JPS5959654A - ホルモン放出因子類似体及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （発明の分野） この発明は、次の一般式（Ｉ）、 １　　２５４５６７Ｒ９ ｐＧ　１　ｕ　−Ｈｉ　ｓ　−Ｔｒ　ｐ−８ｓ　ｒ−Ｔ
ｙｒ　−Ｄ−Ｔ　ｌ　ｅ−Ｌｅ　ｕ−Ａｒｇ−Ｐｒ　ｏ
−ＮｒＩ−ＦＪｔ（Ｉ） （式中、Ｘは水素原子又は保護基、好ましくはｐ−トル
エンスルホニル（トシル）基であル、）で表わされる黄
体形成及び卵胞刺激ホルモン（ｒ、■ｉ十ＦＳｕ）放出
因子類似体に関する。他の略号は通常の意味を有する。

すなわち、Ｅｔはエヂル基を意味し、次の記号（左）は
それぞれ次（右）に示す二価基を意味する。

ｐＧｌｕ　　　　　ピログルタミン酸 Ｈ１ｓ　　　　　ヒスチジン Ｔｒｐ　　　　　　トリプトファン Ｓｅｔ　　　　　セリン Ｔｙｒ　　　　　チロシン １、ｒａｕ　　　　　ｏ−イシン Ａｒｇ　　　　　アル“Ｙニン Ｐｒｏ　　　　　　７５０−リン 上記の新規々生物学的に活性なノナペプチドは高い性腺
刺激活性を有し、そして性周期の制御のため、性周期異
状の治療のため、そして非ステロイド系避妊薬と（−て
、ヒト及び動物薬として使用することができると期待さ
れる。

（発明の背景） すでに知られている通シ、黄体形成及び卵胞刺激ホルモ
ン放出因子（ＬＲＦ）は視床下部により生産され、そし
て脳下垂体前葉におけるＬＨ十ＦＳＨの遊離を誘導する
。遊離したＬＨ＋ＦＳＨは、ヒト及び動物の両性におい
てステロイドホルモンのレベルを制御する。ＬＲＦ受谷
器は生殖腺の周辺にも見出される。拮抗的に（放出に関
して）活性なＬＲＦ類似体は、例えば機能的不妊及び卵
巣のう胞の治療のためにヒト及び動物の医療において使
用される。

さらに、高いそして持続的な作用を有するある種のＬＲ
Ｆ類似体は逆の作用、すなわち排卵及び精子形成を抑制
する作用を崩する。

次の構造、 １２３４５　　　６　　７８９１０ ｐＧ　ｌ　ｕ−Ｈ３ｓ　−Ｔｒ　ｐ−８ｅ　ｒ−Ｔｙｒ
　−Ｇ　１　ｙ−Ｌｏ　ｕ−Ａｒｇ−Ｐｒ　ｏ−Ｇ　ｌ
　ｙ−ＮＨ２を有する天然のＬＲＦデカペプヂドは、そ
のｐＧｌｕ−Ｈｉｓ結合、Ｔｙｒ−Ｇｌｙ結合、及びＰ
ｒｏ−Ｇｌｙ結合の切断の結果として急速な酵素分解を
受ける。従って、これらの臨界的部位におけるアミノ酸
残基を他の残基に置換することによシ、変性さノ１．た
、より高い、そしてより長時間持続する活性を有するさ
らに耐性の高い類似体を得る試みがな込ｌじＣきた。そ
して、６位のグリシンを種々の非イ１ｉ白性Ｄ−アミノ
酸及びその誘導体により、’Ｉ”Ｊにある種の親脂性を
イ１する誘導体により置換することにより、作用的に（
ａｇｏｎｉｓｌｃａｌｌｙ）高い活性をイｊず２゜物質
が誘導された。１０位のＧｕｙ−１ＵＩ２を通常のアル
キル基によジ置換することにより、さらに高いＬＲＦ活
性を有するいわゆる「超活性」類似体が得られた。低い
投与量で投与した場合、これらの物質は特に排卵異状の
治療のため、及び乳／１のステアードレプロダクチ・イ
ブレジーム（ｎｔｅｅｒｅｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ
　ｒｅｇｉｍｅ）における排卵誘発のために有用である
。これらの物質は、農梨動物における性周期の制御のた
め、非ステロイド牲避妊のため及び内分泌依存腫瘍の治
療のために多量に投与することができる。

（発明の構成及び効果） 新規な構造変化を含む構造と活性との関係についての研
究を組織的に継続した結果、高い生物学的活性と医薬と
して使用される可能性を有するＴ、ＲＦ類似体を開発し
た。すなわち、この発明に従えば、天然ＬＲＦの６位の
グリシン基が、この関連においては今まで記載されてい
ないＤ配置を有する新規なアミノ酸の二価基により１１
′１−換された。この基は１−アミノ−３，３−ジメチ
ル−Ｄ−醋酸（ｔｅｒｔ−ロイシン）の基である。この
脂肪族性（１１１１鎖借造は相当に親脂性であシ、そし
て効果的に立体障害される。この２つの／ｒｆ徴のいず
れもが、１．１？、Ｆ類似体の生物学的活性、特にこの
活性の程度及び゛持続性に好都合な影響を与える。この
（ｉ−Ｉ）−１’ｌｅ類似体は、Ｑ−ｔ、ｅｒｔ−ブチ
ル−Ｄ−セリン基又は例えば３−（２−ノーフチル）−
〇−アラニンの芳香族性側鎖を有する類似体に比べて、
代？、Ｑｌ　Ｆ’＋川に対して実質上安定であυ、従っ
て持続性を、０ｊ′□る。。

１０−　Ｇｕｙ−ＮＨ２をＮｆＩＩ丸により置換するの
が最適である。

部分的に保護されたＬＲＦ類似体前駆体は、対応する保
護されていない化合物の活性の実質的な部分を維持して
いる。従って、８位のＡｒｇが遊離の形で存在すること
は高い作用活性のために必須では々い。よυ入手しやす
く、−ｔ　Ｌ、で安価左これらの合成前駆体を使用する
ことに上り、！＋Ｍ°に動物の治療において所望の生物
学的活性がイＩＪられるから前記の知見は特に重要であ
る３゜ 幾つかのＬＲＦ’類似体について、阻害活性を有する逆
の例がすでに報告されている。

ＬＲ，Ｆ類似体（Ｖｌ）及び（■）（例を参照のこと）
を、卵巣剥除した幼牝牛に、１０μｇ及び２００μμの
投与量：で静脈力投した。二重抗体の均−系によシＲＩ
Ａ測定を行った〔スラップニラ−Ｙ　（Ｓｔｕｐｎｌｃ
ｋｌ　）Ｒ・、ミラデジ（八（ｌａｄｅｊ）人、　：　
Ｅｎｄｏｃｔ　ｌｎｏｌｎｇｙ　６８．６（１９７６年
）〕。〕牛ＮＩＨ−ＬＥＲ−１’７１６−２標品をヨウ
ド化標準として使用した。ＲＩＡ感受性は１００ノ堤よ
υ犬であった。５ＴＨ−プロラフアン交叉反応は１％で
あった。試験結果を次の第１表に示す。

２００μｇのＬＲＦ及び類似体を投与した後におけるＬ
Ｈ−Ｈ”ｓＨのレベル ブラ、り　　　−　　　　　　　　　　　　　　：（１
２ｊ１．９ＬＲＦ　　　　　　４０±１１．５　　　　
　１０（１±２６．７　　　　１０８．４１に１Ｇ、１
■　　　　２６７±３８　　　４３±２０．４　　　７
２．４ｆ−１０，９Ｖ１１　　　　　　４０．０±ｒ、
、ｏ　　　　　　　２３０±３２．１　　　　　１１０
．９１１１７ＬＲＦ　　　　５３．３±１３．９　　１
２．３ｆ’！ｒ、ｏ　　　　　７．４３±１．６■　　
　　４６６±１５．４　　８６．７±１０．７　　　３
．８８±］３■　　　　　５３．３±１９．０　２３６
．７±１０　　　１１．２４＋１．５９２鍾類の投力し
ペルで投与した化合物（■）は、非常に高い作用効果を
有する。この化合物は化合物（Ｖｌ）すなわち対応する
トシル誘導体よりさらに活性であり、そして比較対照で
ある天然ＬＲＦよりさらに活性である、この発明に従っ
てＧｌｙをＤ−Ｔｉｅによ、り置換することにより、Ｌ
ＲＦ作用の程度及び持続が顕著に増加する。このことは
、動物画たシ１０μｇの投与量においても明らかに観察
された。部分的に保護された前駆（−１ト：　（■’）
　（ｒＪ：相当な活性を有する。この知見により、４ゾ
チド核の構造（主体構造）の６位における前６１】の（
１■１ζ、変化の有意な効果が確認される。この置換の
好都合な効果は８位におけるＡｒｇのトシル化の不都合
な効果を大きく超越する。天然ＩＲＦの対応する８−ト
シル誘導体はほとんど活性を有しない。

式（１）のノナペプチドは、各アミノ酸又は低級ペプチ
ドを、ペプチド化学における製造方法を用いて結合反応
せしめることにより製造することができる。このための
好ましい方法は、次の一般式（） ％式％（） 〔式中、Ｘは式（１）の場合と同じ意味を有し、そして
Ｙは水素原子又は水素化分解により除去し得る保護基、
好ましくはベンジルオキシカル７］ソニル基である、〕 で表わされる化合物を、次の式（］Ｈｌ、ｐＧｌ　ｕ−
Ｈｌ　ｎ−Ｔｒｐ　　　　　（ＩＩＩ）で表わされるト
リペプチドの反応性誘導体と結合せしめ、そして所望に
より保護基を除去する方法である。

結合反応は、ペプチド化学の古典的な製造方法である溶
液中で［ｇ、シュレーダー（Ｓｏｈｒｏ＊ｄｅｒ：）、
Ｋ、リュプケ（Ｌｕｂｋｅ）　、Ｔｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ　、　Ｖｏｌ、　［ＩＭびＩＴ、　Ａｃ１ｄ　Ｐｒ
ｅ８ｇ　、　＝　ニーヨーク、１９６５年〕又は固相中
で〔Ｊ、Ｍ、ステワード（ＳｔｏｗＲｒｔ）　、Ｊ、Ｉ
）・ヤ７り（Ｙｏｕｎｇ）、　Ｓｏ目ｄ　ｐｈａｓｅ　
ｐｅｐｔｉｄｅＲｓｙｎｔ、ｈａｑｌｑ　。

Ｗ、Ｉｌ、フリーマン社、サンフランシスコ、１９６９
年〕行うことができる。場合忙よっては末端保設基をベ
ンジルオキシカルボニルニル基の導入により保護するの
が打部ａである。側鎖の官能基は、Ａｒｇのり）合を除
き、保護する必要がない。アルギニンのグアニジノ基の
保護はトシル基により行った。この基の除去は常法に従
って行うことができるが、適当な保護剤、例えばチオグ
リコール酸（例を参照のこと）の存在下で、トリフルメ
ロ酢Ｍ中１−リフルオロメタンスルホン酸の溶液を用い
る新規力方法により行うことができる。この方法に上り
、感受性のペプチド分子の他の部分を同時に分解するこ
となくトシル基を急速に除去することができ、従って公
知の方法に比べて実質上高い収率で目的生成物が得られ
る。

保護基を除去した後、得られた生成物を直接に液体クロ
マトグラフィーにより精製することができる。これによ
シ、この発明のノナペプチドが高純度で得られる。いわ
ゆる逆相すなわぢＣＲ”ＣｊＦｌ炭化水炭化全素層せし
めることにより表面変性したシリカゲル（粒径１０〜３
０／１ｍ）を、固定相として使用するのが好ましい。溶
出は、メタノール（含まれる啄プブド化合物に応じて２
０〜６０容量係）及び０．１〜０．５％、好１しくは０
．２％のトリフルオロ酢酸の混合物を移動相として使用
して行う。移動相におけるイオン化抑制剤としてのトリ
フルオロ酢酸の存在は、効果的な分ＩＷｃを行うために
必須である。これにより、追加の脱塩操作を用いないで
１操作により物質を精製することが可能であった。

今まで、同様のペプチド化合物のイ′青製に液体クロマ
トグラフィーは使用されていなかった。前記の移動相は
、処理化合物のイオン化を制御するだめの種々のＰＩ（
の緩衝液を用いるすでに記載されている移動系に代わる
ものとして開発された。緩衝化移動相を用いる場合、分
離した化合物をさらに脱塩処理しなければならず、この
ために分離が相当に血判になりそＩ−て多くの時間を必
要とするようになる。

この発明の生物学的に活性なノナペブ゛チド化合物のＪ
ｌｑ造方法の前記以外の特徴を次の例によシ示す。この
例において、２はベンジルオキシカルボニルｇ、Ｔｏｅ
はトシル基、すガわちｐ−）ルエンスルホニル基、ＤＣ
ＨＡハシシクロヘキシルアミンを示す。この例は、説明
のだめのものであって、これによシこの発明の範囲を限
定するものではない。

５０ｇのＺ−Ｐｒｏ（０，２モル）を１７０ｍ１のジメ
チルホルムアミドに溶解し、これに２１　ｍ／！のピリ
ジンを注入し、そして溶液を一４０℃に冷却する。ピパ
ロイルクロリド（２９ｍｌ、　、（１，２２モル）を加
え、そして混合物を一３０℃にて１０分間攪拌する。反
応混合物を４０℃に冷却した後、５０ｍ１のジメチルホ
ルムアミド中１ｏ、ｌＯ，２ｘモル）のエチルアミンの
溶液を加える。０℃にで一装置いた後、ジメチルホルム
アミドを蒸発せしめ、そして残渣を酢酸エチルに溶解し
、結晶化せしめる。５０ｇ（収率９１チ）の標記化合物
をイυる。融点１２５〜１３０℃。

Ｚ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−Ｐｒｏ−ＮＨ−Ｆｔ　（ｎ）４
．５．９のＺ−Ｐｒｏ−ＮＨ−Ｅｔ　（１６，２ミリモ
ル）を、酢酸中具化水素酸溶液で処理することにより保
護基を除去する。室温にて２０分間装いた後、エーテル
によシ臭酸塩を沈澱せしめ、そしてすぐに３０ｍ１のジ
メチルホルムアミドに溶解した。

ｉｏｙのＺ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）ＤＣｌｌＡ　（Ｉｔ、　
７．８ミリモル）を２　Ｎ　ＨＣｔで分解し、遊離しだ
Ｚ−Ａｒ　ｇ　（Ｔｏ　ＩＩ）　′５Ｃ酢酸エチル中に
抽出する。溶剤を蒸発せしめた後、この生成物を泡状物
として得る。これを６Ｑｍ／！のジメチルホルムアミド
に溶解し、ぞして溶液を一４０℃に冷却し、そしてこの
温度において、１．４ｍ１（２０ミリモル）のピリジン
、２．２　ｍｌのＮ−エチルヒ啄リジン及びｚ、ｔｍｇ
（ｔｏミリモル）のビバリルクロリドで次々と処理する
。−３０℃にて２０分間攪拌した後、Ｐｒｏ−’ＨＨ−
ＥＪＩＩＢｒの上記の溶液を江加し、そして反応混合物
のｐ＋（をＮ−エチルピペリジンを用いて７．５に調整
し、そして冷蔵庫に一夜放置する。次に揮発性部分を蒸
発ぜしめ、残渣を酢酸エチルで抽出し、抽出物をＩＮ塩
酸、５％炭酸水素す）　ＩＪウム溶液及び水で次々と洗
浄する。

次に溶剤を共沸条件下で留去し、６．０２，９（６３％
）の標記化合物を泡状物として得る。アミノ酸組成分析
：　Ｐｒｏ　Ｏ，９１、Ａｒｇｌ、０９．。

６ｇ（８，７ミリモル）のＺ−Ａｒｇ（Ｔｏｎ）−Ｐｒ
ｏ−Ｎｒ（−１ｉｉｔを、酢酸中具化水素酸溶液で処理
することにより保護基を除去する。エーテルを用いて臭
酸塩を溶液から沈澱せしめ、そしＣ″２５ｍ１のジメチ
ル；ｊ゛ルムアミド１度に溶解する。、３．７２ｇ（８
，７ミリモル）のＺ−Ｌｅｕ　ＤＣＨＡ　％　１．２　
Ｊｎｌ’　（１０ミリ七ル）のビバリルクロリド、０．
８３ｍｌ　（８，７ミリモル）のピリジン及び１．１９
ｍｌ　（８，７ミリモル）のＮ−エチルピペリジンを用
いる上記の混合無水物法により再度縮合を行う。この場
合溶剤とし−Ｃジメチルポルムアミドを使用する。前記
の例の化合物■と同様にして生成物を分離する。４．５
ｇ（７３ｑ６）の標記化合物を泡状物として得る。アミ
ノ酸組成分析：Ｌｅｕ　Ｏ，９８、Ａｒｇ　１．０９、
Ｐｒｏ　Ｏ，９３゜２．６９　（５，８２ミリモル）の
Ｚ−１）−Ｔｌｅ　Ｉ）ＣＩＡを０、ＩＮ硫酸で処理す
ることにより頃を分解し、遊離したＺ−Ｄ−Ｔｉｅを酢
酸エチル中に抽出する。溶剤を蒸発せしめた後、２ｇの
油状生成物を得る。この物質を２０ｍ１の塩化メチレン
に溶解する。

４　、ｑ　（５，７ミリモル）の化合物（ＩＩＩ）を酢
酸中具化水素酸で処理して脱カルボベンジル側キシル化
する。メタノール溶液中０）Ｉ−型の陰イ刊ン交換体カ
ラムを用いてＡ酸１話から生成物を１ＪＩＬ離ぜしめる
。

２．９２のＬｅｕ−Ａｒｇ（Ｔｎｓ　）−Ｐｒｏ−ＮＨ
−１ｉ、’ｔを泡状物として得る。この生成物＆：、Ｊ
：ｐＨ２，５及び５７におけるＴＩ’Ｔ、気泳動におい
て純粋でを）るにンヒドリンにより検出）。得られた遊
１顎ｌ・リペプチドアミドを１５ｍ１の塩化メチレンに
一度に溶解Ｌ、−２，０℃に冷却し、前もッテ調製しま
たＺ−１，）−ＴＩ、！溶液、及び１ｒ）ｍｅの塩化メ
チレン中２ｇ（：９．７ミリモル）のジシクロヘキシル
カルビジィミドの溶液を加える。反応混合物を４日間冷
蔵庫中に放置、する。次にジシクロヘキシル尿素の沈澱
を炉去し、炉液６：蒸発せしめ、ぞして７Ａ渣を酢酸エ
チルに溶解する。ｌ　ｔＪ堪酸、５チ炭酸水素ナトリウ
ノ・溶液及び水を用いてて酢酸エチル溶液を次々と洗浄
した後、標記化合物を中性物質として分離する。３．９
ｇ（９３％）のシフ０チドを泡状物として得る。りｒ」
ロホルムーメクノール（９：１）系を用いるシリカゲル
薄層り１：Ｉマドグラフィーにおいて生成物はクロマト
グラフ的に単一である。アミノ酸組成分析：　Ｄ−’Ｉ
’＋６　（１，９２、Ｌｅｕ　Ｏ，９８、Ａｒｇｌ、０
１、ＰｒｏＯ，９３゜３．６ｇの化合物（ＩＶ）ａ−１
・ぞラジウム触媒上水素化分解により処１＋ｆｉ　Ｌ、
て保護基を除去する。３０ｇ（４４ミリモル）の遊離テ
トラペゾグ°ドを得る０無水のジメチルホルムアミド−
塩化メチレン混Ｏ物中−３０Ｃにて、１．９９のＺ−８
ｅｒ−Ｔｙｒ−Ｎ、ＩＴ、　。

１．５ｍ／！のジオキサン中８Ｎ塩酸溶液、及びＯ，ｇ
　ｍｅの亜硝酸ｎ−ブチルな用いて、Ｚ　−Ｓ　ｅ　ｒ
　−Ｔ　ｙ　ｒ　−Ｎ　３とノ縮合ヲ行う。Ｎ−エチル
ビイリジンを用いて中和（ｒＨ８）を行う。次に反応混
合物を０℃にて３日間冷蔵庫に放置する。揮発性部分を
蒸発せしめ、そして残渣を酢酸エチルに溶解する。溶液
を、ＩＮ塩酸、５外炭酸水素すｌ・リウノ、溶液及び水
を用いて次々と反復して洗浄し、そして乾燥しそして蒸
発せしめる。４．１４ｇ（７６％）の非結晶性のへキサ
４ゾチドを得る。生成物は、液体クロマトグラフィー（
０，４Ｘ２５ｃｒｎのカ２）・を使用、固定相：変性シ
リカゲル、移動相ニア０容月襲のメタノール及び３０容
量−の燐酸緩衝液Ｐ＋１４．４　）による検定において
クロマトグラフ的に単一である。生成物は８２ｆ）の標
記へキサペプチドを含有する・アミノ酸組成分析：　Ｓ
ｅｒ　１．１４　、　Ｔｙｒ　１．０５．　Ｄ−Ｔｉｅ
Ｏ，９８，Ｌｅｕ　１．０３　、　Ａｒｇ　１．０４　
、　Ｐｒｏ　１．００゜前記のへキサペプチド（Ｖ）　
（３，８，９）　　を、メクノール溶液中パラジウム触
媒により水素化分解することによυ保護基を除去する。

８８チの遊離ベキザ−でプチドを含有する物質３．２ｇ
を得る（液体クロマトグラフィー、カラムの大きさ及び
固定相は前記の通シ、移動相：５０容μ１％のメタノー
ル及び５０容量チのトリフルオロ酢酸−トリエグールア
ミン緩衝液ＰＩ（３，９，２２０ｎｍにおけるＵＶによ
シ検出、によシ測定）。

無水のジメチルホルムアミドージメチルメルホキシド（
１：１）混合物中、１．６ｇのｐＧｌｕ−Ｉｌ、１ｓ−
Ｔｒｐ−Ｎ２Ｈ３，３２ｙの前記へキザベプチド、及び
０．５　ｍｌの亜硝酸ｎ−プグールを用い−Ｃアジド縮
合を行う、４−２０℃にて反応を行い、この温度で３０
分間アジ１゛形成を行う。次いニ、反応ｄ？１自物（７
）　１ｕｌｌ　ｉ−ｓ　〜９　ｋ　調Ｊ悸ｔ、、そして
、、１１を途中’ｌ’ｌ’ｌ＋：祝Ｌ　’／Ｊ’。

がら４日間冷蔵Ｊｒｉ＜におく。溶剤を蒸ヴ＋ｊ４ｊ、
’　Ｉ〜めた後、残ｌｆｆを少、ｆ７（のエーテルに溶
解し、−そしで・（：１らｉｌだ油状溶液を：３０ｍｅ
のメタノールで稀釈〕る。酢酸エチルを加えることによ
り生成物を沈澱せしめ、瀘紙−ヒに集め、酢酸エチル−
エーテル混合物で洗浄する。３．６５．９’（８７ヴ）
の相ノナベグヂドを得る。液体クロマトグラフィー（カ
ラムの大きさ及び固定相は前記の通り、整励相二６０容
゛間係のメタノール及び４０容ｔ％の隣酸綬衝液ｒｌｌ
　７．０．２１０　ｎｍにおりるＵＶに１℃す（“灸出
）において−１得られた生成物に７０チの標記化合物を
含有し、このほかにクロマトグラフィーのピークにより
示される若干の出発物質（標）■物質を混合してフィー
ドすることにより同定する）を含有する。この相ノナペ
プチドのアミノ酸組成分析の結果は、Ｇｌｕｌ、４３．
　Ｈｉｓ　１．４１．　Ｔｒｐ　１．１．０．　　Ｓｅ
ｒ　１．０り、　Ｔｙｒ　Ｌ２０゜１）−Ｔｉｅ　Ｏ，
８９，Ｌｅｕ　１（＋（１，Ａｒｇ（１，８８，Ｐｒｏ
　Ｏ，％１０である。

生物学的活性を標価するために次の条件下で調興用クロ
マトグラフィーにより物質をＦＮ製する。

カラムの大きさ２．５　＞Ｃ３Ｑα、固定相：変性シリ
カゲル（粒子−リ□（−”　１　（ｌ　ｌｔｍ　）　、
％’ｉ−動相：６（）容−ｈ）：係のメタノール及び４
０容１口、チの０．２　％　ｌ・リフルオロ酢酸水溶液
、２１（ｉｎｍにて検出する。３００７＃ｙの粗ノナペ
ゾチド（３罰の移動相に溶解して注入）から９６チ純度
の生成物１４８ｒｎダを得Ｚ）。アミノ酸組成分析：　
Ｇｌｕ　１．０１．　　Ｈｉｓ　１．０１．　　Ｔｒｐ
　Ｏ，９０゜Ｓｅｒ　Ｏ，９５，Ｔｙｒ　１１．０１．
　　Ｊ’）−ＴｉｅＯ１９５＋　Ｌａｕ　１０　（１＋
Ａｒｇ　Ｏ，９９，Ｐｒｏ　１．０４゜（■（） 上記のようにして精製した化・０物（■）のＲＪ（料（
３ｏｍｐ）を０．６　ｍ（！のｌ−リフルオロ酢酸にｉ
′δ解する。チオグリコールＲ（０，５ｍ１）を加え、
そして混合物を０℃に冷却し、Ｑ、　４　ｍｌのトリフ
ルオロメタンスルホン酸で処理し、そして３０力間冷蔵
庄中に放置する。次にエーテルにより生成物を沈澱ぜし
め、そして沖取する。イ：７られた、べ゛・く′吸湿性
の粉末をＩＭの酢酸に溶力了し　；、、、、、して溶１
１ダを凍結乾燥する６２Ｆｌ：Ｚの粗生成物をイ：する
。この物りＬを、固定相とじで変性シリカゲルを使Ｊ■
１シ、そシて移動相として５５容訊襲のヌクノール４５
係水溶液及び４５容ＦＴ％のトリフルオロ酢酸０２楚水
溶液の混合物を使用する２、５Ｘ３０ｒｒｎカラムによ
る液体クロマトグラフィーによ’）Ｍ’ｉ’ｆｉｔＩ呈
する。１ａ製された物質の試料（２５Ｑ？）を０．５　
ｍｌの移動相に溶解し、そして注入する。＋２８０ｎｍ
にて記録する。純粋な標記化合物を含有する分画を隼め
、メタノールを３０℃にて減圧蒸発亡しめる。１Ｍ酢酸
中溶液を凍結乾燥することにより９８　％　ｉ’ｌ１度
の精製された生成物１０．５ｍ９を得る。アミノ酸組成
分析：Ｇｌｕ　１．０３．　　ｌｌ１ｓ　Ｏ，９４，Ｔ
ｒｐ　Ｏ，８０，Ｓｅｒ　（１，９５゜Ｔｙｒ　Ｏ，９
６，Ｄ−Ｔｉｅ　Ｏ，９０，Ｌｅｕ　Ｏ，９９，Ａｒｇ
　１．０６゜Ｐｒｏ　　１．０１　　。

／ｌ’イＷ「出＋Ａｒｔ人 スボファ、スボエネ　ポドニキイ プロ　ズドラ？トニチコウ　ビロブ 特許出願代理人 弁理士　宵　木　　　　朗 弁理士　西　舘　オ１１　　之 弁理士　　福　　本　　　　　積 弁理士　山　口　昭　之 弁理士　　西　　山　　雅　　也 チェコスロバキア国プラハ８ナ ト・ストレルニチ３ ０発　明　者　イリ・コリンスキイ チェコスロバキア国プラハ６ク ラロプス力・オボラ１１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の一般式（１） （式中、Ｘは水素原子又は保護基、好ましくはｐ−）ル
   エンスルホニル基テアル、） で表わされる高い生殖腺刺激活性を有する黄体形成及び
   卵胞刺激ホルモン放出因子類似体。 ２、個々のアミノ酸又は低級４プチド基を、波プチド化
   学における製造方法を用いて結合せしめることを特徴と
   する次の一般式（１）、１　　　　２３４　　　５　　
   　　　６　　　７（１９ｐＧ　ｌ　ｕ−１（ｋ　ｓ　−
   Ｔｒ　ｐ　−８ｅ　ｔ−Ｔｙｒ　−Ｄ−Ｔ　１　ｅ　−
   Ｌｅ　１１−Ａｒ　ｇ−Ｐｒ　ｏ−ＮＩＩ−Ｅ　を交 （１） （式中、Ｘは水素原子又は保護基、好ましくはｐ−）ル
   エンスルホニル基でアル、） で表わされる化合物の製造方法。 ３、次の一般式（Ｈ）、 Ｙ−８ｅｔ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｔｌ　ｅ　−Ｌｅ　ｕ−Ａｒ
   ｇ−Ｐｒ　ｏ−ＮＨ−Ｅｔ　　　（［［）〔式中、Ｘは
   式（１）の場合と同じ意味を有し、そしてＹは水素原子
   又は水素化分解によシ除去し得る保護基、好ましくはベ
   ンジルオキシカルボニル基である、〕 で表わされるヘキザ啄プチド防導体を、次の式（Ｉｌｌ
   ）、ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ　　　　　（ＩＩＩ）で
   表わされるトリペプチドの反応性誘導体と結合反応せし
   め、そして所望によシ保護基を除去することを特徴とす
   る特許請求の範囲第２項記載の方法。 ４．８位の保ｍｐ−トルエンスルホニル基の除去を、保
   護剤、好ましくはチオグリコール酸の存在下で、トリフ
   ルメロ酢酸中トリフルオロメタンスルホン酸の溶液を用
   いて行い、次に生成物を分離し、そしてＦｆＩ製するこ
   とを特徴とする特許の範囲第３項記載の方法。 ５　反応生成物の精製を、移動相とＬ７て水性メタノー
   ル中トリフルオロ酢酸の溶液を用いる逆相液体クロマト
   グラフィーにより行うことを特徴とする特許請求の範囲
   第４項記載のｌｊ法。