TW302368B - - Google Patents

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Description

A6 B6 S02368 五、發明説明(1 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明涉及新的阿馬多瑞反應化合物和産物,其生産 方法以及這些化合物和産物的新用途。所説化合物和産 —κ 物至少有部分經過如以下反應系統的阿馬多瑞氏重排和 /或美拉德反應: Η OH Η NH-R H 1/ 1/ 1 C -1 I c- I H - C - NH.R I 1 Η - C - OH 1 H - C _ OH C = 0 1 1 阿馬多瑞氏 i ΙΟ - C - Η + Η-,Ν-R ——> HO - C - H 一-> HO-C-H 1 重排 1 Η - C - OH H - C - OH Η - C - OH ο 1 ο 1 Η - C -1 1 H - C -1 I Η - C - OH I 1 ch2oh ch2oh 1 ch2oh 阿馬多瑞反應産物是已知的,它們是反應産物,例如, 氨基酸或呔與糖、寡糖或多糖經過阿馬多瑞氏重排的産 ( J . Biol. Soc、2 1 5 ( 1 9 5 5-)~~Henri Borsook等人)〇 所以,在DE-C-3914354中描述了從燕麥種子提取的氨基 酸和糖的水溶性糖蛋白。還有,EP-A-406087描逑了衍 生自革蘭氏陽性細®的細胞壁的水溶性多糖-糖呔復合 物,而旦J . B 〇 i 1 . C h e m . 1 9 8 5 , 2 6 0 / 9指出由蛋白質的 游離氨基與糖反應生成的阿馬多瑞反應産物已用NMR -光 譜學作了說明。 經濟部中央標準局员工消費合作社印*'1取 本發明現在描述如同申請專利範圍第1項描述的具體 的新的阿馬多瑞氏重排的化合物。優選和改進的方案是 -3 - 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐> 82.1. 20,000 A6 B6 五、發明説明(2 ) 在申諳專利範圍第2至4項中描述。在生物活性物質試 驗反應中上述化合物還原鐵氰化鉀《所説活性物質是由 糖和氨基酸反應生成的》 本發明邏涉及如申請專利範圍第11至17項描述的上述 化合物的新用途,同時,是一般的糖和氨基酸的阿馬多 瑞反應産物的新用途。過去沒有人就生物活性試驗過阿 馬多瑞産物提取物提純的各種步驟(為了除去惰性物質 ballast substances和雜質)。 來源於天然的免疫剌激藥物,如槲寄生屬(mistletoe) 提取物,泥炭提取物等,已確知其缺點在於處理大量材 料需昂貴的費用.,且只獲得幾克的活性物質;不能控制 雜質,因而可能導致毒性和副作用,由於複雜性質和幾 乎不^能重現的組分,當實際使用時還存在給藥問題。 來源於人造的同性質的産物_或産物混合物,如干擾素 或其他遣傳工程方法則費用更昂。而且,對於滲入人的 細胞壁來說,人的干擾素的分子量通常都太大,因此, 所施蕖劑只有小部能有效地起作用。而遣傳工程的産物 通常也有副作用,有些甚至有毒性。而且,它們之中有 些只在一天能有效地起作用,而第二天則不起作用,其 原因至今未明。 經濟部中央標準局S工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再項寫本頁) 裝- 現在,意想不到地發現幾乎任何經過至少部分阿馬多 瑞氏重排的簡單氨基酸/糖復合物沒有顯示以上所説的 缺點,相反,有意想不到的免疫活性。因此,它們可用 —j — · 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐) 82.1. 20,000 經濟部中央標準局W:工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明(3 ) 於藥物的配方和美容剤。這些低分子容易滲入細胞壁, 實際上起了營養物的作用。它們誘導€括腫瘤壊死因子 的天然干擾素和其他細胞素(cytokines)的形成。即使 給藥後三天,它們仍然顯示生物活性的刺激效果。該效 果随著阿馬多瑞氏重排的愎合物的增加而增大,再随著 復合物的分解的增大而減小。 單糖也可用多糖代替,最好是低分子量的,尤其是分 子量小於1000道爾頓的多糖代替,例如《聚糖,其反i 相似。多糖顯示生物活性,且它們變成寡糖後可保留一 些生物活性。 在此之前,人們對這些化合物的生物活性了解甚少。 今發現這些物質的混合物與人的白細胞接觸産生干擾素 和其他的細胞素。這叫做多細胞激活性(poly clonal activation)〇 在這些化合物影饗下,試驗産生的物質和檢驗生物活 性是可能的。所説生.物活性是以與特殊的細胞素有關的 國際單位表示的。這些化合物在純物質濃度在 /ml的範圍内有待別高的生物活性。在分子里,氨基酸 的特性比分子里糖部分的性質更重要。 在經過阿馬多瑞氏重排的L -天門冬氨酸與葡萄糖或半 乳糖的反應産物,當與人的白細胞接觸,並在37 °C, $ 5 % C 0 2的氣氛下,在組鏃培養介質中培育2 M、時將可 産生30-1(300抗病毒單位的干擾素。該干擾素是以用人 -5 - · 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐) 82.1. 20,000 (請先閲讀背面之注意事嗔再塡寫本頁)
J 丨裝· 五、發明説明(4 A7 B7
的癌细胞的生物檢定測量的β在這些化合物的影蜜下, 匯瘤鹿死的化合物也可産生。 具有上述意想不到的用途的産物的通式為: Ri - ΝΗ - R2 Ri 代表衍生自單糖、寡糖和多糖的1-去氧-2-酮糖殘基,所說 多糖最好是低分子量的,尤其是分子量小於1000道爾頓的 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 R 2 代表氨 子量的 因此,生 重排的化合 一種的單糖 代的衍生物 生物的其他 生物活性。 小於1 0 0 0道 在上式中 其是(但不 糖、木糖、 «萄糖、葡 酸的或所説 氨基酸為絲 丙氨酸、天 基酸殘基或妝殘基,所敦呔基,最好是低分 ,尤其是分子量小於1 0 G 0道爾頓的。 物活性化合物包括上述的持殊的阿馬多瑞氏 物或鳥同氨基酸化合物的N -取代的衍生物和 、寡糖或多糖,或一種氨基酸化合物的N-取 和多種的單糖、募糖和/或多糖,或這些衍 任何组合,它們中的每一痼组合都有足夠的 所説多糖最好是低分子置的,尤其是分子量 爾頓的。. ,優選的^ 可以是選自D -型單糖殘基,尤 是唯一)選自以下化合物的殘基:D-型葡萄 半乳糖、鼠李耱、果糖、甘露糖、6 -去氣-糖胺和半乳搪胺;R 2 可以是薛自L-型氛基 氛基酸的任何组合的其他的呔的殘基,所説 氨酸、甘氨酸、脯氨酸、组氨酸、精氨酸、 冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸、半胱 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(2IOX 297公釐) 五、發明説明(5 ) A7 B7 補充 2. al 月丨、 氨酸、胱氛酸、.谷氨匿胺、天冬匿胺、蛋氛酸、酪氨酸 、羥脯氨酸、色氨‘、纈氨酸、異亮ί酸、賴氨酸和亮 氨酸。 本發明還涉及如申請專利範圍第5項所描述的上述的 化合物和産物的生産方法,借此産生下式的一種中間體 ,該式為 N H-R' 其中R’是直碳鏈的1-去氧-2-酮糖殘基或單糖或寡糖或多糖的任 —種〇-橋型。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 代表氨基酸殘基或肽殘基,所説中間體是至少有部 分绖過阿馬多瑞氏重排和/或绖過美拉德反應。該反箧 是連缰加熱反應混合物,最好在壓力下,且同時或隨後 除去溶劑。該方法的優選方案是在申請專利範圍第6至 10項中描述。 在某些情況下,尤其是當使用含有兩β羧基的氨基酸 時,在該方法中加入缓衝鹽是有利的,所說缓衝鹽如碩 酸氫鈉,其莫耳比最好為1: 1。 己發現阿馬多瑞産物較易分解,且分解産物有暗褐色 和焦油般的性質,但组成未明的化合物己失去它們的生 物活性β所以,最好在反應混合物變為淡橙棕色時就停 止阿馬多瑞氏重排反應。 值得注意的是,當原不透明的氨基酸溶液變為清澈時 (阿馬多瑞氏重排之前)生成的中間體反應物易水解, -1Τ 身! 本紙張尺度逋用中國國家標牟(CNS ) Α4規格(210X297公釐) 302368 專利申請案第821〇2133號 ROC Patent Appln. No.82102133 中文説明臂修正頁-附件(―)
Amended Pages of thi7Chinese ______ 五、發明説明(谷 XAmenSI 1994) ---- 你印”1 .即該反應是可逆的。隨著重排的1 gj 産物變為更穩定,且顔色逐漸由淡黃运'變為淡接色,最 後,當阿馬多瑞氏重排象是完成時則爱為橙掠色。由重 排反匾中取出並試驗(按下文所述的各種方法)的樣品 證簧隨著阿馬多瑞氏重排處理,生物活性增大,而進一 步加熱導致分解時,生物活性減小。所説分解,其徴兆 是顔色變為暗褐色》如果反應混合物含有別的酮基1和7 或含硫的氨基酸,如半胱氨酸時,鐵氰化物迅速還原, 且會發生顔色變化;否則,它在3至5分鐘内就會發生 t Ί ,這是對阿馬多瑞氏重排發展程度的一種很好檢査方法 。.未反應的糖只在半個小時或幾痼小時後將顯示顔色變 化。 分離纯阿馬多瑞氏重排産物是按己知方法進行的.該 方法是基於將混合物裝於強陽離子交換劑(如 乂181^1'1“600或0〇^^\(:«),以水連缜地洗滌,在減壓下 蒸發洗出'掖的已選擇.的確定部分,將純化合物置於無水 甲醇中结晶(J · Ε · H 0 d g e a n d Β · Ε · F i s h e Γ, M e t h 0 d s in Carbohydrate Chemistry, Vol. II, Reactions of Carbohydrates, Academic Press, N.Y . London , 1963 ,
Page 105 - 106;或如前所引之Borsook>at al·;或J.
Dubourg and P. Devi I I iers) ° 按照本發明的方法,所有上述的衍生自單糖和氣基^ 化合物的優選的殘基保持不變。此外,慶選的糖作用物 8 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS〉Α4規格(210X297公釐) ^ -裝------訂-----Μ線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局負工消费合作社印裝 83. 3.10,000 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 A7 B7五、發明説明(7 ) 的混合物包括D-型的葡萄耱、木糖、半乳糖、E李糖和 果糖,它們的重量比為2 0 : 1 0 : 4 : 1 : .1 ,而優選的氨 基酸作用物包括L-型的絲氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨 酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮 氨酸和賴氨酸,它們的重量tb為2 0.6: 3 5.8 : 1 3 2 : 180 :360: 216: 160: 72: 68: 780〇 如己述,阿馬多瑞氏重排産物能還原鐵氰化鉀,1這_ 化學試驗反應提供了快速檢定由糖和氛基酸反應生成的 组合物的生物活性的依據。 已發現,在含水溶劑,最好是加低级醇的含水溶劑存 在下,於高溫(和任意壓力下)將按存在於天然泥炭提 取物的同樣成分和同樣重量比的單糖混合物與按存在於 天然泥炭提取物的同樣成分和同樣重量比的氨基酸化合 物的混合物及存在於該天然提取物的任意微量元素 反應,隨後延長加熱以使生成的産物進行阿馬多瑞氏重 排,同時'•或隨後除去溶劑,當反應混合物變為淡橙棕色 時停止重排反應,乾燥生成的産物,並以柱色譜純化該 産物,收集引致戡氡化鉀最大量還原的部分。 在一痼方案中,本發明藥物配方含有活性成分和藥學 上可接受的載體和/或佐藥和/或任意的潤滑劑,活性 成分與其餘成分的重量比在1 : 1和1 : 1 Q Q之間,較好是 1: 8至1: 2Q,最好是1: 9。所説活性成分是式Ri _R2'的至少的一種反應産物,或者是式R1-MH-R2的 i ' * - 9 - * ^ .裝 訂 f 冰 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 83.3. 10,000 A6 _-_B6_ 五、發明説明(8 ) 一種具體化合物。 另一镝有效的藥物配方中,除含有活性成分,還含有 乳糖和潤滑劑,乳糖與潤滑劑的重量比在20: 1和100: 1之間,最好是5 0 : 1。 這些藥物製劑是用於治療和/或預防血液學的和/或 免疫學的疾病和/或通過誘導細胞素的形成以剌瀲人的 和/或哺乳動物的免疫条统。 活性成分的另一種用途是在美容製劑方面。活性成分 存在於該裂劑中的含量為ο.(π-ΐ(α (重量),最好含量 為0.01-1% (重量),尤其是0.05-0. 1%的含量。這些美 容裂劑,除含有活性成分,還含有一般載體、佐藥、營 養成分和/或芳香料。 以下實施例將進一步說明和證實本發明,但這些實施 例並不限制本發明任何方面的i圍。 啻旃例1 放入加熱水浴旋轉'蒸發器中的25Π11燒瓶中裝人1.47g (0.01M) L-谷氨酸、0.84g(0.01M) NaHC03 、 0.91g D- 葡耱、0 . 9 1 g半乳糖扣3 . 0 0 m 1再蒸餾水。 經濟部中央標準局β工消費合作社印製 混合物加熱到8 0°C ,從而最好在減壓下蒸發掉5 0 %水 ,然後在大氣壓下加熱到80-82 °C,在此混度保溫120分 鐘,直至混合物變成橙色。之後,將漿狀濃縮水溶液減 壓蒸乾。由此得到的橙紅色固體反應産物榡為符號D-10 並貯存起來備用於生物試驗。 -10-· 82.1. 20,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS>甲4規格(210 X 297公釐〉 302368 A6 B6 經濟部中央標準局B工消費合作社印製 五、發明説明(9 ) 奮旅例2 放入加熱水浴旋轉蒸發器中的25ml贤瓶中裝人1.33g (0.01M) L-天冬氨酸、0.84g(0.01M) NaHC03、0.91g D-葡糖、0.91g半乳糖和3.0Qb1再蒸皤水。 將混合物攪拌著(利用旋轉法)加熱到80 °C,減壓濃 縮,從而蒸發總體積為1.5ml的水,然後在80-85 °C大氣 壓下處理,直至混合物變成淺橙色,歴時約60分鐘。反 應混合物為漿狀濃縮水溶液,然後將其減壓乾燥。所得 反應産物為乾燥的橙黃色粉末,標為符號D-11並貯存起 來備用於生物試驗。 奮掄例3 放入熱水浴旋轉蒸發器中的25b1燒瓶中裝入1.05g (0.01M)L -絲氨酸、0.91g D-葡糖、0.91g半乳糖和2.50 B 1再蒸播水。 將混合物攪拌著(利用旋轉法)加熱到85-92 °Ce 10 b 分鐘之後,溶液變成橙色。減壓,並將混合物蒸乾。燒 瓶壁上的反應産物形成了橙色透明層。刮掉反應産物並 研成末,標為符號D-12並貯存起來備用於生物試驗。 啻旆例4· 放入熱水浴旋轉蒸發器中的25ml燒瓶中裝入0.66g ( 0.0 0 5 M) D-天冬氨酸、0.42g( 0.0 0 5 M) MaHC03、0.45g ϋ-¾糖、0.4 5g半乳糖和3.0 Oral再蒸餾水。 將混合物加熱到8 (TC ,減壓蒸發,從而揮發掉绾體積 -11-· 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公坌) 82.1. 20,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫木頁) -装. 訂 經濟部中央標準局β工消費合作社印製 A6 B6_ 五、發明説明(10) 為1.5b1的水,然後於85°C大氣壓下處理。60分鐘加熱 後混合物變成橙色,減壓,並將所得漿狀濃缩水溶液蒸 乾。在殘餘物完全乾燥之前,往燒瓶中加入兩次l〇Bl無 水乙醇並蒸發以消除殘餘水分。由此得到的乾燥的反應 産物研成粉末,標為符號D-13並貯存起來備用於生物試 驗《 . 窖掄例5 為了以合成方式得到某種天然泥炭提取物的生物活性 部分的同等物,往放入加熱水浴旋轉蒸發器的燒瓶中裝 入 20.5mg L -絲氨酸、35.8ng L.-甘氨酸、35.8mg L -組 氣酸、1 3 2 . 0 m g L -精氨酸、1 8 0 · 0 m g L -丙氨酸、3 6 0 m g L -脯氨酸、2 1 6 · 0 b g L -酪氨酸、1 6 0纈氨酸、6 8 . 0異亮 氧酸、72.0ag L -亮氨酸、780.0mg L -賴氨酸、2000.0 mg D-# 萄糖、lOOO.Omg D -本_藶、400.[)mg D-半乳糖、 lOO.Omg D -鼠李糖、lOQ.Omg D -果糖和6.0ml再蒸皤水。 利用旋轉法攪拌混合物,並加壓加熱45分鐘以使溫度 由7 5 °C提高到8 6 在此期間,蒸發掉約3 m 1水,並將 基質完全溶解。然後,於85-86 °C大氣壓下處理混合物 以進行阿馬多瑞氏重排。在此期間,溶液迅速變成紅棕 色。減壓,並持绩84 °C加熱,從而同時蒸發掉溶劑。蒸 發结束後加入兩次15nil無水乙醇並使反應混合物乾燥。 將裝有乾燥過的反應産物的燒瓶置於氣化鈣乾燥器中乾 燥1 8小時,然後將反應産物研成粉末,得到约4 . 5 g粉末 -12-· (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) 丨裝· 訂 7 本紙張尺度速用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公爱> 82.1. 20,000 經濟部中央標準局员工消费合作社印製 A6 B6 五、發明説明(U ) 狀産物,標為符號ΕΚ 2-S。 將一份4g的該反應産物溶於20b1蒸餾水並置於尺寸為 25nm X 330bjb的色辑柱上,柱中裝有吸箸劑Anberlite050 X AD-2 (分析级)。柱子用0.4ml /分蒸餾水洗脱。收集 每次10ml體積级分到總體積為450b1 。用色譜法監測諸 级分含量,合併連串柱11-13的级分並減壓蒸發。這些 级分的待徽在於為高含量的阿馬多瑞氏重排反應産物( 用氰鐵酸鉀還原試驗得到證實)。産物以符號EK-S-11 貯存起來備用於生物試驗。 用8-10周齡雄性雌性兩種免疫的Balb/c小鼠進行測定 生物活性的生物試驗。小鼠的免疫是通過腹膜注射0.2 ml 10%羊的红細胞(8兄8〇懸浮液,即6><108値細胞而 進行的。這些紅细胞固定在具有以下組成的無菌Alsever (阿爾塞弗氏)溶液中: 一 . 葡糖 2 . 0 5g 檸檬酸鈉 〇 . 8g 氣化鈉 〇 · 42g 檸檬酸 0 . Q 5 5 g 再蒸餾水 100ml 往這種A 1 s e v e r溶液中以1 : 1的比率加入羊血細胞無 菌樣品,並將混合物在+ 4 °C保持至少3天。然後,將由 此穩定的红細胞無菌製樣並加到磷酸鹽缓衝溶液(PBS) 中以便將它們清洗出。紅細胞用PBS清洗兩遍,並以 -13-· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐) 82.1. 20,000 (犄先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) ;裝- 訂 經濟部中央標準局8工消費合作社印製 A6 B6_ 五、發明説明(12 ) 2000rpn離心分離10分鐘。洗出的細胞以於PBS中的10% 懸浮液形式使用。造種懸浮液用於Bali/ c小鼠的免疫。 待試驗的反應産物以所選剤量腹膜内(i.P)給藥或口 服(P.0)四次。第一次給藥在小鼠用BRBC免疫之前2小時 ,而剩下三次劑量在免疫之後以2 4小時間隔給藥。 各試驗的動物组用不同剤量的被測反應産物處理:10 π g / k g , 1 a g / k g , 0 · 1 n g / k g 和 0 . 0 1 π g / k g。對照的動物组 也用SRBC免疫,但不用被測物質。0.2ml PBS以同樣時 間間隔給藥。 各動物組一對照組和試驗組在所有試驗均由8-12個小 鼠構成。 在免疫之後第四天或(測定7S型抗體而言)第十天, 將小鼠用乙醚麻醉並通過眼球摘除而放血。把血液收集 到試管中。接著,將脊髓破fjfe取出脾臓。用該血液獲 得_定19S + 7S和7S型血凝抗體所需的血清,而脾_用於 製備能形成E -花结的細胞百分率和溶血活性測定用的細 胞。對於這種用途而言,將鼠脾臟粉碎。將所得脾细胞 懸浮於4°C約2ml Hanks介質中,以1.077密度的FicoU-Uropolin梯度成層,然後,於+4°C以3000 rpm離心分離 15分鐘。從内柑分離後,將淋巴细胞血沉棕黃色層置於 Hanks介質中( + 4°C)並以180〇rpm離心清洗兩次,每次7 -10分鐘。然後將脾細胞以能使其含有lx 10s個細胞的 比率懸浮於lffll Hanks介質中。 -1 4 - * 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐〉 82.1. 20,000 (請先閲讀背面之注意事項再瑣寫本頁) -裝· .π. A6 B6 ^02368 五、發明説明(13) (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 對於每次試驗,通過將一滴試驗用脾细胞懸浮液與一 滴當場製備的含4份D.2X錐蟲藍溶液嵇1份4.253ί HaCl 溶液混合物測定死细胞的百分率。在顯橄鏡下,對每 100値細胞测定死脾細胞的百分率。死細胞是海軍藍, 而明亮的細胞是活細胞。存在不高於10%的死細胞百分 率是臨界值;這種樣品必須從另外用途中消除。
測定細胞所進行的所有步驟應該在一锢放置在冰浴中 的無菌的硅化實驗室用玻璃設備中進行。 g旃例B .裝. 第一步,測定試驗的反應産物對産生溶血的抗體(P F C -IgM)數量的影響。試驗如下:把0.5ml 0.5%瓊脂糖溶 液放入試管中並保存在45 °C熱水浴中,摻入0.1ml 10% SRBC懸浮液(製法如上)。之後,加入密度為lXl〇e 個細胞/ ml的O.lffll脾細胞懸浮液,迅速攪拌混合物, Μ立即倒在以前披有瓊脂糖的載片上。將載片於37 °C保 溫2小時。接著再甩2小時,將試樣包覆以1 : 2 Q的比 率稀釋的豚鼠補體。試樣與該補體一起保溫之後,計數 空班形成細胞(PFC)的數量並重新計算為IX 106脾細胞 。各試驗進行兩次。 經濟部中央標準局8工消費合作社印製 在D-11物質以O.lmg/kg的劑量給藥之後,觀察以産生 溶血素IgM(PFC)的脾細胞數增加表逹的應答對SRBC的最 強放大率。該放大率為119%。當日劑量提高1Q倍逹到1 |^/1^時,應答的放大率降到53%。 -15-· 本紙張度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐) 82.1. 20,000 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明(丨4 ) 反應産物D-12表明最強的活性一在lmg/kg的劑S增加 I · . · I 58% 〇 I ' 該試驗的反應産物EK2-S-11在0.1 mg/kg劑量表現了 : 最強的活性(增加65%)。劑量高10倍,即lmg/kg,增 - 加率稍有下降,即52 %。 以lmg/kg劑量試驗的反應産物D-13造成增加率為40% 。當劑量提高到1 0 hi g / k g , ΚΓ增1 0倍,應答僅為1 4 &增— 丨 加率。 ! ! g旃例7 , 1 3 , 也進行血凝試驗以測定抗-S R B C型1 9 S + 7 S和7S抗體之水 : 平。為了測定19S-IgH型抗體水平,在用SRBC免疫後第 四天製備鼠血清;而對測定7 S - I g G型抗皚水平,這種製i 備是在小鼠用SRBC免疫之後第10天進行的,該天數涉及 ί -I 用SRBC免疫小鼠中所給類型想_遷的最大計數的天數β | Α.測定19S + 7S抗體劑數 \ 將血樣''以35Q.0 rpm離心分離30分鐘。從由此裂得的各 I I 樣品收集血清並置於56 °C熱水浴中30分鐘以使補體減活 | β接箸,採用澉量滴定劑和各具有容積為2 5 0 a 1的ϋ -型 : ; 徹孔板來裂備每種血清幾種不同稀釋度的多種溶液(由 1 : 1 - 1 : 4 0 9 6 ) ^稀釋的血清液於室溫保溫1小時。每 種血清中加入1滴1¾ SRBC的PBS憨浮液(製法如上); 1 混合物於3 7 °C.再保溫2小時,然後貯存在+ 4 第二天 I ' !取结果。仍造成血凝作用的最大稀釋度被議為是抗體劑ί · i !, -1 6 -. ---------j -裝------訂-----{線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐〉 83.3. 10,000 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A6 B6 五 '發明説明(15) 數。孔板底部的環形物是血凝發生的微兆。孔板底部的 扭扣狀物形成被議為是負结果,即無£凝發生。 為了統計分析結果,使試驗物中血清的稀釋度增量與 對照組的進行比較》 劑量為lig/kg的反應産物D-11使IgM計數提高了 2.57 倍。在剤量10倍提高的情況下,與對照组柑比,剌激作 用提高了 3 . 5倍〇 本試驗中,反應産物D-12表現出較弱的活性。在0.1 ag/kg劑量,它使IgM計數提高2倍;而在lmg/kg劑量, 提高1 . 4倍。 反應産物EK2 -S-11在本試驗中表現出最強的活性。 在0.1mg/kg劑量,它使IgM計數提髙4.3倍,而在1|!^/]1£_ 劑量,提高3 . 6倍。 劑量為lfflg/kg的反應産物D-13使IgM計數提高3倍, ίϊό高於10倍劑量,提高1.5倍。 Β .測定7 S抗體計數. 將試驗的減活血液以1 : 1的比率為0 . 1 Μ的2 -疏基乙醇 液合併,並將混合於37 °C保溫30分鐘。2 -疏基乙醇破壞 了 19S-(IgM)型免疫球蛋白,而7S-(IgG)型免疫球蛋白 對2-疏基乙醇的作用不敏感。 保溫3 0分鐘之後,用1 5分鐘的時間將溫度冷卻到+ 4 °C 來中止反應。接箸,按上述測定I 9 S -抗體劑數的類似方 式製備若干種稀釋液並與1% SRBC懸浮液合併;於37 Ό -1 7 - * 表紙張尺度適闬中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公货〉 82.1. 20,000 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) .裝· .11 A6 _B6_ 五、發明説明(16) 2小時保溫之後,將樣品貯存在+ 4 °C。按照上述測定血 凝作用計數的標準第二天評估結果。類'似地,以1 : 1的 比率混合1¾ SRBC懸浮液與PBS來進行對照試驗。 當按上述方法試驗物質D-11時,在lmg/kg劑量,該物 質使抗體IgG的産率提高3.16倍。在10mg/kg劑,量高 2 · 2倍。 分別以〇·1 ng/kg和1 ng/kg劑量試驗的反應産物D-12 剌撖抗體IgG的産率提高1.3倍,10 mg/kg劑量提高1.5 倍。 0.1 11^/1^劑量的反應産物EK-S-11剌瀲IgG産率提高 1.9倍,而1以/1^劑量提高2.89倍(與對照相比)。 對於各批量生産或按照本發明合成並給出上述免疫應 答的生物活性反應産物的各組分獲得的試驗A和B的結 果按照 T -學生試驗法(T-student method; or=0.05)統 #分析。各試驗劑量獲得的結果與平行對照試驗進行比 較,並顯示出生物活.性的增加率。 啻旃例8 按照實施例1 - 5獲得的生物活性反應産物組也進行如 此試驗,其中測定形成E -花結的脾细胞的百分率。 經濟部中央標準局β工消費合作社印製 往55〇α1 Hanks介質中加人250//1的1¾ SRBC懸浮液-和待試驗的濃度為IX 10s個細胞/ ml的2 50# 1細胞。 在37 °C,將每種這樣的樣品在配有振盪器的熱水浴中保 溫1 5分鐘。然後,將其在+ 4 °C再貯存2 0小時。在懸浮液 "1 8 ~ * 82.1. 20,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐) C:368 A7 B7 五、發明説明(丨7 ) 經濟部中央揉準局員工消費合作社印製 用卜3滴晶體紫著色之後測定用S R B C形成E -花结的脾細 胞的百分率。 將各樣品測定3次脾细胞的百分率(在每種情況下以 4 0 0烜脾細胞計)。 為了進行统計學評估,在待測物質和對照組之間進行 具有E-花结的脾细胞數量的百分增量的比較。 在本試驗中,顯示出最強的剌激作用的是劑量為Tnfg /kg的反應産物D-1U63%)和EK2 -S-ll(7(U)e在低10倍 劑量(即0 · 1 m g / k g ),該值分別降到4 5 %和5 7 %。 j 與對照组相比,1 rag/kg劑量的反應産物D-12使形成 E -花结的能力提高了 2 2 %。低1 0倍的劑量_ (即〇 . 1 n g / k g )的各值為2 9 %。 反應産物D-13在1 rag/kg劑量顯示出最大作用(58%), 而在更高劑量,作用稍稍下降。 按照以下試驗評估合成的化合物的生物活性: 1 .按照 B a'c h 和 D.arde.nne的方法(〇611.,1111111]11〇1.3,1-1 6,1 9 7 2 )進行形成E -花结的脾细胞百分率_定試驗 » 2. 按照由 Hishell 和 Dutton改進的 Jerne法(J. Exp. Hed 1 2 6 , 4 2 3 - 4 4 2 , 1 9 6 7 )進行産生丨gM型溶血性抗體的細 胞數潮定試驗,以及 3. 按照 Adler 活性血令法(J. Immunol. 95, 2 _6- 38, 39 -4 7 , 1 9 6 5 ),用徹孔板進行血凝1 9 S + 7 S和7 S抗體劑數 -19-· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 83. 3. 10,000 ---------1.-裝------訂------J 線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A6 B6 1.33g(0.01H) 0 . 84g (0.01M) 1 0 . 0 0 g 五、發明説明(18 ) 潮定法(J. IniHUnopharmacol· 4, 43-52, 1982) 實施例9 、 置於熱水浴中的旋轉蒸發器燒瓶中裝入: L-天冬氨酸 N aHCO a 平均分子量為3000道爾頓的水 解的《聚糖 l〇.〇〇ml 再蒸餾水。 將混合物於70 °C加壓加熱,直至固體物完全被溶解並 在此期間用蒸餾的方法排出約3 nl水為止(加熱時間約 為30分鐘)。裝有該溶液的燒瓶鬆鬆蓋住,置於蒸器滅 菌器中並於121 °C加壓加熱4Q分鐘。冷卻之後、所得橙 黃色溶液用1 5 in 1水稀釋,利用離心法淨化並用入口温度 + 1 6 (TC。出口溫度+ 8 5 °C的空噴霧乾燥。得到易溶於 水的10.5 g淺米色反應産物。 這種反應産物中存在阿馬多瑞氏重排産物得到了 Borsook, Abrams和 Lr>_wy介绍的鐵氰酸鉀法[J. biol, (請先閱讀背面之注意事項再塡寫本頁) .裝. •ΤΓ. 實 證 法 譜 色 和 免 的 物 産 述 上 了 實 證 法 驗 試 12物 1-生 11的 ,绍 5)介 95中 (1例 ,施 15實 2面 m 笱 θ ^Rn 經濟部中央標準局κκ工消費合作社印製 似 類 的 出 示 顯 所 劑 製 的 到 得 糖 單 簡 用 與 性例 活胳 疫奮 為 約 : 量 入子 裝分 中均 瓶平 燒 形og. 錐5 糖 聚 ¾ 的 解 水 的 頓 爾 道 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐) 82.1. 20,000 經濟部中央標準局3工消費合作社印製 A6 B6 五、發明説明(19) 1 · lg L-脯氛酸 4 . 0 b 1再蒸餾水。 ~ 利用攪拌的方法溶解内容物。將由此得到的均勻混合 物置於蒸汽滅菌器中並於110 °C加壓加熱40分鐘。所得 透明的橙色液用20ml再蒸餾水稀釋並用離心法淨化。將 清亮液噴霧乾燥。 得到易溶於水的5.3g反應産物。免疫活性與按照前述 實施例的其它試驗中所觀察到的類似。 奮旃例1 1 用傳統方法測試化合物在小鼠而不是在人中的生物活 性。為此,引入了新的生物檢定法。該方法測定了用按 照實施例1-5, 9和10的反應物處理的人體末梢血液白細 胞(PBL)中釋放出的細胞素的量和活性。這種細胞素是 激素狀蛋白質,在實際上所免疫反應以及決定箸體内 平衡的調節過程中起著重要作用。 舖朐羞袢檢宙 在人肺腺癌細胞糸A549中(包括ATCC CCL 185在内) 測定反應産物的細胞毒性。細胞單層胰蛋白酶化,於 dulbecco改進的Engle最小基本介質(DMEM)加1%牛血清 (CS)中的2X 10 s個細胞/ ml的懸浮液與不同劑量的藥 物混合,在塑料微孔板中接種,並於3 7°C保溫4 8小時。 C D %是按照用中性红於1) Μ E Μ的0 . 0 1 5 X溶液箸色而測定的 、造成約50 %細胞培養破鹿的化合物的最低濃度。 -2 1 - * 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS>甲4規格(210 X 297公坌) 82.1. 2 0,000 {請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 丨裝. 訂. 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K Γ δ 胞 細 红 化 溶 X S 8 C —r F 約ί 有清 含血 Π 牛 每胎 (% 胞10 细了 白充 的補 得於 獲置 體者 供後 艏 , 一 }和 h.由胞胺 et僅細醛 Μ用白氨 on使锢谷 (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) 的 素 菌 抗 的 量 批 各 試 測 先 預 0 中 基 養 培 裂 絲 非 的 用 養 培 L B P 用 使 只 中C 基Ina 養ar 培ph 的)( 積HA 容(P IB1素 1 集自 到凝得 加物和 體植} 導是en 誘體ed 素導SW 胞誘 , 細素1S 將胞ca 〇 細Π1 CS的he 7. C 用 Ϊ 6 照 η 對F1 -裝-
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溫 保 p 7 3 · 於 下 氛 氣 氣 空 的I 在 存 貯 液 清 上 0 親 分 心 離 行 進 並 時 小 内 周 11- 在 並 °c 和 P T 0 定褥 檢平 性 活 Ϊ巾 0%板 10孔 ί0 素的 菌中 抗ΕΗ ΠΗ Μ 年 D 胺的 0 ) 氨素 谷番 一 -twt·- L 鍵 li 'ff s / C σϋ % ο ο ο 1Χ IX 有和 含素 於霉 處青 在nl / 經濟部中央標準局S工消費合作社印製 的 釋 稀 板 孔 將 0 層 ο # C 0马 *-% 合 5 匯含 的在 胞並 細中 9 4 層 5 A 單 備胞 製細 於 中 氣 空 的 到時 加小 口印 2 樣溫 ^保 rL °c 毒 病 炎 肌 心 腦 用 並 滌 洗 胞 细 將 後 然 疫 免
作 31 理 病 胞 細 毒 病 使 後 之 時 小 8 4 溫 保 為 義 定 度 定 滴 的. N 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公辇) 82.1. 20,000 A6 B6 五、發明説明(21) 用降低50 %的IFN樣品的稀釋度。也可採用為測定ELISA 掃描器中細胞致死率的MTT (3-〔4, 5=二甲基瞎唑- 2- 基〕-2,5 -二苯基溴化四唑銪法(Hansen, M.B., Nielsen, S.E., and Berg, K · :Re-exainatiοn and Further Developnent of a Precise and Rapid Dye Method for Measuring Cell Growth//Cell Kill. J . I n m u η o . M e t h ·,1 9 8 9 , 1 1 9 , 2 0 3 - 2 1 0 )。I F N s 的試驗室 標準法也包括在所有檢定方法中:重組人體IFN-r (Genentech Inc., USA, specific activiy 2 x 10 8 單 位/fflg),自然人體白細胞IFN-cr (3X106 IU/ml)和 I PN- y ( 2 x 1 0 6 I U/bi 1)(得自 Dr. K . Cantel 1 , Helsinki, Finland) 〇 睡廇鹿死庆1; (TNP)檢宙 按照F 1 i c k和G i f f o r d法測定L S 2 9细胞中的T N P细胞毒 活性(Flick, D. A . , Gifford, 6.E. :Comparison of in Vitro Cell Cytotoxic Assays for Tumor Necrosis Factor . J. Immunol . H e t h . , 68, 1 6 7, 1984)。 經濟部中央標準局S工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) |裝· 往單層細胞培養物中加人樣品和放線菌素D溶液。在 37 Ό保溫20小時後,培養物用晶體紫羥色並測定毒性效 果。把約50 %細胞培養物破壞的量定義為一痼TNF活性 單位。與ΤΝΡ-α製劑 (Genentech Inc., USA)相比表明 :本發明人的檢定法中1個單位等於100-200pg/inl TNF。 -2 3 - · 本紙張K度適用中國國家標準(CNS)曱4規格(210 X 297公货) 82.1. 20,000 A6 _B6_ 五、發明説明(22 ) 细朐袤中袢掄宙 所用的抗血清是:兔抗人體TNF-α,種12958-40和兔 抗人體 IFN-y,種 2891-56 (Gencentech Inc., USA) ,羊抗人TFN-a, 和羊抗人IFN-y (得自Dr. K. Cantell, Finland)。细胞素製劑用在培養基中1: 200 稀釋的血清處理並於室溫保溫1小時。然後,按上述方 法測定殘餘I F N或T N F活性。 使用由健康供血者的血液製得的不同的五組(Li -Ls ) PBL 。經實測,用於鑒定的最佳PBL濃度為8xi0e値細 胞/ lml培養基(補充了 1G%胎牛血清和抗菌素的RPMI 1640) 〇 人體PBL與新的反應産物I-XI(表1)—起保溫導致 IFN和TNF合成》觀測的應答是範圍在3-1GQ// g/ml化合 物(表2)所涉及的劑量。在所指出的濃度内使用的化 会物是非細胞毒性。在所有的生物鑒定中,包括了負的 和正的對照。負的對照測定了在沒加入任何外源剌激物 的條件下自動生成的細胞素(IFN和TNF)的量。正的對 照指出了随公知的對照誘發剤所生成的細胞素的量;在 本案中,該誘發劑為植物凝集素(PHA, Pharmacia, Sweden , 10// g / m 1) 〇 經濟部中央標準局R工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝- 應指出,在由不同的個體獲得的人體PBL培養物中誘 發細胞素一般得到變化相當大的結果。這種現象可根據 人口遣傳的差異而解釋。此外,PBL培養物常自發地産 -24-· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS>甲4規格(210 X 297公釐) 82.1. 20,000 A6 B6 302368 五、發明説明(23) (請先閲讀背面之注意事項再場寫本頁) 生 IFN和 TNF。 換句話説,在PBL的健康供體中一暌觀察到高應答者 和低應答者,甚至是非應答者。 盡管有示出的限制條件,但生物檢定的結果表明用反 應産物(I-XI)處理的PBLUi -L5 )生成了可定董測定的 I FN和 / 或 THF。 --裝. 就含有高應答者的白细胞的Li而言,經實測反應産 物Π (含L -形式的天冬氨酸)作為細胞素誘發劑遠比反 慝物Π1 (含D-形式天冬氨酸,它也更廉價達兩個數量级 )要活性的多,。這種觀察結果很顯著,主要是因為L -型 的氨基酸被生化反應中作為天然作用物的細胞識別。 此外,對於反應産物的生物活性的表逹,分子的氨基 酸部分遠比糖的形式更重要。可使用優選低分子量、恃 別是低於1QQQ道爾頓的多糖(例如葡聚糖,反應産物X :X I)代替單糖,它們反應很類似。 反之亦然。含氨棊酸殘基的多糖可具有生物活性,而 且當它們被分解成具有結合氨基酸的寡糖時,這種活性 仍被保持(未示出數據)。 如果取短肽而不是單値氨基酸且用於剌激白細胞生成 細胞介素,則也可觀到類似結果(未示出數據)。 烴濟部中央標準局β工消費合作社印3來 在由不同的供體得到的100多個PBL培養鑒定的未分级 分離Τ Τ P的七値對照組得到1 〇 - 1 , 〇 〇 〇單位I p N / m 1 ,和9 -750單位TNP (ml。由相當於天然泥炭提取物(實施例5 -25-· 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐) 82.1. 20,000 五、發明説明(24) A6 B6 供 臨誘。因。外 的 A 性在到死性胃 同¾活存察壊活腸 不^ 。種與觀瘤毒以 個BII}這。被腫病可 八 據,性也和抗也。 由 I 數劑活性素到但定 在^ 出節的活擾意,穩 己71示調明癌干注服常表 分 Η 未疫證抗發也 口非物 部 Mi免經的誘。及乎産 -S申劑為 一 開在到涉似應 2 製作另有存察用物反 EK㈣的是是素與觀應産 的ί*性用生因。被要 C1 得L3活應再死性也主藥表 製ΡΒ最的織壞活性的給 物個NF能組瘤毒活物部 合八DT可。腫病癌産局 混的PNf物用和抗抗應如 的到IP産有素到的反例 量得發應很擾意關述 , 含者誘反上干注有上療 } 血是 床發也素 治 (請先閲讀背面之注意事項再塡寫本頁) 编號 作用物 I (D-10) L -谷氨酸,葡耱,半乳糖 II ( D - 1 1 ) L -天冬氨酸,葡糖,半乳糖 ΙΠ (D-13) D -天冬氨酸,葡糖,半乳糖 IV (D-12) L -絲氛酸,《糖,半乳糖 烴濟部中央標準局貝工消費合作社印製
VVIWVIBIX 1 6 8 2^ 分分分分葡 级级级级 ’ ( ( ( ( ^ s s s s , i 1 1 I I® 2 222 鋪 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐) 82.1. 20,000 A6 B6 經濟部中央標準局β工消費合作社印製 五、發明説明(25) X L-天冬氨酸 + ¾聚糖(變種1) XI L-天冬氨酸 +¾聚糖(變種2) 實施例1 2 採用以下反應産物製備含按照實施例1-5, 9和10的反 應産物作為活性成分的藥物配方: A. 片劑膠囊 5.0g 按照S施例1或1G得到的反醮産物(作為活性 成分) 4 4 4 . 0 g 藥用乳糖 1 . 0 g 潤滑劑,如 MYVATEX^ (Eastman Kodak 的商標) 混合諸成分並按照傳統方式用30 %含水乙醇造粒,然 後於40°C干燥。用這些顆粒製成膠囊,其中各含約450 mg穎粒,即5 Bg活性物。另外,也可以用顆粒製片劑, 各重約450mg且含5mg活性物.真1 . B. 以同樣的傳統方式,用合適的載體,將按照前面實 施例1-5,9-10得到的活性物質配製成其它藥物配方。 實施例1 3 按照前面實施例1-5, 9和10得到的活性物質用作旨在 每日護理頭髮和身體的美容製劑的益添加劑,該活性物 質的含置根據製劑類型、給藥方法和具體製劑的使用頻 率的不同而定,可在〇.〇卜1〇°/。(重置)之間。 -27-· 本紙張尺度遑用中國國家標準(CNS)甲4規格(210 X 297公釐> 82.1. 20,000 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -丨裝. B7 五、發明説明(M ) -表2, :人體PBL中反應產物I XI的生物活性 剞量 IFN 單位/ml TNF 單偉/ml . pg/ml L-| L-| L·? L3 經濟部中央標準局負工消費合作社印製 PHA 10 I 100 30 10 3 II 100 30 10 3 III 100 30 1 0 3 IV 1 00 30 10 3 V 1 00 30 10 3 v/I 100 3 0. 10 3 100 30 10 3 /III 100 30 ! 10 : 3 tx 100 30 10 3 C 100 30 10 3 :I 100 30 10 3 ο ο ο ο ο 1 ο ο 3 ο ο ο ο ο ο ο 3 1000 10 <10 <10 <10 <10 <10 10 <10 30 30 <10 <10 <10 <10 <10 10 <1.0 <10 <10 10 <10 <10 <10 <10 <10 10 <10 1 00 30 100 <10 <10 10 <10 10 <10 30 <10 30 <10 <10 <10 30 10 <10 1 0 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 <10 20 <10 <10 <;〇 20 60 20 30 30 1 0 10 1 0 10 10 10 30 10 10 20 20 20 20 60 60 10 10 20 10 20 10 ο ο 000010000.0 000 1 ο I-I - — 1 /S 1 ν < <<<<%✓<>✓<< 2 2 2 2 2 ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο ο C055 18 15 15 15 18 18 18 18 IB ΙΒ 15 18 18 18 9 0 9 8 7 0 9 2 5 2 10 20 20 ΙΌ 20 30 30 30 30 10 10 20 9 8 8 8 ο 5 9 2 7 0 00000000 2560665556 2 1 5-ΛΙ 12 2 2 1 <9 250 2 ο 6 ο 5 ο 5 2 12 12 7 7 0 2 12 16 0 7/7 7 0 7 0 8~2|2|215|2一8 2 2 2 8 8 9 8 8 9 8 8 7 7 2-2 2 0000070000000000 5558628 858888865 <9 <9 <9 <9 <9 <9 <9 <9 <9 <9 <9 <9 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 2 2 8 8 8 7 7 0 1 I 1 I 1 I 2 I 2 I 8 2 2 2 οοοοοοοοοο 8885585555 ο ο 8 .5 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 83. 3.10,000 ---- B6 ---- B6 經濟部t央標準局員工消货合作社印製 五、發明説明( ) 專利申請案第82102133號 ROC Patent Appln. No.82102133 補充之脫明窨中文本-附件(三)
Supplemental Specification in Chinese - Encl( 1) (民國83年1月日送呈) (Submitted on January 1994 ) 1 .於S〖-DEAE管柱上以HPLC測定阿馬多瑞化合物及單純的犛, 接著再依Reutter 及 Eichner (Lebensn. Unters. Forsch. m,28, 1989)使用氣化三苯基四唑铋(TTC)之醇溶液以後 管柱衍生法測定之。 以上所舉之方法可評估出後反應混合物中個別阿馬多瑞化 合物之定量比例,一般而首,賅比例係不會不同於胺基酸 混合物之起始比例(由於不同之反應速率與降解反應速率)》 2_於凝膠管柱〇H-Pak Q-801 (Shodex)(以蒸雔水洗提)上,以 HPLC方法分離後反應混合物。賅方法係依據分子之大小進行 分離,於不同時段之反應混合物中所取得之試樣中(即於可 變之反應期問後),高重量分子之部份增加,此乃由於 Mail lard反應之下一個階段,即分解阿馬多瑞化合物,接 著以胺基酸縮合分解產物。賅部份具有一些cytokine產生 效應之影響,以致於反應期間之色層分析控制可使其與其他 部份維持逋當之比例。 當以UV(波長215或280nm)及折射計追踪洗出液時,未反應 之糖基質會於折射紀錄中視得,且其並未有任何UV吸收。 3.IR光糌可對個別的許多產物的組成差異做相對性之評估。 將本案產物之光謄與先前具有所欲生物活性之產物的相 關光謄,或與標準產物做一比對是爲了改良反應之過程。
, 94-9torf.025-S 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公釐) ....................................................................................裝.....................-訂....................緯 一請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消¢合作社印製 A 6 B6 五、發明説明( ) 提及生物測試,除了已於說明害中所提到的分析之外,更 使用了以下之方法: 4. 以使用氫化可的松(hydrocortisone)培養18及20小時之老 鼠胸腺細胞殘存測定所得到製劑之效應。 此一方法係波藺用於例行控制核准之免疫調節製劑(TFX( 胸腺中之活化肽萃取液)及TTP(得自泥煤萃取液中者_))的 活性。 以下則更進一步對賅分析做一样述,所附者係以本發明製 劑(一爲實例5之產物EK2-S-11,而另一爲實例5Α之產物St-2)進行測試所得之實驗結果。賅二產物所得到之結果係與 上述已核准之免疫調節薬物(TF][及TTP)的相關結果報吿完 全一致。應予提及的是上述之結果係以與TTP相關壤度相 當之壤度,及較TFX可產生相同效應之瀵度低了數倍的瀵 度所得到者。 5. 爲了比較之故,上述之測試係用來顯示本發明產物於鼠的 成纖維細胞L929上的效應。此一測試係用來砰估習知免疫 治療製劑(如報吿於文獻:1) BUck-Olszewska Ζ., f
Zaczynska E., Arch. Immunol .Ther . Exp., 1991 39. 597-606 及2) Zaczynska E. et al. Acta Virol.,1992, 逆,121-8中之LEVAM丨SOL及丨MMUTIOL)的細胞毒性。以 下則样述賅程序,並列出本發明產物一些試樣所得到之結 果。於此須指出一點,所有測試之轼樣均表現出了較市售 產品爲低之毒性。
實例5 A 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公發) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝 •訂 A6 B6 五、發明説明( ) 使用實例5之設備與程序,並以下述之物質做爲起始物: 1 OOmg 卜天冬氮酸, 100mg L-酪氨酸, 20mg L-蘇氨酸, 20og L-絲氮酸, lOOng 苯基丙氨酸, 70mg 谷氮酸, 90mg 甘氮酸, 90mg L-丙氮酸, 50mg L-纈氨酸, 40mg 異亮氨酸, 60mg 亮氨酸, 1 OOmg 組氨酸氫氯化物, 20mg 賴氮酸氫氣化物, 10mg 精氮酸氫氣化物, lOOmg NaHC〇3, 80mg D-葡荀糖,以及 5mg 水 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 經濟部中央橒準局員工消赀合作社印製 於減壓蒸發約2.8ml水後,於75-801C之热浴下將賅些基質溶 解,然後於常壓及86-90TC之溫度下,加热賅液態反應混合 物2小時,接著減麈,並將反應混合物蒸發至乾。於蒸發終 了時,分兩部份加入無水乙辟,毎部份之《稹係15ml»於乾 燥器中冷卻反應容器,將產物(產置爲1.5g)製成粉末,並標 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4规格(210X297公釐) B6 經濟部中央標準局員工消费合泎社印製 五、發明説明( 以"S t - 2 "。 測試: 1 .於受測物質(D-10, EK2-S-11及ST-2)存在下,以氫化可 的松培養18及20小時,测定老鼠胸腺細胞的殘存 以氫化可的松培養18及20小時,測試老鼠胸腺細胞的殘 存: 測試動物:5星期大之雌性Ba丨b/C鼠,調節細胞來源: 老鼠胸腺之胸腺細胞團。 試劑:1>RPM丨1640溶液,2)胎牛血清一經鈍化者(56¾
下3G分鐘),3)半琥珀酸氫化可的松鹽與一溶劑-針薬( HC)-得自波蘭之菜物製造商-POLFA 測弑溶液:蔣發測物質溶於RPtff 1640,分別製備出含 有g/ml,lu g/m丨及〇.5u g/ml受測物質之溶液。 程序:以乙醚將2-3隻雌鼠(每一受測物質)導入潛伏狀 態,以分離胸腺,碾製賅腺«I,並將其懸浮於具有10% 鈍化FCS之RPMI 1640中,然後以用於血液過濾之濾器過 濾該懸浮液,並於相同之培養基中(具有10%鈍化FCS之 RPM丨1640 )以1200 rpn之轉速離心2次(毎次10分鏟), 接著將賅些細胞再懸浮於相同的培養基(濃度爲4 X 1〇6 細胞/ml)中》 將經由如此製備的胸腺細胞懸浮液分散於無菌試管中: 每一支lml懸浮液。將賅些試管置於冰浴中,每一测定 製備兩支試管,於層室中進行所有之步騄。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210X297公釐) ....................................................................................裝......................訂--------------------線 請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消费合作社印製 A6 B6 五、發明説明( ) 進行以下之測定: 1.於具有10%FCS之RPMI 1640中的胸腺細胞。 2 .於具有10% FCS +氫化可的松(HC) 50 u g/m丨之RPM[ 1640中的胸腺細胞。 3. 於具有10% FCS +澳度分別爲5u g/ml,U g/ml及0.5 ug/ml的受測物質之RPMI 1640中的胸腺細胞。於將 受測物質加至胸腺細胞培養物後,於5% C〇2之恆定流 動及37_C之溫度的培養器中培養賅培養物1小時。 4. 於具有10% FCS+澳度爲第3項中所述者的受測物質+ HC 50tig/ml之RPMI 1640中的胸腺細胞。於37¾及 5%C〇2大氣下,培養此測試培養物18及20小時。 於毎一培養物中,测定到了 3至4倍的活及死細胞百分比, 以提爾盼(tyrpan)藍染色死細胞:於測定細胞殘存前即刻 將0.2%提爾盼藍溶液與4.25% NaCl溶液以4:1之比例混合。 染成藍色之胸腺細胞係被認定爲死細胞,而無色細胞係爲 活細胞》 結果之解釋:對毎一受测培養物做了 3-4次之肝估,胸 腺細胞對氫化可的松的敏感性係計算如下: 於具有HC之培養物中的活胸腺細胞% a)相對殘存之% =- 於不具HC之培養物中的活胸腺細胞% 於具有HC所給澳度之受測物質的培養 物中的活胸腺細胞% b )相對殘存之% =- 於不具HC相關濃度之受測物質的培養 物中的活胸腺細胞% 於受測澳度:5/x g/ml,ltt g/ml及0.5U g/ml可於具有氫 -5 - 本紙張足度適用中ϋ國家標準(CNS)甲4规格(210x297公釐) ............................. ................................I.......................玎....................-^ t請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 302368 A6 B6 五、發明説明( ) 化可的松的培養物中增加至少25 %之殘存胸腺細胞的受 測物質係被認爲具活性者,依據槲準程序',於6次测試 中(3劑量,每一饋兩次)至少一次顯示增加高於25 %即 應被鼢爲具活性者。 測試劑量 殘存胸腺細胞之增加% 製 劑 η [ a g/ml] 18小時後 20小時後 D-10 8 5 12 18 8 1 19 28 8 0.5 27 30 ST-2 8 5 41 35 8 1 27 38 8 0.5 42 33 EK2-S-11 8 5 23 23 8 1 35 26 8 0.5 36 34 ...................—................................................................裝......................訂.................:線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝Η消费合作社印製 I .製劑對鼠成織維細胞L929的培養物的細胞毒性效應之測 定 源自人類及動物之成繊維細胞係可懸浮於不同性質之細 胞毒性物質中,細胞株L929 —般係用來測定TNF之細胞 毒性,受測物質於細胞株上之效應係以下法測定之: 程序:將欲測物質溶於再蒸餹水中,製備D-10及St-2之 16ng/ml基礎溶液,使用具有10%鈍化FCS之RPMI 1649 培養基再製作稀釋液,使用96平底板(Flow -6 · 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公釐) A6 B6 五、發明説明( ) 'Laboratories )製作稀释液。以100 it 1,濃度爲1 . 5 X 1〇5細胞/ml之L929細胞懸浮液對稀釋液進拧接種,最後 受測之D-10與St-2稀釋液係爲以下者:800 a g/ml,400 u g/ml,200tt g/ml.···低至 12.5/i g/ml 及 6.25it g/ml。 於毎一平板上有一對照組:一爲由培養基(RPM丨1640 + 10% FCS)中之L929細胞培養物所組成,其他則由具有逋 量再蒸餹水之培養基中的L929細胞培養物所組成。於 5%C〇2大氣中,及於37¾下,培養賅些所製得的平板, 於24及48小時後,使用逆顛微鏡0ΡΤ0Ν評估結果,每一 測試重複3次。 結果: 裝.......................玎....................線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局β工消Φ合作社印51 於本測試中顧示受测物質係不具細胞毒性*以相同的測 試砰估IHHUTI0L與LEVAHISOL的細胞毒性,丨HMUTI0L於 liig/ml之瀵度仍具細胞毒性(猜見Zaczynska et al.之 引證案),而LEVAMISOL於500 u g/ml之瀵度具細胞毒性( 猜見Blach-Olszewska等人之引證案),如上所述,賅兩 種市售之製劑已於波蘭被核准用於《療的用途上》 對於該三種物質:EK2-S-11, D-10及St-2,請見附件之 圖表,於其中提供了更詳盡之確認數據:每一物質有2 最高測試濃度 於24小時後 於48小時後 製 劑 [a g/ml] 、之活細胞% 之活細胞% D-10 800 100 100 ST-2 800 100 100 表紙張尺度適用中國國家標準(CNS)甲4規格(210x297公釐) A6 B6 五、發明説明( ) 個色層分析圖及丨1{光譜圖。 除了提供了 1991及1993年對D-11部份所做之IR光譜及色 屠分析圖(於管柱OH-pak Q-801上)以顯示所有結果之再 現性外,於此亦更提供了 4張豳表。 ............................................................................... 裝......................訂....................線 {請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消"合作社印奴 本紙張尺度適用中國國家標準(CNSj甲4规格(210x297公釐)
經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明( 一 專利申請案第82102133號 ROC Patent Appln. No.82102133 補充之試驗資料中文本-附件㈢ Supplemental Test Data in Chinese - EncI. (ffl ) (民國85年12月3i曰WW) ~ (Submitted on December 31 , 1996 ) TORF標準產品(PTT)之微量分析 元素分析 選用二補充之方法進行該分析,第一種方法稱爲能量分 散X射線螢光法。然而,由於氣離子之濃度過高,以該 方法僅確認了 一半製備性之分析。該預備性之資料給予 了我們有關所預知之元素,其之大約量與試樣稀釋程度 的資訊。 ΡΊΊ之丰定量XRF—屏蔽分析 硫⑸ 鉀(Κ) 鈣(Ca) 鐵(Fe) 鐘(Li) 鈀(Pd) 鎘(Cd) 錫(Sn) 銻(Sb) 本紙張尺度適用中國國家揉準(CNS ) A4规格(210X297公釐) <6% >0.13% <3% > 61ppm <0.0003 <0.002 <0.001 <0.003 <0.001 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)
五、發明説明() A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 破⑴ <0.0742 鎖(Ba) <0.001 铪(Hf) <0.001 鎢⑺ <0.001 始(Pt) <0.003 金(Au) <0.016 汞(Hg) <0,014 絶(T1) <0.001 錯⑽ <0.002 叙(Bi) . <0.001 稀土金屬元素之濃度(g/L = g/kg)': 鈽(Ce) <0.0003 钕(Nd) <0.0004 釤(Sm) <0.0005 銪(Eu) <0.0003 釓(Gd) <0.0002 鏑(Dy) <0.0004 鈥(Ho) <0.0001 铒(Er) <0.0001 铥(Tm) <0.0001 镱(Yb) <0.0004 鍀(Lu) <0.0001 鑭(La) <0.0003 <:位於特定元素檢測極限之値。 -2 - ---------^ 衣------訂------^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 0^368 (由本局壤舄) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 承辦人代碼: 大 類: I P C分類: A6j補充 本案已向: 波蘭國(地區)申請專利,申請曰期: 案號: ,□有d無主張優先權 歐洲 1992年2月13日案號:P293464 1992年 3月 3日案號:92103614.1 有關微生物已寄存於: ,寄存日期: ,寄存號碼: 一 2 - B 一 -I - .1 . I -I - I - ---九— - -i- -I - - - - - - -- -11 一 · - - I I - - - - - -I II I - I ! -I- ί - - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁各欄) 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS ) Α4规格(210Χ297公釐)

Claims (1)

  1. s〇2S68 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 公告 1#正 補充 專利申請案第82102133號 ROC Patent Appln. No.82102133 修正之申請專利範園肀文本-附件㈠ Amended Claims in Chinese - Enc1.(T ) (民國85年12月曰~~WIT) (Submitted on December , 1996) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 J· 一種製造至少一種用於謗導人類及哺乳動物之細胞素 之阿馬多瑞(Amadori)重組化合物的方法,該化合私 係具式R1-NH-R2,其中Ri係包括衍生自單糖或分子量 低於5,000道爾呑之寡糖或多糖之卜去氧-2-酮糖基, R2係包括胺基酸基图,該方法係包括於70至121·(〇之 高溫下,任意地於壓力及/或Ci_4醇存在下,以水爲 溶劑,令多數個不同之胺基酸與單糖、寡糖或多糖反 應,或令以上之任何結合反應,其中單糖及/或寡糖 或多糖與胺基酸之莫耳比係介於2 ·· 1與1 : 1間。 2根據申請專利範圍第1項之方法,其中係使用D-形之 單糖。 3. 根據申請專利範圍第1項之方法,其中係使用L-形之 胺基酸。 4. 根據申請專利範圍第1項之方法,其中單糖及/寡糖 或多糖與胺基酸之莫耳比係1.5·· 1。 5. 根據申請專利範圍第1項之方法,其中單糖及/或寡 糖或多糖係於存於天然泥炭萃取物之無機微量元素存 在下與胺基酸反應。 -29 - -------(I裝------訂-----^ -線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐) 96-9T0RF _ 1549A-M 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ^02368 ll D8 六、申請專利靶圍 6. 根據申請專利範圍第1項之方法,其中單糖及/或寡 糖或多糖與胺基酸之反應係於每lpbw (重量份)水性溶 劑含有0.67至2.75pbw(重量份)固體物之濃縮水溶液 中進行,以及任選地於反應之同時或其後移除溶劑, 直JL (於30至120分鐘後)所形成之產物已進行了阿馬 多瑞重组,以及反應混合物變成淡橙色。、 7. 根據申請專利範圍第1或6項之方法,其中反應係於莫 耳比爲1 : 1之具有二羧基的胺基酸與緩衝鹽之存在下 進行。 / S.根據申請專利範圍第7項之方法,其中缓衝鹽係爲碳 酸氫鈉。 9·根據申請專利範圍第1,5或6項之方法,其中單糖及/ 或寡糖或多糖與胺基酸,以及任意之無機微量元素係 實質上與存於天然泥炭萃取物中者具有相同之組成及 /或重量比。 m根據申請專利範圍第1或6項之方法,其中將反應混合 物(其已進行阿馬多瑞重組)以管柱色層分析純化,由 此收集可使鐵氰化鉀還原的特殊部份。 几一種藉誘導細胞素形成而刺激人類或哺乳動物免疫系 統之醫禁組合物,其係包括至少一種根據申請專利範 圍第1項之方珐所製得的阿馬多瑞重組化合物做爲活 性成分。 111 ( —裝 H 訂 ί .線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)
    本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) Α4· ( 21()χ297公着) 302368 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 12.根據申請專利範圍第11項之組合物,其更包括至少一 種醫察可接受之添加劑,其係選自於載體、佐劑、潤 滑劑、濃縮劑及香料中,且其中阿馬多瑞重组化合物 係以0.01至50重量%之量存在。 议根據申請專利範圍第11或12項之組合物,其中阿馬多 瑞重組化合物與其他組份的重量比係介於1 : 1至1 : •V 100 間。 从根據申請專利範圍第13項之组合物,其中阿馬多端重 組合物與其他组份的重量比係介於1 : 8至1 : 20間。 瓜根據申請專利範圍第13項乏組舍物,其中阿馬多瑞重 組合物與其他组份的重量比係1 : 9。 览·根據申請專利範園第12項之組合物,其中阿馬多瑞重 組化合物係存在於乳糖與潤滑劑之摻合物中,乳糖與 潤滑劑之重量比係介於20 : 1與100 : 1間。 J7·根據申請專利範園第16項之組合物,其中乳糖與湖滑 劑之重量比係50 : 1。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -.;y' 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS ) A4規格(210X297公釐)
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5629412A (en) * 1994-07-11 1997-05-13 Glinskii; Guennadi V. Synthetic glycoamines that promote or inhibit cell adhesion
FR2746316B1 (fr) * 1996-03-19 1998-06-12 Guerlain Nouvelles compositions cosmetologiques ou dermatologiques
WO1997049389A1 (en) * 1996-06-27 1997-12-31 The Picower Institute For Medical Research 3-alkylamino-2-hydroxy-4-hydroxymethyl-2-cyclopenten-1-one advanced glycosylation endproducts and methods of use therefor
DE19705233A1 (de) * 1997-02-12 1998-08-13 Froelich Juergen C Verfahren zur Herstellung einer Formulierung enthaltend Arginin
GB0319463D0 (en) * 2003-08-20 2003-09-17 Givaudan Sa Compounds
TW200925268A (en) * 2007-12-06 2009-06-16 Mallinckrodt Baker Inc Fluoride-containing photoresist stripper or residue removing cleaning compositions containing conjugate oligomeric or polymeric material of alpha-hydroxycarbonyl compound/amine or ammonia reaction
JP2012140360A (ja) * 2010-12-28 2012-07-26 Kracie Home Products Ltd 抗酸化剤、化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物
JP5835894B2 (ja) * 2010-12-29 2015-12-24 クラシエホームプロダクツ株式会社 チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物
JP2012140378A (ja) * 2010-12-29 2012-07-26 Kracie Home Products Ltd チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物
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Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1514910A (en) * 1974-07-02 1978-06-21 Unilever Ltd Amadori compounds and their use to flavour foods
US4629692A (en) * 1982-12-06 1986-12-16 Miles Laboratories, Inc. Immunoassay for nonenzymatically glucosylated proteins and protein fragments an index of glycemia
DE3405841A1 (de) * 1984-02-17 1985-08-22 Bayer Ag, 5090 Leverkusen N-acylierte 1-alkylamino-1-desoxy-ketose-derivate, verfahren zur herstellung und ihre verwendung
DE3601472A1 (de) * 1986-01-20 1987-07-23 Fresenius Ag Verwendung von umsetzungsprodukten von reduzierenden zuckern und serotonin oder serotonin-precursoren zur behandlung cerebraler stoerungen
DK163689A (da) * 1988-04-08 1989-10-30 Sandoz Ag Peptidderivater
WO1992016216A1 (en) * 1991-03-16 1992-10-01 Torf Establishment Peat-derived bioactive products and pharmaceutical and cosmetic compositions containing them

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