-08-14 |
| NO942930D0 (no) | 1994-08-08 |
| NO304026B1 (no) | 1998-10-12 |
| BG62172B1 (bg) | 1999-04-30 |
| BG98956A (bg) | 1995-07-28 |
| WO1993016087A3 (en) | 1993-09-16 |
| AU3496693A (en) | 1993-09-03 |
| DE69327310D1 (de) | 2000-01-20 |
| GR950300017T1 (en) | 1995-04-30 |
| WO1993016087A2 (en) | 1993-08-19 |
| TW302368B (sk) | 1997-04-11 |
| RU2141337C1 (ru) | 1999-11-20 |
| MX9300759A (es) | 1993-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5736519A (en) | Peptide, a method for its preparation and a pharmaceutical composition containing the peptide | |
| JPH02500275A (ja) | 潰瘍の予防のための方法及び組成物 | |
| SK86994A3 (en) | Amadori reactions compounds and products, process for their manufacture, and their use | |
| EP0818462B1 (en) | Glu-trp comprising tripeptides | |
| RU94044534A (ru) | Амино-производные тиазола, способы их получения и содержащие их фармацевтические композиции | |
| JPH07505371A (ja) | 免疫調節活性を有する新規親油性オリゴペプチド | |
| EP3392263A1 (en) | Polypeptide compound, preparation method therefor and use thereof | |
| PL171319B1 (pl) | S posób wytwarzania kompozycji przydatnej do uzytku farmaceutycznegoi/lub kosmetycznego PL PL PL | |
| Thierry et al. | Synthesis and activity of NAcSerAspLysPro analogs on cellular interactions between T-cell and erythrocytes in rosette formation | |
| US4399124A (en) | Peptides having immunostimulating properties and pharmaceutical compositions containing them | |
| AU665789B2 (en) | Pharmaceutical lysine-containing polypeptide compositions and methods of use thereof | |
| EP0632813B1 (en) | Amadori reaction compounds and products, process for their manufacture, and their use | |
| HU208160B (en) | Process for producing t-butyl-oxycarbonyl-1-tyrosylpeptidoglycan monomer and its derivatives marked with 125 i, as well as pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
| CA2011874C (en) | Sdk peptides, a preparation process of the same and therapeutic compositions containing them | |
| US6458761B2 (en) | Synthetic, statistic thymic peptide combination and its use as a preparation with immunological and/or endocrinological effect | |
| JPH0253799A (ja) | 新規ペプチド及び抗菌剤 | |
| GR3031254T3 (en) | Novel derivatives of peptides therapeutically active in the cascade sequence for blood coagulation, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing same | |
| GB1568195A (en) | Synthetc peptides | |
| PL171023B1 (pl) | Sposób wytwarzania nowych induktorów cytokin | |
| JPS63141996A (ja) | 新規活性ペプチド | |
| JPH07506564A (ja) | 医薬的ペンタペプチド組成物およびその使用法 | |
| JPH02115198A (ja) | 動物コラゲナーゼ阻害剤 | |
| JPH06256389A (ja) | 新規なペプチドおよび免疫賦活剤 | |
| JPH03141227A (ja) | 免疫強化剤 |