CZ285200B6 - Produkty Amadoriho přesmyku, způsob jejich výroby a jejich použití - Google Patents
Produkty Amadoriho přesmyku, způsob jejich výroby a jejich použití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ285200B6 CZ285200B6 CZ941945A CZ194594A CZ285200B6 CZ 285200 B6 CZ285200 B6 CZ 285200B6 CZ 941945 A CZ941945 A CZ 941945A CZ 194594 A CZ194594 A CZ 194594A CZ 285200 B6 CZ285200 B6 CZ 285200B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- amadori rearrangement
- reaction
- composition
- compounds
- molecular weight
- Prior art date
Links
- 238000003691 Amadori rearrangement reaction Methods 0.000 title claims abstract description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 67
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 32
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims abstract description 32
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims abstract description 31
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 25
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 19
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 19
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- -1 2-dioxyglucose Chemical compound 0.000 claims abstract description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 16
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims abstract description 15
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims abstract description 14
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 claims abstract description 13
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 11
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 10
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 10
- 229960002429 proline Drugs 0.000 claims abstract description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 9
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 9
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims abstract description 9
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 8
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims abstract description 8
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 229960004295 valine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 7
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 7
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims abstract description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 7
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims abstract description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 7
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 235000014705 isoleucine Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 235000005772 leucine Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000014393 valine Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims abstract description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-QYESYBIKSA-N 6-deoxyglucose Chemical compound C[C@@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-QYESYBIKSA-N 0.000 claims abstract description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims abstract description 6
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims abstract description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 claims abstract description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 6
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims abstract description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims abstract description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims abstract description 6
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims abstract description 6
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 22
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 22
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 20
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 16
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 13
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 claims description 12
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims description 12
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 10
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 9
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 7
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 7
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 7
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 7
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 claims description 7
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 6
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 claims description 6
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 claims description 6
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 claims description 6
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 claims description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 6
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 claims description 6
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 6
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical group O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims description 5
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical group [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 5
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims description 5
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Chemical group OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Chemical group OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 claims description 5
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims description 5
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 claims description 5
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Chemical group ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims description 5
- VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N (3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CC=O VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N alpha-D-ara-dHexp Natural products OCC1OC(O)CC(O)C1O PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- YAGKRVSRTSUGEY-UHFFFAOYSA-N ferricyanide Chemical compound [Fe+3].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] YAGKRVSRTSUGEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 abstract description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 45
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 31
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 21
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 21
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 21
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 20
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical group OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 19
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 19
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 14
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 6
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 5
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910014033 C-OH Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910014570 C—OH Inorganic materials 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 2
- 235000014066 European mistletoe Nutrition 0.000 description 2
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 235000012300 Rhipsalis cassutha Nutrition 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 241000221012 Viscum Species 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000000686 immunotropic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 150000002584 ketoses Chemical class 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- ZCWPHDXKEDBCER-UHFFFAOYSA-N 2,5-diphenyl-2h-tetrazol-2-ium;bromide Chemical compound [Br-].C1=CC=CC=C1C1=[NH+]N(C=2C=CC=CC=2)N=N1 ZCWPHDXKEDBCER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000035859 Drug effect increased Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 229940124041 Luteinizing hormone releasing hormone (LHRH) antagonist Drugs 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000297179 Syringa vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-rhamnose Chemical compound C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002474 gonadorelin antagonist Substances 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000001050 lubricating effect Effects 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002020 noncytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000263 nonmitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 231100000628 reference dose Toxicity 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007363 regulatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000012607 strong cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
- C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
- C07H7/02—Acyclic radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q5/00—Preparations for care of the hair
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Řešení se týká produktů Amadoriho přesmyku obecného vzorce R.sub.1.n.-NH-R.sub.2.n. zahrnuje 1-amino-1-deoxy-2-ketosu, odvozenou od cukerného zbytku, přednostně v D-formě, zvolenou ze souboru zahrnujícího glukosu, xylosu, galaktosu, rhamnosu, fruktosu, mannosu, 2-dioxyglukosu, 6-deoxyglukosu, glukosamin, galaktosamin, oligo- nebo polysacharidy, a přednostně s nízkou molekulovou hmotností, zejména molekulovou hmotností nižší než 1000 dalton a R.sub.2.n. zahrnuje aminokyselinu, přednostně v L-formě, zvolenou ze souboru zahrnujícího serin, glycin, prolin, histidin, arginin, alanin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylalanin, threonin, cystein, glutemin, valin, asparagin, methionin, tyrosin, hydroxypropolin, lysin, tryptofan, isoleucin a leucin nebo, peptidový zbytek, s přednostně nízkou molekulovou hmotností, zejména molekulovou hmotností nižší než 1 000 dalton. Těchto látek se může používat pro výrobu farmaceutických přípravků určených k léčbě a/nebo prevenci hematologických ŕ
Description
(57) Anotace:
Sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem obecného vzorce R1-NH-R2, kde Ri představuje l-deoxy-2-ketosový zbytek jednoduchého cukru v D-formé zvoleného ze souboru zahrnujícího glukózu, xylózu, galaktózu, ramnózu, fruktózu, manózu, 2-dioxyglukózu, 6deoxyglukózu, glukosamin a galaktosamin nebo oligo- nebo polysacharidu, s molekulovou hmotností nižší než 5000; a R2 představuje zbytek aminokyseliny v L-formě zvolené ze souboru zahrnujícího serin, glycin, prolin, histidin, arginin, alanin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylalanin, threonin, cystein, cystin, glutamin, valin, asparagin, methionin, tyrosin, hydroxyprolin, lysin, tryptofan, isoleucin a leucin nebo peptidový zbytek s molekulovou hmotností nižší než 1000; kde 1-deoxy-2-ketosový zbytek je připojen k aminoskupině aminokyselinového nebo peptidového zbytku, pro použití jako činidlo indukující cytokiny a/nebo činidlo regenerující tkáň. Použití alespoň jedné sloučeniny Amadoriho přesmyku pro výrobu farmaceutické nebo kosmetické kompozice pro indukci cytokinu a/nebo regeneraci tkáně, léčení a/nebo prevenci hematologických a/nebo imunologických chorob a/nebo pro stimulaci imunitního systému člověka a/nebo savce nebo pro výživu buněk. Způsob výroby sloučenin Amadoriho přesmyku a kompozice na jejich bázi.
Sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem, způsob jejich výroby a použití a kompozice na jejich bázi
Oblast techniky
Vynález se týká určitých sloučenin, které představují produkty Amadoriho reakce, pro použití jako farmaceutická činidla zaměřená na nové aplikace. Dále se vynález týká způsobu výroby těchto sloučenin, jejich použití pro výrobu farmaceutické kompozice a této kompozice.
Dosavadní stav techniky
Amadoriho přesmyk probíhá podle následujícího reakčního schématu:
H OH | H NH-R |
1/ | |
c [ | k, 1 |
H~ C“ OH | | H - C - OH 1 |
HO“ C - H r | + H2N-R —> HO“ C - H |
H- C“ OH | | H - C “ OH I |
H C C 1 | ) H- C C 1 |
CH2OH | ch2oh |
Amadoriho přesmyk
......— »
H I
H — C NH-R
C= O I
HO“ C“ H
H- C“ OH
H- C- OH ch2oh
Sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem jsou známé. Jedná se například o reakční produkty aminokyseliny nebo peptidu s cukrem, oligo- nebo polysacharidem, u nichž proběhl Amadoriho přesmyk (Henri Borsook et al., J. Biol. Soc. 215 (1955), 111 až 124). Tak je v publikaci DE-C-3914354 popsán vodorozpustný glykoprotein aminokyseliny a cukru, který je izolován z extraktu semen ovsa setého. Dále, v EP-A-406087 jsou popsány vodorozpustné komplexy polysacharidu a glykopeptidu, které jsou získány z buněčné stěny Gram-pozitivní bakterie.
V J. Biol. Chem. (1985), 260/9 se uvádí, že pro charakterizaci sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem vzniklých reakcí glukózy s volnými aminoskupinami proteinu bylo použito NMRspektroskopie.
V EP-A-152 856 je oznámena chemická syntéza biologicky účinných N-acylovaných analogů 1-alkylamino-I-deoxyketosy, při níž se finální produkty získávají reakcí cukru s alkylaminosloučeninou a provádí se Amadoriho přesmyk, za účelem získání analogu 1-alkylamino-ldeoxyketosy a poté finální acylace aminoskupiny. Tento způsob vyžaduje přinejmenším třístupňový postup pro následné provedení potřebných chemických reakcí a také se při něm musí kromě základních reakčních složek používat řady více či méně nákladných pomocných chemických reakčních činidel.
V WO 89/09786 jsou mj. popsány LHRH antagonistické peptidy a kalcintoninové peptidy modifikované alespoň jedním cukerným zbytkem, u něhož proběhl Amadoriho přesmyk. Vzniklé produkty jsou užitečné pro inhibici sekrece luteinizačního hormonu a pro regulaci vápníku v těle.
V této publikaci jsou také uvedeny různé způsoby výroby těchto produktů, například za použití směsi dimethylformamidu a kyseliny octové, jako rozpouštědla, kdy se reakce provádí při 55 °C po dobu 4 hodin.
-1 CZ 285200 B6
V EP 111211 je mj. popsána výroba imunogenních činidel za účelem indukce uvolňování protilátek pro specifickou detekci sloučenin obsahujících cukerné zbytky, u nichž proběhl Amadoriho přesmyk, v krvi pacientů. Imunogenním činidlem může být přírodní protein nebo polypeptid nebo synteticky připravená makromolekula nesoucí 1-deoxyfruktózylový zbytek. Peptidy mají molekulovou hmotnost v rozmezí od 4000 do 10 000 000 dalton. Také jsou zde popsány způsoby glykosylace takových nosičových makromolekul (tj. peptidů), které se například provádějí tak, že se na makromolekulu působí nadbytkem glukózy za mírných podmínek s pufrovaným pH (pomocí fosfátového pufru) a inkubace směsi při teplotě 35 až 40 °C po dobu asi 10 až 20 dnů.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jsou sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem obecného vzorce I
Ri-NH-R, (I) kde
Ri představuje l-deoxy-2-ketosový zbytek jednoduchého cukru v D-formě zvoleného ze souboru zahrnujícího glukózu, xylózu, galaktózu, ramnózu, fruktózu, manózu, 2deoxyglukózu, 6-deoxyglukózu, glukosamin a galaktosamin nebo oligo- nebo polysacharidu, s molekulovou hmotností nižší než 5000, a
R2 představuje zbytek aminokyseliny v L-formě zvolené ze souboru zahrnujícího serin, glycin, prolin, histidin, arginin, alanin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylalanin, threonin, cystein, cystin, glutamin, valin, asparagin, methionin, tyrosin, hydroxyprolin, lysin, tryptofan, isoleucin a leucin nebo peptidový zbytek s molekulovou hmotností nižší než 1000, kde l-deoxy-2-ketosový zbytek je připojen k aminoskupině aminokyselinového nebo peptidového zbytku, pro použití jako činidlo indukující cytokiny a/nebo činidlo regenerující tkáň.
Dále je předmětem vynálezu kompozice pro indukci cytokinu a/nebo regeneraci tkáně, jejíž podstata spočívá vtom, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu, přednostně směs sloučenin Amadoriho přesmyku definovaných výše a
a) alespoň jednu farmaceuticky přijatelnou přísadu zvolenou ze souboru zahrnujícího nosiče, adjuvanty a lubrikační látky, při hmotnostním poměru sloučeniny nebo sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem k farmaceuticky přijatelné přísadě nebo přísadám v rozmezí od 1:1 do 1:100, nebo
b) alespoň jednu kosmeticky přijatelnou přísadu zvolenou ze souboru zahrnujícího nosiče, adjuvanty a lubrikační látky, přičemž sloučenina nebo sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem jsou přítomny v množství 0,01 až 10 % hmotnostních, vztaženo na celou kompozici.
Předmětem vynálezu je také použití alespoň jedné sloučeniny Amadoriho přesmyku definované výše pro výrobu farmaceutické nebo kosmetické kompozice pro indukci cytokinu a/nebo regeneraci tkáně, léčení a/nebo prevenci hematologických a/nebo imunologických chorob a/nebo pro
-2CZ 285200 B6 stimulaci imunitního systému člověka a/nebo savce, pro výrobu kosmetické kompozice sloužící pro výživu buněk.
Konečně je předmětem vynálezu také způsob výroby sloučenin Amadoriho přesmyku, vhodných jako činidla pro indukci cytokinů a/nebo jako činidla pro regeneraci tkáně, definovaných výše, jehož podstata spočívá v tom, že se
a) aminokyseliny v L-formě zvolené ze souboru zahrnujícího serin, glycin, prolin, histidin, arginin, alanin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylalanin, threonin, cystein, cystin, glutamin, valin, asparagin, methionin, tyrosin, hydroxyprolin, lysin, tryptofan, isoleucin a leucin nebo peptidy s molekulovou hmotností nižší než 1000 nechají reagovat s jednoduchými cukry vD-formě zvolenými ze souboru zahrnujícího glukózu, xylózu, galaktózu, ramnózu, fruktózu, manózu, 2-deoxyglukózu, 6-deoxyglukózu, glukosamin a galaktosamin nebo oligonebo polysacharidy, s molekulovou hmotností nižší než 5000 za přítomnosti vody, jako rozpouštědla, při teplotě zvýšené na 7 až 121 °C;
b) pokračuje se v zahřívání reakční směsi, aby vzniklé produkty mohly prodělat Amadoriho přesmyk, za současného nebo následného odstraňování vodného rozpouštědla, přičemž se toto zahřívání provádí tak dlouho, až reakční směs změní svou barvu ze světle oranžové na hnědou a až lze ve vzorcích odebraných z reakční směsi detekovat biologickou účinnost a redukční schopnost vůči ferrikyanidu;
c) reakce se zastaví, aby se zabránilo rozkladu vzniklých sloučenin na sloučeniny postrádající biologickou účinnost a
d) reakční směs se vysuší a/nebo dále podrobí purifikaci sloupcovou chromatografií, přičemž se shromažďují biologicky účinné frakce vyvolávající redukci ferrikyanidu draselného.
Při výrobě výše uvedených přípravků je popřípadě přídavně přítomna alespoň jedna z následujících látek: farmaceuticky a/nebo kosmeticky vhodný nosič, adjuvans a popřípadě lubrikační látka, v hmotnostním poměru sloučeniny k těmto látkám v rozmezí od 1:1 do 1:100, přednostně 1:8 do 1:20 a nej výhodněji asi 1:9 a sloučenina v je v přípravku s výhodou přítomna v množství 0,01 až 10 % hmotnostních, přednostně 0,01 až 1 % hmotnostní a nej výhodněji 0,05 až 0,10% hmotnostního.
Lubrikační látka s výhodou přítomna ve směsi s laktózou, přičemž hmotnostní poměr laktózy k lubrikační látce leží v rozmezí od 20:1 do 100:1 a přednostně je asi 50:1.
Tyto sloučeniny redukují ferrikyanid draselný, což je zkušební reakční činidlo pro biologicky aktivní látky vznikající při reakci cukru s aminokyselinou.
Imunostimulační léčiva z přírodních zdrojů, jako je extrakt ze jmelí, rašelinový extrakt atd. jsou sice již známá, ale jejich nevýhodou je nákladné zpracování velkých množství surovin, které je nutno provést pro získání několika gramů účinné látky a přítomnost nekontrolovatelných nečistot, které mohou vyvolávat toxicitu a vedlejší účinky. Složitá povaha takových přípravků a jejich málo reprodukovatelné složení způsobují problémy při podávání pacientům. Až dosud na biologickou účinnost nikdo nezkoušel frakce získané z různých stupňů purifikace (prováděných za účelem odstranění balastních látek a nečistot) extraktu ze jmelí nebo rašeliny, v němž jsou obsaženy sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem.
Výroba srovnatelných produktů nebo směsí produktů z umělých zdrojů, jako je interferon nebo jiné látky získané metodami genetického inženýrství, je ještě nákladnější. Kromě toho, molekuly humánního interferonu jsou často příliš velké, než aby pronikly stěnou humánních buněk, takže
-3 CZ 285200 B6 se účinným stává pouze zlomek podaného množství. Také produkty získané genetickým inženýrstvím mají obvykle vedlejší účinky a některé z nich jsou dokonce toxické. Kromě toho, některé z nich jsou jeden den účinné a jiný den nikoliv, aniž by byly známy důvody tohoto jevu.
S překvapením se nyní zjistilo, že téměř žádný jednoduchý komplex aminokyseliny a cukru, u něhož proběhl Amadoriho přesmyk, nevykazuje žádné z výše uvedených nevýhod, nýbrž naopak, má překvapivě vysokou imunologickou účinnost. Proto se ho může používat ve farmaceutických přípravcích a v kosmetice. Tyto malé molekuly snadno pronikají buněčnou stěnou a zdá se, že působí jako živiny. Indukují tvorbu přírodního interferonu a jiných cytokinů, včetně faktoru nekrosy nádorů. Tento stimulační účinek na biologickou aktivitu vykazují i po třech dnech od podání. Popsaný účinek se zvyšuje se zvyšujícím se dovršením Amadoriho přesmyku a opět klesá se zvyšujícím se rozkladem tohoto komplexu.
Kromě jednoduchých cukrů se také může používat polysacharidů, které mají přednostně nízkou molekulovou hmotnost, zejména molekulovou hmotnost pod 1000 dalton, jako je například dextran, který působí podobně. Polysacharidy vykazují určitou biologickou účinnost a mohou si zachovat část této účinnosti, když jsou převedeny na oligosacharidy.
O biologické účinnosti těchto sloučenin je až dosud známo jen velmi málo. Nyní se zjistilo, že kombinace těchto látek produkují v kontaktu s humánními leukocyty interferon a jiné cytokiny. Tento jev je označován termínem polyklonální aktivace buněk.
Je možné zkoušet látky produkované pod vlivem těchto sloučenin a stanovit biologické účinnosti v mezinárodních jednotkách, vztahujících se ke konkrétním cytokinům. Tyto sloučeniny mají zejména vysokou biologickou účinnost při koncentraci, která leží v rozmezí od 1 do 100 pg/ml (vztaženo na čistou látku). V určité molekule je konkrétní druh aminokyseliny důležitější než druh cukerného zbytku molekuly.
Reakční produkty L-asparagové kyseliny s glukózou nebo galaktózou produkují po proběhnutí Amadoriho přesmyku - při styku s humánními leukocyty a inkubaci ve tkáňové kultuře při 37 °C po dobu 20 hodin a v atmosféře 5% oxidu uhličitého, 30 až 1000 protivirových jednotek interferonu. Interferon se měří biologickým stanovením za použití buněk humánní rakoviny. Působením těchto sloučenin mohou být také produkovány sloučeniny označované názvem faktor nekrosy nádorů (TNF).
Skupina biologicky aktivních sloučenin podle tohoto vynálezu pokrývá jednak specifické sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem, které jsou popsány výše a jednak N-substituované deriváty řady různých aminokyselinových sloučenin a jednoho jednoduchého cukru, oligosacharidu nebo polysacharidů, který je přednostně nízkomolekulámí (jeho molekulová hmotnost je zejména nižší než 1000 dalton), nebo N-substituované deriváty jedné aminokyselinové sloučeniny a řady jednoduchých cukrů, oligosacharidů a/nebo polysacharidů nebo jakékoliv kombinace těchto derivátů, pokud mají dostatečnou biologickou účinnost.
Předmětem vynálezu je také způsob výroby výše definovaného farmaceutického a/nebo kosmetického přípravku nebo sloučenin, jež jsou produkty Amadoriho přesmyku nebo směsi sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem, jehož podstata spočívá vtom, že se nechá reagovat řada různých aminokyselin nebo peptidů s jedním jednoduchým cukrem, oligosacharidem nebo polysacharidem, nebo jedna aminokyselina nebo peptid s řadou jednoduchých cukrů, oligosacharidů nebo polysacharidů, nebo jejich vzájemná kombinace, za přítomnosti vody, jako rozpouštědla, při zvýšené teplotě přibližně v rozmezí od asi 70 do asi 121 °C, po dobu přednostně od asi 30 do asi 120 minut, přičemž Amadoriho přesmyk, který u výsledných produktů proběhne, se zastaví, když se zdá být přesmyk dokončen podle zkoušky redukcí ferrikyanidu a/nebo podle změny zabarvení reakční směsi.
-4CZ 285200 B6
Při způsobu podle vynálezu vzniká nejprve meziprodukt obecného vzorce
R,'-NH-R2' kde
Rf představuje l-deoxy-2-ketosový zbytek v přímém uhlíkovém řetězci nebo jakoukoliv Opřemostěnou formu jednoduchého cukru, oligosacharidu nebo polysacharidu a
R2' představuje aminokyselinový nebo peptidový zbytek.
V druhé fázi se tento meziprodukt alespoň z části podrobuje Amadoriho přesmyku pokračujícím zahříváním reakční směsi, přednostně za tlaku, za současného nebo následného odstraňování rozpouštědel.
Reakce se s výhodou provádí za přítomnosti anorganických stopových prvků vyskytujících se v přírodním rašelinovém extraktu a popřípadě za tlaku a/nebo za přítomnosti nižšího alkoholu, přičemž přednostní molámí poměr cukrů a/nebo sacharidů k aminokyselinám a/nebo peptidům leží v rozmezí od 2:1 do 1:1, přednostně je 1,5:1.
Po svém vzniku se reační směs s výhodou vysuší a/nebo dále podrobí purifikaci sloupcovou chromatografii, při níž se shromažďují specifické frakce vyvolávající redukci ferrikyanidu draselného.
Při reakci jsou cukry a/nebo nízkomolekulámí sacharidy, na jedné straně, a/nebo aminokyseliny a/nebo nízkomolekulámí peptidy, na druhé straně, a popřípadě také anorganické stopové prvky s výhodou přítomny, v podstatě ve stejném složení a/nebo v podstatě stejném hmotnostním poměru, v jakém se vyskytují v přírodním rašelinovém extraktu.
V některých případech, zejména když se používá aminokyseliny obsahující dvě karboxyskupiny, bývá výhodné přidávat k reakční směsi sůl, která funguje jako pufr, například hydrogenuhličitan sodný, přednostně v molámím pornem 1:1.
Má-li se získat farmaceutický nebo kosmetický přípravek, přidá se ke směsi sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem, které jsou přednostně purifikovány a/nebo vysušeny, alespoň jeden farmaceuticky a/nebo kosmeticky vhodný nosič a/nebo přísada.
Reakce alespoň jednoho cukru a/nebo alespoň jednoho sacharidu s alespoň jednou aminokyselinou a/nebo alespoň jedním peptidem se s výhodou provádí v koncentrovaném vodném roztoku, přednostně v roztoku o koncentraci pevných látek asi 0,67 až asi 2,75 dílu hmotnostního na 1 díl hmotnostní vodného rozpouštědla a následující Amadoriho přesmyk se provádí se současným nebo následným odstraňováním vodného rozpouštědla tak dlouho, dokud reakční směs nenabude světle oranžového zbarvení. Zjistilo se totiž, že produkty Amadoriho přesmyku jsou poměrně náchylné k rozkladu a že produkty tohoto rozkladu mají tmavě hnědou barvu nebo barvu dehtu, přičemž takto vzniklé neidentifikovatelné sloučeniny již ztratily svou biologickou účinnost. Proto se přednostně Amadoriho přesmyk zastavuje v době, kdy reakční směs nabude světle oranžového až hnědého zbarvení.
Je zajímavé si všimnout, že intermediámí reakční produkty, které vznikají, když se původně neprůhledný roztok aminokyseliny vyčeří (před proběhnutím Amadoriho přesmyku), jsou snadno hydrolyzovatelné (tj. reakce je vratná). S postupujícím přesmykem se tato reverzibilita zmenšuje, tj. produkty jsou stálejší a jejich barva se postupně mění od světle žluté na světle oranžovou a dále na oranžovohnědou, kdy se Amadoriho přesmyk zdá být ukončen. Zkoušení vzorků
-5CZ 285200 B6 odebraných v průběhu tohoto přesmyku (různé zkušební postupy jsou uvedeny dále) prokázalo, že se biologická účinnost zvyšuje s postupem Amadoriho přesmyku a snižuje, když má další zahřívání za následek rozklad vzniklých produktů, jehož znamením je barevná změna na tmavě hnědou. Pokud reakční směs obsahuje aminokyseliny s obsahem jiných ketoskupin a/nebo síry, jako je cystein, dochází k okamžité redukci ferrikyanidu a následující barevné změně, jinak trvá reakce 3 až 5 minut a podle toho je možno dobře odhadnout stupeň vývoje Amadoriho přesmyku. Nezreagované cukry by vykázaly barevnou změnu teprve po půl hodině až několika hodinách.
Izolace čistých produktů Amadoriho přesmyku se provádí o sobě známými postupy, které jsou založeny na vazbě směsi na silný katex (jako je Amberlite(R) nebo Dowex(R)) a následující eluci čpavkovou vodou. Potom se vybraná definovaná frakce eluátu odpaří za sníženého tlaku a čistá sloučenina se nechá vykiystalovat z bezvodého methanolu (J. E. Hodge a Β. E. Fisher, Methods in Carbohydrate Chemistry, sv. 11, Reactions of Carbohydrates, 1963, Academie Press, New York, Londýn, str. 105 až 106 nebo výše citovaná publikace Borsook et al. nebo J. Dubourg a P. Devilliers, Bull. Soc. Chim. France 1957, 333 až 336).
Při způsobu podle tohoto vynálezu zůstávají všechny výše uvedené preference, pokud se týče druhu zbytků odvozených od jednoduchého cukru a aminokyseliny, nezměněny. Kromě toho, přednostní směs cukerných substrátů zahrnuje D-formy glukózy, xylózy, galaktózy, ramnózy afruktózy ve hmotnostním poměru přibližně 20:10:4:1:1, zatímco přednostní směs aminokyselinových substrátů zahrnuje L-formy šeřinu, glycinu, hystidinu, argininu, alaninu, prolinu, tyrosinu, valinu, leucinu, isoleucinu a lysinu ve hmotnostním poměru 20, 4:35, 8:35, 8:132:180:360:216:160:72:68:780.
Jak již bylo uvedeno výše, sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem jsou schopny redukovat ferrikyanid draselný, přičemž tato chemická zkušební reakce představuje základ pro rychlé stanovení biologické účinnosti látky vzniklé reakcí cukru a aminokyseliny.
Zjistilo se, že sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem jsou zvláště účinné v tom případě, že se nechá reagovat směs jednoduchých cukrů o stejném složení a o stejném hmotnostním poměru, v jakém se vyskytuje v extraktu z přírodní rašeliny, za přítomnosti vodného rozpouštědla a přednostně za přidání nižšího alkoholu a popřípadě anorganických stopových prvků, které se v takovém extraktu vyskytují, při zvýšené teplotě a popřípadě za zvýšeného tlaku, načež se směs dále zahřívá za účelem Amadoriho přesmyku vzniklých produktů, přičemž se současně nebo následně vypuzují rozpouštědla a přesmyk se zastavuje v okamžiku, kdy reakční směs nabude světle oranžovohnědého zbarvení. Takto vzniklé produkty se potom přečistí sloupcovou chromatografií a shromáždí se frakce, které způsobují maximální redukci ferrikyanidu draselného.
Výše uvedené farmaceutické přípravky obsahují jako účinnou přísadu alespoň jeden reakční produkt obecného vzorce Ri-NH-R2' nebo specifickou sloučeninu obecného vzorce R1-NH-R2 a kromě účinné přísady vhodné nosiče a/nebo pomocné látky a/nebo mazací přísady v hmotnostním poměru účinné přísady k ostatním složkám v rozmezí od 1:1 do 1:100, přednostně od 1:8 do 1:20 a nejvýhodněji v hmotnostním poměru přibližně 1:9.
Jako výhodné provedení farmaceutického přípravku je možno uvést směs účinné přísady, laktózy a mazadla, v níž je hmotnostní poměr laktózy k mazadlu přibližně 20:1 až 100:1, přednostně 50:1.
Těchto farmaceutických přípravků se může používat pro léčbu a/nebo prevenci hematologických a/nebo imunologických chorob a/nebo pro stimulaci imunitního systému člověka a/nebo savců indukcí tvorby cytokinu.
V kosmetických přípravcích podle vynálezu bývá účinná přísada obsažena v množství od 0,01 do 10 % hmotnostních, přednostně od 0,01 do 1 % hmotnostního, zvláště pak v množství od 0,05 do
CZ 285200 B6 |
0,1 % hmotnostního. Tyto kosmetické přípravky mohou kromě účinné přísady obsahovat také nosiče, pomocné látky, obohacující složky a/nebo parfémy.
Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Do 25 ml baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou se předloží:
1,47 g (0,01 mol) 0,84 g (0,01 mol) 0,91 g 0,91 g 3,00 ml | L-glutamové kyseliny, hydrogenuhličitanu sodného, D-glukózy, galaktózy a redestilované vody. |
Vzniklá směs se zahřívá na 80 °C a přitom se, přednostně za sníženého tlaku, odpaří 50 % obsažené vody. Potom se směs zahřívá za atmosférického tlaku na 80 až 85 °C po dobu 120 minut, tj. tak dlouho, dokud nenabude oranžového zbarvení. Vzniklý sirupovitý koncentrovaný vodný roztok se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Takto vzniklý oranžovočervený pevný reakční produkt se označí symbolem D-10 a uchová pro biologické zkoušení.
Příklad 2
Do 25 ml baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou se předloží:
1,33 g (0,01 mol) 0,84 g (0,01 mol) 0,91 g 0,91 g 3,00 ml | L-asparagové kyseliny, hydrogenuhličitanu sodného, D-glukózy, galaktózy a redestilované vody. |
Vzniklá směs se za míchání zahřívá na 80 °C (míchání se provádí otáčením baňky), potom se zkoncentruje za tlaku, přičemž se odpaří celkem 1,5 ml vody. Potom se směs zahřívá za atmosférického tlaku na 80 až 85 °C po dobu přibližně 60 minut, tj. tak dlouho, dokud nenabude světle oranžového zbarvení. Vzniklý sirupovitý koncentrovaný vodný roztok se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Takto vzniklý reakční produkt má podobu suchého žlutooranžového prášku. Produkt se označí symbolem D-l 1 a uchová pro biologické zkoušení.
Příklad 3
Do 25 ml baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou se předloží:
1,05 g (0,01 mol) 0,91 g 0,91 g 2,50 ml | L-serinu, D-glukózy, galaktózy a redestilované vody. |
Vzniklá směs se za míchání zahřívá na 85 až 92 °C (míchání se provádí otáčením baňky), po 100 minutách nabude roztok oranžového zbarvení. Sníží se tlak a směs se odpaří do sucha. Reakční produkt vytvoří na stěnách baňky oranžovou průhlednou vrstvu. Produkt se seškrábe a rozdrží na prášek. Tento produkt se označí symbolem D-12 a uchová pro biologické zkoušení.
Příklad 4
Do 25 ml baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou se předloží:
0,66 g (0,005 mol) 0,42 g (0,005 mol) 0,45 g 0,45 g 3,00 ml | D-asparagové kyseliny, hydrogenuhličitanu sodného, D-glukózy, galaktózy a redestilované vody. |
Vzniklá směs se zahřívá na 80 °C, potom se odpaří za tlaku, přičemž se odpaří celkem 1,5 ml vody. Potom se směs zahřívá za atmosférického tlaku na 80 °C po dobu 60 minut, tj. tak dlouho, dokud nenabude oranžového zbarvení. Vzniklý sirupovitý koncentrovaný vodný roztok se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Před tím, než se zbytek úplně vysuší se 2x přidá 10 ml bezvodého ethanolu a směs se vždy odpaří, aby se odstranila zbytková vlhkost. Takto vzniklý reakční produkt se rozdrtí na prášek, který se označí symbolem D-13 a uchová pro biologické zkoušení.
Příklad 5
Aby se syntetickým postupem získal ekvivalent biologicky účinné frakce extraktu určité přírodní rašeliny, předloží se do baňky umístěné v rotačním odpařováku v lázni se zahřátou vodou tyto složky:
20,5 mg | L-serinu, |
35,8 mg | L-glycinu, |
35,8 mg | L-histidinu, |
132,0 mg | L-argininu, |
180,0 mg | L-alaninu, |
360,0 mg | L-prolinu, |
216,0 mg | L-tyrosinu, |
160,0 mg | L-valinu, |
68,0 mg | L-isoleucinu, |
72,0 mg | L-leucinu, |
780,0 mg | L-lysinu, |
2000,0 mg | D-glukózy, |
1000,0 mg | D-xylózy, |
400,0 mg | D-galaktózy, |
100,0 mg | D-ramnózy, |
100,0 mg | D-fruktózy a |
6,0 ml | redestilované vody. |
Směs se míchá otáčením baňky a zahřívá za tlaku po dobu 45 minut na teplotu od 75 do 86 °C. Během této doby se odpaří přibližně 3 ml vody a substráty se úplně rozpustí. Potom se směs zahřívá 30 minut za atmosferického tlaku na teplotu 85 až 86 °C, aby došlo k Amadoriho přesmyku. Během této doby roztok rychle změní barvu na Červenohnědou. Sníží se tlak a v zahřívání se pokračuje na 84 °C, přičemž současně se odpaří rozpouštědla. Na konci odpařování se do reakční baňky 2x přidá 15 ml bezvodého ethanolu a reakční směs se vždy odpaří do sucha. Baňka s vysušeným reakčním produktem se na 18 hodin umístí do exsikátoru nad chlorid vápenatý a potom se reakční produkt zpracuje na prášek. Získá se přibližně 4,5 g práškovitého produktu, který se označí symbolem EK2-S.
Část (4 g) tohoto reakčního produktu se rozpustí ve 20 ml destilované vody a vzniklý roztok se nanese na náplň chromatografické kolony (kolona má rozměry 25x330 mm a jako náplň obsahuje sorbent Amberlite(R) XAD-2, analytické čistoty). Sloupec se eluuje destilovanou vodou při průtoku 0,4ml/min. Shromažďují se frakce o objemu 10 ml až do celkového objemu eluátu 450 ml. Obsah frakcí se monitoruje chromatografícky. Frakce 11 až 13 se spojí a odpaří za sníženého tlaku. Tyto frakce mají vysoký obsah sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem (což se potvrdí redukční zkouškou pomocí ferrikyanidu draselného). Produkt se uchová pro následující biologické zkoušení a označí se symbolem EK2-S-11.
Biologické zkoušení zaměřené na zjištění biologické účinnosti se provádí na imunizovaných myších Balb/C obojího pohlaví a stáří 8 až 10 týdnů. Imunizace myší se provádí peritoneálním podáním 0,2 ml 10 % suspenze ovčích eiythrocytů (SRBC), tj. 6xl08 buněk. Erythrocyty jsou fixovány ve sterilním Alseverově roztoku následujícího složení:
glukóza 2,05 g, citrát sodný 0,8 g, chlorid sodný 0,42 g, kyselina citrónová 0,055 g, redestilovaná voda do 100 ml.
Do tohoto Alseverova roztoku se vloží aseptický vzorek buněk ovčí krve v poměru 1:1a směs se udržuje alespoň 3 dny při teplotě 4 °C. Takto vzniklé stabilizované erythrocyty se potom za aseptických podmínek převedou do fosforečnanem pufrovaného solného roztoku (PBS), za účelem promytí. Erythrocyty se 2x opláchnou PBS a potom 10 minut odstřeďují při otáčkách 2000 min-1. Promytých buněk se používá ve formě 10 % suspenze v PBS. Této suspenze se používá pro imunizaci myší Balb/C.
Zkoušený reakční produkt se podává intraperitoneálně (i.p.) nebo orálně (p.o.) 4x ve zvolené dávce, přičemž první podání se provádí 2 hodiny před imunizací myší SRBC, zatímco zbývající 3 dávky se podají po imunizaci v intervalech 24 hodin.
Každé zkušební skupině zvířat se podává různá dávka zkoušeného reakčního produktu: 10 mg/kg, 1 mg/kg, 0,1 mg/kg a 0,01 mg/kg. Kontrolní skupina zvířat se také imunizuje SRBC, ale místo zkoušené látky sejí podává ve stejných časových intervalech vždy 0,2 ml PBS.
Všechny skupiny zvířat, jak kontrolní, tak zkušební, při všech pokusech zahrnují 8 až 12 myší.
Čtvrtý den nebo (v případě stanovení protilátek typu 7S) desátý den po imunizaci, se myší mírně anestetizují etherem exsanguinací prostřednictvím extirpace oční bulvy. Krev se odebere do zkumavek. Potom se myším zlomí páteř a vyjme slezina. Krve se použije pro získání séra, kterého je zapotřebí pro stanovení hemagglutinujících protilátek typu 19S + 7S a 7S, zatímco slezin se použije pro získání buněk, které jsou užitečné pro stanovení procentického podílu buněk schopných vytvářet E-rosety a pro stanovení hemolytické účinnosti. Pro tyto účely se myší slezina rozmělní. Splenocytové buňky, které se takto získají, se suspendují přibližně ve 2 ml Hankova média o teplotě 4 °C, navrství na Ficoll-Uropolinův gradient o hustotě 1,077 a potom 15 minut odstřeďují při otáčkách 3000 min-1 a teplotě 4 °C. Po oddělení zmezifáze se žlutohnědý povlak lymfocytů přenese do Hankova média o teplotě 4 °C a 2x promyje, vždy s následným sedmi až desetiminutovým odstřeďováním při otáčkách 1800 min-1. Potom se splenocyty suspendují v 1 ml Hankova média v takovém poměru, aby počet obsažených buněk byl lxlO6.
-9CZ 285200 B6
Při každé zkoušce se stanovuje procentický podíl mrtvých buněk tak, že se 1 kapka zkoušené suspenze splenocytů smíchá s 1 kapkou roztoku barviva (vyrobeného dříve), který obsahuje 4 díly 0,2 % roztoku trypanové modři a 1 díl 4,25 % roztoku chloridu sodného. Pod mikroskopem se vždy stanovuje procentický podíl mrtvých splenocytů u 100 buněk. Mrtvé buňky mají barvu námořnické modři, zatímco světlé buňky jsou živé. Přítomnost většího podílu mrtvých buněk než 10 % je kritická. Takový vzorek je třeba z dalšího použití vyloučit.
Všechny stupně se zkoušenými buňkami by měly být prováděny ve sterilním silikonizovaném skleněném laboratorním zařízení, umístěném v ledové lázni.
Příklad 6
Při první zkoušce se zjišťuje účinek zkoušených reakčních produktů na počet buněk vyvolávajících tvorbu hemolytických protilátek (PFC-IgM). Zkouška se provádí takto: K 0,5 ml 0,5 % roztoku agarosy umístěného ve zkumavce a udržovaného ve vodní lázni zahřáté na 45 °C se přidá 0,1 ml 10% suspenze SRBC (připravené výše popsaným způsobem). Potom se přidá 0,1 ml suspenze splenocytů o hustotě lxlO6 buněk/ml, směs se rychle promíchá a ihned na to nalije na sklíčka předběžně opatřená povlakem agarosy. Sklíčka se 2 hodiny inkubují při 37 °C. Potom se zkoušené vzorky potáhnou komplementem z morčete, zředěným v poměru 1:20 a 2 hodiny inkubují. Po inkubaci zkoušených vzorků s komplementem se zjistí počet plakotvomých buněk (PFC) a výsledek se přepočte na lxlO6 splenocytů. Každá zkouška se provádí 2x.
Nejsilnější zesílení odpovědi na SRBC, vyjádřené jako zvýšení hladiny splenocytů produkujících hemolysiny IgM (PFC) je pozorováno po podání látky D-ll v dávce 0,1 mg/kg. Zesílení (amplifíkace) činí 119%. Když se denní dávka zvýší na 10-násobek (1 mg/kg), amplifíkace odpovědi se sníží na 53 %.
Reakční produkt D-12 vykazuje nej silnější účinnost, přírůstek 58 %, v dávce 1 mg/kg.
Reakční produkt EK^-S-l při této zkoušce vykazuje nejsilnější účinnost v dávce 0,1 mg/kg (přírůstek 65 %). Při dávce lOx vyšší, tj. 1 mg/kg, je toto zvýšení o něco nižší, tj. 52 %.
Reakční produkt D-13 zkoušený v dávce 1 mg/kg způsobuje zvýšení 40%. Při zvýšení této dávky na 10 mg/kg, tj. na lOnásobek, vykazuje odpověď pouze 14 % zvýšení.
Příklad 7
Také se provede aktivní hemagglutinační zkouška za účelem stanovení hladiny protilátek antiSRBC typu 19S + 7S a 7S. Pro stanovení hladiny protilátek typu 19S-IgM se připraví myší sérum čtvrtý den po imunizaci SRBC, zatímco pro stanovení hladiny protilátek typu 7S-IgG se tato příprava provádí desátý den po imunizaci myší SRBC. Doba přípravy séra odpovídá dnu, kdy myši obsahují maximální hladinu protilátek uvedeného typu po imunizaci SRBC.
A. Stanovení hladiny protilátek 19S + 7S
Krevní vzorek se 30 minut odstřeďuje při otáčkách 3500 min-1. Z každého takto získaného vzorku se odebere sérum a umístí do vodní lázně zahřáté na teplotu 56 °C na 30 minut, aby se deaktivoval komplement. Potom se připraví řada roztoků s různým zředěním každého zkoušeného séra (v rozmezí od 1:1 do 1:4096) za použití mikrotitrátoru a mikrotitrových desek s jamkami ve tvaru písmene U, z nichž každá má objem 250 μΐ. Zředěné sérum se inkubuje vždy
- 10CZ 285200 B6 hodinu při teplotě místnosti. Ke každému séru se přidá kapka 1 % suspenze SRBC v PBS (připravené výše popsaným způsobem) a vzniklé směsi se inkubují další 2 hodiny při teplotě 37 °C a potom se uloží do prostoru o teplotě 4 °C. Výsledky se zjišťují následující den. Maximální zředění, při němž je ještě pozorována hemagglutinace, je považováno za údaj charakterizující hladinu protilátek. Prstenec na dně jamky je znamením, že došlo k hemagglutinaci. Útvar podoby knoflíku na dně jamky je považován za negativní výsledek - k hemagglutinaci nedošlo.
Pro statistickou analýzu výsledků se zvýšení zředění séra u zkoušené látky porovná se zvýšením u kontrolní skupiny.
Reakční produkt D-ll, v dávce 1 mg/kg, zvyšuje hladinu IgM 2,57x. Při lOx vyšší dávce se stimulační účinek ve srovnání s kontrolní skupinou zvýší na 3,5-násobek.
Reakční produkt D-12 vykazuje při této zkoušce nižší účinnost. V dávce 0,1 mg/kg zvyšuje hladinu IgM 2x a v dávce 1 mg/kg l,4x.
Reakční produkt EK^-S-ll vykazuje nejsilnější účinnost při této zkoušce. V dávce 0,1 mg/kg zvyšuje hladinu IgM 4,3x a v dávce 1 mg/kg 3,6x.
Reakční produkt D-13 zvyšuje hladinu IgM v dávce 1 mg/kg na trojnásobek a v desetinásobně vyšší dávce na 1,5-násobek.
B. Stanovení hladiny protilátek 7S
Zkoušená inaktivovaná séra se smísí v poměru 1:1 s 0,lM roztokem 2-merkaptoethanolu a směsi se inkubují 30 minut při teplotě 37 °C. 2-merkaptoethanol ničí imunoglobuliny typu 19S-(IgM), zatímco imunoglobuliny typu 7S-(IgG) nejsou citlivé na působení 2-merkaptoethanolu.
Po 30 minutách inkubace se redukční reakce zastaví chlazením na teplotu 4 °C po dobu 15 minut. Potom se připraví řada zředěných vzorků, podobným způsobem, jak je to popsáno výše, za účelem stanovení hladiny protilátek 19S a tyto vzorky se smíchají s 1 % suspenzí SRBC. Po 2 hodinách inkubace při 37 °C se vzorky uloží při teplotě 4°C. Výsledky se vyhodnocují následující den, podle kritérií pro stanovení hladiny, při níž dochází k hemagglutinaci, popsaných výše. Současně se provádí kontrolní zkouška za použití kombinace 1 % suspenze SRBC s PBS v poměru 1:1.
Když se látka D-l 1 zkouší výše popsaným způsobem, zvyšuje v dávce 1 mg/kg tvorbu protilátek IgG 3,16násobně. V dávce 10 mg/kg je toto zvýšení 2,2násobné.
Reakční produkt D-12 zkoušený v dávce 0,1 mg/kg a 1 mg/kg, stimuluje produkci protilátek IgG 1,3násobně. Při dávce 10 mg/kg je stimulace l,5násobná.
Reakční produkt EK2-S-II stimuluje v dávce 0,1 mg/kg produkci IgG l,9násobně a v dávce 1 mg/kg 2,89násobně (vždy ve srovnání s kontrolním pokusem).
Výsledky zkoušek A aB, které se získají u každé produkční várky nebo u každé frakce biologicky účinných reakčních produktů syntetizovaných způsobem podle vynálezu, které poskytly výše uvedenou imunologickou odpověď, se podrobí statistické analýze T-studentovou metodou, a-0,05. Výsledky získané u každé zkoušené dávky se porovnají s paralelní kontrolní zkouškou a zjistí se zvýšení biologické účinnosti.
- 11 CZ 285200 B6
Příklad 8
Skupina biologicky účinných reakčních produktů získaných způsobem podle příkladů 1 až 5 se také podrobí zkoušce, při které se stanovuje procentický podíl splenocytů vytvářejících E-rosety.
250 μΐ 1 % suspenze SRBC a 250 μΐ zkoušených buněk (při koncentraci lxlO6 buněk/ml) se přidá do 550 μΐ Hankova média. Všechny vzorky se inkubují v teplé vodní lázni (zahřáté na 37 °C) vybavené třepačkou po dobu 15 minut. Potom se vzorky skladují při teplotě 4 °C dalších 20 hodin. Procentický podíl splenocytů vytvářejících E-rosety s SRBC se stanoví po obarvení suspenze 1 až 3 kapkami krystalické violeti.
U každého vzorku se stanovuje procentický podíl splenocytů 3x, přičemž v každém případě se spočítá 400 splenocytů. Za E-rosety se považuje útvar, v němž je splenocyt obklopen přinejmenším 3 erytrocyty.
Za účelem statistického vyhodnocení se porovnává procentické zvýšení počtu splenocytů s Erosetami u jednotlivých zkoušených látek a kontrolní skupiny.
Při této zkoušce vykazuje maximální stimulační účinek reakční produkt D-l 1 (63 %) a EK2-S11 (70 %) při dávce 1 mg/kg. Při dávce lOx nižší, tj. 0,1 mg/kg, poklesnou tyto hodnoty na 45 % a 57 %.
Reakční produkt D-12 způsobuje v dávce 1 mg/kg zvýšení schopnosti vytvářet E-rosety o 22 %, ve srovnání s kontrolní skupinou. Příslušná hodnota pro dávku lOx nižší, tj. 0,1 mg/kg, je 29 %.
Reakční produkt D-l3 vykazuje maximální účinek v dávce 1 mg/kg (58 %), zatímco při vyšších dávkách je dosažený účinek o něco nižší.
Biologická účinnost syntetizovaných sloučenin se vyhodnocuje za použití následujících zkoušek:
1) Zkouška stanovení procentického podílu splenocytů, vytvářejících E-rosety se provádí způsobem popsaným v Bach a Dardenne, Cell. Immunol 3,1 až 16,1972.
2) Zkouška stanovení počtu buněk produkujících hernolytické protilátky typu IgM se provádí Jemeho metodou způsobem, který modifikoval Mishell a Dutton (J. Exp. Med. 126, 423 až 442, 1967).
3) Zkouška stanovení hladiny protilátek 19 + 7S a7S, způsobující hemagglutinaci se provádí Adlerovou hemagglutinační metodou (J. Immunol 95, 26 až 38, 39 až 47, 1965) za použití mikrotitrových desek (J. Immuno Pharmacol. 4,43 až 52, 1982).
Příklad 9
Do baňky umístěné v zahřáté vodní lázni rotačního odpařováku se předloží:
1,33 g (0,01 mol) 0,84 g (0,01 mol) 10,00 g | L-asparagové kyseliny, hydrogenuhličitanu sodného hydrolýzovaného dextranu o průměrné molekulové hmotnosti 3000 dalton a |
10,00 ml | redestilované vody. |
- 12CZ 285200 B6
Směs se zahřívá za tlaku na teplotu 70 °C tak dlouho, dokud se úplně nerozpustí pevné látky a v průběhu této doby se oddestilují přibližně 3 ml vody (doba zahřívání je asi 30 minut). Baňka s roztokem se volně zakryje, umístí do parního sterilizačního zařízení a 40 minut zahřívá za tlaku na teplotu 121 °C. Po ochlazení se vzniklý žlutooranžový roztok zředí 15 ml vody, vyčeří odstředěním a vysuší rozprašovacím sušením ve vzduchu při teplotě na vstupu 160 °C a na výstupu 85 °C. Získá se 10,5 g světle béžového reakčního produktu, který je snadno rozpustný ve vodě.
Přítomnost sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem v tomto reakčním produktu se potvrdí zkouškou pomocí ferrikyanidu draselného (viz Borsook, Abrams aLowy, J. Biol. Soc. 215 (1955), 111 až 124 a chromatografíckými metodami.
Biologickými zkouškami, které jsou popsány v předchozích příkladech, se potvrdí, že výše uvedený produkt má podobnou imunotropní účinnost, jako produkt získaný za použití jednoduchého cukru.
Příklad 10
Do kónické baňky se předloží:
5,0 g hydrolýzovaného dextranu o průměrné molekulové hmotnosti přibližně
5000 dalton,
1,1 g L-prolinu a
4,0 ml redestilované vody.
Obsah baňky se rozpustí za míchání. Rovnoměrná směs, která takto vznikne, se umístí do parního sterilizačního zařízení, kde se zahřívá za tlaku na teplotu 110°C po dobu 40 minut. Výsledný průhledný oranžový roztok se zředí 20 ml redestilované vody a vyčeří odstředěním. Čirý roztok se vysuší v rozprašovací sušárně.
Získá se 5,3 g reakčního produktu, který je snadno rozpustný ve vodě. Jeho imunotropní účinnost je podobná jako u produktů získaných v jiných experimentech popsaných v předcházejících příkladech.
Příklad 11
Při konvenčních zkušebních metodách se zkouší biologická účinnost těchto sloučenin na myších, ale nikoliv na lidech. Z toho důvodu byla vyvinuta nová biologická stanovení, při nichž se měří množství a účinnost cytokinů uvolňovaných z humánních periferních krevních leukocytů (PBL), ošetřených reakčními produkty podle příkladu 1 až 5, 9 a 10. Cytokiny jsou proteiny podobné hormonům, které hrají důležitou úlohu při prakticky všech imunologických reakcích, jakož i při regulačních procesech, které jsou zodpovědné za udržování homeostasy.
Zkoušení cytotoxicity
Cytotoxicita reakčních produktů podle vynálezu se stanovuje u buněk adenokarcinomu lidských plic linie A549 (tato linie je uložena v Americké sbírce typových kultur ATCC CCL 185). Monovrstvy buněk se trypsinizují a potom se suspenze 2x105 buněk/ml vDulbeccem modifikovaném Eaglově minimálním esenciálním médiu (DMEM), doplněném 10 % telecím sérem (CS) smíchají s různými dávkami léčiv. Směsi se umístí v jamkách mikrotitrové plotny z plastu a 48 hodin inkubují při 37 °C. Za hodnotu CD50 se považuje minimální koncentrace zkoušené
- 13CZ 285200 B6 sloučeniny, která způsobí přibližně 50% destrukci buněčné kultury, při měření za použití barvení 0,015 % roztokem neutrální červeni v DMEM.
Indukce cytokinu
Povlaky žlutohnědé barvy pocházející od zdravých dárců krve byly získány z oblastní transfusní stanice. Použitý postup je následující: Erythrocyty se podrobí lysi působením chloridu amonného způsobem popsaným v Cantell, L., Hirvonen, S., Kauppinen, H. L.: Production and Partial Purifícation of Human Immune Interferon, Meth. Enzymol., 119, 54, 1986. Používá se leukocytů od jediného dárce ve formě přípravku obsahujícího 8xl06 leukocytů/ml v médiu RPMI 1640, doplněném 10% fetálním telecím sérem (FCS), L-glutaminem a antibiotiky. Všechny várky FCS byly podrobeny předběžnému zkoušení. Pro kultury PBL se používá pouze nemitogenního FCS. Induktory cytokynu se přidávají k 1 ml objemu kultur. Jako referenčního induktoru cytokynu se používá fytohemagglutininu (PHA) (Pharmacia Fine Chemicals, Švédsko) aLPS zE. Colli 0111.B4 (Difco Laboratories). Indukované kultury PBL se inkubují v atmosféře 5 % oxidu uhličitého ve vzduchu 20 hodin při 37 °C a potom se odstředí. Supematanty se skladují při 4 °C a v průběhu jednoho týdne zkoušejí na TNF a IFN účinnost.
Stanovení interferonu (IFN)
Vyrobí se konfluentní monovrstva buněk A549 v jamkách mikrotitrové plotny, v DMEM s 10 % CS, L-glutaminem a antibiotiky (100 U/ml penicilínu a 100 pg/ml streptomicinu). Vzorky IFN zředěné v miskách se přidají k buněčné monovrstvě a 20 hodin inkubují při teplotě 37 °C v atmosféře 5% oxidu uhličitého ve vzduchu. Potom se buňky promyjí a provokují virem encephalomyocarditis (EMCV). Titr IFN je definován jako zředění vzorku IFN, které po 48 hodinách inkubace sníží cytopathogenní účinek viru o 50 %. Také se používá metody s MTT [3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl)2,5-difenyltetrazoliumbromid] (Hansen, Μ. B., Nielsen, S. E., a Berg. K.: Re-examination and Further Development of a Precise and Rapid Dye Method for Measuring Cell Growth/Cell Kill. J. Immuno. Meth., 1989, 119, 203 až 210) pro zjištění usmrcených buněk ve scanneru ELISA. Při všech těchto stanoveních se používá těchto laboratorních standardů IFN: rekombinantní humánní IFN-gamma (Genentech lne., USA, specifická aktivita 2xl08 U/mg), přírodního humánního leukocitu IFN-α (3xl06 IU/ml) a IFNgamma (2xl06 IU/ml), od firmy Dr. K. Cantell, Helsinky, Finsko.
Stanovení faktoru nekrosy nádorů (TNF)
Cytotoxická účinnost TNF se měří v buňkách L929 způsobem popsaným v Flick. D. A., Gifford, G. E.: Comparison of in Vitro Cell Cytotoxic Assays for Tumor Necrosis Factor, J. Immunol. Meth., 68, 167,1984.
Vzorky a roztok aktinomycinu D se přidají ke kulturám buněk v podobě monovrstev. Po 20 hodinové inkubaci při 37 °C se buňky obarví krystalickou violetí a zjišťují se toxické účinky. Definuje se množství, které způsobuje přibližně 50 % destrukci buněčných kultur a toto množství se charakterizuje jako jedna jednotka účinnosti TNF. Na základě srovnání s přípravkem TNF-a (Genentech. Inc., USA) ukazuje, že jedna jednotka při těchto zkouškách odpovídá 100 až 200 pg/ml TNF.
Neutralizační zkoušky cytokinu
Používá se těchto antisér: králičího anti-humánního TNF-α, várka 2958-40 a králičího antihumánního IFN-gamma, várka 2891-56 (Genentech, Inc., USA), ovčího anti-humánního IFNα,β a ovčího antihumánního IFN-gamma (Dr. K. Cantell, Finsko). Cytokinové přípravky se
- 14CZ 285200 B6 ošetří séry zředěnými v poměru 1:200 v kultivačním médiu al hodinu inkubují při teplotě místnosti. Potom se popsaným způsobem stanovuje reziduální účinnost IFN nebo TNF.
Používá se 5 různých dávek (Li až L5) PBL, připravených z krve zdravých dárců. Optimální koncentrace PBL při těchto stanoveních je 8x106 buněk/ml média (RPMI1640, doplněné 10% fetálním telecím sérem a antibiotiky).
Inkubace humánního PBL s novými reakčními produkty I až XI (viz tabulka 1) má za následek syntézu IFN a TNF. Pozorovaná odpověď je závislá na dávce v rozmezí od 3 do 100 pg/ml sloučeniny (viz tabulka 2). Sloučeniny, používané v označených koncentracích jsou necytotoxické. Při všech biologických stanoveních se používá negativních a pozitivních kontrolních zkoušek. U negativních kontrolních zkoušek se měří množství cytokinů (IFN a TNF), které jsou produkovány spontánně bez toho, že by byly přidány nějaké exogenní stimulátory. Pozitivní kontrolní zkoušky poskytují údaj o množství cytokinů produkovaného v odpovědi na známý referenční induktor, v případě této zkoušky je jím fytohemagglutinin (PHA, Pharmacia, Švédsko, 100 pg/ml).
Je třeba zdůraznit, že indukce cytokinů v humánních kulturách PBL získaných od různých jednotlivců obvykle poskytuje výsledky se značným rozptylem. Tento úkaz je možno vysvětlit genetickým rozrůzněním lidské populace. Kromě toho, kultury PBL často produkují IFN a TNF spontánně.
Jinými slovy, u zdravých dárců PBL se běžně vyskytují jednotlivci s vysokou odpovědí i jednotlivci s nízkou odpovědí a dokonce i jednotlivci s nulovou odpovědí.
Přes výše uvedená omezení ukazují výsledky biostanovení, že PBL (Lj až L5) ošetřené reakčním produktem podle vynálezu (I až XI) produkují IFN a/nebo TNF v kvantitativně měřitelném množství.
V případě L] obsahujícího leukocyty dárce s vysokou odpovědí se zjistilo, že reakční produkt II (který obsahuje L-formu asparagové kyseliny) je podstatně účinnější jako induktor cytokinů než reakční produkt III (obsahující D-formu kyseliny asparagové) a který je též podstatně, totiž o dva řády, nákladnější. Toto zjištění je velmi významné, poněvadž při biochemických reakcích jsou buňkami rozpoznávány jako přírodní substráty převážně L-formy.
Kromě toho, pro expresi biologické účinnosti reakčních produktů je aminokyselinová část molekuly mnohem důležitější než forma cukru. Kromě jednoduchých cukrů, se může též používat polysacharidů, přednostně nízkomolekulámích polysacharidů, zejména pak polysacharidů s molekulovou hmotností nižší než 1000 dalton (jako jsou dextrany, reakční produkty X až XI). Takové póly sacharidy reagují podobně jako jednoduché cukry.
Naopak též platí, že polysacharidy obsahující zbytky aminokyselin mohou vykazovat biologickou účinnost a tato účinnost je zachována, když dojde k jejich rozkladu na oligosacharidy s vázanou aminokyselinou (data nejsou uvedena).
Podobné výsledky lze též pozorovat, když se při stimulaci leukocytů pro produkci cytokinů místo jednoduché aminokyseliny použije krátkého peptidů (data nejsou uvedena).
Sedm referenčních dávek nefrakcionovaného TTP, zkoušeného ve více než 100 kulturách PBL od různých dárců, poskytlo 10 až 1000 U IFN/ml a 9 až 750 U TNF/ml. Frakce EK2-S, připravená ze směsi, která odpovídá složení extraktu přírodní rašeliny (příklad 5), byla zkoušena v 8 kulturách PBL od 8 různých dárců krve. Zjistilo se, že tato frakce představuje nejúčinnější přípravek indukující jak tvorbu IFN tak tvorbu TNF (data nejsou uvedena).
- 15CZ 285200 B6
Z možných aplikací reakčních produktů podle vynálezu je možno uvést jejich použití jako imunomodulátorů a tato jejich účinnost je klinicky užitečná. Další prokázanou účinností je účinnost při regeneraci tkání. Také byla pozorována protirakovinová účinnost, která je pravděpodobně spojena s přítomností indukovaného interferonu a faktoru nekrosy nádorů. Také byla zaznamenána protivirová účinnost.
Reakční produkty podle vynálezu je možno podávat orálně, ale stejně dobře lze použít parenterální aplikace a topické aplikace. Tyto produkty jsou poměrně stálé.
Tabulka 1
Seznam reakčních produktů
Číslo | Substráty |
I(D-10) | L-glutamová kyselina, glukóza, galaktóza |
II(D-ll) | L-asparagová kyselina, glukóza, galaktóza |
III (D-13) | D-asparagová kyselina, glukóza, galaktóza |
IV (D—12) | L-serin, glukóza, galaktóza |
V | EK2-S (frakce 11 až 13) |
VI | EK2-S (frakce 6 až 7) |
VII | EK2-S (frakce 8 až 10) |
vm | EK2-S (frakce 28 až 34) |
IX | L-prolin, glukóza |
X | L-asparagová kyselina + dextran (druh 1) XI L-asparagová kyselina + dextran (druh 2) |
Příklad 12
Za použití následujících reakčních produktů se vyrobí farmaceutické přípravky, které jako účinnou přísadu obsahují reakční produkty podle příkladů 1 až 5, 9 a 10:
Tablety/granule
5,0 g reakčního produktu získaného podle příkladu 1 nebo 10 (účinná přísada), 444,0 g farmaceuticky vhodné laktózy a
1,0 g lubrikační látky, například výrobku MYVATEX^ (obch. známka firmy Eastman Kodak)
Složky se smísí a směs se běžným způsobem granuluje za použití 30 % vodného ethanolu. Granulát se usuší při 40 °C a použije se ho pro výrobu kapslí, z nichž každá obsahuje přibližně 450 mg granulí, tj. 5 mg účinné přísady. Alternativně se může granulí použít pro výrobu tablet, z nichž každá má hmotnost 450 mg a obsahuje 5 mg účinné přísady.
Podobnými běžnými postupy se mohou účinné přísady, získané způsoby popsanými v příkladech 1 až 5, 9 a 10, zpracovat za použití vhodných nosičů na jiné farmaceutické přípravky.
Claims (19)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem obecného vzorce IRj-NH-R, (I) kdeRi představuje l-deoxy-2-ketosový zbytek jednoduchého cukru v D-formě zvoleného ze souboru zahrnujícího glukózu, xylózu, galaktózu, ramnózu, fruktózu, manózu, 2-deoxyglukózu, 6-deoxyglukózu, glukosamin a galaktosamin nebo oligo- nebo polysacharidu, s molekulovou hmotností nižší než 5000, aR2 představuje zbytek aminokyseliny v L-formě zvolené ze souboru zahrnujícího serin, glycin, prolin, histidin, arginin, alanin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylalanin, threonin, cystein, cystin, glutamin, valin, asparagin, methionin, tyrosin, hydroxyprolin, lysin, tryptofan, isoleucin a leucin nebo peptidový zbytek s molekulovou hmotností nižší než 1000;kde l-deoxy-2-ketosový zbytek je připojen k aminoskupině aminokyselinového nebo peptidového zbytku, pro použití jako činidlo indukující cytokiny a/nebo činidlo regenerující tkáň.
- 2. Kompozice pro indukci cytokinu a/nebo regeneraci tkáně, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu, přednostně směs sloučenin Amadoriho přesmyku definovaných v nároku 1 aa) alespoň jednu farmaceuticky přijatelnou přísadu zvolenou ze souboru zahrnujícího nosiče, adjuvanty a lubrikační látky, při hmotnostním poměru sloučeniny nebo sloučenin vzniklých Amadoriho přesmykem k farmaceuticky přijatelné přísadě nebo přísadám v rozmezí od 1:1 do 1:100, nebob) alespoň jednu kosmeticky přijatelnou přísadu zvolenou ze souboru zahrnujícího nosiče, adjuvanty a lubrikační látky, přičemž sloučenina nebo sloučeniny vzniklé Amadoriho přesmykem jsou přítomny v množství 0,01 až 10 % hmotnostních, vztaženo na celou kompozici.
- 3. Kompozice podle nároku 2, vyznačující se tím, že l-deoxy-2-ketosové zbytky Ri a aminokyselinové nebo peptidové zbytky R2 jsou přítomny ve směsi sloučenin Amadoriho přesmyku ve stejném složení a/nebo ve stejném hmotnostním poměru, v jakém se vyskytují v přírodním rašelinovém extraktu.
- 4. Kompozice podle nároku 2 nebo 3, vyznačující se tím, že dále obsahuje anorganické stopové prvky vyskytující se v přírodním rašelinovém extraktu.- 17CZ 285200 B6
- 5. Kompozice podle některého z nároků 2 až 4, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr sloučeniny nebo sloučenin Amadoriho přesmyku k přísadě nebo přísadám podle odstavce a) nároku 2 leží v rozmezí od 1:8 do 1:20 a přednostně je 1:9.
- 6. Kompozice podle některého z nároků 2až5, vyznačující se tím, že lubrikační látka je přítomna ve směsi s laktózou, přičemž hmotnostní poměr laktózy k lubrikační látce leží v rozmezí od 20:1 do 100:1 a přednostně je 50:1.
- 7. Kompozice podle některého z nároků 2 až 6, vyznačující se tím, že podle odstavce b) nároku 2 jsou sloučeniny Amadoriho přesmyku přítomny v množství od 0,01 do 1 % hmotnostního, přednostně od 0,05 do 0,1 % hmotnostního, vztaženo na celou kompozici.
- 8. Kompozice podle některého z nároků 2 až 7 pro použití při prevenci nebo léčení hematologických nebo imunologických chorob a/nebo pro stimulaci produkce protilátky.
- 9. Použití alespoň jedné sloučeniny Amadoriho přesmyku podle nároku 1 pro výrobu farmaceutické nebo kosmetické kompozice pro indukci cytokinu a/nebo regeneraci tkáně.
- 10. Použití podle nároku 9 pro výrobu farmaceutické kompozice pro léčení a/nebo prevenci hematologických a/nebo imunologických chorob a/nebo pro stimulaci imunitního systému člověka a/nebo savce.
- 11. Použití podle nároku 9 pro výrobu kosmetické kompozice sloužící pro výživu buněk.
- 12. Způsob výroby sloučenin Amadoriho přesmyku, vhodných jako činidla pro indukci cytokinu a/nebo jako činidla pro regeneraci tkáně, podle nároku 1, vyznačující se tím, že sea) aminokyseliny v L-formě zvolené ze souboru zahrnujícího serin, glycin, prolin, histidin, arginin, alanin, kyselinu asparagovou, kyselinu glutamovou, fenylalanin, threonin, cystein, cystin, glutamin, valin, asparagin, methionin, tyrosin, hydroxyprolin, lysin, tryptofan, isoleucin a leucin nebo peptidy s molekulovou hmotností nižší než 1000 nechají reagovat s jednoduchými cukiy v D-formě zvolenými ze souboru zahrnujícího glukózu, xylózu, galaktózu, ramnózu, fruktózu, manózu, 2-deoxyglukózu, 6-deoxyglukózu, glukosamin a galaktosamin nebo oligonebo polysacharidy, s molekulovou hmotností nižší než 5000 za přítomnosti vody, jako rozpouštědla, při teplotě zvýšené na 7 až 121 °C;b) pokračuje se v zahřívání reakční směsi, aby vzniklé produkty mohly prodělat Amadoriho přesmyk, za současného nebo následného odstraňování vodného rozpouštědla, přičemž se toto zahřívání provádí tak dlouho, až reakční směs změní svou barvu ze světle oranžové na hnědou a až lze ve vzorcích odebraných z reakční směsi detekovat biologickou účinnost a redukční schopnost vůči ferrikyanidu;c) reakce se zastaví, aby se zabránilo rozkladu vzniklých sloučenin na sloučeniny postrádající biologickou účinnost ad) reakční směs se vysuší a/nebo dále podrobí purífíkaci sloupcovou chromatografií, přičemž se shromažďují biologicky účinné frakce vyvolávající redukci ferrikyanidu draselného.
- 13. Způsob podle nároku 12, vyznačující se tím, že se reakce provádí za přítomnosti anorganických stopových prvků vyskytujících se v přírodním rašelinovém extraktu.- 18CZ 285200 B6
- 14. Způsob podle nároku 12 nebo 13, vyznačující se tím, že se reakce provádí za superatmosferického tlaku, přednostně za tlaku 0,1 až 0,15 MPa.
- 15. Způsob podle některého z nároků 12 až 14, vyznačující se tím, že se reakce provádí při molámím poměru cukrů a/nebo sacharidů k aminokyselinám a/nebo peptidům v rozmezí od 2:1 do 1:1 a přednostně při molámím poměru 1,5:1.
- 16. Způsob podle některého z nároků 12ažl5, vyznačující se tím, že se používá cukrů nebo nízkomolekulámích sacharidů a/nebo aminokyselin nebo nízkomolekulámích peptidů ve stejném složení a/nebo ve stejném hmotnostním poměru, v jakém se vyskytují v přírodním rašelinovém extraktu.
- 17. Způsob podle některého z nároků 13 až 16, vyznačující se tím, že se při reakci používá anorganických stopových prvků o stejném složení a/nebo ve stejném hmotnostním poměru, v jakém se vyskytují v přírodním rašelinovém extraktu.
- 18. Způsob podle některého z nároků 12ažl7, vyznačující se tím, že se používá alespoň jedné aminokyseliny obsahující dvě karboxyskupiny a reakce se provádí za přítomnosti solného pufru, přednostně hydrogenuhličitanu sodného v molámím poměru k této aminokyselině 1:1.
- 19. Způsob podle některého z nároků 12 až 18, vyznačující se tím, že se reakce provádí v koncentrovaném vodném roztoku obsahujícím 0,67 až 2,75 dílu hmotnostního pevných látek na 1 hmotnostní díl vodného rozpouštědla.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PL29346492A PL171023B1 (pl) | 1992-02-13 | 1992-02-13 | Sposób wytwarzania nowych induktorów cytokin |
EP92103614 | 1992-03-03 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CZ194594A3 CZ194594A3 (en) | 1994-12-15 |
CZ285200B6 true CZ285200B6 (cs) | 1999-06-16 |
Family
ID=26130822
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CZ941945A CZ285200B6 (cs) | 1992-02-13 | 1993-02-11 | Produkty Amadoriho přesmyku, způsob jejich výroby a jejich použití |
Country Status (21)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5723504A (cs) |
JP (1) | JPH07506344A (cs) |
AT (1) | ATE187734T1 (cs) |
AU (1) | AU672595B2 (cs) |
BG (1) | BG62172B1 (cs) |
BR (1) | BR9305878A (cs) |
CA (1) | CA2130106A1 (cs) |
CZ (1) | CZ285200B6 (cs) |
DE (2) | DE632813T1 (cs) |
ES (1) | ES2072244T1 (cs) |
FI (1) | FI943733A (cs) |
GR (1) | GR950300017T1 (cs) |
HU (1) | HUT70434A (cs) |
MX (1) | MX9300759A (cs) |
NO (1) | NO304026B1 (cs) |
RO (1) | RO115633B1 (cs) |
RU (1) | RU2141337C1 (cs) |
SG (1) | SG52390A1 (cs) |
SK (1) | SK86994A3 (cs) |
TW (1) | TW302368B (cs) |
WO (1) | WO1993016087A2 (cs) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5629412A (en) * | 1994-07-11 | 1997-05-13 | Glinskii; Guennadi V. | Synthetic glycoamines that promote or inhibit cell adhesion |
FR2746316B1 (fr) * | 1996-03-19 | 1998-06-12 | Guerlain | Nouvelles compositions cosmetologiques ou dermatologiques |
WO1997049389A1 (en) * | 1996-06-27 | 1997-12-31 | The Picower Institute For Medical Research | 3-alkylamino-2-hydroxy-4-hydroxymethyl-2-cyclopenten-1-one advanced glycosylation endproducts and methods of use therefor |
DE19705233A1 (de) * | 1997-02-12 | 1998-08-13 | Froelich Juergen C | Verfahren zur Herstellung einer Formulierung enthaltend Arginin |
GB0319463D0 (en) * | 2003-08-20 | 2003-09-17 | Givaudan Sa | Compounds |
TW200925268A (en) * | 2007-12-06 | 2009-06-16 | Mallinckrodt Baker Inc | Fluoride-containing photoresist stripper or residue removing cleaning compositions containing conjugate oligomeric or polymeric material of alpha-hydroxycarbonyl compound/amine or ammonia reaction |
JP2012140360A (ja) * | 2010-12-28 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | 抗酸化剤、化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
JP5835894B2 (ja) * | 2010-12-29 | 2015-12-24 | クラシエホームプロダクツ株式会社 | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
JP2012140378A (ja) * | 2010-12-29 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
JP2012140377A (ja) * | 2010-12-29 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1514910A (en) * | 1974-07-02 | 1978-06-21 | Unilever Ltd | Amadori compounds and their use to flavour foods |
US4629692A (en) * | 1982-12-06 | 1986-12-16 | Miles Laboratories, Inc. | Immunoassay for nonenzymatically glucosylated proteins and protein fragments an index of glycemia |
DE3405841A1 (de) * | 1984-02-17 | 1985-08-22 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | N-acylierte 1-alkylamino-1-desoxy-ketose-derivate, verfahren zur herstellung und ihre verwendung |
DE3601472A1 (de) * | 1986-01-20 | 1987-07-23 | Fresenius Ag | Verwendung von umsetzungsprodukten von reduzierenden zuckern und serotonin oder serotonin-precursoren zur behandlung cerebraler stoerungen |
DK163689A (da) * | 1988-04-08 | 1989-10-30 | Sandoz Ag | Peptidderivater |
WO1992016216A1 (en) * | 1991-03-16 | 1992-10-01 | Torf Establishment | Peat-derived bioactive products and pharmaceutical and cosmetic compositions containing them |
-
1993
- 1993-02-11 RU RU94040167A patent/RU2141337C1/ru active
- 1993-02-11 ES ES93903950T patent/ES2072244T1/es active Pending
- 1993-02-11 SG SG1996003877A patent/SG52390A1/en unknown
- 1993-02-11 BR BR9305878A patent/BR9305878A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-02-11 RO RO94-01361A patent/RO115633B1/ro unknown
- 1993-02-11 DE DE0632813T patent/DE632813T1/de active Pending
- 1993-02-11 HU HU9402347A patent/HUT70434A/hu unknown
- 1993-02-11 DE DE69327310T patent/DE69327310D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-02-11 CA CA002130106A patent/CA2130106A1/en not_active Abandoned
- 1993-02-11 CZ CZ941945A patent/CZ285200B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-02-11 JP JP5513786A patent/JPH07506344A/ja not_active Ceased
- 1993-02-11 AT AT93903950T patent/ATE187734T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-02-11 AU AU34966/93A patent/AU672595B2/en not_active Ceased
- 1993-02-11 SK SK869-94A patent/SK86994A3/sk unknown
- 1993-02-11 WO PCT/EP1993/000327 patent/WO1993016087A2/en active IP Right Grant
- 1993-02-11 US US08/284,635 patent/US5723504A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-02-12 MX MX9300759A patent/MX9300759A/es unknown
- 1993-03-23 TW TW082102133A patent/TW302368B/zh active
-
1994
- 1994-08-05 BG BG98956A patent/BG62172B1/bg unknown
- 1994-08-08 NO NO942930A patent/NO304026B1/no unknown
- 1994-08-12 FI FI943733A patent/FI943733A/fi unknown
-
1995
- 1995-04-30 GR GR950300017T patent/GR950300017T1/el unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
HUT70434A (en) | 1995-10-30 |
ES2072244T1 (es) | 1995-07-16 |
DE69327310D1 (de) | 2000-01-20 |
FI943733A0 (fi) | 1994-08-12 |
NO942930D0 (no) | 1994-08-08 |
RU2141337C1 (ru) | 1999-11-20 |
SK86994A3 (en) | 1995-02-08 |
GR950300017T1 (en) | 1995-04-30 |
WO1993016087A2 (en) | 1993-08-19 |
NO304026B1 (no) | 1998-10-12 |
RU94040167A (ru) | 1996-07-10 |
ATE187734T1 (de) | 2000-01-15 |
CA2130106A1 (en) | 1993-08-14 |
MX9300759A (es) | 1993-11-01 |
US5723504A (en) | 1998-03-03 |
DE632813T1 (de) | 1996-02-15 |
HU9402347D0 (en) | 1994-10-28 |
AU672595B2 (en) | 1996-10-10 |
FI943733A (fi) | 1994-08-12 |
RO115633B1 (ro) | 2000-04-28 |
CZ194594A3 (en) | 1994-12-15 |
BG62172B1 (bg) | 1999-04-30 |
BG98956A (bg) | 1995-07-28 |
WO1993016087A3 (en) | 1993-09-16 |
AU3496693A (en) | 1993-09-03 |
SG52390A1 (en) | 1998-09-28 |
TW302368B (cs) | 1997-04-11 |
BR9305878A (pt) | 1997-08-19 |
JPH07506344A (ja) | 1995-07-13 |
NO942930L (no) | 1994-08-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
IKEKAwA et al. | Antitumor activity of Hypsizigus marmoreus. I. Antitumor activity of extracts and polysaccharides | |
JPH09503489A (ja) | リピドaの毒性を中和するためのペプチド | |
CZ287816B6 (en) | Peptide, process of its preparation, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof | |
CZ285200B6 (cs) | Produkty Amadoriho přesmyku, způsob jejich výroby a jejich použití | |
SU1012786A3 (ru) | Способ получени протеинового комплекса,стимулирующего секрецию инсулина | |
US5114926A (en) | Tetrapeptide inhibiting the entry into cycle of hemopoietic stem cells processes for its preparation, and its uses | |
JPH0288595A (ja) | 免疫刺激性ペプチド、その製法、及び該ペプチドを含有する薬剤組成物 | |
PL171319B1 (pl) | S posób wytwarzania kompozycji przydatnej do uzytku farmaceutycznegoi/lub kosmetycznego PL PL PL | |
Belokrylov et al. | Peptides and their constituent amino acids influence the immune response and phagocytosis in different ways | |
US4399124A (en) | Peptides having immunostimulating properties and pharmaceutical compositions containing them | |
EP0632813B1 (en) | Amadori reaction compounds and products, process for their manufacture, and their use | |
RU2136695C1 (ru) | Сывороточный гликопротеин, обладающий биологической активностью в сверхмалых дозах | |
JPH07196527A (ja) | ペプチドまたはその誘導体と、細胞増殖賦活化剤 | |
HU208160B (en) | Process for producing t-butyl-oxycarbonyl-1-tyrosylpeptidoglycan monomer and its derivatives marked with 125 i, as well as pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
JPS5959654A (ja) | ホルモン放出因子類似体及びその製造方法 | |
JP3859270B2 (ja) | アポトーシス誘導剤 | |
Weltzien et al. | Acidic “peptidophospholipids”, a new class of hapten-bearing cell surface modifying reagents | |
JP2952830B2 (ja) | 血圧降下剤 | |
Belokrylov et al. | Immuno-, phagocytosis-modulating, and antitoxic properties of amino acids and peptide preparations | |
PL171023B1 (pl) | Sposób wytwarzania nowych induktorów cytokin | |
US5948442A (en) | Stimulating ENTEROGENIN compositions and methods for their isolation and use | |
CA1337731C (en) | Inhibitory tetrapeptide of entry into cycle of hemopoietic stem cells, processes for its preparation and its uses | |
NL9000551A (nl) | Sdk peptiden, werkwijze voor de bereiding daarvan en therapeutische preparaten die deze bevatten. | |
RU2223113C1 (ru) | Пептид, обладающий регулирующей биологической активностью на белковый синтез в гепатоцитах | |
RU2046799C1 (ru) | Мономер трет-бутилоксикарбонил-l-тирозил пептидогликана и его 125j -меченое производное и способ их получения |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20010211 |