JP3502415B2

JP3502415B2 - メイラード反応阻害剤

Info

Publication number: JP3502415B2
Application number: JP14831993A
Authority: JP
Inventors: 久美亀山; 喜実江木村; 敏明有賀; 克己湯浅
Original assignee: Kikkoman Corp; Kose Corp
Current assignee: Kikkoman Corp; Kose Corp
Priority date: 1993-05-28
Filing date: 1993-05-28
Publication date: 2004-03-02
Anticipated expiration: 2019-03-02
Also published as: JPH06336430A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、タンパク質と還元糖と
の縮合反応であるメイラード反応を抑制するメイラード
反応阻害剤に関し、更に詳しくは、ブドウ糖とコラーゲ
ンとが非酵素的に結合して生じるアマドリ転移生成物の
生成を阻害し、肌の硬化、しわ形成の原因となり老化架
橋ともいわれるコラーゲンの架橋形成や、肌のくすみの
原因となる着色を抑制すると考えられる、皮膚外用剤や
化粧料等として利用可能なメイラード反応阻害剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】メイラード反応は、アミノ酸、蛋白質な
どの遊離アミノ基（ε−アミノ基、Ν末端のアミノ基）
と還元糖との間で起こる縮合反応を言う。もともとこの
反応は食品の保存によって起こる褐変現象として１９１
２年、フランスのＬ.Ｃ.メイラード（L.C.Maillard）ら
により報告されたものである。

【０００３】１９６８年にラーバー（Rahbar）らが、ヘ
モグロビン分画の１つが糖尿病患者において増加するこ
とを報告して以来、生体内の蛋白質にこの反応が生じる
ことが明らかにされ、近年では本反応の結果生じる構造
や機能の変化が糖尿病のみならず種々の病変、老化に深
い関わりがあることが判明している。

【０００４】メイラード反応の機構は現在、次のように
理解されている。すなわち、まずタンパク質の遊離ア
ミノ基をグルコースなどの還元糖のアルデヒド基が求核
反応によって攻撃し、シッフ塩基を形成する。このシ
ッフ塩基は不安定であり、分子内電子転移反応を起こし
てアマドリ転移生成物を形成し安定化する。次いで、
アマドリ生成物は種々のデオキシオソンを生成し、更に
タンパク質のアミノ基と反応を起こして重合体形成をひ
き起こす。最後に、この重合体形成によりタンパク質
の溶解度が低下し、プロテアーゼの作用を受けにくくな
り、多くは蛍光を発する褐変物質となるのである。

【０００５】以上のことからメイラード反応は、特に代
謝回転の緩やかなタンパク質において顕著であることが
知られ、化粧品科学においては特にコラーゲンのメイラ
ード反応が皮膚の硬化、しわ、くすみ等すなわち皮膚老
化の要因の１つであることが確認されてきている（参考
特開昭６２−２４９９０９号）。

【０００６】すでに、このメイラード反応を阻害する物
質がいくつか知られている。例えば、尿素やグアニジン
（特開昭６２−２４９９０８号）、メチルトリシラノー
ル等のケイ素化合物（特開昭６２−２４９９０９号）、
ベンゾフェノン類（特開平４−３６８３２０号）、黄ご
んフラボノイド（特開平３−２４０７２５号）につい
て、これらがメイラード反応阻害活性を有することが報
告されている。しかし、これらは実際作用が弱かった
り、また、生薬のため価格が高いなどそれぞれに欠点を
有し、実用化のために十分満足のゆくものではなかっ
た。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】したがって、上記の欠
点を解消し、実用に耐え得るメイラード反応阻害剤の開
発が求められていた。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは皮膚のコラ
ーゲンに着目し、種々の化合物を用いてコラーゲンのメ
イラード反応の抑制効果を調べた結果、ブドウ抽出物等
に含まれているプロアントシアニジンに優れた効果があ
ることを見い出し、本発明を完成するに至った。

【０００９】すなわち本発明は、プロアントシアニジン
を有効成分として含有するメイラード反応阻害剤を提供
するものである。

【００１０】本発明の有効成分であるプロアントシアニ
ジンは、ブドウ果実の搾汁粕又は種子の他、トチの実の
殻、つるこけもも、大麦、小豆、松・樫・山桃等の樹皮
等に含まれる化合物である。

【００１１】さらに詳しく言えば、このプロアントシア
ニジンは前記のごとき各種の植物中に存在する縮合型タ
ンニン、すなわちフラバン−３−オールまたはフラバン
−３,４−ジオールを構成単位として縮合もしくは重合
により結合した化合物群（オリゴマーの混合物）であっ
て、これらは酸処理によりシアニジン、デルフィニジ
ン、ペラルゴニジン等のアントシアニジンを生成すると
ころからこの名称が与えられているものである。

【００１２】従って、本発明のプロアントシアニジンと
しては、前記構成単位の２〜１０量体、さらにはそれ以
上の高分子プロシアニジン、プロデルフィニジン、プロ
ペラルゴニジン等のプロアントシアニジンおよびそれら
の立体異性体がすべて含まれるが、このうち、溶解性等
の優れている次の式

【化１】（式中、Ｒ₁は水素または水酸基、Ｒ₂〜Ｒ₄はそれぞれ
独立して水素、水酸基またはメトキシル基、Ｒ₅は水
素、ガロイル基またはグリコピラノシル基である）で表
されるフラバン−３−オールまたはフラバン−３,４−
ジオールを構成単位とした２〜１０量体、特に２〜４量
体のプロアントシアニジンを好適に使用することができ
る（特開昭６１−１６９８２号公報参照）。

【００１３】また、このプロアントシアニジンとして
は、合成法によって得られたものも用いることができ
る。

【００１４】プロアントシアニジンは、ブドウ果実の搾
汁粕又は種子から抽出されたブドウ抽出物に、通常その
成分として、フラバノールに換算して１０％以上（固形
分換算）含まれており、ブドウ抽出物は最も経済的なプ
ロアントシアニジン源ということができる。以下、本
発明においてはプロアントシアニジン源としてこのブド
ウ抽出物を例に取り説明をおこなう。

【００１５】プロアントシアニジンを含むブドウ抽出物
の抽出方法は特に限定されず、ブドウ果実の搾汁粕、又
は種子等の原料を抽出溶媒に浸漬し、これを室温で、ま
たは加温下抽出し、濾過すれば良い。

【００１６】抽出溶媒としては、水、メチルアルコー
ル、エチルアルコール等の１級アルコール、プロピレン
グリコール、１,３−ブチレングリコール等の液状多価
アルコール、酢酸エチルエステル等の低級アルキルエス
テル、ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素、エチルエーテ
ル、アセトン等の公知の溶媒を用いることができ、これ
ら溶媒は一種または二種以上を組合せて使用することが
できる。就中、好ましい抽出溶媒としては、水と混和
する有機溶媒の水溶液、特に、エチルアルコール、メチ
ルアルコール、アセトン等の水溶液が挙げられる。

【００１７】ブドウ抽出物は、上記のように抽出して得
られた抽出液をそのまま用いても良いが、更に必要によ
り濃縮したものを用いても良い。また、これらの抽出
物を常法、例えば向流分配法、液体クロマトグラフィー
等により精製して用いることもできる。

【００１８】本発明のメイラード反応阻害剤は、常法に
従い、必須成分であるプロアントシアニジンを通常の製
剤用基剤に配合して調製することができる。

【００１９】本発明のメイラード反応阻害剤は、軟膏
剤、クリーム剤、外用液剤等の皮膚外用剤や、乳液、ク
リーム、化粧水、パック、ファンデーション、分散液、
洗浄料等の化粧料に添加する剤形あるいはそれらの剤形
そのものとすることができる。

【００２０】本発明のメイラード反応阻害剤における有
効成分（プロアントシアニジン）の含有量は、フラバノ
ール換算で、好ましくは０.００００１〜５重量％（以
下単に「％」で示す）（ブドウ抽出物の乾燥固形分とし
て好ましくは０.０００１〜１０％、より好ましくは０.
０１〜５％）である。抽出液を使用する場合は、溶質
である乾燥固形分の含有量が上記範囲内であれば、その
抽出液濃度等は何ら限定されるものではない。

【００２１】有効成分の含有量が０.００００１％より
少ないと十分な効果は得られないことがあり、また、５
％を越えて配合してもそれ以上の効果の増大は見られな
い。

【００２２】そして、製剤用基剤は前記の使用の態様に
応じて選択することができ、例えば、精製水、緩衝液、
低級アルコール、多価アルコール、油脂、粉体、界面活
性剤、水溶性高分子、美容成分、紫外線吸収剤、増粘
剤、色素、防腐剤、香料、酸化防止剤等を用いることが
できる。

【００２３】

【実施例】次に参考例、試験例および実施例を挙げ、本
発明について更に詳しく説明するが、本発明はこれらに
なんら制約されるものではない。

【００２４】参考例１ブドウ抽出物の製造：ブドウ種子２０重量部に３０％
（v/v）エタノール８０重量部を加え、室温で時々撹拌
しながら２週間抽出し、濾過して粗抽出液を得る。これ
を１０分の１量まで減圧濃縮し、濃縮液にエタノールを
５倍量加え、濾過する。濾液を減圧濃縮して、限外濾過
を行ない、ブドウ抽出物を得た［乾燥固形分として０.
２３％（W/V）；プロアントシアニジンをフラバノール
換算で３７％（乾燥固形分当り）含有］。

【００２５】参考例２ブドウ抽出物の製造：ブドウ搾汁粕２０重量部に、５０
％（v/v）エタノール８０重量部を加え、室温で１０日
間抽出した後、濾過し、ブドウ抽出物を得た［乾燥固形
分として０.３３％（W/V）；プロアントシアニジンをフ
ラバノール換算で６４％（乾燥固形分当り）含有］。

【００２６】参考例３ブドウ抽出物の製造：ブドウ種子粉砕物２０重量部に８
０％（v/v）エタノール８０重量部を加え、室温で３日
間抽出した後、濾過し、ブドウ抽出物を得た［乾燥固形
分として２.４％（W/V）；プロアントシアニジンをフラ
バノール換算で６６％（乾燥固形分当り）含有］。

【００２７】参考例４ブドウ抽出物の製造：ブドウ搾汁粕の粉砕物２０重量部
に熱水８０重量部を加え、６０〜７０℃で５時間抽出し
た後、濾過し、ブドウ抽出物を得た［乾燥固形分として
３.４％（W/V）；プロアントシアニジンをフラバノール
換算で２６％（乾燥固形分当り）含有］。

【００２８】試験例メイラード反応抑制試験：ブドウ抽出物のメイラード反
応抑制作用は次の実験により確認した。まず、子牛皮膚
からのコラーゲン（タイプＩ）をｐＨ７.４の５０ｍＭ
りん酸緩衝液に５ｍｇ／ｍｌとなるように加え、更にグ
ルコース２５０ｍＭと検体であるブドウ抽出物を１％お
よび２％となるように加え、被験サンプルを調製した。
また、検体を加えないサンプル（対照サンプル）および
検体とグルコースを加えないサンプル（正常サンプル）
を調製した。

【００２９】メイラード反応（非酵素的グリコシル化反
応）により生じるアマドリ化合物は、塩酸によって加水
分解され、フロシンとなるので、これらのサンプルを、
３７℃で５日間インキュベートした後、各サンプルの生
成物を塩酸で加水分解し、生じるフロシンをＨＰＬＣに
より定量することにより、メイラード反応の阻害を調べ
た。

【００３０】具体的には、反応後の各サンプルを透析
後、凍結乾燥し、その１ｍｇをとり、６Ｎ塩酸２００μ
ｌを加えて１１０℃で１８時間加水分解を行い、塩酸を
留去したのち、水６００μｌを加えて溶解し、ＨＰＬＣ
カラム（ＴＳＫゲル８０Ｔｓ（東ソー製））に供し、こ
れを５０ｍＭリン酸二水素ナトリウム（ｐＨ２.５）で
溶離し、検出波長２８０ｎｍ及び２５４ｎｍのピーク比
が３.９：１であるピークをフロシンとした。

【００３１】各サンプル中のフロシン値は以下の式によ
り求め、更にこれから阻害率を算出した。この結果を
表１に示す。

【式１】

【００３２】

【００３３】* 参考例１で得たもの。 ** 芍薬を２０倍量の５０％（v/v）アセトンで２回抽出
し、溶媒を留去したもの。

【００３４】上記結果から明らかなように、プロアント
シアニジンにはメイラード反応の公知の阻害剤である塩
酸グアニジン、尿素等と較べて著しく強い阻害効果が認
められた。

【００３５】実施例１化粧水：（組成）配合量（％）（Ａ）ポリオキシエチレン（20E.O.）オレイルエーテル０.２エタノール１５.０香料適量防腐剤０.２

【００３６】（Ｂ）ブドウ抽出物^* ２.０リンゴ酸０.０２リンゴ酸ナトリウム０.０４精製水残量 * 参考例２で調製したもの。

【００３７】（製法）（１）（Ａ）を均一分散するまで混合する。（２）（Ｂ）を均一分散するまで混合し、撹拌しなが
ら（Ａ）を添加し、化粧水を得る。

【００３８】実施例２乳液：（組成）配合量（％）（Ａ）モノステアリン酸ポリエチレン（40E.O.）グリコール１.０モノステアリン酸グリセリル０.５ベヘニルアルコール０.５流動パラフィン５.０ミツロウ１.０オリーブ油５.０

【００３９】（Ｂ）ブドウ抽出物^** ０.１カルボキシビニルポリマー０.１トリエタノールアミン０.１グリセリン５.０防腐剤０.５香料適量精製水残量 ** 参考例３で調製したもの。

【００４０】（製法）（１）（Ａ）を均一分散するまで加熱混合する。（２）（Ｂ）を均一分散するまで加熱混合する。（３）（Ａ）、（Ｂ）共に高温下のうちに、（Ｂ）を
撹拌しながらそこへ（Ａ）を添加する。（４）冷却、脱泡したのち充填を行ない乳液を得る。

【００４１】実施例３美容液：（組成）配合量（％）（Ａ）ポリオキシエチレン（80E.O.）硬化ヒマシ油０.２エタノール５.０グリセリン５.０香料適量防腐剤０.２

【００４２】（Ｂ）ブドウ抽出物^* ０.５カルボキシビニルポリマー０.１５ポリビニルピロリドン０.１トリエタノールアミン０.１５精製水残量 * 参考例２で調製したもの。

【００４３】（製法）（１）（Ａ）を均一分散するまで混合する。（２）（Ｂ）を均一分散するまで混合する。（３）撹拌しながら（Ｂ）に（Ａ）を添加する。（４）脱泡したのち充填して製品とする。

【００４４】実施例４クリーム：（組成）配合量（％）（Ａ）アシルメチルタウリンナトリウム０.５トリオレイン酸ソルビタン２.０ベヘニルアルコール３.０スクワラン１０.０パラフィンワックス３.０オレイン酸オクチルドデシル７.０

【００４５】（Ｂ）ブドウ抽出物⁺ １.０１,３−ブタンジオール５.０防腐剤０.５香料適量精製水残量 + 参考例４で調製したもの。

【００４６】（製法）（１）（Ａ）を均一分散するまで加熱混合する。（２）（Ｂ）を均一分散するまで加熱混合する。（３）（Ａ）、（Ｂ）ともに高温下のうちに、（Ｂ）
を撹拌しながら（Ａ）を添加する。（４）冷却、脱泡したのち充填し、クリームを得る。

【００４７】

【発明の効果】本発明において使用されるプロアントシ
アニジンのメイラード反応阻害効果は、この効果が知ら
れている塩酸グアニジン、尿素等と較べて著しく強く、
これを有効成分とする本発明のメイラード反応阻害剤
は、有効に肌の硬化、しわ形成の原因となるコラーゲン
の架橋形成や、肌のくすみの原因となる着色を抑制する
ことができるものである。以上

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 35/78 Ａ６１Ｋ 35/78 ＣＡ６１Ｐ 17/16 Ａ６１Ｐ 17/16 43/00 １０７ 43/00 １０７Ｃ０７Ｄ 311/28 Ｃ０７Ｄ 311/28 311/62 311/62 (72)発明者有賀敏明千葉県野田市野田339番地キッコーマン株式会社内 (72)発明者湯浅克己千葉県野田市野田339番地キッコーマン株式会社内 (56)参考文献特開平３−204874（ＪＰ，Ａ) 特開平４−190774（ＪＰ，Ａ) 米国特許4698360（ＵＳ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 7/00 - 7/50 A61K 35/78 A61K 31/353

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】プロアントシアニジンを有効成分として
含有し、皮膚外用剤または化粧品に添加する剤形である
ことを特徴とするメイラード反応阻害剤。
【請求項２】プロアントシアニジンが、ブドウ抽出物
に含有されるものである請求項１記載のメイラード反応
阻害剤。