JP2000514839A - 合成及び統計学的な胸腺ペプチドの化合物、及び、免疫学及び／又は内分泌学的効果を発揮する製剤としての用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 活性成分として、胸腺組織の特徴をもつアミノ酸の重量比及びパターンでショートチェーンペプチドを含む、免疫学的及び／又は内分泌学的に活性な製剤。

Description

【発明の詳細な説明】 合成及び統計学的な胸腺ペプチドの化合物、 及び、 免疫学及び／又は内分泌学的効果を発揮する製剤としての用途 本発明は、合成及び統計学的な(statistic)胸腺ペプチドの化合物、及び、免 疫学及び内分泌学的に活性な製剤としてのその用途に関する。 科学分野の多くの研究発表から、脳、免疫系器官（骨髄、胸腺、リンパ腺、脾 臓、腸の粘膜、肺の上皮、及び、体皮）及びホルモン制御の内分泌系の間で、低 分子量の信号物質(signaling substances)によって伝染が生じることが明らかに なってきた。低分子量タンパク質、いわゆる、信号ペプチドが、胸腺組織から同 定されており、このタンパク質は、神経伝播体としての神経レベル及び分化因子 としての免疫学レベルとして機能する。 低分子量信号ペプチドは、このような活性ペプチド物質が皮下において器官に 供給されたとき、Ｔリンパ球及びＢリンパ球において多潜能性親細胞から分化カ スケード(differentiation cascade)を誘発させることが動物実験から証明する ことができた。さらに、胸腺のタンパク質要素に相応する物質を備えたこのよう な信号分子は、例えば、Ｘ線、癌の化学療法、潜在的なウイルス感染によって器 官が既に侵されているときに、その器官を条件的感染から保護できることがわか った。器官の調節平衡に対するこのようなダメージはホルモン障害を併発し、生 殖能力に変化を与え、精神的及び肉体的な機能を低下させ、睡眠障害や食欲減退 を引き起こす。さらに、毛髪の質、爪の成長、皮膚の質を低下させる。 実験において、医学分野では、長い間、このような徴候に出会い、器質性抽出 物の製剤は、医薬品又は補助食品として使用されてきた。特に、牛の胸腺の ような動物から得られた胸腺組織の製剤は、この製剤の分子的な機能原理が不明 のまま、今まで広く使用されてきた。このような胸腺製剤を使用した生体での一 連の生化学的研究におけるデータは、胸腺組織に含まれる物質が神経系及び免疫 系の両方に相乗的効果を表すことと結論付けている。しかし、最近５年間におい て、動物から得られた器質性抽出物のこのような製剤はプリオン(prion)タンパ ク質で汚染されているという危険性が注目されてきた。このプリオンタンパク質 は、ＢＳＥの（牛のスポンジ状脳疾患「狂牛病」）の徴候を誘発することに関連し ている。 従って、本発明の目的は、免疫学的及び／又は内分泌学的に活性な製剤であっ て、胸腺ペプチド化合物(combination)によって有用な効果を発揮するとともに ＢＳＥの危険を回避することができる製剤を反復的に製造することにある。さら に、合成及び統計学的な胸腺ペプチドの化合物、及び、免疫学及び／又は内分泌 学的に有用な効果を発揮する製剤を特定することも目的とする。 本発明は、前述の目的を請求項１の特徴項によって達成した。ここに、免疫学 及び／又は内分泌学的に活性は製剤は、活性成分として、胸腺組織の特徴をもっ てアミノ酸の重量比(weighted quantity ratio)及びパターン(pattern)でショー トチェーン(short-chain)ペプチドを含んでいる。 従属項２は、特定の製造物に関する。すなわち、請求項２は、独立して化学的 に安定するように誘導されたアミノ酸を段階的に整列させて(stepwise lineup) ショートチェーンペプチドにした製剤に関し、これらの合成ペプチドからＮ末端 及び副作用誘発形態をなくした製剤に関する。しかも、胸腺組織の特徴をもった アミノ酸の重量比及びパターンを維持させている。 請求項３は、独立項であり、合成されたショートチェーンペプチドの用途に関 する。このペプチドは、免疫学的及び／又は内分泌学的に活性な性質を備えた胸 腺組織の特徴をもったアミノ酸の重量比及びパターンを有している。すな わち、この製剤は、合成及び統計学的に胸腺ペプチドの化合物を含んでいる。さ らに、従属項の請求項４ないし請求項８は特定の用途に関する。すなわち、これ らの請求項は、免疫が弱い場合、免疫欠損やホルモン障害の場合において、皮膚 や毛髪や爪の栄養素としての用途に関し、化粧品の用途及び補助食品の用途に関 する。 胸腺ペプチドの部分的な加水分解物から得られるのは、ショートチェーン胸腺 ペプチド及びアミノ酸のタンパク混合物であり、この混合物は胸腺組織の酵素的 及び／又は化学的な部分的加水分解によって得られる。部分的な加水分解物が胸 腺組織の特徴をもつアミノ酸の重量比及びパターンを備えたショートチェーンペ プチドよりなることから、この化合物は、クロマトグラフィー及びアミノ酸分析 によって特定された。このようなアミノ酸が依然として残存する胸腺組織の特徴 あるアミノ酸の重量比で化学的に安定な誘導体に互いに反応し、このような合成 化合物がＮ末端保護基もなく、胸腺組織の特徴あるアミノ酸の重量比で繰り返し 結合すると、プリオンタンパク質の恐れもなく、合成及び統計学的な胸腺ペプチ ドの化合物が得られる。 従って、本発明は、比較的簡単な方法で、始めから規格化できる製剤の効果を 発揮する、免疫学的及び内分泌学的に活性な製剤の製造方法も提供する。 製剤がこの方法により得られるので、製薬上反復実施可能な無菌状態で、この ような胸腺ペプチド化合物を製造することができる。この方法は、統計学的な複 数の合成操作よりなり、製剤は神経伝播体及び免疫学的に活性な信号分子の特徴 をもつ一連の信号胸腺ペプチドからなる。天然の胸腺組織からの部分的加水分解 混合物と比較した分析テストによると、使用した分析方法の誤差範囲内で、合成 及び統計学的胸腺ペプチド化合物が天然製剤の合成物と対比することができる。 これにより、胸腺ペプチド化合物を合成することによって、ＢＳＥの危険を低減 して、本発明の目的が達成されたことが理解できる。 驚くべきことに、本発明の合成製剤は、人のリンパ球についての生化学テス トにおいて、部分的加水分解によって製造された市場入手可能な胸腺製剤と対比 して、有糸分裂生殖の共刺激作用(costimulation:細胞増殖の誘導)に関して優れ た活性を発揮した。 さらに、驚くべきことに、合成製剤は、細胞外間質の成分を結合させるという 結果を呈し、硬タンパク質にのみ起因する前述の性質をもっていた。 以下、実施例を参照して、本発明をより詳細に説明する。 実施例１ 本発明の統計学的な胸腺ペプチド化合物は、有糸分裂生殖の共刺激作用のテス ト系において、部分的加水分解によって得られた市場入手可能な胸腺製剤と対比 することにより、生化学的な活性度を試験された。１００，５０，２５μｇ／ｍ ｌの最終濃度がテストされた。 ２人のドナー（ＫＦＧとＷＨ）の場合、統計学的胸腺ペプチド化合物が、部分 的加水分解によって得られた市場入手可能な胸腺製剤よりも統計学的に十分に高 い生化学的活性を示した。１００μｇ／ｍｌの高い濃度において、部分的加水分 解によって得られた市場入手可能な胸腺製剤では細胞増殖の阻害が観察され、統 計学的胸腺ペプチド化合物は服用量に応じて人のリンパ球の増殖を生じさせた。 ２人の血液提供者から、人の末梢（peripheral）血液リンパ球が分離され、部 分的加水分解によって得られた市場入手可能な胸腺製剤と統計学的胸腺ペプチド 化合物を正対照(positive control)ＲＥＦ０１（チモシン分画５）と対比して、 異なる濃度において最適以下の予刺激(prestimulation：0.5μｇ／ｍｌフィトヘ マグルチニン：植物性血球凝集素(ＰＨＡ))を与えた後、これらの細胞の増殖速 度が測定された。 測定操作中において、増殖速度が以下の方法により測定された：Ｔ細胞増殖の 活性成分に依存する誘導中、ＤＮＡ合成が細胞分裂のために刺激された。従って 、放射性ＤＮＡ組成物（３Ｈ−チミジン）の結合を介し、結合された放射能を参 照することによって、Ｔ細胞の成長を測定することができる。 図１及び図２は、ドナーＫＦＧ及びドナーＷＨの血液リンパ球の刺激作用を示 している。テストデータは、フィトヘマグルチニン（Ｋｏｎｔｒ＋ＰＨＡ）を加 えた後の対照物の結果に関連付けられている。このテストにおいて、参照胸腺製 剤が１００μｇ／ｍｌの濃度の正対照として使用された；部分的加水分解によっ て得られた市場入手可能な胸腺製剤及び合成胸腺ペプチド化合物が１００，５０ ，２５μｇ／ｍｌの３つの濃度でテストされた。 図１は、ドナーＫＦＧの結果を示している。正対照が使用された参照胸腺製剤 は、増殖速度が明らかに大きく増加した。しかし、部分的加水分解によって得ら れた市場入手可能な胸腺製剤では、阻害が服用量に依存することが観察された。 ２５μｇ／ｍｌの最も低い濃度の場合のみ、対照物に達した。合成胸腺ペプチド 製剤の作用によって、細胞増殖速度は、対照物の場合より、３つのテストされた 濃度の場合では統計学的にかなり高いものとなった。 図２によると、ドナーＷＨのリンパ球が対比できるように示されている。同様 に、参照胸腺製剤が正対照として使用され、人のリンパ球の増殖がかなり大きく なっている結果を得た。部分的加水分解によって得られた市場入手可能な胸腺製 剤は、５０及び２５μｇ／ｍｌの濃度において、細胞増殖速度に僅かな増加がみ られたが、１００μｇ／ｍｌの高濃度では増加はみられなかった。しかし、合成 胸腺ペプチド化合物のＳＰ／０１／２１１０９６では、明らかに服用量に応じた ＤＮＡ合成速度の増加が観察できた。 実施例１によるこれらのテストの目的は、有糸分裂生殖の共刺激作用のテスト 系において、合成及び統計学的胸腺ペプチド製剤を部分的加水分解によって 得られた市場入手可能な胸腺製剤と対比することである。その意図は、人の血液 リンパ球の細胞増殖速度を増加させるテスト物質の能力をテストすることにある 。 統計学的胸腺ペプチド化合物では、２人のドナーに場合において、部分的加水 分解によって得られた市場入手可能な胸腺製剤と対比して、明らかに高い生化学 活性を認めることができた。さらに、ドナーＷＨは、服用量に応じてＤＮＡ合成 速度の増加を示した。驚くべきことに、細胞培養物への部分的加水分解によって 得られた市場入手可能な胸腺製剤の追加によって、細胞増殖の阻害も生じた。５ ０及び２０μｇ／ｍｌの低い濃度の場合のみ、ドナーＷＨにおいて、細胞増殖速 度が対照物の値より僅かに越えた。 実施例２ 以下の実施例は、ドナーＤＢの血液リンパ球の刺激に関係している。テストデ ータは、図３及び図４を参照して、ＰＨＡでフィトヘマグルチニンを追加した後 、対照物の結果と関連付けられた。チモシン分画Ｎｏ．５（ＴＦ５）が２つの濃 度において正対照として使用された(左から３番目と４番目の棒)。対比するため 、市場入手可能な部分的胸腺加水分解物（５番目と６番目の棒）がまた同じ濃度 で使用された。対照ＰＨＡは単独で使用された。 ０．０５μｇ／ｍｌのＰＨＡで血液細胞の最適以下の刺激作用を伴った有糸分 裂生殖の共刺激作用において、細胞培養物中で１００μｇ／ｍｌの本発明による 合成物の服用の場合、細胞培養物中で０．４μｇ／ｍｌの本発明による合成物の 服用の場合のいずれにおいても、合成及び統計学的胸腺ペプチド化合物は、驚く べき差別化された活性を示している。 同様に、細胞培養物中で０．０２５μｇ／ｍｌの量でＰＨＡによる血液細胞の 予刺激の場合でも、細胞培養物当りのＰＨＡが０．０５μｇ／ｍｌの量で血 液細胞を予刺激するより明らかに少ない量で、本発明の合成及び統計学的胸腺ペ プチド化合物は顕著な効果を示している。 最後に、例えば、本発明の製剤は、試験管内でも、１００μｇ／ｍｌから０． ４μｇ／ｍｌの広い範囲で、対比製剤として使用された市場入手可能な部分的な 胸腺の加水分解物よりも、常に大きな２層活性(two-phase activity)を発揮して いる。いずれにしても、この２層活性は試験管内において免疫学の広い分野で証 明されており、０．４μｇ／ｍｌというきわめて低い濃度の場合でも大きな活性 を発揮することは驚くべきことに疑う余地もなく、低濃度であることによる大き な経済的効果も魅力的である。 合成及び統計学的胸腺ペプチド化合物の分析データは次の通りである。 分析証明書 合成及び統計学的胸腺ペプチドデータシート 対象物 ＃ ＳＰ／０１／２１１０９６ 同定 有り 内容物 黄色粉末 残余溶剤(ＧＣ)： 水 ＜１０ ％ ９％±０．５％ ＤＭＦ ＜０．１％ ｎ．ｄ．＜２００ｐｐｍ メタノール ＜０．１％ ＜１３０ｐｐｍ トルエン ＜０．１％ ｎ．ｄ．＜ ４０ｐｐｍ エチルイソプロピルアミン ＜０．１％ ｎ．ｄ．＜２００ｐｐｍ 酢酸エステル ＜０．１％ ｎ．ｄ．＜ ２０ｐｐｍ 酢酸塩 ＜３ ％ １．６％±０．２％ 無機塩 ＜０．５％ ＜０．２％ 比旋光度 −３０． ０゜±５° −３０．２°±０．２° （２０℃ ｃ＝０．２；Ｈ２０） 遊離アミノ酸 内容： ＧＫＬ０１±５％ 適量 （％，ｗ／ｗ） 全アミノ酸 組成内容 ＧＫＬ０１±５％ 適量 （％，ｗ／ｗ） ペプチド内容量 ５０％±５％ 適量

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】平成１１年７月７日（１９９９．７．７） 【補正内容】 請求の範囲 1.独立して化学的に安定して誘導されたアミノ酸を段階的にショートチェーンペ プチドに整列させることにより製造可能として、Ｎ末端基及び副作用誘発形態な く、胸腺組織の特徴をもったアミノ酸の重量比及びパターンを維持させ、ＢＳＥ の危険なく合成胸腺ペプチド化合物を含む製剤。 2.活性成分として、胸腺組織の特徴をもつアミノ酸の重量比及びパターンでショ ートチェーンペプチドを含む、免疫学的及び／又は内分泌学的に活性な製剤を製 造する方法であって、 独立して化学的に安定して誘導されたアミノ酸を段階的にショートチェーンペ プチドに整列させ、 前記合成ペプチドからＮ末端基及び副作用誘発形態をなくし、 胸腺組織の特徴をもったアミノ酸の重量比及びパターンを維持させた、 ことを特徴とする方法。 3.免疫学的及び／又は内分泌学的に活性な性質を備えた基質を発揮させる、請求 項１の製剤の用法。 4.免疫低下及び免疫欠損時における請求項３の用法。 5.ホルモン障害時における請求項３の用法。 6.皮膚、毛髪及び爪の栄養素における請求項３の用法。 7.化粧品の分野における請求項３の用法。 8.補助食品の分野における請求項３の用法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 37/04 Ａ６１Ｐ 37/04 43/00 １０７ 43/00 １０７ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ， ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 1.活性成分として、胸腺組織の特徴をもつアミノ酸の重量比及びパターンでショ ートチェーンペプチドを含む、免疫学的及び／又は内分泌学的に活性な製剤。 2.独立して化学的に安定して誘導されたアミノ酸を段階的にショートチェーンペ プチドに整列させることにより、Ｎ末端及び副作用誘発形態なく、胸腺組織の特 徴をもったアミノ酸の重量比及びパターンを維持させた、請求項１の製剤。 3.合成及び統計学的に胸腺ペプチドの化合物を発揮するように免疫学的及び／又 は内分泌学的に活性な性質を備えた胸腺組織の特徴をもったアミノ酸の重量比及 びパターンを有する合成ショートチェーンペプチドの用法。 4.免疫低下及び免疫欠損時における請求項３の用法。 5.ホルモン障害時における請求項３の用法。 6.皮膚、毛髪及び爪の栄養素における請求項３の用法。 7.化粧品の分野における請求項３の用法。 8.補助食品の分野における請求項３の用法。