JPH11255657A - 線維芽細胞増殖剤及びこれを配合した皮膚外用剤 - Google Patents

線維芽細胞増殖剤及びこれを配合した皮膚外用剤

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JPH11255657A JP10061287A JP6128798A JPH11255657A JP H11255657 A JPH11255657 A JP H11255657A JP 10061287 A JP10061287 A JP 10061287A JP 6128798 A JP6128798 A JP 6128798A JP H11255657 A JPH11255657 A JP H11255657A
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 安全性に優れた線維芽細胞増殖剤を提供
する。 【解決手段】 フィトグリコーゲンを有効成分として含
有することを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、フィトグリコーゲ
ンを有効成分とした新規な線維芽細胞増殖剤及びこれを
配合した皮膚外用剤に関する。
【0002】
【従来の技術】フィトグリコーゲンとは、動物の細胞
内、特に肝臓や筋肉に多く存在するグリコーゲンと基本
構造が同じである植物由来の冷水可溶な貯蔵多糖類であ
り、α−1,4結合からなるグルコース鎖がα−1,6
結合で高度に枝分かれした構造をしている。そのため、
皮膚外用剤において、その構造を活かし保湿剤として配
合することが従来より提案されている(特開昭62−1
78505、特開昭63−290809)。しかしなが
ら、フィトグリコーゲンの線維芽細胞増殖効果に関して
は未だ何ら報告されていない。
【0003】一方、線維芽細胞は、皮膚内の膠原線維、
弾力線維、基質を産出し、皮膚の老化と密接な関係を有
している。そのため、近年、皮膚外用剤の分野におい
て、線維芽細胞の増殖効果を有する物質を配合し、皮膚
の機能そのものを活性化して、皮膚の老化症状の改善を
図る試みがなされている。このような物質としては、臓
器由来の水溶性蛋白や牛胎盤エキス等が知られている。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、臓器由
来の水溶性蛋白は、蛋白質であるため、感作性で問題が
あり、一方、牛胎盤エキスにおいては、牛由来のもので
あるため、「狂牛病」の問題から安全性で疑問視されお
り、安全性に優れた線維芽細胞増殖剤が切望されてい
る。そこで、本発明の目的は、安全性に優れた線維芽細
胞増殖剤を提供することを目的とする。
【0005】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の目
的を達成すべく安全性に優れた種々の多糖類について鋭
意研究を重ねた結果、フィトグリコーゲンに線維芽細胞
増殖効果を有することを見出し、本発明を完成するに至
った。 すなわち、本発明は、(1)フィトグリコーゲ
ンを有効成分として含有した線維芽細胞増殖剤、(2)
(1)の線維芽細胞増殖剤を配合した皮膚外用剤、を提
供するものである。
【0006】
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
尚、本発明において「%」はすべて「重量%」である。
本発明において「フィトグリコーゲン」とは、前述した
とおり、動物の肝臓や筋肉に多く存在するグリコーゲン
と基本構造が同じである植物由来の冷水可溶な貯蔵多糖
類である。フィトグリコーゲンの供給源としては、植物
由来であれば特に限定するものでないが、例えば、トウ
モロコシ、大麦、米等の種子が挙げられる。その中で
も、スイートコーンの種実は他の植物に比較し、フィト
グリコーゲンを高濃度含有していることから、供給源と
して好ましい。
【0007】本発明で用いるフィトグリコーゲンの抽出
・精製方法は特に制限はなく、任意の方法を採用するこ
とができる。一般的な調製方法を示すと、フィトグリコ
ーゲンを含有する植物組織を粉砕等により抽出しやすい
状態とした後、植物組織の固形分に対し3〜20倍量の
清水を加え水抽出し、デンプン、蛋白質、その他の不溶
物を遠心分離等で除去する。得られた抽出液を加熱処理
および/またはトリクロロ酢酸等で処理し蛋白質を除去
した後、この処理液にメタノール、エタノール、アセト
ン等の有機溶剤を添加しフィトグリコーゲンを沈殿させ
る。尚、沈殿の際の有機溶剤の濃度は、溶剤により異な
るが、例えば、メタノールやエタノールのようなアルコ
ールの場合は60容量%以上、アセトンの場合は50容
量%以上とするのが好ましい。この濃度より低い場合
は、フィトグリコーゲンの一部あるいは全部が溶解した
状態となるため、収率が低減し好ましくない。次に、回
収した沈殿物をメタノール、エタノール、アセトン、ジ
エチルエーテル等の有機溶剤で洗浄した後、乾燥し粉末
状のフィトグリコーゲンを得る。
【0008】本発明の線維芽細胞増殖剤は、上述の方法
等により得られたフィトグリコーゲンをそのまま用いて
も良いし、さらに必要に応じ賦形剤等を加配しても良
い。
【0009】また、線維芽細胞増殖剤の皮膚外用剤への
配合量は、皮膚外用剤中フィトグリコーゲンが0.00
1〜5%、特に、0.01〜2%配合することが好まし
い。その配合量が少な過ぎると皮膚の老化防止や改善効
果が発揮されにくく、一方、あまり多くし過ぎても一定
の効果以上は期待できないからである。
【0010】本発明において「皮膚外用剤」とは、頭皮
を含めた皮膚表面に用いるもので、例えば、化粧水、乳
液、クリーム、養毛剤、育毛剤、パック、口紅、リップ
クリーム、ファンデーション、ションプー、リンス、ト
リートメント、浴用剤等が挙げられる。
【0011】次に、本発明を実施例・試験例に基づき、
さらに詳細に説明する。尚、本発明は、これら実施例・
試験例に制約されるものではない。
【実施例】実施例1 新鮮なスイートコーン種実1kgを粉砕機(商品名「RO
BOT-COUPE CUTTING MIXER R-551 」、ティー・ケー・食
品機械(株)扱い)で粉砕し、この粉砕物に1kgの清
水を加え混合後、200メッシュストレーナーで濾過す
る。得られた濾液を遠心分離機(商品名「高速冷却遠心
機 KR-20000S」、(株)久保田製作所製)で8500r
pmで5分間遠心分離し、デンプン、蛋白質、その他の
不溶物を除去した。上清を濾紙で濾過後、95℃で20
分間加熱し、冷却後、5000rpmで5分間遠心分離
し凝固した蛋白質を除去した。上清を4℃に冷却して、
これに5%になるまでトリクロロ酢酸を加え、4℃で一
晩放置したのち、5000rpmで5分間遠心分離し沈
殿物を除去し、上清を3倍量のメタノールに注加して生
じた沈殿物を5000rpmで5分間の遠心分離で集
め、メタノール、エタノール、ジエチルエーテルで順次
洗浄したのち真空乾燥し線維芽細胞増殖剤を得た。得ら
れた線維芽細胞増殖剤には、乾物中でフィトグリコーゲ
ンを約95%含有していた。
【0012】 実施例2 <処方> (1) 流動パラフィン 15.0% (2) セタノール 2.0% (3) ステアリルアルコール 5.0% (4) ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 5.0% (5) 実施例1の線維芽細胞増殖剤 1.0% (6) プロピレングリコール 5.0% (7) パラオキシ安息香酸メチル 0.1% (8) 香料 0.2% (9) 精製水 66.7% <製造方法>(1) 〜(4) の油相成分を混合・溶解して均
一とし、75℃に加熱した。一方、(5) 〜(7) 及び(9)
の水相成分を混合・溶解して75℃に加熱した。次いで
上記水相成分に油相成分を添加して予備乳化した後、ホ
モミキサーにて均一に乳化した。その後冷却し、50℃
にて(8) を添加・混合し、実施例1の線維芽細胞増殖剤
を配合した皮膚用クリームを得た。
【0013】
【試験例】試験例1(線維芽細胞増殖試験) <試験方法> A.線維芽細胞増殖剤のウェルへのコート 実施例1で得られた線維芽細胞増殖剤を蒸留水で溶解
し、孔径0.22μmのメンブレンフィルターで濾過し
た後、浮遊培養用ウェル(商品名「浮遊培養用96穴マ
ルチプレート」、住友ベークライト(株)製)に線維芽
細胞増殖剤のコート量が固形物として100μg/cm2
となるように添加し、クリーンベンチ内で無菌的に風乾
させた。
【0014】B.線維芽細胞の培養 ヒト真皮線維芽細胞(商品名「CryoNHDF-Neo、Strain N
o.4049」、三光純薬(株)製)を10%FBS(牛胎児
血清)含有D−MEM培地で1×104 セル/mlとな
るように分散し、線維芽細胞増殖剤をコートした各ウェ
ルに100μl添加した。次に、これを、37℃、5%
CO2 雰囲気下で培養し、3、5、6日目の細胞数を下
記のクリスタルバイオレット法により把握した。尚、線
維芽細胞増殖剤をコートしていないウェルを用い上記と
同様な方法で培養したものを対照とした。
【0015】C.クリスタルバイオレット法 各ウェルに10容量%ホルムアルデヒド含有PBS
(−)を添加し、30分間静置して細胞を固定した後、
培地を除去し、PBS(−)で1回洗浄した。次に、染
色液である0.4w/v%クリスタルバイオレット含有
メタノールを各ウェルに50μl添加し、30分間静置
して染色した後、染色液を除去し、蒸留水で洗浄し、2
時間程度風乾し、545nmにおける吸光度をウェルリ
ーダーSK−60((株)サイニクス製)で測定し、6
ウェルの平均値を求めたところ、表1の結果が得られ
た。尚、吸光度0.1当たり約2.5×103 の細胞数
に相当する。
【0016】
【表1】
【0017】表1より、フィトグリコーゲンには線維芽
細胞増殖効果を有していることが理解される。
【0018】試験例2(使用効果試験) 試験方法 皮膚の老化症状が顕著に認められる50〜60歳の女性
20名を1群10名に分け、一方の群には実施例2の線
維芽細胞増殖剤を配合した皮膚用クリーム(本発明
品)、他方の群には線維芽細胞増殖剤を配合せず実施例
2と同様な方法で得た皮膚用クリーム(比較品)をブラ
インドにて3ヵ月間使用させ、使用前後の皮膚のしわ、
きめの変化を写真撮影及び皮膚表面のレプリカにより観
察し、改善効果を評価したところ、表2の結果が得られ
た。尚、改善効果は、「改善」、「やや改善」、「変化
なし」の三段階で評価した。
【0019】
【表2】
【0020】表2より、フィトグリコーゲンを有効成分
として含有した線維芽細胞増殖剤を配合した皮膚外用剤
は、皮膚の老化症状の改善に対して、良好な効果を有す
ることが理解される。
【0021】
【発明の効果】以上述べたように本発明において、多糖
類であるフィトグリコーゲンに線維芽細胞増殖効果を有
することが認められる。これより、安全性に優れた線維
芽細胞増殖剤及び皮膚の老化症状の改善に有効な皮膚外
用剤を提供することができる。
【0022】
【図面の簡単な説明】
【図1】試験例1における線維芽細胞の培養日数と細胞
数を把握するクリスタルバイオレット法による吸光度と
の関係を示したものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 FI A61K 7/48 A61K 7/48 C08B 37/02 C08B 37/02 // A61K 35/78 ADS A61K 35/78 ADS

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 フィトグリコーゲンを有効成分として含
    有することを特徴とする線維芽細胞増殖剤。
  2. 【請求項2】 請求項1記載の線維芽細胞増殖剤を配合
    することを特徴とする皮膚外用剤。
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