JP3009498B2 - 脂質分解酵素阻害剤 - Google Patents
脂質分解酵素阻害剤Info
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Description
蛋白質脂質を有効成分とする脂質分解酵素阻害剤、当該
塩基性蛋白質の調製法、並びに特定の塩基性蛋白質に関
する。
ン、ある種の大豆蛋白等の蛋白質がリパーゼの働きを阻
害して、乳化された脂質が分解されるのを抑制または阻
止することがこれまで種々報告されている( Journal o
f Lipid Research Vol. 25, 1984p.1214-1221等)。し
かしながら、これらの蛋白質は、胆汁酸等が存在すると
リパーゼ阻害作用を失うため生体内ではリパーゼ阻害剤
として機能しない。
用について研究を続けてきた。その結果、小麦胚芽を酸
性溶液で抽出処理すると塩基性蛋白質が得られること、
そしてこの塩基性蛋白質が胆汁酸の存在下でも脂質分解
酵素の働きを阻害または抑制する作用を有することを見
出した。また、上記の小麦胚芽由来の塩基性蛋白質のう
ちから特定の塩基性蛋白質を単離して構造決定を行った
ところ、N末端から数えて1番目から40番目までのア
ミノ酸が配列番号1に示した配列になっていること、そ
してこの塩基性蛋白質も脂質分解酵素阻害作用を有する
ことを見出した。
基性蛋白質を有効成分とする脂質分解酵素阻害剤であ
る。そして、本発明は、N末端から数えて1番目から4
0番目までのアミノ酸が、配列番号1で示される配列を
有している小麦胚芽由来の塩基性蛋白質である。更に、
本発明は、上記塩基性蛋白質を小麦胚芽から得る方法を
包含する。
白質は、等電点がアルカリ側にあり塩基性を示す。そし
て、本発明でいう「脂質分解酵素阻害剤」とは、リパー
ゼ等の脂質分解酵素の働きを阻害または抑制することに
よって脂質の分解を阻害または抑制して、脂質が腸管か
ら吸収されるのを阻害または抑制する機能を有する剤を
いう。本発明の脂質分解酵素阻害剤は、胆汁酸等の存在
下に脂質が乳化された系において効果を有し、したがっ
て生体内で有効に働く。
で抽出処理し、必要に応じて更に抽出物を精製すること
によって得ることができる。小麦胚芽を酸性溶液で抽出
処理して得られる塩基性蛋白質は、複数の塩基性蛋白質
の混合物であり、それら複数の塩基性蛋白質の分子量
は、約5000〜42000の範囲にある。本発明で
は、上記複数の塩基性蛋白質の混合物をそのまま脂質分
解酵素阻害剤として使用することができる。また、当該
混合物から特定の塩基性蛋白質を単離して、それを脂質
分解酵素阻害剤として用いてもよい。
び種々の動物(例えば、ウシ、ウマ、ブタ、ニワトリ等
の家畜、家禽類やイヌ、ネコ等のペット類等)に投与す
ることができる。本発明の脂質分解酵素阻害剤の効果的
な投与量は、投与される対象の種類や年令、身体的な状
態等によって異なり、各々に適した量で投与するのがよ
い。更に、本発明の脂質分解酵素阻害剤は経口剤として
調製し投与するのがよい。また、本発明の脂質分解酵素
阻害剤は、単独で投与しても、または製薬工業において
通常使用されている担体と共に投与してもよく、或は他
の薬剤と併用してもよい。更に本発明の脂質分解酵素阻
害剤は、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、散剤等の任意の剤
形で使用可能である。また、本発明の脂質分解酵素阻害
剤は食品や飼料中に添加して投与することもできる。
ように小麦胚芽を酸性溶液で抽出処理することにより得
ることができ、その調製法の具体例を挙げると下記のと
おりである。小麦胚芽由来の塩基性蛋白質の調製例 (i)水洗やその他の適当な洗浄方法によって脱脂小麦胚
芽または未脱脂小麦胚芽から水溶性画分を除去する、(i
i)水溶性画分を除いた小麦胚芽固体をpH約1.5〜3.
0の酸性溶液、特に酸性水溶液で処理して酸可溶性画分
を酸性溶液中に抽出移行させる、(iii)酸可溶性画分を
含有する酸性溶液を中和して緩衝液を加える、(iv)塩
基性蛋白質を吸着するイオン交換樹脂や吸着剤等を充填
したカラムに中和し緩衝した溶液を通す、(v)カラムに
吸着された塩基性蛋白質を適当な方法により溶出させ
る、(vi)溶出液を脱塩処理する、そして(vii)凍結乾
燥やその他適当な方法で乾燥して複数の塩基性蛋白質の
混合物からなる乾燥生成物を得る。
質分解酵素阻害剤として使用することができる。また、
上記生成物をSDS電気泳動、膜分離等により各々の塩
基性蛋白質に単離して回収してもよい。上記した塩基性
蛋白質の調製法において、工程(iii)で使用する緩衝液
としてはトリス緩衝液(pH8.0)、リン酸緩衝液
(pH7.5)等を、また工程(iv)におけるイオン交換
樹脂や吸着剤としては、CM−トヨパール[東ソー
(株)製]、CM−Sephadex(ファルマシア社
製)等を挙げることができる。更に、工程(vi)の脱塩
処理は、マイクロアシライザー[旭化成(株)製]、浸
透膜等を使用して行うことができる。しかしながら、小
麦胚芽由来の塩基性蛋白質の調製法は、上記方法に限定
されず、本発明の脂質分解酵素阻害剤では小麦胚芽から
得られた塩基性蛋白質のいずれもが使用できる。
た複数の塩基性蛋白質の混合物からなる生成物を、CM
−トヨパール、逆相HPLCを使用して各塩基性蛋白質
に単離させる実験を行った。そして、分離してきた塩基
性蛋白質を回収して、その構造決定を行ったところ、こ
の塩基性蛋白質は、N末端から数えて第1番目から第4
0番目までのアミノ酸が配列番号1で示される配列にな
っており、そしてアミノ酸の結合総数が約60〜100
個の範囲にある蛋白質であることがわかった。そして、
この塩基性蛋白質も上記した塩基性蛋白質混合物と同様
に脂質分解酵素阻害作用を有していた。
明するが、本発明はそれに限定されない。 実施例 1 [小麦胚芽由来の塩基性蛋白質の調製]脱脂小麦胚芽5
0gに5倍量の水を加えて2時間室温で撹拌した後、5
000rpmで20分間遠心分離した。上澄み液を除去
して沈殿を回収した。この沈殿に5倍量の水を加えて上
記と同様に遠心分離し、この操作を3回繰り返して、小
麦胚芽中の水溶性画分を取り除いた。上記で得られた沈
殿に5倍量の水を加えて撹拌した後、6N塩酸を加えて
液のpHを2.0に調整した。室温で2時間撹拌後、5
000rpmで20分間遠心分離し、酸可溶性画分を含
有する上澄み液を回収した。更に、沈殿に対して、上記
の酸抽出処理を再度繰り返して、酸可溶性画分を含有す
る上澄み液を回収して、上記で回収した酸可溶性画分含
有上澄み液と一緒にした。
トリウムを加えてpH7.0に調整した。次いで、この
液に塩化ナトリウムおよびトリス緩衝液(pH8.0)
(以後「トリスバッファー」という)を加えて、塩化ナ
トリウム濃度200mMそしてトリスバッファー濃度2
0mMに調整し、これを更に遠心分離して、その上澄み
液(調整上澄み液)を得た。CM−トヨパールカラム
(内径1.6cm、長さ20cm)を用意し、このカラ
ムを塩化ナトリウム濃度が200mMでトリスバッファ
ー濃度が20mMの液で予め平衡化処理しておいた。平
衡化処理しておいた上記カラムに、上記の調整上澄み液
を通した後、カラムの平衡化処理に使用したのと同じ液
を通してよく洗浄した。次に、塩化ナトリウム濃度が1
Mでトリスバッファー濃度が20mMの液をカラムに通
して、CM−トヨパールに吸着されていた成分を溶出さ
せた。
使用して脱塩した後、得られた溶液を凍結乾燥して約5
0mgの粉末状生成物を得た。上記で得られた粉末状生
成物をピコータグ法によって分析して、各アミノ酸の含
有割合を測定したところ、そのアミノ酸分析値は表1に
示すとおりであった。
を行ったところ、分子量が約5000〜42000の間
にある塩基性蛋白質約20種類に各々別れた。このこと
から上記で得た粉末状生成物は、複数の塩基性蛋白質の
混合物であることが明らかになった。
250mgに対して、リン脂質60mg、胆汁酸の成分
であるタウロコール酸ナトリウム26.9mgおよび2
0mMトリスバッファー5mlを加えた。この液を超音
波処理してオリーブ油の乳化液を調製した。
小麦胚芽由来の塩基性蛋白質画分に、200mMトリス
バッファーを加えて溶解させ、塩基性蛋白質濃度が25
0μg/mlと500μg/mlの2種類の溶液を調製
した。
(シグマ社製 L0382)に200mMトリスバッフ
ァーを加えて、100ユニット豚膵臓リパ−ゼ/mlの
脂質分解酵素液を調製した。
測定]上記で調製したオリーブ油の乳化液を100μl
づつ3組準備した。第1組の乳化液にはトリスバッファ
ー50μlを加え、また第2および3組の乳化液の各々
には上記で調製した塩基性蛋白質含有液を各々50μl
加えて5分間震盪後、上記で調製した脂質分解酵素液5
0μlを加えて37℃で1時間震盪した。次いで、抽出
用溶媒(クロロホルム:メタノール:ヘプタン=49:
1:49)を3ml加えて5分間震盪した後、回転数3
000rpmで5分間遠心分離を行った。上層液をアス
ピレーターで除去した後、下層液に対して銅試薬(0.
45Mトリエタノールアミン、0.05N酢酸、3.4%
硫酸銅五水和物および20%塩化ナトリウム)1mlを
加え、5分間震盪後、回転数3000rpmで5分間遠
心分離した。
発色剤(前記抽出用溶媒に0.1%バソクプロイン、0.
05%ブチル化ヒドロキシアニソールを溶解させたも
の)0.5mlを加え、波長480nmにおける吸光度
(Abs480)を測定して生成した遊離脂肪酸量、す
なわち豚膵臓リパーゼの活性度を調べた。上記の結果
は、下記の表−2のとおりであった。なお、表−2にお
ける活性度は、トリスバッファーを加えたオリーブ油の
乳化液を豚膵臓リパーゼで分解させた場合のAbs48
0を100として、それに対する%で示したものであ
る。
基性蛋白質からなる本発明の阻害剤を加えた場合は、胆
汁酸の存在下でリパーゼの活性が抑制されることがわか
る。
2区用意した。別に、オリーブ油10gと卵黄レシチン
1.2gを混合し、これに蒸留水を加えて全量を20m
lにした後、超音波処理して乳化液を調製し、この乳化
液を2mlずつに小分けした。第1区のラットの各々に
は、ラット1匹につき上記の小分けした乳化液2mlに
実施例1で得た塩基性蛋白質100mgを加えた試料を
胃ゾンデを用いて経口投与し、経時的にラット尾静脈よ
り採血して血液中の中性脂肪濃度を協和メティクス酵素
キットTGを用いて測定して1匹当たりの平均値(mg
/dl)を求めた(本発明例)。また第2区のラットの
各々には、ラット1匹につき上記の小分けした乳化液2
mlに大豆蛋白質加水分解物100mgを加えた試料を
同様に経口投与して、上記と同様にして血液中の中性脂
肪濃度を経時的に測定して、その平均値を求めた (比較例)。上記の結果を下記の表−3に示す。
性蛋白質を添加した試料を投与した本発明例の場合は、
塩基性蛋白質でない大豆蛋白質加水分解物を添加した試
料を投与した比較例に比べて、脂質吸収の阻害作用が大
きく、血液中の中性脂肪の濃度が低く抑えられることが
かわる。」
末状生成物を、ファルマシア社製のファストシステムを
使用して、SDSポリアクリルアミド電気泳動を行っ
た。その結果、ゲル上に各塩基性蛋白質からなる約20
個の分離したバンドが現れた。これらの各塩基性蛋白質
の分子量は、約5000〜42000の間にあった。
性蛋白質の1つについて、そのアミノ酸配列を調べたと
ころ、N末端から数えて1番目から40番目までのアミ
ノ酸が、配列番号1で示される配列を有していることが
明らかになった。更に、この塩基性蛋白質におけるアミ
ノ酸の結合総数は、その分子量から計算して、約60〜
100と推定された。
物に投与すると、脂質分解酵素の働きが阻害されて脂質
の分解が抑制または阻害されるために、摂取した脂質が
体内で急激に吸収されることを防ぐことができ、しかも
総脂肪吸収量をも低く抑えることができ、その結果、高
脂血症の予防や肥満の予防等の種々の効果が奏される。
本発明の脂質分解酵素阻害剤で使用する小麦胚芽由来の
塩基性蛋白質は、小麦胚芽を酸性溶液で抽出処理するこ
とにより簡単に得ることができ、しかも小麦胚芽に由来
するための安全性が高い。
Claims (4)
- 【請求項1】 小麦胚芽由来の塩基性蛋白質を有効成分
とする脂質分解酵素阻害剤。 - 【請求項2】 小麦胚芽を酸性溶液で抽出処理すること
からなる塩基性蛋白質の調製方法。 - 【請求項3】 N末端から数えて1番目から40番目ま
でのアミノ酸が、配列番号1で示される配列を有してい
る小麦胚芽由来の塩基性蛋白質。 - 【請求項4】 小麦胚芽を酸性溶液で抽出して得られた
塩基性蛋白質の混合物から単離されたものである請求項
3の塩基性蛋白質。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP3087246A JP3009498B2 (ja) | 1991-03-28 | 1991-03-28 | 脂質分解酵素阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP3087246A JP3009498B2 (ja) | 1991-03-28 | 1991-03-28 | 脂質分解酵素阻害剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH04300839A JPH04300839A (ja) | 1992-10-23 |
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Family
ID=13909448
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP3087246A Expired - Lifetime JP3009498B2 (ja) | 1991-03-28 | 1991-03-28 | 脂質分解酵素阻害剤 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3009498B2 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH0825891B2 (ja) * | 1993-06-25 | 1996-03-13 | 株式会社薬理学中央研究所 | 脱脂米胚芽由来のリパーゼインヒビター |
NL1006164C2 (nl) * | 1997-05-29 | 1998-12-01 | Univ Leiden | Antimicrobiële peptiden. |
US20050020484A1 (en) | 2001-12-28 | 2005-01-27 | Etsumori Harada | Compositions for improving lipid metabolism |
US20030165574A1 (en) * | 2002-03-01 | 2003-09-04 | Ward Loren Spencer | Compositions and methods for treatment of body weight conditions |
JP5222299B2 (ja) * | 2007-09-04 | 2013-06-26 | 日清ファルマ株式会社 | 脂肪吸収抑制組成物 |
-
1991
- 1991-03-28 JP JP3087246A patent/JP3009498B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Patric Borel et al.,"Isolation and properties of lipolysis inhibitory proteins from wheat germ and wheat bran",Plant Foods for Human Nutrition,Netherlands,Kluwer Academic Publishers,1989,vol.39,p.339−348 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH04300839A (ja) | 1992-10-23 |
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