JPH0825891B2 - 脱脂米胚芽由来のリパーゼインヒビター - Google Patents

脱脂米胚芽由来のリパーゼインヒビター

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JPH0825891B2 JP5155194A JP15519493A JPH0825891B2 JP H0825891 B2 JPH0825891 B2 JP H0825891B2 JP 5155194 A JP5155194 A JP 5155194A JP 15519493 A JP15519493 A JP 15519493A JP H0825891 B2 JPH0825891 B2 JP H0825891B2
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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は心疾患、動脈硬化、糖尿
病などの所謂成人病の誘因である肥満の予防、治療に有
用な粗生成物からなるリパーゼインヒビター、その精製
製剤、それらを添加した抗肥満食品或いは抗肥満ペット
用飼料に関する。
【０００２】
【従来の技術】リパーゼの阻害物質としては、血清アル
ブミン、β−ラクトグロブリン、ある種の大豆蛋白、小
麦胚芽由来の塩基性蛋白質（たとえば特開平４−３００
８３９号公報）がリパーゼの働きを阻害して、乳化され
た脂質が分解されるのを抑制または阻害する事が報告さ
れている。しかし、上記の内、血清アルブミン、β−ラ
クトグロブリン、ある種の大豆蛋白は、胆汁酸存在下に
おいては作用を発揮しない。一方、小麦胚芽由来の塩基
性蛋白質は、胆汁酸のタウロコール酸ナトリウムの存在
下、脂質が乳化された系においても脂質分解酵素の働き
を抑制または阻害することが報告されている。
【０００３】
【発明の概要】本発明の対象である米胚芽由来の脂質分
解酵素阻害物質について述べれば、米胚芽由来の水溶性
蛋白質（水溶性抽出物）は、米胚芽の脱脂後、水で抽出
する事によって得ることができ、胆汁酸等の存在下に脂
質が乳化された系に於いてリパーゼの阻害あるいは抑制
効果を発揮する。この作用効果は他の既知小麦胚芽や大
豆由来等の同種のものと比較して格別顕著であることを
本発明者は見出した。下記に本発明を実施例により具体
的に説明するが、本発明はそれに限定されない。つま
り、本発明の脂質分解酵素阻害物質としては、米胚芽か
ら得られた水抽出物のいずれもが使用できる。
【０００４】米胚芽の脱脂法 米胚芽を超臨界炭酸ガスもしくはｎ−ヘキサンを用いて
脂溶性分画を分離（脱脂）した。ただし、胚芽は前処理
として予め、粉砕、または圧ペンを施した。かくして得
られた脱脂米胚芽由来のリパーゼインヒビターを本発明
者は「デファトーゲン」（Ｄｅｆａｔｔｏｇｅｎ）と名
付けた。
【０００５】
【実施例】実施例１ （１）ｎ−ヘキサン脱脂 前処理として粉砕した米胚芽３５０．０ｇを、ｎ−ヘキ
サン３リットルで３時間室温で撹拌した後ろ過し、残渣
をさらにｎ−ヘキサン２リットルで１．５時間室温で撹
拌した。その後、同様にろ過し、残渣は４０℃、２時間
乾燥後、さらにデシケーターで減圧にて１０時間乾燥、
脱脂物（６５．４％）として得た。ろ液は合わせて減圧
濃縮し米胚芽油分（２１．３％）として得た。 （２）超臨界炭酸ガス脱脂（ＳＣＥ） 米胚芽１２６．２ｇを抽出圧力３５０ｋｇｆ／cm2 ／４
０℃、分離圧６０ｋｇｆ／cm2 ／４０℃、ＣＯ2 流速１
０Ｎリットル／ｍｉｎ、抽剤比５８にて分離した。脱脂
物は収率７２．４％（９１．３８ｇ）、油分は２４．１
％（３０．３８ｇ）であった。米胚芽由来の水溶性蛋白の調製例 上記の方法によって脱脂した米胚芽を（ｉ）水抽出し、
水溶性分画を得、(ii)透析または(iii) 限外ろ過を行
い、凍結乾燥にて粗な水溶性蛋白質を含む粉末を得る。
工程(ii)の透析には透析用セルロースチューブ（分画分
子量１４，０００）（ＶＩＳＫＡＳＥ社製）、(iii) の
限外ろ過には中空糸型、限外ろ過モジュール〔分画分子
量３０，０００〕ＦＢ０２（０．２５ｍ2 ）ＦＵＳ ０
３８２（ダイセル化学（株）製）を使用して行うことが
できる。
【０００６】実施例２ 脱脂米胚芽２５．０ｇに１０倍量の水を加え６時間、室
温にて攪拌した後、３，０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０分間
遠心分離した。その上液を凍結乾燥し、粉末（収率３
０．８％）を得た。得られた粉末の蛋白含有率はＣｕ−
Ｆｏｌｉｎ法のアルブミン換算において２７．０％であ
った。脱脂米胚芽の抽出物の凍結乾燥品につき、イオン
交換クロマトグラフィー、ゲルろ過クロマトグラフィ
ー、逆相クロマトグラフィーを順次おこなって、リパー
ゼを阻害する活性の高い成分を分け、５４Ｋ，３８Ｋ，
２７．５Ｋの三種類のバンドを分離した。それぞれのバ
ンドのＮ末端のアミノ酸配列を解析した結果、三種類と
も一致していた。次にＮ末端のアミノ酸配列を示す。 ＲＤＲＲＧＥＧＳＳＥＥＥＤ？ＧＲ 三種類のバンドが存在することについて以下のように推
測した。 ・同一のポリペプチド鎖から成り、糖鎖などの修飾のさ
れかたが異なる。 ・Ｃ末端側のペプチドの長さが異なる。 得られたアミノ酸配列はたん白質データベースに一致す
るものが存在しない、今までに知られていない新規な配
列である。
【０００７】実施例３ また、上記の上液１２０mlを精製水、３リットル／ｈ
ｒ，４ｈｒ．室温の透析を行い、分子量１４，０００以
上に濃縮した。その結果、蛋白含有率４９．５％の粉末
（収率１３．６％）を得た。
【０００８】実施例４ 前処理として圧ペンし、ＣＳＥ脱脂した米胚芽２５０．
０ｇに２０倍量の水を加え６時間、室温にて撹拌した
後、８０００ｒ．ｐ．ｍ．，２０ｍｉｎ．遠心分離し上
澄みを限外ろ過により分子量３０，０００以上に濃縮
し、収率１０．５％の粉末を得、その蛋白含有率は４
９．５％であった。水溶性蛋白質の脱脂分解酵素阻害作用の測定 リパーゼ測定用試薬（ベーリンガーマンハイム（株））
を用い、波長３６５ｎｍにおける吸光度を指標にし、脂
質トレオレインを分解するリパーゼの活性を１００とし
たとき試料がリパーゼのトレオレイン分解を阻害する割
合（％）を示した。
【０００９】実施例５ 各濃度の試料水溶液０．５mlと酵素液０．１ml（リパー
ゼ０．０４４Ｕ，３７℃）を３７℃、５分間プレインキ
ュベートし、基質溶液*)２．０ml（含トレオレイン）を
加え、波長３６５ｎｍにおいて４分後と１４分後の吸光
度を測定し、リパーゼの基質分解反応にともなう吸光度
の減少を求めた。米胚芽由来の水抽出物のリパーゼ活性
阻害作用の具体例として、表１に超臨界炭酸ガスで脱脂
した試料の水抽出物のリパーゼ活性阻害率（％）を示し
た。*) 反応液最終組成及び濃度：トレオレイン０．３０ｍ
Ｍ，トリス緩衝液 pＨ９．２ ２６ｍＭ，デオキシコー
ル酸ナトリウム１９ｍＭ，塩化カルシウム０．１ｍＭ，
コリパーゼ３mg／リットル 表１から米胚芽の水抽出物にはリパーゼ活性の阻害作用
があり、透析、限外ろ過等によって低分子物質を除去
し、また、蛋白含有率（％）を上げる事によってリパー
ゼ活性阻害率の増加することがわかる。
【００１０】
【表１】 超臨界炭酸ガス脱脂による米胚芽水抽出物のリパーゼ活性阻害率 試料 蛋白含有率 試料の濃度 リパーゼ活性 （％） （％） 阻害率（％） ブランク ０ ０ ０ 〔Ａ〕 １）水抽出物 ２７．０ ０．２５ ５６．５ ０．５ ９８．３ １．０ １０１．０ ２）水抽出物の透析物 ４９．５ ０．２５ ８５．５ ０．５ １０１．０ １．０ １０６．０ 〔Ｂ〕 １）水抽出物 ２０．４ ０．２５ ３３．３ ０．５ ７５．３ １．０ ９５．０ ２）水抽出物の限外ろ過物 ３５．６ ０．２５ ７４．７ ０．５ ９６．３ １．０ １０１．０ 注）〔Ａ〕は脱脂前処理として粉砕した。 〔Ｂ〕は脱脂前処理として圧ペンを施した。
【００１１】実施例６ 脱脂米胚芽中に含まれるリパーゼインヒビターの性状に
ついて、下記の実験を行い、その本体が蛋白質であるこ
とを示唆する成績を得た。 １）脱脂米胚芽の水抽出物を８５℃，６０ｍｉｎの熱処
理で約３０〜３５％が失活する。 ２）プロナーゼ（Ｐｒｏｎａｓｅ）Ｅと共に３７℃で４
時間インキュベートすることで、殆どすべてが失活し
た。
【００１２】実施例７ ラットを使用して米胚芽中に含有されるリパーゼインヒ
ビター（デファトーゲン）のイン・ビボの作用を検討し
た。即ち、雄性ウィスター（Ｗｉｓｔａｒ）ラットを使
用し、対照群（７匹）には慣用の飼育飼料を、試験群に
は超臨界抽出法により脱脂した米胚芽の水抽出物を重量
％で１０％添加した飼料を与えた。実験期間は２週間
で、飼料、水は自由に摂取させた。実験開始前及び実験
終了時に、体重を測定し、採血を行った。実験成績は表
２に総括した。表２に見るように、デファトゲンは体重
増加を有意（Ｐ＜０．１）に抑制、血液の血糖値、Ｈｂ
Ａｉｃ，総コレステロール、中性脂肪の値を有意（Ｐ＜
０．１）に減少させた。
【００１３】
【表２】
【００１４】実施例８ 脱脂小麦胚芽の水抽出物と脱脂米胚芽の水抽出物のリパ
ーゼインヒビター活性の比較実験を行い、後者が収率、
活性（ｕｍｉｔ／ｇ）の点ですぐれていることを証明し
た。脱脂胚芽の水は、各試料１０．０ｇを２００ml蒸留
水で抽出し、遠心分離した上清を凍結乾燥した。 収率：米胚芽 ４０．６６％ 小麦胚芽 ３６．７７％ リパーゼ阻害活性：図１（抽出物の濃度−阻害率片対数
グラフ）に示すように、約５０％阻害率でのｕｎｉｔ／
ｇは米胚芽水抽出物が小麦胚芽の水抽出物の４．１６倍
であった。
【図面の簡単な説明】
【図１】 リパーゼの阻害活性について、本発明の米胚
芽抽出物と先行技術の小麦胚芽水抽出物との比較を、濃
度−阻害率の片対数グラフとして示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ２３Ｌ 1/30 Ｂ Ａ６１Ｋ 38/55 ＡＢＸ ＡＣＮ // Ｃ１２Ｎ 9/99

Claims (4)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 有機溶媒を用いて、或いは超臨界抽出法
    により、脱脂した脱脂米胚芽より水抽出によって得られ
    た粗生成物からなるリパーゼインヒビター。
  2. 【請求項２】 請求項１で得られた粗生成物からなるリ
    パーゼインヒビターを透析法、或いは限外ろ過法などで
    精製した部分的に純化したリパーゼインヒビター製剤。
  3. 【請求項３】 請求項１記載の粗生成物からなるリパー
    ゼインヒビター或いは請求項２記載のリパーゼインヒビ
    ター製剤を添加した抗肥満食品。
  4. 【請求項４】 請求項１記載の粗生成物からなるリパー
    ゼインヒビター、或いは請求項２記載のリパーゼインヒ
    ビター製剤を添加したペット用抗肥満飼料。
JP5155194A 1993-06-25 1993-06-25 脱脂米胚芽由来のリパーゼインヒビター Expired - Fee Related JPH0825891B2 (ja)

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