BG98956A - Съединения и продукти на реакцията на амаdоri,метод за тяхното производство и използването им - Google Patents
Съединения и продукти на реакцията на амаdоri,метод за тяхното производство и използването им Download PDFInfo
- Publication number
- BG98956A BG98956A BG98956A BG9895694A BG98956A BG 98956 A BG98956 A BG 98956A BG 98956 A BG98956 A BG 98956A BG 9895694 A BG9895694 A BG 9895694A BG 98956 A BG98956 A BG 98956A
- Authority
- BG
- Bulgaria
- Prior art keywords
- reaction
- radical
- group
- amino acid
- glucose
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 29
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims abstract description 36
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims abstract description 35
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 32
- -1 triptophane Chemical compound 0.000 claims abstract description 20
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 238000003691 Amadori rearrangement reaction Methods 0.000 claims abstract description 16
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 13
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 12
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 7
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 7
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 claims abstract description 6
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims abstract description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims abstract description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims abstract description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims abstract description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims abstract description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 4
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims abstract description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims abstract description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims abstract description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960004295 valine Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims abstract description 4
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims description 46
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 28
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 17
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 17
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 15
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims description 9
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003415 peat Substances 0.000 claims description 9
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 claims description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 7
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 6
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 5
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 4
- SHZGCJCMOBCMKK-QYESYBIKSA-N 6-deoxyglucose Chemical compound C[C@@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-QYESYBIKSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 3
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims description 3
- 235000008521 threonine Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 3
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 claims description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 claims description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 claims 3
- VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N (3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CC=O VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N 0.000 claims 2
- PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N alpha-D-ara-dHexp Natural products OCC1OC(O)CC(O)C1O PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 claims 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 abstract description 6
- 229960002429 proline Drugs 0.000 abstract description 6
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 abstract description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 abstract description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 abstract description 2
- 235000008729 phenylalanine Nutrition 0.000 abstract description 2
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 abstract 1
- PNNNRSAQSRJVSB-JGWLITMVSA-N D-quinovose Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-JGWLITMVSA-N 0.000 abstract 1
- 230000001175 peptic effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 45
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 31
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 9
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 9
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 7
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 5
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 3
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 2
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-n-(6-hydrazinyl-6-oxohexyl)pentanamide Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCCCCC(=O)NN)SC[C@@H]21 IJJWOSAXNHWBPR-HUBLWGQQSA-N 0.000 description 1
- LDCYZAJDBXYCGN-VIFPVBQESA-N 5-hydroxy-L-tryptophan Chemical compound C1=C(O)C=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 LDCYZAJDBXYCGN-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 1
- 208000035859 Drug effect increased Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 235000014066 European mistletoe Nutrition 0.000 description 1
- 102000020897 Formins Human genes 0.000 description 1
- 108091022623 Formins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000599940 Homo sapiens Interferon gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 description 1
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 1
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 1
- 241001366278 Leptotes marina Species 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000237503 Pectinidae Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241001319148 Pharmacis Species 0.000 description 1
- 206010067171 Regurgitation Diseases 0.000 description 1
- 235000012300 Rhipsalis cassutha Nutrition 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 241000221012 Viscum Species 0.000 description 1
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-rhamnose Chemical compound C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 239000007806 chemical reaction intermediate Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013058 crude material Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- YAGKRVSRTSUGEY-UHFFFAOYSA-N ferricyanide Chemical compound [Fe+3].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] YAGKRVSRTSUGEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000686 immunotropic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000263 nonmitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000012063 pure reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000007363 regulatory process Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 235000020637 scallop Nutrition 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010972 statistical evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
- C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H7/00—Compounds containing non-saccharide radicals linked to saccharide radicals by a carbon-to-carbon bond
- C07H7/02—Acyclic radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q5/00—Preparations for care of the hair
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Cephalosporin Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Новите съединения на реакцията на Амадори имат формула R1-NH-R2, в която R1 е радикал, включващ 1-дезокси-2-кетоза, извлечен от захар в D-форма, подбран от групата глюкоза, ксилоза, галактоза, рамноза, фруктоза, маноза, 6-дезоксиглюкоза, глюкозамин и галактозамин, а R2 включва L-формата на аминокиселина или пептиден радикал, избран от групата серин, глицин, пролин, хистидин, аргинин, аланин, аспарагинова киселина, глутаминова киселина, фенилаланин, треонин, цистеин, цистин, глутамин, аспарагин,метионин, тирозин, хидроксипролин, триптофан, валин, изолевцин, лизин и левцин. Съединения и комбинации от съединения с обща формула R1-NH-R2 в коятоR1 включва 1-дезокси-2-кетозен радикал, извлечен от групата прости захари, олиго- и полизахариди, аR2 - аминокиселина или пептиден радикал, се използват за производство на фармацевтични препарати, които в контакт с човешки левкоцити продуцират интерферон и други цитокини.
Description
Настоящето изобретение се отнася до нови съединения и продукти на реакцията на Amadori, тяхното производство, както и новото използване на тези съединения и продукти, влезли най-малко частично в прегрупиране на Amadori съгласно следната схема и/или реакция на Mai Hard :
| н ан | |
| IX | |
| с------ | |
| 1 н - с - он I | н - |
| 1 но - с - н | | + H^N-R —> на - |
| 1 н - с - он | н - |
| 0 | |
| н - с----- | н - |
| 1 сн2он |
Продуктите на реакцията
| 4/NH.R | н | Η 1 | ||
| - С I | - NH.R | |||
| L· · — | ||||
| с - он 1 | Прегрупиране | 1 с 1 | = 0 | |
| с - н 1 | — > на | но | - Н | |
| с - ан 1 | Amadori 3 | Η | - с 1 | - ОН |
| с------ | Н | - с | - ОН |
снгон СН2ОН на Amadori са известни; те са продукти на реакция между, например аминокиселина или пептид със захар, олиго- или полизахарид, претърпяп прегрупиране на Amadori (J.Biol.
Sac.215 (1955),
Henri
Borsook et al.). В германски патент DE-C-3914354 е описан водоразтворим гликопротеин на аминокиселина и захар, изолиран от екстракт на семена от Avena sativa. Освен това, в европейска заявка за патент ЕР-А-406087 се описват водоразтворими полизахаридни-гликопептидни комплекси, които са извлечени от клетъчните стени на Gram положителна бактерия, а в списание J. Biol. Chem. 1985,260/9 се съобщава, че е използвана NMR-спектроскопия за характеризиране на продуктите от реакцията на Amadori, получени при реакция между гликоза и свободни аминогрупи на белтък.
Настоящето изобретение описва специфични нови съединения, продукти на прегрупирането на Amadori съгласно претенция 1. Предпочитаните варианти са описани в претенции от 2 до 4.
Тези съединения редуктират калиев ферицианид - реакция за тестване на биологично-активни субстанции, формирани в реакция между захар и аминокиселина.
Изобретението се отнася и за ново използване на такива съединения и едновременно за ново използване на продукти на реакцията на Amadori от захари и аминокиселино въобще, както е описано в претенции от 11 до 17. До този момент никой не е изследвал различните стъпки на пречистване на екстракт от продукти на реакцията на Amadori ( с цел да бъдат освободени от баластни субстанции и примеси ) и тяхната биологична активност.
Известни са имуностимулатори от естествени източници , като екстракти от имел, торфени екстракти и т.н., чиито недостатъци са скъпото обработване на големи количества суров материал, за да се получат няколко грама активна субстанция; неконтролируеми примеси, които могат да доведат до токсичност и странични ефекти , както и до проблеми по време на използване, дължащи се на сложната природа и трудно възпроизводимия състав.
Сравними продукти или смеси от продукти от изкуствени източници, като интерферон или получени по други методи на генното инженерство, са още по-скъпи. Освен това, молекулите на човешкия интерферон често са твърде големи за да проникнат през клетъчните стени, така че само част от приетата доза е ефективна. Също, продуктите на генното инженерство обикновено имат странични ефекти, а някои са дори токсични. Освен това, някои от тях един ден са ефективни, а на следващия не, по причини неизвестни досега.
Изненадващо беше установено, че почти всеки прост комплекс от аминокиселина и захар ,влязъл най-малко частично в прегрупиране на Amadori, не показва никой от посочените по-горе недостатъци, а напротив има неочаквано висока иммунна активност
По тази причина те могат да бъдат използвани за лекарствени средства и в козметиката
Малките им молекули лесно проникват през клетъчните стени и действието им е приблизително като на подхранващо вещество
Те индуктират образуването на естествен интерферон и други цит кини, включително и туморонекротизиращ фактор
Дори три дни след приемане, те все още показват стимулиращ ефект върху биологичната активност
Ефектът нараства със завършване на прегрупирането на
Amadori намалява отново при разграждането на комплекса.
Вместо прости захари, могат да се използват и попизахариди, за предпочитане с ниско молекулно тегло,по специално под 1000 daltons, например декстран, който реагира подобно
Полизахаридите показват биологична активност и могат да
запазят част от тази активност и спед като се превърнат в олигозахариди.
До този момент се знаеше твърде малко за биологичната активност на тези съединения. Сега беше установено, че комбинация от тях в контакт с човешки левкоцити, стимулират продуцирането на интерферон и други цитокини. Това се нарича поликлонално активиране на клетките.
Възможно е да се изследват субстанциите, продуцирани под влияние на тези съединения и да се определи биологичната им активност в международни единици, съответстващи на специфичните цитокини. Съединенията показват най-висока биологична активност при концентрация от 1-100yu-g/ml.
В рамките на молекулата, специфичната природа на аминокиселината е по-важна от тази на захарта.
Продуктите от реакцията на L-аспарагинова киселина с гпюкоза ипи гапактоза спед прегрупиране на Amadori когато контактуват с човешки левкоцити и се инкубират в среда , о подходяща за тъканни култури при температура 37 С за 20 часа в атмосфера с 57. съдържание на въглероден двуокис,
- 4 продуцират от 30-1000 антивирусни единици интерферон. Интерферонът се измерва чрез биотест, използващ човешки ракови клетки. Под влияние на гореспоменатите продукти могат да се продуцират също и туморонекротизиращи съединения.
Продуктите, позволяващи такова неочаквано използване имат общата формула rJ -NH-R2 където ι
R^ представлява 1-амино-1-дезокси-2-кетозен радикал, получен от групата на простите захари, опиго- и за предпочитане с ниско молекулно тегло, под
1000 daltons полизахариди и
Rg представлява аминокиселина или пептиден радикал, за предпочитане с ниско молекулно тегло, под 1000 daltons.
Така групата от биологично активни съединения може да обхване или специфичните съединения с прегрупиране на Amadori, описани по-горе, или N-субституирани деривати на голям брой съединения на различни аминокиселини и една проста захар, опиго- или за предпочитане с ниско молекулно тегло /по-малко от 1000 daltons/ полизахарид, или Nсубституирани деривати на едно съединение на аминокиселина и голям брой прости захари, опиго- и/ипи полизахариди от описания тип, или каквато и да е комбинация от тези деривати, всеки от които има достатъчна биологична активност.
ι
За предпочитане е R^ в горната формула да бъде радикал, подбран от прости захари с D-форма, по-специално (но не изключително) глюкоза, ксилоза, галактоза, рамноза, фруктоза, маноза, 6-дезоксиглюкоза, глюкозамин и I галактозамин; Rg може да бъде радикал, подбран от L-формата на съединения на аминокиселини, такива като серин, глицин, хистидин, аргинин, глутамин, аспарагин, аланин, аспарагинова киселина, глутаминова киселина, фенилаланин, треонин, цистеин, цистин, метионин, хидроксипролин, триптофан, пролин, тирозин, валин, изолевцин, певцин и пизин или други пептиди на тези аминокиселини във всякаква комбинация.
Изобретението се отнася и до метод за получаване на горепосочените съединения продукти, както е описано претенция 5 ,при което се формира и междинен продукт с формула
I II
R -NH-R където
R* е -1-дезокси радикал с нормална въглеродна верига или която и да е О-мостова форма на проста захар или опиго или полизахарид,
R11 представлява аминокиселина или пептиден радикал, като този междинен продукт е бил най-малкото частично подложен на прегрупиране на Amadori и/или на реакцията на Mail lard чрез непрекъснато нагряване на реакционната смесза предпочитане под налягане- и едновременно или последващо отделяне на разтворителите. Предпочитаните варианти на метода са описани в претенции от 6 до 10.
В някои случаи, особено когато се използва аминокиселина с две карбоксилни групи, добре е при метода да се добави буферна сол, като например сода бикарбонат, за предпочитане в моларно отношение 1:1.
По-нататък беше установено, че продуктите на прегрупирането на Amadori са относително податливи на декомпозиция, а продуктите на декомпозицията са тъмнокафяви катраноподобни неидентифицирани съединения, които са загубили биологичната си активност. Затова се предпочита реакцията на Amadori да се спре на фазата, в която реакционната смес придобие светло оранжево-кафяв цвят.
Интересно е да се отбележи, че междинните продукти на реакцията, получени когато първоначално непрозрачният аминокиселинен разтвор се избистри (преди прегупирането на Amadori), лесно се хидролизират, т.е. реакцията е обратима. С напредване на прегрупирането, обратимостта намалява, т.е. продуктите стават πο-стабилни, а цветът постепенно се променя от светложълт към светлооранжев и накрай в оранжевокафяво, когато реакцията на Amadori клони към завършване. Проби, взети по време на реакцията и тествани (съгласно различни процедури, описани по-късно) , доказват, че биологичната активност нараства с напредване на реакцията на
Amadori и намалява, когато по-нататъшното нагряване резултира в декомпозиция, за което индикатор е промяната на цвета към тъмнокафяво. Ако реакционната смес съдържа други кето- групи и/или сяросъдържащи аминокиселини, като цистеин, ще протече незабавна редукция на ферицианид и резултираща промяна в цвета ; в противен случай редукцията ще протече за до 5 мин., което е добра проверка за степента на развитие на прегрупирането на Amadori
Нереагиралите захари ще покажат промяна цвета чак след половин час или няколко часа
Изолирането на чисти продукти на реакцията на
Amadori се извършва съгласно известни методи, базирани върху свързване на (Ь) Amberlite или катионообменник ( като сместа със силен (R) Dovex ), последователно елюиране /отмиваме/ с амониева вода, изпаряване на определена избрана фракция на елюата под редуцирано налягане и кристализиране на чистото съединение от безводен метанол ( J.E. Hodje and В.Е. Fisher, Methods in Carbohydrate Chemistry, Vol. II, Reactions o-f Carbohydrates, Academic Press, N.Y., London, 1963, page 105106$ или Borsook at al, както беше цитирано по-напред; или
J.Duborg and Р.Devi 11iers).
В метода съгласно изобретението всички горепосочени предпочитания по отношение вида на радикалите, извпеченни от проста захар и аминокиселинни съединения, остават непроменени. Допълнително, една предпочитана смес от захарни субстрати съдържа Д-формите на глюкоза, ксилоза, галактоза, рамноза и фруктоза в тегловно съотношение 20:10:4:1:1, докато предпочитаната смес от аминокиселинни субстрати аланин, пролин, тирозин, валин, левцин, изолевцин и лизин в тегловно
20.5:35.8:35.8:132:180:360:216:160:72:68:780.
съотношение
Както беше вече отбелязано, продуктите от прегрупирането на Amadori могат да редуктират калиев ферицианид, като такава химическа тестваща реакция осигурява база за бързо определяне на биологичната активност на съединенията, формирани в реакция между захар и аминокиселина.
Беше установено, че продуктите от реакцията на Amadori са особено активни, ако смес от прости захари със същия състав и тегловно съотношение, както в естествените торфени екстракти, влезе в реакция със смес от аминокиселинни съединения със същия състав и в същите тегловни съотношения, както в естествените торфени екстракти в присъствието на воден разтворител, за предпочитане с добавка на нискомолекулен алкохол и евентуално следи от неорганични елементи, характерни за такива естествени торфени екстракти при повишена температура (и евентуално под налягане) и последващо продължаване на нагряването с цел да се осъществи прегупиране на Amadori в получените продукти, едновременно или последващо отстраняване на разтворителите, спиране на реакцията на Amadori когато реагентната микстура стане светло оранжево-кафява на цвят, изсушаване на така получените продукти и пречистване на същите чрез колонна хроматография и събиране на фракциите, които причиняват максимална редукция на калиев ферицианид.
В един от вариантите на изобретението, фармацевтичният Ч» препарат съдържа като активна съставка най-малко един реакционен продукт с формула R *-NH-R £ * или специфично съединение с формула R^ -NH-R£ заедно с фармацевтично приемлив носител и/или добавка, усилваща действието на препарата и/ или евентуално мазилно вещество в тегловно съотношение на активната съставка към останалите компоненти между 1:1 и 1:100, за предпочитане от 1:8 до 1:20, а найдобре 1:9.
Друг вариант на фармацевтичния препарат съдържа в добавка на активната съставка лактоза и мазилно вещество, като тегловното съотношение на лактозата към мазилното вещество е между 20:1 и 100:1, за предпочитане 50:1.
Тези фармацевтични препарати се използват за лечение и/или профилактика на хематопогични и/ипи имунологични забопявания и/или за стимулиране на имунната система на хора и/или мпекопитаещи чрез индукция на формиране на цитокини.
Активните съставки могат да намерят приложение и в козметични препарати. Присъствието на тези съставки в козметичните препарати е в количества от 0,01-10 тегловни 7.,за предпочитане от 0,01-1 тегловен 7. и най-вече от 0,050,1 % . Тези козметични препарати съдържат освен активна съставка и традиционни носители, стимулиращи и обогатяващи добавки и/или ароматни вещества.
Настоящето изобретение ще бъде по-подробно обяснено и илюстрирано с помощта на следните примери, които в никакъв случай не ограничават неговият обхват.
Пример 1:
25-милилитрова колба на ротационен изпарител, поставен във затоплена водна баня,
| се пъпни cs | ||
| 1.47 | g | (0.01 M) L-глутамин! |
| 0.84 | g | (0.01 M) NaHCOj |
| 0.91 | g | D-гпюкоза |
| 0.91 | g | галактоза и |
| 3.00 | ml | редестилирана вода |
ова киселина
Сместа се загрява до 80°С ,за предпочитане под понижено налягане, при което 507. от водата се под атмосферно налягане - се загрява изпарява и след това о до температура 80-85 С, която се поддържа в продължение на
120 min, докато сместа придобие оранжев цвят
След това сиропоподобният концентриран воден разтвор се изпарява до изсушаване под понижено налягане
Така полученият оранжево-червен твърд продукт се маркира със символа
D-10 и се съхранява за биологични тестове
Пример 2
25-милилитрова колба изпарител, поставен в на ротационен затоплена водна баня,
| се пълни с· | ||
| 1.33 | g | (0.01 M) I |
| 0.84 | g | (0.01 Μ) ι |
| 0.91 | g | D-глюкоза |
| 0.91 | g | галактоза |
и
NaHCOj
CL . ν'
L-аспаргинова киселина
3.00 ml редестилирана вода
Сместа се загрява до 80 С с разбъркване (чрез ротация), концентрира се под налягане, при което се изпарява вода с общ обем 1.5 ml и след това се поставя под атмосферно налягане при температура 80-85°C докато стане оранжева на цвят; това става за около 60 min.
Реакционната смес, представляваща сиропоподобен концентриран воден разтвор, се изсушава при понижено налягане. Полученият реакционен продукт е сух, жълто-оранжев прах. Маркира се със символа D-11 и се съхранява за биологични тестове.
Пример 3
25-мипитрова колба на ротационен изпарител, поставен във затоплена водна баня, се пъпни с!
1.05 g (0.01 М) L-серин
0.91 g D-глюкоза
0.91 g галактоза и
2.50 ml редестилирана вода
Сместа се загрява до 85-92° С като се разбърква (посредством ротация). След 100 min, разтвора добива оранжев цвят.Понижава се налягането и сместа се изпарява до край. Продуктът на реакцията образува оранжев прозрачен слой по стените на колбата, който се изтъргва и разпрашава. Маркира се със символа D—12 и се съхранява за биологични тестове.
Пример 4“
25-мипитрова колба на ротационен изпарител, поставен във затоплена водна баня, се пълни с:
CL
0.66 g (0.005 Μ)D-аспаргинова киселина
0.42 g (0.005 M) NaHCOy
0.45 g D-глюкоза
0.45 g галактоза и
3.00 ml редестилирана вода ο
Сместа се загрява до 80 С, изпарява се под налягане, докато 1.5 ml от количеството вода се изпари и след това се о подлага на атмосферно налягане при температура 85 С. След 60 min. нагряване сместа става оранжева на цвят; налягането се понижава и образувалият се сироповиден концентриран воден разтвор се изпарява до край. Преди утайката да е засъхнала съвсем , се прибавя два пъти по 10 ml безводен етанол и се изпарява в колбата с цел да се елиминира остатъчната влага. Така полученият сух продукт на реакцията се разпрашава, маркира се със символа D-13 и се съхранява за биологични тестове.
Пример 5:
За да бъде получен по синтетичен начин еквивалент на биологично активната фракция на някои естествени торфени екстракти, колбата на ротационния изпарител, поставен в
| затоплена водна баня се пълни | c: | |
| 20.5 | mg | L-серин |
| 35.8 | mg | L-гпицин |
| 35.8 | mg | L-хистидин |
| 132.0 | mg | L-аргинин |
| 180.0 | mg | L-аланин |
| 360.0 | mg | L-пролин |
| 216.0 | mg | L-тирозин |
| 160.0 | mg | L-вапин |
| 68.0 | mg | L-изолевцин |
| 72.0 | mg | L-левцин |
| 780.0 | mg | L-лизин |
| 2000.0 | mg | D-глюкоза |
| 1000.0 | mg | D-ксилоза |
| 400.0 | mg | D-гапактоза |
| 100.0 | mg | D-рамноза |
| 100.0 | mg | D-фруктоза |
| 6.0 | ml | редестилирана вода |
Сместа се разбърква посредством ротация и се загрява о под налягане за 45 min, при температура нарастваща от 75 С о до 86 С. През този период около 3 ml от водата се изпаряват, а субстратите се разтварят напълно. След това в продължение на 30 min сместа се подпага на атмосферно налягане при о температура 85-86 С за осъществяване на прегрупиране на Amadori. През този период разтворът бързо добива червенокафяв цвят. Налягането се понижава и нагряването при температура 84° С се продължава, като заедно с това разтворителите се изпаряват. В края на изпаряването се прибавя два пъти по 10 ml безводен етаноп и рективната смес се изсушава. Колбата с изсушения продукт се поставя в ексикатор върху калциев хлорид за 18 часа; след това се разпрашава. Получават се около 4.5д от разпратения продукт и се маркира със символа ЕК2-S.
Порция от 4д от този продукт се разтваря в 20 ml дестилирана вода и се поставя на хроматографска ректификационна колона с размери mm х 30 mm, пълна със сорбент Amberlite(R) XAD-2, аналитична фракция. Колоната се елюира с 0.4 ml/min дестипирана вода, фракции с обем 10 ml се събират докато бъде достигнат общ обем 450 ml.
Съдържанието на фракциите се проверява хроматографично. фракции с поредни номера 11-13 се комбинират и изпаряват под понижено налягане. Тези фракции се характеризират с високо съдържание на продукти на реакцията на Amadori (потвърдено чрез калиев ферицианиден редукционен тест ) . Продуктът се съхранява за биологични тестове със символ EK^-S-ll.
Биологичните тестове за определяне на биологичната активност се провеждат с имунизирани Balb/C мишки от двата попа на възраст 8-10 седмици. Мишките се имунизират чрез перитонално въвеждане на 0.2 ml 10 7. суспензия от овчи g
еритроцити (SRBC), т.е. 6x10 клетки. Еритроцитите се фиксират в стерилен разтвор на Al sever със следния състав :
гликоза натриев цитрат натриев хлорид
2.05 g
0.8 g
0.42 g лимонена киселина
0.055 g редестилирана вода до
100 ml от овчи дни такъв разтвор кръвни клетки на Al sever се поставя асептична проба в отношение о при температура +4 С.
1:1 и сместа се държи поне
От така стабилизираните еритроцити се вземат асептични проби и се поставят във фосфатно неутрализиран солен разтвор (PBS) с цел да бъдат промити. Еритроцитите се промиват с PBS два пъти и след това се центрофугират 10 min при 2000 оборота в минута
Промитите клетки се използват под формата на 107. суспензия в
PBS . Тази суспензия се използва за имунизиране на Balb/C мишки.
За да бъде тестван, продуктът на реакцията се въвежда интраперитонапно (i.p) или през устата четири пъти при определени дози , като първото въвеждане се прави 2 часа преди имунизацията на мишките с SRBC, а следващите три след имунизацията на 24 часови интервали.
Всяка група от изследваните животни се третира с различни дози от тестувания реактивен продукт! 10 mg/kg, 1 mg/kg, 0.1 mg/kg и 0.01 mg/kg. Контролна група от животни също се имунизира с SRBC, но вместо тестваната субстанция се въвеждат 0.2 ml PBS на същите интервали.
Всяка от групите животни, контролна и тестова, се състоят от 8-12 мишки.
На четвъртия ден (в случай на детерминиране на антитела тип 75) или десетия след имунизацията, мишките се упоявват с етер и след това кръвта им се изцежда чрез отстраняване на очните ябълки. Кръвта се събира във изпитателни тубуси. След това гръбначният мозък се прекъсва и се отстранява далакът. Кръвта се използва за получаване на серум, необходим за определяне на хемоаглутиниращи антитела от тип 19S+7S и 7S, докато далаците се използват за приготвяне на клетки, приложими за определяне на хемолитичната активност и процентът на клетки, способни да формират Е-розетки. За целта мишите далаци се пулверизират. Получените далачни клетки/спленоцити/ се суспензират в около 2 ml среда на Hanks при +4 С, наслояват се върху Ficol1-Uropolin градиент с гъстота 1.077 и след това се центрофугират за 15 Min при о
3000 оборота и+ 4 С. След разделяне от междинната фаза, о лимфоцитните корички се поставят в среда на Hanks при +4 С и се изплакват двойно с центрофугиране за 7-10 min, всеки път при 1800 оборота. След това далачните клетки се суспензират в 1ml среда на Hanks в такова съотношение, че да се съдържат g
1x10 клетки.
За всеки тест процентът на мъртвите клетки се определя чрез смесване на капка от изпитваната суспензия далачни клетки с капка от приготвен ex tempore багрилен разтвор, съдържащ 4 части 0.2 Х-ен син трипанов разтвор и 1 част 4.25 7.-ен разтвор на натриев хлорид. Процентът на мъртвите далачни клетки се определя под микроскоп за всеки 100 клетки. Мъртвите клетки са морско сини, а блестящите клетки са живи. Наличието на повече от 10 7. мъртви клетки е критично; такива проби се елиминират от по-нататъшно използване.
Всички операции, които се извършват с клетките, подлежащи на тестване, трябва да бъдат изпълнени в стерилен, силиконизиран лабораторен стъклен апарат, поставен в ледена баня.
Пример 6
В първия тест се определя ефектът на тестваните реакционни продукти върху броя на клетките, продуциращи кръвни антитела (PFC-IgM). Тестът се извършва както следва
Към 0.5ml от 0.5% разтвор на агароза, тубус в затоплена водна баня поставен в изпитателен с температура 45°С се добавя
0. 1 м1
10%-на суспензия на
SRBC (приготвена както беше описано по-горе)
После се далачни кпекти с гъстота
1x10 добавя 0.1 ml суспензия от € , клетки /мл, като сместа се разбърква бързо и се излива върху предметни стъкла, предварително намазани с инкубират при температура агароза. Предметните стъкла се
С в продължение на два часа.
След това разредена пробите се намазват с добавка от морско свинче, в отношение 1:20 и се инкубират за още два часа
След инкубацията на пробите заедно с добавката се изброяват плакообразуващите клетки (PFC) и се преизчисляват за 1x10 далачни клетки. Всеки тест се провежда по два пъти.
Най-гопямо усилване на реакцията спрямо SRBC, изразено в повишщаване броя на дапачните клетки, продуциращи хемопизини IgM (PFC), се наблюдава след приемане на субстанцията D-11 в доза от 0.1 mg/kg. Усилването е 119'/ .
При увеличаване на дозата 10 пъти, до 1 mg/kg, усилването на реакцията намалява до 537. .
Реакционният продукт D-12 показва най-голяма активност
- повишаване с 50% - при доза от 1 mg/kg.
Реакционният продукт EK^-S-ll в този тест показва найгопяма активност при доза от 0.1 mg/kg (повишаване с 65%). При десет пъти по-висока доза, т.е. 1 mg/kg, повишаването е малко по-ниско - 527. .
Реакционният продукт D-13, тестван при доза от 1 ml/kg, предизвиква повишаване 407. . Когато дозата се повиши на 10 mg/kg, т.е. десет пъти, реакцията се усилва само с 14% . Пример 7
Провежда се също хемоаглутинационен тест, определящ нивото на антителата анти - SRBC тип 19S+7S и 7S. За да се определи нивото на антителата тип 19S-IgM се приготвя миши серум на четвъртия ден след имунизацията със SRBC, докато за определяне нивото на антителата тип 7S-IgG, серумът се приготвя на десетия ден след имунизацията на мишките, което е свързано с деня, в които се отчита максималният брой от дадения тип антитела при мишки имунизирани с SRBC.
А.Определяне броя на антителата тип 19S+7S
Кръвните проби се центрофугират в продължение на 30 min при 3500 оборота. От всяка от така приготвените проби се събира серумът и се поставя в затоплена водна баня с о температура 56 С за 30 min за да се дезактивира. След това се приготвят множество разтвори с различна степен на разреждане от всеки тестван серум ( от 1:1 до 1:4096) с помощта на микротитратор и U-образни микротарепки с обем от 250уиД всяка. Разредените серуми се инкубират за 1 час при стайна температура. По една капка 1%-на суспензия на SRBC в PBS (приготвена както е описано по-горе) се добавя към всеки о
серум; сместа се инкубира за още 2 часа при температура 37 С о и след това се съхранява при температура +4 С. Резултатът се отчита на следващия ден. Максималното разреждане, при което все още протича хемоагпутинация, зависи от броя на антителата. Оформянето на пръстен на дъното на тарелката е знак, че протича хемоаглутинация. Наличието на подобно на копче образувание, се счита за негативен резултат - не протича хемоаглутинация.
За статистически анализ на резултатите, повишаването на разредеността на серума на изпитваната субстанция се сравнява с тази на контролната група.
Реакционният продукт D-11 в доза от lmg/kg повишава броя на IgM 2.57 пъти. При десет пъти по висока доза, стимулиращият ефект, в сравнение с контролната група, се увеличава 3.5 пъти.
Реакционният продукт
D-12 в този тест показва по-слаба активност. В доза от 0.1 mg/kg той повишава броя на IgM два пъти, а при доза 1 mg/kg 1.4 пъти.
Реакционният продукт ЕК £ -S-11 показва най-голяма активност при този тест. В доза от 0.1 mg/kg той повишава броя на IgM 4.3 пъти, а в доза от 1 mg/kg - 3.6 пъти.
Реакционният продукт D-13 в доза от 1 mg/kg повишава броя на IgM 3 пъти, а при десет пъти по-висока доза - 1.5 пъти.
Б.Определяне броя на антителата тип 7S
Изпитваните дезактивирани серуми се смесват съотношение 1:1 с 0. 1 разтвор на 2сместа се инкубира за min при температура мерк ап т оет ан ол о
С.
меркаптоетанолът разрушава имуноглобулините от типа 19S(IgM), докато имуноглобулините от типа 7S-(IgG) не са чувствителни на въздействието му.
След 30 min инкубация редукцията се спира чрез о понижаване на температурата до 4 С за 15 min. След това се приготвят множество разтвори по описания по-горе начин за определяне броят на 19S антителата , които се смесват с 17. на SRBC суспензия; след 2 часа инкубация при температура 37° о
С пробите се съхраняват при температура +4 С. Резултатът се отчита на другия ден, съгласно критериите за определяне на хемоаглутинацията, описани по-горе. Едновременно се провежда и контролен тест с комбинация от 1%-на суспензия SRBC и PBS в съотношение 1:1.
При тестване на субстанцията D-11, както е описано погоре, при доза 1 mg/kg се увеличава продуцирането на антитела тип IgG 3.16 пъти. При доза 10 mg/kg, увеличението е 2.2 пъти.
Реакционният продукт D-12, тестван при дози от 0.1 mg/kg и 1 mg/kg стимулира съответно продуцирането на антитела IgG 1.3 пъти, а при доза от 10 mg/kg - 1.5 пъти.
Реакционният продукт EK2“S~11 при доза от 0.1 mg/kg стимулира продуцирането на IgG 1.9 пъти, а при доза от 1 mg/kg - 2.89 пъти (в сравнение с контролната проба).
Резултатите от тестовете А и Б, получени за всяка производствена партида или за всяка фракция от биологичноактивните реакционни продукти, синтезирани съгласно изобретението и даващи горепосочените имунологични реакции, бяха подложени на статистически анализ по метода T-student, = 0.05. Получените резултати за всяка доза от изпитваните бяха сравнени с паралелен контролен тест и показаха увеличаване на биологичната активност.
Пример 8
Групата от биологично-активни реакционни продукти, получени съгласно примери от 1 до 5 се подлага също на тест, в който се определя процентното съотношение на спленоцитите, формиращи Е-розетки.
250уО.1 от тестване клетки
1%-на суспензия в концентрация
SRBC πθ 250утЛ подлежащи на х 10 клетки/ml се добавят към 550yU.L среда на Hanks. Всяка такава проба се инкубира в затоплена водна баня, съоръжена със шейкър, за 15 min при о температура 37 С. След това пробите се съхраняват при ο
температура +4 С за още 20 часа. Процентът на спленоцитите, оформили Е-розетки със SRBC се определя след като суспензията се оцвети с 1 до 3 капки кристалвиолет.
Всяка проба се подлага на трикратно определяне на процента на спленоцитите в нея, като всеки път спленоцитите възлизат на 400 броя. Сппеноцит, обграден с най малко 3 еритроцита, се счита за Е-розетка.
За статистическа оценка, процентното нарастване на броя на спленоцитите с Е-розетки се сравнява между изпитваните субстаниции и контролна група.
В този тест, най-силен стимулиращ ефект показват реакционният продукт (637.) и EKfc-S-ll (707.) при доза от mg/kg. При десет пъти по-малка доза,
т.е
0.1 mg/kg, нивото намалява съответно на 457. и 577.
Реакционният продукт
D-12 при доза от mg/kg причинява повишаване способността за образуване на
Е-розетки с
227. в сравнение с контролната група
При десет пъти по-малка доза,
т.е. 0.1 mg/kg, този процент е 297. .
Реакционният продукт D-13 показва максимален ефект при доза 1 mg/kg (587.) , докато при по-големи дози ефектът е малко по-нисък.
| Биологичната | активност на синтезираните | съединения е | ||
| оценена | чрез спедн | ите тестове! | ||
| 1. | Тест за | определяне процентът | на | спленоцитите, |
формиращи Е-розетки, проведен съгласно Bach и Dardenne
| (Cell. Immunol. 3, 1-16, 1972) | |||||
| 2. Тест за | определяне броя | на клетките, продуциращи | |||
| кръвни антитела | от | типа IgM, проведен | съгласно метода | на | |
| Jerne , модифициран | от Mishell и 1 | Dutton | (J. Exp. Med. 126 | ||
| 423-442, 1967) и | |||||
| 3. Хемоаглутинационен тест | за | определяне броя | на | ||
| антитела тип 19S | + | 7S и 7S, проведен | съгласно методите | на | |
| Adler за активна | хемоагпутинация | (J.Immunol. 95,26-38, | 39- | ||
| 47, 1965) с | използването | на | микротарелки | (J. | |
| Immunopharmacol. | 4, | 43-52, 1982). |
Пример 9
Ротационна изпарителна колба, поставена в затоплена водна баня се пълни с:
0.84 g (0.01 М) NaHCOj
10.00 g
10.00 g хидролизиран декстран със средно молекулно тегло 3000 daltons редестилирана вода
Сместа се загрява под налягане о
до температура 70 С, докато твърдите вещества се разтворят напълно, като през това време се отстраняват чрез дестилация около 3 ml вода (времето за загряване е приблизително 30 min). Колбата с разтвора се покрива свободно, поставя се в паров стерилизатор и си стерилизира под налягане при температура о
121 С в продължение на 40 min. Спед охлаждане, получения жълто-оранжев разтвор се разрежда с 15 ml вода, избистря се чрез центрофугиране и се изсушава чрез въздушен спрей с о о входяща температура +160 С и изходяща температура +85 С. В резултат се получава светпобежов реакционен продукт, лесно разтворим във вода.
Присъствието на продукти на прегрупирането на Amadori в този реакционен продукт се потвърждава чрез тестване по калиево- ферицианидния метод, описан от Borsook, Abrams and Lowy, J.
Biol. Chem 215, (1955), 111-124 и по хроматографски методи.
Биологични тестове, както се описани в предходните примери, потвърждават имунната активност на горепосочения продукт, подобна на тази, показана от препаратите, получени от прости захари.
Пример 10
Конична колба се пълни с:
5.0 g хидролизиран декстран със средно молекулно тегло прибп. 5000 daltons
1.1 g L-пролин
4.0 ml редестилирана вода
Съдържанието се разтваря чрез разбъркване. Получената по този начин еднородна смес се поставя в паров стерилизатор и се загрява под налягане до температура 110°С за 40 min. Полученият прозрачен оранжев разтвор се разрежда с 20 ml редестилирана вода и се избистря 4pei центрофугиране и се изсушава.
Получават се 5.3 g реакционен продукт, лесно разтворим
| във вода. Имунотропната | му активност | е подобна на | тази, | ||
| наблюдавана при другите | експерименти | съгласно | предходните | ||
| примери. | |||||
| Пример 11 | |||||
| С конвенционалните | методи | се | тества | биологичната | |
| активност на различните | съединения | при | мишки , | но не | и при |
| хора. По тази причина се въвеждат | нови | биотестове, с | които |
се измерват количествата и активността на цитокините, освободени от човешкш периферни кръвни левкоцити (PBL), третирани с реакционните продукти, съгласно примери от 1 до 5, 9 и 10. Цитокините са хормоноподобни протеини, които играят важна роля практически във всички имунни реакции, както и в регулаторните процеси, отговорни за поддържането на хомеостазата.
Тестове за цитотоксичност: Цитотоксичността на реакционните продукти е определена в човешка белодробна аденокарциномна клетъчна линия А549 (включително и в Американската типова колекция от култури - ATCC CCL 185).
Клетъчните мсноспоеве се трипсинизират, суспензии от 2x10 клетки/ml в Dulbecco модифицирана Eagle’s minimum essential medium (DMEM) плюс 107. телешки серум (CS) се смесват с различни дози от активната субстанция, посяват се в пластмасови микротарелки и се инкубират за 48 часа при температура 37 С. CD5Q е минималната концентрация на субстанцията, която причинява приблизително 507. разрушаване на клетъчната култура, което се установява чрез оцветяване с 0.0157.-ен разтвор неутрално червено в DMEM.
Индукция на цитокини: Кръвни съсиреци от здрави кръводарители се осигуряват от регионалния кръвопреливен център. Еритроцитите се лизират чрез третиране с NHyCL съгласно Cantell и pp.iCantell, К., Hirvonen, S., Kauppinen, H.L. : Production and Partial Purification o-F Human Immune Interferon. Meth. Enzymol., 119, 54, 1986). Използват се левкоцитите от индивидуален донор, приблизително 8χ1θ' левкоцити/ml, поставени в RPMI 1640 среда , допълнена с 107. ембрионален телешки серум (FCS), L-глутамин и антибиотици. Всички количества FCS се тестват повторно. За културите PBL се използват само немитогенни FCS. Индукторите на цитокини се прибавят към 1 ml обеми от културите. Използваните индуктори на цитокини са фитохемаглутинин (PHA) (Pharmacia Fine Chemicals, Sweden) и LPS от E. coly 0111: В4 (Difco Laboratories). Индуктираните PBL култури се инкубират в о атмосфера с 57. -но съдържание на СОдпри температура 37 С за о часа и се центрофугират, филтратът се съхранява при 4 С и се тества за TNF и IFN активност в рамките на една седмица.
Тест за интерферон (IFN): Слятият монослой от клетки А549 се приготвя в микротарелки в DMEM с 107. CS, L-глутамин и антибиотици (100 единици/ml пеницилин и 100 JA. g/ml стрептомицин). Пробите IFN, разредени в тарелки, се добавят към клетъчния монослой, инкубират се при 37°С за 20 часа в атмосфера с 57. СОз . След това клетките се измиват и се възбуждат с енцефапомиокардитен вирус (EMCV). Титърът на IFN
У®# се определя като разреждане на IFN пробата, което намалява с 507. вирусния цитопатогенен ефект след 48 часа инкубация. За измерване на убитите клетки в скенер ELISA се използва също и метода МТТ (3-С5,5-диметиптиазоп-2-ил3-2,5дифенилтетразолиум бромид)(Hansen М.В., Nielsen, S.E., and Berg K.Re-examination and Further Development of a Precise and Rapid Dye Method for Measuring Cell Growth/Cell Kill.
J. Immuno. Meth.,1989, 119, 203-210). Лабораторните стандарти за интерферони са включени във всички тестове! рекомбинантен човешки гама-интерферон ( Genetech Inc.,USA, специфична активност 2 х 10 units/mg), естествен човешки 8 певкоцитен алфа-интерферон (3 х 10 IU/ml и гама-интерферон 6 (2 х 10 IU/ml), получени от Dr. К. Cantel1, Helsinki, Finland.
Тест за туморонекротизиращ фактор(TNF): Цитотоксичната активност на TNF се измерва в клетки L-929 съгласно Flick и Gifford (Flick, D.A., Gifford, G.Е.: Comparison of in Vitro Cell Cytotoxic Assays for Tumor Necrosis Factor. J. Immunol. Meth., 68, 167, 1984).
Пробите от разтвор на актиномицин D се прибавят към о моноспойните клетъчни култури. След инкубация при 37 С в продължение на 20 часа, културите се оцветяват с кристален виопет и се определя токсичният ефект. Количеството, причиняващо приблизително 50% деструкция на клетъчните култури се дефинира като единица TNF активност. Сравнението с препарат от алфа-TNF (Genetech Inc., USA) показва, че 1 единица от нашия тест е равна на 100-200 pg/ml TNF.
Тестове за неутрализация на цитокини: Използваните антисеруми са: заешки анти-човешки алфа-TNF, партида 2958—40 и заешки анти-човешки гама-IFN, партида 2891-56 (Genetech Inc., USA), овчи анти-човешки алфа-, бета- IFN и овчи античовешки гама-IFN (получен от Dr. К. Cantell, Finland). Цитокиновите препарати се третират със серуми, разредени в отношение 1:200 в културна среда и се инкубират за един час при стайна температура. След това остатъчната активност на IFN и TNF се определя както е описано.
Използват се пет различни партиди (от L 4 До L-5) PBL, приготвени от кръвта на здрави кръводарители.Беше установено, че оптималната концентрация на PBL за тестовете 6 е 8x10 клетки на милилитър среда (RPMI 1640 с добавка на 10Х телешки ембрионален серум и антибиотици).
Инкубацията на човешки PBL с новите реакционни продукти от I до XI (Таблица 1) резултира в синтез на IFN и TNF. Наблюдаваните реакции са зависими от дозата в обхват от 3 до
100 g/ml от съединенията (Таблица 2)
Използваните съединения в посочената концентрация не са токсични. Във всички биотестове са включени позитивни и негативни контролни тестове. Негативният контрол измерва количеството цитокини (IFN и TNF), спонтанно освободени, без помощта на стимуланти. Позитивният контрол индикира количествата цитокини, продуцирани като реакция спрямо известен индуктор; в този случай е използван фитохемагпутинин (PHA,Pharmaci а, Sweden, 10 per ml).
Трябва да се отбележи, че индукцията на цитокини в човешки PBL култури, получени от различни индивиди , обикновено показва съществени отклонения в резултатите. Това явление би могло да бъде обяснено с генетичната диференциация на човешката популация. Освен това, PBL културите често продуцират IFN и TNF спонтанно.
С други думи сред здравите донори на PBL обикновено се наблюдават такива със силна реакция, слаба реакция или дори без реакция.
Независимо от представените ограничения, резултатите от биотестовете показват, че PBL ( от Ь>(до Lj), третирани с реакционните продукти (от I до XI), продуцират IFN и/или TNF, които могат да бъдат измерени количествено.
В случая с L 4 , която съдържа левкоцити с висока реактивност, се установи, че реакционният продукт II (съдържащ L-формата на аспарагиновата киселина) е значително по-активен като индуктор на цитокини, отколкото продуктът III ( съдържащ D-формата на аспарагиновата киселина, която е и два пъти по-скъпа). Този резултат е важен, защото главно L-формите на аминокиселините се припознават от клетките като естествени субстрати в биохимичните реакции.
Освен това, за изразяване на биологичната активност на реакционните продукти, аминокиселинната част от молекулата е много по-важна от формата на захарта. Вместо прости захари (за предпочитане с ниско молекулно тегло, по-специално под
1000 daltons), биха могли да се използват и полизахариди (като декстран, реактивни продукти X-XI), които реагират по подобен начин.
И обратно, полизахаридите, съдържащи остатъчни аминокиселини биха могли да притежават биологическа активност и тази активност се запазва, когато те се декомпозират на олигозахариди със свързани аминокиселини (данни не са посочени).
Подобни резултати също биха могли да се наблюдават, ако вместо проста аминокиселина се вземе къс пептид и се използва за стимулиране на левкоцитите да продуцират цитокини (данни не са посочени).
Седем различни партиди нефракциониран ТТР, изпитани на повече от 100 PBL култури от различни донори, продуцират от 10 до 1000 единици IFN на милилитър и от 9 до 750 единици
TNF на милилитър.
фракцията EK2-S, приготвена от смес, съответстваща по съдържание на естествен торфен екстракт (Пример 5) , беше изпитана в осем PBL култури от осем различни кръвни донори. Беше установено, че това е найактивният препарат и за IFN и за TNF (данни не са посочени
Възможно приложение на реакционните продукти е тяхното клинично използване като имуномодулатори. Друго изпитано тяхно действие е регенерирането на тъкани. Наблюдава се също антиканцерогенно действие, вероятно свързано присъствието на индуктиран интерферон и туморонекротизиращ
Фактор. Забелязана е също и антивирусна активност
Основно използването на горепосочените реакционни продукти е свързано с тяхната орална администрация, но възможно и приложението им чрез инжектиране. Продуктите са относително стабилни продукти
Таблица 1. Списък на реакционните
| No | Субстрат |
| I (D-10) | L-глутаминова киселина, гликоза, галактоза |
| II (D-11) | L-аспарагинова киселина, глюкоза, галактоза |
| III (D—13) | D-аспарагинова киселина, глюкоза, галактоза |
| IV (D-12) | L-серин глюкоза, галактоза |
| V | EK^-S (фракции 11 - 13) |
| VI | EK2~S (фракции 6-7) |
| VII | EK2~S (фракции 8 - 10) |
| VIII | EK2-S (фракции 28 - 34) |
| IX | L-пролин, глюкоза |
| X | L-аспарагинова киселина + декстран (вид 1) |
| XI | L-аспарагинова киселина + декстран (вид 2) |
Пример 12 фармацевтични рецептури, съдържащи като активна съставка реакционните продукти съгласно Примери от 1 до 5, 9 и 10, приготвени с помощта на следните реакционни продукти: А. Таблетки/Гранули:
5.0 g от реакционния продукт, получен съгласно Пример 1 или 10 (активна субстанция)
444.0 g от фармацевтично приемлива лактоза
- 27 (RI
1.0 g мазилно вещество, например MIVATEX' , търговска марка на Eastman Kodak)
Съставките се смесват и гранулират с 307.-Н воден етанол по конвенционален начин, след това се сушат при температура а
С. Гранулите се използват за приготвяне на капсули, всяка съдържаща приблизително 450 mg гранули, т.е. 5 mg активна субстанция. Също така, гранулите могат да се използват за оформяне на таблетки, тежащи приблизително 450 mg и съдържащи 5 mg активна субстанция.
Б. По същия конвенционален начин, активните субстанции, получени съгласно посочените Примери от 1 до 5, 9 и 10, се включват в други фармацевтични рецептури, като се използват подходящи носители.
Таблица 2.
Биологична активност на реакционните продукти
I-ΧΙ в човешки PBL
Доза IFN units/ml TNF units/ml
| уй-g/ml | и | L 2 | L 3 | <-ч | Ly | 1 -i 1 1 1 | L2 | L3 | 1 1 1 r | L5 | |
| Контр. проба | 10 | <10 | <10 | 20 | <10 | 80 | 9 | 27 | 27 | <9 | |
| РНА | 10 | 100 | 30 | 30 | 60 | 100 | 250 | 80 | 250 | 250 | 250 |
| I | 100 | 100 | <1О | <10 | 20 | - | 250 | 9 | 9 | 160 | - |
| 30 | - | - | - | 30 | - | - | - | - | 500 | - | |
| 10 | 30 | <10 | <10 | 30 | - | 80 | 9 | 18 | 160 | - | |
| 3 | - | - | - | 10 | - | - | - | - | 160 | - | |
| II | 100 | 100 | 10 | <10 | 10 | <10 | 250 | 18 | 18 | 250 | <9 |
| 30 | - | - | - | 10 | <10 | - | - | - | 250 | <9 | |
| 10 | 1000 | 10 | 30 | 10 | 10 | 250 | 50 | 27 | 250 | <9 | |
| 3 | - | - | - | 10 | <10 | - | - | - | 160 | <9 | |
| III | 100 | <10 | <10 | 10 | 10 | <10 | 250 | 9 | 18 | 250 | <9 . |
| 30 | — | — | — | 30 | <10 | - | - | - | 250 | <9 |
Таблица 2 - Продължение
| Биологична активност | на | реакционните продукти | |||||||||
| I-XI | в човешки | PBL | |||||||||
| Доза /tcg/ml | L4 | IFN units/ml L-2. Ι-з Ly | L£- | L4 | TNF L2 | units/ml L3 Lz/ | |||||
| 10 | <10 | <10 | <10 | 10 | <10 | 80 | 27 | 18 | 250 | <9 | |
| 3 | — | — | — | 10 | <10 | - | - | - | 80 | <9 | |
| IV | 100 | <10 | 10 | 10 | 20 | <10 | 80 | 60 | 9 | 160 | <9 |
| 30 | - | - | - | 20 | <10 | - | - | - | 27 | <9 | |
| 10 | <10 | 30 | <10 | 20 | <10 | 80 | 50 | 18 | 80 | <9 | |
| 3 | - | - | - | 20 | <10 | - | - | - | 80 | <9 | |
| V | 100 | 30 | <10 | <10 | 60 | - | 80 | 50 | 18 | 250 | — |
| 30 | - | - | - | 60 | - | - | - | - | 80 | - | |
| 10 | <10 | <10 | <10 | 10 | - | 80 | 27 | 9 | 80 | - | |
| 3 | - | — | — | 10 | — | - | - | - | 80 | - | |
| VI | 100 | <10 | <10 | <10 | 20 | - | 80 | 27 | 18 | 80 | - |
| 30 | - | - | - | 10 | - | - | - | - | 80 | - | |
| 10 | 10 | <10 | <10 | 20 | - | 50 | 27 | 18 | 160 | - | |
| 3 | - | - | - | 10 | - | - | - | - | 250 | - | |
| VII | 100 | <10 | <10 | <10 | — | - | 80 | 27 | 27 | — | - |
| 30 | |||||||||||
| 10 | 10 | <10 | <10 | - | - | 80 | 27 | 27 | - | - | |
| 3 | |||||||||||
| VIII | 100 | <10 | <10 | <10 | - | - | 80 | 160 | 27 | - | — |
| 30 | |||||||||||
| 10 | <10 | <10 | <10 | - | - | 750 | 80 | 27 | - | - | |
| 3 |
Таблица 2 - Продължение
Биологична активност на реакционните продукти I-ΧΙ в човешки PBL
| Доза | IFN units/ml | TNF L2 | units/ml | ||||||||
| g/ml | ч | L2 | L3 | 1 1 £ 1 1 | L5 | 1 1 г 1 1 | L3 | ||||
| IX | 100 | 10 | <10 | <10 | 10 | - | 27 | 27 | 18 | 80 | - |
| 30 | - | - | - | 20 | - | - | - | - | 80 | - | |
| 10 | 100 | 30 | <10 | 20 | - | 80 | 27 | 18 | 80 | - | |
| 3 | - | - | - | 10 | - | - | - | - | 50 | - | |
| X | 100 | 100 | <10 | 20 | 20 | - | 27 | 27 | 18 | 250 | - |
| 30 | - | - | - | 30 | - | - | - | - | 80 | - | |
| 10 | <10 | 10 | <10 | 30 | - | 18 | 50 | 27 | 50 | - | |
| 3 | - | - | - | 30 | - | - | - | - | 250 | - | |
| XI | 100 | <10 | 10 | <10 | 30 | - | 18 | 27 | 27 | 50 | - |
| 30 | - | - | - | 10 | - | - | - | - | 250 | - | |
| 10 | <10 | 30 | <10 | 10 | - | 18 | 80 | 80 | 80 | - | |
| 3 | — | — | — | 20 | — | — | — | — | 750 |
Пример 13
--------Активните субстанции, получени съгласно предходните Примери от 1 до 5, 9 и 10 се използват като подобрителни съставки в козметични препарати , предназначени за всекидневни грижи за косата и тялото, като съдържанието на активните субстанции в тях са в обхват от 0.01 до 10 тегловни процента в зависимост от вида на препарата, метода на приложение и честотата на употреба на съответния препарат
Claims (13)
- ПАТЕНТНИ ПРЕТЕНЦИИ1. Съединение на реакцията на Amadori с формулатаR^-NH-R^ къдетоR j включва 1-амино-1-дезокси 2-кетоза, извлечена от захарен радикал, за предпочитане в неговата D-форма, подбран от групата, съставена от глюкоза, ксилоза, галактоза, рамноза, фруктоза, маноза, 2-дезокси-глюкоза, 6дезокси-глюкоза, глюкозамин , галактозамин, аR2 включва аминокиселина или пептиден радикал, за предпочитане с ниско молекулно тегло, по-специално под 1000 daltons, за предпочитане в тяхната LФорма, подбрани от групата, съставена от серин, глицин, пропин, хистидин, аргинин, аланин, аспарагинова киселина, глутаминова киселина, фенилапанин, треонин, цистеин, цистин глутамин, аспарагин метионин, тирозин, хидроксипролин, триптофан, вапин, изопевцин, пизин и певцинСъединение съгласно претенция1, където захарен радикал, подбран от групата наR 4 включваD-глюкозата иDгалактозата.3. Съединение съгласно претенции
- 2, къдетоR2 включва аминокисепинен радикал, подбран от групата наLглутаминовата киселина,L-аспарагиновата киселинаLсеринаСмес от съединения, съгласно претенция 1 продукт с формула дезокси2-кетоза, производствоR^'-NH-R^*, извлечена от на най-малко един където проста реакцион енR^* включва захар, олиго- или1-амино-1за предпочитане с ниско молекулно тегло, по-специално под 1000Метод за daltons- полизахарид a , включва аминокиселина или - за предпочитане с ниско молекулно тегло, по-специално под 1000 daltons - пептиден радикал, където най-малко една субстанция, подбрана от групата на аминокиселините и - за предпочитане с ниско молекулно тегло, по-специално под 1000 daltons- пептидите и най-малко една втора субстанция, подбрана от групата на простите захари, олиго- или - за предпочитане с ниско молекулно тегло, по-специално под 1000 daltons- полизахариди, реагират помежду си при повишена температура, еЬенту^лно под налягане и/или в присъствието на нискомолекулен алкохол, след което междиният/те/ продукт/и/ се подлага/т/ на прегрупиране на Amadori и/или на реакцията на Mai Hard.
- 6. Метод съгласно претенция 5, където реакцията протича в присъствието на аминокиселина, имаща две карбоксилни групи и буферна сол, за предпочитане натриев бикарбонат в молекулно съотношение1: 1.
- 7. Метод съгласно претенции където най-малко една проста захар реагира най-малко една едноосновна аминокиселина и молекулното съотношение на простата/ите/ захар/и/ към аминокиселината/ите/ между2:1 и 1:1, за предпочитане 1.5!1
- 8. Метод съгласно претенции от 5 до 7, където реакцията на захарта/ите/ и/ипи захарида/ите/ с аминокиселината/ите/ и/или пептида/ите/ се провежда в концентриран воден разтвор о при температура 75-90 С, след което се извършва прегрупиране на Amadori при същата температура, евентуално под налягане, с едновременно или последващо отнемане на разтворителите докато реакционната смес стане светло оранжево-кафява на цвят
- 9. Метод съгласно която и да е претенция от 5 до 8, където смес от прости захари със същия състав и в същото тегловно съотношение, както в естествените торфени екстракти, се свързва със смес от аминокиселинни съединения със същия състав и в същото тегловно съотношение, както в споменатите торфени екстракти и евентуално следи от неорганични елементи, съдържащи се в споменатите торфени екстракти, като получената субстратна смес реагира в присъствието на вода като разтворител при повишена температура и евентуално под налягане и/или в присъствието на нискомолекулен алкохол, след което получените продукти се разтварят и реакцията се продължава за да се предизвика прегрупиране на Amadori и/или реакция на Mai Hard , като реакцията се спира, когато реакционната смес стане оранжевокафява на цвят, след което сместа се изсушава.
- 10. Метод съгласно която и да е претенция от 5 до 9, където изсушеният продукт се пречиства чрез колонна хроматография, чрез която специфични фракции, предизвикващи редукция на калиев ферицианид се събират.
- 11. Използване на най-малко едно съединение съгласно която и да е претенция от 1 до 4 или на най-малко един реакционен продукт с N-заместване с обща формула R^’-NH-Rg*, където R' включва 1-амино-1-дезокси 2-кетозен радикал, извлечен от групата на простите захари, олиго- или - за предпочитане с ниско молекулно тегло, по-специално под 1000 daltons - полизахариди, a R^’ включва аминокиселина или - за предпочитане с ниско молекулно тегло, по-специално под 1000 daltons - пептиден радикал , за производство на фамацевтични препарати за индуктиране продуцирането на цитокини в човешки кпетки ипи клетки на млекопитаещи.
- 12. Използване съгласно претенция 11, където споменатият реакционен продукт е синтезиран съгласно която и да е претенция от 5 до 9 и е влязъл най-малкото частично в прегрупиане на Amadori и/или реакция на Mai Hard, за лечение или профилактика на хематопогични и/или имунологични заболявания и/или за стимулиране на имунната система на хора и/или млекопитаещи
- 13.Използване съгласно претенция 11 или 12, където R^* е радикал на D-формата на проста захар, за предпочитане подбран от групата, включваща глюкоза, ксилоза, галактоза рамноза, фруктова, маноза, 2-дезокси-глюкоза, 6-дезокси глюкоза, глюкозамин и гапактозаминИзползване съгласно която и да е претенция от 11 до пептид,13, където R2* е радикал на L-формата на аминокиселина или за предпочитане подбран от групата, включваща серин, глицин, пропин, хистидин, аргинин, аланин, аспарагинова киселина, гпутаминова киселина, фенилапанин, треонин, цистеин, цистин, глутамин, аспарагин, метионин, тирозин, хидроксипролин, триптофан, валин, изолевцин, лизин и левцин15. Използване съгласно която и да е претенция от 11 до
- 14, където споменатия реакционен продукт присъства заедно с фармацевтично приемливи носители и/или полезни примеси и/или евентуално мазилно вещество в тегловно съотношение на реакционния продукт към останалите компоненти между1:1 и1:100, за предпочитане от1:8 да1:20, а най-добре около1:9
- 16.Използване съгласно претенция 15, където споменатите реакционни продукти присъстват в смес със лактоза и мазилно вещество, като тегловното съотношение на лактозата към мазипното вещество е между20:1100: 1 , за предпочитане около 50:1
- 17. Използване съгласно която да е претенция от 11 до16, където споменатите реакционни продукти присъстват количество от 0.01- 10 тегловни процента, по-специално тегловни процента в препарати, предназначени за козметични цели
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL29346492A PL171023B1 (pl) | 1992-02-13 | 1992-02-13 | Sposób wytwarzania nowych induktorów cytokin |
| EP92103614 | 1992-03-03 | ||
| PCT/EP1993/000327 WO1993016087A2 (en) | 1992-02-13 | 1993-02-11 | Amadori reaction compounds and products, process for their manufacture, and their use |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BG98956A true BG98956A (bg) | 1995-07-28 |
| BG62172B1 BG62172B1 (bg) | 1999-04-30 |
Family
ID=26130822
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BG98956A BG62172B1 (bg) | 1992-02-13 | 1994-08-05 | Съединения и продукти на реакцията на amaдори, метод затяхното производство и използването им |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5723504A (bg) |
| JP (1) | JPH07506344A (bg) |
| AT (1) | ATE187734T1 (bg) |
| AU (1) | AU672595B2 (bg) |
| BG (1) | BG62172B1 (bg) |
| BR (1) | BR9305878A (bg) |
| CA (1) | CA2130106A1 (bg) |
| CZ (1) | CZ285200B6 (bg) |
| DE (2) | DE632813T1 (bg) |
| ES (1) | ES2072244T1 (bg) |
| FI (1) | FI943733A0 (bg) |
| GR (1) | GR950300017T1 (bg) |
| HU (1) | HUT70434A (bg) |
| MX (1) | MX9300759A (bg) |
| NO (1) | NO304026B1 (bg) |
| RO (1) | RO115633B1 (bg) |
| RU (1) | RU2141337C1 (bg) |
| SG (1) | SG52390A1 (bg) |
| SK (1) | SK86994A3 (bg) |
| TW (1) | TW302368B (bg) |
| WO (1) | WO1993016087A2 (bg) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5629412A (en) * | 1994-07-11 | 1997-05-13 | Glinskii; Guennadi V. | Synthetic glycoamines that promote or inhibit cell adhesion |
| FR2746316B1 (fr) * | 1996-03-19 | 1998-06-12 | Guerlain | Nouvelles compositions cosmetologiques ou dermatologiques |
| WO1997049389A1 (en) * | 1996-06-27 | 1997-12-31 | The Picower Institute For Medical Research | 3-alkylamino-2-hydroxy-4-hydroxymethyl-2-cyclopenten-1-one advanced glycosylation endproducts and methods of use therefor |
| DE19705233A1 (de) * | 1997-02-12 | 1998-08-13 | Froelich Juergen C | Verfahren zur Herstellung einer Formulierung enthaltend Arginin |
| GB0319463D0 (en) * | 2003-08-20 | 2003-09-17 | Givaudan Sa | Compounds |
| TW200925268A (en) * | 2007-12-06 | 2009-06-16 | Mallinckrodt Baker Inc | Fluoride-containing photoresist stripper or residue removing cleaning compositions containing conjugate oligomeric or polymeric material of alpha-hydroxycarbonyl compound/amine or ammonia reaction |
| JP2012140360A (ja) * | 2010-12-28 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | 抗酸化剤、化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
| JP2012140378A (ja) * | 2010-12-29 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
| JP5835894B2 (ja) * | 2010-12-29 | 2015-12-24 | クラシエホームプロダクツ株式会社 | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
| JP2012140377A (ja) * | 2010-12-29 | 2012-07-26 | Kracie Home Products Ltd | チロシナーゼ活性阻害剤、メラニン産生抑制剤及び美白剤、並びにこれらを含有する化粧料、飲食品組成物及び医薬品組成物 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1514910A (en) * | 1974-07-02 | 1978-06-21 | Unilever Ltd | Amadori compounds and their use to flavour foods |
| US4629692A (en) * | 1982-12-06 | 1986-12-16 | Miles Laboratories, Inc. | Immunoassay for nonenzymatically glucosylated proteins and protein fragments an index of glycemia |
| DE3405841A1 (de) * | 1984-02-17 | 1985-08-22 | Bayer Ag, 5090 Leverkusen | N-acylierte 1-alkylamino-1-desoxy-ketose-derivate, verfahren zur herstellung und ihre verwendung |
| DE3601472A1 (de) * | 1986-01-20 | 1987-07-23 | Fresenius Ag | Verwendung von umsetzungsprodukten von reduzierenden zuckern und serotonin oder serotonin-precursoren zur behandlung cerebraler stoerungen |
| GB2218102B (en) * | 1988-04-08 | 1992-09-16 | Sandoz Ltd | Calcitonin peptide derivatives |
| ES2041616T3 (es) * | 1991-03-16 | 1998-04-16 | Torf Ets | Productos bioactivos derivados de turba y composiciones farmaceuticas y cosmeticas que los contienen. |
-
1993
- 1993-02-11 BR BR9305878A patent/BR9305878A/pt not_active Application Discontinuation
- 1993-02-11 US US08/284,635 patent/US5723504A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-02-11 JP JP5513786A patent/JPH07506344A/ja not_active Ceased
- 1993-02-11 ES ES93903950T patent/ES2072244T1/es active Pending
- 1993-02-11 AU AU34966/93A patent/AU672595B2/en not_active Ceased
- 1993-02-11 RO RO94-01361A patent/RO115633B1/ro unknown
- 1993-02-11 DE DE0632813T patent/DE632813T1/de active Pending
- 1993-02-11 SK SK869-94A patent/SK86994A3/sk unknown
- 1993-02-11 CA CA002130106A patent/CA2130106A1/en not_active Abandoned
- 1993-02-11 WO PCT/EP1993/000327 patent/WO1993016087A2/en active IP Right Grant
- 1993-02-11 RU RU94040167A patent/RU2141337C1/ru active
- 1993-02-11 AT AT93903950T patent/ATE187734T1/de not_active IP Right Cessation
- 1993-02-11 DE DE69327310T patent/DE69327310D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-02-11 SG SG1996003877A patent/SG52390A1/en unknown
- 1993-02-11 HU HU9402347A patent/HUT70434A/hu unknown
- 1993-02-11 CZ CZ941945A patent/CZ285200B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1993-02-12 MX MX9300759A patent/MX9300759A/es unknown
- 1993-03-23 TW TW082102133A patent/TW302368B/zh active
-
1994
- 1994-08-05 BG BG98956A patent/BG62172B1/bg unknown
- 1994-08-08 NO NO942930A patent/NO304026B1/no unknown
- 1994-08-12 FI FI943733A patent/FI943733A0/fi unknown
-
1995
- 1995-04-30 GR GR950300017T patent/GR950300017T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI943733A (fi) | 1994-08-12 |
| TW302368B (bg) | 1997-04-11 |
| RO115633B1 (ro) | 2000-04-28 |
| NO304026B1 (no) | 1998-10-12 |
| DE69327310D1 (de) | 2000-01-20 |
| CZ285200B6 (cs) | 1999-06-16 |
| AU672595B2 (en) | 1996-10-10 |
| RU2141337C1 (ru) | 1999-11-20 |
| JPH07506344A (ja) | 1995-07-13 |
| DE632813T1 (de) | 1996-02-15 |
| NO942930L (no) | 1994-08-08 |
| SG52390A1 (en) | 1998-09-28 |
| ES2072244T1 (es) | 1995-07-16 |
| WO1993016087A2 (en) | 1993-08-19 |
| NO942930D0 (no) | 1994-08-08 |
| MX9300759A (es) | 1993-11-01 |
| ATE187734T1 (de) | 2000-01-15 |
| SK86994A3 (en) | 1995-02-08 |
| FI943733A0 (fi) | 1994-08-12 |
| US5723504A (en) | 1998-03-03 |
| BG62172B1 (bg) | 1999-04-30 |
| RU94040167A (ru) | 1996-07-10 |
| HUT70434A (en) | 1995-10-30 |
| CA2130106A1 (en) | 1993-08-14 |
| GR950300017T1 (en) | 1995-04-30 |
| BR9305878A (pt) | 1997-08-19 |
| CZ194594A3 (en) | 1994-12-15 |
| AU3496693A (en) | 1993-09-03 |
| HU9402347D0 (en) | 1994-10-28 |
| WO1993016087A3 (en) | 1993-09-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Salter et al. | The origin of nitrogen incorporated into compounds in the rumen bacteria of steers given protein-and urea-containing diets | |
| CZ287816B6 (en) | Peptide, process of its preparation, pharmaceutical preparation in which it is comprised and use thereof | |
| EA003090B1 (ru) | Ферментированный высушенный материал, способ его получения и его применение для получения фармацевтической композиции и диетической добавки, а также фармацевтическая композиция и диетическая добавка, содержащие указанный материал | |
| BG98956A (bg) | Съединения и продукти на реакцията на амаdоri,метод за тяхното производство и използването им | |
| SU1012786A3 (ru) | Способ получени протеинового комплекса,стимулирующего секрецию инсулина | |
| US5114926A (en) | Tetrapeptide inhibiting the entry into cycle of hemopoietic stem cells processes for its preparation, and its uses | |
| SU638243A3 (ru) | Способ очистки гамма- -глутамилтаурина | |
| US6469137B1 (en) | Myelopeptides and their therapeutic use | |
| EP0632813B1 (en) | Amadori reaction compounds and products, process for their manufacture, and their use | |
| PL171319B1 (pl) | S posób wytwarzania kompozycji przydatnej do uzytku farmaceutycznegoi/lub kosmetycznego PL PL PL | |
| US6458761B2 (en) | Synthetic, statistic thymic peptide combination and its use as a preparation with immunological and/or endocrinological effect | |
| CA1337731C (en) | Inhibitory tetrapeptide of entry into cycle of hemopoietic stem cells, processes for its preparation and its uses | |
| US5948442A (en) | Stimulating ENTEROGENIN compositions and methods for their isolation and use | |
| CA1056305A (en) | Protein having thymus hormone-like activity | |
| RU2064935C1 (ru) | Гексапептид(бивалфор), обладающий противоопухолевой активностью | |
| RU2097432C1 (ru) | Гликопротеин tcf-ii и фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество гликопротеина tcf-ii | |
| JP2000514839A (ja) | 合成及び統計学的な胸腺ペプチドの化合物、及び、免疫学及び／又は内分泌学的効果を発揮する製剤としての用途 | |
| JPH07506564A (ja) | 医薬的ペンタペプチド組成物およびその使用法 | |
| Proulx | Bound Carnitine in Bovine Brain | |
| JPH0320300A (ja) | 悪性腫瘍細胞増殖抑制作用を有する新規蛋白質 | |
| PL171023B1 (pl) | Sposób wytwarzania nowych induktorów cytokin | |
| JPH07138287A (ja) | 新規なペプチドおよび免疫賦活剤 | |
| JPS5988426A (ja) | アイゼニン（トリペプチド）を有効成分とする免疫増強性制癌作用を有する制癌剤 | |
| JPH06256389A (ja) | 新規なペプチドおよび免疫賦活剤 |